FI94592C - Analogiamenetelmä happea kuljettavan, vesiliukoisen hemoglobiinikompleksin valmistamiseksi - Google Patents
Analogiamenetelmä happea kuljettavan, vesiliukoisen hemoglobiinikompleksin valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI94592C FI94592C FI890303A FI890303A FI94592C FI 94592 C FI94592 C FI 94592C FI 890303 A FI890303 A FI 890303A FI 890303 A FI890303 A FI 890303A FI 94592 C FI94592 C FI 94592C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- group
- hemoglobin
- hem
- formula
- oxygen
- Prior art date
Links
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 title claims 5
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 title claims 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims 2
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- -1 N-bromoacetylaminoethylamino group Chemical group 0.000 claims 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 claims 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 claims 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 claims 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
- C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/10—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
94592
Analogiaraenetelmä happea kuljettavan, vesiliukoisen hemo-globiinikompleksin valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on analogiamenetelmä happea kul-5 jettavan, vesiliukoisen hemoglobiinikompleksin valmistamiseksi, jonka kaava I on: B-X-(PS)-X-(Hem) (I) 10 jossa PS on dekstraani, jonka molekyylipaino on noin 20.000, X on +nh2 0
Il II
15 -C-NH-CH2CH2-NH-C-CH2 ryhmä (Hem) on ryhmä Hb tai Hb-Z Hb on hemoglobiiniryhmä, ja Z on happiaffiniteettia alentava ligandi, joka on saatu 20 inositolitetrakisfosfaattidialehydistä, ja B on salvattu aktivoiva ryhmä.
Pyridoksaali-5-fosfaatin tiedetään sitoutuvan reversiibe-listi hemoglobiiniin. Lisäksi tiedetään, että tämä sitou-25 tuminen voidaan tehdä irreversiibeliksi pelkistämällä.
• · l • ·
Sekä reversiibelisti että irreversiibelisti sitoutuneilla tuotteilla on heikommin happea sitovat ominaisuudet kuin itse hemoglobiinilla. Kuitenkin on havaittu, että derivati-soimalla kovalenttisesti pyridoksaali-5'-fosfaatilla ei 30 dekstraani-hemoglobiinin happiaffiniteettia kyetä pienentä-mään niin paljon, että se lähestyisi arvoa, joka on pyridoksaali-5' -fosfaatilla derivatisoidulla hemoglobiinilla (PLP-Hb). Jotta hemoglobiinipohjäinen verikorvike olisi tyydyttävä, pidetään toivottavana, että happiaffiniteetti 35 olisi lähellä PLP-Hb:n arvoa tai sitä pienempi.
2 -.94592 US-patentissa 4.064.118 on kuvattu verikorvikkeena tai veren jatkamisaineena hyödyllinen seos, joka sisältää vesiliukoista tuotetta, jossa hemoglobiini on kovalentti-sesti kytketty dekstraaniin, jonka molekyylipaino on noin 5 5.000 - noin 2.000.000.
Kuitenkin on havaittu, että hemoglobiiniin verrattuna US-patentin 4.064.118 mukaisilla tuotteilla on taipumus omata jonkin verran suurempi affiniteetti hapen suhteen.
10 Sillä on kuitenkin edelleen hemoglobiinin oleellinen hapen-kuljetus- ja vapauttamiskyky.
US-patentissa 4.650.786 on kuvattu modifioitu dekstraani-hemoglobiinikompleksi, jolla on pienempi happiaffiniteetti.
15 Tämä modifioitu dekstraani-hemoglobiinikompleksi valistetaan aktivoimalla ensin dekstraaniosa ja sen jälkeen saattamalla aktivoitu dekstraani reagoimaan hemoglobiinin tai hemoglobiini-inositoli-tetrakisfosfaattidialdehydi (FPA)-kompleksin kanssa.
