FR2797441A1

FR2797441A1 - Derives des cyclohexane, cyclohexene, cyclohexadiene et benzene pour la preparation de ligands du recepteur du mannose

Info

Publication number: FR2797441A1
Application number: FR9909928A
Authority: FR
Inventors: Cyrille Grandjean; Oleg Melnyk; Masse Helene Gras; Gerhild Angyalosi; Corinne Rommens
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date: 1999-07-30
Filing date: 1999-07-30
Publication date: 2001-02-16
Anticipated expiration: 2019-07-30
Also published as: CA2388663A1; FR2797441B1; AU6846900A; EP1200462A2; WO2001009173A3; JP2003506335A; WO2001009173A2

Abstract

La présente Invention se rapporte à l'utilisation de dérivés du cyclohexane, du cyclohexène, du cyclohexadiène et du benzène pour la préparation de ligands du récepteur du mannose, aux ligands ainsi préparés, ainsi qu'aux applications de ces ligands, notamment pour la préparation de médicaments et, plus particulièrement, la préparation de vaccins et de médicaments destinés à assurer la vectorisation d'un principe actif vers des cellules cibles exprimant le récepteur du mannose ou un récepteur lui étant apparenté, la transfection de séquences d'ADN et d'ARN et ses multiples utilisations en thérapie génique, et la préparation de réactifs de laboratoire et, notamment, de réactifs de diagnostic.

Description

DERIVES DES CYCLOHEXANE, CYCLOHEXENE, CYCLOHEXADIENE ET BENZENE POUR LA PREPARATION DE LIGANDS DU RECEPTEUR DU MANNOSE
La présente Invention se rapporte à l'utilisation de dérivés du cyclohexane, du cyclohexène, du cyclohexadiène et du benzène pour la préparation de ligands du récepteur du mannose, aux ligands ainsi préparés, ainsi qu'aux applications thérapeutiques et diagnostiques de ces ligands.

Les cellules dendritiques, qui représentent une lignée particulière de leucocytes originaires de la moelle osseuse et qui sont présentes dans pratiquement tous les tissus de l'organisme, jouent un rôle clé dans le contrôle des réponses immunitaires. En effet, ces cellules apparaissent être les seules cellules capables in vivo de présenter les antigènes aux lymphocytes T naïfs et matures, et d'induire, par activation de ces lymphocytes T, une réponse immunitaire de type T auxiliaire (J.

BLANCHEREAU et R. M. STEINMANN, Nature, 1998, 392, 245-252).

L'activation des lymphocytes T par les cellules dendritiques implique une reconnaissance et une internalisation préalables des antigènes par ces dernières. Or, il a été montré que l'internalisation des antigènes par les cellules dendritiques s'effectue non seulement par macropinocytose, mais également par un mécanisme d'endocytose ayant pour médiateur, un récepteur spécifique des hydrates de carbone et dénommé récepteur du mannose (A. AVRAMEAS et al., Eur. J.

Immunol., 1996,26, 394-400).

Le récepteur du mannose appartient à la famille des C-lectines qui représente un groupe de glycoprotéines calcium-dépendantes formant des liaisons non-covalentes avec les hydrates de carbone. Si, comme son nom l'indique, le récepteur du mannose se lie préférentiellement au D-mannose, il apparaît se lier également à d'autres hydrates de carbone comme le L-fucose, le D-glucose et la N-acétyl-D-glucosamine qui, comme le D-mannose, comprennent deux fonctions hydroxyles portées par deux atomes de carbone adjacents du cycle qui les constitue. Il semble que la liaison entre le récepteur du mannose et ces hydrates de carbone s'établisse par la coordination d'un ion calcium entre des résidus acide aminé du site de reconnaissance de ce récepteur et les deux fonctions hydroxyles adjacentes desdits hydrates de carbone (W.I. WEIS et al., Nature, 1992, 360, 127-134).

Par ailleurs, comme c'est le cas pour toutes les lectines, la reconnaissance des hydrates de carbone par le récepteur du mannose, bien que spécifique, est faible, de l'ordre de 10-6 à 10-3 M. La liaison simultanée de plusieurs molécules d'hydrates de carbone à plusieurs sites de reconnaissance du récepteur du mannose permet de compenser cette faible affinité. Ce phénomène est appelé effet de groupe .

II a également été montré, non seulement que l'internalisation, par les cellules dendritiques, d'antigènes mannosylés est notablement supérieure à celle d'antigènes non-mannosylés, mais qu'une culture de populations clonales de lymphocytes T de spécificité restreinte aux peptides HLA de classe II, réalisée en présence, d'une part, de cellules dendritiques et, d'autre part, de protéines ou de peptides mannosylés se traduit par une stimulation de ces lymphocytes de 200 à 10 000 fois plus élevée que celle obtenue lorsque ces mêmes protéines et peptides ne sont pas mannosylés (M.C.A.A. TAN et al., Eur. J. Immunol., 1997,27, 2426-2435).

Il est apparu, de ce fait, possible d'induire ou d'augmenter une réponse immunitaire naturellement induite, en favorisant l'internalisation d'un antigène par les cellules dendritiques via le récepteur du mannose, par le couplage de cet antigène avec une structure chimique porteuse de plusieurs molécules d'un hydrate de carbone spécifiquement reconnu par ce récepteur (M.C.A.A. TAN et al., ibid.).

Ceci présente un intérêt tout particulier en vaccinologie et notamment pour le développement de vaccins à base de peptides synthétiques. En effet, si ces derniers présentent l'avantage d'être à la fois chimiquement définis, de composition précise, affranchis des difficultés de la production biologique, purs car dépourvus de contaminants et, enfin, de distribution aisée en raison de leur stabilité, ils présentent généralement l'inconvénient majeur d'être faiblement immunogènes.

C'est ainsi que les Inventeurs ont proposé de modifier des antigènes peptidiques en les greffant sur une structure dendrimérique comprenant un c#ur de type arbre de L-lysine lié à plusieurs restes glycosyles et, notamment, à des restes D-mannose (C. GRANDJEAN et al., 11èME Réunion Peptides et Protéines, 17-22 Janvier 1999, AUSSOIS, FRANCE).

Toutefois, il apparaît que, dans l'optique du développement à une échelle industrielle d'un médicament et, notamment, d'un vaccin, l'utilisation

d'hydrates de carbone naturels comme le D-mannose ou le D-glucose, est susceptible de poser un certain nombre de difficultés, tant sur un plan technique que financier, en raison de ce que ces composés sont difficiles à lier à d'autres structures chimiques et sont instables dans de nombreux milieux réactionnels - en particulier, dans les milieux acides - et dans de nombreux milieux biologiques.

Le problème se pose, par conséquent, de disposer de composés présentant, vis-à-vis du mannose récepteur, une affinité et une spécificité telles qu'ils puissent être reconnus par ce récepteur et se lier sélectivement avec lui, tout en étant dépourvus des inconvénients propres aux hydrates de carbone naturels.

Or, les Inventeurs, toujours dans le cadre de leurs recherches sur le récepteur du mannose, ont constaté que, de manière surprenante, des dérivés du cyclohexane, du cyclohexène, du cyclohexadiène et du benzène qui représentent, de par leur nature carbocyclique, des composés chimiquement plus stables que les hydrates de carbone naturels et, donc, plus faciles à utiliser dans des processus de synthèse, sont capables de mimer le D-mannose vis-à-vis de son récepteur, c'est-àdire de se lier sélectivement à ce dernier et, par conséquent, de remplacer avantageusement les hydrates de carbone naturels dans la préparation de ligands destinés à favoriser l'internalisation d'une substance par des cellules exprimant ce récepteur ou un récepteur de la famille des C-lectines lui étant apparenté.

La présente Invention a donc pour objet l'utilisation d'au moins un composé répondant à la formule générale (I) ci-après :

dans laquelle : - a à 1 représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1 ; - R1 à R12 peuvent, indépendamment les uns des autres, . soit former, avec un substituant porté par un atome de carbone adjacent à celui qui les porte, un carbonate, thiocarbonate, carbamate, urée, thiourée, cétal,

acétal, sulfate, disiloxanylidène, silylène, époxyde, cyclopropane ou encore une aziridine, . soit former, avec un substituant porté par le même carbone que celui qui les porte, un groupe carbonyle, thiocarbonyle, oxime ou dérivé d'oxime, hydrazone ou dérivé d'hydrazone, . soit représenter-R', -OR',-OCOR', -OC02R', -OCSOR',-OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R",-OPO(OR')(OR"), -COR', -C02R' ou l'un de ses dérivés, -CONR'R", -CSNR'R", -NR'R", -NR'NR"R'", -NR'OR", -NR'COR", -NR'CSR", -NR'C02R", -NR'CONR"R"', -NR'CSNR"R'", -NR'CSOR",-SR', -S03R', -NCO, ou encore-NCS, dans lesquels R', R" et R"', qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe protecteur ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes, et porter un groupe nucléophile ou un groupe électrophile ; ledit composé de formule (I) étant tel qu'au moins deux atomes de carbone adjacents du cycle portent chacun un groupe hydroxyle éventuellement protégé ou un substituant susceptible d'être transformé, par une réaction appropriée, en un groupe hydroxyle, et qu'au moins un autre atome de carbone du cycle porte un groupe permettant de le lier à un autre composé ; pour la préparation d'un ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose.

Au sens de la présente Invention, on entend par groupe protecteur , un groupe tel que défini dans l'ouvrage Protective Groups in Organic Synthesis, T. W. GREENE et P. G.M. WUTS, Seconde Edition 1991, J. WILEY and Sons. A titre d'exemples et de façon non-limitative, on peut citer les groupes -SiR*R**R***, -(CH2)2SiR*R**R***, -CH20R*, -CH2SR* et -(CH2)20R* dans lesquels R*, R** et R***, qui peuvent être identiques ou différents, représentent une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de

liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes. Ainsi, par exemple : - lorsque le groupe protecteur est un groupe-SiR*R**R***, celui-ci peut être un groupe triméthylsilyle, triéthylsilyle, triisopropylsilyle, tertiobutyldiméthylsilyle ou tertiobutyldiphénylsilyle, - lorsque le groupe protecteur est un groupe -(CH2)2SiR*R**R***, celui-ci peut être un groupe triméthylsilyléthyléther, - lorsque le groupe protecteur est un groupe -CH2OR*, celui-ci peut être un groupe tert-butoxyméthyle, méthoxyméthyle, benzyloxyméthyle ou 2-méthoxyéthoxyméthyle, - lorsque le groupe protecteur est un groupe -CHzSR*, celui-ci peut être un groupe méthylthiométhyle, tandis que - lorsque le groupe protecteur est un groupe -(CH2)20R*, celui-ci peut être un groupe éthoxyéthyle.

Egalement, au sens de la présente Invention, on entend par groupe accepteur de liaison hydrogène , un groupe comportant un atome électronégatif, et par groupe donneur de liaison hydrogène , un groupe comportant un atome d'hydrogène lié à un atome électronégatif. A titre d'exemples et de façon nonlimitative, on peut citer, en tant que groupes accepteurs de liaison hydrogène, les groupes amides, esters, carbamates, carbonates, nitro, urées et thiourées, et, en tant que groupes donneurs de liaison hydrogène, les groupes amines, alcools et thiols. Il est, toutefois, bien entendu que tout autre groupe susceptible d'accepter ou de donner une liaison hydrogène, tel que décrit par exemple dans l'ouvrage Physical Organic Chemistry, N. S. ISAACS, 1987, J. WILEY and Sons, peut être utilisé conformément à l'Invention.

Par ailleurs, on entend par groupe nucléophile , un groupe possédant une paire d'électrons libres, c'est-à-dire un groupe donneur d'électrons, et par groupe électrophile , un groupe possédant une orbitale moléculaire vacante de faible énergie capable d'interagir avec la paire d'électrons libres d'un groupe nucléophile.

Dans le cadre de la présente Invention, le groupe nucléophile est, de

préférence, choisi parmi les groupes amines, thiols, P-aminothiols, alcools, hydrazide et dérivés d'hydrazide, hydrazine et dérivés d'hydrazine, hydroxylamine et dérivés d'hydroxylamine, tandis que le groupe électrophile est, de préférence, choisi parmi les groupes a-oxo-aldéhyde, -CORa (avec par exemple Ra = H, imidazolyle, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -CO2Ra (avec par exemple Ra = H, halogène, aryle, hétérocycle aromatique,...) et ses dérivés (anhydrides symétriques, anhydrides mixtes, esters activés, ...), -OCORa (avec par exemple Ra= halogène, imidazolyle, hétérocycle aromatique, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -OCO2Ra (avec par exemple Ra = aryle, ...), -OCSRa (avec par exemple Ra = halogène, imidazolyle, hétéroaryle, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -OCSORa (avec par exemple Ra = aryle, ...), -NRaCORb (avec par exemple Ra = H et Rb= halogène, imidazolyle, hétérocycle aromatique, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -NRaCOORb(avec par exemple Ra = H et Rb = aryle, ...), -NRaCSRb(avec par exemple Ra = H et Rb = halogène, imidazolyle, hétérocycle aromatique, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -NRaCSORb(avec par exemple Ra = H et Rb = aryle), -SO2Ra(avec par exemple Ra = halogène), -S03Ra (avec par exemple Ra = H),-NCO, -NCS, maléimide, les sulfonates et les halogénures d'alkyles.

A titre d'exemples et de façon non-limitative, dans la formule générale (I) : - des groupes dérivés d'oxime convenables sont des groupes O-méthyloxime, O-acétyloxime ou O-phénylthiométhyloxime ; - des groupes dérivés d'hydrazone convenables sont des groupes N-méthylhydrazone ou N,N-diméthylhydrazone ; - des groupes dérivés de -C02R' convenables sont des groupes anhydrides symétriques, des esters activés (-COOpentafluorophényle, -COOsulfosuccinimidyle, -COOsuccinimidyle, ...) ou des anions -COO- transformés par un agent électrophile (comme par exemple -COO-benzotriazolyle) ; - des atomes d'halogène convenables sont le brome, le chlore et le fluor ; - des chaînes carbonées convenables sont des groupes alkyles (méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, tertiobutyle, pentyle, ...), des groupes alkényles (vinyle, allyle, butényle, pentényle, ...), des groupes alkynyles (éthynyle, propynyle,

butynyle, pentynyle, ...), des groupes cycloalkyles (cyclopentyle, cyclohexyle, ...), des hétérocycles (pipérazine, ...), des groupes aryles (phényle, crésyle, ...), des groupes hétéroaryles (pyridine, pyrimidine, pyrazine, ...), des groupes polyéthylèneglycols ou encore des polyamines.

Conformément à l'Invention, a à 1 représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1, avec la condition toutefois qu'au moins trois de ces indices soient différents de 0, puisqu'au moins deux atomes de carbone adjacents du cycle du composé répondant à la formule générale (I) doivent porter chacun un groupe hydroxyle éventuellement protégé ou un substituant susceptible d'être transformé, par une réaction appropriée, en un groupe hydroxyle, et qu'au moins un autre atome de carbone de ce même cycle doit porter un groupe permettant de lier ledit composé de formule générale (I) à un autre composé. Ainsi : - lorsque tous les indices a à 1 sont différents de 0, le composé de formule générale (I) est un dérivé du cyclohexane, - lorsque les indices de deux substituants RI à R12 portés par deux atomes de carbone du cycle adjacents sont égaux à 0, le composé de formule générale (I) est un dérivé du cyclohexène, - lorsque les indices de quatre substituants RI à R12portés par quatre atomes de carbone du cycle contigus sont égaux à 0, le composé de formule générale (I) est un dérivé du cyclohexadiène, tandis que - lorsque les indices de six substituants RI à R12 portés respectivement par chacun des atomes de carbone du cycle sont égaux à 0, le composé de formule générale (I) est un dérivé du benzène.

Comme précédemment indiqué, il convient qu'au moins deux atomes de carbone adjacents du cycle du composé de formule générale (I) portent chacun un groupe hydroxyle, lequel peut être éventuellement présent sous une forme protégée, ou un substituant susceptible d'être transformé en un groupe hydroxyle.

En effet, les composés répondant à la formule générale (I) n'ont pas vocation à être utilisés en tant que tels comme ligands du récepteur du mannose, mais sont destinés à être liés à d'autres composés pour conduire à l'obtention de ligands au sein desquels ils joueront le rôle de mimes du D-mannose. Aussi, s'il convient que, dans les ligands tels que prêts à être utilisés, les restes provenant des composés de

formule générale (I) présentent au moins deux fonctions hydroxyles libres, portées respectivement par deux atomes de carbone adjacents du cycle, de manière à être en mesure de mimer le D-mannose et à permettre à ces ligands d'être reconnus par le récepteur du mannose et de se lier à ce dernier, il n'est toutefois pas nécessaire que ces composés présentent initialement de telles fonctions hydroxyles.

