FI103668B - Menetelmä farmakologisesti aktiivisten pyrrolo£3,2-e|indol-4(5H)-onidi meerien valmistamiseksi - Google Patents

Description

103668

Menetelmä farmakologisesti aktiivisten pyrroio[3,2-e]indol-4(5H)-onidimeerien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av farmakologiskt aktiva pyrro-lo[3,2-e]indol-4(5H)-ondimerer 5 Tämä keksintö koskee menetelmää uusien, farmakologisesti aktiivisten pyrrolo[3,2- e]indol-4(5H)-onidimeerien valmistamiseksi. Nämä yhdisteet ovat CC-1065-analo-geja.

10 Antibiootti CC-1065, (7bR,8aS)-7-{[l,6-dihydro-4-hydroksi-5-metoksi-7-[(4,5,8,8a-tetrahydro-7-metyyli-4-oksosyklopropa[c]pyrrolo[3,2-e]indol-2(lH)-yyli)karbonyy-li]bentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli}-1,6-dihydro-4-hydroksi-5-metoksi-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3(2H)-karboksamidi on kuvattu ja sille on esitetty patenttivaatimukset nimellä L.J. Hanka et ai. US-patenttijulkaisussa 15 4 169 888, samoin kuin menetelmä antibiootin CC-1065 valmistamiseksi aerobisella fermentointiprosessilla ja antibiootin CC-1065 talteenottamiseksi siitä.

Julkaisussa D.G. Martin et ai., Journal of Antibiotics. 1985, 38, 746, on esitetty, että etikkahappo liittyy CC-1065:n spirosyklopropyylisykloheksadienyyli-(SCPCH-) 20 järjestelmän poikki, jolloin syntyy fenolinen etikkahappotuote (AAP), 7-{[7-[[l-[(asetyylioksi)metyyli]-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[ l,2-b:4,3-b']dipyr-rol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-l,6-dihydro-4-hydroksi-5-metoksibentso[l,2-b:4,3-b']-dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli}- l,6-dihydro-4-hydroksi-5-metoksibentso[ 1,2-b:4,3-[ b']dipyrroli-3(2H)-karboksamidi. AAP testattiin in vitro ja in vivo ja se todettiin * ’ 25 10^-10^ kertaa vähemmän tehokkaaksi kuin CC-1065 käytetystä erityisestä koejär- jestelmästä riippuen, mistä syystä mielenkiinto, joka on kohdistettu SCPCH-järjes- • · · '•m’· · telmän additiotuotteiden käyttökelpoisuuteen tuumoreita torjuvina aineina tai CC- 1065-analogien esilääkkeinä, on vähentynyt.

• · • · · • · · * 30 Julkaisussa J. Am. Chem. Soc„ 103, no. 18, 1981, on ilmestynyt W. Wierengan artikkeli "Synthesis of the Left-Hand Segment of the Antitumor Agent CC-1065" (eli tuumoreita torjuvan aineen CC-1065 vasenkätisen lohkon synteesi).

t · * EP-hakemuksessa 0 154 445 (julkaistu 11.09.85) on kuvattu antibiootin CC-1065 f I · : 35 erilaisia analogeja, mukaan lukien kaavojen EP-I ja EP-Π mukaiset yhdisteet (katso hakemuksen EP 0154 445 yleisten kaavojen luettelo), jossa kaavassa EP-Π Rj on CH3-, -CH2Ph, CH2=CHCH2-, -CH2SCH3, -CH2OCH3, -CH2OCH2CH2OCH3, -CH2CC13, -CH2CH2Si(R2)3 tai H, jossa Ph on fenyyli; R on alkyyli(Ci-C5), 2 103668

fenyyli tai H; R2' on Cj-Cs-alkyyli, fenyyli tai vetyjä se ei ole välttämättä sama I kuin R yhdessä yhdisteessä; R3 on alkyyli(Ci-C5), fenyyli tai H; ja X on Cl, Br, I

tai OSO2R40, jossa R40 on Ci-C5-alkyyli, fenyyli, tolyyli, bromifenyyli, nitro-fenyyli tai trifluorimetyyli. Kaavan EP-Π mukaiset O-suojatut yhdisteet ovat kemi-5 allisesti stabiileja ja ne voidaan poistaa vain erityisissä kemiallisissa olosuhteissa. Kuitenkin, kun suojaava ryhmä on poistettu 0:sta kaavan EP-II mukaisissa yhdisteissä, niin ne voivat syklisoitua ja tuottaa kaavan EP-I mukaisia yhdisteitä.

Patenttihakemuksessa EP 0 154 445 on kuvattu myös CPI-dimeerit (CPI-dimeeri 10 tarkoittaa syklopropa[C]pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-onidimeeria, jossa syklopropaa-nirengas myös voi olla avoin), joita liittää toisiinsa -CO-(CH2)n 1 -CO-, jossa nj on 2-12, sekä CPI-dimeerit, joita liittää toisiinsa teetteri -C(0)-(-Ri i-)-C(0)-X7-(-CH2CH2-X7)n4-C(0)-(-R 11 -)-C(O)-, jossa Ri 1 on CH2CH2, CHCH; ja X7=0, NH, ja n4 = 1-4, sekä HC1-ja Mel-suolat tapauksessa, jolloin X7 = NH.

15

Joulukuun 19. päivänä 1986 jätetyssä US-patenttihakemuksessa 944 633, joka on kuitenkin hylätty, sekä joulukuun 11. päivänä 1987 jätetyssä ja heinäkuun 14. päivänä 1988 julkaistussa hakemuksessa PCT/TJS 87/03227 on kuvattu muita CPI-esilääkkeiden dimeerejä, joita liittää toisiinsa -CO-(CH2)nj-CO-, jossa nj on 2-12, 20 sekä CPI-dimeerejä, joita liittää toisiinsa teetteri -C(0)-(-R [ j -)-C(0)-Xj-(-CH2CH2-X7)n4-C(0)-(-Ri i-)-C(O)-, jossa Ri 1 on CH2CH2, CH=CH; ja X7=0, . : , NH, ja n4 = 1-4, sekä HC1- ja Mel-suolat tapauksessa, jolloin X7 = NH.

Joulukuun 19. päivänä 1986 jätetyn US-patenttihakemuksen, jonka sarjanumero on I 25 944 633, mukaista materiaalia on kuvattu lukuisissa suullisissa ja poster-esityksissä.

• · • · · V : Tässä keksinnössä saadaan aikaan eräitä uusia synteettisesti valmistettuja yhdisteitä, joilla on jäljempänä esitetty kaava I. Kaavan I mukaisilla edustavilla yhdisteillä on ! :T: osoitettu olevan käyttökelpoista tuumoreita torjuvaa aktiivisuutta tavanomaisissa la- 30 boratorioeläinkokeissa. Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä saadaan kaavioiden 1-6 mukaisilla kemiallisilla prosesseilla, jotka on esitetty yksityiskohtaisesti esimerkeissä.

I I

« « · · Näin ollen keksinnön mukaisesti on aikaansaatu pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-

: ’ ·.: 35 onidimeeri, jolla on kaava I

CPIi-R5-T-R'5-CPI2 I

3 105668 jossa CPIj ja CPI2, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat kaavan A tai B mukainen ryhmä w /=( f hn \

I A

i 5 w /=( x ΥοΊ~Λ W on Ci-C5-alkyyli, fenyyli tai vety; 10 X on atsido, halogeeniatomi, syanaatti, tiosyanaatti, isosyanaatti, tioisosyanaatti, fosfaattidiesteri [-0-P0(0R)2], fosfonyyli (-O-PO2R), tiofosfonyyli (-O-PSOR), : .: sulfinyyli (-O-SOR) tai sulfonyyli (-O-SO2R); . i Y on vety, -C(0)R, -C(S)R, -C(0)0Ri, -S(0)2Ri, -C(0)NR2R3, -C(S)NR2R3 tai : 15 -C(0)NHS02R4; • · . ·: ·. Z on C \ -C5-alkyyli, fenyyli tai vety; ...f R on Ci-C20-alkyyli; C2-C6-alkenyyli; C2-Cg-alkynyyli; fenyyli, joka on valinnai- 20 sesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Ci-C4-alkyylillä, Cj-C3-alkok- • · · . *·) silla, halogeenilla, Ci-C3-alkyylitiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla ·:*·: tai nitrolla; naftyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä tai kahdella - :’*·, Cj-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dial- .:. kyyliaminolla, C1-C3 -alkyylitiolla tai nitrolla; :;··! 25 • * * ' · ': Ri on C i-C20-alkyyli tai fenyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kah della tai kolmella Ci-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, C1-C3-alkyylitiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla tai nitrolla; 4 103668 R.2 ja R3, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat vety, Ci-C20-alkyyli tai fenyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Ci-C4~alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, Ci-C3-alkyylitiolla, trifluorimetyylillä, C2-Cö-dial-kyyliaminolla tai nitrolla; edellyttäen, etteivät sekä R2 ja R3 ole samanaikaisesti 5 fenyyli tai substituoitunut fenyyli; R4 on C i-C iQ-alkyyli; fenyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Cj-C^alkyylillä, Ci~C3-alkoksilla, halogeenilla, Cj-C3-alkyyli-tiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla tai nitrolla; naftyyli, joka on 10 valinnaisesti substituoitunut yhdellä tai kahdella C j -C4-alkyylillä, C1-C3-alkoksilla, halogeenilla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla, Ci-C3-alkyy-litiolla tai nitrolla; R5 ja R'5, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat suora sidos tai jokin seuraavista 15 karbonyyliasyyliryhmistä: 11 x· o ] ·; jossa Xg on -NH-, -O- tai -S-, Yj on vety, Cj-C4-alkyyli, C[-C3-alkoksi tai halo- : : : 20 geeni; : i! 0 H OCH3 « · ·

• · · M

i :T: --γΧ

·:· L_/H

I £ ' ·. · Il H och3 o 25 103668 5 jossa R’ on H tai CH3S-; —ry \\^h'

0 H

O /γι ii /vr ~0“Γογ“1 5 jossa Y\ ja Xg ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia; T on teetterisidos, joka on: a) aminokarbonyyli [-NHC(O)-]; b) karbonyyliamino [-C(0)NH-]; 10 c) amino-teetteri-amino, jolla on kaava NR13-T-NR14-, jossa R13 ja R14, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat vety tai Cj-Cg-alkyyli, tai ne muodostavat yhdessä ryhmän -(CH2)n-, jossa n on 2 tai 3; jossa Τ' on karbonyyli [-C(O)-], dikarbo-nyyli [-C(0)C(0)-]5 [-C(0)(CH2)nC(0)-], jossa n on 1-5, tai ryhmä, jolla on kaava - . -C(0)-het-C(0)-, jossa -het- on heteroaryyli, joka on furan-2,4-diyyli, furan-2,5- : 15 diyyli, pyrrol-2,4-diyyli, pyrrol-2,5-diyyli, tiofen-2,4-diyyli, tiofen-2,5-diyyli, indol- ' * 2,5-diyyli, bentsofuran-2,5-diyyli, bentsotiofen-2,5-diyyli, pyridin-2,6-diyyli, pyrat- • : sin-2,6-diyyli, pyrimidin-2,6-diyyli, kinolin-2,6-diyyli, kinoksalin-2,6-diyyIi, kinat- solin-2,6-diyyli, bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-2,7-diyyli, bentso[l,2-b:4,3-b']difiiran- 2,7-diyyli tai bentsoksatsol-2,5-diyyli, ja joka on valinnaisesti substituoitu yhdellä 20 tai kahdella Ci-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla tai halogeenilla; tai d) -C(0)-het-C(0)-, kun sekä R5 että R'5 ovat suora sidos, jossa -het- tarkoittaa samaa kuin edellä.

I · I

• « · III • · ·

Karbonyyliasyyliryhmissä R5 ja R'5, karbonyylihiiliatomiin sitoutunut vapaa 25 valenssi on sitoutunut esitettyyn, CPIi:n tai CPl2:n typen (N-) vapaaseen valenssiin, :: ja toinen esitetty vapaa valenssi tarkoittaa sidosta teetteriryhmään T.

· 6 103668 CPIi ja CPI2, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat edullisesti l-(kloorimetyyli)- 1.6- dihydro-8-metyyli-5-hydroksi-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli tai 4,5,8,8a-tetrahydro-7-metyyli-4-oksosyklopropa[c]pyrrolo(3,2-e)indol-2(lH)-yyli.

5 Won edullisesti metyyli. X on edullisesti halogeeni, edullisemmin kloori tai bromi.

Y on edullisesti -COR, jossa R on Cj-Cio-alkyyli tai fenyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Ci-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, Ci-C3-alkyylitiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla tai 10 nitrolla; tai -C(0)NHS02R4 tai -C(0)NR2R3· Z on edullisesti vety.

T on edullisesti amidi (aminokarbonyyli); karbonyyliamino [-C(0)NH-]; tai amino-15 teetteri-amino, jolla on kaava -NR13-T-NR14-, jossa R13 ja R14 ovat vety ja jossa Τ' on karbonyyli [-C(O)-] tai kaavan -(O)-het-C(O)- mukainen ryhmä, jossa kaavassa -het- on heteroaryyli, joka on edullisesti pyrrol-2,5-diyyli, fur-2,5-diyyli, indol-2,5-diyyli, bentsofuran-2,5-diyyli tai 3,6-dihydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol- 2.7- diyyli. Ryhmän -het- esitetyt vapaat valenssit ovat sitoutuneet karbonyylihii-20 liatomeihin [-C(0)-het-C(0)-].

. . . R5 on edullisesti 2-karbonyyli-indol-5-yyli, 2-karbonyyli-6-hydroksi7-metoksi- : indol-5-yyli, 2-karbonyyli-l,2,3,6-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-7-yyIi, I . 2-karbonyyli-4-hydroksi-5-metoksi-l,2,3,6-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroI- 25 7-yyli.

• · • · · • · · *.· * Halogeeniatomi (halogeeni) tarkoittaa bromi-, kloori-, jodi- tai fluoriatomia.

»•f

Esimerkkeinä C1 -C20-alkyyleistä voidaan mainita metyyli, etyyli, propyyli, butyyli :T: 30 ja muut vastaavat, niiden isomeeriset muodot mukaan lukien. Esimerkkeinä C1-C3- alkokseista voidaan mainita metoksi, etoksi, propoksi ja niiden isomeerimuodot. Esimerkkeinä C2-Cö-dialkyyliaminoista voidaan mainita dimetyyliamino, dietyyli-’*·.*’ amino, metyylietyyliamino, dipropyyliamino ja etyylipropyyliamino. Esimerkkeinä : aminokarbonyylialkyyleistä (Cj-Cio) voidaan mainita aminokarbonyylipentyyli : ‘ : 35 (-NHCOC5H11) ja aminokarbonyylimetyyli (-NHCOCH3).

Esimerkkeinä valinnaisesti substituoituneista het-ryhmistä voidaan mainita 3,4-dikloorifuran-2,5-diyyli, 3,4-dimetyylifuran-2,5-diyyli, 3-klooripyrrol-2,5-diyyli, 103668 7 3.4- diklooripyirol-2,5-diyyli, 3-metoksipyrrol-2,5-diyyli, 3-metyyli-4-etyyli-pyrrol- 2.5- diyyli, 3,4-difluoripyrrol-2,5-diyyli, 3-bromi-tiofen-2,5-diyyli, 4-klooripyridin- 2.6- diyyli, 4,5-dimetoksibentso[l,2-b:4,3-b']-dipyrrol-2,7-diyyli, 3,5-diklooripyri-din-2,6-diyyli.

5

Kaavan B mukaiset yhdisteet voidaan nimetä käyttäen numerointijärjestelmää, joka on esitetty seuraavassa kaavassa B\

Torx 10 B’ Tällaiset yhdisteet sisältävät l,2,3,6-tetrahydro-8-W-5-Y-bentso[l,2-b:4,3-b']di-pyrroli-l-[Z-CH(X)]-rakenteen.

, ·, , 15 Kaavan I mukaiset yhdisteet on piirretty raseemisena seoksena ja niihin kuuluu kaa van I'a mukainen luonnollinen isomeeri, joka voidaan erottaa raseemisesta seoksesta ’ · | ja/tai valmistaa lähtömateriaaleista, joissa on luonnollinen eli l(S)-konfiguraatio.