?0
Dekstraani-hemoglobiinikomplekseilla ja modifioiduilla dekstraani-hemoglobiinikomplekseilla on kuitenkin haittana se, että vesiliuoksen viskositeetti kasvaa säilytettäessä, ... esimerkiksi 12 päivää tai enemmän, niin paljon, että tämä • « 25 tekee tuotteet antamiseen sopimattomiksi.
Olemme nyt yllättäen havainneet, että dekstraaniosan aktivoidut kohdat voidaan blokata ja että viskositeettia säilytettäessä voidaan parantaa vaikuttamatta hemoglobiinikomp-30 leksin hapenkulutusominaisuuksiin.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että yhdiste, jolla on kaavan II
35 A-X-(PS)-X-(H) (II) 3 - 94592 jossa X, Hem ja PS ovat kuten yllä on määritelty, ja A on N-bromiasetyyliaminoetyyliaminoryhmä, saatetaan reagoimaan 3-merkaptoproprionihapon L-kysteiinin tai 2-merkap-toetanolin kanssa.
5
Aktivoivan ryhmän on kyettävä reagoimaan polysakkaridin hydroksyyliryhmän kanssa. Lisäksi sen on myöhemmin kyettävä reagoimaan hemoglobiinin kanssa. Hemoglobiinissa saatavissa olevia ryhmiä ovat esimerkiksi amino, fenoli, sulfhydryyli, 10 tiometyyli, imidatso, karboksyyli ja guanidiini.
Aktivoiva ryhmä on N-bromoasetyyliaminoetyyliamino.
Aktivoivan ryhmän pitoisuus voidaan määrittää hydrolysoi-15 maila yhdiste, mieluummin hydrolysoimalla se emäksisesti, esimerkiksi natriumhydroksidilla. Esimerkiksi, kun aktivoiva ryhmä sisältää bromia, hydrolyysi NaOH:lla muuntaa aktivoivat ryhmät yksi:yksi-pohjalta bromidi-ioneiksi.
·.' Aktivoivien ryhmien pitoisuus voidaan määrittää sinänsä 20 tunnettua tavanomaista analyyttistä tekniikkaa käyttämällä, esimerkiksi ionikromatografiän avulla tai käyttämällä bromielektrodia, kun aktivoiva ryhmä sisältää bromia.
... Kaavan I mukaisten yhdisteiden P50-arvo voidaan määrittää 25 hapen dissosioitumiskäyristään, jotka on määritetty esimerkiksi menetelmällä: Benesch, MacDuff ja Benesch (1965)
Anal. Biochem 11 81-87.
Kaavan I mukaisten yhdisteiden P50-arvo voi olla 24°C:ssa • ( 30 yli 7 mm Hg, mieluummin yli 8 mm Hg, vieläkin mieluummin yli 9 mm Hg ja kaikkein parhaiten yli 10 mm Hg.
Bromiasetyyliaminoetyyliamino-aktivoivat ryhmät salvataan parhaiten saattamalla reagoimaan sopivan, sulfhydryyli-35 ryhmän sisältävän yhdisteen kanssa.
4 - 94592
Sopivia, sulfhydryyliryhmän sisältäviä yhdisteitä ovat ne yhdisteet, jotka eivät oleellisesti vaikuta tuotteen hap-piaffiniteettiin. Näihin kuuluvat kysteiini (2-amino-3-merkaptopropaanihappo), 2-merkaptoetanoli, ja 3-merkapto-5 propionihappo.
Sulfhydryyliyhdisteen suuret suhteet hemoglobiiniin nähden voivat vaurioittaa hemiryhmää, ja niitä on sen vuoksi syytä välttää. Kun kaavan II mukaisen yhdisteen konsentraatio 10 hemoglobiinin suhteen on 6 - 8 w/v-%, sulfhydryyliyhdisteen käytetty konsentraatio on mieluummin alle 160 mM, vieläkin mieluummin alle 80 mM ja erityisen mielellään alle 50 mM. Erityisesti suosittelemme, että sulfhydryyliyhdisteen konsentraatio on 15 - 20 mM, esimerkiksi noin 16 mM.
