FR2940127A1 - Compositions a usage cosmetique et dermatologique destinees a lutter contre le vieillissement de la peau et contenant un extrait titre de ginkgo biloba et un extrait purifie de lactoferrine - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne des compositions à usage cosmétique et dermatologique, destinées à lutter contre le vieillissement de la peau humaine en réduisant le taux de β-galactosidase dans les cellules de la peau, en augmentant le taux de renouvellement de ces cellules, en augmentant le taux des collagènes III et IV et de cavéoline produits par ces cellules mais aussi en augmentant le taux de protéines maturées dans les couches supérieures de l'épiderme. Ces compositions sont caractérisées en ce qu'elles contiennent au moins un extrait titré de Ginkgo biloba et au moins un extrait purifié contenant de la lactoferrine Le Ginkgo biloba et la lactoferrine sont connus pour de nombreux effets biologiques mais pas du tout pour des effets sur les marqueurs du vieillissement comme le taux de β-galactosidase, le taux de collagènes III et IV, de cavéoline, de protéines matures dans la peau. Au cours d'expériences in-vitro ou in-vivo, l'inventeur a constaté qu'un extrait titré de Ginkgo biloba ou qu'un extrait purifié de lactoferrine n'ont effectivement pas d'effet sur ces marqueurs, mais que le mélange des deux a des effets positifs très marqués sur chacun de ces marqueurs. En culture cellulaire de fibroblastes humains artificiellement vieillis, ledit mélange diminue fortement l'expression de la β-galactosidase. Sur des plasties de peau provenant d'une personne âgée de 60 ans, ledit mélange augmente l'expression de glyco-amino-glycannes, de glyco-amino-glycannes acides, de collagène III, de collagène IV et de cavéoline. En test in-vivo sur humain, une crème contenant un mélange d'un extrait titré de Ginkgo biloba et d'un extrait purifié contenant de la lactoferrine, permet la diminution de la surface des rides se 19,5% et une diminution de la longueur des rides de 21,3% et de la profondeur des rides de 14,9% après deux mois d'application. Toujours in-vivo, l'application d'une crème contenant le même mélange, augmente significativement l'index de maturation de l'épiderme soumis à des UV répétés de faible dose, ce qui montre que ce mélange permet de renforcer la fonction barrière de la peau soumise à une agression. Le mélange revendiqué peut-être introduit dans plusieurs sortes de formes de produits cosmétiques et dermatologiques.

Description

La présente invention concerne des compositions à usage cosmétique et dermatologique. destinées à lutter contre le vieillissement de la peau humaine en réduisant le taux de 13-galactosidase dans les cellules de la peau, en augmentant le taux de renouvellement de ces cellules, en augmentant le taux des collagènes III et IV et de cavéoline produits par ces cellules mais aussi en augmentant le taux de protéines maturées dans les couches supérieures de l'épiderme. Ces compositions sont caractérisées en ce qu'elles contiennent au moins un extrait titré de Ginkgo biloba et au moins un extrait contenant de la lactoferrine. Le vieillissement de la peau humaine se caractérise au niveau visuel par l'apparition de ridules et de rides, par une sécheresse plus ou moins prononcée et par un amincissement de l'épaisseur de la peau. Au niveau biochimique, un certain nombre de marqueurs ont été mis en évidence lors du vieillissement de la peau humaine : augmentation d'une enzyme caractéristique : la (3-galactosidase, diminution du tissu de soutien avec la réduction des collagènes qui le constituent, en particulier des collagènes III et IV, diminution d'une enzyme la cavéoline impliquée dans la communication cellulaire, et enfin diminution de la fonction barrière avec une diminution des lipides épidermiques et des protéines maturées. c'est-à-dire ayant des liaisons croisées entre ces protéines grâce à l'action d'une enzyme : la transglutaminase. Ces marqueurs du vieillissement sont issus de la recherche biochimique sur la peau. certains sont connus depuis longtemps (collagène III et lipides épidermiques), d'autres d'une façon plus récente (collagène IV, 3-galactosidase, cavéoline), ou sont issus de recherches très récentes (protéines maturées). L'objet de la présente invention est de décrire des compositions anti-âge contenant des principes actifs agissant positivement sur tous ces marqueurs du vieillissement de la peau 25 humaine. Or l'inventeur a constaté avec surprise, au cours d'expériences qui sont décrites plus loin, que l'association de deux principes actifs connus pour d'autres propriétés, et de plus, issus de l'agriculture biologique et/ou certifiés Ecocert ont ensemble des activités très marquées sur ces signes du vieillissement, alors qu'ils n'ont qu'une faible activité sur ces 30 mêmes signes quand ils sont pris individuellement. Le Ginkgo biloba L. est bien connu dans les médecines populaires, notamment chinoise. Les noix crues ou cuites ont des effets bénéfiques sur l'asthme, les inflammations, mais sont toutefois toxiques pour les enfants. Les extraits de feuilles sont beaucoup plus utilisés dans les pharmacopées orientales et occidentales. Les extraits de feuilles contiennent des flavonoïdes classiques et des triterpènes cétoniques (ginkolides et bilobalide) qui, eux sont uniques dans le règne végétal. Ces ginkolides et le bilobalide ont une action forte reconnue comme inhibiteur du PAF (Platelet Aggregation Factor) d'où une efficacité dans les maladies cardio-vasculaires et les dégénérescences cérébrales. Les extraits de feuilles ont également une activité anti-phosphodiestérase (anti-inflammatoire, lipolytique), antioxydante, anti-radicalaire. Cependant, la littérature très riche surtout concernant des essais cliniques par voie orale, ne mentionne jamais d'effet sur les marqueurs du vieillissement évoqués plus haut.

