FI87141C - En ny tumoerassocierad antigen - Google Patents
En ny tumoerassocierad antigen Download PDFInfo
- Publication number
- FI87141C FI87141C FI861692A FI861692A FI87141C FI 87141 C FI87141 C FI 87141C FI 861692 A FI861692 A FI 861692A FI 861692 A FI861692 A FI 861692A FI 87141 C FI87141 C FI 87141C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antigen
- antibody
- cancer
- cck061
- monoclonal antibody
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 99
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 99
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 99
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 69
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 37
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 37
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 28
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 25
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 24
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 9
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 claims description 7
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 4
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 claims description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 claims 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 claims 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 14
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 11
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 11
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 10
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 10
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 9
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 9
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 6
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 5
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- WXVUCMFEGJUVTN-UHFFFAOYSA-N phenyl methanesulfonate Chemical compound CS(=O)(=O)OC1=CC=CC=C1 WXVUCMFEGJUVTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101000583741 Clostridium perfringens Sialidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDZJVWAHZYIHFA-UHFFFAOYSA-N [Br].C1(=CC=CC=C1)O Chemical compound [Br].C1(=CC=CC=C1)O JDZJVWAHZYIHFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001466 metabolic labeling Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000012205 qualitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 208000032289 susceptibility to 2 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N tetratriacontaethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1063—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from stomach or intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
1 87141
Uusi kasvaimiin liittyvä antigeeni Tämä keksintö koskee antigeenien, erityisesti kasvaimeen liittyvien antigeenien karakterisointia. Toi-5 saalta se koskee vasta-aineita, jotka reagoivat spesifisesti tällaisten antigeenien kanssa. Vielä toisaalta se koskee näiden vasta-aineiden valmistusmenetelmiä samoin kuin niiden diagnostista käyttöä.
Monoklonaalisten vasta-aineiden mahdolliseen roo-10 liin ihmisten syövän diagnostisoinnissa ja hoidossa on kohdistunut runsaasti tutkimusta ja spekulointia viime aikoina. Erityisen mielenkiinnon kohteena on niiden käyttö immunologisissa määritysmenetelmissä taudin kulun seuraamiseksi esim. hoidon aikana. Erityisen mielenkiinnon kohteena 15 ovat myös monoklonaalisten vasta-aineiden mahdolliset sovellutukset kasvaimen kuvantamisessa siksi, että nämä vasta-aineet pystyvät sitoutumaan kasvaimeen liittyvään antigeeniin in vivo.
Monoklonaalisia vasta-aineita käyttävän teknologian 20 kehittyminen on myös mahdollistanut ihmiskasvainten antigeenisen monimuotoisuuden tutkimisen. Tarkemmin sanottuna monoklonaalisten vasta-aineiden täsmällinen immunoreaktii-visuus sallii ihmiskasvainten erillisten solujen pinta-antigeenien identifioinnin ja erottamisen. Siten näiden 25 erillisten kasvaimeen liittyvien antigeenien karakterisointi antaa käyttöön keinon täydellisemmin hyödyntää monoklonaalisten vasta-aineiden käyttöä syövän diagnostisoinnissa sekä maksimoida monoklonaalisia vasta-aineita käyttävän teknologian edut.
30 Tähän päivään mennessä vain rajoitettu määrä kas vaimeen liittyviä antigeenejä on hyvin karakterisoitu. Lisäksi tiettyjä kasvaimeen liittyviä antigeenejä, joita voitaisiin käyttää diagnostisina ja ennustavina merkkiaineina, ei ehkä esiinny kaikilla potilailla tai kaikkien 35 taudin vaiheiden ja ilmenemismuotojen aikana. Niinpä on 2 87141 tarpeen edelleen identifioida ja karakterisoida ainutlaatuisia kasvaimeen liittyviä antigeenejä.
Tämä keksintö perustuu uuden ihmiskudoksessa ja ihmisen syöpäsolulinjoissa, erityisesti ihmisen paksusuoli-5 syöpäkasvaimessa ja paksusuolisyöpäsolulinjoissa esiintyvän antigeenin löytämiseen ja karakterisointiin. Niinpä keksintö koskee tiettyä kasvaimeen liittyvää antigeeniä, jolle on ominaista sen reaktiivisuus monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa.
10 Tämän keksinnön mukaisesti annetaan käyttöön vasta- aineet, jotka ovat spesifisiä tässä määritellylle antigeenille sekä menetelmät näiden vasta-aineiden valmistamiseksi. Lisäksi keksintö koskee näiden vasta-aineiden käyttöä syövän toteamisessa ja diagnostisoinnissa in vitro immunohis-15 tokemiallisia menetelmiä ja immunologisia määritysmenetelmiä käyttäen. Keksinnön mukaisille menetelmille ja tuotteille on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksissa esitetään .
Kuten yllä on viitattu, tämä keksintö antaa käyttöön 20 uuden kasvaimeen liittyvän antigeenin. Keksinnön mukaisesti monoklonaalista vasta-ainetta CCK061, joka on tuotettu hybridisolulinjassa ATCC-talletus nro HB8786, käytetään tämän aikaisemmin kuvaamattoman antigeenin karakterisoinnissa.
25 Tämän keksinnön mukaisen antigeenin fysiokemialliset ja immunologiset ominaisuudet ja erityisesti sen reaktiivisuus monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa sallii sen karakterisoinnin ja erottamisen muista ihmisen syöpäsolu-linjoissa ja ihmiskudoksessa, mukaanlukien ihmisen kasvainko kudos, olevista antigeeneistä. Niinpä tämän keksinnön käyttöön antaman antigeenin tunnusomaiset piirteet ja ominaisuudet ovat seuraavat: a) Antigeeni esiintyy ihmisen paksusuolisyöpäsolulinjoissa. Normaalit ELISA- (enzyme-linked immunoabsorbent 55 bindind assay) menetelmät, joissa käytetään monoklonaalista 3 87141 vasta-ainetta CCK061, osoittavat, että antigeeni esiintyy paksusuolisyöpäsolulinjoissa mutta ei sellaisissa muissa solulinjoissa kuin rintasyöpä-, eturauhassyöpä-, rakkosyö-pä-, keuhkon adenokarsinooma- ja ihosyöpäsolulinjoissa.
5 b) Antigeeniä tuotetaan normaalin paksusuolikudok- sen ja paksusuolisyöpäkudoksen sytosolissa. CCK061:n reaktiivisuus ihmisen paksusuolikudoksesta ja ihmisen paksusuo-lisyöpäkasvaimesta puhdistettujen plasmamembräänien kanssa osoitetaan tavanomaisilla ELISA-menetelmillä. Vertailun 10 vuoksi mainittakoon, ettei CCK061 reagoi muista normaaleista kudoksista tai kasvainkudoksista, mukaanlukien rintasyöpä-, eturauhassyöpä-, keuhkoadenokarsinooma- ja ihosyö-päkudos, puhdistettujen kalvojen kanssa.
c) Normaalit immunohistokemialliet menetelmät osoit-15 tavat, että antigeeni esiintyy normaalissa paksusuolessa, paksusuolisyöpäkasvaimessa, ruokatorven syöpäkasvaimessa ja mahalaukun syöpäkasvaimessa, sillä tällaisen kudoksen immunoperoksidaasivärjäys osoittaa kudoksen reagoivan voimakkaasti CCK061:n kanssa. Rintasyöpä-, keuhkon adenokarsi-20 nooma-, eturauhassyöpä- ja ihosyöpäkudoksesta osoitetaan heikkoa reaktiivisuutta tai ei reaktiivisuutta lainkaan.
d) SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) ja Western immunoblot -analyysi osoittavat, että antigeenin molekyylipaino on alueella noin 820 000 - noin 960 000.
