FI69630C

FI69630C - FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV KVATERNAERA SALTER AV N, N3-DI (BETA-BROMPROPIONYL) -N1-DISPIROTRIPIPERAZINUM WOLF SALTER AER ANVAENDBARA CEILING MODEL MOT LEUKOS OCH TUMOERER

Info

Publication number: FI69630C
Application number: FI813372A
Authority: FI
Inventors: Margarita Ivanovna Dorokhova; Kira Viktorovna Levshina; Olga Yakovlevna Tikhonova; Alla Nikolaevna Zamskaya; Sofya Markovna Minakova; Tamara Semenovna Safonova; Vladimir A Chernov
Original assignee: V N I Khim Farmatsevtichesky I
Priority date: 1981-10-28
Filing date: 1981-10-28
Publication date: 1986-03-10
Also published as: FI69630B; FI813372L

Description

1 69630 3 12 Menetelmä N/N -di(β-bromipropionyyli)-N ,N -dispirotri- piperatsiniurain kvaternääristen suolojen valmistamiseksi, jotka suolat ovat käyttökelpoisia lääkeaineita leukoosia ja kasvaimia vastaan 5 3 121 69630 3 12 Process for the preparation of quaternary salts of N / N -di (β-bromopropionyl) -N, N -dispirotripiperazine, which salts are useful drugs against leukemia and tumors 5 3 12

Keksintö koskee N,N -di (/'i-bromipropionyyli)-N , N - dispirotripiperatsiniumin kvaternäärisiä suoloja, erikoisesti menetelmää niiden valmistamiseksi.The invention relates to quaternary salts of N, N-di (N-bromopropionyl) -N, N-dispirotripiperazinium, in particular to a process for their preparation.

Ennestään tunnetaan ryhmä dispirotripiperatsinium-10 johdannaisia, joiden typpi-pääteatomeihin on liittynyt /?-hydroksi-, / -klooripropyyli-, epoksipropyyli-, halogeeni- alkyyli-, bentsoyyli-, nitroso-, aryylisulfonihappo- ym. ryhmiä. Näitä tunnettuja dispirotripiperatsiniumjohdannai-sia voidaan esittää seuraavalla yleisellä kaavalla: 15 i_ / V./ \J \ R-N N N N-R · 2C1 \_/ V_/ \_/ ' 1 a-f 20 jossa: la R = CH2CHCH2C1, lb R = CH2CH2C1, le R = CH2CH-CH2 OH 0 ID R = COC6H5, le R = NO, If R = S02CgH4NH2 (vrt. Proceedings of VNIIChFI, "Prospidin - a New Antitumor Compound", iss. Ill, Moskova, 1973, s. 61-64).A group of dispirotripiperazinium-10 derivatives having p-hydroxy, p-chloropropyl, epoxypropyl, haloalkyl, benzoyl, nitroso, arylsulfonic acid and the like groups attached to nitrogen atoms is known from the prior art. These known dispirotripiperazinium derivatives can be represented by the following general formula: wherein: la R = CH2CHCH2C1, lb R = CH2CH2C1, leb = CH2CHCH2C1, le R = CH2CH-CH2 OH 0 ID R = COC6H5, le R = NO, If R = SO2CgH4NH2 (cf. Proceedings of VNIIChFI, "Prospidin - a New Antitumor Compound", iss. Ill., Moscow, 1973, pp. 61-64 ).

25 Tämän ryhmän yhdisteistä yhdisteillä la, Ib ja le on huomattavaa kasvainten vastaista aktiivisuutta. Yhdisteet Ib ja le ovat kuitenkin osoittautuneet pysymättömik-si, ja tästä syystä lääkekäyttöön on suositeltu yhdistettä la, 3,12-diatsa-6,9-diatsaniumdispiro/5,2,5,2/heksadekaa-30 ni-3,12-bis(3-kloori-2-hydroksipropyyli)dikloridia, josta käytetään nimitystä prospidiini (propidiini on rekisteröity merkillä NSC-166100 laitoksessa US National Cancer Institute).Of the compounds in this group, compounds Ia, Ib and Ic have considerable antitumor activity. However, the compounds Ib and lee have proved to be unstable, and for this reason the compound Ia, 3,12-diaza-6,9-diazanedispiro / 5,2,5,2 / hexadecane-30i-3,12-bis has been recommended for medicinal use. (3-chloro-2-hydroxypropyl) dichloride, referred to as prospidine (propidine is registered under NSC-166100 at the U.S. National Cancer Institute).

Prospidiinia käytetään nykyisin kurkunpääsyövän ja 35 joidenkin muiden pahanlaatuisten kasvainten käsittelyyn.Prospidine is currently used to treat laryngeal cancer and some other malignancies.

Prospidiini ei kuitenkaan vaikuta käsiteltäessä heraa toplastisen systeemin pahanlaatuista syöpää sairastavaa potilasta.However, prospidine has no effect in the treatment of whey in patients with malignant cancers of the toplastic system.

6963069630

Prospidiinia valmistetaan dispirotripiperatsinium-dikloridin ja glyseroliepikloorihydriinin välisellä reaktiolla vesipitoisessa väliaineessa (vrt. Proceedings of VNIIChFI "Prospidin - New Antitumor Compound", iss. Ill, 5 Moskova, 1973, s. 14-17).Prospidine is prepared by the reaction of dispirotripiperazinium dichloride with glycerol epichlorohydrin in an aqueous medium (cf. Proceedings of VNIIChFI "Prospidin - New Antitumor Compound", is. Ill., 5 Moscow, 1973, pp. 14-17).

Pahanlaatuisia kasvaimia käsitellään nykyisin monilla erilaisilla lääkeaineilla, joiden aktiivisuus perustuu erilaisiin kemiallisiin yhdisteisiin.Malignant tumors are currently treated with many different drugs, the activity of which is based on various chemical compounds.

Tällaisista kemiallisista yhdisteistä voidaan esi- 10 merkkeinä mainita: - alkyloivat yhdisteet, jotka sisältävät 2-kloori-etyyliamiiniryhmiä (valmisteita: Ambikiini, Melfolan, Syk-lofosfamidi, Leukeran jne.) (2), sivut 89-90; - etyleeni-imiiniryhmät (valmisteita: TioTEF ja 15 sen analogit) (2), sivu 89; - metaanisulfonihapporyhmät (valmisteita: Mileran jne.) (2), sivu 90; - nitrosoalkyyliurea-johdannaiset (valmisteita: CCNU, BCNU, metyylinitrosourea jne.) (1), sivut 65-84; 20 (2), sivu 97; - nukleiinihappojen ja proteiinien aineenvaihdunnan antimetaboliitit (2), sivut 90-92; - pyrimidiiniemästen analogit (valmisteita: 5-fluo-riurasyyli, sytosiini, arabinosidi jne.) (1), sivut 193- 25 271; - puriiniemästen analogit (6-merkaptopuriini, tio-guanidiini jne.) (1) sivut 384-403; - foolihappoantagonistit (valmisteita: metotrek-saatti ja sen analogit) (1), sivut 468-483; 30 - antibiootit (valmisteita: adriamysiini, rubomysii- ni, bleomysiini, aktinomysiini D jne.) (1), sivut 593-614, 850-876, 582-592; (2), sivut 93-95; - kasveista uutetut yhdisteet (valmisteita: kolki-siini, vinblastiini, vinkristiini jne.) (1), sivut 670- 35 694; (2), sivut 92-93; - muut kasvaintenvastaisten yhdisteiden ryhmät (valmisteita; .prospidiini; Proceedings of VNIIChFI "Prospidin - 69630Examples of such chemical compounds are: alkylating compounds containing 2-chloroethylamine groups (preparations: Ambikine, Melfolan, Cyclophosphamide, Leukera, etc.) (2), pages 89-90; - ethyleneimine groups (preparations: ThioTEF and its analogues) (2), page 89; - methanesulphonic acid groups (preparations: Milera, etc.) (2), page 90; - nitrosoalkylurea derivatives (preparations: CCNU, BCNU, methylnitrosourea, etc.) (1), pages 65-84; 20 (2), page 97; - antimetabolites of nucleic acid and protein metabolism (2), pages 90-92; - analogues of pyrimidine bases (preparations: 5-fluorouracil, cytosine, arabinoside, etc.) (1), pages 193-25271; - analogs of purine bases (6-mercaptopurine, thio-guanidine, etc.) (1) pages 384-403; - folic acid antagonists (preparations: methotrexate and its analogues) (1), pages 468-483; 30 - antibiotics (preparations: adriamycin, rubomycin, bleomycin, actinomycin D, etc.) (1), pages 593-614, 850-876, 582-592; (2), pages 93-95; - compounds extracted from plants (preparations: colchicine, vinblastine, vincristine, etc.) (1), pages 670-35 694; (2), pages 92-93; - Other classes of antineoplastic agents (preparations; .prospidin; Proceedings of VNIIChFI "Prospidin - 69630

New Antitumor Compound", iss. III, Moskova, 1973, sivut 6-16, prokarbotsiini) (1), sivut 829-840; (2), sivu 98.New Antitumor Compound ", Iss. III, Moscow, 1973, pages 6-16, procarbocin) (1), pages 829-840; (2), page 98.

Käytettävissä olevilla kasvaintenvastaisilla valmisteilla (varsinkin käytettäessä niiden yhdistelmiä) saa-5 daan huomattavaa paranemista tai täydellinen paraneminen tietynlaisten pahanlaatuisten kasvainten ollessa kyseessä (kohdun suonikalvosyöpä, Berkitt'in tuumori, lasten akuutti lynfoblastinen leukemia, ihosyöpä, kiveksen itusolukas-vain jne.). Kuitenkin käytettäessä näitä kasvaintenvastai-10 siä lääkeaineita, osoittautuu terapeuttinen vaikutus useimmissa tapauksissa vain väliaikaiseksi, ja sen saavuttamiseen tarvitaan yleensä annoksia, jotka aiheuttavat sivuvaikutuksia, kuten punasolujen muodostuksen estymistä, ruuansulatuselimistön, munuaisten jne. häiriöitä (2), (3). 15 Lisäksi kasvaintenvastaisten lääkeaineiden toistuvan käytön yhteydessä on havaittu tottumista käytettyyn valmisteeseen, jolloin sen vaikutus heikkenee.The available antitumor preparations (especially when used in combination) provide significant or complete cure for certain types of malignancies (uterine choroidal cancer, Berkitt's tumor, pediatric acute lynphoblastic leukemia, skin cancer, testicular germ cell, etc.). However, when these antitumor drugs are used, the therapeutic effect proves to be only temporary in most cases and usually requires doses that cause side effects such as inhibition of red blood cell production, gastrointestinal, renal, etc. disorders (2), (3). 15 In addition, repeated use of anti-tumor drugs has been shown to become accustomed to the product used, thereby reducing its effect.

Keksinnön päämääränä oli kehittää uusi menetelmä uusien, biologisen vaikutuksen omaavien aineiden valmis-20 tamiseksi.The object of the invention was to develop a new method for the preparation of new substances having a biological effect.

