ES3037120T3 - Thiostrepton and vitamin e-tpgs for treating cancer - Google Patents

Abstract

La invención se refiere, en parte, a compuestos, composiciones y métodos útiles para tratar el cáncer en células y sujetos. Según un aspecto de la invención, se proporcionan métodos para reducir la viabilidad celular en una población de células cancerosas. Dichos métodos incluyen: poner en contacto una población de células cancerosas con tiostreptona (TS) y vitamina E-TPGS, en condiciones y durante un periodo de tiempo suficientes para una reducción estadísticamente significativa de la viabilidad en varias de las células cancerosas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Tioestreptona y vitamina E-TPGS para tratar el cáncer

Campo de la invención

La invención reivindicada se refiere a composiciones que comprenden Tioestreptona y Vitamina E-TPGS, a dichas composiciones para su uso en métodos de tratamiento del cáncer, y a métodosin vitropara reducir la viabilidad celular, incluyendo los métodos la administración de Tioestreptona y Vitamina E-TPGS.

Antecedentes de la invención

El tratamiento para diversos cánceres puede incluir la administración de agentes para destruir células cancerosas en un sujeto con el cáncer. Los tratamientos actuales contra el cáncer están limitados por los relativamente pocos compuestos o agentes que destruyan las células cancerosas y que puedan administrarse de forma segura a pacientes con cáncer.

Cunniff, B et al; PLOS ONE, VOL. 10, Núm. 5, 26 de mayo de 2015, abordan un enfoque terapéutico para el mesotelioma maligno basándose en la desactivación del metabolismo del peróxido mitocondrial a través del direccionamiento combinatorio de peroxirredoxina.

Yang, C. et al; THERANOSTICS, vol. 8, núm. 2, 1 de enero de 2018 abordan la aplicación de vitamina E TPGS para el suministro de fármacos.

Songwei T. et al; DRUG DELIVERY, vol. 24, núm. 1, 1 de enero de 2017 abordan la nanomedicina basada en succinato de d-a-tocoferilo y polietilenglicol para la terapia contra el cáncer.

El documento US 2010/120896A1 divulga productos antibióticos de una vez al día para tratar Staphylococcus aureus resistente a meticilina.

El documento US 3916027A divulga un concentrado de premezcla para la adición a pienso para animales y aves de corral que consiste esencialmente en violeta de genciana, que es un inhibidor fungicida selectivo de moho de Candida albicans, y el resto en ingredientes inertes.

El documento US 3551554A divulga un método para mejorar la penetración tisular de agentes fisiológicamente activos.

El documento WO 02/102400A1 divulga el uso de los compuestos peptídicos macrocíclicos micrococina y tioestreptona como agentes anticancerosos que se afirma que presentan toxicidad selectiva contra células cancerosas.

Compendio de la invención

En un primer aspecto de la invención, se proporciona una composición que comprende Tioestreptona y Vitamina E-TPGS.

En un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición según el primer aspecto para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto, comprendiendo el tratamiento administrar la composición al sujeto. En un tercer aspecto de la invención, se proporciona un métodoin vitropara reducir la viabilidad celular en una población de células que comprende células cancerosas. El método comprende poner en contacto una población de células con Tioestreptona y Vitamina E-TPGS, en donde la población de células comprende células cancerosas y la puesta en contacto esin vitro.

Por lo tanto, en realizaciones del tercer aspecto, se proporcionan métodosin vitropara reducir la viabilidad celular en una población de células que comprende células cancerosas, incluyendo los métodos: poner en contacto una población de células que incluyen células cancerosas con Tioestreptona (TS) y Vitamina E-TPGS, en condiciones y durante un período de tiempo suficientes para una reducción estadísticamente significativa de la viabilidad de una pluralidad de células cancerosas. En algunas realizaciones, el método también incluye proporcionar una población de células que incluye células cancerosas.

En ciertas realizaciones, la TS y la vitamina E-TPGS tienen un efecto sinérgico en la reducción de la viabilidad en la pluralidad de células cancerosas. En algunas realizaciones, la etapa de puesta en contacto comprende adicionalmente poner en contacto las células cancerosas con violeta de genciana (VG). En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye administrar una composición que incluye la Tioestreptona y vitamina E-TPGS a las células cancerosas.

En algunas realizaciones, la Tioestreptona y la vitamina E-TPGS se suministran como parte de una composición, en donde la composición incluye adicionalmente de manera opcional uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, y la composición incluye adicionalmente de manera opcional dimetilsulfóxido (DMSO).

En el segundo aspecto, las células cancerosas están en un sujeto, y la puesta en contacto incluye administrar la TS y la vitamina E-TPGS, y opcionalmente el VG al sujeto. En algunas realizaciones, la administración incluye administración sistémica. En algunas realizaciones, la administración sistémica incluye una o más de administración entérica y administración parenteral. En algunas realizaciones, la cantidad de TS administrada en un periodo de 24 horas varía de 10 ng a 5 g. En algunas realizaciones, la cantidad de vitamina E-TPGS administrada en un período de 24 horas varía de 10 ng a 500 g. En algunas realizaciones, la cantidad de vitamina E-TPGS administrada a un sujeto en una sola dosis es como máximo 30 g. En algunas realizaciones, la vitamina E-TPGS se administra en 1, 2, 3, 4, 5 o más dosis durante un período de 24 horas. En algunas realizaciones, la cantidad de VG administrada en un periodo de 24 horas varía de 10 ng a 200 mg. En algunas realizaciones, las cantidades de uno o más de TS, vitamina E-TPGS y VG se seleccionan cada una independientemente dentro y entre cada uno de uno o más períodos de 24 horas.

En ciertas realizaciones del segundo y tercer aspecto, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y Vitamina E-TPGS. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En algunas realizaciones, el método también incluye la puesta en contacto con una composición que comprende VG.

En algunas realizaciones del segundo y tercer aspecto, la concentración molar de la TS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 5000 pM. En ciertas realizaciones, la concentración molar del VG en la composición está en un intervalo de 10 nM a 500 pM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 132 mM. En algunas realizaciones, las una o más composiciones incluyen adicionalmente uno o más de un portador y excipiente farmacéuticamente aceptables.

En algunas realizaciones del segundo y tercer aspecto, las células cancerosas incluyen células de mesotelioma maligno. En ciertas realizaciones, las células cancerosas incluyen células de cáncer de ovario.

En algunas realizaciones del segundo aspecto, el sujeto es un mamífero, y opcionalmente es un ser humano. En algunas realizaciones, las células cancerosas se ubican en el sujeto en una o más de: la pleura de los pulmones, el peritoneo, el pericardio y latúnica vaginalis.En ciertas realizaciones, las células cancerosas se ubican en el sujeto en uno o más de: los ovarios, la cavidad peritoneal, el fluido peritoneal y el peritoneo. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un cáncer que se presenta con una efusión múltiple. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene cáncer de ovario. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene mesotelioma maligno.

