FI97649B - Diagnostinen reagenssi nivelreuman diagnosoinnissa käytettäväksi - Google Patents
Diagnostinen reagenssi nivelreuman diagnosoinnissa käytettäväksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI97649B FI97649B FI902322A FI902322A FI97649B FI 97649 B FI97649 B FI 97649B FI 902322 A FI902322 A FI 902322A FI 902322 A FI902322 A FI 902322A FI 97649 B FI97649 B FI 97649B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- protein
- igg
- diagnostic reagent
- rheumatoid arthritis
- serum
- Prior art date
Links
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 title claims abstract description 41
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 16
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims abstract description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims abstract description 7
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 108010034897 lentil lectin Proteins 0.000 claims description 7
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 claims description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 4-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=C(Cl)C2=C1 LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001132374 Asta Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 108091008400 carbohydrate binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000023852 carbohydrate binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/10—Musculoskeletal or connective tissue disorders
- G01N2800/101—Diffuse connective tissue disease, e.g. Sjögren, Wegener's granulomatosis
- G01N2800/102—Arthritis; Rheumatoid arthritis, i.e. inflammation of peripheral joints
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Measuring And Recording Apparatus For Diagnosis (AREA)
- Electrotherapy Devices (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Molds, Cores, And Manufacturing Methods Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
Description
97649
DIAGNOSTINEN REAGENSSI NIVELREUMAN DIAGNOSOINNISSA KÄYTETTÄVÄKSI
Tämä keksintö koskee nivelreuman diagnostista reagenssia, joka sisältää proteiinin A tai G ja leimatun lektiinin välttämättöminä ainesosina, ja joka on käyttökelpoinen lääketieteen alalla nivelreuman diagnoosissa.
Tekniikan taso
On tunnettua, että autovasta-aine, jota kutsutaan "reumatekijäk-si", esiintyy nivelreumapotilaan (tässä jäljessä lyhennetty "RA-potilas") seerumissa ja tunnistaa ihmisen immunoglobuliinin G (tässä jäljessä lyhennetty "IgG":ksi) Fc-alueella olevan antigeenin (viite 1). Äskettäin on RA-potilaan seerumin IgG:n Fc-alueen hiilihydraattiketjut analysoitu yksityiskohtaisesti. Jotkut tämän keksinnön tekijöistä ovat aikaisemmin todenneet, että seerumin IgG:n Fc-alueen hiilihydraattiketjujen galaktoosipitoi-suus RA-potilaalla on huomattavasti alhaisempi kuin terveellä ihmisellä (viite 2). Toisin sanoen, on todettu, että terveen ihmisen seerumin IgGsn Fc-alueen hiilihydraattiketjut koostuvat erilaisista hiilihydraattiosista, jotka ovat mikro-heterogeenisiä eikä niiden suhteissa ole yksilöllisiä eroja (viite 3). Toisaalta RA-potilaan seerumin IgG:n Fc-alueen hiilihydraattiket-jussa on huomattavasti alentunut galaktoosipitoisuus kokonaisuudessaan, vaikka se koostuu erilaisista hiilihydraattiketjuista, jotka ovat mikro-heterogeenisiä eikä niiden suhteissa ole yksilöllisiä eroja aivan samoin kuin on asianlaita terveillä vapaaehtoisilla. Tarkemmin sanottuna, on todettu, että terveiden vapaaehtoisten seerumin IgG:n Fc-alueella esiintyy kolmea erilaista ketjua, joista jokainen liittyy kahteen, yhteen tai ei ainoaankaan galaktoosimolekyyliin, suhteessa 2:2:1, kun taas sellaisten hiilihydraattiketjujen, jotka sisältävät kaksi galaktoo-simolekyyliä, pitoisuus RA-potilaan seerumin IgG:ssä laskee ja galaktoosipuutteisten hiilihydraattiketjujen kokonaispitoisuus lisääntyy voimakkaasti (viite 2). Nämä tulokset antavat aiheen olettaa, että RA-potilaan seerumin IgG:n hiilihydraattiketjut aiheuttavat rakenteellisesti epänormaalisuutta, niin että IgG toimii merkkiaineena RA:lie, jos rakenteellinen epänormaalius voidaan todeta (viite 4).