Uudet yhdisteet ovat kvaternäärisiä N,NJ-di(/3“ 12 / bromipropionyyli)-N ,N -dispirotripiperatsiniumsuoloja, joiden kaava on 25 / V V—\The new compounds are quaternary N, NJ-di (/ 3 ', 12 / bromopropionyl) -N, N -dispirotripiperazinium salts of the formula 25 / V V— \

BrCH,CH.,CO-N N N Iq-COCH^CH-Br - 2XBrCH, CH., CO-N N N Iq-COCH ^ CH-Br - 2X

LL

(I) 30 jossa X on happoanioni.(I) wherein X is an acid anion.

Yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat valkeita kiteisiä jauheita, joilla ei ole selvää sulamispistettä; ne ovat veteen erilaisina määrinä liukenevia ja olennaisesti liukenemattomia orgaanisiin liuottimiin.The compounds of general formula (I) are white crystalline powders which do not have a clear melting point; they are soluble in various amounts in water and substantially insoluble in organic solvents.

4 696304,69630

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, 1 2 että kvaternäärinen N ,N -dispirotripiperatsiniumsuola, jolla on yleinen kaava 5 Γ / V/ \+/ \ HN N N NH · 2X (II) \_/ \_/ \_/ jossa X on happoanioni, saatetaan reagoimaan kaavan 10The process according to the invention is characterized in that the quaternary N, N -dispirotripiperazinium salt of the general formula 5N / V / \ + / \ HN NN NH · 2X (II) \ _ / \ _ / \ _ / where X is an acid anion , is reacted with the formula 10

BrCH2CH2COHal (III) mukaisen /3-bromipropionihappohalogenidin kanssa liuotin-15 väliaineessa ja halogeenivetyä sitovan aineen läsnäollessa, ja tarvittaessa saatua yhdistettä käsitellään yleisen kaavanBrCH 2 CH 2 COHal (III) with a β-bromopropionic acid halide in a solvent-15 medium and in the presence of a hydrogen halide binding agent, and if necessary the compound obtained is treated according to the general formula

MeX (IV) 20 mukaisella yhdisteellä, jossa kaavassa Me on ryhmän I tai II metalli, X on happoanioni.With a compound of formula MeX (IV) 20 wherein Me is a Group I or II metal, X is an acid anion.

Keksinnön mukaan kaavan III mukaista /3-bromipropio-nihappohalogenidia tulisi edullisesti käyttää 10-40 % yli-25 määrin.According to the invention, the β-bromopropionic acid halide of the formula III should preferably be used in an amount of more than 25-40%.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä voidaan liuottimena käyttää vettä tai veden ja veden kanssa sekoittamattoman inertin orgaanisen liuottimen seosta.In the process according to the invention, water or a mixture of an inert organic solvent immiscible with water and water can be used as the solvent.

Halogeenivedyn sitomiseen voidaan käyttää alkali-30 tai maa-alkalimetallien suoloja, edullisesti natriumbikarbonaattia tai litiumhydroksidia.Alkali-30 or alkaline earth metal salts, preferably sodium bicarbonate or lithium hydroxide, can be used to bind the hydrogen halide.

Yleisen kaavan IV mukaisena yhdisteenä käytetään edullisesti natriumbromidia tai hopeanitraattia.Sodium bromide or silver nitrate is preferably used as the compound of general formula IV.

Keksinnön mukainen menetelmä suoritetaan yleensä 35 lämpötilavälillä 0°C:sta huoneen lämpötilaan.The process according to the invention is generally carried out at a temperature in the range from 0 ° C to room temperature.

Keksinnön kohteena on myös kasvaintenvastainen lää- 3 kevalmiste, joka sisältää aktiivisena aineena N,N -di (/3“bro- 69630 1 2 mipropionyyli)-N ,N -dispiropiperatsiniumkloridia (tai 3,12-bis (2-bromipropionyyli)-3,12-diatsa-6,9-diatsaniumdispi-ro/5,2,5,2/heksadekaanidikloridia) ja farmaseuttisesti hyväksyttävää väliainetta .The invention also relates to an antitumor drug preparation containing N, N-di (β-bromo-69630 1 2 mipropionyl) -N, N-dispopiperazinium chloride (or 3,12-bis (2-bromopropionyl) -3) as active ingredient. , 12-diaza-6,9-diazanedispiro / 5,2,5,2 / hexadecane dichloride) and a pharmaceutically acceptable medium.

5 Keksinnön mukaan aktiivista ainetta käytetään jau heena (lyofilisoituna).According to the invention, the active substance is already used in the form of lye (lyophilized).

Keksinnön mukaan aktiivista ainetta on injektioval-misteissa 2-5 %.According to the invention, the active ingredient is present in the injection preparations in an amount of 2-5%.

Keksinnön mukaan farmaseuttisesti hyväksyttävänä 10 kantaja-aineena tai väliaineena on isotoninen natriumklori-diliuos tislatussa vedessä tai 5-20-%:inen glukoosiliuos.According to the invention, the pharmaceutically acceptable carrier or vehicle is an isotonic sodium chloride solution in distilled water or a 5-20% glucose solution.

Seuraavassa kuvataan keksintöä yksityiskohtaisesti.The invention is described in detail below.

On havaittu, että yleisen kaavan I mukaisilla kva- 3 12 ternäärisillä N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N -dispirotri- 15 piperatsiniumsuoloilla on biologista aktiviteettia ja että niitä voidaan käyttää kasvaintenvastaisina aineina.It has been found that the quaternary N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-dispirotri-piperazinium salts of the general formula I have biological activity and can be used as antitumor agents.

Näiden yhdisteiden kasvaintenvastaisten ominaisuuksien ja myrkyllisyyden selville saamiseksi tutkittiin: 1) yhdisteiden vaikutusta siirrekasvannaisten kas-20 vuun valkeilla, erisyntyisillä rotilla ja hiirillä; 2) yhdisteiden aktiviteettia samasyntyisten hiirien leukoosiin; 3) yhdisteiden akuuttia myrkyllisyyttä niitä annettaessa kerran ja useampia kertoja valkeille, erisyntyisil- 25 le standardihäkeissä oleville kahdeksan hiiren ryhmille.To determine the antitumor properties and toxicity of these compounds, the following were investigated: 1) the effect of the compounds on the growth of transplanted tumors in white, native rats and mice; 2) the activity of the compounds on leukosis in congenital mice; 3) the acute toxicity of the compounds when administered once and several times to white, congenital groups of eight mice in standard cages.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden biologisia ominaisuuksia on tutkittu hiirillä ja rotilla suoritetuissa kokeissa. Kasvaintenvastaista aktiviteettia tutkittiin valkeilla rotilla, jotka painoivat kukin 110-130 g ja valkeil-30 la sekä samasyntyisillä että erisyntyisillä hiirillä, jotka painoivat 18-21 g, käyttäen ligatoituja kasvaimia. Käsittely aloitettiin 5-7 vuorokautta kiinteä kasvaimen siirtämisen jälkeen ja seuraavana päivänä leukoosilajien siirtämisen jälkeen. Siirteinä käytettiin seuraavia kasvain-35 lajeja: 1) rotat: Jensen'in sarkooma, sarkooma 45, sarkooma M-l, sarkooma 536; 6 69630 2) erisyntyiset valkeat hiiret: sarkooma 180, sar-kooma AK, sarkooma 37, karsinooma HK; 3) samasyntyiset hiiret: leukemia La, leukemia L1210 ja P-388.The biological properties of the compounds of the invention have been studied in experiments on mice and rats. Antitumor activity was examined in white rats weighing 110-130 g each and white-30a in both congenital and non-congenital mice weighing 18-21 g using ligated tumors. Treatment was started 5-7 days after solid tumor transplantation and the day after leukemia species transplantation. The following tumor-35 species were used as grafts: 1) rats: Jensen's sarcoma, sarcoma 45, sarcoma M-1, sarcoma 536; 6 69630 2) native white mice: sarcoma 180, sarcoma AK, sarcoma 37, carcinoma HK; 3) congenital mice: leukemia La, leukemia L1210 and P-388.

5 Yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa X on Cl (yhdiste 1) ja Br (yhdiste 2), ovat helppoliukoisia nat-riumkloridin isotoniseen liuokseen ja niitä voidaan antaa lääkkeeksi intraperitoneaalisesti. Yhdisteiden annostus on laskettu mg:oina eläimen kehonpainon kg:aa kohti.The compounds of general formula I in which X is Cl (compound 1) and Br (compound 2) are readily soluble in an isotonic solution of sodium chloride and can be administered as a medicament intraperitoneally. The dosage of the compounds is calculated in mg per kg of animal body weight.

10 Koska yleisen kaavan I mukainen yhdiste, jossa X10 Because a compound of general formula I wherein X

on n-CH^CgH^SO^ (yhdiste 3), on niukkaliukoinen veteen, sitä on annettu suspendoituna tärkkelystahnaan ja annokset on laskettu mg:oina eläimen kehonpainon kg:aa kohti.is n-CH 2 Cl 2 H 2 SO 2 (Compound 3), is sparingly soluble in water, is administered suspended in starch paste, and doses are calculated in mg per kg of animal body weight.

Tutkimuksien tulokseksi on saatu, että yhdisteillä 15 on selvää kasvaintenvastaista aktiviteettia rottien siirre-kas vannaisiin . Tulokset esitetään jäljempänä taulukossa 1.Studies have shown that compounds 15 have clear antitumor activity in rat grafts. The results are shown in Table 1 below.

Taulukosta 1 voidaan nähdä, että käytettäessä yhdisteen 1 tai 2 maksimaalista siedettävää annosta (MTD), saadaan huomattava kasvun estyminen seuraavilla: Jensen'in 20 sarkooma (98 ja 100 %), sarkooma M-l (99 ja 95 %), sarkooma 45 (99 ja 100 %), sarkooma 536 (78 ja 74 %). Tämän annoksen olennainen alentaminen ei alenna paljoakaan yhdisteen 1 ja 2 kasvaintenvastaista aktiviteettia Jensen'in sarkoomaan. Kun rotille, joilla oli Jensen'in sarkooma, 25 annettiin yhdistettä 1 1/80 MTB-annoksesta (so. 2 mg/kg) ja yhdistettä 2 1/20 MTD-annoksesta (so. 8 mg/kg), niin havaittu kasvaimen kasvun estyminen oli edellisessä tapauksessa 69 % ja jälkimmäisessä tapauksessa 43 %.It can be seen from Table 1 that the use of the maximum tolerated dose (MTD) of Compound 1 or 2 results in significant growth inhibition in the following: Jensen's 20 sarcoma (98 and 100%), sarcoma M1 (99 and 95%), sarcoma 45 (99 and 100%), sarcoma 536 (78 and 74%). Substantial reduction of this dose does not significantly reduce the antitumor activity of compounds 1 and 2 in Jensen's sarcoma. When rats with Jensen's sarcoma were administered Compound 1 1/80 of the MTB dose (i.e., 2 mg / kg) and Compound 2 of the 1/20 dose of MTD (i.e., 8 mg / kg), tumor growth was observed. inhibition was 69% in the former case and 43% in the latter case.