En algunas realizaciones del segundo aspecto, un medio para administrar una composición de la invención comprende la infusión en una cavidad corporal del sujeto. En algunas realizaciones, los medios de infusión comprenden utilizar un catéter para administrar la composición en una cavidad del sujeto. En algunas realizaciones, la administración incluye un tratamiento primario proporcionado al sujeto. En algunas realizaciones, al sujeto se le administran adicionalmente uno o más de un régimen quirúrgico, un régimen de radioterapia y un régimen de quimioterapia.

En algunas realizaciones, la composición del primer aspecto también incluye violeta de genciana (VG) o un derivado funcional de VG del mismo. En algunas realizaciones, la composición también incluye dimetilsulfóxido (DMSO). En ciertas realizaciones, la concentración molar de la TS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 5000 pM. En algunas realizaciones, la concentración molar del VG o el derivado funcional de VG en la composición está en un intervalo de 10 nM a 10 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar del derivado funcional de vitamina E-TPGS o vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 140 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la Vitamina E-TPGS o del derivado funcional de la vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 132 mM. En algunas realizaciones, la composición también incluye uno o más de un portador y excipiente farmacéuticamente aceptables.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es un gráfico que muestra los resultados de estudios que evaluaron la sensibilidad de células LP9 y HM tratadas con VitE-TPGS durante 48 horas. Las células LP9 son células mesoteliales inmortalizadas, no tumorígenas. Las células HM son células de mesotelioma maligno.

La Figura 2A-B proporciona gráficos que muestran la sensibilidad de células LP9 (Fig. 2A) y células HM (Fig. 2B) tratadas con TS o TS diluidas en VitE (33 mM)-TPGS al 5% /NaCl al 0,9%. Se calcularon las CI50 para TS sola o combinada con VitE-TPGS. Los gráficos muestran la viabilidad frente al log [TS] pM.

La Figura 3 proporciona un histograma que muestra la carga tumoral evaluada mediante la formación de imágenes de luciferasa de tumoresin vivo.Los animales tratados con TS/GV tenían tumores ~50% más pequeños en comparación con los animales de control a 35 DPI. (*p < 0,05, ***p < 0,001, ****p < 0,0001, ANOVA de 2 vías con prueba de comparaciones múltiples de Tukey entre grupos. N = 6 animales por grupo)

La Figura 4 es un gráfico que muestra los pesos de los animales medidos a lo largo del experimento. Obsérvese la pérdida de peso significativa en los últimos ~10 días en todos los grupos excepto el grupo de TS/GV/VitE. Debido a la importante pérdida de peso en los animales de control, se finalizó el experimento.

La Figura 5 es un histograma que muestra el peso tumoral de masas tumorales resecadas quirúrgicamente 42 días después de la inyección (DPI) después de cuatro inyecciones de compuestos de ensayo.

Descripción detallada

Todas las referencias en el presente documento a métodos de tratamiento mediante terapia o cirugía deben interpretarse como referencias a compuestos, composiciones farmacéuticas o medicamentos para su uso en esos métodos, o a métodosin vitro.No se reivindican métodos de tratamiento mediante terapia o cirugía.

Ahora se ha determinado que la puesta en contacto células cancerosas con una composición que comprende Tioestreptona (TS) y Vitamina E-TPGS (también denominada en el presente documento: VitE y VitE-TPGS) aumenta la eficacia de destrucción de células cancerosas de la administración de TS. Se ha identificado ahora que la puesta en contacto una célula cancerosa con TS en disolución con VitE potencia el efecto terapéutico anticanceroso de TS en comparación con la puesta en contacto de una célula cancerosa con TS en ausencia de VitE. Se ha encontrado ahora que la puesta en contacto una célula cancerosa o una pluralidad de células cancerosas con una composición que comprende TS y VitE tiene una eficacia de destrucción de células cancerosas TS potenciada, lo que aumenta la utilidad de TS como agente terapéutico contra el cáncer. Aunque no se desea estar limitado por una teoría particular, la actividad mejorada de la TS contra células cancerosas puede resultar del aumento de disponibilidad de la TS cuando está en solución con VitE, permitiendo así más actividad de destrucción de células cancerosas de la TS en la solución. Por tanto, la misma cantidad de TS puede tener más eficacia de destrucción de células cancerosas cuando está en presencia de VitE que cuando no está en presencia de VitE. Otro beneficio de la actividad de destrucción de células TS potenciada cuando está en solución con VitE es la capacidad de administrar una dosis menor de TS a un sujeto debido a su aumento de eficacia en la destrucción de células cancerosas. El aumento de actividad de la TS en VitE permite la administración de cantidades más bajas de TS, lo que puede reducir efectos secundarios tales como la toxicidad y/u otros efectos indeseables. La administración de una composición que comprende TS y VitE, opcionalmente combinada con la administración de uno o más de otros compuestos terapéuticos contra el cáncer tales como VG y TLK-199, da como resultado un efecto sinérgico de los efectos de destrucción de células cancerosas de la TS y los compuestos terapéuticos en comparación con los mismos tratamientos sin inclusión de VitE. Se ha encontrado que la administración de una solución que comprende TS y VitE-TS y opcionalmente la administración de uno o más compuestos terapéuticos adicionales contra el cáncer a una célula cancerosa y/o un sujeto con cáncer da como resultado un efecto de tratamiento sinérgico en donde se produce más muerte de células cancerosas a partir del tratamiento que la que se produce cuando se administra TS en solución sin VitE. Se pueden poner en contacto una o más células cancerosas con una composición que comprende TS y VitE como un método de tratamiento para el cáncer. Una realización adicional incluye poner en contacto una o más células cancerosas con TS en VitE y también incluye poner en contacto las una o más células cancerosas con otro compuesto terapéutico contra el cáncer, tal como, pero sin limitarse a: VG, TLK-199 u otro compuesto terapéutico contra el cáncer para tratar el cáncer en una célula, tejido o sujeto.

La tioestreptona es un compuesto antibiótico que también se conoce por otros nombres que incluyen, pero sin limitarse a: Briamicina, Tiactina, alaninamida, HR4S203Y18 etc. La VitE utilizada en ciertas realizaciones de métodos y composiciones de la invención es vitamina E-TPGS, que es succinato de D-a-tocoferil polietilenglicol, también denominado succinato de D-a-tocoferil polietilenglicol 1000. Como se emplea en el presente documento, el término VitE se utiliza indistintamente con los términos VitE-TPGS y vitamina E-TPGS.