2 97649
Seuraavat viitejulkaisut 1-4 esittävät ylläolevat löydökset yksityiskohtaisesti ja niihin viitataan tässä keksinnössä.
Viitejulkaisut: 1) Kunkel, H. G., and Tan, E. M. (1964):
Autoantibodies and disease. Adv. Immunol., 4 : 351.
2) Mizuochi, T., Taniguchi, T., Matsuta, K., et ai.
(1985): Association of rheumatoid arthritis and primary osteoarthritis with changes in the glycosylation pattern of total serum IgG.
Nature, 316,452-457.
3) Mizuochi, T., et al (1982): J. Immunol. 129, 2016-2020.
4) Mizuochi, T.(1985): Reactant to rheumatoid factor: abnormality in the sugar chains of IgG in patients with rheumatoid arthritis, Clin.
Immunol. 17, 977-984.
Kuten edellä on kuvattu, on jo tunnettua, että RA:n diagnosoiminen tulee mahdolliseksi, jos galaktoosin puute seerumin IgG:n Fc-alueen hiilihydraattiketjuissa voidaan määrittää. Kuitenkaan mitään praktista diagnostista reagenssia galaktoosin puutteen määrittämiseksi ei vielä ole löydetty.
Näissä olosuhteissa ovat tämän keksinnön tekijät ajatelleet, että keksinnön avulla ratkaistava ongelma on siinä, että on tarjottava diagnostinen reagenssi galaktoosin puutteen määrittämiseen ihmisen seerumissa läsnä olevissa IgG:n hiilihydraattiket-juissa.
Il 3 97649
Keksinnön yhteenveto Tämän keksinnön tekijät ovat suorittaneet laajoja tutkimuksia ylläolevan ongelman ratkaisemiseksi ja ovat todenneet, että tarkoitus saavutetaan lisäämällä proteiinia A tai G seerumiin, jonka jälkeen lisätään leimattua lektiiniä. Tämä keksintö on toteutettu tämän havainnon pohjalta. Tämä keksintö siis koskee diagnostista reagenssia nivelreumaa varten, joka sisältää välttämättöminä ainesosina proteiinia A tai G sekä leimattua lektiiniä.
Toisin sanoen, keksintö koskee kahden aineen, proteiinin A tai G, sekä leimatun lektiinin muodostamaa yhdistelmää, jolla galak-toosinpuutos voidaan määrittää. Reagenssille on tunnusomaista se, mitä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa*
Keksintö tarjoaa käyttöön menetelmän galaktoosinpuutoksen määrittämiseksi käyttämällä edellä määriteltyä diagnostista reagenssia joka menetelmä koostuu seuraavista vaiheista: annetaan proteiinin A tai proteiinin G reagoida seerumin kanssa, annetaan saadun seoksen reagoida leimatun lektiinin kanssa ja osoitetaan leima.
Tätä keksintöä kuvataan nyt yksityiskohtaisemmin.
Termi "nivelreuma" tässä tekstissä käytettynä viittaa autoimmuunisairauksiin, ja niiden erityisoire ilmenee aamujäykkyytenä.
Termi "proteiini A" käytettynä tässä esityksessä viittaa proteiiniin, joka on eristetty Staphylococcus aureus-bakteerin solukalvosta ja joka muodostuu yksittäisestä polypeptidistä, jonka molekyylipaino on 42.000 ja jonka sisäinen rakenne koostuu joistakin keskenään samanlaisista osista.
Proteiinilla A on se ominaisuus, että se sitoutuu IgG:n Fc-alu-eeseen, jolloin se on käyttökelpoinen IgG:n puhdistuksessa tämän ominaisuutensa vuoksi, joka on sinänsä jo tullut tunnetuksi.
