FR2775693A1 - Utilisation d'un polymere nucleique comme marqueur d'authenticite de produits et moyens mis en oeuvre pour sa revelation - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne l'utilisation d'un polymère nucléique, modifié ou non, comme marqueur pour l'identification et la vérification de l'authenticité de produits.Le principe de l'invention consiste en l'ajout dans un produit d'un polymère nucléique, modifié ou non, et à sa révélation consécutive à sa capture et/ ou sa concentration par une méthode simple, sensible et rapide, spécifique du polymère nucléique ajouté dans le produit.L'invention revendique un procédé associant des méthodes de modifications physiques ou chimiques d'acides nucléiques ou plus généralement de polymères nucléiques, des méthodes de capture du polymère nucléique contenu dans l'échantillon et des méthodes de mise en évidence de I a présence de ce polymère nucléique comme méthode de vérification de l'authenticité du produit.Le procédé selon l'invention est particulièrement destiné à des produits pouvant faire l'objet de contrefaçons.
Description
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BREVET D'INVENTION
UTILISATION D'UN POLYMERE NUCLEIQUE COMME MARQUEUR D'AUTHENTICITE DE
PRODUITS ET MOYENS MIS EN OEUVRE POUR SA REVELATION
POSITION DU PROBLEME ET BACKGROUND DE L'INVENTION
De nombreux produits font l'objet de contrefaçons.
Des méthodes d'analyse de l'état de la technique permettent de déceler les contrefaçons mais celles-ci sont généralement restreintes à des
laboratoires d'analyse du fait du matériel spécifique mis en oeuvre.
Or, un moyen de lutte efficace contre cette fraude nécessite une méthode de
détection rapide et sensible réalisable sur le site mis en cause.
D'autre part, chaque produit ayant une spécificité propre, la recherche d'authenticité du produit est basée sur la mesure d'un ou plusieurs paramètres qui lui sont spécifiques. Par rapport au procédé selon l'invention,
l'état de la technique antérieure est, à notre connaissance, inexistant.
L'intérêt de la présente invention repose sur l'utilisation d'un marqueur introduit au cours de l'étape de fabrication ou de conditionnement dans les produits, la présence dudit marqueur authentifiant l'origine du produit. Le marqueur doit répondre à plusieurs contraintes: - il doit être stable dans le produit - il doit être sans danger dans les cas o il peut être en contact avec l'organisme (ingéré dans des aliments, ou en contact avec la peau dans le cas de produits cosmétiques par exemple...)
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- il doit pouvoir être détecté facilement avec une sensibilité suffisante, de telle sorte qu'un apport minimum soit réalisé dans le produit, pour ne pas en particulier modifier ses propriétés physiques, chimiques, rhéologiques, organoleptiques... Concernant le background de l'invention, I'ajoût d'un acide nucléique connu et caractérisé, ou plus généralement d'un polymère de bases azotées, ou "Polymère Nucléique", n'a jamais été à notre connaissance utilisé comme marqueur d'identification ou d'authenticité d'un produit. La révélation de l a présence de matériel nucléique dans un échantillon est par contre très classique dans des laboratoires spécialisés. Cette même révélation, hors du contexte d'un laboratoire n'a pas non plus été réalisée à notre connaissance, non par manque de moyens techniques imaginables par l'homme de l'art, mais
plutôt par manque d'intérêt.
PROCEDE SELON L'INVENTION
Le marqueur utilisé dans le procédé selon la présente invention est un polymère nucléique, soit l'Acide RiboNucléique (ci-après nommé "ARN") ou préférentiellement l'Acide DésoxyriboNucléique (ci-après nommé "ADN"), ou
le "Peptide Nucleic Acid" (ci-après nommé PNA).
L'ADN est un constituant de toute cellule vivante, eucaryote ou procaryote, et
par là-même naturel.
Puisque nous consommons dans notre nourriture de l'ADN, en particulier d'origine végétale, la source d'ADN utilisée sera préférentiellement végétale, lI'ADN dcorigine animale ou bactérienne pouvant présenter un risque du fait de certaines séquences (oncogènes ou résistance aux antibiotiques par exemple) mais surtout de contaminants possibles, tels que les prions. Il est également
possible d'utiliser de l'ADN synthétisé chimiquement ou enzymatiquement.