Ainsi, conformément à l'Invention, il est tout à fait possible d'utiliser, pour la préparation d'un ligand, un composé de formule générale (I) comprenant, sur deux atomes de carbone adjacents du cycle, deux groupes hydroxyles protégés par un groupe protecteur, les autres groupes portés par les atomes du cycle pouvant être éventuellement eux aussi protégés. Cela sera même souhaitable dans un certain nombre de cas, notamment pour éviter que des groupes portés par les atomes de carbone du cycle du composé de formule générale (I) n'interfèrent lors du couplage dudit composé pour conduire à des cyclisations intramoléculaires ou des dimérisations. Bien entendu, les groupes protégeant les deux fonctions hydroxyles portées par les deux atomes de carbone adjacents du cycle seront éliminés préalablement à toute utilisation du ligand, les autres groupes protecteurs pouvant être, eux, facultativement éliminés.

Il est également possible d'utiliser un composé de formule générale (I) dont au moins deux atomes de carbone adjacents portent chacun un substituant précurseur d'un groupe hydroxyle, c'est-à-dire un substituant susceptible d'être transformé postérieurement au couplage dudit composé de formule générale (I) avec un autre composé, en un groupe hydroxyle, par exemple par une réduction (s'il s'agit d'un groupe carbonyle), par une substitution (s'il s'agit d'un groupe tosylate, mésylate ou d'un atome de brome), ou par une oxydation (telle qu'une oxydation de BAYERVILLIGER, s'il s'agit d'un groupe-COR').

Dans le cadre de la présente Invention, des substituants précurseurs de groupes hydroxyles sont soit des groupes carbonyles formés par deux substituants R1 à R12géminaux, soit des atomes d'halogène, soit des groupes choisis parmi les groupes -OR', -OCOR', -OC02R', -OCSOR', -OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R", -OPO (OR')(OR") et-COR' précédemment cités comme étant susceptibles de constituer les substituants RI à R12.

Par ailleurs, il convient qu'au moins un autre atome de carbone du

cycle du composé de formule (I) porte un groupe permettant de le lier à un autre composé.

Conformément à l'Invention, ce groupe est, de préférence, choisi parmi les groupes susceptibles de constituer les substituants RI à R12qui sont en euxmêmes nucléophiles ou électrophiles. A titre d'exemples et de façon non-limitative, parmi les groupes susceptibles de constituer les substituants RI à R12, les groupes -NR'R" (avec R' et R" = H),-SR' (avec R' = H),-OR' (avec R' = H), -NR'OR" (avec R' = méthyle et R" = H ou l'inverse) et -NR'NR"R"' (avec R' = méthyle et R", R'" = H) sont nucléophiles, tandis que les groupes-COR' (avec par exemple R' = H, imidazolyle, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -CO2R'(avec par exemple R' = H, halogène, aryle, hétérocycle aromatique, ...) et ses dérivés (anhydrides symétriques, anhydrides mixtes, esters activés, ...), -OCOR' (avec par exemple R' = halogène, imidazolyle, hétérocycle aromatique, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -OCO2R' (avec par exemple R' = aryle, ...), -OCSR' (avec par exemple R' = halogène, imidazolyle, hétéroaryle, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -OCSOR' (avec par exemple R' = aryle, ...), -NR'COR" (avec par exemple R' = H et R" = halogène, imidazolyle, hétérocycle aromatique, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -NR'COOR" (avec par exemple R' = H et R" = aryle, ...), -NR'CSR" (avec par exemple R' = H et R" = halogène, imidazolyle, hétérocycle aromatique, succinimidyle, sulfosuccinimidyle, ...), -NR'CSOR" (avec par exemple R' = H et R" = aryle), -SO2R' (avec par exemple R' = halogène), -S03R' (avec par exemple R' = H),-NCO et-NCS, sont électrophiles.

En variante, le groupe permettant de lier le composé de formule (I) peut être choisi parmi les groupes susceptibles de constituer les substituants R1 à R12 qui ne sont pas en eux-mêmes nucléophiles ou électrophiles, mais dans lesquels au moins l'un des radicaux R', R" ou R'" porte un groupe nucléophile ou électrophile.

Selon une disposition préférée de l'Invention, le composé est choisi parmi les composés répondant à la formule générale (I) dans laquelle les groupes hydroxyles éventuellement protégés ou les substituants susceptibles d'être transformés en groupes hydroxyles, qui sont portés par deux atomes de carbone adjacents du cycle, sont en positions trans, de manière à présenter une orientation analogue à celle des deux fonctions hydroxyles portées par le cycle du D-mannose qui apparaissent être

impliquées dans la liaison entre ce composé et son récepteur.

De préférence, le composé est choisi parmi les composés répondant à la formule générale (I) qui comprennent, sur un atome de carbone autre que ceux portant les deux groupes hydroxyles éventuellement protégés ou les deux substituants précurseurs d'un groupe hydroxyle, un groupe carboxyle. En effet, la présence d'un groupe carboxyle offre l'avantage de conférer à ces composés de nombreuses possibilités de couplage, par exemple par l'intermédiaire d'une liaison de type amide, ester ou thioester. Par ailleurs, ces couplages peuvent être aisément réalisés par une simple activation de ce groupe carboxyle selon les techniques d'activation classiquement utilisées pour la synthèse peptidique et, notamment, pour la synthèse peptidique sur support solide. Ces techniques sont notamment décrites dans l'ouvrage The Practice of Peptides Synthesis, M. BODANSKY et A. BODANSKY, 1984, SPRINGLER-VERLAG, Berlin.

Selon une disposition particulièrement préférée de l'Invention, le composé est l'acide (-)-shikimique ou l'un de ses dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans pseudo-di-équatoriaux que présente ce composé.

Selon une autre disposition préférée de l'Invention, le composé est l'acide (-)-quinique, de préférence sous une forme protégée, ou l'un de ses dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans vicinaux que présente ce composé.

Les acides (-)-shikimique (ou acide 3,4,5-trihydroxy-1-cyclohexène- 1 -carboxylique) et (-)-quinique (ou acide 1,3,4,5-tétrahydroxycyclohexanecarboxylique) sont disponibles commercialement, par exemple, auprès des Sociétés ALDRICH ou ACROS.

La présente Invention a également pour objet un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, ou en tant que composé intermédiaire pour la préparation d'un tel ligand, lequel composé est caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (III) ci-après :

(B'M)m(XN)nA(PY)y (III)

dans laquelle : - B répond à une ou plusieurs formules générales (II-a) ou (II-b) ci-après :

dans lesquelles : * a à k représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1 ; * Ri à Ripeuvent, indépendamment les uns des autres, # soit former, avec un substituant porté par un atome de carbone adjacent à celui qui les porte, un carbonate, thiocarbonate, carbamate, urée, thiourée, cétal, acétal, sulfate, disiloxanylidène, silylène, époxyde, cyclopropane ou encore une aziridine, # soit former, avec un substituant porté par le même carbone que celui qui les porte, un groupe carbonyle, thiocarbonyle, oxime ou dérivé d'oxime, hydrazone ou dérivé d'hydrazone, . soit représenter-R', -OR', -OCOR', -OC02R', -OCSOR', -OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R", -OPO (OR')(OR"), -COR', -C02R' ou l'un de ses dérivés,-CONR'R", -CSNR'R", -NR'R", -NR'NR"R"', -NR'OR", -NR'COR",-NR'CSR", -NR'C02R", -NR'CONR"R'", -NR'CSNR"R"', -NR'CSOR", -SR' ou encore -S03R', dans lesquels R', R" et R"', qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe protecteur ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à

16 atomes d'halogènes ; * w est un nombre entier égal à 0 ou à 1, et W représente -R[alpha]-, -O-R[alpha]-, -OCO-R"-,

-OC02-Ra~, -OCSO-R"-, -OCSS-R"-, -OS02-R--, -OS03-R"-, -CO-R"-, -COZ-R"-, -S-Ra-, -S03-R"-, -ON(R)-Ra-, -OPO(ORP)O-Re-, -CON(Ra)-R"-, -CSN(Ra)-R"-, -N(R)-Ra~, -NR'W(R5)-Ra~, -N(NRR')-Rc-, -NROO-Rc-, -N(OR)-R"-, -NRCO-Ra-, -N(CORp)-R"-, -NRRCS-R"-, -N(CSRP)-Ra-, -NRC02-Ra~, -N(CO2RP)-Ra-, -NRCON(R8)-Ra~, -N(CONRR8)-Ra~, -NRCSN(R8)-Ra~, -N(CSNRR8)-Ra~, -NROCSO-R'- ou -N(CSORO)-R'-, dans lesquels Ra représente une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes, tandis que R et R# représente, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes ; - m est un nombre entier compris entre 1 et 32 ; - n est un nombre entier qui est : * soit égal à 0, auquel cas A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FIpermettant sa liaison avec de 1 à 4 restes Y, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes B', * soit compris entre 1 et 32, auquel cas X représente le reste d'un composé X' comprenant un groupe fonctionnel F3 permettant sa liaison avec le reste A et de
1 à 32 groupes fonctionnels F4 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes B', tandis que A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FI permettant sa liaison avec de 1 à 4 restes Y, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes X ;

- Y représente le reste d'un composé Y' qui est soit un composé d'intérêt, soit un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt, - M, N et P représentent chacun un groupe de liaison, respectivement entre Blet A quand n = 0 ou Blet X quand n est différent de 0, entre X et A quand n est différent de 0, et entre A et Y, et sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi les groupes oxime, hydrazone, amide, ester, thioester, hydrazide, éther, thioéther, amine, carbonate, carbamate, thiocarbonate, thiocarbamate, urée, thiourée et thiazolidine.

Le composé répondant à la formule générale (III) comprend donc : * en tant qu'éléments obligatoires : # un ou plusieurs restes B1 répondant chacun à l'une des formules générales (II-a) ou (II-b), ce ou ces restes étant destinés à jouer le rôle de mimes du
D-mannose vis-à-vis du récepteur du mannose et résultant de la liaison entre un ou plusieurs composés répondant à la formule générale (I) précédemment définie et le composé A', éventuellement via X', et, de la déprotection des deux groupes hydroxyles adjacents ou de la transformation des deux substituants adjacents précurseurs d'un groupe hydroxyle, dans le cas où le ou lesdits composés de formule générale (I) présente initialement des groupes hydroxyles protégés ou des substituants précurseurs d'un groupe hydroxyle ; # un ou plusieurs restes Y d'un composé Y' correspondant soit à un composé d'intérêt, soit à un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt ; # le reste A d'un composé A' présentant au moins une double fonctionnalité, puisque son rôle est de porter à la fois le ou les restes Blet le ou les restes Y ; et * en tant qu'élément (s) le ou les restes X d'un composé X', différent du composé A' mais présentant, comme ce dernier, au moins une double fonctionnalité, ce ou ces restes X jouant le rôle, lorsqu'ils sont présents, d'éléments de liaison entre le ou les restes 131 et le reste A.

Au sens de la présente Invention, on entend par composé d'intérêt , un composé dont on cherche à favoriser l'intemalisation par des cellules via le récepteur du mannose ou un récepteur de la famille des C-lectines apparenté à

ce dernier (cellules dendritiques, cellules des lignées monocytes-macrophages, ...).

A cette fin, le composé d'intérêt peut être lié au reste A, à raison de 1 à 4 molécules de composé d'intérêt par molécule de composé de formule générale (III), par des groupes de liaison P résultant chacun de la réaction entre deux groupes fonctionnels portés pour le premier, par ledit composé d'intérêt et pour le second, par le composé A'.

En variante, le composé d'intérêt peut être complexé avec le composé de formule générale (III) par l'intermédiaire d'un composé capable de former avec ce composé d'intérêt des liaisons non-covalentes et qui est, lui, lié au reste A, également à raison de 1 à 4 molécules par molécule de composé de formule générale (III), par des groupes de liaison P.

Dans les deux cas, on obtient un ligand apte, de par la présence du ou des restes B1, à se lier spécifiquement au récepteur du mannose ou à tout récepteur apparenté à ce dernier et, de par sa liaison ou sa complexation avec le composé d'intérêt, à favoriser l'intemalisation de ce dernier par les cellules exprimant ce type de récepteur.

Conformément à l'Invention, A représente le reste d'un composé A' qui comprend de 1 à 4 groupes fonctionnels FI permettant sa liaison avec le composé Y' et, selon la valeur de n, un nombre de groupes fonctionnels F2 susceptible de varier entre 1 et 32, permettant sa liaison avec le ou les composés de formule générale (I) ou, lorsque X est présent, le composé X'.

Le composé A' peut être choisi parmi de très nombreux composés pour autant qu'il présente un nombre suffisant de groupes fonctionnels FI et F2 eu égard au nombre de molécules de composé Y' d'une part, et de molécules de composé (s) de formule générale (I) ou, si X est présent, de composé X' d'autre part, auxquelles il est destiné à être lié dans le composé de formule générale (III).

Toutefois, selon une disposition avantageuse de l'Invention, le composé A' est formé d'un enchaînement comprenant plusieurs restes d'un composé au moins trifonctionnel, liés les uns aux autres par des liaisons covalentes, et propre à offrir, au niveau des groupes fonctionnels libres de ces restes (c'est-à-dire des groupes fonctionnels qui ne sont pas engagés dans une liaison covalente), plusieurs sites d'ancrage pour le ou les composés de formule générale (I) ou, lorsque X est présent, le

composé X', et pour le composé Y'.

Selon une modalité préférée de cette disposition, le composé A' comprend de 2 à 32 et, de préférence, de 4 à 16 restes d'un composé trifonctionnel.

Conformément à l'Invention, le composé A' peut, lorsqu'il est formé d'un enchaînement, se présenter soit sous une forme linéaire, soit sous une forme cyclique, soit encore sous une forme ramifiée et, notamment, de type arborescente.

Des exemples de structures ramifiées particulièrement bien adaptées à la préparation d'un ligand du récepteur du mannose selon l'Invention sont illustrés dans les Figures 1A et 1B qui représentent, de manière très schématique, un composé A' sous la forme de deux dendrimères différents.

De préférence, le composé A' comprend en tant que composé trifonctionnel, un acide aminé choisi parmi le groupe constitué par la lysine, l'hydroxylysine, la sérine, la thréonine, la cystéine, l'ornithine, l'acide aspartique et l'acide glutamique. Cet acide aminé peut être aussi bien de la série stérique L que de la série stérique D et le composé A' peut même comprendre à la fois des résidus de la série L et des résidus de la série D.

De manière particulièrement préférée, le composé A' comprend en tant que composé trifonctionnel, de la lysine, dont l'utilisation est en effet particulièrement bien adaptée à la réalisation d'un ligand du récepteur du mannose selon l'Invention dans la mesure où il a été montré que des macromolécules à base de lysine sont dénuées d'immunogénicité intrinsèque (TAM, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85, 540).

Toutefois, il est possible d'utiliser de nombreux autres composés trifonctionnels pour autant qu'ils présentent une biocompatibilité satisfaisante. A titre d'exemples et de façon non-limitative, on peut citer la 3,3'-iminobis(propylamine), la 2,2'-iminobis(éthylamine), l'acide gallique, le tris(2-carboxyéthyl)nitrométhane (M. BRETTEICH et al., Synlett, 1998,1396), le tris(hydroxyméthyl)aminométhane (P. R. ASHTON et al., J. Org. Chem., 1998 ; 63,3429) et la (dihydroxy)propylamine.

Accessoirement, le composé A' peut, lorsqu'il est formé d'un enchaînement, comprendre de plus un ou plusieurs restes correspondant à un ou plusieurs composés différents du composé au moins trifonctionnel qui en constitue l'élément de base. Ce ou ces restes n'ont en principe pas vocation à assurer une

quelconque liaison entre les différents éléments composant le ligand. En fait, leur présence est soit destinée à conférer à ce ligand des caractères additionnels tels qu'une ou plusieurs possibilités supplémentaires de couplage (par exemple, en vue de la réalisation ultérieure d'un dimère de ce ligand), soit liée à la nécessité d'utiliser, au cours de sa préparation, des composés additionnels. Il va de soi que ces composés, tout en étant différents du composé trifonctionnel constituant l'élément de base du composé A', seront de préférence de la même nature que celui-ci. Ainsi, par exemple, ils seront préférentiellement des acides aminés dans le cas où le composé A' comprend, en tant que composé au moins trifonctionnel, un acide aminé.

Conformément à l'Invention, n qui représente le nombre de restes X présents dans le composé de formule générale (III) peut être : # soit égal à 0, auquel cas le ou les restes B' sont directement liés au reste A, # soit compris entre 1 et 32, auquel cas, si n est égal à 1, le ou les restes B1 sont liés au reste A par l'intermédiaire d'un seul reste X, tandis que ,si n est différent de 1, chaque reste X peut servir d'élément de liaison entre un ou plusieurs restes Blet le reste A.

