FI95607B - Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi - Google Patents
Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI95607B FI95607B FI942639A FI942639A FI95607B FI 95607 B FI95607 B FI 95607B FI 942639 A FI942639 A FI 942639A FI 942639 A FI942639 A FI 942639A FI 95607 B FI95607 B FI 95607B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- pulp
- hexenuronidase
- activity
- preparation
- enzyme
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 title claims abstract description 7
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 29
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 title claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 64
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 38
- 239000012978 lignocellulosic material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 64
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 64
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 64
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 42
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 claims description 20
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 20
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 claims description 19
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 claims description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 15
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims description 11
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims description 11
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 claims description 10
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 10
- LIKMAJRDDDTEIG-UHFFFAOYSA-N 1-hexene Chemical compound CCCCC=C LIKMAJRDDDTEIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims description 8
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 6
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 claims description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 5
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 claims description 5
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 claims description 4
- 241000222481 Schizophyllum commune Species 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 241001513093 Aspergillus awamori Species 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 241000193752 Bacillus circulans Species 0.000 claims description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000223208 Curvularia Species 0.000 claims description 3
- 241001105467 Fomitopsis palustris Species 0.000 claims description 3
- 241000222393 Phanerochaete chrysosporium Species 0.000 claims description 3
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 3
- 241000958211 Streptomyces flavogriseus Species 0.000 claims description 3
- 241000228178 Thermoascus Species 0.000 claims description 3
- 241001313536 Thermothelomyces thermophila Species 0.000 claims description 3
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 claims description 3
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 2
- 241000133623 Aspergillus bisporus Species 0.000 claims description 2
- 241000223651 Aureobasidium Species 0.000 claims description 2
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 2
- -1 F. oxysporum) Chemical compound 0.000 claims description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 2
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 claims description 2
- 241001507673 Penicillium digitatum Species 0.000 claims description 2
- 241000228129 Penicillium janthinellum Species 0.000 claims description 2
- 241000222385 Phanerochaete Species 0.000 claims description 2
- 241000222480 Schizophyllum Species 0.000 claims description 2
- 241000187134 Streptomyces olivochromogenes Species 0.000 claims description 2
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims description 2
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 claims description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 108010062085 ligninase Proteins 0.000 claims 3
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims 1
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 claims 1
- 101001091385 Homo sapiens Kallikrein-6 Proteins 0.000 claims 1
- 102100034866 Kallikrein-6 Human genes 0.000 claims 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 claims 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 claims 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 abstract description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 9
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 14
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 10
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 10
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 9
- LGQKSQQRKHFMLI-SJYYZXOBSA-N (2s,3r,4s,5r)-2-[(3r,4r,5r,6r)-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)OC1 LGQKSQQRKHFMLI-SJYYZXOBSA-N 0.000 description 8
- LGQKSQQRKHFMLI-UHFFFAOYSA-N 4-O-beta-D-xylopyranosyl-beta-D-xylopyranose Natural products OC1C(O)C(O)COC1OC1C(O)C(O)C(O)OC1 LGQKSQQRKHFMLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- SQNRKWHRVIAKLP-UHFFFAOYSA-N D-xylobiose Natural products O=CC(O)C(O)C(CO)OC1OCC(O)C(O)C1O SQNRKWHRVIAKLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 8
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 8
- 125000000969 xylosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 description 8
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical group OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- JNIQBPHJIAOMQU-FSIIMWSLSA-N (2s,3s,4s,5r)-2,3,4,5-tetrahydroxy-6-oxoheptanoic acid Chemical group CC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O JNIQBPHJIAOMQU-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- OSVXSBDYLRYLIG-UHFFFAOYSA-N dioxidochlorine(.) Chemical compound O=Cl=O OSVXSBDYLRYLIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001131 Pulp (paper) Polymers 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical group O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- WGLLPAPKWFDHHV-NRGGUMNKSA-N (2s,3s,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CO[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)O[C@@H]1C(O)=O WGLLPAPKWFDHHV-NRGGUMNKSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 2
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004155 Chlorine dioxide Substances 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 2
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 2
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019398 chlorine dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N orcinol Chemical compound CC1=CC(O)=CC(O)=C1 OIPPWFOQEKKFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011122 softwood Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- XEZAVSPANPMMPH-OHKRPGQBSA-N (2s,3s,4r,5r)-2,3,4,5-tetrahydroxy-3-methyl-6-oxohexanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@](O)(C)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XEZAVSPANPMMPH-OHKRPGQBSA-N 0.000 description 1
- CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 1,4-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=C(N)C=C1 CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPSXHKGJZJCWLV-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-(1-ethylpiperidin-4-yl)oxypyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)OC1CCN(CC1)CC VPSXHKGJZJCWLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JCSJTDYCNQHPRJ-UHFFFAOYSA-N 20-hydroxyecdysone 2,3-acetonide Natural products OC1C(O)C(O)COC1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)OC2)O)OC1 JCSJTDYCNQHPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 229920001706 Glucuronoxylan Polymers 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 241000800294 Sarocladium oryzae Species 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 108010061261 alpha-glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N anthraquinone Natural products CCC(=O)c1c(O)c2C(=O)C3C(C=CC=C3O)C(=O)c2cc1CC(=O)OC PYKYMHQGRFAEBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004056 anthraquinones Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- JCSJTDYCNQHPRJ-FDVJSPBESA-N beta-D-Xylp-(1->4)-beta-D-Xylp-(1->4)-D-Xylp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)C(O)OC2)O)OC1 JCSJTDYCNQHPRJ-FDVJSPBESA-N 0.000 description 1
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910001902 chlorine oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 108010038658 exo-1,4-beta-D-xylosidase Proteins 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- AHAREKHAZNPPMI-UHFFFAOYSA-N hexa-1,3-diene Chemical compound CCC=CC=C AHAREKHAZNPPMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000004537 pulping Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003878 thermal aging Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- ABKNGTPZXRUSOI-UHFFFAOYSA-N xylotriose Natural products OCC(OC1OCC(OC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C1O)C(O)C(O)C=O ABKNGTPZXRUSOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01031—Beta-glucuronidase (3.2.1.31)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- D—TEXTILES; PAPER
- D21—PAPER-MAKING; PRODUCTION OF CELLULOSE
- D21C—PRODUCTION OF CELLULOSE BY REMOVING NON-CELLULOSE SUBSTANCES FROM CELLULOSE-CONTAINING MATERIALS; REGENERATION OF PULPING LIQUORS; APPARATUS THEREFOR
- D21C5/00—Other processes for obtaining cellulose, e.g. cooking cotton linters ; Processes characterised by the choice of cellulose-containing starting materials
- D21C5/005—Treatment of cellulose-containing material with microorganisms or enzymes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Paper (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
95607
Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi
Esillä oleva keksintö koskee patenttivaatimuksen 1 johdannon mukaista menetelmää 5 selluloosamassojen, etenkin sulfaattimenetelmällä ja jatketuilla keittomenetelmillä valmistettujen selluloosamassojen, käsittelemiseksi.
Keksintö koskee myös patenttivaatimuksen 20 johdannon mukaista entsyymivalmistetta sekä menetelmää entsyymiä tuottavien kantojen eristämiseksi kuten myös menetelmää 10 halutun entsyymin valmistamiseksi.
Perinteisissä kloorivalkaisuissa selluloosamassojen jäännösligniini liuotetaan kloorin tai klooridioksidin avulla. Nykyisin massat valkaistaan usein happikaasulla, vetyperoksidilla, otsonilla tai yhdistetyillä valkaisusekvensseillä, jotka sisältävät näitä aineita sekä 15 yllä mainittuja, perinteisiä valkaisukemikaaleja. Hemisellulaaseilla tai ligniiniä pilkkovilla entsyymeillä suoritettuja entsyymikäsittelyjä on yhdistetty perinteisiin ja uusiin val-kaisusarjoihin, jolloin on saatu aikaan kuitujen valkaistavuuden paraneminen. Valkaista-vuuden paranemiseen tarvittavat entsyymimäärät ovat pieniä ja entsyymikäsittely voidaan helposti sisällyttää massan valmistusmenetelmiin.
20
Tavanomaisesti entsyymeillä on käsitelty suoraan kuituja, jotka ovat peräisin sellunkeit-toprosesseista. Aiemmassa PCT-patenttihakemuksessa, joka on julkaistu numerolla WO 93/11296, on osoitettu, että entsyymien mahdollisuudet vaikuttaa tehokkaasti massoihin täysin perustuvat selluloosakuitujen ominaisuuksiin. Täten esimerkiksi ksy-25 lanaasit eivät toimi suotuisimmin, kun pintavaraus, se on zeta-potentiaali, on hyvin alhainen. Tämän lisäksi alhaisessa pH-arvossa käsitelty sulfaattimassa, jossa massan hemiselluloosien karboksyyliryhmät ovat happamessa muodossa (eivätkä sisällä metalli-vastaioneja), on jokseenkin huono entsyymikäsittelyjen (hemisellulaasikäsittelyjen) substraatti. Poistamalla entsyymien avulla hemiselluloosien karboksyylihapporyhmiä 30 sellumassoista, voidaan muuttaa sellumassan sekä pintavaraus että metalli-ionipitoisuut-ta. Aiemman patenttihakemuksemme menetelmän mukaan metyyliglukuronihapporyhmät voidaan poistaa siten, että sellumassaa käsitellään entsyymi valmisteella, jolla on väittä- 2 95607 mätöntä glukuronidaasientsyymiaktiivisuutta. Tämä aktiivisuus pilkkoo ksylaaniketjun ksyloosiyksikön ja karboksyylihapposivuketjun välisen sidoksen, jolloin karboksyylihap-poiyhmä poistuu.