25 Antigeenin modifiointi proteinaasi K- käsittelyllä ennen SDS-PAGE:a ja Western immunoblot -analyysiä tuhoaa antigeenin reaktiivisuuden CCK061:n kanssa, mikä osoittaa, että antigeeni on proteiini.
e) Antigeeni on luonteeltaan glykoproteiini. Perä- 14 . 30 suolisyöpäsolujen metabolinen leimaus C-glukosamiini11a ja antigeenin saostaminen immunologisesta CCK061:llä normaaleja menetelmiä käyttäen osoittaa, että antigeeni sisältää hiilihydraattiosan.
f) Liuoksessa olevan antigeenin isoelektrinen foku-3j sointi osoittaa isoelektristen pisteiden olevan alueella noin 4,5 - noin 5,0 ja noin 5,1 - noin 5,9 piikkien ollessa noin 4,9 ja noin 5,4.
4 87141
Yllä olevan yhteenvetona, tämän keksinnön mukainen antigeeni, joka voi olla peräisin ihmiskudoksesta tai ihmisen syöpäsolulinjasta, karakterisoidaan glykoproteiiniksi, jonka molekyylipaino on alueella noin 820 000 - noin 960 000 5 ja jonka isoelektriset pisteet ovat alueilla noin 4,5 - noin 5,0 ja noin 5,1 - noin 5,9. Täsmällisemmin sanottuna antigeenille ovat luonteenomaisia isoelektriset pisteet noin 4,9 ja noin 5,4. Edelleen tämän keksinnön mukainen kasvaimeen liittyvä glykoproteiini esiintyy normaalissa paksu-10 suolessa ja paksusuolisyöpäkasvaimessa sekä ihmisen paksu-suolisyöpäsolulinjoissa.
Erityisen tärkeää tämän keksinnön mukaisen antigeenin erottamisessa muista antigeeneistä, mukaanlukien muut kasvaimeen liittyvät antigeenit, on monoklonaalisen 15 vasta-aineen CCK061 spesifisyys ainakin yhtä tässä karakterisoidun antigeenin determinanttia kohtaan. Lisäksi CCK061:n spesifinen reaktiivisuus keksinnön määrittelemää antigeeniä kohtaan antaa käyttöön keinon antigeenin eristämiseksi ja puhdistamiseksi muusta ihmisestä peräisin olevasta mate-20 riaalista ja lopulta sen antigeenisten determinanttien karakterisoimiseksi. Tällaista puhdistettua antigeeniä ja sen determinantteja voidaan käyttää vasta-aineiden tuottamiseen diagnostisia sovellutuksia varten alalla hyvin tunnettuja menetelmiä käyttäen. Voidaan esimerkiksi saada hiiri -25 hybridoomia, jotka tuottavat monoklonaalisia vasta-aineita. Toisissa tapauksissa antigeeniä voidaan käyttää stimuloimaan immuunivaste kanissa, vuohessa tai muussa eläimessä, jonka seerumista voidaan saada polyklonaalisisia vasta-aineita. Lisäksi antigeeniä voidaan käyttää mielenkiinnon 30 kohteena olevien vasta-aineiden, esimerkiksi monoklonaalis-ten vasta-aineiden tai ihmiskudoksessa, veressä tai muissa ruumiin nesteissä olevien vasta-aineiden karakterisoimi-seen.
Tämän keksinnön mukaisesti annetaan käyttöön monok-35 lonaaliset vasta-aineet, jotka ovat spesifisiä karakterisoidulle antigeenille, sekä menetelmät niiden valmistamiseksi.
5 87141
Edullisesti nämä monoklonaaliset vasta-aineet ovat IgG-luokan vasta-aineita ja reagoivat immunologisesti tämän keksinnön mukaisen kasvaimeen liittyvän glykoproteiinin kanssa oleellisesti samalla tavalla kuin monoklonaalinen 5 vasta-aine CCK061. Nämä monoklonaaliset vasta-aineet ovat käyttökelpoisia ihmisen syövän, erityisesti paksu- ja peräsuolisyövän toteamisessa ja diagnostisoinnissa. Lisäksi näitä vasta-aineita voidaan käyttää keksinnön käyttöön antaman antigeenin eristämisessä ja puhdista-10 misessa edelleen sekä sen täsmällisten determinanttien karakterisoinnissa.
Yllä kuvatut monoklonaaliset vasta-aineet voidaan valmistaa yleisesti Kohlerin ja Milsteinin (Nature 256 (1975) 495 - 497) menetelmän mukaisesti. Tämän keksinnön 15 mukaisesti hiiri tai muu sopiva isäntä immunisoidaan keksinnön mukaisella puhdistetulla antigeenillä tai ihmisen paksusuolisyöpäkasvainkudoksen liukoisella fraktiolla. Immunisoinnin jälkeen immunisoidun hiiren pernasolut fuusioidaan sopivan hiiren myeloomasolulinjan solujen kanssa 20 hybridisolulinjojen seoksen saamiseksi. Hybridisolulinjoja viljellään sopivassa väliaineessa, minkä jälkeen valitaan ja kloonataan ne hybridisolulinjat, jotka tuottavat tässä karakterisoidun antigeenin kanssa spesifisesti reagoivaa vasta-ainetta, ja tuotettu vasta-aine otetaan talteen.
25 Tämä keksintö esittää menetelmät ihmisten syövän, erityisesti paksu- ja peräsuolisyövän, toteamiseksi ja diagnostisoimiseksi in vitro. Keksinnön mukaisen ainutlaatuisen kasvaimeen liittyvän glykoproteiinin karakterisointi siten, kuin tässä on julkaistu, sallii sen osoittamisen 30 potilaan kudosnäytteistä immunohistokemiallisia menetelmiä käyttäen ja/tai potilaan nestenäytteistä in vitro immunologisia määritysmenetelmiä käyttäen. Tämän keksinnön mukaisen kasvaimeen liittyvän antigeenin läsnäolon ja/tai määrän määrittämistä potilasnäytteissä immunohistokemiallisten 35 ja/tai immunologisten määritysmenetelmien avulla voidaan käyttää diagnostisoinnissa ja se saattaa osoittaa sairauden etenemistä tai korreloida sen kanssa.
6 87141
Immunohistokemialliset menetelmät, joita käytetään antigeenien osoittamiseksi potilaan kudosnäytteistä, ovat alalla hyvin tunnettuja, eikä niitä tarvitse kuvata yksityiskohtaisesti. Lyhyesti, tämän keksinnön yhteydessä epäil-5 lyn syöpäpotilaan kudosnäyte saatetaan yhteen tässä karakterisoidulle kasvaimeen liittyvälle glykoproteiinille spesifisen monoklonaalisen vasta-aineen kanssa. Erityisen edullista on käyttää monoklonaalista vasta-ainetta CCK061.
Sitten ne kohdat, joihin vasta-aine sitoutuu, määritetään 10 kudosnäytteen valikoivalla värjäyksellä immunohistokemial- lisia menetelmiä käyttäen.
