FR2465000A1 - Heteropolysaccharide s-130 - Google Patents

Abstract

LE NOUVEL HETEROPOLYSACCHARIDE S-130, PREPARE PAR FERMENTATION D'UNE ESPECE D'ALCALIGENES NON DENOMMEE, ATCC31555, A DES PROPRIETES INTERESSANTES COMME AGENT EPAISSISSANT, DE SUSPENSION ET STABILISANT DANS DES SYSTEMES AQUEUX. SA COMPOSITION CHIMIQUE EST COMPRISE ENTRE LES LIMITES SUIVANTES, EN POIDS, CONCERNANT LES SUCRES: 10-20 D'ACIDE GLUCURONIQUE; 10-25 DE MANNOSE; 20-40 DE GLUCOSE; 30-60 DE RHAMNOSE; LE POLYMERE CONTIENT AUSSI 3-5 DE GROUPES ACETYLE.

Description

-1-

La présente invention concerne un hétéro-

polysaccharide dénommé hétéropolysaccharide S-130.

Le produit S-130 penut être préparé par fermentation d'un milieu nutritif approprié avec un organisme n'ayant pas été décrit jusqu'à présent, d'après des études taxonomiques poussées, qui est

une espèce d'Alcaligens non-dénommée. Un dép8t perma-

nent sans restriction de cet organisme utilisé dans la production du présent hétéropolysaccharide a été effectué avec l'American Type Culture Collection le

27 août 1979 sous le numéro d'inscription ATCC 31555.

Les considérations suivantes rendent justi-

fié et nécessaire que cet organisme soit considér&

comme une nouvelle espèce d'Alcaligenes.

Description de la souche

A. Caractéristiques de morphologie des colonies Sur gélose nutritive, de petites colonies jaunes apparaissent en un jour à 30 C, le diamètre

atteignant environ 1,5 mm après 5 jours d'incubation.

Les colonies sont rondes, lisses, convexes, mucoidi-

ques et opaques. La couleur jaune devient plus foncée

et la texture des colonies devient dure après incuba-

tion prolongée.

Sur gélose YM, de petites colonies jaunes mucoldiques apparaissent en un jour et le diamètre atteint environ 3 mm après 5 jours d'incubation. Les colonies sont rondes, lisses, convexes et opaques, mais le dessus des colonies est plat. On n'observe

pas de texture dure membraneuse.

B. Caractéristiques de morphologie des cellules

La souche S-130 est une bactérie Gram-

négative en forme de bâtonnet. Sur gélose nutritive, la grosseur moyenne des cellules est d'environ 0,5-0,6

sur 1,2-1,6/um; les extrémités des cellules sont amin-

cies et on observe souvent une courbure. Les dimen-

sions et la forme des cellules ne changent pas notable-

ment après incubation prolongée.

Sur gélose YM, les dimensions moyennes des

cellules sont de 0,6-0,8 sur 1,6-2,0 "m, mais la cel-

lule devient plus longue (3-4/um); l'accumulation de

PHB est importante. La motilité est positive. Les co-

lorations des flagelles (méthode au nitrate d'argent modifiée) montrent que la souche a une flagellation mixte, c'est-à-dire des flagelles polaires et latéraux,

aussi bien que des flagelles péritriches.

C. Caractéristiques physiologiques et biochimiques On donne ci-après les résultats d'essais effectu6s:

Résultat faible ou négatif avec la cyto-

chrome-oxydase; positif avec la catalase.

L'organisme est capable de développement

à 37 et à 41 C, mais pas à 43 C.

Tolérance à 3,0 % de NaCl, mais pas à 6,5

de NaCl.

Développement à des pH compris entre 5 et

12.

De l'acide, mais pas de gaz, est produit

dans des conditions aérobies à partir de divers hy-

drates de carbone, tels que les suivants: D-xylose lactose L-arabinose maltose D-glucose mélibiose fructose sucrose galactose tréhalose mannose raffinose Le lait tournesols est réduit, mais pas peptonisé. Les résultats sont positifs avec ADH, mais

pas avec LDC, ODC et PDA.

