FR2820147A1 - Procede et kit d'identification rapide de bacillus cereus dans un echantillon - Google Patents
Procede et kit d'identification rapide de bacillus cereus dans un echantillon Download PDFInfo
- Publication number
- FR2820147A1 FR2820147A1 FR0200413A FR0200413A FR2820147A1 FR 2820147 A1 FR2820147 A1 FR 2820147A1 FR 0200413 A FR0200413 A FR 0200413A FR 0200413 A FR0200413 A FR 0200413A FR 2820147 A1 FR2820147 A1 FR 2820147A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- sep
- cereus
- antigen
- kda
- antigens
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 title claims abstract description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 75
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 73
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 73
- 241001660259 Cereus <cactus> Species 0.000 claims abstract description 16
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 9
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 13
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 241000194106 Bacillus mycoides Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 5
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 5
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 2
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 2
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 235000011962 puddings Nutrition 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 241000006378 Bacillus cereus group Species 0.000 description 1
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 1
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 description 1
- 241001464917 Bacillus racemilacticus Species 0.000 description 1
- 241000193400 Bacillus simplex Species 0.000 description 1
- FVYUIUUYNVUJOP-UHFFFAOYSA-N C1=CC=C2C(O)=CCC(Cl)(C#N)C2=C1 Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CCC(Cl)(C#N)C2=C1 FVYUIUUYNVUJOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000191953 Kocuria varians Species 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000193386 Lysinibacillus sphaericus Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100022448 Maturin Human genes 0.000 description 1
- OMMCXYHUVDGUJQ-UHFFFAOYSA-N Maturin Natural products COc1c2occ(CO)c2c(C=O)c3cccc(C)c13 OMMCXYHUVDGUJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589323 Methylobacterium Species 0.000 description 1
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000202302 Paenibacillus apiarius Species 0.000 description 1
- 241000193393 Paenibacillus larvae subsp. pulvifaciens Species 0.000 description 1
- 241000194105 Paenibacillus polymyxa Species 0.000 description 1
- 241001310339 Paenibacillus popilliae Species 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 241001499740 Plantago alpina Species 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000180394 Ramaria subtilis Species 0.000 description 1
- 241000158504 Rhodococcus hoagii Species 0.000 description 1
- 241001355132 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Chester Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000607766 Shigella boydii Species 0.000 description 1
- 241000895277 Solanum coagulans Species 0.000 description 1
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 1
- 241000736131 Sphingomonas Species 0.000 description 1
- 241000186652 Sporosarcina ureae Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 241000194024 Streptococcus salivarius Species 0.000 description 1
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 1
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 description 1
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 description 1
- 241000193396 Virgibacillus pantothenticus Species 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- -1 diethylaminoethyl groups Chemical group 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002895 emetic Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 231100000249 enterotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002242 enterotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/32—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Bacillus (G)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
L invention concerne un procédé d'identification rapide de Bacillus cereus dans un échantillon qui comprend (a) le mélange avec l'échantillon d'un anticorps ou antisérum dirigé spécifiquement contre un antigène de surface de B. cereus choisi dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28, 5, 26, 5 et 20 kDa et leurs mélanges, et (b) la détection de la présence de B, cereus si la réaction de liaison antigène-anticorps est positive, ainsi qu'un kit pour la mise en oeuvre du procédé.
Description
<Desc/Clms Page number 1>
BUT DE L'INVENTION La présente invention concerne un procédé et un kit pour l'identification rapide de Bacillus cereusdans un échantillon.
ART ANTERIEUR
Bacillus cereust est une bactérie en forme de bâtonnet, aérobie, motile, formant des spores, Gram-positive qui vit dans le sol et qui est connue comme agent pathogène opportuniste des aliments. Bacillus cereus et sa toxine provoquent habituellement le syndrome diarrhéique et le syndrome émétique. Les céréales brutes, les aliments amylacés, les produits laitiers, la viande, les aliments déshydratés et les épices sont des types d'aliments que B. cereus contamine préférentiellement.
Bacillus cereust est une bactérie en forme de bâtonnet, aérobie, motile, formant des spores, Gram-positive qui vit dans le sol et qui est connue comme agent pathogène opportuniste des aliments. Bacillus cereus et sa toxine provoquent habituellement le syndrome diarrhéique et le syndrome émétique. Les céréales brutes, les aliments amylacés, les produits laitiers, la viande, les aliments déshydratés et les épices sont des types d'aliments que B. cereus contamine préférentiellement.
Les protocoles conventionnels pour la détection de B. cereus sont basés sur des observations morphologiques, des tests physiologiques et biologiques, comme le procédé de comptage sur boîte et le procédé du nombre le plus probable (NPP). Harmon et al. ont utilisé l'hydrolyse des lécithines (réaction avec le jaune d'oeuf) pour caractériser l'isolement de B. cereus suspect sur des milieux de sélection comme la gélose mannitoljaune d'#uf-polymyxine (MJP). Cependant, il faut plusieurs jours pour réaliser les tests physiologiques et biologiques (Harmon, S. M. et al., 1992, Compendium of methods for the microbiological examination of foods.
3 3ème édition. American Public Health Association, Washington, D. C., pages e 593-604). Schraft et al. ont développé une réaction en chaîne par polymérase (PCR) pour détecter le gène d'hydrolyse des lécithines de B.
cereus. Comme la plupart des souches du groupe de B. cereus (c'est à dire B. cereus, B. mycoides et B. thuringiensis) possèdent une activité lécithinase, le procédé PCR détecte toutes les espèces du groupe de A cereus sans faire de distinction entre elles (Schraft, H. et M. W. Griffiths, 1995, Specific oligonucleotide primers for detection of lecithinase-positive Bacillus spp. by PCR. Appl. Environ. Microbiol. 61 : 98-102). Il serait donc
souhaitable de disposer d'un procédé rapide et spécifique pour identifier F, cereus.
cereus. Comme la plupart des souches du groupe de B. cereus (c'est à dire B. cereus, B. mycoides et B. thuringiensis) possèdent une activité lécithinase, le procédé PCR détecte toutes les espèces du groupe de A cereus sans faire de distinction entre elles (Schraft, H. et M. W. Griffiths, 1995, Specific oligonucleotide primers for detection of lecithinase-positive Bacillus spp. by PCR. Appl. Environ. Microbiol. 61 : 98-102). Il serait donc
souhaitable de disposer d'un procédé rapide et spécifique pour identifier F, cereus.
<Desc/Clms Page number 2>
RESUME DE L'INVENTION Pour répondre à ce souhait, la présente invention fournit un procédé d'identification rapide de Bacillus cereus dans un échantillon qui comprend (a) le mélange avec l'échantillon d'un anticorps ou antisérum dirigé spécifiquement contre un antigène de surface de B. cereus choisi dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 20 kDa et leurs mélanges, et (b) la détection de la présence de B. cereus si la réaction de liaison antigèneanticorps est positive.
