FR2946532A1 - Utilisation d'un fermentat de botrytis cinerea pour des applications cutanees - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet des compositions dermatologiques ou/et cosmétiques destinées à traiter ou à améliorer les problèmes liés au vieillissement de la peau. L'invention a spécifiquement pour objet des compositions cosmétiques ou/et dermatologiques à base d'un produit de fermentation de Botrytis cinerea en mélange ou en dispersion dans un excipient ou un véhicule inerte non toxique, compatible dermatologiquement. Utilisation dans le domaine cutané en prévention du vieillissement cutané et dans l'anti-âge.

Description

La présente invention se rapporte au domaine des nécessités de la vie et plus particulièrement au domaine des soins de la peau.

Elle a plus particulièrement pour objet des compositions dermatologiques et/ou cosmétiques destinées à traiter ou à améliorer les problèmes liés au vieillissement de la peau.

Elle a spécifiquement pour objet des compositions cosmétiques et/ou dermatologiques à base d'un produit de fermentation de Botrytis et plus particulièrement de Botrytis cinerea en mélange ou en dispersion dans un excipient ou un véhicule inerte, non toxique, compatible dermatologiquement. Utilisation d'un fermentat de Botrytis cinerea en dermo cosmétique. Botrytis cinerea est un champignon, appartenant au genre Botrytis et à l'espèce cinerea. Cette souche est ubiquitaire et saprophyte sur différents organes végétaux. (Carbohydrate Research, 1981, 93, 294). Ce microorganisme contribue à l'obtention de certains vins liquoreux, grâce notamment à la faculté qu'il possède, de synthétiser des composés aromatiques particuliers (Revue Française d'oenologie, 1999, 176, 32 ; Food Chemistry, 2007, 103, 536 ; Journal of Agricultural and Food Chemistry 2007, 55, 1437). Ce champignon produit des molécules très variées et spécifiques.11 est parfaitement connu que Botrytis cinerea fabrique des polysaccharides de type Beta (1-3) (1-6) glucanes pouvant atteindre de l'ordre de 5000 unités glucose. (Revue Française d'oenologie, 2001, 187, 14). On sait également que ce microorganisme est capable de produire de l'acide abscissique. (Agric. Biol. Chem. 1982, 46, 1967, Brevet JP2060590).

Ce champignon ne pousse que dans des conditions très particulières. De nombreuses molécules de synthèse ou produites par d'autres microorganismes sont couramment utilisées pour limiter ou empêcher son développement car sa présence peut présenter des inconvénients. On peut par exemple citer les microorganismes de type Fusarium qui produisent des molécules ayant des effets antifongiques (Fusafungines) en particulier contre Botrytis. (Brevet WO932244). De la même façon, des microorganismes issus de l'espèce des Curvularia produisent des peptides cycliques ayant des propriétés antifongiques très marquées contre Botrytis. (Brevet WO9205191). On a également mentionné des molécules inhibtrices type lactones et polylactones (Brevet WO9406788). Des composés simples dérivés de la tyrosine inhibent également la croissance de Botrytis. (Brevet JP2006131587). Les rhamnolipides produits par une souche bactérienne de type Pseudomonas aeruginosa constituent des composés inhibants pour la croissance de Botrytis (Plant Cell and Environment, 2009, 32, 178).

Les molécules de type polyphénols ont été particulièrement évoquées dans la littérature comme inhibiteur pour Botrytis. Ainsi des proanthocyanidines sont citées pour détruire Botrytis (brevet WO2009026179). Il en est de même avec les flavonols (Brevet 2009026176). Dans la famille des polyphénols, des phytoalexines de type stilbene comme le resvératrol ont aussi montré un effet limitant fortement la croissance de Botrytis cinerea. (J. Phytopathology 1990 129 102) .

Les auteurs de ces travaux ont constaté fortuitement que le résultat de la fermentation par Botrytis cinerea ou le résultat d'un biofermentat parfaitement contrôlé obtenu avec Botrytis cine- rea présentait des applications dans le domaine cutané et en particulier dans des applications cosmétiques et/ou dermatologiques en prévention du vieillissement cutané. Des applications dans l'anti-âge ont ainsi été montrées.