Les résultats sont positifs avec 1R, mais négatifs avec VP, l'indole et l'uréase. La gélatine d'esculine et Tween 80 sont faiblement hydrolysés, mais pas la caséine, l'amidon,

la cellulose et la pectine.

Pas de phosphatase, et hémolyse négative.

Pas d'inhibition par 0,1 % de chlorure de triphényltétrazolium.

Survie à 600 C pendant 30 minutes.

Les organismes se développent sur la gélose EBL et sur Tellurite Blood, mais pas sur les géloses

SS et MacConley.

D. Essai de sensibilité aux antibiotiques

La souche S-130 est sensible aux antibio-

tiques suivants:

Kanamycine.............. 0........ug.......

Néomycine............................. 30ug Chlorotétracycline....... 5g Novobiocine...................O...g. Erythromycine....... . ........ 15pg Tétracycline.. .0g............ g

Gentamicine..........................

Carbénicilline............. 0............ 5 g et n'est pas sensible à: Pénicilline........................... 10 unités Streptomycine............

......... 10 /ug /u Colistine............................. 10/ug Polymyxine B.......................... 300 unités E. Caractéristiques de nutrition Des facteurs organiques de développement..DTD: ne sont pas nécessaires et des sels d'ammonium ser-

vent de seule source d'azote. Un total de 30 composés -4-

organiques sont utilisés comme seule source de car-

bone et d'énergie. La plupart des hydrates de carbone

sont utilisés.

F. Teneur en G+C de l'ADNS On n'a pas effectué d'analyse de l'ADIN. G. Identification par le système API La souche n'a pas pu être identifiée par

ce système.

H. Identification La souche S-130 est un organisme aérobie

Gram-négatif en forme de bâtonnet. Le mode de fla-

gellation de l'organisme est mixte; on observe des

flagelles polaires et péritriches (peut-être des fla-

gelles dégénérés). Selon le Bergey's Manual (8ème édition), ces organismes appartiennent au genre Alcaligenes. TABLEAU I: Essais biochimiques et autres essais divers utilisés pour la souche S-130 Oxydase: de Kovac Pathotech Catalase milieu CF: oxydant fermentatif Gaz à partir de glucose Productioide 112S: TSI à partir de cystine Ammonium à partir de peptone p-galactosidase (ONPG) Arginine dihydrolase Lysine décarboxylase Ornithine décarboxylase Tryptophane désaminase Phénylalanine désaminase Uréase Indole Essai MR Essai VP Réduction de nitrate Réduction de nitrite Dénitrification Fixation de N2 Développement dans milieu de Burk Activité de nitrogénase Lalonate (oxydation) Phosphatase + (faible) + (faible + + t NT + + HT + Hydrolyse de Gélatine Caséine Amidon Tween 80 Pectine Alginate Cellulose Chitine ADN Esculine Développement sur divers Gélose EMB Gélose MacConkey Gélose SS Gélose au sel de manni' Gélose TCBS Gélose au sang et au tellurite de Tinsdale Gélose Pseudosel + (faible) + (faible) NT + s milieux + ! %1 tol + NT Production de pigment: Milieu King A Milieu King B + NT Réaction de colorants: Rouge Congo 0' 0. o C> C> C> TABLEAU I (Suite) Hémolyse (sang de mouton) Lait tournesolé: acide, réduction Production de 3-catolactose Survie à 60 C pend. 30 min. TSI: Culture inclinée "Butte" Gaz Réaction au jaune d'oeuf seulement + Acide Pas de développement + = positif - = négatif NT = pas essayé os J'. o o0 0n CD I VI Conditions de fermentation L'hétéropolysaccharide S-130 est produit durant la fermentation aérobie de milieux nutritifs aqueux appropriés dans des conditions contrôlées par inoculation de l'organisme de l'espèce nondénommée d'Alcaligenes. Les milieux sont des milieux usuels, contenant une source de carbone, d'azote et de sels inorganiques. En général, les hydrates de carbone (par

exemple le glucose, le fructose, le maltose, le su-

crose, le xylose, le mannitol, etc) peuvent être uti-

lisés isolément ou en combinaison comme sources de

carbone assimilable dans le milieu nutritif. La quan-

tité exacte de la source ou des sources hydrate de carbone qu'on utilise dans le milieu dépend en partie