Des brevets ont été déposés pour toutes les activités décrites par voie orale et quelques uns pour les effets par voie topique, mais jamais pour les actions sur les marqueurs du vieillissement évoqués. On utilisera, dans le cadre de la présente invention, un extrait de Ginkgo biloba titré entre 8 et 10% et issu de l'agriculture biologique, qui fait l'objet d'un dépôt de brevet séparé, et pour lequel les procédés d'extraction sont conformes aux recommandations Ecocert . La lactoferrine est une glycoprotéine qui se lie au fer et que l'on peut trouver dans le lait de vache, mais aussi dans la plupart des fluides corporels. Cette molécule de 77.000 daltons de poids moléculaire, a la particularité de se lier à deux atomes de fer. La lactoferrine est primordiale dans le système de défense immunitaire et ses principales autres propriétés sont : antimicrobienne, antivirale, antiparasitaire. Bien sûr la lactoferrine régule l'absorption du fer et a aussi une action anti-oxydante, dans la mesure ou le fer libre augmente les réactions d'oxydation (réaction d'Haber-Weis). On utilisera, dans le cadre de la présente invention, un extrait contenant de la lactoferrine très purifiée c'est-à-dire contenant moins de 50 picogramme par milligramme de lipopolysaccharide bactérien (LPS) et qui de ce fait n'induit pas de production de cytokines pro-inflammatoires par les cellules humaines. Ces deux critères de qualité sont ceux d'une lactoferrine active et n'induisant pas de réaction inflammatoire. L'effet synergique surprenant des deux principes actifs va être décrit dans les exemples suivants, exemples qui sont donnés à titre indicatif mais nullement limitatif.

Exemple 1. Action d'un extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique, d'un extrait purifié de lactoferrine tel que défini précédement, et d'un mélange des deux principes actifs précédents, objet de la présente invention, sur plusieurs modèles biologiques.

Expérience 1 :On réalise un premier test sur une culture de fibroblastes humains normaux soumis à une sénescence prématurée induite par l'eau oxygénée. On réalise tout d'abord un essai de cytotoxicité préliminaire avec comme cellules test des fibroblastes dermiques humains normaux. Le produit quantifié MTT, (0.5 mg/ml) est le formazan. La méthode de détection est la photométrie, avec mesure d'absorbance à 540 nm (référence :Mosmann, T., Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival : application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol. Methods., 65,55-63 (1983). L'incubation est réalisée selon les conditions du test d'efficacité, en terme de mode et de durée d'incubation des composés.