: ' Esimerkkinä keksinnön kohteena olevista, kaavan I mukaisista yhdisteistä voidaan 20 mainita (kaavat esitetty selityksen lopussa olevassa KAAVOJEN LUETTELOSSA): ··« • · · • · ♦ [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorime-tyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli] (yhdiste 1); • · · • · · • ’· # 25 [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikar- * ’ bonyyli)]bis[ 1,2,8,8a-tetrahydro-7-metyyli-syklopropa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)- • oni] (yhdiste 2); *« t « · .·. : (R*,S*)-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso- 30 [l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]etaanidiamiini (yhdiste 3); 8 103668 [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-pyrroli-2,5-diyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipym)l-4-oli] (yhdiste 4); [S-(R*,R*)]-6,6-(2,5-furandiyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetra-5 hydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3'b]dipyrrol-4-oli] (yhdiste 5); [S-(R*,R*)]"N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent-so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-2,5-furaanidikar-boksamidi (yhdiste 6); 10 [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso-[l,2-b:4,3-b,]dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-pyrroli-2J5-di-karboksamidi (yhdiste 7); 15 [R-(R*,S*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent-so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indoli-5-yyli]-propaanidiamidi (yhdiste 8); [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indol-5,2-diyylikarbonyyli)]bis[8-(kloori-20 metyyli)-3,6,7,8 -tetrahydro-1 -metyyli-bentso[ 1,2-b: 4,3 -b']dipyrrol-4-oli-diasetaatti] . : (yhdiste 9); : [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-indoli-2,5-diyylidikarbonyyIi)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8- ; tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli (yhdiste 10); 25 I [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent- so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-indoli-2,5-di-karboksamidi (yhdiste 11);

Ml • · · • · · • :T: 30 [S-(R*,R*)]-2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:- 4.3- b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-N-[3-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hyd- « · ... roksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-6-yy- li]-lH-indoli-5-karboksamidi (yhdiste 12); * * * :/. ί 35 [S-(R*,R*)]-5-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:- 4.3- b']dipyrrol-3(2H)-yyli]-karbonyyli]-N-[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hyd-roksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b,]dipynOl-3(2H)-yyli]karbonyyli]- lH-indol-5-yy-li]-lH-indoli-2-karboksamidi (yhdiste 13); 103668 9 [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-lH-indoli-5,2-diyylikarbonyyli[l-(kloorimetyyli)- 1.6- dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, 2,2-dime-tyylipropaanihappo (yhdiste 14); 5 [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-lH-indoli-5,2-diyyIikarbonyyli[l-(kloorimetyyli)- 1.6- dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, dekaani-happo (yhdiste 15); [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis[(7,8-dihydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-6,2(3H)-10 diyy li)karbonyy li] ] bis [8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8 -tetrahydro-1 -metyylibentso[ 1,2-b> 4,3-b']dipyiTol-4-oli] (yhdiste 16).

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa siten, että yhdiste, jolla on kaava 15 w M, * HN\ [θΓ~{ 2

H

jossa W, X, Y ja Z tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan biskarboksyylihapon kanssa, jolla on kaava 20

HO-R5-T-R'5-OH C

• · · • · · • · · • jossa R5, R'5 ja T tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen reaktiivinen johdannaisen :T: kanssa kaavan I mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa CPIj ja CPI2 ovat 25 samanlaiset, tai sellaisen kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa CPIj , · , ja CPI2 ovat erilaiset, kaavan B* mukainen yhdiste tai sen reaktiivinen johdannai- \mmm nen saatetaan reagoimaan kaavan C mukaisen biskarboksyylihapon tai sen reaktii- - * - · · * visen johdannaisen kanssa, jolloin toinen karboksyyliryhmistä tarvittaessa on suojat- tu, ja sitten mahdollisen suojaryhmän poistamisen jälkeen saatu monokarboksyyli- .·. j 30 happovälituote tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan erilaisen « * kaavan B* mukaisen yhdisteen tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa, ja haluttaessa suoritetaan yksi tai useampi seuraavista reaktioista: 10 103668 (i) kaavan I mukaisessa yhdisteessä ryhmä B syklisoidaan kaavan A mukaiseksi ryhmäksi, (ii) kaavan I mukaisessa yhdisteessä ryhmä A muutetaan ryhmäksi B, (iii) kaavan I mukaisessa yhdisteessä ryhmä B, jossa Y on vety, muutetaan toiseksi 5 ryhmäksi B, jossa Y tarkoittaa samaa kuin edellä vetyä lukuunottamatta.

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan näin ollen valmistaa helposti siten, että asianmukainen 4,5,8,8a-tetrahydro-4-oksosyklopropaani(c)pyrrolo(3,2-e)-indolianalogi (kaava B) saatetaan reagoimaan reagenssina toimivan biskarboksyylihapon, bis-10 isosyanaatin, bis-aminokarboksylaatin tai oksikarboksylaatin kanssa ja sitten muun sopivan 4,5,8,8a-tetrahydro-4-oksosyklopropaani(c)pyrrolo(3,2-e)-indolianalogin (kaava B) kanssa kaavioissa 1, 2, 2a, 3, 4, 5 ja 6 esitetyllä tavalla käyttäen seuraavia reaktio-olosuhteita: 15 Vaiheet 1 ja 4: Toteutetaan liuoksessa, joka sisältää 1 mg - 100 mg/ml esimerkiksi sellaisissa liuottimissa kuten etyyliasetaatissa, metyleenikloridissa tai 1,2-dikloori-etaanissa käyttäen kaasumaista happoa kuten HC1 tai HBr tai vahvaa orgaanista happoa kuten CF3CO3H pitoisuutena 1-5 M. Reaktio toteutetaan 0-50 °C:n lämpötilassa. Amiinisuolana oleva tuote eristetään haihduttamalla liuotin ja happo. Reakti-20 on voidaan antaa edetä 10 minuutista 48 tuntiin.

* «

J : Vaihe 2: Reaktio toteutetaan polaarisessa liuottimessa kuten DMF, DMA tai THF

• alueella -10 - +50 °C olevassa lämpötilassa. Suhde CPI-ryhmä:biskarboksyyli- j happoivedenpoistoaine on edullisesti 2:1:2. Vettä poistava tai kytkevä aine voi olla ,,,,: 25 karbodi-imidi, kuten disykloheksyylikarbodi-imidi (DCC) tai etyylidimetyyliamino- « « propyylikarbodi-imidi (EDC) tai muu alalla tunnettu aine, joka poistaa vettä amidista. Reaktion voidaan antaa edetä 10 minuutista 72 tuntiin.

«· · t · * *·* ‘ Vaiheet 5 ja 7: Samanlaisia kuin vaihe 2, mutta suhde CPI-ryhmä:happo:vedenpois- v : 30 toaine on edullisesti 1:1:1.

« • + .♦··. Vaiheet 3, 8, 9, 11, 14, 15 ja 17: Reaktio toteutetaan orgaanisen emäksen vesiliuok- *·' sessa. Edulliset olosuhteet ovat asetonitriili:vesi:trietyyliamiini suhteessa 1:1:1.

• · ·· Näiden reagenssien välinen suhde voi vaihdella alueella 1:2:2-5:1:1. Myös liuotti- • · L i 35 met voivat vaihdella siten, että asetonitriilin sijasta voidaan käyttää liuottimia DMF, DMA, N-metyylipyrrolidoni, THF, jne. Samoin orgaaninen emäs voidaan vaihtaa muuksi tertiääriseksi orgaaniseksi amiiniksi kuten l,5-diatsa-bisyklo-[3.3.3]oktaa- 103668 11 niksi (DABCO) tai etyylidi-isopropyyliamiiniksi. Lämpötila on tavallisesti alueella 0-50 °C ja reaktion annetaan tavallisesti edetä 5 minuutista 10 tuntiin.

Vaihe 6: Suojaavan ryhmän poistaminen riippuu suojaavasta ryhmästä R. Mikäli se 5 on t-butyyli, niin tällöin tämä ryhmä voidaan poistaa vaiheen 1 kaltaisella happo-käsittelyllä. Mikäli R = bentsyyli, se voidaan poistaa hydrogenolyyttisesti käyttäen Pd-katalyyttiä etyyliasetaatissa tai THF:ssä, esimerkiksi, tai ammoniumformaatilla, metanolilla, vedellä ja Pd/C-katalyytillä. Mikäli R = S1R3, niin tällöin se voidaaan poistaa hapolla tai fluoridi-ioneilla. Nämä kaikki menetelmät ovat alalla hyvin tun-10 nettuja.

Vaiheet 5a ja 7a: Reaktiot voidaan toteuttaa aproottisissa polaarisissa liuottimissa. Edullisia ovat pyridiini, DMF, DMA, THF tai metyleenikloridi. Kun liuotin on muu kuin pyridiini, niin siihen voidaan lisätä jotakin emästä kuten trietyyliamiinia. 15 Reaktio toteutetaan siten, että CPI-ryhmän ja aktivoituneen karbonyyliyhdisteen välinen suhde on noin 1:1. Reaktio voidaan toteuttaa alueella -50 - +100 °C olevassa lämpötilassa, ajanjakson, jonka pituus on 5 minuutista 72 tuntiin, aikana.

Vaiheet 10 ja 16: Reagenssit yhdistetään siten, että CPI-ryhmän ja aktiivisen karbo-20 nyylin välinen suhde on noin 2:1. Reaktio voidaan toteuttaa polaarisissa aproottisissa liuottimissa, joista voidaan mainita THF, DMF, DMA, pyridiini, asetonitriili, jne.

. , Reaktio voidaan toteuttaa alueella -50 - +100 °C olevassa lämpötilassa ajanjakson, jonka pituus on 10 minuutista useisiin viikkoihin, aikana.

* ' 1 M · ' > ' ' 25 Vaiheet 12, 13, 18 ja 19: CPI-ryhmän ja aktiivisen karbonyyliryhmän välinen suhde noin 1:1. Toteutetaan muuten samoin kuin vaihe 10.

• · :T: Seuraavissa esimerkeissä NMR-spektritulokset saatiin DMSO-d6:ssa, mikäli toisin ei mainita. IR-spektrit saatiin Nujol-seoksista. UV-spektrejä varten tarvitut liuokset .·{·. 30 valmistettiin liuottamalla kiintoaine muutamaan pisaraan DMF:ää tai dimetyy- ’ liasetamidia (DMA) ja laimentamalla 95 % etanolilla tai metanolilla, mikäli toisin ei • · · mainita. TLC-tulokset saatiin silikageelillä pinnoitetuilla Analtech Uniplates ” * GF-levyillä.

• • · 35 Esimerkki 1 . ·! : [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino- lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorime- tyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:n (yhdiste 1) valmistus

Osa A

12 103668 5,5'-(karbonyylidi-imino)bis-lH-indoli-2-karboksyylihappo-dietyyliesterin valmistus 5 Liuos, joka sisältää 5-aminoindoli-2-karboksyylihapon etyyliesteriä (6,82 g, 33,4 mM) ja 4-dimetyyliaminopyridiiniä (19 mg, 0,15 mM) THF:ään (80 ml) liuotettuna, jäähdytetään -98 °C:n lämpötilaan jäätynyttä metanolia sisältävässä hauteessa. Siihen lisätään di-isopropyylietyyliamiinia (7 ml, 40,2 mM) ja sitten 1,93 M fos-geenia tolueenissa (8,5 ml, 16,4 mM). Reaktioseosta sekoitetaan -98 °C:n lämpöti-10 lassa 1 tunnin ajan, sitten -78 °C:ssa 1 tunnin ajan. Sitä säilytetään sitten yön yli -13 °C:n lämpötilassa. Sitten reaktio sammutetaan vedellä ja laimennetaan vedellä ja etyyliasetaatilla. Vesikerros erotetaan ja uutetaan uudestaan kahteen kertaan etyyliasetaatilla. Yhdistetyt etyyliasetaattikerrokset pestään N HCl-liuoksella, jolloin saadaan seos, joka voidaan erottaa suodattamalla. Todetaan, että suodattamalla erotettu 15 kiintoaine on puhdasta tuotetta eli 5,5'-(karbonyylidi-imino)bis-lH-indoli-2-karbok-syylihapon dietyyliesteriä (6,38 g, 88 %). Suodos kuivataan ja väkevöidään, jolloin saadaan 1,49 g tummaa kiintoainetta. Tämä materiaali käsitellään kromatografisesti siliakgeelillä (100 g), jota eluoidaan 10 % DMF:llä tolueenissa. Eluaatista kerätään 20 ml:n suuruisia fraktioita. Tuotetta löydetään TLC-määrityksen avulla fraktioista ! 20 23-50. Nämä fraktiot väkevöidään suuressa vakuumissa, jolloin saatava jäännös ki- I teytetään DMF-metanoli-seoksesta. Tällä tavalla saatiin vielä lisäksi 0,80 g tuotetta.

! :.':' NMR: δ 1,36 (t, 6H); 4,35 (q, 4H); 7,10 (s, 2H); 7,26 (d, 2H, J=9Hz); 7,39 (d, 2H, '' : ; J=9Hz); 7,88 (s, 2H); 8,52 (s, 2H); 11,77 (bs, 2H).

25 IR: 3330, 3260, 1705, 1695, 1545, 1250 cm-1.

"** UV: λ max (THF) = 338 nm (ε = 7000); 301 nm (ε = 28000); 292 nm (ε = 26000); *:**: 250 nm (8 = 31000).

:T: MS(FAB) m/z 435(M+H), 406, 362, 253, 204, 159, 132.

TLC: Rf=0,30 (10-90) DMF-tolueeni-seoksessa.

30 • · ·

Osa B

• · * 5,5'-(karbonyylidi-imino)bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon valmistus • · · · * j . · · Tätä indolidimeeridiesteriä eli 5,5'-(karbonyylidi-imino)bis-lH-indoli-2-karboksyy- «

L 35 lihapon dietyyliesteriä (7,16 g, 16,5 mM) käsitellään pyridiinillä (300 ml) ja N

: NaOH-liuoksella (60 ml). Tuloksena saatua seosta sekoitetaan 24 tuntia 25 °C:n • * lämpötilassa, sitten 7 tuntia 50-60 °C:ssa, ja vielä 48 tuntia 25 °C:ssa, jossa vaiheessa TLC osoittaa reaktion päättyneen. Reaktioseos väkevöidään lähes kuiviin suures- 103668 13 sa vakuumissa 25 °C:ssa. Jäännös tehdään happamaksi 3N HCl-liuoksella ja tuloksena saatava kiintoaine otetaan talteen suodattamalla. Suodatettu kiintoaine liuotetaan DMF:ään (100 ml) noin 100 °C:ssa. Sitten liuos laimennetaan metanolilla (400 ml) ja vedellä (10 ml). Liuos jäähdytetään ja kiteinen tuote eli 5,5'-(karbonyyli-5 di-imino)bis-lH-indoli-2-karboksyylihappo otetaan talteen suodattamatta (5,11 g, 82 %).

NMR: δ 7,07(d, 2H, J=2Hz); 7,28(dd, 2H, J=l,8Hz, J=9Hz); 7,40(d, 2H, J=9Hz); 7,89(d, 2H, J=l,8Hz); 8,59(bs, 2HO); ll,65(d, 2H, J=l,5Hz).

10 IR: 3400-2300, 1680, 1530, 1225 cm'1.

UV: λ max = 294 nm (ε = 23000).

MS(FAB): m/z 379(M+H), 362, 331, 253, 176, 158, 132.

TLC: Rf = 0,33 (40-60-2) DMF-tolueeni-etikkahappo-seoksessa.