15
Jotta reaktio olisi tehokas ja sellainen, jossa vältetään hemoglobiinin vaurioitumista, pH on mieluummin välillä 7 - 11,5, vieläkin mieluummin välillä 8,5 - 10,5 ja kaikkein mieluummin välillä 9-10, esimerkiksi noin 9,5.
20
Reaktio yhdisteen kanssa, joka kykenee deaktivoimaan aktivoivat ryhmät, suoritetaan mieluummin alle noin 25°C:ssa ja mieluummin välillä 0 ja 5°C.
25 Sen jälkeen, kun reaktio yhdisteen kanssa, joka kykenee deaktivoimaan aktivoivat ryhmät, on suoritettu, voidaan kaavan I tai III mukainen yhdiste eristää sinänsä tunnetuilla tavanomaisilla menetelmillä, esimerkiksi dialyysin avulla.
30
Hem on suositellusti Hb-Z-ryhmä. Z on myös suositellusta polyoli, jonka hydroksiryhmistä kaksi tai useampi on este-röity fosforihapon kanssa. Erityisen suositellusti Z sisältää 2 - 6 ja vieläkin mieluummin 2-4 fosfaattiryhmää. Kun 35 Z on polyolifosfaattiesteri, hydroksiryhmistä vähintään 5 - 94592 kaksi ja mieluummin kaikki on esteröity fosforihapon kanssa. Lisäksi on suositeltavaa, että Z sisältää 4-8 hiili-atomia ja on suoraketjuinen ryhmä. Edelleen on suositeltavaa, että Z on polyoli, jossa kussakin hiiliatomissa (muis-5 sa kuin vähintään yhdessä terminaalisessa hiiliatomissa) on valinnaisesti fosforihapon esteröity hydroksiryhmä.
Z-ryhmä voi olla yhdistetty hemoglobiiniin US-patentissa 4.650.786 esitetyllä menetelmällä.
10 Z-ryhmä on suositellusta peräisin inositolifosfaatista. Inositolifosfaatit ovat tunnettuja yhdisteitä, ja ne voidaan valmistaa ja eristää tavalla, joka myös on sinänsä tunnettu. Erityisen suositeltavaa on, että Z-ryhmä on 15 peräisin inositolitetrafosfaatista, esimerkiksi seoksesta, jossa on pääosa inositolitetrafosfaattia ja pienempi osuus muita inositolifosfaatteja.
... Suosittelemme, että aktivoivien ryhmien moolien lukumäärä 20 hemoglobiinimooleja kohti on alle 0,2 ja vieläkin mieluummin alle 0,1.
Yhdisteen hemoglobiinipitoisuus voidaan määrittää sinänsä ... tunnetuilla tavanomaisilla tekniikoilla, esimerkiksi spekt-25 rofotometrisen analyysin avulla (mitataan optinen tiheys annetulla aallonpituudella, esimerkiksi aallonpituudella 415 mm (tai menetelmällä: D. L. Drabkin ja J. H. Austin, J. Biological Chemistry, Voi 112 s. 51-65 (1935).
• · · 30 Kaavan II mukaiset yhdisteet voi olla valmistettu esimerkiksi tavalla, joka on kuvattu eurooppalaisen patentin 0.140.640 esimerkissä 1.
6 - 94592 Tässä selityksessä viitattu hemoglobiini voi olla peräisin mistä tahansa sopivasta eläimestä, esimerkiksi nautaeläimestä, mutta mieluummin se on ihmisen hemoglobiini.