Proteiinin A tavoin on proteiini G eristetty Staphylococcus au-reus-bakteerista ja sen ominaisuuksiin kuuluu sitoutuminen IgG:n Fc-alueeseen, niin että se on käyttökelpoinen IgG:n puhdistuksessa tämän ominaisuuden vuoksi, joka sekin on tullut sinänsä tunnetuksi.
4 97649
Termi "lektiini" on yleistermi hiilihydraattia sitoville proteiineille. Vaikka lektiiniä ensin saatiinkin risiininsiemenistä, ovat lektiinit laajalti levinneet eläimiin, kuten bakteereihin, joten erilaisia eri lähteistä peräisin olevia lektiineitä on nyt saatavissa. Mikä hyvänsä lektiini, oli se sitten peräisin inistä lähteestä hyvänsä, voi sitoutua erilaisiin sokeriketjuihin, jotka eroavat toisistaan rakenteellisesti, ja ne voidaan tunnistaa. Esimerkiksi monet eri lähteistä peräisin olevat lektiinit voivat tunnistaa galaktoosipuutteisen mannoosiketjun. Sen mukaisesti tässä keksinnössä käytettäväksi tarkoitettu lektiini ei ole alkuperältään erityisen rajoitettu, vaan voi olla mikä tahansa ja peräisin mistä tahansa lähteestä. Erityisen edullisia esimerkkejä siitä ovat konkanavaliini A ja Lens culinaris-agglutiniini.
Lektiinin leimaus koettimeksi hiilihydraatin määrittämiseksi voidaan suorittaa tavanomaisilla menetelmillä. Toisin sanoen, se voidaan suorittaa menetelmällä, joka on sopivasti valittu sellaisista menetelmisä, joilla leimataan entsyymiä, radioisotoop-pia ja niin edelleen. Niinpä tämä keksintö ei ole rajoitettu leimausmenetelmän suhteen. Entsyyminleimauksessa entsyymi voi sitoutua lektiiniin joko suoraan tai sopivien molekyylien, kuten biotiinin ja avidiinin välityksellä.
Galaktoosin puuttumisen määritys tämän keksinnön diagnostisella lääkkeellä voidaan suorittaa olennaisesti seuraavalla tavalla. Ensiksi proteiini A immobilisoidaan nitroselluloosamembraanille, ja sen jälkeen lisätään puskurilla laimennettua seerumia. Sitten saatuun membraaniin lisätään biotiini-konkanavaliini A-liuosta hiilihydraattiosien toteamiseksi. Edelleen lisätään avidiini-peroksidaasiliuosta toisen reaktion suorittamiseksi. Saatu memb-raani pestään ja käsitellään substraattiliuoksella peroksidivä-riä vastaan. Vaikka ylläolevassa menetelmässä käytetään diagnostista reagenssia, joka sisältää välttämättöminä ainesosina proteiini A:ta ja biotiini-konkanavaliini A:ta (leimattu lektiini), voidaan tämän keksinnön mukainen diagnostinen reagenssi sopivasti yhdistää muihin komponentteihin käytettäväksi määritystapah-tuman aikana käyttömukavuuden parantamiseksi diagnostiseksi rea-genssiyhdistelmäksi, ja esimerkkejä näistä ovat fosfaattipuskuri, suojaliuos, nitroselluloosamembraani, avidiini-peroksidaasi, Tris-puskuri, substraattiliuos ja reaktion pysäytysliuos. Tämä 1 5 97649 keksintö sisältää nämä edellä kuvatut diagnostiset reagenssiyh-distelmät.
Vaikka on jo todettu, että IgG voidaan puhdistaa proteiini A:11a tai G:llä ja että lektiini voi tunnistaa hiilihydraattiketjun, on uutta yhdistää proteiini A tai G lektiinin kanssa diagnostiseksi lääkkeeksi, ja RA:n mukava ja tarkka diagnosoiminen on saatu mahdolliseksi tällä järjestelyllä, kuten seuraavissa kokeellisissa esimerkeissä kuvataan, vaikka sitä onkin pidetty vaikeana aina näihin aikoihin saakka.