5 Vaikka glukuronidaasientsyymikäsittelyllä on saatu jokseenkin lupaavia tuloksia, vielä enemmän on parannettava sellaisten massojen, erityisesti sulfaattimassojen sekä joidenkin muunnetun (jatketun) keiton avulla saatujen massojen, modifiointia, jotka sisältävät erittäin pieniä määriä glukuronihappoja.
10 Esillä olevan keksinnön yhteydessä on havaittu yllättäen, että ksyloosiyksikön happamet sivuketjut eivät koostu yksinomaan 4-O-metyyli-a-D-glukuronihaposta tai a-D-gluku-ronihaposta, kuten nykyisin arvellaan, vaan tavanomaisen sulfaattimenetelmän samoin kuin muutamien uusien, jatkettujen keittomenetelmien yhteydessä, olennainen osa 4-metyyliglukuronihappoa (seuraavassa lyhennetty MeGluA.ksi) itse asiassa muutetaan 15 tyydyttymättömäksi johdannaisekseen, nimittäin 4-deoksi-a-L-treo-4-hekseeniuroniha-poksi tai hekseeniuronihapoksi (HexA). Tämä karboksyylihappo voi esiintyä valkaisu-olosuhteiden mukaan myös valkaistussa massassa.
Edellä esitettyihin havaintoihin viitaten, esillä oleva keksintö saa aikaan sellaisen uuden 20 ratkaisun teollisten massojen modifioimiseksi, joka perustuu ajatukseen poistaa selektiivisesti ainakin osa hekseeniuronihapporyhmistä, jotka sisältyvät massaan.
Täsmällisemmin sanottuna esillä olevalle keksinnölle on tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa.
25
Esillä olevan keksinnön entsyymivalmisteelle on tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 17 tunnusmerkkiosassa. Menetelmälle heksenuronidaasiaktiivisuutta tuottavien mikro-organismikantojen eristämiseksi on tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 22 tunnusmerkkiosassa ja menetelmälle heksenuronidaasin tuottami-30 seksi on tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 25 tunnusmerkkiosassa.
It 3 95607 Määritelmät
Esillä olevassa keksinnössä termiä "glukuronihapporyhmät" käytetään 4-O-metyyli-a-D-glukuronihapon tai α-D-glukuronihapporyhmien lyhennyksenä. "Hekseeniuronihappo-5 ryhmät" on 4-deoksi-a-L-treo-4-hekseeniuronihapon lyhennys.
Termillä "entsyymivalmiste" nimitetään mitä tahansa tuotetta, joka sisältää ainakin yhtä entsyymiä. Tällainen entsyymivalmiste voi siten olla kasvatusliuos, joka sisältää yhtä tai useampaa entsyymiä, tai eristetty entsyymi tai yhden tai useamman entsyymin seos.
10 Entsymaattisen aktiivisuuden lisäksi valmiste edullisesti sisältää sellaisia apuaineita, joita yleisesti käytetään paperi- ja selluteollisuun käyttöön tarkoitetuissa entsyymival-misteissa. Nämä apuaineet koostuvat tyypillisesti esimerkiksi puskurointi- ja stabilointiaineista.
15 Termi "uronidaasi" tässä yhteydessä käytettynä kattaa sekä hekseeniuronidaasin että glukuronidaasin.
"Oleellinen määrä hekseeniuronidaasia" tai "oleellinen määrä glukuronidaasia" ilmaisee, että entsyymivalmisteen uronidaasi- tai glukuronidaasiaktiivisuudet ovat suhteellisen 20 korkeat. Toisin sanoen, määrät ovat riittävät, jotta saadaan aikaan happamien ryhmien ja ksyloosiyksiköiden välisten sidosten hydrolyysi. Entsyymivalmisteen uronidaasiaktii-visuuksien tulisi erityisesti olla niin korkeita, että oleellinen osa substraatin uroni-happoryhmiä voidaan poistaa saattamalla substraatti kosketuksiin entsyymin kanssa.
25 Esillä olevassa keksinnössä termiä "kraftprosessi" käytetään "sulfaattiprosessin" synonyyminä, ja se merkitsee keittomenetelmää, jonka pääasialliset keittokemikaalit koostuvat natriumsulfidista ja natriumhydroksidista. "Uudet" ja "muunnetut" (eli modifioidut) keittomenetelmät tarkoittavat sellunkeittomenetelmiä, jotka perustuvat tavanomaisen sulfaattikeiton jatkamiseen, kunnes lignoselluloosamateriaalin kappaluku on 30 laskenut alle arvon noin 20. Näihin menetelmiin liittyy tyypillisesti happikäsittely.
4 95607
Kuvio esittää metyyliglukuronihapporyhmien muuttumista hekseeniuronihapporyhmiksi sellunkeittoajan funktiona.
Esillä olevan keksinnön ominaispiirteet ja edut kuvataan tarkemmin seuraavassa yksi-5 tyiskohtaisessa selityksessä ja sovellutusesimerkeissä.
Esillä olevassa keksinnössä hekseeniuronihappojen olemassaolo on osoitettu - hydrolysoimalla ksylaanipolymeeriä ksylanaasilla, kun männystä keitetään massaa kraftprosessin avulla, ja 10 - erottamalla happamet oligosakkaridit neutraaleista ja - analysoimalla happamet oligosakkaridit ‘Hilla ja 13C NMR.llä.
Käytettyä valmistustapaa kuvataan yksityiskohtaisemmin työskentelyesimerkeissä 1 ja 2.
15 NOESY- ja vastaavasti HMBC-menetelmillä saatujen kaksiulotteisten NMR-ristipiikkien perusteella päätellään, että hekseeniuronihappo on kiinnittynyt a-(l-*2)-sidoksella sisäiseen ksy loosiin.
On havaittu, että tavanomaisen sulfaattikeiton jälkeen ksy läänin karboksyylihapporyh-20 mistä noin 65 prosenttia muodostuu hekseeniuronihaposta, kun kysymys on koivun kraftmassasta. Mäntysulfaattimassan kohdalla vastaava prosenttiluku on noin 80. Jotkut uudet keittomenetelmät, erityisesti EMCC, MCC/02 ja jatkuva sellunkeitto, joka on yhdistetty happikäsittelyyn, tuottavat sellua, joissa karboksyylihapporyhmät lähes yksinomaan muodostuvat hekseeniuronihapoista. Kuviossa on esitetty kokeellisia tuloksia, 25 jotka osoittavat metyyliglukuronihapon muuttumisen hekseeniuronihapoiksi kraftprosessin aikana. Kuviosta käy ilmi, että mitä pitempi keittoaika, sitä suurempi osa karbok-syylihapporyhmistä muodostuu hekseeniuronihapporyhmistä. Taulukko 1 esittää tulokset, jotka koskevat erilaisten massojen HexA- ja MeGlcA-tuIoksia.
it 5 95607
Taulukko 1. T. reesei:n ksylanaasilla (pl 9,0) saatujen teollisten havupuumasso-jen hydrolyysituotteiden koostumus
Keittomenetel- Kappa Ksyloosi MeGlcA HexA Xyl (% 5 mä (SCAN) (%ofd.w.) (mol-%) (mol-%) teoreetti sesta)
Jatkettu erä + 13,10 6,3 nd 0,8 9,8 AQ______ EMCC_ 18,90 63__nd__2,8 9,3_
Erä__26,80 8,5__0A__AA__10,4 10 Super-batch/02 6,40 5,6 nd 0,4 5,8 MCC/Q2__11,80__83__nd__AA__83_
Jatkuva/02 20,30 8,8 nd 5,5 8,2 AQ = antrakinoni 15 EMCC = Extended modified continuous cook (jatkettu, modifioitu jatkuva keitto) nd = ei osoitettu
Tavanomaisen hiilihydraattianalyysin yhteydessä suoritettava hapan hydrolyysi hajottaa hekseeniuronihapon, mikä osaltaan selittää sen, miksi mainittua happoa ei ole aiemmin 20 havaittu tavanomaisen hiilihydraattianalyysin yhteydessä.
Keksintöön liittyvät lisähavainnot osoittavat, että uronihappojen kahden tyypin suhteelliset määrät valkaistussa massassa vaihtelevat valkaisuolosuhteiden mukaan, kuten taulukossa 2 on esitetty.
25 6 95607
Taulukko 2. Valkaisun vaikutus havupuusulfaattimassan (kappaluku 25,9) pintaksylaanin koostumukseen 5 Valkaisu- Vaaleus HexA MeGluA Ara Xyl sekvenssi (mol-%) (mol-%) (mol-%) (mol-%) _Q__nd__4^8__09__05__86,8 QO__408__08__00__05__86,6 QOQZ__605__03__00__06__90,1 10 QOQZE__608__06__00__7,9 89,6 QOQZEP 80,4__06__01__08__89,5 QOQP__705__4/7__U__04__86,8 QOQPZ__804__03__02__04__91,9 QOQPZE 80,8__02__U__7,4 91,3 15 QOQPZEP 88,5__03__03__06__90,8 QOQPPP 82,2__43__02__03__87,0 QOQDEDED 88,1__OO__1,2 7,5 90,8 Q = EDTA-käsittely, O = happi, P = peroksidi, E = alkalinen uutto, D = kloori-20 dioksidi.
