FR2944209A1 - Cosmetic use of active ingredient comprising sugar obtained from Adenophora stricta in cosmetic composition as skin depigmenting agent, to lighten skin and/or to reduce skin pigmentation spots and to inhibit the synthesis of melanin - Google Patents
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Description
UTILISATION COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU D'ADENOPHORA STRICTA POUR DEPIGMENTER LA PEAU, AGENT COSMETIQUE, PROCEDE D'OBTENTION ET COMPOSITIONS COSMETIC USE OF AN ACTIVE INGREDIENT FROM ADENOPHORA STRICTA FOR SKIN DEPIGMENTATION, COSMETIC AGENT, PROCESS FOR OBTAINING AND COMPOSITIONS
La présente invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique d'un principe actif issu d'Adenophora stricto pour dépigmenter ou éclaircir la peau. L'invention se rapporte également à un agent cosmétique dépigmentant issu d'Adenophora stricto, à un procédé d'obtention ainsi qu'à des compositions dépigmentantes et/ou éclaircissantes comprenant au moins un principe actif issu d'Adenophora stricto. La couleur de la peau chez l'homme est le résultat d'un subtil mélange de pigments dont l'essentiel résulte de variations quantitatives et qualitatives des mélanines, pigments produits et sécrétés par des cellules spécialisées appelées mélanocytes situées dans la couche basale de l'épiderme. Deux types de mélanines sont synthétisées : les eumélanines de couleur noire, qui sont photoprotectrices, et les phaeomélanines, de couleur jaune-rouge qui sont photosensibilisantes. La couleur de la peau découle de l'association de ces deux groupes de mélanines sous l'influence d'enzymes et de nombreux gènes de contrôle. La production de mélanines, ou mélanogenèse, assure une pigmentation constitutive de la peau dès la naissance. Elle conduit également à une pigmentation facultative ou induite, le bronzage, qui correspond à une réponse évolutive et adaptative de l'organisme à différents stimuli dont les expositions prolongées au soleil. The present invention relates to the use in a cosmetic composition of an active ingredient derived from Adenophora stricto to depigment or lighten the skin. The invention also relates to a depigmenting cosmetic agent derived from Adenophora stricto, to a process for obtaining and to depigmenting and / or lightening compositions comprising at least one active ingredient derived from Adenophora stricto. The color of the skin in humans is the result of a subtle mixture of pigments, the essential result of quantitative and qualitative variations of melanins, pigments produced and secreted by specialized cells called melanocytes located in the basal layer of the skin. epidermis. Two types of melanin are synthesized: the black eumelanins, which are photoprotective, and the yellow-red phaeomelanins, which are photosensitizing. The color of the skin results from the combination of these two groups of melanins under the influence of enzymes and many control genes. The production of melanins, or melanogenesis, ensures a constitutive pigmentation of the skin from birth. It also leads to an optional or induced pigmentation, tanning, which corresponds to an evolutionary and adaptive response of the body to different stimuli including prolonged exposure to the sun.
Il est courant que des personnes souhaitent recourir à une dépigmentation de la peau pour des raisons cosmétiques diverses, soit pour un éclaircissement global, soit pour éliminer ou atténuer des tâches issues de désordres locaux de la pigmentation. En effet, une des caractéristiques du vieillissement cutané est l'apparition de tâches pigmentaires disgracieuses appelées lentigo solaires pour les zones les plus fréquemment photo-exposées, et lentigo séniles pour les tâches pigmentaires assez larges qui apparaissent chez le sujet âgé. Actuellement, il existe de nombreux agents de la dépigmentation destinés à éclaircir la peau ou à limiter les pigmentations excessives et restaurer une coloration normale de la peau. Ces actifs agissent soit directement sur la vitalité des mélanocytes, soit en inhibant une des enzymes impliquées dans la synthèse de mélanine. Toutefois il subsiste toujours un besoin pour un produit cosmétique dépigmentant efficace, capable d'atténuer visiblement la pigmentation de la peau. Pour répondre à cette problématique, la présente invention propose d'utiliser un principe actif issu d'Adenophora stricto comme agent dépigmentant. L'Adenophora est une plante herbacée de la famille des Campanulacées. L'Adenophora stricto est une espèce particulière, traditionnellement utilisée comme plante ornementale. Elle est également utilisée en médecine chinoise. D'après l'Oriental Materia Medica, Adenophora radix, permet de traiter le phlegme, de contrôler la toux, de nourrir le Yin et de nettoyer les poumons. Adenophora radix est également connu comme expectorant, cardiotonique et anti-fongique. En outre, en médecine orientale, la racine d'Adenophora est employée en tant qu'agent de détoxication. En cosmétique, Adenophora stricto est connue pour quelques applications spécifiques. Ainsi, la demande de brevet FR-2.904.934 décrit l'utilisation d'un complexe contenant un extrait de