FR2688003A1

FR2688003A1 - Derives de nucleosides, leur preparation et leurs applications biologiques.

Info

Publication number: FR2688003A1
Application number: FR9202401A
Authority: FR
Inventors: Beaussoleil Sylvie; Bosgiraud Claudine; Depelley Jean; Granet Robert; Krausz Pierre; Nicolas Jean-Albert; Piekarski Salomon
Original assignee: Universite de Limoges
Current assignee: Universite de Limoges
Priority date: 1992-02-28
Filing date: 1992-02-28
Publication date: 1993-09-03
Anticipated expiration: 2012-02-28
Also published as: FR2688003B1

Abstract

Ces dérivés répondent à la formule (CF DESSIN DANS BOPI) dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou de soufre, l'un des Y1 ou Y2 représente NR" et l'autre représente C = X ou CH2 , Z représente NH ou CR'R"; R, R' et R" représentent chacun un atome d'hydrogène, un groupe alkyle ou cycloalkyle éventuellement halogèné, et R1 , R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, acyloxy, benzoyloxy, N3 , SCN ou CN, ou bien les symboles R1 et R2 représentent ensemble une seconde liaison, sous réserve que R1 , R2 et R3 ne soient pas H simultanément.

Description

La présente invention concerne de nouveaux dérivés de nucléosides, leur préparation et leurs applications biologiques notamment antivirales.

Un nucléoside naturel est un composé formé d'un glucide (ribose ou déoxyribose) sur lequel se greffe une base purique ou pyrimidique.

L'élaboration de nouveaux nucléosides constitue actuellement un des développements majeurs dans le domaine de la chimie fine. Ces composés possèdent en effet des pouvoirs antiviraux et certains sont utilisés comme substance antiherpês (par ex. 5-(2-bromovinyl)arabinouridine et 5-méthoxyméthyl-2'-déoxyuridine), anti
HIV (anti-SIDA) (par ex. 3'-azido-3'-déoxythymidine dénommé AZT, 2'-3-didéhydro-2',3'-didésoxythymidine et 2' , 3' -didéoxycytidine), ou comme substances anticancéreu- ses (par ex. 3-(3-oxoprop-1-ényl)-thymidine. On peut se référer à cet égard par exemple aux documents suivants: - L.J.J. HRONOWSKI et W.A. SZAREK, J. Chem. Soc., Chem.

Commun., 1990, 21, 1547; - P. KUMAR et L.I. WIEBE, Nucléosides Nucléotides, 1990, 9 (6), 847 et 861; - A.A. Van AERSCHOT et coll. Nucleosides Nucléotides, 1990, i (4), 557; - M. SHARMA et M. BOBEK, Tetrahedron Lett., 1990, 31 (41), 5839; - B.V. JOSHI et C.B. REESE, Tetrahedron Lett., 1990, 31 (51), 7483; - A. MATUSDA, M. SATOH et T.UEDA, Nucleosides Nucleotides, 1990, 9 (4), 587.

La recherche de nouvelles molécules, si possible plus actives et plus sélectives (c'est-à-dire moins toxiques pour le malade) est activement poursuivie.

En l'absence d'une connaissance exacte des modes d'action de ces composés, la stratégie consiste à préparer de nouveaux nucléosides modifiés en induisant des changements soit sur la partie glucidique, soit sur la partie base purique ou pyrimidique et d'évaluer a posteriori les activités biologiques.

On a maintenant préparé de nouveaux nucléosides comprenant une unité ribosique fixée à une base triazinique ou pipérazinique non aromatique, qui ont des activités biologiques, notamment antivirales intéressantes.

L'invention a donc pour objet des dérivés de nucléosides répondant à la formule

dans laquelle
X représente un atome d'oxygène ou de soufre, l'un des Y1 ou Y2 représente NR" et l'autre représente
C = X ou CH2,
Z représente NH ou CR'R"
R, R' et R" représentent chacun un atome d'hydrogène, un groupe alkyle droit ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone ou cycloalkyle en C3 à C12 atomes de carbone, chacun pouvant porter un ou plusieurs atomes d'halogène, et
R1, R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy ou acyloxy de 2 à 7 atomes de carbone, benzoyloxy, ou un autre groupe nucléophile tel que Na, SCN ou CN, ou bien les symboles R1 et R2 représentent ensemble une seconde liaison, sous réserve que R1, R2 et
R3 ne soient pas H simultanément.

On préfère les composés (I) dans lesquels R1,
R2 et R3 représentent chacun un groupe hydroxy ou acyloxy en C2-C7, en particulier acétoxy, ou benzoyloxy.

On préfère les composés (I) dans lesquels R représente un groupe alkyle en C1 à C12 ou cycloalkyle en
C3 à C12 et R' et R" représentent chacun H. On entend par cycloalkyle ou groupe alkyle mono-, di-ou tricyclique tel qu'un adamantyle.