Samalla tavalla menetelmät antigeenisten aineiden osoittamiseksi in vitro potilaan nestenäytteistä immunologisia määritysmenetelmiä käyttäen ovat alalla hyvin tunnet-15 tuja, eikä niitä tarvitse toistaa. Tämän keksinnön tarkoituksiin potilaan nestenäyte saatetaan yhteen ainakin yhden tämän keksinnön mukaisen kasvaimeen liittyvän glykoprote-iinin kanssa spesifisesti reagoivan monoklonaalisen vasta-aineen kanssa ja näytekomponentteihin sitoutunut vasta-aine 20 määritetään. Keksinnön mukaisen antigeenin kvalitatiiviset ja ja/tai kvantitatiiviset määritykset voidaan suorittaa kompetetiivisia immunologisia määritysmenetelmiä käyttäen. Monoklonaalisia vasta-aineita voidaan sopivasti käyttää sillä ehdolla, että näillä vasta-aineilla on vaadittu spesi-25 fisyys tämän keksinnön käyttöön antamalle antigeenille.
Edullisesti käytetään monoklonaalista vasta-ainetta CCK061. Lisäksi edulliset käytettävät immunologiset määritysmenetelmät ovat kaksipaikkaisia two-site) immunometrisiä määritysmenetelmiä, joissa käytetään monoklonaalisia vasta-ainei-30 ta, jotka valitaan siten, että ne sitoutuvat tässä karakterisoidun antigeenin toisiaan häiritsemättömiin determinantteihin.
7 871 41
Keksinnön mukaisia vasta-aineita voidaan käyttää erityisesti ihmisten paksu- ja peräsuolisyövän diagnostisointiin in vivo. Menetelmät kasvaimen paikallistamiseksi ja toteamiseksi voidaan suorittaa antamalla epäillylle 5 syöpäpotilaalle ennalta määrätty, vaikuttava määrä vasta-ainetta, joka reagoi spesifisesti tämän keksinnön mukaisen kasvaimeen liittyvän glykoproteiinin kanssa, ja osoittamalla vasta-aineen sijaintikohdat normaaleja kuvantamismenetelmiä käyttäen. Vasta-ainetta, edullisesti CCK061:tä, anne-10 taan potilaalle farmaseuttisesti hyväksyttävässä kantaja-aineessa ja leimattuna edullisesti gamma-säteilyä lähettävällä radionuklidilla vasta-aineen osoittamiseksi.
Syövän hoidossa syöpäpotilaalle annetaan ennalta määritetty, vaikuttava määrä keksinnön karakterisoimalle 15 kasvaimeen liittyvälle antigeenille spesifistä monoklonaa-lista vasta-ainetta, edullisesti CCK061, farmaseuttisesti hyväksyttävässä kantajassa ja konjugoituna sopivan kasvaimen paikalle annostelua varten valitun terapeuttisen aineen, esimerkiksi radioisotooppien, edullisesti beeta-partikke-20 leita lähettävien radionuklidien, lääkeaineiden, solumyrkkyjen tai biologisten proteiinien kanssa.
Edelleen syövän diagnostisoinnin in vivo yhteydessä alan asiantuntijoille on itsestään selvää, että vasta-ainevalmisteitä, jotka sisältävät keksinnön mukaisel-25 le kasvaimeen liittyvälle antigeenille spesifisten vasta-aineiden tai niiden fragmenttien seoksia, voidaan tietyis-sä tapauksissa käyttää kasvainten toteamisen ja paikallis-: : tamisen parantamiseksi.
' Edelleen olemme yllättäen keksineet, että ainakin : : 30 yksi tässä karakterisoidun antigeenin determinantti esiin tyy geneettiseen sairauteen, rakkulaiseen fibroosiin liittyvissä limakalvoantigeeneissa. Täsmällisemmin sanottu- 8 87141 na olemme havainneet, että monoklonaalista vasta-ainetta CCK061 voidaan käyttää rakkulaista fibroo-sia osoittavien kohonneiden seerumin limakalvoanti-geenien osoittamisessa- CCK061 on erityisen käyttökelpoi-5 nen rakkulaisen fibroosin osoittamisessa potilaissa, jotka geneettisistä syistä eivät pysty tuottamaan osoitettavia määriä tautiin liittyviä sialysoituja Lea-antigeeneja, sillä CCK061 reagoi niiden limakalvoantigeenien kanssa, jotka eivät liity Lewis-veriryhmäsysteemiin. Niinpä tämä 10 keksintö esittää menetelmän rakkulaisen fibroosin osoittamiseksi saattamalla seeruminäyte yhteen monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa ja määrittämällä CCK061:n sitoutuminen näytekomponentteihin sellaisen immunologisen määritysmenetelmän avulla, jossa käytetään toista vasta-15 ainetta, joka pystyy sitoutumaan rakkulaiseen fibroosiin liittyviin limakalvoantigeeneihin. Edullisesti immunologinen määritysmenetelmä on kaksipaikkainen immunometrinen määritysmenetelmä ja toinen vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine, joka on valittu siten, että CCK061 ja toinen 20 vasta-aine sitoutuvat rakkulaiseen fibroosiin liittyvien seerumin limakalvoantigeenien toisiaan häiritsemättömiin determinantteihin.
Tämä keksintö tulee paremmin ymmärretyksi seuraa-vien rajoittamattomien esimerkkien perusteella.
25 Esimerkki I
Monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 valmistus Hybridisolulinjan ATCC-talletus nro HB8786, joka tuottaa monoklonaalista vasta-ainetta CCK061, valmistamiseksi naaraspuoliset Balb/c-hiiret (Charles River Breeding 30 Laboratories, Wilmington, MA) immunisoitiin ruiskuttamalla vatsaonteloon 200 ^ug kasvainsytosolia, joka oli saatu paksusuolisyöpäkasvaimen ruumiinavausnäytteestä, 5 kertaa 14 päivän välein. 3 päivää viidennen immunisoinnin jälkeen hiirien pernat poistettiin ja yksi solususpensio valmis-35 tettiin.
9 871 41
Solujen fuusioiminen tehtiin Kohlerin ja Mils-teinin, Nature 256, (1975) 495 - 497, menetelmän mukaisesti.
g 1 x 10 (pernasolua) fuusioitiin 1,0 ml:ssa fuusioväliainet-ta, joka sisälsi 35 % polyetyleeniglykolia (PEG 1500) AP-5 MEM-väliaineessa (Flow Laboratories, Inglewood, Kalifornia) 7 2,5 x 10 P3.653-myeloomasolun kanssa. Fuusion jälkeen soluja viljeltiin HAT-väliaineessa (hypoksantiini, aminop-teriini, tymidiini) 37°C:ssa kostutetussa 5 % CO^ -inku-baattorissa.
Hybridoomien tuottamat vasta-aineet seulottiin ELISA- (enzyme-linked immunoabsorbent binding assay) menetelmällä immunisointiin käytetyn paksusuolisyöpäkasvaimen sytosolipreparaattien vs. normaalin keuhkon suhteen. Vasta-aineet, jotka reagoivat 5-kertaisesti tai enemmän kasvain-15 sytosolin kanssa, valittiin. Monoklonaalinen vasta-aine, joka nimettiin CCK061:ksi, karakterisoitiin edelleen ja valittiin käytettäväksi tässä käyttöön annetun antigeenin karakterisoimi seen.
Esimerkki II
20 Antigeenin karakterisointi
Monoklonaalista vasta-ainetta CCK061 käytettiin tämän keksinnön mukaisen antigeenin karakterisointiin tässä julkaistuja menetelmiä käyttäen.
