FI97692B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatin ja esilääkkeen valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatin ja esilääkkeen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI97692B FI97692B FI913511A FI913511A FI97692B FI 97692 B FI97692 B FI 97692B FI 913511 A FI913511 A FI 913511A FI 913511 A FI913511 A FI 913511A FI 97692 B FI97692 B FI 97692B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antibody
- activator
- lysozyme
- prodrug
- cancer
- Prior art date
Links
- 239000012190 activator Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 32
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 29
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims description 73
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims description 73
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims description 71
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims description 69
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims description 69
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims description 69
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 44
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 37
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 32
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 31
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 16
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 9
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 claims description 9
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 6
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 claims 2
- 239000003139 biocide Substances 0.000 claims 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims 2
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 claims 2
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 claims 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims 2
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 claims 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 claims 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 40
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 4
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical class O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 67
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 43
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 39
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 25
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical group NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 15
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 11
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 10
- 239000003118 drug derivative Substances 0.000 description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 9
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical group C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 8
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- -1 amine acids Chemical class 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NITXODYAMWZEJY-UHFFFAOYSA-N 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanehydrazide Chemical compound NNC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 NITXODYAMWZEJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 4
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 4
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 101710172562 Cobra venom factor Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 241000872931 Myoporum sandwicense Species 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- DPTYILOGADPXRZ-RXDSZOQSSA-N Penta-N-acetylchitopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O[C@@H]([C@H](O)[C@H](C=O)NC(=O)C)[C@H](O)CO)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)NC(C)=O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 DPTYILOGADPXRZ-RXDSZOQSSA-N 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 3
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- QOLHWXNSCZGWHK-BWBORTOCSA-N (6r,7r)-1-[(4s,5r)-4-acetyloxy-5-methyl-3-methylidene-6-phenylhexyl]-4,7-dihydroxy-6-(11-phenoxyundecylcarbamoyloxy)-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,5-tricarboxylic acid Chemical compound C([C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)C(=C)CCC12[C@@H]([C@@H](OC(=O)NCCCCCCCCCCCOC=3C=CC=CC=3)C(O1)(C(O)=O)C(O)(C(O2)C(O)=O)C(O)=O)O)C1=CC=CC=C1 QOLHWXNSCZGWHK-BWBORTOCSA-N 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 0 C*(C)OC(C(C1NC(C)=O)*=C)*(CO)OC1O Chemical compound C*(C)OC(C(C1NC(C)=O)*=C)*(CO)OC1O 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 229940126559 Compound 4e Drugs 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 101001018100 Homo sapiens Lysozyme C Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- GUNOUNRTBRPXOQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(pyridin-2-yldisulfanyl)hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCSSC1=CC=CC=N1 GUNOUNRTBRPXOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMVJCTWESJIARS-QWWZWVQMSA-N (2r,3r)-2,3-bis(sulfanyl)butane-1,4-diol Chemical compound OC[C@@H](S)[C@H](S)CO IMVJCTWESJIARS-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- GSZQTIFGANBTNF-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)phosphonic acid Chemical compound NCCCP(O)(O)=O GSZQTIFGANBTNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOLCUFKJHSQMEL-BIXPGCQOSA-N (4-butylcyclohexyl) N-[(2S)-4-methyl-1-oxo-1-[[(2S)-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopyrrolidin-3-yl]propan-2-yl]amino]pentan-2-yl]carbamate Chemical compound CCCCC1CCC(CC1)OC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2CCNC2=O)C=O FOLCUFKJHSQMEL-BIXPGCQOSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGMXNNSYEFOBHQ-OWOJBTEDSA-N 2-[(e)-4-morpholin-4-ylbut-2-enyl]-1,1-dioxothieno[3,2-e]thiazine-6-sulfonamide Chemical compound O=S1(=O)C=2SC(S(=O)(=O)N)=CC=2C=CN1C\C=C\CN1CCOCC1 JGMXNNSYEFOBHQ-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 201000011057 Breast sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- MNLRQHMNZILYPY-MDMHTWEWSA-N N-acetyl-alpha-D-muramic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@@H]1NC(C)=O MNLRQHMNZILYPY-MDMHTWEWSA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 239000007868 Raney catalyst Substances 0.000 description 1
- NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N Raney nickel Chemical compound [Al].[Ni] NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000564 Raney nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010031650 Thy-1 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 101710181904 Venom factor Proteins 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 229940045719 antineoplastic alkylating agent nitrosoureas Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical group OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N chitotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)[C@@H](CO)O1 RQFQJYYMBWVMQG-IXDPLRRUSA-N 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical class COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- LIQODXNTTZAGID-OCBXBXKTSA-N etoposide phosphate Chemical compound COC1=C(OP(O)(O)=O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 LIQODXNTTZAGID-OCBXBXKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000752 etoposide phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108010062699 gamma-Glutamyl Hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229940051921 muramidase Drugs 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- HKOOXMFOFWEVGF-UHFFFAOYSA-N phenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=CC=C1 HKOOXMFOFWEVGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940067157 phenylhydrazine Drugs 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical class O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- DKACXUFSLUYRFU-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-aminocarbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NN DKACXUFSLUYRFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6891—Pre-targeting systems involving an antibody for targeting specific cells
- A61K47/6899—Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy [ADEPT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
97692
Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatin ja esilääkkeen valmistamiseksi
Keksinnön kuvaus 5 Tämä keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti käyttökelpoisen aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatin valmistamiseksi, joka sisältää lysotsyymin aktivaattorina ja ihmisen monoklonaalisen vasta-aineen tai sen fragmentin kohdistusosana. Keksintö koskee myös menetelmää terapeutit) tisesti käyttökelpoisen esilääkkeen valmistamiseksi, joka sisältää syöpää tuhoavan aineen, joka sisältää pilkottavissa olevan molekyylin, joka estää solun sisään joutumisen.
Keksinnön tausta 15 Lääkkeet eivät ole yleensä valikoivia kohde-elin- tensä tai -solujensa suhteen ja tämän tuloksena niillä on toksisia sivuvaikutuksia. Käsite, jossa liitetään terapeuttinen aine kantajamolekyyliin (esim. vasta-aineeseen), jolla on spesifisyyttä määrättyä kohdesolupopulaatiota 20 kohtaan on näin ollen houkutteleva, jotta saataisiin aikaan paikkaspesifinen lääkkeen vapautuminen. Viime vuosina esimerkiksi on käytetty useita monoklonaalisia vasta-aineita, jotka tunnistavat syöpään liittyviä solun pinta-antigeeneja, monien kliinisessä käytössä olevien syöpää 25 tuhoavien aineiden kantajina, kuten selostetaan katsauksessa (Vogel, C.-W., 1987). Tutkijat ovat kuvanneet sellaisten immunokonjugaattien spesifisiä ja voimakkaita sy-totoksisia vaikutuksia monissa in vitro -järjestelmissä. Vähemmän vaikuttavia ja jopa pettymyksen aiheuttaneita 30 tuloksia saatiin tutkittaessa sellaisten immunokonjugaattien immunoterapeuttista vaikutusta syöpää kantavilla eläimillä samoin kuin syöpäpotilailla. Nämä tulokset osoittavat, että immunokonjugaattien käsite asettaa joukon vaikeuksia, jotka täytyy vielä voittaa, koska ei ole ollut 35 mahdollista vapauttaa riittäviä määriä monoklonaalisiin . 97692 2 vasta-aineisiin liitettyjä lääkkeitä (katsauksena katso Vogel., C.-W. 1987).
Varhaisessa vaiheessa tajuttiin, että entsyymit voivat olla ylivoimaisia lääkkeisiin nähden. Ribosomeja 5 inaktivoivat proteiinit (RIP:t) ovat entsyymejä, ja niiden sytotoksista vaikutusta vahvistaa tämä entsymaattinen aktiivisuus. Kuitenkin, lääkkeiden tavoin RIPrien on jouduttava solun sisään, vapauduttava vasta-ainekantajasta ja päästävä asianmukaiseen solunsisäiseen osaan vaikutustaan 10 käyttääkseen. Lisäksi, ollakseen tehokkaita RIP:t tarvitsevat sen, että jokainen kohdesolu ilmentää antigeeniä, ja niillä on luontaista sytotoksisuutta, joka rajoittaa sitä määrää joka voidaan antaa.
Toinen entsymaattinen lähestymistapa käyttää vasta-15 aineeseen kytkettyä pinta-aktiivista entsyymiä. Tämä vasta- aine-entsyymikonjugaatti ei vaatisi solun sisään joutumista ja kykenisi käyttämään sytotoksista vaikutusta alueen soluihin. Yksi esimerkki pinta-aktiivisesta entsyymistä, jota on käytetty vasta-ainekonjugaattina, on fos-20 folipaasi C, joka hyökkää kaikkien solukalvojen fos-folipidien kimppuun suoraan tarvitsematta solun sisään joutumista. Fosfolipaasin kyky hyökätä fosfolipidien kimppuun kaikissa soluissa on kuitenkin luontaisen sytotok-sisuuden merkki, mikä rajoittaa sen hyödyllisyyttä (Flic-25 kinger & Trost, 1976). Toinen vasta-ainekonjugaattina käytetty pinta-aktiivinen entsyymi on kobran myrkyn faktori (CVF), komplementtia aktivoiva entsyymi, joka sen lisäksi ettei sen tarvitse joutua solujen syömäksi ei ole luontaisesti sytotoksinen (Vogel, C.-W., 1987). Kuitenkin, 30 kaikkien vieraiden proteiinien tavoin CVF on hyvin immuno-geeninen ja sen käyttö syöpäsolujen hoidossa on näin ollen rajoittunut.
Toinen lähestymistapa käytti vasta-aine-emäksinen fosfataasi -konjugaatteja etoposidijohdannaisen defosfo-35 rylaatioon. Tämän lähestymistavan ongelmia ovat kilpailu 3 976 92 veressä kiertävien sisäsyntyisten substraattien kanssa, mikä rajoittaa entsymaattista aktiivisuutta kohteessa, ja korkea entsyymiaktiivisuuden taso verenkierrossa ja ei-kohdekudoksissa, mikä johtaa epäsuotavan sytotoksisen ak-5 tiivisuuden nousuun (Senter et ai., 1988).
Erilainen entsymaattinen käsite käytti karboksipep-tidaasi-G2:ta, joka katkaisee olennaisen kasvutekijän, fo-laatin (Searle et ai., 1986). Riittävä folaattitason lasku vaatii kuitenkin kohdekudoksessa korkeamman entsyymikon-10 jugaattitason kuin voidaan saavuttaa käyttämällä vasta-aine-entsyymikonjugaattia in vivo.
Yllä kuvatun kaltaisten erityisten haittojen lisäksi kaikilla entsymaattisilla lähestymistavoilla on immuno-geenisyysongelma. Vasta-aineiden kehittyminen entsyymejä 15 vastaan johtaa vaikutuksen inaktivoitumiseen tukkimisen ja eteerisen esteen kautta ja vasta-aine-entsyymin nopeaan poistumiseen verenkierrosta. Tästä syystä K.D. Bagshawen (1987) ehdottama järjestelmä, joka käyttää entsyymi-vasta-ainekonjugaattia lääkkeen aktivoimiseen, antaisi parhaim-20 millään hyödyllisiä tuloksia vain yhtenä annoksena, ja immuunivaste saattaa estää tehon jopa tällöin. Bagshawen käsite käyttää ei-nisäkäsperäisiä entsyymejä, joilla ei ole analogeja ihmisillä, jotta vältettäisiin muiden entsyymien kuin konjugaatissa läsnäolevan entsyymin aiheut-25 tama aktivoituminen. Nämä entsyymit olisivat kuitenkin hyvin immunogeenisia, erityisesti konjugoituina.