L'invention concerne plus particulièrement les composés (I) dans lesquels X est 0.

Les composés de l'invention peuvent être préparés par couplage d'un dérivé triazinique ou pipérazinique de formule

dans laquelle X, Y1, Y2, Z, R, R' et R" ont la même signification que dans la formule I, avec un dérivé glucidique de formule

dans laquelle R'1, R' 2 et R'3 ont respectivement la même signification que R1, R2 et R3 dans la formule I à l'exception de hydroxy, et le cas échéant on déacyle le composé (I) ainsi obtenu dans lequel l'un au moins de R1, R2 et R3 est un groupe acyloxy, pour obtenir le composé hydroxylé correspondant.

Dans un des cas préférés où R1, R2 et R3 représentent chacun OH, Y1 est C=X, Y2 est NR", Z est NH,
R' et R" représentent chacun H et X est 0, le procédé peut être représenté par le schéma suivant

<tb> <SEP> 0
<tb> <SEP> O <SEP> Ç <SEP> CÉR
<tb> AcOO <SEP> OAc <SEP> 02
<tb> <SEP> t <SEP> HNI1ae <SEP> AcOO
<tb> <SEP> OAc
<tb> <SEP> H
<tb> <SEP> o
<tb> <SEP> O
<tb> <SEP> HNzC <SEP> t
<tb> <SEP> O <SEP> = <SEP> Cs <SEP> / <SEP> H <SEP> (R' <SEP> = <SEP> H
<tb> <SEP> N
<tb> <SEP> X=O
<tb> déacétylationY, <SEP> = <SEP> CO
<tb> <SEP> HOCH <SEP> <SEP> = <SEP> Z <SEP> = <SEP> =0
<tb> <SEP> Y1 <SEP> = <SEP> CO
<tb> <SEP> HH <SEP> O <SEP> Y2 <SEP> = <SEP> Z <SEP> = <SEP> NH)
<tb> <SEP> H <SEP> Hz <SEP> H
<tb> <SEP> HO <SEP> OH
<tb> <SEP> HO <SEP> OH
<tb>
Ac étant un groupe acétyle.

a) Couplage. La réaction de couplage du ribose peracétylé au dérivé triazinique ci-dessus peut être réalisée de manière régio- et stéréo-sélective.

Parmi les nombreux systèmes utilisables pour ce type de couplage, on préfère la méthode décrite par Vorbrüggen et Bennua, Chem. Ber. 1981, 114, 1234, 1256 et 1279. Il associe au couple glucide-base purique ou pyrimidique le chlorure de triméthylsilane (TMSCl), l'hexaméthyldisilazane (HMDS) et le triméthylsilyltrifluorométhane sulfonate (TMSTf). Il présente le triple avantage de mener au produit de couplage en une seule opération, d'être très sélectif et de minimiser la quantité de sous-produits. L'optimisation des conditions de réaction a montré que les composés selon l'invention pouvaient être obtenus avec un rendement de l'ordre de 20% en opérant sous argon à 0 C avec des rapports molaires glucides/base TMSCl/HMDS/TMSTf=1/1/O, 8/0,8/2,2.

b) Déacétylation
Il est préférable d'employer une méthode de déacylation douce. Elle consiste à mettre le nucléoside triacétylé dans un milieu réactionnel comprenant une base faible telle qu'une amine, par exemple un milieu constitué de méthanol/eau/triéthylamine.

Les dérivés triaziniques de formule II (Y1 =
CX; Y2 = NR"; Z = NH), peuvent être synthétisés de la manière suivante.

1) Synthèse des esters a bromées
Le point de départ de cette synthèse multiétapes est l'élaboration des esters a-bromés. Le schéma est le suivant
5 10 15 20 25 30 35

Le passage par les chlorures d'acide correspondant à l'acide se fait par l'addition de trichlorure de phosphore (dissous dans l'hexane) et chauffage à 40-50"C sous agitation, pendant 1 à 2 jours. La bromuration est effectuée sous agitation. Une estérification au méthanol termine ces synthèses. Cette réaction est rapide (1 heure environ) et exothermique.

2) Synthèse des bases triaziniques
A partir des esters a-bromés synthétisés précédemment et du chlorhydrate de semicarbazide, on peut obtenir les bases triaziniques selon le schéma suivant:

Les dérivés glucidiques de formule III sont généralement connus. Le ribose paracétylé est en particulier disponible chez les firmes Aldrich, Sigma, etc...

Les bases pipéraziniques de formule II (Y1 =
NR", Y2 = CH2, Z = CRR') peuvent être élaborées selon la réaction

x = o
II Y1 = NH
Y2 = CH2
Z = CRR'
Le couplage entre le dérivé pipérazinique (II) et le dérivé glucidique (III) est effectué selon le même processus que pour les dérivés triaziniques.