Préalablement au test de cytotoxicité par MTT, une observation visuelle est effectuée en complément afin de vérifier l'intégrité et l'état morphologique des cellules. Les résultats du test de cytotoxicité conduit à adopter les concentrations suivantes pour les trois produits à l'essai : Extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique certifié Ecocert : 0,016%, 15 0,0032%, 0,00064% Extrait purifié de lactoferrine : 0,2%, 0,04%, 0,008% Mélange des deux extraits précédents en proportion respectivement 0,87/0,01 : 0 ,016%. 0,0032%, 0,00064% Test d'efficacité. Les séquences suivantes sont mises en oeuvre : 20 - Mise en culture et incubation de fibroblastes humains normaux - Changement du milieu par du milieu contenant les conditions suivantes : - Condition n°l : contrôle milieu de culture seul, témoin - Condition n°2 : référence positive (BHA) - Conditions N°3 à 5 : extrait de Ginkgo biloba à 3 concentrations 25 -Conditions N° 5 à 8 : extrait contenant de la lactoferrine à 3 concentrations -Conditions 9 à 11 : mélange des deux extraits à 3 concentrations Incubation 24h Changement du milieu par du milieu contenant de l'eau oxygénée et les composés à l'essai ou la référence 30 Incubation 24h Changement du milieu par du milieu frais contenant le ou les composés à l'essai ou la référence Incubation pendant 144 heures Mesure de la 3-galactosidase. - Tripsination et réensemencement des cellules - Marquage de la (3-galactosidase (coloration bleu) -Numération des cellules positives à la (3-galactosidase -Prise de photos et comptage des cellules positives - Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport à la série témoin. Produit testé Concentration % de cellules expriment la 13- galactosidase par rapport au Témoin Référence positive -59% Extrait de Ginkgo biloba 0,00064% -2% Extrait de Ginkgo biliba 0,0032% -3% Extrait de Ginkgo biloba 0,016% -3% Extrait à la lactoferrine 0,008% -5% Extrait à la lactoferrine 0 ,04% -8% Extrait à la lactoferrine 0,2% -9% Mélange Ginkgo + 0,00064 -32% Lactoferrine 0,87/0,01 Mélange Ginkgo + 0,0032% -45% Lactoferrine 0,87/0,01 Mélange Ginkgo + 0,016% -65% Lactoferrine 0 ,87/0,01 On voit donc que le mélange d'extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique certifié Ecocert et l'extrait purifié de lactoferrine a une action très marquée sur l'expression de la (3-galactosidase par des fibroblaste humains prématurément vieillis par contact avec de l'eau oxygénée, ces fibroblastes vieillis exprimant beaucoup moins de cette enzyme en présence du mélange, alors que la présence de l'extrait de Ginkgo biloba certifié Ecocert seul ou de l'extrait purifiéde lactoferrine seul ne diminue pas significativement l'expression de 13-galactosidase. Cela signifie que ce mélange diminue fortement le vieillissement de cellules de la peau prématurément vieillies.

Expérience 2. On réalise un deuxième test sur des explants de peau humaine maintenus en survie et issus de chirurgie plastique. Préparation de 27 expiants de peau humaine provenant d'une plastie d'une personne de 60 ans et mise en survie en milieu de survie standard.

Les explants seront répartis en 4 lots de six explants chacun et un lot témoin TO de 3 expiants, comme suit : TO Témoin plastie : 3 explants T Témoin non traité : 6 explants MP1 extrait de Ginkgo biloba certifié Ecocert : 6 explants MP2 extrait contenant de la lactoferrine purifiée : 6 explants MP3 Mélange de l'extrait de Ginkgo biloba certifié Ecocert et de l'extrait purifié de lactoferrine en proportion 0 ;87/0,01 : 6 explants Traitement A JO, les explants seront placés dans 2 ml de milieu de culture et les produits seront appliqués en topique sur les explants à l'aide de disques de papier filtre. Les témoins ne reçoivent aucun traitement. Le traitement sera renouvelé tous les deux jours et les explants seront en survie à 37 °C en atmosphère humide enrichie de 5% de CO2.

Prélèvement pour l'histologie A JO, les trois explants du lot TO seront prélevés. Les prélèvements seront coupés en deux, une moitié est fixée par un fixateur formolé et l'autre moitié est congelée à -80°C. A J5 et J10, 3 explants de chaque lot seront prélevés. Les prélèvements seront coupés en deux, une moitié est fixée par un fixateur formolé et l'autre moitié est congelée à -80°C.