La présente invention fournit aussi un kit pour l'identification rapide de B. cereus qui comprend une solution d'anticorps ou d'antisérums dirigés contre des antigènes de surface de B. cereus et les agents ou réactifs et appareils nécessaires pour la détection de la réaction de liaison entre un anticorps ou antisérum et un antigène bactérien dans un échantillon à tester, où les antigènes sont choisis dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 20 kDa et leurs mélanges.
DESCRIPTION DE L'INVENTION
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui suit et se réfère aux dessins annexés, donnés uniquement à titre d'exemple, et dans lesquels : La figure 1 représente une électrophorèse en gel de polyacrylamide-SDS (SDS-PAGE) de Bacil/us cereus et Bacillus spp. La figure 1A représente une SDS-PAGE d'antigènes de surface extraits avec du dodécylsulfate de sodium (SDS) à 1 %. La colonne de gauche représente des marqueurs de masse moléculaire et les colonnes 1 à 6 représentent B. cereus CCRC 10603,11026, 15840,15843, 15846 et 13481, respectivement. La figure 1B représente une SDS-PAGE d'antigènes de surface extraits de Bacillus spp. avec du SDS à 1 %. La colonne de gauche représente des marqueurs de masse moléculaire, les colonnes 1 et 2 représentent B. cereus CCRC 10603 et 11026, respectivement, la colonne 3 représente B. mycoides CCRC 12022, la colonne 4 représente B. icheniformis CCRC 11556, la
L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description détaillée qui suit et se réfère aux dessins annexés, donnés uniquement à titre d'exemple, et dans lesquels : La figure 1 représente une électrophorèse en gel de polyacrylamide-SDS (SDS-PAGE) de Bacil/us cereus et Bacillus spp. La figure 1A représente une SDS-PAGE d'antigènes de surface extraits avec du dodécylsulfate de sodium (SDS) à 1 %. La colonne de gauche représente des marqueurs de masse moléculaire et les colonnes 1 à 6 représentent B. cereus CCRC 10603,11026, 15840,15843, 15846 et 13481, respectivement. La figure 1B représente une SDS-PAGE d'antigènes de surface extraits de Bacillus spp. avec du SDS à 1 %. La colonne de gauche représente des marqueurs de masse moléculaire, les colonnes 1 et 2 représentent B. cereus CCRC 10603 et 11026, respectivement, la colonne 3 représente B. mycoides CCRC 12022, la colonne 4 représente B. icheniformis CCRC 11556, la
<Desc/Clms Page number 3>
colonne 5 représente B. ZCCRC 10029 et la colonne 6 représente B. megaterium CCRC 10608 ; et la figure 2 représente une courbe dose-réponse entre la concentration des antigènes de surface totaux de B. cereus CCRC 10603 et l'absorbance à 450 nm (A450) déterminée par un dosage ELISA avec des anticorps dirigés contre l'antigène de 28,5 kDa.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Le procédé selon la présente invention est un procédé immunologique d'identification de B. cereus dont la caractéristique essentielle est la liaison d'antigènes de surface de B. cereus déterminés et d'anticorps spécifiques qui permet une identification très simple, rapide, très sensible et spécifique.
Le procédé selon la présente invention est un procédé immunologique d'identification de B. cereus dont la caractéristique essentielle est la liaison d'antigènes de surface de B. cereus déterminés et d'anticorps spécifiques qui permet une identification très simple, rapide, très sensible et spécifique.
La présente invention fournit un procédé d'identification rapide de Sacillus cereus dans un échantillon qui comprend a) le mélange avec l'échantillon d'un anticorps ou antisérum dirigé spécifiquement contre un
antigène de surface de R cereus choisi dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 24 kDa et leurs mélanges, et b) la détection de la présence de B. cereus si la réaction de liaison antigène anticorps est positive.
antigène de surface de R cereus choisi dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 24 kDa et leurs mélanges, et b) la détection de la présence de B. cereus si la réaction de liaison antigène anticorps est positive.
Dans le cadre de la présente invention, le terme anticorps désigne toute immunoglobuline dirigée contre un antigène spécifique produit par des organismes animaux, et le terme antisérum désigne le sérum d'un animal riche en anticorps spécifiques, obtenu après immunisation de cet animal. En général, on obtient des antisérums en immunisant des animaux (lapins, chèvres, souris, par exemple) avec un antigène qui est émulsifié avec un adjuvant. La préparation d'anticorps ou d'antisérums est bien connue de l'homme du métier. Une protéine de surface de B. cereus utilisée pour la production d'un anticorps dans un animal immunisé est purifiée par SDS-PAGE. Bien qu'une telle protéine soit dénaturée, l'anticorps produit à partir d'elle est capable de reconnaître la protéine de surface de B. cereus. L'anticorps peut réagir avec certains épitopes antigéniques de la protéine native du fait des propriétés polyclonales.
<Desc/Clms Page number 4>
Les antigènes de surface de B. cereus utilisés selon la présente invention comprennent les antigènes de surface ayant des masses moléculaires de 28,5 kDa, 26,5 kDa et 20 kDa, ou leurs mélanges. On préfère les antigènes de 28,5 kDa et 20 kDa et on préfère encore l'antigène de 28,5 kDa. Il est possible de préparer et purifier ces antigènes de surface en utilisant des procédés ou techniques conventionnels quelconques, par exemple de la manière décrite dans les exemples qui seront donnés dans la suite.
Selon la présente invention, les anticorps dirigés contre des antigènes de surface de B. cereus possèdent des titres élevés, de préférence de 1 x 105 à 1 x lOB, et de préférence encore de 1 x 106 à 1 X 107. L'antigène de 28,5 kDa est plus antigénique que les antigènes de 26,5 kDa et 20 kDa.
Selon la présente invention, il est possible d'employer tout procédé approprié de détection d'une réaction de liaison antigèneanticorps pour détecter la liaison d'un antigène de surface de B. creuset d'un anticorps. On préfère un procédé utilisant un dosage immunoenzymatique en phase hétérogène à enzyme marqueur (ELISA) et un procédé utilisant un dosage par immunotransfert de colonies.
Dans un mode de réalisation que l'on préfère, le mélange réactionnel antigène-anticorps est combiné avec de la gélose sélective mannitol-jaune d'oeuf-polymyxine (MJP).
La présente invention fournit un kit pour l'identification rapide de B. cereus qui comprend des anticorps ou antisérums dirigés contre des antigènes de surface de B. cereus et les agents ou réactifs et appareils nécessaires pour la détection de la réaction de liaison anticorps-antigène dans un échantillon à tester, l'antigène étant choisi parmi le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 20 kDa, et leurs mélanges.
Concernant le kit selon la présente invention, les agents ou réactifs et appareils qu'il contient peuvent être préparés ou produits par l'homme du métier utilisant ses compétences et une technologie conventionnelle. De préférence, ces agents ou réactifs et appareils sont utilisés dans un dosage ELISA.