Les exemples suivants illustrent l'invention.

Les structures de ces composés ont été confirmées par les moyens classiques de spectroscopie:
R.M.N., I.R., Masse.

Les spectres 1H RMN sont enregistrés sur spectromètres VARIAN EM 360 (60 MHz) ou sur BRUCKER AC 200 (200 MHz) avec le tétraméthylsilane comme standard interne dans le DMSO d6 ou le DCCl3. Les déplacements chimiques sont notés en ppm (6), les couplages en Hz et les signaux sont exprimés de la façon suivante : singulet (s), doublet (d), triplet (t), multiplet (m). Tout proton mobile est confirmé par addition de D2O.

Les spectres IR sont enregistrés sur un appareil PERKIN ELMER 1310. L'échantillon est sous forme de pastilles KBr ou en solution dans du tétrachlorure de carbone entre 2 fenêtres de KBr.

Les spectres W sont enregistrés sur un appareil WIKON 930 (KONTRON INSTRUMENT) en absorbance entre 200 et 400 nm sur des produits en solution dans l'éthanol dans des cuves de quartz de lcm de trajet optique.

Les spectres de masse sont réalisés sur un spectromètre SHIMADZU QP 1000 en E.I.

Les points de fusion sont déterminés sur banc
KOFLER.

Les chromatographies analytiques sur couches minces (CCM) sont effectuées
- soit sur gel de silice 60F254 MERCK (0,20 mm d'épaisseur) déposé sur feuille d'aluminium.

- soit en phase inverse sur gel de silice RP 18F254 MERCK déposé sur plaque de verre (3x5 cm).

Les chromatographies préparatives sur plaque sont réalisées sur gel 60PF254 MERCK déposé sur plaque de verre (20x20 cm; 2 mm d'épaisseur).

Les chromatographies sur colonne sont effectuées sur gel LICHROPREP Si 60 MERCK (15-25 pm). La colonne de diamètre 2 cm a une hauteur approximative de 15 cm.

PREPARATION DES COMPOSES DE FORMULE II.

Préparation 1 a) 2-bromopropanoate de méthyle
L'acide 2-bromopropanoïque (90 ml; 1 mol; 1 éq.) est mis en présence du trichlorure de phosphore (52,2 ml; 0,6 mol; 1,8 éq.) pendant 2 jours sous agitation à 40"C. Le chlorure de l'acide 2-bromopropanoïque est récupéré après décantation de l'acide orthophosphoreux. Un excès de méthanol (50 ml) est ajouté goutte à goutte pendant une heure (la réaction est exothermique et le dégagement d'acide chlorhydrique est neutralisé par propanoate de méthyle obtenu est extrait à l'éther (1x50 ml) et le milieu est neutralisé à l'hydroxyde de potassium ou lavé à l'eau distillée (1x50 ml).La phase organique est séparée, séchée pendant une heure sur sulfate de magnésium, filtrée sur célite; l'éther est évaporé pour donner un liquide jaunâtre que l'on distille sous presion réduite (o 40 mm Hg) en obtenant deux paliers : 59"C et 69-70"C. Le deuxième palier (69-70"C) est attribué au 2-bromopropanoate de méthyle : Eb = 144"C; CCM phase inverse : Rf = 0,76 (méthanol/eau = 70:30).

b) 1,6-dihydro-3,5-dioxo-6-méthyl-1,2,4-triazine (II
R=CH3; R'=H; X=O; Y1=CO; Y2=Z=NH)
Cette synthèse a été effectuée selon 2 protocoles différents
Le 2-bromopropanoate de méthyle (I:10,5g 0,069 mol; II:16,7g - 0,1 mol) et le chlorhydrate de semicarbazide (I:6,8g - 0,06 mol; II:15,6g - 0,14 mol) sont placés dans l'éthanol absolu (30 ml) sous agitation à 70"C et sous atmosphère d'argon.Un premier équivalent de triéthylamine (I:8,6 ml - 0,06 mol; II: 19,5 ml - 0,14 mol) est rajouté goutte à goutte pour libérer la fonction amine primaire du semicarbazide; le semicarbazide se dissout t Après 12 heures, un deuxième équivalent de triéthylamine (I:8,6 ml-0,06 mol; II:14 ml-0,1 mol) est rajouté en plusieurs fractions pour éliminer le bromhydrate. Après 5 jours, le milieu est neutre. La séparation des chlorhydrates et bromhydrates de triéthylamine peut être effectuée selon les 2 méthodes suivantes (méthode
A pour I - méthode B pour II)
Méthode A (I) : Filtration des chlorhydrates et bromhydrates de triéthylamine. Evaporation de l'éthanol. Addition d'un mélange chloroforme/eau (1:1) au filtrat.Les sels de triéthylamine restant sont dissous dans la phase aqueuse. Le 2-semicarbazidopropanoate de méthyle est extrait et décanté dans la phase organique.