15 Osa C

(S)-1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihy dro-5-hy droksi-8-metyyli-bentso[ 1,2-b:4,3 -b']-dipyr-roli-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesterin [(Boc)CPI fenolikloridi] ja kloorivedyn välinen reaktio, jota seuraa kondensaatio 5,5'-(karbonyylidi-imino)bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon kanssa 20 (S)-1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ l,2-b:4,3-b']-dipyr-roli-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (128 mg, 0,38 mM) liuotetaan etyyliasetaattiin (6 ml) ja tätä liuosta käsitellään juuri valmiste-• , tulla liuoksella, joka sisältää HCl:a etyyliasetaatissa (6 ml). Reaktiota sekoitetaan ] 25 tunnin ajan, minkä jälkeen TLC osoittaa lähtömateriaalin hävinneen täydellisesti.

’ * Reaktioliuos väkevöidään vakuumissa ja palautetaan ilmakehän paineeseen typpi- m ilmakehässä. Tuloksena saatu jäännös haihdutetaan vielä kahdesti uudestaan mety- » · · · leenikloridista, jolloin saadaan (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-l,2,3,6- tetrahydro-bentso[ 1,2-b .4,3 -b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI-fenolikloridi-hydroklo-:'i': 30 ridisuola). Tätä materiaalia käsitellään liuoksella, joka sisältää dihappoa eli 5,5'- (karbonyylidi-imino)bis-lH-indoli-2-karboksyylihappoa (78 mg, 0,21 mM) kuivassa • . dimetyyliasetamidissa (4 ml). Sitten lisätään kiinteätä l-etyyli-3-(3-dimetyyli- aminopropyyli)karbodi-imidi-hydrokloridia (EDC, 68 mg, 0,08 mM). 45 minuutin kuluttua lisätään toinen määrä yhdistettä EDC (68 mg). Sekoittamista jatketaan 50 35 minuuttia. Reaktioseos saostetaan vedellä ja kiintoaine sentrifugoidaan. Se pestään : 0,1 N HCl-liuoksella, 0,5 % NaHC03-liuoksella ja vedellä, sentrifugoimalla ja poistamalla vesifaasi joka kerran. Jäännöstä haihdutetaan vakuumissa alle 20 toriin paineessa kaksi vuorokautta. Raakatuote adsorboidaan DMFistä Celite-tuotteeseen 14 103668 ja käsitellään kromatografisesti silikageelikolonnilla (15 g), jota eluoidaan 30 % DMFillä tolueenissa. 10 ml:n suuruisia fraktioita kerätään. [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbo-nyylibis(imino- lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahyd-ro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:a esiintyy fraktioissa 4-16 (115,1 mg 5 kiintoainetta, saanto 74 % yhdisteestä BocCPI laskien). NMR, IR, UV, FAB.

NMR: δ 2,356(S,6H); 3,582(m, 2H); 3,92(m, 2H); 4,03(m, 2H); 4,548(m, 2H); 4,67(m, 2H); 7,044(s, 4H); 7,26(d, 2H); 7,42(d, 2H); 7,64(bs, 2H); 7,849(s, 2H); 8,466(bs, 2H); 9,767(bs, 2H); 10,704(bs, 2H); 11,53 l(bs, 2H).

10 IR: 3260, 1580, 1195, cm'1.

UV: λ max = 349 nm (ε = 25000); 295 nm (ε = 31000).

MS(FAB): m/z 815(M+H), 779, 579, 236, 201, 187, 159.

DNA:han sitoutuminen: 15 24 h Δ [Φ] ~ 0 λ TLC: Rf=0,44 (30-70) DMF-tolueeni-seoksessa.

20

Esimerkki 2 [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikar-:' \: bonyyli)]bis[l,2,8,8a-tetrahydro-7-metyyIi-syklopropa(c)pyrroio[3,2-e]indoI-4(5H)- :' i'; oni]:n (yhdiste 2) valmistus j 25 [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorime-tyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:a (80 mg, • 0,1 mM) käsitellään asetonitriilillä (10 ml), vedellä (3 ml) ja trietyyliamiinilla *·* * (3 ml). Reaktioseosta sekoitetaan typpi-ilmakehässä huoneen lämpötilassa. 40 mi- 30 nuutin kuluttua saostunut tuote otetaan talteen suodattamalla. Suodos laimennetaan «ti v : vedellä ja etyyliasetaatilla ja toinen erä tuotetta otetaan talteen suodattamalla. Kiin- *·.· : toaineet yhdistetään, jolloin saadaan [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[karbo- « nyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[l,2,8,8a-tetrahydro-7-metyylisyklo-. ··. propa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-oni]:a (38 mg, 52 %).

35 NMR: δ l,394(m, 2H); 2,008(s+m, 8H); 3,169(m, 2H); 4,44(m, 2H); 4,522(m, 2H); V i 6,693(s, 2H); 6,881(s, 2H); 7,120(s, 2H); 7,266(d, 2H); 7,402(d, 2H); 7,872(s, 2H); 8,512(bs, 2H); 1 l,536(bs, 2H); 1 l,675(bs, 2H).

103668 15 IR: 3250, 1560, 1375, 1255 cm-1.

UV: λ max = 365 nm (ε =36000); 316 nm (ε =31000).

MS(FAB): Laskettu yhdisteelle ¢43^5^05: 743,2730; todettu 743,2737. Ionit kohdissa m/z 543, 368, 201.

5 DNA:han sitoutuminen: 24 h Δ [Φ] ~ 0 λ 10 TLC: Rf=0,43 (30-70) DMF-tolueeni.

Esimerkki 3 (R*,S*)-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso-15 [l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]etaanidiamiinin (yhdiste 3) valmistus

Osa A

5,5’-[(l,2-diokso-l,2-etaanidiyyli)di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon die-20 tyyliesterin valmistus 5-aminoindoli-2-karboksyylihapon etyyliesteriä (190,4 mg, 0,93 mM) liuotetaan : tislattuun THF:ään (15 ml) typpi-ilmakehässä ja liuos jäähdytetään -78 °C:n läm- : : : potilaan. Liuokseen ruiskutetaan di-isopropyylietyyliamiinia (175 μΐ, 1,00 mM), ·:··: 25 sitten oksalyylikloridia (41 μΐ, 0,47 mM). Reaktioseosta sekoitetaan -78 °C:ssa ·;··.· yhden tunnin ajan. Reaktioseos haihdutetaan vakuumissa puoleen tilavuuteen, ja sitten sitä käsitellään vedellä. Tuote eli 5,5'-[(l,2-diokso-l,2-etaanidiyyli)di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteri saostuu valkoisena kiintoai- • · · neena, joka otetaan talteen sentrifugoimalla ja jota kuivataan 72 tuntia alle 20 torrin ... 30 paineessa (232 mg).

» I > • · · • · · v : NMR: δ 1,348(T, 6H); 4,35(q, 4H); 7,16(s, 2H); 7,45(d, 2H); 7,68(d, 2H); 8,224(s, - ·:··: 2H); 10,732(bs, 2H); ll,92(bs, 2H).

:: IR: 3360, 3320, 1690, 1670, 1525, 1255, 1215 cm'1 cm.

.;. 35 UV: λ max = 330 nm (ε =5000); 299 nm (ε =10 000); '·; ·; MS(E1): m/z 462(M+), 417, 230, 204, 158.

* ·

Osa B

16 103668 5,5'-[(l,2-diokso-l,2-etaanidiyyli)di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon valmistus 5 5,5'-[(l,2-diokso-l,2-etaanidiyyli)di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon die-tyyliesteriä (220 mg, 0,48 mM) suspendoidaan pyridiiniin (9 ml) ja käsitellään IN NaOH-liuoksella (1,5 ml). Maitomaista seosta kuumennetaan 60 °C:ssa typpi-ilma-kehässä. 24 tunnin kuluttua lisätään uudestaan N NaOH-liuosta (1 ml) ja reaktiose-osta kuumennetaan uudestaan 3 tuntia. Sitten reaktioseos neutraloidaan lisäämällä 10 IN HCl-liuosta (2,5 ml) ja väkevöidään puoleen tilavuuteen alle 20 torrin paineessa. Sitten jäännöstä käsitellään IN HCl-liuoksella (50 ml) ja sentrifugoidaan, jolloin saadaan hieman vaaleanpunainen kiinteä jäännös. Se pestään vedellä, sentrifugoidaan ja kuivataan vakuumiuunissa, jolloin jäljelle jää tuote eli 5,5'-[(l,2-diokso-l,2-etaanidiyyli)di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihappo (148 mg).

15 NMR: δ 7,098(s, 2H); 7,42(d, 2H, J=9Hz); 7,66(d, 2H, J=9Hz); 8,20l(s, 2H); 10,709(bs, 2H); 1 l,80(bs, 2H).

IR: 3420, 3310, 1660, 1510, 1220 cm'1.

MS(FAB): m/z 407(M+H), 385, 331, 253, 177.

20 TLC: Rf=0,31 (40-60-2) DMF-tolueeni-etikkahappo-seoksessa.

r Osa C

r '.; 5,5'-[( 1,2-diokso-1,2-etaanidiyyli)di-imino]bis- lH-indoli-2-karboksyylihapon ja (S)- ' , l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3- 25 (2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesterin [(Boc)CPI fenolikloridi] välinen reaktio * « · · · · · ’: ‘: (S)-1 -(kloorimetyyli)- l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ l,2-b:4,3-b']dipyrro- ««· : li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (42,5 mg, 0,13 mM) liuotetaan etyyliasetaattiin (1 ml) typpi-ilmakehässä pimeässä. Reaktio-30 seosta käsiteltiin HCl:llä kyllästetyllä etyyliasetaatilla (3 ml). Reaktioseosta sekoite-taan 1 tunnin ajan ja haihdutetaan vakuumissa. Typpeä johdetaan sisään vakuumia laukaistaessa. Kiinteätä (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-l,2,3,6-tetra- « · · · · hydro-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI-fenolikloridi-hydrokloridi) '··' saatiin haihduttamalla uudestaan 2 kertaan CH2Cl2:sta. Reaktioon lisätään suspen- L 35 sio, joka sisältää 5,5'-[(l,2-diokso-l,2-etaanidiyyli)di-imino]bis-lH-indoli-2-karbok- : syylihappoa (28,4 mg, 0,06 mM) dimetyyliasetamidissa (2 ml). Sitten lisätään kiin teätä EDC:tä (43,4 mg, 0,23 mM). Reaktiota sekoitetaan pimeässä typpi-ilmakehässä huoneen lämpötilassa 100 minuutin ajan. Vettä lisätään tuotteen saostami- τ^ϊ -siua 103668 17 seksi. Kiintoaine eristetään sentrifugoimalla, pestään kahdesti 5 % NaHC03:lla, sitten 0,1 N HCl-liuoksella ja vedellä. Kiintoaine kuivataan vakuumissa. Kiintoaine adsorboidaan DMF:stä silikageeliin, ja käsitellään kromatografisesti silikageeli-kolonnissa (3 g) eluoiden 20-30 % DMF:llä tolueenissa. 1-2 ml:n suuruisia fraktioi-5 ta otetaan talteen. (R*,S*)-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]etaani-diamiinia on läsnä fraktioissa 15-22 (24,6 mg, 45 % saanto).

NMR: (DMF-d7) 6 2,216(s, 6H); 3,47(m, 2H); 3,77(m, 2H); 3,918(m, 2H); 4,51(m, 10 4H); 6,95(s, 2H); 7,03(s, 2H); 7,40(d, 2H); 7,62(d, 2H); 8,22(s, 2H).

UV: λ max =341 nm (ε =38000); 293 nm (ε =52000).

TLC: Rf = 0,58 (30-70) DMF-tolueeni-seoksessa.

Esimerkki 4 15 [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-pyrroli-2,5-diyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:n (yhdiste 4) valmistus (S)-l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyiTo-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (40 mg, 20 0,12 nM) liuotetaan etyyliasetaattiin (1 ml) typpi-ilmakehässä. Reaktiota käsitellään etyyliasetaatilla, joka on juuri kyllästetty HClillä (3 ml) ja tuloksena saatua liuosta . . sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1 tunnin ajan. Liuotin poistetaan vakuumissa ja . punertavana kiinteänä jäännöksenä saatu (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyy- li-l,2,3,6-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI fenolikloridi-. 25 hydrokloridi) haihdutetaan uudestaan 2 kertaan CH2Cl2:n kanssa, huuhdellen typel- lä haihdutusten välillä. Tätä käsitellään pyrroli-2,5-dikarboksyylihapolla (8,9 mg, ] * 0,057 mM) kuivassa dimetyyliasetamidissa (1 ml) ja EDC:ssä (24 mg, 0,125 mM) ja v : tuloksena olevaa liuosta sekoitetaan 25 °C:ssa. 50 minuutin kuluttua uusi EDC- määrä (24 mg, 0,125 mM) lisätään. Jälleen 55 minuutin kuluttua reaktio laimenne-:T: 30 taan vedellä (5 ml) ja natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella (5 ml) ja uutetaan etyyliasetaatilla 4 kertaa. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivataan (Na2SC>4) ja haihdutetaan. Raakajäännös adsorboidaan etyyliasetaatin ja asetonin seoksesta 0,5 g:aan silikageeliä ja käsitellään 6 g silikageeliä sisältävällä kolonnilla 10 %

, I

DMF-tolueeni-seoksessa ja sitten 15 % DMF-tolueeni-seoksessa. 3-4 ml:n suuruisia 35 fraktioita kerätään. [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-pyrroli-2,5-diyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:a löydetään fraktioista 23-37 (25 mg).

18 103668 NMR: δ 2,349(s, 6H); 3,59(M, 2H); 3,90(m, 2H); 4,01(m, 2H); 4,40(m, 2H); 4,55(m, 2H); 6,850(s, 2H); 7,039(m, 2H); 7,60(m, 2H); 9,77(s, 2H); 10,71(bs, 2H); 1 l,36(bs, 1H).

UV: λ max = 356 nm (ε =16000); 290 nm (ε =21000).

5 TLC: Rf = 0,47 (20-80) DMF-tolueeni-seoksessa.

Esimerkki 5 [S-(R*,R*)]-6,6'-(2,5-furandiyyIidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetra-hydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3'b]dipyrrol-4-oli]:n (yhdiste 5) valmistus 10 (S)- l-(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrro-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (40,6 mg, 0,12 mM) liuotetaan etyyliasetaattiin (1 ml), laitetaan typpi-ilmakehään ja käsitellään HCl:llä kyllästetyllä etyyliasetaatilla (3 ml). 50 minuutin kuluttua reaktio 15 haihdutetaan vakuumissa, palaten ilmakehän paineeseen typpi-ilmakehässä. Kiinteätä (S)- l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-1,2,3,6-tetrahydro-bentsof l,2-b:4,3-b'Jdipyrrolihydrokloridia (CPI fenolikloridi-hydrokloridi) saadaan haihduttamalla uudestaan kahteen kertaan CH2Cl2:sta. Kiintoainetta käsitellään liuoksella, joka sisältää furaani-2,5-dikarboksyylihappoa (9,7 mg, 0,062 mM) kuivassa dimetyyliase-20 tamidissa (1 ml). Kiinteätä EDC.tä (43,1 mg, 0,22 mM) lisätään kahtena yhtä suurena annoksena, 45 minuutin välein. Reaktio pysäytetään 170 minuuttia toisen lisäyk-| . sen jälkeen lisäämällä etyyliasetaattia ja vettä. Vesi uutetaan uudestaan etyyliase- , ' taatilla. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestään 0,5 N HCl-liuoksella, 1 % NaH- ; * . Cecilia ja vedellä. Kuivaus (Na2SC>4) ja väkevöinti tuottaa keltaista kiintoainetta 25 (55,2 mg). Kiintoaine adsorboidaan DMF-asetoni-seoksesta silikageeliin (0,7 g). Se * * laitetaan silikageelikolonniin (7 g), jota eluoidaan 10-15 % DMF:llä tolueenissa.

2-3 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen. [S-(R*,R*)]-6,6'-(2,5-furandiyylidikar- • · · : bonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3'b]dipyr- rol-4-oli]:a saadaan eristetyksi kirkkaankeltaisena kiintoaineena väkevöimällä frak- :T: 30 tiot 23-31 (22,3 mg, saanto 63 %).

« ♦ · • ♦ · * * * ’· . NMR: δ 2,344(s, 6H); 3,63(m, 2H); 3,89(m, 2H); 4,029(m, 2H); 4,5l(m, 2H); 4,60(m, 2H); 7,048(s, 2H); 7,37(s, 2H); 7,64(m, 2H); 9,82(s, 2H); 10,75(bs, 2H).

