FR2855752A1 - COSMETIC USE OF SOPHOROLIPIDS AS REGULATORY AGENTS OF SUB-CUTANEOUS ADIPOSE MASS AND APPLICATION TO SLURRY - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne de nouvelles utilisations cosmétiques des sophorolipides, en tant qu'agents amincissants et/ou en tant qu'agents actifs stimulant la synthèse de la leptine par les adipocytes, pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à réduire les surcharges graisseuses sous-cutanées.L'invention concerne également un procédé de traitement cosmétique destiné à obtenir un effet amincissant du corps humain selon lequel on applique sur les parties du corps à traiter une composition cosmétique contenant au moins un sophorolipide.Elle concerne également de nouvelles compositions cosmétiques contenant au moins un sophorolipide, en association avec un agent lipolytique choisi dans le groupe constitué par l'AMPc et ses dérivés, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase.The invention relates to new cosmetic uses of sophorolipids, as slimming agents and / or as active agents stimulating the synthesis of leptin by adipocytes, for the manufacture of a cosmetic composition intended to reduce excess fat. The invention also relates to a cosmetic treatment process intended to obtain a slimming effect on the human body, according to which a cosmetic composition containing at least one sophorolipid is applied to the parts of the body to be treated. It also relates to novel cosmetic compositions containing at least one sophorolipid, in combination with a lipolytic agent chosen from the group consisting of cAMP and its derivatives, agents for activating the enzyme adenylate cyclase and agents which inhibit the enzyme phosphodiesterase.
Description
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La présente invention concerne une nouvelle utilisation cosmétique des sophorolipides comme agents régulateurs de la masse adipeuse. The present invention relates to a novel cosmetic use of sophorolipids as regulating agents of the adipose mass.
Les sophorolipides constituent une famille de produits généralement obtenus dans des procédés de fermentation de différents substrats par des levures, en particulier par Candida bombicola ou par Candida apicola. Sophorolipids are a family of products generally obtained in processes for fermenting different substrates by yeasts, in particular Candida bombicola or Candida apicola.
Les sophorolipides ont en commun d'être constitués d'une fraction glucidique d'un disaccharide commun, le sophorose (2-O-p-D- glucopyranosyl-D-glucopyranose), acétylé ou non, et d'une fraction lipidique qui fait intervenir des hydroxyacides gras différents. The sophorolipids have in common to be constituted by a carbohydrate fraction of a common disaccharide, sophorose (2-OpD-glucopyranosyl-D-glucopyranose), acetylated or not, and a lipid fraction which involves hydroxy fatty acids. different.
Il existe deux catégories de sophorolipides qui correspondent aux formules I et II données ci-dessous, correspondant respectivement à une forme lactone et à une forme acide. There are two categories of sophorolipids which correspond to the formulas I and II given below, respectively corresponding to a lactone form and an acid form.
Dans la forme acide, le disaccharide est lié par une fonction éther à un acide gras alors que dans la forme lactone, l'acide gras forme une lactone avec le disaccharide. In the acid form, the disaccharide is linked by an ether function to a fatty acid whereas in the lactone form, the fatty acid forms a lactone with the disaccharide.
Ainsi, les sophorolipides répondent à l'une au moins des formules I (forme lactone) et II (forme acide) ci-dessous :
Thus, the sophorolipids correspond to at least one of formulas I (lactone form) and II (acid form) below:
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dans lesquelles Ri est de l'hydrogène ou un groupement acétyle, R2 est de l'hydrogène ou un groupement alkyle en Ci à Cg, et R3 est un groupement hydrocarboné saturé ou non en C7 à C17.
wherein R 1 is hydrogen or an acetyl group, R 2 is hydrogen or a C 1 to C 6 alkyl group, and R 3 is a saturated or unsaturated C 7 to C 17 hydrocarbon group.
La composition exacte des mélanges de produits de type sophorolipide dépend en fait à la fois des conditions de leur procédé de fabrication, en particulier de la nature de la levure mise en #uvre, et de la nature du substrat traité. The exact composition of the sophorolipid product mixtures is in fact dependent on both the conditions of their manufacturing process, in particular the nature of the yeast employed, and the nature of the treated substrate.
Il est maintenant bien connu que les composés de type sophorolipide sont des composés particulièrement intéressants dans de nombreux domaines de l'industrie du fait de leurs propriétés tensioactives. Ils sont, en particulier, utilisables comme agents de nettoyage et comme agents émulsifiants, surtout, du fait de leurs propriétés amphiphiles liées à la présence du sophorose hydrophile et du reste d'acide gras lipophile. It is now well known that sophorolipid compounds are compounds of particular interest in many fields of industry because of their surfactant properties. They are, in particular, useful as cleaning agents and as emulsifying agents, especially, because of their amphiphilic properties related to the presence of hydrophilic sophorose and lipophilic fatty acid residue.
Les sophorolipides présentent, en outre, l'avantage d'être bien tolérés par la peau et ont pu être récemment développés dans différentes applications cosmétiques, en particulier dans la lutte contre le vieillissement cutané. The sophorolipids have, in addition, the advantage of being well tolerated by the skin and have been recently developed in different cosmetic applications, particularly in the fight against skin aging.
Ainsi, la publication les sophorolipides : actif contre le vieillissement cutané , Parfums et Cosmétiques Actualité, N 129, juinjuillet 1996, décrit l'action stimulante des sophorolipides sur les cellules du Thus, the publication sophorolipids: active against skin aging, Perfumes and Cosmetics News, N 129, JuneJuly 1996, describes the stimulating action of sophorolipids on the cells of the skin.
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derme et leur action réparatrice et préventive vis-à-vis du vieillissement cutané. dermis and their restorative and preventive action vis-à-vis skin aging.
Le brevet FR 2 757 766 décrit l'utilisation des sophorolipides en tant qu'agents stimulateurs du métabolisme des fibroblastes dermiques et met en évidence l'effet restructurant, réparateur et raffermissant de la peau des sophorolipides sous leur forme brute ou sous leur forme acide. Patent FR 2 757 766 describes the use of sophorolipids as agents stimulating the metabolism of dermal fibroblasts and highlights the restructuring, repairing and firming effect of the skin of sophorolipids in their raw form or in their acid form.
Le brevet européen EP 0 209 783 décrit l'utilisation de sophorolipides de type lactone pour combattre les pellicules et comme agents bactériostatiques dans des déodorants. European patent EP 0 209 783 describes the use of lactone-type sophorolipids to combat dandruff and as bacteriostatic agents in deodorants.
Ainsi donc, un certain nombre d'utilisations potentielles des sophorolipides dans le domaine de la cosmétique ou de la dermatologie sont connues à ce jour. Thus, a number of potential uses of sophorolipids in the field of cosmetics or dermatology are known to date.
Les inventeurs de la présente invention ont maintenant découvert de façon tout à fait surprenante une nouvelle utilisation des sophorolipides comme agents amincissants ou dans le traitement des surcharges adipeuses. Ils ont, par ailleurs, mis en évidence que cette nouvelle utilisation était liée à la propriété parfaitement inattendue des sophorolipides de favoriser la synthèse de la leptine par les adipocytes. The inventors of the present invention have now quite surprisingly discovered a new use of sophorolipids as slimming agents or in the treatment of adipose overloads. They have also demonstrated that this new use was related to the perfectly unexpected property of sophorolipids to promote the synthesis of leptin by adipocytes.
La leptine de la souris a été récemment identifiée en 1994 comme étant le produit du "gène ob" (Zhang, y et al., Nature, 1994, 372 :425 et Tartaglia L.A., 1997, J. Biol. Chem. 272:6093). Mouse leptin was recently identified in 1994 as the product of the "ob gene" (Zhang, et al., Nature, 1994, 372: 425 and Tartaglia LA, 1997, J. Biol Chem 272: 6093 ).
La structure de la leptine humaine (ou protéine humaine OB) et son utilisation dans la modulation du poids chez les animaux ont été décrites dans la demande de brevet britannique GB 2292382. Il s'agit d'une protéine sécrétée par l'adipocyte qui informe le cerveau de l'état des réserves adipeuses. Elle agit par l'intermédiaire de récepteurs membranaires situés en particulier au niveau de l'hypothalamus. The structure of human leptin (or human OB protein) and its use in modulating weight in animals have been described in British Patent Application GB 2292382. It is a protein secreted by the adipocyte which informs the brain of the state of fat reserves. It acts via membrane receptors located in particular at the level of the hypothalamus.
D'abord étudiée chez le rongeur puis chez l'homme, elle joue un rôle clef dans la régulation du poids corporel. First studied in rodents and then in humans, it plays a key role in the regulation of body weight.
