FI92325B - Menetelmä tymopentiinianalogien valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä tymopentiinianalogien valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI92325B FI92325B FI852522A FI852522A FI92325B FI 92325 B FI92325 B FI 92325B FI 852522 A FI852522 A FI 852522A FI 852522 A FI852522 A FI 852522A FI 92325 B FI92325 B FI 92325B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- peptide
- asp
- val
- arg
- phe
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 10
- PSWFFKRAVBDQEG-YGQNSOCVSA-N thymopentin Chemical class NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PSWFFKRAVBDQEG-YGQNSOCVSA-N 0.000 title abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 98
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 37
- 102400000159 Thymopoietin Human genes 0.000 abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 101800001703 Thymopentin Proteins 0.000 abstract description 9
- 229960004517 thymopentin Drugs 0.000 abstract description 9
- 102400000160 Thymopentin Human genes 0.000 abstract description 8
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract description 5
- 101710195641 Splenin Proteins 0.000 abstract description 4
- MLKWIQODPVLVLN-SHVFRELUSA-N ac1q1oa8 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CN)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 MLKWIQODPVLVLN-SHVFRELUSA-N 0.000 abstract description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 32
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 32
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 101710163560 Lamina-associated polypeptide 2, isoform alpha Proteins 0.000 description 18
- 101710189385 Lamina-associated polypeptide 2, isoforms beta/gamma Proteins 0.000 description 18
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000898 Thymopoietin Substances 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 11
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 11
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 10
- -1 mono- Chemical class 0.000 description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 9
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 7
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000000398 DiGeorge Syndrome Diseases 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical group NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 5
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- ZOOGRGPOEVQQDX-UHFFFAOYSA-N cyclic GMP Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C=NC2=C1NC(N)=NC2=O ZOOGRGPOEVQQDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000010543 22q11.2 deletion syndrome Diseases 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 4
- 108010057281 Lipocalin 1 Proteins 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 4
- HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 2-heptylcyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCCCCCCC1=CCCCC1=O HBAHZZVIEFRTEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SLRMQYXOBQWXCR-UHFFFAOYSA-N 2154-56-5 Chemical compound [CH2]C1=CC=CC=C1 SLRMQYXOBQWXCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100021752 Corticoliberin Human genes 0.000 description 3
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 3
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001367 Merrifield resin Polymers 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 3
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxo-4-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- OTLNPYWUJOZPPA-UHFFFAOYSA-M 4-nitrobenzoate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 OTLNPYWUJOZPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 101710105077 Agglutinin-1 Proteins 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N L-aspartic acid beta-benzyl ester Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 2
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102400000757 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000003526 lymphopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FGVVTMRZYROCTH-UHFFFAOYSA-N pyridine-2-thiol N-oxide Chemical compound [O-][N+]1=CC=CC=C1S FGVVTMRZYROCTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N thiocyanic acid Chemical compound SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- BDHUTRNYBGWPBL-HNNXBMFYSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-6-(phenylmethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCNC(=O)OCC1=CC=CC=C1 BDHUTRNYBGWPBL-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFNXWZGIFWJHMI-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C)(C)C(O)=O MFNXWZGIFWJHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCPTXJJVVDAEMW-XVFCMESISA-N 3',5'-cyclic CMP Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H]2OP(O)(=O)OC[C@H]2O1 WCPTXJJVVDAEMW-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWWYHRQXHSCNQS-UHFFFAOYSA-N 3-nitropyridine-2-sulfonyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CN=C1S(Cl)(=O)=O SWWYHRQXHSCNQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGUKYNXWOWSRET-UHFFFAOYSA-N 4-pyrrolidin-1-ylpyridine Chemical compound C1CCCN1C1=CC=NC=C1 RGUKYNXWOWSRET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026449 AKT-interacting protein Human genes 0.000 description 1
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008162 B cell deficiency Diseases 0.000 description 1
- 102400000748 Beta-endorphin Human genes 0.000 description 1
- 101800005049 Beta-endorphin Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- LEKVNOZMYOJBDN-TULHYZDNSA-N CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N)NC(=O)[C@@](CC(=O)O)(N)N(C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)C(C)C Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N)NC(=O)[C@@](CC(=O)O)(N)N(C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)C(C)C LEKVNOZMYOJBDN-TULHYZDNSA-N 0.000 description 1
- QYOVMAREBTZLBT-KTKRTIGZSA-N CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO QYOVMAREBTZLBT-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- OQGTWCURZDGFGK-FKEBYFGASA-N CCCN([C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)C(=O)[C@H](CCCN(C=O)C(=N)N)N Chemical compound CCCN([C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)C(=O)[C@H](CCCN(C=O)C(=N)N)N OQGTWCURZDGFGK-FKEBYFGASA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 101710113174 Corticoliberin Proteins 0.000 description 1
- 108010022152 Corticotropin-Releasing Hormone Proteins 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N D-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229930182847 D-glutamic acid Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229930195715 D-glutamine Natural products 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229930195721 D-histidine Natural products 0.000 description 1
- 229930182845 D-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182831 D-valine Natural products 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 101000718065 Homo sapiens AKT-interacting protein Proteins 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 201000001322 T cell deficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 1
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 1
- 108010046516 Wheat Germ Agglutinins Proteins 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WOPZMFQRCBYPJU-NTXHZHDSSA-N beta-endorphin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WOPZMFQRCBYPJU-NTXHZHDSSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- DTPCFIHYWYONMD-UHFFFAOYSA-N decaethylene glycol Polymers OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO DTPCFIHYWYONMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002169 ethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003979 granulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000011872 intimate mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ACOWDLJHDRICBS-ABNMWNEUSA-N methyl 2-hydroxy-3,5-bis(125I)(iodanyl)benzenecarboximidate Chemical compound [125I]C=1C(=C(C(OC)=N)C=C(C=1)[125I])O ACOWDLJHDRICBS-ABNMWNEUSA-N 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-VOQCIKJUSA-N methyl beta-D-galactoside Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-VOQCIKJUSA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- VIJMMQUAJQEELS-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(ethenyl)ethenamine Chemical compound C=CN(C=C)C=C VIJMMQUAJQEELS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007925 protein solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000001799 protein solubilization Methods 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- POECFFCNUXZPJT-UHFFFAOYSA-M sodium;carbonic acid;hydrogen carbonate Chemical compound [Na+].OC(O)=O.OC([O-])=O POECFFCNUXZPJT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- OBTWBSRJZRCYQV-UHFFFAOYSA-N sulfuryl difluoride Chemical compound FS(F)(=O)=O OBTWBSRJZRCYQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010013515 thymopoietin receptor Proteins 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 125000005270 trialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/66—Thymopoietins
- C07K14/662—Thymopoietins at least 1 amino acid in D-form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/18—Thymus derived hormone or factor; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Control Of Eletrric Generators (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Control Of Charge By Means Of Generators (AREA)
- Control Of Combustion (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
92325
Menetelmä tymopentilnianalogien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää uusien immunosääte-lypeptidien ja varsinkin tymopentiinipeptidin analogien 5 valmistamiseksi, joilla on huomattavasti parantunut teho.
US-patenttijulkaisuissa 4 190 646 ja 4 261 886 on kuvattu erilaisia pentapeptidejä, joilla on samankaltainen aktiivisuus kuin pitkäketjuisella tymopoietiinilla, joka on kuvattu US-patenttijulkaisuissa 4 002 740 ja 4 077 949. 10 Tymopoietiini stimuloi selektiivisesti T-solujen differen-tioitumista. US-patenttijulkaisussa 4 190 646 kuvattu pen-tapeptidi, jossa on sekvenssi H-ARG-LYS-ASP-VAL-TYR-OH, tunnetaan tymopoietiini-pentapeptididinä eli "tymopentii-ninä". Joidenkin näiden peptidien biologinen aktiivisuus 15 on kuvattu artikkelissa: M.E. Weksler et ai., J. Exp. Med. 148: 996-1006 (1978). Edellä mainitut US-patenttijulkaisut liitetään tähän viitteinä. US-patenttijulkaisuissa 4 361 673 ja 4 420 424 on myös esitetty erilaisia peptidejä, joilla väitetään olevan samankaltaista aktiivisuutta 20 kuin tymopoietiinilla. Samankaltaisen rakenteen omaava peptidi, joka eristettiin naudan pernasta ja jolle annettiin nimi "spleniini", on kuvattu artikkeleissa: Audhya et ai., Biochemistry 20, 6195-6200 (1981) ja Proc. Nat. Acad. Sei. (USA), 81, 2847-2849 (toukokuu 1984). Tämä materiaali *· 25 stimuloi sekä T-solujen että B-solujen muodostusta.
Tiettyjä entsyymiresistenttejä immunosäätelypepti-dejä on esitetty hakijan US-patentissa 4 505 853.
Tymopoietiinin on osoitettu vaikuttavan eläinten ja ihmisten immunosäätelysysteemiin ja se on siten käyttökel-30 poinen sellaisten tautien käsittelyssä, joissa esiintyy : häiriöitä immuunifunktiossa riippumatta siitä, ilmenevätkö nämä häiriöt immuunifunktion puutteena tai liiallisena im-muunifunktiona. Katso esim. Audhya, T. ja Goldstein. G., Int. J. Pept. Protein Res. 22, 568-572 (1983); Aiuti et 35 ai., Lancet 1:551-555 (1983) ja Levinsky et ai., "Primary 92325 2
Immunodeficiency Diseases", Wedgewood, Rosen ja Paul (toim.), 19, 273-276 (1983). Näihin artikkeleihin ja edellä mainittuihin patentteihin ja artikkeliin viitataan e-sillä olevan keksinnön muun tausta-aineiston ja keksintöön 5 sisältyvien biologisten prosessien käsittelyssä.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti saadaan peptidejä ja peptidikoostumuksia, jotka ovat yllättävästi tehokkaampia kuin tymopentiini tai spleniini ja joilla siten saadaan merkitseviä etuja immuunihäiriöiden käsittelyssä.