UV: λ max = 360 nm (ε =20 000); 295 nm (ε =24000).

35 TLC: Rf= 0,47 (20-80) DMF-tolueeni-seoksessa.

• · · t » • ·

jljJ

103668 19

Esimerkki 6 [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[ l-(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent-so[l,2-b:4,3-b']dipynOl-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-2,5-furaanidikar-boksamidin (yhdiste 6) valmistus 5

Osa A

5,5'-[2,5-furandiyylibis(karbonyyli-imino)]-bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon die-tyyliesteri 10 Furaani-2,5-dikarboksyylihappoa [50 mg, 0,32 mM, A. Sohst ja B. Tollens, Justus Liebigs Ann. Chem., 245, 1 (1888)] ja 5-aminoindoli-2-karboksyylihapon etyylies-teriä (130 mg, 0,64 mM) liuotetaan dimetyyliasetamidiin (2 ml) ja liuosta käsitellään EDC:llä (132 mg, 0,69 mM). 20 tunnin kuluttua reaktio laimennetaan vedellä (20 ml) ja uutetaan kahdesti etyyliasetaatilla. Yhdistetyt etyyliasetaattiliuokset pes-15 tään N HCl-liuoksella ja N NaOH-liuoksella ja kuivataan (MgS04). Etyyliasetaatin väkevöinti vakuumissa tuottaa jäännöksen (154 mg). Se käsitellään kromatografi-sesti 10 g:lla silikageeliä, jota eluoidaan 50-60 % etyyliasetaatilla heksaanissa, ja sitten 50 % etyyliasetaatilla tolueenissa. 4 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen. Kun fraktiot 22-50 haihdutetaan, saadaan 5,5'-[2,5-furandiyylibis(karbonyyli-20 imino)]-bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (107 mg).

. .·. NMR: δ l,413(t, 6H); 4,38(g, 4H); 7,137(s, 2H); 7,51(d, 2H); 7,58(D, 2H); 8,021(s, ; 2H); 8,097(bs, 2H); 10,146(bs, 2H); 1 l,742(bs, 2H).

' . TLC: Rf = 0,38 (60-40) etyyliasetaatti-heksaani-seoksessa.

' ; 25

Osa B

’:: 5,5'-[2,5-furandiyylibis(karbonyyli-imino)]-bis- lH-indoli-2-karboksyylihapon vai- • · · · mistus 30 5,5,-[2,5-furandiyylibis(karbonyyli-imino)]-bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon die-

tyyliesteriä (60 mg, 0,11 mM) suspendoidaan metanoliin (0,4 ml) ja käsitellään N

« • . NaOH:lla (0,25 ml). 5 vuorokauden kuluttua reaktio haihdutetaan vakuumissa ja jäännös liuotetaan veteen ja liuos tehdään happamaksi pH-arvoon 2 N HCl-liuok-« * _ sella. Tämä liuos pakastekuivataan, jolloin saadaan 5,5'-[2,5-furandiyylibis(karbo- 1 nyyli-imino)]-bis-lH-indoli-2-karboksyylihappoa (22 mg).

• f • · *

Osa C

20 103668 5,5'-[2,5-furandiyylibis(karbonyyli-imino)]-bis- lH-indoli-2-karboksyylihapon ja (Boc) CPI-fenolikloridin välinen reaktio 5 (S)-l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrro-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (33 mg, 0,098 mM) liuotetaan etyyliasetaattiin (1 ml) ja tuloksena saatua liuosta sekoitetaan Ar-ilmakehässä ja sitä käsitellään etyyliasetaattiin juuri valmistetulla kylläisellä HCl-liuoksella (3 ml). 45 minuutin kuluttua seos haihdutetaan vakuumissa ja tulok-10 sena olevaa (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-l,2,3,6-tetrahydro-bentso-[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI fenolikloridi-hydrokloridi) käsitellään kahdesti yhdisteellä CH2CI2 ja haihdutetaan uudestaan. Sitä käsitellään dimetyyli-asetamidilla (1 ml), joka sisältää 5,5'-[2,5-furandiyylibis(karbonyyli-imino)]-bis- 1FI-indoli-2-karboksyylihappoa (22 mg, 0,047 mM). Tuloksena olevaa liuosta käsitel-15 lään kahdessa erässä noin 50 minuutin välein EDC:llä (40 mg, 0,21 mM). 50 minuutin jälkeen reaktio laimennetaan vedellä ja seos uutetaan THF-etyyliasetaatti-seoksella. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivataan yhdisteellä MgS04 ja väkevöi-dään vakuumissa, jolloin saadaan kiintoainetta (15 mg). Tätä materiaalia käsitellään kromatografisesti silikageelillä (5 g), jota eluoidaan 20-30% DMF:llä tolueenissa. 20 3 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen. Kun fraktiot 16-28 haihdutetaan, saadaan [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent-so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyIi]-lH-indoI-5-yyli]-2,5-furaanidikar-boksamidia (5 mg).

Il»· f'<f, 25 NMR: δ 2,363(s, 6H); 3,60(m, 2H); 3,90(m, 2H); 4,03(m, 2H); 4,56(m, 2H); ""ί 4,68(m, 2H); 6,616(s, 1H); 7,05(s, 2H); 7,16(m, 2H); 7,41(s, 2H); 7,53(s, 4H); 7,64(m, 1H); 8,16(s, 2H); 9,79(s, 2H); 10,29(bs, 2H); 10,73(bs, 2H); 1 l,73(bs, 2H). UV: λ max (MeOH) = 350 nm (ε = 41000); 283 nm (ε = 50500).

MS(FAB): m/z 911 (M+H), 909 (M+H), 412, 395, 335, 300, 253, 210.

: 30 TLC: Rf= 0,217 (20-80) DMF-tolueeni-seoksessa.

ί

I I I

Esimerkki 7 [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso-: ’··,·* [1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-pyiToli-2,5-di- : : 35 karboksamidin (yhdiste 7) valmistus

Osa A

21 103668

Pyrroli-2,5-dikarboksyylihapon kytkeminen 5-amino-indoli-2-karboksyyIihapon etyyliesteriin 5 Pyrroli-2,5-dikarboksyylihappoa [50 mg, 0,32 mM, Kuhn, R. ja Dury, K., Justus Liebigs Ann. Chern., 571, 44 (1951)] ja 5-amino-indoli-2-karboksyylihapon etyy-liesteriä (130 mg, 0,64 mM) liuotetaan dimetyyliasetamidiin (2 ml) ja liuosta käsitellään EDC:llä (129 mg, 0,67 mM). 22 tunnin kuluttua seosta käsitellään jäävedellä (20 ml) ja saostunut kiintoaine suodatetaan. Tätä materiaalia käsitellään kromato-10 grafisesti silikageelillä (10 g), jota eluoidaan 10-15 % DMF:llä tolueenissa. 4 ml:n suuruisia fraktioita kerätään. Kun fraktiot 22-42 haihdutetaan, saadaan tuotetta (72 mg) sisältävä jäännös. Tätä jäännöstä hierotaan etyyliasetaatin kanssa ja kuivataan, jolloin saadaan 5,5'-[lH-pyrroli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)-bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (42 mg).

15 NMR: δ l,413(t, 6H); 4,38(q, 4H); 7,137(s, 2H); 7,51(d, 2H); 7,58(d, 2H); 8,021(s, 2H); 8,097(bs, 2H); 10,146(bs, 2H); ll,742(bs, 2H).

TLC: Rf = 0,38 (60-40) etyyliasetaatti-heksaani-seoksessa.

20 Osa B

5,5'-[ 1 H-pyrroli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)-bis-1 H-indoli-2-karboksyylihapon ; '; valmistus : 5,5'-[ lH-pyrroli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)-bis- lH-indoli-2-karboksyylihapon . 25 dietyyliesteriä (42 mg, 0,08 mM) liuotetaan pyridiiniin (1 ml) ja tätä liuosta käsitel lään N NaOH-liuoksella (0,2 ml). 24 tunnin kuluttua reaktiota käsitellään jälleen N NaOH-liuoksella (0,4 ml). Edelleen 96 tunnin kuluttua reaktio haihdutetaan va-* kuumissa ja jäännös liuotetaan veteen (5 ml). Vesiliuos tehdään happamaksi pH- arvoon 2 N HCl-liuoksella ja pakastekuivataan sen jälkeen, jolloin saadaan 5,5'-[lH-

• «I

V : 30 pyrroli-2,5-diyyIibis(karbonyyli-imino)-bis-lH-indoli-2-karboksyylihappoa.

' TLC: Rf = 0,18 (2-15-85) etikkahappo-DMF-tolueeni-seoksessa.

Osa C

« « 5,5'-[lH-pyrroli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)-bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon 35 kytkeminen (S)-l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[l,2-b> :/ i 4,3-b']dipyrroli-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriin [(Boc)CPI fenoliklo- ridi] 103668 22 (S)-1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ l,2-b:4,3-b']dipyrro-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (40 mg, 0,12 nM) liuotetaan etyyliasetaattiin (1 ml) typpi-ilmakehässä. Reaktiota käsitellään etyyliasetaatilla, joka on juuri kyllästetty HCkllä (3 ml), ja tuloksena saatua seosta 5 sekoitetaan huoneen lämpötilassa 45 minuuttia. Liuotin poistetaan vakuumissa ja jäännös palautetaan ilmakehän paineeseen typellä. Jäännös haihdutetaan kahdesti uudestaan CH2Cl2.Ha, jolloin saadaan (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli- l,2,3,6-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI fenolikloridi-hydrokloridi). Tämä materiaali liuotetaan dimetyyliasetamidiin (1 ml) ja liuosta 10 käsitellään 5,5’-[lH-pyrroli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)-bis-lH-indoli-2-karbok-syylihapolla (28 mg) ja EDC:llä (25 mg, 0,13 mM). 50 minuutin kuluttua reaktiota käsitellään vielä uudestaan EDC:llä (25 mg). Edelleen 50 minuutin kuluttua reaktio laimennetaan vedellä ja saostuneet kiintoaineet ositetaan THF:n ja etyyliasetaatin välille. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivataan (MgS(>4) ja väkevöidään vakuu-15 missä, jolloin saadaan kiintoainetta (80 mg). Tätä materiaalia käsitellään kromato-grafisesti silikageelillä (10 mg), jota eluoidaan 20 % DMFrllä tolueenissa. 3 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen. Kun fraktiot 26-45 haihdutetaan, saadaan [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2[[ 1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso-[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-pynOli-2,5-di-20 karboksamidia (11 mg).

NMR: δ 2,363(s, 6H); 3,60(m, 2H); 3,91(m, 2H); 4,032(m, 2H); 4,54(m, 2H); ; , 4,68(m, 2H); 6,625(s, 1H); 7,05(s, 2H); 7,09(s, 2H); 7,13(s, 2H); 7,49(m, 4H); I : 7,64(m, 1H); 8,18(s, 2H); 9,78(s, 2H); 10,09(bs, 2H); 10,72(bs, 2H); 1 l,67(bs, 2H); : 25 12,22(bs, 1H).

; ^ . UV: λ max (metanoli) = 344 nm (ε =58600); 296 nm (ε =68000).

j ]..* MS(FAB): Laskettu yhdisteelle C48H39CI2N9O6: 908,2478; ** * Todettu: 908,2496. Ionit arvoilla m/z 543, 368, 201.

TLC: Rf = 0,21 (20-80) DMF-tolueeni-seoksessa.

• · · v : 30 '·/'· Esimerkki 8 [R-(R*,S*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent- * · f.·.. so[l,2-b:4,3-b']dipynOl-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indoli-5-yyli]-propaanidiamidin (yhdiste 8) valmistus 35

Osa A

23 103668 5-aminoindoli-2-karboksyylihappo-etyyliesterin reaktio malonyylidikloridin kanssa

Liuos, joka sisältää 5-aminoindoli-2-karboksyylihapon etyyliesteriä (196 mg, 5 0,96 mM) kuivassa tislatussa THF:ssä (15 ml), jäähdytetään jäähauteessa, typpi- ilmakehässä. N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (350 μΐ, 2,01 mM) ja malonyyli-dikloridia (80 μΐ, 0,82 mM) lisätään ruiskulla. Tunnin kuluttua liuotin poistetaan osittain ja 5,5'-[(l,3-diokso-l,3-propaanidiyyli)-di-imino]bis-lH-indoli-2-karbok-syylihapon dietyyliesteri saostetaan vedellä. Seos sentrifugoidaan ja nestekerros 10 hylätään. Kiintoaine kuivataan vakuumissa. Jäännös käsitellään kromatografisesti silikageelillä (2 g), jota eluoidaan 25 % asetonilla tolueenissa, 40 % asetonilla tolu-eenissa, 60 % asetonilla tolueenissa, 80 % asetonilla tolueenissa ja asetonilla. 15 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen. Tuote eli 5,5’-[(l,3-diokso-l,3-pro-paanidiyyli)-di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä löydetään 15 fraktioista 9-13 (77 mg).

NMR: (asetoni-d6) δ l,37(t, 6H); 3,571(s, 2H); 4,36(q, 4H); 7,16(s, 2H); 7,48(m, 4H); 8,17(s, 2H); 9,71(bs, 2H); 10,92(bs, 2H).

IR: 3300, 1650, 1200 crn’l.

20 UV: λ max = 340 nm (ε =5400); 297 nm (ε = 28000).

MS(E1): m/z 476 (M+), 340, 272, 226, 204, 158.

: TLC: Rf = 0,21 (40-60) asetoni-heksaani-seoksessa.

Osa B

,,.,; 25 5,5'-[(l,3-diokso-l,3-propaanidiyyli)-di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon • . valmistus • · • · · » · » ’·* ’ Osassa A saatu diesteri (0,16 mM) liuotetaan pyridiiniin (3 ml) ja 1 N natriumhyd- roksidiin (0,53 ml). Reaktioseosta sekoitetaan typpi-ilmakehässä 50 °C:n lämpöti- • « · 30 lassa noin 2 tuntia ja sitten huoneen lämpötilassa 4 tunnin ajan. Reaktioseosta käsi-L: : tellään 1 N HCl-liuoksella ja se haihdutetaan lähes kuiviin. Tuote saostetaan vedellä ja eristetään sentrifugoimalla ja pestään vedellä, jolloin saadaan 5,5'-[(l,3-diokso- # ... _ 1,3-propaanidiyyli)-di-imino]bis- lH-indoli-2-karboksyylihappoa.

LJ 35 NMR: δ 3,47(s, 2H); 7,04(s, 2H); 7,36(m, 4H); 8,03(s, 2H); 10,09(bs, 2H); :/ i ll,68(bs,2H).

UV: λ max = 294 nm (ε =13000).

Osa C

24 103668 5,5,-[(l,3-diokso-l,3-propaanidiyyli)-di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon kytkeminen (S)- l-(kloorimetyyli)- l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ 1,2- b:4,3-b']dipyrroli-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriin [(Boc)CPI feno-5 likloridi] (S)-l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[lJ2-b:4,3-b,]dipyrro-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (37,8 mg, 0,11 mM) liuotetaan etyyliasetaattiin (0,5 ml) typpi-ilmakehässä. Liuosta käsitellään 10 HClillä kyllästetyllä etyyliasetaatilla (3 ml) yhden tunnin ajan. Reaktio haihdutetaan, laukaisten vakuumi typellä. Tuloksena saatu (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi- 8-metyyli-l,2,3,6-tetrahydro-bentso[l,2-b:4,3-b']dipynOli-hydrokloridi (CPI fenoli-kloridi-hydrokloridi) haihdutetaan 2x CH2Cl2illa. Tätä materiaalia käsitellään 5,5'-[(l,3-diokso-l,3-propaanidiyyli)-di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapolla (24,3 15 mg, 0,058 mM) kuivassa dimetyyliasetamidissa (1 ml). EDC (49 mg, 0,156 mM) punnitaan ja noin puolet siitä lisätään reaktioon. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 45 minuuttia. Sitten lisätään loput EDC.stä ja sekoittamista jatketaan 40 minuuttia. Reaktio laimennetaan etyyliasetaatilla ja vedellä. Liukenemattomat materiaalit poistetaan suodattamalla ja otetaan talteen. Suodos erottuu kerroksiksi ja . 20 vesikerros uutetaan uudestaan etyyliasetaatilla. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kui- I vataan (Na2SC>4) ja väkevöidään vakuumissa. Tämä jäännös yhdistetään edellä suo- ! y dattamalla erotettuun kiintoaineeseen ja absorboidaan silikageeliin (0,4 g) ja laite- : : taan silikageelikolonnin (5 g) huippuun. Kolonnia eluoidaan 22-28 % DMFillä tolu- : eenissa, keräten 2 ml:n suuruisia fraktioita. Tuote eli 5,5'-[(l,3-diokso-l,3-propaani- 25 diyyli)-di-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihappo eristetään fraktioista 14-28 : (36 mg).