Chez les souris ob/ob, l'absence de leptine dans le sérum due à des mutations du gène ob (celui qui code pour la leptine) entraîne une obésité massive. In ob / ob mice, the absence of leptin in the serum due to mutations in the ob gene (the one that codes for leptin) leads to massive obesity.
Chez l'homme, les premiers travaux concernant la leptine ont été dirigés vers les patients obèses et/ou diabétiques. In humans, early work on leptin has been directed to obese and / or diabetic patients.
En effet, plus un adipocyte possède une teneur élevée en triglycérides, plus il produit de leptine, et inversement (Médecine/Sciences, Indeed, the more a fat cell has a high triglyceride content, the more it produces leptin, and vice versa (Medicine / Sciences,
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1998, n 8-9, 14,858-864, G. Ailhaud : L'adipocyte, cellule sécrétrice et endocrine). 1998, No. 8-9, 14, 858-864, G. Ailhaud: The adipocyte, secretory and endocrine cell).
Ainsi chez les obèses, deux situations peuvent se présenter. Thus in obese, two situations can arise.
Soit il existe une mutation du gène de la leptine, celle-ci est alors non fonctionnelle, en particulier sur les récepteurs du cerveau. Soit il existe un défaut du transfert de la leptine au niveau de la barrière entre circulation sanguine et cerveau. Either there is a mutation of the leptin gene, it is then non-functional, especially on the brain receptors. Either there is a defect of leptin transfer at the barrier between blood circulation and brain.
Une étude, au cours de laquelle une injection quotidienne de leptine synthétique a été réalisée sur des patients qui souffraient d'obésité ou de surcharges pondérales a montré des résultats probants : une perte de poids significative chez les patients atteints d'une certaine forme d'obésité est apparue (travaux menés à la Tufts University aux Etats-Unis, présentés à l'occasion du congrès American Diabètes Association : Jean Mayer, USA Human Nutrition Research Center on Aging). One study, in which a daily injection of synthetic leptin was performed on patients who were suffering from obesity or overweight showed convincing results: significant weight loss in patients with some form of Obesity appeared (work conducted at Tufts University in the United States, presented at the American Diabetes Association conference: Jean Mayer, USA Human Nutrition Research Center on Aging).
En fait, la leptine déclenche un phénomène de satiété provoquant une diminution de la prise alimentaire et diminuant la fréquence des prises alimentaires. In fact, leptin triggers a phenomenon of satiety causing a decrease in food intake and decreasing the frequency of food intake.
Lorsque la masse adipeuse augmente, la leptine produite par le tissu adipeux va inhiber la prise alimentaire et stimuler la dépense énergétique. Elle va donc s'opposer ainsi à une prise de poids excessive. As adipose tissue increases, leptin produced by adipose tissue will inhibit food intake and stimulate energy expenditure. She will therefore oppose excessive weight gain.
Ainsi donc, on peut considérer que cette protéine est un régulateur de la masse adipeuse dont le rôle primordial est d'inhiber le dépôt d'adiposité en excès. Thus, it can be considered that this protein is a regulator of the adipose mass whose primary role is to inhibit the deposition of adiposity in excess.
Le rôle de régulation locale joué par la leptine est bien connu (voir Systemically and Topically Administered Leptin Both Accelerate Wound Healing in Diabetic ob/ob Mice. B. D. Ring, S. Scully, C. R. Davis, M. B Baker, M.J. Cullen, M.A. Pelleymounter, D. Danilenko. Endocrinology, 2000 vol. 141, n 1, p. 446-449). The local regulatory role played by leptin is well known (see Systemically and Topically Administered Leptin Both Accelerate Wound Healing in Diabetic Mice / BD Ring, S. Scully, Davis CR, B Baker, MJ Cullen, MA Pelleymounter D. Danilenko, Endocrinology, 2000, Vol 141, No. 1, pp. 446-449).
Par ailleurs, le rôle de la leptine dans l'expression de certains gènes conduisant à l'accumulation de lipides (gènes de différenciation) est également bien connu dans le sens de la régulation de la lipolyse. Moreover, the role of leptin in the expression of certain genes leading to the accumulation of lipids (differentiation genes) is also well known in the sense of the regulation of lipolysis.
La leptine, d'une part réprime l'expression de certains gènes conduisant à l'accumulation de lipides (gènes de différenciation), et cela sans la participation du cerveau. Leptin on the one hand represses the expression of certain genes leading to the accumulation of lipids (differentiation genes), without the involvement of the brain.
D'autre part, la leptine induit une lipolyse directement sur les adipocytes. Ceci a été observé sur des adipocytes de souris in vitro (voir On the other hand, leptin induces lipolysis directly on the adipocytes. This has been observed on mouse adipocytes in vitro (see
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In vitro Lipolytic Effect of Leptin on Mouse Adipocytes : for a possible Autocrine/Paracrine Role of Leptin, G. Frühbeck, M. Aguado, J.A. In vitro Lipolytic Effect of Leptin on Mouse Adipocytes: for possible Autocrine / Paracrine Role of Leptin, G. Frühbeck, M. Aguado, J.A.
Martinez, Biochemical and Biophysical Research communications 1997 : 240, p. 590-594). L'effet de la leptine sur la lipolyse des adipocytes est spécifique et opère via des récepteurs présents dans le tissu adipeux blanc. Martinez, Biochemical and Biophysical Research Communications 1997: 240, p. 590-594). The effect of leptin on lipolysis of adipocytes is specific and operates via receptors present in white adipose tissue.
La leptine transforme l'oestrone de la circulation sanguine (hormone qui augmente le dépôt de lipides) en oléyl-oestrone qui est considéré comme un facteur "amincissant". L'apparition de ce facteur provoque une lipolyse généralisée et une thermogénèse (voir Leptin enhances the synthesis of oleyl-estrone from estrone in white adipose tissue, M. Esteve, J. Virgili, H. Aguilar, F. Balada, J. A. Fernandez-Lopez, W. Leptin converts estrone from the bloodstream (hormone that increases lipid deposition) into oleyl-estrone, which is considered a "slimming" factor. The appearance of this factor causes generalized lipolysis and thermogenesis (see Leptin enhances the synthesis of oleyl-estrone from estrone in white adipose tissue, M. Esteve, J. Virgili, H. Aguilar, F. Balada, JA Fernandez-Lopez , W.
Remesar, M. Alemany, Eur J. Nutr. 1999,38, p. 99-104). Administrée à des rats obèses ou normaux, l'oléyl-oestrone provoque une perte de masse grasse. Remesar, M. Alemany, Eur J. Nutr. 1999, 38, p. 99-104). Given to obese or normal rats, oleyl-estrone causes a loss of fat mass.
On voit donc tout l'intérêt qu'il y a à disposer d'un moyen pour agir sur la synthèse de la leptine qui agira notamment: - directement au niveau cutané par l'intermédiaire des récepteurs présents à ce niveau, - sur le tissu adipeux en provoquant la lipolyse, - sur un facteur agissant comme régulateur du poids, à savoir l'oléyl-oestrone. So we see all the interest there is to have a way to act on the synthesis of leptin which will act in particular: - directly on the skin through the receptors present at this level, - on the tissue adipose by causing lipolysis, - on a factor acting as a weight regulator, namely oleyl-estrone.
Les essais réalisés dans le cadre de la présente invention ont permis de démontrer que les sophorolipides permettaient d'augmenter considérablement la sécrétion de la leptine par les adipocytes. The tests carried out in the context of the present invention have made it possible to demonstrate that sophorolipids make it possible to considerably increase the secretion of leptin by adipocytes.
Ainsi, l'utilisation en application topique des sophorolipides favorise la sécrétion de la leptine par les adipocytes et permet de traiter les surcharges graisseuses sous-cutanées. Thus, the use in topical application of sophorolipids promotes the secretion of leptin by adipocytes and can treat subcutaneous fat overload.
L'invention concerne, selon un premier aspect, l'utilisation cosmétique d'au moins un sophorolipide, en tant qu'agent amincissant pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à réduire les surcharges graisseuses sous-cutanées, lesdits sophorolipides répondant à l'une au moins des formules I ou II ci-dessous : The invention relates, in a first aspect, to the cosmetic use of at least one sophorolipid, as a slimming agent for the manufacture of a cosmetic composition intended to reduce subcutaneous fat overload, said sophorolipids responding to the at least one of formulas I or II below:
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dans lesquelles Ri est de l'hydrogène ou un groupement acétyle, R2 est de l'hydrogène ou un groupement alkyle en Ci à Cg, et R3 est un groupement hydrocarboné saturé ou non en C7 à C17-
Selon un deuxième aspect, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un sophorolipide tel que défini ci-dessus, en tant qu'agent stimulant la synthèse de la leptine par les adipocytes, pour la fabrication d'une composition cosmétique destinée à réduire les surcharges graisseuses sous-cutanées.
in which R 1 is hydrogen or an acetyl group, R 2 is hydrogen or a C 1 to C 6 alkyl group, and R 3 is a saturated or unsaturated C 7 to C 17 hydrocarbon group;
According to a second aspect, the present invention also relates to the use of at least one sophorolipid as defined above, as an agent stimulating the synthesis of leptin by adipocytes, for the manufacture of a cosmetic composition for to reduce subcutaneous fat deposits.