Traitements histologiques Les prélèvements fixés seront déshydratés, imprégnés en paraffine. mis en bloc et coupés au microtome à 5 m. Les prélèvements congelés seront coupés à 7 en vue des immunomarquages. Examen de la morphologie générale Les coupes en paraffine seront colorées au trichrome de Masson, variante de Goldner. Un examen au microscope sera réalisé afin d'évaluer la morphologie générale des structures dermiques et épidermiques. Coloration au bleu alcian-PAS et visualisation des Glyco-Amino-Glycanes (GAG) Les GAG seront visualisés après coloration au bleu alcian-PAS (coloration de Mowry). Ils seront observés dans les parties hautes du derme papillaire et le long de la jonction dermoépidermique (JDE), apparaissant sous forme d'une bande festonnée PAS. positive (rose/violacée).

Dans cette zone, les GAG sont un réservoir de facteurs de croissance. Ils seront recherchés aussi dans l'épiderme dans les espaces inter-cellulaires des couches basales. Dans cette zone, les GAG recherchés apparaissent en bleu et sont des GAG acides. Immunomarquage du collagène III L'immunomarquage du collagène III sera réalisé sur coupes congelées avec l'anti-corps anti-collagène III. Immunomarquage du collagène IV L'immunomarquage du collagène IV sera réalisé sur coupes congelées avec l'anti-corps anti-collagène IV. Les noyaux seront contre colorés à l'iodure de propidium. 10 Immunomarquage de la cavéoline L'immunomarquage de la cavéoline sera réalisé sur coupes congelées avec l'anti-corps anti-cavéoline. -Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport à la série témoin. Produit GAG GAG Collagène Collagène Cavéoline acides III IV Témoin TO 100 100 100 100 100 Témoin non traité 105 101 95 100 98 Extrait de Ginkgo biloba 110 102 120 90 105 Extrait de Lactoferrine 98 110 115 85 108 Mélange Ginkgo+Lactoferrine 128 140 155 13 8 144 0,87/0,01 15 On voit donc que le mélange d'un extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et d'un extrait purifié de lactoferrine incite les fibroblastes du derme à produire plus de collagènes III et IV et plus de Glyco-amino-glycanes (GAGs) qui sont les principaux composant de la matrice extra-cellulaire du derme. Cet effet surprenant et inattendu de ce type de mélange, objet de la présente invention, a 20 bien entendu une forte valeur cosmétique, dans la mesure ou ce mélange a une action sur les marqueurs du vieillissement, en incitant les cellules à produire plus de collagènes III et IV et plus de Glyco-amino-glycannes, principaux composants de la matrice extra-cellulaire, ce qui a pour conséquence un repulpage biologique du derme et donc de la peau, entrainant par conséquent une diminution importante des rides et des ridules, ainsi qu'un 25 effet raffermissant important. et un effet remodelant en arrondissant l'ovale du visage.

Un autre objet de la présente invention est l'utilisation d'un tel mélange dans une préparation à usage topique en cosmétologie ou en dermatologie. Les compositions cosmétiques, et dermatologiques de la présente invention peuvent se présenter sous forme appropriée suivant les règles de l'art en usage, entre autres sous forme de liquides, de pâtes, de crèmes, d'émulsions, de lotions, d'huiles, de gels, de masques, de solides, de poudres, de granulés, de sprays, d'aérosols, de comprimés, présentées dans des contenants adéquats tels que flacons, bouteilles, pots, sachets, boites, ampoules, gélules, crayons, porte-bâtons ou tout autre contenant primaire adéquat. Les compositions cosmétiques et dermatologiques de la présente invention peuvent être composées entre autres d'émulsion huile/eau ou eau/huile, d'émulsion à phases gémellaires, de micro-émulsions, d'émulsions PIT, de nano-émulsions, d'émulsions multiples eau/huile/eau ou huile/eau/huile, de pseudo-émulsions (dispersions de deux phases non miscibles au moyen de gélifiants), de gels aqueux, de gels gras, de gels hydroalcoolique, de gels hydro-glycoliques, de phases grasses, de suspensions, de savons solides ou liquides, de solutions moussantes, de liquides aqueux, de liquides gras, de liquides hydro-alcoolique, de liquides hydro-glycoliques, de poudres compressées ou non, d'une des formes précédentes contenant des micro-capsules, des nano-capsules, des liposomes, ou de tout autre forme vectorisée connue de l'homme de l'art et compatible avec la peau humaine.