des autres ingrédients dans le milieu, mais, en géné-

ral, la quantité d'hydrate de carbone varie habituel-

lement entre 2 et 4 % environ du poids du milieu. De préférence, on utilise 3 % de glucose. Ces sources de -carbone peuvent 8tre utilisées individuellement ou

plusieurs de ces sources de carbone peuvent être com-

binées dans le milieu. En général, de nombreuses ma-

tières protéiques peuvent être utilisées comme sources

d'azote dans la fermentation. Des sources d'azote uti-

lisables sont, par exemple,des hydrolysats de levures,

de la levure primaire, de la farine de soja, de la fa-

rine de graines de coton, des hydrolysats de caséine,

de la liqueur de macération de maïs, des résidus so-

lubles de distillation, de la pâte de tomates, etc. Les sources d'azote, isolément ou en combinaison, sont utilisées à raison de 0,05 à 0,4 CDU environ du poids

du milieu aqueux.

Parmi les sels inorganiques nutritifs qui peuvent être incorporés dans les milieux de culture, se trouvent les sels usuels capables de donner des -8ions de sodium, de potassium, d'ammonium, de calcium et des ions phosphate, sulfate, chlorure, carbonate,

etc. Sont inclus aussi des métaux présents en quanti-

tés de l'ordre de traces comme le cobalt, le manganèse, le fer et le magnésium.

Il y a lieu de noter que les milieux dé-

crits dans les exemples sont seulement illustratifs de la grande variété de milieux pouvant être utilisés,

et ne doivent pas être considérés comme limitatifs.

Une caractéristique importante des milieux est que quand la souche S-130 est cultivée dans des conditions de basse teneur en Ca ++, c'est-à-dire dans de l'eau désionisée ou dans un système aqueux ayant moins de 200 ppm d'ions Ca, la gomme résultante a

des propriétés améliorées de dissolution.

La fermentation est effectuée à des tempé-

ratures comprises entre 25 et 355C environ; toutefois, pour les meilleurs résultats, il est préférable de conduire la fermentation à des températures comprises entre 28 et 32 C environ. Le pH des milieux nutritifs pour le développement de la culture d'Alcaligenes et pour la production du polysaccharide S-130 peut varier

entre 6 et 8 environ, de préférence entre 6,5 et 7,5.

Bien que le polysaccharide S-130 soit pro-

duit par culture tant en surface qu'immergée, il est

préféré de conduire la fermentation à l'état immergé.

On effectue commodément une fermentation à

petite échelle en inoculant un milieu nutritif appro-

prié avec la culture et, après transfert à un milieu de production, en permettant à la fermentation de

s'effectuer à une température constante de 300C envi-

ron sur une secoueuse pendant plusieurs jours.

La fermentation est commencée dans un flacon stérilisé de milieu par une ou plusieurs étapes de

développement de germes. Le milieu nutritif pour l'é-

-9 -

tape de développement de germes peut être une combi-

naison appropriée quelconque de sources de carbone et

d'azote. Le flacon de développement de germes est se-

coué dans une chambre à une température constante de 30%0 environ pendant 1 à 2 jours, ou jusqu'à ce que le développement soit satisfaisant, et on utilise un peu du développement végétatif résultant pour inoculer un deuxième étage de développement de germes ou le milieu de production. Les flacons des étages intermédiaires de développement de germes, quand on les utilise, sont

développés essentiellement de la même manière; c'est-

à-dire qu'une partie du contenu du flacon du dernier étage de développement de germes est utilisée pour inoculer le milieu de production. Les flacons inoculés

sont secoués à une température constante pendant plu-

sieurs jours et à la fin de la période d'incubation

les contenus des flacons sont recueillis par précipi-

tation par un alcool approprié comme l'isopropanol.

Pour un travail à grande échelle, il est

préférable de conduire la fermentation dans des ré-

servoirs appropriés équipés d'un agitateur et d'un moyen pour aérer le milieu de fermentation. Selon ce

procédé, le milieu nutritif est préparé dans le ré-

servoir et stérilisé par chauffage à des températures allant jusqu'à 121'C environ. Après refroidissement,

le milieu stérilisé est inoculé avec des germes obte-

nus précédemment de la culture productrice et on laisse s'effectuer la fermentation pendant un laps de temps de, par exemple, 2 à 4 jours tout et agitant et/ou en aérant le milieu nutritif et en maintenant

la température à 3OC environ. Ce procédé de produc-

tion du S-130 convient particulièrement bien pour la

préparation de grandes quantités.