Annettaessa keksinnön mukaisia yhdisteitä valkeille 30 erisyntyisille hiirille, joilla oli siirretty kasvain, havaittiin myös korkea kasvaintenvastainen aktiviteetti. Vastaavat tulokset nähdään jäljempänä taulukossa 2.High antitumor activity was also observed when the compounds of the invention were administered to white tumor-bearing mice of different births. The corresponding results are shown in Table 2 below.

Kuten taulukosta 2 ilmenee, yhdisteiden 1 ja 2 MTD-annoksilla kasvainten kasvu estyi seuraavasti: sarkooma 35 180 (66 ja 52 %), sarkooma 37 (88 ja 60 %), sarkooma AKAs shown in Table 2, MTD doses of compounds 1 and 2 inhibited tumor growth as follows: sarcoma 35,180 (66 and 52%), sarcoma 37 (88 and 60%), sarcoma AK

(87 ja 81 %) .(87 and 81%).

li 7 69630li 7 69630

Yhdisteiden aktiviteetti leukoosin suhteen on määritetty vertaamalla käsiteltyjen eläinten elinaikaa (It) kontrollieläinten elinaikaan. 1^. on leukoosin kehittymisen estoindeksi, joka lasketaan seuraavasti: 5 käsiteltyjen eläinten keskimääräinen elinaika ioo-ΙΟΟ kontrollieläinten keskimääräinen elinaikaThe leukosis activity of the compounds has been determined by comparing the lifespan (It) of the treated animals with the lifespan of the control animals. 1 ^. is the leukemia inhibition index calculated as follows: 5 mean lifespan of treated animals ioo-ΙΟΟ mean lifespan of control animals

Yhdisteillä 1 ja 2 on selvä antileukoosivaikutus. Tulokset nähdään taulukossa 3.Compounds 1 and 2 have a clear antileukotic effect. The results are shown in Table 3.

10 Taulukosta 3 ilmenee, että annettaessa hiirille, joihin on istutettu leukamia La, yhdistettä 1 ja 2, käsiteltyjen hiirien elinaika kasvaa kontrolliin verrattuna 3-ja 2-kertaiseksi. Lisäksi yhdisteellä 1 on leukemiaa L1210 sairastavien hiirien elinaikaa pidentävä vaikutus kertoi-15 mella 1,03 ja leukemiaa P-388 sairastavien elinaikaa pidentävä vaikutus kertoimella 2 kontrolliin verrattuna.Table 3 shows that when compounds 1 and 2 were implanted in mice implanted with leukemia La, the lifespan of the treated mice increased 3-fold and 2-fold compared to the control. In addition, Compound 1 has a lifetime prolonging effect of mice with leukemia L1210 by a factor of 1.03 and a lifetime prolonging effect of leukemia P-388 by a factor of 2 compared to the control.

Yhdistettä 3 on tutkittu antamalla rotille ja hiirille, joihin on siirretty kasvaimia, yhdistettä suun kautta. Annettaessa yhdistettä 3 MTD-annos havaitaan seuraava 20 kasvainten kasvun estyminen: Jensen'in sarkooma (50 %), sar-kooma M-l (49 %) ja sarkooma 180 (35 %), katso taulukot 1 ja 2.Compound 3 has been studied by oral administration of tumor-transplanted rats and mice. Following administration of Compound 3 MTD dose, the following 20 tumor growth inhibitions were observed: Jensen's sarcoma (50%), sarcoma M-1 (49%), and sarcoma 180 (35%), see Tables 1 and 2.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden myrkyllisyystutki-muksissa määritettiin yhdisteiden absoluuttinen tappava an-25 nos (DLg^), keskimääräinen tappava annos (DL^0) ja MTD.Toxicity studies of the compounds of the invention determined the absolute lethal dose (DLg), mean lethal dose (DL 2) and MTD of the compounds.

Yhdisteille 1 ja 2 DL^ ja DL^g määritettiin käyttäen terveitä valkeita hiiriä, jotka painoivat 18-21 g ja antaen yhdisteitä intraperitoneaalisesti kerran ja useampia kertoja (kerran vuorokaudessa 7 vrk:n ajan).For compounds 1 and 2, DL ^ and DL ^ g were determined using healthy white mice weighing 18-21 g and administering the compounds intraperitoneally once and several times (once daily for 7 days).

30 On havaittu, että yhdisteellä 1 on sitä annettaessa yksi ainoa annos intraperitoneaalisesti DL,-g = 1,924 mg/kg, yhdisteellä 2 samoissa olosuhteissa DL^-g = 1,150 mg/kg; vastaavasti yhdisteiden 1 ja 2 DLg^-arvot ovat 2,272 ja 1,250 mg/kg. Koetulokset nähdään taulukossa 4.It has been found that Compound 1, when administered intraperitoneally, has a single dose of DL 1 -g = 1.924 mg / kg, Compound 2 under the same conditions has a DL 2 -g = 1.150 mg / kg; the DLg values of compounds 1 and 2 are 2.272 and 1.250 mg / kg, respectively. The test results are shown in Table 4.

35 Annettaessa yhdistettä 1 useampia kertoja sen DL^,.35 When compound 1 is administered several times, its DL 2 ,.

ja DL^q ovat vastaavasti 577 ja 444 mg/kg; yhdisteellä 2 vastaavat arvot ovat 340 ja 150 mg/kg. Yhdisteiden 1, 2 ja 3 MTD-annokset ovat 149, 125 ja 83 mg/kg (ks. taulukko 4).and DL ^ q are 577 and 444 mg / kg, respectively; for compound 2 the corresponding values are 340 and 150 mg / kg. The MTD doses of compounds 1, 2 and 3 are 149, 125 and 83 mg / kg (see Table 4).

6963069630

Yhdisteiden 1, 2 ja 3 MTD-annoksia on tutkittu terapeuttisissa kokeissa antamalla niitä toistuvina annoksina eläimillä, joihin on siirretty kasvaimia (ks. taulukoita 1 ja 2) .The MTD doses of Compounds 1, 2, and 3 have been studied in therapeutic trials by repeated doses in tumor-transplanted animals (see Tables 1 and 2).

5 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden ja tunnetun kasvaintenvastaisen yhdisteen, prospidiinin (3,12-diatsa-6,9-diatsaniumdispiro/3,2,5,2/heksadekaani-3,12-bis-(3-kloori-2-hydroksipropyyli)dikloridi) vaikutusta on verrattu erityisessä koesarjassa.The compounds of the present invention and the known antitumor compound, prospidine (3,12-diaza-6,9-diazanedispiro / 3,2,5,2 / hexadecane-3,12-bis- (3-chloro-2-hydroxypropyl)) dichloride) has been compared in a specific series of experiments.

10 Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on vähäisempi myrkyllisyys kuin prospidiinillä (ks. taulukko 4).The compounds of the present invention have less toxicity than prospidine (see Table 4).

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat aktiivisia hiiriin siirretyn leukemian suhteen, kun sen sijaan prospidiini ei vaikuta leukemian kehittymiseen (ks.The compounds of the present invention are active against transplanted leukemia in mice, whereas prospidine does not affect the development of leukemia (see

15 taulukot 3 ja 5).15 Tables 3 and 5).

Kuten taulukosta 5 havaitaan, keksinnön mukaisilla yhdisteillä on olennaisena etuna prospidiiniin verrattuna laaja terapeuttinen vaikutusalue. Kun prospidiinin kemote-rapeuttinen indeksi (Ch/T) Jensen'in sarkooman suhteen on 20 27, niin se on vastaavasti yhdisteillä 1 ja 2 60 ja 60, so. kaksinkertainen prospidiiniin verrattuna.As can be seen from Table 5, the compounds of the invention have a substantial advantage over a wide range of therapeutic activity over prospidine. When the chemotherapeutic index (Ch / T) of prospidine for Jensen's sarcoma is 27, it is 60 and 60 for compounds 1 and 2, respectively. double that of prospidine.

Edellä määritellyistä yhdisteistä on aktiivisin 3 12 N,N -di (/3-bromipropionyyli) -N ,N -dispirotripiperatsinium- dikloridi, jota voidaan käyttää aktiivisena aineosana uu-25 dessa keksinnön mukaisessa kasvaintenvastaisessa lääkevalmisteessa .Of the compounds defined above, the most active is 3 12 N, N -di (β-bromopropionyl) -N, N -dispirotripiperazinium dichloride, which can be used as an active ingredient in a new antitumor drug preparation according to the invention.

Keksinnön mukaisen lääkevalmisteen farmakologista aktiviteettia verrattuna prospidiinin aktiviteettiin on tutkittu eläinkokeissa (rotta- ja hiirikokeet).The pharmacological activity of the pharmaceutical preparation according to the invention in comparison with the activity of prospidine has been studied in animal experiments (rat and mouse experiments).

30 Keksinnön mukaisella lääkeaineella on huomattavan hyvä kasvaintenvastainen aktiviteetti sitä annettaessa paitsi intraperitoneaalisesti myös ihonalaisesti ja lihaksensisäisesti. Tulokset nähdään taulukossa 6.The medicament of the invention has remarkably good antitumor activity when administered not only intraperitoneally but also subcutaneously and intramuscularly. The results are shown in Table 6.

Lisäksi keksinnön mukainen valmiste on tehokkaampi 35 kuin prospidiini sitä annettaessa rotille suun kauttaIn addition, the preparation of the invention is more effective than oral prospidine in rats

Jensen'in sarkoomaa vastaan. Tulokset nähdään taulukossa 7.Against Jensen's sarcoma. The results are shown in Table 7.

9 696309 69630

Keksinnön mukaisella valmisteella on selvä leukoosin-vastainen vaikutus hiiriin, joihin on siirretty leukemia, kun sen sijaan prospidiinilla ei ole tällaista vaikutusta (taulukko 5).The preparation according to the invention has a clear anti-leukosis effect in mice transplanted with leukemia, whereas prospidine does not have such an effect (Table 5).

5 Keksinnön mukaisella lääkeyhdisteellä on prospidii- niin verrattuna 2,5-kertainen terapeuttinen vaikutusalue (vrt. taulukko 5).The pharmaceutical compound of the invention has a 2.5-fold therapeutic range compared to prospidine (cf. Table 5).

Verrattaessa esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteen ja prospidiinin myrkyllisyyttä, todettiin prospidii-10 nin myrkyllisyyden (DL^q) olevan kaksinkertainen, kun yhdisteitä annettiin yksi annos hiirille (paino 20-21 g), jolloin keksinnön mukaisen yhdisteen DL^-g oli 1,924 mg/kg ja prospidiinin 1,000 mg/kg (ks. taulukko 4).Comparing the toxicity of the compound of the present invention and prospidine, the toxicity (DL ^ q) of prospidine-10 was found to be doubled when the compounds were administered in a single dose to mice (weight 20-21 g), with a DL ^ g of the compound of the invention of 1.924 mg / g. kg and 1,000 mg / kg of prospidine (see Table 4).

Keksinnön mukaisen yhdisteen kumulatiivinen myrkyl-15 lisyys on selvempi kuin prospidiinin kumulatiivinen myrkyllisyys (vert. taulukko 4).The cumulative toxicity of the compound of the invention is more pronounced than the cumulative toxicity of prospidine (cf. Table 4).