Chaparral, un extrait d'Adenophora stricto et un extrait de Lupinus albus dans une composition anti-vieillissement. De même la demande de brevet japonais JP-3.176.414 décrit une utilisation d'un extrait d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique anti-pelliculaire. Toutefois l'utilisation d'Adenophora stricto pour dépigmenter la peau n'a jamais été envisagée. Or, de façon surprenante, Adenophora stricto présente des propriétés remarquables qui lui permettent d'agir simultanément sur plusieurs facteurs essentiels impliqués dans le phénomène de pigmentation cutanée. L'invention vise donc l'utilisation cosmétique d'un principe actif d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique comme agent dépigmentant ou agent d'éclaircissement de la peau. En particulier l'invention vise l'utilisation d'un principe actif issu d'Adenophora stricto contenant au moins 30% de sucres. L'utilisation d'un tel actif permet d'agir sur la mélanocytogenèse, sur la mélanogenèse, sur le transport des mélanosomes et sur la mélanogenèse photo- induite. Préférentiellement l'invention vise l'utilisation d'un actif qui permet d'agir simultanément sur ces différents phénomènes. L'invention vise également un agent cosmétique dépigmentant, obtenu à partir d'Adenophora stricto, présentant une teneur en sucres supérieure à 30% par rapport à la teneur totale en matière sèche, un procédé d'obtention de cet actif cosmétique ainsi que des compositions cosmétiques incluant au moins un actif. Par agent dépigmentant ou agent d'éclaircissement , on entend un principe actif cosmétique capable de dépigmenter ou d'éclaircir la peau humaine. Les principes actifs issus d'Adenophora stricto selon l'invention peuvent être obtenus par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. It is common that people wish to use a depigmentation of the skin for various cosmetic reasons, either for an overall clarification, or to eliminate or mitigate tasks resulting from local disorders of pigmentation. Indeed, one of the characteristics of cutaneous aging is the appearance of unsightly pigmentary spots called solar lentigo for the most frequently photo-exposed areas, and senile lentigo for the rather large pigmentary spots that appear in the elderly subject. Currently, there are many depigmentation agents to lighten the skin or limit excessive pigmentations and restore a normal skin color. These active agents act either directly on the vitality of melanocytes, or by inhibiting one of the enzymes involved in melanin synthesis. However, there is still a need for an effective depigmenting cosmetic product, capable of visibly reducing the pigmentation of the skin. To answer this problem, the present invention proposes to use an active ingredient derived from Adenophora stricto as a depigmenting agent. Adenophora is a herbaceous plant of the family Campanulaceae. Adenophora stricto is a special species, traditionally used as an ornamental plant. It is also used in Chinese medicine. According to the Oriental Materia Medica, Adenophora radix, it is possible to treat phlegm, control coughs, feed Yin and clean the lungs. Adenophora radix is also known as expectorant, cardiotonic and anti-fungal. In addition, in eastern medicine, Adenophora root is used as a detoxifying agent. In cosmetics, Adenophora stricto is known for some specific applications. Thus, patent application FR-2,904,934 describes the use of a complex containing a Chaparral extract, an extract of Adenophora stricto and an extract of Lupinus albus in an anti-aging composition. Similarly, Japanese Patent Application JP-3.176.414 describes a use of an Adenophora stricto extract in an anti-dandruff cosmetic composition. However the use of Adenophora stricto to depigment the skin has never been considered. Surprisingly, Adenophora stricto has remarkable properties that enable it to act simultaneously on several essential factors involved in the skin pigmentation phenomenon. The invention therefore relates to the cosmetic use of an active ingredient of Adenophora stricto in a cosmetic composition as a depigmenting agent or skin lightening agent. In particular, the invention relates to the use of an active ingredient derived from Adenophora stricto containing at least 30% of sugars. The use of such an active agent makes it possible to act on melanocytogenesis, on melanogenesis, on the transport of melanosomes and on photoinduced melanogenesis. Preferably, the invention aims at the use of an active agent which makes it possible to act simultaneously on these different phenomena. The invention also relates to a depigmenting cosmetic agent, obtained from Adenophora stricto, having a sugar content of greater than 30% relative to the total content of dry matter, a process for obtaining this cosmetic active ingredient as well as compositions cosmetics including at least one active ingredient. By depigmenting agent or lightening agent is meant a cosmetic active ingredient capable of depigmenting or lightening human skin. The active ingredients derived from Adenophora stricto according to the invention can be obtained by a process comprising at least one enzymatic hydrolysis step.