Selon un troisième aspect, l'invention concerne un procédé de traitement cosmétique amincissant du corps humain destiné à diminuer les According to a third aspect, the invention relates to a cosmetic slimming treatment method of the human body intended to reduce the
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surcharges graisseuses sous-cutanées, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer à la surface de la partie du corps concerné une composition cosmétique contenant au moins un composé de la famille des mêmes sophorolipides. subcutaneous fat overload, characterized in that it consists in applying to the surface of the part of the body concerned a cosmetic composition containing at least one compound of the family of the same sophorolipids.
Enfin, selon un quatrième aspect, l'invention concerne de nouvelles compositions cosmétiques, notamment destinées à réduire les surcharges graisseuses sous-cutanées contenant, à titre d'agent actif, au moins un sophorolipide tel que défini précédemment, en combinaison avec au moins un agent lipolitique. Finally, according to a fourth aspect, the invention relates to novel cosmetic compositions, in particular intended to reduce subcutaneous fat overloads containing, as active agent, at least one sophorolipid as defined above, in combination with at least one lipolitic agent.
Les compositions cosmétiques utilisées selon les trois premiers aspects de l'invention ainsi que les compositions nouvelles qui font l'objet du quatrième aspect de l'invention contiennent, à titre de principe actif, au moins un produit de la famille des sophorolipides répondant à l'une des formules I et II données précédemment. The cosmetic compositions used according to the first three aspects of the invention as well as the novel compositions which are the subject of the fourth aspect of the invention contain, as active principle, at least one product of the family of sophorolipids corresponding to the one of the formulas I and II given previously.
Selon une variante avantageuse de l'invention, ces sophorolipides sont obtenus par fermentation de substrats végétaux, les procédés de fermentation mis en #uvre conduisant en général à des mélanges de produits répondant aux formules I et II. According to an advantageous variant of the invention, these sophorolipids are obtained by fermentation of plant substrates, the fermentation processes used generally leading to mixtures of products corresponding to formulas I and II.
On utilisera avantageusement selon l'invention des sophorolipides produits par fermentation, de préférence par fermentation de substrats végétaux, plus précisément par bioconversion d'un substrat glucidique en présence d'un substrat lipidique. Advantageously used according to the invention sophorolipids produced by fermentation, preferably by fermentation of plant substrates, more precisely by bioconversion of a carbohydrate substrate in the presence of a lipid substrate.
Ainsi, les sophorolipides peuvent être produits par fermentation avec une levure, à partir de glucose et d'huile végétale ou de leurs esters. Thus, sophorolipids can be produced by fermentation with yeast, from glucose and vegetable oil or their esters.
En particulier, on peut utiliser comme levure une souche de Candida bombicola ou de Candida apicola sur un substrat de nature glucidique, suivi d'une phase de production par bioconversion de deux substrats, l'un glucidique et l'autre lipidique. In particular, a yeast strain of Candida bombicola or Candida apicola can be used on a carbohydrate-type substrate, followed by a production phase by bioconversion of two substrates, one glucidic and the other lipidic.
Selon une variante avantageuse de l'invention, on utilisera des sophorolipides ou des mélanges de sophorolipides répondant à l'une au moins des formules II ou II' ci-dessous : According to an advantageous variant of the invention, sophorolipids or mixtures of sophorolipids corresponding to at least one of the formulas II or II 'below will be used:
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dans lesquelles Ri est de l'hydrogène ou un groupement acétyle.
in which R 1 is hydrogen or an acetyl group.
Selon une autre variante avantageuse de l'invention, on recourt à des sophorolipides ou des mélanges de sophorolipides répondant à l'une des formules III ou III' ci-dessous : According to another advantageous variant of the invention, use is made of sophorolipids or mixtures of sophorolipids corresponding to one of the formulas III or III 'below:
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dans lesquelles Ri est de l'hydrogène ou un groupement acétyle et R4 est une chaîne hydrocarbonée linéaire présentant éventuellement une insaturation et comprenant 11, 13 ou 15 atomes de carbone.
wherein R 1 is hydrogen or an acetyl group and R 4 is a linear hydrocarbon chain optionally having unsaturation and comprising 11, 13 or 15 carbon atoms.
Selon une variante avantageuse, on utilise un mélange de sophorolipides contenant, à titre de sophorolipide majoritaire, le diacétate- 6', 6" - L - (2'-O-p-D-glucopyranosyl-p-D-glucopyranosyl)-oxy)-17- octadécénoïque lactone-1',4". According to an advantageous variant, a mixture of sophorolipids containing, as a major sophorolipid, the diacetate-6 ', 6 "-L- (2'-OpD-glucopyranosyl-pD-glucopyranosyl) -oxy) -17-octadecenoic lactone is used. -1 ', 4 ".
Un tel mélange, obtenu par fermentation, se trouve actuellement dans le commerce. On citera, par exemple, les produits commercialisés par la Société Rhodia, en particulier le produit Miractive Ipoleose 30#, Such a mixture, obtained by fermentation, is currently commercially available. For example, the products marketed by the Rhodia Company, in particular the Miractive Ipoleose 30 # product,
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ainsi que le produit commercialisé sous la marque Sopholiance par la Société Soliance. as well as the product marketed under the Sopholiance brand by Soliance.
Dans ces différents produits, lorsqu'ils sont obtenus par un procédé de fermentation mettant en #uvre un substrat lipidique, par exemple une huile végétale, la structure de la fraction lipidique reflète celle des hydroxy-acides gras présents dans le substrat lipidique de départ. In these different products, when they are obtained by a fermentation process using a lipid substrate, for example a vegetable oil, the structure of the lipid fraction reflects that of the fatty hydroxy acids present in the starting lipid substrate.
Par ailleurs, la longueur relative des groupements R2 et R3 dépend de la position du groupement hydroxyle dans l'hydroxy-acide gras de départ. Moreover, the relative length of the groups R2 and R3 depends on the position of the hydroxyl group in the starting hydroxy-fatty acid.
Ainsi, on recourt avantageusement à des hydroxy-acides gras dans lesquels le groupement hydroxyle se trouve en position co ou #-1 et, dans ces cas, les fractions glucidique et lipidique des sophorolipides sont reliées entre elles par une liaison acétal entre le carbone noté 1' de la molécule de glucose non impliquée dans la liaison sophorosidique et le carbone # ou #-1 de l'acide gras qui porte la fonction hydroxyle. Thus, it is advantageous to use hydroxy-fatty acids in which the hydroxyl group is in the position co or # -1 and, in these cases, the carbohydrate and lipid fractions of the sophorolipids are connected to each other by an acetal bond between the noted carbon. 1 'of the glucose molecule not involved in the sophoroside bond and the carbon # or # -1 of the fatty acid which carries the hydroxyl function.
Par ailleurs, les sophorolipides peuvent se présenter soit sous forme acide, soit sous forme lactone ou en mélange de ces deux formes. Furthermore, the sophorolipids can be in either acid form or in lactone form or in a mixture of these two forms.
Par ailleurs, les essais réalisés par les inventeurs de la présente invention ont montré que les concentrations en sophorolipides des compositions cosmétiques utilisées selon l'invention sont avantageusement comprises entre.0,01% et 5%, et de préférence entre 0,1% et 1%, en poids de ladite composition. Moreover, the tests carried out by the inventors of the present invention have shown that the sophorolipid concentrations of the cosmetic compositions used according to the invention are advantageously between 0.01% and 5%, and preferably between 0.1% and 1%, by weight of said composition.
Par ailleurs, les compositions cosmétiques utilisées selon l'invention peuvent être formulées sous toute forme destinée à un usage topique. Moreover, the cosmetic compositions used according to the invention can be formulated in any form intended for topical use.
Comme exposé précédemment, les compositions utilisées selon l'invention peuvent également comprendre un agent lipolytique choisi dans le groupe constitué par l'AMPc et ses dérivés, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase. De telles compositions constituent en elles-mêmes des produits nouveaux qui font l'objet du quatrième aspect de l'invention. De telles compositions contenant ces associations spécifiques s'avèrent particulièrement intéressantes, pour améliorer l'effet amincissant. As explained above, the compositions used according to the invention may also comprise a lipolytic agent chosen from the group consisting of cAMP and its derivatives, the activating agents of the adenylate cyclase enzyme and the phosphodiesterase enzyme inhibitory agents. Such compositions are in themselves new products which are the subject of the fourth aspect of the invention. Such compositions containing these specific combinations are particularly interesting, to improve the slimming effect.