5 Teollinen käyttökelpoisuus
Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat hyödyllisiä, koska ne kykenevät siirtämään happea. Yhdisteet ovat siten hyödyllisiä immobilisoituina hapen uuttoaineina, esimerkiksi US-10 patentissa 4.343.715 kuvatussa systeemissä. Yhdisteet ovat indikoituja myös käytettäväksi verikorvikeseoksissa tai veren jatkamisseoksissa. Yhdisteitä voidaan siten käyttää lisäämään heikosti perfuusioitujen kudosten hapensaantia. Tällaisia heikosti perfuusioituja kudoksia voi olla mukana 15 syöpäkasvustoissa, sydänlihaksen infarktitapauksissa tai aivoverenvuototapauksissa. Yhdisteitä voidaan käyttää myös verikorvikkeina, esimerkiksi onnettomuuksien tai väkivallan uhreilla; kun veren tyypittäminen ja yhteensovittaminen ei ole mahdollista tai tämä ei ole mahdollista käytettävissä 20 olevan ajan kuluessa; kun normaali verensiirto asettaa potilaat vaaraan tai potilaat kieltäytyvät verensiirrosta; viemään happea kudoksiin tai elimiin, jotka on tarkoitus säilyttää; kehonulkoisten kierrätysjärjestelmien käynnistä-miseen; tai muihin tilanteisiin, joissa erytrosyytit ovat 25 normaalisti indikoituja.
Keksinnön mukaisesti tuodaan kaavan I mukainen yhdiste esiin käytettäväksi farmaseuttisena aineena. Erityisesti tuodaan esiin kaavan I mukainen yhdiste käytettäväksi far-30 maseuttisessa preparaatissa, joka on tarkoitettu huonosti oksygenoitujen kudosten hoitoon.
Näitä yhdisteitä voidaan antaa kyseessä oleville potilaille seoksena farmaseuttisesti hyväksyttävän apuaineen, laimen- 7 - 94592 timen tai kantajan, esimerkiksi vesiliuoksen kanssa, joka voi olla puskuroitu tasapainoitettu suolaliuos.
Keksinnön mukaisesti tuodaan esiin farmaseuttinen formu-5 laatio, joka sisältää kaavan I mukaista yhdistettä seoksena farmaseuttisesti hyväksyttävän apuaineen, laimentimen tai kantajan kanssa.
Yleisesti sanoen yhdisteet annetaan käyttämällä sen tyyppi-10 siä formulaatioita, pakkauksia ja antamismuotoja, jotka ovat tavanomaisia annettaessa veriplasman jatkamisaineita. Yhdisteet voidaan myös pakkaskuivata, valinnaisesti kryo-suojaavan aineen kanssa, ja myöhemmin rekonstituoida käyttöä varten.
15
Yhdisteen annettava määrä vaihtelee riippuen potilaan koosta, tilasta ja halutusta hoidosta. Eräissä vakavissa tapauksissa voidaan kuitenkin korvata oleellisesti potilaan .·· kaikki veri tämän keksinnön mukaista yhdistettä sisältä-20 väliä formulaatiolla.
Keksinnön mukaisten yhdisteiden etuna on, että niillä on samankaltaisiin tunnettuihin yhdisteisiin verrattuna parem-.. mat hapen absorptio- ja vapautumisominaisuudet ja niillä on 25 pidempi varastoinninkestävyys, esimerkiksi viskositeetin kasvut varastoitaessa ovat pienemmät. Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat edullisia myös siksi, että ne voidaan valmistaa helposti ja suhteellisen suurella saannolla.
• · 30 Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa nisäkkäille isäntien hemoglobiinin korvaamiseksi. Edelleen tuodaan esiin keksinnön mukainen yhdiste käytettäväksi farmaseuttisena aineena, jolla korvataan hemoglobiinista enintään 99 v/v-%, mieluummin enintään 98 v/v-%, vieläkin mieluummin 35 enintään 96 v/v-% ja erityisesti enintään 95 v/v-%.
- 94592 8
Keksintöä on havainnollistettu millään tavoin rajoittamatta seuraavien esimerkkien avulla, joissa lämpötilat ovat Celsius-asteita ja viskositeetit mitattiin käyttämällä Ostwald'in viskositeettimittaria 37°C:ssa.