Kuten edellä esitetyistä tuloksista käy ilmi, siinä tapauksessa, että valkaisussa käytetään peroksidia tai happea, hekseeniuronihappo muodostaa ksylaanin ksyloosiyksiköiden happamien sivuketjujen pääosan. Hapetus, esimerkiksi klooridioksidilla tai otsonilla, 25 tuhoaa valkaisun aikana hekseeniuronihapon.
Hekseeniuronidaasia tuottavien kantojen eristäminen ja entsyymin tuottaminen
Esillä olevan keksinnön mukaan ainakin osa hekseeniuronihapporyhmistä poistetaan 30 massasta selektiivisesti. Tämä selektiivinen poisto voidaan aikaansaada entsymaattisesti siten, että käytetään hekseeniuronidaasia, tai kemiallisesti käyttämällä aineita, jotka 7 95607 selektiivisesti reagoivat kaksoissidoksen kanssa vaikuttamatta huomattavasti molekyylin jäljelle jäävään osaan. On edullista käyttää hekseeniuronidaasia.
Esillä oleva keksintö koskee siten menetelmää sellaisten mikrobikantojen eristämiseksi, 5 jotka pystyvät tuottamaan hekseeniuronidaasia. Yhteenvetona esitettynä keksintö käsittää vaiheet, joissa - kootaan mikro-organismia sisältävän orgaanisen aineen näytteet sellutehtaasta tai sen läheisyydestä tai mistä tahansa mahdollisesta lähteestä, joka sisältää materiaalia, jolla on tämä hiilihydraattirakenne, 10 - näytteet sekoitetaan esimerkiksi fysiologisessa keittosuolaliuoksessa, - laimennetun liuoksen erät siirrostetaan levyille, sopivalle elatusalustalle, - levyjä inkuboidaan ja niitä viljellään, jotta saadaan pesäkkeitä, - eristetään pesäkkeet, jotka kasvavat nopeasti, ja - nopeasti kasvavat pesäkkeet haluttaessa puhdistetaan ja niiden hekseeniuronidaasiak-15 tiivisuus määritetään.
Elatusalusta sisältää oligomeerejä, joissa on hekseeniuroni- happoa tai ksylaania, sopivien typen ja hiilen lähteiden kanssa. Menetelmää kuvataan yksityiskohtaisemmin esimerkeissä 5 ja 6.
20
Hekseeniuronidaasia voidaan tuottaa mikrobikannoilla, jotka eristetään edellä esitetyllä menetelmällä viljelemällä mikro-organismia kasvatusalustalla, jossa on oligomeerejä, jotka sisältävät hekseeniuronihappoa tai ksylaania.
25 Keksinnön edullisen sovellutusmuodon mukaan käytettävä entsyymivalmiste sisältää sellaisen mikro-organismin viljelynesteen tai -alustan, joka tuottaa uronidaasia ja joka on eristetty edellä kuvatulla tavalla. Tällainen viljelyneste mieluummin väkevöidään ennen käyttöä. Toisen edullisen sovellutusmuodon mukaan entsyymivalmiste sisältää puhdistetun entsyymin, joka on eristetty viljelynesteestä.
« 30 8 95607
Lignoselluloosamateriaalien käsittelyyn sopivalla entsyymivalmisteella on oleellinen uronidaasiaktiivisuus ja se sisältää vain pieniä määriä hemisellulaaseja (ksylanaaseja), jos ollenkaan.
5 Keksintö ei kuitenkaan rajoitu tässä esitettyihin entsyymin alkuperiin eikä eristys-menetelmään, ja entsyymi voidaan saada myös muilla menetelmillä.
Täten on mahdollista tuottaa uronidaasientsyymiä mikro-organismeilla, jotka on muta-toitu tai geneettisesti konstruoitu siten, että ne tuottavat haluttua entsyymiä, tai muilla 10 tuottoisäntäkannoilla, joihin on siirretty tätä koodaava geeni.
Uronidaasientsyymivalmiste voi olla peräisin mikro-organismista, joka valitaan sellaisesta ryhmästä, joka koostuu sukujen Trichoderma (esim. T. reesei, T. harzianum), Aspergillus (esim. A. niger, A. awamori, A. lerreus, A.oryzae), Schizophyllum (esim.
15 S. commune), Aureobasidium (esim. A. pullulans), Phanerochaete (esim. P. chrysospo-rium), Fusarium (esim. F. oxysporum), Agarius (esim. A. bisporus), Penicillium (esim.
P. janthinellum, P. digitatum), Streptomyces (esim. S. olivochromogenes, S. flavo-griseus) ja Bacillus (esim. B. subtilis, B. circulans) mikro-organismien joukosta. Se voi olla peräisin myös mikro-organismikannasta, joka valitaan ryhmästä, johon kuuluvat 20 Thermoascus auranticus, Curvularia inequalis, Tyromyces palustris, Cryptonectria parasitica, Myceliopthora thermophila ja Thermobacter auranticus. Voidaan käyttää myös mikro-organismeja, jotka tuottavat ksantanaasia ja pektinaasia.
Erittäin sopivia ovat myös kannat, jotka on eristetty sellutehtaan lähistöltä ja jotka 25 pystyvät pilkkomaan HexA.ta sisältäviä ksylaaneja.
Kaikkia näitä mikro-organismeja voidaan käyttää sellaisten uronidaasien tuottamiseen, jotka hydrolysoivat ksylaanin uronihapposivuryhmiä (HexA:ta tai MeGlcA.ta).
30 Edullisen soivellutusmuodon mukaan entsyymivalmisteet tuotetaan siten, että viljellään mitä tahansa yllä mainittuja, uronidaasia tuottavia mikro-organismeja viljelyalustassa, joka sisältää ksylaania.
. · 9 95607
Esillä oleva keksintö perustuu siihen ajatukseen, että ksylaania sisältävästä hiilihydraat-tisubstraatista poistetaan hekseeniuronihappoiyhmät pilkkomalla ksyloosiyksiköiden ja happamien sivuketjujen väliset sidokset. Vastakohtana edellä mainituille, voimakkaille hapetusmenetelmille, jotka eivät ainoastaan hajota hekseeniuronihapporyhmiä vaan 5 vaikuttavat myös materiaalin koko hiilihydraattiosan kemialliseen rakenteeseen, esillä olevan keksinnön mukaan vaaditaan, että mainitut ryhmät on poistettava selektiivisesti.
Sellaisissa tapauksissa, joissa ksylaani sisältää sekä HexA:ta että MeGlcA:ta, yleensä on toivottavaa poistaa spesifisesti molemmat sivuryhmät. Uronihapporyhmät poistetaan 10 mieluummin entsymaattisesti siten, että substraatti saatetaan kosketuksiin vastaavan hydrolaasin kanssa, se on vastaavasti hekseeniuronidaasin ja glukuronidaasin kanssa.
Esillä olevan keksinnön mukaan massoista valmistetun paperin teknisiä ominaisuuksia voidaan modifioida entsymaattisesti poistamalla karboksyylihapporyhmät nimenomaan 15 massakuitujen pinnalta. Etenkin esillä olevaa keksintöä voidaan käyttää sellumassoille, jotka on valmistettu sulfaattiprosessin tai muunnetun (sulfaatti-) prosessin avulla, kuten edellä mainittiin.
Erään edullisen sovellutusmuodon mukaan hekseeniuronihapporyhmät poistetaan ennen 20 sellumassan valkaisua. Kun sellusta poistetaan karboksyyliryhmät, myös sen sisältämät metallikationit poistuvat. Tällä tavalla valkaisukemikaalien, erityisesti komplekseja muodostavien aineiden, kuten esimerkiksi EDTA:n tai DTPA:n, kulutus vähentyy.
Koska esillä olevan keksinnön mukainen käsittely vähentää massojen metalli-ionipitoi-suutta, vetyperoksidia ja happea voidaan edellisesti käyttää valkaisukemikaalina.
25
Erään toisen edullisen sovellutusmuodon mukaan massan karboksyylihappomääriä modifioidaan siten, että käytetään hekseeniuronidaasia sellaisella tavalla, että hemisellu-laasien tai muiden entsyymien vaikutus kuitumateriaaleihin voidaan optimoida ja sitä voidaan tehostaa ilman mitään kuidun hemiselluloosien hydrolyysiä. Mitä suurempi on 30 entsyymivalmisteen suhteellinen hekseeniuronidaasiaktiivisuus, sitä helpompaa on saavuttaa tämä päämäärä. TFC-massojen (kokonaan kloorittomien massojen) valkaistu- 95607 10 vuutta voidaan lisätä uronidaasikäsittelyllä (käsittelyillä, jotka suoritetaan uronidaaseil-la).