El violeta de genciana (VG), también conocido como violeta cristal y violeta de metilo, es un tinte de trifenilmetano con propiedades antibacterianas, antifúngicas, antihelmínticas, anti-tripanosomales, antiangiogénicas y antitumorales. TLK-199, nombre químico: 2-amino-5-(((R)-3-(benciltio)-1-(((S)-2-etoxi-2-oxo-1-feniletil)amino)-1 -oxopropan-2-il)amino)-5-oxopentanoato de (S)-etilo, también se conoce como hidrocloruro de Ezatiostat. Se ha utilizado TLK-199 como tratamiento para trastornos de la médula ósea, tales como el síndrome mielodisplásico (SMD).

En el presente documento se describen métodos para poner en contacto células cancerosas con TS en una composición con VitE para tratar cáncer en células, tejidos y sujetos. La invención reivindicada utiliza una combinación de Tioestreptona y Vitamina E-TPGS. Las composiciones utilizadas en la invención pueden ser una composición que comprende TS en VitE, y que incluye adicionalmente uno o más agentes de direccionamiento o agentes de suministro. El tratamiento con una composición que comprende TS y VitE puede comprender poner en contacto una o más células cancerosas con el agente o agentes, en donde la puesta en contacto da como resultado la muerte de una o más de las células cancerosas que se han puesto en contacto. En ciertas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende TS y VitE y uno o más de VG, TLK-199, un agente de direccionamiento y un compuesto terapéutico contra el cáncer. En ciertas realizaciones de la invención, se administra a un sujeto una composición que incluye TS con VitE y también se administran al sujeto una o más composiciones que comprenden uno o más de VG, TLK-199, un agente de direccionamiento y un compuesto terapéutico para tratar el cáncer. En ciertas realizaciones de la invención, una combinación que comprende una composición que comprende TS en VitE y una composición que comprende TLK-199 se administra a una célula cancerosa para tratar el cáncer. En ciertas realizaciones de la invención, se administra una combinación de una composición que comprende TS y VitE y al menos una composición que comprende uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer a una célula cancerosa para tratar el cáncer.

Las composiciones y métodos de la invención se pueden utilizar para tratar a un sujeto que tiene o se considera que está en riesgo de tener un cáncer. Por tanto, los métodos y composiciones de la invención son útiles para tratar cánceres en células y en sujetos. Las células que se pueden tratar utilizando una composición que comprende TS y VitE incluyen, pero sin limitarse a, células cancerosas. Una célula cancerosa que se trata utilizando un método, o una o más composiciones de la invención puede estarin vitroen el tercer aspecto oin vivoen el segundo aspecto. Una célulain vivoestá en un sujeto.

Como se emplea en el presente documento, el término "una o más" cuando se utiliza en referencia a una célula significa una única célula o una pluralidad de células. Una pluralidad de células incluye al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 50, 100, 500, 1.000, 5.000, 10.000, 50.000, 100.000, 500.000, 1.000.000, 5.000.000, 10.000.000 o más células, incluyendo todos los números enteros intermedios. En algunas realizaciones de la invención, una célula o pluralidad de células está en cultivo celular, en el tercer aspecto, o está en un sujeto, en el segundo aspecto. Una pluralidad de células puede ser un conjunto homogéneo o heterogéneo de células. Como se emplea en el presente documento, una pluralidad homogénea de células significa una pluralidad de células en donde una o más características celulares de interés son las mismas para todas las células de la pluralidad. Se entenderá que una pluralidad homogénea de células se puede considerar homogénea basándose en que cada una de las células tiene una o más características de interés que son las mismas, por ejemplo, son células cancerosas, pero no es necesario que las células sean completamente idénticas y los rasgos o características, distintas de las características de interés pueden diferir en diferentes células de la pluralidad. En ciertas realizaciones del segundo aspecto de la invención, la pluralidad de células está en un sujeto.

Como se emplea en el presente documento, un sujeto significará un animal vertebrado que incluye, pero sin limitarse a, un ser humano, ratón, rata, cobaya, conejo, vaca, perro, gato, caballo, cabra y primate no humano, p. ej., mono. En ciertas realizaciones del segundo aspecto de la invención, un sujeto puede ser un animal domesticado, un animal salvaje o un animal agrario. Por tanto, el segundo aspecto de la invención se puede utilizar para tratar enfermedades o afecciones en sujetos humanos y no humanos. Por ejemplo, los métodos y composiciones de la invención se pueden utilizar en aplicaciones veterinarias, así como en regímenes de prevención y tratamiento humanos. En algunas realizaciones de la invención, el sujeto es un ser humano. En algunas realizaciones de la invención, un sujeto tiene uno o más cánceres. En algunas realizaciones, un sujeto exhibe, también referido en el presente documento como "presenta", una efusión múltiple.

Una composición que comprende TS y VitE se puede administrar a una célula, tejido y/o sujeto para tratar uno o más tipos diferentes de cáncer, incluyendo, pero sin limitarse a: un mesotelioma maligno, un cáncer de ovario, un carcinoma, un sarcoma, una leucemia, un linfoma, un mieloma, un glioma, cáncer de mama, un cáncer epitelial, cáncer uterino, cáncer vaginal, cáncer de próstata, cáncer testicular, cáncer de pene, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer de cuello uterino, cáncer de garganta, cáncer oral, cáncer pancreático, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, melanoma, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de estómago, cáncer de hueso, cáncer de tejido conectivo, cáncer de vejiga, cáncer ocular, cáncer nasal, cáncer adiposo, cáncer de tiroides, linfoma no Hodgkin, cáncer de intestino delgado, tumor de Wilms, cáncer gastrointestinal, cáncer del sistema nervioso central (SNC), cáncer del sistema nervioso periférico (SNP), cáncer esofágico, sarcoma de Karposi, cáncer de vesícula biliar, linfoma de Hodgkin, mieloma múltiple, osteoscarcoma, neuroblastoma, rabdomioscarcoma, cáncer de cavidad nasal, retinoblastoma y cáncer salival. En ciertas realizaciones, las células cancerosas se ubican en el sujeto en uno o más de: los ovarios, la cavidad peritoneal, el fluido peritoneal y el peritoneo. Algunas realizaciones de los métodos y composiciones de la invención se pueden utilizar para tratar un cáncer o tumor que se presenta con una efusión múltiple.

Una composición de TS y VitE se puede utilizar y administrar para tratar numerosos tipos diferentes de células, incluyendo, pero sin limitarse a: una célula pleural, una célula peritoneal, una célula dérmica, una célula de tejido mamario, una célula ovárica, una célula de mesotelioma, una célula muscular, una célula del sistema circulatorio, una célula de tejido conectivo, una célula ósea, una célula exocrina, una célula endocrina, una célula orgánica, una célula de mesénquima, una célula de tejido conectivo, una célula epitelial, una célula endotelial, una célula neuronal, una célula glial, una célula glandular, una célula estromal, una célula renal, una célula tiroidea, una célula madre, una célula hematopoyética, una célula linfoide, una célula mieloide, una célula eritroide, un cardiomiocito, un hepatocito, un astrocito, un oligodendrocito y un adipocito. En ciertas realizaciones de la invención, una célula tratada mediante un método que comprende poner en contacto una célula con una composición que comprende TS y VitE con o sin poner en contacto la célula con una o más composiciones que comprenden uno o más de Vg , TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer puede ser una célula cancerosa, y el cáncer puede ser cualquiera de los cánceres mencionados anteriormente u otros cánceres o neoplasias conocidos en la técnica. En algunas realizaciones de la invención, el cáncer es un mesotelioma maligno y en ciertas realizaciones de la invención, el cáncer es un cáncer de ovario.