Solulinjat, joita käytettiin antigeenin karakteri-25 sointiin samoin kuin monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 reaktiivisuuden seulomiseen, olivat seuraavat: 10 871 41
Solulinj a Lähde SW403 ja SW620 paksusuolisyöpä Amerikkalainen tyyppivil- jelmäkokoelma, Rockville, Maryland.
5 T84-paksusuolisyöpä Tri H. Masui, Kalifornian
Yliopisto San Diegon Syö-päkeskuksessa, San Diego, Kalifornia.
10 SKMel-ihosyöpä Amerikkalainen tyyppivil- jelmäkokoelma, Rockville, Maryland.
15 Calu-3 -keuhkon Amerikkalainen tyyppivil- adenokarsinooma jelmäkokoelma, Rockville,
Maryland.
T47D-rintasyöpä Tri Renato Dulbecco, Salk- 20 instituutti, La Jolla,
Kalifornia.
Ml4-ihosyöpä Tri Ralph Reisfeld, Scripps
Kliniikka ja Tutkimussäätiö, La Jolla, Kalifornia.
25 H 907 -rakkosyöpä Tri K.E. Hellström, Fred
Hutchinson Syöväntutkimus-keskus, Seattle, Washington.
30 PC-3 eturauhassyöpä Tri Mark Glassey, Kalifor nian Yliopisto San Diegossa, La Jolla, Kalifornia.
Solut kasvatettiin Autopaw-väliaineessa, joka sisälsi 8 % hevosen seerumia ja 2 % fetaalia vasikan seerumia kostu- 35 tctussa, 37°C:isossa CC>2-inkubaattorissa.
11 87141
Solulinj a-ELISA
Monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa reagoivan antigeenin läsnäolo ihmisen syöpäsolulinjoissa määritettiin ELISA- (enzyme-linked immunoabsorbent binding assay) mene-5 telmällä mitattuna absorbanssin 490 nm:ssä perusteella.
Yllä kuvatuista solulinjoista saatuja soluja ylläpidettiin kudosviljelypulloissa, kunnes saavutettiin noin 90 %:n yhtenäisyys (confluent). Solut ja väliaineen sisältävät pullot jäädytettiin -20°C:ssa. Sitten pullot saatettiin 10 huoneenlämpötilaan ja solut poistettiin ja laskettiin. Solu- g jen määräksi säädettiin 4 x 10 solua ja ne pipetoitiin pitoisuuksina 2 x 10 solua kuoppaa kohti Cleveland-lasikuitu-suodatinmikrotiitterilevylle. Solut pestiin 3 kertaa liuoksella, joka sisälsi 0,3 % gelatiinia ja 1 % naudan seerumin 15 albumiinia fosfaatilla puskuroidussa keittosuolassa. 50 ^,ul monoklonaalj sta vasta-ai net La CCKO 0.1 lisättiin kuoppaa koh-U ja levyä inkuboil.iin yksi luuli h ih »m» m n 1 ämpöt. i lasso. Kun levy oli pesty 5 kertaa liuoksella, joka sisälsi 0,3 % gelatiinia fosfaatilla puskuroidussa keittosuolassa, lisät-20 tiin 50 ^ul 1 - 4000 kertaisesti laimennettua, peroksidaa-silla konjugoitua vuohen anti-hiiri-IgG:tä ja -IgMrää, ja levyä inkuboitiin 1 tunti. Kun levy oli pesty 6 kertaa, kuoppiin lisättiin 200 ^ul liuosta, joka sisälsi 1 mg/ml o-fenyleenidiamiinia, ja 0,03 % m°l/l sitraatti- 25 fosfaattipuskurissa, ja levyä inkuboitiin ravistellen pimeässä 30 minuuttia. Reaktio pysäytettiin 4 N t^SO^rlla ja absorbanssi 490 nm:ssa luettiin.
Kuten alla olevassa taulukossa I on esitetty, CCK061 reagoi paksusuolisyöpäsolulinjojen SW403 ja T84 kanssa, 30 mikä osoittaa, että keksinnön mukainen antigeeni esiintyy ihmisen paksusuolisyöpäsolulinjoissa. Vertailun vuoksi mainittakoon, ettei CCK061 osoittanut mainittavaa reaktiivisuutta sellaisten solulinjojen kuin rintasyöpä-, eturauhassyöpä-, rakkosyöpä-, keuhkon adenokarsinooma- ja ihosyöpä-35 solulinjojen kanssa.
i2 871 41
Membraani/sytosoli-ELISA
Monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa reagoivan antigeenin läsnäolo normaalin ihmiskudoksen ja ihmisen kasvainkudoksen puhdistetuissa kalvofraktioissa määritet-5 tiin ELISA- (enzyme-linked immunoabsorbent binding assay) määrityksellä mitattuna absorbanssin 490 nm:ssa perusteella.
Membraani/sytosoli-fraktiot valmistettiin kymmenen tunnin kuluessa kuolemasta talteenotetuista ja -80°C:ssa säilytetyistä ihmiskudoksen kirurgisista ja ruumiinavaus-10 näytteistä. Kudos homogenoitiin neljään tilavuuteen puskuria, joka sisälsi 10 mmo3/l Tris-HCl:a, pH 7,5, 2 mmol/1 kalsiumkloridia, 2 mmol/1 fenyylimetyylisulfonaattia, (homogenointipuskuri) 4°C:ssa Dounce-homogenisaattorissa ja kaikki seuraavat vaiheet suoritettiin 4°C:ssa. Homoge-15 naatti sentrifugoitiin nopeudella 1000 x g 5 minuuttia tumien ja kokonaisten solujen poistamiseksi. Supernatantti poistettiin ja sentrifugoitiin nopeudella 130 000 x g yksi tunti. Tämän suurella nopeudella suoritetun sentrifugoinnin supernatantti poistettiin ja nimettiin sytosoli-fraktioksi. 20 Sakka suspendoitiin yhteen tilavuuteen homogenointipuskuria ja laitettiin 40 % /20 % risen epäjatkuvan sakkaroosigradi-entin päälle 10 mmol/1 Tris-HCl:ssa, pH 7,2. Gradienttia sentrifugoitiin nopeudella 130 000 x g 17 tuntia. 40 %/20 % -välifaasissa oleva materiaali pipetoitiin talteen, laimen-25 nettiin 5-kertaisesti homogenisointipuskuri11a ja sentrifugoitiin 60 minuuttia nopeudella 25 000 x g. Sakka suspendoitiin homogenointipuskuriin, jaettiin osiin ja pantiin säiliöön -80°C:een.
Membraani/sytosoli-ELISA:n suorittamiseksi kalvo-30 ja sytosolifraktiot kuivattiin 96-kuoppaisilie tasapohjaisille polyvinyylimikrotiitterilevyille (Dynatech, Alexandria, VA) pitoisuuksina 1 ^ug ja 10 ^ug proteiinia kuoppaa kohti, mainitussa järjestyksessä. Levyt pestiin neljä kertaa tislatulla vedellä, jonka jälkeen niitä inkuboiliin 35 jo minuuttia huoneenlämpötilassa fosfaatilla puskuroidussa keittosuolassa olevan 20 % hevosen seerumin kanssa. Puskuri i3 871 41 poistettiin ja ensimmäinen vasta-aine lisättiin yhdeksi tunniksi. Levyt pestiin 6 kertaa vesijohtovedellä ennen peroksidaasilla konjugoidun vuohen anti-hiiri-IgG:n ja -IgM:n (1:1000 laimennos) lisäystä. Levyjä inkuboitiin 5 yksi tunti, jonka jälkeen ne pestiin 5 kertaa tislatulla vedellä. Väri kehittyi, kun kuoppiin lisättiin 100 ^ul liuosta, joka sisälsi 1 mg/ml o-fenyleenidiamiinia ja 0,03 % vetyperoksidia 0,1 ml/1 sitraatti-fosfaattipusku-rissa, pH 5,0. Levyjä inkuboitiin pimeässä ravistellen 10 30 minuuttia. Reaktio pysäytettiin lisäämällä 50 ^ul kuop paa kohti 8 mol/1 H2S°4 3a absorbanssi 490 rutussa luettiin.