Plus précisément, il est apparu que l'association d'au moins un sophorolipide tel que défini précédemment avec un ou plusieurs agents, ci-après désignés par agents lipolytiques, induisant une lipolyse, dans les More specifically, it has been found that the combination of at least one sophorolipid as defined previously with one or more agents, hereinafter referred to as lipolytic agents, inducing lipolysis, in the
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adipocytes s'avère particulièrement intéressante dans le cadre de la présente invention, comme cela sera expliqué plus loin. adipocytes is particularly advantageous in the context of the present invention, as will be explained later.
En particulier, on choisira pour réaliser cette association au moins un agent lipolytique cosmétiquement acceptable dans le groupe constitué par l'adénosine-3',5'-cyclique monophosphate (AMPc) et ses dérivés, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase. In particular, at least one lipolytic agent which is cosmetically acceptable in the group consisting of adenosine-3 ', 5'-cyclic monophosphate (cAMP) and its derivatives, the activating agents of the adenylate cyclase enzyme and inhibitors of the phosphodiesterase enzyme.
Comme agent activateur de l'adénylate cyclase, on choisira avantageusement la forskoline ou un extrait de plante en contenant, tel qu'un extrait de Coleus forskohlii ou Plectranthus barbatus, ou encore un extrait de la plante Tephrosia purpurea. As an activating agent for adenylate cyclase, forskolin or a plant extract containing it, such as an extract of Coleus forskohlii or Plectranthus barbatus, or an extract of the plant Tephrosia purpurea, will advantageously be chosen.
Comme agent inhibiteur de phosphodiestérase, on pourra utiliser une xanthine telle que la 3-isobutyl-1-méthyl-xanthine ou IBMX, la caféine ou la théophilline. As a phosphodiesterase inhibiting agent, it is possible to use a xanthine such as 3-isobutyl-1-methylxanthine or IBMX, caffeine or theophylline.
Les compositions cosmétiques renfermant de telles associations, qui sont nouvelles en elles-mêmes, constituent le quatrième aspect de la présente invention. Cosmetic compositions containing such combinations, which are new in themselves, constitute the fourth aspect of the present invention.
Ainsi donc selon ce quatrième aspect, la présente invention concerne une composition cosmétique, notamment destinée à réduire les surcharges graisseuses sous-cutanées, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre d'agent actif, - au moins un sophorolipide tel que défini précédemment, - au moins un agent lipolytique cosmétiquement acceptable choisi dans le groupe constitué par l'AMPc et ses dérivés cosmétiquement acceptables, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase, dans un véhicule cosmétiquement acceptable. Thus according to this fourth aspect, the present invention relates to a cosmetic composition, in particular for reducing subcutaneous fat overload, characterized in that it contains, as active agent, at least one sophorolipid as defined above. at least one cosmetically acceptable lipolytic agent chosen from the group consisting of cAMP and its cosmetically acceptable derivatives, the activating agents of the adenylate cyclase enzyme and the phosphodiesterase enzyme inhibitory agents, in a cosmetically acceptable vehicle.
Dans les compositions nouvelles de l'invention, les sophorolipides sont contenus à une concentration comprise entre 0,01 % et 5 % et, de préférence, entre 0,1 % et 1 % en poids par rapport au poids total de ladite composition. In the new compositions of the invention, the sophorolipids are contained at a concentration of between 0.01% and 5% and, preferably, between 0.1% and 1% by weight relative to the total weight of said composition.
Les compositions cosmétiques nouvelles contiennent en outre au moins un agent actif lipolytique choisi dans le groupe constitué par l'AMPc et ses dérivés lipolytiques, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase. The novel cosmetic compositions further contain at least one lipolytic active agent selected from the group consisting of cAMP and its lipolytic derivatives, the activating agents of the adenylate cyclase enzyme and the phosphodiesterase enzyme inhibitory agents.
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Dans ces compositions cosmétiques, l'AMPc ou son dérivé sera avantageusement utilisé à une concentration comprise entre à 0,001 % et 5 % en poids par rapport au poids total de la composition. In these cosmetic compositions, the cAMP or its derivative will advantageously be used at a concentration of between 0.001% and 5% by weight relative to the total weight of the composition.
A titre de dérivé de l'AMPc, on pourra choisir tout dérivé de l'AMPc cosmétiquement acceptable et en particulier un sel ou un dérivé acylé, notamment un dérivé mono- ou dibutyryle. As a derivative of cAMP, it will be possible to choose any cosmetically acceptable cAMP derivative and in particular a salt or an acyl derivative, especially a mono- or dibutyryl derivative.
A titre d'agent activateur de l'enzyme adénylate cyclase, on choisit, de façon avantageuse, la forskoline ou un extrait de plante en contenant, de préférence à une concentration comprise entre 0,001 % et 1 % et, de préférence entre 0,05 % et 0,25 %, en poids par rapport au poids total de la composition. As an activating agent for the adenylate cyclase enzyme, forskolin or a plant extract containing it is advantageously chosen, preferably at a concentration of between 0.001% and 1% and, preferably, between 0.05 and 0.05%. % and 0.25%, by weight relative to the total weight of the composition.
Comme extrait contenant de la forskoline, on choisira de préférence un extrait de Coleus forskohlii ou Plectranthus barbatus. Un tel extrait peut être obtenu par un procédé d'extraction tel que celui décrit dans la demande internationale WO 91/02516. As an extract containing forskolin, an extract of Coleus forskohlii or Plectranthus barbatus will preferably be selected. Such an extract can be obtained by an extraction process such as that described in the international application WO 91/02516.
On pourra également utiliser comme agent activateur de l'adénylate cyclase un extrait de la plante Tephrosia purpurea, à une concentration comprise entre 0,001 % et 5 %, de préférence entre 0,01 % et 5 %, en poids par rapport au poids total de la composition. Un tel extrait peut être obtenu par un procédé d'extraction tel que celui décrit dans la demande internationale WO 95/03780. It is also possible to use as an activating agent for adenylate cyclase an extract of the plant Tephrosia purpurea, at a concentration of between 0.001% and 5%, preferably between 0.01% and 5%, by weight relative to the total weight of the composition. Such an extract can be obtained by an extraction process such as that described in international application WO 95/03780.
Enfin, comme exposé précédemment, selon une autre variante, les compositions nouvelles selon l'invention contiennent un agent inhibiteur de la phosphodiestérase, en particulier une xanthine et, tout particulièrement, la 3-isobutyl-1-méthyl-xanthine (IBMX), la caféine ou la théophilline, de préférence à une concentration comprise entre 0,001 % et 10 %, de préférence entre 0,01 et 1 %, en poids par rapport au poids de la composition. Finally, as explained above, according to another variant, the novel compositions according to the invention contain a phosphodiesterase inhibiting agent, in particular xanthine and, in particular, 3-isobutyl-1-methyl-xanthine (IBMX), caffeine or theophillin, preferably at a concentration of between 0.001% and 10%, preferably between 0.01 and 1%, by weight relative to the weight of the composition.
Les compositions nouvelles utilisées selon la présente invention et qui contiennent une association de sophorolipides avec un agent lipolytique tel que l'AMPc et ses dérivés lipolytiques, les agents activateurs de l'adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de la phosphodiestérase, s'avèrent particulièrement intéressantes du fait de l'action synergique des deux types de constituants. The novel compositions used according to the present invention which contain a combination of sophorolipids with a lipolytic agent such as cAMP and its lipolytic derivatives, the activating agents for adenylate cyclase and the phosphodiesterase inhibiting agents, are particularly interesting. because of the synergistic action of the two types of constituents.
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Sans que les inventeurs de la présente invention s'estiment totalement liés par cette explication, une interprétation plausible de l'effet de synergie observé est donnée ci-après. Without the inventors of the present invention being fully bound by this explanation, a plausible interpretation of the observed synergistic effect is given below.