Hekseeniuronidaasikäsittely voidaan suorittaa erikseen, samanaikaisesti jonkin muun 5 käsittelyn kanssa tai ennen sellaista käsittelyä. On erityisen edullista yhdistää hek- seeniuronidaasi-käsittely glukuronidaasikäsittelyyn. Kun hekseeniuronidaasikäsittely on samanaikaista sellaisen hemisellulaasikäsittelyn kanssa, jossa käytetään esimerkiksi ksylanaasia tai mannanaasia, on edullista käyttää entsyymivalmistetta, johon on lisätty uronidaasia tai joka on tuotettu kannalla, jota geneettisesti on parannettu suuren uroni-10 daasiaktiivisuuden tuottamiseksi, jotta saadaan valmiste, jolla luonteenomaisesti on korkea uronidaasiaktiivisuus. Keksinnön mukaaan hekseeniuronidaasikäsittely voidaan yhdistää myös käsittelyihin, jotka suoritetaan sellulaaseilla ja (tai) ligniiniä muuntavilla aktiivisuuksilla. Viimeksi mainittujen entsyymien esimerkkeinä voidaan mainita ligniini-peroksidaasi, lakkaasi ja Mn:ia tarvitseva peroksidaasi.
15
Kemiallisten massojen (sellun) lisäksi keksinnön menetelmä soveltuu myös minkä tahansa lignoselluloosien käsittelyyn, se on, mekaanisille tai kemimekaanisille massoille. Täten esillä olevissa tutkimuksissa on yllättäen havaittu, että selluloosamassojen jälki-kellertymistä voidaan vähentää hekseeniuronidaasi- ja (tai) glukuronidaasikäsittelyllä.
20
Kuten esimerkissä 12 alla esitetään, keksinnön mukaista käsittelyä voidaan käyttää myös valkaistusta massasta valmistetun paperin teknisten ominaisuuksien parantamiseen. Taulukon 2 tuloksista käy ilmi, että peroksidilla tai hapella valkaistuissa TCF-sellu-loosissa on huomattavia määriä hekseeniuronihapporyhmiä.
25
Keksinnön mukaisella menetelmällä saadaan aikaan huomattavia etuja. Niinpä kun massaa käsitellään uronidaasilla, kuten tässä aiemmin kuvattiin, ennen tai samanaikaisesti muulla entsyymillä (esimerkiksi ksylanaasilla) suoritettavan massan käsittelyn kanssa entsymaattisen hydrolyysin astetta voidaan lisätä, erityisesti siinä tapauksessa, 30 että substraattina käytetään metallitonta massaa. Esillä oleva keksintö tekee mahdolliseksi poistaa karboksyyliryhmät massoista, jotka eivät sisällä mitään merkittäviä • määriä metyyliglukuronihapporyhmiä.
Il 11 95607 Käsittelyn vaikutus perustuu erityisesti varattujen ryhmien poistoon eikä hemisellu-loosan kokonaishydrolyysiin. Esillä olevan menetelmän vaikutus perustuu uronihappo-ryhmien entsymaattiseen poistoon, jotta pintavaraus muutetaan edulliseen muotoon verrattuna lisäkäsittelyihin, jotka ovat joko kemiallisia tai entsymaattista. Muuttamalla 5 kuvattuja tekijöitä (kuten esimerkiksi pinta varausta), voidaan säädellä esimerkiksi niiden entsyymien toimintaa, jotka vaikuttavat kuitusubstraatin edullisimpiin osiin. Keksintö tekee mahdolliseksi vaikuttaa suoraan sellaisten kemikaalien tyyppiin ja määrään, joilla teollisessa mittakaavassa on uutettava ligniini kuiduista ja joita voidaan lisäksi käyttää, jotta parannetaan vähän klooria sisältäviä tai kloorittomia valkaisumenetelmiä, ja täten 10 vähentää ympäristön saastumista.
Siten että selluloosaa käsitellään uronidaasientsyymillä, voidaan hydrolysoida uronihap-poryhmiä, jotka sitovat metallia, mikä tehostaa selluloosan metalli-ionien poistoa. Sen tähden komplekseja muodostavien aineiden (esimerkiksi EDTA:n tai DTP A. n) käyttöä 15 ennen TCF-valkaisua voidaan vähentää tai se voidaan kokonaan poistaa.
Glukuronihapporyhmien entsymaattista poistoa voidaan käyttää eräiden pieniä määriä karboksyyliryhmiä sisältävien massojen, kuten esimerkiksi metallittomien tai sellaisten massojen, tuotannon parantamiseen.
20
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on myös ominaista, että sillä voidaan muuntaa sellaisen paperin teknisiä ominaisuuksia, jota valmistetaan kemiallisista ja mekaanisista massoista.
25 Esimerkit
Keksinnön mukaista menetelmää kuvataan seuraavissa esimerkeissä, jotka eivät millään muotoa rajoita keksintöä. Aiemmassa PCT-hakemuksessa (WO 93/11296) esitetään valmistuksen yksityiskohdat α-glukuronidaasille, jota voidaan käyttää yhdessä hek-30 seeniuronidaasin kanssa.
12 95607
Kuten edellä mainittiin, karboksyylihapporyhmien ja niihin sidottujen vastaionien lukumäärä vaikuttaa massan sähköiseen varaukseen. Näitä tekijöitä voidaan kuvata erilaisilla kemiallisilla ja fysikaalisilla parametreillä ja kuitujen (massojen) pintavaraus voidaan mitata zeta-potentiaalin avulla (Melzer 1972). Massojen metalli-ionipiloisuus voidaan 5 mitata siten, että niiden metallit analysoidaan atomiabsorptiospektrofotometrillä. Massojen karboksyylihappopitoisuus voidaan mitata esimerkiksi Sjöströmin menetelmällä (KCL-menetelmä, 192:68). Entsyymien toimintaa kuiduissa voidaan kuvata sokereiden vapautumisena ja ligniinifragmenttien uutettavuutena entsyymikäsittelyn jälkeen.
10
Esimerkki 1
Hekseeniuronihappoa sisältävien (HexA) oligosakkaridien valmistus
Koivun sulfaattimassaa, jonka kappaluku oli 17 - 18, saatiin Kaukaan sellutehtaalta 15 (Enso-Gutzeit Oy). Ensin massan koostumus analysoitiin seuraavasti, jotta varmistuttiin siitä, että sen hekseeniuronihapposisältö oli riittävä. Massaa hydrolysoitiin T. reesein ksylanaasilla (pl 9) 40 °C:ssa 24 tunnin ajan. Massakoostumus hydrolyysissä oli 5-prosenttinen, entsyymiannos oli 10 000 nkat/g massaa ja pH säädettiin 5,0:ksi rikkihapolla. Hydrolyysin jälkeen näyte suodatettiin, keitettiin ja se lyofilisoitiin. Lyofilisaatti 20 analysoitiin NMR:llä. Hydrolysaatin sokeriaineosat olivat seuraavat: - ksyloosiyksiköitä 95 % - hekseeniuronihappoa 4,2 % (sidottu ksyloosiyksiköihin) - metyyliglukuronihappoa 0,8 % (sidottu ksyloosiyksiköihin) 25 HexA:ta sisältävien oligomeerien vapauttamiseksi 223 kg märkää massaa lisättiin asteittain 400 litraan vettä (koostumus, joka muodostui, oli noin 6-prosenttinen) entsyymikäsittelyn ensimmäisten 24 tunnin aikana ja selluloosaa hydrolysoitiin kaupallisilla sellu-laasi- (Econase, Oy Alko Ab) sekä ksylanaasivalmisteilla (Ecopulp, Oy Alko Ab). Entsyymiannokset, jotka olivat peräisin molemmista valmisteista, olivat seuraavat: 30 endoglukanaasia (aktiivisuus määritetty hydroksietyyliselluloosaa kohtaan, IUPAC, 1989) 6200 nkat/g kuivaa massaa sekä ksylanaasia (määritetty Bailey et al.:n menetel-I mällä, 1992) 10500 nkat/g kuivaa massaa. Hydrolyysiolosuhteet olivat seuraavat: läm- 13 95607 pötila 40 - 45 °C, pH 5 ja kesto kolme (3) päivää. Hydrolyysi lopetettiin keittämällä 15 minuutin ajan. Jäähdyttämisen jälkeen hydrolysaattia ravisteltiin varovaisesti +5 °C:ssa yön ajan.
5 Hydrolysaatti kirkastettiin painesuodatuksella Seitz Orion C-40:n metallilevykehys-suodattimella (suodatuspinta-ala 1,7 m2). Suodatuspaine oli 100 kPa.ta (1 baari). Hyd-rolysaattiin lisättiin ennen suodatusta 3,5 kg suodatuksen apuainetta (piimaata, Celite Standard Super-Cel). Saatiin noin 600 litraa kirkasta suodosta 20 minuutin kuluessa. Hydrolysaatin happamet hydrolyysituotteet analysoitiin kromatografisesti Dionex-pyl-10 väällä (KCL, Espoo). Identifioidut happamet aineosat olivat seuraavat: metyyligluku-ronihappo 390 mg/1, glukuronihappo 98 mg/1 ja kolme oligomeeriä, jotka olivat substi-tuoidut hekseeniuronihapolla (nimitetty (HexAXnl:ksi, HexAX^ksi ja HexAX^ksi) ja joiden konsentraatiot olivat seuraavat: - HexAXnl 280 U/l 15 - HeAX„2 400 U/l - HexAX„3 20 U/l, jolloin 1 U vastaa vastetta ilmaisinsignaalissa, joka on suuruudeltaan 1,0.
NMR.llä analysoitiin sellaisten pääkomponenttien rakenne, jotka sisältävät hek-20 seeniuronihappoa (HexAXnl ja HexAX^). Nämä yhdisteet muodostuivat hek- seeniuronihappoyksiköstä, joka on kiinnitetty ksylobioosin ei pelkistävään päähän pienemmässä ja ksylotrioosin ei pelkistävään päähän suuremmassa oligosakkaridissa.