Kuten alla olevassa taulukossa II on esitetty, CCK061 reagoi normaalin paksusuolen ja paksusuolisyöpäkas-vaimen kalvofraktioiden kanssa, muttei reagoinut muista 13 normaaleista kudoksista ja syöpäkasvaimista, mukaanlukien rintasyöpä-, keuhkon adenokarsinooma-, ihosyöpä- ja eturau-hassyöpäkasvaimesta peräisin olevien kalvojen kanssa. Niinpä CCK061:n karakterisoima antigeeni osoitettiin vain pak-susuolisyöpäkasvaimesta ja normaalista paksusuolesta.
2 0 Immunohistokerniallinen määritys CCK061:n kanssa reagoivan antigeenin läsnäolo normaalissa ihmiskudoksessa ja ihmisen kasvainkudoksessa määritettiin ihmiskudoksen immunoperoksidaasivärjäystä käyttäen. Osa jäädytetyistä kudospaloista, jotka oli saatu 25 kymmenen tunnin kuluessa kuolemasta talteenotetuista ja -80°C:ssa säilytetyistä kirurgisista ja ruumiinavausnäyt-teistä, leikattiin 4-6 mikrometrin leikkeiksi mikrotomi/-kryostaati11a. Lasilevyille kiinnitettyinä leikkeet kuivattiin nopeasti ilmassa, jonka jälkeen levyt kastettiin 30 asetoniin. Epäsuoraa immunoperoksidaasimcnetelmää, joka suoritettiin oleellisesti, kuten Taylor, Arch. Pathol. Lab. Med. 102. 102 (19/8) 113, on kuvannut, käytettiin näiden levyjen vär jäänti seen. Leikkeet kostutettiin uudelleen i nku-boimalla niitä fosfaatilla puskuroidussa keittosuolassa 35 (PBS) 5 minuuttia. CCK061-vasta-aine levitettiin leikkeiden päälle ja levyjä inkuboitiin kosteassa kammiossa yksi tunti.
14 871 41
Vasta-aine pestiin leikkeistä PBS:llä, jonka jälkeen leikkeet upotettiin PBS:ään 5 minuutiksi. Leikkeet peitettiin peroksidaasilla konjugoidun vuohen anti-hiiri-IgG- ja -IgM-vasla-ai neeri (Tacjo Chemicals, Burlingame, CA) 1:50 laimen-r, nuku o LI a, ja ui i Lei iukuboiL.iin 10 in i nuuU, i a kosteassa kammiossa. Vasta-aine pestiin pois PBSrllä. Värireaktio kehitettiin liuoksella, joka sisälsi 1 mg/ml diaminobentsidii-nia ja 0,03 % Levyt vastavärjättiin hematoksyliini- eosiinilla.
10 Alla oleva taulukko III osoittaa, että CCK061 rea goi voimakkaasti normaalin paksusuolen limakalvon kanssa mitattuna kudoksen värjäytymisen voimakkuuden perusteella ja heikosti tai ei lainkaan muiden normaalien kudosten kanssa. CFK061 osoitti heikkoa reaktiivisuutta normaalin 15 rinta-, keuhko- ja eturauhaskudoksen kanssa.
Alla oleva taulukko IV osoittaa CCK061:n reagoivan voimakkaasti paksusuolisyöpä-, ruokatorvisyöpä- ja mahalauk-kusyöpäkasvaimen kanssa mutta reagoivan heikosti tai ei lainkaan muiden syöpäkasvainten kanssa. Heikkoa reaktiivi-20 suutta esiintyy sellaisten syöpäkasvainten kuin rintasyövän ja keuhkon adenokarsinooman kanssa.
Antigeenin biokemiallinen analyysi CCK061:n karakterisoiman antigeenin proteiini luonne ja molekyylipaino määritettiin SDS-polyakryyliamidigeeli-25 elektroforeesilla (SDS-PAGE) ja Western immunoblot -analyysillä. 20 g yllä kuvatulla tavalla valmistettua sytosolia liuotettiin geelinäytepuskuriin (62,5 mmol/1 Tris-HCl, pH 6,8, 3 % SDS, 10 % glyseroli, 0,001 % bromi fenolisini-nen, 5 i merkaploetunoli) ja erotettiin epäjatkuvaa SDS-30 PAGE:11a kuten V.K. Laemmli et ai., Nature 227 (1970) 680, ovat kuvanneet, 3 - 15 % lineaarista gradienttigeeliä ja 3 %:sta konsentroimisgeeliä käyttäen. Erotetut proteiinit siirrettiin elektroforeettisesti (0,1 mm Schleicher ja Schuell) 250 mA:n virtaa käyttäen yli yön Towbin et ai. n, PNAS 76 (1979) 4350, menetelmän mukaisesti. Nitroselluloosa- 15 87141 kopioita inkuboitiin liuoksessa, joka sisälsi 3 % naudan seerumin albumiinia (BSA) fosfaatilla puskuroidussa keittosuolassa 30 minuuttia, jonka jälkeen niitä inkuboitiin yli yön hybridoomasupernatantin kanssa, joka oli laimennettu 5 1/1000 3 % BSA -PBS -liuoksella. Nitroselluloosaliuskat pestiin 0,1 % Tween:llä PBS:ssä 30 minuutin ajan vaihtaen 125 puskuria 5 kertaa ja niitä inkuboitiin I:llä leimatulla lampaan anti-hiiri-immunoglobuliinilla, 100 000 cpm/ml, kolme tuntia. PBS-Tween -liuoksella tehdyn pesun jälkeen 10 nitroselluloosaliuskat kuivattiin ilmassa ja altistettiin röntgen-fiImilie (Kodak XAR-5) 4-72 tunniksi vahvistus-levyä käyttäen -70°C:ssa.
Antigeenin luonteen edelleen määrittämiseksi yllä kuvatulla tavalla valmistetut kalvot käsiteltiin seuraa-15 villa tavoilla ennen SDS-PAGE:a ja Western immunoblot -analyysi ä: a) Natriumperjodaatti: 20 ^,ug sytosoliproteiinia inkuboitiin 50 mmol/1 natriumperjodaatissa yksi tunti 4°C:ssa.
20 b) Neuraminidaasi: 20 ^ug:n sytosolia pH säädettiin pH 5 - 6:ksi etikkahapolla ja sitä inkuboitiin yksi tunti 37°C:ssa 10 mU:n Clostridium perfringens neuraminidaasia kanssa.
c) Proteinaasi K: 20 ^ug sytosolia inkuboitiin 25 2,0 mg/ml proteinaasi K:ta sisältävässä liuoksessa yksi tun ti 37°C:ssa.
d) Käsittely laimealla emäksellä: 20 ^ug sytosolia inkuboitiin yli yön 0,1 mol/1 NaOH:ssa, jonka jälkeen liuos neutraloitiin 0,1 mol/1 HCl:lla.