Il a en effet été déjà observé que les agents favorisant une lipolyse dans les adipocytes, tels que les extraits de Coleus par exemple, présentent une efficacité biologique remarquable qui associe en général un important pouvoir lipolytique à une activité inhibitrice de la maturation adipocytaire. La réduction importante en volume et en quantité des vacuoles lipidiques après un traitement par l'agent lipolytique conduit à une réduction de la production de leptine. Il est donc probable que cette perte locale de leptine dans l'environnement proche des adipocytes résultant du traitement par l'agent lipolytique puisse être compensée par l'effet d'un produit stimulant la synthèse de la leptine. Le maintien d'une concentration suffisante en leptine dans l'environnement proche des adipocytes exerce ainsi un rôle qui s'oppose à l'augmentation de la masse adipeuse. Tout semble donc se passer comme si le message était émis par des cellules grasses qui informent par une opération de rétro-contrôle de la nécessité de réduire le stockage sous forme de triglycérides. Ainsi, grâce à l'action combinée des sophorolipides, et d'au moins un autre agent lipolytique, on obtient un effet amincissant renforcé et plus prolongé. It has indeed already been observed that the agents promoting lipolysis in adipocytes, such as extracts of Coleus, for example, have a remarkable biological efficacy which generally associates an important lipolytic power with an inhibitory activity of adipocyte maturation. The significant reduction in volume and amount of lipid vacuoles after treatment with the lipolytic agent leads to a reduction in leptin production. It is therefore probable that this local loss of leptin in the environment close to the adipocytes resulting from treatment with the lipolytic agent can be compensated by the effect of a product stimulating the synthesis of leptin. The maintenance of a sufficient concentration of leptin in the environment close to the adipocytes thus exerts a role which opposes the increase of the adipose mass. Everything seems to happen as if the message was issued by fat cells that inform by a back-control operation of the need to reduce storage in the form of triglycerides. Thus, thanks to the combined action of sophorolipids, and at least one other lipolytic agent, a reinforced and more prolonged slimming effect is obtained.
EXEMPLES Exemple 1 : Mise en évidence de l'effet des sophorolipides sur la synthèse de la leptine par les adipocytes de souris 1. Principe du test
Le concept selon lequel la masse adipeuse peut être régulée via des facteurs circulants sécrétés est très intéressant. EXAMPLES Example 1: Demonstration of the Effect of Sophorolipids on the Synthesis of Leptin by Mouse Adipocytes 1. Principle of the Test
The concept that adipose mass can be regulated via circulating circulating factors is very interesting.
Le principe du test est de mesurer la sécrétion de la leptine par les adipocytes. The principle of the test is to measure the secretion of leptin by adipocytes.
Le test utilise une technique immunoenzymatique "en sandwich". The test uses a sandwich immunoenzymatic technique.
On tapisse les puits des microplaques avec un anticorps polyclonal de la leptine de souris. The wells of the microplates are lined with a polyclonal antibody of mouse leptin.
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Les standards, contrôles et échantillons sont déposés dans les puits et à ce moment là, toute la leptine présente se lie à l'anticorps immobilisé. The standards, controls and samples are deposited in the wells and at this point, all the leptin present binds to the immobilized antibody.
La leptine liée est ensuite détectée par un anticorps anti-leptine de souris couplé à une enzyme, la peroxydase. Une solution substrat est ensuite ajoutée dans les puits. La réaction enzymatique conduit à une solution bleue qui vire au jaune après ajout d'une solution d'arrêt. The bound leptin is then detected by a mouse anti-leptin antibody coupled to an enzyme, peroxidase. A substrate solution is then added to the wells. The enzymatic reaction leads to a blue solution which turns yellow after addition of a stop solution.
L'intensité de la couleur mesurée est proportionnelle à la quantité de leptine présente. La lecture de la densité optique est faite à 450 nm au spectrophotomètre. The intensity of the measured color is proportional to the amount of leptin present. The reading of the optical density is made at 450 nm with the spectrophotometer.
2. Matériel et méthodes Culture de cellules 3T3-F442A :
A partir d'une lignée établie de préadipocytes de souris 3T3, a été isolé un clone qui a la capacité d'accumuler de grandes quantités de triglycérides. Les agents lipolytiques réduisent cette accumulation. Il est donc apparu pertinent de tester des agents lipolytiques potentiels sur cette lignée de préadipocytes murins 3T3-F442A. Ces préadipocytes (GREEN H. and KEHINDE 0. - Spontaneous Heritable Changes Leading to Increased Adipose Conversion in 3T3 Cells, Cell Vol. 7,105-113, 1976) peuvent se multiplier et se différencier en présentant le phénotype morphologique et biochimique caractéristique de la fonction différenciée de l'adipocyte mature. Lorsqu'ils sont en phase exponentielle de croissance, ils sont d'apparence fibroblastique, présentent une forme allongée et sont très adhérents au support. A confluence lorsque les conditions le permettent, une transition morphologique très précoce leur confère une forme arrondie. 2. Material and methods Cell culture 3T3-F442A:
From an established 3T3 mouse preadipocyte line, a clone was isolated which has the ability to accumulate large amounts of triglycerides. Lipolytic agents reduce this accumulation. It has therefore appeared appropriate to test potential lipolytic agents on this line of murine preadipocytes 3T3-F442A. These preadipocytes (GREEN H. and KEHINDE 0. - Spontaneous Heritable Changes Leading to Increased Adipose Conversion in 3T3 Cells, Cell Vol 7, 105-113, 1976) can multiply and differentiate by presenting the morphological and biochemical phenotype characteristic of differentiated function. of the mature adipocyte. When they are in an exponential phase of growth, they are fibroblastic in appearance, have an elongated shape and are very adherent to the support. At confluence when conditions permit, a very early morphological transition gives them a rounded shape.
Les cellules connaissent alors un processus d'amplification clonale. The cells then undergo a process of clonal amplification.
A ces changements morphologiques s'ajoutent des accroissements de l'activité d'enzymes lipogénétiques ainsi que des augmentations de réponses de ces cellules à des facteurs hormonaux affectant la lipogénèse et la lipolyse. To these morphological changes are added increases in the activity of lipogenetic enzymes as well as increases in responses of these cells to hormonal factors affecting lipogenesis and lipolysis.
Les préadipocytes 3T3-F442A constituent donc un excellent modèle d'étude de la lipolyse du fait des transformations morphologiques et métaboliques acquises par les cellules pendant leur programme de développement. (Pairault J and Lasnier F : Control of adipogenetic The 3T3-F442A preadipocytes therefore constitute an excellent model for studying lipolysis because of the morphological and metabolic transformations acquired by the cells during their development program. (Pairault J. and Lasnier F: Control of adipogenetic
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différenciation of 3T3-F442A cells by retinoic acid, dexamethasone and insulin : a topographie analysis, J. cell Physiol. (1987), 132,279-86). Differentiation of 3T3-F442A cells by retinoic acid, dexamethasone and insulin: a topography analysis, J. Cell Physiol. (1987), 132, 279-86).
D'après la littérature, la leptine est sécrétée par les adipocytes dans le milieu de culture. ("Insulin and cortisol promote leptin production in cultured human fat cells", Wabitsch M. and al, Diabetes, (1996), 45 (10), 1435-8 ; "Immunohistochemichal and ultrastructural localization of leptin and leptin receptor in human white adipose tissue and differentiating human adipose cells in primary culture", Bornstein S. R. et al, Diabetes, (2000), 49 (4), 532-8 ; "leptin, leptin receptors, and the control of body weight", Friedman J.M., Nutrition Reviews, 1998,56 (2), Part 2). According to the literature, leptin is secreted by adipocytes in the culture medium. ("Insulin and cortisol promote leptin production in cultured human fat cells", Wabitsch M. et al, Diabetes, (1996), 45 (10), 1435-8; "Immunohistochemical and ultrastructural localization of leptin and leptin receptor in human white adipose The present invention relates to the use of human and adipose cells in primary culture, Bornstein SR et al, Diabetes, (2000), 49 (4), 532-8, Leptin, Leptin receptors, and the control of body weight, Friedman JM, Nutrition Reviews. , 1998.56 (2), Part 2).
Dans les cellules 3T3-F442A, l'expression du gène ob a été particulièrement étudié (Leroy P. et al, J. of Biol. Chem, 1996, 271 (5), 2365-2368 ; Considine R.V. and al., Horm. Res. 1996,46, 249-256). In 3T3-F442A cells, the expression of the ob gene has been particularly studied (Leroy P. et al., J. of Biol Chem, 1996, 271 (5), 2365-2368, Considine RV et al., Horm. Res 1996, 46, 249-256).
Les préadipocytes 3T3-F442A sont ensemencés à JO dans les boîtes de Pétri 35 mm (Corning) et mis à l'étuve à 37 C sous une atmosphère air-C02 (95: 5). Les cellules sont cultivées dans un milieu essentiel minimum de Eagle modifié (DMEM) selon Dulbecco (glucose 4,50 g/1) (GIBCO BRL) complémenté avec 5 % de sérum de veau (SV) (BIOMEDIA) et 5 % de sérum de veau foetal (GIBCO) pendant la phase de croissance. Le milieu est changé à J2 et J4. The 3T3-F442A preadipocytes are seeded at 0 ° C. in 35 mm petri dishes (Corning) and put in an oven at 37 ° C. under an air-CO2 (95: 5) atmosphere. The cells are cultured in Dulbecco's Modified Eagle Minimum Essential Medium (DMEM) (glucose 4.50 g / l) (GIBCO BRL) supplemented with 5% calf serum (SV) (BIOMEDIA) and 5% serum fetal calf (GIBCO) during the growth phase. The middle is changed to D2 and D4.