L'intérêt de l'ADN en tant que marqueur est sa remarquable résistance et sa stabilité (on a en particulier retrouvé de l'ADN dans des fossiles datant de
plusieurs millions d'années).
Un dérivé de l'ADN, "Polyamide Nucleic Acid" ou "Peptide Nucleic Acid" (PNA), constitué comme les acides nucléiques (ADN et ARN) d'une succession de bases azotées, mais liées à du N-(2-aminoéthyl)glycine au lieu du sucre (désoxyribose ou ribose) a été décrit comme présentant de nombreuses propriétés similaires à celles des acides nucléiques, en particulier sur les appariements de brins et les interactions ADN- protéines [Nielsen et al. (1991)Science, 254, 1497-1500; Egholm etal. (1993)Nature, 365, 566-568; Wittung et al. (1994) Nucleic Acids Research, 22, 5371-5377]. Ce PNA peut
donc être indifféremment être utilisé en lieu et place d'un acide nucléique.
D'autre part, la structure primaire d'un acide nucléique ou PNA, définie comme une succession de bases azotées (Adénine, Cytosine, Guanine et Thymine pour l'ADN; Adénine, Cytosine, Guanine et Uracile pour l'ARN; indifféremment les 5 bases pour le PNA) liées à un polymère de sucre, est modifiable, ce qui permet une spécificité de détection selon la modification apportée. Ces modifications peuvent être d'origine chimique, mais aussi d'origine physique. L'intérêt d'une modification utilisant un agent physique réside dans le fait qu'il n'y a pas d'apport d'un autre agent qui pourrait se retrouver
ensuite dans le produit qui sera désigné "Produit Marqué".
Enfin, les techniques biochimiques, immunologiques et de biologie moléculaire, en particulier, permettent de concentrer et/ou d'atteindre des 2s seuils de détection très faibles (pour l'ADN, de l'ordre de 1 picogramme, soit
l'équivalent d'un dixième du contenu d'une seule cellule humaine).
Suite à une détection rapide de terrain, une analyse plus poussée peut être réalisée caractérisant l'intégralité ou une partie de la structure primaire de
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I'ADN marqueur peut être réalisée dans un laboratoire disposant des
techniques et du matériel adéquat.
Le procédé selon l'invention, qui revendique l'utilisation d'un polymère nucléique, constitué d'ADN ou ARN ou de PNA, modifié dans sa structure primaire (définie comme la succession de bases azotées associées au polymère de sucres ou de N-(2-aminoéthyl)glycine) sous une forme altérée ou lésée en tant que marqueur d'identification ou d'authenticité de produit, peut être décrit de la façon suivante: - purification du polymère nucléique qui sera utilisé comme marqueur (cette partie n'est pas revendiquée et ne sera donc pas décrite) - génération des dommages sur le polymère nucléique - concentration et/ou purification du polymère nucléique contenu dans un volume d'échantillon du produit à identifier révélation du polymère nucléique Les produits concernés, faisant l'objet de contrefaçons, et donc dans lesquels le marqueur aura été ajouté au cours de l'étape de fabrication ou de conditionnement, générant ainsi le Produit Marqué, incluent par exemple (liste non exhaustive) des aliments d'origine animale ou végétale (comme les alcools, les huiles, les foies gras...), des parfums ou des produits chimiques
(huiles, pétrole..)...
Génération de dommages La génération de dommages caractéristiques et donc identifiables sur l e polymère nucléique peut être réalisée selon les exemples suivants (les exemples étant données pour l'ADN):
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L'irradiation d'ADN par un rayonnement UVC (longueur d'onde classiquement utilisée de 254nm) conduit à des lésions de type dimères de pyrimidines
(essentiellement des pontages entre thymine) et des photoproduits 6-4.
Les radiations ionisantes induisent selon la dose des cassures sur l'un ou les deux brins de l'ADN. Les doses utilisées sont de l'ordre de quelques Gray (Gy)
et un rayonnement, de type y, peut être généré par une source de 60Co.
Des cassures simple brin peuvent être générées en portant l'ADN à 70 C pendant 10 minutes dans une solution contenant 1 OOmM de chlorure de
sodium et 1 OmM de citrate de sodium a un pH acide, de l'ordre de 5.