De manière préférentielle, les compositions cosmétiques selon l'invention contiennent 0,01 à 20% d'un extrait d'Adenophora stricto. Elles peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique. Preferably, the cosmetic compositions according to the invention contain 0.01 to 20% of an extract of Adenophora stricto. They can be in any form allowing the application topically.
L'invention vise aussi un procédé cosmétique pour dépigmenter des tâches pigmentaires et/ou éclaircir la peau, comprenant l'application topique sur la peau d'au moins une composition cosmétique contenant entre 0,01 à 20% d'un extrait d'Adenophora stricto. The invention also relates to a cosmetic process for depigmenting pigmentary spots and / or lightening the skin, comprising the topical application to the skin of at least one cosmetic composition containing between 0.01% and 20% of an extract of Adenophora strict.
La présente invention est maintenant décrite en détail. Selon un premier aspect l'invention vise donc l'utilisation d'un principe actif issu d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique comme agent dépigmentant ou agent d'éclaircissement de la peau. Préférentiellement il s'agit d'un principe actif osidique issu d'Adenophora stricto, encore plus préférentiellement un principe actif issu d'Adenophora stricto présentant une teneur en sucres supérieure ou égale à 30% par rapport à la teneur totale en matière sèche. Le processus de synthèse des mélanines par les mélanocytes différenciés, la mélanogenèse, met en jeu différentes enzymes qui catalysent chacune des réactions conduisant à la formation des pigments mélaniques au sein des mélanosomes. Trois enzymes sont particulièrement impliquées dont la tyrosinase. L'actif issu d'Adenophora stricto selon la présente invention propose de réduire l'activité de la tyrosinase et par conséquent de limiter la synthèse des pigments mélaniques. The present invention is now described in detail. According to a first aspect the invention therefore aims to use an active ingredient derived from Adenophora stricto in a cosmetic composition as a depigmenting agent or skin lightening agent. Preferably, it is an osidic active ingredient derived from Adenophora stricto, more preferably an active ingredient derived from Adenophora stricto having a sugar content greater than or equal to 30% with respect to the total content of dry matter. The process of synthesis of melanins by differentiated melanocytes, melanogenesis, involves different enzymes that catalyze each of the reactions leading to the formation of melanin pigments within melanosomes. Three enzymes are particularly involved including tyrosinase. The active ingredient derived from Adenophora stricto according to the present invention proposes to reduce the activity of tyrosinase and consequently to limit the synthesis of melanin pigments.
Les mélanocytes possèdent des expansions cytoplasmiques appelées dendrites mélanocytaires , qui leur permettent de rentrer en contact avec les kératinocytes des couches suprabasales. Chaque mélanocyte est en relation avec environ 36 kératinocytes, formant ainsi une unité épidermique de mélanisation . En même temps que se déroule la synthèse des mélanines, les mélanosomes sont transportés vers l'extrémité des dendrites mélanocytaires. Les mélanosomes sont transportés le long de fibres d'actine et de tubuline grâce à un complexe moléculaire d'ancrage aux extrémités des dendrites comprenant Rab27 et la mélanophiline. Les mélanosomes sont ensuite transférés vers les kératinocytes associés. La présente invention propose un actif issu d'Adenophora stricto capable de réduire la synthèse de Rab27 et/ou de la mélanophiline au sein des mélanocytes, limitant ainsi le transport des mélanosomes vers l'extrémité des dendrites mélanocytaires. En outre l'actif selon l'invention permet aussi de bloquer le transfert des mélanosomes, du mélanocyte vers les kératinocytes auxquels il est associé. Au sens de l'invention mélanogenèse désigne le processus de synthèse de la mélanine incluant toutes les réactions enzymatiques et/ou non enzymatiques se rapportant au procédé de synthèse d'un précurseur chimique de la mélanine, d'un de ses intermédiaires ou sous-produits. De même, le terme transport des mélanosomes désigne le processus de mobilité des mélanosomes incluant toutes les réactions enzymatiques et/ou non enzymatiques se rapportant au procédé de migration des mélanosomes. Par ailleurs, le terme inhiber signifie au sens de la présente invention, diminuer, limiter ou bloquer l'action ou le fonctionnement d'un procédé. Selon l'invention l'utilisation d'un principe actif issu d'Adenophora stricto permet donc d'atténuer la pigmentation de la peau, préférentiellement simultanément - en contrôlant la mélanogenèse par la tyrosinase, et - en contrôlant le transport des mélanosomes au sein des mélanocytes et en bloquant le transfert des mélanosomes vers les kératinocytes via Rab27 et/ou mélanophiline. Avantageusement, l'utilisation d'un extrait d'Adenophora stricto permet donc de réduire la formation des pigments mélaniques et de limiter leur concentration au sein des kératinocytes. Il peut être utilisé en tant que principe actif dans une composition cosmétique pour un effet dépigmentant efficace en vue par exemple d'éclaircir la peau et/ou de réduire des tâches pigmentaires cutanées de vieillissement ou UV-induites. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un principe actif ou agent cosmétique dépigmentant particulièrement adapté, obtenu à partir d'Adenophora stricto, présentant une teneur en sucres supérieure à 30% du poids total de l'extrait sec. De façon préférée il s'agit d'un principe actif issu d'Adenophora stricto présentant une teneur en sucres comprise entre 40 et 65% par rapport à la teneur totale en matière sèche. Melanocytes have cytoplasmic expansions called melanocyte dendrites, which allow them to come into contact with the keratinocytes of suprabasal layers. Each melanocyte is related to approximately 36 keratinocytes, thus forming an epidermal unit of melanization. At the same time as melanin synthesis is taking place, melanosomes are transported to the end of melanocyte dendrites. The melanosomes are transported along actin and tubulin fibers by means of an anchoring molecular complex at the ends of the dendrites comprising Rab27 and melanophilin. The melanosomes are then transferred to the associated keratinocytes. The present invention provides an active ingredient derived from Adenophora stricto capable of reducing the synthesis of Rab27 and / or melanophilin within melanocytes, thereby limiting the transport of melanosomes to the end of melanocyte dendrites. In addition, the active agent according to the invention also makes it possible to block the transfer of melanosomes from the melanocyte to the keratinocytes with which it is associated. For the purposes of the invention, melanogenesis refers to the process of synthesizing melanin, including all the enzymatic and / or non-enzymatic reactions relating to the process for the synthesis of a chemical precursor of melanin, of one of its intermediates or by-products. . Similarly, the term transport of melanosomes refers to the process of mobility of melanosomes including all enzymatic and / or non-enzymatic reactions related to the melanosome migration process. Moreover, the term "inhibit" means, within the meaning of the present invention, to reduce, limit or block the action or the operation of a process. According to the invention, the use of an active ingredient derived from Adenophora stricto thus makes it possible to attenuate the pigmentation of the skin, preferably simultaneously - by controlling melanogenesis by tyrosinase, and - by controlling the transport of melanosomes within the cells. melanocytes and blocking the transfer of melanosomes to keratinocytes via Rab27 and / or melanophilin. Advantageously, the use of an Adenophora stricto extract therefore makes it possible to reduce the formation of melanin pigments and to limit their concentration within the keratinocytes. It can be used as an active ingredient in a cosmetic composition for an effective depigmenting effect, for example to lighten the skin and / or to reduce aging or UV-induced skin pigment spots. According to a second aspect, the invention relates to a particularly suitable active ingredient or cosmetic depigmenting agent, obtained from Adenophora stricto, having a sugar content greater than 30% of the total weight of the dry extract. Preferably, it is an active ingredient derived from Adenophora stricto having a sugar content of between 40 and 65% relative to the total content of dry matter.
L'actif selon l'invention peut être obtenu à partir de toute partie d'une plante d'Adenophora stricto, notamment de la graine, de la feuille, de la tige et du bourgeon. Préférentiellement il est obtenu à partir de racines d'Adenophora stricto. Il peut notamment se présenter sous forme liquide, ou sous forme de poudre 15 après atomisation ou lyophilisation. Préférentiellement il se présente sous forme d'un liquide aqueux limpide de couleur claire, et peut être défini par les caractéristiques exposées ci-après. Matières sèches : On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105°C en 20 présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches d'un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention est compris entre 10 et 150 g/I, plus particulièrement entre 24 et 44 g/I. 25 Mesure du pH : Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 3 et 5, plus particulièrement entre 3 et 4. The active agent according to the invention can be obtained from any part of an Adenophora stricto plant, in particular from the seed, the leaf, the stem and the bud. Preferably it is obtained from roots of Adenophora stricto. It may in particular be in liquid form, or in powder form after atomization or lyophilization. Preferably it is in the form of a clear aqueous liquid light color, and can be defined by the characteristics described below. Dry matter: The solids content is measured by passing the oven at 105 ° C. in the presence of sand of a sample of initial weight given until a constant weight is obtained. The solids content of an active ingredient derived from Adenophora stricto according to the invention is between 10 and 150 g / l, more particularly between 24 and 44 g / l. PH measurement: The pH measured by the potentiometric method at ambient temperature leads to values of between 3 and 5, more particularly of 3 to 4.
Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'un gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux d'un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention est compris entre 5 et 85 g/I, préférentiellement entre 13 et 25 g/I. L'actif contient au moins 30% de sucres totaux par rapport aux matières sèches totales. Préférentiellement la teneur est comprise entre 40 et 65%. Caractérisation des carbohydrates L'analyse par HPLC d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer la répartition des poids moléculaires de la fraction glucidique. Poids moléculaire (Da) Pourcentage de la fraction glucidique d'un principe actif selon l'invention (%) Monosaccharides <180 Entre 60 et 80% Oligosaccharides 180<MM<1500 Entre 20 et 40% La caractérisation par chromatographie en phase gazeuse (CPG) de la fraction glucidique du principe actif selon l'invention donne les résultats suivants15 Composition de la fraction glucidique d'un principe actif selon l'invention (%) Acide galacturonique 36.6 Glucose 32.2 Arabinose 18.4 Rhamnose 4.7 Galactose 4.7 Mannose 1.3 Acide Glucuronique 1.2 Xylose 0.9 Un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention se caractérise donc par une fraction carbohydrates composée principalement d'acide galacturonique, de glucose et d'arabinose sous forme de monosaccharides et d'oligosaccharides. Determination of the total sugar content The DUBOIS method is used. In the presence of concentrated sulfuric acid and phenol, the reducing sugars give an orange-yellow compound. From a standard range, the total sugar content of a sample can be determined. The total sugar content of an active ingredient derived from Adenophora stricto according to the invention is between 5 and 85 g / l, preferably between 13 and 25 g / l. The active ingredient contains at least 30% total sugars as compared to total solids. Preferably the content is between 40 and 65%. Carbohydrate Characterization The HPLC analysis of an active ingredient according to the invention makes it possible to determine the distribution of the molecular weights of the carbohydrate moiety. Molecular weight (Da) Percentage of carbohydrate moiety of an active ingredient according to the invention (%) Monosaccharides <180 Between 60 and 80% Oligosaccharides 180 <MM <1500 Between 20 and 40% Characterization by gas chromatography (GC ) of the carbohydrate moiety of the active ingredient according to the invention gives the following results Composition of the glucidic moiety of an active ingredient according to the invention (%) Galacturonic acid 36.6 Glucose 32.2 Arabinose 18.4 Rhamnose 4.7 Galactose 4.7 Mannose 1.3 Glucuronic acid 1.2 Xylose 0.9 An active ingredient derived from Adenophora stricto according to the invention is therefore characterized by a carbohydrate moiety composed mainly of galacturonic acid, glucose and arabinose in the form of monosaccharides and oligosaccharides.
Détermination de la teneur en protéines Le taux de protéines est obtenu par la méthode de Kjedhal. La teneur en protéines totales peut être exprimée en pourcentage par rapport à la teneur en matières sèches. L'actif cosmétique selon l'invention issu d'Adenophora stricto contient moins 10 de 40% de protéines par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement moins de 20%. Détermination de la teneur en composés phénoliques Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, détectables à 715nm. 15 L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques. Les lectures sont réalisées à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 40 à 120mg/I. Determination of the protein content The protein level is obtained by the Kjedhal method. The total protein content may be expressed as a percentage of dry matter content. The cosmetic active ingredient according to the invention derived from Adenophora stricto contains less than 40% of proteins relative to total solids, preferably less than 20%. Determination of the content of phenolic compounds The phenolic compounds form, in the presence of potassium ferricyanide, colored compounds, detectable at 715 nm. The intensity of staining is proportional to the amount of phenolic compounds. The readings are made from a standard range of gallic acid ranging from 40 to 120 mg / l.
La teneur en composés phénoliques est exprimée en pourcentage par rapport aux matières sèches. L'actif cosmétique selon l'invention issu d'Adenophora stricto contient moins de 10% de composés phénoliques par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement moins de 5%. Fraction active La fraction active d'un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention est déterminée dans l'étude de la synthèse de mélanine. La fraction active permet de réduire de 40% la synthèse de mélanine dans des cultures de mélanocytes B16F1. L'analyse de la fraction active d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer un degré de polymérisation moyen égal à 4,9, représentatif d'oligosaccharides. La caractérisation par chromatographie en phase gazeuse (CPG) de la fraction active du principe actif donne les résultats suivants Composition de la fraction active du principe actif selon l'invention (%) Arabinose 29.5 Acide galacturonique 26.9 Glucose 16.8 Galactose 8.5 Rhamnose 8.4 Xylose 3.9 Acide Glucuronique 3.7 Mannose 1.6 Fucose 0.7 La fraction active d'un principe actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention se caractérise donc par une fraction carbohydrate composée d'oligosaccharides principalement d'arabinose, d'acide galacturonique et de glucose. The content of phenolic compounds is expressed as a percentage relative to the solids. The cosmetic active ingredient according to the invention derived from Adenophora stricto contains less than 10% of phenolic compounds relative to total solids, preferentially less than 5%. Active Fraction The active fraction of an active ingredient derived from Adenophora stricto according to the invention is determined in the study of melanin synthesis. The active fraction makes it possible to reduce melanin synthesis by 40% in B16F1 melanocyte cultures. The analysis of the active fraction of an active ingredient according to the invention makes it possible to determine an average degree of polymerization equal to 4.9, representative of oligosaccharides. The characterization by gas chromatography (GC) of the active fraction of the active principle gives the following results Composition of the active fraction of the active ingredient according to the invention (%) Arabinose 29.5 Galacturonic acid 26.9 Glucose 16.8 Galactose 8.5 Rhamnose 8.4 Xylose 3.9 Acid Glucuronique 3.7 Mannose 1.6 Fucose 0.7 The active fraction of an active ingredient derived from Adenophora stricto according to the invention is therefore characterized by a carbohydrate moiety composed of oligosaccharides mainly of arabinose, galacturonic acid and glucose.