A la confluence cellulaire (à J7), le milieu est changé :
Le milieu de base reste le même (DMEM) mais est supplémenté avec 10 % de sérum de veau foetal (SVF) et 5 pg/ml d'insuline (SIGMA). At the cell confluence (on day 7), the medium is changed:
The basal medium remains the same (DMEM) but is supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) and 5 μg / ml insulin (Sigma).
Le milieu est ensuite changé à J9 et J11. The medium is then changed to D9 and D11.
A J14, J16 et J18, on effectue un traitement par les sophorolipides. On D14, D16 and D18, treatment with sophorolipids is carried out.
Pour le présent test, on utilise des sophorolipides commercialisés par la société Soliance (France) sous la dénomination Sopholiance. A cet effet, on remplace le milieu par le milieu de composition ci-dessus auquel a été ajouté les sophorolipides aux concentrations indiquées ci-dessous. En raison de l'insolubilité des sophorolipides dans l'eau ou dans le milieu de culture, on utilise une solution-mère de sophorolipides préparée dans du DMSO, que l'on dilue dans du milieu de culture DMEM. Quatre concentrations différentes de sophorolipides sont ainsi testées : 10 g/ml, 5 g/ml, 2,5 pg/ml et 1 g/ml, en comparaison avec une culture témoin. For the present test, sophorolipids marketed by Soliance (France) under the name Sopholiance are used. For this purpose, the medium is replaced by the above composition medium to which the sophorolipids have been added at the concentrations indicated below. Due to the insolubility of sophorolipids in water or in the culture medium, a master solution of sophorolipids prepared in DMSO is used, which is diluted in DMEM culture medium. Four different concentrations of sophorolipids are thus tested: 10 g / ml, 5 g / ml, 2.5 μg / ml and 1 g / ml, in comparison with a control culture.
Pour les besoins du test, on change le milieu de culture témoin également à J14, J16 et J18. For the purposes of the test, the control culture medium is also changed at D14, D16 and D18.
<Desc/Clms Page number 16> <Desc / Clms Page number 16>
La partie surnageante est collectée avant ledit traitement à J16, J17, J18 et J21,
Le protocole est résumé dans le Tableau 1 ci-dessous : Tableau I
The supernatant is collected before said treatment on D16, D17, D18 and D21,
The protocol is summarized in Table 1 below: Table I
<tb>
<tb> J0 <SEP> Ensemencement <SEP> des <SEP> 3T3-F442A <SEP> dans <SEP> DMEM, <SEP> 5 <SEP> % <SEP> SV, <SEP> 5 <SEP> % <SEP> SVF <SEP> - <SEP>
<tb> densité <SEP> cellulaire <SEP> 2 <SEP> x <SEP> 104 <SEP> cellules <SEP> / <SEP> boîte <SEP> de <SEP> Pétri <SEP> 35 <SEP> mm
<tb> J2 <SEP> Changement <SEP> de <SEP> milieu
<tb> J4 <SEP> Changement <SEP> de <SEP> milieu
<tb> J7 <SEP> Confluence <SEP> - <SEP> Changement <SEP> de <SEP> milieu <SEP> (milieu <SEP> de <SEP> culture <SEP> DMEM, <SEP> 10
<tb> % <SEP> SVF, <SEP> 5 g/ml <SEP> d'insuline
<tb> J9 <SEP> Changement <SEP> de <SEP> milieu
<tb> J11 <SEP> Changement <SEP> de <SEP> milieu
<tb> J14 <SEP> Traitement <SEP> par <SEP> composition <SEP> contenant <SEP> des <SEP> sophorolipides
<tb> (changement <SEP> de <SEP> milieu
<tb> J16 <SEP> Collecte <SEP> des <SEP> surnageants <SEP> cellulaires, <SEP> puis <SEP> traitement <SEP> par
<tb> composition <SEP> contenant <SEP> des <SEP> sophorolipides <SEP> (changement <SEP> de <SEP> milieu)
<tb> J17 <SEP> Collecte <SEP> des <SEP> surnageants <SEP> cellulaires
<tb> J18 <SEP> Collecte <SEP> des <SEP> surnageants <SEP> cellulaires, <SEP> puis <SEP> traitement <SEP> par
<tb> composition <SEP> contenant <SEP> des <SEP> sophorolipides <SEP> (changement <SEP> de <SEP> milieu
<tb> J21 <SEP> Collecte <SEP> des <SEP> surnageants <SEP> cellulaires
<tb>
3. Dosage de la leptine
La leptine sécrétée est déterminée au moyen d'une technique immuno-enzymatique de type ELISA dite "en sandwich", en recourant au kit de dosage Quantikine M mouse (R&D System, G-B). <Tb>
<tb> J0 <SEP> Seeding <SEP> of <SEP> 3T3-F442A <SEP> in <SEP> DMEM, <SEP> 5 <SEP>% <SEP> SV, <SEP> 5 <SEP>% <SEP > SVF <SEP> - <SEP>
<tb> density <SEP> cell <SEP> 2 <SEP> x <SEP> 104 <SEP> cells <SEP> / <SEP> box <SEP> of <SEP> Petri <SEP> 35 <SEP> mm
<tb> J2 <SEP> Change <SEP> of <SEP> middle
<tb> J4 <SEP> Change <SEP> of <SEP> middle
<tb> J7 <SEP> Confluence <SEP> - <SEP> Change <SEP> of <SEP> medium <SEP> (middle <SEP> of <SEP> culture <SEP> DMEM, <SEP> 10
<tb>% <SEP> SVF, <SEP> 5 g / ml <SEP> insulin
<tb> J9 <SEP> Change <SEP> of <SEP> middle
<tb> J11 <SEP> Change <SEP> of <SEP> middle
<tb> J14 <SEP> Treatment <SEP> with <SEP> composition <SEP> containing <SEP> of <SEP> sophorolipids
<tb> (change <SEP> of <SEP> middle
<tb> J16 <SEP> Collect <SEP> of <SEP> Cellular Supernatants <SEP>, <SEP> Then <SEP><SEP> Treatment by
<tb> composition <SEP> containing <SEP> of <SEP> sophorolipids <SEP> (change <SEP> of <SEP> medium)
<tb> J17 <SEP> Collect <SEP> Cellular <SEP> Supernatants <SEP>
<tb> J18 <SEP> Collect <SEP> of <SEP> Cellular Supernatants <SEP>, <SEP> Then <SEP><SEP> Treatment by
<tb> composition <SEP> containing <SEP> of <SEP> sophorolipids <SEP> (change <SEP> of <SEP> middle
<tb> J21 <SEP> Collect <SEP> Cellular <SEP> Supernatants <SEP>
<Tb>
3. Determination of leptin
The secreted leptin is determined using a so-called "sandwich" ELISA immunoenzymatic technique, using the Quantikine M mouse assay kit (R & D System, GB).
Ce dosage ELISA utilise la leptine de souris recombinée, exprimée dans E. Coli et des anticorps dirigés contre la leptine recombinante de souris. This ELISA assay uses recombinant mouse leptin, expressed in E. Coli and antibodies against recombinant mouse leptin.
Les différentes opérations du dosage sont effectuées suivant les directives accompagnant le kit de dosage précité. The various operations of the assay are carried out according to the instructions accompanying the above-mentioned assay kit.
Schématiquement, on tapisse, dans une première étape, les puits des microplaques avec l'anticorps polyclonal de la leptine de souris. Schematically, in a first step, the wells of the microplates are lined with the polyclonal antibody of mouse leptin.
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Les standards permettant l'étalonnage des résultats, et les échantillons de surnageant témoins et de cultures traitées, sont ensuite déposés dans les puits. Toute la leptine présente se lie alors à l'anticorps ainsi immobilisé. Standards for calibration of results, control supernatant samples and treated cultures are then deposited in the wells. All the leptin present then binds to the immobilized antibody.
La leptine liée est ensuite détectée par un anticorps anti-leptine de souris couplé à une peroxydase. Ainsi, après avoir introduit dans les puits la peroxydase, on ajoute ensuite une solution substrat. La réaction enzymatique conduit à une solution bleue qui vire au jaune après ajout d'une solution d'arrêt. The bound leptin is then detected by a mouse anti-leptin antibody coupled to a peroxidase. Thus, after introducing the peroxidase into the wells, a substrate solution is then added. The enzymatic reaction leads to a blue solution which turns yellow after addition of a stop solution.