En ciertas realizaciones de la invención, una pluralidad de células cancerosas comprende un tumor que incluye células cancerosas en proximidad espacial entre sí. En algunas realizaciones de la invención, una pluralidad de células puede no estar en proximidad espacial entre sí, por ejemplo, pueden estar en un sujeto, pero pueden estar separadas espacialmente en dos o más regiones espaciales, tejidos y/u órganos diferentes del sujeto. En algunas realizaciones de la invención, una pluralidad de células cancerosas comprende uno o más de un cáncer primario y un cáncer secundario (por ejemplo, una metástasis); uno o más cánceres primarios; y/o uno o más cánceres secundarios. Como se emplea en el presente documento, un cáncer primario se utiliza en referencia al cáncer inicial, de origen y un cáncer secundario comprende células cancerosas que se han separado de un cáncer primario y se han trasladado a y están presentes en un tejido u órgano diferente en el sujeto. Una célula cancerosa de un cáncer secundario puede ser del mismo tipo de cáncer que el cáncer primario de origen. En ciertas realizaciones, un sujeto puede tener más de un tipo de cáncer. En ciertas realizaciones de la invención, una célula cancerosa es una célula cancerosa metastásica.

Los ejemplos no limitantes de sujetos a los que se puede aplicar el segundo aspecto de la presente invención son sujetos que han sido diagnosticados, se sospecha que tienen o están en riesgo de tener uno o más cánceres. Los métodos del segundo aspecto de la invención se pueden aplicar a un sujeto que, en el momento del tratamiento que utiliza un método que incluye administrar una composición que comprende TS y VitE con o sin poner en contacto la célula con una o más composiciones que comprenden uno o más de VG, TLK-199, y otro compuesto terapéutico contra el cáncer se ha diagnosticado de un cáncer y (1) está recibiendo tratamiento para uno o más cánceres, (2) ha recibido tratamiento para uno o más cánceres, y/o (3) se le administrará un tratamiento para uno o más cánceres.

En algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, un sujeto está en riesgo de tener o desarrollar uno o más cánceres. En algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, un sujeto está en riesgo de tener o desarrollar un cáncer primario. En algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, un sujeto está en riesgo de tener o desarrollar un cáncer secundario. Un sujeto en riesgo de desarrollar un cáncer primario o un cáncer secundario tiene una mayor probabilidad de desarrollar el cáncer, en comparación con un riesgo de control de desarrollar el cáncer primario o cáncer secundario, respectivamente. En algunas realizaciones de la invención, un nivel de riesgo puede ser estadísticamente significativo en comparación con un nivel de riesgo de control. Un sujeto en riesgo puede incluir, por ejemplo, un sujeto que tiene una anomalía genética, cuya presencia se ha demostrado que tiene una relación correlativa con una mayor probabilidad de desarrollar un cáncer; un sujeto que se ha sometido a un tratamiento para un cáncer primario (por ejemplo, pero sin desear que sea limitante, la eliminación de un tumor primario) pero que se considera que está en riesgo de un cáncer secundario y/o metástasis y/u otro tipo de cáncer; un sujeto que se somete a un tratamiento contra el cáncer distinto de un tratamiento contra el cáncer de la invención; un sujeto que tiene una familia y/o antecedentes médicos personales de uno o más cánceres; un sujeto expuesto a agentes tales como amianto, toxinas químicas o actividades; y/o un sujeto cuyo cáncer se ha tratado previamente y está en remisión aparente.

La eficacia de un tratamiento que comprende administrar una composición que comprende TS y VitE a un sujeto administrando o sin administrar también al sujeto una o más composiciones que comprenden uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer se puede determinar y comparar con valores de control. Un valor de control puede ser un valor predeterminado, que puede adoptar una variedad de formas. Puede ser un único valor de corte, tal como una mediana o media. Esto se puede establecer basándose en grupos comparativos, por ejemplo, en grupos de células o individuos que tienen un cáncer y no se tratan con una composición que comprende TS y VitE para un sujeto administrando o sin administrar también al sujeto una o más composiciones que comprenden uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer. Otro grupo comparativo puede ser un grupo de sujetos con antecedentes de un cáncer y un grupo de sujetos sin tales antecedentes. El valor predeterminado dependerá de la población particular seleccionada. Por consiguiente, el valor predeterminado seleccionado puede tener en cuenta la categoría en donde cae un individuo o célula. Los intervalos y categorías apropiados se pueden seleccionar con no más que experimentación rutinaria por los expertos en la técnica. Como se emplea en el presente documento, "eficaz" y "eficacia" significan un aumento estadísticamente significativo en la muerte de células cancerosas cuando se tratan con un método de la invención, en comparación con un control que tiene el cáncer, pero no se trata con la composición con el mismo método de la invención. Un nivel de muerte celular en un sujeto tratado con una composición que comprende TS y VitE administrando o sin administrar también al sujeto una o más composiciones que comprenden uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer utilizando un método de la invención se puede comparar con un sujeto de control no tratado con la misma combinación terapéutica y la eficacia significa un aumento estadísticamente significativo en el número de células cancerosas que mueren. En algunas realizaciones, el número de células que mueren como resultado de un tratamiento de la invención es mayor que cero, y en ciertas realizaciones de la invención el número de células que mueren como resultado de un tratamiento de la invención es más de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 50, 100, 1000, 10.000 veces el número de células cancerosas que mueren en el control que no se trata con una composición que comprende TS y VitE en un método de la invención.

Se entenderá que los controles pueden ser, además de valores predeterminados, muestras de materiales probados en paralelo con los materiales experimentales. Los ejemplos incluyen muestras de poblaciones de control o muestras de control generadas a través de fabricación para ser analizadas en paralelo con las muestras experimentales; y también un control puede ser una muestra de un sujeto antes, durante o después de un tratamiento de cáncer, incluyendo, pero sin limitarse a un tratamiento de la invención.

Tratamiento

Como se emplea en el presente documento, los términos "tratar", "tratado" o "tratando" cuando se utilizan con respecto a un cáncer pueden referirse a un tratamiento profiláctico que disminuye la probabilidad de que un sujeto desarrolle el cáncer, y también puede referirse a un tratamiento después de que el sujeto haya desarrollado el cáncer para eliminar o mejorar el cáncer, evitar que el cáncer se haga más avanzado (p. ej., metastatizando, diseminando, ampliando, etc.) y/o ralentizar la progresión del cáncer en comparación con la progresión en ausencia de la terapia.