Les compositions de la présente invention dans le cas d'une application cosmétique ou dermatologique peuvent donc comprendre en outre les adjuvants cosmétiques ou pharmaceutiques classiquement mis en oeuvre comme des composants de phase huileuse, des gélifiants, des émulsionnants, des électrolytes, des humectants. des séquestrants, des émollients, des agents hydratants, des agents filmogènes, des pigments insolubles, des colorants, des filtres solaires, des principes actifs ou tout autre ingrédient habituellement utilisé en cosmétologie, ou en dermatologie. Dans tout ce qui suit ou ce qui précède, les pourcentages sont donnés en poids sauf mention contraire. Dans les compositions faisant l'objet de la présente invention, la teneur totale du mélange d'un extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et d'un extrait purifié de lactoferrine peut être présent dans la proportion de 0,001 à 40%. Dans le dit mélange, les proportions, del' extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique certifié Ecocert et del' extrait purifié de lactoferrine, exprimés en Exemple 2. Soin Anti-Rides Lissant On prépare la phase grasse suivante : 5,0g Huile d'argan bio Huile de noyau d'abricot bio 2,0g Beurre de karité bio 2,0g Rhus verniciflua peel wax d'origine naturelle 1,5g Glycéryl stéarate d'origine naturelle 4,0g Alcool cétylique d'origine naturelle 2,0g Triheptanoate de glycérol 2.0g Octyldodécanol 1,0g Tocophérol 0,05g Sucrose distéarate d'origine naturelle 3,0g Glycéryl stéarate citrate d'origine naturelle 1.9g On chauffe cette phase grasse à 80°C. Q.S.100g Par ailleurs on prépare la phase aqueuse suivante : Eau osmosée Eau de cassis bio 0.5g Eau de myrtille bio 0,5g Glycérine végétale 5,0g Mélange conservateur 0,6g On y ajoute le gélifiant et on le laisse s'hydrater : 0,3g Gomme Xanthane pourcentages de la composition cosmétique ou dermatologique finale peuvent être respectivement de 0,1% à 20%, 0,005 à 2%, préférentiellement de 0,5 à 10%. de 0,01 à 0,5%. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention pourront apparaître dans les exemples 5 qui suivent, et qui sont donnés à titre purement illustratif et nullement limitatif. 10 15 20 25

On chauffe la phase aqueuse à 80°C. On verse ensuite la phase grasse chaude dans la phase aqueuse et on agite vigoureusement pendant 10 minutes. L'émulsion se forme. 30 On commence ensuite à refroidir l'émulsion sous agitation douce. Quand la température atteint 40°C, on ajoute successivement : Extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert 0,87g Extrait purifié de lactoferrine 0,01g Parfum naturel 0,4g Il est fabriqué 2.600g de cette crème qui est alors conditionnée dans des flacons plastiques de 50g. Cette crème est soumise à une série de tests d'innocuité qui démontrent sa parfaite 5 tolérance pour la peau humaine Test clinique. Cette crème est ensuite soumise à un test clinique destiné à vérifier son efficacité contre les rides et de son effet raffermissant sur la peau et remodelant sur l'ovale du visage. Nombre de personnes : 22 femmes en bonne santé, âgées de 46 à 68 ans (moyenne 55ans). 10 avec des rides de la patte d'oie visibles, avec une peau sèche ou normale et un ovale du visage marqué. Les personnes n'ont pas de problèmes de peau tels que : psoriasis, eczéma, érythème, oedème, cicatrices, ni lésions d'aucune sorte sur la région de la patte d'oie. Les personnes n'ont pas démarré ou changé ou arrêté un traitement hormonal substitutif 15 durant les trois derniers mois avant de début du test ni pendant la durée du test. Les personnes n'ont pas appliqué de produit anti-rides (par exemple à base d'AHA, acides de fruits ou de rétinol) depuis au moins six semaines avant le début du test. Les personnes s'engagent à ne pas utiliser d'autres produits cosmétiques visages que le produit testé pendant la durée du test hormis des démaquillants, des lotions toniques ou des 20 maquillages tous ces produits étant sans revendications de soins. Les personnes s'engagent à ne pas utiliser pendant la durée du test, de médicament contenant de l'aspirine, des anti-inflammatoires stéroidiens ou non-stéroidiens, de la DHEA (seul l'usage restreint de paracétamol est autorisé). Aucun produit cosmétique (y compris le produit à tester) ne peut être utilisé sur les zones 25 étudiées les jours de mesure. Le produit doit être utilisé sur le visage 2 fois par jour (matin et soir) pendant 56 jours. Les quantités à utiliser sont celles que les personnes utilisent habituellement pour ce type de produit sur leur visage. C'est une étude ouverte : les investigateurs et les personnes testées sont au courant de 30 l'objectif de l'étude. C'est une étude non comparative. Chaque personne est sa propre référence au jour T0.