• · • · · j : NMR: δ 2,354(s, 6H); 3,51(m, 2H); 3,60(m, 2H); 3,91(m, 2H); 4,03(m, 2H); 4,54(m, 2H); 4,67(m, 2H); 7,05(s, 2H); 7,10(s, 2H); 7,38(d, 2H); 7,46(d, 2H); :7: 30 7,64(m, 2H); 8,10(s, 2H); 9,78(s, 2H); 10,13(bs, 2H); 10,72(bs, 2H); ll,64(bs, 2H).

C:': UV: λ max = 336 nm (ε = 35000); 294 nm (ε =44000).

TLC: Rf = 0,46 (30-70) DMF-tolueeni-seoksessa.

I « f t 4 I « · * 103668 25

Esimerkki 9 [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indol-5,2-diyylikarbonyyli)]bis[8-(kloori-metyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-1 -metyyli-bentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli-diasetaa-ti]:n (yhdiste 9) valmistus 5 [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikar-bonyyli)]bis[l,2,8,8a-tetrahydro-7-metyyli-syklopropa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-oni]:a (5 mg, 0,007 mM) liuotetaan DMF:ään (200 μΐ) ja asetoniin (0,5 ml) ja tätä liuosta käsitellään pyridiini-hydrokloridilla (8,3 mg, 0,07 mM). Reaktiota sekoite-10 taan huoneen lämpötilassa pimeässä 110 minuuttia ja sitten se väkevöidään pieneksi tilavuudeksi ja käsitellään vedellä. Seos sentrifugoidaan ja nesteet poistetaan, jolloin saadaan [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-kloorimetyyli)3,6,7,8-tetrahydro-1 -metyyli-bentso[ 1,2-b :4,3 -b']dipyrrol-4-oli]: a kiintoaineena. Tämä kiintoaine liuotetaan pyridiiniin (100 μΐ) ja sitä käsitellään 15 asetanhydridillä (6 μΐ, 0,06 mM). Reaktiota sekoitetaan pimeässä huoneen lämpötilassa 85 minuuttia, sammutetaan vedellä ja väkevöidään kuiviin. Jäännöstä käsitellään vedellä ja se sentrifugoidaan. Neste poistetaan ja kiintoaine kuivataan vakuu-missa. Tämä kiintoaine adsorboidaan DMFistä silikageeliin (0,07 g). Silikageeli ja siihen absorboitunut yhdiste laitetaan silikageelikolonniin (1 g), jota eluoidaan 20 10-40 % DMF:llä tolueenissa. 0,5 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen.

[S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indol-5,2-diyylikarbonyyli)]bis[8-(kloori-metyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-1-metyylibentso[ 1,2-b .4,3-b']dipyrrol-4-oli-diasetaatti] . ·: eluoituu fraktioissa 38-47 (3,4 mg).

25 NMR (DMSO-d6, TMS): δ 2,37 (s, 6H); 2,40(s, 6H); 3,72(m, 2H); 3,99(m, 2H); ; i 4,19(m, 2H); 4,61 (m, 2H); 4,74(m, 2H); 7,09(s, 2H); 7,24(m, 4H); 7,43(m, 2H); ’;*/ 7,83(bs, 2H); 7,87(m, 2H); 8,50(bs, 2H); 1 l,12(bs, 2H); 1 l,56(bs, 2H).

; UV(DMA+MeOH): λ max = 325 nm (ε - 43800); 294 nm (ε = 43800).

v : 30 Esimerkki 10 :T: [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-indoli-2,5-diyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8- tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:n (yhdiste 10) valmistus : ’ (S)-1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrro- 35 li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (49 mg, 0,146 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä etyyliasetaatissa (0,6 ml). Siihen lisätään kaasumaisella HCl:llä kyllästettyä etyyliasetaattia (3 ml) ja reaktiota seurataan TLC-määrityksin ja se on edennyt loppuun noin 45 minuutissa.

103668 26

Reaktio haihdutetaan, laukaisten vakuumi typellä. Tuloksena saatu (S)-l-(kloorime-tyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-l,2,3,6-tetrahydro-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydro-kloridi (CPI fenolikloridi-hydrokloridi) haihdutetaan 2x CH2Cl2:lla. Jäännöksenä saatu CPI-fenolikloridi-hydrokloridisuola liuotetaan kuivaan dimetyyliasetamidiin 5 (1 ml) ja sitä sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä. Siihen lisätään indoli-2,5-dikarboksyylihappoa (15 mg, 0,073 mM), ja sitten EDC:tä (40 mg, 0,21 mM). Reaktioseokseen lisätään 45 minuutin kuluttua edelleen EDC:tä (23 mg, 0,12 mM) ja reaktioseoksen annetaan reagoida 1 tunnin ajan. Reaktioseos siirretään sentrifugiputkeen, huuhtoen reaktiota DMF:llä (0,5 ml) ja se laimennetaan vedellä 10 tuotteen saostamiseksi, joka tuote sentrifugoidaan ja dekantoidaan. Raakatuote siirretään pyöreäpohjaiseen pulloon, jossa on asetonia, ja tuloksena saatava liuos haihdutetaan vakuumissa. Raakatuote levitetään silikageelin (0,5 g) päälle ja se käsitellään kromatografisesti silikageelikolonnilla (6 g), joka on tehty liuottimeen, joka sisältää 20 % DMF:ää tolueenissa, ja kolonnia eluoidaan tällä samalla liuottimella 15 keräten samalla 1 ml:n suuruisia fraktioita. [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-indoli-2,5-diyyli-dikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli] saadaan fraktioista 22-47 haihduttamalla ne kuiviin (31 mg).

, NMR (d6-DMSO, TMS): δ 2,33(s, 3H); 2,36(s, 3H); 3,54-3,68(t, 2H); 3,79-3,96(m, I 20 3H); 3,98-4,1 l(t, 2H); 4,23-4,44(bs, 1H); 4,50-4,60(d, 1H); 4,62-4,75(t, 1H); 7,02(s, 1H); 7,05(s, 1H); 7,22(s, 1H); 7,44-7,53(d, 1H); 7,53-7,62(d, 1H); 7,62-j 7,73(bs, 1H); 7,95(s, 1H); 7,98(s, 1H); 9,60-9,75(bs, 1H); 9,80(s, 1H); 10,66(s, 1H); i 10,73(s, 1H); ll,93(s, 1H).

.,..: 25 Esimerkki 11 t < < e. [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[ l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent- so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-indoli-2,5- • · · '·* ’ dikarboksamidin (yhdiste 11) valmistus

; 30 Osa A

* * * V : 5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino]bis-lH-indoli-2-karboksyylihappo- dietyyliesterin valmistus ‘ ‘' Indoli-2,5-dikarboksyylihappoa (200 mg, 0,49 mM) sekoitetaan huoneen lämpötila 35 lassa typpi-ilmakehässä kuivassa DMFissä (4 ml). Tähän lisätään 5-amino-indoli-2- : karboksyylihapon etyyliesteriä (400 mg, 1,96 mM) ja EDC:tä (200 mg, 1,05 mM).

Kolmen vuorokauden kuluttua reaktioseos siirretään sentrifugiputkeen ja laimennetaan vedellä. Saostunut kiintoaine sentrifugoidaan ja supematanttineste dekantoi- 103668 27 daan. Jäännös pestään asetonilla, jolloin saadaan 5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis-(karbonyyli-imino)]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (78 mg). Lisää 5,5'-[ 1 H-indoli-2,5 -diyy libis(karbonyy li-imino)]bis-1 H-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä saadaan edellisistä asetonipesunesteistä väkevöimällä ne kuiviin ja 5 käsittelemällä kromatografisesti silikageelillä (40 g), jota eluoidaan 10-20 % DMF:llä tolueenissa. 15 ml:n suuruisia fraktioita kerätään ja 5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (83 mg) saadaan haihduttamalla fraktiot 35-40 kuiviin.

10 Osa B

5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon valmistus 5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)]:bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon 15 dietyyliesteriä (161 mg, 0,28 mM) liuotetaan sekoittaen typpi-ilmakehässä huoneen lämpötilassa pyridiiniin (5 ml) ja absoluuttiseen etanoliin (5 ml). Tuloksena saatavaan liuokseen lisätään N NaOH-liuosta (1 ml) ja sen annetaan seisoa 5 tuntia. Sitten liuotin poistetaan suureksi osaksi haihduttamalla vakuumissa, vettä lisätään ja reaktioseos pakastekuivataan. Tuloksena saatava raakatuote levitetään Celite-tuot-20 teen (1,5 g) päälle ja laitetaan C-18-käänteisfaasilla täytetyn silikageelikolonnin (15 g) huippuun. Kolonnia eluoidaan seuraavilla liuottimilla: 50 % DMF vedessä (200 ml); 60 % DMF vedessä (100 ml); 70 % DMF - 30 % vettä (100 ml); 80 % . ; DMF - 20 % vettä (300 ml). 5 ml:n suuruisia fraktioita kerätään ja niitä seurataan : TLC-analyysillä. 5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)]bis-lH-indoli-2- ,,,.: 25 karboksyylihappoa (46 mg) esiintyy fraktioissa 7-21.

• ·

Osa C

• · I

5,5'-[lH-indoli-2,5-diyylibis(karbonyyli-imino)]bis-lH-indoli-2-karboksyylihapon ja (Boc) CPI-fenolikloridin välinen reaktio • t · v : 30 • · · V ; (S)-l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrro- li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (59 mg, ,, 0,176 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä pimeässä 45 mi- nuutin ajan etyyliasetaatissa (1 ml) sekä kaasumaisella HClillä kyllästetyssä etyyli-35 asetaatissa (4 ml). TLC-määritys 30 minuutin jälkeen osoittaa reaktion päättyneen. Reaktioseos haihdutetaan vakuumissa ja se haihdutetaan 2x CH2Cl2:lla, laukaisten vakuumi, joka kerran typellä, jolloin saadaan (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-1,2,3,6-tetrahydro-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI feno- 28 103668 liki ori di -hy drokloridi). Tämä CPI-fenolikloridi-hydrokloridisuola liuotetaan sekoittaen typpi-ilmakehässä pimeässä kuivaan DMA:han (1 ml), Liuosta käsitellään 5,5'-[ 1 H-indoli-2,5-diyy libis(karbonyy li-imino)]bis-1 H-indoli-2-karboksyylihapolla (46 mg, 0,088 mM) ja EDC:llä (50 mg, 0,26 mM). 30 minuutin kuluttua lisätään li-5 sää EDC:tä (26 mg, 0,13 mM). Reaktion annetaan seisoa vielä 1 tunnin ajan, minkä jälkeen se siirretään sentrifugiputkeen ja pestään DMF:llä (1 ml). Vettä lisätään tuotteen saostamiseksi, joka tuote otetaan sitten talteen sentrifugoimalla. Kiintoaine huuhdotaan RB-pulloon asetonilla ja haihdutetaan vakuumissa. Jäännös levitetään silikageelin (1 g) päälle ja käsitellään kromatografisesti silikageelikolonnilla (9 g). 10 Kolonnia eluoidaan 25 % DMF:llä tolueenissa, sitten 30 % ja 40 % DMF.llä toluee-nissa. 2 ml:n suuruisia fraktioita kerätään ja ne analysoidaan TLC-menetelmällä. [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso-[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-indoli-2,5-dikar-boksamidia on läsnä fraktioissa 31-80. Epäpuhdasta tuotetta esiintyy fraktioissa 15 8-30. Ne käsitellään uudestaan kromatografisesti silikageelikolonnilla (4,5 g), jota eluoidaan 20 % DMF.llä tolueenissa - 30 % DMF:llä tolueenissa. 1 ml:n suuruisia fraktioita kerättiin. [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hyd-roksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yy-li]-lH-indoli-2,5-dikarboksamidia löydetään fraktioista 2-75. Kun näistä kahdesta 20 kromatografisesta käsittelystä saadut materiaalit yhdistetään, saadaan [S-(R*,R*)]-N,N’-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-indoli-2,5-dikarboksamidia : (47 mg), i . i j 25 NMR (d6-DMSO, TMS): δ 2,37(s, 6H); 3,55-3,68(t, 2H); 3,87-3,97(d, 2H); 3,97- ! 4,10(t, 2H); 4,51-4,6l(d, 2H); 4,61-4,77(t, 2H); 7,07(s, 2H); 7,14(s, 1H); 7,17(s, : 1H); 7,45-7,75(m, 8H); 7,96(s, 1H); 8,23(s, 2H); 8,26(s, 1H); 8,46(s, 1H); 9,82(s, I ’ 2H); 10,18(s, 1H); 10,33(s, 1H); 10,75(s, 2H); ll,66(s, 1H); ll,71(s, 1H); 12,09(s, I ..... 1H)· ί *.* ‘ 30 UV(DMA+MeOH): λ max =328 nm (ε = 33560); 281 nm (ε = 38350) • · · • · · » · · ...·: Esimerkki 12 • · [S-(R*,R*)]-2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-‘ b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-N-[3-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5- I; :···: 35 hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-6- :‘ i yyli]- lH-indoli-5-karboksamidin (yhdiste 12) valmistus

Osa A

29 103668 5-[[(2-karboksi-lH-indol-5-yyli)ammo]karbonyyli]-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesterin valmistus 5 Indoli-2,5-dikarboksyylihappoa (98 mg, 0,42 mmol) ja 5-amino-indoli-2-karboksyy-lihappo-etyyliesteriä (86 mg, 0,42 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä kuivassa DMF:ssä (2 ml). EDC.tä (90 mg, 0,47 mM) lisätään ja seoksen annetaan reagoida 25 tunnin ajan. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja sentrifu-goidaan ja supematantti dekantoidaan. Jäännöksenä saatu kiintoaine liuotetaan ase-10 toniin ja haihdutetaan ja käsitellään sitten kromatografisesti silikageelillä (20 g) ja eluoidaan 50 % etyyliasetaatilla heksaanissa, sitten 30 % asetonilla heksaanissa. 15 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen ja ne analysoidaan TLC-menetelmällä. 5-f[(2-karboksi-1 H-indol-5-yyli)amino]karbonyyli]-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä on läsnä fraktioissa 8-86 (137 mg, saanto 78 %).

15

Osa B

5-[[(2-karboksi-lH-indol-5-yyli)amino]karbonyyli]-lH-indoli-2-karboksyylihapon valmistus 20 5-[[(2-karboksi-lH-indol-5-yyli)amino]karbonyyli]-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (137 mg, 0,33 mM) liuotetaan huoneen lämpötilassa sekoittaen typpi-ilmakehässä pyridiiniin (3 ml) ja absoluuttiseen etanoliin (3 ml). Siihen lisätään IN :': NaOH-liuosta (1 ml) ja reaktioseoksen annetaan reagoida 29 tunnin ajan, jona aika- - na muodostuu sakkaa. IN HCl:a (1 ml) lisätään ja reaktioseos väkevöidään pyörö- .. .: 25 haihduttimessa. Jäännökseen lisätään vettä, jolloin muodostuu samea liuos. Tämä liuos pakastekuivataan. Jäännös levitetään Celite-tuotteen (1 g) päälle, ja laitetaan • · ... sitten C-18-käänteisfaasilla (10 g) täytetyn silikageelikolonnin huippuun. Kolonnia ’ eluoidaan 40 % DMF.llä vedessä - 80 % DMF:llä vedessä nostaen DMF-pitoisuutta kulloinkin 10 % (kulloinkin 100 ml). 5 ml:n suuruisia fraktioita kerätään. 5-[[(2- • · · '·* * 30 karboksi-lH-indol-5-yyli)amino]karbonyyli]-lH-indoli-2-karboksyylihappoa löytyy * fraktioista 30-70 (40 mg).