Une modification par Botrytis cinerea de ces composés de type polyphénolique induit de nouvelles molécules qui vont neutraliser la croissance du champignon ou même le détruire. Ceci est particulièrement vrai pour le resvératrol qui est transformé en une famille de molécules connues sous le nom de viniférine. Le passage du resvératrol en viniférine s'effectue par l'intermédiaire d'une laccase. (FEMS microbiology letters, 1998,167,203). La vérification de cette hypothèse a été réalisée en isolant le gêne de cette laccase Bcicc2 (Molecular microbiology 2002, 43, 883). En résumé, lorsque le champignon de type Botrytis cinerea est en contact avec des molécules de type polyphénols, il les transforme pour s'auto intoxiquer et en même temps, il les convertit en d'autres molécules aromatiques. Le resvératrol peut aussi sous forme glycosylée présenter cet effet fongicide (J. Agric. Food Chem.2003,51,1464).

Toutes ces publications montrent qu'un biofermentat issu de ce champignon n'est pas aisé à réaliser et il est nécessaire d'être particulièrement attentif au milieu et aux conditions de culture à employer pour qu'il n'y ait pas d'interférence entre ce milieu et la croissance de Botrytis cinerea.

Les Demandeurs ont constaté que le résultat de la fermentation par Botrytis cinerea ou le résultat d'un biofermentat parfaitement contrôlé obtenu avec Botrytis cinerea présentait des applications dans le domaine cutané et en particulier dans des applications cosmétiques et/ou dermatologiques en prévention du vieillissement cutané. Des applications dans l'anti-âge ont aussi été montrées.

Pour la réalisation de compositions cosmétiques ou dermatologiques de l'invention, on mélange ou on disperse une prise d'essai de produit de fermentation de Botrytis cinerea avec une phase lipidique émulsionnante. On dilue ensuite avec un agent épaississant et on parfume ou aromatise la préparation finale avec un parfum, un agent colorant, un agent conservateur, une préparation qui améliore le toucher,un agent antibactérien, un agent émulsionnant et/ou un agent communiquant un aspect nacré. Le produit de fermentation de Botrytis cinerea peut en outre être additionné d'un autre principe actif d'action semblable ou synergique.

Parmi les parfums utilisables pour de telles compositions, on pourra citer la préparation Parfum 40119-01 de la société Synarome, le parfum Flashy de la société Synarome, l'arôme orange ou mandarine, l'arôme floral de la société Robertet, l'arôme lilas de la société Expressions parfumées, l'arôme rose de la société Robertet.

Parmi les arômes que l'on peut ajouter aux compositions de l'invention, on pourra citer l'arôme citron, l'arôme citronnelle, ou l'arôme violette. Parmi les agents colorants que l'on peut ajouter, on citera à titre d'exemple le VDC Red 40 (LCW), ou le DC Yellow 6 (LCW). On peut également ne pas ajouter d'agent colorant.

Parmi les agents conservateurs, on citera plus particulièrement les Germabens, les Parabens 30 de méthyle, d'éthyle, de butyle ou de propyle, le dermosoft et plus particulièrement le dermosoft 1388 eco, le dermosoft GMCY et le dermosoft 700B.

Parmi les compositions qui améliorent le toucher, on citera en premier lieu les silicones, les siliconols, ou les huiles de silicone, comme par exemple le produit DC 1403 (Dow Corning)25 fait d'un mélange de Dimethicone et de Dimethiconol, ou le produit DC 1501 (mélange de Cyclopenta siloxane et de dimethiconol).

Comme agent émulsionnant, on pourra citer les stéarates de polyéthylène glycol, les stéarates de propyle, les Brij, les Span, les produits auto-émulsionnants, les Saponines et les composés similaires.

Comme agents épaississants, on citera en particulier les mucilages, les gommes végétales, les polymères acryliques, le polyacrylamide, le Rhamnosoft, le Fucosoft et les produits similaires.

La concentration en fermentat de Botrytis s'échelonne de 0.1 à 10% en poids et de préference de 0.2 à 0.5% en poids.