30 Kaikki reaktiot pysäytettiin lisäämällä geelinäyte- puskuria.
SDS-PAGE:n ja Western immunoblot -analyysin perusteella antigeenin molekyylipainon määritettiin olevan alueella noin 820 000 - noin 960 000. Antigeenin kemiallinen 35 ja entsymaattinen modifiointi ja sen jälkeiset SDS-PAGE- ja Western immunoblot -analyysit osoittivat antigeenin pro- 16 87141 teiiniluonteen. Täsmällisemmin sanottuna antigeenin reaktiivisuuden CCK061:n kanssa osoitettiin tuhoutuvan, kun antigeeniä käsiteltiin proteinaasi K:11a yllä kuvatulla tavalla. Yllä kuvatut vaihtoehtoiset modifikaatiot eivät johtaneet 5 antigeenin reaktiivisuuden CCK061:n kanssa häviämiseen. Glykoproteiiniluonteen määrittäminen Tässä karakterisoitu antigeeni määritettiin luonteeltaan glykoproteiiniksi saostamalla immunologisesti 14 C-glukosamiini11a leimatut SW403-paksusuolisyöpäkasvain-10 solut.
SW403-soluja, kasvatettiin yhtenäiseksi Autopow- väliaineessa, joka sisälsi 8 % hevosen seerumia ja 2 % 2 fetaalia vasikan seerumia, 75 cm :n kudosvi1jelypulloissa.
14
Sitten väliaineeseen lisättiin 50 ^uCi C-glukosamiinia 15 (New England Nuclear, Boston, MA) ja seosta inkuboitiin 18 tuntia 37°C:ssa,kostutetussa inkubaattorissa, joka sisälsi 5 % CO^ita ilmassa. Solut pestiin kolme kertaa fosfaatilla puskuroidulla keittosuolalla (PBS), jonka jälkeen ne raaputettiin pullosta 10 ml:aan PBS:ää. Solusakka pes-20 tiin vielä kolme kertaa PBS:llä, ennen kuin se suspendoi-tiin 1,0 ml:aan hajoittamispuskuria (0,02 mol/1 Tris-HCl, pH 8,0, 1 mmol/1 EDTA, 0,5 % NP-40, 0,5 % deoksikolaatti, 0,5 mmol/1 fenyylimetyylisulfonaatti). Inkuboinnin jälkeen pyörivällä alustalla 4°C:ssa 1 - i tuntia lysaatti sentri-25 fugoitiin mikrofuugissa (16 000 x g) yksi minuutti ja supernatantti dialysoitiin TBS:ää (0,02 mol/1 Tris-HCl, 14 pH 8, 0,15 mol/1 NaCl, 0,1 % natriumatsidi) vastaan. C:llä leimattua lysaattia inkuboitiin yli yön CCK061-vasta-aineen kanssa 4°C:ssa pyörivällä alustalla. Seokseen lisättiin 30 Sepharoseen sidottua antihiiri-immunoglobuliinia ja seosta inkuboitiin 3 tuntia huoneenlämpötilassa. Sepharoseen sitoutunut materiaali pestiin 4 kertaa liuoksella, joka sisälsi 0,05 mol/1 Tris:ä, 0,15 mol/1 NaCl:a, 0,5 % NP-40:tä, 0,05 deoksikolaattia, 0,1 % NaN^:a ja 1 mg/ml BSA:ta, pH 35 8,1, ja vielä 4 kertaa edellä kuvatulla puskurilla, josta 87141 17 puuttui BSA. Näytteet analysoitiin SDS-polyakryyliamidi-geenielektroforeesilla kuten aikaisemmin on kuvattu.
Isoelektrinen fokusointi CCK061:n karakterisoiman antigeenin isoelektrinen 5 fokusointi tehtiin kuvatulla tavalla isoelektristä foku sointia pylväässä käyttäen.
20 mg paksusuolisyöpäkasvainsytosolia, joka oli valmistettu yllä kuvatulla tavalla, fokusoitiin vesijääh-dytysvaipalla varustetussa 110 ml:n isoelektrisen foku-10 soinnin pylväässä 0-47 %:ssa sakkaroosigradientissa, jo ka sisälsi pH-alueen 3,5 - 10 amofolyytit. Pylvästä esi-fokusoitiin 600 voltin jännitettä käyttämällä 12 tuntia 4°C:ssa. Näyte ruiskutettiin gradientin keskelle ja näytettä fokusoitiin vielä 30 tuntia 4°C:ssa. 1 ml:n frak-15 tiot kerättiin pylväästä ja fraktioiden pH määritettiin välittömästi. Fraktiot dialysoitiin 10 mmol/1 natrium-fosfaattia, pH 7,0, vastaan yli yön. Näytteet fraktioista analysoitiin niiden reaktiivisuuden CCK061:n kanssa suhteen paksusuolisyöpäkasvain-ELISA-määrityksellä.
20 Tällä menetelmällä suoritettu antigeenin isoelekt rinen fokusointi osoitti isoelektriset pisteet, jotka olivat alueilla noin 4,5 - 5,0 ja noin 5,1 - 5,9 piikkien ollessa noin 4,9 ja noin 5,4.
is 87141
Taulukko I
Monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 reaktiivisuus ihmis-solulinjojen kanssa 5
Solujinja Abs4gQ
SW403-paksusuolisyöpä 0,49 T47D-rintasyöpä 0,03 10 PC-3-eturauhassyöpä 0,08 H907-rakkosyöpä 0,01
Calu-3-keuhkon adenokarsinooma 0,03
SkMel-ihosyöpä 0,03 M14-ihosyöpä 0,05 15 SW620-paksusuolisyöpä 0,01 T84-paksusuolisyöpä 0,40
Taulukko II
Monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 reaktiivisuus ihmis-20 kudoksen kalvopreparaattien kanssa
Kasvainkalvot Abs4gQ Normaalit kalvot Abs^gg
Paksusuolisyöpä 2,05 Paksusuoli 2,81 25
Paksusuolisyöpä 0,78 Maksa 0,01
Rintasyöpä 0,00 Keuhko 0,00
Rintasyöpä 0,03 Haima 0,00
Keuhkon adenokarsinooma 0,03 Perna 0,00 30
Keuhkon adenokarsinooma 0,01 Rinta 0,00
Keuhkon levy- epiteelisyöpä 0,01 Rakko 0,00
Keuhkon pieni-3 r>
Soininen syöpä 0,00 Aivo 0,00 19 87141
Keuhkon pienisoluinen syöpä 0,00
Ihosyöpä 0,01
Eturauhassyöpä 0,01 5 Eturauhassyöpä 0,00
Taulukko III
CCK061:n immunohistologinen reaktiivisuus normaalin 10 kudoksen kanssa
Kudos Positiivisten tulosten luku- määrä/tutkittujen näytteiden lukumäärä_ 15 Voimakas reaktiivisuus
Paksusuoli (vain limakalvo) 4/4
Heikko reaktiivisuus
Rinta 1 /4
Keuhko 3/5 20 Kohdunkaula (vaihteleva) 2/2
Ruokatorvi (vaihteleva) 2/2
Eturauhanen 1/4
Munanjohdin (vaihteleva) 1/2
Kilpirauhanen 1/2 25 Haima 1/2
Ei reaktiivisuutta
Maksa 0/2
Maha 0/2
Munuainen 0/2 30 Rakko 0/1
Kohtu 0/1
Ohutsuoli 0/2
Kives 0/2 20 87141
Taulukko IV
CCK061:n immunohistologinen reaktiivisuus kasvainkudoksen kanssa 5
Kudos Positiivisten tulosten luku- määrä/tutkittujen näytteiden lukumäärä_
Voimakas reaktiivisuus
Paksusuolisyöpä 15/18
Ruokatorvisyöpä 2/2
Mahalaukkusyöpä 2/2
Heikko reaktiivisuus
Rintasyöpä (maitotiehyet 15 (luminal ducts)) 3/7
Keuhkon adenokarsinooma 1/4
Levyepiteelisyöpä 2/4
Haimasyöpä 2/4
Ei reaktiivisuutta 2q Keuhkon pienisoluinen syöpä 0/4
Eturauhassyöpä 0/4
Maksasyöpä 0/2
Ihosyöpä 0/1
Aivosyöpä 0/2 25 Munuaissyöpä 0/2
Edellä olevan keksinnön kuvauksen tarkoitus on valaista ja selittää esimerkein keksintöä. Alan asiantuntijoille on selvää, että muutokset ja modifikaatiot ovat mahdollisia keksinnön hengen ja piirin siitä muuttumatta.