A l'image du composé A', le composé X' peut être choisi parmi de très nombreux composés pour autant que, là encore, il possède un nombre suffisant de groupes fonctionnels F3 et F4 permettant d'assurer sa liaison avec, d'une part, le nombre désiré de molécules de composé (s) formule générale (I), et, d'autre part, avec le composé A'.

Toutefois, conformément à l'Invention, le composé X' est avantageusement formé d'un enchaînement comprenant de 2 à 5 restes d'un ou plusieurs composés, liés les uns aux autres par des liaisons covalentes, et dont l'un des restes terminaux porte un ou plusieurs groupes fonctionnels F4 permettant sa liaison avec une ou plusieurs molécules de composé (s) deformule générale (I). En effet, un tel composé présente l'avantage, notamment dans le cas où le composé A' est luimême formé d'un enchaînement, de remplir le rôle de bras espaceur entre le reste A et le ou les restes Blet de limiter ainsi l'encombrement stérique autour des groupes hydroxyles portés par ces restes, afin de favoriser l'interaction de ces groupes hydroxyles avec les ions calcium présents dans les sites de reconnaissance du

récepteur du mannose et, partant, la liaison entre ce dernier et le ligand.

Bien que cela ne soit pas obligatoire, le composé X' sera préférentiellement de la même nature que le composé A'. Ainsi, par exemple, dans le cas où le composé A' est formé d'un enchaînement comprenant, en tant que composé au moins trifonctionnel, un acide aminé, le composé X' sera de préférence un oligopeptide.

Toutefois, le composé X' peut être choisi parmi de nombreux autres composés pour autant qu'ils présentent une biocompatibilité satisfaisante. A titre d'exemples et de façon non-limitative, on peut citer l'acide mercaptopropionique, les thioamines, les bromoamines et les bras espaceurs du type polyéthylèneglycol comme le 4,7,10-trioxa-l,13-tridécane diamine.

Conformément à l'Invention : - M représente un groupe de liaison entre Blet A quand n = 0 ou entre Blet X quand n est différent de 0, qui résulte de la réaction entre un groupe fonctionnel porté par le ou les composés de formule générale (I) et un groupe fonctionnel porté par le composé A' (groupe fonctionnel F2) ou, le cas échéant, par le composé X' (groupe fonctionnel F4) ; - N représente un groupe de liaison entre X et A quand n est différent de 0, qui résulte de la réaction entre un groupe fonctionnel F3 porté par le composé X' et un groupe fonctionnel F2 porté par le composé A' ; tandis que - P représente un groupe de liaison entre A et Y, qui résulte de la réaction entre un groupe fonctionnel FI porté par le composé A' et un groupe fonctionnel porté par le composé Y'.

Ces groupes de liaison sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi les groupes oxime, hydrazone, amide, ester, thioester, hydrazide, éther, thioéther, amine, carbonate, carbamate, thiocarbonate, thiocarbamate, urée, thiourée et thiazolidine. A titre d'exemples et de façon non-limitative : - un groupe oxime peut être formé par réaction d'un groupe O-alkylamine avec un groupe carbonyle, - un groupe hydrazone peut être formé par réaction d'un groupe hydrazine avec un groupe carbonyle, - un groupe amide (respectivement, ester) peut être formé par

réaction d'un groupe amine (respectivement, alcool) avec un groupe acide activé ou anhydride ou halogénure d'acide, - un groupe thioester peut être formé par réaction d'un groupe thiol avec un groupe acide activé ou anhydride ou halogénure d'acide, - un groupe hydrazide peut être formé par réaction d'un groupe hydrazine avec un groupe acide activé, anhydride ou halogénure d'acide, - un groupe éther peut être formé par réaction d'un groupe alcool avec un groupe halogénure d'alkyle, - un groupe thioéther peut être formé par réaction d'un thiol avec un groupe halogénure d'alkyle, - un groupe amine peut être formé par réaction entre un groupe amine et un halogénure d'alkyle, - un groupe carbonate peut être formé par réaction d'un groupe chloroformate avec un groupe alcool, - un groupe carbamate peut être formé par réaction d'un groupe chlorofonnate avec un groupe amine, - un groupe thiocarbonate peut être formé par réaction d'un groupe chlorothioformate avec un groupe alcool, - un groupe thiocarbamate peut être formé par réaction d'un groupe chlorothioformate avec un groupe amine, - un groupe urée peut être formé par réaction d'un groupe isocyanate avec un groupe amine, - un groupe thiourée peut être formé par réaction d'un groupe isothiocyanate avec un groupe amine, tandis que - un groupe thiazolidine peut être formé par réaction d'un groupe ssaminothiol avec un groupe carbonyle.

On comprendra dès lors que, dans la formule générale (III), B1, A et X représentent les restes de composés portant naturellement des groupes fonctionnels propres à conduire, par réaction les uns sur les autres, à l'obtention de groupes de liaison de ce type, ou de composés ayant été modifiés de manière à porter de tels groupes fonctionnels.

A cet égard, il convient de préciser que, conformément à l'Invention, le composé répondant à la formule générale (III) peut être préparé : - soit par une synthèse convergente, c'est-à-dire par assemblage de composés disponibles dans le commerce et éventuellement modifiés pour les besoins de la préparation du composé répondant à la formule générale (III), et/ou de composés préalablement synthétisés.

Ainsi, par exemple, le composé de formule générale (III) peut être obtenu en couplant, dans un premier temps, le ou les composés répondant à la formule générale (I) avec le composé X', puis en couplant le composé résultant de ce premier couplage avec le composé A', et enfin en couplant le composé résultant de ce deuxième couplage avec le composé Y', ce dernier couplage étant éventuellement suivi de la déprotection des deux groupes hydroxyles vicinaux ou de la transformation des deux substituants précurseurs d'une fonction hydroxyle portés par le ou les restes B', dans le cas où le ou les composés de formule (I) portent de tels groupes ou substituants.

En variante, le composé de formule générale (III) peut être obtenu en couplant un composé résultant du couplage entre un ou plusieurs composés répondant à la formule générale (I) et le composé X', avec un composé résultant, lui, du couplage entre le composé A' et le composé Y', ce dernier couplage pouvant, là encore, être suivi d'une déprotection ou d'une transformation telles que susdites.

Bien entendu, tout autre ordre d'assemblage peut également être envisagé pour autant qu'il permette d'obtenir un composé répondant à la formule générale (III).

- soit par une stratégie de synthèse récurrente, notamment dans le cas où les composés Y', A' et X' sont constitués par des acides aminés. Ainsi, les composés Y', A' et X' peuvent être formés et assemblés les uns aux autres par addition successive des acides aminés qui les composent, par exemple selon les techniques de synthèse peptidique sur support solide dérivées de la méthode initialement décrite par MERRIFIELD (The Chemistry of Solid Phase Peptide Synthesis, STEWART et YOUNGEd., 1984).

- soit encore par une stratégie de synthèse pour partie convergente et pour partie récurrente.

Selon une disposition préférée de l'Invention, le composé répond à la formule générale (III) dans laquelle m est un nombre entier compris entre 4 et 16, n est un nombre entier compris entre 2 et 8, X représente le reste d'un oligopeptide comprenant de 2 à 4 résidus acide aminé et présentant, à son extrémité N-tenninale, deux groupes fonctionnels F4, tandis que A représente le reste d'un enchaînement comprenant de 2 à 8 résidus de lysine et se présentant sous la forme d'un dendrimère.

Selon une autre disposition préférée de l'Invention, le composé répond à la formule générale (III) dans laquelle B1 représente le reste d'un ou plusieurs composés choisis parmi l'acide (-) -shikimique, l'acide (-)-quinique et leurs dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans vicinaux que présentent ces composés.

Conformément à l'Invention, le composé Y' peut être un composé d'intérêt, auquel cas le composé répondant à la formule générale (III) est propre à être utilisé, en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté à ce dernier.

Selon l'usage auquel est destiné le ligand, le composé d'intérêt peut être un antigène et, notamment, un antigène vaccinal tel qu'un peptide de synthèse correspondant à un ou plusieurs épitopes d'une protéine d'un agent pathogène, un antigène sous-unité protéique ou polysaccharidique, une fraction bactérienne ou virale purifiée, un anticorps tel qu'une immunoglobuline ou un sérum antilymphocytes, un acide nucléique ou un fragment d'un acide nucléique (séquence d'ARN ou d'ADN) codant pour une protéine d'intérêt ou pour un ou plusieurs déterminants antigéniques de cette protéine, un principe actif médicamenteux tel qu'un immunostimulant, un immunosupresseur, un cytostatique ou un antibiotique, et peut, à ce titre, être aussi bien une substance de nature protéinique, peptidique, osidique ou polyosidique, lipidique, lipoprotéinique, lipopolyosidique, polynucléotidique, qu'un composé issu de la chimie.

Le composé d'intérêt peut également être un marqueur détectable propre à permettre une révélation de la présence du ligand dans le milieu où il se trouve, tel qu'un radioisotope, un fluorochrome ou une enzyme.

Bien entendu, il est aussi possible que le composé d'intérêt soit constitué d'une association de plusieurs susbtances de nature différente comme par exemple, un antigène ou un anticorps lié à un marqueur détectable.

En variante, le composé Y' peut être un composé capable de former des liaisons non-covalentes avec un composé d'intérêt, auquel cas le composé répondant à la formule générale (III) est susceptible d'être utilisé pour la préparation d'un ligand se présentant sous la forme d'un complexe non-covalent et apte à vectoriser ledit composé d'intérêt jusqu'à des cellules cibles, et à en favoriser, ainsi, l'internalisation par ces dernières.

Dans cette variante, le composé Y' est avantageusement un composé hydrophobe et, de préférence, un lipide, tandis que le composé d'intérêt est avantageusement une protéine, un peptide, une lipoprotéine, un acide nucléique ou un fragment d'acide nucléique, un liposome ou une association moléculaire présentant des bicouches lipidiques.

La présente Invention a aussi pour objet un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, lequel composé se présente sous la forme d'un complexe non-covalent entre un composé répondant à la formule générale (III) dans laquelle Y représente le reste d'un composé Y' capable de former un tel complexe avec un composé d'intérêt, et un composé d'intérêt.

La présente Invention a encore pour objet un composé utile en tant que composé intermédiaire pour la préparation d'un ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, lequel composé est caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (V) ci-après : (B2M)m(XN)nA (V) dans laquelle : - B répond à la formule générale (IV) ci-après :

dans laquelle : * a à k représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1 ; * RI à R11peuvent, indépendamment les uns des autres, # soit former, avec un substituant porté par un atome de carbone adjacent à celui qui les porte, un carbonate, thiocarbonate, carbamate, urée, thiourée, cétal, acétal, sulfate, disiloxanylidène, silylène, époxyde, cyclopropane ou encore une aziridine, # soit former, avec un substituant porté par le même carbone que celui qui les porte, un groupe carbonyle, thiocarbonyle, oxime ou dérivé d'oxime, hydrazone ou dérivé d'hydrazone, . soit représenter-R', -OR',-OCOR', -OCOzR', -OCSOR', -OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R",-OPO(OR')(OR"), -COR', -C02R' ou l'un de ses dérivés,-CONR'R", -CSNR'R", -NR'R", -NR'NR"R"', -NR'OR", -NR'COR", -NR'CSR", -NR'COzR", -NR'CONR"R'", -NR'CSNR"R"', -NR'CSOR", -SR' ou encore -S03R', dans lesquels R', R" et R"', qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe protecteur ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à
16 atomes d'halogènes ;

* w est un nombre entier égal à 0 ou à 1, et W représente -R#~, -0-R"-, -OCO-R#~, -OCO2-R"-, -OCSO-R"-, -OCSS-R"-, -OS02-R"-, -OS03-R"-, -CO-R"-, -COz-R"-, -S-R"-, -S03-R"-, -ON(RP)-R"-, -OPO(OR)0-R"-, -CON(RP)-R"-, -CSN(RP)-Ra -, -N(RP)-Ra -, -NRPN(R8)-Ra -, -N(NRPR5)-Ra-, -NRO-Ra-, -N(ORI3)-Ra~, -NRCO-Ra-, -N(CORI3)-Ra~, -NRPCS-R"-, -IS(CSRR)-R"-, -NRPCO2-Ra-, -N(C02RI3)-Ra -, -NRPCON(R6)-Ra-, -(CO\"RPR Ô)-R a~, -NRRCSN(Rs)-R"-, -N(CSNRPR5)-Ra-, -NRPCSO-Ra- ou -N(CSOR)-R"-, dans lesquels Ra représente une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique,

saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes, tandis que
R et R# représente, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes ;
B2étant tel que les substituants R1 et R3 ou les substituants R4 et R6 représentent chacun un groupe hydroxyle éventuellement protégé ou un substituant susceptible d'être transformé, par une réaction appropriée, en un groupe hydroxyle ; - m est un nombre entier compris entre 1 et 32 ; - n est un nombre entier qui est : * soit égal à 0, auquel cas A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FI permettant sa liaison avec un composé d'intérêt ou avec un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à
32 restes B2, * soit compris entre 1 et 32, auquel cas X représente le reste d'un composé X' comprenant un groupe fonctionnel F3 permettant sa liaison avec le reste A et de
1 à 32 groupes fonctionnels F4 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes B2, tandis que A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FI permettant sa liaison avec un composé d'intérêt ou un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 2 à 32 restes X ; - M et N représentent chacun un groupe de liaison, respectivement entre B2et A quand n = 0 ou B2et X quand n est différent de 0, et entre X et A quand n est différent de 0, et sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi les groupes oxime, hydrazone, amide, ester, thioester, hydrazide, éther, thioéther, amine, carbonate, carbamate, thiocarbonate, thiocarbamate, urée, thiourée et thiazolidine.

Ainsi, dans la formule générale (V), le ou les restes B2 résultent du couplage, d'un ou plusieurs composés répondant à la formule générale (I) avec le composé A', éventuellement via X', et de, de manière facultative mais non obligatoire, de la déprotection des deux groupes hydroxyles adjacents ou de la transformation des deux substituants adjacents précurseurs d'un groupe hydroxyle, dans le cas où ledit ou lesdits composés de formule générale (I) présentent initialement des groupes hydroxyles protégés ou des substituants précurseurs d'un groupe hydroxyle.

Dans le composé de formule générale (V), les composés A' et X' sont tels que décrits en relation avec la formule générale (III).

Par ailleurs, ce composé peut être, comme le composé répondant à la formule générale (III), préparé par une synthèse convergente, par une synthèse récurrente ou encore par une synthèse pour partie convergente, pour partie récurrente.

Selon une disposition préférée de l'Invention, le composé répond à la formule générale (V) dans laquelle m est un nombre entier compris entre 2 et 16, n est un nombre entier compris entre 2 et 8, X représente le reste d'un oligopeptide comprenant de 2 à 4 résidus acide aminé et présentant, à son extrémité N-terminale, deux groupes fonctionnels F4, tandis que A représente le reste d'un enchaînement comprenant de 2 à 8 résidus de lysine et se présentant sous la forme d'un dendrimère.

Selon une autre disposition préférée de l'Invention, le composé répond à la formule générale (V) dans laquelle B2 représente un reste d'un ou plusieurs composés choisis parmi l'acide (-)-shikimique, l'acide (-)-quinique, éventuellement sous forme protégée, et leurs dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans vicinaux que présentent ces composés.

La présente Invention a encore pour objet un composé utile en tant que composé intermédiaire pour la préparation d'un ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, lequel composé est caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (VI) ci-après : (B1M)mA (VI) dans laquelle : - B' et M ont la même signification que dans la formule générale (III),

- m est un nombre entier compris entre 50 et 500, tandis que - A représente le reste d'un polymère capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt.

Au sens de la présente Invention, on entend par polymère , un ensemble de molécules de poids moléculaire variable, résultant de l'enchaînement de plusieurs monomères.

Ce polymère est choisi parmi des composés capables de donner lieu, au contact d'un composé d'intérêt, à la formation d'un complexe non-covalent avec ce composé, par exemple par l'intermédiaire de liaisons ioniques, de liaisons dipolaires ou d'interactions hydrophobes, le complexe ainsi obtenu étant alors susceptible d'être utilisé en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté à ce dernier.

De préférence, le polymère est un polymère cationique. A titre d'exemples et de façon non-limitative, des polymères cationiques convenables sont des polymères de lysine tels que ceux commercialisés par la Société SIGMA sous les références P0296, P6403, P4408, P7886, P0899, PI 149 ou encore P0124, et des polymères d'ethylèneimine tels que celui commercialisé par la Société FERMENTAS sous la référence EXGEN 500 en tant que réactif de transfection cellulaire.