Lyhyt kuvaus piirroksista
Kuva 1 esittää RA-potilaan seerumin IgG:n värjäyksen jälkeen Con A:11a saadun signaalin vahvuuden vertailun terveiden vapaaehtoisen vastaavan signaalin kanssa. Signaalin vahvuus määritettiin käyttämällä Flying-täpläskanneria CS 9000.
Kuva 2 esittää seerumin IgG:n värjäyksen jälkeen LCA:lla saadun signaalin vahvuuden vertailun terveen ihmisen vastaavan signaalin kanssa. Signaalin vahvuus määritettiin käyttämällä Flying-täpläskanneria CS 9000.
Kuva 3 esittää kutakin sairautta sairastavan potilaan Agalacto-cyl-IgG-seerumin määrän, joka on saatu menetelmällä, jossa käytetään horisontaalisella akselilla olevia mikrolevykoloja värin kehittämiseksi, jonka jälkeen mittaukset suoritetaan 405 nm:llä ja 490 nm:llä. Sairauksien nimet on esitetty esimerkissä 2. Taulukko 1 esittää kuvassa 3 esitettyjen tulosten mukaiset posi-tiivisuusprosentit.
[Esimerkki] 1. Kaupallisesti saatava proteiini A (esim. Sigman tai Pharmaci-an tuote) tai proteiini G (esim. Sigman tai Pharmacian tuote) yhdistettiin leimatun (esimerkiksi peroksidaasi- tai biotiini-leimatun) lektiinin (kaupallisesti saatava, esim. Sigman tai Seikagaku Kogyon tuote) kanssa, jolloin saadaan tämän keksinnön mukainen diagnostinen reagenssi.
6 97649 2. Yllä kuvatut komponentit yhdistettiin edelleen kiinteään komponenttiin proteiinin A immobilisoimiseksi (sitomiseksi) (kuten nitroselluloosamembraani tai polystyreenimikrolevy), suojapusku-riin (kuten fosfaatti- tai Tris-puskuri, joka sisältää BSA:ta tai gelatiinia), leimattuun entsyymiin (kuten streptoavidiini-peroksidaasi) ja entsyyminvastaiseen substraattiin (kuten 4-kloorinaftoli), jolloin saatiin tämän keksinnön mukainen diagnostinen reagenssi.
3. Proteiinin A tai G, joka on sidottu tai immobilisoitu kiinteään komponenttiin, annetaan reagoida ihmisen plasman tai seerumin kanssa immunoglobuliinin (IgG) valikoimiseksi spesifisesti. IgG:ssä oleva hiilihydraattirakenne leimataan leimatulla lektii-nillä (kuten peroksidaasilektiini) rakenteellisen epänormaalisuuden havaitsemiseksi IgG:n hiilihydraattiketjussa käyttämällä hyväksi lektiinin aktiivisuutta tunnistaa spesifisesti hiilihydraattiket jun rakenne. Havaitseminen suoritetaan määrittämällä IgG-ketjuun sitoutuneen lektiinin määrä perustuen signaalin vahvuuteen, kuten kehittyneeseen väriin. Tarkemmin sanottuna, koska RA-potilaan seerumin IgG:n hiilihydraattiketjujen rakenteen ana-lysi ilmaisi, että hiilihydraattiketjujen galaktoosipitoisuus oli huomattavasti alentunut, seulottiin lektiinit, jotka reagoivat tämän agalaktosyyli-IgGin kanssa. Tuloksena tästä todettiin, että mannoosin tunnistavat lektiinit, kuten konkanavaliini A (Con A) tai Lens culinaris agglutiniini (LCA), ovat äärimmäisen raktiivisia agalaktosyyli-IgG:lle. Niinpä RA-potilaan seerumin IgG tutkittiin käyttäen näitä lektiineitä.
Esimerkki 1 (Näyte): Seerumit preparoitiin RA-potilaista ja terveistä vapaaehtoisista käytettäväksi seuraavissa kokeissa.