On lisäksi huomioitava keksinnön mukaisen yhdisteen erityinen jakautuminen eri elimiin ja kudoksiin. Tulokset nähdään taulukoissa 8 ja 9.In addition, the particular distribution of the compound of the invention in different organs and tissues must be taken into account. The results are shown in Tables 8 and 9.

20 Annettaessa keksinnön mukaista yhdistettä, jossa on merkkiaineena C^4, havaitaan veressä suurempi radioaktiivisuus kuin C^-merkittyä prospidiinia annettaessa. Keksinnön mukaista yhdistettä kerääntyy kurkunpäähän, hen-kitorveen, keuhkoputkiin, luuytimeen, kasvaimeen ja kilpi-25 rauhaseen enemmän kuin prospidiinia. C14-merkitty keksinnön mukainen yhdiste poistuu elimestä 24 tunnin kuluessa suonensisäisestä annostuksesta pääasiassa virtsan mukana, kun sen 14 sijaan C -merkitty prospidiini pysyy elimessä kauemmin. Vastaavat luvut nähdään taulukossa 10.When a compound of the invention with a C4-4 marker is administered, greater radioactivity is observed in the blood than with a C4-labeled prospidine. The compound of the invention accumulates more in the larynx, trachea, bronchi, bone marrow, tumor and thyroid gland than prospidine. The C14-labeled compound of the invention is eliminated from the organ within 24 hours after intravenous administration, mainly in the urine, whereas instead of 14, the C-labeled prospidine remains in the organ for longer. The corresponding figures are shown in Table 10.

30 Keksinnön mukainen valmiste sisältää aktiivista ai netta ja farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja-ainetta.The preparation of the invention contains the active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier.

Keksinnön mukaista valmistetta voidaan käyttää sekä parenteraaliseen että ulkonaiseen lääkeantoon.The preparation according to the invention can be used for both parenteral and topical administration.

Parenteraaliseen lääkeantoon käytetään suonensisäis-35 tä, lihaksensisäistä ja intrakavitaarista injektiota; suun kautta lääkeanto tapahtuu käyttäen tabletteja tai kapseleita .For parenteral administration, intravenous, intramuscular and intracavitary injection are used; oral administration is by tablet or capsule.

10 696 3 010 696 3 0

Injektiovalmisteet koostuvat aktiivista ainetta sisältävästä liuoksesta, joka on valmistettu liuottamalla jauhemainen (lyofilisoitu) aktiivinen aineosa farmaseuttisesti hyväksyttävään väliaineeseen.Formulations for injection consist of a solution containing the active ingredient prepared by dissolving the powdered (lyophilized) active ingredient in a pharmaceutically acceptable medium.

5 Farmaseuttisesti hyväksyttävänä väliaineena voidaan käyttää natriumkloridin liuosta tislatussa vedessä tai 5-20-%:ista glukoosiliuosta.A solution of sodium chloride in distilled water or a 5-20% glucose solution can be used as a pharmaceutically acceptable medium.

Aktiivisen aineen konsentraatio farmaseuttisesti hyväksyttävässä väliaineessa on edullisesti 2-5 %.The concentration of the active substance in the pharmaceutically acceptable medium is preferably 2-5%.

10 Injektioliuos valmistetaan välittömästi ennen käyt töä liuottamalla steriili jauhe (lyofilisoitu jauhe) isotoniseen NaCl:n liuokseen tislatussa vedessä tai 5-20-%:i-seen glukoosiliuokseen.The solution for injection is prepared immediately before use by dissolving the sterile powder (lyophilized powder) in an isotonic solution of NaCl in distilled water or a 5-20% glucose solution.

Tablettimuodossa oleva lääkevalmiste sisältää ak-15 tiivistä ainetta ja kiinteää täyteainetta.The medicinal product in tablet form contains an active ingredient and a solid excipient.

Sopivia kantaja-aineita tabletteihin ovat sakkaroosi, laktoosi, natriumkloridi, tärkkelys, talkki.Suitable carriers for tablets are sucrose, lactose, sodium chloride, starch, talc.

Tabletin muodossa oleva farmaseuttinen koostumus sisältää aktiivista ainetta 200-500 mg.The pharmaceutical composition in the form of a tablet contains 200 to 500 mg of active ingredient.

20 Ulkoiseen käyttöön lääkeaine valmistetaan voiteen muotoon.20 For external use, the drug is prepared in the form of a cream.

Voiteen muodossa oleva valmiste sisältää aktiivista ainetta ja farmaseuttisesti hyväksyttävää voidepohjaa.The ointment formulation contains the active ingredient and a pharmaceutically acceptable ointment base.

Farmaseuttisesti hyväksyttävä voidepohja voi sisäl-25 tää vaseliinia, lanoliinia ja kasviöljyä.The pharmaceutically acceptable ointment base may contain petrolatum, lanolin and vegetable oil.

Voide sisältää edullisesti aktiivista ainetta 1-40 % farmaseuttisesti hyväksyttävässä voidepohjassa.The ointment preferably contains 1-40% of active ingredient in a pharmaceutically acceptable ointment base.

Keksinnön mukaisia lääkevalmisteita on tutkittu antamalla niitä kahdessa sairaalassa potilaille, joilla 30 oli erilaisia kasvaimia; kokeet osoittivat yhdisteiden myrkyllisyyden olevan alhainen.The pharmaceutical preparations according to the invention have been studied by administering them in two hospitals to patients with 30 different tumors; experiments showed that the toxicity of the compounds was low.

Lisäksi havaittiin, että annettaessa keksinnön mukaista valmistetta suonensisäisesti 500-600 mg vuorokaudessa (20 vrk:n ajan yhteensä aina 10 g:aan asti) potilaat 35 sietivät sitä hyvin.In addition, it was found that when the preparation according to the invention was administered intravenously at 500-600 mg per day (for a total of up to 10 g for 20 days), it was well tolerated by patients 35.

Keksinnön mukaisen valmisteen teho on myös osoittautunut hyväksi akuutin leukoosin tapauksessa. Kokeet 11 6 9630 suoritettiin 54 potilaalla, joista 20:llä oli pahanlaatuinen verisairaus. Kaikkien potilaiden kliininen tila ennen hoidon alkua keksinnön mukaisella valmisteella ja hoidon jälkeen todettiin (yleiskunto, suurentuneet imusolmukkeet, 5 maksa ja perna). Potilaiden veri, luuydin, virtsa analysoitiin, veren biokemialliset ominaisuudet määritettiin ja potilaalle suoritettiin elektrokardiografinen tutkimus (EKG). On todettu, että annettaessa suonensisäisesti keksinnön mukaista valmistetta 100 - 1 000 mg, saadaan posi-10 tiivinen vaikutus 45 %:lla potilaista; akuuttia imukudos-leukemiaa tai myeloleukemiaa sairastavilla potilailla saatiin 20 %:lla potilaista täydellinen kliinishematologinen paraneminen.The efficacy of the preparation according to the invention has also proved to be good in the case of acute leukosis. Experiments 11,69630 were performed on 54 patients, 20 of whom had malignant blood disease. The clinical status of all patients before and after treatment with the preparation according to the invention was determined (general condition, enlarged lymph nodes, 5 liver and spleen). Patients' blood, bone marrow, urine were analyzed, blood biochemical properties were determined, and the patient underwent an electrocardiographic examination (ECG). It has been found that intravenous administration of 100 to 1,000 mg of a preparation according to the invention results in a positive effect in 45% of patients; in patients with acute lymphocytic leukemia or myeloleukemia, complete clinical haematological recovery was achieved in 20% of patients.

33

Keksinnön mukaisia uusia kvaternäärisiä N,N -di-1 2 15 ^J-bromipropionyyli)-N ,N -dispirotripiperatsiniumsuoloja voidaan valmistaa kahdella tavalla.The novel quaternary N, N-di-1 2 (N-bromopropionyl) -N, N-disirotripiperazinium salts of the invention can be prepared in two ways.

Ensimmäisessä menetelmävaihtoehdossa keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi käytetään lähtöaineina edellä esitetyn yleisen kaavan II mukaisia kvaternää-20 risiä N ,N -dispirotripiperatsiniumsuoloja, jotka saatetaan reagoimaan edellä esitetyn kaavan III mukaisen happo-halogenidin kanssa liuotinväliaineessa halogeenivetyä sitovan aineen läsnäollessa.In a first process variant for the preparation of the compounds of the invention, quaternary N, N-disirotripiperazinium salts of the above general formula II are used as starting materials, which are reacted with an acid halide of the above formula III in a solvent medium in the presence of a hydrogen halide.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetyt kaavojen 25 ii ja III mukaiset yhdisteet ovat kirjallisuudesta tunnettuja, ja niitä valmistetaan tavanomaisin menetelmin (vrt. Proceedings of VNIIChFI "Prospidin" - New Antitumor Compound", iss. Ill, Moskova, 1973, s. 14-15).The compounds of formulas 25 ii and III used in the process of the invention are known from the literature and are prepared by conventional methods (cf. Proceedings of VNIIChFI "Prospidin - New Antitumor Compound", is. Ill., Moscow, 1973, pp. 14-15).

/3-bromipropionihapon halogenidina käytetään edulli-30 sesti bromipropionihappokloridia.As the halide of β-bromopropionic acid, bromopropionic acid chloride is preferably used.

Yleisen kaavan III mukaista yhdistettä käytetään 10-40 %:n ylimääränä, edullisesti 15-20 %:n ylimääränä.The compound of general formula III is used in an excess of 10-40%, preferably in an excess of 15-20%.

Liuottimena voi olla vesi tai veden ja veden kanssa sekoittamattoman orgaanisen liuottimen seos.The solvent may be water or a mixture of water and a water-immiscible organic solvent.

35 Inertti orgaaninen veden kanssa sekoittamaton liuo tin voi olla eetteri, petrolieetteri, halogenoitu hiilivety, kuten kloroformi, aromaattinen hiilivety, kuten bentsee-ni.The inert organic water-immiscible solvent may be an ether, petroleum ether, a halogenated hydrocarbon such as chloroform, an aromatic hydrocarbon such as benzene.

12 6963012 69630

Halogeenivetyä sitovana aineena voidaan käyttää alkali- ja maa-alkalimetallisuoloja.Alkali and alkaline earth metal salts can be used as the hydrogen halide binding agent.

Halogeenivetyä sitovana aineena on edullisesti natriumbikarbonaatti, kaliumbikarbonaatti tai litiumhydroksi-5 di.The hydrogen halide scavenger is preferably sodium bicarbonate, potassium bicarbonate or lithium hydroxy-5 di.

Asylointi suoritetaan lämpötila-alueella 0°C:sta huoneen lämpötilaan.The acylation is performed in the temperature range from 0 ° C to room temperature.

Reaktion päätyttyä veteen helppoliukoinen tuote, 3 12 esimerkiksi N,N -di ^3-bromipropionyyli)-N ,N -dispirotri- 10 piperatsiniumdikloridi voidaan erottaa reaktioseoksesta saostamalla jäähdytetyllä alemmalla alkoholilla, kuten me-tanolilla.Upon completion of the reaction, a readily water-soluble product, for example N, N-di (3-bromopropionyl) -N, N-dispirotri-piperazinium dichloride, can be separated from the reaction mixture by precipitation with a cooled lower alcohol such as methanol.

