FI93124B - Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi - Google Patents
Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI93124B FI93124B FI861662A FI861662A FI93124B FI 93124 B FI93124 B FI 93124B FI 861662 A FI861662 A FI 861662A FI 861662 A FI861662 A FI 861662A FI 93124 B FI93124 B FI 93124B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- carrier
- egg white
- protein
- electrolyte
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims 9
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 title claims 9
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 title claims 9
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 title claims 9
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 title claims 9
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims abstract description 30
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 125000003010 ionic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 45
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 35
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 35
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 43
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 20
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 18
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 16
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 15
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 15
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 15
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 13
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 6
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 5
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 5
- -1 alkyl glycidyl ether Chemical compound 0.000 description 5
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L sodium sulphate Substances [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 4
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 4
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 4
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 description 3
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 3
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 150000002118 epoxides Chemical group 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000006855 networking Effects 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 3
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 3
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TURITJIWSQEMDB-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-[(2-methylprop-2-enoylamino)methyl]prop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NCNC(=O)C(C)=C TURITJIWSQEMDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N Acrolein Chemical compound C=CC=O HGINCPLSRVDWNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 2
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N haloperidol Chemical compound C1CC(O)(C=2C=CC(Cl)=CC=2)CCN1CCCC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 125000000555 isopropenyl group Chemical group [H]\C([H])=C(\*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229920001568 phenolic resin Polymers 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 229920002818 (Hydroxyethyl)methacrylate Polymers 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVHNFUWEUOIMNQ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetic acid;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound OCC(O)=O.CC(=C)C(O)=O VVHNFUWEUOIMNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXGFMDJXCMQABM-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-methylphenol Chemical compound [CH]OC1=CC=CC([CH])=C1O KXGFMDJXCMQABM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GROXSGRIVDMIEN-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-prop-2-enylprop-2-enamide Chemical compound CC(=C)C(=O)NCC=C GROXSGRIVDMIEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATVJXMYDOSMEPO-UHFFFAOYSA-N 3-prop-2-enoxyprop-1-ene Chemical compound C=CCOCC=C ATVJXMYDOSMEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YUJSWFZLUCHGFO-UHFFFAOYSA-N 4-(4-azidophenyl)aniline Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 YUJSWFZLUCHGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000531 Amidohydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004092 Amidohydrolases Human genes 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 239000005057 Hexamethylene diisocyanate Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L L-tartrate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 description 1
- XUYPXLNMDZIRQH-UHFFFAOYSA-N N-acetylmethionine Chemical group CSCCC(C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- FQYUMYWMJTYZTK-UHFFFAOYSA-N Phenyl glycidyl ether Chemical compound C1OC1COC1=CC=CC=C1 FQYUMYWMJTYZTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000187759 Streptomyces albus Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229920006222 acrylic ester polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000001838 alkalimetric titration Methods 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229920003180 amino resin Polymers 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000019400 benzoyl peroxide Nutrition 0.000 description 1
- UENWRTRMUIOCKN-UHFFFAOYSA-N benzyl thiol Chemical compound SCC1=CC=CC=C1 UENWRTRMUIOCKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N chromate(2-) Chemical compound [O-][Cr]([O-])(=O)=O ZCDOYSPFYFSLEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- GOKHOJAPKHTXEJ-UHFFFAOYSA-N diisocyanatoazaniumylideneazanide Chemical compound [N+](=[N-])(N=C=O)N=C=O GOKHOJAPKHTXEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004922 lacquer Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 235000014666 liquid concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- RPQRDASANLAFCM-UHFFFAOYSA-N oxiran-2-ylmethyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCC1CO1 RPQRDASANLAFCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012966 redox initiator Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N rhenium atom Chemical compound [Re] WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009938 salting Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-OUBTZVSYSA-N sodium-24 Chemical compound [24Na] KEAYESYHFKHZAL-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/1203—Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms other than lactobacteriaceae
- A23C9/1206—Lactose hydrolysing enzymes, e.g. lactase, beta-galactosidase
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3268—Macromolecular compounds
- B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
- B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3268—Macromolecular compounds
- B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
- B01J20/3282—Crosslinked polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING OR TREATMENT THEREOF
- A23C2220/00—Biochemical treatment
- A23C2220/10—Enzymatic treatment
- A23C2220/104—Enzymatic treatment with immobilised enzymes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
93124
Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi -Förfarande för immobilisering av löst äggviteämne
Keksinnön kohteena on menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi vesiliuoksesta liuokseen suspendoituun kiinteään, makrohuokoiseen, veteen liukenemattomaan kantajaan elektrolyytin läsnäollessa ja valkuaisaineen kiinnittämiseksi kantajaan siihen adsorboituneen valkuaisaineen verkostusta aiheuttavan kytkentäkomponentin avulla, joka sisältää kaksi tai useampaa valkuaisaineen suhteen reaktiivista funktionaalista ryhmää.
Immobilisoituja entsyymejä on jo saatu verkostamalla liuotetut entsyymit glutaaridialdehydillä. Tällöin on havaittu, että kasvava ionivahvuus edistää verkostumista, mikä on selitetty elektrolyyttien saostavan vaikutuksen avulla; vrt. K. Ogata et ai. Biochim. Biophys. Acta, side 159 (1968), sivu 405 - 407.
Glutaarialdehydiä on käytetty myös sitomaan liuotettuja entsyymejä liukenemattomiin kantajiin; vrt. A. Habeeb, Archives of Biochemistry and Biophysics, nide 119, (1967), sivut 264 - 268. Päinvastoin kuin glutaaridialdehydillä suoritettu kantajätön saostaminen ja verkostaminen sitominen kiinteisiin kantajiin on aina suoritettu alhaisissa elektrolyyttikonsent-raatioissa.
Patenttijulkaisun DE-OS 33 36 257 mukaisessa menetelmässä valmistetaan pysyvästi immobilisoituja entsyymejä siten, että huokoinen kantaja, esimerkiksi piimää kostutetaan entsyymili-uoksella tai kantaja päällystetään kiinteän entsyymin kerroksella ja tämä kantajasta ja liuenneesta tai kiinteästä entsyymistä muodostuva valmiste laitetaan vesipitoiseen suolaliuokseen ja annetaan verkostusaineen vaikuttaa. Suolaliuos vaikuttaa siten, että entsyymivalmisteesta ei liukene pois mitään entsyymiä eikä mene hukkaan immobilisoinnissa. Tässä menetelmässä on siten periaatteessa käytettävä kaksi erillistä työvaihetta, nimittäin entsyymivalmisteen, joka sisältää kantajan 2 93124 ja liuennutta tai liukoista entsyymiä, valmistamisen ja ent-syymivalmisteen lisäämisen verkostushauteeseen.
Patenttijulkaisussa EP 37667 on kuvattu sienilaktaasin sitominen makrohuokoisista kationisista ioninvaihtohartseista muodostuvaan kantaja-aineeseen ja patenttijulkaisussa EP 26672 makrohuokoisista amfoteerisistä ioninvaihtohartseista muodostuviin kantaja-aineisiin glutaaridialdehydin avulla. Molemmissa menetelmissä käytetään elektrolyyttejä puskurointiaineina korkeintaan ennen reaktiota glutaaridialdehydin kanssa tai sen jälkeen, kun taas itse reaktio suoritetaan kuitenkin vain alhaisissa konsentraatioissa, jotka missään tapauksessa eivät ole suurempia kuin 0,05 mooli/1, jotta ei estettäisi ioniad-sorptiota. Päinvastoin mainitaan korkeat ionikonsentraatiot keinona liuottaa mahdollisesti verkostumatta jääneet entsyymi-määrät kantajasta. Amfoteeriset tai kationiset kantajahartsit voivat johtaa moniin häiritseviin vuorovaikutuksiin substraat-tinesteiden liuenneiden ainesosien kanssa ja usein niitä ei sen vuoksi voi käyttää.