10 Keksintö koskee menetelmää immunomoduloivaa aktii visuutta omaavan pentapeptidin valmistamiseksi, jolla on kaava: R-ARG-W-ASP-VAL-Z-R1 15 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän happo- tai emäsad-ditiosuolan valmistamiseksi, jossa kaavassa R on H, asetyyli tai formyyli; W on LYS, PRO, dehydro-PRO tai AIB; Z on PHE tai HIS; 20 R: on OH tai NH2;
Yllättäen on havaittu, että keksinnön mukaisesti valmistetuilla peptideillä on tymopentiinin ja spleniinin kaltaista aktiivisuutta, jonka voimakkuus on noin 10-ker-tainen tymopentiinin tai spleniinin aktiivisuuteen verrat- '· 25 tuna.
Keksinnön mukaisesti valmistettavat peptidit, joissa W on PRO, dehydro-PRO tai AIB, ovat hämmästyttävän kestäviä sellaiselle entsyymien hajotusvaikutukselle, joka on esitetty edellä mainitussa US-patenttihakemuksessa.
30 Edullisia keksinnön mukaisesti valmistettuja pepti- • dejä ovat sellaiset kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa W on PRO. Kaikkein edullisimpia peptidejä ovat H-ARG-LYS-ASP-VAL-PHE-OH, H-ARG-LYS-ASP-VAL-HIS-OH, H-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH, H-ARG-PRO-ASP-VAL-HIS-OH ja a-asetyyli-ARG- 35 PRO-ASP-VAL-PHE-NH2.
92325 3 Näiden peptidien kanssa suoloja muodostavista hapoista mainittakoon epäorgaaniset hapot, kuten kloorivety-happo, bromivetyhappo, perkloorihappo, typpihappo, tiosy-aanihappo, rikkihappo, fosforihappo ym. ja orgaaniset ha-5 pot, kuten muurahaishappo, etikkahappo, propionihappo, glykolihappo, maitohappo, palorypälehappo, oksaalihappo, malonihappo, meripihkahappo, maleiinihappo, fumaarihappo, antraniilihappo, kaneelihappo, naftaleenisulfonihappo, sulfaniilihappo ym.
10 Näiden peptidien kanssa suoloja muodostavista emäk sistä mainittakoon epäorgaaniset emäkset, kuten natrium-hydroksidi, kaliumhydroksidi ym. ja orgaaniset emäkset, kuten mono-, di- ja trialkyyli- ja -aryyliamiinit (esim. trietyleeniamiini, di-isopropyyliamiini, metyyliamiini, 15 dimetyyliamiini ym.) ja mahdollisesti substituoidut etano-liamiinit (esim. etanoliamiini, dietanoliamiini ym.).
Koko tässä hakemuksessa peptidien ja tiettyjen niiden valmistuksessa käytettyjen materiaalien aminohappokom-ponenteista käytetään mukavuussyistä lyhenteitä. Nämä ly-20 henteet ovat seuraavat:
Aminohappo Lyhenne
L-alaniini ALA
D-alaniini D-ALA
L-arginiini ARG
·'? 25 D-arginiini D-ARG
L-asparagiinihappo ASP
D-asparagiinihappo D-ASP
L-glutamiinihappo GLU
D-glutamiinihappo D-GLU
30 L-glutamiini GLN
: D-glutamiini D-GLN
L-histidiini HIS
D-Histidiini D-HIS
L-isoleusiini ILE
35 D-isoleusiini D-ILE
92325 4
L-Leusiini LEU
D-leusiini D-LAU
L-lysiini LYS
D-lysiini D-LYS
5 α-aminoisobutyryyli AIB
L-fenyylialaniini PHE
D-fenyylialaniini D-PHE
L-proliini PRO
L-tryptofaani TRP
10 D-tryptofaani D-TRP
L-valiini VAL
D-valiini D-VAL
Keksinnön mukaisia peptidejä voidaan yleisesti valmistaa tunnetuilla menetelmillä. Keksinnön mukaiselle me-15 netelmälle on tunnusomaista, että suoritetaan kiinteäfaa-sisynteesi sinänsä tunnetulla tavalla. Peptidejä voidaan sopivasti valmistaa käyttäen kiinteäfaasisynteesitekniik-kaa, jonka alunperin kuvasi Merrifield: JACS 85, 2149-2154 (1963). Tällaisia menetelmiä sisältyy myös joihinkin edel-20 lä viitatuista aikaisemmista patenteista. Muita menetelmiä löytyy esimerkiksi teoksessa: M. Bodanszky et ai.. Peptide Synthesis, John Wiley & Sons, 2. painos, 1976, sekä muissa alaa käsittelevissä teoksissa. Näissä synteeseissä käytettäviksi sopivia suojaryhmiä ja niiden lyhenteet on esitet-*' 25 ty edellä mainitussa teoksessa sekä teoksessa: J.F.W.
McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, New York, 1973. Molemmat kirjat liitetään tähän viitteenä. Tässä käytetyt tavalliset suojaryhmät ovat tert-butyylioksikar-bonyyli (BOC), bentsyyli (BZL), tert-amyylioksikarbonyyli 30 (AOC), tosyyli (TOS), o-bromifenyylimetoksikarbonyyli : (BrZ), 2,6-diklooribentsyyli (BZLC12) ja fenyylimetoksikar- bonyyli (Z tai CBZ).
Keksinnön mukaisesti valmistetuilla peptideillä on havaittu olevan samankaltaista biologista aktiivisuutta 35 kuin edellä mainituissa US-patenttijulkaisuissa ja artik- 92325 5 keleissä esitetyllä tymopoietiinilla. Tämä biologinen aktiivisuus on osoitettu kokeella, jossa mitataan vaikutus ihmisen T-solulinjassa aikaan saatuun syklisen-GMP:n tuottoon verrattuna vastaavaan tuottoon tymopoietiinilla. Koe-5 peptidin vaikutus c-GMP:n tuottoon tässä kokeessa osoittaa koepeptidin kykyä sitoutua solun tymopoietiini-respektori-kohtaan ja vaikuttaa tymopoietiinin kaltaisella biologisella aktiivisuudella. Kuten jäljempänä esitetyistä tuloksista voidaan nähdä, valmistettavien peptidien vaikutus on 10 jopa noin 10-kertainen tymopoietiinin vaikutukseen verrat tuna ja niistä saatu etu on siten merkitsevä. Kun peptidien valmistus on kallista ja niiden on usein havaittu nopeasti hajoavan elävässä systeemissä, niin keksinnön mukaisesti valmistetut peptidit, joilla on parantunut teho, 15 ovat erittäin arvokkaita.
Näillä biologisesti aktiivisilla peptideillä on myös osoitettu olevan kyky sitoutua solumembraaniresepto-riin, tymopoietiinille aktiiviseen kohteen.
Ennen esillä olevaa keksintöä ei ollut odotettavis-20 sa, että pystyttäisiin valmistamaan peptidejä, joiden teho verrattuna symopentiinin tehoon on näin paljon suurempi, korvaamalla 5-asemassa oleva aminohappo, fenyylialaniinil-la tai histidiillä. Edellä esitetyissä viitejulkaisuissa on yleisesti osoitettu olevan välttämätöntä, että 5-ase-’· 25 massa on tyrosiinitähde tai tyrosiinin kaltainen aminohappotähde. Alalla ei ole missään ehdotettu, että näin huomattavasti parantunut teho voitaisiin saavuttaa käyttämällä tässä keksinnössä esitettyjä peptidejä.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettujen 30 peptidien immunosäätelyominaisuudet tekevät käyttökelpoi-: siksi ihmisten ja eläinten käsittelyyn, sillä niillä on kyky aiheuttaa lymfopoieettisten kantasolujen differenti-oitumista hemopoieettisissa kudoksissa kateenkorvajohtoi-siksi soluiksi (T-solut), jotka pystyvät vaikuttamaan ke-35 hon immunovasteeseen. Tästä seuraa, että keksinnön mukai- 92325 6 silla peptideillä katsotaan olevan monenlaista terapeuttista käyttöä.
Ensisijaisesti, yhdisteiden pystyessä suorittamaan tiettyjä kateenkorvan funktioita, niillä on käyttöä eri-5 laisissa kateenkorvan funktioiden ja immuniteetin aloilla. Eräs tällainen käyttö on DiGeorgen oireyhtymän käsittely, joka oireyhtymä aiheutuu synnynnäisestä kateenkorvan puuttumisesta. Antamalla DiGeorge-oireyhtymää sairastavalle potilaalle jotakin keksinnön mukaisista peptideistä tätä 10 puutosta lievitetään. Immunologian asiantuntija pystyy helposti määräämään sopivan lääkkeenantotavan (edullisesti parenteraalisesti) ja keksinnön mukaisten peptidien tehokkaan määrän DiGeorge-oireyhtymän käsittelyssä. Koska valmistettavat peptidit ovat tehokkaampia kuin tymopentiini, 15 niin ne ovat terapeuttisesti käyttökelpoisempia kuin alalla aikaisemmin käytetyt peptidit.
Lisäksi keksinnön mukaisesti valmistettuja peptidejä pidetään käyttökelpoisina kehon kollektiivisen immuniteetin parantamisessa, koska ne lisäävät tai parantavat 20 soluimmuniteetin terapeuttista stimulaatiota ja ovat siten käyttökelpoisia käsiteltäessä tauteja, joissa esiintyy krooninen infektio, kuten sieni- tai mykoplasmainfektiot, tuberkuloosi, lepra, akuutit ja krooniset sekä virusinfektiot tai muut sen kaltaiset.