(Menetelmä): Proteiini A (250 μg/ml) liuotettiin fosfaattipuskuriin (50 mM fosfaattia, 0,15 M NaCl, pH: 7,4), 10 μΐ tätä liuosta levitettiin nitroselluloosamembraanille (dot blotting). Saatu membraani kuivattiin ja suojattiin suojauspuskurilla (50 mM Tris-HCl, 0,15 M NaCl, 0,05% NP-40, 2,5% gelatiinia (w/v), pH: 7,4) .
Il 7 97649
Saatua membraania (IgG:n sieppausmembraani; johon tässä jäljessä viitataan nimellä "IGGTM") käytettiin RA-potilaan tai terveiden vapaaehtoisten seerumin IgG:n sokeriketjuanalyysissä. RA-potilaan tai terveiden vapaaehtoisten seerumi laimennettiin suojaus-puskurilla ja lisättiin IGGTM:ään IgG:n sitomiseksi membraaniin (60 min huoneenlämmössä). Reaktion jälkeen IGGTM huuhdottiin varovaisesti ja pestiin 5 minuuttia. Sitten saatuun IGGTM:ään lisättiin 500 μg/ml biotiini-Con A:ta (20 μg/ml) reaktion suorittamiseksi (60 min huoneenlämmössä). Reaktion jälkeen saatu IGGTM huuhdottiin varovasti ja pestiin kahdesti 5 minuutin ajan kummallakin kerralla. Sitten saatuun IGGTM:ään lisättiin 500 μΐ streptoavidiiniperoksidaasia toisen reaktion suorittamiseksi. Reaktion jälkeen saatu IGGTM huuhdottiin varovasti ja pestiin kahdesti 5 minuuttia kerrallaan. Pesun jälkeen saatu IGGTM huuhdottiin varovasti TBS:llä (20 mM Tris-HCl, 0,5 M NaCl, pH: 7,4). Peroksidaasinvastainen substraattiliuos (500 μς/ιηΐ) lisättiin IGGTM:ään värinkehityksen aloittamiseksi (5-10 min). Kun kehittyminen oli täysin tapahtunut, saatu IGGTM pestiin riittävästi tislatulla vedellä ja kuivattiin kehittyneen signaalin vahvuus IGGTM:ssä kahden aallonpituuden Flying-täpläskannerilla CS 9000 (valm. Shimadzu) (lambda = 540 nm).
Tulos 1. Neljän RA-potilaan ja neljän terveen vapaaehtoisen seerumin IgG:stä tutkittiin reaktiivisuus Con A:n kanssa. Terveen ryhmän keskimääräinen lukema oli 7603,85, kun taas RA-ryhmällä'se oli 43906,22. Niinpä RA-ryhmällä oli korkeampi lukema kuin terveiden ryhmällä (kuva 1).
2. Kymmenen RA-potilaan ja neljän terveen miehen seerumin IgG:-stä tutkittiin reaktiivisuus LCA:lla. Terveen ryhmän keskimääräinen lukema oli 0, kun taas RA-ryhmällä se oli 24501,8. RA-ryhmällä oli siis korkeampi lukema kuin terveellä ryhmällä (kuva 2).
8 97649
Esimerkki 2 (Näyte): Seerumit preparoitiin potilailta, joilla oli jäljessä oleva sairaus, sekä terveiltä vapaaehtoisilta, käytettäväksi seuraavissa kokeissa.