Des dommages de type oxydatif peuvent être générés en incubant l'ADN avec de Il'eau oxygénée à des concentrations de l'ordre du millimolaire pendant un temps de l'ordre de 30 minutes à une température préférentiellement de 37 C, en éclairant l'ADN en lumière blanche en présence de bleu de méthylène à des concentrations de quelques nanogrammes par millilitre, ou en irradiant
avec des rayons y. Il y a en particulier dans ces cas formation de 8-
hydroxyguanine (également appelée 8-oxo-7, 8-dihydro 2'-désoxyguanosine, oh8dG). Selon le produit dans lequel l'ADN lésé sera utilisé comme marqueur d'authenticité, d'autres méthodes pour générer les I ésions peuvent être utilisées. Celles-ci regroupent d'une manière générale les composés génotoxiques qui par définition génèrent des dommages, esssentiellement sur
les bases azotées, sur l'ADN ou l'ARN et donc par suite sur le PNA.
Il est également possible de greffer chimiquement une molécule sur un polymère nucléique même si cette molécule n'est pas naturellement réactive
2.5 vis-à-vis des polymères nucléiques.
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Concentration et/ou purification de l'ADN La concentration et révélation de l'ADN originellement contenu dans I e produit à caractériser peuvent être réalisées de différentes manières, les critères importants à appliquer étant la simplicité, la sensibilité et I a fiabilité du test. L'homme de l'art connaît diverses manières de purifier et de concentrer l'ADN
issu d'un échantillon.
La manière la plus classique de purifier l'ADN, utilisée en laboratoires, repose sur une étape d'extraction phénolique (phénol auquel on a éventuellement ajouté du chloroforme et/ou de l'alcool isoamylique) pour détruire essentiellement les protéines, suivie d'une précipitation en présence de sels et d'alcool (préférentiellement éthanol ou isopropanol). Une variante de cette méthode, appliquée à des cellules et tissus, a été décrite [Chomczynski (1993) Biotechniques, 15, 532-536]. Une autre variante, substituant le phénol à un détergent cationique (dodecyltrimethylammonium bromide) et le sel utilisé dans la précipitation à un autre détergent cationique (cetyltrimethylammonium bromide) a été décrite [Gustincich et al. (1991) Biotechniques, 11, 298- 301]. Ces méthodes sont difficilement mises en oeuvre en dehors d'un contexte de laboratoire disposant d'un matériel spécifique. Une autre façon classique de purifier l'ADN repose sur l'utilisation de son affinité vis-à-vis d'un support. Citons par exemple des matrices de DEAE (diéthylaminoéthane) décrites dans le manuel "Molecular Cloning" (Sambrook, Fritsch & Maniatis; Cold Spring Harbor Laboratory Press) ou les supports commercialisés par la société Qiagen. Cette dernière méthode présente en particulier l'avantage d'utiliser l'écoulement passif de l'échantillon au
travers d'une colonne et donc de ne pas nécessiter de matériel spécifique.
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L'ADN étant au pH physiologique un polyanion, on peut le capturer plus ou moins spécifiquement en utilisant un support cationique. On peut également le capturer plus spécifiquement en utilisant des histones, protéines ayant de l'affinité pour l'ADN. De la même façon, ces agents présentant une affinité pour le matériel nucléique (ADN ou ARN) peuvent être fixés sur une colonne. La fixation de l'ADN sur des billes de silice provenant par exemple de l a calcination de diatomées [Boom et al. (1990) Journal of Clinical Microbiology, 28, 495-503; Carter & Milton (1993) Nucleic Acids Research, 21, 1044; Zeillinger et al. (1993) Biotechniques, 14, 202-203], en présence de thiocyanate de guanidine (agent chaotropique) présente l'avantage de détruire de nombreuses autres molécules présentes dans un mélange, concomitamment à la fixation de l'ADN. Par contre, cette méthode nécessite
du matériel de laboratoire tel que centrifugeuse et bain-marie.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, la solution contenant l'ADN peut être filtrée au travers d'un support qui retient spécifiquement l'ADN, de façon dépendante ou indépendante de sa structure primaire définie en fonction ou non de dommages et de la nature de ces dommages. Un exemple de ce type de support est commercialisé par la société Xenith Biomed (Galway, Irlande) sous le nom de Xenith Formats. Dans ce cas, la fixation sur ces Xenith Formats d'un agent de capture de l'ADN permet simultanément sa concentration et sa purification. L'homme de l'art connaît ensuite différents moyens de révéler et même de plus ou moins quantifier de l'ADN fixé sur un support. Révélation de l'ADN L'ADN, de par sa structure en double hélice, présente la capacité d'accepter des molécules dites intercalantes au sein de sa structure primaire. Cette propriété a largement été utilisée pour visualiser de très faibles quantités
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d'ADN (de l'ordre du nanogramme, voire de quelques dizaines de picogrammes) grâce à des molécules intercalantes fluorescentes. Le bromure d'éthidium, fluorescent sous une excitation UV, est le plus couramment utilisé. D'autres molécules (comme le PicoGreen ) ont été développées, en particulier par l a société Molecular Probes (USA), avec des longueurs d'excitation et d'émission différentes. L'utilisation de ces molécules nécessite toutefois un matériel
spécifique tel que fluorimètre.
Bien que l'ADN soit très faiblement immunogène, on dispose néanmoins d'anticorps dirigés contre sa structure primaire, en particulier grâce à
certaines maladies auto-immunes de type lupus ou polyarthrite rhumatofde.
On dispose ainsi d'anticorps dirigés contre la structure normale de l'ADN (structure double brin), contre une structure simple brin ou contre des composants identifiés de l'ADN telles que les bases azotées. Il est donc ainsi possible de détecter de l'ADN par des méthodes immunologiques. Si l'ADN a été au préalable fixé sur un support, il est possible de réaliser un ELISA
(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) classique connu de l'homme de l'art.
Les types de support possibles sont nombreux. Citons par exemple les puits
de microplaque, des microbilles, des membranes...
L'anticorps utilisé pour la détection de l'ADN, ou d'un certain type d'ADN lésé, peut être soit directement marqué, soit être lui-même révélé par un second anticorps ou ligand (tels que la protéine A isolée de Staphylococcus aureus ou la protéine G isolée de streptocoques hémolytiques de souches C ou G) marqué. Ledit marquage peut lui-même autoriser une détection directe ou indirecte. Dans le cas d'une détection directe, citons par exemple un groupement fluorescent lié à l'anticorps (ou au ligand), un réactif chimioluminescent tel que les esters d'acridium ou des particules d'or colldfdal. Une détection indirecte fait le plus souvent appel à une enzyme, ou
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catalyseur, lié à l'anticorps ou ligand, qui va modifier dans une étape
suivante un substrat chromogène, bioluminescent ou chimioluminescent.
Une variante à l'utilisation de membrane réside dans l'utilisation du système Gencomb (Orgenics, Yavne, Israel). Le support demeure une membrane mais l'ADN n'est pas fixé sur cette membrane mais au contraire mis dans un tampon ("Hybrid Run") qui permet sa migration par capillarité sur ladite membrane. L'ADN est capturé au cours de sa migration, et ainsi concentré, par un ligand qui a été fixé sur la membrane. Le point o l'ADN s'accumule peut être visualisé par l'utilisation d'un intercalant fluorescent. Une variante de ce test réside dans l'utilisation d'un ligand de l'ADN (anticorps par exemple) marqué à l'or colloïdal. L'accumulation, après migration, du complexe ADN-complexe or colloïdal sur le site de fixation du second ligand sera simplement visualisée directement ou à l'aide d'un système d'amplification du signal. Dans un procédé avantageux selon l'invention, le ligand fixé peut être un anticorps reconnaissant un type d'ADN lésé, le ligand comigrant avec l'ADN peut être un anticorps anti-ADN. Sur le même support Gencomb , un anticorps anti-ADN et un anticorps anti-ADN lésé peuvent être déposés de telle façon que les sites d'accumulation potentiels soient facilement discernables. Il devient possible dans un même échantillon de discerner la présence d'ADN natif (non lésé) de la présence rd'ADN lésé, ou d'introduire lors de l'analyse de l'échantillon, sensé contenir de I'ADN lésé, de l'ADN natif servant ainsi de contrôle positif à l'analyse lors de
l'identification du Produit Marqué.