Keksinnön yhteenveto
Olemme keksineet uuden lähestymistavan lääkkeen vapautumiseen käyttäen kohdistettua entsyymiä joka kier-30 tää yllä mainitut rajoitukset. Ehdotamme kaksivaiheista menetelmää. Ensimmäiseksi olennaisesti ei-immunogeeninen kohdistusosa-aktivaattori -konjugaatti, joka sisältää ak-tivaattorin, tyypillisesti entsyymin, kohdistusosaan kytkettynä. Edullisessa suoritusmuodossa kohdistusosa on vas-35 ta-aine, joka sitoutuu solun pinnalla tai syövän solunul- 97692 4 koisella alueella (esim. nekroottisella alueella) sijaitsevaan, syöpään liittyvään antigeeniin. Vasta-aine-akti-vaattori -konjugaatti pysyy spesifisesti syövässä. Jos on tarpeen, sitoutumattoman konjugaatin annetaan poistua ve-5 renkiertojärjestelmästä riittävässä määrin toksisten sivu vaikutusten välttämiseksi. Tarvittaessa tätä menetelmää voidaan nopeuttaa in vivo kompleksin muodostuksella tai ex vivo adsorboimalla spesifiseen matriisiin. Toiseksi annetaan suhteellisen myrkytön lääkejohdannainen (esilääke), 10 jota solut eivät voi ottaa sisäänsä. Syöpäkohdassa vasta-aineeseen sitoutunut entsyymi "aktivoi" lääkejohdannaisen, muuttaen esilääkkeen lääkemolekyyliksi joka pystyy menemään antigeenipositiivisten samoin kuin antigeeninegatii-visten syöpäsolujen sisään syöpäkohdassa ja käyttämään 15 vaikutustaan. Lisäksi lähestymistapamme sallii ei-immuno-geenisen esilääkkeen toistetun antamisen, täten voimakkaasti vahvistaen tämän terapeuttisen lähestymistavan tehokkuutta. Lisäksi tämä lähestymistapa ei rajoitu syöpää tuhoavaan hoitoon, vaan sitä voidaan soveltaa mihin tahan-20 sa järjestelmään tarvittaessa terapeuttisen aineen paik-kaspesifistä vapautumista. Esimerkkeihin muista taudeista, joiden kanssa tätä paikkaspesifistä aktivaatiomenetel-mää voidaan käyttää, kuuluvat tarttuvat taudit, autoimmuunitaudit ja muut tulehdustaudit. Kohdistettu aktivaatio-25 kohta voi olla täten erityinen kudos tai erityinen solu-tyyppi, tartuntaa aiheuttavat organismit mukaan lukien.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle aktivaattori-koh-distusosa -konjugaatin valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään ja keksinnön 30 mukaiselle menetelmälle esilääkkeen valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 2 esitetään.
Keksinnön etuna on, että konjugaattien ei tarvitse joutua kohdesolun syömäksi. Täten potilaassa voidaan pitää yllä toistuva ja pitkäaikainen esilääkkeen muuttaminen, 35 mukaan lukien vasta-aine-aktivaattori -konjugaattien toistuvat inj ektiot.
97692 5
Tiettyjen vaatimusten täytyy täyttyä keksintöä varten. Ensiksikin kohdistusosan (vasta-aineen) ja kohdis-tusosaan sitoutuneen aktivaattorin (entsyymin) täytyy olla alkuperää, joka on yhteensopiva hoidettavan lajin kanssa, 5 jotta estetään konjugaattien immunologinen inaktivaatio. Siinä tapauksessa että hoidetaan ihmisiä, niiden pitäisi olla ihmisperäisiä tai ihmistyyppisiä, joko olemalla geneettisesti konservoituneita tai olemalla peräisin geneettisesti samankaltaisesta lajista, ja täten olla olennai-10 sesti ei-immunogeenisiä jotta estetään näitä molekyylejä vastaan suuntautuneiden vasta-aineiden kehittyminen. Esi-lääkkeen täytyy myös olla olennaisesti ei-immunogeeninen. On osoitettu, että tapahtuu vasta-aineiden kehittymistä immunokonjugaateissa (esim. hiiren vasta-aineissa) olevia 15 vieraita proteiineja vastaan. Ihmisen anti-hiiri -vasta-aineen muodostusta on raportoitu syöpäpotilaissa näiden saatua yksittäisiä injektioita hiiren monoklonaalisia vasta-aineita (McCallister et ai., 1988), mikä täten rajaa näiden aineiden soveltuvuuden yhteen hoitosarjaan. Monilla 20 yksilöillä on jopa ennalta olemassaolevia vasta-ainetasoja hiiren immunoglobuliinia vastaan ennen kuin he saavat ensimmäisen annoksensa hiiren vasta-ainetta (Schroff, R. W. et ai, 1985). Lisäksi, kahden tai useamman injektion jälkeen 50 %:lla potilaista voidaan havaita vasta-ainevas-25 teitä jopa heikosti immunogeenisiä vasta-aineiden F^-fragmentteja vastaan (Reynolds, J. C. et ai, 1986). Täten, tarkoitamme olennaisesti ei-immunogeenisella sitä, että aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatti ja esilääke voidaan antaa potilaalle toistuvasti aiheuttamatta potilaassa im-30 muunivastetta, joka estää konjugaattien paikantumista, esilääkkeen aktivoitumista tai aktivoidun lääkkeen aktiivisuutta siinä määrin että terapeuttinen teho estyy.
Toinen vaatimus on, että vasta-aineeseen sitoutuneella entsyymillä ei olennaisesti saa olla luontaisesti 35 esiintyvää substraattia verenkierrossa tai ei-kohdesolujen 97692 6 pinnalla. Luontaisesti esiintyvän substraatin olemassaolo isännässä on epäedullista, koska se kilpailee esilääkkeen aktivoitumisen kanssa ja johtaa siihen että esilääkettä aktivoituu vähemmän. Luontaisesti esiintyvien substraat-5 tien poissaolo on myös tärkeää, jotta vältetään vahingolliset sivuvaikutukset, jotka johtuvat entsymaattisesta aktiivisuudesta isännässä ennen vasta-aine-aktivaattori -konjugaatin paikantumista. Vastaavasti sellaiset entsyymit kuten fosfolipaasi-C ja fosfataasit eivät ole sove-10 lialta, koska niillä on luontaisia substraatteja ihmisillä. Määritellään "olennaisesti ei luontaisesti esiintyvän substraatin" sellaisten substraattimäärien poissaoloksi, jotka joutuessaan kontaktiin aktivaattorin kanssa konju-gaattia annettaessa estäisivät esilääkkeen terapeuttisesti 15 tehokkaan muuttumisen lääkkeeksi syöpäkohdissa. Samoin substraatti ei voi olla läsnä määrinä, jotka aiheuttaisivat haitallisia sivuvaikutuksia luontaisesti läsnäolevaan substraattiin kohdistuvan entsymaattisen vaikutuksen johdosta.
20 Kolmas tärkeä vaatimus keksinnölle on, että konju gaatin entsymaattista aktiivisuutta ei saa olennaisesti olla läsnä tai sitä saa olla läsnä vain hyvin alhaisina määrinä verenkierrossa tai ei-kohde-elinten solujen pinnalla, jotta vältetään kohdistumaton esilääkkeen aktivoi-25 tuminen, joka johtaisi aktivaatioon muualla kuin syöpäkoh-dassa. Esimerkiksi emäksisen fosfataasin, ihmisseerumissa varsin korkeina tasoina esiintyvän entsyymin, osoitetaan defosforyloivan molekyylipainoltaan alhaisia yhdisteitä muutamassa minuutissa ihmisseerumissa (Hamm et ai, 1988). 30 Vähäisissä määrin läsnäolevaa entsymaattista aktiivisuutta voidaan edelleen laskea tämän keksinnön vaatimuksen saavuttamiseksi poistamalla vasta-aine verenkierrosta. Tämä voidaan tehdä in vivo muodostamalla immuunikomplekseja tai ex vivo spesifiseen matriisiin adsorboimalla. Konjugaatin 35 entsymaattisen aktiivisuuden olennainen poissaolo määri- 97692 7 tellään niin, että esilääke ei aktivoidu muissa kohdissa kuin syöpäkohdissa siinä määrin että lääkkeen terapeuttinen vaikutus estyy tai ei-syöpäkudoksessa aiheutuu epä-suotavaa sytotoksisuutta, tai molempia.
5 Edullisten suoritusmuotojen kuvaus
Alla kuvatut esimerkit käyttävät ihmisen mono-klonaalista IgM-vasta-ainetta ja ihmisen lysotsyymiä ak-tivaattorina ja doksorubisiinijohdannaista efektorikom-ponenttina (esilääkkeenä). Tämä järjestelmä havainnollis- 10 taa keksintömme etuja, jotka ovat: a) kaikki komponentit, kohdistusosa, aktivaattori ja esilääke ovat olennaisesti ei-immunogeenisiä, mikä sallii toistuvan kohdistuksen samoin kuin esilääkkeen toistuvan antamisen; 15 b) vasta-aine-efektori -kompleksi on myrkytön, tä ten sallien suurten kompleksimäärien antamisen. Esilääke käyttää täyttä sytotoksista aktiivisuuttaan vain aktivaation jälkeen; c) konjugaatin joutumista solun sisään ei vaadita, 20 täten esilääkkeen toistuvaa muuttumista lääkkeeksi voidaan käyttää peräkkäisissä antamisissa; d) antigeenin ilmentymistä kohdekudoksen kaikissa soluissa ei vaadita, koska muutoksen jälkeen lääkemolekyy-lit kykenevät menemään sekä antigeenipositiivisten että 25 antigeeninegatiivisten solujen sisään; e) lysotsyymillä ei ole ihmisissä luonnollisesti ilmenevää substraattia aktiivisuudelleen, millä näin vältetään lysotsyymin aktiivisuudesta kilpaileminen ja tätä seuraavat haitalliset vaikutukset (Lysotsyymin luonnolli- 30 sena substraattina ovat bakteerien soluseinien polymee rit, jotka koostuvat vuorottelevista N-asetyylimuramiini-happo- ja N-asetyyliglukosamiinitähteistä. ); ja f) lysotsyymiä esiintyy verenkierrossa vain hyvin alhaisina määrinä, jotka ovat peräisin lysotsyymiä sisäl- 35 tävistä valkosoluista, eikä sitä ilmennetä solujen pinnoilla (Briggs et ai, 1966).
97692 8 Tässä kuvattu menetelmä on kuitenkin sovellettavissa moniin perusvaatimukset täyttäviin vasta-aineisiin ja aktivaattorijärjestelmiin, eikä käsite ole rajoittunut lysotsyymi-aktivaattori -järjestelmiin. Todellakin, yksi 5 lähestymistapamme etu on se, että se on paljon sallivampi vasta-aineen ominaisuuksien suhteen kuin järjestelmä, joka vaatii, että kohdesolut syövät vasta-aineen. Lisäksi ak-tivaattorin ei tarvitse olla entsyymi, vaan mikä tahansa yhdiste joka toimii muuttaen esilääkkeen aktiiviseksi 10 osaksi, kuten esimerkiksi katalyyttiseksi vasta-aineeksi (Napper et ai, 1987).