Esillä olevan keksinnön avulla on mahdollista immobilisoida liuenneet valkuaisaineet makrohuokoisiin kantaja-aineisiin yksinkertaisella tavalla yksivaiheisessa menetelmässä ja korkeilla aktiivisuussaannoilla.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, että valkuaisaineen vesiliuoksen, jossa elektrolyytin ionivahvuus on vähintään 0,30 mooli/1, annetaan vaikuttaa tämän vesiliuoksen ympäröimään kantajaan kuormituksella, joka on ainakin 20 mg valkuaisainetta kantajan grammaa kohti, kunnes valkuaisaine on adsorboitunut kantajaan ja että valkuaisaineen vesili-•:uokseen lisätään kytkentäkomponentti adsorboitumisen aikana tai sen jälkeen ilman kantajan välikuivausta.
Yllättävää on, että korkeat ionivahvuudet tässä vaaditulla alueella edistävät valkuaisaineen immobilisointia makrohuokoi-. selle kantaja-aineelle, vaikka korkeat ionivahvuudet muutoin 3 93124 toimivat keinona, jolla kovalenttisesti sitoutumattomat valku-aisainemolekyylit irrotetaan kantajasta ja joka verkkouttamis-aineiden läsnäollessa muodostaa kantajattomia liukenemattomia sakkoj a.
Seuraava taulukko osoittaa aktiivisuussaannon kasvavan, kun penisilliiniamidaasia sidotaan glutaaridialdehydin avulla fenyylisefaroosiin nousevissa ionivahvuuksissa. Sitomis-menetelmä vastaa esimerkissä 5 annettua toimintatapaa.
Kantajaan sidotun entsyymin Kaliumfosfaattipuskuri aktiivisuus
Moolisuhde Ionivahvuus Kans.yksikköjä/ Immobil. aktiivi- (mooli/1) (mooli/1)_märkäpaino-G_suussaanto. % 0,01 0,03 64 36 0,05 0,15 103 51 0,10 0,30 128 72 0,50 1,50 170 92 Käyttämättä glutaaridialdehydiä ei muutoin samanlaisissa sito-misolosuhteissa voida todeta ylipäätään lainkaan sitoutunutta aktiivisuutta.
Keksinnön mukaisen, parhaana pidetyn toimintatavan edullinen vaikutus verrattuna immobilisointiin amfoteeriseen kantajaan voidaan havainnollistaa esimerkillä, joka koskee hiivalaktaa-sin immobilisointia. Patenttijulkaisun EP-A 26672 vertailu-esimerkin 1 perusteella immobilisoidaan hiivalaktaasi glutaaridialdehydin avulla pH-arvossa 6,65 ja 20 - 22°C:ssa 64 % määräsaannolla fenoli-formaldehydihartsipohjaiseen amfoteeri-seen ioninvaihtajaan. Aktiivisuus on kuitenkin tällöin niin alhainen, että käytännössä saavutetaan tuskin mitään aktii-visuussaantoa.
Jos sitä vastoin vesiliuoksesta, joka sisältää 111 g entsyymi-preparaattia litrassa, sidotaan hiivalaktaasi 23°C:ssa helmiäiseen, makrohuokoiseen, neutraaliin kantajahartsiin, jonka 4 93124 pohjana on verkostettu akryyliamidi, jossa on oksiraaniryhmiä kytkentäaktiivisina ryhminä, niin saadaan seuraavat aktiivi-suussaannot riippuen käytetystä elektrolyyttikonsentraatiosta:
Elektrolyytin kons. Ionivahvuus Aktiivisuussaanto, % käy- (Mooli ^ΗΡΟ^, ΚΗ2Ρ0^/1) (mooli/1) tetvstä aktiivisuudesta 0,5 1,21 3,5 1,0 2,42 19 1,25 3,02 51 1,5 3,33 55
Ennen kaikkea on yllättävää, että keksinnön mukaisella menetelmällä voidaan helposti päästä hyvin erilaisillakin, epäspe-sifillä kantaja-aineilla suuriin absoluuttisiin aktiivisuuksiin ja erinomaisiin aktiivisuussaantoihin, jotka muutoin olivat saavutettavissa vasta kantajan kalliin aktivoinnin jälkeen. Seuraavan verkostamisen jälkeen valkuaisaine pysyy kantajaan sitoutuneena myös alhaisissa ionivahvuuksissa ja se voidaan esimerkiksi entsyymien tapauksessa käyttää uudelleen useita kertoja ilman huomattavia aktiivisuustappioita.
Menetelmä sopii kaikenlaatuisten kiinteiden makrohuokoisten hiukkasten valmistamiseen, jotka luonnostaan sisältävät liukoisia valkuaisaineita immobilisoidussa muodossa. Tärkein käyttöala on kantajaan sidottujen entsyymien valmistaminen.
Sen lisäksi merkitystä on affiniteettikromatografiaan tarkoitettujen täyteaineiden valmistaminen ja diagnostisten testiaineiden valmistaminen.
Valkuaisaineet, jotka voidaan keksinnön mukaisesti sitoa, ovat sellaisia, jotka ovat lämpötilassa välillä 0 ja 60°C niin vesiliukoisia, että ne voidaan saattaa kosketukseen kantajan kanssa liuenneessa muodossa. Keksintö ei rajoitu tämän laatuisiin määrättyihin valkuaisaineisiin vaan käsittää kaikki biogeeniset, vesiliukoiset proteiinipitoiset materiaalit.
Vaikkakin tähän mennessä keksinnön mukaisen menetelmän ei ole ^havaittu täydellisesti epäonnistuneen, ei voida sulkea pois 5 93124 mahdollisuutta, että yksittäisiä valkuaisaineita ei voida sitoa kantajaan tai voidaan sitoa vain huonommalla tuloksella kuin muilla menetelmillä. Valkuaisaine voi olla edullista stabiloida ionilisäysten avulla tai entsyymien tapauksessa substraattilisäyksen avulla.
Parhaina pidetään entsyymejä. Esimerkkeinä mainittakoon amy-laasit, proteaasit, amidaasit, pektinaasit, sellulaasit, hemi-sellulaasit, asylaasit, laktaasit, isomeraasit, invertaasit ja oksidaasit. Ei-entsyymimäisistä valkuaisaineista ovat esimerkkejä vasta-aineet, proteiinirakenteiset hormonit ja entsyymi-inhibiittorit .
Kantaja voi muodostua jokaisesta veteen tai elektrolyyttili-uokseen liukenemattomasta kiinteästä aineesta, jolla on makro-huokoinen rakenne. Sopivat kiinteät aineet, joilla on makro-huokoinen rakenne, sisältävät huokosia, joiden huokoshalkaisi-ja on vähintään 10 nm ja joiden huokostilavuus on yli 0,1 cm3/g, parhaiten yli 0,5 cm3/g. Parhaiten kantajien huo-kosleveys on 10 - 100 nm, ominaispinta-ala 10 - 500 m2/g ja huokostilavuus 1-3 cm3/g.
