FI84280C - Foerfarande foer en submers odling av pseudomonas aeruginosa-bakteriestammar. - Google Patents
Foerfarande foer en submers odling av pseudomonas aeruginosa-bakteriestammar. Download PDFInfo
- Publication number
- FI84280C FI84280C FI863678A FI863678A FI84280C FI 84280 C FI84280 C FI 84280C FI 863678 A FI863678 A FI 863678A FI 863678 A FI863678 A FI 863678A FI 84280 C FI84280 C FI 84280C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- culture
- pseudomonas aeruginosa
- nutrient medium
- strains
- carbon source
- Prior art date
Links
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 title description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 21
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 241000947836 Pseudomonadaceae Species 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 abstract description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 abstract description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000032536 Pseudomonas Infections Diseases 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000010028 chemical finishing Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N hydron Chemical compound [H+] GPRLSGONYQIRFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/104—Pseudomonadales, e.g. Pseudomonas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Menetelmä Pseudomonas aeruginosa-bakteerikantojen^A^j^öe-mlseksl submerssisesti
Keksinnön kohteena on menetelmä Pseudomonas aeruginosa-bak-teerikantojen viljelemiseksi submerssisesti eli pinnanalai-sesti Pseudomonadaceaen taksonomisesta heimosta.
Pseudomonas aeruginosa-bakteeri on opportunistinen, patogeeninen taudinaiheuttaja, jota esiintyy usein sairaalainfektioissa, pääasiassa potilaissa, joilla on heikentynyt vastustuskyky, kuten palovammoista kärsivissä potilaissa, henkilöissä, jotka sairastavat kystistä fibroosia tai joilla on orgaanisia virhetoimintoja, ja syöpäpotilaissa. Antibiootit tehoavat vain rajoitetusti Pseudomonas-infektioihin resistenssin esiintymisen johdosta, mistä syystä pyritään käyttämään immunologisia menetelmiä Pseudomonas aeruginosan aiheuttamien infektioiden torjuntaan.
Infektioita voivat laukaista useat kannat, jotka tuottavat O-ryhmäantigeenejä ja H-antigeenejä. Ansorgin H-antigeeni-kaavion mukaisesti (Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig. A 242, 228 - 238 (1978) käytettäessä epäsuoraa immunofluoresenssitek-niikkaa differentioidaan Pseudomonas aeruginosan kohdalla kompleksinen flagella-antigeeni a, jossa on osa-antigeenit ao/ ai, β2' a3* a4' 3a yhtenäinen flagella-antigeeni b. Osatekijät ao - 84 ovat itsenäisiä determinantteja, niin että tuloksena syntyy useita H-tyyppejä sisältävä flagellaarinen antigeenikaavio. O-ryhmillä ja H-tyypillä on vapaita yhdistelmiä .
On jo tunnettua valmistaa Pseudomonas-infektioiden ennaltaehkäisemiseksi Pseudomonas-roketteita, jolloin lähtöaineina käytetään joko itse Pseudomonas aeruginosa-bakteerimassaa ja/tai viljelysuodoksia, joita saadaan kasvattamalla mikro-organismeja pintaviljelmissä tai submerssisesti kompleksisissa ravintoväliaineissa. Näissä kompleksisissa ravintovä-liaineissa on käytetty hiili- ja energialähteen (useimmiten hiilihydraattien) ja olennaisten ravintosuolojen lisäksi 2
8 4 2 S O
mitä erilaisimpia uutteita ja/tai eläin-, mikrobi- tai kas-viproteiinien hydrolysaatteja (niin kutsuttuja peptoneja). Tällaisten liuoksten täydennysaineiden tarkkaa koostumusta ei ole määritelty ja ne saattavat lisäksi vaihdella erästä toiseen. Ne sisältävät aminohappojen lisäksi myös epätäydel-lisesti hajaantuneita proteiiniosia ja niiden määrittelemättömiä komplekseja ja niiden oleellinen tehtävä on aminohappo- ja kasvuainetarpeen kattaminen. Viljelmän emäliuokset sisältävät tästä syystä aina runsaasti aineita, jotka eivät ole peräisin bakteereista, mikä on haitallista siksi, että Pseudomonas aeruginosan flagella(H)-antigeenin valmistamiseksi tarvitaan yhä useampia viljelyasteen mukaisesti säädettäviä erotusasteita, jotta flagella(H)-antigeeni voidaan vapauttaa mahdollisimman pitkälti ravintoväliaineesta peräisin olevista epäpuhtauksista.