Kohdistusosan valinta Tämän keksinnön mukaisesti mitä tahansa antigeeniä vastaan suunnattuja vasta-aineita voidaan käyttää kohdis-15 tusosana. Vasta-aineiden lisäksi kohdistusosina voidaan käyttää muita molekyylejä joilla on affiniteettia kohdistettuihin spesifisiin soluihin, kudostyyppeihin tai tar-tunnanaiheuttajiin. Esimerkiksi sytokiineilla on erityistä spesifisyyttä tietyntyyppisiä soluja kohtaan ja niitä voi-20 daan käyttää kohdistusosina. Vaikka kohdistusosana voidaan käyttää muunkintyyppisiä molekyylejä kuin vasta-aineita, kuten antigeenejä, vasta-ainefragmentteja, lektiiniä, hormonia tai ligandia, yksinkertaisuuden vuoksi termiä vasta-aine käytetään seuraavassa pohdinnassa siinä tarkoitukses-25 sa, että muunkintyyppisiä kohdistusosia voidaan käyttää niiden sijasta.
Tavanomaisia polyklonaalisia vasta-aineita voidaan käyttää käsitteeseen kuuluvina kantajamolekyyleinä. Kuitenkin monoklonaaliset vasta-aineet tarjoavat monia etuja. 30 Kukin monoklonaalinen vasta-aine on spesifinen yhdelle antigeeniselle determinantille. Täten monoklonaalisten vasta-aineiden kanssa normaalikudoksiin kohdistuvan epäspesifisen sitoutumisen määrä ja tätä seuraava myrkyllisyys normaaleille ei-kohdekudoksille vähenee. Lisäksi, 35 koska voidaan tuottaa rajattomia määriä kutakin monoklo- 97692 9 naalista vasta-ainetta, kaikkia yksittäisiä vasta-aine-valmisteita voidaan kontrolloida sen varmistamiseksi, että antigeenispesifisyys pysyy vakiona vasta-ainetuotteen kes-toiän ajan. Erilaisia monoklonaalisia vasta-aineita, jotka 5 ovat spesifisiä eri epitoopeille samoilla kudosspesifi-syyksillä, voidaan yhdistää. Täten, kun käytetään mono-klonaalista vasta-ainetta tai monoklonaalisten vasta-aineiden seosta, vapautumissysteemin tehokkuus ja hallinta paranee ilman, että uhrataan mitään sellaisia myötävaiku-10 tuksia järjestelmän tehokkuuteen, jotka voidaan saavuttaa tavanomaisilla polyklonaalisilla reagensseilla.
Edullinen lähestymistapa on käyttää monoklonaalisia tai polyklonaalisia vasta-aineita, jotka ovat peräisin samasta lajista kuin hoitoa saava eläin. Enimmäkseen, 15 poikkeuksena eläinlääketieteelliset sovellutukset, on suotavinta käyttää ihmisen, ihmistyyppiseksi tehtyjä tai yhdistelmä-vasta-aineita, jotka ovat koostumukseltaan lähinnä ihmistyyppiä. Monia monoklonaalisia ihmisvasta-aineita on kuvattu. Myös on kuvattu lähestymistapoja, 20 Joissa tehdään ihmistyyppiseksi vasta-aineita jotka ovat kehittyneet ei-ihmislajin imusoluista, ja menetelmiä jotka käyttävät ei-ihmisvasta-aineiden vaihtelevan alueen geenejä, jotka on geneettisesti liitetty ihmisen vasta-aineen vakioalueen geeneihin. Homologisten ja geneettisesti muo-25 kettujen vasta-aineiden edut ovat lukuisia. Toisin kuin heterologisille, esim. hiiren tai rotan vasta-aineille, immuunivaste homologiselle vasta-aineelle on minimaalinen. Enintään ilmenee heikko vaste ihmisvasta-aineen idiotyyp-pisille determinanteille ja silloinkin vain monien anto-30 kertojen jälkeen. Ihmisen monoklonaalista vasta-ainetta 16-88 käyttävissä kliinisissä tutkimuksissamme emme ole havainneet mitään immuunivasteen induktiota vasta-aineen minkään alueen, idiotyyppisen, allotyyppisen tai runko-osan (framework) suhteen, toistettujen annosten - jopa 200 35 mg/viikko - jälkeenkään (Steis et ai, 1990). Tämä etu sai- 97692 10 lii koskemattoman, kokonaisen immunoglobuliinin pikemminkin kuin nopeammin metaboloituvien vasta-ainefragmenttien käytön, sallii koskemattoman, kokonaisen immunoglobuliinin korkeiden annosten antamisen, ja sallii monien vasta-ai-5 neen antokertojen käytön. Homologisissa lajeissa tuotetuilla vasta-aineilla on lisäetuja, sillä ne tunnistavat hienoja antigeenisiä eroja, joita heterologiset vasta-aineet tai edes geeniteknologisin menetelmin käsitellyt ihmisvasta-aineet eivät tunnista.
10 Vasta-aine voidaan suunnata mitä kohdetta vastaan tahansa, esim. syöpä-, kudos-, bakteeri-, sieni-, virus-, lois-, mykoplasma-, kudostyyppi- tai erilaistumisanti-geeneja tai -reseptoreja ja jne. Vasta-aine voi olla mistä luokasta tahansa, IgG, IgA, IgE tai igM, ja voidaan käyt-15 tää yhdistelmänä vasta-aineita, jotka reagoivat erilaisten antigeenisten determinanttien kanssa. Yksinkertaisuuden vuoksi kohteeseen viitataan seuraavassa kohdekudoksena, mikä on mikä tahansa näistä materiaaleista joille kohdis-tusosalla on affiniteettia.
20 Keksinnön sovellutuksissa, joissa sytotoksiset ai neet aktivoidaan syöpäsolujen ympäristössä, syöpäsolujen ei tarvitse syödä kohde-antigeenia tai -vasta-ainetta jotta sytotoksinen aine menee solun sisään, kuten tapauksessa jossa vasta-aine on kemiallisesti sitoutuneena sytotoksi- 25 seen aineeseen.
Aktivaattorin valinta
Aktivaattoriaktiivisuuden ei normaalisti pitäisi olla läsnä verenkierrossa tai saatavilla olevissa ei-koh-dekudoksissa, tai sen pitäisi olla läsnä hyvin matalina 30 tasoina, niin että verenkierrossa ja ei-kohdekudoksissa olevan lääkkeen epäsuotavaa aktivaatiota tapahtuu vain hyvin vähäisessä määrin, joka ei johda haitallisiin sivuvaikutuksiin. Lisäksi aktivaattorin substraattien tai aktivaattorin inhibiittoreiden ei pitäisi olla läsnä veren-35 kierrossa tai kohdekudoksissa siinä määrin, että se vaa- 97692 11 rantaa terapeuttisen edun. Ylivertainen etu saavutetaan, jos konjugaatti valitaan niin että se on ei-immunogeeninen valitsemalla samasta lajista peräisin oleva entsyymi kuin hoitoa saava eläin tai lähes identtinen entsyymi. Monet 5 entsyymit ovat säilyneet hyvin evoluutiossa, niin että alemmista lajeista eristetyt molekyylit ovat lähes identtisiä ihmi sent syyniin kanssa.
Vasta-aineeseen kiinnittynyt aktivaattori voi olla minkä luokan entsyymi tahansa; hydrolaasi, oksidoreduktaa-10 si, transferääsi, isomeraasi, lyaasi tai ligaasi, tai vasta-aine jolla on samanlaisia katalyyttisia vaikutuksia (viite Napper et ai, 1987).
Endoglykosidaasientsyymi täyttää yllämainitut vaatimukset aktivaattorin aktiivisuudelle. Lisäksi sen pieni 15 molekyylipaino, yhdestä ketjusta koostuva rakenne ja hyvin tutkitut kemialliset ja rakenneominaisuudet (Imoto et ai, 1972) mahdollistavat entsyymin kemiallisen liittämisen vasta-aineeseen. Lystosyymi on 129-130 aminohapon emäksinen endoglykosidaasi, joka on hyvin konservoitunut. Niin-20 kin erilaisista lajeista kuin kanasta, viiriäisestä ja ihmisestä peräisin olevat lysotsyymit ovat lähes identtisiä aminohappotähteiden lukumäärän, primaaristen amiinien lukumäärän ja tässä katalyyttisessä mekanismissa mukanaole-vien aminohappojen lukumäärän suhteen. Lysotsyymi on sta-25 biili välillä pH 2 - pH 11 aina 77 eC lämpötiloihin saakka. Lisäksi lysotsyymi kestää epätavallisen hyvin useimpien denaturoivien aineiden alhaisia konsentraatioita. Täydellinen disulfidisidoksien pelkistyminen eliminoi ly-sotsyymin entsyymiaktiivisuuden. Ihmisessä lysotsyymiä 30 esiintyy maidossa, kyynelissä, syljessä, istukassa, pernassa, valkosoluissa ja monosyyteissä. Veressä oleva lysotsyymi on peräisin valkosoluista ja monosyyteistä. Normaalit veren tasot ovat noin 1 % kyynelten tasoista (Os-serman ja Lawlor, 1966). Lysotsyymi hyökkää N-asetyyliglu-35 kosamiinin (GlcNAc) ja N-asetyylimuramiinihapon välisen β- 12 97692 (1 -» 4) -sidoksen kimppuun joidenkin bakteerien solusei-nässä ja hyökkää kitiinin, lineaaristen B-(l -» 4) -sidok-slsten Nasetyyllglukosamllnlpolymeerlen kimppuun. Edulliset substraatit ovat polymeerejä, jotka ovat yhtä suuria 5 tai suurempia kuin (GlcNAc)6.
Aktivaattorin kytkentä vasta-aineeseen Tämän keksinnön menetelmän mukaisesti aktivaattori-entsyyml tai katalyyttinen vasta-aine kytkeytyy kohdistus-vasta- aineeseen tavalla, joka säilyttää kompleksin kyvyn 10 sitoutua antigeeniin ja aktivoida esilääkekomponentti. Tämä saadaan aikaan käyttämällä homo- tai heterobifunktionaalisia ristisidoksia muodostavia aineita tai suoraan proteiinia muokkaavia reagensseja, jolloin saadaan aikaan hyvin reaktiivisia ryhmiä sekä aktivaattorikomponenttiin 15 että kohdistusosaan. Näillä reaktiivisilla ryhmillä deri-vatisoituina aktivaattori ja kohdistuskomponentit kytkeytyvät yhteen kovalenttisella sidoksella kun ne sekoitetaan yhteen.
Proteiineihin tai peptideihin voidaan tuoda kytken-20 täryhmiä (linkers) saattamalla ne reagoimaan amino-, kar-boksyyli- tai sulfhydryyliryhmien kanssa (Wawrzynczak ja Thorpe, 1987) ja glykoproteiiniin ja hiilihydraatteihin sokerin hapetuksen jälkeen, jolloin saadaan aldehydejä (Sela ja Hurwitz, 1987). Aldehydit voidaan saattaa reagoi-25 maan kytkentäryhmän aminoryhmien kanssa (esim. hydratsi-din), jolloin muodostuu Shiffin emäs (esim. hydratsoni).
Sulfhydryyliryhmiä voidaan saada aikaan monien biologisten molekyylien kysteiinitähteistä, mukaan lukien vasta-aineet ja entsyymit. Nämä tähteet voidaan derivati-30 soida reaktiivisten ryhmien kanssa muuttamatta molekyylien biologista toimintaa. Vasta-ainemolekyylien joukossa kaikki luokat sisältävät ketjun sisäisiä ja ketjujen välisiä disulfidisidoksia, jotka stabiloivat molekyylin tertiääri-ja kvaternäärirakennetta. IgM-luokan vasta-aineiden ta-35 pauksessa raskaan ketjun rakenne sisältää useita disul-
·» Mi anti UIN
97692 13 fidisidoksia, jotka voidaan derivatisoida miedon pelkistyksen jälkeen vasta-aineen menettämättä toimintaansa. Vapaat sulfhydryyliryhmät reagoivat sitten halogeenialkyy-liryhmien, p-elohopea(2)bentsoaattiryhmien ja Michael-tyy-5 pin additioreaktioon kykenevien ryhmien kanssa, mukaan lukien esimerkiksi malemiidit ja sentyyppiset ryhmät joita on kuvattu Mitran ja Lawtonin (1979) artikkelissa.