Selon un autre aspect, la présente invention vise un procédé d'obtention d'un agent cosmétique issu d'Adenophora stricto. Le procédé comprend au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. Préférentiellement il s'agit d'un procédé comprenant les étapes suivantes : - solubilisation d'une poudre de racines d'Adenophora stricto en 10 milieu aqueux, - au moins une hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble, - traitement thermique en vue du blocage des activités enzymatiques, et 15 - filtration, et/ou - filtration stérilisante. Le procédé peut comprendre une étape de concentration par ultrafiltration, précipitation et/ou chromatographie. L'agent cosmétique obtenu peut être ensuite présenté sous forme liquide ou sous 20 forme de poudre après atomisation ou lyophilisation. Le procédé peut également comprendre une étape d'ajout de conservateur(s), et/ou des étapes permettant de stabiliser la couleur et l'odeur de l'actif obtenu. La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques pour application topique sur la peau destinée à un effet dépigmentant, comprenant entre 0,1 25 et 25% en poids d'un agent cosmétique issu d'Adenophora stricto selon l'invention. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions sont notamment destinées à réduire des tâches d'hyperpigmentation et/ou à éclaircir la peau. Des tests ont montré la compatibilité du principe actif avec les matières premières utilisées en cosmétique : épaississants, émulsionnants, solvants. On peut également citer un exemple de formulation ayant montré une stabilité physique, incluant 4% d'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto selon l'invention : - Arachidyl alcool/Behenyl alcool/Arachidyl glucoside : 3,0% - Isononyl isononoate : 2,0% - Cetearyl octonoate : 10,0% - Polyacrylamide/C13-14 Isoparaffin/Laureth-7 : 2,0% - Conservateurs : 0,5% - Agent cosmétique selon l'invention : 4,0% - Eau : 78,5%. According to another aspect, the present invention relates to a process for obtaining a cosmetic agent derived from Adenophora stricto. The method comprises at least one enzymatic hydrolysis step. Preferably, it is a process comprising the following steps: solubilization of a root powder of Adenophora stricto in an aqueous medium, at least one enzymatic hydrolysis, separation of the soluble and insoluble phases, heat treatment in blocking of enzymatic activities, and 15-filtration, and / or-sterilizing filtration. The method may comprise a concentration step by ultrafiltration, precipitation and / or chromatography. The cosmetic agent obtained can then be presented in liquid form or in the form of powder after atomization or lyophilization. The method may also include a step of adding preservative (s), and / or steps to stabilize the color and odor of the asset obtained. The present invention also covers cosmetic compositions for topical application to the skin intended for a depigmenting effect, comprising between 0.1 and 25% by weight of a cosmetic agent derived from Adenophora stricto according to the invention. These compositions may especially be in the form of creams, oil-in-water emulsions, water-in-oil emulsions, multiple emulsions, solutions, suspensions or powders. They can be more or less fluid and have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a paste or a foam, or in solid form. These compositions are especially intended to reduce hyperpigmentation tasks and / or lighten the skin. Tests have shown the compatibility of the active ingredient with the raw materials used in cosmetics: thickeners, emulsifiers, solvents. There may also be an example of a formulation having shown a physical stability, including 4% of cosmetic agent derived from Adenophora stricto according to the invention: - Arachidyl alcohol / Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside: 3.0% - Isononyl isononoate: 2 , 0% - Cetearyl octonoate: 10.0% - Polyacrylamide / C13-14 Isoparaffin / Laureth-7: 2.0% - Preservatives: 0.5% - Cosmetic agent according to the invention: 4.0% - Water: 78 , 5%.