Un brevet d'invention déposé par la société Genolife (demande de brevet français 97 06102, intitulé "Procédé de détection qualitative et quantitative des altérations de l'ADN et des ligands de ces altérations") repose sur
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l'utilisation de protéines spécifiques de reconnaissance de lésions de l'ADN peut trouver une application dans le présent procédé. Dans la demande de brevet français 97 06102, les lésions de l'ADN sont reconnues spécifiquement, selon le type de dommages générés, par des protéines d'origine humaine, car cette source présente un intérêt dans le diagnostic. Dans le cas présent, la source de protéines reconnaissant les lésions peut être plus généralement d'origine eucaryote ou procaryote. L'utilisation de ces protéines, constituant plus généralement un ligand de l'ADN lésé, s'applique à des techniques ELISA, Gencomb ou toute autre méthode de mise en évidence
d'interactions entre ligands imaginables par l'homme de l'art.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, un polymère nucléique, constitué d'ADN (Acide DésoxyriboNucléique) ou d'ARN (Acide RiboNucléique) ou de PNA (Peptide Nucleic Acid) est introduit comme marqueur
d'authenticité d'un produit, le-dit marqueur étant révélable.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, ce polymère nucléique peut être modifié dans sa structure primaire, les modifications portant
essentiellement sur les bases dudit polymère nucléique.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, ces modifications sont
apportées par des méthodes physiques ou chimiques.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique peut provenir d'un organisme biologique (cas de l'ADN ou de l'ARN) ou avoir été
synthétisé chimiquement ou enzymatiquement.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique peut être modifié par un rayonnement, préférentiellement de type ultraviolet, ou par
des radiations ionisantes.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique peut également être modifié par l'action d'un produit oxydant agissant seul, ou
selon une réaction favorisée par un métal de transition ou un rayonnement.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le produit oxydant peut être l'eau oxygénée. Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique peut
également être modifié par l'action du bleu de méthylène sous éclairement.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique peut être
modifié de façon générale par un agent génotoxique.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique peut également être modifié par greffage chimique d'une molécule ne réagissant
pas forcément naturellement avec celui-ci.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique est
purifié et/ou concentré à partir du produit à analyser.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le polymère nucléique est
caractérisé selon sa structure primaire par un ligand.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, le ligand est préférentiellement un anticorps reconnaissant la structure primaire normale
ou modifiée du polymère nucléique.
Dans un procédé avarntageux selon l'invention, la reconnaissance de I a
structure primaire du polymère nucléique par le ligand est révélée.
Dans un procédé avantageux selon l'invention, la révélation de I a reconnaissance du polymère nucléique par le ligand fait appel préférentiellement à des techniques optiques, mais également à des
techniques fluorimétriques ou luminométriques.
Dans un autre procédé avantageux selon l'invention, la structure primaire du
polymère nucléique peut être révélée à l'aide d'une méthode enzymatique.
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Dans un procédé autre avantageux selon l'invention, la structure primaire du polymère nucléique peut également être révélée par hybridation moléculaire à l'aide d'une sonde marquée radioactivement ou portant un haptène qui sera
révélé dans une nouvelle étape.
Dans un exemple avantageux selon l'invention, de l'ADN plasmidique (pUC18) lésé au benzo[a]pyrène, par des méthodes connues de l'homme de l'art, est
ajouté dans l'échantillon à une concentration de lnanogramme par millilitre.
La détection de cet ADN lésé sert à identifier l'échantillon. Un échantillon ne contenant pas cet ADN lésé est analysé en parallèle. Sur un format Xenith (nitrocellulose; 0,8pJm) on a déposé, de façon repérable, 2 gouttes de 5pI
d'une solution d'anticorps anti-ADN et d'une solution d'anti-benzo-diol-
epoxyde (adduit formé par le benzo[a]pyrène) aux concentrations respectives de 1 et 2,5pJg/ml dans une solution de sérumalbumine bovine à 1% et de lactose à 4%. Après avoir laissé sécher la membrane pendant 30 minutes, 300p1 d'une solution de PBS (solution saline de phosphate connue de l'homme de l'art) contenant 0,6% de lait en poudre écrémé sont ajoutés. Quand l a solution a traversé la membrane, un millilitre de l'échantillon, auquel on rajoute extemporanément 1 nanogramme d'ADN plasmidique pUC18, non lésé, est ajouté. Quand la solution a traversé la membrane, 200 microlitres d'une solution de PBS contenant 0,2% de lait en poudre écrémé, 0,05% de Tween-20 et un anticorps anti-ADN couplé à la phosphatase alcaline, dilué au 1/2000 sont ajoutés. Quand la solution a traversé la membrane, 700p1 de PBS contenant 0,05% de Tween- 20 sont ajoutés pour laver la membrane, puis 200p1 de BCIP (substrat colorimétrique de la phosphatase alcaline, disponible commercialement) sont ajoutés. Lorsque la couleur est bien apparue, la réaction est stoppée par addition de 200p1 d'une solution d'EDTA 0,3M.