La première méthode appliquée est celle des répliques en silicone sur la patte d'oie. La sélection de la patte d'oie à mesurer est randomisée à l'aide d'un logiciel spécifique (loi binomiale) Les personnes doivent arriver pour les mesures sans aucun maquillage ni produit 5 cosmétique sur leur visage. Après 15 minutes d'acclimatation à 21°C plus ou moinsl°C, hygrométrie 45% plus ou moins 5%, les personnes sont mises dans une position semi-allongée dans un fauteuil adapté. Le positionnement des sujets est le même d'une mesure à l'autre grâce à des marques en creux dans le dossier. 10 Les empreintes de la patte d'oie sont réalisées avec 8g de résine de silicone (Silflo, Flexico Developments Ltd, Grande Bretagne) mélangés à 8 gouttes de catalyseur à l'aide d'une spatule. Une empreinte de toute la patte d'oie est réalisée. Cela inclus 5 cm depuis le coin de l'oeil jusqu'à la lisière des cheveux, au moins 3cm en direction du sourcil et du front et au moins 3cm en direction de la joue. Pendant la prise de l'empreinte, l'oeil de la personne 15 reste ouvert, et la tête est droite. Après 10 minutes, l'empreinte est détachée de la peau. Au dos de l'empreinte, on note le numéro de la personne, le côté étudié et la date de la mesure (T0, T28 ou T56). Les empreintes sont analysées en générant des ombres portées à leur surface. à l'aide d'un éclairage rasant d'angle d'incidence connu (35°). L'analyse des niveaux de gris ainsi 20 formés permet d'obtenir une série de paramètres standardisés (programme Quantirides ) qui permet de mesurer la longueur totale de rides et l'aire totale des rides dans la zone considérée. On peut donc mesurer l'évolution de ces paramètres entre le début du test (T0). le milieu du test (T28) et la fin du test (T56). La deuxième méthode mesure est celle des paramètres viscoélastiques cutanés et se fait à 25 l'aide d'un Cutomètre . Cet appareil mesure la déformation d'une zone cutanée (la joue), soumise à une contrainte mécanique de succion et son pouvoir de récupération. Les propriétés visco-élastiques de la peau sont corrélées aux notions de souplesse, de tonicité, d'élasticité et de fermeté de la peau. La troisième méthode mesure concerne l'ovale du visage, elle est réalisée à l'aide de 30 photos prises dans des conditions rigoureusement identiques : visage bien calé dans un porte menton n'influençant pas la forme du visage, éclairage toujours réglé de la même manière. Les photographies sont ensuite traitées par un logiciel qui reproduit la forme du visage et permet de calculer son ovalisation.