Hydrolysaatti syötettiin kymmenenä (10) 50 litran suuruisena eränä anioninvaihtajaan 25 (Dowex 1 X 2, 100 - 200 meshiä, Cl-muoto, 2,2 kg), joka oli pakattu kuuden (6) litran vetoiseen pylvääseen (BP-252, Pharmacia, läpimitta 25,2 cm, korkeus 11 cm). Virtausnopeus oli noin 450 ml/minuutti, ja käytetyt eluentit olivat: 1. 1-molaarinen NaAc (geelin regenerointia varten), 2. tislattu vesi (tasapainottamista varten ennnen näytteen syöttöä), 3. näytteen syöttö, 4. tislattu vesi (pylvään pesua varten), 5. 0,1-molaarinen 30 natriumasetaatti (happamien tuotteiden eluointia varten alhaisessa ionivahvuudessa) ja 6.
1-molaarinen natriumasetaatti (eluointia varten suuremmassa ionivahvuudessa ja geelin : regenerointia varten). Koottiin jakeet, joiden koot olivat 450 ml tai 900 ml, ja ne ana- 14 95607 lysoitiin. Kaikki kymmenen kierrosta olivat samanlaisia konduktivisuuden ja UV-absor-banssin perusteella, jotka määritettiin eluoiduista jakeista. Absorboitumattomassa materiaalissa ei havaittu mitään happamia oligomeerejä.
5 Huippujakeet 4 kierroksesta yhdistettiin ja lyofilisoitiin. Näiden poolien koostumukset esitetään seuraavassa taulukossa.
Taulukko 3. Oligomeeripoolien koostumus
10 Valmiste Tilavuus Kuiva-aine HexAX^+HexAX^+HexAX^ MeGIcA GIcA
I % U/ml{**) 1000 UH mg/l g mg/1 g
P-229 B-C I
(pieni suola- 3,9 1,65 2900 11 200 0,78 50 0,20 15 pitoisuus)
P-229 B-C II
(suuri suola- 3,5 7,4 7800 27 6800 24 700 2.5 pitoisuus)
P-229 D-F I
20 (pieni suola- 3.8 1.93 3600 14 580 2.2 50 0,19 pitoisuus)
P-229 D-F II
(suuri suola- 3,8 7,4 8800 33 7600 29 640 2,4 pitoisuus) 25 - (**) Hekseeniuronihappoa sisältävien oligomeerien määrät ilmaistaan mielivaltaisina yksiköinä, koska ei ole 30 saatavilla mitään standardeja. Voidaan arvioida, että 1 U on yhtä paljon kuin 1,5 - 3,0 mg.
1 g lyofilisoitua valmistetta P-229 B-C II liuotettiin 10 mlraan tislattua vettä. Näyte pantiin Bio-Gelin P-2-pylvääseen (Bio-Rad, korkeus 90 cm, tilavuus 1,8 1), joka aiemmin oli tasapainotettu tislatulla vedellä. 15 ml:n suuruiset jakeet koottiin eluoinnin 35 aikana, joka suoritettiin tislatulla vedellä. Sellaiset jakeet, jotka sisälsivät suurimmat pitoisuudet HexAX2:hta, yhdistettiin ja haihduttamalla väkevöitiin 10 ml.ksi. Tämän jälkeen samanlainen geelisuodatus toistettiin kaksi kertaa. Kolmannen geelisuodatuksen 15 95607 jälkeen huippujae sisälsi enemmän kuin 95 prosenttia HexAX2:hta, mikä pääteltiin kromatografisen analyysin perusteella ja varmistettiin NMRrllä.
Jotta saatiin oligomeerien raaka jae, lyofilisoitua valmistetta P-229 B-C II, jonka ase-5 taattipitoisuus oli pieni, liuotettiin 60 mlraan tislattua vettä. Näyte pantiin Sephadex G10 -pylvääseen (Pharmacia, korkeus 55 cm, tilavuus 1,1 1), joka aiemmin oli tasapainotettu tislatulla vedellä. Yhdistettiin sellaiset jakeet, joilla oli korkeimmat hekseeni-uronihappoa sisältävien oligomeerien pitoisuudet. Koottu pooli sisälsi noin 5 g näitä oligomeerejä. Voitiin valmistaa suuri erä hekseeniuronihappoa sisältävää materiaalia, 10 josta suolat oli poistettu, siten että ajo toistettiin useita kertoja.
Viitteet:
Bailey, M.J., Biely, P. ja Poutanen, K. (1992), Interlaboratory testingr of methods for assay of xylanase activity, J. Biotechnol. 23, 257 - 270.
15 IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry) (1989), Measurement of cellulase activities. Pure Appi. Chem. 59, 257 - 268.
Esimerkki 2
Ksylaania sisältävän hekseeniuronihapon (HexA) valmistus 20
Glukuronoksylaania (Roth 7500, 7,5 g) käsiteltiin natrium-boorihydridillä (100 mg) aikalisissä olosuhteissa (150 ml 1-molaarista NaOH.ta). Ksylaani liuotettiin ensin ja saatiin kirkas liuos. Astia suljettiin ja astian ilma korvattiin typellä. Liuosta inkuboitiin huoneenlämpötilassa yön ajan. Tämän jälkeen suljettua astiaa inkuboitiin 150 °C:ssa 2 25 tunnin ajan ja se jäähdytettiin kylmällä vedellä.
Liuos poistettiin astiasta ja siihen lisättiin 7,5 ml glyserolia. Liuos neutraloitiin pH 7:ksi muurahaishapolla. Lisättiin pisaroittani 150 ml metanolia samalla jatkuvasti sekoittaen ja saostuma, joka muodostui, poistettiin sentrifiigoimalla. Muodostunut saostu-30 ma pestiin ensin etanoli-vedellä (1:1, 150 ml) ja sitten metanolilla (150 ml). Saostuma kuivattiin huoneenlämpötilassa. Kuivan saostuman paino oli 6,31 g (84 prosenttia alku-: peräisestä ksyläänistä).
16 95607
Valmistetun ksylaanin analysoimiseksi sen pieni näyte jauhettiin käsin, minkä jälkeen se hydrolysoitiin T. reesein ksylanaasilla (pl 9) 40 °C:ssa 24 tunnin ajan. Hydrolyysissä ksylaanin pitoisuus oli 10 g/1, entsyymiannos 10 000 nkat/g ksylaania, ja puskuri oli 50 mmolaarinen natriumasetaatti, pH 5,0. Hydrolyysin jälkeen näyte sentrifugoitiin, keitet-5 tiin ja lyofilisoitiin. Lyofilisaatti analysoitiin NMR:llä. Hydrolysaatin sokeriaineosat olivat seuraavat: - ksyloosiyksiköitä 95 % - hekseeniuronihappoa 4,1 % (sitoutunut ksyloosiyksiköihin) 10 - tunnistamattomia sokeriaineosia 0,9 %
Esimerkki 3 15 Hekseeniuronidaasiaktiivisuuden ilmaiseminen
Hekseeniuronidaasiaktiivisuus ilmaistiin ohutkerroskromatografian avulla, jossa käytettiin seuraavaa menettelytapaa: 20 20 μΐ entsyyminäytettä inkuboitiin 20 μ1:η kanssa hekseeniuronidaasisubstraania (puh distettu hekseeniuronoksylobioosi, HexAX2, joka oli valmistettu, kuten kuvataan esimerkissä 1, 0,2-prosenttista liuosta 50-mmolaarisessa natriumsitraatissa, pH 5,3) inkuboitiin 60 minuutin ajan 50 °C:ssa. Reaktioseosta pantiin arviolta 2 μΐ pienenä täplänä lähelle (etäisyys noin 1 cm) kromatografialevyn yhtä sivua (DC-Alufolien, Kieselgel 25 60, Merck artikkelinumero 5553). Levy asetettiin näytepuoli alaspäin lasikammioon, jossa oli ajoliuos (50 tilavuusprosenttia asetonia, 40 tilavuusprosenttia n-butanolia ja 10 tilavuusprosenttia tislattua vettä, 1,0 - 1,5 cm syvyydeltä astian pohjalla). Ajokammio suljettiin ja liuotinrintaman annettiin nousta noin levyn keskustaan.
30 Hydrolyysireaktiossa tuotettu ksylobioosi ilmaistiin siten, että levy kehitettiin kuivaamalla sitä ilmassa noin 10 minuutin ajan. Tämä jälkeen levy ruiskutettiin kehitteellä (10 prosenttia H20:ta, 10 prosenttia väkevöityä rikkihappoa, 80 prosenttia etanolia ja 0,2 n.
17 95607 prosenttia 3,5-dihydroksitolueenia, orsiinia: Merck 820933). Levy kuivattiin (noin 10 minuuttia paperilla) ja se kehitettiin, siten että sitä inkuboitiin 105 - 110 °C:ssa 10 minuutin ajan. Muodostunut ksylobioosi (ja ksyloosi, kun entsyyminäytteessä oli /3-ksy-losidaasia) voitiin ilmaista värjäytyneenä täplänä samalla etäisyydellä lähtöviivasta kuin 5 standardisokerit (1 - 5 μΐ 0,2-prosenttista vesiliuosta käytettiin hydrolysaatin tavoin). Ksylobioosin muodosmminen ilmaisi, että hekseeniuronihapon ja ksyloosin välinen sidos oli pilkkoutunut, mikä antoi yhtä suuret moolimäärät hekseeniuronihappoa ja ksylobioosia mloksena hekseeniuronidaasiaktiivisuudesta, jota oli entsyyminäytteessä.