5
Esimerkki 1
Kaavan I mukaisten yhdisteen valmistaminen a) Kaavan II mukaisen yhdisteen muodostaminen 10
Seuraava toimenpide suoritettiin 0 - 4°C:ssa. N-bromiase-tyyliaminoetyyliamino-dekstraani-hemoglobiini (Br-dx) valmistettiin inkuboimalla N-bromiasetyyliaminoetyyliamino-dekstraania (Br-dx) (valmistettu US-patentin 4.064.118 esi-15 merkin 1 menetelmällä) ja hemoglobiinia (Hb) 0,05M natriumbikarbonaatissa. 100 ml jääkylmää 6 w/v-prosenttista (Hb:n suhteen) Br-dxHb:a 0,05M natriumbikarbonaatissa (pH = 9,5) yhdistettiin 4,45 ml:n kanssa 2M bis /2-hydroksietyyli/-imino-tris-/hydroksimetyyli/metaania (bis-tris) (pH 7,5).
20 Tähän seokseen lisättiin 0,5 g inositolitetrakisfosfaatti-dialdehydiä (FPA) 68 ml:ssa 0,05M natriumasetaattia (pH=5,2). pH säädettiin arvoon 7,4 0,1 N natriumhydroksi-dilla, lisättiin 10 ml 0,5M dimetyyliamiiniboraania ja seosta inkuboitiin 2 tuntia 0°C:ssa samalla sekoittaen.
« 25 Valmistettu vesiliuos oli 8 w/v-prosenttinen.
b) Käsittely 3-merkaptopropionihapolla
Sen jälkeen lisättiin natriumbikarbonaattia edellä olevan 30 vaiheen a) tuotteeseen 0,2M loppukonsentraatioon asti ja pH säädettiin arvoon 9,5 käyttämällä 0,1 N natriumhydrok-sidia. 3-merkaptopropionihappoa lisättiin 16 mM loppukonsentraatioon asti. Sen jälkeen seos dialysoitiin 0,1M tris/hydroksimetyyli/aminometaanihydrokloridi (tris-cl)-35 puskuria vasten (pH 8,5), joka sisälsi IM natriumkloridia, 9 - 94592 ja sen jälkeen munuaisten dialyysipuskuria vasten (pH 7,4). Valmistettu vesiliuos oli 8 w/v-prosenttinen.
Esimerkkien la) ja 1 b) tuotteiden bromiasetyyliamino-5 etyyliamino (BAEA)-ryhmän pitoisuus määritettiin esimerkin 4 mukaisella menetelmällä.
Esimerkkien la) ja 1 b) mukaisesti valmistettujen liuosten viskositeetit mitattiin aika ajoin. Tulokset on luetteloitu 10 taulukossa I.
Esimerkki 2
Edellä olevan esimerkin 1 b) toimenpiteet suoritettiin 15 käyttämällä a) L-kysteiiniä b) merkaptoetanolia 3-merkaptopropionihapon asemesta. Valmistetut tuotteiden .··' vesiliuokset olivat 8 w/v-prosenttisia.
20
Tuotteiden BAEA-ryhmän pitoisuus määritettiin esimerkin 4 menetelmällä.
.. Liuosten viskositeetit mitattiin aika ajoin. Tulokset on t t 25 luetteloitu taulukossa I.
Esimerkki 3 a) Valmistettiin esimerkin 1 a) tuotteen 6 w/v-prosenttinen •« 30 vesiliuos.
b) Valmistettiin esimerkin 1 b) tuotteen 6 w/v-prosenttinen vesiliuos.
Näiden liuosten viskositeetit mitattiin aika ajoin. Tulok-35 set on luetteloitu taulukossa I.
- 94592 10
Esimerkki 4 BAEA-ryhmän pitoisuus 5 Seuraavalla menetelmällä mitattiin verikorvikkeiden, jotka oli valmistettu edellisten esimerkkien 1 ja 2 a) ja b) mukaisesti, BAEA-ryhmän pitoisuus.
Esimerkkien 1 ja 2 a) ja b) tuotetta inkuboitiin O,IN 10 natriumhydroksidissa 30 minuuttia 100°C:ssa. Sen jälkeen seokset jäähdytettiin jäillä, neutraloitiin pH-arvoon 7,0 (käyttämällä IN etikkahappoa), suodatettiin ja bromipitoi-suus analysoitiin käyttämällä ionikromatografiaa.