Eräänä toisena tähänastisten erittäin suoritettavien viljelymenetelmien haittana on se, että bakteerit ovat alttiina jatkuvalle fysiologiselle muutokselle niiden inokulointi-ajankohdasta niiden viljelystä suoritettavaan erotushetkeen asti. Bakteeribiomassan tämän fysiologisen ja tästä syystä funktionaalisen differentoitumisen laukaiseva hetki johtuu itse solukasvusta ja ravintoväliaineen koostumuksen siten alunperin aiheutuneesta ajallisesta muutoksesta. Tämän spontaanin fysiologisen differentoitumisen näkyvä seuraus voidaan todeta yksinään jo "batch"-viljelmän kasvukäyrän erilaisissa vaiheissa. Toisaalta solumassan fysiologisen aktiviteetin ja toisaalta sen ympäristön välisen esitetyn suoran suhteen seurauksena liittyy siihen myös erilaisten intra- ja ekstrasellulääristen aineenvaihduntatuotteiden etusijalla oleva rikastuminen kasvuvaiheesta ja differentoitumisvai-heesta riippuen. "Batch"-viljelmän viljelyn emäliuokset sisältävät tästä syystä kaikkien ajallisesti yksittäisten differentoitumisvaiheiden aikana muodostuneiden aineenvaihduntatuotteiden integroidun seoksen.
Keksinnön tarkoituksena on välttää nämä vaikeudet ja haitat ja sen tehtävänä on saada aikaan Pseudomonas aeruginosa-bak-
8 4 2 S O
teerikantojen submerssinen viljelymenetelmä, joka tuottaa olennaisesti tähänastista paremmalla saannolla bakteeribio-massan antigeenien valmistamiseksi, joiden fysiologinen tila pysyy muuttumattomana koko viljelyaikana. Menetelmässä käytetään synteettistä ravintoväliainetta (elatusainetta), josta ei muodostu mitään ylimääräisiä epäpuhtauksia autoklavoi-taessa, ja joka mahdollistaa bakteeribiomassan helpomman kemiallisen viimeistelyn flagella-antigeeniksi.
Tämä tehtävä ratkaistaan keksinnön mukaisesti siten, että seuraavia H-tyyppi-antigeeneja tuottavia kantoja
Kanta H-tyyppi 170001 (ATCC 33350) - b M-2 (ATCC 33349) - b 5940*) - a0, a2 5939*) - a0, a3 5933*) - a0, alt a2 1210 (ATCC 33354) - a0, a1# a2 170018 (ATCC 33356) - a0, a3, a4 *) Kannat on esitetty julkaisussa Zbl. Bakt.
Hyg., I. Abt. Orig. A242, 228-238 (1978) ja ne ovat saatavissa Pariisissa sijaitsevasta Collection de 1'Institut Pasteur-nimisestä talletuslaitoksesta viljellään vesipitoisessa, antigeenivapaassa ja proteiiniva-paassa ravintoväliaineessa, joka sisältää typpilähteen ja mineraalisuoloja sekä hiililähteenä sukkinaattia tai virtsa-ainetta eli ureaa.
Mainittu hiililähde on osoittautunut erityisessä määrin kasvua edistäväksi.
Kannoissa 170001, 5940, 5939, 5933 ja 170018 käytetään An-sorgin nimitystä. Tyypittömien kantojen M-2 ja 1210 luokittelu vastaavaksi H-serotyypiksi tapahtui Montien et ai:n mukaisten molekyylipainojen vertailututkimusten ja serologisten ristireaktioiden perusteella.
4 84280
Mieluummin suoritetaan kantojen viljely jatkuvatoimisesti.
Erään edullisen suoritusmuodon mukaisesti kasvatus voi tapahtua turbidostaattisesti, jolloin ravintoväliaineen happipitoisuus on 5 - 20 etenkin n. 10 %, solutiheys pidetään arvossa 2 - 3 x 109 solua/ml ja substraatin laimennus-määrä pidetään arvossa 0,1 My - 0,3 My lisäämällä tuoretta ravintoväliainetta.