La présente Invention a également pour objet un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, lequel composé est caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un complexe non-covalent entre un composé répondant à la formule générale (VI) et un composé d'intérêt.

Les ligands conformes à l'Invention sont de grand intérêt. En effet, tout en étant aptes à être reconnus de manière très satisfaisante par le récepteur du mannose et à se lier spécifiquement avec lui, ils présentent l'avantage de pouvoir être préparés aisément et à des coûts compatibles avec une exploitation industrielle, notamment par les nombreuses techniques de synthèse peptidique sur support solide.

Ces ligands sont susceptibles de trouver de nombreuses applications telles que : - la préparation de médicaments et, plus particulièrement, la préparation de vaccins et de médicaments destinés à assurer la vectorisation d'un

principe actif vers des cellules cibles exprimant le récepteur du mannose ou un récepteur lui étant apparenté, - la transfection de séquences d'ADN et d'ARN et ses multiples utilisations en thérapie génique ; dans ce dernier cas, on utilisera des ligands se présentant sous la forme de complexes non-covalents entre un composé de formule générale (VI) et une séquence polynucléotidique, et - la préparation de réactifs de laboratoire et, notamment, de réactifs de diagnostic.

La présente Invention a encore pour objet l'utilisation d'au moins un composé répondant à la formule générale (I) pour la préparation d'un médicament capable de se lier au récepteur du mannose ou à tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose.

La présente Invention a encore pour objet un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, tel que précédemment défini pour l'utilisation en tant que médicament.

Un tel médicament est susceptible de trouver en premier lieu des applications dans toutes les indications thérapeutiques dans lesquelles on recherche une induction, une modulation ou une suppression des réponses immunitaires et, plus particulièrement, de celles qui sont sous le contrôle des cellules T. A titre d'exemples et de façon non-limitative, on peut citer : - la prévention et le traitement des maladies infectieuses et, notamment, la vaccinologie, auquel cas le composé d'intérêt sera un antigène vaccinal ou un acide nucléique ou un fragment d'acide nucléique codant pour une protéine vaccinale ou pour un ou plusieurs déterminants antigéniques d'une telle protéine, et l'immunothérapie anti-infectieuse non-spécifique ; - le traitement des maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux disséminé, la polyarthrite rhumatoïde ou la maladie de WEGENER ; - le traitement des déficits immunitaires congénitaux ou acquis ; - la prévention ou le traitement des états d'hypersensibilité ; - le traitement des pathologies cancéreuses ; et - la prévention des rejets dans les greffes d'organes.

Ce médicament est également susceptible d'être utilisé pour la vectorisation d'un principe actif non-immunomodulateur vers des cellules cibles exprimant un récepteur de la famille des C-lectines. Ainsi, par exemple, les composés utiles en tant que ligands conformes à l'Invention peuvent trouver application en antibiothérapie, pour la vectorisation d'antibiotiques telles que les fluoroquinones ou la colistine vers des cellules des lignées des monocytes-macrophages infectées par des bactéries ou par des mycobactéries, ou dans le traitement de maladies liées à une déficience enzymatique cellulaire comme la maladie de GAUCHER, auquel cas ils serviront à vectoriser l'enzyme déficiente jusqu'aux cellules de KUPFER.

La présente Invention a encore pour objet un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, tel que précédemment défini pour l'utilisation in vitro.

La présente Invention a, en outre, pour objet un réactif de diagnostic, caractérisé en ce qu'il comprend un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, tel que précédemment défini.

Outre les dispositions qui précèdent, la présente Invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront du complément de description qui suit, qui se rapporte à des exemples de préparation de composés utiles en tant que composés intermédiaires pour la préparation de ligands du récepteur du mannose conformes à l'Invention, de ligands du récepteur du mannose conformes à l'Invention et de démonstration des propriétés biologiques de ces ligands, ainsi qu'aux dessins annexés dans lesquels : - les Figures 1A et 1B illustrent deux exemples de conformations ramifiées susceptibles d'être présentées par le composé A' ; - les Figures 2A, 2B et 2C illustrent les structures chimiques de six composés utiles en tant que composés intermédiaires pour la préparation de ligands conformes à l'Invention ; - les Figures 3A et 3B illustrent les structures chimiques de 4 ligands conformes à l'Invention préparés à partir des composés montrés sur les Figures 2A et 2B ;

- la Figure 4 illustre, sous la forme de courbes, les valeurs moyennes des intensités de fluorescence présentées par des cellules dendritiques traitées par 2 ligands conformes à l'Invention (-#- et -#-) et par 2 composés témoins (---#--- et -#-) à des concentrations comprises entre 1 et 10 M; - la Figure 5 illustre, sous la forme de courbes, les valeurs moyennes des intensités de fluorescence présentées par des cellules dendritiques traitées par 2 ligands conformes à l'Invention (-#- et -#-) et par 2 composés témoins (---#-- et -#-) à une concentration de 5 M après une préincubation desdites cellules en présence de solutions de mannane de concentrations comprises entre 10-4 et 10 mg/ml.

Il doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustrations de l'objet de l'Invention et n'en constituent en aucune manière une limitation.

Dans ce qui suit, on utilisera les formules suivantes : Ac2O: anhydride d'acétyle Boc : t-butyloxycarbonyle 'Bu : tert-butyle DCC : dicyclohexylcarbodiimide DCM : dichlorométhane DIEA : diisopropyléthylamine DMF : diméthylformamide Eq. : équivalent EDTA : éthylène diamide tétraacétique ESI-MS : spectrométrie de masse à électrospray Fmoc : 9-fluorénylméthoxycarbonyIe HOBt : N-hydroxybenzotriazole

HBTU : N-oxyde d'hexafluorophosphate de [(1H-benzotriazoI-1-yl) (diméthylamino)- méthylène] -N-méthylméthanaminium MBHA : 4-méthylbenzylhydrylamine Mtt :4-méthyltrityle NMP : N-méthylpyrrolidone

PBS : tampon phosphate Pmc : 2,2,2,5,7,8-pentaméthylchroman-6-sulfonyle RMN : résonance magnétique nucléaire RP-HPLC : chromatographie liquide haute performance en phase inverse TFA : acide trifluoroacétique TNBS : acide 2,4,6-trinitrobenzène sulfonique TOF-PDMS : spectrométrie de masse à désorption par plasma Trt : trityle
Par ailleurs, dans le cadre des exemples qui suivent : # la mesure des rotations optiques a été effectuée avec un polarimètre PERKIN-
ELMER 241 et les valeurs [[alpha]]D sont exprimées en unités de 10-1 degrés.cm2/g ; # les chromatographies liquides haute performance en phase inverse semi- préparatives et analytiques ont été réalisées à l'aide d'un système SHIMADZU
LC-9A ou LC-4A, en utilisant une colonne BECKMANN ultrapore C-8 (300 ,
5 m, 4,6 x 25 mm) ou HYPERSIL hyperprep C-18 (300 , 8 m, 15 x 500 mm), un débit de 1 ou de 3 ml/minute, une détection à 215 ou à 230 nm, et l'un des 5 systèmes d'élution suivants : - système A : TFA à 0,05% dans de l'eau - système B : TFA à 0,05% dans un mélange acétonitrile/eau (80:20) - système C : TFA à 0,05% dans un mélange acétonitrile/eau (60: 40) - système D : tampon phosphate 50 mM, pH 6,95 - système E : un mélange de tampon phosphate 50 mM, pH 6,95, et d'acétonitrile (50:50) ; # les spectres TOF-PDMS ont été enregistrés à l'aide d'un spectromètre de masse à désorption par plasma APPLIED BIOSYSTEMS Bio-Ion 20 ; # les spectres ESI-MS ont été enregistrés à l'aide d'un spectromètre de masse à source d'ionisation par électrospray Micromass Quatro II ; tandis que # les spectres RMN 'H et 13C ont été enregistrés à l'aide d'un spectromètre de masse
BRUKER DRX 300 ou DRX 600 ; les déplacements chimiques sont exprimés en ppm, en prenant comme standard interne, le tétraméthylsilane, celui du sel de sodium de l'acide triméthylsilylpropionique deuteré.

EXEMPLE 1 : PREPARATION DE COMPOSES UTILES EN TANT QUE COMPOSES INTERMEDIAIRES POUR LA PREPARATION DE LIGANDS CONFORMES A L'INVENTION
Six composés se présentant sous la forme de dendrimères et répondant à la formule générale (V) dans laquelle : # m représente un nombre entier égal à 4,8 ou 16, . B2représente un reste acide (-)-shikimique ou (-)-quinique, # n est un nombre entier égal à 2,4 ou 8 (dans le cas où m est respectivement égal à
4, 8 et 16), # X représente le reste d'un tripeptide de séquence (SI) ci-après :
Lys-Cys(tert-butylthio)-Gly (SI) # A représente le reste d'un dendrimère comprenant 2,4 ou 8 (dans le cas où m est respectivement égal à 4,8 et 16) résidus L-lysine et présentant, d'une part, 2,4 ou 8 groupes chloroacétyles pour sa liaison avec un nombre équivalent de tripeptides et, d'autre part, un groupe amine libre propre à permettre sa liaison avec une molécule d'intérêt, . M représente un groupe amide, tandis que N représente un groupe thioéther, ont été préparés.

La préparation de ces composés a été réalisée en utilisant une stratégie de synthèse convergente, c'est-à-dire en procédant : - en premier lieu, à la préparation des dendrimères A', - puis, à la préparation des tripeptides de séquence (SI) et à leur couplage avec deux molécules d'acide (-)-shikimique ou (-)-quinique, et - enfin, au couplage des dendrimères A' et des tripeptides porteurs des restes acide (- ) -shikimique ou (-)-quinique, par déprotection de la fonction thiol de ces tripeptides et par formation d'une liaison thioéther entre cette fonction thiol et un groupe chloroacétyle desdits dendrimères A'.

Les structures chimiques de ces composés, qui seront dénommés dans ce qui suit :

# composés 21,23 et 25, pour ce qui est des composés comprenant respectivement 4,
8 et 16 restes acide (-)-shikimique, et # composés 22,24 et 26, pour ce qui est des composés contenant respectivement 4,8 et 16 restes acide (-)-quinique, sont représentées sur les Figures 2A, 2B et 2C.

1. 1 - Préparation des dendrimères A'
Chaque dendrimère A' a été préparé à une échelle de 0,5 mmole par une synthèse sur support solide, à partir de 15g d'une résine MBHA initialement chargée à 0,4 mmoles/g (Société SENN CHEMICALS) et en utilisant : # une stratégie Boc/benzyle pour la protection des acides aminés à coupler, # un mélange HBTU/HOBt/DIEA dans du DMF, en tant que réactifs d'activation pour les couplages des acides aminés, et # des tests à la ninhydrine (KAISER et al., Anal. Biochem., 1970,34, 595) et au
TNBS (HANCOCK et BATTERSBY, Anal. Biochem., 1976, 71, 261) pour le contrôle des opérations de couplage et de déprotection.

Afin d'abaisser la charge en fonctions amines libres de la résine à une valeur de 0,1 mmoles/g, 0,25 équivalent (par fonction amine devant réagir) de Boc-p-Ala-OH a été, dans un premier temps, couplé à cette résine, en présence de 5 équivalents de mélange HBTU/HOBt/DIEA (0,25 : 0,25 : 0,75éq. ) dans du DMF (durée de la réaction : 1 heure). Puis, les groupes amines de la résine restées libres ont été protégés par acétylation, en faisant réagir la résine avec un mélange AC20/DIEA/DCM (5: 10:85) pendant 10 minutes.

Le deuxième couplage - correspondant en fait au premier couplage d'une L-lysine - a été réalisé en utilisant 4 équivalents (par fonction amine devant réagir) de Boc-L-Lys(2-chlorobenzyle)-OH, c'est-à-dire d'une L-lysine dont la chaîne latérale est protégée par un groupe 2-chlorobenzyle, en présence de 20 équivalents de mélange HBTU/HOBt/DIEA (4: 4:12 éq. par fonction amine devant réagir) dans du DMF (durée de la réaction : 45 minutes).

Le troisième couplage a, lui, été effectué en utilisant 4 équivalents de Boc-L-Lys (Boc)-OH, présence de 20 équivalents de mélange HBTU/HOBt/ DIEA (4: 4:12 éq. ) dans du DMF (durée de la réaction : 45 minutes).

A l'issue de ce troisième couplage, un tiers de la résine a été déprotégé, puis acylé par 8 équivalents d'anhydride chloroacétique préformé (via une activation par du DCC), pour obtenir un dendrimère (dénommé composé 13 dans ce qui suit) comprenant 2 résidus L-lysine et présentant d'une part, un groupe amine libre (qui n'est autre que le groupe c-amine de la première L-lysine ayant été couplée à la (3-alanine) et d'autre part, 2 groupes chloroacétyles.

Les deux autres tiers de la résine ont fait l'objet d'un quatrième pour obtenir la fixation de deux L-lysines supplémentaires. Ce couplage a été réalisé avec 4 équivalents de Boc-L-Lys (Boc)-OH, présence de 20 équivalents de mélange HBTU/HOBt/DIEA (4: 4:12 éq. Par fonction amine devant réagir) dans du DMF (durée de la réaction : 45 minutes).

A l'issue du quatrième couplage, la moitié de la résine restante (soit 1/3 de la quantité de résine initiale) a été à son tour déprotégée et acylée par 8 équivalents d'anhydride chloroacétique préformé pour obtenir un dendrimère (dénommé composé 14 dans ce qui suit) comprenant 4 résidus L-lysine et présentant à la fois un groupe amine libre et 4 groupes chloroacétyles.

La seconde moitiée de la résine restante a été soumise à un cinquème couplage avec 4 L-lysines. Les opérations de couplage de deux L-lysines, de déprotection et d'acylation de la résine par l'anhydride chloroacétique ont été reconduites encore une fois pour obtenir un dendrimère à 8 résidus L-lysine (dénommé composé 15 dans ce qui suit) présentant un groupe amine libre et 8 groupes chloroacétyles.

Que ce soit la /3-alanine ou les L-lysines, tous les acides aminés ont été activés pendant 1 minute avant d'être ajoutés à la résine. En pratique, lors de chaque opération de couplage, le HBTU (1 éq. pour le couplage de la (3-alanine, 4 éq. pour celui des L-lysine), après dissolution dans du DMF, a été ajouté à une solution contenant l'acide aminé à coupler (1 éq. dans le cas du couplage de la (3-alanine, 4 éq. dans le cas du couplage des L-lysine), du HOBt (1 éq. pour le couplage de la P-alanine, 4 éq. pour celui des L-lysine) et de la DIEA (2 éq. pour le couplage de la P-alanine, 8 éq. pour celui des L-lysine) dans du DMF. L'ensemble a été mélangé pendant 1 minute, puis ajouté à la résine préalablement imbibée par du DMF

contenant de la DIEA (1 éq. pour le couplage de la (3-alanine, 4 éq. pour celui des Llysine). Le mélange réactionnel résultant a été agité mécaniquement pendant toute la durée de la réaction.

Par ailleurs, entre chaque opération de couplage, la résine a été successivement filtrée, lavée 3 fois avec du DMF (3 x 2 minutes) et du DCM (3 x 2 minutes), traitée par un mélange TFA/DCM (50: 50, 1 x 2 minutes, 1 x 20 minutes) propre à permettre le clivage des groupements protecteurs Boc, lavée à nouveau par du DCM (2 x 2 minutes), neutralisée avec un mélange DIEA/DCM (5: 95 ; 3 x 1 minute) et lavée une dernière fois avec du DCM (2 x 1 minute).

Le clivage des dendrimères et leur déprotection ont été obtenus en faisant réagir la résine avec 11ml d'un mélange HF/anisole (10:1) par gramme de résine, à 0 C et pendant 60 minutes. A la suite de quoi, ils ont été successivement précipités dans du tert-butylméthyléther froid, centrifugés, dissout dans de l'eau, lyophilisés et purifiés par une RP-HPLC semi-préparative [gradient (A/B) : 100:0 à 50 :50 en 120 minutes].

Ont été ainsi obtenus : # 160 mg de dendrimère 13 (Rdt : 52%) ; spectre TOF-PDMS : m/z 498 (M+H)+; . 215 mg de dendrimère 14 (Rdt : 42%) ;spectre TOF-PDMS : m/z 928 (M+Na)+ ; et . 182 mg de dendrimère 15 (Rdt : 20%) ; spectre TOF-PDMS : m/z 1726 (M+H)+.

1. 2 - Préparation des tripeptides porteurs des restes acide (-)-shikimique et (-)-quinique
La préparation des tripeptides porteurs des restes acide (-)-shikimique et (-)-quinique a été réalisée sur support solide, en synthétisant dans un premier temps le peptide de séquence (SI) et en couplant dans un deuxième temps une molécule de ce tripeptide avec 2 molécules d'acide (-) -shikimique ou (-) -quinique, par formation d'une liaison entre les groupes amine de la L-lysine N-terminale dudit tripeptide et le groupe carboxyle desdits acides.