PARTIE EXPERIMENTALE Exemples de fermentation avec la souche de Botrytis cinerea Souche BEC 1713 : origine ATCC n° 90769 BEC 1714: origine ATCC n° 96625 Composition milieux de culture

Exemple 1 Glucose : 10 à 20 g/l Extrait de pomme de terre : 4 g/1 Extrait auto-lytique de levure : 1 g/1

PH : 4,0 à 5,0

Exemple de milieu de culture2 Jus de raisin qsp glucose 10 à 20 g/1 Extrait de pomme de terre 4 g/l Extrait auto-lytique de levure 1 g/1

PH (initial) : 4,0 à 5,0

Exemple de milieu de culture 3 Extrait de raisin : qsp glucose 10 à 20 g/l Extrait de pomme de terre : 4 g/1 Extrait auto-lytique de levure : 1 g/1

PH (initial) : 4,0 à 5,0 Exemple de milieu de culture 4 Extrait de raisin + extrait de tomate : qsp glucose 10 à 20 g/1 Extrait de pomme de terre : 4 g/1 Extrait auto-lytique de levure : 1 g/1 PH (initial) : 4,0 à 5,0 Exemples de fermentation avec la souche de Botrytis cinerea- Quel que soit le mode opératoire retenu, les fermentations et les traitements s'effectuent sur le même schéma Préparation des pré-cultures 1 : culture sur gélose PDA (Potatoes Dextrose Agar) (Incubation quelques jours ; étuve 25°C)

2 : culture liquide (Erlen) (Composition milieu : voir les exemples mentionnés précédemment) (Incubation shaker : 25°C ; 2 à 5 jours)35 Conditions de culture (fermenteur 20 litres) Taux d'ensemencement : environ 5% (pré-culture liquide) Aérobie : 0,5 à 1 vvm Agitation : 100 à 200 tpm PH régulé ou non : 25°C Température Durée : 5 à 10 jours Suivi culture : Consommation sucres Viscosité

Traitements des moûts de fermentation Après traitement thermique (stérilisation) le moût (éventuellement dilué) est clarifié par filtration ou centrifugation. On obtient ainsi une préparation limpide (colorée) qui peut présenter une viscosité notable.

La validation de l'intérêt biologique au niveau cutané de ces fermentats ou biofermentats a été effectuée sur des expiants de peau humaine. (Etude réalisée par la société BIO EC, Long-jumeau). Il a par exemple été noté une nette surexpresion de collagène III avec une expression modérée de collagène I. On a aussi observé une surexpression modérée des Glyco amino glycanes GAGs neutres le long de la jonction dermo-épidermique. Par l'intermédiaire des cellules de Langerhans, un intérêt dans la protection et dans la sphère anti inflammatoire cutanée a aussi été pressenti. Tous ces résultats permettent d'établir qu'un fermentat ou un biofermentat parfaitement contrôlé de Botrytis cinerea constitue un produit parfaitement adapté à des applications cutanées, en particulier pour lutter contre les problèmes de vieillissement de la peau.

Préparation des expiants de peau humaine et mise en survie en milieu BEM (BIO-EC's Ex-plants Medium). Les explants ont été répartis en un lot de six expiants et un lot témoin TO avec 3 expiants pour vérification et suivi a été utilisé : Les explants recevront chacun et à chaque temps de traitement : 20 l du produit P12 (fermentat issu de l'exemple 1) par incorporation directe dans le milieu de culture

Prélèvement pour l'histologie A J6 , 3 explants de chaque lot ont été prélevés. Les prélèvements sont coupés en deux, une moitié a été fixée dans du formol tamponné et l'autre moitié congelée à -80°C.

Etude histologique Après fixation, les prélèvements ont été déshydratés, imprégnés et enrobés en paraffine. Des coupes de 5 m ont été réalisées pour l'observation morphologique générale.

Première étape : Morphologie générale : L'observation de la morphologie générale des structures épidermiques et dermiques d'expiants de peau humaine est réalisée sur les coupes colorées au trichrome de Masson, va-riante de Goldner. Sur les explants traités par le produit de fermentation à 0.25%. Le stratum corneum est modérément épais, légèrement feuilleté, légèrement kératinisé en surface et plus nettement à sa base avec une légère parakératose. L'épiderme présente 5 à 6 assises cellulaires avec une assez bonne morphologie, malgré quelques cellules à oedème péri nucléaire. Le relief de la jonction dermo-épidermique est net. Le derme papillaire présente un collagène avec des fibres épaisses formant un réseau peu dense. Il est bien cellularisé.