En ciertas realizaciones de la invención, poner en contacto una célula cancerosa con una composición que comprende TS y VitE con o sin poner en contacto también la célula cancerosa con uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer aumenta la probabilidad de muerte de la célula cancerosa, frente a una célula que no se pone en contacto con la composición de TS y VitE.

Estrategias de administración

Una composición que comprende TS y VitE se puede administrar sola o combinada con uno o más de VG, TLK-199, otro agente terapéutico, un agente de direccionamiento y un agente de marcaje. Aunque la TS y la VitE se administran en una única composición farmacéutica, los otros agentes tales como VG, TLK-199, otro compuesto terapéutico contra el cáncer, un agente de direccionamiento y un agente de marcaje se pueden administrar en una o más composiciones separadas. Una composición que comprende TS y VitE se puede administrar a un sujeto utilizando medios de administración únicos o utilizando más de un medio de administración dependiendo de factores tales como la ubicación de un cáncer, el momento deseado de administración, el estado de un sujeto y el cáncer, etc. En algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, una composición que comprende TS y VitE es una composición separada de una composición que comprende VG, TLK-199, otro agente terapéutico, un agente de direccionamiento y un agente de marcaje y las dos o más composiciones diferentes se pueden administrar al mismo tiempo, o se pueden administrar secuencialmente, utilizando un régimen donde su administración se solapa en parte o en su totalidad. Se entenderá que, en algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, dos o tres de TS en VitE, VG y TLK-199 se pueden administrar al mismo tiempo y en ciertas realizaciones de la invención, dos o tres de TS en VitE, VG y TLK-199 están en diferentes composiciones cuando se administran. En un ejemplo no limitante, en algunas realizaciones de la invención, la TS en VitE y el TLK-199 están en una composición farmacéutica y se administran a un sujeto juntos, y la VG está en una composición farmacéutica diferente que se administra al mismo tiempo que, o en un momento diferente del que se administran al sujeto la TS en VitE y el TLK-199. El efecto sinérgico de la administración de TS en VitE, VG y TLK-199 no requiere su administración en una única composición. En otro ejemplo no limitante, TS en VitE y TLK-199 se proporcionan en la misma composición farmacéutica y se administran juntos a un sujeto y VG no se administra al sujeto como parte del tratamiento.

En algunas realizaciones de métodos de tratamiento del segundo aspecto de la invención, TS en VitE se administra a un sujeto con un cáncer al que también se le administran uno o más agentes terapéuticos y tratamientos distintos. Así, por ejemplo, la administración de TS en VitE se puede realizar junto con un agente quimioterapéutico y puede potenciar la eficacia de destrucción de células cancerosas del agente quimioterapéutico. Un ejemplo no limitante de un agente quimioterapéutico es: un taxano, una antraciclina, un fármaco con base de platino, un antimetabolito, un análogo de base, un análogo de nucleósido, un análogo de nucleótido, un antifolato, metotrexato, un alcaloide, vincristina, vinblastina, irinotecán, etopósido, velcade, un inhibidor de tirosina quinasa, un inhibidor de serina/treonina quinasa, bleomicina, ciclofosfamida, citoxano, everolimus y metformina. En ciertas realizaciones de la invención, la TS en VitE en los métodos y composiciones de la invención se proporcionan junto con otras moléculas tales como agentes de direccionamiento y agentes de marcaje y se utilizan en los métodos de tratamiento de la invención. Un agente de direccionamiento o agente de marcaje se puede unir a TS, VG, TLK-199 u otro compuesto terapéutico contra el cáncer e incluir en un método de tratamiento de la invención utilizando medios conocidos en la técnica tales como, pero sin limitarse a, mediante un enlace covalente. En algunas realizaciones de la invención, un agente de direccionamiento o marcado se puede incorporar a TS cuando se produce o se puede añadir después de la producción utilizando métodos de fabricación química rutinarios.

Los agentes de direccionamiento útiles en algunas realizaciones de la invención son agentes de direccionamiento que dirigen o ayudan a dirigir TS en VitE, y en ciertas realizaciones de la invención uno o más de VG, TLK-199, y otro compuesto terapéutico contra el cáncer a una célula específica que se debe tratar tal como una célula dérmica, célula de tejido ovárico, una célula plural, una célula peritoneal, una célula de tejido mamario, una célula muscular, una célula madre, una célula circulatoria, una célula de tejido conectivo, una célula ósea, una célula exocrina, una célula endocrina, una célula orgánica, una célula de mesénquima, una célula de tejido conectivo, una célula epitelial, una célula endotelial, una célula neuronal, una célula glial, una célula glandular, una célula estromal, una célula renal, una célula tiroidea, una célula madre, una célula hematopoyética, una célula linfoide, una célula mieloide, una célula eritroide, un cardiomiocito, un hepatocito, un astrocito, un oligodendrocito, un ovocito o un adipocito. Ciertos agentes de direccionamiento útiles en algunas realizaciones de la invención pueden ser agentes que dirigen o ayudan a dirigir un compuesto tal como TS, VG, TLK-199 u otro compuesto terapéutico contra el cáncer a un orgánulo tal como una mitocondria.

Un agente de direccionamiento elegido dependerá de la naturaleza del cáncer. En algunos casos, puede ser deseable dirigir la combinación de agentes a una o más regiones pleurales, células pulmonares, regiones peritoneales, células peritoneales, células dérmicas, células de tejido mamario, células musculares, células circulatorias, células del tejido conectivo, células madre, células óseas, células exocrinas, células endocrinas, células de órganos, células de mesénquima, células del tejido conectivo, células epiteliales, células endoteliales, células neuronales, células gliales, células glandulares, células estromales, células renales, células tiroideas, células madre, células hematopoyéticas, células linfoides, células mieloides, células eritroides, cardiomiocitos, hepatocitos, astrocitos, oligodendrocitos, ovocitos y adipocitos. Los expertos en la técnica serán conscientes de, y serán capaces de, seleccionar y utilizar agentes de direccionamiento adecuados en realizaciones de la invención utilizando métodos rutinarios. Un ejemplo no limitante de un agente de direccionamiento útil en ciertas realizaciones de la invención es un péptido de penetración celular, un agente de internalización celular, secuencia, una molécula pequeña, un polinucleótido, un liposoma, un liposoma pegilado, un acuasoma, un polímero biodegradable, una nanopartícula, un oligonucleótido y otros polipéptidos de direccionamiento.