La densité optique de cette solution est mesurée au spectrophotomètre à 450 nm. Elle est proportionnelle à la quantité d'anticorps fixé, elle-même proportionnelle à la quantité de leptine initialement présente. Les résultats sont exprimés en pg/ml de leptine présents dans les surnageants cellulaires. The optical density of this solution is measured spectrophotometer at 450 nm. It is proportional to the amount of fixed antibody, itself proportional to the amount of leptin initially present. The results are expressed in μg / ml of leptin present in the cell supernatants.
Chaque test est réalisé trois fois. Each test is performed three times.
Les résultats obtenus sont les suivants :
Tableau II
Concentrations en leptine (pg/ml) dans les surnageants
The results obtained are as follows:
Table II
Leptin concentrations (μg / ml) in supernatants
<tb>
<tb> Concentration <SEP> des <SEP> J16 <SEP> J17 <SEP> J18 <SEP> J21
<tb> sophorolipides
<tb> Témoin <SEP> 1153 <SEP> + <SEP> 41 <SEP> 884 <SEP> ~ <SEP> 35 <SEP> 1203 <SEP> ~ <SEP> 24 <SEP> 1299 <SEP> ~ <SEP> 15
<tb> 10 <SEP> g/ml <SEP> 1111 <SEP> ~ <SEP> 41 <SEP> 677 <SEP> 25 <SEP> 1249 <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 1066 <SEP> ~ <SEP> 14
<tb> 5 <SEP> g/ml <SEP> 1161 <SEP> ~ <SEP> 20 <SEP> 692 <SEP> 13 <SEP> 1522 <SEP> 33 <SEP> 1242 <SEP> 21 <SEP>
<tb> 2,5 <SEP> g/ml <SEP> 1400 <SEP> ~ <SEP> 38 <SEP> 862 <SEP> ~ <SEP> 27 <SEP> 1891 <SEP> ~ <SEP> 23 <SEP> 1592 <SEP> 40 <SEP>
<tb> 1 <SEP> g/ml <SEP> 1340 <SEP> ~ <SEP> 11 <SEP> 912 <SEP> ~ <SEP> 36 <SEP> 3338 <SEP> ~ <SEP> 23 <SEP> 2916 <SEP> ~ <SEP> 34
<tb> <Tb>
<tb> Concentration <SEP> of <SEP> J16 <SEP> J17 <SEP> J18 <SEP> J21
<tb> sophorolipids
<tb> Control <SEP> 1153 <SEP> + <SEP> 41 <SEP> 884 <SEP> ~ <SEP> 35 <SEP> 1203 <SEP> ~ <SEP> 24 <SEP> 1299 <SEP> ~ <SEP > 15
<tb> 10 <SEP> g / ml <SEP> 1111 <SEP> ~ <SEP> 41 <SEP> 677 <SEP> 25 <SEP> 1249 <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 1066 <SEP> ~ <SEP> 14
<tb> 5 <SEP> g / ml <SEP> 1161 <SEP> ~ <SEP> 20 <SEP> 692 <SEP> 13 <SEP> 1522 <SEP> 33 <SEP> 1242 <SEP> 21 <SEP>
<tb> 2.5 <SEP> g / ml <SEP> 1400 <SEP> ~ <SEP> 38 <SEP> 862 <SEP> ~ <SEP> 27 <SEP> 1891 <SEP> ~ <SEP> 23 <SEP > 1592 <SEP> 40 <SEP>
<tb> 1 <SEP> g / ml <SEP> 1340 <SEP> ~ <SEP> 11 <SEP> 912 <SEP> ~ <SEP> 36 <SEP> 3338 <SEP> ~ <SEP> 23 <SEP> 2916 <SEP> ~ <SEP> 34
<Tb>
De l'examen des résultats contenus dans le tableau ci-dessus, on observe tout d'abord que, la comparaison des résultats obtenus à J17 et J18 montre une accumulation de leptine plus marquée dans la culture traitée que dans les cultures-témoin. La comparaison des résultats obtenus à J16, J17 et J18 montre, d'autre part que l'effet du traitement sur la sécrétion de leptine ne se fait sentir que 48 heures après le traitement. De plus, on observe qu'avec le temps, la production de leptine augmente. Ceci démontre que plus les cellules se différencient en From the examination of the results contained in the table above, it is first observed that the comparison of the results obtained on days 17 and 18 shows a more marked accumulation of leptin in the treated culture than in the control cultures. The comparison of the results obtained on days 16, 17 and 18 shows, on the other hand, that the effect of the treatment on the secretion of leptin is not felt until 48 hours after the treatment. In addition, it is observed that over time, the production of leptin increases. This demonstrates that the more cells differentiate into
<Desc/Clms Page number 18><Desc / Clms Page number 18>
adipocytes (le milieu de culture étant un milieu de différenciation), plus se constitue un potentiel de production de leptine. adipocytes (the culture medium is a differentiation medium), plus is a potential for leptin production.
Exemple 2 - Mise en évidence de l'effet des sophorolipides sur la synthèse de la leptine par les adipocytes humains 1 - Principe du test
Le but du test est de mesurer l'effet des sophorolipides sur la sécrétion de leptine par des adipocytes humains sous-cutanés. EXAMPLE 2 Demonstration of the Effect of Sophorolipids on the Synthesis of Leptin by Human Adipocytes 1 - Test Principle
The purpose of the test is to measure the effect of sophorolipids on the secretion of leptin by subcutaneous human adipocytes.
Les tests ont été réalisés avec trois concentrations du composé testé à 5 heures. The tests were carried out with three concentrations of the test compound at 5 hours.
Les quantités de leptine sécrétées ont été déterminées en recourant au kit de détermination de la quantité de leptine Quantikine Human Leptin Immunoassay kit (R&D System, GB). The secreted amounts of leptin were determined using the Quantikine Human Leptin Immunoassay kit (R & D System, GB).
2 - Protocole
Des préadipocytes humains sous-cutanés sont cultivés dans des microplaques à 24 puits. 2 - Protocol
Subcutaneous human preadipocytes are cultured in 24-well microplates.
Les concentrations de produits testés sont respectivement de 1,2,5 et 5 ng/ml. The concentrations of products tested are respectively 1.2.5 and 5 ng / ml.
Le témoin négatif utilisé dans le test est la solution de DMSO correspondant à la concentration maximum. The negative control used in the test is the DMSO solution corresponding to the maximum concentration.
Le témoin positif est l'insuline à 100 nM. The positive control is insulin at 100 nM.
Les traitements ont été effectués pendant 5 heures et 24 heures. The treatments were performed for 5 hours and 24 hours.
Les préadipocytes sont ensemencés et maintenus jusqu'à différenciation en absence des composés à tester pendant environ 3 semaines. Puis, ils sont introduits dans le milieu de base, en absence de toute hormone pendant 3 jours. The preadipocytes are inoculated and maintained until differentiation in the absence of test compounds for about 3 weeks. Then, they are introduced into the basal medium, in the absence of any hormone for 3 days.
Les étapes du traitement sont les suivantes :
1. Traitement des cellules avec les sophorolipides (Sopholiance) aux concentrations de ing/ml, 2,5ng/ml et 5 ng/ml. Des cultures non traitées par les sophorolipides sont également réalisées pour servir de témoins. De l'insuline (100 nM) est utilisée comme témoin positif. Chaque test est fait trois fois. The stages of treatment are as follows:
1. Treatment of cells with sophorolipids (Sopholiance) at concentrations of ing / ml, 2.5ng / ml and 5 ng / ml. Crops not treated with sophorolipids are also made to serve as controls. Insulin (100 nM) is used as a positive control. Each test is done three times.
2. Incubation des plaques à 37 C pendant 5 heures et 24 heures. 2. Incubation plates at 37 C for 5 hours and 24 hours.
3. A la fin de chaque période d'incubation, prélèvement de 100 l de chaque milieu dans chaque puits et congélation de l'échantillon. 3. At the end of each incubation period, take 100 l of each medium from each well and freeze the sample.
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4. La leptine sécrétée est déterminée au moyen d'une technique ELISA de type sandwich en recourant au kit de dosage Quantikine Human Leptin kit (R&D System, G-B). 4. The secreted leptin is determined using a sandwich ELISA technique using the Quantikine Human Leptin kit kit (R & D System, G-B).
Pour réaliser ce dosage, on opère selon les instructions accompagnant le kit de dosage. To perform this assay, one operates according to the instructions accompanying the dosing kit.