(näytteet)
Nivelreuma (RA) 20
Varhaisvaiheen nivelreuma (E-RA) 27
Seronegatiivinen nivelreuma (S-N-RA) (RA-koe: Rose, 8 tai vähemmän) 13
Osteoartriitti (OA) 18
Varhaisvaiheen osteoartriitti (E-OA) 20
Systeeminen punahukkasairaus (SLE) 12
Terveet vapaaehtoiset 87 (Menetelmä): Kuhunkin mikrolevyn koloon pantiin 100 μΐ proteiini Asta (2,5 pg/ml), ja peitettiin. Suoritettiin suojaus suojaus-puskurilla (1 % BSA, 50 mM fosfaattipuskuria, 0,15 M NaCl, pH: 7,4). 100 μΐ gelatiinipuskuria (50 mM Tris-HCl, 0,15 M NaCl, 0,05% NP-40, 2,5% (w/v) gelatiinia, pH: 7,4) lisättiin kuhunkin koloon, ja sen jälkeen siihen lisättiin 1 μΐ näytettä. Sitten kuhunkin koloon lisättiin vielä 100 μΐ gelatiinipuskuria. Kaikkia koloja inkuboitiin 25eC:ssa 60 min. Reaktion jälkeen kukin kolo pestiin pesupuskurilla (50 mM Tris-HCl, 0,15 M NaCl, 0,05% NP-40, pH: 7,4). Sitten lisättiin 100 μΐ biotiini-Con A-liuosta (0,0625 pg/ml) ja reaktion annettiin tapahtua 25eC:ssa 60 min.
Reaktiotuote pestiin pesupuskurilla. Sitten lisättiin 100 μΐ streptoavidiiniperoksidaasiliuosta. Reaktion annettiin tapahtua 25eC:ssa 60 min. Reaktiotuote pestiin pesupuskurilla, jonka jälkeen lisättiin 100 μΐ substraattiliuosta (3% H»Oa, 10 μΐ + ABTS 6 mg/4 ml, sitruunahappopuskuri, pH: 4,2) reaktion suorittamiseksi 37°C:ssa 60 minuuttia.
Kuhunkin koloon lisättiin 100 μΐ natriumatsidiliuosta reaktion lopettamiseksi ja absorbanssi näytteestä 405 nm:ssä ja 490 nm:ssä mitattiin käyttämällä kahden aallonpituuden spektrofoto-metriä. 1 S 97649
Tulos
Kuva 3 esittää seuraavaa.
(1) Absorbanssi 0,14 on määritetty cut-off-arvoksi; nivelreuma tunnistetaan RA:ksi, kun näytteen mitattu absorbanssi on suurempi kuin cut-off-arvo. Positiivisuussuhde kullekin sairaudelle on esitetty taulukossa 1.
(2) Korkea positiivisuussuhde havaitaan muilla sairauksilla kuin RA:11a, t.s. SLEzllä, 0A:lla ja LDsllä, tavanomaisella RA-ko-keella, kuten hemagglutinaatiomenetelmä ja lateksikoagulaatio-menetelmä, Tatsu ABE:n mukaan, General Clinic (Sogo Rinsho) 34, 1915 (1985). Tämän keksinnön koemenetelmä antaa hyvin alhaisen positiivisuussuhteen näiden sairauksien suhteen, mutta erittäin korkean selektiivisyyden RA-sairaudelle.
Taulukko 1
SAIRAUS C0P
_(A405/490)_SUHDE (%) RA 0.155±0.048 75(15/20) E-RA 0.15810.048 53.8(14/27) S-N-RA 0.09210.027 7.7(1/13) OA 0.08610.035 5.6(1/18) E-OA 0.05710.018 0(0/20) SLE 0.09 10.032 0(0/12) MAKSASAIR. 0.087+0.046 17.2(5/29) KONTROLLI 0.08110.03 4.6(4/87)
Claims (2)
1. Diagnostinen reagenssi käytettäväksi nivelreuman diagnostisoinnissa, tunnettu siitä, että se sisältää proteiinia A tai G ja leimattua lektiiniä välttämättöminä ainesosina, ja että leimattu lektiini on sellainen, joka tunnistaa galak-toosipuutteisen sokeriketjun, ja että leimattu lektiini galak-toosipuutteisen sokeriketjun tunnistamiseen on konkanavaliini A tai Lens culinaris agglutiniini.