Le phase organique est séchée sur sulfate de magnésium pendant une heure, filtrée sur célite, puis le chloroforme est évaporé.

Méthode B (II) : On ajoute de l'acétone dans le milieu -pour faire cristalliser les chlorhydrates et bromhydrates de triéthylamine puis on filtre et on évapore les solvants (éthanol et acétone).

Après séparation du chlorhydrate et du bromhydrate de triéthylamine, on traite à l'éthanoate de sodium dans de méthanol absolu (1:111 mg de sodium; 4,8 mmol/30 ml d'éthanol; II:9g de sodium; 0,12 mol/30 ml d'éthanol) pour la cyclisation. On ajoute une solution d'acide chlorhydrique ( 12%) jusqu'à neutra-lisation du milieu. Les sels (NaCl principalement) sont éliminés par filtration dans l'éthanol à chaud.Le 1,6-dihydro-3,5 dioxo-6-méthyl-1, 2, 4-triazine cristallise dans l'méthanol à froid sous forme de cristaux blancs:
Rendement : 1:78mg (1%); II:1,9g (15%); PF=214 C;1H RMN 60 MHz(DMSO d6):6 1,3 (d,3H,H6'), 3,3(m,1H,H6), 5,5(m, 1H,H), 8,9(s,îH, disparaît dans D2O, H2 ou H5), 10,4 (s, 1H, disparaît dans D2O,H4 ou H3); Masse : 129(M+), 114(M±CH3), 86 et 71 (fragmentations du squelette);
IR:3240 (vNH:-CO-NH-CO-), 3050(vNH cycle triazine), 1755,1711 (vC=O); CCM:Rf=0,16 (vchloroforme/éthanol =95:5).

Préparation 2 a) 2-bromoadamantane-éthanoate de méthyle
L'acide adamantane éthanoïque (2g; 0,01 mol; 1 eq.) est dissous dans l'hexane (10 ml) et le trichlorure de phosphore (0,52 ml; 6mmol; 1,8 eq.) est ajouté à 50 C sous agitation pendant 18 heures. Après décantation (4 heures) de l'acide orthophosphoreux et évaporation de l'hexane, le chlorure de 1 ' acide adamantane éthanoïque est obtenu sous la forme d'un liquide incolore que l'on soumet à l'action du brome (0,6 ml; 0,011 mol; 1,1 eq.) sous agitation à température ambiante pendant 3 semaines. (L'acide bromhydrique dégagé et l'excès de brome sont éliminés dans un piège à potasse).Le chlorure de l'acide 2-bromo adamantane éthanoique est obtenu sous la forme d'un liquide brun translucide auquel on ajoute un excès de méthanol (1 ml) goutte à goutte pendant 30 minutes (la réaction est exothermique avec un dégagement d'acide chlorhydrique). Le 2-bromo-adamantane éthanoate de méthyle et le méthanol en excès ne sont pas miscibles.

Après refroidissement, le produit obtenu est extrait à l'éther (1x20 ml). Le milieu est neutralisé à 1' hydroxyde de potassium (ce qui décolore la phase organique) puis lavé à l'eau distillée (1x20 ml). La phase organique est décantée, séchée pendant une heure sur sulfate de magnésium, filtrée sur célite et l'éther est évaporé pour donner le composé recherché sous la forme d'un liquide jaunâtre épais cristallisant à l'air.

Rendement : 2,506g (87,2%); PF=46 C;1H RMN 60 MHz(CDCl3): 61,7 (m,12H,6CH2Ad), 2,1(m,3H,3CHAd), 3,8(s,3H,CH3O-), 4(s,1H,-CH-Br); IR:2925(vasCH2Ad), 2890(vCHAd), 2850 (VCH2Ad), 1735(vC=0), 1160(vC-O); CCM phase inverse:Rf= 0,28 (méthanol/eau = 70:30).

b) 6-adamantane-1,6-dihydro-3,5-dioxo-1,2,4-triazine ( II:R=l-adamantyle;R' =H; X=O; Y1=CO; Y2=Z=NH)
Le composé obtenu dans a) (2,6 g;O,01 mol) et le chlorhydrate de semicarbazide (1,4g;0,0125 mol) sont placés dans l'éthanol absolu (40 ml) sous agitation à 70"C. Un premier équivalent de triéthylamine (1,8 ml; 0,0125 mol) est ajouté goutte à goutte pour libérer la fonction amine primaire du semicarbazide; celui-ci se dissout. Après 12 heures, un deuxième équivalent de triéthylamine (1,4 ml; 0,01 mol) est rajouté pour éliminer le bromhydrate. Après séparation des chlorhydrates et bromhydrates de triéthylamine (Méthode B), le produit est séché au dessicateur pendant 3 jours.On traite ensuite à l'éthanoate de sodium dans l'éthanol absolu (0,345 g de sodium; 0,015 mol/30 ml d'éthanol) pour la cyclisation. On ajoute une solution d'acide chlorhydrique ( 12%) jusqu'à neutralisation du milieu.