La invención en algunas realizaciones incluye un agente que dirige uno o más de TS, VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer a las mitocondrias. En algunas realizaciones de la invención, la TS que está en VitE está en asociación con (por ejemplo: está unida a) un agente de direccionamiento mitocondrial. Un ejemplo no limitante de un agente de direccionamiento mitocondrial es un agente de direccionamiento mitocondrial basado en Gramicidina S, un péptido de direccionamiento mitocondrial; una nanopartícula que se traslada a las mitocondrias, y un sistema de suministro basado en liposomas para las mitocondrias, un agente que utiliza el sistema translocasa de carnitina-acilcarnitina, citocromos y malato deshidrogenasa. Un ejemplo no limitante de un agente de direccionamiento mitocondrial que se puede utilizar en los métodos de la invención para dirigir uno, dos o tres de TS, VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer a las mitocondrias de una célula es trifenilfosfonio (TPP). Diekert, K., et al., en PNAS (1999) vol 96, Num. 21, 11752-11757; Murphy, M. en Biochimica et Biophysica Acta 1777 (2008) 1028-1031; Addya, S., et al., en J. Cell Biology, (1997) Vol. 139, Num. 3, 589-599; Del Gaizo, V., et al., (2003) en Mol. Gen. y Metabol., Vol. 80, 170-180 exponen ejemplos adicionales de señales de direccionamiento que se pueden utilizar en algunas realizaciones de la invención.

Los agentes de marcaje se pueden utilizar en ciertas realizaciones de métodos, compuestos y composiciones de la invención para determinar la localización de uno o más de: TS, VG, TLK-199 y otros compuestos terapéuticos contra el cáncer en células y tejidos a los que se han administrado utilizando una realización de un método de la invención y también se pueden utilizar para evaluar la localización en células, tejidos u orgánulos de compuestos de tratamiento que han sido administrados. Los procedimientos para unir y utilizar agentes de marcaje tales como marcadores enzimáticos, colorantes, radiomarcadores, marcadores fluorescentes, etc. son bien conocidos en la técnica.

Las composiciones, compuestos y métodos de la invención se pueden potenciar mediante su utilización combinados con otros procedimientos para tratar un cáncer. En algunos casos, un procedimiento de tratamiento puede implicar la administración de otro agente terapéutico o tratamiento tal como un medicamento y/o cirugía, terapia de radiación, etc. Por lo tanto, en algunas realizaciones de la invención, la administración de una composición que comprende TS y VitE se realiza en uno o más de: antes de, coincidente con o después de la administración de otra terapia para tratar el cáncer. Los métodos de tratamiento de la invención que incluyen la administración de una composición que comprende TS y VitE se pueden utilizar en cualquier estadio de un cáncer incluyendo en un pre-cáncer, displasia, tumor, metástasis, remisión, recaída, etc. Los métodos del segundo aspecto de la invención también se pueden utilizar para sujetos que se han tratado previamente con uno o más de otros métodos antineoplásicos, quimioterapéuticos, quirúrgicos o de radiación que no tuvieron éxito, tuvieron un éxito mínimo y/o ya no tienen éxito en la ralentización o detención de la progresión del cáncer en el sujeto.

Cantidades eficaces

La TS y la VitE se administran a una célula (en el tercer aspecto) o sujeto (en el segundo aspecto) en una cantidad eficaz para tratar un cáncer. Una "cantidad eficaz para tratar un cáncer" es una cantidad necesaria o suficiente para realizar un efecto biológico deseado. Por ejemplo, una cantidad eficaz de TS y VitE en un método de la invención es la cantidad necesaria para conseguir uno o más de (i) ralentizar o detener la progresión del cáncer; (ii) destruir una pluralidad de células cancerosas, y (iii) revertir uno o más síntomas del cáncer. Según algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, una cantidad eficaz es la cantidad de TS en VitE, sola o combinada con otro medicamento o tratamiento para un cáncer que cuando se administra da como resultado una respuesta terapéutica deseada en el sujeto, incluyendo uno o más de: prevención del cáncer, prevención de una metástasis del cáncer y tratamiento del cáncer. En algunas realizaciones de la invención, un efecto biológico deseado puede ser uno o más de: muerte de una pluralidad de células cancerosas; la mejora y o eliminación absoluta de los síntomas resultantes del cáncer; una supresión parcial o completa del cáncer, como se evidencia, por ejemplo, por una prueba de diagnóstico que indica que el sujeto está libre del cáncer, o que se reduce uno o más de la presencia, nivel o tamaño tumoral, metástasis y gravedad del cáncer.

Típicamente, se determinará una cantidad eficaz de TS en VitE en ensayos clínicos, estableciendo una dosis eficaz para una población de prueba frente a una población de control en un estudio ciego. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz será la que dé como resultado una respuesta deseada, por ejemplo, una cantidad que disminuye un cáncer; mantiene un cáncer en remisión en células y/o un sujeto con el cáncer. Por tanto, una cantidad eficaz para tratar un cáncer puede ser la cantidad que cuando se administra aumenta la muerte celular de una pluralidad de células cancerosas en el sujeto a un nivel que es mayor que el nivel de muerte de células cancerosas que ocurriría en el sujeto o tejido sin la administración de la TS en VitE. En caso de tratar un cáncer, una respuesta deseada a un tratamiento de la invención puede ser reducir o eliminar uno o más síntomas o características fisiológicas del cáncer en una célula, tejido y/o sujeto. La reducción o eliminación puede ser temporal o puede ser permanente. El estado del cáncer se puede verificar utilizando métodos conocidos en la técnica. En algunas realizaciones de la invención, una respuesta deseada al tratamiento de un cáncer puede comprender retrasar o prevenir la aparición del cáncer, ralentizar, retrasar o detener la progresión de un cáncer, mantener la remisión de un cáncer, etc.

Una cantidad eficaz de TS administrada en solución con VitE en un método de tratamiento de la invención también se puede determinar evaluando los efectos fisiológicos de la administración de TS en VitE en una célula o sujeto, tal como un aumento en la muerte de células cancerosas, una disminución del cáncer, etc. después de la administración. Como en el presente documento, los términos "administrando" y "administrar" cuando se utilizan en referencia al tratamiento de una o más células cancerosas significan poner en contacto una o más células cancerosas con TS que está en solución con un compuesto de VitE. En algunas realizaciones de un método de tratamiento de la invención también comprende administrar uno o más de: VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer al sujeto al que se administra la TS en VitE. En ciertas realizaciones de la invención, uno o más de TS, VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer son parte de una composición farmacéutica. En ciertas realizaciones de la invención, la TS en VitE es parte de una composición farmacéutica. En ciertas realizaciones de la invención, una composición que comprende TS en VitE y una o más composiciones que incluyen uno o más de VG, TLK-199 y otro agente terapéutico contra el cáncer se pueden administrar como parte de una, dos o tres composiciones farmacéuticas diferentes, en donde la manera de administración de cada una de las composiciones es adecuada para poner en contacto una o más células cancerosas con TS, VG, TLK-199 y/u otro compuesto terapéutico contra el cáncer. Algunas realizaciones de composiciones farmacéuticas de la invención también incluyen un portador farmacéuticamente aceptable. Se entenderá que si uno o más de TS, VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer son parte de composiciones farmacéuticas separadas, cada una de las composiciones farmacéuticas puede incluir, pero no necesariamente, el mismo portador farmacéuticamente aceptable.