2q Tarkoitus on, että seuraavat patenttivaatimukset tulkitaan siten, että ne sisältävät kaikki tällaiset muutokset ja modifikaatiot.
Claims (18)
1. Antigeeni, joka on peräisin ihmiskudoksesta tai ihmisen syöpäkasvainsolulinjasta, tunnettu sii- 5 tä, että mainittu antigeeni on glykoproteiini, jonka mo-lekyylipaino on alueella noin 820 000 - noin 960 000 ja isoelektriset pisteet alueilla noin 4,5 - noin 5,0 ja noin 5,1 - noin 5,9 ja että se on reaktiivinen hybridoo-masolulinjan ATCC HB8786 tuottaman monoklonaalisen vasta-10 aineen CCK061 kanssa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen antigeeni, tunnettu siitä, että isoelektriset pisteet ovat noin 4,9 ja noin 5,4.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen antigeeni, 15 tunnettu siitä, että sen reaktiivisuus monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa voidaan tuhota käsittelemällä antigeeniä proteinaasi K:11a.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen antigeeni, tunnettu siitä, että se on kasvaimeen liittyvä 20 antigeeni, joka esiintyy paksu- ja peräsuolisyöpäkasvai- messa.
5. Menetelmä monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että immunisoidaan hiiri tai muu sopiva isäntä jonkin 25 patenttivaatimuksen 1-4 mukaisella antigeenillä; fuusioidaan immunisoidun hiiren tai muun sopivan isännän pernasolut sopivien hiiren myeloomasolujen kanssa, jolloin saadaan hybridisolulinjojen seos; viljellään hybridisolulinjoja sopivassa väliai- 30 neessa; valitaan ja kloonataan hybridisolulinjät, jotka tuottavat vasta-ainetta, joka reagoi spesifisesti mainitun antigeenin kanssa; sekä otetaan talteen näin tuotettu monoklonaalinen vas-35 ta-aine; 87141 ja haluttaessa vasta-aineeseen yhdistetään radio-isotooppi, myrkky tai lääkeaine sopivan konjugoivan aineen läsnäollessa.
6. Monoklonaalinen vasta-aine, tunnettu 5 siitä, että se reagoi spesifisesti jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukaisen antigeenin kanssa.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen monoklonaalinen vasta-aine, tunnettu siitä, että se on hiiren vasta-aine.
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen monoklonaalinen vasta-aine, tunnettu siitä, että se on IgM-luo-kan vasta-aine, jonka reaktiivisuus tuhoutuu, kun antigeeniä käsitellään proteinaasi K:11a.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen monoklonaalinen 15 vasta-aine, tunnettu siitä, että kasvaimeen liitttyvä antigeeni esiintyy paksu- ja peräsuolisyöpäkas-vaimessa.
10. Patenttivaatimuksen 6 mukainen monoklonaalinen vasta-aine, tunnettu siitä, että se valmistetaan 20 patenttivaatimuksen 5 mukaisella menetelmällä.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen monoklonaalinen vasta-aine, tunnettu siitä, että se on hybridoomasolulinjan ATCC HB8786 tuottama CCK061.
12. Menetelmä syövän toteamiseksi ja diagnostisoi- 25 miseksi epäillyssä syöpäpotilaassa, tunnettu siitä, että potilaalta saatu kudosnäyte saatetaan yhteen monoklonaalisen vasta-aineen kanssa, joka reagoi spesifisesti jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukaisen antigeenin kanssa, ja että näytteen kohdat, joihin vasta-aine 30 sitoutuu, määritetään immunohistokemiallisin menetelmin.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vasta-aine on CCK061.
14. Menetelmä syövän toteamiseksi ja diagnostisoimiseksi in vitro epäillyssä syöpäpotilaassa, t u n - 35. e t t u siitä, että potilaasta saatu nestenäyte saate- li 87141 taan yhteen ainakin yhden monoklonaalisen vasta-aineen kanssa, joka reagoi spesifisesti jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukaisen antigeenin kanssa ja että vasta-aineen sitoutuminen nestenäytteen komponentteihin määritetään 5 immunologisella määritysmenetelmällä.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vasta-aine on CCK061.
16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että immunologinen määritysmene- 10 telinä on kaksipaikkainen immunometrinen määritysmenetelmä ja että vasta-aineet ovat monoklonaalisia vasta-aineita, jotka on valittu siten, että ne sitoutuvat antigeenin toisiaan häiritsemättömiin determinantteihin.
17. Menetelmä rakkulaisen fibroosin osoittamiseksi 15 in vitro, tunnettu siitä, että potilaan seerumi- näyte saatetaan yhteen monoklonaalisen vasta-aineen CCK061 kanssa ja määritetään vasta-aineen sitoutuminen näytteen komponentteihin immunologisella määritysmenetelmällä, jossa immunologisessa määritysmenetelmässä käyte- 20 tään toista vasta-ainetta, joka pystyy sitoutumaan ainakin yhteen rakkulaiseen fibroosiin liittyvään limakal-voantigeeniin.