Le produit est recueilli à partir du milieu

de fermentation par précipitation par un alcool appro-

-10-

prié, comme l'isopropanol.

Hétéropolysaccharide S-150

L'hétéropolysaccharide produit par une es-

pèce non dénommée d'Alcaligenes est composé principa-

lement d'hydrates de carbone avec 3-5 % de groupes

acétyle comme l'ester à liaison 0-glycosidique.

La portion hydrate de carbone du polysaccha-

ride S-130 contient 10-20 % d'acide glucuronique; -25 % de mannose; 20-40 % de glucose; et 30-60 %

de rhamnose.

La teneur en groupes acétyle de 5-10 % a été déterminée en traitant une solution aqueuse à 0,2 % de gomme S-130 par un réactif alcalin, l'hydroxylamine,

cela étant suivi d'un traitement par un réactif chlo-

rure ferrique acide LS. Hestrin (1949) J. Biol. Chem.

, pages 249-261].

Les sucres neutres du polysaccharide S-130 ont été déterminés en dissolvant 10 mg du produit dans

2 cm3 de solution 211 de H2S04 et en chauffant le mé-

lange à 100 C pendant 4 heures. La solution résultante a été refroidie, neutralisée par l'hydroxyde de baryum

et on a porté le pH à 5-6 au moyen d'anhydride carbo-

nique solide. Le précipité résultant de sulfure de baryum a été éliminé par centrifugation et le liquide surnageant a été concentré à l'état d'un sirop sous pression réduite. On a tenté d'identifier les sucres dans l'hydrolysat par chromatographie gaz-liquide de

leurs dérivés aldononitrile acétate sur un chromato-

graphe modèle 5750 de Hewqlett-Packard en utilisant 3 %, en poids d'OV225 sur Gas Chrom Q en particules

de 0,149 à 0,177 mm à 210 C. On a identifié et déter-

miné quantitativement les sucres par comparaison avec des étalons authentiques {J.K. Baird, M.J. Holroyde,

et D.C. Ellwood [1973) Carbohydr. Res. 27 pages 464-

467].

-11 -

Les divers sucres neutres des polysaccha-

rides ont été caractérisés aussi par utilisation de chromatographie descendante sur papier sur du papier pour chromatographie Whatman N I en utilisant comme solvant la couche supérieure d'un mélange pyridine:

acétate d'éthyle: eau (2:5:5). On a coloré les chro-

matogrammes en utilisant une immersion dans le ni-

trate d'argent et un réactif pour pulvérisation phta-

late d'alanine acide. Les sucres constituants ont été identifiés par cochromatographie avec des étalons de sucres et par la réaction de couleur spécifique avec

le réactif phtalate d'alanine.

La teneur en acide glucuronique du poly-

saccharide a été déterminée par deux méthodes sépa-

rées. Dans une méthode, l'échantillon a été décarboxy-

lé par de l'acide chlorhydrique à 19 % et l'anhydride carbonique libéré a été recueilli dans de l'hydroxyde de sodium normal et on a effectué des déterminations par titrage en retour L B.L. Browning (1967) Methods of Wood Chemistr2 II, pages 632-633] et par la méthode colorimétrique au carbazole LT. Bitter et H.M. Muir

(1962) Anal. BioDhem. 4 pages 330-334].

On a utilisé une électrophorèse sur papier pour la séparation et la tentative d'identification de l'acide glucuronique présent dans l'hydrolysat

acide neutralisé décrit ci-dessus. Des portions ali-

quotes de ce dernier et des étalons connus d'acide glucuronique ont été appliqués sur du papier pour électrophorèse Camag 'E 68-011 et-on a effectué une électrophorèse pendant 2,0 heures dans un tampon au pH 2,7 en utilisant un appareil d'électrophorèse Camag modèle huVE. Les chromatogrammes ont été colorés avec le réactif pour immersion au nitrate d'argent

afin de localiser les acides glucuroniques séparés.