Useimmin käytetyt proteiineihinliittämismenetelmät perustuvat lysiinin nukleofUlisten epsilon-aminoryhmien 10 hyökkäykseen. Aminoryhmä voi reagoida karbonyylifunktioi-den kanssa joita ovat saaneet aikaan hyvin reaktiiviset sukkinimidiesterit, anhydridit tai sykliset tioesterit, tai aktivoimalla karbonyylifunktioita karbodi-imidien kanssa, jolloin muodostuu karboksiamidisidoksia. Vaihto-15 ehtoisesti voidaan muodostaa amidiniumsidos hyökkäämällä aminoryhmään metyyli-imidaattiestereillä.
Efektorimolekyylien valinta Käytettävät efektoriyhdisteet valitaan aiotun sovelluksen tarkoituksen mukaan (esim. tappaminen, solun 20 lisääntymisen estäminen, hormoni terapia tai geeniterapia). Nämä yhdisteet voivat sisältää esimerkiksi farmaseuttisia aineita, toksiineja, alkyloivia aineita, entsyymejä, antibiootteja, antimetaboliitteja, lisääntymistä estäviä aineita, hormoneita, hermoston välittäjä-aineita, DNA:ta, 25 röntgensäteitä läpäisemättömiä väriaineita, paramagneetti- sia väriaineita, radioaktiivisia isotooppeja, fluorogeeni-sia yhdisteitä, markkeriyhdisteitä, solukalvon läpäisevyyttä muuttavia yhdisteitä ja liukenemattomia matriiseja. Ylläolevan ei millään tavoin ole tarkoitus olla kattava 30 lista eikä sen ole tarkoitus rajoittaa keksinnön suoja-alaa. Lopuksi, voidaan käyttää yhdisteiden yhdistelmää. Esimerkkeihin syöpää tuhoavista aineista, joita voidaan käyttää esilääkkeiden valmistuksessa keksinnön mukaisesti kuuluvat nukleosidianalogit, syklofosfamidit ja analogit, 35 nitrosokarbamidit, mitromysiinit, alkyloivat aineet, aika- 97692 14 loidit, bleomysiini, antrasykliinit ja sisplatiini ja analogit.
Edullinen esimerkki antrasykliinistä on doksorubisiini, joka voidaan konjugoida negatiivisesti varautunei-5 siin tähteisiin katkaistavissa olevalla väliryhmällä. Negatiivisesti varautuneiden tähteiden läsnäolon vuoksi solut eivät ota sisäänsä koskematonta lääkejohdannaista eikä se voi käyttää solunsisäistä sytotoksista aktiivisuuttaan. Kuitenkin, väliryhmän pilkkoutuessa (esim. entsymaattises-10 ti) negatiivisesti varautuneet tähteet poistetaan ja lääke johdannainen voi mennä solujen sisään käyttämään vaikutustaan.
Suunnittelimme lääkejohdannaisen, joka koostuu seu-raavista osista: 15 a) syöpää tuhoava aine doksorubisiini; b) kitiini-oligomeeriväliryhmä, joka on konjugoitu doksorubisiiniin pelkistävän päänsä välityksellä lääkkeen C13-karbonyyliryhmään; ja c) kaksi tauriinitähdettä, jotka ovat liittyneet 20 kahteen aldehydiryhmään, jotka ovat syntyneet kitiini-oli- gomeeriväliryhmän ei-pelkistävään päähän periodaattihape-tuksella.
Doksorubisiini kuuluu ryhmään antrasykliinilääkkei-tä, joita on tutkittu laajasti kasvaimia tuhoavina ainei-25 na syöpäpotilaiden hoidossa (Young ja Ozols, 1981). Dok-sorubisiinilla on tärkeä rooli monien kasvainsairauksien, kuten leukemian, rintasyövän ja sarkoomien tehokkaassa hoidossa. Doksorubisiinin tehokasta käyttöä ovat kuitenkin vaikeuttaneet tavanomaiset myrkyllisyydet (veren muodos-30 tuksen suppressio, pahoinvointi ja oksentelu sekä tukan-lähtö) samoin kuin ainutlaatuiset myrkyllisyydet (sydän-lihassairaus). Tässä hahmotellun kaltainen paikkaspesifi-nen aktiivisten doksorubisiinimolekyylien vapautus vähentää suuresti lääkkeen epäsuotavia sytotoksisia vaikutuksia 35 ja täten avaa kokonaisen uuden aikakauden tämän ja muiden antrasykliinien käytössä.
97692 15
Kitiini-oligomeerit (N-asetyyliglukosamiinin oligo-meerit) valittiin väliryhmiksi, koska kitiini-oligomeerit ovat alttiita ihmislysotsyymin aiheuttamalle katkaisulle (Holler et ai, 1975a; Holler et ai, 1975b). Lysotsyymin 5 valinta tarjoaa useita etuja ehdotetulle hoitoperiaatteelle. Ensiksikin, lysotsyymiä on runsaasti nisäkkäiden eritteissä (syljessä, kyyneleissä, maidossa, kohdunkaulan limassa) ja solunsisäisesti kudosten lysosomeissa (erityisesti valkosoluissa ja munuaisissa), mutta lysotsyymitasot 10 seerumissa ovat suhteellisen alhaisia. Tuloksena lääke- johdannaisten epäsuotavan pilkkoutumisen määrä verenkierrossa on oleva rajoittunut. Toiseksi, lysotsyymille ei ole verenkierrossa luonnollista substraattia, joka kykenisi kilpailemaan lääke johdannaisten kanssa kohdistettujen ent-15 syymimolekyylien aktiivisista kohdista.
Lääke johdannaisen soluun ottamisen estämiseksi hii-lihydraattitilaan kiinnitetään kaksi sulfonihappotähdet-tä. Negatiivisesti varautuneiden sulfonihapporyhmien estävä vaikutus molekyylipainoltaan pienten yhdisteiden ottoon 20 solun sisään on dokumentoitu hyvin monilla molekyyleillä, kuten värin ekskluusiotesteissä käytetty Trypan blue (Phillips, 1973) tai Evans blue, jota käytetään apuna diagnostiikassa määritettäessä ihmisen veren tilavuutta (The Merck Index, yhdeksäs painos, 1976).
25 Kuvioiden lyhyt kuvaus
Kuvio 1. SPDP-muokatun 16.88:n immunoreaktiivisuus.
Kuvio 2. TPCH-muokatun 16.88:n immunoreaktiivisuus.
Kuvio 3. 16.88-lysotsyymi -konjugaatin immunoreak-tiivisuus.
30 Kuvio 4. Standardikäyrä: lysotsyymiaktiivisuus.
Kuvio 5. 16.88-lysotsyymin pysyminen seerumissa "nude"-hiirissä, joilla on toisesta lajista saatu syöpä-siirre.
Kuvio 6. 16.88-lysotsyymin pysyminen syöpäkasvai-35 messa "nude"-hiirissä, joilla on toisesta lajista saatu syöpäsiirre.
97692 16
Kuvio 7. Doksorubisiinin derivatisointi pyridyyli-disulfiditähteellä.
Kuvio 8. Tioesteri-derivatisoitujen kitiinioligo-sakkaridien valmistus.
5 Kuvio 9. Tioesteri-derivatisoitujen kitiinioligo- meerien liittäminen pyridyylidisulfidi-derivatisoituun doksorubisiiniin.
Kuvio 10. Tauriinitähteiden kiinnitys tioesteri-derivatisoituihin kitiinioligomeereihin.
10 Kuvio 11. Doksorubisiinijohdannainen, joka sisältää tauriinitähteitä pilkottavissa olevan kitiinioligomeeri-väliryhmän välityksellä.
Kuvio 12. Doksorubisiinin annosvaste A2780-munasar-jasyöpäsoluja vastaan.
15 Kuvio 13. Doksorubisiinijohdannaisen, joka sisältää tauriinitähteitä pilkottavissa olevan kitiinioligomeerivä-liryhmän välityksellä, sytotoksinen aktiivisuus.
Esimerkki 1
Vasta-aine-entsyymikonjugaattien valmistus lysot-20 syymientsyymiä ja ihmisen monoklonaalista vasta- ainetta 16.88 käyttäen
Ihmisen monoklonaalisen vasta-aineen 16.88 derivatisointi pyridyylidisulfidiryhmillä
Seuraavat kokeet osoittavat sulfhydryyli-derivati-25 soituun lysotsyymiin (aktivaattoriin) konjugoidun pyri-dyylidisulfidi-derivatisoidun vasta-aineen muodostuksen. Monia aktivoituja disulfidiryhmiä tuodaan vasta-aineeseen N-sukkinimidyyli-3-(2-pyridyyliditio)propionaattia (SPDP) käyttäen ennemmin kuin destabiloidaan vasta-ainetta ket-30 jujen välisiä tai ketjunsisäisiä disulfidisiltoja pelkistämällä, jolloin saataisiin aikaan sulfhydryyliryhmiä lysotsyymiin liitettäväksi.
Vaihtoehtoisia kytkentäryhmiä voidaan käyttää siinä tapauksessa, että vasta-aine menettää immunologisen aktii-35 visuutensa SPDP:llä derivatisoitaessa. Uusi väliryhmä t» «M:t *««> Intä· < 97692 17 S-(2-tiopyridyyli)-L-kysteiinihydratsidi (TPCH) (Zara et al, 1989) on kuvattu. TPCH tuo mukaan kytkentäryhmän, jolla on päässään reaktiivinen pyridyylidisulfiditähde, joka on liitetty vasta-aineen hapetettuihin hiilihydraattitäh-5 teisiin. TPCH saattaa sallia useampien väliryhmien mukaan tuomisen vasta-aineen toiminnan heikentymättä kuin ne kyt-kentäryhmät, jotka kytkeytyvät vasta-aineen epsilon-ami-noryhmien välityksellä, kuten SPDP. Yhteen sekoitettuina sulhydryylit, jotka on tuotu aktivaattorientsyymiin 2-imi-10 notiolaanilla (2-IT), reagoivat pyridyylidisulfiditähtei-den kanssa, jotka on tuotu vasta-aineeseen SPDP:llä tai TPCH:11a, jolloin muodostuu disulfidisidos. Disulfidi-sidoksin kytketyillä vasta-aine-toksiini -konjugaateilla tehdyt tutkimukset viittaavat siihen, että vasta-aineen ja 15 aktivaattorientsyymin välinen disulfidisidos voi olla osittain epästabiili in vivo, mikä johtaa aktivaattorientsyymin vapautumiseen vasta-aineesta ennen kuin se on kohdistunut kasvaimeen. Tämä voitaisiin estää kytkemällä vasta-aine ja aktivaattori käyttämällä stabiilimpaa tio-20 eetterisidosta, joka tuodaan mukaan käyttämällä risti- sidoksia muodostavaa reagenssia kuten N(gamma-maleimido-butyryylioksi)sukkinimidia (GMBS) SPDHrn tai TPCH:n sijasta. GMBS saa aikaan terminaalisen reaktiivisen malemiidi-ryhmän pikemminkin kuin sulfhydryylin, jolloin muodostuu 25 stabiilimpi tioeetterisidos sulfhydryylin kanssa, joka tuotiin mukaan lysotsyymiin 2-IT:llä.
Esitetyssä esimerkissä vasta-aine on ihmisen syöpää vastaan suunnattu IgM-luokan monoklonaalinen vasta-aine 16.88 (Haspel et ai, 1985), joka reagoi antigeenin (CTA#1) 30 kanssa, jota löytyy tietyntyyppisten syöpäsolujen solu-limasta, mukaan lukien paksusuoli-, rinta-, munasarja-, haima- ja keuhkosyöpä. Pyridyylidisulfiditähteet saatiin aikaan kahdella eri menetelmällä.
Menetelmä A: Vasta-aine 16.88 derivatisoitiin 35 lysiinitähteiden aminoryhmissä käyttäen heterobifunktio- 18 97692 naalista kytkentäryhmää, N-sukkinimidyyli-3-(2-pyridyyli-ditio)propionaattia (SPDP). Kahdeksan moolia SPDP:tä voitiin tuoda per mooli 16.88:aa 16.88:n vasta-aine-aktii-visuuden vähentyessä hyväksyttävässä määrin (kuva 1). Jot-5 ta saataisiin aikaan sisällytyssuhde 8:1, 10 moolia SPDP:tä saatettiin reagoimaan kunkin 16.88-moolin kanssa 30 minuutin ajan huoneenlämmössä 0,01 M fosfaattipuskurissa, pH 7,0, joka sisälsi 0,1 M natriumkloridia. Konjugoitu vasta-aine erotettiin ylimääräisestä SPDP:stä Sephadex G-10 25 -geelisuodatuksella. Immunoreaktiivisuus arvioitiin modifioimattoman 16.88-referenssin suhteen vertaamalla SPDP-muokatun ja muokkaamattoman 16.88-referenssin kykyä kilpailla I-125-leimatun muokkaamattoman 16.88-referenssin kanssa samaa alkuperää olevan antigeenin CTA#1 sitomises-15 sa. Sisällytyssuhteella 8,6:1 se SPDP-16.88:n määrä, joka vaadittiin vähentämään 125I-16.88:n sitomista 50 %:lla, kas-voi nelinkertaiseksi.
Menetelmä B: 16.88:n hiilihydraattiosat hapetettiin aldehydifunktioiden luomiseksi, joihin kiinnitettiin hete-20 robifunktionaalinen väliryhmä S-(2-tiopyridyyli)-L-kys- teiinihydratsidi (TPCH). Toisin kuin SPDP, joka liittyy vasta-aineeseen proteiinissa olevien aminoryhmien välityksellä, TPCH:n hydratsidiosa muodostaa hydratsoneja alde-hydiryhmien kanssa, jotka saatiin aikaan 16.88:n hiili-25 hydraattiosiin miedolla periodaattihapetuksella. Kuten kuvassa 2 näkyy, voitiin saada aikaan niinkin monen kuin 17 TPCH-moolin sisällytys per 16.88-mooli ilman havaittavaa vasta-aineaktiivisuuden menetystä.
16.88:n derivatisointi tehtiin saattamalla reagoi-30 maan 16.88-liuos konsentraatiossa 2 mg/ml 0,1 M natrium-asetaattipuskurissa, pH 5,5, 10 mM natriumperiodaatin kanssa +4 °C lämpötilassa 10 minuutin ajan. TPCH lisättiin suhteessa 7 000 TPCH-moolia/16.88-mooli (vastaa noin 20-kertaista molaarista ylimäärää TPCH:ta 16.88:n primaaris-35 ten aminoryhmien suhteen) 0,1 M natriumasetaattipuskuris- SK ' Itt t Hill I i MH : : 97692 19 sa, pH 5,5. Ylimääräinen TPCH poistettiin Sephadex G-25 -geelisuodatuksella 0,01 M fosfaattipuskurissa, pH 7,0, joka sisälsi 0,1 M natriumkloridia.
Derivatisoidun vasta-aineen immunoreaktiivisuus 5 arvioitiin kompetitiivisella sitoutumisanalyysillä. Ver rattiin derivatisoidun ja alkuperäisen 16.88-vasta-aineen kykyä kilpailla radioleimatun alkuperäisen 16.88-vasta-aineen kanssa spesifiseen antigeeniin sitoutumisessa. Verrattiin ID50-arvoja derivatisoidulle ja alkuperäiselle vas-10 ta-aineelle.
Lysotsyymin derivatisointi
Lysotsyymin aminoryhmät voidaan derivatisoida ami-noreaktiivisilla heterobifunktionaalisi11a reagensseilla 16.88:aan liittämistä varten. Aminoryhmän derivatisointia 15 tutkittiin SPDP-.llä, GMBS-.llä ja 2-IT:llä. Sekä SPDP että GMBS haittasivat kovasti entsyymiaktiivisuutta jopa niinkin alhaisilla sisällytyssuhteilla kuin 2 kytkentäryhmä-molekyyliä/lysotsyymi (Taulukko 1). Derivatisointi 2-IT:llä suhteessa 2 väliryhmämolekyyliä/lysotsyymi johti 20 lysotsyymiaktiivisuuden säilymiseen 60-68 -prosenttisesti.
Lysotsyymi derivatisoitiin 100-kertaisella molaari-sella ylimäärällä 2-IT:tä 0,01 M fosfaattipuskurissa, pH 8,0, joka sisälsi 0,1 M natriumkloridia ja 0,001 M di-tiotreitolia, 10 minuutin ajan huoneenlämmössä. Reaktio 25 pysäytettiin lisäämällä 10-kertainen molaarinen ylimäärä (2-IT:n suhteen) etanoliamiinia. Derivatisoitu lysotsyymi poistettiin ylimääräisestä 2-IT:stä ja etanoliamiinista Sephadex G-10 -geelisuodatuskromatografiällä samassa puskurissa, pH 7,0, joka sisälsi 2 mM etyleenidiamiinitetra-30 etikkahappoa ja se käytettiin välittömästi pyridyylidisul- fididerivatisoituun 16.88-vasta-aineeseen liittämiseen. Lysotsyymiaktiivisuus mitattiin käyttäen Micrococcus lyso-deikticus -suspensiota (Shugar, 1949).
20 97692
Taulukko 1
Lysotsyymin muokkauksen vaikutus entsyymiaktiivisuuteen 5 Heterobifunktio- Molaariset suhteet Jäljelläoleva naalinen (kytkentäryhmä: lysotsyymi- ryhmä lysotsyymi) aktiivisuus (%)
Koe I Koe II
10 2-iminotiolaani 2,1:1 60 % 68 % SATA 2,0:1 10 % GMBS 1,8:1 5 % 18 % * Mitattuna Micrococcus lysodeiktlcus -määrityksellä 15 (Shugar, 1949).
16.88-lysotsyymi -konjugaattien synteesi 2-IT-derivatisoitu lysotsyymi liitettiin SPDP-deri-vatisoituun 16.88:aan (menetelmä A) tai TPCH-derivatisoi-20 tuun 16.88:aan (menetelmä B).
Menetelmä A: 16.88-SPDP ja 2-IT-derivatisoitu lysotsyymi liitettiin yhteen sekoittamalla kaksi komponenttia suhteessa 1:1 (w/w). Liuosta huuhdeltiin typpikaasulla 24-48 -tuntisen liittämisreaktion aikana 4 eC 25 lämpötilassa. 16.88-lysotsyymi erotettiin vapaasta lysot- syymistä Fractogel 55F-geelifiltraatiolla 0,01 M fosfaattipuskurissa (pH 7,0) joka sisälsi 0,1 M natriumkloridia.
Menetelmä B: 2-IT-derivatisoitu lysotsyymi sekoitettiin TPCH-derivatisoidun 16.88:n kanssa 1:1 (w/w) suh-30 teessä ja saatettiin reagoimaan yli yön huoneenlämpötilassa. 16.88-lysotsyymi erotettiin vapaasta lysotsyymistä geelifiltraatiolla kuten menetelmässä A.
Liittämissaantojen vertailu SPDP-derivatisoidun 16.88:n ja TPCH-derivatisoidun 16.88:n välillä osoitti 35 korkeamman kokonaissaannon SPDP-muokatun vasta-aineen -R m t Rt il l!l i Bi I 1 1 97692 21 kanssa. Rutiininomaisesti 3-4 moolia lysotsyymiä voitiin liittää per mooli SPDP-muokattua 16.88:aa. 16.88-lysot-syymi -konjugaatin antigeeniä sitova aktiivisuus mitattiin kompetitiivisessa sitoutumismäärityksessä muokkaamattoman 5 16.88-referenssin suhteen. Kuviossa 3 näytetyt tulokset osoittavat, ettei vasta-aineaktiivisuutta enää menetetty 16.88-lysotsyymi -konjugaatissa SPDP-muokattuun 16.88:aan verrattuna, kuten näytetään kuviossa 1.
Konjugaattien entsymaattinen aktiivisuus mitattiin 10 uudella määrityksellä, joka käytti esilääkkeen kaltaista liukoista substraattia. Määrityksen substraatti oli N-ase-tyyliglukosamiini-pentameeri (GlcNAc)5 (1 mM) 0,005 M sit-raattipuskurissa, pH 4,5. Pilkottu (GlcNAc)5 erotettiin substraatista 4 tunnin jälkeen 37 eC lämpötilassa ohutker-15 roskromatografiällä piin päällä käyttäen 2-propanoli/ve si /ammoniumhydroksidi (62/37/1) liuotinjärjestelmää. (G1cNAc)5 ja pilkottu substraatti visualisoitiin sulauttamalla päälle 10 % rikkihappoa etanolissa. Kvantitaatio tehtiin densitometrisella skannauksella. Menetelmä mittaa 20 lysotsyymin aktiivisuutta konsentraatioalueella 6,25 - 50 yg/ml. Standardikäyrä (kuvio 4) osoitti, että määritys on herkin lysotsyymin konsentraatioalueella 6,25 - 10 μg/ ml. Taulukko 2 osoittaa, että 16.88-lysotsyymillä on noin 90 % vastaavan 2-IT-derivatisoidun lysotsyymimäärän ak-25 tiivisuudesta.
16.88-lysotsyymin stabiilisuutta on seurattu 4 °C ja huoneenlämpöisissä (25 eC) varasto-olosuhteissa. Tulokset (taulukko 3) osoittavat, että lysotsyymin aktiivisuus ei laske merkittävästi yhden kuukauden aikana 4 °C tai 25 30 °C lämpötilassa. Yhden kuukauden varastoinnin jälkeen ha vaittiin 16.88 -vasta-aineen aktiivisuuden vähentyvän 54 % huoneenlämmössä ja vasta-aineen aktiivisuuden vähentyvän 33 % 4 °C lämpötilassa.
22 97692
Taulukko 2
Vasta-aineen liittämisen vaikutus lysotsyymin aktiivisuuteen 5
Lysotsyymi- Molaarlset suhteet Jäljelläoleva johdannainen (Lysotsyymi:16.88) lysotsyymi- aktilvisuus (%) 10
Lysotsyymi-IT 100
Lysotsyymi-16.88 4:1 92 3:1 90 15
Taulukko 3 20
Lysotsyymi-16.88 -immunokonjugaattien stabiilisuus Päivämäärä Tarvittava vasta-aineen Jäljellä oleva määrä (pg) sitoutumisen lysotsyymi- 25 50 %:een inhiboitumiseen aktiivisuus (%)
25 eC 4 °C 25 eC 4 °C
30 10/13/89 6 pg (100 %) 7 pg (100 %) 100 % 100 % 11/13/89 13 pg (46 %) 10,5 pg (67 %) 90 % 106 %
•I : M li tilli , I
97692 23
Syöpäkasvaimen paikallistaminen in vivo ja 16.88 -lysotsyymin farmakologinen kinetiikka ihmisen paksusuolensyövän syöpäsiirremallissa "nude"-hiirissä 16.88-lysotsyymi tai 16.88, joka oli leimattu 5 1-125:llä spesifiseen aktiivisuuteen 1 mCi/mg, injektoi tiin suonensisäisesti (50 mCi, 50 pg) 15 Balb/c kateen-korvattomien "nude" hiiren ryhmiin, joilla oli 0,2 gramman ihonalaisia ihmisen paksusuolensyövän siirteitä. Paksusuolensyöpä (THO) ilmentää antigeeniä, jonka ihmisen monok-10 lonaalinen vasta-aine 16.88 tunnistaa. Tarkoitus oli verrata vasta-aine-lysotsyymi -konjugaattia (1:4) ja konju-goitumatonta 16.88-vasta-ainetta arvioitaessa lysotsyymin vaikutusta normaaliin syövän etenemiseen ja vasta-aineen säilymiseen seerumissa (veressä). Seerumissa säilyminen 15 (kuvio 5) oli arviolta sama 16.88-lysotsyymille ja 16.88:lie ajanjaksona neljä tuntia - kaksi päivää injektion jälkeen, ja 16.88:n puoliintumisajaksi seerumissa osoittautui 12,4 tuntia ja 16,88-lysotsyymin puoliintumis-ajaksi seerumissa 11,8 tuntia. Injektioajankohdasta yhteen 20 tuntiin injektion jälkeen, 16.88-lysotsyymi vaikutti poistuvan nopeammin seerumista. 16.88-lysotsyymin tai 16.88:n määrät syöpäsiirteessä olivat suurimmillaan yhden tunnin kuluttua injektion jälkeen; 4 % 16.88-lysotsyymille, 3,5 % 16.88:lie. Sekä 16.88-lysotsyymillä että 16.88:11a poistu-25 misnopeudet syöpäkasvaimesta olivat samanlaiset yhden tunnin - kahden päivän jälkeen antamisesta (kuvio 6).
Esimerkki 2
Doksorubisiinijohdannaisen valmistus Lääkejohdannainen koostuu seuraavista osista: 30 a) doksorubisiinista; b) kitiini-oligomeeriväliryhmästä, joka on konju-goitu pelkistävän päänsä välityksellä doksorubisiiniin, lääkkeen C13-karbonyyliryhmään; ja c) kahdesta tauriinitähteestä, jotka ovat liit-35 tyneet kahteen aldehydiryhmään, jotka on tehty kitiini- 97692 24 oligomeeriväliryhmän ei-pelkistävään päähän periodaatti-hapetuksella.
Doksorubisiinin derivatisointi pyridyylidisulfidi- tähteellä 5 Jotta saataisiin liitettyä doksorubisiini kitiini- oligomeeriväliryhmän pelkistävään päähän, molekyyliä muokataan sen C13-karbonyyliryhmässä hydratsidijohdannaisella julkaistujen menetelmien mukaisesti (Hurwitz et ai, 1980; Hurwitz et ai, 1983). Tässä esimerkissä käytetty hydratsi-10 dijohdannainen on heterobifunktionaalinen reagenssi, joka sisältää yhden hydratsidiosan ja yhden pyridyylidisulfidi-osan (kuva 7). Hydratsidijohdannaisen [3-(2-pyridyylidi-tio)propionihappohydratsidin (PDPH)] synteesi suoritetaan kolmivaiheisena menetelmänä: 3-merkaptopropionihapon pyri-15 dyylidisulfidijohdannaisen valmistus, karboksyyliryhmän kondensaatio t-butyyli-karbatsaatilla, jota seuraa suojauksen poisto HCl:llä kyllästetyllä etyyliasetaatilla.
Doksorubisiini*HC1 -liuos (58 mg, 0,1 millimoolia) 0,85 ml:ssa H20:ta käsiteltiin liuoksella, joka koostui 20 PDPH:sta (380 mg, 1 millimooli) ja NaOAc:sta (84 mg, 1,02 millimoolia) 0,6 ml:ssa vettä. Tähän kirkkaanpunaiseen liuokseen lisättiin 4,8 ml 0,1 M Na2C03:a ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa (RT) yli yön. Reaktioseos uutettiin CHCl3/MeOH: 11a (3/1), yhdistetty uute haihdutettiin ja puh-25 distettiin preparatiivisella TLC:llä (ohutkerroskromato- grafiällä) (Tapered Preparative Uniplate-T, CHCl3/MeOH/ NH4OH=90/10/1), jolloin saatiin yhdiste 1. FAB-MS; m/z = 755(M+1).
Tioesteri-derivatisoitujen kitiini-oligosakkari-30 dien valmistus (Kuvio 8)
Kitiini hydrolysoitiin Rupleyn (1964) kehittämällä menetelmällä ja puhdistettiin P2-geelisuodatuspylvään läpi. Täten saadut kitiini-oligosakkaridit derivatisoitiin 35 kuten näytetään kuvassa 8. Penta-N-asetyylikitopentaoosi - 97692 25 (2e) palvelee esimerkkinä. Penta-N-asetyylikitopentaoosin (2e) seos (0,44 g, 0,42 millimoolia) 10 ml:ssa vettä, 8 mlrssa etanolia ja 1 ml:ssa fenyylihydratsinia kuumennettiin 125 °C lämpötilaan kahdeksi päiväksi. Reaktioseos 5 jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, lisättiin 20 ml vettä ja tehtiin eetteriuutto (25 ml x 3). Vesipitoinen kerros lyo-filisoitiin ja tuote puhdistettiin edelleen käänteisfaasi-pylvään läpi (C18) (40 % Me0H/H20). Yhdiste 3e (0,33 g, 0,29 millimoolia) liuotettiin veteen (20 ml), lisättiin 10 1/4 teelusikallinen Raney Nickel W-2:ta ja hydrattiin
Parr-laitteessa yli yön. Reaktioseos suodatettiin Celite-kerroksen läpi, konsentroitiin ja ladattiin Dowex 50-WK2 (H*) -ioninvaihtopylvääseen. Pylväs eluoitiin ensin 80 ml:11a vettä, jota seurasi 50 ml 2N-NH40H:ta. Eluaatti 15 lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,15 g yhdistettä 4e. Yhdiste 4e (0,15 g, 0,15 millimoolia) liuotettiin veteen (5 ml), sekoitettiin 0,067 g (0,29 millimoolia) SATA-mää-rän kanssa 0,8 ml:ssa DMF:ää ja sekoitettiin huoneenlämpö-tilassa yli yön. Reaktioseos laimennettiin vedellä (20 20 ml), uutettiin kloroformilla (20 ml x 3) ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin yhdiste 5e, joka hydrolysoitiin 10 miellä 0,1 M NaOH:ia huoneenlämmössä kahden tunnin ajan ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin kellertävä jauhe 6e.
Tioesteri-derivatisoitujen kitiini-oligomeerien 25 kiinnitys pyridyylidisulfididerivatisoituun dokso- rubisiiniin (kuva 9) PDPH-derivatisoitu doksorubisiini 1 (0,01 g, 0,013 millimoolia) liuotettiin etanoliin (12 ml), lisättiin 30 katalyyttinen määrä H0Ac:tä, jonka jälkeen 0,25 g (0,023 millimoolia) yhdistettä 6e, ja sekoitettiin yli yön huoneenlämmössä. Liuotin haihdutettiin ja jäännös liuotettiin veteen (10 ml), uutettiin (CHCl3/MeOH=7/3) ja yhdistetyt uutteet haihdutettiin, jolloin saatiin tummanruskeaa jau-35 hetta 7 [TLC ei osoittanut havaittavaa määrää tioesteri- 97692 26 derivatisoitua kitiiniollgomeeriä (6e). Piigeeli, 2-propa-noli/vesi/NH4OH=72/27/l] .
Tauriinitähteiden kiinnitys tioesteri-derivatisoi-tuihin kitiinioligomeereihin 5 (Kuvio 10)
Tioesteri-derivatisoidun kitiinioligomeerin hapetus NaI04:llä muodosti dialdehydejä ei-pelkistävässä päässä, jotka saatettiin reagoimaan tauriinin kanssa, jolloin muodostui Schiffin emäs (8). Yhdiste 8 pelkistettiin stabii-10 limmaksi amiiniksi NaBH4:llä, jolloin saatiin yhdiste 9. Yhdisteen 9 hydrolyysi 0,1 M NaOHrlla muodosti derivati-soidun kitiinoligomeeriväliryhmän, joka sisälsi vapaan sulfhydryylin pelkistävässä päässä (10).
Doksorubiinijohdannaisen valmistus, joka sisältää 15 tauriinitähteitä pilkottavissa olevan kitiinioligo- meeriväliryhmän välityksellä
Disulfidisidoksen (7) välityksellä kitiinioligomeerin sisältävä doksorubisiinijohdannainen saatettiin miedon Nal04-käsittelyn alaiseksi pH:ssa 6,0 60 minuutin ajan huo-20 neenlämpötilassa. Kun ylimääräinen NaI04 oli sammutettu etyleeniglykolilla, reaktioseokseen lisättiin 10-kertainen molaarinen ylimäärä tauriinia (doksorubisiinijohdannaisen suhteen). Kun oli inkuboitu yksi lisätunti huoneenlämpö-tilassa, johdannaista käytettiin sytotoksisuusmäärityksiin 25 sen jälkeen kun pH oli säädetty 7,2:een. Yhdisteen 7 muuttuminen tauriinijohdannaiseksi vahvistettiin TLC-analyy-sillä piin päällä (2-propanoli/vesi/NH4OH=72/27/l).
Vaihtoehtoinen synteesimenetelmä sallii stabiilimman lääkejohdannaisen valmistuksen, jossa käytetään kuvas-30 sa 10 esitettyä kitiiniväliryhmää. Pyridyylidisulfidi-de-rivatisoitu doksorubisiini (1^) saatetaan reagoimaan tau-riini-derivatisoidun kitiinioligomeerin kanssa, joka sisältää vapaan sulfhydryyliryhmän pelkistävässä päässä (10), jolloin muodostuu doksorubisiinijohdannainen (11), 35 joka näytetään kuvassa 11.
97692 27
Sul f onihappo tähteiden lukumäärä per doksorubisiini-j ohdannainen
Tarvittaessa sulfonihappotähteiden lukumäärää per lääkejohdannainen voidaan helposti muuttaa. Esimerkiksi 5 neljä sulfonihappotähdettä kahden asemesta voidaan liittää lääkejohdannaista kohti käyttäen hydratsidijohdannaisia, joista kukin kantaa kahta sulfonihappotähdettä. Lisäksi negatiivisesti varautuneiden ryhmien sisällyttäminen ei rajoitu sulfonihappotähteisiin. Esimerkiksi voidaan myös 10 käyttää fosfaatteja tai fosfonihappotähteitä (esim. 3-ami-nopropyylifosfonihappoa).
Kitiinioligomeeriväliryhmän pituus esilääkkeessä Lysotsyymin aikaansaama suhteellinen kitiinioligo-meerien pilkkoutumisnopeus on suhteessa ketjun pituuteen. 15 Esimerkiksi kitoheksaoosi pilkkoutuu 30 000 kertaa nopeammin kuin kitotrioosi (Imoto et ai, 1972). Näin ollen pen-tameereja suurempien kitiinioligomeeriväliryhmien voidaan odottaa muodostavan lääkkeitä, jotka lysotsyymi aktivoi helpommin.