10 Esimerkki 4
Hekseeniuronidaasiaktiivisuuden määrän määrittäminen
Hekseeniuronidaasiaktiivisuuden määrä määritettiin kromatografisesti menettelytavalla, joka oli seuraava: 15 400 μΐ entsyyminäytettä inkuboitiin 100 μ1:η kanssa hekseeniuronidaasisubstraattia (hekseeniuronoksylobioosia, HexAX2, 0,2-prosenttinen liuos 50-mmolaarisessa natrium-sitraatissa, pH 5,3) 10 minuutin ajan 50 °C:ssa, minkä jälkeen reaktio lopetettiin keittämällä. Reaktioseos analysoitiin ksylobioosin suhteen HPLC-kromatografialla. Käytetty 20 pylväs oli HC-40 (Hamilton, Ca+2-muoto). Eluenttina käytettiin Milli-Q -vettä, ja eluointinopeus oli 0.5 ml min1. Yhden moolin suuruinen määrä ksylobioosia, joka vapautui reaktiossa, vastasi yhden määrää hekseeniuronihapporyhmiä, joita vapautui reaktiossa samanaikaisesti. Tämän suhteen perusteella voitiin tarkasti kvantitoida aktiivisuus (se on, hekseeniuronidaasiaktiivisuus), joka pilkkoi sidoksen hekseeniuronihapon ja 25 ksylobioosin väliltä.
Esimerkki 5
Hekseeniuronihappoa sisältäviä oligomeerejä käyttävien mikrobikantojen eristäminen selektiivisillä agarlevyillä 30
Koottiin maanäytteitä, hylättyä kraftmassaa ja tarkemmin määrittelemätöntä kiinteää • materiaalia Oy Sunila Ab Kotkan sulfaattisellutehtaan varastoalueelta ja sisäpuolelta.
18 95607
Koottiin myös vesi- ja sedimenttinäytteitä tehtaan alueelta ja sellutehtaan välittömästä läheisyydestä.
Näytteiden laimennussarjat valmistettiin fysiologisessa NaCl-liuoksessa. 100 μΐ suumi-5 set erät sopivia laimennuksia siirrostettiin steriloidulle agarille, joka sisälsi: - 0,5 % hekseeniuronihappo-oligomeerejä, jotka oli valmistettu, kuten kuvataan esimerkissä 1, - Yeast Nitrogen Basea, (Difco) 10 - 1,8 % agaria - 0,05 % Triton X-100:a pesäkekoon rajoittamista varten
Levyjä inkuboitiin 30 °C:ssa ja pesäkkeiden kasvu havainnoitiin. Sellaiset pesäkkeet, jotka kasvoivat nopeasti, eristettiin ja puhdistettiin käyttämällä mikrobiologisia standar-15 ditekniikoita ja niitä tutkittiin hekseeniuronidaasiaktiivisuuden tuoton suhteen. Tämän menettelytavan tuloksena saatiin useita eristyksiä, jotka pystyivät kasvamaan ksylo-oligomeerijakeella, joka sisälsi hekseeniuronihappoa.
Esimerkki 6 20 Rikastusviljelmä hekseeniuronidaasia tuottavien mikrobikantojen eristämiseksi
Materiaalinäytteet otettiin Kotkassa, Suomessa, sellaisen tehtaan sisäpuolelta, joka tuotti kraftmassaseosta. Otetut näytteet sisälsivät valunutta massaa, jätteitä ja laskeumia seiniltä, koneista ja muista rakenteista, ja otettiin myös jätevesinäytteitä.
25
Laboratoriossa pienet alanäytteet, joiden paino oli 1 - 5 g, lietettiin ja sekoitettiin vorte-xin avulla steriiliin keittosuolaliuokseen ja siitä 1 ml:n suuruiset erät siirrettiin 100 ml:n pulloihin, jotka sisälsivät 20 ml alustaa, joka koostui liuoksista, jotka sisälsivät kroma-tografisesti puhdistettua HeGlcAX2:hta ja HeGlcAX2:hta sekä 0,67 g Γ1 Yeast Nitrogen 30 Basea (YNB, Difco). Pulloja ravisteltiin 3 päivän ajan nopeudella 150 kierrosta minuutissa, 30 °C:ssa. Silmukallinen (noin 10 μΐ) täten saatua, tiheää mikrobiviljelmää siir-: rettiin sitten tuoreeseen alustaan, jonka koostumus oli sama, ja viljelyt toistettiin.
Il 19 95607
Lopulliset viljelmäsuodokset sentrifugoitiin, jotta mikrobit poistettiin, ja kirkkaat sentri-fugaatit laimennettiin tislatulla vedellä suhteessa 1:100. Näiden lainmennusten optiset absorbanssit mitattiin 230 nm:ssä, jossa aallonpituudessa hekseeniuronihapon kaksoissi-doksella on maksimi absorbanssinsa. Nämä mittaukset ilmaisivat, että hekseeniuroni-5 happoryhmiä sisältävien oligomeerien pitoisuudet olivat vähentyneet lähes nollaksi kaikissa viljelmäsuodoksissa (taulukko 4). Spektrometrin antamat tulokset varmistettiin oligosakkaridianalyysin avulla, jossa käytettiin HPLC.tä: HeGlcAX2 ja HeGlcAX3 olivat hävinneet täydellisesti kaikista viljelyalustoista (taulukko 4). Mitään muita neutraa-leita tai happamia mono- ja oligosakkarideja ei havaittu merkittävinä määrinä alustassa 10 eikä viljelmäsuodoksissa.
Viljelmien mikroskooppihavainnot ilmaisivat, että kolmea viljelmää hallitsi yksi ainoa mikrobilaji (yksi on nimitetty mikrokokiksi ja kaksi erilaisiksi Bacillus-lajeiksi), kun taas hiiva hallitsi yhtä viljelmistä. Puhtaiden kantojen identifiointi suoritetaan standardi 15 mikrobiologisin tekniikoin.
Taulukko 4. HexA-substituoitujen ksylo-oligosakkaridien erottaminen viljel-mäsuodoksista, jotka saivat alkunsa sellutehtaasta kerättyjen materiaalinäytteiden suspensiosta 20
Viljelmä pH A230 Jäljelle jääneet oligosakkaridit (mg l1) ____Xj__HeGlcAX2 HeGlcAX, Väliaine__6J1__0,690__24__3600__5100 1__Vb__0,170__29__0__0 25 2__7^9__0,055__10__0__0 3 __7£__0,170__55__0__0 4 7,9 0,040 (+) 0 0 30 Nämä tulokset osoittavat, että sellaiset mikrobit, jotka eristettiin rikastusviljelmän avulla, tuottivat entsyymiä, joka pystyi helpottamaan HeGlcAX2:n ja HeGlcAX3:n meta- 20 95607 boliaa sillä tavalla, että hekseeniuronihapporyhmä käytettiin täydellisesti hyväksi. Täten on ilmeistä, että kyseessä olevat kannat tuottavat hekseeniuronidaasientsyymiä.
Esimerkki 7 5 Hekseeniuronidaasin tuottaminen ravistelupulloissa
Niitä eristyksiä, jotka saatiin esimerkissä 6 kuvatulla tavalla, viljeltiin ravistelupulloissa (tilavuus 250 ml, 50 ml alustaa). Viljeltiin 30 °C:ssa, pyörivässä ravistelijassa (200 kierrosta minuutissa). Ennen viljelyä alustaa steriloitiin 120 °C:ssa 20 minuutin ajan.
10 Käytetty alusta sisälsi: hiilen lähteenä ja induktorina 0,5 prosenttia hekseeniuronihappo-oligomeerejä, jotka valmistettiin, kuten kuvattiin esimerkissä 1, Yeast Nitrogen Basea (Difco) typenlähteenä ja muita ravintoaineita. Viiden päivän mittaisen viljelyn jälkeen viljelmäsupematanteista voitiin ilmaista hekseeniseeniuronidaasiaktiivisuus, kuten esimerkissä 3 kuvattiin.
15
Esimerkki 8
Hekseeniuronidaasin puhdistus
Sellaista eristystä, joka saatiin esimerkissä 6 kuvatulla tavalla, viljeltiin laboratorion 20 bioreaktorissa (työskentelytilavuus 10 litraa). Viljelyolosuhteet olivat seuraavat: lämpötila 30 °C, ravistelu 400 - 500 kierrosta minuutissa, ilmastus 5 litraa min'1 ja pH-mini-mi 4,0. Ennen viljelyä alustaa steriloitiin 120 °C:ssa 15 minuutin ajan. Käytetty alusta sisälsi: hiilenlähteenä ja induktorina 1,0 prosentin hekseeniuronihappo-oligomeerejä, jotka oli valmistettu, kuten esimerkissä 1 kuvataan, sekä sopivia typen lähteitä ja muita 25 ravinteita. Kun saavutettiin stationäärivaihe, viljely pysäytettiin ja mikrobisolut ja kiinteä materiaali erotettiin sentrifugoimalla.