2. Menetelmä galaktoosipuutteisuuden määrittämiseen seerumin IgG:n sokeriketjuissa, jossa menetelmässä käytetään patenttivaatimuksessa 1 määriteltyä diagnostista reagenssia, tunnet -t u siitä, että menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: proteiinin A tai proteiinin G annetaan reagoida seerumin kanssa; saadun seoksen annetaan reagoida leimatun lektiinin, jona toimii konkanavaliini A tai Lens culinaris agglutiniini, kanssa, ja; osoitetaan leima. Il 11 97649
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12617789 | 1989-05-19 | ||
| JP12617789 | 1989-05-19 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI902322A0 FI902322A0 (fi) | 1990-05-09 |
| FI97649B true FI97649B (fi) | 1996-10-15 |
| FI97649C FI97649C (fi) | 1997-01-27 |
Family
ID=14928591
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI902322A FI97649C (fi) | 1989-05-19 | 1990-05-09 | Diagnostinen reagenssi nivelreuman diagnosoinnissa käytettäväksi |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0398292B1 (fi) |
| JP (1) | JP2945075B2 (fi) |
| KR (1) | KR920007202B1 (fi) |
| CN (1) | CN1036156C (fi) |
| AT (1) | ATE126598T1 (fi) |
| CA (1) | CA2016125A1 (fi) |
| DE (1) | DE69021631T2 (fi) |
| DK (1) | DK0398292T3 (fi) |
| ES (1) | ES2076254T3 (fi) |
| FI (1) | FI97649C (fi) |
| GR (1) | GR3017345T3 (fi) |
| NO (1) | NO301563B1 (fi) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2133772A1 (en) * | 1993-11-19 | 1995-05-20 | Yuji Yamada | Method for assaying glycoconjugate and reagent thereof |
| JP3537535B2 (ja) * | 1994-07-14 | 2004-06-14 | 株式会社中埜酢店 | 免疫グロブリンｇ結合糖鎖構造に基づく臨床検査方法 |
| AU5104100A (en) * | 1999-06-02 | 2000-12-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Method for judging rheumatoid arthritis |
| GB2362211A (en) * | 2000-05-08 | 2001-11-14 | Leuven K U Res & Dev | Detecting circulating immune complexes using protein G |
| CN112924671A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-06-08 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种用于诊断类风湿关节炎合并肺间质纤维化的生物标志物及其用途 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3175955D1 (en) * | 1981-02-19 | 1987-04-09 | Hoffmann La Roche | Process for the deternination of antigens or antibodies |
| US4617262A (en) * | 1983-07-22 | 1986-10-14 | Cooperbiomedical, Inc. | Assaying for circulating immune complexes with labeled protein A |
| US4659659A (en) * | 1985-01-22 | 1987-04-21 | Monsanto Company | Diagnostic method for diseases having an arthritic component |
| US4863874A (en) * | 1986-07-11 | 1989-09-05 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for detecting phosphatidylinositol through binding to Concanavalin A |
| GB8726271D0 (en) * | 1987-11-10 | 1987-12-16 | Univ London | Protein glycosylation assay |
-
1990
- 1990-05-04 CA CA002016125A patent/CA2016125A1/en not_active Abandoned
- 1990-05-09 FI FI902322A patent/FI97649C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-05-14 JP JP12376690A patent/JP2945075B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-05-15 NO NO902158A patent/NO301563B1/no not_active IP Right Cessation
- 1990-05-16 DK DK90109242.9T patent/DK0398292T3/da active