Los ensayos adecuados para determinar la eficacia de TS en VitE y/o una combinación de TS en VitE con uno o más de VG, TLK-199 y otro agente terapéutico contra el cáncer serán conocidos por los expertos en la técnica y se pueden emplear para medir el nivel de la respuesta a un tratamiento y una cantidad y dosificación de la combinación de los compuestos administrados a un sujeto. La cantidad de TS en VitE, así como las cantidades de uno o más de VG, TLK-199 y otro agente terapéutico contra el cáncer se pueden modificar basándose, al menos en parte, en tales mediciones. Los ejemplos no limitantes de mediciones de respuesta a un tratamiento contra el cáncer de la invención incluyen pruebas de diagnóstico, estadificación, medición tumoral, exploraciones del cáncer, etc. La cantidad de un tratamiento se puede variar, por ejemplo, mediante uno o más de: aumento o disminución de la cantidad de una composición farmacéutica administrada, cambio de la composición farmacéutica administrada, cambio de la vía de administración, cambio del momento de la dosificación, cambio de la administración de otro agente terapéutico, un ejemplo no limitante del cual es un agente quimioterapéutico, etc. La cantidad eficaz variará con el cáncer particular que se esté tratando, la edad y el estado físico del sujeto que se esté tratando; la etapa y gravedad del cáncer, la duración del tratamiento, la naturaleza de una terapia anterior, concurrente o inminente (si la hubiera), la vía específica de administración y factores adicionales dentro del conocimiento y experiencia del profesional sanitario. Por ejemplo, aunque no se pretende que sea limitante, una cantidad eficaz de TS puede depender de la manera con la que se suministra, así como si también se incluyen o no VG o TLK-199 en la composición farmacéutica que incluye la TS en VitE. Se entenderá que, en algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, un método terapéutico contra el cáncer puede incluir una o más administraciones de TS en VitE a un sujeto y que al sujeto se le pueden administrar, pero no es necesario, una o más composiciones adicionales que comprenden TS que no está en VitE.

Una cantidad eficaz de TS en VitE, con o sin administración de uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer para el tratamiento de un cáncer puede variar dependiendo de los compuestos específicos incluidos, el modo de administración de los compuestos y si el tratamiento se utiliza solo o combinado con otro agente o compuesto terapéutico. La cantidad eficaz para cualquier aplicación particular también puede variar dependiendo de factores tales como el cáncer que se esté tratando, el compuesto particular que se esté administrando, el tamaño del sujeto o la gravedad del cáncer. Un experto en la técnica puede determinar empíricamente la cantidad eficaz de un compuesto particular de la invención sin necesidad de experimentación excesiva. Combinado con las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, un experto en la técnica puede elegir administrar TS en VitE con o sin uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer, teniendo en cuenta factores tales como potencia del compuesto, biodisponibilidad relativa, peso corporal del paciente, gravedad de los efectos secundarios adversos y modo de administración preferido, para planificar y utilizar un régimen de tratamiento profiláctico o terapéutico eficaz que no produzca toxicidad indeseable sustancial en un sujeto tratado y sea eficaz para tratar un cáncer en el sujeto.

Una dosificación de composición farmacéutica y/o dosificación de TS en VitE y/o uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer puede ser ajustada por un profesional sanitario o veterinario individual, particularmente en caso de cualquier complicación.

En algunas realizaciones, la cantidad de vitamina E-TPGS administrada a un sujeto en una única dosis no es mayor de 30 g. En algunas realizaciones, la vitamina E-TPGS se administra en 1, 2, 3, 4, 5 o más dosis durante un período de 24 horas. En algunas realizaciones, la cantidad de VG administrada en un periodo de 24 horas varía de 10 ng a 200 mg. En algunas realizaciones, la cantidad de una o más de TS, vitamina E-TPGS y VG se seleccionan cada una independientemente dentro y entre cada uno de uno o más períodos de 24 horas. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En algunas realizaciones, el método también incluye la puesta en contacto con una composición que comprende VG. En algunas realizaciones, la concentración molar de la TS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 5000 pM. En ciertas realizaciones, la concentración molar del VG en la composición está en un intervalo de 10 nM a 10 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 145 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 132 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la vitamina E-TPGS en la composición es al menos 10 nM, 50 nM, 100 nM, 1000 nM, 10.000 nM, 1 mM, 10 mM, 20 mM, 30 mM, 40 mM, 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM, 100 mM, 110 mM, 120 mM, 130 mM, 140 mM, 150 mM o 160 mM. Para su uso en un método de tratamiento combinado de la invención, se determina independientemente una cantidad terapéuticamente eficaz de cada uno de TS en VitE, VG, TLK-199 y/u otro agente terapéutico contra el cáncer y típicamente varía de 0,01 mg/kg a aproximadamente 1,0 g/kg, de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 500 mg/kg, o de aproximadamente 0,2 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, en una o más administraciones de dosis diarias, durante uno o más días.

En algunas realizaciones, la cantidad de TS administrada en un periodo de 24 horas varía de 10 ng a 1 g. En algunas realizaciones, la cantidad de vitamina E-TPGS administrada en un período de 24 horas varía de 10 ng a 500 g. En algunas realizaciones, la cantidad de vitamina E-TPGS administrada a un sujeto en una única dosis no es mayor de 30 g. En algunas realizaciones, la vitamina E-TPGS se administra en 1,2, 3, 4, 5 o más dosis durante un período de 24 horas. En algunas realizaciones, la cantidad de VG administrada en un periodo de 24 horas varía de 10 ng a 200 mg. En algunas realizaciones, la cantidad de una o más de TS, vitamina E-TPGS y VG se seleccionan cada una independientemente dentro y entre cada uno de uno o más períodos de 24 horas.

En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En ciertas realizaciones, la puesta en contacto incluye la puesta en contacto con una o más composiciones que incluyen TS y vitamina E-TPGS. En algunas realizaciones, el método también incluye la puesta en contacto con una composición que comprende VG. En algunas realizaciones, la concentración molar de la TS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 5000 pM. En ciertas realizaciones, la concentración molar del VG en la composición está en un intervalo de 10 nM a 10 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 132 mM. En algunas realizaciones, la concentración molar de la vitamina E-TPGS en la composición es al menos 10 nM, 100 nM, 1000 nM, 10.000 nM, 1 mM, 10 mM, 50 mM, 60 mM, 70 mM, 80 mM, 90 mM, 100 mM, 110 mM, 120 mM, 130 mM, 140 mM, 150 mM o 160 mM. En algunas realizaciones, las una o más composiciones incluyen adicionalmente uno o más de un portador y excipiente farmacéuticamente aceptables.