Toisessa menetelmävaihtoehdossa yleisen kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi käytetään lähtöaineena 15 ensimmäisessä menetelmävaihtoehdossa valmistettua tuotetta, jota käsitellään yhdisteellä, jolla on yleinen kaavaIn a second process variant for the preparation of a compound of general formula I, the starting material is the product prepared in the first process variant, which is treated with a compound of general formula

MeX (IV) 20 jossa Me on ryhmän I tai II metalli, X on happoanioni.MeX (IV) 20 where Me is a Group I or II metal, X is an acid anion.

33

Siten valmistettaessa N,N -di (/3-bromipropionyyli) - 1 2 N ,N -dispirotnpiperatsiniumdibromidia tai -dinitraattia lähtöaineena käytetään edellä menetelmävaihtoehdon I mu- 3 12 kaisesti valmistettua N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N - 25 dispirotripiperatsiniumdikloridia.Thus, for the preparation of N, N-di (β-bromopropionyl) -12 N, N-dipropyropiperazinium dibromide or dinitrate, the starting material used is N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N - 25 dispirotripiperazinium dichloride.

Kaavan IV mukaisena yhdisteenä käytetään ryhmään I tai II kuuluvan metallin suolaa, kuten natriumbromidia tai hopeanitraattia.As the compound of formula IV, a salt of a Group I or II metal such as sodium bromide or silver nitrate is used.

Edellä kuvattu reaktio suoritetaan vesipitoisessa 30 väliaineessa huoneen lämpötilassa.The reaction described above is performed in an aqueous medium at room temperature.

Reaktion päätyttyä halutut tuotteet eristetään ja puhdistetaan tavanomaisin menetelmin.Upon completion of the reaction, the desired products are isolated and purified by conventional methods.

Keksinnön ymmärtämiseksi esitetään seuraavassa erityisiä esimerkkejä, jotka valaisevat keksinnön mukaista me- 3 12 35 netelmää kvaternääristen N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N -dispirotripiperatsiniumsuolojen valmistamiseksi.In order to understand the invention, specific examples are given below which illustrate the process according to the invention for the preparation of quaternary N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-disirotripiperazinium salts.

1313

Esimerkki 1 6 9 6 3 0 3 12 N,N -di (/3-bromipropionyyli) -N ,N -dispirotripiperat- siniumdikloridin valmistus 1 2Example 1 6 9 6 3 0 3 12 Preparation of N, N -di (β-bromopropionyl) -N, N -dispirotripiperazinium dichloride 1 2

Seokseen, jossa oli 3 g N ,N -dispirotripiperatsi-5 niumdikloridia, 1,5 g litiumhydroksidia, 1 ml vettä ja 10 ml eetteriä, lisättiin voimakkaasti sekoittaen 5,2 g /J-bromi-propionihappokloridia 5 ml:ssa eetteriä 5-10°C:ssa. Reak-tioseosta sekoitettiin 15°C:ssa kaksi tuntia. Sakka suodatettiin, liuotettiin 10 ml:aan vettä, ja saatu vesiliuos 10 kaadettiin 100 mlraan metanolia. Saatu seos jäähdytettiin 0°C:seen, sakka suodatettiin, pestiin alkoholilla ja kui- 3 vattiin, jolloin saatiin 2 g N,N -di (β-bromipropionyyli)-1 2 N ,N -dispiropiperatsiniumdikloridia valkeana kiteisenä aineena, jolla ei ole selvää sulamispistettä, ja joka liu-15 kenee hyvin veteen ja on olennaisesti liukenematon orgaanisiin liuottimiin.To a mixture of 3 g of N, N-disirotripiperazin-5-dichloride, 1.5 g of lithium hydroxide, 1 ml of water and 10 ml of ether was added, with vigorous stirring, 5.2 g of N-bromopropionic acid chloride in 5 ml of ether 5-10 ° C. The reaction mixture was stirred at 15 ° C for two hours. The precipitate was filtered, dissolved in 10 ml of water, and the resulting aqueous solution was poured into 100 ml of methanol. The resulting mixture was cooled to 0 ° C, the precipitate was filtered, washed with alcohol and dried to give 2 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -1 2 N, N-dipopiperazinium dichloride as a white crystalline solid melting point, and which Liu-15 is highly water soluble and substantially insoluble in organic solvents.

Saatu, %: C 37,8 H 5,78 N 9,85 Cl" 12,21 C18H32Br2C12N4°2Found,%: C 37.8 H 5.78 N 9.85 Cl "12.21 C18H32Br2C12N4 ° 2

Laskettu, %: C 38,10 H 5,65 N 9,89 Cl" 12,53.Calculated,%: C 38.10 H 5.65 N 9.89 Cl "12.53.

20 Esimerkki 2 3 12 N,N -di (/3-bromipropionyyli) ,N ,N -dispirotripiperat- siniumdibromidin valmistusExample 2 3 12 Preparation of N, N -di (β-bromopropionyl), N, N -dispirotripiperazinium dibromide

Menetelmä 1: 1 2Method 1: 1 2

Suspensioon, joka sisälsi 15 g N ,N -dispirotripi-25 peratsiniumdibromidia 40 ml:ssa vettä, lisättiin voimakkaasti sekoittaen natriumbikarbonaatin (7,5 g) liuos 40 mltssa vettä ja sitten 8 ml /J-bromipropionihappokloridia. Reak-tioseosta sekoitettiin kaksi tuntia huoneen lämpötilassa. Sakka suodatettiin, pestiin vedellä ja alkoholilla ja kui-30 vattiin.To a suspension of 15 g of N, N-disirotrip-25 perazinium dibromide in 40 ml of water was added, with vigorous stirring, a solution of sodium bicarbonate (7.5 g) in 40 ml of water and then 8 ml of N-bromopropionic acid chloride. The reaction mixture was stirred for two hours at room temperature. The precipitate was filtered, washed with water and alcohol and dried.

3 123 12

Saatiin 20 g N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N - dispirotripiperatsiniumdibromidia. Yhdisteellä ei ole selvää sulamispistettä, se on kohtalaisesti veteen liukeneva, olennaisesti liukenematon alkoholeihin ja muihin orgaani-35 siin liuottimiin.20 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-dispirotripiperazinium dibromide were obtained. The compound does not have a clear melting point, it is moderately soluble in water, substantially insoluble in alcohols and other organic solvents.

Saatu, %: C 33,21 H 4,94 N 8,81 Br 48,78 C18H32Br2N4°2Found,%: C 33.21 H 4.94 N 8.81 Br 48.78 C18H32Br2N4 ° 2

Laskettu. %: C 32,95 H 4,92 N 8,54 Br 48,71.Calculated. %: C 32.95 H 4.92 N 8.54 Br 48.71.

69630 1469630 14

Menetelmä 2:Method 2:

Liuokseen, joka sisälsi 0,6 g esimerkissä 1 valmis- 3 12 tettua N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N -dispirotripiperat- siniumdikloridia 3 ml:ssa vettä, lisättiin 0,25 g natrium- 5 bromidia 5 ml:ssa vettä. Saatu sakka suodatettiin, pestiin kylmällä vedellä ja metanolilla ja kuivattiin.To a solution of 0.6 g of the N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-disirotripiperazinium dichloride prepared in Example 1 in 3 ml of water was added 0.25 g of sodium bromide. in ml of water. The resulting precipitate was filtered, washed with cold water and methanol and dried.

3 123 12

Saatiin 0,45 g N,N -di (/3-bromipropionyyli) -N ,N - dispirotripiperatsiniumdibromidia, joka oli täysin identtinen edellä menetelmässä 1 valmistetun yhdisteen kanssa.0.45 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-dispirotripiperazinium dibromide was obtained, which was completely identical to the compound prepared in Method 1 above.

10 Esimerkki 3 3 12 N,N' -di (/3-bromipropionyyli) -N ,N -dispirotripiperat- siniumdinitraatin valmistusExample 3 3 12 Preparation of N, N'-di (β-bromopropionyl) -N, N-disirotripiperazinium dinitrate

Menetelmä 1: 2 2Method 1: 2 2

Liuokseen, jossa oli 3,5 g N ,N -dispirotripiperat-15 siniumdinitraattia 15 m.l:ssa vettä lisättiin 0-5°C:ssa samanaikaisesti 2,0 ml /5-bromipropionihappokloridia ja 0,48 g litiumhydroksidia 6 ml:ssa vettä; reaktioseoksen jatkokäsittely suoritettiin samoin kuin esimerkissä 1. Saatu sakka suodatettiin, pestiin kylmällä vedellä ja metanolilla ja 20 kuivattiin.To a solution of 3.5 g of N, N-disirotripiperat-15 sinium dinitrate in 15 ml of water at 0-5 ° C were simultaneously added 2.0 ml of β-bromopropionic acid chloride and 0.48 g of lithium hydroxide in 6 ml of water; further work-up of the reaction mixture was carried out as in Example 1. The resulting precipitate was filtered, washed with cold water and methanol and dried.

3 123 12

Saatiin 3,9 g N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N - dispirotripiperatsiniumdinitraattia. Tuotteelle ei ole selvää sulamispistettä, se on jossain määrin veteen liukeneva ja olennaisesti liukenematon orgaanisiin liuottimiin.3.9 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-dispirotripiperazinium dinitrate were obtained. The product does not have a clear melting point, it is somewhat soluble in water and essentially insoluble in organic solvents.

25 Saatu, %: Br 25,91 C18H32Br2N6°8 Laskettu, %: Br 25,77.Found,%: Br 25.91 C 18 H 32 Br 2 N 6 O 8 Calculated,%: Br 25.77.

Menetelmä 2:Method 2:

Liuokseen, jossa oli 0,6 g esimerkissä 1 valmistet-3 12 30 tua N,N -di (/3r-bromipropionyyli) -N ,N -dispirotripiperatsi-niumdikloridia 6 mlrssa vettä, lisättiin 0,34 g hopeanit-raattia liuotettuna 4 ml:aan vettä. Hopeakloridisakka suodatettiin nopeasti pois, ja suodokseen lisättiin samansuuruinen määrä metanolia. Dinitraattisakka suodatettiin, 35 pestiin kylmällä vedellä ja metanolilla ja kuivattiin.To a solution of 0.6 g of the N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-disyrotripiperazinium dichloride prepared in Example 1 in 6 ml of water was added 0.34 g of silver nitrate dissolved in 4 ml. to water. The silver chloride precipitate was quickly filtered off, and an equal amount of methanol was added to the filtrate. The dinitrate precipitate was filtered, washed with cold water and methanol and dried.

3 123 12

Saatiin 0,41 g N,N -di (/3-bromipropionyyli)-N ,N - dispirotripiperatsiniumdinitraattia, joka oli identtinen menetelmässä 1 valmistetun tuotteen kanssa.0.41 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-dispirotripiperazinium dinitrate was obtained, which was identical to the product prepared in Method 1.

69630 1569630 15

Esimerkki 4 3 12 N,N -di (/3-bromipropionyyli) -N ,N -dispirotripiperat- siniumdi(p-tolueenisulfonaatin) valmistus 1 2Example 4 3 12 Preparation of N, N -di (β-bromopropionyl) -N, N -dispirotripiperazinium di (p-toluenesulfonate) 1 2

Suspensioon, joka sisälsi 5,68 g N ,N -dispirotripi-5 peratsinium-di(p-tolueenisulfonaattia) 10 ml:ssa vettä, lisättiin voimakkaasti sekoittaen 5-10°C:ssa samanaikaisesti annoksittain (sellaisella nopeudella, ettei lämpötila kohonnut yli edellä mainitun tason) litiumhydroksidin (1 g) liuos 5 ml:ssa vettä ja 4,3 g /3-bromipropionihappokloridia. 10 Reaktiososta sekoitettiin 15-18°C:ssa 2,5 tuntia. Sakka suodatettiin, pestiin vedellä ja alkoholilla ja kuivattiin.To a suspension of 5.68 g of N, N-disirotripi-5 perazinium di (p-toluenesulfonate) in 10 ml of water was added with vigorous stirring at 5-10 ° C at the same time in portions (at such a rate that the temperature did not rise above a solution of lithium hydroxide (1 g) in 5 ml of water and 4.3 g of β-bromopropionic acid chloride. The reaction mixture was stirred at 15-18 ° C for 2.5 hours. The precipitate was filtered, washed with water and alcohol and dried.

3 123 12

Saatiin 4,2 g N,N -di (/3-bromipropionyyli) -N ,N - dispirotripiperatsiniumdi(p-tlueenisulfonaattia) valkeana kiteisenä aineena, jolla ei ole selvää sulamispistettä, ja 15 joka on niukkaliukoinen veteen ja olennaisesti liukenematon orgaanisiin liuottimiin.4.2 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -N, N-dispirotripiperazinium di (p-toluenesulfonate) were obtained as a white crystalline substance with no clear melting point and sparingly soluble in water and substantially insoluble in organic solvents.

Saatu, %: Br 19,19 19,05 C32H46Br2N4°8S2 Laskettu, %: Br 19,10.Found,%: Br 19.19 19.05 C32H46Br2N4O8S2 Calculated,%: Br 19.10.

20 Samankaltaisella menetelmällä kuin esimerkissä 4, valmistettiin seuraavat yhdisteet: 1 2 N ,N -dispirotripiperatsiniundijodidista ja /3-bromi- 3 propionihappokloridista 3,7 g N,N -di (/3-bromipropionyyli)-1 2 N ,N -dispirotripiperatsiniumdijodidia valkeina kiteinä, 25 joilla ei ollut selvää sulamispistettä, jotka liukenivat jossain määrin veteen ja olivat olennaisesti liukenemattomia orgaanisiin liuottimiin; 1 2 N ,N -dispirotripiperatsiniumdibentseenisulfonaatis- 3 ta ja /3 -bromipropionihappokloridista 4,5 g N,N -di (/3-bromi-30 propionyyli)-N ,N -dispirotripiperatsiniumdibentseenisulfo-naattia valkeina kiteinä, joilla ei ollut selvää sulamispistettä, jotka olivat niukkaliukoisia veteen ja olennaisesti liukenemattomia orgaanisiin liuottimiin; 1 2 N ,N -dispirotripiperatsiniumdimetyylisulfonaatista 3 35 ja ^-bromipropionihappokloridista 3,9 g N,N -di (/3-bromipro-1 2 pionyyli)-N ,N -dispirotripiperatsiniumdimetyylisulfonaat-tia valkeina kiteinä, joilla ei ollut selvää sulamispis- ___ - τ 16 69630 tettä, jotka olivat jossain määrin liukenevia veteen ja olennaisesti liukenemattomia orgaanisiin liuottimiin; 1 2 N ,N -dispirotripiperatsiniumdibentsoaatista ja 3 ^rbromipropionihappokloridista 4,5 g N,N -di (/$-bromipropio-1 2 5 nyyli)-N ,N -dispirotripiperatsiniumdibentsoaattia valkeina kiteinä, jotka olivat olennaisesti liukenemattomia veteen ja orgaanisiin liuottimiin.In a similar manner to Example 4, the following compounds were prepared: 3.7 g of N, N-di (β-bromopropionyl) -1 2 N, N-disyrotripiperazinium diiodide from 1 N, N-disirotripiperazine diiodide and β-bromo-3-propionic acid chloride as crystals without a clear melting point, which were somewhat soluble in water and substantially insoluble in organic solvents; 1 2 4.5 g of N, N -di (β-bromo-30-propionyl) -N, N -dispirotripiperazinium dibenzenesulfonate from N, N -dispirotripiperazinium dibenzenesulfonate 3 and β-bromopropionic acid chloride as white crystals with no clear melting point which were sparingly soluble in water and substantially insoluble in organic solvents; 1 2 N, N -dispirotripiperazinium dimethylsulfonate 3 35 and 4-bromopropionic acid chloride 3.9 g of N, N-di ([3-bromopropro-12-pionyl) -N, N-disyrotripiperazinium dimethylsulfonate in the form of white crystals without clear crystals - τ 16 69630 teas which were somewhat soluble in water and essentially insoluble in organic solvents; 1 2 N, N -dispirotripiperazinium dibenzoate and 3'-bromopropionic acid chloride 4.5 g of N, N-di (p-bromopropion-1 2 5-yl) -N, N-disirotripiperazinium dibenzoate as white crystals which were essentially insoluble in water and organic.

Taulukko 1table 1

Keksinnön mukaisten yhdisteiden vaikutus rottien 10 siirrekasvaimien kasvuun Kasvain Yhdiste 1Effect of Compounds of the Invention on Growth of Transplant Tumors in Rats 10 Tumor Compound 1

Annos, mg/kg Injek- I , % Eläimen kehonpai- (intraperi- tioiden non muutos, g toneaalises- lukum. T, T, . ,, .Dose, mg / kg Inj- I,% Change in body weight (intraperitoneal non-animal, g tonal number T, T,. ,,.

Koe Kontrolli 15 1 2 3 4 5 6Test Check 15 1 2 3 4 5 6

Jensen'in 160x 7 +98 -12 +25 sarkooma 125 7 +89 +4 -16 90 7 +86 +6 -16 40 5 +85 +20 +17 20 20 7 +98 +30 +25 10 7 +93 +4 +25 6 6 +80 +10 +5 4 6 +81 0 +5 2 6 +69 -1 +5 25 1 7 0 —2Jensen's 160x 7 +98 -12 +25 sarcoma 125 7 +89 +4 -16 90 7 +86 +6 -16 40 5 +85 +20 +17 20 20 7 +98 +30 +25 10 7 +93 + 4 +25 6 6 +80 +10 +5 4 6 +81 0 +5 2 6 +69 -1 +5 25 1 7 0 —2

Sarkooma 125x 5 +99 -3 +3 45 80 5 +99 -9 -12 50 7 +61 -8 -12 20 70 -12 -12 30 Sarkooma 140x 6 +78 -32 +13 536 70 6 +55 -22 +13 50 7 +45 -15 -14Sarcoma 125x 5 +99 -3 +3 45 80 5 +99 -9 -12 50 7 +61 -8 -12 20 70 -12 -12 30 Sarcoma 140x 6 +78 -32 +13 536 70 6 +55 -22 + 13 50 7 +45 -15 -14

Sarkooma lllx 5 +99 +4 +14 M-l 90 5 +96 +7 +8 25 xMaksimi siedettävä annos (MTD)Sarcoma lllx 5 +99 +4 +14 M-l 90 5 +96 +7 +8 25 xMaximum tolerated dose (MTD)

YYYY

Suoritettu yksi koePassed one test

It, % - kasvaimen kasvun estymiskerroin 17 69630It,% - tumor growth inhibition factor 17 69630

Yhdiste 2Compound 2

Annos mg/kg Injektioiden It, % Eläimen kehonpainon (intraperito- lukumäärä muutos, g neaalisesti) Koe Kontrolli 5 7 8 9 10 11 149X 5 +100 -30 +3 86 4 +99 +1 +3 88 5 +99 +1 -2 10 39 5 +99 +14 +3 21 44 +90 +34 +3 8 7 +43 +21 -12 4,2 7 +35 +6 -12 2,1 7 +46 +5 -12 15 95X 6 +100 -6 -19 83 7 +96 +6 -4 44 7 +96 +4 -4 20 7 +66 -12 -4 20 133X 5 +74 -14 -4 81 6 +52 -15 -4 95X 6 +97 +8 +21 18 69630Dose mg / kg Injections It,% Animal body weight (change in intraperitoneal number, g nal) Test Control 5 7 8 9 10 11 149X 5 +100 -30 +3 86 4 +99 +1 +3 88 5 +99 +1 - 2 10 39 5 +99 +14 +3 21 44 +90 +34 +3 8 7 +43 +21 -12 4.2 7 +35 +6 -12 2.1 7 +46 +5 -12 15 95X 6 + 100 -6 -19 83 7 +96 +6 -4 44 7 +96 +4 -4 20 7 +66 -12 -4 20 133X 5 +74 -14 -4 81 6 +52 -15 -4 95X 6 +97 +8 +21 18 69630

Yhdiste 3Compound 3

Annos, mg/kg Annosten lu- It, % Eläimen kehonpainon (suun kautta) kumäärä muutos, gDose, mg / kg Dose readings,% Change in animal body weight (oral), g

Koe Kontrolli 5 12 13 14 15 16 83X 7 +50 -7 +3 10 ei tutkittu 15 ei tutkittu 20 ei tutkittu 85X 6 +49 +1 -3Experience Control 5 12 13 14 15 16 83X 7 +50 -7 +3 10 not studied 15 not studied 20 not studied 85X 6 +49 +1 -3

IIII

19 6963019 69630

Taulukko 2Table 2

Keksinnön mukaisten yhdisteiden vaikutus hiirien siirrekasvaimien kasvuun Kasvain Yhdiste 1 5 Annos, mg/kg Injek- I. , % Eläimen kehonpai- (intraperi- tioiden non muutos, g toneaalises- lukum. Koe Kontrolli ti) 2 3 4 5 6 10 Sarkooma 262x 6 +66 -6 -2 180 75 6 +74 -4 -5 25 6 +42Effect of Compounds of the Invention on Mouse Transplant Tumor Growth Tumor Compound 1 5 Dose, mg / kg Injection,% of animal body weight (change in intraperitoneal effects, g tonal count. Experiment Control) 2 3 4 5 6 10 Sarcoma 262x 6 +66 -6 -2 180 75 6 +74 -4 -5 25 6 +42

Sarkooma 277x 6 +88 -4 -3 15 37 150 5 +53 75 7 +74 -2 -2Sarcoma 277x 6 +88 -4 -3 15 37 150 5 +53 75 7 +74 -2 -2

Sarkooma 250x 6 +87 -3 -3 AK 200 5 +64 125 6 +62 -1 -3 20 75 8 +81 -3 -3Sarcoma 250x 6 +87 -3 -3 AK 200 5 +64 125 6 +62 -1 -3 20 75 8 +81 -3 -3