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Le point sur lequel a été déposé l'anticorps anti-ADN sert de contrôle de bon
fonctionnement du test. Le point sur lequel a été déposé l'anticorps anti-
benzo-diol-epoxyde sert à mettre en évidence la présence d'ADN lésé au
benzo[a]pyrène et ainsi à identifier le produit.
La sensibilité du test est de 0,5+0,2 nanogramme d'ADN lésé au
benzo[a]pyrène par millilitre de solution.
Ce procédé simple, rapide et sensible peut permettre aux industriels soucieux de s'opposer aux contrefaçons de leurs produits d'envoyer une
personne sur un site pour y procéder immédiatement à un test d'authenticité.
Il sera apprécié de l'homme de l'art que la présente invention n'est pas limitée à ce qui a été décrit. La portée de la présente invention est définie
dans les revendications qui suivent.
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Claims (14)
1) La présente invention a pour objet un procédé de vérification de l'authenticité d'un produit caractérisé en ce que: a) on a introduit un polymère nucléique (Acide DésoxyriboNucléique, ADN, Acide Ribonucléique, ARN ou Peptide Nucleic Acid, PNA) dans le produit, b) on révèle la présence du polymère nucléique dans le produit, sa présence authentifiant le produit 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polymère nucléique peut être modifié dans sa structure primaire
3) Procédé selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été modifié dans sa structure primaire par des méthodes physiques ou chimiques 4) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le polymère nucléique peut provenir d'un organisme biologique ou avoir été synthétisé chimiquement ou enzymatiquement
) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été soumis à un rayonnement
6) Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été soumis à un rayonnement, ce rayonnement étant situé dans la gamme de l'ultraviolet
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7) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été soumis à des radiations ionisantes
8) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été soumis à un traitement par un produit oxydant, seule, en présence d'un métal de transition ou en présence d'un éclairement ultraviolet
9) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4 et 8, caractérisé en ce que I e
produit oxydant est l'eau oxygénée
) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été soumis à un traitement au bleu de méthylène sous éclairement
i 1) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique a été soumis à un traitement par un agent génotoxique
12) Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l e/
polymère nucléique a été couplé chimiquement à une molécule identifiable
13) Procédé selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que l e
polymère nucléique est concentré et/ou purifié à partir du produit à analyser
14) Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que l a
structure primaire du polymère nucléique est détectée à l'aide d'un ligand spécifique
.c.,r>< w:.- -.-, -... _- -
16 2775693
1 5) Procédé selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que I e
ligand est un anticorps reconnaissant la structure primaire normale ou modifiée du polymère nucléique
16) Procédé selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que l a
reconnaissance de la structure primaire du polymère nucléique par le ligand est révélée
17) Procédé selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisé en ce que l a
révélation de la reconnaissance de la structure primaire du polymère nucléique par le ligand fait appel à des techniques optiques, fluorimétriques ou luminométriques
18) Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que l a
structure primaire du polymère nucléique est détectée à l'aide d'une méthode enzymatique
19) Procédé selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que l a
structure primaire du polymère nucléique est détectée à l'aide d'une sonde moléculaire par hybridation
) Procédé selon l'une des revendications 1 à 12 et 19, caractérisé en ce
que la sonde utilisée est marquée radioactivement
21) Procédé selon l'une des revendications 1 à 12 et 19, caractérisé en ce
que la sonde utilisée porte un haptène révélable directement ou indirectement
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|---|---|---|---|
| FR9802664A FR2775693B1 (fr) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Utilisation d'un polymere nucleique comme marqueur d'authenticite de produits et moyens mis en oeuvre pour sa revelation |
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| FR (1) | FR2775693B1 (fr) |
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Effective date: 20061130 |