- 25 Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä pide tään käyttökelpoisina millä tahansa sellaisella alueella, joka liittyy soluimmuniteettiin ja varsinkin immuniteetin puutteeseen, kuten edellä mainitussa DiGeorge-oireyhtymäs-sä. Siten milloin T-solujen ja B-solujen epätasapainon 30 johdosta vasta-aineita tuotetaan liikaa, peptidit voivat • korjata tämän tilan stimuloimalla T-solujen tuottamista.
Niiden odotetaan siten olevan terapeuttisesti käyttökelpoisia tiettyjen sellaisten autoimmuunitautien käsittelyssä, joissa syntyy vaurioita aiheuttavia vasta-aineita; 35 tällaisia tauteja ovat esimerkiksi syteeminen lupus eryt- 92525 7 hematosis, nivelreuma ym.
Laajimmassa käytössään keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet sopivat säätelemään sellaisen ihmis-tai eläinkohteen immuunisysteemiä, joka on tällaisen sää-5 telyn tarpeessa. Tässä käytettynä ilmaisu "säätely" tarkoittaa, että kyseessä olevat yhdisteet saavat aikaan immuunisysteemin palautumisen abnormista sairaustilasta normaaliin tasapainotilaan. Kun tällä säätelyllä saattaa olla suurta käyttöä korjattaessa immunologisia puutoksia (esim. 10 DiGeorge-oireyhtymä), niin sillä on myös käyttöä korjattaessa liiallisen immunologisen aktiivisuuden aiheuttamia tiloja (esim. autoimmuunitaudit).
Tässä esitetään menetelmä sellaisten tautitilojen käsittelemiseksi, jotka johtuvat potilaan (ihminen tai 15 eläin) suhteellisesta tai absoluuttisesta T-solujen tai B-solujen puutoksista, antamalla tällaisesta tilasta kärsivälle potilaalle terapeuttisesti vaikuttava määrä kaavan (I) mukaista peptidiä. Esitetään myös menetelmä sellaisten tilojen käsittelemiseksi, jotka johtuvat potilaan kateen-20 korvan suhteellisesta tai absoluuttisesta defektistä, antamalla potilaalle terapeuttisesti vaikuttava määrä kaavan (I) mukaista peptidiä. Tässä käytettynä ilmaisu "terapeuttisesti vaikuttava määrä" tarkoittaa määrää, joka vaikuttaa tehokkaasti tiloissa, jotka johtuvat T-solujen tai B-25 solujen puutoksista tai vastaavasti kateenkorvan defektistä. Kuvataan myös menetelmä hoidon kohteen lymfopoieettis-ten kantasolujen indusoimiseksi kehittämään kateenkorva-johtoisille lymfosyyteille tunnusomaiset ominaisuudet, jossa menetelmässä hoitoa tarvitsevalle kohteelle annetaan 30 tehokas indusoiva määrä kaavan (I) mukaista peptidiä. Esitetään lisäksi menetelmä kohteen prekursori-B-solujen indusoimiseksi tarkoituksella kehittää kypsiä B-soluja, jossa menetelmässä kohteelle annetaan vaikuttava määrä kaavan (I) mukaista peptidiä.
35 Farmaseuttisten koostumusten valmistamiseksi kaavan 92325 8 I mukainen peptidi tai sen emäs- tai happoadditiosuola aktiivisena aineena yhdistetään intiimiksi seokseksi farmaseuttisen kantaja-aineen kanssa noudattaen tavanomaista farmaseuttisten koostumusten valmistustekniikkaa. Kantaja-5 aine riippuu lääkeantoon tarkoitetun valmisteen muodosta, joka voi olla sopiva esimerkiksi sublinguaaliseen, rektaa-liseen, nasaaliseen, oraaliseen tai parenteraaliseen lääkeantoon. Valmistettaessa koostumuksia oraaliseen annos-muotoon, voidaan käyttää mitä tahansa tavallisia farma-10 seuttisia väliaineita, kuten esimerkiksi vettä, öljyjä, alkoholeja, makuaineita, säilöntäaineita, värejä ym., kun kyseessä ovat oraaliset nestekoostumukset (esim. suspensiot, eliksiirit ja liuokset) tai kantaja-aineita, kuten tärkkelyksiä, sokereita, laimennusaineita, rakeistusainei-15 ta, voiteluaineita, sideaineita, hajoamista edistäviä aineita, kun kyseessä ovat kiinteät oraaliset valmisteet (esim. jauheet, kapselit ja tabletit). Säädetysti lääkeainetta vapauttavia valmistemuotoja voidaan myös käyttää. Annostuksen helppouden vuoksi tabletit ja kapselit edus-20 tavat edullisinta annosyksikkömuotoa, jolloin tietenkin käytetään kiinteitä farmaseuttisia kantaja-aineita. Haluttaessa tabletit voidaan päällystää sokerilla tai entero-päällysteellä käyttäen standardimenetelmiä.
Parenteraalisiin tuotteisiin käytetään kantaja-ai-25 neena tavallisesti vettä, vaikka myös muita aineosia voidaan lisätä liukoisuuden tai säilyvyyden parantamiseksi (esimerkiksi). Voidaan myös valmistaa injektoitavia suspensioita, jossa tapauksessa voidaan käyttää sopivia nestemäisiä kantaja-aineita, suspendointiaineita ym.
30 Kuvatut peptidit ovat yleensä aktiivisia parente- raalisesti annettuina määrinä noin 1 pg/kehonpaino-kg. DiGeorge-oireyhtymän käsittelyssä peptidejä voidaan antaa parenteraalisesti noin 0,1 - 10 mg/kehonpaino-kg. Samaa suuruusluokkaa olevia annoksia voidaan yleensä käyttää 35 käsiteltäessä muita edellä mainittuja sairauksia tai ti- 92325 9 loja, joissa käsittelyn kohteena on immuniteetin puutos. Suuremmat määrät (esim. noin 10-1 000 mg/kehonpaino-kg) ovat sopivia liiallisen immuuniaktiivisuuden tukahduttamiseen.
5 Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on valaista keksintöä. Esimerkeissä ja kaikkialla selityksessä osat ovat paino-osia, jollei muuta ole osoitettu.
Esimerkki I
Arginyyli-lysyyli-aspartyyli-valyyli-fenyylialanii-10 ni, solvatoitu BOC-PHE-0-CH2-hartsi
Kloorimetyloitua hartsia (1,04 mmol Cl/g; 5 g) ja vedetöntä KF (0,44 g, 7,5 mmol) lisättiin BOC-PHE-OHsn (1,33 g, 5 mmol) liuokseen DMF:ssä (40 ml) pyöreäpohjäisessä kolvissa, joka oli varustettu mekaanisella sekoit-15 tajalla. Reaktioseosta sekoitettiin 65 °C:ssa 24 tuntia. Hartsi suodatettiin ja pestiin perusteellisesti DMF:llä, DMF/H20-seoksella (1:1), H20:lla, EtOH/H20-seoksella (1:1), EtOH:lla ja CH2Cl2:lla. Aminohappoanalyysin mukaan BOC PHE-0H:n substituutio hartsilla oli 0,545 mmol/g hartsia.
20 ARG-LYS-ASP-VAL-PHE
Z-ARG(Z,Z)-LYS(Z)-ASP(·BZL)-VAL-PHE-OCH2-hartsi koottiin käsin kiinteäfaasimenetelmällä. Aminohappojohdannaisia ja DCC:tä käytettiin 3-kertaisena ylimääränä seu-raaviin kytkentöihin: Z-ARG(Z,Z)-OH, BOC-LYS(Z)-OH, BOC-’· 25 ASP(·BZL)-OH ja BOC-VAL-OH. Peptidi-hartsi (3,1 g) pilkot tiin sitten käsittelemällä HF/anisolilla (9:1, 30 ml) tunnin ajan 0 °C:ssa. HF/anisolin poistamisen jälkeen pepti-di-hartsiseos suodatettiin ja pestiin eetterillä (3 x 20 ml). Peptidi uutettiin 5-%:isella H0Ac/H20:lla (3 x 50 ml) 30 ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 800 mg tuotetta. Raaka-: peptidi puhdistettiin Sephadex-SPC-25 kolonnissa (80 x 2,5 cm), joka oli tasapainotettu 0,2-m NH2OAc-liuoksella, pH 5. Virtausnopeus oli 85 ml/h ja fraktioita koottiin 10 ml/ putki. Haluttu peptidi saatiin putkissa 145 167. Nämä 35 fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 92325 10 750 mg materiaalia. Tämä peptidi kromatografoitiin edelleen Sephadex G-10 kolonnissa (80 x 2,5 cm) käyttäen H20:ta. Virtausnopeus oli 18 ml/h ja fraktioita koottiin 10 ml/putki. Otsikon peptidi saatiin putkissa 21-26.
5 Ohutkerroskromatografia (Silica Gel F60, 20 μιη)
Rf 0,23 (n-BuOH/HOAc/H20 = 4:1:1)
Rf 0,11 (NH4OH/2-propanoli = 37:84)
Aminohappoanalyysi:
Arg 1,04, Lys 1,00, Asp 1,04, Val 0,97 ja Phe 1,00 10 peptidipitoisuus: 88 % HPLC: Whatman Partisil-ODS-1 kolonni 10-%:inen CH3OH/0,02-m KH2P04, pH 3,5 Virtausnopeus: 2 ml/min Retentioaika: 8,10 min.