L"invention est maintenant illustrée par des études évaluant l'effet d'un agent cosmétique issu d'Adenophora stricto. L'actif utilisé pour ces études est un actif issu d'Adenophora stricto présentant les caractéristiques suivantes : - solution aqueuse - aspect : liquide limpide - couleur : jaune - matières sèches : 30,7 g/I - teneur en sucres totaux : 14,4g/l, soit 46% de l'extrait sec - teneur en protéines totales : 3,1g/I, soit 10% de l'extrait sec. The invention is now illustrated by studies evaluating the effect of a cosmetic agent derived from Adenophora stricto The active ingredient used for these studies is an active ingredient derived from Adenophora stricto having the following characteristics: - aqueous solution - appearance: clear liquid - color: yellow - solids content: 30.7 g / l - total sugar content: 14.4 g / l, ie 46% of the dry extract - total protein content: 3.1 g / l, ie 10 % of the dry extract.
Cet exemple d'extrait n'est bien entendu pas limitatif. 1/ Evaluation de l'effet sur la mélanogenèse 1-1/Etude de l'activité anti-tyrosinase L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet dépigmentant d'un actif issu d'Adenophora stricto, en mesurant l'inhibition de l'activité tyrosinase. L'étude est réalisée sur cultures de mélanocytes B16F1 selon le protocole suivant. Les cellules sont ensemencées et incubées dans un milieu de culture adapté. On ajoute au milieu de culture l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, et les cellules sont incubées pendant plusieurs jours. Ensuite, on réalise une trypsination cellulaire et on effectue le dosage de la tyrosinase. Les résultats obtenus pour les cellules traitées avec l'actif selon l'invention par rapport aux cellules non traitées, montrent une diminution de l'activité tyrosinase de 227o. Ainsi, ces résultats montrent bien qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet d'inhiber l'activité de l'enzyme tyrosinase impliquée dans la synthèse de mélanine, et donc d'inhiber la mélanogenèse. 1-2/ Quantification du taux de mélanine synthétisée Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet dépigmentant d'un actif issu d'Adenophora stricto, en mesurant le taux de mélanine synthétisée. L'étude est réalisée sur cultures de mélanocytes B16F1 selon le protocole décrit ci-après. Les cellules sont ensemencées dans un milieu de culture adapté et incubées. This example of extract is of course not limiting. 1 / Evaluation of the effect on melanogenesis 1-1 / Study of the anti-tyrosinase activity The objective of this study is to evaluate the depigmenting effect of an asset derived from Adenophora stricto, by measuring the inhibition of tyrosinase activity. The study is carried out on B16F1 melanocyte cultures according to the following protocol. The cells are seeded and incubated in a suitable culture medium. The cosmetic agent derived from Adenophora stricto 2% is added to the culture medium and the cells are incubated for several days. Then, cellular trypsination is performed and the determination of tyrosinase is carried out. The results obtained for the cells treated with the active agent according to the invention compared to the untreated cells, show a decrease in the tyrosinase activity of 2270. Thus, these results clearly show that an active ingredient derived from Adenophora stricto makes it possible to inhibit the activity of the tyrosinase enzyme involved in the synthesis of melanin, and thus to inhibit melanogenesis. 1-2 / Quantification of the synthesized melanin content This study aims to evaluate the depigmenting effect of an active ingredient derived from Adenophora stricto, by measuring the melanin content synthesized. The study is carried out on B16F1 melanocyte cultures according to the protocol described below. The cells are seeded in a suitable culture medium and incubated.
On ajoute au milieu de culture l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, et les cellules sont incubées pendant plusieurs jours. Ensuite, on réalise une trypsination cellulaire et on effectue le dosage de la mélanine. The cosmetic agent derived from Adenophora stricto 2% is added to the culture medium and the cells are incubated for several days. Then, cellular trypsination is performed and the melanin assay is performed.