Ont été ainsi obtenues :

. d'une part, la lV",N-di-[(3R,4S,5R)-3,4,5-trihydroxy-1-cycIohexenecarbox-1-yl]-Llysyl-[S-(tert-butylthio)]-L-cystéyl-glycine, qui sera dénommée composé 1 dans ce qui suit, et

. d'autre part, la lVa,lVE-di-[(lsn,3R,4s",SR)-1,3,4,5-tétrahydroxy-1-cyclohexanecarbox-1-yl]-L-lysyl-[S-(tert-butylthio)]-L-cystéyl-glycine, qui sera dénommée composé 3 dans ce qui suit. a) Préparation du composé 1
Le composé 1 a été préparé à une échelle de 2 mmoles à l'aide d'une résine ester de Fmoc-glycine p-benzyloxybenzyle (disponible sous la dénomination commerciale Fmoc-Gly-O-Wang auprès de la Société NOVABIOCHEM) chargée à 0,8 mmoles/g, et en utilisant : # une stratégie Fmoc pour la protection des fonctions amine des acides aminés à coupler, # un mélange HBTU/DIEA dans de la NMP, en tant que réactifs d'activation pour les couplages des acides aminés, # un mélange pipéridine/NMP pour éliminer les groupements protecteurs Fmoc, et # des tests à la ninhydrine et au TNBS pour le contrôle des réactions de couplage et de déprotection.

Après élimination des groupements Fmoc protégeant les fonctions amine des résidus glycine de la résine, par traitement de cette dernière par un mélange pipéridine/NMP (20: 80) pendant 20 minutes, le couplage du résidu S-(tert-butylthio)L-cystéine a été réalisé en utilisant 2 équivalents (par groupe amine devant réagir) de Fmoc-L-Cys(tert-butylthio)-OH en présence du mélange HBTU/DIEA (2:3 éq. ) dans de la NMP (durée de la réaction : 40 minutes). L'utilisation d'un groupe tert-butylthiol comme groupement protecteur de la fonction thiol du résidu L-cystéine a été choisie en raison de ce que ce groupe est à la fois peu sensible aux conditions réactionnelles utilisées au cours des opérations de couplage et de clivage, tout en étant susceptible d'être aisément éliminé par l'action de trialkylphosphines.

Ce premier couplage a été suivi d'un second couplage destiné à fixer la L-lysine du tripeptide, lequel a été effectué en utilisant 2 équivalents de Fmoc-L-Lys (Fmoc)-OH en présence de 5 équivalents de mélange HBTU/DIEA (2: 3 éq. ) dans de la NMP (durée de la réaction :40 minutes).

Puis, il a été procédé au couplage des deux molécules d'acide (-)-shikimique en activant 2 équivalents (par fonction amine devant réagir) de cet acide par 2 équivalents de mélange HBTU/DIEA (1:1 éq.) dans de la NMP pendant 30

secondes, et en ajoutant ledit acide à la résine préalablement imbibée d'un mélange NMP/DIEA (durée de la réaction : 40 minutes).

Au terme de cette opération de couplage, le solvant a été filtré, la résine a été lavée successivement avec de la NMP (3 x 2 minutes) et du DCM (3 x 2 minutes), puis séchée.

Le clivage du composé 1 a été réalisé en traitant la résine par 25 ml d'un mélange TFA/H20/Me2S (95: 2,5:2,5) à la température ambiante pendant 2 heures. La solution a été concentrée sous pression réduite et le résidu ainsi obtenu a été dissous dans de l'eau, puis soumis à une lyophilisation conduisant à l'obtention d'1,64 g d'une poudre jaune pâle. 107 mg de cette poudre ont été purifiés par une RP-HPLC semi-préparative [gradient (A/B) : 100:0 à 50 :50 110 minutes], ce qui a permis d'obtenir, après lyophilisation, 15mg de composé 1 pur, soit un rendement de 14%.

Le composé 1 présente les caractéristiques suivantes : Rotation optique : [[alpha]]D25 -117 (c 0.19, H2O); Spectre RMN 'H : ôH(300 MHz ; H20-D20 90 :10) 1. 16 (3 x 3 H, 3 s, C(CH3)3), 1. 14- 1. 35 (2 H, m, 2 lysyl y-H), 1. 37-1.44 (2 H, m, 2 lysyl #-H), 1. 62-1.75 (2 H, m, 2 lysyl ss-H), 2. 00-2.11 ( 2 H, m, 2 6-H), 2. 59 ( 1 H, dd, J 11.3 et J 17. 4, 1 6-H), 2. 60 (1 H,

dd, J 11.1 et J 17.0, 1 6-H), 2.90 (1 H, dd, Ja,R 7.0 et Jo,p, 14.1, 1 cystéyl (3-H), 3.04- 3. 16 (2 H, m, 2 lysyl s-H), 3. 09 (1 H, dd, J[alpha],ss 4. 9 et Jss,ss' 14,1 cystéyl ss-H), 3. 58 et 3. 59 (2 H, 2 dd, J3,4 4. 6 et J4,5 9. 2, 2 4-H), 3. 73-3.76 (2 H, m, 2 glycyl a-H), 3. 83-3.88 (2 H, m, 2 5-H), 4. 17 (1 H, m, lysyl a-H), 4. 25-4.29 (2 H, m, 2 3-H), 4. 52 (1 H, m, 1 cystéyl a-H), 6. 22 et 6. 28 (2 H, 2 br d, J2,3 4. 0, 2 2-H), 7. 86 (1 H, t, J#,NH 5. 4, 1 lysyl

euh), 8.02 (1 H, t, Ja,NH 5.6, 1 glycyl NH), 8.06 (1 H, d, Ja,rH 6.6, 1 lysyl 1VI-, 8.32 (1 H, d, J[alpha],NH 7. 7, 1 cystéyl NH); Spectre RMN 13C: 8c(81.3 MHz; H2O-D2O 90 :10) 22. 9 (lysyl y-C), 28. 3 (lysyl #-C), 29. 4 (C(CH3) 3), 30. 7 (lysyl ss-C), 31. 7 et 31. 5 (2 6-C), 39. 8 (lysyl #-C), 40. 6 (cystéyl ss-C), 41. 8 (glycyl a-C), 48. 7 (C(CH3)3), 53. 3 (cystéyl a-C), 54. 9 (lysyl a-C), 66. 3 et 66. 8 (2 4-C et 2 5-C), 71. 9 et 72. 0 (2 3-C), 131. 1 et 132. 1 (2 1-C), 133. 1 et 133. 7 (2 2C), 170. 5, 171. 0, 172. 7, 173. 4 et 174. 6 (5 XC=O) ;

Spectre TOF-PDMS : m/z 729 (M+Na)+.

Les constantes de couplage entre les protons 3-H/4-H et 4-H/5-H des deux restes acide (-)-shikimique présents dans le composé 1 telles que déterminées par spectrométrie RMN 'H sont respectivement de 4,6 et 9,2 Hz. Ces constantes sont compatibles avec une orientation pseudo-équatoriale des fonctions hydroxyles portées par les atomes de carbone situés en positions 4 et 5 desdits acides et viennent confirmer l'analogie de structure existant entre l'acide (-) -shikimique et le D-mannose. b) Préparation du composé 3
Le composé 3 a été préparé à une échelle de 2 mmoles à l'aide d'une résine ester de Fmoc-glycine o-methoxy-p-(benzyloxy)benzyle (disponible sous la dénomination commerciale Fmoc-Gly-Sasrin auprès de la Société BACHEM) chargée à 0,8 mmoles/g et en utilisant : # une stratégie Fmoc pour la protection des fonctions amine des acides aminés à coupler, # un mélange HBTU/DIEA dans de la NMP, en tant que réactifs d'activation pour les couplages des acides aminés, # un mélange pipéridine/NMP pour éliminer les groupements protecteurs Fmoc, et # des tests à la ninhydrine et au TNBS pour le contrôle des opérations de couplage et de déprotection.

Les couplages de la S-(tert-butylthio)-L-cystéine et de la L-lysine ont été réalisés dans des conditions identiques à celles utilisées pour la préparation du composé 1.

Par contre, le couplage des deux molécules d'acide (-) -quinique a été, lui, effectué selon un protocole opératoire différent de celui utilisé pour le couplage de l'acide (-)-shikimique. En effet, il s'est avéré que l'activation de l'acide (-) -quinique se traduisait immédiatement par la formation d'une y-lactone bicyclique, par estérification entre le groupe carboxyle porté par le carbone situé en position 1 et le groupe hydroxyle porté par le carbone situé en position 5 de cet acide, et qu'il était donc nécessaire de protéger les fonctions hydroxyle de l'acide (-) -quinique avant de procéder à son couplage.

Il a donc été choisi de soumettre l'acide (-)-quinique à une peracétylation par de l'anhydride acétique, de manière à obtenir l'acide

(Is,,,3R,4s,,5R)- 1,3,4,5-tétraacétoxycyclohexane- 1 -carboxylique qui n'est autre que le dérivé tétraacétylé de l'acide (-) -quinique et qui sera dénommé composé 9 dans ce qui suit, puis de transformer ce dernier en son fluorure (dénommé composé 18 dans ce qui suit) en traitant le composé 9 par du fluorure de cyanuryle.

Pour ce faire, une goutte d'acide perchlorique a été ajoutée, à température ambiante et sous agitation, à une suspension contenant 4 g (21 mmoles) d'acide (-) -quinique dans 30 ml d'un mélange acide acétique/AczO (2:1). L'agitation a été poursuivie pendant 12 heures au terme desquelles le mélange résultant a été dilué avec du chloroforme et soumis à une extraction par une solution saturée en bicarbonate de sodium, puis par de l'eau. La couche organique a été séchée par du sulfate de sodium, filtrée et concentrée sous pression réduite. Le résidu a été précipité par addition de pentane pour donner 6,45 g de composé 9, soit un rendement de 86%.

La transformation de l'acide 9 en son fluorure a été réalisée en ajoutant, goutte à goutte et sous agitation, 937 l (11,10 mmoles) de fluorure de cyanuryle à une solution comprenant 500 mg (1,39 moles) de composé 9 dans 6 ml de chlorure de méthylène et 112 (il (1,39 mmoles) de pipéridine, et en portant le mélange résultant à reflux pendant 2 heures. Un précipité blanc s'étant formé, ce mélange a été filtré, puis il a été soumis à une extraction par de l'eau. L'élimination du solvant de la couche organique, après séchage de cette dernière par du sulfate de sodium, a conduit à l'obtention d'une huile correspondant au composé 18 et qui a été soumise à un séchage sous vide pendant plusieurs heures.

Les composés 9 et 18 présentent les caractéristiques spectrales suivantes : Composé 9 : Spectre RMN 1H: 8H(300 MHz ; CDC13) 1. 87 (1 H, dd, J5,6 10. 2 et J6,6# 13. 6, 6-H), 1.96, 1.98, 2.03 et 2. 08 (4 x 3 H, 4 s, 4 CH3), 1.98-2.03 (1 H, m, 6'-H), 2. 36 (1 H, dd,

J2,2 15.9 et/2,3 3.3, 2-H), 2.50 (1 H, dd, J2,z 15.9 et J2',3 3.2, 2'-H), 4.97 (1 H, dd, J 3,4 3. 4 et/4,5 9. 4, 4-H), 5.31 (1H, ddd, J4,5 9. 4, J5,6 10. 2 et J5,6# 4. 2, 5-H), 5.50 (1H, m, 3H);

Spectre RMN 13C: #c(81.3 MHz ; CDC13) 21. 0, 21. 1, 21. 2 et 21. 4 (4 CH3), 32. 0 et 36. 3 (2-C et 6-C), 66. 7, 67. 7 et 71. 3 (3-C, 4-C et 5-C), 78.8 (1-C), 170. 1-170.5 (4 C02Me), 173. 1 (C02H) ; Spectre TOF-PDMS : m/z 1102 (M+Na)+, 1080 (M+H)+, 1080 (M+H)+, 1022 (M+H- 'Bu)+.

Composé 18 : Spectre RMN IH : #H(300 MHz ; CDCl3) 1. 97-2.05 (1 H, m, 6-H), 2. 03, 2. 06, 2. 08 et 2. 16 (4 x 3 H, 4 s, 4 CH3), 2.45 (1 H, dd, J2,2' 15.4 et J2,3 3. 7, 2-H), 2. 50-2.66 (2 H, m, 2'-H et 6'-H), 5. 08 (1 H, dd, J3,4 3. 5 et J4,5 9. 1, 4-H), 5.38(1 H, ddd, J4,5 9.1, J5,6# 9. 1 et J5,6 5. 1, 5-H), 5.56 (1 H, m, 3-H) ; Spectre RMN 13C : 8c(81.3 MHz ; CDCl3) 20. 4, 20. 6, 20. 8 et 20. 9 (4 CH3), 31. 9 et 35.4 (2-C et 6-C), 66. 0, 68. 2 et 70. 4 (3-C, 4-C et 5-C), 76.7 (JC.F 53. 2, 1-C), 160. 3 (JC.F 373. 4, COF), 169. 6, 169.7, 169.8 et 169. 8 (4 C02Me).

Le couplage des deux molécules de composé 18 a été réalisé en acylant la résine une première fois par 2 équivalents (par fonction amine devant réagir) de composé 18 en présence de 3 équivalents de DIEA dans de la NMP (durée de la réaction : 60 minutes), puis, après avoir lavé la résine avec de la NMP (3 x 2 minutes) et du DCM (3 x 2 minutes), en l'acylant une seconde fois, mais en utilisant 1 équivalent des différents réactifs.

Le clivage du composé 3 a été obtenu en traitant la résine par 20 ml d'un mélange CH2Cl2/TFA/1Pr3SiH (95: 2:3) (4 x 5 minutes). La solution a été concentrée sous pression réduite et le résidu ainsi obtenu a été dissout dans de l'eau, puis soumis à une lyophilisation conduisant à l'obtention d'1,40 g d'un composé brut qui a été dissout dans 25 ml de méthanol. A la solution ainsi obtenue, a été ajouté, goutte à goutte et sous agitation, du méthoxide de sodium méthanolique 1 M jusqu'à l'obtention d'un pH d'environ 9, puis on a laissé ce mélange réagir pendant 3 heures, en contrôlant le déroulement de la réaction par une RP-HPLC. Le mélange a été ensuite concentré sous pression réduite. Un échantillon de 100 mg du résidu a été purifié par une RP-HPLC semi-préparative [gradient (A/B) : 100 :0 à 90:10 en 10

minutes, puis 90:10 à 50 :50 70 minutes] pour conduire à l'obtention, après lyophilisation, de 41 mg de composé 3 pur, soit un rendement de 59%.

Le composé 3 présente les caractéristiques suivantes : Rotation optique : [[alpha]]D25 -73 (c 0.49, H20) ; Spectre RMN 'H : 8H(300 MHz ; H20-D20 90:10) 1. 12 (3 x 3 H, s, 3 CH3), 1. 15-1.22 (2 H, m, 2 lysyl y-H), 1. 34 (2 H, quintet, J[gamma],# 7. 2 et J#,# 7. 2, 2 lysyl #-H), 1. 57-1.90 (10

H, m, 2 lysyl -H, 4 2-H et 4 6-H), 2.83 (1 H, dd, Ja,p 8.6 et J[3,[3' 14, 1 cystéyl (3-H), 3. 02 (3 H, m, 1 cystéyl ss-H et 2 lysyl e-H), 3. 33 (2 H, dd, J3,4 2. 9 et J4,5 9. 6, 2 4-H), 3. 79 ( 2 H, d, J[alpha],NH 5. 8, 2 glycyl a-H), 3. 80-3.90 (2 H, m, 2 5-H), 4. 01 (2 H, br s, 2 3-

H), 4.11 (1 H, dt, JQ,NH 7.0 et Ja,p 7.2, 1 lysyl a-H), 4.54 (1 H, dt, JaNH 7.6 et Ja,p 6.0, 1 cystéyl a-H), 8. 02 (1 H, t, J[alpha],NH 5. 9, 1 lysyl #NH), 8. 11 (1 H, d, Ja,NH 7. 0, 1 lysyl [alpha]NH), 8. 21 (1 H, t, J[alpha],NH 5.8, 1 glycyl NH), 8. 35 (1 H, d, Ja,NH 7. 6, 1 cystéyl NH) ; Spectre RMN 13C: 8c(81.3 MHz; H20-D20 90:10) 22. 7 (lysyl y-C), 28. 3 (lysyl 8-C), 29. 4 (C(CH3)3), 30. 9 (lysyl ss-C), 37. 5 (2 2-C), 39. 4 (lysyl s-C), 40. 7 (cystéyl ss-C et 2 6-C), 41. 8 (glycyl a-C), 48. 6 (C(CH3) 3), 53. 1 (cystéyl a-C), 54. 4 (lysyl a-C), 66. 7 et 66. 8 (2 3-C), 70. 8 (2 5-C), 75. 4 (2 4-C), 77. 2 (2 1-C), 172. 5, 173. 4, 174. 4, 177. 1 et 177. 4 (5 XC=O) ; Spectre ESI-MS : m/z 741 (M-H)'.

Les constantes de couplage entre les protons 3-H/4-H et 4-H/5-H des deux restes acide (-)-quinique présents dans le composé 3 telles que déterminées par spectrométrie RMN 'H sont respectivement de 2,9 et 9,6 Hz. Ces constantes sont également compatibles avec des couplages axial-équatorial et axial-axial et une conformation en chaise des cyclohexanes présentant un groupe amide équatorial.

1. 3 - Couplages des dendrimères A' et destripeptides porteurs des restes acide (-)-shikimique et (-)-quinique
Les couplages des composés 13,14 et 15 et des composés 1 et 3 ont été réalisés selon une procédure comprenant 2 étapes, à savoir : # une première étape visant à réduire la liaison disulfure (S-SBu') que présente chacun des composés 1 et 3, en traitant ces composés par de la n-tributylphosphine dans un mélange n-propanol/eau dégazés (50: 50), de manière à obtenir

l'élimination du groupe protecteur tert-butylthiol porté par chacun des composés 1 et 3 et, partant, la déprotection de leur fonction thiol, et # une seconde étape visant à faire réagir les composés 1 et 3 ainsi réduits avec les composés 13,14 et 15, dans un mélange DMF/eau dégazés (90: 10) et en présence de carbonate de potassium, de manière à obtenir la formation d'une liaison thioéther entre la fonction thiol des composés 1 et 3 et l'une des fonctions chloroacétyles des composés 13, 14 et 15.

Ainsi, à une solution contenant 1,5 équivalent (par groupe chloroacétyle devant réagir à la deuxième étape) de composé 1 ou de composé 3 dans 1 ml d'un mélange n-propanol/eau dégazés (50: 50), a été ajouté 1 équivalent de ntributylphosphine. Chaque mélange réactionnel a été laissé, sous agitation et sous azote, à température ambiante pendant 24 heures, puis les solvants et le tertbutylmercaptan libéré ont été évaporés sous pression réduite et les résidus ont été séchés sous vide pendant 15 minutes.

Chacun de ces résidus, après dissolution dans un mélange DMF/eau dégazés (90:10), a été ajouté à 1 équivalent (1,5 ).!mole) d'un composé 13, 14 ou 15 et à 20 équivalents de carbonate de potassium. Chaque mélange réactionnel a été laissé, sous agitation et à température ambiante, pendant 72 à 96 heures - les réactions étant contrôlées par des RP-HPLC-, puis, dilué dans de l'eau et lyophilisé. Les résidus ont été alors purifiés par des RP-HPLC semi-préparatives.

Ont été ainsi obtenus : # 3,39 mg de composé 21 (Rdt : 61%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 70:30 en 70 minutes, # 5,98 mg de composé 22 (Rdt : 66%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 75:25 en 25 minutes, puis isocratique, # 2,25 mg de composé 23 (Rdt : 42%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 80:20 en 35 minutes, puis isocratique, # 5,75 mg de composé 24 (Rdt : 56%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 75:25 en 25 minutes, puis isocratique, # 3,15 mg de composé 25 (Rdt : 43%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 75:25 en 40 minutes, puis isocratique, et

# 7,03 mg de composé 26 (Rdt : 61 %) en utilisant un gradient (A/C) 100 :0 à 80 :20 35 minutes, puis isocratique, se présentant tous sous la forme d'une poudre blanche.

Les composés 21 à 26 présentent les caractéristiques spectrales suivantes : Composé 21 : Spectre RMN 'H : ôH(600 MHz ; H2O-D2O 90:10) 1. 31-1.46 (8 H, m, 8 lysyl y-H), 1. 43-1.60 (6 H, m, 6 lysyl #-H), 1. 64 (2 H, m, 2 lysyl #-H), 1. 68-1.89 (8 H, m, 8 lysyl ss-H), 2. 17-2.23 (4 H, m, 4 6-H), 2. 46 and 2. 51 (2 x 1 H, 2 dt, J[alpha],[alpha]' 15. 4 and J[alpha],ss 6. 2, 2 alanyl a-H), 2. 70- 2. 80 (4 H, m, 4 6'-H), 2. 89-2.95 (2 H, m, 2 cystéyl ss-H), 2. 96-3.01 (2 H, m, 2 lysyl #- H), 3. 06 (2 H, dd, J[alpha],ss 5. 3 and Jss,ss' 14.9, 2 cystéyl p'-H), 3. 21 (2 H, m, 2 lysyl E-H), ), 3. 25 (2 H, m, 2 lysyl #-H), 3. 27 (1 H, d, J 16. 5, CHH), 3. 30 (1 H, d, J 16. 5, CHH), 3. 33 (2 H, s, CH2), 3. 41-3.50 (2 x 1 H, 2 ddt, Ja,p 6. 2, Jss,ss 12. 6 and Jss,NH 6. 2, 2 ssalanyl (3-H), 3. 71-3.76 (4 H, m, 4 4-H), 3. 95 (4 H, d, J[alpha],NH 6. 3, 4 glycyl a-H), 4. 00- 4. 05 (4 H, m, 4 5-H), 4. 25 (2 H, dt, J[alpha],ss 5. 6 and Ja,NH 6. 3, 2 lysyl a-H), 4. 32-4.38 (4 H, m, 4 lysyl a-H), 4. 42-4.44 (4 H, m, 4 3-H), 4. 58-4.62 (2 H, m, 2 cystéyl a-H), 6. 38 and 6. 44 (2 x 2 H, 2 br d, J2,3 4. 0, 2 x 2 2-H), 6.90 (1 H, s, NHH), 7. 54 (br s, 'NH2),

7.60 (1 H, s, NHF, 8.07 (2 H, t, .7 6.8, 2 lysyl eNH), 8.15 (1 H, t, yOjNH 6.2, (3- alanyl NH), 8. 24 (1 H, t, J#,NH 6. 3, 1 lysyl #NH), 8. 25-8.27 (2 H, m, 2 lysyl [alpha]NH), 8. 31 and 8. 32 (2 x 1 H, 2 t, J[alpha],NH 6. 3, 2 glycyl NH), 8. 42 (1 H, d, J[alpha],NH 6. 8, 1 lysyl [alpha]NH), 8. 47 (1 H, d, J[alpha],NH 6. 3, 1 lysyl [alpha]NH), 8. 61 (2 H, d, J[alpha],NH 7. 6, 2 cystéyl NH) ; Spectre ESI-MS : m/z 1660. 4 (M-H)', 829. 9 (M-2H)2-.

Composé 22 : Spectre RMN 1H: #H(300 MHz ; H20-D20 90 :10) 1. 22-1.28 (8 H, m, 8 lysyl y-H), 1. 34-1.43 (6 H, m, 6 lysyl #-H), 1. 52 (2 H, m, 2 lysyl #-H), 1. 57-1.64 (8 H, m, 8 lysyl ss-H), 1. 65-1.99 (16 H, m, 8 2-H and 8 6-H), 2. 33 (2 H, t, J[alpha],ss 6. 3, 2 P-alanyl a-H), 2. 69-2.84 (4 H, m, 2

cystéyl 3-H and 2 lysyl s-H), 2.92 (2 H, dd, Ja,p 5.3 and J3,P- 14, 1 2 cystéyl (3-H), 2.98-3.11 (6 H, m, 6 lysyl #-H), 3. 15 and 3. 19 (2 x 2 H, 2 s, 2 CH2), 3. 23 and 3.34 (2 x

1 H, 2 ddt, Ja,p 5.3, Jp,o, 13.0 and J,NH 5.7, 2 P-alanyl (3-H), 3.38 (4 H, dd, J3,a 3.1 and J4,5 9.7, 4 4-H), 3. 76 and 3. 77 (4 H, 2 t, Ja,NH 6. 3, 2 glycyl a-H), 3. 87-3.96 (4 H, m, 4 5-H), 4. 06 (4 H, br s, 4 3-H), 4. 10-4.16 (4 H, m, 4 lysyl a-H), 4. 60-4.64 (2 H, m, 2

cystéyl 3-H), 6.73 and 7.42 (2 x 1 H, 2 s, NHH and NHH), 7.96 (1 H, t, Ja,r- 5.7, p- alanyl NH), 8. 07 (1 H, t, J[alpha],NH 6. 3, 1 lysyl ENH), 8.10 (1 H, t, Ja,NH 6. 9, 1 lysyl #NH), 8.11(2 H, t, Ja,NH 6.3, 2 glycyl NH), 8. 12 (1 H, t, JE,NH 6.8, 1 lysyl #NH), 8. 13 (2 H, d, J[alpha],NH 6.8, 2 lysyl aNH), 8. 25 (1 H, d, Ja,NH 6.7, 1 lysyl aNH), 8. 29 (1 H, d, J[alpha],NH 6. 3, 1 lysyl [alpha]NH), 8.39 (2 H, d, J[alpha],NH 7.6, 2 cystéyl NH ; Spectre ESI-MS : m/z 1732. 5 (M-H)', 865. 6 (M-2H)2-.

Composé 23 : Spectre ESI-MS : mesuré :3235.0, calculé : 3235. 6, m/z 1616. 4 (M-2H)2-, 1077. 3 (M- 3H)3-, 807. 7 (M-4H)4'.

Composé 24 : Spectre ESI-MS : mesuré :3379.0, calculé : 3379. 7, m/z 1688. 3 (M-2H)2-, 1125. 3 (M- 3H)3-, 843. 8 (M-4H)4'.

Composé 25 : Spectre ESI-MS : mesuré : 6382. 0, calculé : 6383. 0, m/z 1594. 5 (M-4H)4-, 1275. 5 (M- 5H)5-, 1062. 8 (M-6H)6-, 910. 8 (M-7H)''.

Composé 26 : Spectre ESI-MS : mesuré : 6671.0, calculé : 6671. 2, m/z 2221. 9 (M-3H)3', 1666. 7 (M-

4hot, 1333.1 (M-5H)5", 1110.8 (M-6H)6-, 952.0 (M-7H)'. EXEMPLE 2 : PREPARATION DE LIGANDS CONFORMES A L'INVENTION
Quatre ligands - qui seront dénommés ligands 21F, 22F, 23F et 24F dans ce qui suit - et répondant à la formule générale (III) dans laquelle : # m représente un nombre entier égal à 4 ou 8, . B1représente un reste acide (-)-shikimique ou (-)-quinique, . n est un nombre entier égal à 2 ou 4 (dans le cas où m est respectivement égal à 4 et
8),

. X représente le reste d'un tripeptide de séquence (SI) telle que définie dans l'exemple 1, . A représente le reste d'un dendrimère A' comprenant 2 ou 4 (dans le cas où m est respectivement égal à 4 et 8) résidus L-lysine et présentant, d'une part, 2 ou 4 groupes chloroacétyles pour sa liaison avec un nombre équivalent de tripeptides et, d'autre part, un groupe amine libre propre à permettre sa liaison avec Y, . Y représente le reste d'une molécule de fluorescéine, . M représente un groupe amide, N représente un groupe thioéther, tandis que P représente un groupe thiourée, ont été préparés en couplant les composés 1 et 3, après déprotection de leur fonction thiol dans des conditions identiques à celles décrites au ≈1.4 dudit exemple 1, avec des composés 13 et 14 ayant préalablement réagi avec du FITC.

Ainsi, comme décrit au ≈1.4 de l'exemple 1, à une solution contenant 1,5 équivalent (par groupe chloroacétyle devant réagir ultérieurement) de composé 1 ou de composé 3 dans 1 ml d'un mélange n-propanol/eau dégazés (50:50), a été ajouté 1 équivalent de n-tributylphosphine. Chaque mélange réactionnel a été laissé, sous agitation et sous azote, à température ambiante pendant 24 heures, puis les solvants ont été évaporés sous pression réduite et les résidus ont été séchés sous vide pendant 15 minutes.

Par ailleurs, 1 équivalent (1-2,5 jumelés) de composé 13 ou 14 a été mis à réagir avec 1,1 équivalent de FITC et 4 équivalents de diéthylisopropylamine dans 1 ml de DMF dégazé, à température ambiante et à l'obscurité, pendant 4 heures au terme desquelles chaque mélange réactionnel a été ajouté à une solution comprenant l'un des résidus précédemment obtenus dans 300 l d'eau dégazée. Les parois des récipients contenant lesdits mélanges réactionnels ont été rincées avec 200 l de DMF dégazé et le pH des différents mélanges réactionnels a été amené à une valeur de 8-8,5 par addition de carbonate de potassium.

Ces mélanges réactionnels ont ensuite été laissés à l'obscurité pendant 48 heures, les réactions étant contrôlées par des RP-HPLC. Puis, chaque mélange réactionnel a été dilué dans de l'eau contenant 10% d'acide acétique et lyophilisé et les résidus ont été purifiés par des RP-HPLC semi-préparatives.

Ont été ainsi obtenus :

. 1,82 mg de ligand 21F (Rdt : 46%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 75:25 en 15 minutes, puis 75 :25 65 :35 30 minutes, . 1,42 mg de ligand 22F (Rdt : 27%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 75:25 en 15 minutes, puis 75 :25 65 :35 30 minutes, # 4,56 mg de ligand 23F (Rdt : 62%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 85:15 en 15 minutes, puis 85:15 à 70 :30 30 minutes, . 3,57 mg de ligand 24F (Rdt : 50%) en utilisant un gradient (A/C) : 100 :0 à 85:15 en 15minutes, puis 85:15à 70:30 en 30 minutes, se présentant tous sous la forme d'une poudre blanche.

Les structures chimiques de ces ligands sont représentées sur les Figures 3A et 3B.

Leurs spectres ESI-MS sont les suivants : . ligand 21F : m/z 2123. 5 (M-H)+, 1062. 3 (M-2H)2+ . ligand 22F : mesuré : 2051.0, calculé : 2051.2, m/z 1026.1(M-2H)2+ . ligand 23F : mesuré : 3769. 0, calculé : 3769. 1, m/z 1254. 9 (M-3H)3-, 941. 2 (M-
4H) 4- # ligand 24F : mesuré : 3624. 0, calculé : 3624. 1, m/z 1207. 0 (M-3H)3', 905. 4 (M-
4H)4-.

EXEMPLE 3 PREPARATION DE LIGANDS CONFORMES A L'INVENTION
Deux ligands répondant à la formule générale (III) dans laquelle : # m est un nombre entier égal à 3, . B1représente un reste acide (-)-shikimique ou (-)-quinique, # n est un nombre entier égal à 0 (en sorte que X est absent), . A représente le reste d'un enchaînement linéaire A' comprenant 3 résidus L-lysine et présentant 4 groupes amines libres pour son couplage, d'une part, avec les trois molécules d'acide (-) -shikimique ou (-) -quinique et, d'autre part, avec Y, et . Y représente un composé d'intérêt formé par trois résidus Arg-Gly-Arg liés à un épitope de classe II, en l'espèce le peptide 323-339 d'ovalbumine de poule (qui sera dénommé Ova 323-339 dans ce qui suit), . M et P représentent un groupe amide,

ont été préparés.

La préparation de ces ligands a été réalisée en procédant : # en premier lieu, à la synthèse, sur un support solide, d'un peptide présentant la séquence (S2) suivante :
323 Ac- Cys [S -(tert-butylthio)] -Lys (Mtt)-Lys(Mtt)-Lys(Mtt)-Arg(Pmc)- Gly-Arg

(Pmc)-Ile-Ser('Bu)-Gln(Trt)-AIa-Val-His(Trt)-Ala-Ala-His(Trt)-Ala-
339 Glu('Bu)-Ile-Asn(Trt)-Glu('Bu)-Ala-Gly-Arg(Pmc) (S2) dans laquelle : - les 17 résidus acide aminé situés à l'extrémité C-terminale correspondent à la séquence du peptide Ova 323-339, - le groupe formé par les 3 résidus Arg-Gly-Arg situés en amont de la séquence dudit peptide Ova 323-339 représente un groupe sensible aux endopeptidases, - le groupe formé par les 3 résidus Lys-Lys-Lys correspond à l'enchaînement des
L-lysine, tandis que - le résidu S-(tert-butylthio)-L-cystéine acétylée situé à l'extrémité N-terminale est destiné à permettre un couplage ultérieur du ligand, par exemple pour l'obtention d'un dimère ; # puis, au couplage des résidus L-lysine de ce peptide et des acides (-) -shikimique et (-)-quinique (sous la forme de son dérivé tétra-O-acétylé), par formation d'une liaison amide entre les groupes s-amine desdits résidus L-lysine et les groupes carboxyles desdits acides.

Ces ligands seront dénommés respectivement ligand 25 et ligand 28 dans ce qui suit.

Le peptide de séquence (S2) a été synthétisé à une échelle de 0,25 mmole à partir de 337 mg d'une résine MBHA Rink amide chargée à 0,74 mmoles/g (Société SENN CHEMICALS), et en utilisant : - une stratégie Fmoc/butyle pour la protection des fonctions a-amine des acides aminés à coupler,

- un groupe 2,2,2,5,7,8-pentaméthylchroman-6-sulfonyle comme groupement protecteur des chaînes latérales des L-arginines, - un groupe tert-butyle comme groupement protecteur des chaînes latérales des L- sérine et acides L-glutamique, - un groupe trityle comme groupement protecteur des chaînes latérales de la
L-asparagine, de la L-glutamine et des L-histidines, - un groupe 4-méthyltrityle comme groupement protecteur des chaînes latérales des
L-lysines, - un mélange HBTU/HOBt/DIEA dans du DMF, en tant que réactifs d'activation pour le couplage des acides aminés, - un mélange pipéridine/DMF pour éliminer les groupements protecteurs Fmoc, et - des tests à la ninhydrine et au TNBS pour le contrôle des opérations de couplage et de déprotection.

Les couplages des 20 premiers acides aminés ont été réalisés de façon automatisée au moyen d'un synthétiseur APPLIED BIOSYSTEM AB231, tandis que les couplages des L-lysines et de la S-(tert-butylthio)-L-cystéine ont été effectués manuellement.

Dans tous les cas, ces couplages ont été réalisés en utilisant 4 équivalents (par fonction amine devant réagir) d'acide aminé, en présence du mélange HBTU/HOBt/DIEA (4: 4:12 éq. par fonction amine devant réagir) dans du DMF, et en activant les acides aminés pendant 1 minute avant de les ajouter à la résine. En pratique, le HBTU (4 équivalents) a été dissout dans du DMF, puis ajouté à une solution contenant l'acide aminé à coupler, du HOBt (4 équivalents) et de DIEA (8 équivalents) dans du DMF. L'ensemble a été mélangé pendant 1 minute, puis ajouté à la résine préalablement imbibée par du DMF contenant 4 équivalents de DIEA. Le mélange réactionnel résultant a été agité mécaniquement pendant toute la durée de la réaction, c'est-à-dire pendant 40 minutes pour les couplages automatisés et 45 minutes pour les couplages manuels.

Les couplages des L-lysines et de la S-(tert-butylthio)-L-cystéine ont tous été suivis d'un traitement de la résine par un mélange Ac2O/DIEA/DCM (5: 10:85) d'une durée de 10 minutes destiné à acétyler les groupes amines qui n'auraient pas été couplés.

Par ailleurs, entre chaque opération de couplage, la résine a été successivement filtrée, lavée avec du DMF (3 x 2 minutes) et du DCM (3 x 2 minutes), traitée par un mélange pipéridine/DMF (20: 80) pour obtenir le clivage des groupements Fmoc, et lavée à nouveau avec du DMF (2 x 2 minutes) et du DCM (3 x 1 minute).

A l'issue du couplage de la S-(tert-butylthio)-L-cystéine et de son acétylation, les groupes protecteurs 4-méthyltrityles des résidus L-lysine ont été hydrolysés en lavant la résine avec un mélange TFA/DCM (1:99) en flux continu jusqu'à disparition de sa coloration jaune.

Les couplages du peptide de séquence (S2) avec les acides (-)-shikimique et (-)-quinique ont été réalisés en faisant réagir, à température ambiante et pendant 45 minutes, des fractions de la résine ainsi lavée avec 4 équivalents d'acide (-)-shikimique ou 4 équivalents d'acide tétra-O-acétyl-(-)-quinique préalablement activés par 4 équivalents de HBTU et 4 équivalents de HOBt, en présence de 12 équivalents de DIEA dans du DMF, et en contrôlant les réactions par des tests à la nynhidrine et au TNBS.

Le clivage des produits résultants et leur déprotection ont été réalisés en traitant la résine par 10 ml d'un mélange TFA/H20/'Pr3SiH (95: 2,5:2,5) par gramme de résine, à température ambiante et pendant 90 minutes. A la suite de quoi, ils ont été successivement précipités dans du diéthyléther froid, centrifugés, dissout dans de l'eau, lyophilisés et purifiés par une RP-HPLC semi-préparative [gradient (A/B) : 100 :0 à 50 :50 120 minutes].

Ont été ainsi obtenus : . 48 mg de ligand 25 (Rdt : 29%) en utilisant un gradient (A/B) : 100 :0 à 50 :50 en100 minutes ; et # 25 mg d'un composé 26 (Rdt : 15%) en utilisant un gradient (A/B) : 100 :0 à 60:40 en 100 minutes.

Ce composé 26 a été soumis à une désacylation pour obtenir le ligand 28. Pour ce faire, à 23 mg du composé 28 en solution dans 10 ml de méthanol distillé sur magnésium, ont été ajoutés 300 l d'une solution 1M de méthanolate de sodium dans du méthanol. Le mélange réactionnel a été agité à température ambiante, sous azote, pendant 45 minutes et la réaction a été stoppée par l'addition de quelques

gouttes d'acide acétique. Le brut réactionnel a été concentré sous pression réduite et a été purifié par RP-HPLC en utilisant un gradient (A/B) : 100 :0 à 80 : 20 en 30 minutes, puis 80 : 20 à 70 : 30 en 25 minutes, puis isocratique pendant 10 minutes pour conduire à 15 mg de ligand 28 (Rdt : 75%).

Les spectres ESI-MS des ligands 25 et 28 sont les suivants : # ligand 25 : mesuré : 3228. 0, calculé : 3228. 7, m/z 1076. 9 (M+3H)3+, 808. 0 (M+4H)4+, 646. 7 (M+5H)5+ . ligand 28 : mesuré: 3283, calculé : 3282. 7, m/z 1641. 9 (M+2H)2+, 1094. 9 (M+3H)3+, 821. 4 (M+4H)4+,657.4 (M+5H)5+.

EXEMPLE 4 : ACTIVITE BIOLOGIQUE DES LIGANDS CONFORMES A L'INVENTION
L'activité biologique des ligands conformes à l'Invention a été vérifiée par une série d'expérimentations in vitro visant à tester leur aptitude à être internalisés, via le récepteur du mannose, par des cellules dendritiques obtenues à partir de sang périphérique humain.

Les expérimentations rapportées ici ont été réalisées avec quatre composés différents, à savoir : # les ligands liés à de la fluorescéine 23F et 24F dont la préparation est décrite dans l'exemple 2 ci-avant, # un composé, qui sera dénommé composé 30 dans ce qui suit et se différenciant des ligands 23F et 24F en ce qu'il comprend 8 chaînes polyhydroxylées de configuration galacto au lieu des 8 restes acide (-)-shikimique ou (-)-quinique, ce composé étant destiné à servir de "témoin" négatif en raison de la faible affinité que présente le récepteur du mannose vis-à-vis du D-galactose et des composés apparentés à ce dernier, et . un composé, qui sera dénommé composé 31 dans ce qui suit et se présentant sous la forme d'un dendrimère constitué par 8 résidus L-lysine et 8 restes
D-mannose, ce composé étant, lui, destiné à servir de "témoin" positif puisque le récepteur du mannose se lie préférentiellement au D-mannose.

IV.1- Protocole a) Préparation des composés 30 et 31

Le composé 30 a été préparé selon un protocole opératoire consistant : # dans un premier temps, à synthétiser un tripeptide de séquence (SI) dans des conditions analogues à celles décrites au ≈1. 2 de l'exemple 1 ci-avant pour la préparation du composé 1 ; . puis, après clivage de ce tripeptide, par traitement de la résine par 25 ml d'un mélange TFA/H2O/ME2S (95: 2,5:2,5) à la température ambiante pendant 2 heures, à coupler 1 molécule dudit tripeptide avec 2 molécules de D-galactonolactone, en faisant réagir 160 mg (0,90 mmoles) de D-galactonolactone avec une solution contenant 140 mg (0,22 mmoles) de tripeptide et 0,79 mmoles de DIEA dans 5 ml de méthanol porté à reflux pendant 24 heures, puis en ajoutant à ce mélange réactionnel 80 mg (0,45 mmoles) de D-galactonolactone supplémentaires et maintenant le reflux pendant encore 24 heures ; et # enfin, en couplant, dans des conditions identiques à celles décrites dans l'exemple 2

ci-avant, la lVr,NE di-[(2R,3R,4S,SR)-2,3,4,5-tétrahydroxy-1-hexane-carbox-1-yl]L-lysyl-[5'-(rerr-butylthio)]-L-cystéyl-glycine ainsi obtenue avec un composé 14 ayant préalablement réagi avec du FITC.

Le composé 31 a été, quant à lui, préparé en traitant, un composé 15 par du 2-thioethyl-a,D-mannopyranoside, puis en faisant réagir le composé résultant avec du FITC. b) Obtention des cellules dendritiques
Les cellules dendritiques ont été obtenues par différenciation de monocytes, eux-mêmes isolés à partir de cellules mononuclées de sang périphérique humain, selon un protocole dérivé de celui décrit par AVRAMEAS et al. (Eur. J.

Immunol., 1996,26, 394-400).

Pour ce faire, les cellules mononuclées présentes dans des prélèvements de sang périphérique humain (fournis par l'Etablissement de Transfusion Sanguine du Nord-Pas de Calais, FRANCE) ont été séparées des autres éléments du sang par centrifugation en gradient de densité Ficoll/Paque(Société PHARMACIA), puis lavées 3 fois, par centrifugation, avec du milieu RPMI 1640 (Société GIBCO) contenant 3 mM d'EDTA.

Les cellules mononuclées ainsi isolées ont été mises en suspension, à 37 C et sous une atmosphère à 5% de CO2, dans un milieu de culture comprenant du milieu RPMI 1640 supplémenté par 5.10-5 M de p-mercaptoéthanol (Société MERCK), 2 mM de L-glutamine (Société MERCK), 1 mM de pyruvate de sodium (Société GIBCO), 10% de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur (Société GIBCO), 100 UI/ml de pénicilline et par 100 g/ml de streptomycine (toutes deux provenant de la Société SPECIA).

Puis, la suspension résultante a été répartie sur des boîtes de Pétri de 10 cm de diamètre, à raison de 8 à 12.10 cellules par disque. L'enrichissement en monocytes a été obtenu en laissant adhérer ces cellules aux boîtes, à 37 C et dans un incubateur à CO2 (5%) humidifié, pendant 3 à 4 heures.

Après élimination des cellules non-adhérentes, les cellules adhérentes ont été remises en suspension dans du milieu de culture comme décrit ciavant, mais comprenant de plus 800 U/ml de facteur de croissance des lignées granulocytaires et macrophagiques humain recombinant (Société PEPRO TECH) et 1000 U/ml d'interleukine-4 humaine recombinante (Société PEPRO TECH), à raison de 106 cellules par ml de milieu. Elles ont été alors mises en culture, dans des plaques de culture cellulaire de 24 puits et dans les mêmes conditions de température et d'atmosphère que précédemment, pendant 6 à 8 jours au cours desquels il y a différentiation des monocytes vers les cellules dendritiques (ces dernières étant faiblement adhérentes). c) Analyse par cytométrie de flux des cellules non-adhérentes recueillies
Afin de vérifier que les cellules non-adhérentes recueillies à l'étape b) ci-avant présentent bien les antigènes de surface caractéristiques des cellules dendritiques, une partie de ces cellules ont été lavées 2 fois avec du tampon PBS contenant 0,03 mg/ml de sérum albumine bovine, puis mises à incuber, sur de la glace et pendant 30 minutes, avec un anticorps monoclonal de souris dirigé contre le récepteur du mannose humain et conjugé à de la phycoérythrine (Société BECTON DICKINSON) et : # soit un anticorps monoclonal de souris dirigé contre l'antigène CDla humain, qui représente l'un des principaux antigènes de surface des cellules dendritiques,

. soit un anticorps monoclonal de souris dirigé contre l'antigène CD 14 humain, qui représente, lui, l'un des antigènes de surface propres aux monocytes et macrophages, ces deux derniers anticorps étant marqués par du FITC (Société BECTON DICKINSON).

A l'issue de ces incubations, les cellules ont été lavées avec du tampon PBS et remises en suspension dans ce même tampon. La fluorescence leur étant associée a alors été analysée par cytofluorométrie, au moyen d'un cytomètre EPICS XL-MCL (Société COULTER CORPORATION). d) Internalisation des ligands conformes à l'Invention parles cellules dendritiques
Les tests visant à apprécier l'internalisation des ligands 23F et 24F ont été réalisés selon le protocole suivant : des cellules non-adhérentes recueillies à l'étape b) ci-avant ont été lavées 2 fois avec du tampon PBS contenant 1 mM de chlorure de calcium. A la suite de quoi, ces cellules ont été préincubées, à 37 C et pendant 10 minutes, puis mises à incuber, à 37 C et pendant 20 minutes, avec différentes solutions contenant chacune l'un des composés à tester, à une concentration comprise entre 1 et 10 M. Les cellules ont ensuite été lavées 3 fois avec du tampon PBS froid et fixées pendant 20 minutes dans du paraformaldéhyde à 2%.

La fluorescence associée à ces cellules a été alors appréciée par une analyse FACScan au moyen du cytomètre précité.

Par ailleurs, afin de vérifier que l'internalisation des ligands 23F et 24F par les cellules dendritiques est bien liée à une reconnaissance de ces ligands par le récepteur du mannose et non, à un autre mécanisme, ces tests ont été reconduits en préincubant les cellules en présence de solutions de mannane extrait de Saccharomyces cerevisiae (Société SIGMA), de concentrations comprises entre 10-4 et 10 mg/ml. Le mannane est, en effet, connu pour être internalisé de manière sélective via le récepteur du mannose.

II.2 - Résultats
La Figure 4 illustre, sous la forme de courbes, les valeurs moyennes des intensités de fluorescence présentées par les cellules dendritiques après une

incubation en présence de solutions comprenant respectivement de 1 à 10 M de

ligand 23F (#*#), de ligand 24F (##), de composé 30 ( # a # ) et de composé 31 (-#-). Sont exprimées, en ordonnées, les valeurs moyennes des intensités de fluorescence et, en abscisses, les concentrations des solutions.

Cette Figure montre qu'une incubation des cellules dendritiques, d'une durée de 20 minutes et réalisée en présence d'une solution dosée à 1 M de ligand 23F ou de ligand 24F est suffisante pour obtenir une internalisation de ces ligands par ces cellules. Elle montre également que cette internalisation est spécifique puisque le composé 30 (porteur de chaînes polyhydroxylées) ne pénètre pratiquement pas dans les cellules dendritiques et ce, quelle que soit la dose de ce composé utilisée pour l'incubation de ces cellules, alors que le composé 31 (porteur de restes D-mannose) se retrouve très largement dans lesdites cellules dendritiques.

Par ailleurs, la Figure 5 illustre, sous la forme de courbes, les valeurs moyennes des intensités de fluorescence présentées par les cellules dendritiques lorsque celles-ci ont été soumises successivement à une préincubation en présence de solutions de mannane de concentrations comprises entre 10-4 et 10 mg/ml, puis à une incubation avec des solutions comprenant 5 M de ligand 23F (-#-), de ligand 24F (-#-), de composé 30 (---#---) ou de composé 31 (-ci-). Sont exprimées, en ordonnées, les valeurs moyennes de fluorescence et, en abscisses, les concentrations des solutions de mannane.

Cette Figure montre que l'intemalisation, par les cellules dendritiques, des ligands 23F et 24F, ainsi que celle du composé 31 diminue drastiquement au fur et à mesure que la concentration en mannane augmente. Ceci signe l'existence d'une forte compétition entre ces ligands et le mannane vis-à-vis du récepteur du mannose et vient confirmer que l'intemalisation des ligands conformes à l'Invention par les cellules dendritiques s'effectue bien par l'intermédiaire du récepteur du mannose.