Traitement histologique Des coupes en paraffine de 5 gm ont été réalisées selon le mode opératoire MO-H-173 à l'aide d'un microtome type Minot, Leica RM 2125 et montées sur des lames de verre histo- logiques Superfrost .

Les prélèvements congelés ont été coupés à 7 gm dans un cryostat Leica CM 3050. Les coupes ont été collées sur des lames de verre histologique silanisées Superfrost Plus pour les immunomarquages.

Exemple de résultats de tests concernant le collagène I : Aucun marquage n'est observé après avoir remplacé l'anti-corps primaire et l'anti-corps secondaire par du PBS comme il apparaît sur la figure I ci-après annexée.

Explants non traités à J6 : Le marquage est net, bien filamenteux et plus ou moins dense dans l'ensemble du derme papillaire. Explants traités avec le produit à J6 : Le marquage est très net, bien filamenteux et assez dense dans l'ensemble du derme papillaire.

Le produit induit une surexpression modérée de collagène I dans le derme papillaire. 20 Exemple de résultats de tests concernant le collagène III : Aucun marquage n'est observé après avoir remplacé l'anti-corps primaire et l'anti-corps secondaire par du PBS, comme il ressort de la figure II ci-annexée. Explants non traités à J6 : Le marquage est assez net, bien filamenteux et plus ou moins dense dans l'ensemble du 25 derme papillaire. Explants traités avec le roduit à J6 : Le marquage est fort, bien filamenteux et très dense surtout le long de la jonction dermoépidermique.

30 Le produit provoque une nette surexpression de collagène III surtout le long de la jonction dermo-épidermique Exemple de résultats de tests avec CDla Aucun marquage n'est observé après avoir remplacé l'anti-corps primaire et l'anti-corps se- condaire par du PBS comme il ressort de la figure III ci-annexée.

Explants non traités à J6 : Les cellules de Langerhans sont très nombreuses, très dendritiques et bien présentes dans tous les compartiments épidermiques. Elles sont légèrement présentes dans le derme. Explants traités avec le produit à J6 : Les cellules de Langerhans sont nombreuses, très dendritiques et bien présentes dans tous les compartiments épidermiques. Elles sont modérément présentes dans le derme.

Ce biofermentat induit une très légère diminution des cellules de Langerhans dans l'épiderme sans modification de leur morphologie.