Le polysaccharide S-130 donne de la viscosité -12- à un milieu aqueux quand il est dissous dans l'eau à de faibles concentrations. Pour cette raison et aussi pour sa sensibilité au cisaillement et sa rhéologie d'ensemble, il est utile comme épaississant, agent de suspension, émulsionnant, stabilisant, lubrifiant,

agent filmogène ou liant, spécialement dans des sys-

tèmes aqueux. En particulier, il a des utilisations

dans les applications suivantes ou les produits sui-

vants: adhésifs, ciments pour joints de murs, mor-

tiers liquides et mortiers retenant l'eau, enduits pour bouchage de fissures, étanchéité des bottes de conserve, produits pour chaudières, crémage du latex, fondants pour baguettes de soudure, pâtes à braser, vernis céramiques et extrusions, produits de nettoyage et de brillantage, jouets, émulsions (latex, asphalte,

silicone), récupération de l'argent, enrobages de se-

mences, réglage de la pulvérisation pour pesticides ou herbicides, pesticides et herbicides fluides et concentrés émulsionnables, liants pour tabac, encres

à base d'eau, solutions pour distributeurs lithogra-

phiques, produits de finition pour cuir, hydro-paillage

et hydro-sémis, impression et finition de tissus, addi-

tifs pour papier à ajouter dans la partie humide, ad-

juvant de rétention et de formation pour papier à ajouter dans la partie humide, produits anti-adhésifs, agents de démoulage, résines liquides, explosifs en bouillie et emballés, boues de forage pour puits de pétrole et puits d'eau, fluides de stimulation pour pétrole, produits de beauté, suspensions et émulsions

pharmaceutiques.

De plus, cette gomme est utile dans des pro-

duits alimentaires tels que des Gelées et d'autres produits d'une haute teneur en sucre, des boissons comprenant des boissons à base d'acide citrique, des v5 produits laitiers comprenant la crème glacée et le

2:465000

-13- yaourt, des assaisonnements pour salade, des mélanges secs, des glaçages, des sirops, les gâteaux dits puddings, des aliments farineux, des aliments en boites de conserve et passés à l'autoclave et des produits de remplissage pour boulangerie. Une utilité particulièrement intéressante se trouve dans le domaine des boues de forage pour puits de pétrole et puits d'eau. Cn trouvera ci-après

des exemples plus détaillés illustrant cette utilisa-

tion préférée.

Bien que la gomme S-130 possède une proprié-

té générale consistant à donner de la viscosité, son profil particulier de propriétés en solution est une

caractéristique distinctive qui permet de la distin-

guer des autres hétéropolysaccharides.

Brièvement, la gomme est d'une haute visco-

sité en présence de 0,1 % de KCl (1650 cPo) et d'eau DI (1470 cPo). Elle présente une excellente stabilité à l'acide acétique à chaud (+36 A) et à la chaleur (-1 %). Un gel se forme en présence de chaleur et de

1 % de NaOH. Cette gomme est réactive à KOl, présen-

tant un accroissement de viscosité de plus de 16 % en présence de 0,1 % et de 2,5 % de ÉCl. Il se forme

un film fragile, d'une faible résistance à la trac-

tion.

Les propriétés suivantes de la gomme: bonne viscosité dans la saumure (KCl et ITaCl) et dans l'eau de mer, bonne stabilité aux acides et à la chaleur, viscosité constante dans des plages de pH de 1,5 à 12,1 et bonne stabilité au cisaillement, la rendent

spécialement utilisable pour des applications indus-

trielles comme dans des fluides de forage et des fluides pour l'industrie du pétrole. Spécialement, la gomme S-130 a une excellente stabilité à la chaleur et il ne se produit pas de perte de viscosité lors -14- d'un passage à l'autoclave à 121 C et à 1,05 kg/cm2

pendant 15-20 minutes.