Claims

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'au moins un composé répondant à la formule générale (I) ci-après :

dans laquelle : - a à 1 représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1 ; - R1 à R12 peuvent, indépendamment les uns des autres, # soit former, avec un substituant porté par un atome de carbone adjacent à celui qui les porte, un carbonate, thiocarbonate, carbamate, urée, thiourée, cétal, acétal, sulfate, disiloxanylidène, silylène, époxyde, cyclopropane ou encore une aziridine, # soit former, avec un substituant porté par le même carbone que celui qui les porte, un groupe carbonyle, thiocarbonyle, oxime ou dérivé d'oxime, hydrazone ou dérivé d'hydrazone, . soit représenter-R', -OR',-OCOR', -OC02R', -OCSOR',-OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R",-OPO(OR')(OR"), -COR', -C02R' ou l'un de ses dérivés, -CONR'R", -CSNR'R", -NR'R", -NR'NR"R'", -NR'OR", -NR'COR", -NR'CSR", -NR'C02R", -NR'CONR"R"', -NR'CSNR"R"', -NR'CSOR",-SR', -S03R', -NCO, ou encore-NCS, dans lesquels R', R" et R"', qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe protecteur ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes, et porter un groupe nucléophile ou un groupe électrophile ; ledit composé de formule (I) étant tel qu'au moins deux atomes de carbone adjacents

du cycle portent chacun un groupe hydroxyle éventuellement protégé ou un substituant susceptible d'être transformé, par une réaction appropriée, en un groupe hydroxyle, et qu'au moins un autre atome de carbone du cycle porte un groupe permettant de le lier à un autre composé ; pour la préparation d'un ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose.

2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle le composé est choisi parmi les composés répondant à la formule générale (I) dans laquelle les groupes hydroxyles éventuellement protégés ou les substituants susceptibles d'être transformés en groupes hydroxyles, qui sont portés par deux atomes de carbone adjacents du cycle, sont en positions trans.

3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans laquelle le composé est choisi parmi les composés répondant à la formule générale (I) qui comprennent, sur un atome de carbone autre que ceux portant les deux groupes hydroxyles éventuellement protégés ou les deux substituants précurseurs d'un groupe hydroxyle, un groupe carboxyle.

4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle le composé est l'acide (-) -shikimique ou l'un de ses dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans pseudo-di-équatoriaux que présente ce composé.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle le composé est l'acide (-) -quinique, de préférence sous une forme protégée, ou l'un de ses dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans vicinaux que présente ce composé.

6. Composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, ou en tant que composé intermédiaire pour la préparation d'un tel ligand, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (III) ci-après : (B1M)m(XN)nA(PY)y (III) dans laquelle :

16 atomes d'halogènes ;

dans lesquelles : * a à k représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1 ; * Ri à R1i peuvent, indépendamment les uns des autres, # soit former, avec un substituant porté par un atome de carbone adjacent à celui qui les porte, un carbonate, thiocarbonate, carbamate, urée, thiourée, cétal, acétal, sulfate, disiloxanylidène, silylène, époxyde, cyclopropane ou encore une aziridine, # soit former, avec un substituant porté par le même carbone que celui qui les porte, un groupe carbonyle, thiocarbonyle, oxime ou dérivé d'oxime, hydrazone ou dérivé d'hydrazone, . soit représenter -R', -OR', -OCOR', -OC02R', -OCSOR', -OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R",-OPO(OR')(OR"), -COR', -C02R' ou l'un de ses dérivés,-CONR'R", -CSNR'R", -NR'R", -NR'NR"R"', -NR'OR", -NR'COR",-NR'CSR", -NR'C02R", -NR'CONR"R"', -NR'CSNR"R"', -NR'CSOR", -SR' ou encore -S03R', dans lesquels R', R" et R"', qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe protecteur ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à

- B répond à une ou plusieurs formules générales (Il-a) ou (II-b) ci-après :

1 à 32 groupes fonctionnels F4 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes BI, tandis que A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FIpermettant sa liaison avec de 1 à 4 restes Y, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes X ; - Y représente le reste d'un composé Y' qui est soit un composé d'intérêt, soit un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt,

Rss et R# représente, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes ; - m est un nombre entier compris entre 1 et 32 ; - n est un nombre entier qui est : * soit égal à 0, auquel cas A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FI permettant sa liaison avec de 1 à 4 restes Y, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes B1 * soit compris entre 1 et 32, auquel cas X représente le reste d'un composé X' comprenant un groupe fonctionnel F3 permettant sa liaison avec le reste A et de

* w est un nombre entier égal à 0 ou à 1, et W représente -rua~, -0-Rc-, -OCO-Rc-, -OCO2-R"-, -OCSO-R"-, -OCSS-R"-, -OSO2-Ra-, -OS03-R"-, -CO-R"-, -CO2-R"-, -S-R"-, -SO3-Ra-, -ON(RP)-Ra-, -OPO(ORI)O-Rc-, -CC)N(R)-e-, -CSN(R')-Ra-, -N(RP)-Rc-, -NRN(R8)-Ra-, -N(NRPR5)-Ra-, -NRO-R"-, -N(ORP)-Ra -, -NRPCO-Ra -, -N(CORP)-Ra -, -NRPCS-Ra -, -N(CSR)-Rc-, -NRPC02-R"-, -N(CO2R)-Ra-, -NRPCON(R6)-Ra-, -N(CONRPRo)-Ra~, -NRPCSN(R5)-Ra-, -N(CSNRPR5)-Ra-, -NRCSO-R"- ou -N(CSOR)-R"-, dans lesquels Ra représente une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes, tandis que

- M, N et P représentent chacun un groupe de liaison, respectivement entre Blet A quand n = 0 ou Blet X quand n est différent de 0, entre X et A quand n est différent de 0, et entre A et Y, et sont choisis, indépendamment les uns des autres, parmi les groupes oxime, hydrazone, amide, ester, thioester, hydrazide, éther, thioéther, amine, carbonate, carbamate, thiocarbonate, thiocarbamate, urée, thiourée et thiazolidine.

7. Composé selon la revendication 6, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' qui est formé d'un enchaînement comprenant plusieurs restes d'un composé au moins trifonctionnel liés les uns aux autres par des liaisons covalentes, et propre à offrir, au niveau des groupes fonctionnels libres de ces restes, plusieurs sites d'ancrage pour le ou les composés de formule générale (I) ou, lorsque X est présent, le composé X', et pour le composé Y'.

8. Composé selon la revendication 7, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' comprenant de 2 à 32 et, de préférence, de 4 à 16 restes d'un composé trifonctionnel.

9. Composé selon la revendication 8, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' comprenant en tant que composé trifonctionnel, un acide aminé choisi parmi le groupe constitué par la lysine, l'hydroxylysine, la sérine, la thréonine, la cystéine, l'omithine, l'acide aspartique et l'acide glutamique.

10. Composé selon la revendication 9, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' comprenant en tant que composé trifonctionnel, de la lysine.

11. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, caractérisé en ce que X représente le reste d'un composé X' qui est formé d'un enchaînement comprenant de 2 à 5 restes d'un ou plusieurs composés, liés les uns aux autres par des liaisons covalentes, et dont l'un des restes terminaux porte un ou plusieurs groupes fonctionnels F4 pour sa liaison avec un ou plusieurs restes B'.

12. Composé selon la revendication 10, caractérisé en ce que X représente le reste d'un oligopeptide.

13. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 12, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (III) dans laquelle m est un nombre entier compris entre 4 et 16, n est un nombre entier compris entre 2 et 8, X

représente le reste d'un oligopeptide comprenant de 2 à 4 résidus acide aminé et présentant, à son extrémité N-terminale, deux groupes fonctionnels F4, tandis que A représente le reste d'un enchaînement comprenant de 2 à 8 résidus de lysine et se présentant sous la forme d'un dendrimère.

14. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 13, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (III) dans laquelle Bl représente le reste d'un ou plusieurs composés choisis parmi l'acide (-)-shikimique, l'acide (-)-quinique et leurs dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans vicinaux que présentent ces composés.

15. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 14, caractérisé en ce que Y représente le reste d'un composé Y' qui est choisi parmi les antigènes, les anticorps, les acides nucléiques et les fragments d'acides nucléiques codant pour une protéine d'intérêt ou pour un ou plusieurs déterminants antigéniques de cette protéine, les fractions bactériennes et virales purifiées, les principes actifs médicamenteux et les marqueurs détectables.

16. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 14, caractérisé en ce que Y représente le reste d'un composé hydrophobe.

17. Composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un complexe non-covalent entre un composé répondant à la formule générale (III) telle que définie dans l'une quelconque des revendications 6 à 14 et 16 mais dans laquelle Y représente le reste d'un composé Y' capable de former un tel complexe avec un composé d'intérêt, et un composé d'intérêt.

18. Composé selon la revendication 17, caractérisé en ce que le composé d'intérêt est une protéine, un peptide, une lipoprotéine, un acide nucléique ou un fragment d'acide nucléique, un liposome ou une association moléculaire présentant des bicouches lipidiques.

19. Composé utile en tant que composé intermédiaire pour la préparation d'un ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, caractérisé en ce qu'il répond à la

dans laquelle : * a à k représentent, indépendamment les uns des autres, un nombre entier égal à 0 ou à 1 ; * R1 à Ri peuvent, indépendamment les uns des autres, # soit former, avec un substituant porté par un atome de carbone adjacent à celui qui les porte, un carbonate, thiocarbonate, carbamate, urée, thiourée, cétal, acétal, sulfate, disiloxanylidène, silylène, époxyde, cyclopropane ou encore une aziridine, # soit former, avec un substituant porté par le même carbone que celui qui les porte, un groupe carbonyle, thiocarbonyle, oxime ou dérivé d'oxime, hydrazone ou dérivé d'hydrazone, . soit représenter-R', -OR',-OCOR', -OC02R', -OCSOR', -OCSSR', -OS02R', -OS03R', -ONR'R", -OPO (OR')(OR"), -COR', -C02R' ou l'un de ses dérivés,-CONR'R", -CSNR'R", -NR'R", -NRNR"R"", -NR'OR", -NR'COR", -NR'CSR", -NR'C02R", -NR'CONR"R"', -NR'CSNR"R"', -NR'CSOR", -SR' ou encore -S03R', dans lesquels R', R" et R"', qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome d'halogène, un groupe protecteur ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16

formule générale (V) ci-après : (B2M)m(XN)nA (V) dans laquelle : - Brépond à la formule générale (IV) ci-après :

32 restes B2,

B2étant tel que les substituants R1 et R3 ou les substituants R4 et R6 représentent chacun un groupe hydroxyle éventuellement protégé ou un substituant susceptible d'être transformé, par une réaction appropriée, en un groupe hydroxyle ; - m est un nombre entier compris entre 1 et 32 ; - n est un nombre entier qui est : * soit égal à 0, auquel cas A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FIpermettant sa liaison avec un composé d'intérêt ou avec un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à

-OC02-R--, -OCSO-R a -, -OCSS-Ra-, -OSO2-Ra-, -OS03-R'\ -CO-Ro-, -CO2-Rn-, -S-Ra-, -S03-R"-, -ON(Rf3)-RQ-, -OPO(ORf3)O-RQ-, -CON(Rf3)-RQ-, -CSN(Rf3)-RQ-, -N(RP)-Ra-, -NRR5)--, -N(NRf3R )-RQ-, -NRf30-RQ-, -N(ORf3)-RQ-, -NRf3CO-RQ-, -N(CORf3)-RQ-, -NRf3CS-RQ-, -N(CSRf3)-RQ-, -NRaCO2-Ra-, -N(C02R)-Ra-, -NRf3CON(Rô)-RQ-, -N(CONRf3Rô)-RQ-, -NRf3CSN(RÔ)-RQ-, -N(CSNRf3RÔ)-RQ-, -NRf3CSO-RQ- ou -N(CSORf3)-RQ-, dans lesquels Ra représente une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes, tandis que R et R# représente, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ou une chaîne carbonée linéaire, ramifiée ou cyclique, saturée ou insaturée, comprenant de 1 à 18 atomes de carbone et éventuellement de 1 à 7 groupes accepteurs ou donneurs de liaison hydrogène, ladite chaîne carbonée pouvant de plus comprendre de 1 à 16 atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à 16 atomes d'halogènes ;

16 atomes d'halogènes ; * w est un nombre entier égal à 0 ou à 1, et W représente -R[alpha]-, -O-R[alpha]-, -OCO-Ra-,

atomes choisis parmi l'oxygène, le soufre et l'azote, et être substituée par 1 à

1 à 32 groupes fonctionnels F4 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes B2, tandis que A représente le reste d'un composé A' comprenant de 1 à 4 groupes fonctionnels FI permettant sa liaison avec un composé d'intérêt ou un composé capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt, et de 1 à 32 groupes fonctionnels F2 permettant sa liaison avec de 1 à 32 restes X ; - M et N représentent chacun un groupe de liaison, respectivement entre B2et A quand n = 0 ou B2et X quand n est différent de 0, et entre X et A quand n est différent de 0, et sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, parmi les groupes oxime, hydrazone, amide, ester, thioester, hydrazide, éther, thioéther, amine, carbonate, carbamate, thiocarbonate, thiocarbamate, urée, thiourée et thiazolidine.

* soit compris entre 1 et 32, auquel cas X représente le reste d'un composé X' comprenant un groupe fonctionnel F3 permettant sa liaison avec le reste A et de

20. Composé selon la revendication 19, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A qui est formé d'un enchaînement comprenant plusieurs restes d'un composé au moins trifonctionnel, liés les uns aux autres par des liaisons covalentes, et propre à offrir, au niveau des groupes fonctionnels libres de ces restes, plusieurs sites d'ancrage pour le ou les composés de formule générale (I) ou, lorsque X est présent, le composé X', et pour le composé Y'.

21. Composé selon la revendication 20, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' comprenant de 2 à 32 et, de préférence, de 4 à 16 restes d'un composé trifonctionnel.

22. Composé selon la revendication 21, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' comprenant en tant que composé trifonctionnel, un acide aminé choisi parmi le groupe constitué par la lysine, l'hydroxylysine, la sérine, la thréonine, la cystéine, l'ornithine, l'acide aspartique et l'acide glutamique.

23. Composé selon la revendication 22, caractérisé en ce que A représente le reste d'un composé A' comprenant en tant que composé trifonctionnel, de la lysine.

24. Composé selon l'une quelconque des revendications 19 à 23, caractérisé en ce que X représente le reste d'un composé X' qui est formé d'un enchaînement comprenant de 2 à 5 restes d'un ou plusieurs composés, liés les uns aux autres par des liaisons covalentes, et dont l'un des restes terminaux porte un ou

plusieurs groupes fonctionnels F4 pour sa liaison avec un ou plusieurs restes B2.

25. Composé selon la revendication 24, caractérisé en ce que X représente le reste d'un oligopeptide.

26. Composé selon l'une quelconque des revendications 19 à 25, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (V) dans laquelle m est un nombre entier compris entre 4 et 16, n est un nombre entier compris entre 2 et 8, X représente le reste d'un oligopeptide comprenant de 2 à 4 résidus acide aminé et présentant, à son extrémité N-terminale, deux groupes fonctionnels F4, tandis que A représente le reste d'un enchaînement comprenant de 2 à 8 résidus de lysine et se présentant sous la forme d'un dendrimère.

27. Composé selon l'une quelconque des revendications 19 à 26, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (V) dans laquelle B2 représente le reste d'un ou plusieurs composés choisis parmi l'acide (-) -shikimique, l'acide (-) -quinique et leurs dérivés obtenus par substitution d'un ou plusieurs atomes de carbone du cycle autres que ceux portant les deux groupes hydroxyles trans vicinaux que présentent ces composés.

28. Composé utile en tant que composé intermédiaire pour la préparation d'un ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, caractérisé en ce qu'il répond à la formule générale (VI) ci-après : (B'M)mA (VI) dans laquelle : - Blet M sont tels que définis dans la revendication 6, - m est un nombre entier compris entre 50 et 500, tandis que - A représente le reste d'un polymère capable de former un complexe non-covalent avec un composé d'intérêt.

29. Composé selon la revendication 28, caractérisé en ce que le polymère formant le reste A est un polymère cationique du type polymère de lysine ou polymère d'éthylèneimine.

30. Composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de

tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose, caractérisé en ce qu'il se présente sous la forme d'un complexe non-covalent entre un composé répondant à la formule générale (VI) telle que définie dans la revendication 28 ou la revendication 29, et un composé d'intérêt.

31. Utilisation d'au moins un composé répondant à la formule générale (I) pour la préparation d'un médicament capable de se lier au récepteur du mannose ou à tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose.

32. Composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose selon l'une quelconque des revendications 6 à 15,17, 18 et 30 pour l'utilisation en tant que médicament.

33. Composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose selon l'une quelconque des revendications 6 à 15, 17, 18 et 30 pour l'utilisation in vitro.

34. Réactif de diagnostic, caractérisé en ce qu'il comprend un composé utile en tant que ligand du récepteur du mannose ou de tout récepteur de la famille des C-lectines apparenté au récepteur du mannose selon l'une quelconque des revendications 6 à 15,17, 18 et 30.