20 25 30 9 35 Exemples de formules pour des applications cutanées 5 Exemple 1 : crème restructurante anti-âge MATIERES PREMIERES % NOM INCI PHASE A 5.00 Behenyl alcohol / Glyceryl stearate / Céralution H (Sasol) 3.00 Glyceryl stearate citrate / sodium di- Nacol 22/98 (Sasol) cocoamide PEG-15 sulfate Behenyl alcohol Miglyol 812 (Sasol) 4.00 Caprylic / capric triglyceride Isofol 20 (Sasol) 3.00 Octyldodecanol Dub MOD (Stéarineries Dubois) 4.00 Octyldodecyl myristate Lanol SG (Goldschmidt ù Dégussa) 3.00 Glyceryl stearate Q6 Céramide issu de l'huile de Car- 0.50 Palmitoyl PG-linoleamide thame (Solabia) Phytopin (DRT) 10.50 Phytosterols _ 0.15 Phosphatidylcholine Phospholipon 90G (Phospholipid GmbH) PHASE B qs 100 Aqua . . . . .. . . . . .. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Eau déminéralisée Biofermentat de Botrytis cinerea 3.00 Physiogényl (UCIB) 3.00 Sodium PCA / Magnesium PCA / Zinc PCA / Manganese PCA Glycérine 3.00 Glycerin Keltrol CG-SFT (Kelco) 0.30 Xanthan gum PHASE C Glycofilm (Solabia) 5.00 Biosaccharide gum-4 PHASE D _ DC 1403 (Dow Corning) 11.50 Dimethicone / Dimethiconol Sépiplus 265 (Seppic) 11.50 Ammonium acrylate and acrylamide copolymer / Polyisobutene / Polysor- bate 20 PHASE E Parfum 40119-01 (Synarôme) 0.20 Fragrance _ FDC Red 40 (LCW) qs CI 16035 DC Yellow 6 (LCW)_ qs CI 15985 Conservateur qs 105 Exemple 2. crème biomimétique anti-âge MATIERES PREMIERES % NOM INCI PHASE A Céralution H (Sasol) 5.00 Behenyl alcohol / Glyceryl stearate / _ ___ Glyceryl stearate citrate / sodium di- cocoamide PEG-15 sulfate Nacol 22/98 (Sasol) 3.00 Behenyl alcohol Miglyol 812_(Sasol) 4.00 Caprylic / capric triglyceride Isofol 20 (Sasol) 3.00 Octyldodecanol Dub MOD (Stéarineries Dubois) 4.00 Octyldodecyl myristate Lanol SG (Goldschmidt û Dégussa) 3.00 Glyceryl stearate ç 37619 Céramide issu de l'huile de pé- 0.50 Palmitoyl PG-linolenamide pins de framboises (Solabia) Phytopin (DRT) 0.50 Phytosterols Phospholipon 90G (Phospholipid 0.15 Phosphatidylcholine GmbH) PHASE B Eau déminéralisée qs 100 Aqua Biofermentat de Botrytis cinerea 5.00 Physiogényl (UCIB) 3.00 Sodium PCA / Magnesium PCA / Zinc PCA / Manganese PCA Glycérine 3.00 Glycerin Keltrol CG-SFT (Kelco) 10.30 Xanthan gum PHASE C Glycofilm (Solabia) 5.00 Biosaccharide gum-4 PHASE D Dimethicone / Dimethiconol DC 1403 (Dow Corning) 11.50 Sépiplus 265 (Seppic) 11.50 Ammonium acrylate and acrylamide copolymer / Polyisobutene / Polysor- bate 20 PHASE E Parfum 40119-01 (Synarôme) 10.20 Fragrance FDC Red 40 (LCW) qs CI 16035 DC Yellow 6 (LCW) qs CI 15985 Conservateur qs 11 10 Exemple 3 : crème apaisante MATIERES PREMIERES % NOM INCI PHASE A 4.00 Methyl glucose sesquistearate Tégo care PS (Goldschmidt û De- 12.00 Behenyl alcohol gussa) Nacol 22/98 (Sasol) Miglyol 8810 (Sasol) 4.00 Butylene glycol dicaprylate / dicaprate DC 200 V 100 (Dow Corning) 2.00 Dimethicone Isofol 20 (Sasol) 14.00 Octyldodecanol___ 523 Céramide issu de l'huile de pépins 0.60 Palmitoyl PG-linolenamide de kiwi (Solabia) Phospholipon 90G (Phospholipid 0.20 Phosphatidylcholine GmbH) PHASE B Eau déminéralisée ` qs 100 Aqua Biofermentat de Botrytis cinerea 1.00 Glycérine 2.00 Glycerin Keltrol CG-SFT (Kelco) 0.30 Xanthan gum PHASE C _ Rhamnosoft (Solabia) 5.00 _Biosaccharidegum-2 DC 1501 (Dow Corning) 1.50 Cyclopentasiloxane / dimethiconol Sépigel 305 (Seppic) 11.00 Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 Parfum 40120-01 (Synarôme) 0.20 Fragrance Acide lactique [ qs Conservateur qs 12 10 15 20 Exemple 4 : crème anti-âge pour peaux sensibles MATIERES PREMIERES (% NOM INCI PHASE A Montanov 202 (Seppic) 5.00 Arachidyl alcohol / behenyl alcohol / [ arachidyl glucoside _ 10.30 _ Nikkolipid 81 S (Nikko) Batyl alcohol / stearic acid / caprylic/capric triglyceride / lecitin Miglyol 812 (Sasol) 4.00 Caprylic / capric triglyceride Isoto120 (Sasol) 3.00 Octyldodecanol Tegosoft CO (Goldschmidt) 2.00 Cety_l ethylhexanoate Dub PTO (Stéarineries Dubois) 2.00 1 Pentaerythrityl tetraethylhexanoate Q6 Céramide issu de l'huile de Coton 0.30 Palmitoyl PG-linoleamide (Solabia) analogue de céramide riche en acide 1.00 _ punicique obtenu à partir d'huile de pépins de grenade Phytopin (DRT) _ Phytosterols 0.30 PHASE B qsp Aqua Eau déminéralisée Conservateur qs __ 2.00 Glycerin fermentat de Botrytis cinerea 12.00 Glycérine _ 0.20 Xanthan gum Keltrol CG SFT (Kelco) PHASE C 5.00 ........................................... ...HASE Biosaccharide gum-1 Fucogel (Solabia) PHASE D Glycolysat de papaye (CEP) 14.00 Propylene glycol / Aqua / Carica pa- paya Simulgel NS (Seppic) 0.75 _ Hydroxyethyl acrylate / sodium acry- loyldimethyl taurate copolymer / squalane / Polysorbate 60 DC 1501 (Dow Corning) 1.00 Cyclopentasiloxane / dimethiconol PHASE 0.20 _ HAS. Parfum E E Parfum Flashy (Synarôme) DCYellow 6 (LCW) ; qs CI 15985 FDC Red 40 (LCW) _ qs CI 160355 Exemple 5 : Composition pour le maintien de l'élasticité cutanée MATIERES PREMIERES % (m/m) DENOMINATION INCI PHASE A Tégo care PS (Goldschmidt û De- 4.00 Methyl glucose sesquistearate gussa) Nacol 22/98 (Sasol) i 2M0 _ Behenyl alcohol Miglyol 8810 (Sasol) 14.00 Butylene glycol dicaprylate / dicaprate DC 200 V 100 (Dow Corning) 2.00 Dimethicone Isofol 20 (Sasol) 3.00 Octyldodecanol Oméga9 ceramide (Solabia) 1.00 Palmitoyl PG-linoleamide PHASE B Eau déminéralisée qs 100 Aqua Glycérine 2.00 Glycerin KeltrolCG-SFT (Kelco) _ 0.30 Xanthan gum __ _ PHASE C ____ 5.00 Biosaccharide gum-2 Rhamnosoft (Solabia) fermentat de Botrytis cinerea 3.50 DC 1501 (Dow Corning) 1.50 Cyclopentasiloxane / dimethiconol Sépigel 305 (Seppic) 1.00 Polyacrylamide / C13-14 isoparaffin / Laureth-7 Parfum 0.20 ' Fragrance ,...__ ___ Acide lactique qs Conservateur qs C ... 10 15