• ·

Osa C

[ ' 5-[[(2-karboksi- lH-indol-5-yyli)amino]karbonyyli]-1 H-indoli-2-karboksyylihapon * ..' 35 reaktio (Boc)CPI-fenolikloridin kanssa • · • · * · · « · (S)-1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihy dro-5 -hydroksi-8-metyy li-bentso[ 1,2-b: 4,3 -b']dipyrro-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (74 mg, 103668 30 0,22 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä pimeässä 45 minuutin ajan etyyliasetaatissa (1 ml) sekä kaasumaisella HCkllä (5 ml) kyllästetyssä etyyliasetaatissa. Reaktioseos haihdutettiin vakuumissa ja haihdutettiin uudestaan 2x yhdisteellä CH2CI2, johtaen sisään joka kerran typpeä, jolloin saatiin (S)-I-5 (kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli- l,2,3,6-tetrahydro-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyr-rolihydrokloridia (CPI fenolikloridi-hydrokloridi). CPI-fenolikloridihydrokloridisuo-la liuotetaan kuivaan DMA:han (1 ml) sekoittaen typpi-ilmakehässä pimeässä. Reaktioon lisätään 5-[[(2-karboksi-lH-indol-5-yyli)amino]karbonyyli]-lH-indoli-2-karboksyylihappoa (40 mg, 0,11 mM) ja EDC:tä (75 mg, 0,39 mM) ja reaktioseok-10 sen annetaan reagoida 30 minuuttia, minkä jälkeen lisätään vielä uutta EDC:tä (20 mg, 0,10 mM) ja annetaan reagoida vielä tunnin ajan. Liuos siirretään sentrifu-giputkeen ja pestään DMF:llä (1 ml), laimennetaan vedellä tuotteen saostamiseksi ja sentrifugoidaan. Supematantti dekantoidaan. Kiintoaine huuhdotaan RB-pulloon asetonilla ja haihdutetaan uudestaan vakuumissa.

15

Raakatuote levitetään silikageelin (1 g) päälle ja laitetaan silikageelillä (9 g) täytetyn kolonnin huippuun, jossa kolonnissa liuotimena on käytetty seosta 20 % DMF -80 % tolueenia. Kolonnia eluoidaan 20 % DMF:llä tolueenissa, sitten 30 % DMF:llä tolueenissa. 2 ml:n suuruisia fraktioita kerätään. Fraktiot 21-78 otetaan talteen ja 20 haihdutetaan ja jäännös käsitellään kromatografisesti silikageelillä (5 g) täytetyllä i kolonnilla, jota eluoidaan 20 % DMF:llä tolueenissa. 1 ml:n suuruisia fraktioita j kerätään. [S(R*,R*)]-2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent- : so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-N-[3-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihyd- I . ro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-in- 25 dol-6-yyli]-lH-indoli-5-karboksamidia on läsnä fraktioissa 20-45 (49 mg, saanto r 56%).

9 9 99· • · · • * · NMR (d6-DMSO, TMS): δ 2,37 (s, 6H); 3,54-3,68(t, 2H); 3,87-3,97(d, 2H); 3,98- V : 30 4,10(t, 2H); 4,50-4,60(d, 2H); 4,61-4,77(q, 2H); 7,07(s, 2H); 7,13(s, 1H); 7,29(s, V : 1H); 7,45-7,52(d, 1H); 7,55-7,73(m, 4H); 7,9l(s, 1H); 8,23(s, 1H); 8,45(s, 1H); 9,82(s, 1H); 9,84(s, 1H); 10,18(s, 1H); 10,75(s, 1H); 10,76(s, 1H); ll,65(s, 1H); .*·. 12,00(s, 1H).

t, UV(DMA+MeOH): λ max = 328 nm (ε = 36830); 292 nm (ε = 43800).

35 : Esimerkki 13 [S-(R*,R*)]-5-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b: 4,3 -b'] dipyrrol-3 (2H)-yyli] -karbonyyli] -N-[2-[[ 1 -(Woorimetyyli)-1,6-dihy dro-5 - 103668 31

hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indoI-5-yyli]-lH-indoli-2-karboksamidin (yhdiste 13) valmistus Osa A

5-[[(5-karboksi- lH-indol-2-yylikarbonyyli]amino]-1 H-indoli-2-karboksyylihapon 5 dietyyliesterin valmistus

Indoli-2,5-dikarboksyylihapon 5-etyyliesteriä (65 mg, 0,28 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä kuivassa DMF:ssä (1 ml). Siihen lisätään 5-amino-indoli-2-karboksyylihappoa (57 mg, 0,28 mM) ja EDC:tä (60 mg, 31 mM). 10 24 tunnin kuluttua reaktio laimennetaan vedellä ja kiintoaine otetaan talteen suodat tamalla. Jäännöksenä saatu kiintoaine liuotetaan asetoniin ja haihdutetaan silikagee-lin (2 g) päälle. Tämä materiaali laitetaan silikageelikolonnin (18 g) huippuun ja sitä eluoidaan 10 % DMF:llä tolueenissa. Fraktioista löytyy 5-[[(5-karboksi-lH-indol- 2-yylikarbonyyli]amino]-lH-indoli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (75 mg, 15 saanto 64 %).

Osa B

5-[[(5-karboksi- lH-indol-2-yylikarbonyyli]amino]-1 H-indoli-2-karboksyylihapon valmistus 20 5-[[(5-karboksi-1 H-indol-2-yylikarbonyyli]amino]-1 H-indoli-2-karboksyylihapon ' dietyyliesteriä (75 mg, 0,18 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi- : ilmakehässä pyridiinissä (2 ml), absoluuttisessa etanolissa (2 ml) ja IN NaOH- i liuoksessa (600 μΐ) 120 tuntia 25 °C:ssa. Sitten lisätään vielä IN NaOH-liuosta .. 25 (1 ml) ja reaktiota lämmitetään 20 tunnin ajan 50 °C:ssa. Sitten lisätään IN HC1- liuosta (1,6 ml) ja reaktio haihdutetaan vakuumissa. Jäännös levitetään Celite-tuotteen (1 g) päälle ja laitetaan C-18-silikageeliä (10 g) sisältävään kolonniin.

* Kolonnia eluoidaan 50 % DMF:llä vedessä - 80 % DMF:llä vedessä (eluoiden 100 ml:lla kutakin 10 %:n lisäystä kohden). 5 ml:n fraktioita kerätään ja ne analy- • · * *;· · 30 soidaan TLC-menetelmällä. 5-[[(5-karboksi-lH-indol-2-yylikarbonyyli]amino]-lH- v : indoli-2-karboksyylihappoa löydetään fraktioista 5-77.

9 9 9

."". Osa C

]; | 5-[[(5-karboksi- lH-indol-2-yyli)karbonyyli]amino]- lH-indoli-2-karboksyylihapon • · ' · · · ‘ 35 ja (Boc) CPI-fenolikloridin välinen reaktio • Ψ 9 (S)-1 -(kloorimetyyli)- l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli-bentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrro-li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (121 mg, 103668 32 0,36 mM) sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä pimeässä 30 minuuttia etyyliasetaatissa (2 ml) ja kaasumaisella HCl.llä kyllästetyssä etyyliasetaatissa (8 ml). 30 minuutin kuluttua toteutettu TLC osoittaa reaktion päättyneen. Reaktio haihdutetaan vakuumissa ja se haihdutetaan uudestaan 2x CH2Cl2:lla, joh-5 taen kulloinkin sisään typpeä, jolloin saadaan (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-1,2,3,6-tetrahydro-bentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokloridia (CPI fenoli-kloridi-hydrokloridi). Tämä CPI-fenolikloridi-hydrokloridisuola liuotetaan typpi-ilmakehässä ja pimeässä sekoittaen kuivaan DMA:han (1,5 ml). Tuloksena saatuun liuokseen lisätään 5-[[(5-karboksi-lH-indol-2-yylikarbonyyli]amino]-lH-indoli-2-10 karboksyylihappoa (65 mg, 0,18 mM) ja EDC.tä (110 mg, 0,57 mM). 30 minuutin kuluttua reaktiota käsitellään vielä EDCrllä (45 mg, 0,23 mM) ja sen annetaan reagoida vielä 1,5 tuntia. Reaktioliuos siirretään sentrifugiputkeen DMF:lIä (1 ml) huuhtomalla, laimennetaan vedellä tuotteen saostamiseksi ja sentrifugoidaan. Su-pematantti dekantoidaan. Kiintoaine huuhdotaan RB-pulloon asetonilla ja haihdute-15 taan uudestaan vakuumissa. Raakatuote levitetään silikageelin (1 g) päälle ja laitetaan silikageelillä (10 g) täytetyn kolonnin huippuun, joka kolonni on tehty 20 % DMF - 80 % tolueeniseokseen. Kolonnia eluoidaan 20 % DMF:llä tolueenissa, sitten 35 % DMF:Ilä tolueenissa. 2 ml;n fraktioita kerätään. [S-(R*,R*)]-5-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-20 3(2H)-yyli]-karbonyyli]-N-[2-[[ l-(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyy- libentso [ 1,2-b: 4,3 -b'] dipyrrol-3 (2H)yyli]karbonyyli]-1 H-indol-5 -yyli]-1 H-indoli-2- ,; karboksamidia (43 mg) saadaan eristetyksi fraktioista 25-47.

i NMR (d6-DMSO, TMS): δ 2,33(s, 3H); 2,37(s, 3H); 3,50-3,70(t, 2H); 3,78-3,97(m, 25 3H); 3,97-4,14(t, 2H); 4,24-4,43(bs, 1H); 4,48-4,62(d, 1H); 4,62-4,75(t, 1H); j..j 7,04(s, 1H); 7,06(s, 1H); 7,16(s, 1H); 7,40-7,72(m, 7H); 8,00(s, 1H); 8,25(s, 1H); 9,64-9,80(bs, 1H); 9,8l(s, 1H); 10,30(s, 1H); 10,68(s, 1H); 10,75(s, 1H); ll,70(s, : V ’ 1H); 12,03(s, 1H).

I #<# UV(DMA+MeOH): λ max = 316 nm (ε = 36830); 295 nm (ε = 40030).

» « « j v * 30 « i · * Esimerkki 14 [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-lH-indoli-5,2-diyylikarbonyyli[l-(kloorimetyyli)-. ·. l,6-dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, 2,2-dime- tyylipropaanihapon (yhdiste 14) valmistus 35 i [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikar- bonyyli)]bis[ 1,2,8,8a-tetrahydro-7-metyyli-syklopropa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-onia (5,4 mg, 7,3 μΜ) liuotetaan pyridiiniin (200 μΐ) ja liuosta käsitellään 103668 33 2,2-dimetyylipropionihappokloridilla (24 μΐ, 192 μΜ) O °C:ssa. 10 minuutin kuluttua reaktio lämmitetään 25 °C:n lämpötilaan ja sitä sekoitetaan 20 minuuttia tässä lämpötilassa. Sitten reaktio sammutetaan vedellä (0,1 ml) ja väkevöidään kuiviin. Jäännös liuotetaan DMF:ään ja haihdutetaan vakuumissa silikageelin (0,1 g) päälle. 5 Tämä materiaali laitetaan silikageeliä (1 g) sisältävän kolonnin huippuun ja kolonnia eluoidaan 10-30 % DMF:llä tolueenissa. 0,2 ml:n fraktioita otetaan talteen. Fraktiot 17-50 haihdutetaan kuiviin ja jäännös pestään asetonilla. Sitten asetonihuuhtelusta saatu jäännös käsitellään kromatografisesti silikageelikolonnilla (0,3 g), jota eluoidaan 10-12 %DMF:llä tolueenissa. 0,2 ml:n fraktioita otetaan talteen. [S-(R*,R*)]-10 karbonyylibis[imino-1 H-indoli-5,2-diyylikarbonyyli[ 1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro- 8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, 2,2-dimetyylipropaa-nihappoa (1,1 mg) saadaan haihduttamalla fraktiot 9-23.

NMR (dg-DMSO, TMS): 1 l,39(s, 18H); 2,4l(s, 6H); 3,73(m, 2H); 4,00(m, 2H); 15 4,21 (m, 2H); 4,60(m, 2H); 4,73(m, 2H); 7,09(s, 2H); 7,25(m, 4H); 7,42 (m, 2H); 7,80(bs, 2H); 7,88(S, 2H); 8,55(bs, 2H); 10,87(bs, 2H); ll,54(bs, 2H).

UV(DMA + MeOH): λ max = 324 nm (ε = 40000); 294 nm (ε = 40000).

Esimerkki 15 20 [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-lH-indoli-5,2-diyylikarbonyyli[l-(kloorimetyyli)- l,6-dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyiToli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, dekaani-^ hapon (yhdiste 15) valmistus j [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorime- : 25 tyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-olia (10 mg, 0,012 mM) liuotetaan pyridiiniin (0,2 ml) ja DMF:ään (0,01 ml). Liuosta käsitellään • · dekaanianhydridillä (75 mg, 0,23 mM) ja reaktiota sekoitetaan pimeässä 24 tuntia. ’·* ’ Sitten reaktio sammutetaan vedellä (0,05 ml) ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös pes tään vedellä ja tolueenilla, ottaen kulloinkin liukenematon materiaali talteen sentri-:·* * 30 fugoimalla. Tuloksena oleva jäännös käsitellään kromatografisesti silikageelillä V * (1,2 g) täytetyllä kolonnilla, jota eluoidaan 5 %, 6 %, 7 % ja 10 % DMF.llä toluee- nissa. 0,3 ml:n fraktioita kerätään. [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-lH-indoli-5,2- · , diyylikarbonyyli[ 1-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyr- ·' roli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, dekaanihappoa (1,3 mg) saadaan haihduttamalla fraktiot 35 18-60.

• I » * » • · 103668 34 NMR (d^-DMSO, TMS): δ 0,86(t); 1,24 (m); 1,45 (m); 2,18 (t); 2,40 (s); 3,70 (m); 3,98(m); 4,15(m); 4,59(m); 4,71(m); 7,08 (s); 7,27 (m); 7,42 (m); 7,80 (m); 7,88 (s); 8,59 (bs); 11,05 (bs); 11,53 (bs).

UV (DMA+MeOH): λ max = 324 nm (ε = 40 000); 294 nm (ε = 40 000) 5 Esimerkki 16 [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis[(7,8-dihydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-6,2(3H)-diyyli)karbonyyli]]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:n (yhdiste 16) valmistus

10 Osa A

6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-karboksyyliha-pon etyyliesteri]:n valmistus on kuvattu julkaisussa M.A. Warpehoski, V.S. Bradford, Tetrahedron Lett.. 1986, 27, 2735.

15 NMR: δ 1,35 (t, 6H); 3,285(t, 4H); 4,123(t, 4H); 4,34(q, 4H); 7,06(s, 2H); 7,22(d, 2H); 7,32(d, 2H); 1 l,845(s, 2H).

MS(E1): m/z 586(M+), 257, 230, 184, 156.

TLC: Rf = 0,14 (25-75) asetoni-heksaani-seoksessa.