Kantajan ulkoinen muoto ei ole vaikutuksen kannalta kriittinen, vaikkakin usein pidetään parhaina suuripinta-alaisia systeemejä, joiden spesifinen pinta-ala on vähintään 1 m2/g, koska ne mahdollistavat immobilisoidun valkuaisaineen suuren aktiivisuusmäärän sitomisen pieneen tilaan. Sopiviin kantaja-aineisiin kuuluvat astioiden tai putkien tai astioiden tai putkijohtojen kiinteiden sisärakenteiden sisemmät pinnat tai päällysteet, foliot, membraanit, paperit, kankaat, kuitukankaat tai kuitupakkaukset tai kiinteiden aineiden muut pakkaukset tai kerrokset, jotka voidaan ympäröidä tai joiden läpi voi tapahtua virtausta. Kun näiden aineiden välissä on riittävän suuria läpivirtauskelpoisia tiloja, kantajat tai ainakin lähellä pintaa olevat kantajakerrokset voivat huomattavasti turvota vaikuttamatta läpivirtaavuuteen. Parhaiten käytetään pieniosaisia kantajia, millä tarkoitetaan kantaja-aineita, 6 93124 joiden hiukkaskoko on alle 10 mm, parhaiten välillä 0,1 ja 5 mm. Erityisen hyvinä pidetään helmiä, so. pallon muotoisia kantaja-aineita. Edullista on, että pieniosaiset kantajat eivät lainkaan turpoa tai turpoavat vain vähän vesipitoisessa mediumissa, jossa niitä käytetään, parhaiten enintään kuivan aineen keksinkertaiseen irtotilavuuteen. Pieniosaisten kantajien sopivuuden edellytyksenä on, että ne voidaan suspendoida elektrolyyttipitoiseen liuokseen sekoittamalla tai että pyl-västäytössä virtaus voi tapahtua niiden läpi.
Parhaina pidetään kantaja-kiintoaineita, jotka eivät ole kuormatut kationisesti. Tällä tarkoitetaan kiintoaineita, jotka eivät sisällä matriisissaan tai luoksepäästävillä pinnoillaan lainkaan kovalenttisesti sitoutuneita kationisia ryhmiä tai emäksisiä ryhmiä, jotka protonoitumisen kautta voivat muuntua kationisiksi ryhmiksi, so. ammonium- tai aminoryhmiä, tai näiden ryhmien pitoisuus on enintään 0,1 milliekvivalent-ti/g. Erityisen hyvänä pidetään kuormittamattomia tai heikosti anionisesti kuormitettuja makrohuokoisia kiintoaineita. Kuormittamattomina pidetään kiintoaineita, jotka eivät sisällä lainkaan kovalenttisesti sitoutuneita karbonyyli-, karboksy-laatti-, sulfonaatti-, amino- tai ammoniumryhmiä tai niiden määrä on enintään 0,1 milliekvivalentti/g kuivaa kantajahart-sia. Heikosti anioniset kantajahartsit voivat sisältää anioni-sia ryhmiä, jotka sisältävät kovalenttisesti sitoutuneita karboksyyli- tai karboksylaattiryhmiä aina konsentraatioon 5 milliekvivalentti/g asti. Nämä arvot koskevat tietenkin hartsiainetta kantajahiukkasten aktiivisilla pinnoilla.
Kuitenkin on osoittautunut, että suurten suolakonsentraati-oiden vaikutuksesta proteiinin pinnalla voi tapahtua ulos-:suolautuminen myös erittäin hydrofiilisilla pinnoilla, jopa voimakkaasti anionisesti kuormitetuilla kiintoaineilla. Myös tällaiset kantajat ovat sen vuoksi käyttökelpoisia.
Hydrofobiset ryhmät, esimerkiksi tyydytetyt tai parhaiten . tyydyttämättömät alifaattiset sivuryhmät, joissa on kaksi tai • « 7 93124 useampia hiiliatomeja, tai aromaattiset ryhmät edistävät voimakkaasti valkuaisaineen sitoutumista, jolloin kyseessä on näiden ryhmien suuruuden asemesta pikemminkin niiden pinta-tiheys kantajan pinnoilla. Kantajan huokosseinämän pinnat tai kantaja kokonaisuudessaan muodostuu parhaiten polymeerimateriaalista, joka sisältää mainitunlaatuisia sivuryhmiä vähintään 1 paino-%.
Periaatteessa sopivia ovat myös makrohuokoiset epäorgaaniset kantajat, kuten lasihelmet tai lasikuidut (esim. "Controlled Pore Glass"), piihappo, alumiinioksidi tai aktiivihiili. Orgaanisilla aineilla, erityisesti muoveilla, on etuna se, että niistä voidaan helpommin valmistaa määrätyssä muodossa oleva kantaja, esimerkiksi helminä, kuituina, kalvoina tai päällysteinä. Orgaanisen kantaja-aineen kemiallinen rakenne ei ole kriittinen, vaikka yksittäistapauksessa on huolellisesti tukittava, millä kantajalla saadaan paras tulos.
Sopivat veteeniiukenemattomat, makrohuokoiset muovihartsit voivat olla luonteeltaan esimerkiksi polaarittomia ja verkos-tamattornia tai verkostettuja, kuten esimerkiksi polymetyyli-metakrylaatti ja muut akryyliesteripolymeerit, polystyreeni, selluloosaesteri, fenoli-formaldehydi-hartsit, epoksidihartsit tai polyolefiinit. Ne voivat olla myös polaarisia ja enemmän tai vähemmän hydrofiilisiä, mutta verkostamisen seurauksena < · veteeniiukenemattornia. Näihin kuuluvat verkostetut selluloosa-ja tärkkelysjohdokset, verkostettu polyakryyliamidi tai poly-metakryyliamidi, akryyli- tai metakryylihapon verkostetut polyhydroksialkyyliesterit, verkostettu polyvinyylipyrrolidoni tai ei-emäksiset aminomuovihartsit.
Adsorptio-ominaisuuksien parantamiseksi on usein edullista tehdä kantaja jonkin verran hydrofobiseksi, ainakin pinnalta. Esimerkiksi voidaan epäorgaaniset kantajat, kuten piidioksidi, pentoniitti tai huokoiset lasit varustaa pinnalta fenyyliryh-millä saattamalla reagoimaan fenyylifuktionaalisten silaanien kanssa. Vastaavalla tavalla voidaan makrohuokoiset orgaaniset 93124 8 kantajat, kuten sefaroosi, fenyloida fenyyliglysidyylieetterillä tai alkyloida alkyyliglysidyylieetterillä. Adsorptiota parantava vaikutus on fenyyliryhmien lisäksi yleensä kaikilla suoraketjuisilla tai haarautuneilla alkyyliryhmillä, joissa on 1-18 hiiliatomia.
Erityisen sopiva kantajahartsien ryhmä helminä tai onttoina helminä voidaan saada patenttijulkaisujen DE-B-22 37 316, 23 43 633 tai DE-A-27 22 751 mukaisesti. Tällöin on kysymys verkostetuista, hieman turpoavista tai turpoamattomista poly-merisaateista, joilla on hydrofiilinen matriisi, joka on muodostettu parhaiten oleelliselta osin akryyliamidista, metakryyliamidista ja verkostavasti vaikuttavasta metyleeni-bis-akryyliamidista tai -metakryyliamidista. Ne sisältävät valkuaisaineiden suhteen sitomisaktiivisia ryhmiä, erityisesti epoksidiryhmiä, koska nämä eivät hydrolysoimalla tai valkuaisaineen kanssa tapahtuvassa reaktiossa muodosta ionillisia ryhmiä. Lisäksi ne sisältävät noin 2-5 painoprosenttia vapaita metakryolyyli- tai isopropanyyliryhmiä, jotka ovat peräisin vain yksipuolisesti reagoineista verkostamisainemolekyyleistä. Näitä kantajia käytettäessä voidaan jättää myös pois mukana käytetty ylimääräinen verkostamisaine.
Elektrolyytti vaikuttaa keksinnön mukaisessa menetelmässä luultavasti siten, että muodostamalla rakenteen vesimolekyyli-' en kanssa se johtaa jonkinlaiseen ylikyllästymiseen valkuaisaineen kanssa, joka tapauksessa sen liukoisuuden pienenemiseen. Usein on edullista lisätä elektrolyytit vasta valkuaisaineen liuottamisen jälkeen, koska tämä muutoin liukenee usein vain hitaasti tai ei lainkaan.
•Kysymys jonkin elektrolyytin saostavasta vaikutuksesta jossakin konsentraatiossa riippuu valkuaisaineen laadusta, sen konsent-raatiosta ja mukana olevista aineista ja on tukittava tapaus tapaukselta. Yleensä käyttökelpoisia ovat kaikki vaikutukseltaan ulossuolavat elektrolyytit, esimerkiksi Hofmeister'in . sarjan kaikki ulossuolaavat anionit, mukaanlukien kloridi.
9 93124 H.M. Rauen on antanut esimerkkejä elektrolyyttien erilaisesta vaikutuksesta, "Biochemischen Taschenbuch", osa 2, 2. painos, sivut 56 - 57. Sopivia ovat elektrolyytit, joilla Ks-arvo on positiivinen yhtälössä
log 100 f = -K_ . J
tai jos log SQ = β
log S = β - Ks . J
jolloin S on valkuaisaineen liukoisuus elektrolyytin läsnäollessa ja SQ ilman elektrolyyttiä. Moniarvoiset metallikationit vaikuttavat usein saostavasti tai inaktivoivasti, joten parhaana pidetään yksiarvoisia kationeja, siis ennen kaikkea alkali-ioneja. Anioneilla on selvempi vaikutus elektrolyytti-lisäyksen vaikutukseen. Parhaiten sopivia ovat sulfaatti, fosfaatti ja polyfosfaatti. Myös karbonaatilla, kromaatilla, asetaatilla, sitraatilla ja tartraatilla on voimakas ulos-suolaava vaikutus, mutta näitä ei voida kuitenkaan aina käyttää herkkien valkuaisaineiden yhteydessä. Yksiarvoisia anio-neja, kuten kloridia tai asetaattia on käytettävä suurempi konsentraatio kuin moniarvoisia anioneja, jotta saavutettaisiin tarvittava ionivahvuus. Kaikkia on käytettävä suuri konsentraatio, jotta niillä olisi niiden ulossuolaava vaikutus . Useimmille valkuaisaineille sopivat parhaiten suuren tehonsa, alhaisen hintansa ja vaarattomuutensa vuoksi neutraalit rakennesuolat, kuten ammonium-, natrium- tai kaliumsul-faatti, ammonium-, natrium- tai kaiiumvetyfosfaatti. Elektro-lyyttipitoisen valkuaisaineliuoksen pH-arvo riippuu valkuaisaineen herkkyydestä ja on parhaiten välillä 4-9.
* Elektrolyyttilisäyksen tehon kannalta on ratkaiseva sen ioni-vahvuus i. Vesiliuokselle, jossa on 1-kappaletta ionilajeja, se lasketaan kaavasta i 2 r-k z± ^
•‘E
10 93124 jossa Ci on ionilajin konsentraatio ja arvo. 1 m K2HP04-liuokselle, jossa CK =2, ZK = 1, CHpo = 1, ZHpo = 2, saadaan esimerkiksi ionivahvuus J = 3. Parhaana pidettyjen elektrolyyttien konsentraatiot ovat käytännössä ionivahvuus-välillä 0,15 ja 2 mooli/1. Ionivahvuus on parhaiten vähintään 0,3 mooli/1.
Immobilisointi alkaa periaatteessa adsorptiovaiheella. Myös verkostusainetta käytettäessä lähtee verkostusreaktio adsorp-tiovaiheesta. Molemmat vaiheet voidaan suorittaa peräkkäin tässä järjestyksessä, so. ensin adsorboidaan valkuaisaine kantajaan elektrolyytin läsnäollessa ja vasta sen jälkeen lisätään verkostavat kytkentäkomponentit. Tätä järjestystä pidetään parhaana. Molemmat vaiheet voidaan kuitenkin menetelmällisesti koota yhteen ja antaa kytkentäkomponenttien vaikuttaa samanaikaisesti elektrolyytin kanssa jo adsorption aikana. Lopuksi monissa tapauksissa on myös mahdollista saattaa kantaja reagoimaan yksinään kytkentäkomponenttien kanssa ja vasta sen jälkeen lisätä valkuaisaine ja elektrolyytti.
Valkuaisaineen adsorptio tapahtuu 0,1 - 100 tunnin, parhaiten 1-10 tunnin sisällä järjestelmässä, joka muodostuu valkuaisaineen vesiliuoksen muodostamasta supernatantista ja kantajasta. Oleellista on, että elektrolyyttiliuos ympäröi täydellisesti kantajahiukkaset molemmissa reaktiofaaseissa. Immobili- * sointi nopeutuu lämpötilan noustessa. Parhaiten toimitaan korkeimmassa lämpötilassa, jonka valkuaisaine sietää ilman tehon heikkenemistä. Vaikkakin voidaan toimia vielä 0°C:ssa, erityisen edullisia ovat yli 40°C lämpötilat, monissa tapauksissa yli 50°C lämpötilat.
11 93124 lia, so. 2 paino-% tai yli. Sitä vastoin biomakromolekyylien eristämiseen tarkoitettujen immobilisoitujen ligandien tapauksessa pienemmät kuormitustiheydet ovat edullisempia.
Immobilisointi voidaan suorittaa siten, että kantaja lietetään valkuaisaineliuokseen ja elektrolyyttien lisäämisen jälkeen sekoitetaan kohtuullisesti menetelmän loppuun asti. Elektro-lyyttipitoisen valkuaisaineliuoksen voidaan antaa virrata pylväsreaktorissa kantajakerroksen läpi ja liuosta voidaan kierrättää pumppaamalla pidempi aika.
Immobilisointi muodostuu aluksi vain valkuaisaineen adsorptiosta kantajaan. Kun kuormitettu kantaja tämä jälkeen tuodaan vähän elektrolyyttiä sisältävään ympäristöön, useissa tapauksissa on odotettavissa valkuaisaineen desorptio. Tämä estetään sitomalla sen jälkeen valkuaisainemolekyyli kovalenttisesti keskenään tai kantajan kanssa. Tätä varten lisätään toisessa reaktiovaiheessa kytkentä- tai verkostuskomponenttia, mikä menetelmällisesti voidaan suorittaa jo adsorptiovaiheen aikana.
Kytkentäkomponentin täytyy liueta vesipitoiseen elektrolyytti-liuokseen ainakin valkuaisaineen immobilisointiin riittävä määrä. Oleellista on, että tätä komponenttia käytetään elek-Lrolyyttisliuoksen supernatantissa; so. liuos ei saa imeytyä kokonaan kantajamateriaalista. Märän kantajamateriaalin ml kohti käytetään vähintään noin 0,2 ml elektrolyyttiliuosta, parhaiten 10 ml asti. Kytkentäkomponentin on edelleen vaikutettava elektrolyytin läsnäollessa niin, että tämän saostava vaikutus säilyy jäljellä, kunnes valkuaisaine on immobilisoi-tunut irreversiibelisti.
• *
Xytkentäkomponenteiksi sopivat vähintään rajoitetusti vesiliukoiset yhdisteet, joissa on kaksi tai useampia funktionaalisia ryhmiä, joilla ne voivat reagoida valkuaisaineen ja mahdollisesti myös kantajan funktionaalisten ryhmien kanssa. Irreversiibeli immobilisoituminen voi tapahtua verkostamalla valkuaisaine itsensä kanssa tai verkostamalla se kantajan 12 93124 kanssa. Sopivia, valkuaisaineiden kanssa reaktiivisia funktionaalisia ryhmiä ovat esimerkiksi aldehydi-, epoksi-, diatso-, isosyanaatti- ja kloorimuurahaishappoesteriryhmät. Vähemmän edullisia ovat monissa tapauksissa karboksyylihappoanhydridi-tai esteriryhmät, koska ne muuttavat voimakkaasti kantajan sähkökemiallista luonnetta muodostamalla anionisia karboksy-laattiryhmiä. Erityisen käyttökelpoisia kytkentäkomponentteja ovat diatsobentsidiini, heksametyleenidi-isosyanaatti, kloori-muurahaishappoetyyliesteri ja tärkeimpänä yhdisteenä glutaari-aldehydi. Voidaan käyttää myös alempia vesiliukoisia polymeerejä, joiden molekyylipainot ovat alle 100.000, kuten polyak-roleenia, akryyli- tai metakryyliamidin sekapolymeerejä glysi-dyyliakrylaatin tai -metakrylaatin kanssa tai akroleiinin kanssa tai N-allyylimetakryyliamidia.
Mainitsematta ei voi jättää sellaisia kytkentäkomponentteja, jotka tulevat kytkentäaktiivisiksi vasta UV-säteilytyksen tai radikaalimuodostajien (redoksi-initiaattoreiden) vaikutuksesta, esimerkiksi diallyylieetteri tai akryyli- tai metakryyliamidin sekapolymerisaatti p-toluyyli-hydroksietyylimetakry-laatin kanssa.
Irreversiibeliin immobilisointiin tarvittava kytkentäkomponen-Lin määrä riippuu sen reaktiivisuudesta valkuaisaineen kanssa ja mahdollisesti kantajan kanssa ja voi olla esimerkiksi • välillä 1 - 100 paino-% laskettuna valkuaisaineen painosta. Kytkennän reaktio-olosuhteet eivät yleensä eroa adsorption olosuhteista, joten kummatkin tapahtuvat voivat kulkea samanaikaisesti samoissa olosuhteissa. Glutaaridialdehydillä suoritetussa kytkennässä reaktioaika on yleensä 0,1 - 100 tuntia, parhaiten 2 tuntia lämpötiloissa välillä 0 ja 80°C.
•
Immobilisointireaktion jälkeen elektrolyyttiliuos, joka sisältää valkuaisaineen mahdollisesti sitoutumattomia ryhmiä ja kytkentäkomponenttia, yleensä erotetaan kuormitetusta kantajasta. Tämä pestään sen jälkeen sopivalla puskuriliuoksella, #minkä jälkeen se on käytettävissä teknillisesti.
13 93124
Esimerkki 1
Immobilisointi glukoosi-isomeraasi
Kantaja: Makrohuokoiset, pitkälle verkostetut styreeni/di-vinyylibentseeni-helmet, joiden sisäinen pinta-ala noin 200 m2/g ja keskimääräinen huokoshalkaisija 40 nm.
Entsyymi: Glukoosi-isomeraasi, Streptomyces albus-viljelmän nestemäinen konsentraatti.
Aktiivisuus: 1 g entsyymiä muodostaa 5 g D-fruktoosia 0,1-moo-lisesta D-glukoosi-liuoksesta pH-arvossa 7 ja 70°C lämpötilassa 60 minuutissa.
Kytkentä: Ensin adsorboidaan entsyymi makrohuokoiseen kantajaan. Tätä varten pyöritetään pyörimispenkissä huoneen lämpötilassa (23°C) 10 g kantajaa ja 10 g entsyymiä 50 ml:ssa suolaliuosta, joka sisältää 12 % natriumsulfaattia ja 5 % magnesiumsulfaattia sekä 0,02 % kobolttisulfaattia. Vesiliuoksen ionivahvuus on 4,18 mooli/1.
pH säädettiin arvoon 7,0. 20 tunnin kuluttua lisätään 0,5 % glutaaridialdehydiä ja pyöritetään edelleen. Adsorboitu entsyymi "ristiverkostuu" tällä tavoin ja kiinnittyy huokosiin.
2 tunnin kuluttua erotetaan imun avulla ja pestään. Aktiivisuuksien vertailumäärityksestä saadaan suodoksen jäännösaktii-visuudeksi 45 %; kantajasta saadaan takaisin 37 % (= 37 % aktiivisuussaanto).
Käyttö: Immobilisoitu glukoosi-isomeraasi täytetään pylväs- teaktoriin. 60°C lämpötilassa isomeroidaan 40-prosenttinen • glukoosiliuos, jonka pH-arvo on 7,5, 45-prosenttiseksi fruktoosiksi, kun läpivirtausnopeus on 7 kertaa kiinteän kerroksen tilavuus tunnissa.
> · 14 93124
Esimerkki 2
Immobilisoitu Aspergillus orvzae-laktaasi
Kantaja: Verkostettu polyakryylihappoesteri, keskimääräinen huokoshalkaisija 25 nm, sisäinen pinta-ala 140 m2/g; helmet, joiden halkaisija 0,3 - 1 mm.
Entsyymi: Aspergillus oryzae-laktaasi, jauhemainen konsent-raatti. Aktiivisuus = 30.000 yksikköä/g.
Kytkentä: 10 g kantajaa ja 1 g entsyymipreparaattia 40 ml:ssa suolaliuosta ravistellaan 8 tuntia 35°C:ssa. Suolaliuos sisältää 24 % kaliumkloridia, ja liuoksen pH oli säädetty arvoon 5,0. Vesiliuoksen ionivahvuus on 3,21 mooli/1. Entsyymin stabiloimiseksi lisättiin vielä 0,1 % laktoosia. Tämän jälkeen jäähdytetään ja ravistellaan huoneen lämpötilassa vielä 2 tuntia, kun on lisätty 0,5 % glutaaridialdehydiä. Tämän jälkeen erotetaan imulla ja pestään. Verrataan kantajan ja suodoksen laktaasiaktiivisuuksia. Kantajasta löydettiin 34 % käytetystä aktiivisuudesta, suodoksesta 11 %. Aktiivisuussaanto = 34 %.
Käyttö: Pylväsreaktori täytetään immobilisoidulla Aspergillus-laktaasilla. 35°C lämpötilassa hydrolysoidaan yli 90-prosent-uisesti 5-prosenttinen laktoosiliuos, jonka pH on 4,5 ja jota syötetään 40 kertaa kiinteän kerroksen tilavuus tunnissa.
* 60 päivän jälkeen ei voida vielä havaita mitään aktiivisuuden laskua.
Esimerkki 3
Immobilisoitu hiivalaktaasi • 1 1 Kantana: Makrohuokoinen, runsaasti verkostettu helmipolyme-risaatti, jonka pohjana on metakryyliamidi/metyleeni-bis-metakryyliamidi, jossa on vapaita epoksidiryhmiä (1,2 % oksi-raani-happi) ja 2,2 % oksastettuja isopropenyyliryhmiä, jotka ovat väkevöityneet huokosten sisäpinnoille. Huokostilavuus , = 3,4 ml/g, keskimääräinen huokoshalkaisija = 20 nm. Tämän 15 93124 kantajan valmistus on kuvattu patenttijulkaisun DE-A 27 22 751 esimerkissä 2.
Adsorboituneen entsyymin kytkentä tapahtuu tässä tapauksessa kovalenttisesti epoksidiryhmillä samalla, kun se adsorboidaan suuren suolakonsentraation vaikutuksen alaisena.
Entsyymi: Hiivalaktaasi Saccharomyces (Kluyveromyces) lactis-hiivasta, nestemäinen preparaatti, 5000 neutraalia laktaasi-yksikköä (NLU).
Kytkentä: 10 g kantajaa ja 10 g entsyymiä ravistellaan huoneen lämpötilassa (23°C) 80 g:ssa suolaliuosta. Suolaliuos sisältää 16 % dikaliumvetyfosfaattia, 7,9 % kaliumdivetyfosfaattia ja entsyymin stabiloimiseksi 20 ppm Μη(II)-kloridi.4 H20. Sen ionivahvuus on 3,34 mooli/1. 72 tunnin kuluttua erotetaan imulla, pestään ja verrataan suodoksen laktaasiaktiivisuutta kantajan vastaavaan aktiivisuuteen. Käytetystä aktiivisuudesta löydetään 55 % kantajasta ja 14 % suodoksesta.
Tällä herkällä entsyymillä on siten erittäin korkea aktiivi-suussaanto, so. 55 %.
Käyttö: Pylväsreaktori täytetään kytketyllä hiivalaktaasilla.
7°C lämpötilassa johdetaan pylvään läpi 20 päivää kevytmaitoa (0,3 % rasvaa) läpivirtausnopeudella 55 kertaa kiinteän kerroksen tilavuus tunnissa. Maidon sisältämä laktoosi hydrolysoituu aluksi 65-prosenttisesti glukoosiksi ja galaktoosiksi ja 20 päivän kuluttua vielä 50-prosenttisesti.
Menetelmä 4
Immobilisoitu aminohappo-asvlaasi
Kantaja: Makrohuokoinen, runsaasti verkostettu helmipolyme-risaatti, jonka pohjana on metakryyliamidi/metyleeni-bis-metakryyliamidi, jossa on vapaita epoksiryhmiä (1,2 % oksi-raani-happi) ja 2,2 % oksastettuja isopropenyyliryhmiä, jot- 16 93124 ka ovat väkevöityneet huokosten sisäpinnoille. Huokostilavuus = 3,4 ml/g, keskimääräinen huokoshalkaisija = 20 nm. Tämän kantajan valmistus on kuvattu patenttijulkaisun DE-A 27 22 751 esimerkissä 2.
Entsyymi: Jauhemainen aminohappo-asylaasi-konsentraatti Aspergillus-kannasta.
Aktiivisuus: 23.000 yksikköä/g, substraatti = asetyyli-D,L-metioniini.
Kytkentä: 10 g kantajaa ja 20 g entsyymipreparaattia ravistellaan 35°C:ssa 80 ml:ssa suolaliuosta. Suolaliuos sisältää 14,2 % natriumsulfaattia sekä 24 ppm koboltti(II)-kloridi.6 H20, ja liuoksen pH on säädetty arvoon 7,0. Sen ionivahvuus on 3 mooli/1 ottamatta huomioon entsyymipreparaatin suolapitoisuutta .
8 tunnin kuluttua kantaja erotetaan imulla ja pestään. Käytetystä aktiivisuudesta löydetään 61 % kantajasta ja suodoksesta 1 %. Aktiivisuussaannoksi saavutetaan siten 61 %.
Esimerkki 5
Penisilliiniamidaasin sitominen erilaisiin kantajiin
Taulukon I mukaista kosteaa kantajamateriaalia pestään kulloinkin 3,5 g 5 kertaa kulloinkin viisinkertaisella tilavuudella demineralisoitua vettä ja suodatetaan lasisintterillä. Tämän jälkeen kantajamateriaalia ja 6,8 ml entsyymiliuosta, joka sisältää 676 kansainvälistä yksikköä penisilliini-amidaa-sia E.coli-bakteerista 0,5 M K-fosfaattipuskurissa (pH 7,5, mukana 0,1 % NaN3), ravistellaan 2 tuntia noin 21°C:ssa. Puskuriliuoksen ionivahvuus on 1,5 mooli/1. Lisätään 0,136 ml 25-prosenttista vesipitoista glutaaridialdehydi-liuosta, joka on stabiloitu ioninvaihtohartsin avulla (Amberlite A 21), minkä jälkeen ravistellaan vielä kaksi tuntia. Tämän jälkeen kuormitettu kantajamateriaali viedään veden avulla lasisint-,terille ja pestään vielä kolme kertaa 1 M natriumkloridilla 17 93124 ja kaksi kertaa 0,05 M Na-fosfaattipuskurilla (pH 7,5, jossa 0,1% NaN3).
Entsymaattinen aktiivisuus määritettiin titraamalla alkalimet-risesti pH-arvossa 7,5, kun substraattina oli penisilliini-G K (puhdistamaton). Tätä varten lisättiin kulloinkin 20 ml 2-prosenttista substraattiliuosta 0,05 M Na-fosfaattiliuokseen, pH 7,5, ja titrattiin automaattisesti 37°C:ssa 0,5 M natrium-hydroksidilla. Tulokset on annettu taulukossa I.
Taulukko I
Kantajamateriaali Immobilisoidun PC-amidaasin aktiivisuus
Kem. koostumus (Kauppanimi) Yks./mär- Aktiivi- paino suus- _g_saanto a) Verkostettu agaroosi (Sepharose-CL-4B*) 96 58 b) oktyloitu, verkos- (Octyl-Sepharose- tettu agaroosi CL-4B*) 98 53 c) fenyloitu verkos- (Phenyl-Sepharose- tettu agaroosi CL-4B*) 168 91 d) verkostettu agaroosi, (DEAE-Sepharose- joka substituoitu di- CL-6B*) 84 61 etyyliaminoetyyliryh- mällä (kationinen) s) karboksimetyloitu (CM-Sepharose- verkostettu agaroosi CL-6B*) 94 48 (anioninen) f) fenoksiasetyylisellu- loosa 77 59 g) oksiraani-polyakryyliami-dihartsi (DE 27 22 751, esimerkki 1), joka saa- 172 85 tettu reagoimaan bentsyyli-merkaptaanin kanssa h) polymetakryyli-imidi- (Rohacell WF, vaahto, jauhettu Rohm GmbH) 70 45 18 93124
Taulukko I jatkuu
Kantajamateriaali Immobilisoidun PC-amidaasin aktiivisuus
Kem. koostumus (Kauppanimi) Yks./mär- Aktiivi- paino suus- _g_saanto i) verkostettu polymetyy-limetakrylaattiglyko- lidimetakrylaatti- 35 25 sekapolymerisaatti1), painosuhde 90:10 j) verkostettu polymetyy- limetakrylaattiglykoli- 55 37 dimetakrylaatti-sekapolymerisaatti1) k) verkostettu polymetyy- limetakryalattiglykoli- 43 33 dimetakrylaatti-sekapolymerisaatti1) l) verkostettu, polysty- reeni, jossa 10 % divi- 57 42 nyylibentseeniä1) m) Huokoinen lasi huokos- (Controlled Pore tilavuus 0,75 cm3/g Glass-10) 105 60 keskim. huokoshalkai-sija 17 nm sisäinen pinta-ala 107 m2/g *) Pharmacia AB, Uppsala, Ruotsi, yhtiön tavaramerkit
Valmistusmenetelmä: Sekoitusastiassa lämmitetään 50°C:een liuos, jossa on 1 paino-osa (T) polyvinyylialkoholia ja 320 paino-osaa vettä, ja tähän jaetaan pisaramaisesti sekoittamalla seos, jossa on 100 T monomeerejä (metyylimetakrylaatti + glykolidimetakrylaatti tai styreeni + divinyylibentseeni), 60 T n-heptaania ja 1,4 T dibentsoyyliperoksidia. 4-tuntisen polymerointiajan aikana lämpötila pidetään jäähdyttämällä enintään 75°C:ssa. Tämän jälkeen liuotin tislataan pois tunnin 19 93124 aikana 36°C:ssa. Muodostuneet polymerisaattihelraet erotetaan suodattamalla jäähdyttämisen jälkeen.
Esimerkki 6
Trvpsiinin sitominen fenvvli-sefaroosiin 3,5 g fenyyli-sefaroosia (märkäpaino) esikäsitellään esimerkin 1 mukaisesti. Tämän jälkeen lisätään 150 mg trypsiiniä, joka on liuotettu 6,8 ml:aan 0,5 M kaliumfosfaattipuskuriliuosta (pH 7,5, jossa 0,1 % NaN3), ja ravistellaan 2 tuntia 23°C:ssa. Ionivahvuus on 1,5 mooli/1. Adsorboitu entsyymi kiinnitetään ja jälki käsitellään esimerkin 1 mukaisesti.
Entsymaattinen aktiivisuus määritettiin käyttämällä substraattina kaseiinia ja N-bentsoyyli-l-arginiini-etyyliesteri-hydro-kloridia (BAEE).
Tulokset: kaseiinia vastaa 8,3 yks./märkäpaino-g BAEE:ta vastaan 311 yks./märkäpaino-g
Esimerkki 7
Kantanaan sidottujen laktaasi-preparaattien valmistaminen
Kulloinkin 1 g Aspergillus oryzae-laktaasia (kauppanimi "Lactase-Präparat 2214 C Konz.", Rohm GmbH), jonka aktiivisuus on 30.000 yks./g, liuotetaan 40 ml:aan 0,7 M Na2S04-liuosta, jonka ionivahvuus on 2,1 mooli/1, pH 5,5, ja liuokseen lisätään kulloinkin 10 g taulukossa annettuja kantajahartseja ja ravistellaan 20 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen lisätään 0,8 ml 25-prosenttista vesipitoista glutaaridialde-hydiliuosta ja ravistellaan 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Preparaatit erotetaan suodattamalla, pestään ja määritetään immobilisoituneen ja suodokseen jääneen entsyymin aktiivisuus ja ilmaistaan prosentteina käytetystä aktiivisuudesta. Tulokset on annettu taulukossa II: 20 93124
Taulukko II
Aktiivisuus immob.lak- jäännös-Kantajamateriaali taasin ak- aktiivi- tiivisuus- suus
Kem. koostumus (kauppanimi) saanto suodok- _%_sessa % a) heikosti emäksinen sty- (Amberlite reeni/divinyylibentseeni- IRA 921) 17,5 0 pohjainen ioninvaihto- hartsi b) makrohuokoinen polyak- (Amberlite ryylihappoesteri-pohjai- XAD 71) 29,5 18 nen adsorptiohartsi c) markohuokoinen fenoli- (Duolite formaldehydi-adsorptio- S 5612) 24,0 5 hartsi, heikosti emäksinen d) makrohuokoinen fenoli- (Duolite formaldehydi-adsorptio- S 5872) 26,0 4 hartsi, heikosti emäksinen e) markohuokoinen fenoli- (Duolite formaldehydi-adsorptio- S 7612) 22,0 6 hartsi, ei-ionillinen f) makrohuokoinen lasi huo- (Controlled kostilavuus 0,75 cm3/g Pore Glass 42,4 8 keskim. huokoshalkaisija CPG 10) 17 nm sisäinen pinta-ala 107 m2/g g) polymetakryyli-imidi- (Rohacell3) 31,0 0 vaahto, jauhettu h) Hydroksyyliapatiitti (emäks. kalsiumfos- - 16,5 5 faatti), jauhettu
Rohm & Haas Co., Philadelphia, USA, yhtiö tavaramerkki 2
Duolite International Co. yhtiön tavaramerkki 3
Rohm GmbH, Darmstadt, yhtiön tavaramerkki
Claims (6)
- 93124
- 1. Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi vesi-liuoksesta liuokseen suspendoituun kiinteään, makrohuokoiseen, veteen liukenemattomaan kantajaan elektrolyytin läsnäollessa ja valkuaisaineen kiinnittämiseksi kantajaan siihen adsorboituneen valkuaisaineen verkostusta aiheuttavan kytkentäkompo-nentin avulla, joka sisältää kahta tai useampaa valkuaisaineen suhteen reaktiivista funktionaalista ryhmää, tunnettu siitä, että valkuaisaineen vesiliuoksen, jossa elektrolyytin ionivahvuus on vähintään 0,30 mooli/1, annetaan vaikuttaa tämän vesiliuoksen ympäröimään kantajaan kuormituksella, joka on ainakin 20 mg valkuaisainetta kantajan grammaa kohti, kunnes valkuaisaine on adsorboitunut kantajaan ja että valkuaisaineen vesiliuokseen lisätään kytkentäkomponentti adsorboi-tumisen aikana tai sen jälkeen ilman kantajan välikuivausta.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kantajaa, joka ei sisällä kovalenttises-ti sitoutuneita kationisia ryhmiä tai joka sisältää näitä enintään 0,1 milliekvivalentti/g.
- 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kantajaa, jossa on enintään 5 milliekvi-valenttia kovalenttisesti sitoutuneita anionisia ryhmiä grammaa kohti kuiva-ainetta.
- 4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kantajaa, joka sisältää enintään 0,1 milliekvivalenttia kovalenttisesti sitoutuneita ionillisia ryhmiä grammaa kohti kuiva-ainetta. 1 Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kantajaa, joka turpoaa vesipitoisissa mediumeissa enintään kaksinkertaiseen tilavuuteen. 93124
- 6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kantajaa käytetään hienojakoisina hiukkasina, erityisesti helminä. « · 93124
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3515252A DE3515252C2 (de) | 1985-04-27 | 1985-04-27 | Verfahren zur Immobilisierung gelöster Eiweißstoffe |
| DE3515252 | 1985-04-27 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI861662A0 FI861662A0 (fi) | 1986-04-21 |
| FI861662L FI861662L (fi) | 1986-10-28 |
| FI93124B true FI93124B (fi) | 1994-11-15 |
| FI93124C FI93124C (fi) | 1995-02-27 |
Family
ID=6269271
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI861662A FI93124C (fi) | 1985-04-27 | 1986-04-21 | Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4839419A (fi) |
| EP (1) | EP0200107B1 (fi) |
| JP (1) | JPH084505B2 (fi) |
| AT (1) | ATE68525T1 (fi) |
| DE (2) | DE3515252C2 (fi) |
| DK (1) | DK189286A (fi) |
| FI (1) | FI93124C (fi) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8508340D0 (en) * | 1985-03-29 | 1985-05-09 | Creighton T E | Production of protein |
| US5179199A (en) * | 1986-10-20 | 1993-01-12 | Genzyme Corporation | Protein purification |
| US5449759A (en) * | 1987-05-16 | 1995-09-12 | Somatogen, Inc. | Hemoglobins with intersubunit desulfide bonds |
| DK427987A (da) * | 1987-08-17 | 1989-02-18 | Vnii Biotekhnologii | Fremgangsmaade til immobilisering af fungal beta-galactosidase |
| GB2208649A (en) * | 1987-08-17 | 1989-04-12 | Vnii Biotekhnologii | Immobilization of fungal beta -galactosidase on an inorganic carrier |
| US5545727A (en) * | 1989-05-10 | 1996-08-13 | Somatogen, Inc. | DNA encoding fused di-alpha globins and production of pseudotetrameric hemoglobin |
| US5092992A (en) * | 1989-06-07 | 1992-03-03 | J. T. Baker Inc. | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography |
| US5085779A (en) * | 1989-06-07 | 1992-02-04 | J. T. Baker, Inc. | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography |
| DE3932521C1 (en) * | 1989-09-29 | 1991-04-25 | Nitra Gesellschaft Fuer Biotechnik Mbh, 2100 Hamburg, De | Removing nitric oxide from enclosed atmos. - comprises culturing nitrifying bacteria in aq. suspension on membrane |
| DE4029374A1 (de) * | 1990-09-15 | 1992-03-19 | Roehm Gmbh | Immobilisierte enzyme |
| US5200471A (en) * | 1990-11-05 | 1993-04-06 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Biomolecules covalently immobilized with a high bound specific biological activity and method of preparing same |
| CA2122717C (en) * | 1991-11-08 | 2003-07-15 | David C. Anderson | Hemoglobins as drug delivery agents |
| US5512169A (en) * | 1992-12-30 | 1996-04-30 | Dow Corning Corporation | Liquid column packing materials |
| DE69428891T2 (de) * | 1993-03-29 | 2002-06-27 | Minnesota Mining And Mfg. Co., Saint Paul | VERFAHREN ZUR VERBINDUNG VON LIGANDEN IN EINEM PORÖSEN TRÄGER (e.g.AZLAKTON) UND DESSEN ANWENDUNGEN |
| JP3708542B2 (ja) * | 1993-08-13 | 2005-10-19 | ミネソタ マイニング アンド マニュファクチャリング カンパニー | その上に不溶性酵素粒子を含有するカートリッジ・フィルター |
| US5468847A (en) * | 1994-03-10 | 1995-11-21 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Method of isolating and purifying a biomacromolecule |
| US6833260B1 (en) | 1999-10-08 | 2004-12-21 | Protein Scientific, Inc. | Lactose hydrolysis |
| US7060478B2 (en) * | 2004-03-12 | 2006-06-13 | Min-Hsiung Lee | Process for preparing lysozyme |
| GB0425102D0 (en) * | 2004-11-15 | 2004-12-15 | Ciba Spec Chem Water Treat Ltd | Polymeric compositions and methods of employing them in papermaking processes |
| US20070055013A1 (en) * | 2005-02-21 | 2007-03-08 | Noriho Kamiya | Substrate and method of immobilizing protein |
| JP2009125006A (ja) * | 2007-11-24 | 2009-06-11 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | シリカ系メソ多孔体−セルロース、ヘミセルロースの加水分解酵素複合体 |
| WO2009143008A1 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Daedalus Innovations Llc | Solubilization of proteins in reverse micelles by extraction from a solid support |
| GB201002824D0 (en) * | 2010-02-19 | 2010-04-07 | Temasek Polytechnic | A method of preparing a substrate for immobilization of functional substances thereon and the substrate obtained therefrom |
| US8263751B2 (en) | 2010-11-19 | 2012-09-11 | Daedalus Innovations Llc | Method for removing a protein from a metal chelate resin |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2129809A (en) * | 1936-06-19 | 1938-09-13 | Goodman Mfg Co | Shaker conveyer |
| US3767531A (en) * | 1972-02-14 | 1973-10-23 | Us Agriculture | Preparation of insolubilized enzymes |
| GB1514707A (en) * | 1974-06-25 | 1978-06-21 | Atomic Energy Authority Uk | Immobilization of biologically active substances |
| US3983000A (en) * | 1976-04-01 | 1976-09-28 | Corning Glass Works | Bonding proteins to inorganic supports |
| CA1093991A (en) * | 1977-02-17 | 1981-01-20 | Hideo Hirohara | Enzyme immobilization with pullulan gel |
| GB1557944A (en) * | 1978-01-30 | 1979-12-19 | Sumitomo Chemical Co | Enzyme immobilization carrier and preparation thereof |
| JPS5548392A (en) * | 1978-02-17 | 1980-04-07 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel immobilizing material combined with biologically active substance, its preparation, device comprising it, method, and preparation of support |
| US4440903A (en) * | 1978-06-30 | 1984-04-03 | Ramot University Authority For Applied Research And Industrial Development Ltd. | Dihaloisocyanide derivatives of polymers for coupling nucleophiles |
| JPS5651984A (en) * | 1979-10-02 | 1981-05-09 | Sumitomo Chem Co Ltd | Fixed lactase and its preparation |
| JPS56140890A (en) * | 1980-04-04 | 1981-11-04 | Sumitomo Chem Co Ltd | Immobilized lactase and its preparation |
| JPS5736986A (en) * | 1980-08-13 | 1982-02-27 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Immobilized aminoacylase agent and its preparation |
| KR900007631B1 (ko) * | 1982-10-06 | 1990-10-17 | 노보-노르디스크 아크티에 셀스카브 | 가교제에 의한 고정효소제제의 제조방법 |
| GB2129809B (en) * | 1982-10-06 | 1986-06-04 | Novo Industri As | Method for production of an immobilized enzyme preparation by means of a crosslinking agent |
| JPS59216586A (ja) * | 1983-05-24 | 1984-12-06 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 固定化酵素およびその製造法 |
-
1985
- 1985-04-27 DE DE3515252A patent/DE3515252C2/de not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-04-17 EP EP86105330A patent/EP0200107B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-17 DE DE8686105330T patent/DE3681953D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-17 AT AT86105330T patent/ATE68525T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-04-21 FI FI861662A patent/FI93124C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-04-24 DK DK189286A patent/DK189286A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-04-25 JP JP61094942A patent/JPH084505B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-02-16 US US07/161,204 patent/US4839419A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI93124C (fi) | 1995-02-27 |
| EP0200107A3 (en) | 1987-08-05 |
| DK189286D0 (da) | 1986-04-24 |
| JPH084505B2 (ja) | 1996-01-24 |
| DK189286A (da) | 1986-10-28 |
| US4839419A (en) | 1989-06-13 |
| EP0200107A2 (de) | 1986-11-05 |
| DE3515252A1 (de) | 1986-11-06 |
| JPS61249390A (ja) | 1986-11-06 |
| DE3515252C2 (de) | 1994-02-24 |
| DE3681953D1 (de) | 1991-11-21 |
| ATE68525T1 (de) | 1991-11-15 |
| EP0200107B1 (de) | 1991-10-16 |
| FI861662L (fi) | 1986-10-28 |
| FI861662A0 (fi) | 1986-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI93124B (fi) | Menetelmä liuenneen valkuaisaineen immobilisoimiseksi | |
| Brena et al. | Immobilization of enzymes: a literature survey | |
| US5200471A (en) | Biomolecules covalently immobilized with a high bound specific biological activity and method of preparing same | |
| JPS6029474B2 (ja) | 固定された蛋白質及びその製造法 | |
| US20110117596A1 (en) | Composite sorbent material, its preparation and its use | |
| CA1212058A (en) | High-surface-area systems for immobilization of substrates containing nucleophilic groups | |
| Vlakh et al. | Flow‐through immobilized enzyme reactors based on monoliths: I. Preparation of heterogeneous biocatalysts | |
| CN104277111B (zh) | 用于制备固定化蛋白质、多肽或寡肽的复合载体、制法及用途 | |
| US4705753A (en) | Biologically active acrylonitrile-based copolymeric membrane | |
| JPS596886A (ja) | 巨大多孔質で親水性の酵素用担体 | |
| US4582860A (en) | Oxirane resins for enzyme immobilization | |
| Horvath | Pellicular immobilized enzymes | |
| CA2092036A1 (en) | Immobilization of biochemical substances | |
| JPS6219835B2 (fi) | ||
| CZ280422B6 (cs) | Způsob výroby opticky aktivních kyanhydrinů | |
| Zemanova et al. | Effect of the nature of proteins on their coupling to different epoxide-containing supports | |
| EP1352957A1 (en) | Carriers for covalent immobilization of enzymes | |
| FI101400B (fi) | Menetelmä kantajaan sidottujen entsyymien valmistamiseksi | |
| PL102119B1 (pl) | A process of producing the base for immobilizing enzymes | |
| EP0186347B1 (en) | Method for producing high-active biologically efficient compounds immobilized on a carrier | |
| WO1994017903A3 (en) | Membranes for use in affinity separation and methods for activating membranes | |
| JPS6344885A (ja) | 酵素固定化ダイナミツクス膜 | |
| SU755296A1 (ru) | Способ получения активированных носителей для иммобилизации биологически активных веществ 1 | |
| RU2029565C1 (ru) | Адсорбент для извлечения атерогенных липопротеинов из биологических жидкостей | |
| SU664468A1 (ru) | Способ получени активированных носителей |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ROEHM GMBH |