Pseudomonas aeruginosa-bakteerikantojen keksinnön mukainen viljely tapahtuu sekoittamalla ja ilmastamalla "avointa" viljelmää siten, että ne saatetaan maksimaaliseen kasvuun ja flagellien muodostukseen. Ravintosubstraatin syöttö suoritetaan viljelmän kasvumäärän tai vastaavasti viljelmän saavuttaman tasapainotilan mukaan. Tuoreen ravintoväliaineen syötön säätö tai vastaavasti ohjaus tapahtuu viljelmän kasvun suhteen verrannollisesta parametrin, sopivimmin solutiheyden ajallisen muutoksen mukaisesti. Kuitenkin voidaan käyttää myös muita parametrejä, jotka ovat verrannollisia viljelmän kehityksen suhteen, kuten hengitysaktiivisuus, C02~tuotanto, vetyionikonsentraation muutos, hiililähdekonsentraation muutos, respiraatio-osamäärä, typpikulutus, happikulutus ja lämpöefekti. Edelleen voi tuoreen ravintoväliaineen syötön säätö tapahtuu muodostuneen antigeenin määrästä riippuvaisena .
Keksinnön mukaisessa yhtäjaksoisessa kasvatusmenetelmässä poistetaan samanaikaisesti tuoreen ravintoväliaineen syötön kanssa viljelynestettä viljelyastiasta, niin että kasvun ja fysiologisen aktiivisuuden, etenkin toisaalta solujen muodostuksen ja toisaalta solujen ympäristön välille säätyy tarkoin määriteltävä ja aina toistettava virtaustasapainoti-la, joka voidaan säilyttää käytännöllisesti katsoen ajallisesti rajattomasti.
Ravintoväliaineena käytetään synteettistä proteiinivapaata väliainetta, joka sisältää yksinomaan kemiallisesti sekä fysikokemiallisesti kvalitatiivisesti ja kvantitatiivisesti 5 84280 määriteltäviä aineosia. Tähän tarkoitukseen soveltuu epäorgaaninen ravintoliuos, joka sisältää kaikki olenaiset elementit.
Eräässä edullisessa keksinnön mukaisessa menetelmässä voidaan käyttää tauti-itiöiden fermentatiiviseen valmistukseen sekä jatkuvatoimisen viljelyn kemostaattista periaatetta, jossa viljelmän fysiologista aktiivisuutta säädetään rajoittavalla substraatilla, mieluummin hiili- ja energialähteen substraatilla, että jatkuvatoimisen viljelyn turbidostaat-tista periaatetta, jossa laimennusnopeutta (My) ja siten viljelmän fysiologista aktiivisuutta säädetään ulkoisesti kasvuparametrin, mieluummin viljelmän hetkellisen solutihey-den avulla.
Edullisesti käytetään turbidostaattista jatkuvatoimista viljelyä.
Maksimaalisen bakteerikasvun edistämiseksi myös lämpötilat tai vastaavasti pH-arvo ovat tärkeitä; siten on tarkoituksenmukaista noudattaa viljelyn aikana 20 - 35eC:n, sopivim-min 30"C:n lämpötilaa ja pH-arvoa 6,5 - 7,5, sopivimmin 7,0.
yksityiskohtaisesti keksinnön mukainen menetelmä suoritetaan turbidostaattisesti fermentaattorissa siten, että ensin ra-vintoväliaine ympätään bakteerikannalla ja työskennellään noudattaen esitettyjä olosuhteita, kunnes on saavutettu esitetty solutiheys, 2 - 3 x 109 solua/ml, logaritmisessa loppuvaiheessa. Heti kun asianlaita on näin, fermentaattorista poistetaan jatkuvasti bakteerisuspensiota ja se korvataan jatkuvasti tuoreella ravintoliuoksella. Laimennusmäärä ei saa tarkoituksenmukaisesti olla yli 0,3 My, mieluummin 0,1 -0,2.
Esitetyissä olosuhteissa virtaustasapainotilan saavuttamisen jälkeen saadaan 1,5 - 2,0 g/1 märkiä soluja, mikä vastaa suspension sameusarvoa 0,5 - 0,7 Tyndallin menetelmän mukaisesti ennen linkoamista 590 nmrssä.
6 84280
Keksinnön mukaista menetelmää selitetään lähemmin seuraavan esimerkin avulla:
Esimerkki: Käytettiin seuraavan koostumuksen omaavaa ravintoliuosta: dinatriumsukkinaattia 4,05 g/1 dikaliummonovetyfosfaattia 7 g/1 kaliumdivetyfosfaattia 3 g/1 ammoniumvetyfosfaattia l g/1 magnesiumsulfaattia . 7 H2O 0,05 g/1 rauta(III)kloridia 0,0025 g/1 pH säädettiin arvoon 7,0 ja lämpötila 30"C:seen. Ravinto-liuos ympättiin kannalla Pseudomonas aeruginosa M-2 ja sijoitettiin 15 l:n fermentaattoriin. 96 tuntia kestävässä fermentoinnissa käytettiin 140 1 ravintoväliainetta, jolloin ilman kulutus oli 10 % pC>2 (happiosapaine). Laimennusmäärä oli 0,1 My. Solutiheys oli virtaustasapainotilan saavuttamisen jälkeen 2 - 3 x 109 solua/ml.