Les solvants (eau et éthanol) sont évaporés et on ajoute de l'eau distillée (1x20 ml) pour solubiliser les sels (NaCl principalement). Après filtration du produit et séchage, la gomme brune obtenue est recristallisée dans l'éthanol. Le composé du titre cristallise sous forme de cristaux marrons.

Rendement : 20mg (0,8%); PF:178 C; IR:3000-3400 (VN-H), 2800-2900 (vC-H); 1690 (vu=0) CCM:Rf=0,37 (chloroforme/ éthanol = 95:5).

Préparation 3 1,6-dihydro-3,5-dioxo-6-propyl-1,2,4-triazine (II:R=n-C3H7;R'=H; X=O; Y1=CO; Y2=Z=NH)
Le 2-bromopentanoate de méthyle obtenu selon le mode opératoire de la préparation la) (15,6 g; 0,08 mol) et le chlorhydrate de semicarbazide (13,4 g; 0,12 mol) sont placés dans l'éthanol absolu (30 ml) sous agitation à 70"C et sous atmosphère d'argon. Un premier équivalent de triéthylamine (16,7 ml; 0,12 mol) est rajouté goutte à goutte pour libérer la fonction amine primaire du semicarbazide; celui-ci se dissout. Après 12 heures, un deuxième équivalent de triéthaylamine (11,2 ml; 0,08 mol) est rajouté pour éliminer le bromhydrate.

Après séparation du chlorhydrate et du bromhydrate de triéthylamine (méthode A), on traite à l'éthanoate de sodium dans de l'éthanol absolu (1,85 g de sodium; 0,08 mol/30ml d'éthanol) pour la cyclisation. On ajoute une solution d'acide chlorhydrique (~12%)jusqu'à neutralisation du milieu. Les sels (NaCl) sont éliminés par filtration dans méthanol à chaud. La 1,6-dihydro-3,5 -dioxo-6-propyl-1, 2, 4-triazine cristallise dans 1 'éthanol à froid sous forme de cristaux blancs.

Rendement : 2,35g (18,7%); PF=215 C; 1H RMN (DMSOd6):6 1 (m,3H,H6'''),1,6(m,4H,H6'+H6''), 3,3(m,1H,H6), 5,6(d, lH,H1), 8,8(s,1H,disparaît dans D20,H2 ou H5), 1O,3(s,1H, disparaît dans D2O,H4 ou H3); Masse:158(MH+), 157(M+), 115 (M'-CH3-CH=CH2:Mac Lafferty), 114(M±CH3-CH2-CH2), 86 et 71 (fragmentations du squelette); IR:Bandes principales identiques à celles de la préparation lb); W(éthanol): Xmax=245 nm(E335); CCM:Rf=0,20 (chloroforme/éthanol= 95:5).

Préparation 4 3-decyl 2-pipérazinone (II:X=O; Y1=NH; Y2=CH2; Z=CRR' avec R=nC1OH2l et R'=H)
Le chlorhydrate de ce composé préparé selon
S. PIEKARSKI (Oléagineux, 1962, 10, 785) (5 g) est dissous dans le chloroforme (40 ml), puis on ajoute 1,5 g de KOH dans 20 ml d'eau. Après agitation et décantation, la phase organique est séchée puis évaporée. On obtient des cristaux blancs
rendement 3,1 g (73*).

Préparation 5 2,3-diméthyl 2-pipérazinone (II:X=O; Y1=NH; Y2=CH2; Z=CRR' avec R=R'=CH3)
Une solution de 2-bromo-2 méthyl propanoate d'éthyle (9,05 ml, 0,062 mol) dans 40 ml de benzène est ajoutée goutte à goutte, à une solution de 25 ml d'éthylène-diamine dans 40 ml de benzène à température ambiante. Une fois l'addition du réactif terminée, la solution est portée au reflux pendant 2 heures. Après refroidissement on ajoute une solution de potasse alcoolique contenant 3,45 g (0,062 mol de KOH) pour neutraliser le milieu. Le précipité de KBr est filtré, puis la solution est évaporée. Le résidu est repris par de l'acétate d'éthyle chaud. Au refroidissement on obtient des cristaux blancs.

Rendement : 2,15 g (27%)
PF = 134"C
Spectre IR vC = O : 1640 cm-l
vNH amine : 3350 cm-l
EXEMPLE 1 : 6-aza-5,6-dihydro-5-méthyl-2',3',5'-triacétate-uridine (I:R1=R2=R3=CH3COO; R=CH3; R'=H; X=O; Yl=CO; Y2=Z=NH)
Deux synthèses sont effectuées dans des conditions proches (I-II) et les produits bruts sont rassemblés avant séparation.

Du ribose peracétylé (0,3183g; 1 mmol) et de la 1, 6-dihydro-3, 5-dioxo-6-méthyl-1, 2,4-triazine (0,129 g; 1 mmol) sont dissous dans le 1,2 dichloroéthane (5 ml). On ajoute ensuite successivement du chlorure de triméthylsilane (101 pl; 0,8 mmol), de l'hexaméthyldisilazane (169 pl); 0,8 mmol) et du triméthylsilyltrifluorométhane sulfonate (400 pl; 2,2 mmol) en agitant sous atmosphère d'argon à 0 C. La solution brunit. Après 24 heures (I) ou 6 heures (II), le milieu est traité par un mélange eau/solution saturée de bicarbonate de sodium (1:1; 16 ml). On atteint alors la neutralité. On ajoute du dichloromêthane (20 ml) pour extraire le composé formé.La phase organique est décantée puis séchée sur sulfate de magnésium, filtrée sur charbon végétal et célite. Après évaporation du dichlorométhane, le produit brut se présente sous l'aspect d'un sirop jaunâtre épais (306,3 mg pour I+315,3 mg pour II) que l'on adsorbe sur
Florisil afin de séparer le composé du titre par chromatographie sur colonne (15 cm de silice) avec les éluants suivants : chloroforme (100%, 300 ml); chloroforme/éthanol (99:1, 100 ml; 98:2, lOOml). Une purification supplémentaire est effectuée par chromatographie sur plaque (éluant : chloroforme/éthanol=95:5).

Rendement : 67mg (9,6%); CCM:Rf=0,23 (chloroforme/éthanol = 95:5).

EXEMPLE 2 : 6-aza-5,6-dihydro-5-proDyl-2',3',5'-triacétate-uridine (I:R1=R2=R3=CH3COO; R=n-C3H7; R'=H; X=O; Y1=CO; Y2=Z=NH)
On dissout 636,6 mg (2 mmol) de ribose peracétylé et 314 mg (2 mmol) de 1,6-dihydro-3,5-dioxo-6propyl 1,2,4-triazine dans 10 ml de 1,2-dichloroéthane.

On ajoute ensuite successivement 202 ml de chlorure de triméthylsilane, 338 ml d'hexaméthyldisilazane et 800 p1 de triméthylsilyltrifluorométhane à 0 C sous atmosphère d'argon. La solution brunit. On traite par 32 ml d'un mélange eau/solution saturée de bicarbonate de sodium (1:1) pour arrêter la réaction et on ajoute du dichlorométhane (20 ml) pour extraire le composé formé. La phase organique est décantée après vérification de la neutralité du milieu, puis séchée sur sulfate de magnésium et filtrée sur charbon végétal et célite.Après évaporation du dichlorométhane, le produit brut (443 mg) se présente sous l'aspect d'un sirop jaunâtre. I1 est extrait par chromatographie sur colonne (Eluants : chlorofrome 150 ml, chloroforme/éthanol = 99:1-100 ml, 98:2 - 100 ml, 97:3-lOOml). On obtient 135,8 mg (rendement 16,3%) du composé du titre.

1H RMN 200 MHz (CDCl3): 6 0,9 (t,3H,J5'''-5''=15,4 Hz, H5,,'), 1,3 (m,2H,H5,'), 1,7 (m,2H,H5,), 2,2 (plusieurs s, 9H-OAc), 3,5(dd,1H,J55.=6,2Hz,J56=3,5 Hz,H5), 4,2 (m, 3H,H4 ,H5a,H5b), 4,6(d,1H,J2=6,5Hz,H2,), 5,3(m,îH, H3.),5,6(d,1H,J65=4Hz,H6), 6,1(d,1H,J1'-2'=7Hz,H1'),7,1 et 7,7 (2s,îH, disparaît dans D2O,H acide); Masse: 417(MH+), 259,240,217,167,158, 157,156,149, 145,143,140,139,128, 127, 115,114,103;IR:3100-3400 (vN-H), 2960 (vas CH3), 2920 (vasCH2), 2860(vsCH3), 1750(vC=O ester), 172O(vC=O base); CCM:Rf=0,34 (chloroforme/éthanol=95: 5).

EXEMPLE 3 6-aza-5,6-dihydro-5-méthyl-uridine (I:R1=R2=R3=OH; R=CH3; R'=H; X=O; Y1=CO; Y2=Z=NH)
Le dérivé d'uridine obtenu selon l'exemple 1 (35,5 mg; 9,1 pmol) est placé dans un mélange réactionnel eau/méthanol/triéthylamine (10:10:1-10 ml) pendant 2 heures sous agitation à 0 C. La réaction est suivie par
CCM (éluant: chloroforme/éthanol=70:30). Au fur et à mesure que la déacétylation se déroule, le produit se solubilise dans la solution. Après évaporation du mélange réactionnel et élimination des traces d'eau par azéotropie dans l'éthanol (2ml); le composé du titre est séparé par chromatographie sur plaque (éluant:chloroforme/éthanol=70:30).

Rendement : 12 mg (50t);
IR (cm-1):3400 (vNH), 3200 (vOH), 2960 (vCH3), 1720 (vC=O base)
CCM : Rf = 0,45 (éluant:chloroforme/éthanol=7:3).

EXEMPLE 4 6-aza-5,6-dihydro-5-propyl-uridine (I : R1=R2=R3=OH; R=n-C3H7; R'=H; X=O; Y1=CO; Y2=Z=NH)
Le dérivé d'uridine obtenu selon l'exemple 2 (141 mg;3,4 10-5 mol) est placé dans un mélange réactionnel eau/méthanol/triéthylamine (10:10:1-30 ml) pendant 2 jours sous agitation à 25"C. La réaction est suivie par CCM (éluant: chloroforme/éthanol = 70:30). Au fur et à mesure que la déacétylation se déroule, le produit se solubilise dans la solution. Après évaporation du mélange réactionnel et élimination des traces d'eau par azéotropie dans l'éthanol (2 ml), le composé du titre est séparé par chromatographie sur plaque (éluant chloroforme/éthanol = 70:30).

Rendement : 20 mg (20,3%);
IR (cm-l) 3400 (kNH), 3200 (vOH), 2970 (VCH3), 1720 (vC=O base)
UV (éthanol): Xmax:245 nm (E 400); CCM:Rf=0,55 (éluant chloroforme/éthanol=70:30).

EXEMPLE 5 1-(2,3,5tri-O-acétyl ss,D-ribofurannosyl)3-décyl 2-pipérazinone (I:R1=R2=R3=CH3COO;R=R'=H.X=O; Y1=NH; Y2=CH2; Z =CHn-C10H21)
Du ribose peracétylé (0,318 g; 1 mmol) et de la 3-décyl 2-pipérazinone (0,240 g; 1 mmol) sont dissous dans 1,2-dichloroéthane (5 ml). On ajoute ensuite successivement du chlorure de triméthyl-silane (101 pl; 0,8 mmol), de hexaméthyl disîlazane (169 pl, 0,8 mmol) et du triméthylsilyl-trifluorométhane sulfonate (218 pl; 1,2 mmol) en agitant sous atmosphère d'argon. La réaction se poursuit pendant 5 heures à température ambiante.

Après extraction selon l'exemple 1, on obtient un sirop jaunâtre épais : 0,667 g. Le produit brut est purifié sur colonne de silice avec les éluants suivants : éther/hexane (70:30, 200 ml), éther (100%, 100 ml), chloroforme (100%, 100 ml).

Une purification supplémentaire est effectuée par chromatographie sur plaque (éluant éther/hexane 60:40).

On obtient 0,185 g (37%).

EXEMPLE 6 1-(2,3,5 tri-O-acétyl ss,D-ribofurannosyl) 3,3-diméthyl 2 -pipe-razinone ( : R1=R2=R3=CH3COO; R=R ' =H: X=O; Y1=NH;Y2=CH2; Z=C( CH3)2)
Du ribose peracétylé (0,318 g; 1 mmol) et de la 3,3-diméthyl 2-pipérazinone (0, 128 g;l mmol) sont dissous dans l'acétonitrile (5 ml). On ajoute ensuite successivement du chlorure de triméthyl-silane (101 pl; 0,8 mmol), de l'hexaméthyldisilazane (169 pI, 0,8 mmol) et du triméthylsilyl-trifluorométhane sulfonate (400 pl; 2,2 mmol) en agitant sous atmosphère d'argon. La réaction se poursuit pendant 2 heures à température ambiante.

Après traitement identique à celui de l'exemple 1, on obtient un sirop épais : 0,252 g.

avec comme éluant : chloroforme/éthanol 95:5 on obtient 108 mg de produit.

Rendement : 28%
Spectre IR vC = O acétate : 1740 cm-l
vC = O amide : 1640 cm-l
vNH amine : 3450 cm-l
Les composés de l'invention ont été soumis à une expérimentation biologique.

EXEMPLE DE TEST BIOLOGIOUE : ETUDE IN VITRO DE L'ACTI
VITE ANTIVIRALE
On a recherché l'activité inhibitrice du 6 aza-5, 6-dihydro-5-propyl-uridine sur 1' effet cytopathique (ECP) induit par un lentivirus : le virus Visna, sur une culture de cellules primaires de plexus choroïde, en microplaques, selon le protocole proposé par S. Beausoleil et coll. Rev. Infect. Diseases, 1989, 11 (5), 732; et Rev. Méd. Vét., 1991, 142(7), 557. L'activité antivirale étudiée est l'effet curatif sur ces cellules préinfectées par le virus avant l'addition des composés selon 1' invention.

Essai de cytotoxicité
Avant de réaliser l'essai antiviral, on a déterminé la toxicité du produit vis-à-vis des cellules de plexus choroïde. L'étude de cette cytotoxicité est effectuée sur une microplaque contenant un tapis cellulaire de 24 h.

Chaque dilution de produit est additionnée dans 8 cupules, en présence d'un témoin cellules par essai. Après 7 jours d'incubation, l'évaluation de la cytotoxicité est réalisée par lecture au microscope inversé. Les cultures sont examinées après coloration au
May-Grunwal-Giemsa. La concentration minimale cytotoxique (CMC) correspond à la première dilution qui n'entraîne pas de changement dans la morphologie des cellules.

Pour le produit selon l'exemple 4, la CMC est égale à 25pM.

Etude de l'inhibition cytopathique
Les essais d'inhibition de l'effet cytopathique sont effectués en microplaque sur un tapis cellulaire inoculé par 0,15 TCID50 de virus par cellule pendant 30 minutes à 37"C, avant addition du produit à tester. Ils sont répliqués 8 fois, en parallèle avec un témoin cellules et un témoin virus non traité. Au jour 6, la formation de foyers syncytiaux est observée au microscope inversé après coloration au May-Grunwald-Giemsa.

Résultats
Le pourcentage d'effet protecteur du produit étudié sur les cellules cibles exposées au virus est déterminé par la formule suivante
dans le témoin virus-dans l'essai traité 100 x nombre de syncytia dans le témoin virus-dans le témoin cellules
La concentration efficace à 50% (CE50) obtenue avec la 6-aza-5,6-dihydro-5-propyl-uridine est égale à 17,5 pM. Ce composé exerce donc une activité inhibitrice décelée sur le virus Visna. En effet, à la valeur égale à la CMC (25 pM), on a observé une inhibition de l'effet cytopathique du virus sur les cellules, supérieure à 70%.

L'étude présente montre que les composés de l'invention et notamment la 6-aza-5,6-dihydro-5-propyluridine sont actifs sur les lentivirus et peuvent donc être utilisés comme médicaments notamment antiviraux.

L'invention comprend donc aussi les composi tions pharmaceutiques contenant comme principe actif un composé de formule I ainsi qu'un véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable, notamment les compositions injectables.

Outre leur application entant qu'antiviraux, les composés (I) de l'invention peuvent être utilisés comme antibactériens, fongicides, insecticides et antiparasitaires.

Claims

REVENDICATIONS

1. Dérivés de nucléosides répondant à la formule

dans laquelle

X représente un atome d'oxygène ou de soufre, 1 'un des Y1 ou Y2 représente NR" et l'autre représente

C = X ou CH2,

Z représente NH ou CR'R"

R, R' et R" représentent chacun un atome d'hydrogène, un groupe alkyle droit ou ramifié de 1 à 12 atomes de carbone ou cycloalkyle en C3 à C12 atomes de carbone, chacun pouvant porter un ou plusieurs atomes d'halogène, et

R1, R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, acyloxy de 2 à 7 atomes de carbone, benzoyloxy, N3, SCN ou CN, ou bien les symboles R1 et R2 représentent ensemble une seconde liaison, sous réserve que R1, R2 et R3 ne soient pas H simultanément.

2. Composés (I) selon la revendication 1, dans lesquels R1, R2 et R3 représentent chacun un groupe hydroxy ou acyloxy en C2-C7.

3. Composés (I) selon la revendication 1, caractérisé en ce que Y1 représente C=X, Y2 représente

NR" et Z représente NH.

4. Composés (I) selon l'une des revendications 1 à 3, dans lesquels R représente un groupe alkyle en C1 à C12 ou cycloalkyle en C3 à C12 et R' et R" représentent chacun H.

5. Composés (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lesquels X est O.

6. 6-aza-5,6-dihydro-5-propyl-uridine.

7. Procédé de préparation des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'on couple un dérivé triazinique ou pipérazinique de formule

dans laquelle X, Y1, Y2, Z, R et R' ont la même signification que dans la formule I, avec un dérivé glucidique de formule

dans laquelle R'1, R'2 et R'3 ont respectivement la même signification que R1, R2 et R3 dans la formule I à l'exception de hydroxy, et le cas échéant on déacyle le composé (I) ainsi obtenu dans lequel l'un au moins de R1, R2 et R3 est un groupe acyloxy, pour obtenir le composé hydroxylé correspondant.

8. Composition pharmaceutique contenant comme principe actif un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ainsi qu'un véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable.

9. Médicament antiviral comprenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.

10. Utilisation des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 comme antibactériens, fongicides, insecticides et antiparasitaires.