<Desc/Clms Page number 5>
En outre, ce kit peut être utilisé en combinaison avec de la gélose sélective mannitol-jaune d'oeuf-polymyxine (MJP) pour l'identification rapide de B. cereus.
Exemples
Exemple 1
Identification de B. cereus
Bactéries et conditions de culture
On a testé 165 souches bactériennes (voir tableau 1 ci-dessous) comprenant 38 souches de B. cereus, 79 souches d'autres espèces de Bacillus et 48 souches qui n'appartiennent pas au genre Bacillus. On a obtenu la plupart des cultures auprès du Culture Collection and Research Center (CCRC, Food Industry Research and Development Institute, Hsinchu, Taiwan). On a obtenu Bacillus anthracis ATCC 8705 et ATCC 14578 auprès de la American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). On a maintenu les cultures de Bacillus spp. sur de la gélose nutritive, tandis que l'on a maintenu les bactéries n'appartenant pas au genre Bacillus sur de la gélose trypticase soja. Pour appliquer la tehnique ELISA, on a cultivé Bacillus spp. A 30 C sur de la gélose MJP ou de la gélose nutritive, et on a cultivé les autres bactéries à 37 C sur de la gélose trypticase soja pendant 20 à 24 heures avant l'analyse.
Exemple 1
Identification de B. cereus
Bactéries et conditions de culture
On a testé 165 souches bactériennes (voir tableau 1 ci-dessous) comprenant 38 souches de B. cereus, 79 souches d'autres espèces de Bacillus et 48 souches qui n'appartiennent pas au genre Bacillus. On a obtenu la plupart des cultures auprès du Culture Collection and Research Center (CCRC, Food Industry Research and Development Institute, Hsinchu, Taiwan). On a obtenu Bacillus anthracis ATCC 8705 et ATCC 14578 auprès de la American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). On a maintenu les cultures de Bacillus spp. sur de la gélose nutritive, tandis que l'on a maintenu les bactéries n'appartenant pas au genre Bacillus sur de la gélose trypticase soja. Pour appliquer la tehnique ELISA, on a cultivé Bacillus spp. A 30 C sur de la gélose MJP ou de la gélose nutritive, et on a cultivé les autres bactéries à 37 C sur de la gélose trypticase soja pendant 20 à 24 heures avant l'analyse.
<Desc/Clms Page number 6>
Tableau 1 Microorganisme no. CCRC nombre de souches
Total ELISA-ELISA- positives négatives Bacillus cereus (le nO. CCRC n'est pas 38 38 0 spécifié pour chaque souche individuelle) Rvei 11840, 11842,11220, 6 0 6
11728,11906, 11970 B. anthracisa 8705, 14578 2 2 0
B. apiarius 11830 1 0 1 Z badius 11699, 11909 2 0 2 Ritz brevis 10600, 11717, 11047, 5 0 5
11841,11912 S. circulants 13842,13847, 10605,4 0 4
11027 S. coagulans 10606,10272, 11592,6 0 6
12147, 12210, 11700 B. firmus 11729, 11730 2 0 2
B. insolites 11737 1 0 1 Rmrvae 14187 1 0 1 B. erosporus 10607, 11951 2 0 2 B./entus 11735, 12021 2 0 2 B, licheniformis 11556, 12826, 11702 3 0 3 Rmacerans 12025, 13021, 14680 3 0 3 B. maroccanus 14649 1 0 1 B. megaterium 10608, 14706, 11962, 4 0 4 11965 B. mycoides 10604, 11968, 12022, 4 4 0 11716 S. pabuli 15857 1 0 1 B. pantothenticus 14681 1 0 1 B. polymyxa 14352, 12011, 12012 3 0 3
Total ELISA-ELISA- positives négatives Bacillus cereus (le nO. CCRC n'est pas 38 38 0 spécifié pour chaque souche individuelle) Rvei 11840, 11842,11220, 6 0 6
11728,11906, 11970 B. anthracisa 8705, 14578 2 2 0
B. apiarius 11830 1 0 1 Z badius 11699, 11909 2 0 2 Ritz brevis 10600, 11717, 11047, 5 0 5
11841,11912 S. circulants 13842,13847, 10605,4 0 4
11027 S. coagulans 10606,10272, 11592,6 0 6
12147, 12210, 11700 B. firmus 11729, 11730 2 0 2
B. insolites 11737 1 0 1 Rmrvae 14187 1 0 1 B. erosporus 10607, 11951 2 0 2 B./entus 11735, 12021 2 0 2 B, licheniformis 11556, 12826, 11702 3 0 3 Rmacerans 12025, 13021, 14680 3 0 3 B. maroccanus 14649 1 0 1 B. megaterium 10608, 14706, 11962, 4 0 4 11965 B. mycoides 10604, 11968, 12022, 4 4 0 11716 S. pabuli 15857 1 0 1 B. pantothenticus 14681 1 0 1 B. polymyxa 14352, 12011, 12012 3 0 3
<Desc/Clms Page number 7>
B. popilliae 14650 1 0 1 B. pulvifaciens 15859 1 0 1 B. pumilus 14688,14700 2 0 2 B. racemilacticus 12807 1 0 1 B. sphaericus 14354,12825, 11066,6 0 6
12006,14702, 14703 B. 10610,11092 2 0 2
stearothermophilus R. subtilis 10029, 12815 2 0 2 R. thuringiensis 14380, 14381, 14683, 7 7 0 15853, 15854, 15855, 15856 B. thuringiensis 15860 1 1 0 subsp. israelensis Bacillusspp. 12276, 14642 2 0 2 Corynebacterium 10367, 12469 2 0 2 ammoniagenes C glutamicus 10488 1 0 1 C glutamicum 11384 1 0 1 Eschericia coli 10675,10314, 10316,5 0 5
10324,14824 Enterobacter 10370,10401, 11507 3 0 3 cloacae Methylobacterium 11048,12234 2 0 2 extorquens Microbacterium 11670,12505 2 0 2 ammoniaphilum Micrococcus luteus 11271,15275, 15276 3 0 3
M. pyrogenes 11274, 11275 2 0 2 M. varians 15216, 15217 2 0 2 Proteus mirabilis 10725, 10726 2 0 2 Pseudomonas 10944 1 0 1 aerugmosa Rhodococcus equi 11367, 11368 2 0 2 Salmonella Chester 15468 1 0 1
<Desc/Clms Page number 8>
Salmonella 15455 1 0 1 Etterbeek Salmonella 15580 1 0 1 Simsbury Salmonella 15581 1 0 1 Tennessee Shigella boydii 10771 1 0 1 sonnei 10773, 10774 2 0 2 Sphingomonas 13954,13955 2 0 2 paucimobilis Sporosarcina urea 10766 1 0 1 Staphylococcus 11551,14941, 14943,4 1 3
aureus 14944 S. epidermidis 15245,15246, 15247 3 0 3 streptococcus 10787 1 0 1 agalactiae S. mutans 10793 1 0 1 S. salivarius 12257 1 0 1 a les deux souches de B. anthracis provenaient de ATCC.
aureus 14944 S. epidermidis 15245,15246, 15247 3 0 3 streptococcus 10787 1 0 1 agalactiae S. mutans 10793 1 0 1 S. salivarius 12257 1 0 1 a les deux souches de B. anthracis provenaient de ATCC.