Ainsi, on ajoute 100 l d'une base protéinique tamponnée dans chaque puits d'une microplaque tapissée d'un anticorps monoclonal humain contre la leptine. Puis, on ajoute 100 l de chaque échantillon et du témoin. On laisse ensuite incuber pendant 2 heures à 25 C. Après lavage de l'échantillon témoin, on ajoute 200 l d'un anticorps monoclonal humain contre la leptine conjugué à de la peroxydase de radis noir dans chaque puits et on laisse incuber pendant 1 heure à 25 C. Après cette étape, on ajoute dans chaque puits 200 l d'un substrat et on laisse incuber pendant 30 minutes à 25 C. On arrête finalement la réaction par addition de 50 l de solution d'arrêt et on note l'absorbance à 450 nm. Thus, 100 l of a buffered protein base is added to each well of a microplate lined with a human monoclonal antibody against leptin. Then, 100 l of each sample and the control are added. It is then incubated for 2 hours at 25 ° C. After washing the control sample, 200 μl of a human monoclonal antibody against leptin conjugated to black radish peroxidase is added to each well and incubated for 1 hour. at 25 ° C. After this step, 200 μl of a substrate is added to each well and incubated for 30 minutes at 25 ° C. The reaction is finally stopped by the addition of 50 μl of stop solution and the reaction is noted. absorbance at 450 nm.
Résultats
Les résultats moyens obtenus en ce qui concerne la concentration en leptine obtenue, après 5 heures de traitement, dans les différents échantillons testés contenant respectivement 1 ng/ml, 2,5 ng/ml et 5 ng/ml de sophorolipides, en comparaison avec le témoin et le témoin positif (insuline 100 nM), sont donnés dans le tableau III ci-dessous :
Tableau III
Concentrations en leptine (pg/ml) dans les surnageants
Results
The average results obtained with regard to the concentration of leptin obtained, after 5 hours of treatment, in the different samples tested respectively containing 1 ng / ml, 2.5 ng / ml and 5 ng / ml of sophorolipids, in comparison with the control and the positive control (insulin 100 nM), are given in Table III below:
Table III
Leptin concentrations (μg / ml) in supernatants
<tb>
<tb> Concentration <SEP> (ng/ml) <SEP> Concentration <SEP> moyenne <SEP> en <SEP> leptine <SEP> (pg/ml)
<tb> et <SEP> écart-type
<tb> 0 <SEP> (Témoin) <SEP> 75,36 <SEP> 8,71
<tb> 1 <SEP> 620,59 <SEP> 42,12
<tb> 2,5 <SEP> 694,79 <SEP> 271,51
<tb> 5 <SEP> 988,03 <SEP> 0,68 <SEP>
<tb> Insuline <SEP> 100 <SEP> nM <SEP> 1104,30 <SEP> 216,95 <SEP>
<tb> <Tb>
<tb> Concentration <SEP> (ng / ml) <SEP> Concentration <SEP> average <SEP> in <SEP> leptin <SEP> (pg / ml)
<tb> and <SEP> standard deviation
<tb> 0 <SEP> (Control) <SEP> 75.36 <SEP> 8.71
<tb> 1 <SEP> 620.59 <SEP> 42.12
<tb> 2.5 <SEP> 694.79 <SEP> 271.51
<tb> 5 <SEP> 988.03 <SEP> 0.68 <SEP>
<tb> Insulin <SEP> 100 <SEP> nM <SEP> 1104.30 <SEP> 216.95 <SEP>
<Tb>
On observe que la sécrétion de leptine augmente avec la concentration en sophorolipides. It is observed that the secretion of leptin increases with the concentration of sophorolipids.
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Exemple 3 - Compositions cosmétiques contenant des sophorolipides
On donne ci-dessous des formules cosmétiques contenant des sophorolipides. Dans ces formules, les compositions sont exprimées en pourcentage en poids. Example 3 - Cosmetic Compositions Containing Sophorolipids
Cosmetic formulas containing sophorolipids are given below. In these formulas, the compositions are expressed in percentage by weight.
Dans toutes ces compositions, les sophorolipides utilisés sont un mélange commercial résultant de la bioconversion par Candida bombicola d'un substrat glucidique contenant des sucres extraits du blé et d'un substrat lipidique provenant de l'extraction des esters méthyliques d'acide gras de l'huile de colza. In all these compositions, the sophorolipids used are a commercial mixture resulting from the bioconversion by Candida bombicola of a carbohydrate substrate containing sugars extracted from wheat and a lipid substrate derived from the extraction of the fatty acid methyl esters of 'Colza oil.
1- Formule hydro/alcoolique amincissante Eau qsp
100,00 % Alcool éthylique 42,00 % PEG 32 1,50 % Menthoxypropanediol q. s. 1- Slimming hydro / alcoholic formula Water qs
100.00% Ethyl alcohol 42.00% PEG 32 1.50% Menthoxypropanediol qs
Parfum 0,20 % Sophorolipides (Sopholiance) 0,20 % 2 - Emulsion fluide amincissante PPG 2 isoceteth-20 acétate 2,00 % Poloxamer 407 0,50 % Propylèneglycol isoceteth-3 acétate 15,00 % Pentacyclométhicone 15,00 % Eau qsp. 100,00 % Butylèneglycol 3,00 % Conservateurs q.s. Perfume 0.20% Sophorolipids (Sopholiance) 0.20% 2 - Slimming fluid emulsion PPG 2 isoceteth-20 acetate 2.00% Poloxamer 407 0.50% Propylene glycol isoceteth-3 acetate 15.00% Pentacyclomethicone 15.00% Water qs . 100.00% Butylene Glycol 3.00% Preservatives q.s.
Gomme xanthane 0,05 % Acrylates/clO-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,04 % Neutralisant q. s. 0.05% xanthan gum Acrylates / 30 alkyl acrylate Crosspolymer 0.04% Neutralizer q. s.
Polyacrylamide c13-14 isoparaffin laureth-7 0,50 % Parfum 0,20 % Sophorolipides (Ipoleose) 0,20 % Polyacrylamide c13-14 isoparaffin laureth-7 0.50% Perfume 0.20% Sophorolipids (Ipoleose) 0.20%
<Desc/Clms Page number 21><Desc / Clms Page number 21>
3 - Crème amincissante Steareth-2 0,50% Steareth-21 1,75% Alcool cétylique 0,30% Alcool stéarylique 0,30% Acide stéarique 0,50% Stearate éthyle-2-hexyle 4,00% Cetearyl isononanoate 3,00% Squalane 4,00% IBMX 1,00% Diméthicone 0,40% Eau qsp.100.00% Glycérine 2,00% Butylène glycol 3,00% Conservateurs q.s. 3 - Slimming cream Steareth-2 0.50% Steareth-21 1.75% Cetyl alcohol 0.30% Stearyl alcohol 0.30% Stearic acid 0.50% Stearate ethyl-2-hexyl 4.00% Cetearyl isononanoate 3, 00% Squalane 4.00% IBMX 1.00% Dimethicone 0.40% Water qsp.100.00% Glycerin 2.00% Butylene glycol 3.00% Preservatives qs
Acrylates/c10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,35% Gomme xanthane 0,10% Sodium hyaluronate 0,02% Neutralisant q. s. Acrylates / c10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0.35% Xanthan gum 0.10% Sodium hyaluronate 0.02% Neutralizer q. s.
Polyacrylamide cl3-14 isoparaffin laureth 7 0,50% Alcool dénaturé 5,00% Parfum 0,20% sophorolipides (Sopholiance) 1,00% Exemple 4 - Emulsion fluide amincissante PPG-2 isoceteth-20 acétate 2 % Poloxamer 407 0,50 % Propylène glycol isoceteth-3 acétate 15 % Pentacyclométhicone 15 % Eau qsp.100 % Butylène glycol 3 % Conservateurs q.s. Polyacrylamide cl3-14 isoparaffin laureth 7 0.50% Denatured alcohol 5.00% Perfume 0.20% sophorolipids (Sopholiance) 1.00% Example 4 - Slimming fluid emulsion PPG-2 isoceteth-20 acetate 2% Poloxamer 407 0.50 % Propylene glycol isoceteth-3 acetate 15% Pentacyclomethicone 15% Water qsp.100% Butylene glycol 3% Preservatives qs
Extrait de Coleus forskohlii (à 80 % de forskoline) 0,1 % Gomme xanthane 0,05% Extract of Coleus forskohlii (at 80% forskolin) 0.1% Xanthan gum 0.05%
<Desc/Clms Page number 22><Desc / Clms Page number 22>
Acrylates/c10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,04% Neutralisant q. s. Acrylates / c10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0.04% Neutralizer q. s.
Polyacrylamide c13-14 isoparaffin laureth-7 0,50% Parfum 0,20% sophorolipides (Sopholiance) 0,50%Polyacrylamide c13-14 isoparaffin laureth-7 0.50% Perfume 0.20% sophorolipids (Sopholiance) 0.50%
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Effective date: 20140228 |