Viljelynesteen hekseeniuronidaasiaktiivisuus voitiin erottaa muista hydrolyyttisistä aktiivisuuksista (esimerkiksi ksylaanista) tavanomaisilla kromatografisilla proteiininpuhdis-30 tusmenetelmillä, erityisesti ioninvaihtokromatografialla, hydrofobisellä interaktiokroma-tografialla, geelisuodatuksella, kromatofokusoinnilla ja affmiteettikromatografialla.
21 95607
Esimerkki 9
Sulfaattimassasta valmistetun paperin kellertymisen vähentäminen
Valkaisematonta ja valkaistua (OQPPP) kraftmassaa käsiteltiin hekseeniuronidaasilla.
5 Käsittelyn jälkeen massasta valmistettiin levyjä ja niiden lämpövanheneminen mitattiin. Hekseeniuronidaasikäsittely vähensi mitattua pc-arvoa verrattuna levyihin, jotka valmistettiin käsittelemättömästä massasta.
Esimerkki 10 10 EDTA:n kulutuksen väheneminen peroksidivalkaisussa
Ruskeaa sulppukraftmassaa käsiteltiin hekseeniuronidaasilla ennen peroksidivalkaisua. Massan metallikationien määrä mitattiin hekseeniuronidaasikäsittelyn jälkeen. Hekseeniuronidaasikäsittely vähensi EDTA:n määrää, joka tarvittiin metallin poistoon ennen 15 peroksidikäsittelyä. Kun entsyymiannos oli riittävä, EDTA-käsittely voitiin jättää pois.
Esimerkki 11
Hekseeniuronidaasin vaikutus TCF-valkaisuun 20 Ruskea sulppumassaa käsiteltiin ksylanaasilla ja hekseeniuronidaasilla. Yhdistetyn käsittelyn tuloksena parani vaaleus, joka valkaisussa saatiin. Massa valkaistiin siten, että • käytettiin a) peroksidia, b) otsonia.
Esimerkki 12 25 Paperin teknisten ominaisuuksien muuntaminen hekseeniiniuronidaasilla TCF:llä valkaistua massaa käsiteltiin hekseeniuronidaasilla. Tämän tuloksena hek-seeniuronihapporyhmiä poistui, ja paperin tekniset ominaisuudet muuttuivat myöhemmin ja sen kierrätettävyys parani.
Claims (26)
- 95607
- 1. Menetelmä lignoselluloosamateriaalien, erityisesti sellumassojen, muuntamiseksi, tunnettu siitä, että selektiivisesti poistetaan ainakin osa massan hekseeniuronihap- 5 poryhmistä.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hek-seeniuronihapporyhmät poistetaan saattamalla massa kosketuksiin entsyymivalmisteen kanssa, jolla on oleellinen heksenuronidaasiaktiivisuus. 10
- 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että massa saatetaan kosketuksiin heksenuronidaasi-valmisteen kanssa, joka sisältää vain vähäisiä määriä hemisellulaaseja, jos ollenkaan.
- 4. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hek- senuronidaasivalmiste pääasiallisesti sisältää heksenuronidaasia tuottavan mikro-organismin viljelyalustan.
- 5. Jonkin patenttivaatimuksista 2-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 20 massa saatetaan kosketuksiin heksenuronidaasivalmisteen kanssa, joka on peräisin mikro-organismikannasta, joka on valittu ryhmästä, joka koostuu sukujen Trichoderma (esim. T. reesei, T. harzianum), Aspergillus (esim. A. niger, A. awamori, A. terreus, A.oryzae), Schizophyllum (esim. S. commune), Aureobasidium (esim. A. pullulans), Phanerochaeie (esim. P. chrysosporium), Fusarium (esim. F. oxysporum), Agarius 25 (esim. A. bisporus), Penicillium (esim. P. janthinellum, P. digitatum), Streptomyces (esim. S. olivochromogenes, S. flavogriseus) ja Bacillus (esim. B. subtilis, B. circulans) mikro-organismien joukosta.
- 6. Jonkin patenttivaatimuksista 2-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 30 massa saatetaan kosketuksiin heksenuronidaasivalmisteen kanssa, joka on peräisin mikro-organismikannalta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat Thermoascus au- li 95607 ranticus, Curvularia inequalis, Tyromyces palustris, Cryptonectria parasitica, Myce-liopthora thermophila ja Thermobacter auranticus.
- 7. Patenttivaatimuksen 4 tai 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hek-5 senuronidaasivalmiste on peräisin geneettisesti muunnetusta kannasta, joka sisältää geenin, joka koodittaa heksenuronidaasia.
- 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että massan hek-seeniuronihapporyhmät poistetaan massan metallien määrän vähentämiseksi. 10
- 9. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että entsyymival-miste sisältää heksenuronidaasiaktiivisuuden lisäksi glukuronidaasiaktiivisuutta.
- 10. Jonkin patenttivaatimuksista 1-8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että 15 hekseeniuronihapporyhmät poistetaan etenkin hapella tai peroksidilla suoritetun massan kloorivapaan valkaisun tehostamiseksi.
- 11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hekseeniuronihapporyhmät poistetaan massan jälkikellertymisen vähentämiseksi. 20
- 12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hek- • seeniuronihapporyhmät poistetaan massan paperiteknisten ominaisuuksien parantamisek si.
- 13. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ensin massaa käsitellään entsyymivalmisteella, jolla on oleellista heksenuronidaasi- ja valinnaisesti glukuronidaasiaktiivisuutta ja myöhemmin se saatetaan kosketuksiin entsyymivalmisteen kanssa, jolla on hemisellulaasi-, sellulaasi ja (tai) ligninaasiaktiivisuutta.
- 14. Jonkin aiemman patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että massaa käsitellään samanaikaisesti entsyymivalmisteella, jolla on heksenuronidaasiaktii- 95607 visuutta, ja entsyymivalmisteella, jolla on hemisellulaasi-, sellulaasi- ja (tai) ligniiniä muuntavaa aktiivisuutta.
- 15. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käsiteltävä 5 lignoselluloosamateriaali on muutettu massaksi tavanomaisella sulfaattikeitolla tai jatketulla keittomenetelmällä.
- 16. Patenttivaatimuksen 1, 14 tai 15 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että massaa käsitellään entsyymivalmisteella, jotta saataisiin tehostetuksi muiden entsyymi- 10 en, kuten esimerkiksi hemisellulaasin, sellulaasin tai ligninaasin, massaan kohdistuva vaikutus.
- 17. Entsyymivalmiste, joka on käyttökelpoinen lignoselluloosamateriaalien, erityisesti selluloosamassojen, käsittelyssä, tunnettu siitä, että se sisältää oleellisen määrän 15 heksenuronidaasiaktiivisuutta yhdessä sellaisten sopivien apuaineiden kanssa, joita käytetään paperi- ja massateollisuuden entsyymivalmisteissa.
- 18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen entsyymivalmiste, tunnettu siitä, että sisältää myös oleellisen määrän glukuronidaasiaktiivisuutta. 20
- 19. Patenttivaatimuksen 17 mukainen entsyymivalmiste, tunnettu siitä, että hek- • senuronidaasientsyymi on peräisin uronidaasia tuottavasta mikro-organismikannasta, joka valitaan ryhmästä, johon pääasiallisesti kuuluvat Trichoderma reesei, Schizophyl-lum commune, Aspergillus niger, Thermoascus auranticus, Agaricus bisporus, Asper- 25 gillus awamori, Aspergillus niger, Curvularia inequalis, Schizophyllum commune, Tyromyces palustris, Streptomyces flavogriseus, S. olivochromogenes ja muut Strepto- • myces-kannat, Cryptonectria parasitica, Myceliopthora thermophila, Penicillium jant-hinellum, Penicillium digitatum, Aspergillus terreus, Thermobacter auranticus, Aero-basidium pullulans, Aspergillus oryzae, Phanerochaete chrysosporium, Bacillus cir- 30 culans ja B. subtilis. Il 95607
- 20. Patenttivaatimuksen 19 mukainen entsyymivalmiste, tunnettu siitä, että hek-senuronidaasivalmiste on peräisin geneettisesti muunnetusta kannasta, joka sisältää geenin, joka koodittaa heksenuronidaasia.
- 21. Patenttivaatimuksen 18 tai 19 mukainen entsyymivalmiste, tunnettu siitä, että heksenuronidaasivalmiste pääasiallisesti käsittää heksenuronidaasia tuottavan mikro-organismikannan viljely alustan, joka valinnaisesti on väkevöity.
- 22. Menetelmä sellaisten mikrobikantojen eristämiseksi, jotka pystyvät tuottamaan hek-10 senuronidaasia, tunnettu siitä, että - sellutehtaasta tai sen läheisyydestä kootaan näytteet mikro-organismi-pitoisesta orgaanisesta aineesta, - näytteet sekoitetaan fysiologiseen suolaliuokseen, - suolaliuoslaimennusten eriä siirrostetaan sopivalle kasvualustalle, 15. levyjä inkuboidaan ja niitä viljellään, jotta saadaan pesäkkeitä, - ne pesäkkeet, jotka kasvavat nopeasti, eristetään ja - valinnaisesti puhdistetaan nopeasti kasvavat pesäkkeet ja määritetään niiden hek-senuronidaasiaktiivisuus.