Samoissa olosuhteissa viljeltiin kantoja 170001 ja 1210, jolloin seuraavassa taulukossa on esitetty viljelyolosuhteet, laimennusmäärä, happiosapaine %:eina ja solusaanto (g/1 märkäpainoa) kaksinkertaisen sentrifugoinnin jälkeen 15.000 x g:ssä. Edelleen on esitetty suspension sameusarvot ennen sentrifugointia.
kanta vilj elyolosuhteet__solusaanto _ laimennus- happi- sameusarvo g/1 märkiä määrä pitoisuus 590 nm:ssä soluja ____d = 1 cm__ 170001 0,1 My 10 % p02 0,6 - 0,67 1,7 M-2 0,1 My 10 % pC>2 0,6 - 0,7 1,6-1,7 1210 0,1 My 10 % p02 0,55 - 0,65 1,5 - 1,6 1210 0,1 My 10 % p02 0,6 1,5-1,6
Claims (2)
1. Menetelmä Pseudomonas aeruginosa-bakteerikantojen viljelemiseksi subsmerssisesti Pseudomonadaceae-suvun taksonomisesta heimosta, tunnettu siitä, että seuraavia H-tyyppi-antigeeneja tuottavia kantoja Kanta_H-tyyppi 170001 - b M-2 - b 5940 - ao, a2 5939 - ag, aj 5933 - aQ, aj_, a2 1210 - a0, ai, a2 170018 - öq, aj, a4 viljellään vesipitoisessa, antigeenivapaassa ja proteiini-vapaassa ravintoväliaineessa, joka sisältää typpilähteen ja mineraalisuoloja sekä hiililähteenä sukkinaattia tai ureaa, jatkuvatoimisesti ja turbidostaattisesti, jolloin ravinto-väliaineen happipitoisuus on 5 - 20 %, sopivimmin n. 10 %, solutiheys pidetään arvossa 2-3x109 solua/ml ja substraatin laimennusmäärä pidetään arvossa 0,1 My - 0,3 My lisäämällä tuoretta ravintoväliainetta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet- t u siitä, että viljelyssä lämpötila pidetään 20 - 35eC:ssa, sopivimmin 30eC:ssa, ja pH pidetään arvossa 6,5 - 7,5, sopivimmin 7,0. θ Patentkrav: 84280
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0007385A AT384238B (de) | 1985-01-14 | 1985-01-14 | Verfahren zur submersen zuechtung von pseudomonas aeruginosa-bakterienstaemmen |
| AT7385 | 1985-01-14 | ||
| AT8600003 | 1986-01-13 | ||
| PCT/AT1986/000003 WO1986004086A1 (en) | 1985-01-14 | 1986-01-13 | Method for the immersed culture of pseudomonas aeruginosa bacterial strains |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI863678A0 FI863678A0 (fi) | 1986-09-11 |
| FI863678L FI863678L (fi) | 1986-09-11 |
| FI84280B FI84280B (fi) | 1991-07-31 |
| FI84280C true FI84280C (fi) | 1991-11-11 |
Family
ID=3480817
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI863678A FI84280C (fi) | 1985-01-14 | 1986-09-11 | Foerfarande foer en submers odling av pseudomonas aeruginosa-bakteriestammar. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0211014B1 (fi) |
| JP (1) | JPH07114690B2 (fi) |
| AT (2) | AT384238B (fi) |
| CA (1) | CA1273887C (fi) |
| DE (1) | DE3674502D1 (fi) |
| DK (1) | DK421386A (fi) |
| ES (1) | ES8706820A1 (fi) |
| FI (1) | FI84280C (fi) |
| WO (1) | WO1986004086A1 (fi) |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1201638A (en) * | 1969-04-02 | 1970-08-12 | Chinese Petroleum Corp | Microbiological production of high protein compositions |
| US3987164A (en) * | 1970-10-20 | 1976-10-19 | Yuzuru Homma | Method for prevention of pseudomonas aeruginosa infections |
| US3928565A (en) * | 1971-10-19 | 1975-12-23 | Yuzuru Homma | Pharmaceutical preparation of pseudomonas aeruginosa bacterial component possessing anti-tumor and anti-infection properties |
| US4444888A (en) * | 1979-06-22 | 1984-04-24 | Sybron Corporation | Microorganism for decolorizing pulp and paper mill wastewater |
| US4482632A (en) * | 1981-05-07 | 1984-11-13 | Spraker Philip W | Microbiological process for removing oleaginous material from wastewater and microbiological combination capable of same |
| JPS5991879A (ja) * | 1982-11-16 | 1984-05-26 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
| BR8400054A (pt) * | 1983-01-10 | 1984-08-14 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Processo para cultivar bacterias pseudomonas |
-
1985