Karsinooma 250x 6 +86 -4 -2 HK 125 6 +42 -3 -2 maksimi siedettävä annos (MTD) 25 xxsuoritettu yksi koeCarcinoma 250x 6 +86 -4 -2 HK 125 6 +42 -3 -2 maximum tolerated dose (MTD) 25 xxperformed one test

It, % - kasvaimen kasvun estymiskerroin 69630 20It,% - tumor growth inhibition factor 69630 20

dPdP

ro o Iro o I

* o m <D* o m <D

3 3 d H (0 X (N 00 (ö P X oo m3 3 d H (0 X (N 00 (ö P X oo m

•ro -PH• ro -PH

CC

CC ·Η ·· 3 oo oo λ: oo cCC · Η ·· 3 oo oo λ: oo c

00 ro ON -P ro -P X00 ro ON -P ro -P X

ro I « 3 *· 3 Xro I «3 * · 3 X

Ira d X O 3 O H Q ^ m roIra d X O 3 O H Q ^ m ro

d C P X O -H Eh ^ <N 00 Id C P X O -H Eh ^ <N 00 I

•H > +| -p -h ra S 3 3• H> + | -p -h ra S 3 3

to tn 3 -f I -Pto tn 3 -f I -P

•ro X Γ- -P 00 P• ro X Γ- -P 00 P

O * 'H 3O * 'H 3

CC CT 3 *· * > rtJCC CT 3 * · *> rtJ

·· C 3 0) 3 (T -P·· C 3 0) 3 (T -P

3 3 C -P3 3 C -P

Cl I 0) PCl I 0) P

Q -H 3 <#> tn o >+ o CS oorro X in ίτ m i iQ -H 3 <#> tn o> + o CS oorro X in ίτ m i i

·· ^ i—I ID X D ^ '—! C·· ^ i — I ID X D ^ '-! C

OC -P rN >,053 e 3 0) h ω O Cn 3 CN Q) -H C X tn |H X 3 C \ 3 h i—i 3 tn en :3 H ^ >, 6 3 Γ03-ΓΟ 3·*·» *3* X 3 3 •h 300 P d enOC -P rN>, 053 e 3 0) h ω O Cn 3 CN Q) -HCX tn | HX 3 C \ 3 hi — i 3 tn en: 3 H ^>, 6 3 Γ03-ΓΟ 3 · * · » * 3 * X 3 3 • h 300 P d en

O g C O O O X S OO g C O O O X S O

X 0) X X + i +i X & 3 m n- o oCX 0) X X + i + i X & 3 m n- o oC

X X 3 p +i+i x o) an r~ i m e 3 3 tl) > tN (N 3 C 33 mro ON 3X X 3 p + i + i x o) an r ~ i m e 3 3 tl)> tN (N 3 C 33 mro ON 3

30)3 ' ~ NO Γ- 3 3 DQ30) 3 '~ NO Γ- 3 3 DQ

3333 3 3 - ^ 3 C X3333 3 3 - ^ 3 C X

3 3 3 ON i—I m m 3 3 X3 3 3 ON i — I m m 3 3 X

H C tn C E-ι -HH C tn C E-ι -H

>1 :3 3 T3 — Il 3 λ; 3 3 ω 0) Ό dt> d 3 3 p e 3 tn 3 tn> 1: 3 3 T3 - Il 3 λ; 3 3 ω 0) Ό dt> d 3 3 p e 3 tn 3 tn

P 3 d * CO O O Ή XP 3 d * CO O O Ή X

3 3 W 3 ro PP O^TOOQ) 3 0)0 3 d 3 inONinOTi3 3 W 3 ro PP O ^ TOOQ) 3 0) 0 3 d 3 inONinOTi

05 3 P 3 O On 3 I O C05 3 P 3 O On 3 I O C

3d 3 2C a 3 CP Ί i On H 3 3 tn 3 O >1 o o m x >, JO 3 3 3 3 3 0\ >1 3 tn 3 ON 3 C On 3 3 0)3 3 3 X C E 3 3 ON 3 3 3 ·3 0) 3 3 >i 3 3 ·3 I 33d 3 2C a 3 CP Ί i On H 3 3 tn 3 O> 1 oomx>, JO 3 3 3 3 3 0 \> 1 3 tn 3 ON 3 C On 3 3 0) 3 3 3 XCE 3 3 ON 3 3 3 · 3 0) 3 3> i 3 3 · 3 I 3

33 :3 ON 3- on C 3 X33: 3 ON 3- is C 3 X

X ·3 X x O O 3 3 in ON O O XX · 3 X x O O 3 3 in ON O O X

3 X +1 3 - p an I"- m O p3 X +1 3 - p an I "- m O p

3 3 C P 3+1+1 3 C 0) 3 (NCNIOJ X3 3 C P 3 + 1 + 1 3 C 0) 3 (NCNIOJ X

CO > no 3 0) iX Q SCO> no 3 0) iX Q S

3:3 -33 CC ON 3 3 333 0 3 *» 0)3 3 0) 3 C 3 0) 00 Γ" TS 3 > 3 C 3 3 3 C 0) 3 0) 3 +> 0) 3 3 3 Q) 33: 3 -33 CC ON 3 3 333 0 3 * »0) 3 3 0) 3 C 3 0) 00 Γ" TS 3> 3 C 3 3 3 C 0) 3 0) 3 +> 0) 3 3 3 Q) 3

3 tn 3 WC O3 tn 3 WC O

P 3 3 -H 3 0 3 3 3 Ό P C Ό3 C 3 3 X 0) 3 ON 3 3 JP 3 3 ΟΝ ΓΟ 3 g X >, > 0) 3 3 >1 P 3 3 3 φο)Ό3 a) a> a) <u ts x tn 33 3 0 3 333 3 3 tntndP tn tntncndi E 3 3 tn 3 3 3 3 3 tnP 3 3 -H 3 0 3 3 3 Ό PC Ό3 C 3 3 X 0) 3 ON 3 3 JP 3 3 ΟΝ ΓΟ 3 g X>,> 0) 3 3> 1 P 3 3 3 φο) Ό3 a) a > a) <u ts x tn 33 3 0 3 333 3 3 tntndP tn tntncndi E 3 3 tn 3 3 3 3 3 tn

3 Ό Ό O C TS TS Ό Ό O X3 Ό Ό O C TS TS Ό Ό O X

(0 .CjCPO XI XX-CPH(0 .CjCPO XI XX-CPH

> x x d x; x x x x d x 69630 21> x x d x; x x x x d x 69630 21

XX

Eh Ο Ο Γ"~ \ φ in (N ·—-Eh Ο Ο Γ "~ \ φ in (N · —-

Λ IQΛ IQ

U :r0 WU: r0 W

P — I -t-1 A I φ g 3 O) 00 X Ό Φ -P A 00 I X Φ m 3 3 (O m m o -pa A φ -p ι ο i m mo •H Q ε Q -H gP - I -t-1 A I φ g 3 O) 00 X Ό Φ -P A 00 I X Φ m 3 3 (O m m o -pa A φ -p ι ο i m mo • H Q ε Q -H g

(¾ ·Ρ G(¾ · Ρ G

>1 £ (0> 1 £ (0

•P φ Ο -P• P φ Ο -P

C p a rp x x meC p a rp x x me

•p -p 3 <0 <N oo ο AG• p -p 3 <0 <N oo ο AG

G ·ρ φ ·ρ rp ro I ro 3G · ρ φ · ρ rp ro I ro 3

•H K Q £ Q £ -X• H K Q £ Q £ -X

H “ XH “X

0 •P I < C £ ϋ φ Q X X X -HO)0 • P I <C £ ϋ φ Q X X X -HO)

m a: oo σι o o -Pm a: oo σι o o -P

o 3 m h a po 3 m h a p

P φ -P CN P -HP φ -P CN P -H

(X Q £ Φ £(X Q £ Φ £

A -HA -H

m Gm G

3 1 C -H3 1 C -H

P O o <D £ 3 o oo e A AH+ + + -rH<Ö •H P + + -P -nP O o <D £ 3 o oo e A AH + + + -rH <Ö • H P + + -P -n

rO rO rO -PrO rO rO -P

> co £ G ~> co £ G ~

m Φ Qm Φ Q

e a e-· ο φ es AG p ~ A -H I Φe a e- · ο φ es AG p ~ A -H I Φ

3 (0 o <£» -PC3 (0 o <£ »-PC

r—i 4-i O ro e» 0 Φ 3m Am + + + dPdPdP £mr — i 4-i O ro e »0 Φ 3m Am +++ dPdPdP £ m

G (0 P + + +o Φ AG (0 P +++ o Φ A

Eh> (0(0 o m o o AOEh> (0 (0 o m o o AO

β co £ H ® co id Gβ co £ H ® co id G

φ I I I I I G r-, -P in o o o i0 Q) G I en oo y? m E-( 't)φ I I I I I G r-, -P in o o o i0 Q) G I en oo y? m E- ('t)

•H O rH G rG• H O rH G rG

G 0I+ + + G Λ :G GG 0I + + + G Λ: G G

> AS+ + + Φ U>m m p + 4- + G x (0 (0π3+ + +·Ρ x A en ε £ (C >1> AS + + + Φ U> m m p + 4- + G x (0 (0π3 + + + · Ρ x A en ε £ (C> 1

m -P -Pm -P -P

i m Gi m G

ia o o Φ -Hia o o Φ -H

n (0 K O m + + + On (0 K O m + + + O

G A -^ + + + G PG A - ^ + + + G P

rH 3 P + + + G PrH 3 P + + + G P

-P (0 (0 + + > Φ-P (0 (0 + +> Φ

G -P CO £ m (0 AG -P CO £ m (0 A

a) m g p m Ό p -X m -h •H P G G £ φ φ -P G G -P >1a) m g p m Ό p -X m -h • H P G G £ φ φ -P G G -P> 1

P > - ε Φ 3 -PP> - ε Φ 3 -P

m go £ Am •H G Φ O + + + -H -rl Φm go £ Am • H G Φ O + + + -H -rl Φ

Ό Φ C0A+ + + (0 (OGΦ Φ C0A + + + (0 (OG

,C Φ GP+ + + > > G, C Φ GP +++>> G

>h m φ g + + + m > h oi (0 -nm A Φ (0> h m φ g + + + m> h oi (0 -nm A Φ (0

AiOh

•H + + + + O• H + + + + O

G + + + GG + + + G

rH (N -rl + + Φ •H + £ φ φ φ Ό -rl -P -P -P Ή ·· (0 m m m a > •h -h -h m ε m Ό tJ Ό O O (0rH (N -rl + + Φ • H + £ φ φ φ Ό -rl -P -P -P Ή ·· (0 m m m a> • h -h -h m ε m Ό tJ Ό O O (0