Préparation d'antigènes de surface
Le procédé de purification était une modification de celui décrit par Bhunia et al. (Bhunia et al., Infect. Immun. 59 : 3176-3184). S. cereus CCRC 10603 a été cultivé sur des boîtes de gélose nutritive à 30 C pendant 18 heures. Deux millilitres de tampon phosphate 70 mM (pH 6,8) ont été ajoutés à chaque boîte pour récolter les bactéries. Les cellules ont été lavées avec le même tampon phosphate et centrifugées à 3000 x g pendant 15 min. Les antigènes de surface ont été extraits avec 2 ml de tampon phosphate 70 mM (pH 6,8) contenant 1 % de dodécylsulfate de sodium (SDS) et 0,5 % de ss-mercaptoéthanol. Après incubation à 70 C pendant 20 min et centrifugation (10000 x g pendant 10 minutes), le culot de cellules a été séparé du surnageant contenant les antigènes de surface extraits avec le SDS qui a été dialysé pendant 18 à 24 heures. Les
Le procédé de purification était une modification de celui décrit par Bhunia et al. (Bhunia et al., Infect. Immun. 59 : 3176-3184). S. cereus CCRC 10603 a été cultivé sur des boîtes de gélose nutritive à 30 C pendant 18 heures. Deux millilitres de tampon phosphate 70 mM (pH 6,8) ont été ajoutés à chaque boîte pour récolter les bactéries. Les cellules ont été lavées avec le même tampon phosphate et centrifugées à 3000 x g pendant 15 min. Les antigènes de surface ont été extraits avec 2 ml de tampon phosphate 70 mM (pH 6,8) contenant 1 % de dodécylsulfate de sodium (SDS) et 0,5 % de ss-mercaptoéthanol. Après incubation à 70 C pendant 20 min et centrifugation (10000 x g pendant 10 minutes), le culot de cellules a été séparé du surnageant contenant les antigènes de surface extraits avec le SDS qui a été dialysé pendant 18 à 24 heures. Les
<Desc/Clms Page number 9>
antigènes de surface d'autres souches ont été extraits avec SDS de la même manière.
Purification des antigènes de surface
Les antigènes de surface obtenus par extraction ont été analysés par SDS-PAGE. Après l'électrophorèse, les gels ont été colorés au bleu de Coomassie. La figure 1 représente une SDS-PAGE de souches de B. cereus et de Bac/Z spp. à titre de témoin. Comme le montre la figure lA, les diagrammes protéiques de la plupart des souches de B. cereus comportaient deux bandes principales communes correspondant à des masses moléculaires de 26,5 et 20 kDa et une bande secondaire correspondant à une masse moléculaire de 28,5 kDa (voir les flèches sur la figure ira). La figure 1B indique que les diagrammes en bandes d'autres espèces de Bacillus présentaient des variations plus importantes.
Les antigènes de surface obtenus par extraction ont été analysés par SDS-PAGE. Après l'électrophorèse, les gels ont été colorés au bleu de Coomassie. La figure 1 représente une SDS-PAGE de souches de B. cereus et de Bac/Z spp. à titre de témoin. Comme le montre la figure lA, les diagrammes protéiques de la plupart des souches de B. cereus comportaient deux bandes principales communes correspondant à des masses moléculaires de 26,5 et 20 kDa et une bande secondaire correspondant à une masse moléculaire de 28,5 kDa (voir les flèches sur la figure ira). La figure 1B indique que les diagrammes en bandes d'autres espèces de Bacillus présentaient des variations plus importantes.
Préparation d'anticorps
Les bandes protéiques correspondant aux masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 20 kDa ont été découpées séparément en petits fragments, broyées en fines particules avec un homogénéisateur à main et émulsifiées avec de l'adjuvant incomplet de Freund (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA). Deux millilitres d'antigène émulsifié ont été utilisés pour immuniser des lapins New Zealand White (d'un poids de 2,5 kg). Chaque lapin a reçu quatre rappels à intervalles de 3 semaines. Dix jours après la dernière injection, du sang a été prélevé sur les oreilles des lapins. Le complément des antisérums a été inactivé par chauffage à 56 C pendant 30 min, et les titres des antisérums ont été déterminés par dosage ELISA.
Les bandes protéiques correspondant aux masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 20 kDa ont été découpées séparément en petits fragments, broyées en fines particules avec un homogénéisateur à main et émulsifiées avec de l'adjuvant incomplet de Freund (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA). Deux millilitres d'antigène émulsifié ont été utilisés pour immuniser des lapins New Zealand White (d'un poids de 2,5 kg). Chaque lapin a reçu quatre rappels à intervalles de 3 semaines. Dix jours après la dernière injection, du sang a été prélevé sur les oreilles des lapins. Le complément des antisérums a été inactivé par chauffage à 56 C pendant 30 min, et les titres des antisérums ont été déterminés par dosage ELISA.
Des microplaques de titrage (Nunc, Danemark) ont été recouvertes d'antigènes de surface totaux extraits avec le SDS (10 tig/ml), et, après addition de séries de dilutions 10 fois d'antisérums, un conjugué protéine A-peroxydase de raifort (HRP) a été utilisé comme émetteur de signal. Les titres des antisérums contre chacun des antigènes de 28,5 kDa, 26,5 kDa et 20 kDa, déterminés par dosage ELISA, étaient d'environ 1 x 106 à 1 X 107. Bien que l'antigène de 28,5 kDa soit relativement peu abondant (figure lA), les titres d'anticorps contre cette protéine étaient comparables à ceux obtenus contre les protéines de 26,5 kDa et 20 kDa. Il est possible
<Desc/Clms Page number 10>
que l'antigène de 28, 5 kDa soit plus antigénique que les deux autres antigènes.
Purification d'anticorps et préparation d'un conjugué anticorps- enzyme
La fraction IgG (immunoglobuline G) des antisérums dirigés contre chacun des antigènes de 28,5, 26, 5 et 20 kDa a été purifiée par précipitation au sulfate d'ammonium puis chromatographie sur échangeur d'ions comportant des groupes diéthylaminoéthyle (Chen et al., J. Food Prot. 58 : 873-878). Les anticorps spécifiques ont été purifiés encore par chromatographie d'affinité, les ligands employés étant les antigènes de surface totaux de B. cereus CCRC 10603 extraits au SDS et couplés à un gel de Sepharose 4B activé au bromure de cyanogène (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Suède). Les anticorps purifiés par affinité dirigés contre chaque antigène ont été conjugués à la HRP (Boehringer GmbH, Mannheim, Allemagne) par couplage au moyen du protocole d'oxydation de la peroxydase avec le periodate de sodium (Hudson et aL, 1989, Practical Immunology, 3ème éd. r Blackwell Scientific Publication, Londres).
La fraction IgG (immunoglobuline G) des antisérums dirigés contre chacun des antigènes de 28,5, 26, 5 et 20 kDa a été purifiée par précipitation au sulfate d'ammonium puis chromatographie sur échangeur d'ions comportant des groupes diéthylaminoéthyle (Chen et al., J. Food Prot. 58 : 873-878). Les anticorps spécifiques ont été purifiés encore par chromatographie d'affinité, les ligands employés étant les antigènes de surface totaux de B. cereus CCRC 10603 extraits au SDS et couplés à un gel de Sepharose 4B activé au bromure de cyanogène (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Suède). Les anticorps purifiés par affinité dirigés contre chaque antigène ont été conjugués à la HRP (Boehringer GmbH, Mannheim, Allemagne) par couplage au moyen du protocole d'oxydation de la peroxydase avec le periodate de sodium (Hudson et aL, 1989, Practical Immunology, 3ème éd. r Blackwell Scientific Publication, Londres).
Identification de B. cereus par un dosage ELISA
Les anticorps dirigés contre chacun des antigènes de 28,5, 26,5 et 20 kDa ont été utilisés comme anticorps de capture et de détection. Les puits de microplaques de titrage ont été recouverts de 0,1 ml d'anticorps purifiés par affinité (10 Jlgfml) à 37 C pendant 2 heures. Les plaques ont été lavées avec PBS (solution salée tamponnée au phosphate) contenant 0,05 % de Tween 20 (PBST), bloquées une nuit avec de la sérumalbumine bovine (BSA) à 1 % à 4 C, et lavées de nouveau avec PBST. Une colonie formée sur de la gélose MJP ou de la gélose trypticase soja a été mise en suspension dans 0,2 ml de PBS contenant 0,1 % de Teepol (alkyle en Cg- C13-SUlfates de sodium primaires ; Sigma, St. Louis, MO, USA). La suspension a été chauffée dans un bain d'eau bouillante pendant 5 min et centrifugée (5000 x g pendant 10 min) pour retirer les cellules et débris insolubles. La suspension résultante a été diluée 1 : 1 avec BSA à 2 %, et 0,1 ml d'échantillon dilué a été ajouté à chaque puits des microplaques de titrage. Les plaques ont été incubées à 37 C pendant 1 heure et lavées
Les anticorps dirigés contre chacun des antigènes de 28,5, 26,5 et 20 kDa ont été utilisés comme anticorps de capture et de détection. Les puits de microplaques de titrage ont été recouverts de 0,1 ml d'anticorps purifiés par affinité (10 Jlgfml) à 37 C pendant 2 heures. Les plaques ont été lavées avec PBS (solution salée tamponnée au phosphate) contenant 0,05 % de Tween 20 (PBST), bloquées une nuit avec de la sérumalbumine bovine (BSA) à 1 % à 4 C, et lavées de nouveau avec PBST. Une colonie formée sur de la gélose MJP ou de la gélose trypticase soja a été mise en suspension dans 0,2 ml de PBS contenant 0,1 % de Teepol (alkyle en Cg- C13-SUlfates de sodium primaires ; Sigma, St. Louis, MO, USA). La suspension a été chauffée dans un bain d'eau bouillante pendant 5 min et centrifugée (5000 x g pendant 10 min) pour retirer les cellules et débris insolubles. La suspension résultante a été diluée 1 : 1 avec BSA à 2 %, et 0,1 ml d'échantillon dilué a été ajouté à chaque puits des microplaques de titrage. Les plaques ont été incubées à 37 C pendant 1 heure et lavées
<Desc/Clms Page number 11>
avec PBST, et 0, 1 ml de conjugué HRP-anticorps dilué 1 : 10000 dans BSA à 1 % a été ajouté à chaque puits. Après 1 heure d'incubation à 37 C et lavage avec PBST, 0,1 ml de substrat de HRP (3, 3', 5, 5'- tétraméthylbenzidine et H202 ; Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD, USA) a été ajouté à chaque puits. La réaction a été interrompue par addition de 0,1 ml de H3PO4 1 M à chaque puits, et l'absorbance à 450 nm (A45o) a été mesurée avec un lecteur d'ELISA. Une valeur d'absorbance supérieure à celle du témoin négatif plus trois écartstypes a été considérée comme une réaction positive. Le témoin négatif était constitué par PBS. La figure 2 montre une courbe dose-réponse entre la concentration des antigènes de surface totaux de B. cereus CCRC 10603 et le signal ELISA. Selon la présente invention, la sensibilité du dosage pour la détection d'antigènes de surface totaux de B. cereus est 10 ng/ml.
Le tableau 2 ci-dessous montre l'utilisation d'anticorps dirigés contre les antigènes de 28,5, 26,5 et 20 kDa pour tester B. cereus CCRC 10446,10927 et 11026. Tous les anticorps étaient capables de détecter efficacement les antigènes correspondants. Les signaux ELISA produits par les anticorps contre les antigènes de 28,5 et 20 kDa étaient plus intenses que ceux produits par les anticorps dirigés contre l'antigène de 26,5 kDa.
Tableau 2
<tb>
<tb> Microorganisme <SEP> Signal <SEP> ELISAa <SEP> (A450) <SEP> avec <SEP> des <SEP> anticorps <SEP> contre
<tb> l'antigène <SEP> de <SEP> l'antigène <SEP> de <SEP> l'antigène <SEP> de <SEP> 20
<tb> 28,5 <SEP> kDa <SEP> 26,5 <SEP> kDa <SEP> kDa
<tb> B. <SEP> cereus <SEP> CCRC <SEP> 1,64 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 03 <SEP> 1,14 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 03 <SEP> 1,45 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 02
<tb> 10446
<tb> B. <SEP> cereus <SEP> CCRC <SEP> 0,67 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 04 <SEP> 0,33 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> 0,43 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 03
<tb> 10927
<tb> B. <SEP> cereus <SEP> CCRC <SEP> 1, <SEP> 48 <SEP> 0, <SEP> 07 <SEP> 1,17 <SEP> zut <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> 1,34 <SEP> 0, <SEP> 00
<tb> 11026
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> 0, <SEP> 17 <SEP> ~ <SEP> 0,001 <SEP> 0, <SEP> 11 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> 0,15 <SEP> ~ <SEP> 0, <SEP> 01
<tb>
a moyenne : écart-type en double
Les résultats du dosage ELISA d'espèces individuelles testées avec les anticorps dirigés contre l'antigène de 28,5 kDa sont présentés
<tb> Microorganisme <SEP> Signal <SEP> ELISAa <SEP> (A450) <SEP> avec <SEP> des <SEP> anticorps <SEP> contre
<tb> l'antigène <SEP> de <SEP> l'antigène <SEP> de <SEP> l'antigène <SEP> de <SEP> 20
<tb> 28,5 <SEP> kDa <SEP> 26,5 <SEP> kDa <SEP> kDa
<tb> B. <SEP> cereus <SEP> CCRC <SEP> 1,64 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 03 <SEP> 1,14 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 03 <SEP> 1,45 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 02
<tb> 10446
<tb> B. <SEP> cereus <SEP> CCRC <SEP> 0,67 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 04 <SEP> 0,33 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> 0,43 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 03
<tb> 10927
<tb> B. <SEP> cereus <SEP> CCRC <SEP> 1, <SEP> 48 <SEP> 0, <SEP> 07 <SEP> 1,17 <SEP> zut <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> 1,34 <SEP> 0, <SEP> 00
<tb> 11026
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> 0, <SEP> 17 <SEP> ~ <SEP> 0,001 <SEP> 0, <SEP> 11 <SEP> : <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> 0,15 <SEP> ~ <SEP> 0, <SEP> 01
<tb>
a moyenne : écart-type en double
Les résultats du dosage ELISA d'espèces individuelles testées avec les anticorps dirigés contre l'antigène de 28,5 kDa sont présentés
<Desc/Clms Page number 12>
dans le tableau 1 ci-dessus. Les 38 souches de B, cereus présentaient toutes des réactions positives. La plupart des 127 souches de bactéries différentes de B. cereus présentaient des réactions négatives. Cependant, toutes les souches appartenant au groupe B, cereus (c'est à dire B. anthracis, B. mycoides et B. thuringiensis) produisaient des résultats faussement positifs. Des résultats similaires ont été obtenus avec des anticorps dirigés contre l'antigène de 20 kDa pour tester les bactéries.
Identification de B, cereus par immunotransfert de colonies
Les colonies de B. cereus sur des boîtes de gélose nutritive ont été transférées par empreinte sur une membrane en papier qui a ensuite été rincée avec PBS. La membrane portant les empreintes des colonies a été séchée dans une étuve pendant 10 minutes et éclairée avec de la lumière UV (1, 2 3/cm x 0,1 min). La membrane a été incubée avec une solution de conjugué anticorps-enzyme diluée 1 : 2000 et agitée doucement
pendant 60 min à la température ambiante. La membrane a été rincée trois fois avec PBST pendant 5 minutes. Enfin, la membrane a été rincée avec PBS et colorée dans une solution colorante de 4-CN (4-chloro-1- naphtol) pendant environ 45 min et la réaction a été interrompue par lavage de la membrane à l'eau.
Les colonies de B. cereus sur des boîtes de gélose nutritive ont été transférées par empreinte sur une membrane en papier qui a ensuite été rincée avec PBS. La membrane portant les empreintes des colonies a été séchée dans une étuve pendant 10 minutes et éclairée avec de la lumière UV (1, 2 3/cm x 0,1 min). La membrane a été incubée avec une solution de conjugué anticorps-enzyme diluée 1 : 2000 et agitée doucement
pendant 60 min à la température ambiante. La membrane a été rincée trois fois avec PBST pendant 5 minutes. Enfin, la membrane a été rincée avec PBS et colorée dans une solution colorante de 4-CN (4-chloro-1- naphtol) pendant environ 45 min et la réaction a été interrompue par lavage de la membrane à l'eau.
Au total, 62 souches de B. cereus ont été testées, parmi lesquelles 61 présentaient des réactions positives et 1 des réactions négatives. Parmi les 38 souches non-Bacillus (19 espèces), 36 présentaient des réactions négatives. Les résultats décrits ci-dessus indiquent que le procédé d'identification de B. cereus selon l'invention est précis et rapide.
Exemple 2
Détection de B. cereus dans des aliments
Quinze échantillons d'aliments, comprenant du riz, des haricots, du pudding, un aliment lacté instantané pour nourrissons, des épices (poivre) et de la crème glacée, ont été achetés dans des supermarchés locaux. Le comptage sur boîte aérobie de ces échantillons a été réalisé (Maturin et al., 1995, dans Bacteriological Analytical Manual, 8ème éd.
Détection de B. cereus dans des aliments
Quinze échantillons d'aliments, comprenant du riz, des haricots, du pudding, un aliment lacté instantané pour nourrissons, des épices (poivre) et de la crème glacée, ont été achetés dans des supermarchés locaux. Le comptage sur boîte aérobie de ces échantillons a été réalisé (Maturin et al., 1995, dans Bacteriological Analytical Manual, 8ème éd.
Association of Officiai Analytical Chemists International, Arlington, VA, USA). Des séries de dilutions 10 fois des échantillons d'aliments
<Desc/Clms Page number 13>
homogénéisés ont été analysées concernant B. cereus par inoculation à du bouillon trypticase soja-polymyxine (TSP) dans des séries NPP de trois tubes. Après un enrichissement sélectif, les tubes qui présentaient une croissance dense ont été sous-cultivés sur des boîtes de gélose MJP séparées. Une ou plusieurs colonies suspectes sur chaque boîte de gélose MJP ont été analysées par la technique ELISA pour identifier B. cereus.
Ces colonies ont aussi été sous-cultivées sur de la gélose nutritive inclinée après quoi les espèces ont été identifiées par des protocoles conventionnels.
Parmi les 15 échantillons d'aliments analysés, B. cereus a été détecté dans 11 échantillons par dosage ELISA (voir le tableau 3 cidessous). Cependant, d'après une détermination par le procédé conventionnel, 10 échantillons seulement se sont révélés contenir B. cereus. L'échantillon faussement positif obtenu par analyse ELISA était le haricot mungo, dans lequel B. thuringiensis a été isolé. Certaines souches de B. thuringiensis possèdent un gène de type entérotoxine similaire à
celui de B. cereus (Asano et al., 1997, Appl. Environ. Microbiol. 63 : 1054- 1075). De plus, selon Carlson et al., B. cereus et B. thuringiensis devraient être considérés comme appartenant à la même espèce (Carlson et al., Appl. Environ. Microbial 60 : 1719-1725). Les résultats mentionnés ci- dessus montrent la précision du procédé selon la présente invention et son utilité pour l'identification rapide de B. cereus.
celui de B. cereus (Asano et al., 1997, Appl. Environ. Microbiol. 63 : 1054- 1075). De plus, selon Carlson et al., B. cereus et B. thuringiensis devraient être considérés comme appartenant à la même espèce (Carlson et al., Appl. Environ. Microbial 60 : 1719-1725). Les résultats mentionnés ci- dessus montrent la précision du procédé selon la présente invention et son utilité pour l'identification rapide de B. cereus.
Tableau 3
<tb>
<tb> Alimenta <SEP> Comptage <SEP> sur <SEP> boîte <SEP> B. <SEP> cereus <SEP> (NPP/g) <SEP> déterminé
<tb> aérobie <SEP> par <SEP> :
<tb> (CFU/g)
<tb> Procédé <SEP> ELISA
<tb> conventionnel
<tb> Millet <SEP> 1, <SEP> 2 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 3, <SEP> 6 <SEP> 3, <SEP> 6
<tb> Avoine <SEP> 4, <SEP> 8 <SEP> x <SEP> 102 <SEP> NDb <SEP> ND*
<tb> Riz <SEP> 4, <SEP> 3 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 9,1 <SEP> 9, <SEP> 1
<tb> Riz <SEP> glutineux <SEP> 2, <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 3,6 <SEP> 3, <SEP> 6
<tb> Soja <SEP> noir4, <SEP> 5 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 9, <SEP> 1 <SEP> 9, <SEP> 1
<tb> Haricot <SEP> beurre <SEP> 1, <SEP> 5 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 93 <SEP> 93
<tb>
<tb> Alimenta <SEP> Comptage <SEP> sur <SEP> boîte <SEP> B. <SEP> cereus <SEP> (NPP/g) <SEP> déterminé
<tb> aérobie <SEP> par <SEP> :
<tb> (CFU/g)
<tb> Procédé <SEP> ELISA
<tb> conventionnel
<tb> Millet <SEP> 1, <SEP> 2 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 3, <SEP> 6 <SEP> 3, <SEP> 6
<tb> Avoine <SEP> 4, <SEP> 8 <SEP> x <SEP> 102 <SEP> NDb <SEP> ND*
<tb> Riz <SEP> 4, <SEP> 3 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 9,1 <SEP> 9, <SEP> 1
<tb> Riz <SEP> glutineux <SEP> 2, <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 3,6 <SEP> 3, <SEP> 6
<tb> Soja <SEP> noir4, <SEP> 5 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 9, <SEP> 1 <SEP> 9, <SEP> 1
<tb> Haricot <SEP> beurre <SEP> 1, <SEP> 5 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 93 <SEP> 93
<tb>
<Desc/Clms Page number 14>
<tb>
<tb> Haricot <SEP> mungo <SEP> 2,9 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> ND <SEP> 3,6c
<tb> Haricot <SEP> de <SEP> Soissons <SEP> 1,2 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 3, <SEP> 6 <SEP> 9, <SEP> ld
<tb> Haricot <SEP> Adzuki <SEP> 8,8 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 15 <SEP> 15
<tb> Soja <SEP> 2, <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 23 <SEP> 93c
<tb> Épices <SEP> 4,9 <SEP> x <SEP> 105 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> Crème <SEP> glacée <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 102 <SEP> 23 <SEP> 23
<tb> Aliment <SEP> lacté <SEP> ND <SEP> ND <SEP> ND
<tb> instantané
<tb> Flocons <SEP> d'avoine <SEP> 2,0 <SEP> x <SEP> 102 <SEP> ND <SEP> ND
<tb> pudding <SEP> ND <SEP> ND <SEP> ND
<tb>
* ND : non déterminé a. Tous les échantillons de nourriture, à l'exception des quatre derniers, sont de la nourriture non traitée. b. Non détecté. c. L'organisme provoquant un faux-positif et une valeur de NPP plus
grande est B. thuringiensis. d. L'organisme provoquant une valeur NPP plus grande est B. mycoides.
<tb> Haricot <SEP> mungo <SEP> 2,9 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> ND <SEP> 3,6c
<tb> Haricot <SEP> de <SEP> Soissons <SEP> 1,2 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 3, <SEP> 6 <SEP> 9, <SEP> ld
<tb> Haricot <SEP> Adzuki <SEP> 8,8 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 15 <SEP> 15
<tb> Soja <SEP> 2, <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 103 <SEP> 23 <SEP> 93c
<tb> Épices <SEP> 4,9 <SEP> x <SEP> 105 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> Crème <SEP> glacée <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 102 <SEP> 23 <SEP> 23
<tb> Aliment <SEP> lacté <SEP> ND <SEP> ND <SEP> ND
<tb> instantané
<tb> Flocons <SEP> d'avoine <SEP> 2,0 <SEP> x <SEP> 102 <SEP> ND <SEP> ND
<tb> pudding <SEP> ND <SEP> ND <SEP> ND
<tb>
* ND : non déterminé a. Tous les échantillons de nourriture, à l'exception des quatre derniers, sont de la nourriture non traitée. b. Non détecté. c. L'organisme provoquant un faux-positif et une valeur de NPP plus
grande est B. thuringiensis. d. L'organisme provoquant une valeur NPP plus grande est B. mycoides.
Les exemples décrits ci-dessus sont indiqués comme simples illustrations de la méthode d'identification rapide de B. cereus et du kit concerné revendiqués dans l'objet de la demande, et ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention.
Claims (12)
- antigène de surface de R cereus choisi dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28, 5, 26, 5 et 20 kDa et leurs mélanges, et (b) la détection de la présence de B. cereus si la réaction de liaison antigène-anticorps est positive.REVENDICATIONS 1. Procédé d'identification rapide de Bacillus cereus dans un échantillon caractérisé en ce qu'il comprend (a) le mélange avec l'échantillon d'un anticorps ou antisérum dirigé spécifiquement contre un
- 2. Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'antigène est l'antigène de surface de B. cereus ayant une masse moléculaire de 28,5 kDa ou 20 kDa, ou un mélange de ces antigènes.
- 3. Procédé selon la revendication 2 caractérisé en ce que l'antigène est l'antigène de surface de B. cereus ayant une masse moléculaire de 28,5 kDa.
- 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il comprend l'utilisation de gélose sélective mannitol-jaune d'oeuf-polymyxine (MJP) pour l'identification rapide de B. cereus.
- 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que la réaction de liaison est détectée par dosage ELISA.
- 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que la réaction de liaison est détectée par dosage par immunotransfert de colonies.
- 7. Kit pour l'identification rapide de B. cereus caractérisé en ce qu'il comprend des anticorps dirigés contre des antigènes de surface de B. cereus et les agents ou réactifs et appareils nécessaires pour la détection de la réaction de liaison anticorps-antigène dans un échantillon à tester, l'antigène étant choisi dans le groupe consistant en les antigènes de surface de B. cereus ayant des masses moléculaires de 28,5, 26,5 et 20 kDa, et leurs mélanges.
- 8. Kit selon la revendication 7 caractérisé en ce que l'antigène est l'antigène de surface de B. cereus ayant une masse moléculaire de 28,5 kDa ou 20 kDa, ou un mélange de ces antigènes.<Desc/Clms Page number 16>
- 9. Kit selon la revendications 8 caractérisé en ce que l'antigène est l'antigène de surface de B. cereus ayant une masse moléculaire de 28,5 kDa.
- 10. Kit selon l'une quelconque des revendications 7 à 9 caractérisé en ce qu'il peut être utilisé en combinaison avec de la gélose sélective mannitol-jaune d'oeuf-polymyxine (MJP) pour l'identification rapide de B. cereus.
- 11. Kit selon l'une quelconque des revendications 7 à 10 caractérisé en ce que les agents ou réactifs et appareils pour la réaction de liaison sont utilisés dans un dosage ELISA.
- 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisé en ce que la réaction de liaison est détectée au moyen des agents ou réactifs et appareils utilisés dans un dosage par immunotransfert de colonies.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW090101886A TWI253471B (en) | 2001-01-31 | 2001-01-31 | Method for rapid identification of bacillus cereus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2820147A1 true FR2820147A1 (fr) | 2002-08-02 |
| FR2820147B1 FR2820147B1 (fr) | 2005-01-28 |
Family
ID=21677177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR0200413A Expired - Fee Related FR2820147B1 (fr) | 2001-01-31 | 2002-01-15 | Procede et kit d'identification rapide de bacillus cereus dans un echantillon |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6699679B2 (fr) |
| FR (1) | FR2820147B1 (fr) |
| GB (1) | GB2374664B (fr) |
| TW (1) | TWI253471B (fr) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2235772C1 (ru) * | 2003-01-29 | 2004-09-10 | Общество с ограниченной ответственностью "БИОТРОФ" | Штамм бактерий bacillus pantothenticus 1-85 для использования в гранулированных кормах |
| EP1508622A1 (fr) * | 2003-08-22 | 2005-02-23 | Siegfried Prof. Dr. Scherer | Détection du peptide synthase impliqué dans la production de la toxine émétique de Bacillus cereus |
| DE102006061002A1 (de) | 2006-12-22 | 2008-06-26 | Profos Ag | Verfahren und Mittel zur Anreicherung, Entfernung und zum Nachweis von gram-positiven Bakterien |
| CN102854320B (zh) * | 2012-10-09 | 2014-08-06 | 天津商业大学 | 一种蜡样芽孢杆菌电化学纳米免疫传感器的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0498920A2 (fr) * | 1991-02-14 | 1992-08-19 | Vicam, L.P. | Méthode d'essai pour détecter la présence de bactéries |
| WO1999036081A1 (fr) * | 1998-01-14 | 1999-07-22 | Uab Research Foundation | Ligands peptidiques se fixant a la surface de spores bacteriennes |
| US6284517B1 (en) * | 1999-05-28 | 2001-09-04 | Lawrence Restaino | Plating media for the presumptive identification of Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8426470D0 (en) | 1984-10-19 | 1984-11-28 | Technology Licence Co Ltd | Monoclonal antibodies |
| US5763226A (en) * | 1995-02-17 | 1998-06-09 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Bacillus cereus enterotoxin and method of use |
| ATE339449T1 (de) | 2000-04-28 | 2006-10-15 | Tetracore Inc | Anthrax-spezifisches antigen, impfstoffe die das antigen enthalten, anthrax-spezifische antikörper,und deren verwendungen |
-
2001
- 2001-01-31 TW TW090101886A patent/TWI253471B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-12-17 US US10/022,591 patent/US6699679B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-27 GB GB0130971A patent/GB2374664B/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-01-15 FR FR0200413A patent/FR2820147B1/fr not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0498920A2 (fr) * | 1991-02-14 | 1992-08-19 | Vicam, L.P. | Méthode d'essai pour détecter la présence de bactéries |
| WO1999036081A1 (fr) * | 1998-01-14 | 1999-07-22 | Uab Research Foundation | Ligands peptidiques se fixant a la surface de spores bacteriennes |
| US6284517B1 (en) * | 1999-05-28 | 2001-09-04 | Lawrence Restaino | Plating media for the presumptive identification of Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2820147B1 (fr) | 2005-01-28 |
| US6699679B2 (en) | 2004-03-02 |
| TWI253471B (en) | 2006-04-21 |
| US20020146752A1 (en) | 2002-10-10 |
| GB0130971D0 (en) | 2002-02-13 |
| GB2374664A (en) | 2002-10-23 |
| GB2374664B (en) | 2004-09-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nguyen et al. | Screening food for Bacillus cereus toxins using whole genome sequencing | |
| Nogueira et al. | Characterization of salivary immunoglobulin A responses in children heavily exposed to the oral bacterium Streptococcus mutans: influence of specific antigen recognition in infection | |
| Minnich et al. | Enzyme immunoassay for detection of salmonellae in foods | |
| Barer et al. | Relationship of toxin production to species in the genus Aeromonas | |
| Skjelkvålé et al. | Enterotoxin formation by different toxigenic types of Clostridium perfringens | |
| JPH05502588A (ja) | 腸出血性大腸菌０１５７：ｈ７及び０２６：ｈ１１への単クローン抗体及びその検出方法 | |
| Singh et al. | Evaluation of highly sensitive indigenous milk ELISA kit with fecal culture, milk culture and fecal-PCR for the diagnosis of bovine Johne's disease (BJD) in India | |
| Notermans et al. | Immunological methods for detection of foodborne pathogens and their toxins | |
| Naseri et al. | Prevalence of the most common virulence-associated genes among Brucella Melitensis isolates from human blood cultures in Hamadan Province, West of Iran | |
| Morlay et al. | Label-free immuno-sensors for the fast detection of Listeria in food | |
| KR100319402B1 (ko) | 살모넬라측정방법 | |
| JP3773633B2 (ja) | 大腸菌ｏ１５７の分析方法及び分析用試薬 | |
| FR2820147A1 (fr) | Procede et kit d'identification rapide de bacillus cereus dans un echantillon | |
| Parker et al. | Sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for Vibrio vulnificus hemolysin to detect V. vulnificus in environmental specimens | |
| Wiuff et al. | Immunochemical analyses of serum antibodies from pig herds in a Salmonella non-endemic region | |
| Chang et al. | Development of a latex agglutination test for the rapid identification of Vibrio parahaemolyticus | |
| Hochel et al. | Development of an indirect competitive ELISA for detection of Campylobacter jejuni subsp. jejuni O: 23 in foods | |
| Brett | Kits for the detection of some bacterial food poisoning toxins: problems, pitfalls and benefits | |
| WO2008050041A1 (fr) | Procede de diagnostic in vitro des staphylococcus aureus producteurs de pvl | |
| Chen et al. | Identification of Listeria monocytogenes based on the detection of a 68-kilodalton cell-surface antigen | |
| Khosrobeygi et al. | Isolation and Purification of Low Molecular Weight Proteins from Culture Filtrate of Mycobacterium Tuberculosis Strain C | |
| Hochel et al. | Characterization of rabbit antibodies for immunochemical detection of Yersinia enterocolitica | |
| Boot et al. | An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for monitoring rodent colonies for Pasteurella pneumotropica antibodies | |
| Sanna et al. | Development of a specific immunomagnetic capture‐PCR for rapid detection of viable Mycoplasma agalactiae in sheep milk samples | |
| Zhang et al. | Development and characterization of monoclonal and polyclonal antibodies against Salmonella enterica Typhimurium for biosensor detection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TP | Transmission of property | ||
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20140930 |