15 Esimerkki 5
Esimerkkien 1 ja 2 a) ja b) tuotteiden hapen dissosioitu-miskäyrät määritettiin käyttämällä menetelmää: Benesch,
MacDuff ja Benesch (1965) Anal. Biochem 11 81-87 (käyttä-20 mällä kuitenkin 24°C lämpötilaa ja 0,05M bis-tris (pH 7,4)-puskuria). Tulokset on esitetty kuviossa 1, jossa: x-akseli on Log P02 (02:n osapaine), y-akseli on oksygenitumis-%, .. 1) Esimerkin 1 a) yhdiste « c 25 2) Esimerkin 1 b) yhdiste 3) Esimerkin 2 b) yhdiste 4) Esimerkin 2 a) yhdiste
Kuviosta 1 määritettiin seuraavat P50-arvot 24°C:ssa: 30 1) 10,3 mm Hg 2) 10,3 mm Hg 3) 8,7 mm Hg 4) 9,5 mm Hg 35 n - 94592
Oi m mm H CN H (Tl
'11-' m o H
<D
*i« «s* m oo m T3 m m ^ ^ (d Λ m m h oi in σι 3 cN =»t - - - - - tn m m m h i
•H
c
(0 -H
0) (T\ LD *H
CQ (Tl ^ Λ .. o~ o m o U «H I I I I <h o m h tn
^ -h O
4-1 B
:(Ö 4-1 <1> -H O) O' 00 Λ > O) 00 (Π O ^
-H Oi 4-1 Γ- H 00 Oi -H
:(Ö H -H ----11 Ή
Ci, to oj m m m >i
ra O 04 S
>i X 4J
4-i m <u >, -h id h ra ,h > m in id
-I-I 00 ID (Tl -H
:f0 I 1 I I - - B
CO Oi H 0 u
H CQ
O oi r~ oi o *
Ui H oo m id
Ui m ιη σι oi σι
D
,J CTl Oi OI r-l
. S
.. E-· r . in oi in h m oo ID Γ- O' 00 H ^ O O' H in O Oi (Tl
O' m m m oi H
+
Xi O O O -H
ffi o o in o ra - - - - ft* .. uooom^ooora ; ♦ < o o > ^ »a* *1* ra CO 4-1 4-1 (Ö 4-1
•H
I B
A i
1 ö >1 -h ra G
:ld dl ^ ft 3 H <D
ui d -rl o oo m m o id G
E CD E G tn Ö O O -H
-h -h o <i) -h E m ra
*,r i—I :(C Ci Ή O ‘ O
>h u ja b 4-> o
M
ra
•H
Λ 0) "ra Λ ra Λ ra Λ
K 4J H r-ι oi oi m m G
X m ra
Q -H H
i e ε ε e e e e -h
i—I -H -H -H -H -H -H J
cu ra m ra m m ra m fc > ωωωωωω * in o in
i—I 1—I
Claims (1)
- i2 - 94592 Patenttivaatimus Analogiamenetelmä happea kuljettavan, vesiliukoisen hemo-globiinikompleksin valmistamiseksi, jonka kaava I on: 5 B-X-(PS)-X-(Hem) (I) jossa PS on dekstraani, jonka molekyylipaino on noin 20.000, 10. on +nh2 O Il II -C-NH-CH2CH2-NH-C-CH2 ryhmä 15 (Hem) on ryhmä Hb tai Hb-Z Hb on hemoglobiiniryhmä, ja Z on happiaffiniteettia alentava ligandi, joka on saatu inositolitetrakisfosfaattidialehydistä, ja B on salvattu aktivoiva ryhmä ,•20 tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaavan II A-X-(PS)-X-(H) (II) jossa X, Hem ja PS ovat kuten yllä on määritelty, ja 25 A on N-bromiasetyyliaminoetyyliaminoryhmä, saatetaan rea- goimaan 3-merkaptoproprionihapon L-kysteiinin tai 2-merkap-toetanolin kanssa. i3 - 94592 Analogiförfarande för framställning av en syre transporte-rande vattenlöslig hemoglobinkomplex med formeln I 5 B-X-(PS)-X-(Hem) (I) där PS är en dextran med en molekylvikt av 20.000, X är 10 +nh2 o Il II -C-NH-CH2CH2-NH-C-CH2 grupp (Hem) är en grupp Hb eller Hb-Z 15 Hb är en hemoglobingrupp, och Z är en syreaffiniteten reducerande ligand erhällen ur inositoltetrakisfosfatdialdehyd, och B är blockerad aktiverande grupp kännetecknat därav, att en förening med formeln 20 II A-X-(PS)-X-(Hem) (II) där X, Hem och PS är säsom ovan definierats, och A är en N-bromacetylaminoetylaminogrupp, omsätts med 3-mer- • · t 25 kaptoproprionsyra, L-cystein eller 2-merkaptoetanol.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB878712240A GB8712240D0 (en) | 1987-05-23 | 1987-05-23 | Pharmaceutical formulation |