- 23. Patenttivaatimuksen 22 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kasva tusalusta sisältää hekseeniuronihappo-oligomeerejä yhdessä sopivien typpi- ja hiililähtei-’ den kanssa.
- 24. Patenttivaatimuksen 22 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kasva-25 tusalusta sisältää ksylaania, jossa on hekseeniuroni-happosivuryhmiä. : 25. Menetelmä heksenuronidaasin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että kasvatetaan patenttivaatimuksen 22 mukaan eristettyä kantaa kasvualustalla, joka sisältää hek-seeniuronihappo-oligomeerejä tai ksylaania. 30 95607
- 26. Patenttivaatimuksen 25 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että geeni, joka koodittaa patenttivaatimuksen 22 mukaan eristetyn kannan heksenuronidaasia, on siirretty mikro-organismiin, jota kasvatetaan sopivalla kasvatusalustalla. i K 95607
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI942639A FI95607C (fi) | 1994-06-03 | 1994-06-03 | Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi |
| ES95920911T ES2169134T3 (es) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Metodo y preparado enzimatico para el tratamiento de pulpas de celulosa. |
| AU26172/95A AU2617295A (en) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Method and enzymatic preparation for treatment of cellulose pulps |
| EP95920911A EP0764226B1 (en) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Method and enzymatic preparation for treatment of cellulose pulps |
| DE69524408T DE69524408D1 (de) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Verfahren und enzymatische herstellung zur behandlung von zellstoffpulpe |
| PT95920911T PT764226E (pt) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Processo e preparacao enzimatica para o tratamento de pastas de celulose |
| US08/750,069 US6830655B2 (en) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Method of modifying a xylan-containing carbohydrate substrate having hexenuronic acid groups attached to the xylan |
| PCT/FI1995/000317 WO1995033883A1 (en) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Method and enzymatic preparation for treatment of cellulose pulps |
| AT95920911T ATE210216T1 (de) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Verfahren und enzymatische herstellung zur behandlung von zellstoffpulpe |
| CA002191859A CA2191859A1 (en) | 1994-06-03 | 1995-06-05 | Method and enzymatic preparation for treatment of cellulose pulps |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI942639A FI95607C (fi) | 1994-06-03 | 1994-06-03 | Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi |
| FI942639 | 1994-06-03 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI942639A0 FI942639A0 (fi) | 1994-06-03 |
| FI95607B true FI95607B (fi) | 1995-11-15 |
| FI95607C FI95607C (fi) | 1996-02-26 |
Family
ID=8540852
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI942639A FI95607C (fi) | 1994-06-03 | 1994-06-03 | Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6830655B2 (fi) |
| EP (1) | EP0764226B1 (fi) |
| AT (1) | ATE210216T1 (fi) |
| AU (1) | AU2617295A (fi) |
| CA (1) | CA2191859A1 (fi) |
| DE (1) | DE69524408D1 (fi) |
| ES (1) | ES2169134T3 (fi) |
| FI (1) | FI95607C (fi) |
| PT (1) | PT764226E (fi) |
| WO (1) | WO1995033883A1 (fi) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6210801B1 (en) | 1996-08-23 | 2001-04-03 | Weyerhaeuser Company | Lyocell fibers, and compositions for making same |
| US6306334B1 (en) | 1996-08-23 | 2001-10-23 | The Weyerhaeuser Company | Process for melt blowing continuous lyocell fibers |
| US6331354B1 (en) | 1996-08-23 | 2001-12-18 | Weyerhaeuser Company | Alkaline pulp having low average degree of polymerization values and method of producing the same |
| US6146494A (en) * | 1997-06-12 | 2000-11-14 | The Procter & Gamble Company | Modified cellulosic fibers and fibrous webs containing these fibers |
| JP4556344B2 (ja) * | 2001-05-11 | 2010-10-06 | 王子製紙株式会社 | 新規ヘキセンウロニダーゼ、それをコードする遺伝子、およびそれらの使用 |
| SE520956C2 (sv) * | 2001-12-05 | 2003-09-16 | Kvaerner Pulping Tech | Kontinuerlig kokning med extra uppehållstid för avdragen vätska utanför kokaren |
| WO2003074780A1 (en) * | 2002-03-06 | 2003-09-12 | Iogen Bio-Products Corporation | Xylanase treatment of chemical pulp |
| SE525872C2 (sv) * | 2002-09-06 | 2005-05-17 | Stora Enso Ab | Metod att tillverka mekanisk massa med reducerad energikonsumtion |
| US20040112555A1 (en) * | 2002-12-03 | 2004-06-17 | Jeffrey Tolan | Bleaching stage using xylanase with hydrogen peroxide, peracids, or a combination thereof |
| US7201847B1 (en) * | 2003-07-30 | 2007-04-10 | Michael Bowling | Wastewater treatment method utilizing white rot and brown rot fungi |
| WO2006126983A1 (en) * | 2005-05-04 | 2006-11-30 | Novozymes North America, Inc. | Chlorine dioxide treatment compositions and processes |
| JP2006219767A (ja) * | 2005-02-08 | 2006-08-24 | Univ Of Tsukuba | 製紙用化学パルプ中の不飽和ウロン酸の除去方法 |
| US7922705B2 (en) * | 2005-10-03 | 2011-04-12 | The Procter & Gamble Company | Densified fibrous structures and methods for making same |
| US20080227161A1 (en) * | 2007-03-16 | 2008-09-18 | Weyerhaeuser Company | Methods for producing a hydrolysate and ethanol from lignocellulosic materials |
| WO2010011957A2 (en) * | 2008-07-25 | 2010-01-28 | The Regents Of The University Of California | Enzymatic hydrolysis of cellulosic biomass through enhanced removal of oligomers |
| US9970157B2 (en) * | 2013-08-09 | 2018-05-15 | Novozymes A/S | Reducing content of hexenuronic acids in cellulosic pulp |
| CN113026409A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-06-25 | 边静 | 一种利用棕榈纤维制生物无硫半化学浆的方法 |
| CN116042414B (zh) * | 2023-01-04 | 2025-03-28 | 华中农业大学 | 一种灰色链霉菌h114及抑菌代谢物制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2643800C2 (de) * | 1976-09-29 | 1986-10-30 | Fritz Werner Industrie-Ausrüstungen GmbH, 6222 Geisenheim | Verfahren zur Herstellung von Xylose durch enzymatische Hydrolyse von Xylanen |
| FI89613C (fi) * | 1991-12-05 | 1993-10-25 | Valtion Teknillinen | Foerfarande foer enzymatisk behandling av cellulosamassor |
-
1994
- 1994-06-03 FI FI942639A patent/FI95607C/fi not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-05 US US08/750,069 patent/US6830655B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-05 AT AT95920911T patent/ATE210216T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-06-05 CA CA002191859A patent/CA2191859A1/en not_active Abandoned
- 1995-06-05 DE DE69524408T patent/DE69524408D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-05 ES ES95920911T patent/ES2169134T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-05 PT PT95920911T patent/PT764226E/pt unknown
- 1995-06-05 EP EP95920911A patent/EP0764226B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-05 AU AU26172/95A patent/AU2617295A/en not_active Abandoned
- 1995-06-05 WO PCT/FI1995/000317 patent/WO1995033883A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1995033883A1 (en) | 1995-12-14 |
| EP0764226A1 (en) | 1997-03-26 |
| FI942639A0 (fi) | 1994-06-03 |
| DE69524408D1 (de) | 2002-01-17 |
| US20040069426A1 (en) | 2004-04-15 |
| US6830655B2 (en) | 2004-12-14 |
| FI95607C (fi) | 1996-02-26 |
| PT764226E (pt) | 2002-05-31 |
| ATE210216T1 (de) | 2001-12-15 |
| AU2617295A (en) | 1996-01-04 |
| EP0764226B1 (en) | 2001-12-05 |
| CA2191859A1 (en) | 1995-12-14 |
| ES2169134T3 (es) | 2002-07-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI95607B (fi) | Menetelmä ja entsyymivalmiste selluloosamassojen käsittelemiseksi | |
| Bailey et al. | Effect of pH on production of xylanase by Trichoderma reesei on xylan-and cellulose-based media | |
| AU649703B2 (en) | A method for enzymatically treating pulp with an enzyme system from thermomonospora fusca | |
| FI121469B (fi) | Mikrotetraspora-lajista eristettyjä lämpöstabiileja ksylanaaseja ja menetelmä niiden käyttämiseksi | |
| EP0851914B1 (en) | Purified mannanase from bacillus amyloliquefaciens and method of preparation | |
| AU624279B2 (en) | Method for bleaching with reduced organic chlorides | |
| CA2019411A1 (en) | Enzymatic delignification of lignocellulosic material | |
| FI109037B (fi) | Kemiallisen lignoselluloosamassan entsyymikäsittely | |
| US5834301A (en) | Method of removing color from kraft wood pulps | |
| FI96783B (fi) | Aureobasidium pullulansin käyttö massan valkaisussa | |
| US5369024A (en) | Xylanase from streptomyces roseiscleroticus NRRL-11019 for removing color from kraft wood pulps | |
| US5183753A (en) | Preparation of xylanase by cultivating thermomyces lanuginosus dsm 5826 in a medium containing corn cobs | |
| JPH02210086A (ja) | パルプの漂白方法 | |
| WOOD | Jeffries et al.[45] Date of Patent: Nov. 10, 1998 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: VALTION TEKNILLINEN TUTKIMUSKESKUS |
|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |