FI91075C - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI91075C FI91075C FI883388A FI883388A FI91075C FI 91075 C FI91075 C FI 91075C FI 883388 A FI883388 A FI 883388A FI 883388 A FI883388 A FI 883388A FI 91075 C FI91075 C FI 91075C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- phe
- peptide
- nal
- pro
- cit
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 162
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- -1 alicyclic carboxylic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 43
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 6
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000001711 D-phenylalanine group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 claims abstract description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 52
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 35
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 22
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M cyanate Chemical compound [O-]C#N XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 14
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 11
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 10
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims description 10
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 9
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 9
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 6
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 6
- 125000003941 D-tryptophan group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 claims description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 claims description 5
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 4
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 3
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Chemical group CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims 2
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims 1
- 108010037248 lantibiotic Pep5 Proteins 0.000 claims 1
- SRCAXTIBNLIRHU-JJKPAIEPSA-N lantibiotic pep5 Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N\C(=C/C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N\C(=C/C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N\C(=C(/C)S)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(=O)CC SRCAXTIBNLIRHU-JJKPAIEPSA-N 0.000 claims 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 abstract description 43
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 229940124041 Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) antagonist Drugs 0.000 abstract description 8
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 abstract description 5
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 abstract description 5
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 abstract description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 3
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 abstract description 3
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 abstract description 3
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 abstract description 2
- 125000002698 D-tryptophano group Chemical group C(=O)(O)[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C12)N* 0.000 abstract 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 abstract 1
- 230000001648 edemagenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 51
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 51
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 48
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 48
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 39
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 34
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 29
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 28
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 28
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 28
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 18
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 17
- KFEFLCOCAHJBEA-ANRVCLKPSA-N cetrorelix acetate Chemical compound CC(O)=O.C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KFEFLCOCAHJBEA-ANRVCLKPSA-N 0.000 description 16
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 16
- GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M potassium cyanate Chemical compound [K]OC#N GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- UGVVAXGWDBKHRO-LLVKDONJSA-N ethyl (2r)-2-acetamido-3-pyridin-3-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@H](NC(C)=O)CC1=CC=CN=C1 UGVVAXGWDBKHRO-LLVKDONJSA-N 0.000 description 10
- JLBCSWWZSSVXRQ-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CN=C1 JLBCSWWZSSVXRQ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 7
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 7
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 7
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 6
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 6
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 6
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- PHOQLWOIWDIYFR-WUCXBFDXSA-N (2r)-2-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-acetamido-3-(4-chlorophenyl)propanoyl]amino]-3-(4-chlorophenyl)propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 PHOQLWOIWDIYFR-WUCXBFDXSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700024471 N-acetyl-(4-chlorophenylalanyl)(1)-(4-chlorophenylalanyl)(2)-tryptophyl(3)-arginyl(6)-alanine(10)- LHRH Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N isatin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(=O)NC2=C1 JXDYKVIHCLTXOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical class CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- ARSRBNBHOADGJU-UHFFFAOYSA-N 7,12-dimethyltetraphene Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(C=CC=C1)C1=C2C ARSRBNBHOADGJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical compound C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 125000000635 L-ornithyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 150000001913 cyanates Chemical class 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- UGVVAXGWDBKHRO-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-acetamido-3-pyridin-3-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)C(NC(C)=O)CC1=CC=CN=C1 UGVVAXGWDBKHRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000546 inhibition of ovulation Toxicity 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006281 4-bromobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1Br)C([H])([H])* 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- RUELKOXFMICCQP-UHFFFAOYSA-N C(CC(=O)OCC=1C=NC=CC1)(=O)ONC(C(CC)CC)=O Chemical compound C(CC(=O)OCC=1C=NC=CC1)(=O)ONC(C(CC)CC)=O RUELKOXFMICCQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VFZRZRDOXPRTSC-UHFFFAOYSA-N DMBA Natural products COC1=CC(OC)=CC(C=O)=C1 VFZRZRDOXPRTSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700023965 acetyl-2-(2-naphthyl)-Ala(1)-4-F-Phe(2)-Trp(3)-Arg(6)- LHRH Proteins 0.000 description 2
- CQJZXVCPROCGRM-OYDHUGEGSA-N acetyl-2-(2-naphthyl)-ala(1)-4-f-phe(2)-trp(3)-arg(6)-lhrh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(F)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CQJZXVCPROCGRM-OYDHUGEGSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N dicarbonic acid Chemical compound OC(=O)OC(O)=O ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000002497 edematous effect Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- CMJCWQISQGNHHI-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(carbamoylamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=O CMJCWQISQGNHHI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFYAYGJCPXRNBL-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-naphthalen-1-ylpropanoate Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CC=CC2=C1 OFYAYGJCPXRNBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUEOQWDVOXEFDJ-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-ylacetic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 VUEOQWDVOXEFDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-GFCCVEGCSA-N 3-(2-Naphthyl)-D-Alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- CNQCWYFDIQSALX-UHFFFAOYSA-N 3-(chloromethyl)pyridine Chemical compound ClCC1=CC=CN=C1 CNQCWYFDIQSALX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N D-Proline Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-SCSAIBSYSA-N D-citrulline Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical class C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- XIGSAGMEBXLVJJ-YFKPBYRVSA-N L-homocitrulline Chemical compound NC(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O XIGSAGMEBXLVJJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000738964 Rattus norvegicus POU domain, class 6, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002253 Tannate Polymers 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N acoh acetic acid Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O YBCVMFKXIKNREZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010976 amide bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- CIHWJRSPVJBHGT-UHFFFAOYSA-N benzhydrylazanium;chloride Chemical compound Cl.C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 CIHWJRSPVJBHGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000021235 carbamoylation Effects 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- ODCCJTMPMUFERV-UHFFFAOYSA-N ditert-butyl carbonate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(C)(C)C ODCCJTMPMUFERV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- WUDNUHPRLBTKOJ-UHFFFAOYSA-N ethyl isocyanate Chemical compound CCN=C=O WUDNUHPRLBTKOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011318 facial edema Diseases 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 1
- 239000002474 gonadorelin antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000002434 gonadorelin derivative Substances 0.000 description 1
- 239000003933 gonadotropin antagonist Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000508 hormonal effect Toxicity 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N mecn acetonitrile Chemical compound CC#N.CC#N BCVXHSPFUWZLGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C.CCN(C(C)C)C(C)C WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002522 swelling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISHLCKAQWKBMAU-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-diazocarbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N=[N+]=[N-] ISHLCKAQWKBMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/18—Feminine contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/11—Gonadotropin; related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
i 91075
Menetelma uusien terapeuttisesti kayttOkelpoisten pepti-dien valmistamiseksi Tåma keksintO koskee menetelm&a uusien peptidien 5 valmistamiseksi, jotka estavat nisakkailia gonadotropii-nien vapauttamista aivolisakerauhasesta aiheuttamatta kuitenkaan turvotusvastavaikutuksia. Erityisesti tama keksintO koskee menetelmaa luteinisoivaa hormonia vapaut-tavan hormonin (LHRH), jolla on kaava 10 p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, analogien ja niiden suolojen valmistamiseksi.
Yli 15 vuoden ajan ovat tutkijat etsineet selek-15 tiivisesti tehokkaita LHRH-dekapeptidin antagonisteja [M.
Karten ja J.E. Rivier, Endocrine Reviews, 7, 44 - 66 (1986)]. Suuri kiinnostus sellaisia antagonisteja kohtaan perustuu niiden h£>ydy 11 isyyteen endokrinologian, gyneko-logian, raskauden ehk&isyn ja syOvén alalia. On valmis-20 tettu suuri maara yhdisteita potentiaalisina LHRH:n anta-gonisteina. Kiinnostavimpia tahan mennessa 1OydettyjS antagonisteja ovat ne yhdisteet, joiden rakenne edustaa LHRH-rakenteen muunnelmaa.
Ensimm&inen sarja tehokkaita antagonisteja saatiin 25 sijoittamalla aromaattisia aminohappojaannOksiå asemiin 1, 2, 3 ja 6 tai 2, 3 ja 6. Yhdisteet kuvataan LHRH:na, jossa alkuperdisten aminohappojaannOsten korvaaminen muilla on ilmaistu yiaindeksien avulla. Tunnettuja antagonisteja ovat: . . 30 [Ac-D-Phe(4-C1 )1,2,D-Trp3,6]LHRH (D.H. Coy et al., julkaisussa: Gross, E. ja Meienhofer, J. (toimittajat). Peptides, Proceedings of the 6th American Peptid Sympo- • · sium, s. 775 - 779, Pierce Chem. Co., Rockville, II., 1979); 35 [Ac-Pro1, D-Phe(4-Cl)2, D-Nal(2)3·6)LHRH (US-pa- ____: tentti no. 4 419 347) ja [Ac-AS-Pro1, D-Phe(4-Cl)2, D-Trp3·6]LHRH (J.L. Pineda et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 420, 1983).
2
Antagonistien vesiliukoisuuden lisååmiseksi sijoi-tettiin myOhemmin emåksisia aminohappoja, kuten esimer-kiksi D-Arg, 6-asemaan. Esimerkiksi [Ac-D-Phe(4-Cl)1,2, D-Trp3, D-Arg6, D-Ala10]LHRH (ORG-30276) (D.H. Coy et al., 5 Endocrinology, 100, 1 445, 1982); ja [Ac-D-Nal(2J1, D-Phe(4-F)2, D-Trp3, D-Arg6]LHRH (ORF 18260) (J.E. Rivier et al., julkaisussa: Vickery B.H., Nestor, Jr. J.J., Hafez, E.S.E. (toimittajat), LHRH and Its Analogs, s. 11 - 22, MTP Press, Lancaster, UK, 10 1984).
Analogit eivat osoittaneet ainoastaan odotettua parantunutta vesiliukoisuutta, vaan niilia ilmeni myOs parantunut antagonistinen vaikutus. Nama erittain tehok-kaat, hydrofiiliset analogit, joissa on D-Arg ja muita 15 emaksisia sivuketjuja 6-asemassa, aiheuttivat kuitenkin ohimenevan turvotuksen muodostumista kasvoihin ja raajoi-hin, kun niita annettiin rotille annoksina 1,25 tai 1,5 mg/kg ihon alle (F. Schmidt et al., Contraception, 29, 283, 1984; J.E. Morgan et al., Int. Archs. Allergy Appl. 20 Immun. 80, 70, (1986). Koska turvotusta aiheuttavien vai- kutusten esiintyminen rotilla naiden antagonistien anta-misen jalkeen synnytti epailyksia niiden turvallisuudesta ihmisten kaytttssa ja siten jarrutti naiden laakkeiden ot-tamista kliiniseen kayttttttn, on toivottavaa kehittaa an-25 tagonistisia peptideja, joilla ei ole naita sivuvaikutuk-sia.
KeksinnOn mukaisesti valmistetut peptidit ovat LHRH:n antagonisteja, joilla on emaksisten peptidien parantunut vesiliukoisuus ja suuri antagonistinen tehok-30 kuus, mutta joilla ei ole turvotusta synnyttavia vaiku- tuksia. Nama yhdisteet estavat erittain tehokkaasti gona-dotropiinien vapauttamista aivolisakerauhasesta nisak-kailia mukaan luettuna ihmiset.
Esilia oleva keksintO koskee menetelmaa yhdistei-35 den valmistamiseksi, joilla on kaava X-R1-R2-R3-Ser-Tyr-R6-Leu-Arg-Pro-R10-NH2 (I) 91075 3 jossa X on asyyliryhmfi, joka on saatu 1-7 hiiliatomla sisdlt&vien, alifaattlsten tai alisyklisten karboksyyli-happojen suorista tai haarautuneista ketjuista, tai kar-5 bamoyyliryhmS, R1 on D- tai L-Pro, D- tai L-A3-Pro, D-Phe, D-Phe(4-Hl), D-Ser, D-Thr, D-Ala, D-Nal(l) tai D-Nal(2), R2 on D-Phe tai D-Phe(4-Hl), R3 on D-Trp, D-Phe, D-Pal(3), D-Nal(l) tai 10 D-Nal(2), R6 on D-Cit, D-Hci, D-Cit(Q) tai D-Hci(Q) ja R10 on Gly tai D-Ala, jolloin HI on fluori, kloori tai bromi ja Q on C1.3-alkyy-li, tai sen farmaseuttisesti hyvAksyttSvien happoadditio-15 suolojen valmistamiseksi, jolloin menetelm&lle on tunnus- omaista, etta peptidikemiassa tavallisen fragmenttikondensaation avulla kondensoidaan vastaavat peptidifragmentit tai peptidi rakennetaan asteittain ldhtbaminohapoista 20 peptidikemiassa tavallisen faramgnettikondensaation avul la tai kaavan I mukaisessa peptidissS, jossa R6 on D-Orn tai D-Lys, D-Orn:n tai D-Lys:n vapaa aminoryhmA muutetaan saattamalla reagoimaan alkalisyanatin kanssa tai yhdis-teen kanssa, joka tuottaa syanaatin, tai C^-alkyyli-iso-25 syanaatin kanssa ureidoryhmAksi ja saadut peptidit mahdollisesti asyloidaan ja/tai muutetaan amideiksi ja mahdollisesti muutetaan fysiologisesti vaaratto-miksi happosuoloiksi.
30 Keksinnbn mukaisessa menetelmåsså syntyy vSlipep- tidejS tai vSlipeptidihartseja, joilla on kaava
XJ-R1-R2-R3-Ser (X4) -Tyr( X5 )-R*6( X6) -Leu-Arg( X®) -R10-NH-X10 II
35 jossa
Xt on asyyliryhmA, joka on saatu 1-7 hiiliatomia siséltåvien alifaattisten tai alisyklisten karboksyyli- 4 happojen suorista ja haarautuneista ketjuista (erityises-ti asetyyli), t-Boc, vety tai karbamoyyli, X4 on Ser-hydroksiryhmån suoj aryhma (esimerkiksi bentsyyli, 2,6-diklooribentsyyli), 5 X5 on Tyr-fenolihydroksyyliryhman suojaryhma (esi merkiksi bentsyyli, 2,6-diklooribentsyyli, 2-kloori(2-bromi)-bentsyyliloksikarbonyyli; bentsyyliloksikar-bonyyli), X6 on Lys- tai Orn-sivuketjuaminoryhmån suojaryh-10 m3 (bentsyylioksikarbonyyli, 2-klooribentsyylioksikarbo-nyyli), X8 on Arg-guanidinoryhman suojaryhma (N02, Tos), X10 on bentshydryyli- tai metyylibentshydryyliryh-mia sisaitava kantajahartsi, 15 R1 on D- tai L-Pro, D- tai L-A3-Pro, D-Phe, D-Phe(4-H1), d-Ser, D-Thr, D-Ala, D-Nal(l) tai D-Nal(2), R2 on D-Phe tai D-Phe(4-Hl), R3 on D-Trp, D-Phe, D-Pal(3), D-Nal(l) tai D-Nal(2), 20 R*6 on D-Lys tai D-Orn, D-Cit, D-Hci, D-Cit(Q) tai D-Hci(Q) ja R10 on Gly tai D-Ala, jolloin Hl on fluori, kloori tai bromi.
Eraan menettelytavan mukaan esimerkiksi muutetaan 25 kaavan II mukainen peptidi, jossa R*6 on D-Lys tai D-Orn ja X6 on vety, syanaatin tai yhdisteen, joka tuottaa sya-naatin (syanaattiiahde), avulla kaavan III mukaiseksi peptidiksi: X1-R1-R2-R3-Ser (X4) -Tyr( X5 )-R**6-
30 Leu-Arq (X8) -Pro-R10-NH-X10 III
jossa symboleilla Xlr R1, R2, R3, X4, X5, X8, R10 ja X10 on ilmoitetut merkitykset ja R**6 on Cit, Hci, Cit(Q) tai Hci(Q). Tama reaktio suoritetaan mieluimmin, kun on 35 asyyli ja kaikki muut jaannOkset X on vety.
Sopivia syanaatteja tai syanaatin tuottavia yhdis-teita ovat: alkalisyanaatit (esimerkiksi kaliumsyanaat- I! 91075 5 ti), N-alempialkyyli-isosyanaatti (N-etyyli-isosyanaat-ti). Kaavan II mukaiset peptidit syntetisoidaan mieluim-min tunnetun kiinteåfaasitekniikan avulla. Muuttaminen syanaateilla tal syanaatin tuottavilla yhdisteilia suori-5 tetaan liuottimissa, mieluinunin aproottisissa liuottimis-sa kuten esimerkiksi vesipitoisessa DMFtssa, lSmpdtilois-sa vaiilta 0 - 50 °C, mieluinunin 0 - 25 °C.
Taman reaktion edistymista, toisin sanoen Orn/ Lys-peptidien muuttumista vastaaviksi Cit/Hci-peptideik-10 si, voidaan helposti seurata HPLC:n avulla MeCN-vesipi- toisissa TFA-systeemeissa, johtuen Cit/Hci- ja esimerkiksi Cit(etyyli)/Hci(etyyli)peptideille tunnusomaisesta re-tentioajan pidentyneisyydesta 2,6 ± 0,3 minuutilla ver-rattuna vastaaviin Orn/Lys-peptideihin.
15 Kaavan I mukaisia peptideja, joissa X on asyyli- ryhma, saadaan suoraan suorittamalla lohkaiseminen ja suojauksen poistaminen kaavan II mukaisille vaiipeptidi-hartseille, joissa Xx on asyyliryhma ja R*6 on D-Cit, D-Hci, D-Cit(Q) tai D-Hci(Q), ja kaavan I mukaisia pepti-20 deja, joissa X on karbamoyyliryhma, saadaan kaavan II mu-kaisista peptidihartseista, joissa Xj on vety tai Boc, nimittain lohkaisemalla ja poistamalla suojaus ja sen jaikeen karbamoyloimalla.
Gonadotropiinia vastaan vaikuttava farmaseuttinen 25 valmiste aikaansaadaan sekoittamalla kaavan I mukaista yhdistetta farmaseuttisesti hyvaksyttavan kantaja-aineen kanssa, mukaan luettuna mikropalloset hidastettua vapaut-tamista vårten.
Peptidien maarittelyyn kSytetty nimistO on yhtapi-30 tavå biokemian nimistba kSsitelleen IUPAC-IUB-komitean esittSmSn nimistOn kanssa (European J. Biochem., 1984, 138, 9 - 37), jolloin yhdenmukaisesti totunnaisen esitys-tavan kanssa N-p&3ss& olevan aminoryhmat esiintyvat va-semmalla ja C-paan karboksyyliryhma oikealla. Ilmausta 35 luonnolliset aminohapot kaytetaan yleisesti luonnollises-ti esiintyvista aminohapoista, joita on proteiineissa ja jotka kasittavat aminohapot Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, 6
Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp ja His. Yksittaisista aminohappojaannbksista kSytetyt lyhennykset perustuvat aminohappojen triviaali-nimiin ja ovat Ala, alaniini; Arg, arginiini; Cit, sit-5 rulliini; Gly, glysiini; Hci, homositrulliini; Leu, leu-siini; Lys, lysiini; Pal(3), 3-(3-pyridyyli)alaniini; Nal(2), 3-(2-naftyyli)alaniini; Nal(l), 3-(1-naftyyli)-alaniini, Orn, ornitiini; Phe, fenyylialaniini;
Phe(4-Cl), 4-kloorifenyylialaniini; Phe(4-F), 4-fluori-10 fenyylialaniini; Pro, proliini; Ser, seriini; Trp, tryp-tofaani ja tyr, tyrosiini. Kaikki tassa kuvatut aminoha-pot kuuluvat L-sarjaan, ellei toisin ole mainittu, esi-merkiksi D-Trp tarkoittaa D-tryptofaania ja D-Nal(2) tar-koittaa 3-(2-naftyyli)-D-alaniinia. D-Cit(Q) tai D-Hci(Q) 15 tarkoittaa, etta sitrulliinin (homositrulliinin) ureido-osan aminoryhmån H-atomi on korvattu alkyyli-ryhmail& Q. Muita kSytettyja lyhennyksia ovat AcOH etikkahappo
AcOEt etyyliasetaatti 20 Ac20 etikkahapon anhydridi
Boc- tert. butyylioksikarbonyyli- DIC di-isopropyylikarbodi-imidi DIEA N,N-di-isopropyylietyyliamiini DMF dimetyyliformamidi 25 HoBt 1-hydroksibentseenitriatsolihydraatti HPLC korkeapainenestekromatografia
MeOH metyylialkoholi TEA trietyyliamiini DCC disykloheksyylikarbodi-imidi 30 MeCN asetonitriili
IpOH isopropanoli Z(2-C1) 2-klooribentsyylioksikarbonyyli DCB 2,6-diklooribentsyyli
Tos p-tolueenisulfonyyli 35 TFA trifluorietikkahappo Z bentsyylioksikarbonyyli li 91075 7
Erityisen hyvinå pidetaan kaavan I mukaisia LHRH-analogeja, joissa; X on asetyyli tai karbamoyyli, R1 on D-Phe(4-C1), D-Nal(2), Pro tai D-Phe, 5 R2 on D-Phe(4-C1) tai D-Phe(4-F), R2 on D-Trp tai D-Pal(3), R^ on D-Cit, D-Hci, D-Cit(etyyli), D-Hci(etyyli) ja R10 on D-Ala.
Kuten edella. on mainittu, keksinnon mukainen peptidien 10 valmistus tapahtuu siten, etta ne valmistetaan peptidikemias-sa yleisesti kaytetyn fragmenttikondensaation avulla vastaa-vista peptidifragmenteissa tai peptidikemiassa tavallisen asteittaisen rakentamisen avulla, tai siten ettS kaavan I mu-kaisessa peptidissa, jossa R6 on D-Orn tai D-Lys, D-Orn:n tai 15 D-Lys : n vapaa aminoryhma muutetaan antamalla reagoida alka-lisyanaatin tai yhdisteen, joka tuottaa syanaatin, tai C^_3-alkyyli-isosyanaatin kanssa ureidoryhmSksi, ja saadut pep-tidit mahdollisesti asyloidaan ja/tai muutetaan amideiksi ja mahdollisesti muutetaan fysiologisesti vaarattomiksi 20 happosuoloiksi.
Asteittainen rakentaminen tapahtuu esimerkiksi siten, ettS ensin sidotaan karboksyylipaMn aminohappo gly-siini tai D-alaniini tai niiden amidien, joissa pysyvH tx-aminoryhma on suojattu, tahan tarkoitukseen yleisesti 25 kaytettyyn synteettiseen kantajaan kovalenttisesti, a-ami-non suojaryhma lohkaistaan pois, nMin saatuun vapaaseen aminoryhmaan sidotaan iahinn3 seuraava suojattu aminohappo sen karboksyyliryhman kautta, sitten taas lohkaistaan taman toisen aminohapon OL-aminon suojaryhmM pois, tahSn 30 sidotaan seuraava aminohappo ja tMUM tavoin askel aske-leelta liitetaan syntetisoitavan peptidin muut aminoha-pot oikeassa jårjestyksessS ja kun kaikki aminohapot on liitetty, patenttivaatimuksen 1 mukainen valmis peptidi lohkaistaan pois kantajasta ja mahdollisesti muut ISsnS 35 olevat sivufunktioiden suojaryhmSt lohkaistaan pois.
8
Fragmenttikytkemisessa kaytetåan mieluimmin ilman ra-semoitumista tapahtuvaa atsidikytkemista tai disyklohek-syylikarbodi-imidi/l-hydroksibentsotriatsoli- tai DCC/3-hydroksi-4-okso-3,4-dihydro-l,2,3-bentsotriatsiini-mene-5 telmåå. Voidaan my5s kåyttåa hyvMksi fragmenttien aktivoituja estereitS (DCC = disykloheksyylikarbodi-imidi).
Aminohappojen asteittaiseen kondensaatioon sopivat erityisen hyvin bentsyylioksikarbonyyli-aminohappojen akti-voidut esterit, kuten esimerkiksi N-hydroksisukkinimi-10 diesteri tai 2,4,5-trikloorifenyyliesteri ja 4-nitrofe-nyyliesteri. Kahden jålkimmSisen aktiiviesterin aminolyy-siå voidaan erittMin hyvin katalysoida N-hydroksiyhdis-teiden avulla, joiden happamuus on suurin piirtein etikka-hapon luokkaa, kuten esimerkiksi 1-hydroksibentsotriatso-15 lin avulla.
Valiaminonsuojaryhmiksi soveltuvat poishydrattavat ryhmåt, kuten esimerkiksi bentsyylioksikarbonyylijaannSs (= Z-jSMnnbs) tai heikon happamuuden avulla pois lohkais-tavat ryhmSt, kuten esimerkiksi 2-(p-difenyyli)isopropyyli-20 oksikarbonyyli- tai 2-(3,5-dimetoksifenyyli)isopropyyli-'oksikarbonyylijaannds.
Asteittainen kondensaatio tapahtuu suorittamalla synteesi vastaavista, mahdollisesti tavalliseen tapaan suojatuista aminohapoista totunnaiseen tapaan. Samoin on 25 mahdollista kayttaS automaattista peptidinsyntetisoijaa, esimerkiksi Beckman Model 990 -peptidinsyntetisoijaa, mahdollisesti kayttSen yleiseen tapaan kaupallisesti saa-tavissa olevia suojattuja aminohappoja.
Tama synteesi tapahtuu esimerkiksi tata tarkoitus-30 ta vårten yleisella tavalla vastaavista suojatuista aminohapoista siten, etta ensin sidotaan syntetisoitavan pep-tidin karboksyyliterminaalinen aminohappo, jonka pysyvS α-aminoryhma on suojattu, tShSn tarkoitukseen yleisesti kaytettyyn synteettiseen kantaja-aineeseen kovalenttises-35 ti, tt-aminon suojaryhmS lohkaistaan pois, nain saatuun va-paaseen aminoryhm3an sidotaan IShinnå seuraava suojattu li 91075 9 aminohappo sen karboksyyliryhman kautta, sitten jalleen tåmån toisen aminohapon Λ-aminon suojaryhmå lohkaistaan pois, tShSn sidotaan seuraava aminohappo ja tailå tavoin asekeleelta liitetSSn syntetisoitavan peptidin muut ami-5 nohapot oikeassa jSrjestyksessa ja kun kaikki aminohapot on liitetty, lohkaistaan valmis peptidi kantajasta pois ja mahdollisesti lisSksi lSsnS olevat sivufunktioiden suo-jaryhmåt lohkaistaan pois.
Aminohappojen liittåmisreaktio tapahtuu lMmpStila-10 alueella 10 - 40 °C, mieluimmin 20 - 30 °C, mahdollisesti tahan tarkoitukseen yleisesti kSytetyssS inertissS liuot-timessa tai suspension våliaineessa (esimerkiksi dikloori-metaanissa), jolloin voidaan mahdollisesti liukoisuuden parantamiseksi lisStå 20 %:iin saakka dimetyyliformamidia.
15 SynteettisenS kantajamateriaalina tulevat kysymyk- seen synteettiset polymeerit, esimerkiksi turpoava poly-styreenihartsi, joka on helmien muodossa (esimerkiksi, kloorimetyloitu kopolymeraatti, joka on muodostunut poly-styreenistS ja 1 %:sta divinyylibentseeniS). Pysyvien 20 (t-aminoryhmien suojaryhmina tulevat kysymykseen esimerkiksi: tertiaarinen butyylioksikarbonyyliryhma, karbobent-soksiryhmå tai karbobentstioryhmS (joissa mahdollisesti on kulloinkin p-bromi tai p-nitrobentsyylijaSnnds), tri-fluoriasetyyliryhmS, ftalyylijSannbs, o-nitrofenoksiase-25 tyyliryhmS, trityyliryhma, p-tolueenisulfonyyliryhmS, bentsyyliryhma, bentseeniytimessS substituoidut bentsyy-lijaannfikset (p-bromi- tai p-nitrobentsyylijSSnnds), Æ-fenyylietyylijSSnnQs. TSman lisSksi viitataan my5s Jesse P. Greensteinin ja Milton Winitzin kirjaan Chemistry 30 of Amino Acids, New York 1961, John Wiley and Sons, Inc., osa 2, esimerkiksi sivuille 883 ja sita seuraavat sivut, seka teokseen The Peptids, osa 2, toim. E. Gross ja J. Meienhofer, Academic, New York, taulukoihin III ja IV.
NamS suojaryhmMt sopivat periaatteessa my5s kysymykseen 35 tulevien aminohappojen muiden funktionaalisten sivuryhmien (OH-ryhmSt, Nl^-ryhmSt) suojaamiseen.
10 Låsnå olevat hydroksiryhmåt (seriini, treoniini) suojataan mieluimmin bentsyyliryhmien ja vastaavien ryh-mien avulla. Muut aminoryhmåt kuin pysyvåt Ot-aminoryhmåt (esimerkiksi ω-asemassa olevat aminoryhmåt; arginiinin 5 guanidinoryhmå) suojataan mieluimmin nitroryhmillå.
Yksittåisten aminohappojen liittåminen toisiinsa tapahtuu tåhån tarkoitukseen yleisesti kåytetyillå mene-telmillå. Erityisesti tulevat kysymykseen: symmetristen anhydridien menetelmå 10 (disykloheksyylikarbodi-imidin låsnå ollessa) karbodi-imidi-menetelmå, karbodi-imidi-hydroksibentsotriatsoli-menetelmå (katso The Peptids, osa 2, toim. E. Gross ja J. Meien-hofer).
15 Arginiinin liittåmiseen kåytetåån mieluimmin kar- bodi-imidi-menetelmåå, asparagiinin sekå glutamiinin liittåmiseen kåytetåån mieluimmin karbodi-imidi-hydroksi-bentsotriatsoli-menetelmåå (katso The Peptids, osa 2, toim. E. Gross ja J. Meienhofer). Muita aminohappoja vårten kåy-20 tetåån yleenså symmetristen tai seka-anhydridien menetel-måå.
Kaavan 1 mukaisten peptidien, joissa kuitenkin ·’, un D-Orn tai D-Lys (låhtdaineita syanaatin avulla muutta- mista vårten), valmistus voi tapahtua esimerkiksi maini-
• I
.*·.·, 25 tun asteittaisen peptidinrakentamisen tai fragmenttikonden- •v saation avulla.
Kun valmistetaan keksinndn mukaisesti peptidejå, joissa R° on Cit(Q) tai Hci(Q), kåytetåån peptidin syn-teesisså yleenså vastaavaa pååsså olevaa ureidoryhmåsså 30 alkyyliryhmållå Q substituoitua Cit:a tai Hci:a.
Peptidien I muuttaminen niiden happoadditiosuoloik-si voidaan suorittaa antamalla niiden reagoida happojen kanssa sinånså tunnetulla tavalla. Påinvastoin voidaan va-paiden peptidien vapauttaminen suorittaa antamalla niiden 35 happoadditiosuolojen reagoida emåsten kanssa.
Il 91075 11
Valmistusmenetelmåssa on siis kysymys esimerkiksi yksinomaisesta kiinteafaasitekniikasta, osittaisesta kiinteafaasitekniikasta, fragmenttikondensaatiosta tai klassi-sesta liuosfaasisynteesistå. (Katso M. Bodanszky, "Prin-5 ciples of Peptide Synthesis", Springer-Verlag, 1984).
Esimerkiksi yksinomaisen kiinteSfaasisynteesin menetelmiS on kuvattu oppikirjassa "Solid Phase Peptide Synthesis", J.M. Stewart ja J.D. Young, Pierce Chem.
Company, Rockford, III., 1984 (2. painos), G. Barany ja 10 R.B. Merrifield, "The Peptides", kappale 1, s. 1 - 285, 1979, Academic Press, Inc.
Klassinen liuossynteesi on kuvattu yksityiskohtai-sesti julkaisussa "Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl). Synthese von Peptiden", E. Wunsch (toimit-15 taja) (1974) , Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Saksan Liittotasavalta.
Sellaisissa synteeseissa on tavallista, ettS eri aminohappojSSnnfisten reaktiiviset sivuketjun funktionaa-liset ryhmat suojataan sopivien suojaryhmien avulla, jol-20 lainen eståa kemiallisen reaktion tåssa kohdassa, kunnes ryhma lopuksi otetaan pois. YleensS niissS on myos tavallista aminohapon tai fragmentin α-aminoryhman suojaaminen siksi aikaa kun tcimå kokonaisuus reagoi karboksyyliryhman avulla, minkS jSlkeen seuraa Oi-aminon suojaryhman selek-25 tiivinen poistaminen, jotta seuraava reaktio voisi tapah-tua tassS kohdassa. Sen mukaisesti niissS on seunoin tavallista valmistaa synteesin yhtenS vaiheena vSlituote, joka kSsittaa jokaisen aminohappojSSnndksistM ja se on halutun jSrjestyksen mukaisesti liitetty peptidiketjuun, jolloin 30 sivuketjusuojaryhmSt liitetaan sopiviin jaSnndksiin.
TSmSn keksinnbn mukaiset menetelmSt voidaan suorit-taa lukuisia tukifaaseja kSyttamSHS. NSmS tukifaasit voi-vat olla esimerkiksi hartseja, kuten bentshydryyliamiini-hartseja (sopivasti 2 % verkkokytkentSS), p-metyylibents-35 hydryyliamiinihartseja (sopivasti 2 % verkkokytkentSS), tai vastaavia.
12
Kaavassa II: R*, R2 ja R·^ ovat edelleen ylla låhemmin kuvatun mukaisia.
on vety tai asyyliryhmå, joka on saatu 1-7 5 hiiliatomia sisåltåvien alifaattisten tai alisyklisten karboksyylihappojen suorista tai haarautuneista ketjuis-ta, taia-aminon suojaryhmS. X^:n tarkoittamat a-aminon suojaryhmåt ovat sellaisia, jotka alan kehitystason mukaan ovat tunnettuja kaytettaviksi asteittaisessa synteesissa 10 polypeptideja vårten. a-aminon suojaryhmSluokista, joita voidaan kSyttSS X1:nS, voidaan mainita fluorenyylimetoksi-karbonyyli (Fmoc) tai t-butoksikarbonyyli (Boc).
4 X voi olla sopiva Ser:n hydroksyyliryhmSn suoja-ryhma, kuten esimerkiksi bentsyyli (Bzl) ja 2,6-dikloori-15 bentsyyli (DCB). Parhaana pidetty suojaryhmS on Bzl.
X^ voi olla sopiva Tyr:n fenyylihydroksyyliryhmHn suojaryhmS, kuten esimerkiksi Bzl, 2-Br-Z ja 2,6-dikloori-bentsyyli (DCB). Parhaana pidetty suojaryhmS on DCB.
X^ on Lys:n tai Orn:n sivuketjuaminoryhmMn sopiva 20 suojaryhma. EsimerkkejS sopivista sivuketjuaminon suoja-ryhmista ovat bentsyylioksikarbonyyli (Z) ja 2-klooribent-syylioksikarbonyyli /Z-(2-Cl)] .
g X on sopiva suojaryhmS Arg:n guanidinoryhmSlle, kuten esimerkiksi nitro, Tos, metyyli-(t-butyylibents)-25 sulfonyyli, 4-metoksi-2,3,6-trimetyylibentssulfonyyli; parhaana pidetty ryhmS on Tos.
X10 on amidiryhmaa suojaava bentshydryyli- tai metyylibentshydryyliryhma, joka on kiinnittynyt tahan tarkoitukseen yleisesti kSytettyyn kantajahartsiin (esi-30 merkiksi 98 % styreeni - 2 % dinyylibentseenikopolyme-raatti, joka sisaltaa bentshydryyliamiini- tai metyyli-bentshydryyliamiiniryhmia).
Sivuketjuaminon suojaryhman valinta ei ole kriit-tinen, mutta yleensS valitaan sellainen, joka ei poistu, 35 kun α-aminon suojaryhmiS poistetaan synteesin aikana.
91075 13
Kaavan I mukaiset peptidit valmistetaan kaavan II mukaisista valipeptidihartseista alan nykytason perusteel-la tunnettujen menetelmien mukaan.
Kaavan II mukaisten vSlipeptidihartsien kiinteSfaa-5 sisynteesi suoritetaan oleellisesti siten kuin Merrifield, J. on kuvannut julkaisussa J. Am. Chem. Soc., 85, s. 2 149 (1963) . KiinteSfaasisynteesi aloitetaan peptidin C-termi-naalisesta pSåstå kytkemSHS suojattu «-aminohappo sopi-vaan hartsiin. TSllainen IShtoaine voidaan valmistaa sito-10 malla α-aminosuojattu Gly tai D-Ala amidisidoksella bents-hydryyliamiinihartsiin. Sellaisia kantajahartseja on ylei-sesti saatavissa kaupallisesti ja niitS kSytetSSn yleensS, kun toivotussa syntetisoitavassa polypeptidissS on C-pSSs-sS Ct-karboksiamidi.
15 EraåssS synteesin suoritusmuodossa suojataan Gly:n tai D-Ala:n primaarinen aminoryhmS t-butoksikarbonyloival-la vaikuttaja-aineella ja kytkeminen suoritetaan kSyttå-mSlia jotakin tunnetuista dialkyylikarbodi-imidi-kytken-tSmenetelmistS.
20 Sopivan kytkentMreagenssin valinta on asiantunti- jalle tuttua. Erityisen sopiva kytkentSreagenssi on N,N'-di-isopropyylikarbodi-imidi (DIC).
Aktivoivia reagensseja ja niiden kSyttSS peptidi-kytkennassS on kuvattu teoksessa M. Bodanszky, "Prin-25 ciples of Peptide Synthesis", Springer-Verlag, 1984.
Jokainen suojattu aminohappo tai aminohappojakso lisStaSn kiinteSfaasireaktoriin kSyttclen sen suurin piirtein kaksinkertaista ylimSåraa ja kytkeminen voidaan suorittaa vSliaineessa DMFsCI^C^ (1:1) tai pelkSssa 30 Ci^C^issa. Sellaisissa tapauksissa, joissa esiintyy epa-taydellista kytkeytymista, kytkentamenetelmS toistetaan, ennen kuin poistetaan <t-aminon suojaryhmS ennen seuraavan aminohapon kanssa kytkemistH. KytkentSreaktion tulosta tutkitaan kussakin synteesin vaiheessa mieluimmin ninhyd-35 riinireaktion avulla kuten on kuvanneet E. Kaiser et al., Anal. Biochem., 34, 595 (1970).
14
Sen jalkeen kun kaavan II mukaisten peptidihart-sien haluttu aminohapposekvenssi on saatu valmiiksi, pois-tetaan pååssS oleva Boc-ryhmS ja haluttaessa suoritetaan N-terminaalinen asylointi kayttamSHS sopivaa asyylihyd-5 ridiS tai happokloridia 50-kertaisena ylimaårana haloge-noidussa hiilivetyliuottimessa; sopivasti etikkahapon an-hydridia metyleenikloridissa 30 minuutin ajan. vaiipepti-di voidaan poistaa kantajahartsista kasittelemaiia sita sellaisella reagenssilla kuin esimerkiksi nestemaiselia 10 fluorivedylia, joka ei ainoastaan lohkaise peptidia irti hartsista, vaan lohkaisee myOs pois kaikki muut sivuket-jusuojaryhmat X^, X^, X®, X^^ ja X**, mikaii se on lasna.
Mikaii lohkaisemiseen kaytetaan fluorivetyS, sil-loin ovat reaktioputkessa lasna anisoli tai m-kresoli tai 15 haluttaessa metyylietyylisulfidi huuhteluaineena.
*6 6
Peptidien II, joissa R on D-Lys tai D-Orn ja X
on vety, muuttaminen peptideiksi I syanaatin avulla on ku-vattu edellisilia sivuilla.
Jos asylointi jatetaan pois, johtaa kaavan II mu-20 kaisten peptidihartsien kasitteleminen fluorivedylia sel-laisten dekapeptidien muodostumiseen, joissa on vapaita omega-amino- ja/tai a-aminoryhmia ja jotka vastaavat kaa-vaa II, jossa X-, X^, X5, X®, X^ ja, mikSli se on lasna, g ^ X ovat vety. NMmS vapaat peptidit muutetaan kaavan I mu-25 kaisiksi peptideiksi, joissa X on karbamoyyliryhma, nimit-tåin kMsittelemalla syanaatilla, sopivasti alkalimetalli-syanaatilla, mieluimmin kaliumsyanaatilla. Viimeksi mai-nittua reaktiota, toisin sanoen I^Nin muuttamista I^N-CO-NH:ksi peptidien aminopSSssa ja Orn/Lys-jSannosten 30 muuttamista Cit/Hci-jaånnSksiksi, voidaan helposti tark-kailla HPLC:n avulla kayttaen MeCN-vesipitoisia TFA-sys-teemeja, johtuen karbamoyloiduille peptideille tunnus-omaisesti retentioajan pidentyneisyydestS 2-3 minuutin verran, toisin sanoen HjN-CO-NH-ryhman omaaville yhdis-35 teille, I^N-ryhmHn omaaviin yhdisteisiin verrattuna tun-nusomaisesta.
II
91075 15
Vaihtoehtoisesti ja mieluummin saadaan peptidit I, joissa X = asyyli tai karbamoyyli, suoraan kaavan II mukai- sista valipeptidi-hartseista, joissa X1 on asyyli tai kar-*6 1 bamoyyli ja R on D-Cit, D-Hci, D-Cit(Q) tai D-Hci(Q), 5 lohkaisemalla ja poistamalla lohkaisemalla suojaryhmSt.
Vaikka tSssS kuvataan my6s kaavan I mukaisten yh-disteiden yksinomainen kiinteåfaasisynteesi ja osittainen kiinteafaasisynteesi, voitaisiin yhdisteet valmistaa klas-sisten liuosfaasimenetelmienkin avulla.
10 EsimerkeissS kuvatulla tavalla valmistettuja, syn- teettisiS peptidejS verrattiin kahteen tehokkaimmasta vii-me aikoina kuvatuista LHRHrn antagonisteista, nimittSin yhdisteisiin /Ac-D-Phe(4-C1)^ '2, D-Trp3, D-Arg^, D-Ala^7-LHRH (ORG-30276) (Coy et al., Endocrinology, 100, 1 445,
15 1982) ja /Ac-D-Nal(2)1, D-Phe(4-F)2, D-Trp3, D-Arg®7LHRH
(ORF 18260) (Rivier et al., teoksessa: Vickery, B.H., Nestor, Jr., J.J., Hafez, E.S.E. (toimittajat), "LHRH and Its Analogs", s. 11 - 22, MTP Press, Lancaster, UK, 1984), ja todettiin, ettå ne osoittivat yhtS voimakkaita estMviS 20 vaikutuksia seka in vitro etta in vivo, tosin sillS poik-keuksella, ettS painvastoin kuin kontrollipeptideilla niilla ei ilmennyt in vivo turvotusvaikutuksia.
Hormonaalisia vaikutuksia in vitro verrattiin rot-tien aivolisakerauhasen superfundamentoituihin solusys-25 teemeihin (S. Vigh ja A.V. Schally, Peptides, 5 suppl.
1: 241 - 247, 1984), joissa LHRH:n (ja muiden vapautta-vien hormonien) vaikutus voidaan todeta tarkkaan, koska LH:n (tai muiden aivolisSkerauhashormonien) mSSrS, joka erittyy poisvirtaavaan vSliaineeseen, ei ainoastaan ole 30 verrannollinen kaytetyn peptidin hormoninvapautustehoon, vaan on mybs helposti mitattavissa hyvin kuvatun radioim-munoanalyysin avulla.
LHRH:n antagonistin tehokkuuden mSSrittamiseksi kåytetSSn superfundamentointiin seoksia, jotka sisSltSvat 35 LHRH:a samana pysyvSn konsentraation (tavallisesti 1 nM) ja antagonistia vaihtelevia konsentraatioita, jotta saa- 16 taisiin maMritettyå se molekyylinen antagonistin suhde LHRH:n, jossa LHRH:n vaikutus on taysin estynyt. Nama suhteet ovat suunnilleen 5 kununankin kaavan I mukaisen peptidin ja vertailupeptidin kohdalla, kun rotan aivo-5 lisåkerauhasen solusysteemia esi-inkuboidaan etukåteen antagonistien kanssa 9 minuutin ajan.
In vivo -ovulaationestokokeessa (A. Corbin ja C.W. Beattie; Endocr. Res. Commun. 2, 1 - 23, 1975; D.H. Coy et al., Endocrinology, 100, 1 445, 1982) todettiin kaa-10 van I mukaisten peptidien kohdalla samoin, etta ne ovat suurin piirtein yhtS tehokkaita kuin kontrolliantagonis-ti, nimittain kullakin peptidilla voitiin havaita ovulaa-tion 87,5 - 100 % estyminen ihon alle annetun annoksen ollessa 1-3 pg/rotta.
15 Schmidtin et al. (Contraception, 29, 283 - 289, 1984) turvotuskokeessa voitiin kuitenkin todeta selva ero kontrollipeptidien ja kaavan I mukaisten peptidien vSlillå. Kontrollipeptidit aiheuttivat turvotusta kasvois-sa ja raajoissa, kun niitå annettiin rotille ihon alle an-20 noksina 1,25 ja 1,5 mg/kg. Kaavan I mukaisilla peptideil-la ei voitu havaita sellaista vastavaikutusta, kun niitS annettiin ihon alle annoksena 1,5 mg/kg.
Suoritetuissa kokeissa jaettiin rotat kolmeen ryh-mSSn, siten etta kulloinkin oli viisi rottaa ryhmSS koh-25 den ja tutkittua yhdistettS kohden. Suoritettiin vertai-lu tunnetun, alan kehitystason mukaisen yhdisteen kanssa, jolla on nimitys ORG 30276 (N-Ac-D-p-Cl-Phe*'^, D-Trp^, D-Arg^, D-Ala^) .
Ryhmille annettiin kerran påivSsså kahtena perak-30 kaisena paivana ruiskeena ihon alle LHRH:n antagonisteja annostuksena 1,5 mg/kg. KontrolliryhmSlle annettiin ruiskeena ainoastaan laimennusainetta. Rottia tarkkailtiin 5 tunnin ajan paivaa kohden. Rottien reaktiot luokitel-tiin seuraavasti: NR ei nSkyvSS vastavaikutusta, PR osit-35 tainen vastavaikutus: turvotusta nenSn alueella ja nen5n-vierusalueella, FR taydellinen vastavaikutus: turvotusta kasvoissa ja turvonneet raajat.
Il 91075 17
Alla olevassa taulukossa 1 on yhteenveto tulok- sista.
Taulukko 1 5 LHRH:n 1. påivå 2. påivå
antagonist!_NR_PR_FR__NR_PR_FR
ORG 30276 3 7 0 0 0 10 kontrolli 900 900 esimerkki I 800 9 0* 0 10 esimerkki III 800 800 esimerkki IV 9 0 0 9 0 0 esimerkki V 900 81*0 esimerkki XX 900 81*0 esimerkki XXI 900 900 15 esimerkki XXVI 8 0 0 8 0 0 esimerkki XXVII 900 900 * hyvin våhåistå kasvoturvotusta 20 Kaikki valmistetut peptidit ovat tSysin tehokkai- ta LHRH-vapautuksen estSmisessS jossakin maarin jSrkevi-nS konsentraatioina in vitro, vaikka useimmat ovat hiu-kan vahemmSn tehokkaita kuin kysymyksessS olevat in vitro-standardit; tosin nSma peptidit ovat in vivo paljon te-25 hokkaampia.
Tama osoitettiin kokeessa, joka koski histamiinin vapauttamista in vitro vatsakalvon syottOsoluista, joka koe suoritettiin yhdenmukaisesti Morganin et al. (Int.
Archs. Allergy appl. Immun. 80, 70, 1986) menetelmHn kans-30 sa.
Histamiinin vapauttaminen in vitro
THssa kokeessa rottia nukutettiin eetterin avulla ja vatsaontelotulehdusnestesoluja otettiin talteen pese-mMllS niita 12 ml:11a syBttdsoluvaiiainetta (MCM) (150 mM 35 NaCl; 3 mM KC1; 3,0 mM Na2HP04; 3,5 mM KH2PC>4; 0,98 mM
CaCl2; 5,6 mM dekstroosi; 0,1 % vasikan seerumin albumii- 18 ni; 0,1 % gelatiini ja 10 E/ml hepariinia) [9]. Koottiin soluja 4:ltS tai 5:ltS rotalta, ne sentrifugoitiin nopeu-della 120 G, uudelleensuspendoitiin MCM;een konsentraa-tioksi 0,5 x 106 ml ja 1 ml annostettiin 12 x 75 mm:n po-5 lyetyleeniputkiin. Putkien annettiin tasoittua 15 minuu-tin ajan 37 °C:een ja niitS inkuboitiin 60 minuutin ajan yksin (histamiinin taustavapauttaminen), 48/80:n kanssa (positiivinen kontrolli) (Sigma Chemicals, St. Louis,
Mo.) tai sopivien konsentraatioiden kanssa (1 ng -10 10 pg/ml) LHRH:n antagonisteja. Reaktio lopetettiin jSSh- dyttSmSllS putket 4 °C:een. Putket sentrifugoitiin; su-pernatantit poistettiin ja niitS sSilytettiin -20 °C:ssa, kunnes niistå tutkittiin histamiini. Kokeet suoritettiin kulloinkin kahdesti. Solujen kokonaishistamiini osoitet-15 tiin keittSmSllS 10 minuutin ajan. Vastavaikutuksena antagonisterne vapautettu histamiini ilmoitettiin prosent-timSSrSnS koko vapautumista. NSmS konsentraatiot, joissa vapautui suurin piirtein 50 % koko syOttOsolujen hista-miinista (HRDS0 pg/ml), mSSritettiin jokaiselle antago-20 nistille. Tuloksista on esitetty yhteenveto kuviossa 1.
EsillS olevan keksinndn mukaisesti valmistettua LHRH-analogia, jossa 6-asemassa on D-sitrulliini, verrat-tiin rakenteeltaan ISheiseen, julkaisusta Z. Natur-forschung. 42b (1987) 101 - 106 tunnettuun peptidiin, 25 jossa 6-asemassa on D,L-sitrulliini.
50 pSivSS vanhoja Spraque-Dawley-naarasrottia (paino 200 - 230 g) kSsiteltiin dimetyylibentsantrasee-nillS (DMBA; 20 mg/elSin) suun kautta. Noin 20 pSivSn ku-luttua voitiin todeta ensimmSiset rintakasvaimet. Kasvai-30 men paino mSSritettiin Druckreyn menetelmSllS [Druckrey, H., Steinhoff, D., Nakayama, M., Preussmann, R., Anger, K.: Experimentelle BeitrSge zum Dosis-Problem in der Krebs-Chemotherapie und zur Wirkungsweise von Endoxan., Dtsch. Med. Wschr. 88 (1963) 651] vertaamalla kunkin kas-35 vaimen tilavuutta etukSteen muodostettujen plastiliini-
II
91075 19 mallien tilavuuteen. Kasvaimen paino raaaritettiin kerto-malla mallin paino tekijalia, joka muistutti plastiliinin ja kasvainkudosten ominaispainoja. Taman menetelmSn valido in ti suoritettiin korreloimalla 99 palpoidun kasvaimen 5 painot painoihin, jotka saatiin punnitsemalla suoraan ir-tileikattu kasvain. Korrelaatiokerroin oli 0,98. Kun ko-konaiskasvainmassa oli noin 1 g, eiaimet jaettiin sattu-manvaraisesti kSsittelyryhmiin ja kontrolliryhmiin, jois-sa kussakin oli 7 eiainta, ja hoito aloitettiin vSlittd-10 masti.
Testattavat yhdisteet olivat Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (D-muoto; D-20761), Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-L-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (L-muoto, D-21378) ja Ac-15 D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D,L-Cit-Leu-Arg-
Pro-D-Ala-NH2 (DL-muoto, D-21385). Yhdisteet injektoitiin ihon alle yhtenS annoksena; annoksen suuruus oli 3,16 mg/kg. Koe paatettiin 21 paivan kuluttua ja kasvaimen paino maaritettiin. Tulokset esitetaan seuraavassa 20 taulukossa 2.
Taulukko 2 D-20761 D-21385 D-21378 kontrolli (D-muoto) (DL-muoto) (L-muoto) 25
Keskimaarainen 0,45 8,6 9,4 9,45 kasvaimen paino g:ina 21 paivan kuluttua koeyh-30 disteen injek- tiosta
Kun rottia, joilla oli DMBArlla indusoituja kas-35 vaimia, hoidettiin yhdelia suurella annoksella (3,16 mg/kg) valmisteita D-20761 (D-muoto), D-21378 (L-muoto) ja D-21385 (DL-muoto), havaittiin, etta L-muoto oli tay-sin tehoton estamaan kasvaimen kasvua. MyOs DL-muoto oli lahes tehoton: saatiin vain 9 %:n inhibitio kontrolliin 20 verrattuna. Sita vastoin D-muoto esti kasvaimen kasvua hyvin voimakkaasti eli 95 % kontrolliin verrattuna.
NSma koetulokset osoittavat, etta D-muoto toimii hyvin spesifisesti seka DL- etta L-muotoon verrattuna.
5 Kaikilla peptideilia todettiin ovulaatio estava vaikutus naarasnisakkailia hyvin alhaisina annoksina. Kaavan I mukaiset peptidit annettiin usein farmaseutti-sesti hyvaksyttavien, ei myrkyllisten suolojen, kuten esimerkiksi happoadditiosuolojen, muodossa. Esimerkkeja 10 sellaisista happoadditiosuoloista ovat hydrokloridi, hyd-robromidi, sulfaatti, fosfaatti, fumaraatti, glukonaatti, tannaatti, maleaatti, asetaatti, sitraatti, bentsonaatti, sukkinaatti, alginaatti, pamoaatti, malaatti, askorbaat-ti, tartraatti ja vastaavat. Kun vaikuttava aine annetaan 15 tablettimuodossa, voi tabletti sisaitaa farmaseuttisesti hyvaksyttavaa laimennusainetta, jossa on sideainetta, kuten esimerkiksi traganttia, maissitarkkelysta tai gela-tiinia; hajotusainetta, kuten algiinihappoa ja liukuai-netta, kuten magnesiumstearaattia.
20 Kun antaminen halutaan suorittaa nestemaisessé muodossa, voidaan kåyttaa makeutusainetta ja/tai makuai-netta farmaseuttisesti hyvaksyttavan laimennusaineen osa-na, ja antamisen tapahtuessa laskimoon se suoritetaan isotoonisessa suolaliuoksessa, fosfaattipuskuriliuoksis-25 sa tai vastaavassa.
Farmaseuttiset valmisteet sisaitavat tavallisesti peptidin yhdessa tavanomaisen, farmaseuttisesti hyvaksyttavan kantaja-aineen kanssa. Annos on yleensa suurin piirtein 1 - 100 mikrogrammaa peptidia kilogrammaa kohden 30 saajan ruumiinpainoa antamisen tapahtuessa laskimoon; suun kautta annettavat annokset ovat suurempia. Yleensa tapahtuu koehenkilOiden hoito nailia peptideilia samalla tavoin kuin kliininen hoito muilla LHRHrn antagonisteil-la.
'35 Naita peptidej3 voidaan antaa nisakkaille laski moon, ihon alle, lihaksen sisaan, suun kautta, nenan si-
II
91075 21 sSån tai emSttimen siså&n, sikiSvyyden ehkSisyn ja/tai kontrollin aikaansaamiseksi ja samoin kåyttdtapauksissa, joissa tarvitaan ohimenevaa sukurauhasaktiivisuuden vai-menemista, kuten esimerkiksi hoidettaessa ennenaikaista 5 puberteettia tai sadehoidon tai kemoterapian aikana.
TepsivSt annokset vaihtelevat kulloinkin antamismuodon ja kulloisenkin hoidettavan nisSkåslajin mukaan. Esimerkki tyypillisesta annostusmuodosta on fysiologinen suola-liuos, jossa on peptidia, ja tata annetaan annoksena suu-10 rin piirtein 0,1 - 2,5 mg/kg ruumiinpainoa. Peptidin an-taminen suun kautta voi tapahtua joko kiinteana tai nes-temaisenå muotona.
Vaikka keksintO on kuvattu huomioiden parhaana pi-detty suoritusmuoto, tulisi olla itsestaan selvaa, etta 15 voidaan tehda vaihdoksia ja muutoksia, jotka ovat asian-tuntijalle ilmeisen selvia, ilman etta poiketaan oheis-ten patenttivaatimusten rajoittamalta keksinndn alueelta. KeksinnOssS voidaan samoin kayttaa alan kehitystason mu-kaisia korvaamisia, jotka eivat oleellisesti poikkea suo-20 rituksesta.
SB-030, SB-075 ja SB-088 ovat, kuten jaljempana on kuvattu tarkemmin, dekapeptideja, joilla on erityisen edullisia vaikutuksia:
Ac-D-Nal (2) -D-Phe( 4C1)-R3-Ser-Tyr-R6-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 25 SB-030, R3 = D-Trp, R6 * D-Cit; SB-075, R3 - D-Pal, R6 « D-Cit? SB-088, R3 - D-Pal, R6 « D-Hci.
Rakenneosiin sisaityvista aminohapoista eivat D-Pal, D-Cit ja D-Hci ole kaupallisesti saatavissa. D-Pal 30 vaatii taydellisen synteesin, joka alkaa dietyyliasetami-domalonaatista ja 3-pikolyylikloridista ja suoritetaan tunnetulla tavalla. D-Cit ja D-Hci voidaan helposti val-mistaa kaupallisesti saatavista diaminohapoista, kuten esimerkiksi aminohaposta D-Om tai D-Lys.
22
Jokaisella peptidilia ilmenee voimakas LHRH:a es-tava vaikutus, kuten alla on osoitettu, eika ollenkaan turvotusta aiheuttavia sivuvaikutuksia.
Taulukko 3 5 SB-030:n, SB-075:n ja SB-088:n LHRH:a estava vai kutus
Peptidi LHRH:n (3 nM) % esty- Ovulaationesto- minen ekvimolaarisella koe 10 maarana peptidia ajan- kohtana 0 min. 2 tunnin kulut- annos (pg) % esto _tua_ SB-030 83 58 1,5 50 15 3,0 100 SB-088 86 60 1,5 66 2.0 83 3.0 100 SB-075 89 54 1,5 75 20 1,0 100
Lyhennykset: Aminohapot ja suojaryhmat on lyhen-netty kuten IUPAC IUB JCBN on suositellut [Eur. J.
25 Biochem. 138, 9-37 (1984)]. Muita lyhennyksia ovat:
Boc20, di-t-butyylidikarbonaatti; DCM, di-kloorimetaani; TLC/TLE, ohutkerroskromatografia/elektroforeesi silika-geelilevylia.
SB-030:11a on SB-075:een ja SB-088:aan verrattuna 30 se etu, etta se sisaitaa vain yhden epatavallisen amino-hapon, nimittain aminohapon D-Cit. Toisaalta osoittavat sekå SB-075 etta SB-088 suurempaa tehokkuutta ja parempaa vesiliukoisuutta kuin SB-030.
Havainnot ja kokeet, jotka tehtiin SB-030:n, 35 SB-075:n ja SB-088:n synteesin aikana, voidaan esittaa ’·“· lyhyesti seuraavasti:
II
91075 23
Kuvataan SB-030:n, SB-075:η ja SB-088:η kiintea-faasisynteesi bentshydryyliamiinihartsin yhteydessa kayt-tSen Boc-toimintaohjetta. Tama menettely on tSysin riit-tava taman peptidin kokoamista vårten, koska se sisaltaa 5 asteittaisen ketjunpidentamisen karboksyylipaan kautta, jotta vaitettaisiin merkittava rasemoituminen amidisidok-sen muodostamisen aikana, ja samoin siihen sisaityy vaii-tuotteiden helppo eristaminen, jotka vaiituotteet voivat osoittautua erikoisen vaikeiksi syntetisoitaessa luon-10 teeltaan hydrofiilisia fragmentteja (toisin sanoen frag-mentteja 9-10-5-10).
Tavanomainen asteittainen synteesi liuoksessa on luonnollisesti myOs sopiva naiden peptidien valmistusme-netelma, mutta se menetelma vaatii kuitenkin varmasti 15 enenunan tyOta ja aikaa.
LahtQaineet
Klintea kantaja
Kaytettiin bentshydryyliamiinihartsia, joka sisai-si 1,1 mekv. NH2/g (Advanced ChemTech, Louisville, KY).
20 Voidaan myOs kayttaa pienenunan NH2-pitoisuuden, esim.
0,4 - 0,6 mekv./g, omaavia hartseja, mutta niiden kSyttd on luonnollisesti epataloudellisempaa.
Aminojohdannaiset
Alla mainitut Boc-aminohapot hankittiin toimini-25 melta Bachem ja kaytettiin ilman lisapuhdistusta:
Boc-D-Ala, Boc-Arg(Tos), Boc-Leu.H20,
Boc-D-Nal, Boc-D-Phe(4Cl), Boc-Pro,
Boc-Ser(Bzl), Boc-D-Trp ja Boc-Tyr(DCB).
Boc-D-Cit, Boc-D-Hci ja Boc-D-Pal, joita ei ole 30 kaupallisesti saatavissa, valmistettiin kirjallisuuden mukaan (1 - 4), vahaisin muutoksin.
Boc-D-Cit
Vaihe 1, D-Cit D-Orn (Sigma, 98 %) muutettiin D-Cit:ksi kuten on 35 kuvattu (1), silia poikkeuksella, etta reaktioseosta, 24 jossa oli (D-Orn)2Cu ja KOCN, sekoitettiin 2-3 tunnin ajan, jotta esitettaisiin (D-Cit, D-Orn)Cu:n muodostaman karstan kerrostuminen astian seindmiin.
D-Cit:n puhtaus tutkittiin TLE:n (ohutkerroselek-5 troforeesi) avulla kayttaen pH-arvon 6,5 omaava pyridii-ni-etikkahappo-vesi (100:4:900) -puskuriliuosta ja 30 V/cm, 45 minuutin aikana.
Vaihe 2, Boc-D-Cit 6,6 g (30 mmoolia) Boc20, joka oli 15 ml:ssa ase-10 tonitriilia, lisattiin liuokseen, jossa oli 4,4 g (25 mmoolia) D-Cit 25 ml:ssa vetta ja 12,6 ml:ssa (90 mmoolia) trietyyliamiinia. Seosta sekoitettiin 2-3 tunnin ajan. Sen jaikeen seokselle suoritettiin TLC (ohutkerroskromatografia) kayttaen liuotinsysteemia etyy-15 liasetaatti-pyridiini-etikkahappo-vesi (60:10:3:6): yh-disteilia Boc-D-Cit, D-Cit ja Boc-D-Orn (Boc), joka muo-dostui D-Orn-epSpuhtaudesta, ilmenevat vastaavasti Rf-ar-vot 0,4, 0,0 ja 0,9. Seosta laimennettiin 25 ml:11a vetta ja uutettiin dietyylieetterilia (2 x 20 ml) ja etyyliase-20 taatilla (2 x 20 ml), jotta poistettaisiin ylimaara di- karbonaattia ja Boc-D-Orn(Boc)-epapuhtaus. Vesifaasi teh-tiin happamaksi kayttaen 1 M KHS04 ja sen jaikeen kun oli lisatty suunnilleen 10 g Na2S04 uutettiin faasia etyyli-asetaatilla (3 x 30 ml). Yhdistetyt etyyliasetaattiliuok-25 set (jotka oli huolellisesti erotettu vesikerroksesta) haihdutettiin tyhjOssa. jaannOs laimennettiin kuivalla dioksaanilla ja haihdutettiin tyhjOssa kolme kertaa. Taman seurauksena muodostunut kevyt dljy laimennettiin 25 ml:11a DMF ja kaytettiin kytkemiseen pitoisuutena 30 mmooli/ml tata Boc-D-Cit-perusliuosta.
Boc-Cit:n synteesi kayttaen Boc-atsidia asylointi-aineena ja kiteisen disykloheksyyliamiinisuolan valmis-tus on kuvattu (2).
II
91075 25
Boc-D-Hci Vaihe 1, D-Hci D-Hci valmistettiin yhdisteesta D-Lys.HCl (Sigma) vastaavasti kuin D-Cit (katso ylia ja viittaus 1).
5 Vaihe 2, Boc-D-Hci 6,6 g di-tert-butyylikarbonaattia laimennettuna 15 ml:11a asetonitriilia lisåttiin liuokseen, jossa oli 25 mmoolia (4,73 g) D-Hci 25 ml:ssa vetta ja 12,6 ml:ssa (90 mmoolia) trietyyliamiinia, ja reaktioseosta sekoitet-10 tiin 2-3 tunnin ajan. Reaktion tflydellisyys tutkittiin TLC:n avulla kuten Boc-D-Cit:n tapauksessa; Boc-D-Hci:n, D-Lys:n ja Boc-D-Lys(Boc):n Rf-arvot olivat vastaavasti 0,3, 0,0 ja 0,8. Reaktioseosta uutettiin eetterilia. Vesi faasi tehtiin happamaksi kayttaen 1 M KHS04 ja sen jai-15 keen kun oli lisatty 10 g Na2S04, sitS uutettiin etyyli-asetaatin ja n-butanolin 1:1-seoksella (4 x 30 ml). Yh-distetyt orgaaniset liuokset kuivattiin Na2S04:n avulla ja haihdutettiin tyhjfissa. Jaanndsta hierrettiin dietyy-lieetterin kanssa, suodatettiin, pestiin eetterilia, sit-20 ten suspendoitiin etyyliasetaattiin ja sekoitettiin 2 tunnin ajan 20 °C:ssa ja lisaksi 0 °C:ssa viela 2 tunnin ajan. Nain saatu kiteinen materiaali suodatettiin eril-leen, pestiin kylmaiia etyyliasetaatilla ja kuivattiin, jolloin saatiin suunnilleen 3,9 g Boc-D-Hci:a, jonka su-25 lamispiste oli 141 - 142 °C (hajoaa).
Boc-D-Pal(3)
Vaihe 1, dietyyliasetamido(3-pyridyylimetyyli) ma-lonaatti (3)
Saatiin 113,0 g (60,3 %) dietyyliasetamido(3-pyri-30 dyylimetyyli)malonaattia 132,0 g:sta dietyyliasetamidoma-lonaattia J.E. Rivierin et al. (3) menetelman avulla.
Raaka materiaali suli 95 eC:ssa. Pieni nåyte 104 -106 °C:ssa sulaneesta (kirjallisuuden mukaan 95 °C) uudelleenkiteytettiin vedesta.
35 Vaihe 2, N-asetyyli-3-(3-pyridyyli)-DL-alaniinin etyyliesteri (4) 26 61,6 g (200 mmoolia) dietyyliasetamido(3-pyridyy-limetyyli)malonaattia laimennettiin tulpalla varustetussa pullossa 210 ml:11a NaOH:n etanoliliuosta ja selsotettiln y£>n ajan ympSristOn låmpOtilassa. Seuraavana pSivSna seos 5 saatettiin palautusjaahdytysolosuhteisiin ja sita pidet-tiin j aahdytyspalautuslåmpOtilassa 30 minuutin ajan. Seos jååhdytettiin sitten huoneen lampOtilaan ja suodatettiin liukenemattomlen kiinteiden aineiden poistamiseksi. Liu-kenemattomla aineita pestlin erllalsilla pienilia maaril-10 la etanolia ja heitettiin sitten pols. Yhdistetyt suodok-set haihdutettiin kuiviin ja kulva jaannds kiteytettlin vedesta kayttaen 3 - 5 ml H20:ta grammaa kohden kiinteaa ainetta. Materiaalin saanto 38,0 (160 mmoolia, 80 %). Su-lamispiste 124 - 126 °C (kirjallisuuden mukaan 118 -15 121 °C).
Vaihe 3, N-asetyyli-3-(3-pyridyyli)-D-alaniinin etyyliesteri (3) 45,0 g (190 mmoolia) ylia kuvattua DL-seosta laimennettiin 225 ml:11a kuumaa 4,5 % HC1. Tama liuos jaah-20 dytettiin sitten nopeasti 25 °C:een hienojen kiteiden suspension muodostamiseksi. pH-arvo saadettiin 7,2:ksi kåyttamaiia 2 N KOH:a ja sitten lisattiin 150 mg alfaky-motrypsiinia ja pH-arvo pidettiin sitten vaiilia 6,8 - 7,2 lisaamana tipoittain 2 N K0H:a. Sen jaikeen kun pH-25 arvossa ei ollut tapahtunut muutosta 15 minuutin aikana, lisattiin viela 50 mg alfa-kymotrypsiinia, jotta varmis-tettaisiin, etta hydrolyysi oli tapahtunut taydellisesti. pH-arvossa ei ilmennyt enaa muutosta taman uuden entsyy-milisayksen jaikeen ja lopullinen pH-arvo oli 7,2. Tata 30 liuosta uutettiin 4 x 200 ml:11a etyyliasetaattia. Etyy-liasetaattiuutteet yhdistettiin, kuivattiin Na2S04:n avulla, kuivausaine suodatettiin pois ja liuotin poistet-tiin tyhjOssa. jaanntis uudelleenkiteytettiin tolueenista (13 15 ml/g), jolloin saatiin saannoksi 13,0 g (55 mmoo-35 lia, 57 %), tuotetta, jonka sulamispiste oli 79 - 81 °C (kirjallisuuden mukaan 122 °C).
II
91075 27
Vaihe 4, 3-(3-pyridyyli)-D-alaniini, D-Pal(3) (4) 13.0 g (55 mmoolia) N-asetyyli-3-(3-pyridyyli)-D-alaniinin etyyliesteriS kuumennettiin γόη ajan 100 ml:n kanssa 6 N HCl:a palautusja&hdyttåen. Liuotin poistettiin 5 tyhjOssS. Lisattiin 15 mg etanolia ja tama poistettiin tyhjdssa. Tama etanolikasittely toistettiin vieia kaksi kertaa. jaannbs uudelleenkiteytettiin 90 % etanolista, jolloin saatiin 13,0 g (54 mmoolia, 98 %) amiinihydroklo-ridia. Sulamispiste 237 - 239 °C (hajoaa) (kirjallisuuden 10 mukaan 253 - 256 °C).
Vaihe 5, N-Boc-3-(3-pyridyyli)-D-alaniini,
Boc-D-Pal(3) (3) 13.0 g (54 mmoolia) ylia kuvattua D-Pal(3):a lai-mennettiin 50 ml:11a H20:ta. Lisattiin 50 ml tetrahydro-
15 furaania ja 30 ml (214 mmoolia) trietyyliamiinia. Tahan seokseen lisattiin sekoittamisen aikana tunnin vaiiajoin 4 x 5 g:n osia Boc20 ( 90,7 mmoolia). Sen jaikeen kun oil sekoitettu kaikkiaan 6 tunnin ajan, poistettiin tetrahyd-rofuraani tyhjOssa. Ylimaara dikarbonaattia poistettiin 20 heksaanin avulla. Vesikerroksen pH-arvo saadettiin 6 N
HCl:n avulla 4:ksi ja sita uutettiin sitten 4 x 100 ml:n osilla etyyliasetaattia. Etyyliasetaattiuutteet yhdistet-tiin ja takaisinuutettiin 2 x 5 ml:n osilla kyliastettya suolaliuosta. Kuivattiin Na2S04:n avulla, suodatettiin ja 25 liuotin poistettiin tyhjbssa. jaannOs uudelleenkiteytettiin tolueenista, jolloin saatiin 8,4 g (31 mmoolia, 57 %) Boc-D-Pal(3):a, jonka sulamispiste oli 141 - 142 °C (hajoaa) (kirjallisuuden mukaan 135 - 136 °C).
Peptldihartsien valmistus 30 Manuaaliseen synteesiin tarkoitettuun reaktioas- tiaan, jonka vetavyys oli suunnilleen 60 ml; pantiin 1 g (1,1 mmoolia) bentshydryyliamiini HCl-hartsia. Annettiin paisua 2 tunnin ajan 20 ml:ssa DCM:a ja suodatettiin sitten. Sen jaikeen lisattiin hartsin joukkoon 15 ml 10 % 35 DIEA/DCM:a, ravistettiin 2 minuutin ajan ja suodatettiin.
28
Viimeksi mainittu kåsittely toistettiin vielå kaksi ker-taa. Boc-aminohapot liitettiin etukåteen muodostettuina HOBt-estereinå tåhån hartsiin våhitelleen kuten on esi-tetty taulukossa 3. Vaiheet 1-12 muodostavat yhden ami-5 nohappojåånnOksen kytkentåsyklin. Kymmenen peråkkåisen syklin avulla saatiin vapaan D-Nal(2)-jåånndksen pååttåmå dekapeptidiamidihartsi. Tåmå peptidihartsi asetyloitiin kuten on kuvattu vaiheissa 2e ja 2f, poistettiin sitten reaktioastiasta, pestiin DCM:lla ja n-heksaanilla ja kui- 10 vattiin tyhjdsså, jolloin saatiin 2,9 - 3,0 g haluttua seuraavien rakenteiden mukaista asetyylidekapeptidiamidi-hartsia2: 1. Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4C1)-D-Trp-Ser(Bzl)-Tyr(DCB)-D-Cit-Leu-Arg(Tos)-Pro-D-Ala-NH-HARTSI SB-030:n tapauk- 15 sessa; 2. Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4C1)-D-Pal(3)-Ser(Bzl)-
Tyr(DCB)-D-Cit-Leu-Arg(Tos)-Pro-D-Ala-NH-HARTSI SB-075:n tapauksessa; 3. Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4C1)-D-Pal(3)-Ser(Bzl)- 20 Tyr(DCB)-D-Hci-Leu-Arg(Tos)-Pro-D-Ala-NH-HARTSI SB-088:n tapauksessa.
2SB-088:a syntetisoitiin pienempi måårå (0,1866 mmoolia), peptidihartsia no. 3 ja saadun vapaan dekapep-tidin raakaa HF-suolaa oli vastaavasti 410 mg ja 200 mg.
II
91075 29
Taulukko 4. Synteesiohjelma
Vaihe Reagenssi ja menetelmS Sekoitusaika 5 minuutteina 1 etukåteen valmistettu HOBt-esteri^, kytkentS 90 4 2 ninhydriinikoe (5) , kun palloset ovat 10 keskinkertaisen tai voimakkaan sinisiå, toistetaan vaiheet 1+2, heikosti si-nisen vSrin tapauksessa jatketaan vai-heilla 2a - 2f 2a MeOH (10 ml), pesu 1 15 2b 10 % DIEA/DCM (10 ml), neutralointi 2 2c MeOH (10 ml), pesu 1 2d DCM (10 ml), (kolme kertaa) pesu 2 4 2e asetyyli-imidatsoli , asetylointi 30 2f ninhydriinikoe, jos se on positiivi- 20 nen, toistetaan vaiheet 2d - 2f 3 MeOH (10 ml), (kaksi kertaa) pesu 1 4 DCM (10 ml), (kolme kertaa) pesu 2 5 50 % TFA/DM (10 ml), suojaryhman poisto 1 25 6 50 % TFA/DM (10 ml), suojaryhman poisto 30 7 IpOH (10 ml), pesu 1 8 10 % DIEA/DCM (10 ml), neutralointi 3 9 MeOH (10 ml), pesu 1 30 10 10 % DIEA/DCM (10 ml), neutralointi 3 11 MeOH (10 ml), pesu 1 12 DCM (10 ml), pesu 2 35 ^Lukuunottamatta yhdistettS Boc-D-Cit valmistet- tiin Boc-aminohappojen HOBt-esterit seuraavasti: 30 3 mmol Boc-aminohappoa /toisin sanoen (mg:na) D-Ala: 568, D-Pro: 646, Arg(Tos): 1 286, Leu: 748, Tyr(DCB): 1 321, Ser(Bzl): 886, D-Hci: 865, D-Trp: 913 tai D-Pal(3): 799, D-Phe(4Cl): 899, D-Nal(2): 946? ja 460 mg 5 (3 mmol) HOBT.I^Orta liuotettiin 1 ml:an DMF:a, laimen- nettiin 2 ml:11a DCM:a, jSShdytettiin 0 °C:een ja annet-tiin reagoida 0,6 ml:n (3,8 mmol) kanssa DIC:a 0 °C:ssa 10 minuutin ajan; sen jalkeen lisattiin hartsiin huuhdel-len 4x1 ml:11a DCM:a. Boc-D-Cit:n tapauksessa liuotet-10 tiin HOBt.^O 3 ml:an Boc-D-Cit-perusliuosta, annettiin reagoida DIC:n kanssa kuten yllS, sitten sekoitettiin hartsin joukkoon kåyttSen 1 x 1 ml DMF:a ja 3 x 1 ml:n DCM-huuhtelua.
4
Cit:a sisaltavien peptidihartsien tapauksessa on 15 kokeen tulos negatiivinen, kun palloset ovat valkeita (tai heikosti keltaisia) ja liuos on vårjSytynyt sinipunerta-vaksi. Boc-Arg(Tos):n tSydellinen kiinnittyminen Pro-jSan-ndkseen, joka on liittyneenS hartsiin, voidaan tarkistaa kayttSmSlla isatiinireagenssia (2,5 g isatiinia, 20 g fe-20 nolia, 30 g bentsyylialkoholia ja 2,5 g Boc-Phe:a); kokeen tulos on negatiivinen, kun palloset ovat valkeita (tai heikosti keltaisia, mutta eivat sinisiS) sen jSlkeen kun on pesty 3-4 kertaa asetonilla.
4 0,34 g:n imidatsolia liuotettuna 2 ml:an DCM:a 25 annettiin reagoida 0,5 ml:n kanssa etikkahapon anhydridia 0 °C:ssa 2 minuutin ajan ja lisSttiin sitten hartsin joukkoon kayttSen 3 x 2 ml:n DCM-huuhtelua.
Vapaiden dekapeptidiamidien valmistus
Lohkaisu ja suojauksen poisto 30 Kutakin peptidihartsia kasiteltiin 3 ml:11a m- kresolia ja suunnilleen 30 ml:11a fluorivetyM (HF) 0 °C:ssa 45 minuutin ajan. Sen jalkeen kun HF oli poistet-tu suurtyhjdssS, hierrettiin jaljellS olevaa peptidihartsia kuivan dietyylieetterin kanssa, suodatettiin, pes-35 tiin dietyylieetterillå ja peptidi uutettiin sitten seu-raavasti:
II
91075 31 1. 50 % etikkahappo ja DMF (2 - 2 x 20 ml) SB-030 :n tapauksessa; 2. 50 % etikkahappo (3 x 15 ml) SB-075:n ja SB-088 :n tapauksessa; 5 ja erotettiin hartsista suodattamalla. Peptidi- liuos haihdutettiin tyhjbssM. ja jåånnBstå hierrettiin di-etyylieetterin kanssa, suodatettiin, pestiin dietyylieet-terilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 1,2 - 1,3 g HF-suolaa raako^en dekapeptidien kanssa , puhtauden ollessa 10 70 - 85 %.
Puhdistus
Raaka peptidi puhdistettiin kSyttSmSlia Beckman Prep-350 -preparatiivista HPLC-systeemiS. Erottumiset saatiin tapahtumaan 41,5 x 250 mm:n Dynamax-pylvaMssS, 15 jossa oli pakattuna pallomaista C^-silikageeliM (huokos-koko 300 A, osasten suuruus 12 jam) (RAININ Inc. Co.
Woburn, MA).
Raaka SB-030 lisSttiin pylvSSseen 30 % muurahais-happoliuoksessa, kun sen sijaan raaka SB-075 ja SB-088 20 liuotettiin 30 % etikkahappoon. KSytettiin painegradient-tieluutiota. Liuotin A oli 0,1 % TFA:n vesiliuos ja liuo-tin B oli 0,1 % TFA 70 % asetonitriilin vesiliuoksessa. Painevirtausnopeus oli 35 ml/min. Pylvaan eluointia val-vottiin vaihdeltavissa olevan aallonpituuden UV-detekto-25 rin avulla (Beckman tyyppi 163) 220 nm:n aallonpituudel-la.
Puhtaiden dekapeptidiamidien mSarS ja yleensS saa-dut saannot olivat seuraavat: 1. 600 mg (34 %) SB-030:a, 30 2. 960 mg (52 %) SB-075:tS ja 3. 140 mg (45 %) SB-088:a (katso alaviite 2), jolloin puhtaus oli >95 %.
Analyyttinen HPLC
HPLC-analyysi suoritettiin Hewlett-Packard malli 35 1090 -nestekromatografian avulla. PeptidinSytteet kroma-
tografoitiin 4,6 x 250 mm:n W-Porex 5 um - C^g-pylvaSssS
32 (Phenomex, Rancho Palos Verdes, CA) lapivirtausnopeudel-la 1,2 ml/min kayttaen painegradienttieluutiota liuotti-milla A ja B (raakanSytteiden kromatograiraneja on liitet-ty mukaan).
5 Aminohappoanalyysi
PeptidinSytteitS hydrolysoitiin 110 °C:ssa 20 tun-nin ajan tyhjennetyissa, suljetuissa putkissa kayttSen 4 M metaanisulfonihappoa, jossa oli 0,2 % 3-(2-aminoetyyli)-indolia, ja hydrolysaatin aminohappokoostumus maaritet- 10 tiin Beckman 6300 -aminohappoanalysaattorissa.
Oheisessa taulukossa on osoitettu LHRH-analogien affiniteetti aivolisSkerauhasta kohtaan tai ihmisen nisS-syopamembraanin reseptoreita kohtaan, mSSritettyna kayttaen radioaktiivisuudella merkittya LHRH: a tai radioak- 15 tiivisuudella merkittya D-Trp^-LHRH: a.
Radioaktiivisuudella merkittya LHRH:a kayttaen suoritetut mittaukset (A) osoittavat, etta SB-075:lia il-menee suurin affiniteetti aivolisakerauhasen reseptoreita kohtaan, toisin sanoen silia on suurin kyky syrjayttaa 20 LHRH, mika on LHRH:n antagonistien paatuntomerkki. Toi-saalta nayttaa SB-088 osoittavan erityisen suurta affini-teettia ihmisen nisasyopamembraanin reseptoreita kohtaan kummassakin kokeissa (A + B).
Kirjallisuusviitteet: 25 1. J.P. Greenstein ja M. Winitz: Chemistry of the
Amino Acids, John Wiley + Sons, New York, NY, 1961. (Cit: 2 491 - 2 494).
2. K. Eisele: Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 356, 845 - 854 (1975) .
30 3. J.E. Rivier, J. Porter, C.L. Rivier, M. Perrin, A. Corriogan, W.A. Hook, R.P. Siraganiean ja W.W. Vale: J. Med. Chem. 29, 1 846 - 1 851 (1986).
4. C. Hoes, J. Raap, W. Bloemhoff ja K.E.T.
Kerling: Reel. Trav. Chim. Pay-Bas 99, 99 - 104 (1980).
35 5. J.M. Stewart ja J.D. Young: Solid Phase Peptide
Synthesis, toinen painos. Pierce Chemical Company, Rockford Illionois, 1984^.
11 91075 33
Esimerkki 1
Kaavan Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4 —C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 mukainen peptidi
Synteesi tapahtuu vSlipeptidistS Ac-D-Nal(2)-Pro-5 D-Phe(4—Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2.
TamS vSlipeptidi rakennettiin asteittain n. 0,6 mekv.
NH2/g sisåltSvSSn bentshydryyliamiinihartsiin kiinnit-tyneena Beckman 990 -syntetisaattorissa aloittaen Boc-D-Ala:lla alia kuvatun menetelmSn mukaan.
10 Kytkeminen suoritetaan ohjeen A mukaan seuraavasti:
Ohje A
Reagenssi Sekoitusaika _(minuutteja) 15 1. Boc-aminohappo 60 - 90 (2-3 mmoolia/g hartsia)
+ ekviv. mSSra DIC:S
2. MeOH (kaksi kertaa) 1 3. CH2C12 (kaksi kertaa) 1 20
Suojaryhmien poisto suoritetaan ohjeen B mukaan seuraavasti:
Ohje B
25 Reagenssi Sekoitusaika _(minuutteja) 4. 50 % TFA/1 % etaaniditioli CH2Cl2:ssa (kaksi kertaa) 15 + 15 5. IpOH/1 % etaaniditioli 1 30 6. 10 % TEA CH2Cl2:ssa 2 7. MeOH 1 8. 10 % TEA CH2Cl2:ssa 2 9. MeOH (kaksi kertaa) 1+1 10. CH2C12 (kaksi kertaa) 1+1 35 34
Lyhyesti sanottuna kaytetaan Boc: a α,-aminoryhmien suojaamiseen. Tos:a kaytetaan suojaamaan Arg:n guanidi-noryhmaa. DCB: a kaytetSSn Tyr:n fenolisen hydroksyyli-ryhmån suojaryhmana ja Ser:n OH-ryhma suojataan BzL:n 5 avulla. KSytetaan suojattujen aminohappojen kaksin- - kol-minkertaista ylimSSrSS perustuen bentshydryyliamiinihartsin Nl^-pitoisuuteen plus yhteen ekvivalenttiin DIC:S CI^C^ CH2Cl2:ssa tai 10 - 50 % DMF/CI^Clj:ssa, kulloinkin Boc-aminohapon liukoisuuden mukaan, kahden tunnin ajan.
10 N-terminaalinen asetylointi suoritetaan kayttaen etikkahapon anhydridin 50-kertaista ylimSSraa CH2Cl2:ssa 0,5 tunnin aikana. NSin saadulla suojatulla valipeptidil-la on seuraava kokoonpano:
Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser(X4)-Tyr-(X5)-D-15 Lys(X8)-Leu-Arg(X®)-Pro-D-Ala-NH-X^, missa X4 on Bzl ja X^ on DCB, X8 on Z(2-C1), X8 on Tos ja X^^ on hartsiin kuuluva bentshydryyliryhmS.
Suojatun peptidihartsin pilkkomiseksi ja suojauk-sen poistamiseksi siitS sitM kHsitellMSn 1,4 ml:lla m-20 kresolia ja 15 ml:11a fluorivetya grammaa kohden peptidi-hartsia 0,5 tunnin ajan 0 °C:ssa ja 0,5 tunnin ajan huo-neen ISmpdtilassa. Sen jalkeen kun fluorivety on poistet-tu suurtyhjdssM peptidihartsi pestaan dietyylieetterillS ja peptidi uutetaan sitten DMFrlla ja erotetaan hartsista 25 suodattamalla. DMF-liuos konsentroidaan sitten suurtyhjSs-sa pieneen tilavuuteen ja sita hierretaSn sitten dietyyli-eetterin kanssa. NSin saatu raakatuote puhdistetaan yllå kuvatulla tavalla valmistavan HPLC:n avulla. NMin saadaan ylla annetun kaavan mukainen puhdas vapaa vSlipeptidi, 30 jossa X4, X5, X6, X8 ja X10 merkitsevat vetyS.
Vapaan, D-Lys(X8):n sisaltavan valipeptidin anne-taan sitten reagoida huoneen lampdtilassa kaliumsyanaatin kanssa 80 % DMF:n vesiliuoksessa (81 mg KCNO/ml; aika: 24 tuntia). Sen jalkeen kun liuotin on poistettu suurtyh-35 jossa seuraa reaktiotuotteen puhdistus preparatiivisen HPLC:n avulla; nSin saadaan haluttu D-Hci:n sisaltSvS peptidi.
11 91075 35
Nain saatu D-Hci:n sisaltava peptidi on oleellises-ti puhdas (95 %:iin saakka). HPLC-analyysi suoritetaan Hewlett-Packard 1090A -gradienttinestekromatografiasys-teemissa PHENOMENEX (W-Porex 5C18) -pylvSSssa ja eluoidaan 5 liuottimilla, joista A on: 0,1 % TFA, B: 0,1 % TFA 70 % CH^CNjssa, kSyttåen gradienttia 30 - 60 % 30 minuutissa. Halutulla peptidilla ilmenee HPLC-retentioaika (retention time) 28,2 minuuttia.
Peptidien puhdistaminen suoritetaan Beckman Prep-10 350-gradienttinestekromatografissa kSyttSen 41,4 x 250 mm:n kolonnia, jossa on preparatiivinen, kåånteinen DYNEMAX C18 -faasi (300 A, 12 um), ja liuottimia, joista A on: 0,1 % TFA ja B: 0,1 % TFA 70 % CH^CNsssa, ja kSyttSen painegradienttia 45 - 60 % 30 minuutissa. Puhdas peptidi, 15 joka on saatu TFA-suolan muodossa, voidaan haluttaessa muuttaa asetaattimuotoon, nimittåin saattaen asetaatti-muotoon johtamalla AG3X (Bio-Rad) -pylvåån lavitse ja sen jSlkeen lyofilisoiden.
Esimerkki II
20 Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci(etyy- li)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-N^
Valmistaminen tapahtuu vastaavasta valipeptidis-ta, joka sisaltSS 6-asemassa D-Hci(etyyli):n asemesta aminohapon D-Lys, vastaavalla tavalla kuin esimerkissa 25 I antamalla reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa (0,1 mg 10 ml:ssa 1 g:a kohden vaiipeptidia) DMF:ssa 0-10 °C:ssa 10 tunnin aikana. Retentioaika (retention time) on 30,8 minuuttia.
Esimerkki III
30 Peptidin Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr- D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 synteesi suoritetaan esimerkissa I kuvatulla tavalla. Lahtdpeptidi sisaltaa 6-asemassa Boc-D-Orn(Z) :n Boc-D-Lys/Z (2-Cl]_7:n asemesta, jota kaytetaan esimerkissa I. Tama lahtdpeptidi valmiste-35 taan vastaavasti kuin esimerkissa I. Retentioaika 27,8 minuuttia. Lahtopeptidin retentioaika 25,5 minuuttia.
36
Esimerkki IV
Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit(etyy-li)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-N^
TamS peptidi valmistetaan Ac-D-Nal(2)-Phe(4—Cl) -5 D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2:sta ja N-etyyli- isosyanaatista DMF:ssa (0,1 mg 10 ml:ssa grammaa kohden vSlipeptidiS) 0-10 °C:ssa esimerkin III mukaisesti. Reaktioaika 10 tuntia. HPLC-retentioaika 30,4 minuuttia.
Esimerkki V
10 Peptidin Ac-D-Phe(4-C1)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr- D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 synteesi suoritetaan esimer-kissS I kuvatulla tavalla, silla poikkeuksella, ettS lSh-tdpeptidin 1-asemaan sijoitetaan Boc-D-Phe(4-C1) Boc-D-Nal(2):n asemesta, jolloin saadaan vSlittdmSnS låhtdpep-15 tidinS Ac-D-Phe(4-C1)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2· Retentioaika 26,6 minuuttia; lahtdpep-tidin, jossa on Ac 1-asemassa, retentioaika; 24,0 minuuttia .
Esimerkki VI
20 Ac-D-Phe(4—Cl)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci- (etyyli)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NI^
Lcihtopeptidi on Ac-D-Phe(4-C1)-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (katso esimerkki V), jonka annetaan reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa 25 (0,1 mg 10 mltssa grammaa kohden lahtdpeptidiS) 0-10 °C;ssa DMFtssa. Reaktioaika 10 tuntia. HPLC-retentioaika: 29,2 minuuttia.
Esimerkki VII
Peptidin Ac-D-Phe(4-C1)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-30 D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 synteesi suoritetaan kuten on kuvattu esimerkissa I, sillS poikkeuksella, ettå Boc-D-Phe(4-Cl) sijoitetaan Boc-D-Nal(2):n asemesta 1-asemaan ja Boc-D-Orn(Z) Boc-D-Lys/Z:n asemesta 6-ase-maan, niin etta valittomåna låhtdpeptidinS saadaan Ac-35 D-Phe(4-C1)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (retentioaika 24,0 minuuttia), jonka annetaan I! 91075 37 sitten reagoida esimerkin I mukaisesti KCNO:n kanssa. HPLC-retentioaika 26,3 minuuttia.
Esimerkki VIII
Ac-D-Phe(4-C1)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-5 (etyyli)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NI^ LShtSpeptidi on Ac-D-Phe(4 —Cl)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-N^ (katso esimerkki VII), jonka annetaan reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa DMF:ssa (0,1 mg 10 ml:ssa grammaa kohden IShtdpeptidia) 10 0-10 °C:ssa 10 tunnin ajan. HPLC-retentioaika 28,6 mi nuuttia .
Esimerkki IX
Peptidin Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 synteesi suoritetaan esimerkin 15 I mukaisesti. Saadulla peptidillS ilmenee HPLC-retentioaika 27,4 minuuttia.
Esimerkki X
Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4 —Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci(etyy-li)-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 20 LShtopeptidi on: Ac-D-Nal(2)-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-
Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-Gly-N^ (katso esimerkki IX), jonka annetaan reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa DMF:ssa (0,1 mg 10 ml:ssa grammaa kohden lShtOpeptidia) 0-10 °C:ssa 10 tunnin ajan. HPLC-retentioaika 30,0 minuuttia.
25 Esimerkki XI
Ac-Pro-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Lahtdpeptidi on: Ac-Pro-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (retentioaika 16,8 minuuttia), 30 jonka annetaan reagoida esimerkin I mukaisesti kaliumsya-naatin kanssa. Lahtopeptidi saadaan vastaavasti kuin esi-merkissa I, silla poikkeuksella, etta Boc-Pro sijoitetaan Boc-D-Nal(2):n asemesta 1-asemaan. HPLC-retentioaika 19,3 minuuttia.
38
Esimerkki XII
Ac-Pro-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci(etyyli)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
LahtQpeptidi on: Ac-D-Pro-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-5 D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (katso esimerkki XI), jonka annetaan reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa DMF:ssa (0,1 mg 10 ml:ssa grammaa kohden IShtSpeptidiS) 0-10 °C:ssa 10 tunnin ajan. HPLC-retentioaika 22 minuuttia.
Esimerkki XIII
10 Ac-Pro-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro- D-Ala-NH2 Låhtdpeptidi on: Ac-Pro-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (retentioaika 16,85 minuuttia), jonka annetaan esimerkin I mukaisesti reagoida kaliumsya-15 naatin kanssa. LShtdpeptidi saadaan myos vastaavasti kuin esimerkissM I, silla erotuksella, etta Boc-Pro sijoitetaan Boc-D-Nal(2):n asemesta 1-asemaan ja Boc-D-Orn(Z) Boc-D-Lys/Z (2-Cl)_7:n asemesta 6-asemaan. HPLC-retentioaika 18,8 minuuttia.