Claims (8)

1. REVENDICATIONS1) Compositions cosmétiques et/ou dermatologiques caractérisées en ce qu'elles renferment à titre de principe actif un produit de fermentation de Bo/ryîis cinercu en association ou en mé-5 lange avec un excipient ou un véhicule inerte non toxique. dermatologiquement acceptable.
2. 2) Compositions cosmétiques et/ou dermatologiques selon la revendication 1 caractérisées en ce que le fermentat de Botrytis est celui d'une souche BEC 1713 (Al CC N° 90769) ou d'une souche BEC 1714 (ATCC N° 96625)
3. 3) Compositions cosmétiques et/ou dermatologiques selon la revendication 1 ou la revendication 2 dans lesquelles la concentration en fermentat de Botrytis s'échelonne de 0.1 à l o% en poids. 15
4. 4) Compositions cosmétiques et/ou dermatologiques selon l'une des revendications précédentes dans lesquelles la concentration en fermentas de Botrytis s'échelonne de 0.2 à 5 %
5. 5) Utilisation d'une composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes pour des applications dans le domaine cutané.
6. 6) Utilisation d'une composition cosmétique selon la revendication 5 pour des applications dans le domaine de l'anti-âge.
7. 7) Utilisation d'une composition dermatologique selon l'une des revendications précédentes 25 en vue de la réalisation d'un médicament à base de fermentat de Botrytis destiné à traiter ou à améliorer les problèmes liés au vieillissement de la peau.
8. 8) Utilisation d'une composition dermatologique selon l'une des revendications précédentes à base de fermentat de Botrytis en vue de la réalisation d'un médicaments destiné à s'appliquer 30 dans le domaine de l'anti-âge. 10 20