1. Viscosité et cisaillement A. Brookfield Di H20 DIK2O + 0,1 % i C1 1. 1, 0,0 à 60 tpm 1470 cPo 1650 cPo à 6 tpm 10 400 cPo Rotor N 3 2. 0,1% (adaptateur UL)a 45 cPo 30 cPo 3. 0,5 % Uells-Brookfield à 9,6 s 680 cPo 1180 cPo B. Cisaillementb 1. n à 19,2 s 10 110 cPo 2. n à 9,6 s1 2 200 cPo 3. n à 76,8 s-1 320 cPo 4. n à 384 s-1 60 cPo

82 -1 6OF

5. n à 3&82 scPo 6. n à 9,6 s-1 1 800 cPo C. Stockage à 4,400 C

2050 cPo à 60 tpm avec rotor N 4, écoule-

ment très saccadé, accroissement de viscosité de 39 %

par rapport à la viscosité à la température ambiante.

2. Stabilité aux acides, aux bases et à la chaleur A. Stabilité 1. Acide acetique plus chaleur valeur initiale de n: 2500 cPo valeur finale de n: 5600 cPo % de changement: +36 2. I G HC1l plus chaleur valeur initiale de n: 1230 cPo valeur finale de n: perte totale % de changement: perte totale 3. 1 % NIaOH plus chaleur valeur initiale de n: 1380 cPo -15- valeur finale de n: Gel % de changement: Gel 4. Chaleur seulement valeur initiale de n: 2130 cPo valeur f inale de n: 2100 cPo % de changement: -1 B. Effet du pH 1. Acide acétique & 5 % pH Wl7 2560 cPoC 2. NH40H à 5% pH _11,09 200 cPoc 3. Compatibilité avec les sels et les colorants A. Sels 1. CaCl2 (saturé) compatible 2. Polyphosphate d'ammonium précipité 3. NI{4I03 à 60 % compatible 4. 1 % A1203(SO4)3.18H20 compatible 5. 1 % CaCl22H20 coM2atible 6. 1% KC1 comatible 7. 0,1 % OCl 2560 cPo 8. 2,5 % KCl 2560 cPo B. Colorants 1. Vert ';illing"' compatible 2. Bleu de méthylène précipité 4. Propriétés texture/écoulement

Gomme d'une haute viscosité, écoulement sac-

cadé, pas de gélification, gommeux au toucher.

5. Synergie et enz7umesc n à 1% à 0 heure à 2 heures _ du mélange du mélange A. Guar 2320 cPo 2560 cPo 2560 cPo B. H.P. Guar 1960 cPo 1950 cPo 2560 cPo C. CIC 870 cPo 1310 cPo 97o cPo D. HEC 440 cPo 870 cPo 1180 cPo E. SMS 47-6 2150 cPo -16- Viscosité prévisible Synergie A. Guar 2230 cPo + 15 % B. H.P. Guar 2050 cPo +25 % C. CLC 1360 cPo 0 % D. HEC 97 cPo +22 % 6. Réactivité avec le lait A. Dispersion: excellent B. Séparation du petit-lait: 1er jour C. Autres observations: 7. Formation de film S'étend de manière irrégulière; un film se forme, non plastique, très fragile, faible résistance

à la traction.

aviscosit mesurée sur un viscosimètre Brookfield

modèle LVF à 6 tpm avec le rotor IN 1 et un adapta-

teur UL.-

bToutes mesures effectuées sur un viscosimètre Wells-

Brookfield modèle RVT-c/p.

CViscosité mesurée sur un micro-viscosimètre Wells-

-1

Brookfield modèle RVT-c/p à 9,6 s1.

Exemple 1

Procédé de fermentation pour la production d'hétéro-

polysaccharide S-130 A. Entretien de la culture L'organisme Alcaligenes non-dénommé, ATCC 51555, pousse très bien sur gélose NA, avec une

bonne morphologie des colonies. La température d'incu-

bation est de 50 C. L'organisme produit un pigment

jaune.

B. Preparation de germes Des germes en ballons sont préparés dans du bouillon YlM mis à incuber à 50 C pendant 24 heures, puis utilisés pour inoculer un milieu de production de germes qui est le m me que dans le fermenteur -17-

final. On utilise un inoculum à 5 % pour le fermen-

teur de 14 litres.