20 Osa B

6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-karboksyyliha-pon dietyyliesteri]:n valmistus . 6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-karboksyyliha- 25 pon etyyliesteri]:ä (30 mg, 0,13 mM) liuotetaan kuivaan THF:ään (0,5 ml) ja tätä I <«· liuosta käsitellään 4-dimetyyliaminopyridiinillä (1 mg). Tämä liuos jäähdytetään ; -98 °C:n lämpötilaan nestemäistä typpeä ja jäätynyttä metanolia sisältävässä hau- * * * I teessä, typpi-ilmakehässä. Siihen lisätään di-isopropyylietyyliamiinia (25 μΐ, 0,14 mM), sitten 1,93 M fosgeenia tolueenissa (35 μΐ, 0,067 mM). Reaktiota sekoi-30 tetaan noin -98 °C:ssa 3 tunnin ajan. Sitten sitä säilytetään -65 °C:n pakastimessa Ϊ : yön yli. Reaktiota sekoitetaan huoneen lämpötilassa 90 minuuttia. Se laimennetaan * . vedellä ja etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestään suolaliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan. Raakajäännös (47,9 mg) adsorboidaan silikageelin (0,5 g) pinnalle tislatusta THF:stä. Tuloksena saatu kiintoaine laitetaan silikageeliä (5 g) sisältävän :" *: 35 kolonnin kuippuun ja kolonnia eluoidaan 5-15 % asetonilla tolueenissa. 3 ml:n frak- tioita kerätään. 6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-karboksyylihapon dietyyliesteriä (5,6 mg) saadaan fraktioista 5-9.

103668 35

Osa C

6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-karboksyyliha-pon dietyyliesteri]:ä (7 mg, 0,014 mM) liuotetaan pyridiiniin ja tätä liuosta käsitellään IN NaOH-liuoksella (0,05 ml). Sitten reaktio kuumennetaan 50 °C:n lämpöti-5 laan 6 tunniksi. Reaktio tehdään happamaksi IN HCl-liuoksella (0,2 ml) ja kiinteänä saostunut 6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-kar-boksyylihapon dietyyliesteri otetaan talteen sentrifugoimalla ja kuivataan vakuumis-sa.

10 Osa D

[S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis[(7,8-dihydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-6,2(3H)-diyyli)karbonyyli]]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:n (yhdiste 16) valmistus 15 (S)-1 -(kloorimetyyli)- l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyIi-bentso[ l,2-b:4,3-b']dipyrro- li-3(2H)-karboksyylihapon 1,1-dimetyyliesteriä [(Boc)CPI fenolikloridi] (11 mg, 0,033 mM) liuotetaan etyyliasetaattiin (0,2 ml) ja HCkllä kyllästettyyn etyyliasetaattiin (0,7 ml). Seoste sekoitetaan huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä 1 tunnin ajan. Se haihdutetaan typpivirran alla. Yhdistettä CH2CI2 lisätään ja jäännökse-20 nä saatu (S)-l-(kloorimetyyli)-5-hydroksi-8-metyyli-l,2,3,6-tetrahydro-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-hydrokioridi (CPI fenolikloridi-hydrokloridisuola) haihdutetaan uudestaan kahdesti typpivirran alla. 6,6'-karbonyylibis[3,6,7,8-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-2-karboksyylihapon dietyyliesteri]:ä (6 mg, 0,014 mM) liuotetaan ' . DMA:han (0,3 ml) ja lisätään CPI-fenolikloridi-hydrokloridisuolaan. Sitten seosta 25 käsitellään EDCillä (6,4 mg, 0,034 mM). Reaktiota sekoitetaan typpi-ilmakehässä 1 < *»· ] huoneen lämpötilassa 50 minuuttia. Siihen lisätään vielä EDC:tä (6,4 mg, ' * 0,034 mM) ja sekoittamista jatketaan 65 minuuttia. Tuote saostetaan lisäämällä * · t • · vähitellen vettä. Kiintoaine (28 g) otetaan talteen sentrifugoimalla ja kuivataan vakuumissa. Tämä raakatuote adsorboidaan DMF:stä silikageeliin (0,3 g). Se laite-30 taan silikageeliä (3 g) sisältävään kolonniin, jota eluoidaan 10, 12, 14, 16 ja 20 % DMFillä tolueenissa. 1 ml:n suuruisia fraktioita otetaan talteen. [S-(R*,R*)]-6,6- * . [karbonyylibis[(7,8-dihydrobentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyiToli-6,2(3H)-diyyli)karbonyy- ',,' li]]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4- 1 ;' oli]:a (6 mg) saadaan väkevöimällä fraktiot 40-62.

35 NMR. δ 2,36(s, 6H); 3,3(t, 4H); 3,61(m, 2H); 3,92(m, 2H); 4,03(m, 2H); 4,16(t, 4H); 4,55(m, 2H); 4,69(m, 2H); 7,01(s, 2H); 7,05(s, 2H); 7,27(m, 4H); 7,66(m, 2H); 9,79(s, 2H); 10,74(bs, 2H); ll,62(bs, 2H).

103668 36 UV: λ max = 353 nm (ε = 28000); 286 nm (ε - 45000).

TLC: Rf = 0,29 (20-80) DMF-tolueeni-seoksessa.

Lähtöyhdisteet ovat tunnettuja tai niitä voidaan valmistaa helposti tunnetuilla mene-5 telmillä. Katso M.A. Warpehoski, Tet. Lett., 27, 4103 (1986); W.W. Wierenga, J, Am, Chem. Soc., 103, no. 18, 1981; D.G. Martin, J. Antibiotics, 1985, 38, 746; ja M.A. Warpehoski, I. Gebhart, R.C. Kelly, W.C. Krueger, L.H. Li, J.P. McGovren, M. D. Prairie, N. Wicnienski ja W. Wierenga, J. Med. Chem., 1988, 31, sivut 590-603.

10

Yhdisteen CPI(Boc) HC1 valmistus on kuvattu julkaisussa R.C. Kelly, I. Gebhard, N. Wicnienski, P.A. Aristoff, P.D. Johnson, D.G. Martin, J. Am. Chem, Soc., 1987, 109, 6837.

15 Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat erityisen käyttökelpoisia kasvaimia torjuvina aineina. Kaavan I mukaisten yhdisteiden edustajilla on todettu olevan kasvaimia torjuvaa aktiivisuutta leukemiaa sairastavissa P388-hiirissä, ja niiden aktiivisuus on myös merkittävä hiiriä hyväksikäyttävissä L1210-leukemia- ja B16-melanooma-koejärjestelmissä. Näitä hiiriin perustuvia koejärjestelmiä voidaan käyttää kliinisesti i 20 käyttökelpoisten, ihmisessä kasvaimia torjuvien aineiden ennustamiseen (katso esi- I merkiksi A. Geldin et ai., European J. Cancer. Voi. 17, sivut 129-142, 1981; J.M.

i Vendetti, Cancer Treatment Reports, voi. 67, sivut 767-722, 1983; ja J.M. Vendetti et ai., Advances in Pharmacology and Chemotherapy, voi. 20, sivu 1-20, 1984), ja näin ollen oheisen keksinnön mukaisia yhdisteitä (kaava I) voidaan käyttää alttiiden, 25 uudiskasvua tuottavien (syöpä-) sairauksien, mukaan lukien alttiit leukemiat, sääte- < € · » · ' ' lyyn ja hoitoon ihmisessä, kun niitä annetaan esimerkiksi laskimon sisäisesti i ': "· annoksina, joiden koko on noin 0,001 pg - 10 mg ruumiin painokiloa kohden vuoro- * # · - ; : kaudessa, täsmällisen annoskoon riippuessa potilaan iästä, painosta ja tilasta sekä antokertojen tiheydestä.

30 ·*; Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita, kun niitä annetaan laskimon sisäisesti (iv) juoksevissa liuoksissa annosinjektiona tai infuusiona. Edulliset annokset ovat r r f * O. 01 mikrogrammaa/kg - 1000 mikrogrammaa/kg annosinjektiona sekä 0,0002-20 ' · · ' mikrogrammaa/kg/minuutti infuusiona. Täsmällinen annos riippuu erityisestä yhdis- :'' *: 35 teestä sekä iästä, painosta, antotavasta ja potilaan fyysisestä tilasta sekä antokertojen : tiheydestä.

103668 37

Taulukoissa 1 ja 2 on esitetty kaavan I mukaisilla yhdisteillä in vivo ja in vitro L1210 -kokeissa saatuja havainnollistavia tuloksia. Taulukossa 3 on esitetty tuloksia, joiden avulla verrataan toisiinsa [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso-5 [l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli]:a (yhdiste 1) ja (7bR)-N-[2-[(4,5,8,8a-tetrahydro-7- metyyli-4-oksosyklopropa[c]pyrrolo[3,2-e]-indol-2-(lH)-yyli)karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-2-bentsofuraanikarboksamidia (U-73 975) muissa hiirijärjestelmissä, joissa näitä yhdisteitä käytettiin yhdessä. Yhdiste 1 on vähintään yhtä aktiivista kuin yhdiste U-73 975 kaikissa järjestelmissä, sekä eräissä kokeissa kuten ihonalaisessa 10 L1210-kokeessa sen aktiivisuus on parempi useilla annosalueilla. Lisäksi on todettu, ettei yhdiste 1 samoin kuin U-73 975 aiheuta viivästynyttä kuolemaa.

Biologiset in vivo L1210 -tulokset osoittavat, että [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis-(imino-lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-me-15 tyylibentso[l,2-b:4,3-b’]dipyrrol-4-oli] (yhdiste 1) on kaikkein aktiivisin analogi, jonka hoitava vaikutus on erittäin suuri annoskoon ollessa 15 pg/kg. Taulukoissa 1 ja 4 esitetyt tulokset on saatu hyvin tunnetuilla standardimenetelmillä (In Vivo Cancer, Models, NIH Publication no. 84-2635, 1984).

20 Suureella T/C tarkoitetaan käsiteltyjen hiirien elinajan mediaania jaettuna vertailu-hiirien elinajan mediaanilla kerrottuna sadalla.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää bakteereja torjuvina aineina. Näiden aineiden avulla voidaan säädellä alttiiden mikrobien lisääntymistä erilaisissa ympä-25 ristöissä käyttäen tavanomaisia mikrobiologisia tekniikoita. Tällaisista ympäristöistä • » » voidaan mainita S. aureus -bakteerin ja muiden vastaavien kontaminoimat hampai-denhoitovälineet sekä mikrobiologisen laboratorion työskentelypinnat, jotka voidaan : : puhdistaa sellaisella valmisteella, joka sisältää noin 1-10 % (paino/til.) kaavan I mu kaista yhdistettä.

T: 30 r i · · • » • · i I · · #

I I I I I I

i i

KAAVOJEN LUETTELO

38 103668

& H H

Xerr^i

o h H

Yhdiste 1 o^y^V h h

}«YOH

0 H H °

Yhdiste 2

h iJ

HorVs^H

' H H

i *:’: « ”” Yhdiste 3 i KAAVOJEN LUETTELO (jatkuu) 103668 39 γ, Cl cl;)yYw 0 5 °

Yhdiste 4 . ·_ Yhdiste 5 i <Vr ‘ΤγΡ"

ηο'^^'ν h ffls H

ΗίΤ? «ΊΓΊ»-<,

! ϊ M

Yhdiste 6 40 KAAVOJEN LUETTELO (jatkuu) 103668 •&Γ

H H

Yhdiste 7 &Γ . . 1Ä H&rr'Oyi

H H

Yhdiste 8 'i ~öU-c' e>tO" „A A,.

: * · · ·

Yhdiste 9 41 KAAVOJEN LUETTELO Gatkuu) 103668 N.

0Η®~Λ

H

Yhdiste 10 Yhdiste 11 :i; hertsi i

H H

1 · · · « : ^: Yhdiste 12 KAAVOJEN LUETTELO Gatkuu) 42 10 ό 6 6 8

Yhdiste 13

H H

Λ X

(M.),C^O θ' O 'o O^^C(M.), i

Yhdiste 14 ,-Ct a“\ i :¾ .

_A ΑοηΛ«.

* · *: : ' Yhdiste 15 »··» I ·

III

in KAAVOJEN LUETTELO (jatkuu) 103668 43 "Cx f~a c,_v jp Q, vXAoh }^9y%k

H H

yhdiste 16 * · · · »· · • · • · »· · • · • · • · · • · « » MM • · 44 105668

Taulukko 1 L-1210-leukemia in vivo IV lääke verrattuna IP kasvain annosteltu 1. vuorokautena L1210 in vivo

Yhdisteen no. Annos (Hg/kg) Paras T/C^ 14 20 156 9 50 165 10 6 213 (1 parantui) 11 13 188 12 2 181 13 13 188 U-73975 100 213 1 15 4/6 parantui 3 6 106 8 50 194 2 10 169 6 5 178 (1 parantui) 7 1 156 5 600 156 4 50 156 15 13 243 (1 parantui) 16 12 243 (1/6 parantui) 5 v : a BDFi-uroshiiriä.

·:! b T/C = käsitelty/vertailu x 100, jossa "käsitelty" tarkoittaa hengissäpysymisajan ·:··· mediaania käsitellyssä ryhmässä ja "vertailu" tarkoittaa hengissäpysymisajan medi- aania käsitelemättömässä vertailuryhmässä. 30 vuorokautta hengissä pysyneitä 10 eläimiä pidettiin parantuneina.

» ψ t* • » · • · · • · · • · « • · * i * * ' i .

i , , , „ 103668 45

Taulukko 2

Biologisia in vitro -tuloksia

Yhdiste Π>50^ 5 1 0,000001 3 0,000009 8 0,000006 2 0,000001 10 6 0,000012 7 0,000004 5 0,00001 4 0,000004 15 0,000001 15 16 0,000002 a Lääkkeet testattiin L1210-leukemiasoluja vastaan.

b Tämä arvo on lääkkeen se pitoisuus yksikössä pg/ml, joka estää solujen kasvun 50-prosenttisesti.

20 I f · · « · · • · • · • · · < · · 4 · · • · * I - · I · · • • · I » · « · · « « • · ^ 103668 46

Taulukko 3 U-73975 Cpdl ODb 5 L-1210 i.p.a pg/kg 100 10-15 i.v.-annos paras T/C 213 1. vrk:na (parantuneet)0 (4/6)

OD

10 L-1210 i.p.a pg/kg 20 4

i.p.-annos T/C

1., 5., 9. vkr:na (parantuneet) (4/6) (3/6)

OD

15 L-1210 se pg/kg 100 10-25

i.p.-annos paras T/C

l.vrk:na (parantuneet) (4/6) (6/6)

OD

20 B-16i.p. Pg/kg 100 15 i.v.-annos : 1. vrk:na T/C 160 167

OD

! 25 Lewis-keuhko i.v. pg/kg 25 4 • · . i.v.-annos • « « · * 1.. 5., 9. vrk.na T/C 147 168 4 * · ’ EI KASVAINTA ei viivästynyttä ei viivästynyttä kuolemaa kuolemaa * * * v: 30 • · * :: a i.p. = vatsaontelon sisäisesti ja i.v. = laskimon sisäisesti b OD = optimiannos , · ·. c Näissä kokeissa 30 vuorokautta hengissä pysyneitä eläimiä pidettiin parantuneina.

47 103668 KAAVIO 1 W 2 /— X Valhe 1 H* JL lTVz ~—:-

- Liuotin A

h-(r

Vaihe 2 ,w L ° °

X HO-0—fteeneri)—OH

JO H /“z Dehydrausaine

Liuotin B

H H 2 W Z z WN—Λ Χ"/^-γΧζ'ΝΗ Vaihe 3' ^ λ—{t eetteri)—^

o' O

:·: a · · • * • · ·:·· __,w 7 z w -vö” λ—fteetteri)—/ O 'o ': 4 48 103668 KAAVIO 2 W, 2, H H JL /~Xl Vaihe 4 xx>- -- r°^r v W, 2, Vaihe 5 Ηθ> 1 H O-U—(t eetteri)—U—o R Z’

H H

2*

Wt 2, A-i L—x, Vaihe 6 «n 1^/ Suo jäävän ryhmän poisto

JljO-*· —-

ϊ,0~— H OR

—(teetteri )~^C

____ θ' Ό . 5 il··* I « > z.

Vaihe 7 h£kJ~*‘ : T: ?· JrYVz, I :T: h/~Jl j' JL jL /~2’ --►- * * Y1oxSssX^'H oh Dehydraus- ": λ—Ceetteri)—^ reagenssi o o 49 KAAVIO 2 (jatkuu) 103668 /N'^^SOY, ^r— (teetteri)—^

O O

7 W, , _ W,v ”&-* -45" λ— (teerten J—/

O O

t W, ^ 2j W,

Valhe 9/ kun Υ,^Η, y2=h k !>—'· z.-CTl 7 *“ Y.o·^----^"N.