Résultats. Après application deux fois par jour pendant 56 jours de la crème décrite dans l'exemple 2 ci-dessus et contenant 0,87% d'extrait titré de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et 0.01% d'un extrait purifié de lactoferrine, on constate, en moyenne sur 22 femmes âgées de 46 à 68 ans, ayant des rides de la patte d'oie visibles, une diminution de la surface des rides de 19,5% et une diminution de la longueur des rides de 21,3% ainsi qu'une diminution de la profondeur des rides de 14,9% (résultats statistiquement significatifs). Les mesures cutométriques permettent d'objectiver de manière statistiquement 10 significative une peau plus tonique, plus ferme et moins fatigable Les mesures d'ovale du visage montrent en moyenne sur l'ensemble du panel une diminution de 22% de l'ovalisation du visage, résultat statistiquement significatif. On voit donc que le mélange de 0,87% d'extrait titré de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et 0.01% d'un extrait purifié de lactoferrine dans une 15 émulsion cosmétique, ne contenant aucun autre agent actif ni hydratant, a un effet bénéfique sur l'ensemble des paramètres mesurés : d'une façon statistiquement significative, il fait diminuer les rides de la patte d'oie, permet d'augmenter la tonicité et la fermeté de la peau et il diminue l'ovale du visage, ce qui confirme in-vivo l'action très positive de ce mélange que l'on a constaté in-vitro et ex-vivo sur des marqueurs 20 biologiques du vieillissement, et confirme donc l'intérêt cosmétique de ce nouveau 25 30 mélange de principes acitfs. Exemple 3. Crème Anti-Rides Yeux et Lèvres On prépare la phase grasse suivante : 6,0g Alcool cétylique d'origine naturelle Glycéryl stéarate d'origine naturelle 4,0g Triheptanoate de glycérol 8,0g Tocophérol 0,05g Sucrose distéarate d'origine naturelle 3,0g Glyceryl stéarate citrate d'origine naturelle 1,9g On chauffe cette phase grasse à 80°C. QS 100g On fait par ailleurs chauffer la phase aqueuse à 80°C: Eau purifiée Glycérine 2,0g Mélange conservateur 0,5g On y ajoute le gélifiant et on le laisse s'hydrater : 0,3g Gomme Xanthane Quand la phase aqueuse est bien homogène, on ajoute la phase grasse à 80°C sous une 5 bonne agitation que l'on maintient 10 minutes. L'émulsion se forme. On refroidit ensuite l'émulsion. Quand la température est de 40°C, on ajoute Extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert 0,87g Extrait purifié de lactoferrine 0,01g Parfum naturel 0,3g 10 On obtient ainsi une émulsion de couleur crème et de consistance agréable pour le contour des yeux et des lèvres. Expérience 3: mesure de l'index de maturation de l'épiderme. Pour les besoins de cette expérience, cette crème sera utilisée sur l'avant bras de volontaires, de façon à pouvoir faire les prélèvements nécessaires.

15 La mesure de l'index de maturation de l'épiderme (IME) est basée sur la quantification du taux de lysine libre (non liée) sur les protéines présentes dans le stratum corneum. Une petite quantité de groupe c-aminé de lysine correspond à une grande quantité de yglutamyl-c-lysine isopeptide, liaison croisée formée par la transglutaminase, et donc en conséquence une grande quantité de cornéocytes rigides et donc une maturation importante 20 de l'épiderme et un effet barrière renforcé. Les échantillons de stratum corneum sont prélevés par des bandes collantes Dsquame . ils sont ensuite dérivatisés par du chlorure de dansyl. Les aminoacides libres, les aminoacides N-terminaux et les N-c-groupes amines libres de lysine sont ainsi dansylés et ensuite quantifiés par HPLC.

25 L'index de maturation de l'épiderme est calculé comme : IME=100/ taux de lysine libre (non liée) sur les protéines présentes dans le stratum corneum en g/mg de protéines. Les UV, même à faible dose, sans causer d'érythème, diminuent l'IME. C'est pourquoi, dix volontaires sains ont été chaque jour soumis pendant 2 semaines à des lits de bronzage 30 délivrant des doses d'UVA de 10 Joules/cm2 et d'UVB de 25 mJ/cm2 à chaque exposition. Pendant l'expérience, chaque patient a été traité 2 fois par jour, sur un bras avec la crème de l'exemple 3 (à la dose de 2mg/cm2) et sur l'autre bras avec la même crème mais ne contenant ni l'extrait de Ginkgo biloba ni l'extrait purifié de Lactoferrine (placebo). L'IME a été mesuré avant et après l'expérience et sur chacun des bras. Les résultats sont résumés dans le tableau suivant : Index de Maturation de l'Epiderme Crème de l'exemple 3 Crème Placebo Avant l'exposition répétée aux UV 44 45 Après l'exposition répétée aux UV 35 28 La différence est significative. On voit donc aue le mélange Extrait de Ginkgo Lactoferrine purifiée augmente significativement l'index de maturation de l'épiderme soumis à des UV répétés de faible dose, ce qui montre que ce mélange permet de renforcer la fonction barrière de la peau soumise à une agression. Les exemples ci-dessus ne sont évidemment pas limitatifs de la présente invention. En particulier, les propriétés des préparations cosmétiques et dermatologiques décrites dans la présente invention peuvent être destinées à toutes les parties du corps humain. biloba et