C. Milieu dans le fermenteur final

Le milieu suivant donne des résultats ac-

ceptables dans le fermenteur de 14 litres et peut

8tre utilisé pour des fermenteurs de plus grande ca-

pacité, de 20 litres et de 70 litres: Glucose............................. * 3,0 %

K2HPO4.............................. 0,05 %

* Promosoy............................ 0,05 % NHeO3.. 6.. *.........a.0,09 %é

NH4N05, /.........................0C0

MgS04.7H20.0,1 % Fe+. ............. 1 ppm Sels HoLe....................... .1 ml/L On règle le pH entre 6,5 et 7,5. A O heure, le pH est de 7,3 et la quantité de source de carbone résiduelle mesurée est de 5,07 %. Après 25,5 heures, le pH est de 7,0 et la viscosité mesurée de la bière est de 2350. Après 63,5 heures, le pH est de 6,3 et

la viscosité de la bière de 3950 et on arrête la réac-

tion en ajoutant 4 % d'isopropanol.

Les sels HoLe sont une solution d'oligo-

éléments contenant du tartrate, du molybdate de magné-

sium, CoC13, ZnCl2, CuC12, de l'acide borique, du

chlorure de manganèse et du sulfate ferreux.

Les vitesses initiales d'agitation et d'aé-

ration sont de 400 tpm et de 3L/M, respectivement.

L'aération reste constante pendant toute la fermenta-

tion. On augmente l'agitation suivant le besoin durant

la fermentation pour assurer un bon mélange. L'agita-

tion maximale est de 1600 tpm.

Quand on désire un produit d'une basse te-

neur en calcium, on utilise le milieu ci-dessus avec

de l'eau désionisée.

-18- D. Recueil La bière de fermentation est pasteurisée à 0 pendant 1015 minutes. De bonnes fibres sont produites dans des conditions de précipitation donnant 58-60 % d'IPA usé. E. Séchage Le produit est recueilli après séchage à -55 C pendant une heure environ dans un séchoir à

plateaux à air forcé.

Le produit préparé dans cet exemple pré-

sente une viscosité à 1 % de 1490 dans l'eau désioni-

sée et de 2400 à 1 % dans de l'eau DI contenant 1 % de KCl ajouté. Il contient d'après l'analyse 12 % d'acide glucuronique, 28 % de glucose, 13 % de mannose, 59 % de rhamnose, 3,5 % de groupes acétyle et pas de pyruvate. Les mesures sur cette gomme indiquent un excellent développement de la viscosité dans KC1 à 2, avec une excellente stabilité à TTaCl et une excellente conservation de la viscosité jusqu'à au moins 149 C; on observe une légère gélification de la gomme dans

K01 à 2 %..

Exemple 2

Composition de boue à l'eau de mer S-130 est utile dans des boues utilisées pour le forage de puits de pétrole. Une formule et des résultats pour une boue à base d'eau de mer sont les suivants: S-130 1,0 kg Eau de mer 350 litres Résultats de viscosité Fann Vitesse (tpm) 3 6 100 200 300 600C Lecture sur le cadran 3,4 3,8 8,5 11,0 13,2 17,2 pH = 7,1

2465000.

-19-

Exemple 3

Composition d'un fluide de fracturation hydraulique

Exemple de fluide de fracturation hydrau-

lique - pour températures élevées (au-dessus de 93 C): -

pour 1000 litres: H20 % de méthanol ou 500 ppma de sulfite de sodium Z KCl 19,8 kg Persulfate d'ammonium 1,20 kg S-130 4,80 kg Viscosité du fluide ci-dessus: Fann 55 tpm 600 300 200 100 6 3 Viscosité, cPo 15,0 24, 2 5533,4 55,3 450 813

Z465000

-20-

Claims (2)

- REVENDICALTIOITS -

1 - Hétéropolysaccharide S-130 contenant -20 % d'acide glucuronique; 1025 % de mannose; -40 % de glucose; 30-60 % de rhamnose; et 3-5 % de groupes acétyle, préparé par fermentation dans des conditions contrôlées d'une culture de ATCC 31555,

une espèce d'Alcaligenes.

2 - Produit selon la revendication 1, carac-

térisé en ce qu'il contient moins de 200 ppm d'ions

Ca++.