X! .e .G p G £XX! .e .G p G £ X

ΪΗ >n >i Oi K XΪΗ> n> i Oi K X

22 69630 (ti -Ρ -Ρ 3 (Ο22 69630 (ti -Ρ -Ρ 3 (Ο

Ai . (tiAi. (t

(Ο C -Ρ G G(Ο C –Ρ G G

CO en 3 oCO en 3 o

3 e -H O 3 C -H3 e -H O 3 C -H

P -H rH (A (0 Ή HP -H rH (A (0 Ή H

-P (ti <Η Ai (ti Ή-P (ti <Η Ai (ti Ή

ai 3cojOai 3cojO

e e p i i -p -h e p -a· ήe e p i i -p -h e p -a · ή

C O -p I 3 -H o -P I IC O -p I 3 -H o -P I I

dj .cc x -P x: edj .cc x -P x: e

O O -H -P O) OO O -H -P O) O

•h Ai ϋί (ti ω λ: x •P tr> > G tn tn e cc 0 ti) ' C (ti CU - tn -P tn -h -P tn •H COOvOrH C :(ti G O ti) tn σι• h Ai ϋί (ti ω λ: x • P tr>> G tn tn e cc 0 ti) 'C (ti CU - tn -P tn -h -P tn • H COOvOrH C: (ti G O ti) tn σι

«ti -H -P O I rH -H -P -H -P o Ή I«Ti -H -P O I rH -H -P -H -P o Ή I

tn « 3 K I -H -H «0 3 X Itn «3 K I -H -H« 0 3 X I

•H H 3 Ό O -H 3 tn w e -h -p h ε e Oi tn 01 tn -h tn o ti V t_i r] 3 c#> Οι X <*> X to oo tn o •h - 00Γ" (ti G - tn n i—I C -P ++ -n 3 -P + +• HH 3 Ό O -H 3 tn we -h -ph ε e Oi tn 01 tn -h tn o ti V t_i r] 3 c #> Οι X <*> X to oo tn o • h - 00Γ "(ti G - tn ni — IC -P ++ -n 3 -P ++

3 M λ; H3 M λ; B

(ti 3 Γ" i-H(ti 3 Γ "i-H

n > O tn O C (0n> O tn O C (0

At -H <ΰ ΑΦΗAt -H <ΰ ΑΦΗ

X -p X X ti) -HX -p X X ti) -H

3 tn C 3 -P -H e3 tn C 3 -P -H e

rHQJCd) rH 05 -P CDrHQJCd) rH 05 -P CD

305(13¾ S-HO'O305 (13¾ S-HO'O

(ti -H g -H :<ti (OOP ·Η :(ti(ti -H g -H: <ti (OOP · Η: (ti

EnttiOOP h C OPEnttiOOP h C OP

Ή O -H :(ti >1 e -H :iti (tJ A! -P :(ti m to 3-P:iti r^t^· CP Ai £ -P 3 Ai g O (ti <1) 3 ti) > ti) 3 C tn -nA tn 03 -n Ai •H C 3 Ai (ti e 3Ή O -H: (ti> 1 e -H: iti (tJ A! -P: (ti m to 3-P: iti r ^ t ^ · CP Ai £ -P 3 Ai g O (ti <1) 3 ti)> ti) 3 C tn -nA tn 03 -n Ai • HC 3 Ai (ti e 3

C H H O Ai H rHC H H O Ai H rH

tn -h i—itn -h i — i

3 - 3 C3 - 3 C

-PC -P (ti-PC -P (ti

3 0 E3 0 E

Ai tn coAi tn co

•H C ti) O• H C ti) O

(ti O Ai > Hi 05 -HP &i H Ai 0) (ti Ai rH C \ Ai 0) C \ >1 C tn O O tn C X ti) £ toin Ai C (Dg ti) -P ti) - 3-H-P m m ti) -Ρ -P - oo m r-1 - 05'(ti O Ai> Hi 05 -HP & i H Ai 0) (ti Ai rH C \ Ai 0) C \> 1 C tn OO tn CX ti) £ toin Ai C (Dg ti) -P ti) - 3-HP mm ti) -Ρ -P - oo m r-1 - 05 '

-4-5 0) tn 05 ID m -H C -H 05 -H i-H-4-5 0) tn 05 ID m -H C -H 05 -H i -H

tn p -HO (ö ti) E Otn p -HO (ö ti) E O

•hpoc -PtnrHC• hpoc -PtnrHC

O-HAiC O C (ti CO-HAiC O C (ti C

X! -H X (ti 0)ti)>(ti >-1 05 > 1-5X! -H X (ti 0) ti)> (ti> -1 05> 1-5

•H•B

-P-P

(0 tn I -h 04 ti) -H e(0 tn I -h 04 ti) -H e

(ti tn 05 i—) -H(ti tn 05 i—) -H

-P -H C -H (ti -H-P -H C -H (ti -H

tn (0 a) -P -p (1)¾ •h h tn m tn -p -h E (ti Ai ti) -h tn Q4 (ti C (ti tn E -h tntn (0 a) -P -p (1) ¾ • h h tn m tn -p -h E (ti Ai ti) -h tn Q4 (ti C (ti tn E -h tn

-p O Xi -H rH ¾ O-p O Xi -H rH ¾ O

C X -H :(0 (ti X! PC X -H: (0 (ie X! P

< H P3 tn > X (¾<H P3 tn> X (¾

IIII

Taulukko 8 23 69630 14xTable 8 23 69630 14x

Yhdisteen 1-C jakautuminen rotan (jolla sarkooma M-l) elimiin ja kudoksiin suonensisäisen injektion jälkeen 5 Elin 15 min 30 min 60 min 24 tuntiaDistribution of Compound 1-C in organs and tissues of rat (with sarcoma M-1) after intravenous injection 5 Organ 15 min 30 min 60 min 24 hours

Kurkunpaa 4,15 3,43 2,0 0,58Throat 4.15 3.43 2.0 0.58

Munuaiset 10,4 5,4 2,6 0,53Kidneys 10.4 5.4 2.6 0.53

Keuhkoputket 3,4 2,83 1,7 0,24Bronchial tubes 3.4 2.83 1.7 0.24

Henkitorvi 7,29 4,62 4,64 0,6 10 Aivolisäke 6,3 6,67 5,13 4,12Trachea 7.29 4.62 4.64 0.6 10 Pituitary 6.3 6.67 5.13 4.12

Kilpirauhanen 3,5 2,73 1,43 0,48Thyroid 3.5 2.73 1.43 0.48

Luuydin 3,84 6,67 3,78 0,76Bone marrow 3.84 6.67 3.78 0.76

Kateenkorva 1,67 0,71 0,54 0,2Thymus 1.67 0.71 0.54 0.2

Kasvain 1,76 0,91 0,57 0,26 15 Veri 1,43 0,91 0,47 0,05Tumor 1.76 0.91 0.57 0.26 15 Blood 1.43 0.91 0.47 0.05

Maksa 0,94 0,69 0,76 0,32Liver 0.94 0.69 0.76 0.32

Perna 0,66 0,33 0,32 0,11Perna 0.66 0.33 0.32 0.11

Keuhkot 0,95 0,71 0,86 0,26Lungs 0.95 0.71 0.86 0.26

Imusolmukkeet 0,69 0,11 0,69 0,2 20 x Yhdisteessä 1 merkkiatomi on molekyylin dispirotripiper-atsiniumosassa xxKokonaiskertymistä osoittava kerroin 24 6 9 6 3 0Lymph nodes 0.69 0.11 0.69 0.2 20 x Compound 1 has a marker atom in the dispirotripiperazinium moiety of the molecule xxTotal accumulation factor 24 6 9 6 3 0

Taulukko 9Table 9

Prospidiini-C14*511 3akautuminen rotan (jolla on sar-kooma M-l) elimiin ja kudoksiin suonensisäisen injektion jälkeen 5 Elin 15 min 30 min 60 min 24 tuntiaProspidine-C14 * 511 3accumulation in organs and tissues of rat (with sarcoma M-1) after intravenous injection 5 Organ 15 min 30 min 60 min 24 hours

Kurkunpää 0,42xx 0,32xx 0,14XX 0,05xxLarynx 0.42xx 0.32xx 0.14XX 0.05xx

Munuaiset 3,43 0,67 0,56 0,15Kidneys 3.43 0.67 0.56 0.15

Keuhkoputket 2,16 0,82 0,5 0,25Bronchi 2.16 0.82 0.5 0.25

Henkitorvi 0,38 0,21 0,1 0,07 10 Aivolisäke 2,4 1,65 1,47 0,55Trachea 0.38 0.21 0.1 0.07 10 Pituitary 2.4 1.65 1.47 0.55

Kilpirauhanen 1,2 1,06 0,75 0,22Thyroid 1.2 1.06 0.75 0.22

Luuydin 0,8 0,6 0,52 0,18Bone marrow 0.8 0.6 0.52 0.18

Kateenkorva 0,16 0,06 0,05 0,02Thymus 0.16 0.06 0.05 0.02

Kasvain 0,65 0,37 0,3 0,07 15 Veri 0,4 0,1 0,07 0,01Tumor 0.65 0.37 0.3 0.07 15 Blood 0.4 0.1 0.07 0.01

Maksa 1,43 0,75 0,67 0,13Liver 1.43 0.75 0.67 0.13

Perna 0,43 0,21 0,11 0,06Perna 0.43 0.21 0.11 0.06

Keuhkot 1,54 0,45 0,2 0,06Lungs 1.54 0.45 0.2 0.06

Imusolmukkeet 0,57 0,48 0,14 0,04 20 x Prospidiinissa on merkkiatomi molekyyli dispirotripiper-atsiniumosassaLymph nodes 0.57 0.48 0.14 0.04 20 x Prospidine has a marker atom in the dispirotripiperazinium moiety

XXXX

Erilaista kertymistä osoittavat kertoimet 2 5 Taulukko 10Coefficients indicating different accumulation 2 5 Table 10

Radioaktiivisuuden poistuminen rotan elimistä 24 14 tuntia suonensisäisen yhdisteen 1-C ja Prospidiini-C^:n antamisen jälkeenElimination of radioactivity in rat organs 24 14 hours after administration of intravenous compound 1-C and Prospidine-C

Valmiste Virta Uloste Yhteensä 30 Yhdiste 1 98,3 %X 1,6 %x 99,9 %Preparation Stool Total 30 Compound 1 98.3% X 1.6% x 99.9%

Prospidiini 68,0 7,0 75,0 x80,7 % on poistunut kolmessa tunnissa.Prospidine 68.0 7.0 75.0 x80.7% is eliminated in three hours.

lili

Claims

A process for the preparation of quaternary salts of N, N -di (β-bromopropionyl) -N, N-diaspirotripiperazinium which are useful as agents against leukemia and tumors and which have the formula I! - BrCH_CH ~ CO-N NN N-COCH-CH ~ Br · 2Χ I io - 2 2 v_y \ _A_y 2 2 j where X is an acid anion, characterized in that the quaternary salt of di-spirotripiperazinium of formula 11 15 '1 - IIN NN NH * 2X II - v_ / ww J wherein X is as defined above, is reacted with a / 2-bromopropionic acid halide of formula III in BrCH2CH2COHal III in a solvent in the presence of a hydrogen halide acceptor and, if desired, treated with , of the formula IV MeX IV 30 wherein Me is a metal belonging to group I or II of the Periodic Table of the Elements and X has the same meaning as above.