18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että immunologinen määritysmene- 25 telmä on kaksipaikkainen immunometrinen määritysmenetelmä ja että toinen vasta-aine on monoklonaalinen vasta-aine, joka on valittu siten, että vasta-aine CCK061 ja toinen vasta-aine sitoutuvat limakalvoantigeenin toisiaan häiritsemättömiin determinantteihin. 30 87141
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US72620285A | 1985-04-22 | 1985-04-22 | |
| US72620285 | 1985-04-22 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI861692A0 FI861692A0 (fi) | 1986-04-22 |
| FI861692L FI861692L (fi) | 1986-10-23 |
| FI87141B FI87141B (fi) | 1992-08-31 |
| FI87141C true FI87141C (fi) | 1992-12-10 |
Family
ID=24917624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI861692A FI87141C (fi) | 1985-04-22 | 1986-04-22 | En ny tumoerassocierad antigen |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0200464B1 (fi) |
| JP (1) | JPS61289897A (fi) |
| AT (1) | ATE79632T1 (fi) |
| AU (2) | AU599589B2 (fi) |
| DE (1) | DE3686438T2 (fi) |
| DK (1) | DK185086A (fi) |
| ES (2) | ES8800604A1 (fi) |
| FI (1) | FI87141C (fi) |
| NO (1) | NO170810C (fi) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ222509A (en) * | 1986-11-19 | 1993-03-26 | Oncogen | Hybridoma cell line producing antibodies binding to tumour-associated mucin antigen |
| US6004761A (en) * | 1986-11-19 | 1999-12-21 | Sanofi | Method for detecting cancer using monoclonal antibodies to new mucin epitopes |
| JPS63157995A (ja) * | 1986-12-18 | 1988-06-30 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト大腸癌単クロ−ン性抗体ａｃｃ−５７４ |
| DK169987D0 (da) * | 1987-04-03 | 1987-04-03 | Jens Christian Jensenius | Human tumor-associated antigen, ca-ou1 |
| JP2688824B2 (ja) * | 1987-05-29 | 1997-12-10 | 郁男 山科 | 単クローン抗体ｎｋｙ１３ |
| US5073493A (en) * | 1987-05-29 | 1991-12-17 | Ikuo Yamashina | Monoclonal antibody nky13 |
| AU618209B2 (en) * | 1987-07-02 | 1991-12-12 | Akzo N.V. | Antigen recognized by mca 16-88 |
| EP0397419A3 (en) * | 1989-05-10 | 1991-04-03 | Hybritech Incorporated | Novel tumor-associated antigen, antibodies, compositions and uses therefor |
| DE69029270T2 (de) * | 1989-09-15 | 1997-03-27 | Genetic Systems Corp., Seattle, Wash. | HYBRIDOMA CT43, DAS EIN ANTIKöRPER GEGEN EIN MUCINEPITOP VON DARMKREBS ERZEUGT |
| IT1262954B (it) * | 1992-07-03 | 1996-07-23 | Ist Farmacoterapico It Spa | Regioni antigeniche dei complessi tpl e anticorpi diretti contro di essi. |
| AU2001252945A1 (en) * | 2000-03-24 | 2001-10-08 | Corixa Corporation | Compositions and methods for therapy and diagnosis of colon cancer |
| ES2468394T3 (es) * | 2008-12-18 | 2014-06-16 | Eidia Co., Ltd. | Método para el diagnóstico de la fibrosis qu�stica mediante el uso de los niveles de KL-6 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4468457A (en) * | 1981-06-01 | 1984-08-28 | David M. Goldenberg | Method for producing a CSAp tryptic peptide and anti-CSAp antibodies |
| NZ212419A (en) * | 1984-06-25 | 1988-08-30 | Mucan Diagnostics Pty Ltd | In vitro diagnostic test for detecting cancer cells producing mucin antigens |
| NO861491L (no) * | 1985-04-22 | 1986-10-23 | Hybritech Inc | Antistoff, fremgangsmaate for dets fremstilling og anvendelse for deteksjon og diagnose av canser. |
-
1986
- 1986-04-21 ES ES554209A patent/ES8800604A1/es not_active Expired
- 1986-04-22 AU AU56469/86A patent/AU599589B2/en not_active Ceased
- 1986-04-22 DE DE8686303042T patent/DE3686438T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-04-22 FI FI861692A patent/FI87141C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-04-22 NO NO861577A patent/NO170810C/no unknown
- 1986-04-22 AT AT86303042T patent/ATE79632T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-04-22 JP JP61093183A patent/JPS61289897A/ja active Pending
- 1986-04-22 EP EP86303042A patent/EP0200464B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-22 DK DK185086A patent/DK185086A/da not_active Application Discontinuation
-
1987
- 1987-08-17 ES ES557680A patent/ES8900247A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-10-26 AU AU65569/90A patent/AU627084B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0200464B1 (en) | 1992-08-19 |
| AU627084B2 (en) | 1992-08-13 |
| FI861692L (fi) | 1986-10-23 |
| ES8900247A1 (es) | 1989-05-16 |
| DK185086A (da) | 1986-10-23 |
| ES8800604A1 (es) | 1987-11-16 |
| AU5646986A (en) | 1987-10-29 |
| JPS61289897A (ja) | 1986-12-19 |
| FI861692A0 (fi) | 1986-04-22 |
| ES554209A0 (es) | 1987-11-16 |
| DK185086D0 (da) | 1986-04-22 |
| ATE79632T1 (de) | 1992-09-15 |
| NO861577L (no) | 1986-10-23 |
| AU6556990A (en) | 1991-01-17 |
| NO170810B (no) | 1992-08-31 |
| NO170810C (no) | 1992-12-09 |
| DE3686438D1 (de) | 1992-09-24 |
| ES557680A0 (es) | 1989-05-16 |
| DE3686438T2 (de) | 1993-01-21 |
| EP0200464A3 (en) | 1988-05-04 |
| AU599589B2 (en) | 1990-07-26 |
| FI87141B (fi) | 1992-08-31 |
| EP0200464A2 (en) | 1986-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4446122A (en) | Purified human prostate antigen | |
| KR900003923B1 (ko) | 인체 암종양과 관련된 항원에 대한 단일클론성 항체 | |
| US4921790A (en) | Tumor specific assay for CA125 ovarian cancer antigen | |
| US4849509A (en) | Monoclonal antibodies against melanoma-associated antigens and hybrid cell lines producing these antibodies | |
| AU619827B2 (en) | Carcinoma orosomucoid-related antigen, a monoclonal antibody thereto, and their uses | |
| JPS59176298A (ja) | ヒト結腸がんに対するモノクロ−ナル抗体および方法 | |
| USRE33405E (en) | Purified human prostate antigen | |
| FI87141C (fi) | En ny tumoerassocierad antigen | |
| JPS595120A (ja) | 単クロ−ン性抗ｃｅａ抗体 | |
| JP2774491B2 (ja) | ヒトの消化器ガンに対するモノクローナル抗体 | |
| EP0199586A2 (en) | Tumour-associated antigen | |
| US5298393A (en) | Monoclonal antibody for human acid-glutathione S-transferase and process for preparation thereof | |
| KR101777254B1 (ko) | En2 단백질을 특이적으로 인식하는 특정 항원으로부터 얻어진 단클론 항체 또는 이를 함유하는 전립선암 진단용 조성물 | |
| EP0282581A4 (en) | Monoclonal paratopic molecule directed to human ganglioside gd2. | |
| JPWO1987003377A1 (ja) | グルタチオンｓ−トランスフェラ−ゼに対するモノクロ−ナル抗体及びその製造法 | |
| US4916055A (en) | Detection of human cancer with a monoclonal antibody specific for antigen gp650 | |
| WO1981001849A1 (en) | Purified human prostate antigen | |
| EP0242154B1 (en) | A novel tumor-associated antigen | |
| AU640145B2 (en) | A novel tumor associated antigen | |
| EP0397419A2 (en) | Novel tumor-associated antigen, antibodies, compositions and uses therefor | |
| JPH08208698A (ja) | モノクローナル抗体 | |
| CN119954953A (zh) | 靶向b7h3抗原结合蛋白及其应用 | |
| JPH01171495A (ja) | モノクローナル抗体及びそれを用いる定量法 | |
| JPH06107695A (ja) | 新規ヒト血液細胞関連抗原及びそれを認識する単クローン抗体 | |
| JPS61249999A (ja) | モノクロ−ナル抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: HYBRITECH INCORPORATED |