- 1985-01-14 AT AT0007385A patent/AT384238B/de not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-01-13 DE DE8686900708T patent/DE3674502D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-01-13 CA CA499448A patent/CA1273887C/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-01-13 JP JP61500682A patent/JPH07114690B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1986-01-13 AT AT86900708T patent/ATE56988T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-01-13 ES ES550832A patent/ES8706820A1/es not_active Expired
- 1986-01-13 EP EP86900708A patent/EP0211014B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-01-13 WO PCT/AT1986/000003 patent/WO1986004086A1/de not_active Ceased
- 1986-09-03 DK DK421386A patent/DK421386A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-09-11 FI FI863678A patent/FI84280C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AT384238B (de) | 1987-10-12 |
| ATE56988T1 (de) | 1990-10-15 |
| DK421386D0 (da) | 1986-09-03 |
| JPS62501330A (ja) | 1987-06-04 |
| ES8706820A1 (es) | 1987-07-01 |
| CA1273887A (en) | 1990-09-11 |
| EP0211014B1 (de) | 1990-09-26 |
| FI863678A0 (fi) | 1986-09-11 |
| DE3674502D1 (de) | 1990-10-31 |
| EP0211014A1 (de) | 1987-02-25 |
| ES550832A0 (es) | 1987-07-01 |
| FI863678L (fi) | 1986-09-11 |
| CA1273887C (en) | 1990-09-11 |
| JPH07114690B2 (ja) | 1995-12-13 |
| DK421386A (da) | 1986-09-03 |
| WO1986004086A1 (en) | 1986-07-17 |
| FI84280B (fi) | 1991-07-31 |
| ATA7385A (de) | 1987-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Roberts et al. | New procedures for purification of L-asparaginase with high yield from Escherichia coli | |
| US5494808A (en) | Defined medium OMPC fermentation process | |
| Ford | Culture of human genital “T-strain” pleuropneumonia-like organisms | |
| AU669028B2 (en) | Method of clonal growth of (streptococcus pneumoniae) | |
| Dukes et al. | Identification of Haemophilus vaginalis | |
| Fu et al. | Recent advances in the large scale fermentation of Neisseria meningitidis group B for the production of an outer membrane protein complex | |
| Happold et al. | The Coli-Tryptophan-Indole Reaction: II. The Non-Production of Tryptophanase in Media Containing Glucose | |
| FI84280C (fi) | Foerfarande foer en submers odling av pseudomonas aeruginosa-bakteriestammar. | |
| Barry et al. | Colicine A | |
| JPH10127298A (ja) | アカルボース調製のためのオスモル濃度制御発酵法 | |
| RU2518282C1 (ru) | Питательная среда для глубинного культивирования туляремийного микроба | |
| SU676177A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
| Schuster et al. | A synthetic medium for continuous culture of the S‐layer carrying Bacillus stearothermophilus PV 72 and studies on the influence of growth conditions on cell wall properties | |
| US3686072A (en) | L-asparaginase from erwinia | |
| RU1566532C (ru) | Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных | |
| SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
| RU2301256C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования холерного вибриона | |
| JP2001517429A (ja) | 繊毛虫（原生動物）の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質を生産する発酵法 | |
| SU877927A1 (ru) | Штамм @ 79-продуцент бактериоцина а79 | |
| JPS6319158B2 (fi) | ||
| VARDAR-ÜNLÜ | A Comparison of Germ Tube Production by Candidaalbicans in Three Media | |
| RU2129440C1 (ru) | Способ изготовления вакцин против пастереллеза животных и птиц | |
| Feenstra et al. | A Study of the Diphtheroids Found in Infectious Bovine Pyelonephritis | |
| CA2138178A1 (en) | Control of ph during bordetella growth | |
| SU1163636A1 (ru) | Штамм ацидофильных метилотрофных бактерий @ @ ВСБ-924-продуцент белка |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: "IMMUNO" AKTIENGESELLSCHAFT FUER |
|
| MA | Patent expired |