Les résultats obtenus pour les cellules traitées avec l'actif selon l'invention par rapport aux cellules non traitées, montrent une diminution du taux de mélanine synthétisée de 50%. Ces résultats montrent bien qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet de diminuer fortement la synthèse de mélanine par les mélanocytes. 2/ Evaluation de l'effet sur le transport des mélanosomes 2-1/Etude de la synthèse de Rab27a Le but de cette étude est d'évaluer la capacité d'un actif issu d'Adenophora stricto à limiter la synthèse de Rab27a, un des facteurs indispensables au transport des mélanosomes. L'étude est réalisée par Western Blot sur cultures de mélanocytes B16F1 Le protocole opératoire est le suivant. Les mélanocytes sont ensemencés dans un milieu de culture adapté et sont traités par l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, puis incubés pendant plusieurs jours. A la fin de l'incubation, les extraits cellulaires sont récupérés puis stockés. On réalise ensuite un dosage des protéines totales à l'aide d'un kit de dosage. Le Western Blot est réalisé par électrophorèse sur gel SbS-polyacrylamide et l'immunomarquage est effectué avec des anticorps adaptés pour Rab27a. Les bandes obtenues sont ensuite semi-quantifiées par densitométrie. On constate que testé à 2% sur mélanocytes B16F1, l'actif selon l'invention issu d'Adenophora stricto, diminue significativement de 45% la synthèse de Rab27a, un des facteurs indispensables au transport de mélanosomes. The results obtained for the cells treated with the active agent according to the invention compared with the untreated cells, show a decrease in the melanin content synthesized by 50%. These results clearly show that an active ingredient derived from Adenophora stricto can greatly reduce melanin synthesis by melanocytes. 2 / Evaluation of the effect on the transport of melanosomes 2-1 / Study of the synthesis of Rab27a The aim of this study is to evaluate the ability of an asset derived from Adenophora stricto to limit the synthesis of Rab27a, a factors essential to the transport of melanosomes. The study is carried out by Western blotting on B16F1 melanocyte cultures. The operating protocol is as follows. The melanocytes are inoculated in a suitable culture medium and are treated with the cosmetic agent derived from Adenophora stricto at 2%, and then incubated for several days. At the end of the incubation, the cell extracts are recovered and then stored. A total protein assay is then performed using a assay kit. The Western blot is performed by SbS-polyacrylamide gel electrophoresis and immunostaining is performed with antibodies adapted for Rab27a. The bands obtained are then semi-quantified by densitometry. It is found that tested 2% on B16F1 melanocytes, the active ingredient according to the invention derived from Adenophora stricto, significantly reduces by 45% the synthesis of Rab27a, one of the indispensable factors for the transport of melanosomes.
Ainsi, ces résultats montrent bien qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet de limiter le transport de mélanosomes. 2-2/Etude de la synthèse de mélanophiline Cette étude a pour objectif d'évaluer la capacité d'un actif issu d'Adenophora stricto à limiter la synthèse de mélanophiline, un des facteurs indispensables au transport des mélanosomes. Thus, these results show that an asset derived from Adenophora stricto can limit the transport of melanosomes. 2-2 / Study of melanophilin synthesis This study aims to evaluate the ability of an active ingredient derived from Adenophora stricto to limit the synthesis of melanophilin, one of the essential factors for the transport of melanosomes.
L'étude est réalisée par Western Blot sur cultures de mélanocytes humains normaux. Le protocole opératoire est le suivant. Les mélanocytes sont ensemencés dans un milieu de culture adapté et sont traités par l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, puis incubés pendant plusieurs jours. A la fin de l'incubation, les extraits cellulaires sont récupérés puis stockés. On réalise ensuite un dosage des protéines totales à l'aide d'un kit de dosage. Le Western Blot est réalisé par électrophorèse sur gel SbS-polyacrylamide et l'immunomarquage est effectué avec des anticorps adaptés pour la mélanophiline. Les bandes obtenues sont ensuite semi-quantifiées par densitométre après analyse d'images. On constate que testé à 2% sur mélanocytes humains normaux, l'actif selon l'invention issu d'Adenophora stricto, diminue significativement de 34% la synthèse de mélanophiline, un des facteurs indispensables au transport de mélanosomes. Ainsi, ces résultats montrent qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet bien de limiter le transport de mélanosomes. The study is performed by Western Blot on normal human melanocyte cultures. The operating protocol is as follows. The melanocytes are inoculated in a suitable culture medium and are treated with the cosmetic agent derived from Adenophora stricto at 2%, and then incubated for several days. At the end of the incubation, the cell extracts are recovered and then stored. A total protein assay is then performed using a assay kit. Western blotting is performed by SbS-polyacrylamide gel electrophoresis and immunolabeling is performed with antibodies suitable for melanophilin. The bands obtained are then semi-quantified by densitometer after image analysis. It is found that tested to 2% on normal human melanocytes, the active ingredient according to the invention derived from Adenophora stricto, significantly reduces by 34% the synthesis of melanophilin, one of the indispensable factors for the transport of melanosomes. Thus, these results show that an asset derived from Adenophora stricto makes it possible to limit the transport of melanosomes.
Ces différentes études permettent de montrer qu'un extrait d'Adenophora stricto présente bien un effet dépigmentant, en particulier inhibiteur de la mélanogenèse et inhibiteur du transport des mélanosomes. These various studies make it possible to show that an Adenophora stricto extract has a depigmenting effect, in particular a melanosome inhibitor and an inhibitor of melanosome transport.
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