| GB8712240 | 1987-05-23 | ||
| GB8800399 | 1988-05-23 | ||
| PCT/GB1988/000399 WO1988009346A1 (en) | 1987-05-23 | 1988-05-23 | Haemoglobin complexes |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI890303A0 FI890303A0 (fi) | 1989-01-20 |
| FI890303L FI890303L (fi) | 1989-01-20 |
| FI94592B FI94592B (fi) | 1995-06-30 |
| FI94592C true FI94592C (fi) | 1995-10-10 |
Family
ID=10617836
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI890303A FI94592C (fi) | 1987-05-23 | 1989-01-20 | Analogiamenetelmä happea kuljettavan, vesiliukoisen hemoglobiinikompleksin valmistamiseksi |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4900816A (fi) |
| EP (1) | EP0314749B1 (fi) |
| JP (1) | JP2716497B2 (fi) |
| AU (1) | AU613921B2 (fi) |
| DE (1) | DE3884744T2 (fi) |
| FI (1) | FI94592C (fi) |
| GB (1) | GB8712240D0 (fi) |
| HK (1) | HK141895A (fi) |
| NO (1) | NO173939C (fi) |
| WO (1) | WO1988009346A1 (fi) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3021041B2 (ja) * | 1990-03-14 | 2000-03-15 | ザ ユニバーシティ オブ トロント イノベーションズ ファンデーション | アシルリン酸エステルおよびそれによる蛋白質の改質 |
| US5248766A (en) * | 1990-08-17 | 1993-09-28 | Baxter International Inc. | Oxirane-modified hemoglobin based composition |
| US6018035A (en) * | 1997-07-21 | 2000-01-25 | Baxter International Inc. | Reagents for isotropic size enhancement of a peptide, protein, nucleotide or other substrate |
| US5981710A (en) * | 1997-07-21 | 1999-11-09 | Baxter International, Inc. | Therapeutic hemoglobin composition having isotropically increased size |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO763384L (fi) * | 1975-10-07 | 1977-04-13 | Imp Metal Ind Kynoch Ltd | |
| CA1055932A (en) * | 1975-10-22 | 1979-06-05 | Hematech Inc. | Blood substitute based on hemoglobin |
| DE3029307A1 (de) * | 1980-08-01 | 1982-03-04 | Dr. Eduard Fresenius, Chemisch-pharmazeutische Industrie KG, 6380 Bad Homburg | Haemoglobin enthaltendes blutersatzmittel |
| DE3144705C2 (de) * | 1981-11-11 | 1983-12-08 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung eines lagerstabilen, vernetzten Hämoglobinpräparates mit hoher Sauerstoff-Transportkapazität, sowie das nach diesem Verfahren hergestellte Hämoglobinpräparat |
| GB8328917D0 (en) * | 1983-10-28 | 1983-11-30 | Fisons Plc | Blood substitute |
-
1987
- 1987-05-23 GB GB878712240A patent/GB8712240D0/en active Pending
-
1988
- 1988-05-23 US US07/197,443 patent/US4900816A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-23 DE DE88904572T patent/DE3884744T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-23 WO PCT/GB1988/000399 patent/WO1988009346A1/en not_active Ceased
- 1988-05-23 AU AU17850/88A patent/AU613921B2/en not_active Expired