Claims (9)

1. Revendications1) Compositions cosmétiques et dermatologiques destinées à ralentir le vieillissement de la peau humaine en agissant sur certains marqueurs importants du vieillissement : en réduisant le taux de f3-galactosidase dans les cellules de la peau, en augmentant le taux de renouvellement de ces cellules, en augmentant le taux des collagènes III et IV et de cavéoline produits par ces cellules et en augmentant le taux de protéines maturées dans les couches supérieures de l'épiderme, et caractérisées par le fait qu'elles contiennent au moins un extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et au moins un extrait purifié de lactoferrine.
2. 2) Compositions suivant la revendication 1 et caractérisées par le fait qu'elles contiennent une proportion du mélange d'un extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et d'un extrait purifié de lactoferrine,pouvant aller de 0,001 à 40%
3. 3).Compositions suivant les revendications 1 à 2 et caractérisées par le fait que, les proportions d'un extrait de Ginkgo biloba issu de l'agriculture biologique et certifié Ecocert et d'un extrait purifié de lactoferrine exprimés en pourcentages de la composition cosmétique ou dermatologique finale peuvent être respectivement de 0,1% à 20% et 0,005 à 2%, préférentiellement de 0,5 à 10%, et de 0,01 à 0,5%.
4. 4) .Compositions suivant les revendications 1 à 3 et caractérisées par le fait que les actions sur les marqueurs du vieillissement contribuent à diminuer les ridules et les rides du visage
5. 5).Compositions suivant les revendications 1 à 3 et caractérisées par le fait que les actions sur les marqueurs du vieillissement contribuent à augmenter la tonicité et la fermeté de la peau et à diminuer sa fatigabilité
6. 6).Compositions suivant les revendications 1 à 3 et caractérisées par le fait que les actions sur les marqueurs du vieillissement contribuent à faire diminuer l'ovale du visage
7. 7) Compositions suivant les revendications 1 à 3 et caractérisées par le fait que les actions sur les marqueurs du vieillissement peuvent s'exercer sur toutes les parties du corps
8. 8).Compositions suivant les revendications 1 à 7 et caractérisées par le fait qu'elles peuvent se présenter sous forme de liquides, de pâtes, de crèmes, d'émulsions, de lotions, d'huiles, de gels, de masques, de solides, de poudres, de granulés, de sprays, d'aérosols, de comprimés, présentées dans des contenants adéquats tels que flacons, bouteilles, sachets, pots, boites, ampoules, gélules, crayons, porte-bâtons.
9. 9).Compositions suivant les revendications 1 à 8 et caractérisées par le fait qu'elles peuvent être composées. d'émulsion huile/eau ou eau/huile, d'émulsion à phasesgémellaires, de micro-émulsions, d'émulsions PIT, de nano-émulsions, d'émulsions multiples eau/huile/eau ou huile/eau/huile, de pseudo-émulsions (dispersions de deux phases non miscibles au moyen de gélifiants), de gels aqueux, de gels gras, de gels hydroalcoolique, de gels hydro-glycoliques, de phases grasses, de suspensions, de savons solides ou liquides, de solutions moussantes, de liquides aqueux, de liquides gras, de liquides hydro-alcoolique, de liquides hydro-glycoliques, de poudres compressées ou non, d'une des formes précédentes contenant des micro-capsules, des nano-capsules, des liposomes, ou de tout autre forme vectorisée.