20 Eripituisia kitiinioligosakkarideja sisältävien doksorubisiinijohdannaisten sytotoksinen aktiivisuus
In vitro -sytotoksisuus mitattiin käyttäen 3H-tymi-diinin sisäänoton inhibitiota A2780-munasarjasyöpäsoluil-25 la. Lyhyesti, 0,1 ml solususpensiota, joka sisälsi 2 x 104 solua Eaglen modifioidussa MEM-ravintoliemessä, lisättiin 96-kaivoisen mikroviljelylevyn kaivoihin. Lisättiin neljä kertaa 0,1 ml:n tilavuuksia doksorubisiinia tai doksorubi-siinijohdannaista 0,6 - 10 pg/ml konsentraatioina ja se-30 koituksia inkuboitiin 4 tuntia 37 eC lämpötilassa kosteutetussa C02-lämpökaapissa. 0,1 ml 3H-tymidiiniä (10 pCi/ml) lisättiin kuhunkin kaivoon ja inkuboitiin 16 tuntia. Sen jälkeen solut pestiin, kerättiin 0,5 N natriumhydroksidil-la ja mitattiin laskurilla 3H-tymidiinin sisäänotto. Kuvio 35 12 näyttää tulokset tyypillisessä doksorubisiinia käyttä- 26 97692 vässä määrityksessä. Taulukko 4 vertailee sellaisen dok-sorubisiinin aktiivisuutta, joka on muokattu väliryhmällä (PDPH) jota käytetään liittämään (GlcNAc)„, ja doksorubi-siinia joka on liitetty (GlcNAc^raan tai (GlcNAc)5:aan.
5 Doksorubisiinin muokkauksen määrästä riippumatta lääkkeen aktiivisuus ei havaittavasti heikentynyt. Tämä tulos osoittaa, että lysotsyymin toiminnan aikaansaama lääke on yhtä sytotoksinen kuin alkuperäinen doksorubisiini.
10 Taulukko 4
Doksorubisiinijohdannaisen sytotoksisuus
Johdannainen Sytotoksisuus (%)* 15 ------------------------------------------------
Dox-PDPH 67,1
Dox-(GlcNAc)x 99,6
Dox-(G1cNAc)5 100,0 20 * sytotoksisuus (%) doksorubisiiniin verrattuna. Lääkkeen konsentraatio vastaa 0,625 pg/ml.
Tauriinijohdannaisia pilkottavissa olevan kitiini-oligomeeriväliryhmän välityksellä sisältävän dokso-25 rubisiinijohdannaisen sytotoksinen aktiivisuus
Kuvio 13 näyttää tauriinitähteitä sisältävän dokso-rubisiinijohdannaisen sytotoksisen aktiivisuuden verrattuna doksorubisiinijohdannaiseen, joka sisältää kitopen-taoosiväliryhmän ilman kiinnittyneitä tauriinitähteitä. 30 Sytotoksisuus suoritettiin aikaisemmin kuvatulla tavalla. Tauriinia sisältävä lääke oli noin 20-kertaisesti vähemmän sytotoksinen. Kiinnittyneitä tauriinitähteitä sisältävän kitiinioligomeeriväliryhmän altistuminen lysotsyymille johti väliryhmän pilkkoutumiseen, mikä vahvistettiin 35 TLCrllä (2-propanoli/vesi/NH4OH=67/32/l). Nämä tiedot vah- 97692 29 vistavat, että tauriinia sisältävä esilääke voidaan muuttaa eripituisia kitiinioligomeereja sisältäviksi aktiivisiksi lääkelajeiksi, jotka ovat yhtä aktiivisia kuin läh-tölääke (taulukko 4).
5
Viitteet
Bagshawe, K.D. Antibody Directed Enzymes Revive Anti-Cancer Prodrugs Concept. Br. Med. J. 56, 531-537 (1987).
10
Briggs, R.S., Perillie, P.E. ja Finch, S.C. Lysozyme in Bone Marrow and Peripheral Blood Cells. J. Histochem. Cytochem. 14, 167-170 (1966).
15 Ellman, G.L. Tissue Sulfhydryl Groups. Arch. Biochem. Biophys. 87, 70-79 (1959).
Flanagan, P. ja Lionetti, F. Lysozyme Distribution in Blood. J. Hematology 10, 497-501, 1955.
20
Flickinger, R.A. ja Trost, S.R. Cytotoxicity of Antibody Phospholipase C Conjugate on Cultured Friend Leukemia Cells. Eur. J. Cancer 12, 159-160 (1976).
25 Gallego, J., Price, M.R. ja Baldwin, R.W. Preparation of Four Daunomycin-Monoclonal Antibody 79IT/36 Conjugates with Anti-Tumor Activity. Int. J. Cancer 33, 737-744 (1984). 1
Hamm, C.W., Kupper, W., Bredehorst, R., Hilz, H., Bleifeld, W. Quantitation of Coronary Venous Adenosine in Patients: Limitations Evaluated by Radioimmunoassay.
Cardiovascular Res. 22, 236-243 (1988).
97692 30
Haspel, M.V., McCabe, R.P., Pomato, N., Janesch, N.J.,
Knowlton, J.V., Peters, L.C., Hoover, H.C., Jr. ja Hanna, M.G., Jr. Generation of Tumor Cell-Reactive Humor 5 Monoclonal Antibodies Using Peripheral Blood Lymphocytes from Actively Immunized Colorectal Carcinoma Patients. Cancer Res. 45:3931-3961, 1985.
Holler, E., Rupley, J.A. ja Hess, G.P. Productive and 10 Unproductive Lysozyme-Chitosaccharide Complexes.
Equilibrium Measurements. Biochemistry 14, 1088- (1975a).
Holler, E., Rupley, J.A. ja Hess, G.P. Productive and
Unproductive Lysozyme-Chitosaccharide Complexes. Kinetic 15 Investigations. Biochemistry 14, 2377- (1975b).
Hurwitz, E., Wilchek, M. ja Phita, J. Soluble Macro molecules as Carriers for Daunomycin. J. Appi. Biochem. 2, 25-35 (1980).
20
Hurwitz, E., Arnon, R., Sahar, E. ja Danon, Y. A Conjugate of Adriamycin and Monoclonal Antibodies to Thy-1 Antigen Inhibits Human Neuroblastoma Cells In Vitro. Ann. N. Y. Acad. Sci 417, 125-136 (1983).
25
Imoto, T., Johnson, L.N., North, A.C.T., Phillips, D.C. ja Rupley, J.A. Vertebrate Lysozymes. Teoksessa: The Enzymes (toim. P.D. Boyer) Vol. 7, 665-868 (1972). 1
McCallister, T.J., Halpern, S.E., Dillman, R.O. ja Shawler, D.L. Human Anti-Mouse Antibody (HAMA) Formation in Cancer Patients Following Single Injections of Murine Monoclonal Antibodies. FASEB J. 2:690 (1988).
97692 31
Mitra, S. ja Lawton, R.G. Reagents For the Cross-Linking of Proteins by Equilibrium Transfer Alkylation. J. Amer. Chem. Soc. 101, 3097-3110 (1979).
5 Napper, A.D., Benkovic, S.J., Tramontano, A. ja Lerner, R. A. A Stereospecific Cyclization Catalyzed by an Antibody. Science 237, 1041-1043 (1987).
Osserman, E.F. ja Lawlor, D.P. Serum and Urinary Lysozyme 10 (Muramidase) in Monocytic and Monomyelocytic Leukemia. J. Exp. Med. 124, 921-951 (1966).
Phillips, H.J. Teoksessa: Tissue Culture: Methods and
Applications (toim. P.F. Kruse, Jr. ja M.K. Patterson, 15 Jr.) s. 406 (1973).
Prakash, C. ja Vi jay, I.K. A New Fluorescent Tag for Labeling of Saccharides. Analyt. Biochem. 128, 41-46 (1983).
20
Raftery, M.A., Rand-Meir, T., Dahlquist, F.W., Parsons, S. M., Borders, Jr., C.L., Wolcott, R.G., Beranek, Jr., W., ja Jao, L. Separation of Glucosaminoglycan Saccharide and Glycoside Mixtures by Gel Filtration. Analyt. Biochem. 30, 25 427-435. (1969).
Reynolds, J.C., Carrasquillo, J.A., Keenan, A.M., Lora, M.E., Sugarbaken, P., Abrams, P., Foon, K., Mulshine, J.L., Roth, J., Colcher, D., Schlom, J. ja Larson, S.M.
30 Human Anti-murine Antibodies Following Immunoscintigraphy on Therapy With Radiolabeled Monoclonal Antibodies. J. Nucl. Med., 27, 1022 (1986).
32 97692
Rodwell, J.D. ja McKearn, T.J. Antibody Conjugates for the Delivery of Compounds to Target Sites. US-patentti 4 671 958, 9. kesäkuuta 1987.
5 Rupley, J.A. The Hydrolysis of Chitin. Biochem. Biophys. Acta 83, 245-255 (1964).
Schroff, R.W., Foon, K.A., Bratty, S.M., Oldham. R.K. ja Morgan, Jr. A.C., Human Anti-Murine Immunoglobulin 10 Responses in Patients Receiving Monoclonal Antibody Therapy. Cancer Res. 45, 879-885 (1985).
Searle, F., Bier, C., Buckley, R.G. ja 8 muuta. The Potential of Carboxypeptidase G2-Antibody Conjugates as 15 Anti-Tumour Agents. Br. J. Cancer 53, 377 (1986).
Sela, M. ja Hurwitz, E. Conjugates of Antibodies with Cytotoxic Drugs. Teoksessa: Immunoconjugates. Antibody
Conjugates in Radioimaging and Therapy of Cancer (toim. 20 C.-W. Vogel), 189-216 (1987).
Senter, P.D., Saulnier, M.G., Schreiber, G.J., Hirschberg, D.L., Brown, J.P., Hellstroem, I. ja Hellstroem, K.E. Anti-Tumor Effects of Antibody Alkaline Phosphatase 25 Conjugates in Combination with Etoposide Phosphate. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 4842-4846 (1988).
Shugar, D. Measurement of Lysozyme Activity and the Ultraviolet Inactivation of Lysozyme. Biochem. Biophys. 30 Acta, 8, 302-309, 1949.
Steis, R., Carrasquillo, J.A. ja 16 muuta. An Evaluation of the Toxicity, Immunogenecity, and Tumor Radioimmuno-detecting Ability of Two Human Monoclonal Antibodies in ii < - w;t aim i;t i n : : 97692 33
Patients with Metastatic Colorectal Carcinoma. J. Clin. Oncology, 1990 (painossa).
Thorpe, P.E., Wallace, P.M., Knowles, P.P., Relf, M.G., 5 Brown, A.N.F., Watson, G.J., Knyba, R.E., Wawrzyczak, E.J. ja Blakey, D.C. New Coupling Agents for the Synthesis of Immunotoxins Containing a Hindered Disulfide Bond with Improved Stability In Vivo. Cancer Res. 47, 5924-5931 (1987).
10
Vogel, C.-W (toim.) Immunoconjugates. Antibody Conjugates in Radioimaging and Therapy of Cancer. Oxford University Press, New York, 1987.
15 Wawrzynczak, E.J. ja Thorpe, P.E. Methods for Preparing Immunotoxins: Effect of the Linkage on Activity and
Stability. Teoksessa: Immunoconjugates. Antibody
Conjugates in Radioimaging and Therapy of Cancer, (toim. C.-W. Vogel), 28-55 (1987).
20
Young, R.C. ja Ozols, R.F. The Anthracycline Antineoplastic Drugs. N. Engl. J. Med. 305, 139-153 (1981). 1 2 3 4 5 6
Zara, J.J., Wood, R.C., McCabe, R.P., Pomato, N., Hanna 2
Jr., M.G., Bredehorst, R. ja Vogel, C-W., Synthesis of a 3
Novel Site-Specific Heterobifunctional Crosslinker: Use 4 for the Preparation of Antibody Conjugates with Cobra 5
Venom Factor. Fourth International Conference on 6
Monoclonal Antibody Immunoconjugates for Cancer, San
Diego, CA. 30. maaliskuuta - 1. huhtikuuta 1989.
Claims (10)
1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen akti-vaattori-kohdistusosa -konjugaatin valmistamiseksi, joka 5 sisältää lysotsyymin aktivaattorina ja ihmisen monoklonaa-lisen vasta-aineen tai sen fragmentin kohdistusosana, tunnettu siitä, että kytketään kovalenttisella sidoksella mainittu aktivaattori mainittuun kohdistusosaan tavalla, joka säilyttää konjugaatin kyvyn sitoutua anti- 10 geeniin ja aktivoida esilääke, joka sisältää pilkottavissa olevan molekyylin.
2. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen esi-lääkkeen valmistamiseksi, joka sisältää syöpää tuhoavan aineen, joka sisältää pilkottavissa olevan molekyylin, 15 joka estää solun sisään joutumisen, tunnettu siitä, että mainittu pilkottavissa oleva molekyyli konjugoi-daan syöpää tuohoavaan aineeseen.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että syöpää tuhoava aine on deri- 20 vatisoitu kitiinioligomeeriväliryhmällä.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että syöpää tuhoava aine on antra-sykliini.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että kitiinioligomeeriväliryhmä on kiinnittynyt aminoryhmän välityksellä kohtaan, joka on valittu ryhmästä, joka koostuu antrasykliinin C13-karbonyy-likohdasta ja antrasykliinin sokeriosasta.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että kitiinioligomeerijohdannainen sisältää (GlcNAc)n:n, jossa n on 1 - 10, joka sisältää negatiivisesti varautuneita ryhmiä ja reaktiivisen ryhmän, joka sallii kovalenttisen kiinnittymisen antrasykliiniin.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, 35 tunnettu siitä, että negatiivisesti varautuneet ryhmät ovat sulfonaatteja, fosfaatteja, karboksylaatteja tai fosfonaatteja. i· «UI MC lii li* i 97692 35
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että negatiivisesti varautuneiden ryhmien lukumäärä on 1 - 10.
9. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että kitiinioligomeeriväliryhmä on sitoutunut kovalenttisesti lääkkeeseen aktiivisen ryhmän välityksellä, joka valitaan disulfidi-, tioesteri-, imi-di-, halogeeni-, amiini-, karboksyyli-, esteri-, tioli-ja alkoholiryhmistä.
10. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktiivinen ryhmä valitaan disulfidi-, tioesteri-, imidi-, halogeeni-, amiini-, karboksyyli-, esteri-, tioli- ja alkoholiryhmistä. 36 97692
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US30099989A | 1989-01-23 | 1989-01-23 | |
| US30099989 | 1989-01-23 | ||
| PCT/US1990/000503 WO1990007929A1 (en) | 1989-01-23 | 1990-01-23 | Site specific in-vivo activation of therapeutic drugs |
| US9000503 | 1997-12-30 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI913511A0 FI913511A0 (fi) | 1991-07-22 |
| FI97692B true FI97692B (fi) | 1996-10-31 |
| FI97692C FI97692C (fi) | 1997-02-10 |
Family
ID=23161497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI913511A FI97692C (fi) | 1989-01-23 | 1991-07-22 | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatin ja esilääkkeen valmistamiseksi |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0454783B1 (fi) |
| JP (1) | JP3273608B2 (fi) |
| KR (1) | KR0185967B1 (fi) |
| AT (1) | ATE123414T1 (fi) |
| AU (1) | AU648015B2 (fi) |
| CA (1) | CA2025899A1 (fi) |
| DE (1) | DE69019959T2 (fi) |
| DK (1) | DK0454783T3 (fi) |
| ES (1) | ES2075893T3 (fi) |
| FI (1) | FI97692C (fi) |
| NO (1) | NO912864L (fi) |
| WO (1) | WO1990007929A1 (fi) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5773435A (en) * | 1987-08-04 | 1998-06-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Prodrugs for β-lactamase and uses thereof |
| US5851527A (en) * | 1988-04-18 | 1998-12-22 | Immunomedics, Inc. | Method for antibody targeting of therapeutic agents |
| DE69034042T2 (de) * | 1989-08-02 | 2003-07-17 | Mitra Medical Technology Ab, Lund | System zur verwendung in einem verfahren zur therapeutischen und diagnostischen behandlung |
| DE4106389A1 (de) * | 1991-02-28 | 1992-09-03 | Behringwerke Ag | Fusionsproteine zur prodrug-aktivierung, ihre herstellung und verwendung |
| US6610299B1 (en) | 1989-10-19 | 2003-08-26 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Glycosyl-etoposide prodrugs, a process for preparation thereof and the use thereof in combination with functionalized tumor-specific enzyme conjugates |
| US6475486B1 (en) | 1990-10-18 | 2002-11-05 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Glycosyl-etoposide prodrugs, a process for preparation thereof and the use thereof in combination with functionalized tumor-specific enzyme conjugates |
| US7241595B2 (en) | 1989-10-20 | 2007-07-10 | Sanofi-Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Glycosyl-etoposide prodrugs, a process for preparation thereof and the use thereof in combination with functionalized tumor-specific enzyme conjugates |
| DE68928946T2 (de) * | 1989-12-11 | 1999-10-21 | Immunomedics, Inc. | Verfahren zum aufspüren von diagnostischen oder therapeutischen mitteln durch antikörper |
| SE9100142L (sv) | 1991-01-17 | 1992-07-18 | Bengt Sandberg | En metod och ett system foer foerbaettrad in vivo reducering av diagnostiska och/eller terapeutiska substanser medelst extrakorporeal borttagning, och anvaendandet av naemnda substanser foer detta aendamaal |
| FR2676058B1 (fr) * | 1991-04-30 | 1994-02-25 | Hoechst Lab | Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers. |
| WO1994001137A1 (en) * | 1992-07-06 | 1994-01-20 | Hybritech Incorporated | Method for delivery of cytotoxic agents and components thereof |
| GB9323429D0 (en) * | 1993-11-12 | 1994-01-05 | Wellcome Found | Therapy |
| BR9510490B1 (pt) * | 1994-12-23 | 2010-10-05 | composição farmacêutica combinada de dois componentes estruturada para uso em um hospedeiro. | |
| CA2227040A1 (en) | 1995-08-16 | 1997-03-06 | Zeneca Limited | Chemical compounds |
| DK0795334T3 (da) * | 1996-03-12 | 2006-06-06 | Sanofi Aventis Deutschland | Nye prodrugs til behandling af tumorer og betændelsessygdomme |
| PL229108B1 (pl) * | 2014-08-22 | 2018-06-29 | Celther Polska Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia | Sposób wydzielania i oczyszczania estrów chityny (mono-, di‑podstawionych) oraz kopoliestrów chityny z mieszanin poreakcyjnych |
| EP3970752A1 (en) * | 2020-09-17 | 2022-03-23 | Merck Patent GmbH | Molecules with solubility tag and related methods |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4067774A (en) * | 1971-05-14 | 1978-01-10 | Syva Company | Compounds for enzyme amplification assay |
| US4631190A (en) | 1981-06-26 | 1986-12-23 | Shen Wei C | Acidity-sensitive spacer molecule to control the release of pharmaceuticals from molecular carriers |
| LU85581A1 (fr) * | 1984-10-10 | 1986-06-11 | Smb Lab | Ensembles d'anticorps monoclonaux diriges contre la lactoferrine humaine et le lysozyme humain |
| JPS62138496A (ja) * | 1985-12-11 | 1987-06-22 | Ihara Chem Ind Co Ltd | キチンオリゴマ−の製造方法 |
| AU618209B2 (en) * | 1987-07-02 | 1991-12-12 | Akzo N.V. | Antigen recognized by mca 16-88 |
| NZ225599A (en) * | 1987-08-04 | 1991-09-25 | Bristol Myers Co | Antibody-enzyme conjugates and combinations with prodrugs for the treatment of tumour cells |
| ZA893284B (en) * | 1988-05-04 | 1990-03-28 | Igen Inc | Peptide analogs and their use as haptens to elicit catalytic antibodies |
-
1990
- 1990-01-23 JP JP50311690A patent/JP3273608B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-01-23 WO PCT/US1990/000503 patent/WO1990007929A1/en not_active Ceased
- 1990-01-23 CA CA002025899A patent/CA2025899A1/en not_active Abandoned
- 1990-01-23 DK DK90902934.0T patent/DK0454783T3/da active
- 1990-01-23 AU AU50397/90A patent/AU648015B2/en not_active Ceased
- 1990-01-23 DE DE69019959T patent/DE69019959T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-01-23 ES ES90902934T patent/ES2075893T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-23 KR KR1019900702129A patent/KR0185967B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1990-01-23 EP EP90902934A patent/EP0454783B1/en not_active Revoked
- 1990-01-23 AT AT90902934T patent/ATE123414T1/de not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-07-22 NO NO91912864A patent/NO912864L/no unknown
- 1991-07-22 FI FI913511A patent/FI97692C/fi active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69019959T2 (de) | 1995-10-05 |
| NO912864L (no) | 1991-09-19 |
| JPH04503068A (ja) | 1992-06-04 |
| AU5039790A (en) | 1990-08-13 |
| NO912864D0 (no) | 1991-07-22 |
| KR910700072A (ko) | 1991-03-13 |
| DK0454783T3 (da) | 1995-10-16 |
| DE69019959D1 (de) | 1995-07-13 |
| FI97692C (fi) | 1997-02-10 |
| EP0454783A1 (en) | 1991-11-06 |
| KR0185967B1 (ko) | 1999-05-01 |
| EP0454783A4 (en) | 1992-01-15 |
| FI913511A0 (fi) | 1991-07-22 |
| ATE123414T1 (de) | 1995-06-15 |
| ES2075893T3 (es) | 1995-10-16 |
| WO1990007929A1 (en) | 1990-07-26 |
| CA2025899A1 (en) | 1990-07-24 |
| AU648015B2 (en) | 1994-04-14 |
| EP0454783B1 (en) | 1995-06-07 |
| JP3273608B2 (ja) | 2002-04-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5433955A (en) | Site specific in vivo activation of therapeutic drugs | |
| FI97692B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen aktivaattori-kohdistusosa -konjugaatin ja esilääkkeen valmistamiseksi | |
| US4937183A (en) | Method for the preparation of antibody-fragment conjugates | |
| AU646121B2 (en) | Acid-labile linker molecules | |
| AU614532B2 (en) | Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells | |
| US5094848A (en) | Cleavable diphosphate and amidated diphosphate linkers | |
| US5157104A (en) | Trichothecene conjugates | |
| EP0031999B1 (en) | Antitumor protein hybrid and process for the preparation thereof | |
| EP1028978B1 (en) | Methods of preparing glycosylated antibodies and antibody fragments having reactive ketone groups | |
| JPH03503898A (ja) | 薬剤輸送系に関する更なる改良 | |
| EP0294294A2 (en) | Amine derivatives of anthracycline antibiotics | |
| US5478576A (en) | Arabinogalactan derivatives and uses thereof | |
| US5514794A (en) | Antibody-drug conjugates | |
| WO1993025239A1 (en) | Arabinogalactan derivatives and uses thereof | |
| WO1993025225A1 (en) | Liposomal formulations for administering to cancer patients | |
| WO1993025225A9 (en) | Liposomal formulations for administering to cancer patients | |
| KR930003333B1 (ko) | 탄수화물 단위가 변형된 리보솜을 비활성화시키는 당단백질 성분을 함유하는 지속-작용성 면역독소의 제조방법 | |
| KR950007215B1 (ko) | 오시딕 단위를 산화시키고 쉬프염기를 형성하여 리보솜을 비활성화시키는 당단백질을 변형시키는 방법 | |
| CA2114629C (en) | Receptor conjugates for targeting antibiotics to bacteria | |
| JPS62175500A (ja) | 修飾糖タンパク質、当該修飾糖タンパク質の製造方法、当該修飾糖タンパク質を含む免疫毒素および当該免疫毒素を有効成分として含む抗ガン剤組成物 | |
| JPS6069034A (ja) | 免疫毒素、免疫毒素を含有する薬剤及び免疫毒素の生体外使用方法 | |
| Wilchek | Affinity Therapy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application |