- 1988-05-23 EP EP88904572A patent/EP0314749B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-23 JP JP63504191A patent/JP2716497B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-01-20 FI FI890303A patent/FI94592C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-10-19 NO NO890249A patent/NO173939C/no not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-09-07 HK HK141895A patent/HK141895A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0314749A1 (en) | 1989-05-10 |
| FI890303A0 (fi) | 1989-01-20 |
| AU1785088A (en) | 1988-12-21 |
| JPH01503308A (ja) | 1989-11-09 |
| FI94592B (fi) | 1995-06-30 |
| NO173939B (no) | 1993-11-15 |
| AU613921B2 (en) | 1991-08-15 |
| JP2716497B2 (ja) | 1998-02-18 |
| WO1988009346A1 (en) | 1988-12-01 |
| DE3884744D1 (de) | 1993-11-11 |
| US4900816A (en) | 1990-02-13 |
| HK141895A (en) | 1995-09-15 |
| EP0314749B1 (en) | 1993-10-06 |
| NO890249D0 (no) | 1989-01-19 |
| DE3884744T2 (de) | 1994-02-10 |
| NO173939C (no) | 1994-02-23 |
| NO890249L (no) | 1989-01-19 |
| FI890303L (fi) | 1989-01-20 |
| GB8712240D0 (en) | 1987-07-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI74979C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en vattenloeslig som blodsubstitut anvaendbar foerening. | |
| US4301144A (en) | Blood substitute containing modified hemoglobin | |
| US4584130A (en) | Intramolecularly cross-linked hemoglobin and method of preparation | |
| US5079337A (en) | Macromolecular conjugates of hemoglobin, a procedure for their preparation and their uses | |
| EP0265865B1 (de) | Blutersatzmittel | |
| Wong | Conjugated Hemoglobin: Rightshifted Dextran-Hemoglobin as Blood Substitute | |
| FI94592C (fi) | Analogiamenetelmä happea kuljettavan, vesiliukoisen hemoglobiinikompleksin valmistamiseksi | |
| EP0475971B1 (en) | A hemoglobin composition and its use | |
| US6956025B2 (en) | Mammalian haemoglobin compatible with blood plasma, cross-linked and conjugated with polyalkylene oxides as artificial medical oxygen carriers, production and use thereof | |
| Hu et al. | A solid phase adsorption method for preparation of bovine serum albumin–bovine hemoglobin conjugate | |
| CA2584406C (en) | Lecithinized superoxide dismutase composition and a process for its production | |
| AU782407B2 (en) | Hemoglobin-antioxidant conjugates | |
| US5290919A (en) | Hemoglobin intramolecularly cross-linked with trivalent reagents | |
| US7307150B2 (en) | Dextran-hemoglobin conjugates as blood substitutes | |
| US3935185A (en) | Polynucleotides of poly(5-hydroxycytidylic acids) | |
| US5646252A (en) | Hemoglobin composition and preparation thereof | |
| EP0314042A2 (en) | Novel copolymers and superoxide dismutase modified with said copolymers | |
| Prouchayret et al. | Low oxygen affinity derivatives of human hemoglobin by fixation of polycarboxylic dextran to the oxyform | |
| Bakker et al. | Oxygen affinity of hemoglobin solutions modified by coupling to PLP or NFPLP and the effects on tissue oxygenation | |
| JPH05238959A (ja) | 静脈注射用制癌作用物質複合体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: FISONS PLC |
|
| MA | Patent expired |