λ—(teetteri)—^ o O

i < 9 ··· • * • · • · 1 · » • t • · » » * - · · • ·

V

»· · · • · Ϊ • < KAAVIO 2a 50 103668

Vaihe 5a

0 ° L

Χ,-U—(teetteri)—Ö— X4 r -- XjCV^

YtO'^^N

λ'-* C teetteri) —

Of \ 5a

Valhe 3 j~ —? w’\ ho'^^'n ’ ’ ν·Λ^.οη ^-—(teetteri )—A O 'o 7

Kun *3 = X4 ja ne ovat hyvin irtoavia ryhmiä kuten ^Ι,^Βγ,^Η,^Η —Ο-ιΛν a w w' Ö at· • · · · · • · * • · « « · * • · · • · « * « * • · r > j :¾ 103668 51 KAAVIO 3 _W Z Vaihe 10 HNvJkv_y X 0=TC=N—(T1lh«r)—N=C=0

XjO“z -1- H H 8 °

2 X—“—N—(teetteri J—H—U—X

R Ä

W Z Z W

HNV^ns^\"X X1”"\j(j<h

,N'^V^1SOY

Λ-N—(teetteri)—N—

O R RO

10

Vaihe 11 i Ä· Ä: λ-N-(teetteri )-N—/ o' I I 'o

... R R

: : : n

IM

III

52 103668 KAAVIO 4 Λ Vaihe 12 O o f’ Xj-ii-N—(teetteri)—N—ϋ~χ4

HN R R

H ^ Zj 2 HNtX /X*

Vaihe 13 /=fw’ Lx v.o'W'n^ z’

2" H H

YiO^^N * A-N—(teetterj)—N—^

® R RO

10 W, Zn Zj w,v /=rf Γ x_I Ss=\ Vaihe 14

HNvMT ' 2 )yLNH V, S Yi B H

N*"*V^0Yj R (teetteri}—N—^

0 R R O

: 13 ’ hvXA AThr I 0ί^-Ν Z’ * νΛ^Α0 J)-N-('teetteri}—N—^ .·:*. R R ° 14 *»« « * : i < c » « KAAVIO 4 (jatkuu) 53 103668 W, l’ Zi w,

Vaihe 15 jT ' λ Y,¥HY**H Γΐί>—ζι ζϊ-^ιίΓ 13 -► Yio^^N 1 1 ;^Λ0 /f-N-(teerten )~N—^ ° R R ° 15 t · • · « · • · · • · · • t · » · • · · · 1 « · · f KAAVIO 5 54 10 3 6 6 8 ** 2 0 Vaihe 16 q HVV< X——(teet!en)—O—H—x -----** h,Sh 2

Zw_^

Z N-Js^X

\ / OY

y^-O-Ct eetteri)—O—X O Ό 16

Vaihe 17

ϊ Y * H fzzf" .2 2 W

1 - ~ 1&-- \ r ή-0 (teetteri)-O—Λ ° No 17 · · • ♦ » I I * Ψ

H

il KAAVIO 6 55 103668

0 Vaihe 18 Q

1 1* x^H-o—(' teetteri)Ο ·Χ4 HNV^n^\ X' v.o'^S'i Z' 2' H H ,W» Z*

Vaihe /=< L-v Y,O^^N +

2" H H

rrv. --

VlO^-^·* X, ^-0— {teetteri)—O—-A o 'o 18

Wi Z, 2, W,v 1—-Y y I r^\ Vaihe 20 1 * Y, = Y2 = h yy~ O—(teetteri)—O—X Ο 'o 19 __„Wl 7 , Wj.

"Ä;· ’ * /7—0—(teetteri)-0—^ ·'" 0 ’o 20 • # · it* » * t :T: w, ]' w

Vaihe 2t /**! /"Xl *\

Yi^hyj = h HNv|^l|^y_.z z_/rVNH

^ Υ,Ο'^^Ν ’ Ν-^Λο

-0-(teetteri)—0—X

,·. : 0 Ό 2l

Claims (13)

1. 56 103668
2. 1. Menetelmä farmakologisesti aktiivisen pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)-onidimeerin valmistamiseksi, jolla on kaava I 5 CPIl - R5 - T - R'5 - CPI2 I jossa CPIj ja CPI2, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat kaavan A tai B mukainen ryhmä 10 w /^( f HN\ ' JL I A w Ti f * I :/; I .,..: 15 W on C1 -Cs-alkyyli, fenyyli tai vety; • · ' X on atsido, halogeeniatomi, syanaatti, tiosyanaatti, isosyanaatti, tioisosyanaatti, fosfaattidiesteri [-0-P0(0R)2], fosfonyyli (-0-P02R), tiofosfonyyli (-O-PSOR), sulfinyyli (-O-SOR) tai sulfonyyli (-O-SO2R); 20 Y on vety, -C(0)R, -C(S)R, -C(0)0R], -S(0)2Ri, -C(0)NR2R3, -C(S)NR2R3 tai r -J- -C(0)NHS02R4; I · * . · · . Z on C1 -C5-alkyyli, fenyyli tai vety; ’·;·* 25 :. = .: R on Ci-C20-alkyyli; C2-Cö-alkenyyli; C2-C6-alkynyyli; fenyyli, joka on valin- *·.’·· naisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Ci-C4-alkyylillä, C1-C3- alkoksilla, halogeenilla, Ci-C3-alkyylitiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyli- 57 103668 aminolla tai nitrolla; naftyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä tai kahdella Cj-C^alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla, C j -C3-alkyylitiolla tai nitrolla;
3. 5 Rj on Ci-C20_alkyyli tai fenyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella C i-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, Ci-C3-alkyyli-tiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla tai nitrolla; R2 ja R3, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat vety, Cj-C20-alkyyli tai fenyyli, 10 joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Ci-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, Ci-C3-alkyylitiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla tai nitrolla; edellyttäen, etteivät sekä R2 ja R3 ole samanaikaisesti fenyyli tai substituoitunut fenyyli;
4. 15 R4 on C1 -C ] o-alkyyli; fenyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä, kahdella tai kolmella Ci-C4-alkyylillä, Ci-C3-alkoksilla, halogeenilla, Ci-C3-alkyyli-tiolla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla tai nitrolla; naftyyli, joka on valinnaisesti substituoitunut yhdellä tai kahdella Ci-C4-alkyylillä, C1-C3-alkoksilla, halogeenilla, trifluorimetyylillä, C2-C6-dialkyyliaminolla, Cj-C3-alkyy-20 litiolla tai nitrolla; R5 ja R'5, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat suora sidos tai jokin seuraavista 1 karbonyyliasyyliryhmistä: : || x‘ 25 o • « · • I · • · · - jossa X8 on -NH-, -O- tai -S-, Yj on vety, Ci-C4-alkyyli, Cj-C3-alkoksi tai halo- *\ ' geeni; o Il \ 30. h och3 58 103668 ? r>C -/>Γ" II Η och3 ο jossa R' on H tai CH3S-; \\\S
5. 0 H O νγι _8_wL_, Toi 1 S jossa Yj ja Xg ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia; '. ! T on teetterisidos, joka on: * I 10 a) aminokarbonyyli [-NHC(O)-]; j b) karbonyyliamino [-C(0)NH-]; c) amino-teetteri-amino, jolla on kaava NR13-T-NR14-, jossa R13 ja R14, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat vety tai Ci-Cg-alkyyli, tai ne muodostavat yhdes- I · I V ·* sä ryhmän -(CH2)n-, jossa n on 2 tai 3; jossa Τ' on karbonyyli [-C(O)-], dikar- , 15 bonyyli [-C(0)C(0)-], [-C(0)(CH2)nC(0)-], jossa n on 1-5, tai ryhmä, jolla on kaa- va -C(0)-het-C(0)-, jossa -het- on heteroaryyli, joka on furan-2,4-diyyli, furan-2,5-diyyli, pyrrol-2,4-diyyli, pyrrol-2,5-diyyli, tiofen-2,4-diyyli, tiofen-2,5-diyyli, indol- 2,5-diyyli, bentsofuran-2,5-diyyli, bentsotiofen-2,5-diyyli, pyridin-2,6-diyyli, pyrat- M < 1 ·;;; sin-2,6-diyyli, pyrimidin-2,6-diyyli, kinolin-2,6-diyyli, kinoksalin-2,6-diyyli, kinat- '··. 20 solin-2,6-diyyli, bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-2,7-diyyli, bentso[l,2-b:4,3-b']difuran- 2,7-diyyli tai bentsoksatsol-2,5-diyyli, ja joka on valinnaisesti substituoitu yhdellä ... : tai kahdella C i-C4-alkyylillä, C i-C3-alkoksilla tai halogeenilla; tai 103668 d) -C(0)-het-C(0)-, kun sekä R5 että R'5 ovat suora sidos, jossa -het- tarkoittaa samaa kuin edellä; tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaava w M x HN\ χθ"ΓΠ z
6. 5 H jossa W, X, Y ja Z tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan biskarboksyylihapon kanssa, jolla on kaava 10 ho-r5-t-r'5-oh C jossa R5, R'5 ja T tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa kaavan I mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, jossa CPIj ja CPI2 ovat samanlaiset, tai sellaisen kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa CPIj 15 ja CPI2 ovat erilaiset, kaavan B* mukainen yhdiste tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan C mukaisen biskarboksyylihapon tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa, jolloin toinen karboksyyliryhmistä tarvittaessa on suojat-tu, ja sitten mahdollisen suojaryhmän poistamisen jälkeen saatu monokarboksyyli-happovälituote tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan erilaisen ....: 20 kaavan B* mukaisen yhdisteen tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa, mmrm. ja haluttaessa suoritetaan yksi tai useampi seuraavista reaktioista: . (i) kaavan I mukaisessa yhdisteessä ryhmä B syklisoidaan kaavan A mukaiseksi X/ ryhmäksi, • · · * ·' * (ii) kaavan I mukaisessa yhdisteessä ryhmä A muutetaan ryhmäksi B, 25 (iii) kaavan I mukaisessa yhdisteessä ryhmä B, jossa Y on vety, muutetaan toiseksi • · · : ryhmäksi B, jossa Y tarkoittaa samaa kuin edellä vetyä lukuun ottamatta. • · · f · I I » X, 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan ]!!! yhdiste, jossa W on metyyli. 30
7. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan •: : yhdiste, jossa X on halogeeni. 103668
8. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa Y on vety tai -COR, jossa R on Ci-Cjo-alkyyli.
9. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5 yhdiste, jossa Z on vety.
10. 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa T on aminokarbonyyli [-NHC(O)-]; karbonyyliamino [-C(0)NH-]; tai amino-teetteri-amino-, jolla on kaava -NR13-T-NR14-, jossa R13 ja R14 ovat vety 10 ja jossa Τ' on karbonyyli [-C(O)-] tai ryhmä, jolla on kaava -C(0)-het-C(0)-, jossa -het- tarkoittaa samaa kuin edellä.
11. 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa T on amino-teetteri-amino, jolla on kaava -NR13-T-NR14-, jossa R13 15 ja Rj4 ovat vety ja jossa Τ' on karbonyyli [-C(O)-] tai ryhmä, jolla on kaava -C(O)-het-C(O)-, jossa -het- on pyrrol-2,5-diyyli, fur-2,5-diyyli, indol-2,5-diyyli, bentsofu-ran-2,5-diyyli tai 3,6-dihydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-2,7-diyyli.
12. 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 20 yhdiste, jossa R5 ja R'5 ovat 2-karbonyyli-indol-5-yyli, 2-karbonyyli-6-hydroksi-7- metoksi-indol-5-yyli, 2-karbonyyli-l,2,3,6-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-7-yyli, 2-karbonyyli-4-hydroksi-5-metoksi-l,2,3,6-tetrahydrobentso[l,2-b:4,3-b']di- 1 1 · : ‘ ' pyrrol-7-yyli.
13. 9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan •s·" yhdiste, jossa CPIj ja CPI2, jotka ovat samanlaisia tai erilaisia, ovat edullisesti ·;·*: l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-8-metyyli-5-hydroksi-bentso[l,2:4,3-6']dipyrrol-3- (2H)-yyli tai 4,5,8,8a-tetrahydro-7-metyyli-4-oksosyklopropa[c]pyrrolo(3,2-e)indol- I ’ 2(lH)-yyli. 30 * * * ,·*·. 10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan: 9 t · ':'': [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino- lH-indoli-5,2-dikarbonyyli)]bis[8-(kloorime- tyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli] (yhdiste 1); . 35 ,·, : [7bR-[2(7'bR*,8'aS*),7bR*,8aS*]]-2,2'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-dikar- « · « ' ' bonyyli)]bis[l,2,8,8a-tetrahydro-7-metyylisyklopropa(c)pyrrolo[3,2-e]indol-4(5H)- oni] (yhdiste 2); 103668 (R*,S*)-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso-[l,2-b:4,3-b']dipyirol-3(2H)-yyIi]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]etaanidiamiini (yhdiste 3); 5 [S-(R*,R*)]-6,6'-(lH-pyrroli-2,5-diyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli] (yhdiste 4); [S-(R*,R*)]-6,6'-(2,5-furandiyylidikarbonyyli)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetra-hydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3'b]dipyrrol-4-oli] (yhdiste 5); 10 [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent-so[ 1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-1 H-indol-5-yyli]-2>5-furaanidikar-boksamidi (yhdiste 6); 15 [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[ 1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyyli- bentso[ l,2-b:4,3-b']dipynOl-3(2H)-yyli]karbonyyli]-1 H-indol-5-yyli]- lH-pyrroli- 2,5-dikarboksamidi (yhdiste 7); [R-(R*,S*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent-20 so[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indoli-5-yyli]-propaanidiamidi (yhdiste 8); i' ·' [S-(R*,R*)]-6,6'-[karbonyylibis(imino-lH-indoli-5,2-diyylikarbonyyli)]bis[8-(kloo- '; rimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipynOl-4-oli-diasetaat- '1": 25 ti] (yhdiste 9); • · ·:··: [S-(R*, R*)]-6,6'-(lH-indoli-2,5-diyylidikarbonyyIi)bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8- tetrahydro-l-metyyli-bentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-4-oli (yhdiste 10); . 30 [S-(R*,R*)]-N,N'-bis[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibent- ' so[l,2-b:4,3-b']dipynOl-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-indoli-2,5- • · · \ dikarboksamidi (yhdiste 11); ψ - {»Ill « I :' f,: [S-(Ri|c>R*)]-2-[[ 1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[ 1,2- 35 b:4,3-b']dipynOl-3(2H)-yyli]karbonyyli]-N-[3-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5- · Vm': hydroksi-8-metyylibentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli] - lH-indol-6- • · t ' ’ yyli]-lH-indoli-5-karboksamidi (yhdiste 12); 62 103668 [S-(R*,R*)]-5-[[ 1 -(kloorimetyyli)-1,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[ 1,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]-karbonyyli]-N-[2-[[l-(kloorimetyyli)-l,6-dihydro-5-hydroksi-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrrol-3(2H)-yyli]karbonyyli]-lH-indol-5-yyli]-lH-indoli-2-karboksamidi (yhdiste 13); 5 [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-lH-indoli-5,2-diyylikarbonyyli[l-(kloorimetyyli)- 1.6- dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, 2,2-dime-tyylipropaanihappo (yhdiste 14); 10 [S-(R*,R*)]-karbonyylibis[imino-1 H-indoli-5,2-diyylikarbonyyli[ 1 -(kloorimetyyli)- 1.6- dihydro-8-metyylibentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-3,5(2H)-diyyli]]esteri, dekaani-happo (yhdiste 15); [S-(R*,R*)]-6,6,-[karbonyylibis[(7,8-dihydrobentso[l,2-b:4,3-b']dipyrroli-6,2(3H)-15 diyyli)karbonyyli]]bis[8-(kloorimetyyli)-3,6,7,8-tetrahydro-1 -metyylibentso[ 1,2- b:4,3-b']dipyrrol-4-oli] (yhdiste 16).