- 1990-05-16 ES ES90109242T patent/ES2076254T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-16 DE DE69021631T patent/DE69021631T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-05-16 EP EP90109242A patent/EP0398292B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-05-16 AT AT90109242T patent/ATE126598T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-05-19 CN CN90103723A patent/CN1036156C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1990-05-19 KR KR1019900007225A patent/KR920007202B1/ko not_active Expired
-
1995
- 1995-09-08 GR GR950401869T patent/GR3017345T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69021631D1 (de) | 1995-09-21 |
| NO301563B1 (no) | 1997-11-10 |
| EP0398292B1 (en) | 1995-08-16 |
| NO902158D0 (no) | 1990-05-15 |
| GR3017345T3 (en) | 1995-12-31 |
| NO902158L (no) | 1990-11-20 |
| DK0398292T3 (da) | 1995-09-25 |
| KR920007202B1 (ko) | 1992-08-27 |
| EP0398292A3 (en) | 1991-11-13 |
| FI97649C (fi) | 1997-01-27 |
| ATE126598T1 (de) | 1995-09-15 |
| JPH0373857A (ja) | 1991-03-28 |
| FI902322A0 (fi) | 1990-05-09 |
| CA2016125A1 (en) | 1990-11-19 |
| KR900017608A (ko) | 1990-12-19 |
| EP0398292A2 (en) | 1990-11-22 |
| JP2945075B2 (ja) | 1999-09-06 |
| CN1047392A (zh) | 1990-11-28 |
| CN1036156C (zh) | 1997-10-15 |
| ES2076254T3 (es) | 1995-11-01 |
| DE69021631T2 (de) | 1996-02-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dalle-Donne et al. | Protein carbonyl groups as biomarkers of oxidative stress | |
| Fairbanks et al. | Methods for measuring plasma hemoglobin in micromolar concentration compared | |
| US4302536A (en) | Colorimetric immunoassay process | |
| US5466582A (en) | Thrombocytopenia determination | |
| US20070184504A1 (en) | Assay for anti-INGAP antibodies | |
| JP4197393B2 (ja) | ＩｇＡ腎症の検査法 | |
| HU182442B (en) | Process for the determination of immunoglobulins | |
| FI97649B (fi) | Diagnostinen reagenssi nivelreuman diagnosoinnissa käytettäväksi | |
| JPWO1999050663A1 (ja) | ＩｇＡ腎症の検査法 | |
| CN109725158B (zh) | 多肽sle2018-v001在诊断系统性红斑狼疮试剂盒中的应用 | |
| JP2821951B2 (ja) | 血小板減少症判定 | |
| WO1998026293A1 (en) | Methods of detecting transmissible spongiform encephalopathies by detecting 14-3-3 protein isoforms | |
| WO1998026293A9 (en) | Methods of detecting transmissible spongiform encephalopathies by detecting 14-3-3 protein isoforms | |
| RU2122736C1 (ru) | Набор для выявления сенсибилизирующих аллергенов методом твердофазного иммуноферментного анализа | |
| CN109725156B (zh) | 多肽sle2018-v002在诊断系统性红斑狼疮试剂盒中的应用 | |
| JP4124526B2 (ja) | 正常アグリカン測定法とその応用 | |
| KR20100060897A (ko) | 에틸벤젠 독성 중독 진단용 바이오마커 | |
| GB2217335A (en) | Compositions for isolation and immobilisation of C-reactive protein in body liquids | |
| RU2197736C1 (ru) | Реагент для иммуноферментного анализа и способ иммуноферментного тестирования специфических антител при описторхозе, вызываемом печеночной трематодой opisthorhis felineus | |
| JP4681175B2 (ja) | 播種性血管内凝固症候群及びその発症前段階を検出する方法 | |
| Saile et al. | Quantification of serum amyloid P by enzyme-linked immunosorbent assay | |
| CN109725157B (zh) | 多肽sle2018-v003在诊断系统性红斑狼疮试剂盒中的应用 | |
| Ranjan et al. | Immunochemical detection of glycated lens crystallins and their circulating autoantibodies in human serum during aging | |
| JPH11166931A (ja) | 生体成分の量的あるいは質的異常を検出する方法 | |
| KR20250132251A (ko) | 환원형 퍼옥시레독신 ⅰ의 c-말단 펩타이드를 유효성분으로 하는 류마티스 관절염 진단 마커 및 이를 활용한 류마티스 관절염 진단 키트, 그리고 티오레독신 1을 동반 표지자로 사용한 조합 분석을 통한 류마티스 관절염 진단 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: EISAI CO., LTD. |