15 Esimerkki II
N°-asetyyli-arginyyli-prolyyli-aspartyyli-valyyli-fenyylialaniini
Otsikon peptidi syntetisoitiin kiinteäfaasimenetel-mällä käyttäen BOC-PHE Merrifield-hartsia (12,03 g, 0,51 20 mekv/g). Hartsi kytkettiin peräkkäin kolmen ekvivalentin kanssa seuraavia: BOC-VAL, BOC-0-BZL-ASP ja BOC-PRO. Kyt-kentäaineena käytettiin koko synteesin ajan 1:1 DCC:HOBT CH2Cl2:DMF-seoksessa 4:1.
Noin 1/3 tästä tetrapeptidistä pantiin syrjään.
"· 25 Loppuosa kytkettiin edellä olevissa kytkentäolosuhteissa N9-TOS-N“-AOC-ARG: iin.
Noin 1/2 tästä pentapeptidistä pantiin syrjään. Loppuosaa käsiteltiin TFA:lla ja sitten neutraloitiin DIEA:lla. Seosta käsiteltiin sitten Ac20:lla (3 ml) ja 30 DMAP:llä (0,3 g) CH2Cl2:ssa (40 ml) 60 minuuttia. Hartsi « • pestiin, kuivattiin ja pilkottiin HF:n (40 ml) ja anisolin (10 ml) seoksessa 0 °C:ssa 60 minuuttia. Jäännöksenä olevat kiinteät aineet uutettiin 10-%:isella HOAc:llä ja lyo-filisoitiin, jolloin saatiin 1,36 g raakapeptidiä.
35 Raakapeptidi puhdistettiin Sephadex DEAE kolonnissa 92325 11 (2,6 x 90 cm); 0,05-m NH4HC03, pH 5 (3,5 1) 100 ml/h virtausnopeus, 13 ml fraktiot, 206 nm detektori. Fraktiot 170-205 koottiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 830 mg otsikon yhdistettä.
5 TLC: silikageeli, 250 μπι
Liuotin Rf 5:5:3:1 EtOAc: pyr: H20: HOAc 0,38 4:1:5 nBuOH:HOAc:H20, ylempi faasi 0,41 1:1 trifluorietanoli:NH4OH 0,75 10 aminohappoanalyysi:
Arg 1,02, Pro 0,98, Asp 0,97, Vai 1,02, Phe 1,01
Peptidipitoisuus: 65,3 %.
Esimerkki III
N“-formyyli-arginyyli-propyyli-aspartyyli-valyyli- 15 fenyylialaniini
Otsikon peptidi valmistettiin kiinteäfaasimenetel-mällä käyttäen lähtöaineena esimerkin II (N9-TOS-N -AOC)-ARG-PRO-(P-BZL)-ASP-VAL-PHE-hartsiesteriä (noin 2 mmol). Suojaryhmät poistettiin TFA/CH2Cl2:lla (1:1) ja seos neut-20 raloitiin DIEA:lla, sitten hartsia käsiteltiin p-nitro- fenyyliformiaatilla (1,0 g) ja HOBT:lla (0,9 g) CH2C12/DMF-seoksessa (5:1, 30 ml) 16 tuntia. Hartsi pestiin ja sitä käsiteltiin jälleen p-nitrofenyyliformiaatilla (1,0 g) ja DMAP:llä (0,2 g) CH2Cl2:ssa yksi tunti.
’· 25 Formyylipeptidihartsi pilkottiin käsittelemällä HF:n (60 ml) ja anisolin (10 ml) seoksessa 0 °C:ssa tunnin ajan. Jäännöksenä saatuja kiinteitä aineita käsiteltiin 0,2-%:isella NH40H:lla, uute lyofilisoitiin, jolloin saatiin 1,00 g väritöntä kiinteää ainetta.
30 Peptidi puhdistettiin Sephadex DEAE-kolonnissa (2,6 : x 90 cm): 0,1-m NH4HC03, pH 7,5, virtausnopeus 100 ml/h, 13 ml fraktiot, 206 nm detektori. Koottiin fraktiot 105-130, ne lyofilisoitiin, jolloin saatiin 675 mg väritöntä kiinteää otsikon yhdistettä.
35 TLC: Silikageeli, 250 μπι.
92325 12
Liuotin Rf 5:5:3:1 EtOAc: pyr: H20: HOAc 0,59 4:1:5 nBuOH:HOAc:H20 0,40 15:3:12:10 mBuOH:HOAc:H20:pyr 0,59 5 Aminohappoanalyysi:
Arg 1,01, Pro 1,00, Asp 1,00, Vai 0,98, Phe 1,00 Peptidipitoisuus: 78,5 %
Esimerkki IV
Arginyyli-prolyyli-aspartyyli-valyyli-fenyyliala- 10 niini
Otsikon yhdiste syntetisoitiin kiinteäfaasimenetel-mällä käyttäen lähtöaineena BOC-PHE Merrifield-hartsia (8,06 g, 0,5 mekv/g). Hartsi kytkettiin peräkkäin kolmen ekvivalentin kanssa seuraavia: BOC-VAL (kerran käyttäen 15 DCC/4-pyrrolidinopyridiiniä ja uudelleen käyttäen DCC/ HOBT:ä), BOC-P-BZL-ASP (DCC/HOBT), BOC-PRO (DCC/HOBT) ja Ng-TOS-Na-AOC-ARG (DCC/HOBT). Liuottimena oli koko ajan CH2C12/DMF 4:1.
Noin puolet tästä hartsista kuivattiin ja pilkot-20 tiin käsittelemällä HF:n (40 ml), anisolin (10 ml) ja mer-kaptoetanolin (1 ml) seoksessa 0 °C:ssa tunnin ajan. Jäännöksenä saadut kiinteät aineet uutettiin 10-%:isella HOAc:11a ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 1,34 g raaka-peptidiä.
: 25 Raakapeptidi puhdistettiin Sephadex CM 25 -kolon nissa (2,6 x 90 cm), gradienttieluointi: 0,05-m NH4OAc, pH 5 (2,1 1) - 0,3-m NH4OAc, pH 5 (2,1 1), virtausnopeus 100 ml/h, 13 ml fraktiot, 206 nm detektori. Fraktiot 61 - 100 koottiin ja lyofilisoitiin. Kiinteä aine kromatografoitiin v . 30 G-10 Sephadex -kolonnissa (eluointi l-%:isella HOAc:llä), tuotetta sisältävät fraktiot koottiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 780 mg otsikon yhdistettä.
TLCs Silikageeli G, 250 μιη Liuotin Rf 35 5:5:3:1 EtOAc: pyr: H20: HOAc 0,38 92325 13 4:1:5 n-BuOH:HOAc:H20, ylempi faasi 0,25 1:1 trifluorietanoli:NH4OH 0,71
Aminohappoanalyysi:
Arg 1,00, Pro 1,00, Asp 1,00, Val 1,03, Phe 0,96 5 Peptidipitoisuus: 61 %.
Edellä olevat esimerkit on esitetty keksinnön kohteen valaisemiseksi.
Esimerkki V
Arginyyli-lysyyli-aspartyyli-valyyli-histidiini, 10 solvatoitu
Otsikon yhdiste syntetisoitiin kiinteäfaasimenetel-mällä käyttäen lähtöaineena BOC-(im-TOS)-histidiiniä kiinnitettynä Merrifield-hartsiin, substituutiotaso 0,12 mmol/ g. Pesusarja oli seuraava: 15 Määrä x Aika kertoja 1) 50-%:inen TFA/CH2C12 75 x 1 1 min 2) 50-%: inen TFA/CH2C12 75 x 1 20 min 3) CH2C12 75 x 3 1 min 20 4) 25-%:inen (CH3)2CH0H/CH2C12 75 x 3 1 min 5) CH2C12 75 x 3 1 min 6) 5-%:inen di-isopropyylietyyli- amiini/CH2Cl2 75/1 1 min 7) CH2C12 75 x 3 1 min • 25 8) sama kuin 6) 75 x 1 1 min 9) CH2C12 75 x 3 1 min 10) kytkentävaihe
Kaikki kytkentäreaktiot, paitsi valiinin liittäminen, suoritettiin käyttäen symmetristä anhydridiä. Symmet-. 30 rinen anhydridi syntetisoitiin käyttäen aminohapon johdan naista ja DCC:ä (moolisuhde 2:1) CH2Cl2:ssa 0 °C:ssa. Di-sykloheksyyliurea suodatettiin pois ja suodos lisättiin kiinteätaasireaktioastiaan.
92325 14
Aminohappo Määrä mmol Toimittaja Erä nro
Boc-valiini 4,0 g 18,00 Bachem R4544
Boc-valiini 4,0 g 18,00 Bachem R4544
Boc-valiini 2,0 g 9,00 Bachem R4544 5 Βοσ-β-bentsyyli-Asp 3,22 g 10,00 Bachem R5291 n“-Boc-N*-CBZ-Lys 3,81 g 10,00 Bachem R4651
Na-CBZ -Νγ 'AdiCBZ-Arg 2,9 g 5,00 Bachem R5931
Huomautuksia: 1. Boc-valiinin kolmas kytkentä suoritettiin käyt-10 täen disykloheksyylikarbodi-imidiä (9,00 mmol) ja 1-hyd- roksibentsotiratsolimonohydraattia (9,00 mmol) dimetyyli-formamidin (20 ml) ja metyleenikloridin (30 ml) seoksessa.
2. Boc-valiinin kolmannen kytkennän jälkeen hartsi-peptidi asetyloitiin 5-%:isella etikkahappoanhydridillä 15 CH2Cl2:ssa (100 ml), jossa oli 100 mg 4-dimetyyliaminopy-ridiiniä.
3. Asetyloinnin jälkeen hartsipeptidi jaettiin kahtia.
4. Lysiinitähteen suojaryhmän poiston ja neutra-20 loinnin jälkeen hartsipeptidi jaettiin kahtia.
Hartsipeptidin saanto oli 6,7 g. Suojaryhmä poistettiin käsittelemällä HF:llä (60 ml) käyttäen anisolia (3 ml) puhdistajana.
HF ja anisoli poistettiin alennetussa paineessa ja 25 jäännöstä trituroitiin dietyylieetterissä, jäännös suodatettiin, pestiin dietyylieetterillä ja uutettiin 50-%:i-sella TFA/CH2C12:11a (4 x 25 ml). Uutteet yhdistettiin, liuottimet poistettiin alennetussa paineessa ja jäännöstä trituroitiin dietyylieetterissä. Saatu kiinteä aine suo-. 30 datettiin, pestiin dietyylieetterillä ja kuivattiin vakuu-missa huoneen lämpötilassa yön yli, jolloin saatiin 1,84 g raakapeptidiä.
1,0 g raakapeptidiä kromatografoitiin Sephadex C-25 kolonnissa (2,6 x 95 cm) käyttäen eluointiin 0,2-m NH4CH3C02 35 (pH 6,0). Virtausnopeus oli 90 ml/h ja fraktioita koottiin
II
92325 15 7.5 minuutin välein. 200 fraktion jälkeen puskuriksi vaihdettiin 0,25-m NH4CH3C02 (pH 7,0). Fraktiot 240-280 yhdistettiin ja lyofilisoitiin. Lyofilisointi suoritettiin kaksi kertaa vedestä, jolloin saatiin 0,8 g tuotetta. Se kro- 5 matografoitiin Sephadex G-10 kolonneissa (2 peräkkäistä 2.6 x 95 cm kolonnia) käyttäen eluointiin vettä. Virtausnopeus oli 40 ml/h ja fraktiot olivat kukin 150 tippaa (6,5 ml). Fraktiot 78-87 yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 286 mg otsikon yhdistettä. TLC silikageeli 10 G250 (J.T. Baker 5 x 20 cm), täplitetty 40 pg.
Liuotinsysteemi Rf n-butanoli/etikkahappo/vesi (1:1:1) 0,23 n-butanoli/etikkahappo/vesi/pyridiini (4:2:3:1) 0,29 kloroformi/metanoli/väkevä NH40H (2:2:1) 0,23 15 HPLC:n mukaan puhtausaste oli 99,4 %.
Aminohappoanalyysi Laskettu Saatu
Arg 1,0 1,03
Lys 1,0 1,00
Asp 1,0 0,95 20 Vai 1,0 1,02
His 1,0 0,99 76,1 % peptidiä
Optinen kiertokyky /**/2 2 = -32,9° (c = 0,1124 1-m H0Ac:ssä) Esimerkki VI
’ 25 Asetyyli-arginyyli-a-aminoisobutyryyli-aspartyy- livalyyli-fenyylialaniiniamidi, solvatoitu A. TFA Asp(OBzl)-Val-Phe-NH-MBHA-hartsi p-metyylibentshydryyliamiinihartsi (70 g, 0,3 mmol/ g hartsia) sai turvota CH2Cl2:ssa tunnin ajan. Boc-Phe, ; 30 Boc-Val ja Boc-Asp(OBzl)-0H liitettiin hartsiin DCC-kyt-kentää käyttäen. N-päätteen Boc-ryhmä poistettiin ja pep-tidihartsi kuivattiin; sitä käytettiin muiden peptidien synteesiin.
B. Ac-Ara-Aib-Asp-Val-Phe-NH, 35 TFA Asp(OBzl)-Val-Phe-NH-MBHA-hartsi (6 g) kytket tiin Boc-Aib:iin ja sitten Aoc-Arg(Tos)-OH:hon käyttäen 92325 16 DCC/HOBt-kytkentää. Aoc-ryhmä poistettiin Arg:sta ja peptidi-hartsi asetyloitiin Ac20/pyridiinillä (1:1). Peptidi-hartsi (5 g) pilkottiin sitten HF/anisolilla (9:1, 50 ml) 0 eC:ssa tunnin aikana. Peptidi uutettiin 5-%:isella HOAc/ 5 H20:lla (3 x 50 ml) ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 570 mg kiinteää ainetta. Raakapeptidi kromatografoitiin Sepha-dex DEAE-kolonnissa (80 x 2,5 cm), joka oli tasapainotettu puskuroimattomalla 0,05-m (NH4)HC03:lla. Virtausnopeus oli 85 ml/h ja koottiin 10 ml:n fraktioita. Peptidi eluoitui 10 putkiin 35-48 ja tämä fraktio lyofilisoitiin, jolloin saatiin 450 mg tuotetta.
Ohutkerroskromatografia (Silica Gel F60, 20 pm)
RfI 0,45 (NH4OH/isopropanoli » 37:84)
RfII 0,25 (n-Bu0H/H0Ac/H20 = 3:1:1) 15 Aminohappoanalyysi:
Arg 1,01, Aib 1,03, Asp 1,03, Vai 0,99, Phe 1,00 Peptidipitoisuus: 88,3 %
Esimerkki VII
Asetyyli-arginyyli-prolyyli-aspartyyli-valyyli-fe-20 nyylialaniini-amidi, solvatoitu
Ac-Arg(Tos)-Pro-Asp(OBzl)-Val-Phe-NH-MBHA-hartsi syntetisoitiin käyttäen lähtöaineena p-metyylibentshydryy-liamiini-hartsia (10 g, subst. 0,3 mmol NH2/g hartsia). Aminohappojohdannaisia ja DCC:tä käytettiin seuraaviin ' 25 kytkentäreaktioihin 3-kertaisena ylimääränä: Aoc-Arg- (Tos)-OH, Boc-Pro, Boc-Asp(OBzl)-OH, Boc-Val ja Boc-Phe. Peptidi-hartsi (4 g) pilkottiin sitten käsittelemällä HF/anisolilla (9:1, 40 ml) tunnin ajan 0 °C:ssa. HF/aniso-li poistettiin, seos suodatettiin ja pestiin eetterillä .30 (3 x 30 ml). Peptidi uutettiin 5-%:isella H0Ac/H20:lla (3 x 50 ml) ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 315 mg tuotetta. Raakapeptidi puhdistettiin sitten Sephadex DEAE kolonnissa (2,5 x 80 cm), joka oli tasapainotettu 0,05-m NH4HC03:lla (puskuroimaton). Virtausnopeus oli 85 ml/h, ja 35 fraktioita koottiin 12 ml/putki. Haluttu peptidi eluoitui putkiin 30-40. Tämä fraktio lyofilisoitiin, jolloin saa- li 92325 17 tiin 300 mg tuotetta.
Ohutkerroskromatografia (Silica Gel F60, 200 pg)
RfI 0,55 (NH40H/isopropanoli = 37:84)
RfII 0,3 (n-Bu0H/H0Ac/H20 = 3:1:1) 5 Aminohappoanalyysi:
Arg 1,00, Pro 0,99, Asp 0,99, Vai 1,00, Phe 1,00 Peptidipitoisuus: 57,5 %.
Esimerkki VIII
Syklinen-GMP-koe 10 Tässä kokeessa mitataan koepeptidin kyky sitoutua intaktin CEM-solun solumembraanireseptoriin ja selektiivisesti stimuloida syklisen-GMP:n tuottamista siten kuin itse tymopoietiini.
CEM-solulinja saatiin laitoksesta American Type 15 Culture Collection ja sitä viljeltiin RPMI-1640-väliai-neessa, johon oli lisätty 10 % kuumentamalla inaktivoitua naudansikiöseerumia, 10 % kuumentamalla inaktivoitua hevosen seerumia, 2 mmol/kg L-glutamiinia ja 50 g/ml gentamy-siiniä, 37 °C:ssa kosteassa ilmakehässä, joka sisälsi 5 % 20 C02/ loppupitoisuuteen 3-4 x 106 solua/ml. Tässä konsent- raatiossa solut olivat kasvukäyrän aikaisessa stationaa-risessa vaiheessa ja niiden arvioitiin tryptaanisinieks-kluusiomenetelmällä olevan yli 10-%:isesti eläviä. Soluja viljeltiin neljä vuorokautta, sitten solut koottiin. Koo-25 tut solut pestiin kolme kertaa PBS:llä ja suspendoitiin jälleen RPMI-1640-väliaineeseen konsentraatioksi 3,12 x 107 solua/ml. Solujen annettiin tasapainottua 37 °C:ssa 30 minuuttia, sitten erilaisia konsentraatioita koepeptidejä 25 pl:ssa väliainetta lisättiin 1 ml:aan soluja, jolloin li-. 30 sätyn koeyhdisteen alkukonsentraatio valittiin siten, että saatiin koepeptidin haluttu loppukonsentraatio väliaineessa. Koepeptidi sekoitettiin välittömästi solususpension kanssa. Suspensiota inkuboitiin ravistusvesihauteessa 37 °C:ssa 4-5 minuuttia ja käsittely päätettiin lisäämällä 35 jääkylmää trikloorietikkahappoa (10 %, 1 ml).
92325 18
TCA:ssa olevat solut homogenoitiin ja niitä käsiteltiin ultraäänellä syklisen nukleotidin vapauttamiseksi. Muodostunut suspensio lingottiin 3 000 g:ssä 20 minuuttia 4 °C:ssa, saatu sakka liuotettiin 0,1-m NaOH-liuokseen ja 5 liuosta käsiteltiin ultraäänellä jälleen 30 minuuttia, jonka jälkeen proteiinipitoisuus määritettiin Cadman'in et ai. menetelmällä. Anal. Biochem. 96, 21-23 (1979). TCA
poistettiin päällä olevasta fraktiota uuttamalla vedellä kyllästetyllä dietyylieetterillä (4 x 5 ml). Viimeisen 10 uuton jälkeen eetteri poistettiin päällä olevasta fraktiosta kuumentamalla 10 minuuttia 50 °C:ssa vesihauteessa. Uutettu päällä oleva fraktio lyofilisoitiin ja rekonstruoitiin 50-mmolaariseen asetaattipuskuriin (pH 6,2) syklisen nukleotidin radioimmunokoetta varten, joka koe suori-15 tettiin käyttäen koepakkausta NEX-133, New England Nuclear, Boston, MA 02113.
Koepeptidin kunkin konsentraation indusoiman syklisen GMP-määrän määrittämiseksi suoritettiin tavanomainen kilpaileva radioimmunokoe radiomerkittyä syklistä GMP:tä 20 vastaan. Tulokset nähdään kuviossa 1 ja seuraavassa taulukossa, jossa on verrattu edustavia keksinnön mukaisia peptidejä ja tymopentiiniä (nimitys: "TP-5") ja "vaikuttamatonta" peptidiä H-ASP-ARG-TYR-LYS-VAL-OH. Nämä tulokset osoittavat esitettyjen peptidien ylivoimaista vaiku-’* 25 tustehoa verrattuna tymopentiinin tehoon ja ne osoittavat myös kokeen spesifisyyttä tymopentiinin kaltaisen aktiivisuuden kokeiluun.
92325 19
Taulukko 1
Tuotetun c-GMP:n konsentraatio (pikomooleina/ml)
Peptidi Peptidin konsentraatio 5 _(Pg/miJ_ 10° 101 102 103 104 105 H-ARG-LYS-ASP-VAL-TYR-OH (TP-5) 0 4,5 9 12 14-- a-acetyl-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH 7 15 -- -- ---- α-formyl-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH 0 14 -- -- ---- 10 H-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH 0 12 H-ARG-LYS-ASP-VAL-HIS-OH 0 9 -- H-ARG-LYS-ASP-VAL-PHE-OH 6 9 -- H-ASP-ARG-TYR-LYS-VAL-OH ------ 0 0 0 15 Muita edustavia yhdisteitä, joilla tässä kokeessa saatiin erittäin hyviä tuloksia, olivat: N-oo-asetyyli-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-NH2; N-ot-asetyyli-ARG-AIB-ASP-VAL-PHE-NH2.
20 Esimerkki IX
Reseptorikoe Tässä kokeessa mitataan koepeptidin kyky kilpailla merkityn tymopoietiinin kanssa sitoutua CEM-solujen eristettyihin tymopoietiinin solupintareseptoriproteiineihin.
» ’· 25 Materiaalit - CEM-solulinjat saatiin laitoksesta Ame rican Type Culture Collection. 3-nitro-2-pyridiinisulfo-nyylikloridin ja 2-pyridiinitioli-l-oksidin toimitti tri Rei Matsueda, Sanyo Laboratories, Tokio. RPMI-1640, nau-dansikiöseerumi ja L-glutamiini saatiin firmasta Gibco, .30 gentamysiini firmasta Schering ja lektiini-kytketyt aga-roosihelmet toimitti Vector Laboratories. Sephadexin toimitti Pharmacia Fine Chemicals ja ihmis-IgG:n Miles Laboratories. Kaikki muut kemikaalit hankittiin tavallisilta kaupallisilta toimittajilta ja ne olivat reagenssilaatua. 35 Kaniiniantitymopoietiinivasta-aine ja ubikitiini tuotet- 92325 20 tiin tunnetuilla menetelmillä.
Käytetyt lyhenteet ovat: PBS = fosfaattipuskuroitu suolaliuos, TCA = trikloorietikkahappo, SDS = natriumodo-dekyylisulfaatti, Con A konkanaviliini A, TP = tymopoie-5 tiini, PEG = polyetyleeniglykoli, BSA = naudan seerumial- bumiini, IP = intraperitoneaalinen, PMSF = fenyylimetyyli-sulfonyylifluoridi, FTS = facteur thymic serique, CRF = kortikotropiinia vapauttava tekijä, ACTH = adrenokortiko-trooppinen hormoni, Hepes = N-2-hydroksietyylipiperatsii-10 ni-N-2-etaanisulfonihappo.
Membraanialvkoproteiinin valmistus - CEM-ihmislymfoi-disolulinjaa viljeltiin RPMI-1640-väliaineessa, jossa oli lisänä 10 % kuumentamalla inaktivoitua naudansikiöseeru-mia, 2 mmol/kg L-glutamiinia ja 10 pg/ml gentamysiiniä, 37 15 °C:ssa kosteassa atmosfäärissä, joka sisälsi 5 % C02, lop- pupitoisuuteen 3-4 x 106 solua/ml. Tässä konsentraatiossa solut olivat kasvukäyrän aikaisessa stationaarisessa vaiheessa ja niiden arvioitiin trypaasiniekskluusiokokeen perusteella olevan yli 90-%risesti eläviä.
20 Membraaniglykoproteiinit valmistettiin modifioimalla
Hedon et ai. esittämää tekniikkaa, Biochem. 20, 3385-3393 (1981). Solut pestiin kerran PBS:llä ja suspendoitiin sitten liuokseen, joka sisälsi 40 % sakkaroosia, 50 mmol/kg Hepes:iä, 1 % EDTArta, 0,1 % 0-fenantroliinia ja 1 mmol/kg 25 PMSF (metanolissa), pH 7,8; suspensio homogenoitiin lasi-homogenaattorissa huoneen lämpötilassa. Koko suspensiota käsiteltiin sitten solun hajotus-ultraäänilaitteella, jossa oli kuppi-sarviliite (malli W-225R) 35 °C:ssa 10 minuuttia. Suspensio lingottiin 600 g:ssa 10 minuuttia ,30 4 °C:ssa Sorval GLC-3-sentrifugissa ja supernatantti lin gottiin uudelleen 20 000 g:ssä Sorval 5 B sentrifugissa 4 °C:ssa kolme minuuttia. Muodostuneesta pelletistä saatu raakamembraanifraktio suspendoitiin liuokseen, joka sisälsi 50 mmol/kg Hepes:iä, 10 mmol/kg MgS04 ja 1 mmol/kg PMSF, 35 pH 7,8, loppukonsentraatioksi 5 mg/ml. Proteiini solubi-
II
92325 21 loitiin sekoittamalla suspensiota 2 tuntia 25 °C:ssa l-%:isessa Triton X-100 -liuoksessa (loppukonsentraatio), joka sisälsi 0,1 % Brij-96 (polyoksietyleeni(10)oleyylies-teri) (loppukonsentraatio). Suspensio lingottiin 200 000 5 g:ssä kaksi tuntia 4 °C:ssa ja supernatanttia säilytettiin -70 °C:ssa. Liukoisen proteiinin konsentraatio mitattiin Cadman'in et ai. menetelmällä käyttäen BSA:ta standardina ja puskuria kontrollina.
Reseptoriproteiinin puhdistamiseen käytettiin vehnän-10 alkio-agglutiniinia tai Ricinus communis -kasvin aggluti-niini-I:tä. Kaikkia lektiinihelmiä säilytettiin vastaavien monosakkaridi-inhibiittorien (300 mmol) kanssa 4 eC:ssa.
Kutakin puhdistusta varten 2 ml lektiini-agaroosia pakattiin 1 cm läpimittaiseen kolonniin ja pestiin huoneen 15 lämpötilassa 25 mlrlla 0,15-m NaCl, joka sisälsi 50 mmol/ kg Hepes:iä, 0,1 % Triton X-l ja 0,01 % SDS, pH 7,8.
Kolonnit pestiin 200 ml:11a 0,15-m NaCl, joka sisälsi 50 mmol/kg Hepes:iä ja 0,1 % Triton X-100, pH 7,8 ja lop-pupesu suoritettiin samalla puskurilla, joka sisälsi 10 20 mmol/kg MgS04. Kaikkiin puskurisysteemeihin lisättiin PMSF:ää (1 mmol/kg). Livenneet membraaniproteiinit (noin 10 mg) johdettiin jokainen viisi kertaa erillisten kolonnien lävitse. Kolonni pestiin sitten 4 °C:ssa 100 ml:11a 0,15-m NaCl, joka sisälsi 50 mmol/kg Hepes:iä, 10 mmol/kg '25 MgS04 ja 0,1 % Triton X-100, pH 7,8. Monosakkaridi-inhi-biittoreita konsentraationa 400 mmol 3 ml:ssa pesupuskuria käytettiin eri kolonnieluaatteihin; N-asetyyliglykosamii-nia vehnänalkioagglutiniiniin ja β-metyyli-D-galaktosidia Ricinus communis -kasvin agglutiniini-I:hin. Monosakkari-30 dit pantiin kolonniin, joka suljettiin 30-40 minuutiksi tasapainottumisen aikaansaamiseksi, minkä jälkeen eluoi-tiin edelleen. Proteiinieluaatti dialysoitiin liuosta vastaan (500 ml), joka sisälsi 50 mmol/kg Hepes:iä, 10 mmol/ kg MgS04 ja 0,1 % Triton X-100, pH 7,8, 4 °C:ssa.
92325 22
Radiomerkitvn tvmopoietiinin valmistus - Tymopoietii-ni liuotettiin 0,2-m natriumkarbonaatti-bikarbonaattipus-kuriin, pH 9,8, reaktiivisten aminoryhmien saamiseksi. Tymopoietiiniliuokseen lisättiin 3-nitro-2-pyridiinisul-5 fonyylikloridia dioksaanissa (10:1 mol) ja seosta sekoitettiin viisi tuntia 20 °C:ssa. Lisättiin vettä ja liukenematon materiaali lingottiin. Suojattu peptidi puhdistettiin kromatografoimalla Sephadex G-25 kolonnissa ja peptidi pilkottiin post-proliini-pilkkomisentsyymillä NH2-ter-10 minaalisuojatun proliinin poistamiseksi. Metyyli-3,5 di-[125I] jodihydroksibentsimidaatti (4 000 Ci/mmol) saatiin 5,5 mCi/ml konsentraationa metanolissa ja se haihdutettiin kuiviin. Jodattu imidoesteri (1,4 nmol) saatettiin reagoimaan suojatun tymopoietiinin kanssa (5 pg, 3,9 nmol) 15 Wood'in et ai.. Anal. Biochem., 69, 339-349 (1975), mene telmällä, johon oli tehty seuraavat modifikaatiot. Reaktio suoritettiin 500 pl:ssa 0,16-m boraattipuskuria, pH 9,1, 24 tunnin aikana 4 eC:ssa. Reaktio pysäytettiin lisäämällä 500 μΐ 2-m sitraattifosfaattipuskuria, pH 5,5, 4 °C:ssa. 20 Näyte kromatografoitiin Biogel P-10 kolonnissa natriumpy-rofosfaattiliuoksessa, pH 7,5 (15 tippaa/fraktio) 4 °C:ssa vapaan jodin erottamiseksi.
Jodattu peptidi liuotettiin veteen ja sitä käsiteltiin 2-pyridiinitioli-l-oksidilla (moolisuhde 10:1) viisi ’25 tuntia huoneen lämpötilassa suojaryhmien poistamiseksi.
Merkitty peptidi, josta suojaryhmät oli poistettu, puhdistettiin Biogel P-10 kolonnissa. Saatiin kolme radioaktiivista piikkiä, joista kaksi ensimmäistä olivat immunoak-tiivisia kaniiniantitymopoietiini-vasta-aineelle. Ensim-. . 30 mäinen piikki lisättiin DEAE-Sephadex X-25 kolonniin (1 x 60 cm), joka oli tasapainotettu 50-nmolaarisella Tris-pus-kurilla, pH 7,0. Jodattu seos eluoitiin tällä puskurilla käyttäen lineaarista gradienttia lisäämällä ioniväkevyyttä tasapainokonsentraatiosta 1,0-molaariseen. Kunkin fraktion 35 radioaktiivisuus määritettiin käyttäen LKB 1280 Ultra gam- 92525 23 ma -spektrometriä.
Kullakin puhdistuskaavalla saadut fraktiot, joilla oli radioaktiivisuuspiikki, analysoitiin niiden kyvyn suhteen sitoa ylimäärin käytettyä antitymopoietiinivasta-ai-5 netta. DEAE-Sephadex A-25 kolonnin piikin II fraktioilla (fraktiot 35-45) oli korkein spesifinen sidonta ja niitä käytettiin sen jälkeen radioreseptorikokeessa.
Jodattu tymopoietiini säilytti biologisen aktiivisuutensa, joka määritettiin sen vaikutuksen perusteella her-10 mo-lihaskokeessa (Goldstein, Nature 247, 11-14 (1947)) ja sen vaikutuksesta CEM-solujen syklisen CMP:n synteesiin.
Sidontakoe - Koepuskuri valmistettiin lisäämällä 100 ml:aan lasilaitteessa tislattua vettä 12 g Hepesriä, 1,2 g MgS04 ja 1,2 g BSA. pH säädettiin arvoon 7,65 1-m NaOH-15 liuoksella. Standardiperusliuos valmistettiin käyttäen koepuskuria ja tätä liuosta käytettiin viikon ajan. Koe suoritettiin lasisissa koeputkissa (12 x 75 mm) lisäämällä 100 μΐ standardiliuosta, 25 μΐ reseptori proteiinia (150-200 pg/ml). 25 μΐ 125I-TP (80 000 cpm), 20 μΐ l-%:ista Tri-20 ton X-100 ja laimentamalla 200 piiksi koepuskurilla. 18 tunnin inhiboinnin jälkeen 4 °C:ssa, lisättiin 200 μΐ ih-mis-IgG (1,5 mg/ml) (kantajaksi) ja 200 μΐ 35-%:ista PEG-8000 PBS:ssä, pH 7,65, sekoitettiin ja seosta inkuboitiin 30 minuuttia jäillä. Putket lingottiin, jäännös pestiin '25 10-%:isella PEG-liuoksella PBS:ssä, pH 7,3 ja lukemat saatiin LKB-gamma-laskijalla. Sakan radioaktiivisuuden katsottiin edustavan ei-radioaktiivisen tymopoietiinin läsnä ollessa (1 mg/ml) ei-spesifistä sidontaa. Supernatanttiin lisättiin TCA:ta (loppukonsentraatio 5 %) ja sakan radio-. , 30 aktiivisuus määritettiin. Kaikissa tapauksissa se ylitti 95 %, mikä osoittaa jäljitysaineesta vapautuvan minimaalisen vähän 125I:a.
Kilpailukokeet - Edellä olevan sidontakoeprosessin jälkeen 125I-TP:tä (2,3 x 10"10 mol) inkuboitiin resepto-35 riproteiinin (4 pg) kanssa ja koepeptidiä yhdessä saman 92325 24 konsentraation kanssa tymopoietiini 37-45 nonapeptidiä (H-VAL-GLU-LEU-TYR-LEU-GLN-SER-LEU-TNR-OH ). Inkubointia jatkettiin 12 tuntia, minkä jälkeen vapaa ja sidottu 125I-TP määritettiin edellä esitetyllä tavalla. Nonapeptidiä käy-5 tetään salpaamaan reseptoriproteiinilla oleva viereinen respetorikohta. Jos tämä viereinen reseptorikohta ei ole salvattu, jonkin verran merkittyä TP:tä voi sitoutua re-septoriproteiiniin tämän kohdan kautta siinäkin tapauksessa, että koepeptidi salpaa tymopoietiinin reseptorikohdan. 10 Tällainen sidonta ei ole riippuvainen koepeptidin aktii visuudesta ja (jollei TP 37-45 salpausta olisi) antaisi epätarkkoja tuloksia.
Seuraavat edustavat yhdisteet aiheuttivat tymopoietiinin itsesiirtymään verrattuna vähintään 50-%risen siir-15 tymän ekvivalenttisilla konsentraatioilla: H-ARG-LYS-ASP-VAL-PHE-OH; N-a-asetyyli-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH; N-a-formyyli-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH; N-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH: ja 20 H-ARG-LYS-ASP-VAL-HIS-OH.
Vertailuna mainittakoon, että sellaiset peptidit kuin insuliini, glukagoni, kasvuhormoni, somatostatiini, β-en-dorfiini, FTS, ACTH, CRF ja ubikitiini eivät aiheuttaneet havaittavaa siirtymää.
Claims (7)
1. Menetelmä immunomoduloivaa aktiivisuutta omaavan pentapeptidin valmistamiseksi, jolla on kaava: 5 R-ARG-W-ASP-VAL-Z-R1 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän happo- tai emäsad-ditiosuolan valmistamiseksi, jossa kaavassa 10 R on H, asetyyli tai formyyli; W on LYS, PRO, dehydro-PRO tai AIB; Z on PHE tai HIS; R1 on OH tai NH2; tunnettu siitä, että suoritetaan kiinteäfaasisyn-15 teesi sinänsä tunnetulla tavalla.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi a-asetyyli-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n -20 n e t t u siitä, että valmistetaan peptidi a-formyyli- ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi H-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-OH.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan peptidi H-ARG-LYS-ASP-VAL-HIS-OH.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi asetyyli-ARG- 30 a-AIB-ASP-VAL-PHE-NHj.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan peptidi asetyyli-ARG-PRO-ASP-VAL-PHE-NHj. 26 92325
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/625,344 US4629723A (en) | 1984-06-27 | 1984-06-27 | Potent thymopentin analogs |
| US62534484 | 1984-06-27 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI852522A0 FI852522A0 (fi) | 1985-06-26 |
| FI852522L FI852522L (fi) | 1985-12-28 |
| FI92325B true FI92325B (fi) | 1994-07-15 |
| FI92325C FI92325C (fi) | 1994-10-25 |
Family
ID=24505633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI852522A FI92325C (fi) | 1984-06-27 | 1985-06-26 | Menetelmä tymopentiinianalogien valmistamiseksi |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4629723A (fi) |
| EP (1) | EP0166612B1 (fi) |
| JP (1) | JPH0689029B2 (fi) |
| KR (1) | KR920006563B1 (fi) |
| AT (1) | ATE81135T1 (fi) |
| AU (1) | AU592309B2 (fi) |
| CA (1) | CA1269499A (fi) |
| DE (1) | DE3586697T2 (fi) |
| DK (1) | DK171238B1 (fi) |
| FI (1) | FI92325C (fi) |
| IL (1) | IL75637A (fi) |
| NO (1) | NO167924C (fi) |
| NZ (1) | NZ212461A (fi) |
| ZA (1) | ZA854832B (fi) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0215805A1 (en) * | 1985-01-18 | 1987-04-01 | MERCK PATENT GmbH | Immunoregulatory peptides |
| DE3619633A1 (de) * | 1986-06-11 | 1987-12-17 | Hoechst Ag | Peptide mit einfluss auf die diurese und natriurese, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und ihre verwendung |
| HUT46044A (en) * | 1986-11-21 | 1988-09-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing immunstimulant peptides inhibiting multiplication of leukaemic cells and pharmaceutics comprising same |
| IT1216908B (it) * | 1987-03-19 | 1990-03-14 | Eniricerche Spa | Analoghi retro-inversi della timopentina e dei suoi frammenti, il metodo per la loro sintesi ed il loro impiego per la preparazionedi composizioni farmaceutiche. |
| HU199878B (en) * | 1987-06-19 | 1990-03-28 | Berlin Chemie Veb | Process for producing acylated splenopentynes and pharmaceutical compositions comprising such compounds as active ingredient |
| US5656601A (en) * | 1987-06-19 | 1997-08-12 | Berlin-Chemie Ag | Acylated splenopentins, methods for their synthesis and their use |
| JPH01125328A (ja) * | 1987-07-30 | 1989-05-17 | Centro Natl De Biopreparados | 髄膜炎菌ワクチン |
| WO1989009229A1 (en) * | 1988-03-31 | 1989-10-05 | Immunobiology Research Institute, Inc. | Treatment of hiv viremic patients with thymopentin |
| NZ229004A (en) * | 1988-05-19 | 1993-09-27 | Immunobiology Res Inst Inc | Tetrapeptides having t cell helper acitivity |
| US4943477A (en) * | 1988-09-27 | 1990-07-24 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Conductive sheet having electromagnetic interference shielding function |
| FI902534A0 (fi) * | 1988-09-30 | 1990-05-22 | Immunobiology Res Inst Inc | Peptider med t-cellsuppressoraktivitet. |
| IT1227908B (it) * | 1988-12-23 | 1991-05-14 | Eniricerche S P A Milano Sclav | Nuovi analoghi retro-inversi della timopentina, il metodo per la loro sintesi ed il loro impiego per la preparazione di composizioni farmaceutiche |
| US5218089A (en) * | 1988-12-23 | 1993-06-08 | Sclavo S.P.A. | Retro-inverso analogues of thymopentin and the method for their synthesis |
| US5036050A (en) * | 1989-01-12 | 1991-07-30 | Immunobiology Research Institute, Inc. | Compositions containing thymopentin for topical treatment of skin disorders |
| WO1992013546A1 (en) * | 1991-02-04 | 1992-08-20 | George Washington University | Mb-40 peptide that enhances the production of interleukin-1 and modulates age-associated immune response |
| US5492894A (en) * | 1991-03-21 | 1996-02-20 | The Procter & Gamble Company | Compositions for treating wrinkles comprising a peptide |
| US5215964A (en) * | 1991-06-03 | 1993-06-01 | Immunobiology Research Institute, Inc. | Peptides useful in regulating the immune and nervous systems |
| US5952465A (en) * | 1993-04-23 | 1999-09-14 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| WO1994025482A1 (en) * | 1993-04-23 | 1994-11-10 | Evans Herbert J | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| US6258550B1 (en) | 1993-04-23 | 2001-07-10 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| US5928896A (en) * | 1993-04-23 | 1999-07-27 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein--protein interaction site |
| US5965698A (en) * | 1993-04-23 | 1999-10-12 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein--protein interaction site |
| US5639729A (en) * | 1993-08-26 | 1997-06-17 | Immunobiology Research Institute, Inc. | Tripeptides useful in immune and CNS therapy |
| US6084066A (en) * | 1993-10-29 | 2000-07-04 | Virginia Commonwealth University | Polypetides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| FR2741076B1 (fr) * | 1995-11-15 | 1998-01-30 | Rech De Pathologie Appliquee S | Conjugues peptidiques derives des hormones thymiques, leur utilisation a titre de medicament et compositions les contenant |
| CN101168560B (zh) * | 2006-10-23 | 2012-09-05 | 江苏正大天晴药业股份有限公司 | N-取代肽酰胺，其药物组合物与用途 |
| CN117860921A (zh) * | 2021-12-16 | 2024-04-12 | 江西中医药大学 | 一种胸腺五肽衍生物tp-7在制备肿瘤诊断和/或治疗试剂中的应用 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4077949A (en) * | 1973-12-28 | 1978-03-07 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Polypeptide hormones of the thymus |
| US4002740A (en) * | 1975-08-21 | 1977-01-11 | Gideon Goldstein | Tridecapeptide compositions and methods |
| US4190646A (en) * | 1975-11-11 | 1980-02-26 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Polypeptide compositions and methods |
| SE446867B (sv) * | 1977-11-15 | 1986-10-13 | Sloan Kettering Inst Cancer | Sett att framstella en polypeptid med formaga att inducera differentiering av t-lymfocyter men inte av komplementreceptor (cr?72+) b-lymfocyter |
| JPS55149237A (en) * | 1979-04-12 | 1980-11-20 | Ortho Pharma Corp | Thymopoietin active peptide |
| US4261886A (en) * | 1980-03-13 | 1981-04-14 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Peptides having thymopoietin-like activity |
| CA1157466A (en) * | 1979-04-12 | 1983-11-22 | Gideon Goldstein | Peptides having thymopoietin-like activity |
| DE2938420A1 (de) * | 1979-09-22 | 1981-04-09 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue peptide und verfahren zu ihrer herstellung |
| US4309340A (en) * | 1980-03-31 | 1982-01-05 | American Home Products Corporation | Polypeptide compositions |
| US4361673A (en) * | 1980-09-19 | 1982-11-30 | American Home Products Corporation | Polypeptide compositions |
| US4305852A (en) * | 1980-10-20 | 1981-12-15 | American Home Products Corporation | Polypeptide compositions |
| US4505853A (en) * | 1983-11-18 | 1985-03-19 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Enzyme-resistant immunomodulatory peptides |
| DE3421614A1 (de) * | 1984-06-09 | 1985-12-12 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von pentapeptiden mit wirkung auf das immunsystem und zwischenprodukte dieses verfahrens |
-
1984
- 1984-06-27 US US06/625,344 patent/US4629723A/en not_active Ceased
-
1985
- 1985-06-18 NZ NZ212461A patent/NZ212461A/xx unknown
- 1985-06-26 AU AU44215/85A patent/AU592309B2/en not_active Expired
- 1985-06-26 IL IL75637A patent/IL75637A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 KR KR1019850004553A patent/KR920006563B1/ko not_active Expired
- 1985-06-26 EP EP85304559A patent/EP0166612B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-26 ZA ZA854832A patent/ZA854832B/xx unknown
- 1985-06-26 NO NO852567A patent/NO167924C/no unknown
- 1985-06-26 AT AT85304559T patent/ATE81135T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 DE DE8585304559T patent/DE3586697T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-26 CA CA000485260A patent/CA1269499A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-26 DK DK289285A patent/DK171238B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-06-26 FI FI852522A patent/FI92325C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-06-27 JP JP60141464A patent/JPH0689029B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1990
- 1990-04-25 US US07/514,184 patent/USRE34165E/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU592309B2 (en) | 1990-01-11 |
| FI92325C (fi) | 1994-10-25 |
| IL75637A (en) | 1990-02-09 |
| JPS6118799A (ja) | 1986-01-27 |
| EP0166612B1 (en) | 1992-09-30 |
| NO167924B (no) | 1991-09-16 |
| ZA854832B (en) | 1987-02-25 |
| FI852522A0 (fi) | 1985-06-26 |
| FI852522L (fi) | 1985-12-28 |
| DE3586697T2 (de) | 1993-02-11 |
| AU4421585A (en) | 1986-01-02 |
| US4629723A (en) | 1986-12-16 |
| EP0166612A2 (en) | 1986-01-02 |
| NZ212461A (en) | 1988-10-28 |
| NO852567L (no) | 1985-12-30 |
| DK289285D0 (da) | 1985-06-26 |
| DK289285A (da) | 1985-12-28 |
| IL75637A0 (en) | 1985-10-31 |
| EP0166612A3 (en) | 1987-08-05 |
| CA1269499A (en) | 1990-05-22 |
| DE3586697D1 (en) | 1992-11-05 |
| KR920006563B1 (ko) | 1992-08-08 |
| USRE34165E (en) | 1993-01-19 |
| ATE81135T1 (de) | 1992-10-15 |
| KR860000314A (ko) | 1986-01-28 |
| NO167924C (no) | 1991-12-27 |
| DK171238B1 (da) | 1996-08-05 |
| JPH0689029B2 (ja) | 1994-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI92325B (fi) | Menetelmä tymopentiinianalogien valmistamiseksi | |
| US4505853A (en) | Enzyme-resistant immunomodulatory peptides | |
| US4547489A (en) | Conformationally restricted thymopentin-like compounds | |
| CA1241643A (en) | Peptides affecting the immune regulation and a process for their preparation | |
| US4261886A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
| FI94350B (fi) | Menetelmä T-soluavustaja-aktiivisuutta omaavien peptidien valmistamiseksi | |
| US4190646A (en) | Polypeptide compositions and methods | |
| US4395404A (en) | Synthetic thymosin β3 and β4 analogues | |
| US4002740A (en) | Tridecapeptide compositions and methods | |
| EP0136475A2 (en) | Novel growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith | |
| IE49289B1 (en) | Tripeptides,process for their preparation,therapeutic compositions containing them and methods for their use | |
| EP0016612B1 (en) | Peptides having ubiquitin-like activity, process for their preparation, therapeutic compositions containing them and their use | |
| US4650788A (en) | Novel peptides having an immunostimulating action, processes for their preparation and their use | |
| US4397842A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
| EP0138616A2 (en) | Nona- and dodecapeptides for augmenting natural killer cell activity, processes for making them and pharmaceutical compositions comprising them | |
| EP0018182B1 (en) | Peptides having thymopoietin-like activity, therapeutic compositions containing them, and process for their preparation | |
| CA1105925A (en) | Pentapeptide compositions and methods | |
| US4258152A (en) | Pentapeptide modified resin | |
| FI96115B (fi) | Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on T-soluavustaja-aktiivisuutta | |
| GB1585736A (en) | Polypeptides and methods for their production |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: ORTHO PHARMACEUTICAL CORPORATION |
|
| MA | Patent expired |