20 Esimerkki XIV
Ac-Pro-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit(etyyli)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Lcihtdpeptidi on: Ac-Pro-D-Phe (4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (katso esimerkki XIII), jonka 25 annetaan esimerkin VI mukaisesti reagoida N-etyyli-isosya-naatin kanssa. HPLC-retentioaika 24,9 minuuttia.
Esimerkki XV
Ac-D-Phe-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 30 Lahtopeptidi on: Ac-D-Phe-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr- D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (retentioaika 20,8 minuuttia), jonka annetaan esimerkin I mukaisesti reagoida kaliumsya-naatin kanssa. Lahtdpeptidi saadaan vastaavasti kuin esi-merkissS I, jolloin kuitenkin 1-asemaan sijoitetaan Boc-35 D-Nal(2):n asemesta aminohappoj&Snnds Boc-D-Phe. HPLC-retentioaika 23,4 minuuttia.
II
91075 39
Esimerkki XVI
Ac-D-Phe-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci(etyyli)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Lahtopeptidi on: Ac-D-Phe-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-5 Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (katso esimerkki XV), jon-ka annetaan reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa DMF:ssa (0,1 mg 10 ml:ssa grammaa kohden lShtdpeptidiS) 0-10 °C:ssa 10 tunnin ajan. HPLC-retentioaika 26,0 minuuttia.
Esimerkki XVII
10 Ac-D-Phe-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-
Pro-D-Ala-NH2 LShtSpeptidi on: Ac-D-Phe-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (retentioaika 21,0 minuuttia) , jonka annetaan esimerkin I mukaisesti reagoida ka-15 liumsyanaatin kanssa. Lahtopeptidin valmistus tapahtuu esimerkin I mukaisesti silla erotuksella, ettS Boc-D-Nal(2):n asemesta sijoitetaan 1-asemaan Boc-D-Phe ja Boc-D-Lys/Z (2-Cl]_7:n asemesta 6-asemaan Boc-D-Orn (Z) . HPLC-retentioaika 23,1 minuuttia.
20 Esimerkki XVIII
Ac-D-Phe-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit(etyyli)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Lahtdpeptidi on: Ac-D-Phe-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Orn-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 (katso esimerkki XVII), 25 jonka annetaan reagoida N-etyyli-isosyanaatin kanssa DMF:ssa (0,1 mg 10 ml:ssa grammaa kohden IShtSpeptidiS) 0-10 °C:ssa 10 tunnin ajan. HPLC-retentioaika 25,4 minuuttia .
Esimerkki XIX
30 Esimerkki kaavan Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-
Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 mukaisen peptidin .·. · yleisesta valmistuksesta.
TSmS peptidi valmistetaan asteittain kMyttSen bentshydryyliamiinihartsia, joka sisaltSM suunnilleen 35 1,0 moolia ekvivalenttisia aminoryhmiS grammaa kohden, kSyttSen Beckman 990 -syntetisaattoria, jolloin aloite- 40 taan Boc-D-Alasta. Kytkeminen tapahtuu esimerkisså I an-netun ohjeen A mukaan. D-suojaryhmån poistaminen suorite-taan esimerkisså I annetun ohjeen B mukaan. Muut olosuh-teet ovat vastaavien esimerkisså I annettujen tietojen 5 mukaiset.
NSin saatu suojattu vSlipeptidi on kokoonpanoltaan seuraavanlainen:
Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser(X4)-Tyr(X5)-D-
Hci-Leu-Arg(X8)-Pro-D-Ala-NHX10, jolloin X4 = Bzl ja X5 8 10 10 = Bzb, X = Tos ja X on bentshydryyliryhmå, joka kuuluu hartsiin.
NSin saadun suojatun peptidin lohkaisu tapahtuu esimerkin I mukaan kSyttaen 1,4 ml m-kresolia ja 15 ml fluorivetyå grammaa kohden peptidihartsia (0,5 tuntia 15 0 °C:ssa ja 0,5 tuntia huoneen ISmpdtilassa). Kaikki muut toimenpiteet ovat esimerkisså I ilmoitetun mukaiset. Saatu raakatuote puhdistetaan preparatiivisen HPLC-kromato-grafian avulla. HPLC-analyysi suoritetaan esimerkin I mu-kaisesti Hewlett-Packard 1090A -gradienttinestekromato-20 grafiasysteemissa kSyttåen Phenomenex-pylvSstS ja eluoi-den seuraavilla liuottimilla:
Liuotin A: 0,1 % TFA, liuotin B: 0,1 % TFA 70 % CH^CNissa kayttaen gradienttia 35 - 75 % 30 minuutissa. Saadun peptidin, jossa on 6-asemassa D-Hci, HPLC-retentio-25 aika on 22,9 minuuttia. LisSpuhdistus tapahtuu Beckmann-Prep-350-gradientti-nestekromatografissa esimerkin I mu-kaisesti.
Esimerkki XX
Peptidi H2N-CO-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-30 D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 saadaan esimerkin XIX mukai-sesti sillS erotuksella, etta Boc-D-Nal(2):n asemesta si-joitetaan 1-asemaan ^N-CO-D-Nal(2) ja N-terminaalista asylointia ei suoriteta. HPLC-retentioaika 24,0 minuuttia.
Esimerkki XXI
35 Peptidin Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-
Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 synteesi tapahtuu kuten on ku- 91075 41 vattu esimerkissa XIX silla poikkeuksella, etta Boc-D-Cit sijoitetaan asemaan 6 Boc-D-Hci:n asemesta. Halutulla peptidilla on HPLC-retentioaika 22,5 minuuttia.
Esimerkki XXII
5 Ac-D-Phe(4—Cl)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-
Arg-Pro-D-Ala-N^
Valmistus esimerkin XIX mukaisesti sillM erotuksel-la, ettS Boc-D-Phe(4-C1) sijoitetaan 1-asemaan Boc-D-Nal(2):n asemesta. HPLC-retentioaika 24,0 minuuttia.
10 Esimerkki XXIII
Ac-D-Phe(4-C1)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NHj
Valmistus tapahtuu esimerkin XIX mukaisesti silla erotuksella, etta Boc-D-Phe(4-C1) sijoitetaan Boc-D- 15 Nal(2):n asemesta 1-asemaan ja Boc-D-Cit Boc-D-Hci:n asemesta 6-asemaan. Saadun peptidin retentioaika on 20,8 minuuttia.
Esimerkki XXIV
Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu- 20 Arg-Pro-Gly-NH2
Valmistus tapahtuu esimerkin XIX mukaisesti, silla erotuksella, etta Boc-Gly sijoitetaan 10-asemaan Boc-D-Ala:n asemesta. Saadun peptidin HPLC-retentioaika on 22,4 minuuttia.
25 Esimerkki XXV
Ac-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Valmistus tapahtuu esimerkin XIX mukaisesti silla erotuksella, etta Boc-D-Pal(3) sijoitetaan Boc-D-Trp:n 30 asemesta 3-asemaan. Saadun peptidin HPLC-retentioaika on 13,6 minuuttia.
Esimerkki XXVI
Ac-D-Nal-D-Phe(4 —Cl)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 35 Valmistus tapahtuu esimerkin XIX mukaisesti silia erotuksella, etta Boc-D-Cit sijoitetaan D-Hci:n asemesta 42 6-asemaan ja Boc-D-Pal(3) Boc-D-Trp:n asemesta 3-asemaan. Saadun peptidin HPLC-retentioaika on 13,3 minuuttia.
Esimerkki XXVII
Peptidin H2N-CO-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Pal(3)-Ser-5 Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 synteesi suoritetaan kuten on kuvattu esimerkissS XIX, sillS erotuksella, etta Boc-D-Cit sijoitetaan Boc-D-Hci:n asemesta asemaan 6, Boc-D-Pal(3) sijoitetaan Boc-D-Trp:n asemesta asemaan 3 ja N-terminaalinen asetylointi jatetSMn pois. Nain saadaan 10 valipeptidi: H-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-
Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2. NSin saadun vapaan peptidin an-netaan sitten reagoida kaliumsyanaatin kanssa 80 % DMF:n vesiliuoksessa (81 mg KOCN/300 mg peptidiS/ml) huoneen lampotilassa 24 tunnin ajan. Sen jålkeen kun on haihdutet-15 tu suurtyhjosså, reaktioseos puhdistetaan preparatiivisen HPLC:n avulla. Nain saadun peptidin HPLC-retentioaika on 14,4 minuuttia.
Esimerkki XXVIII
H2N-CO-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Hci-20 Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 valmistetaan esimerkin XIX mukaises-ti sillS erotuksella, etta Boc-D-Pal(3) sijoitetaan Boc-D-Trp:n asemesta asemaan 3 ja ettS N-terminaalinen asetylointi jåtetåan pois. Nain saadaan valipeptidi H-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2. 25 N3in saadun vapaan peptidin annetaan sitten reagoida kaliumsyanaatin kanssa DMF:n vesiliuoksessa (81 mg KOCN/300 mg peptidiS/ml) huoneen 13mp6tilassa 24 tunnin ajan. Sen jHlkeen kun on haihdutettu suurtyhjosså, reaktioseos puhdistetaan preparatiivisen HPLC:n avulla. Nåin saadun pep-30 tidin HPLC-retentioaika on 14,7 minuuttia.
Esimerkki XXIX
Peptidin H2N-C0-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2 synteesi alkaa vSlipepti-din H-D-Nal(2)-D-Phe(4-C1)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-35 Pro-D-Ala-NH2 valmistamisesta. Vålipeptidin synteesi suoritetaan kuten on kuvattu esimerkissS XIX, silla erotuk-
II
91075 43 sella, etta Boc-D-Orn(Z) sijoitetaan asemaan 6 Boc-D-Hci:n asemesta ja etta N-terminaalinen asetylointi jate-taan pois. Vapaan, 6-asemassa D-0rn:n sisåltavan pepti-din annetaan sitten reagoida kaliumsyanaatin kanssa 80 % 5 DMF:n vesiliuoksessa (162 mg KOCN/300 mg peptidiS/ml) huoneen lampdtilassa 24 tunnin ajan. Sen jMlkeen on haih-dutettu suurtyhjSsså, reaktioseos puhdistetaan preparatii-visen HPLC:n avulla. NSin saadun peptidin HPLC-retentio-aika on 23,6 minuuttia.
10 Esimerkki XXX
Peptidin H2N-C0-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Hci-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NHj synteesi alkaa vMlipep-tidin H-D-Nal(2)-D-Phe(4-Cl)-D-Trp-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 valmistamisella. VSlipeptidin synteesi suo-15 ritetaan kuten on kuvattu esimerkissa XIX, silla erotuk-sella, etta Boc-D-Lys/Z(2-Cl7 sijoitetaan 6-asemaan Boc-D-Hci:n asemesta ja etta N-terminaalinen asetylointi jS-tetSMn pois. Vapaan peptidin, joka sisSltSS 6-asemassa D-Lys:n, annetaan sitten reagoida kaliumsyanaatin kanssa 20 80 % DMF:n vesiliuoksessa (164 mg KOCN/300 mg peptidiS/ml) huoneen lampdtilassa 24 tunnin ajan. Sen jSlkeen kun on haihdutettu suurtyhjossa,reaktioseos puhdistetaan prepa-ratiivisen HPLC:n avulla. NMin saadun peptidin HPLC-re-tentioaika on 14,0 minuuttia.
Claims (7)
1. MenetelmS terapeuttisesti kSyttOkelpoisen pep-5 tidin valmistamiseksi, jolla on kaava X-R1-R2-R3-Ser-Tyr-R6-Leu-Arg-Pro-R10-NH2 (I) jossa 10. on asyyliryhma, joka on saatu 1-7 hiiliatomia sisaltavlen, alifaattisten tai alisyklisten karboksyyli-happojen suorista tai haarautuneista ketjuista, tai kar-bamoyyliryhma, R1 on D- tai L-Pro, D- tai L-A3-Pro, D-Phe,
15 D-Phe(4-Hl), D-Ser, D-Thr, D-Ala, D-Nal(l) tai D-Nal(2), R2 on D-Phe tai D-Phe(4-Hl), R3 on D-Trp, D-Phe, D-Pal(3), D-Nal(l) tai D-Nal(2), R6 on D-Cit, D-Hci, D-Cit(Q) tai D-Hci(Q) ja 20 R10 on Gly tai D-Ala, jolloin HI on fluori, kloori tai bromi ja Q on C^-alkyy-li, tai sen farmaseuttisesti hyvaksyttavien happoadditio-suolojen valmistamiseksi, tunnettu siita, etta peptidikemiassa tavallisen fragmenttikondensaation 25 avulla kondensoidaan vastaavat peptidifragmentit tai peptidi rakennetaan asteittain lahtbaminohapoista peptidikemiassa tavallisen fragmenttikondensaation avulla tai kaavan I mukaisessa peptidissS, jossa R6 on D-Orn 30 tai D-Lys, D-Orn:n tai D-Lys:n vapaa aminoryhma muutetaan saattamalla reagoimaan alkalisyanatin kanssa tai yhdis-teen kanssa, joka tuottaa syanaatin, tai C^-alkyyli-iso-syanaatin kanssa ureidoryhm&ksi ja saadut peptidit mahdollisesti asyloidaan ja/tai 35 muutetaan amideiksi ja II 91075 mahdollisesti muutetaan fysiologisesti vaaratto-miksi happosuoloiksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta suoritetaan asteittainen ra- 5 kentaminen, jolloin ensin sidotaan karboksyylipåån amino- happo, glysiini tai D-alaniini, tai niiden amidi, joissa pysyvS α-aminoryhma on suojattu, tata tarkoitusta vårten tavanomaiseen synteettiseen kantajaan kovalenttisesti, α-aminon suojaryhmå lohkaistaan pois, nain saatuun vapaa-10 seen aminoryhmaan sidotaan lahinna seuraava suojattu ami-nohappo sen karboksyyliryhmSn kautta, sitten jalleen lohkaistaan taman toisen aminohapon α-aminon suojaryhma pois, tahan sidotaan seuraava aminohappo ja talla tavoin askel askeleelta liitetaan syntetisoitavan peptidin muut 15 aminohapot oikeassa jarjestyksessa, ja kun kaikki amino-hapot on liitetty valmis peptidi lohkaistaan pois kanta-jasta ja mahdollisesti lohkaistaan pois lisaksi lasna olevat sivuryhmien suojaryhmat.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, 20 tunnettu siita, etta X on asetyyli- tai karba-moyyliryhma, R1 on D-Nal(2), D- tai L-Pro, D-Phe tai D-Phe(4-Cl), R2 on D-Phe(4-Cl) tai D-Phe(4-F) ja R3 on D-Trp tai D-Pal(3).
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen me-25 netelma, tunnettu siita, etta X on asetyyli, R1 on D-Nal(2) tai D-Phe(4-Cl), R2 on D-Phe(4-Cl), R3 on D-Trp tai D-Pal(3) ja R10 on D-Ala.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen mene-telma, tunnettu siita, etta X on asetyyli.
6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen mene- telma, tunnettu siita, etta X on karbamoyyli.
7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen mene-telma, tunnettu siita, etta R6 on D-Cit tai D-Hci.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI933629A FI101884B (fi) | 1987-07-17 | 1993-08-17 | Luteinisoivaa hormonia vapauttavan hormonin (LHRH) antagonistipeptidej ä |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/074,126 US4800191A (en) | 1987-07-17 | 1987-07-17 | LHRH antagonists |
| US7412687 | 1987-07-17 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI883388A0 FI883388A0 (fi) | 1988-07-15 |
| FI883388L FI883388L (fi) | 1989-01-18 |
| FI91075B FI91075B (fi) | 1994-01-31 |
| FI91075C true FI91075C (fi) | 1994-05-10 |
Family
ID=22117877
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI883388A FI91075C (fi) | 1987-07-17 | 1988-07-15 | Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4800191A (fi) |
| EP (1) | EP0299402B1 (fi) |
| JP (1) | JP2944669B2 (fi) |
| AT (1) | ATE90362T1 (fi) |
| BR (1) | BR1100478A (fi) |
| CA (1) | CA1339623C (fi) |
| DE (3) | DE3881592D1 (fi) |
| DK (1) | DK173375B1 (fi) |
| ES (1) | ES2054741T3 (fi) |
| FI (1) | FI91075C (fi) |
| HK (1) | HK21194A (fi) |
| HU (1) | HU206376B (fi) |
| IE (1) | IE62744B1 (fi) |
| LU (1) | LU90425I2 (fi) |
| LV (1) | LV5795B4 (fi) |
| NL (1) | NL990029I2 (fi) |
| PT (1) | PT87998B (fi) |
| ZA (1) | ZA885147B (fi) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4800191A (en) * | 1987-07-17 | 1989-01-24 | Schally Andrew Victor | LHRH antagonists |
| US5171835A (en) * | 1988-10-21 | 1992-12-15 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | LHRH antagonists |
| US5169932A (en) * | 1989-10-30 | 1992-12-08 | The Salk Institute For Biological Studies | Gnrh analogs |
| US5064939A (en) * | 1990-02-06 | 1991-11-12 | The Salk Institute For Biological Studies | Cyclic gnrh antagonists |
| PT96807B (pt) * | 1990-02-20 | 1998-07-31 | Syntex Inc | Processo melhorado para a sintese de analogos de lh-rh (hormona de libertacao da hormona de luteinizacao) com proteccao minima temporaria |
| ATE144538T1 (de) * | 1991-04-25 | 1996-11-15 | Romano Deghenghi | Lhrh-antagonisten |
| DE4117507A1 (de) * | 1991-05-24 | 1992-11-26 | Schering Ag | Verfahren zur herstellung von n(pfeil hoch)6(pfeil hoch)-substituierten lysin-derivaten |
| CH683149A5 (fr) * | 1991-07-22 | 1994-01-31 | Debio Rech Pharma Sa | Procédé pour la préparation de microsphères en matériau polymère biodégradable. |
| WO1993003752A1 (en) * | 1991-08-19 | 1993-03-04 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Decapeptide having dopamine stimulating activity |
| US6468959B1 (en) * | 1991-12-05 | 2002-10-22 | Alfatec-Pharm Gmbh | Peroral dosage form for peptide containing medicaments, in particular insulin |
| BE1005720A3 (fr) * | 1992-03-20 | 1993-12-28 | Solvay | Procede de synthese peptidique et nouveaux intermediaires de synthese. |
| DE4305225A1 (de) * | 1993-02-19 | 1994-08-25 | Asta Medica Ag | Neues Herstellverfahren für Cetrorelix Lyophilisat |
| US6828415B2 (en) * | 1993-02-19 | 2004-12-07 | Zentaris Gmbh | Oligopeptide lyophilisate, their preparation and use |
| BE1007183A3 (fr) * | 1993-06-18 | 1995-04-18 | Solvay | Ureines derivees d'alpha, omega-diaminoacides et procede pour leur preparation. |
| DE4320201A1 (de) * | 1993-06-18 | 1995-01-12 | Asta Medica Ag | Verwendung von Cetrorelix und weiteren Nona- und Dekapeptiden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Aids und zur Wachstumsstimulation |
| US5413990A (en) * | 1993-08-06 | 1995-05-09 | Tap Pharmaceuticals Inc. | N-terminus modified analogs of LHRH |
| US5502035A (en) * | 1993-08-06 | 1996-03-26 | Tap Holdings Inc. | N-terminus modified analogs of LHRH |
| JP3662926B2 (ja) * | 1993-08-06 | 2005-06-22 | タツプ・ホールデイングス・インコーポレイテツド | Ｌｈｒｈのｎ末端改変類似体 |
| US5643605A (en) * | 1993-10-25 | 1997-07-01 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for microencapsulation of adjuvants |
| US6080429A (en) * | 1993-10-25 | 2000-06-27 | Genentech, Inc. | Method for drying microspheres |
| US6913767B1 (en) | 1993-10-25 | 2005-07-05 | Genentech, Inc. | Compositions for microencapsulation of antigens for use as vaccines |
| CA2178592C (en) * | 1993-12-09 | 2009-07-28 | Jurgen Engel | Long-acting injection suspensions and a process for their preparation |
| DE4342091A1 (de) * | 1993-12-09 | 1995-06-14 | Asta Medica Ag | Erzeugnisse zur Anwendung von initial hohen Dosen von Cetrorelix und Herstellung einer Kombinationspackung zur Verwendung bei Therapie von Krankheiten |
| US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
| US5843901A (en) * | 1995-06-07 | 1998-12-01 | Advanced Research & Technology Institute | LHRH antagonist peptides |
| US5932547A (en) * | 1996-07-03 | 1999-08-03 | Alza Corporation | Non-aqueous polar aprotic peptide formulations |
| US5916582A (en) * | 1996-07-03 | 1999-06-29 | Alza Corporation | Aqueous formulations of peptides |
| US5981489A (en) * | 1996-07-18 | 1999-11-09 | Alza Corporation | Non-aqueous protic peptide formulations |
| DE19644994A1 (de) * | 1996-10-30 | 1998-05-07 | Asta Medica Ag | Diagnostisches Mittel |
| US5821230A (en) * | 1997-04-11 | 1998-10-13 | Ferring Bv | GnRH antagonist decapeptides |
| US5925730A (en) | 1997-04-11 | 1999-07-20 | Ferring Bv | GnRH antagonists |
| US6407205B1 (en) * | 1997-06-04 | 2002-06-18 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | FSH-releasing peptides |
| DE19728737C1 (de) * | 1997-07-04 | 1999-02-11 | Johannes Christian Groeninghen | Verfahren zur Erkennung und Bestimmung von GnRH-Rezeptoren und die Verwendung von GnRH-Agonisten und GnRH-Antagonisten zur Behandlung eines Tumors ausgehend vom Hirn und/oder Nervensystem und/oder den Hirnhäuten |
| US5941844A (en) * | 1997-11-17 | 1999-08-24 | Alza Corporation | Method and device for controlling mammalian reproductive cycle |
| US6191115B1 (en) * | 1998-08-12 | 2001-02-20 | Abbott Laboratories | C-terminus modified heptapeptide LHRH analogs |
| US6858598B1 (en) | 1998-12-23 | 2005-02-22 | G. D. Searle & Co. | Method of using a matrix metalloproteinase inhibitor and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia |
| US6833373B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-12-21 | G.D. Searle & Co. | Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia |
| DE19911771B4 (de) * | 1999-03-17 | 2006-03-30 | Zentaris Gmbh | LHRH-Antagonist, Verfahren zu seiner Herstellung und seiner Verwendung |
| DE10024451A1 (de) * | 2000-05-18 | 2001-11-29 | Asta Medica Ag | Pharmazeutische Darreichungsform für Peptide, Verfahren zu deren Herstellung und Verwendung |
| DE10040700A1 (de) * | 2000-08-17 | 2002-02-28 | Asta Medica Ag | Salze von biologisch aktiven Peptiden, ihre Herstellung und Verwendung |
| AU1996802A (en) | 2000-12-15 | 2002-06-24 | Wrigley W M Jun Co | Encapsulated acid mixtures and products including same |
| DE10157628A1 (de) * | 2001-11-26 | 2003-06-12 | Zentaris Ag | Injektionslösung eines LHRH-Antagonisten |
| US7214662B2 (en) | 2001-11-27 | 2007-05-08 | Zentaris Gmbh | Injectable solution of an LHRH antagonist |
| CN101647772A (zh) * | 2008-08-12 | 2010-02-17 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | Lhrh拮抗剂类物质的注射用缓释制剂及其制备 |
| CA2750582A1 (en) | 2009-01-22 | 2010-07-29 | Maatschap Interne Geneeskunde Rijnstate | Method for the prophylaxis or treatment of flushing |
| CN101863960B (zh) * | 2009-04-15 | 2013-03-06 | 无锡市凯利药业有限公司 | 西曲瑞克的制备方法 |
| EP2266567A1 (en) | 2009-05-26 | 2010-12-29 | Æterna Zentaris GmbH | Use of cetrorelix in combination with PDE V inhibitors for the treatment of sex hormone dependent disorders |
| WO2012077131A1 (en) | 2010-12-06 | 2012-06-14 | Astron Research Limited | A stable ready-to-use cetrorelix injection |
| US20220233631A1 (en) | 2019-06-17 | 2022-07-28 | Intas Pharmaceuticals Ltd. | Stable formulation of cetrorelix |
| CN111875673B (zh) * | 2020-07-31 | 2022-03-11 | 江苏莱森生物科技研究院有限公司 | 一种具有抗肿瘤活性的多肽及其用途 |
| CN112175043A (zh) * | 2020-10-12 | 2021-01-05 | 湖南津安生物科技有限公司 | 一种改进的鲑鱼促性腺激素释放激素的固相合成方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3250759A (en) * | 1961-08-18 | 1966-05-10 | Olin Mathieson | Citrulline containing peptides |
| AU9102582A (en) * | 1981-12-10 | 1983-06-16 | David Howard Coy | Lh-rh antagonists |
| FI832053A7 (fi) * | 1982-06-10 | 1983-12-11 | Syntex Inc | LHRH-antagonistina käyttökelpoinen LHRH:n nonapeptidi- ja dekapeptidianalogit sekä niiden valmistusmenetevalmistusmenetelmä. |
| DE3467173D1 (en) * | 1983-08-16 | 1987-12-10 | Akzo Nv | Lh- rh antagonists |
| US4565804A (en) * | 1984-09-07 | 1986-01-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH Antagonists VI |
| US4690916A (en) * | 1984-11-13 | 1987-09-01 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Nona and decapeptide analogs of LHRH useful as LHRH antagonists |
| US4677193A (en) * | 1985-02-22 | 1987-06-30 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptides containing an aliphatic-aromatic ketone side chain |
| EP0199302A2 (en) * | 1985-04-19 | 1986-10-29 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Contraception in dogs with luteinizing hormone releasing hormone antagonists |
| US4800191A (en) * | 1987-07-17 | 1989-01-24 | Schally Andrew Victor | LHRH antagonists |
-
1987
- 1987-07-17 US US07/074,126 patent/US4800191A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-05-23 US US07/197,153 patent/US5198533A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-11 DE DE8888111031T patent/DE3881592D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-11 DE DE19975052C patent/DE19975052I2/de active Active
- 1988-07-11 AT AT88111031T patent/ATE90362T1/de active
- 1988-07-11 EP EP88111031A patent/EP0299402B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-11 ES ES88111031T patent/ES2054741T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-12 DE DE3823590A patent/DE3823590A1/de not_active Withdrawn
- 1988-07-15 IE IE218588A patent/IE62744B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-07-15 DK DK198803956A patent/DK173375B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-07-15 CA CA000572236A patent/CA1339623C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-15 FI FI883388A patent/FI91075C/fi active IP Right Grant
- 1988-07-15 HU HU883701A patent/HU206376B/hu unknown
- 1988-07-15 ZA ZA885147A patent/ZA885147B/xx unknown
- 1988-07-15 PT PT87998A patent/PT87998B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-07-18 JP JP63177288A patent/JP2944669B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-03-10 HK HK211/94A patent/HK21194A/xx not_active IP Right Cessation
-
1996
- 1996-07-22 LV LV960300A patent/LV5795B4/xx unknown
-
1997
- 1997-05-06 BR BR1100478-9A patent/BR1100478A/pt active IP Right Grant
-
1999
- 1999-08-04 LU LU90425C patent/LU90425I2/fr unknown
- 1999-09-24 NL NL990029C patent/NL990029I2/nl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1339623C (en) | 1998-01-06 |
| DK173375B1 (da) | 2000-09-11 |
| US4800191A (en) | 1989-01-24 |
| ATE90362T1 (de) | 1993-06-15 |
| IE882185L (en) | 1989-01-17 |
| LV5795A4 (lv) | 1997-02-20 |
| IE62744B1 (en) | 1995-02-22 |
| EP0299402A3 (en) | 1990-06-06 |
| BR1100478A (pt) | 2000-03-14 |
| LV5795B4 (lv) | 1997-08-20 |
| NL990029I2 (nl) | 2000-03-01 |
| DE3881592D1 (de) | 1993-07-15 |
| JP2944669B2 (ja) | 1999-09-06 |
| ES2054741T3 (es) | 1994-08-16 |
| LU90425I2 (fr) | 1999-10-04 |
| DE19975052I2 (de) | 2009-01-02 |
| DK395688A (da) | 1989-01-18 |
| EP0299402A2 (de) | 1989-01-18 |
| PT87998A (pt) | 1989-06-30 |
| EP0299402B1 (de) | 1993-06-09 |
| DE3823590A1 (de) | 1989-01-26 |
| DK395688D0 (da) | 1988-07-15 |
| US5198533A (en) | 1993-03-30 |
| FI883388L (fi) | 1989-01-18 |
| NL990029I1 (nl) | 1999-12-01 |
| HU206376B (en) | 1992-10-28 |
| FI91075B (fi) | 1994-01-31 |
| JPS6434997A (en) | 1989-02-06 |
| HK21194A (en) | 1994-03-18 |
| PT87998B (pt) | 1995-03-01 |
| HUT47311A (en) | 1989-02-28 |
| ZA885147B (en) | 1989-04-26 |
| FI883388A0 (fi) | 1988-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI91075C (fi) | Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi | |
| FI92211B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten nonapeptidi- ja dekapeptidianalogien valmistamiseksi, jotka ovat LHRH:n antagonisteja | |
| US5877277A (en) | Octapeptide bombesin analogs | |
| US4410514A (en) | GnRH Agonists | |
| JPH05505630A (ja) | Ｌｈｒｈ拮抗薬 | |
| DK167361B1 (da) | Grf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable salte heraf og fremgangsmaader til fremstilling af disse | |
| WO1994011393A1 (en) | BICYCLIC GnRH ANTAGONISTS | |
| IE914140A1 (en) | Nonapeptide bombesin antagonists | |
| US5681928A (en) | Betides and methods for screening peptides using same | |
| US7732412B2 (en) | Methods of treatment using novel LHRH antagonists having improved solubility properties | |
| EP0201260A2 (en) | GnRH antagonists | |
| WO2000031136A9 (en) | Antagonistic analogs of gh-rh inhibiting igf-i and -ii | |
| US5258492A (en) | LHRH analogues with cytotoxic moieties at the sixth position | |
| Channabasavaiah et al. | New analogs of luliberin which inhibit ovulation in the rat | |
| EP0328090A2 (en) | LHRH analogs | |
| RU2248982C9 (ru) | Антагонисты lhrh, их получение, фармацевтическая композиция и ее получение, способ лечения опухолей и бесплодия у млекопитающих | |
| US4443368A (en) | Peptides affecting gonadal function | |
| Fisher et al. | Hypothalamic hormones. 71. Synthesis and some biological activities of the tyrosine-8 analog of substance P | |
| EP0225746A2 (en) | Therapeutic decapeptides | |
| WO1996017862A1 (en) | Lhrh antagonists having lactam groups at the n-terminus | |
| FI101884B (fi) | Luteinisoivaa hormonia vapauttavan hormonin (LHRH) antagonistipeptidej ä | |
| Flouret et al. | Analogues of a potent oxytocin antagonist with truncated c‐terminus or shorter amino acid side chain of the basic amino acid at position 8 | |
| AU700904C (en) | Amino acids for making betides and methods of screening and making betide libraries |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: ASTA MEDICA AKTIENGESELLSCHAFT |
|
| BB | Publication of examined application | ||
| SPCG | Supplementary protection certificate granted |
Spc suppl protection certif: L179 Extension date: 20130714 |
|
| FG | Patent granted |
Owner name: ADMINISTRATORS OF THE TULANE EDUCATIONAL FUND |