La cantidad absoluta administrada dependerá de una variedad de factores que incluyen un tratamiento simultáneo, el número de dosis y los parámetros individuales del sujeto que incluyen edad, condición física, tamaño y peso. Estos son factores bien conocidos por los expertos en la técnica y pueden abordarse con experimentación no más que rutinaria. En algunas realizaciones, se puede utilizar una dosis máxima, es decir, la dosis más alta segura según el criterio médico razonable. Dependiendo de la vía de administración del fármaco (administración directa frente a sistémica) la concentración del fármaco para administración clínica variará. En ciertas realizaciones de la invención, el porcentaje de VitE-TPGS en una composición que comprende TS solubilizado en VitE-TPGS puede ser de hasta 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, incluyendo todos los porcentajes dentro del intervalo proporcionado. En algunas realizaciones del segundo aspecto de la invención, una composición administrada a un sujeto para tratar un cáncer comprende TS solubilizada con VitE-TPGS al 5%. En algunas realizaciones de los métodos de la invención, también se incluye dimetilsulfóxido (DMSO) en una o más composiciones administradas a un sujeto.

También se contemplan múltiples dosis de TS en VitE. En algunos casos, la TS en VitE se administra a un sujeto una, dos, tres o más veces, al menos diariamente, cada dos días, semanalmente, cada dos semanas, mensualmente, etc. Las dosis se pueden administrar una vez al día o más de una vez al día, por ejemplo, 2, 3 o más veces en un período de 24 horas. En algunas realizaciones de la invención, una composición que comprende TS y VitE se administra a un sujeto cero, una o más veces al día durante 1,2, 3, 4, 5, 6, 7 días en una semana. Como ejemplo no limitante, una composición de la invención que comprende TS y VitE se puede administrar una vez el día 1, cero veces el día 2, dos veces el día 3, cero veces los días 4 y 5, y una vez los días 6 y 7 en una semana. El programa de administración se puede determinar basándose en la necesidad de un sujeto. En algunas realizaciones de la invención, una composición que comprende TS y VitE se administra a un sujeto durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 o más semanas, con una frecuencia de una o más veces en uno o más días de una o más de las semanas. Un programa de administración de una composición de la invención que comprende TS y VitE puede incluir una frecuencia de administración regular o irregular y la frecuencia se puede determinar basándose en parámetros tales como, pero sin limitarse a: la gravedad de la afección, etc.

Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar solas, combinándolas entre sí, y/o combinándolas con otras terapias farmacológicas, u otros regímenes de tratamiento que se administran a sujetos con un cáncer. Las composiciones farmacéuticas utilizadas en las realizaciones de la invención son preferiblemente estériles y contienen una cantidad eficaz de una combinación de TS en VitE para hacer uno o más de: destruir una célula con la que se ha puesto en contacto y producir la respuesta terapéutica deseada en una unidad de peso o volumen adecuada para la administración a un sujeto.

La dosificación de una composición farmacéutica que comprende TS y VitE que se administra a un sujeto puede elegirse según diferentes parámetros, en particular según el modo de administración utilizado y el estado del sujeto. Otros factores pueden incluir el periodo de tratamiento deseado. En caso de que la respuesta en un sujeto sea insuficiente a las dosis iniciales aplicadas, pueden emplearse dosis más altas (o dosis eficazmente más altas por una vía de suministro diferente, más localizada) en la medida en que lo permita la tolerancia del paciente.

Métodos de administración

Se dispone de una variedad de vías de administración para TS en VitE. El modo de administración particular seleccionado dependerá de la afección particular que se esté tratando y la dosificación requerida para la eficacia terapéutica. Los métodos de esta invención, hablando en términos generales, se pueden poner en práctica utilizando cualquier modo de administración que sea médicamente aceptable, lo que significa cualquier modo que produzca niveles eficaces de tratamiento sin provocar efectos adversos clínicamente inaceptables. En algunas realizaciones de la invención, una composición de TS en VitE se administra por vía oral, entérica, mucosa, percutánea y/o parenteral. El término "parenteral" incluye inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intrapleural, intraperitoneal e intraesternal, o técnicas de infusión. Otras vías incluyen, pero sin limitarse a, nasal (p. ej., a través de un tubo gastronasal), dérmica, vaginal, rectal y sublingual. Las vías de administración de la invención pueden incluir intratecal, intraventricular o intracraneal.

En algunas realizaciones de los métodos de la invención, un medio para administrar una composición que comprende TS en VitE a células y/o un sujeto comprende utilizar un catéter para infundir la composición en una cavidad corporal de un sujeto y/o lavar una cavidad corporal de un sujeto con la composición. Los ejemplos de catéteres que se pueden utilizar en ciertas realizaciones de la invención incluyen, pero sin limitarse a, un catéter intrapleural y un catéter intraperitoneal. En un ejemplo no limitante, se utiliza un catéter intrapleural para administrar una o más dosis de una composición de la invención que comprende TS en VitE en la cavidad pleural de un sujeto con una efusión múltiple. En otro ejemplo no limitante, a un sujeto con cáncer de ovario se le puede administrar una composición de la invención que comprende TS en VitE a la cavidad peritoneal utilizando un catéter intraperitoneal.

En algunas realizaciones de la invención, una composición que comprende TS y VitE, o una o más composiciones que comprenden VG, TLK-199 y/u otro compuesto terapéutico contra el cáncer se puede colocar dentro de una matriz de liberación lenta y administrar mediante la colocación de la matriz en el sujeto. En algunas realizaciones de la invención, uno o más de TS en VitE, VG, TLK-199 y otro agente terapéutico contra el cáncer se pueden administrar a una célula y/o sujeto utilizando nanopartículas recubiertas con un agente de suministro que se dirige a una célula u orgánulo específico, un ejemplo no limitante del cual es una mitocondria.

Uno o más de TS en VitE, VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer se pueden administrar en formulaciones, que se pueden administrar en soluciones farmacéuticamente aceptables, que pueden contener rutinariamente concentraciones farmacéuticamente aceptables de sal, agentes tamponantes, conservantes, portadores compatibles, adyuvantes y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos. Según los métodos de la invención, uno o más de TS en VitE, VG, TLK-199 y otros compuestos terapéuticos contra el cáncer se pueden administrar en una o más composiciones farmacéuticas. En general, una composición farmacéutica comprende la composición de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable. Los portadores farmacéuticamente aceptables son bien conocidos por el experto en la técnica y pueden seleccionarse y utilizarse independientemente utilizando métodos rutinarios. Como se emplea en el presente documento, un portador farmacéuticamente aceptable significa un material no tóxico que no interfiere en la eficacia de la actividad biológica de los ingredientes activos, por ejemplo, la capacidad de TS en VitE para destruir una célula cancerosa.

Los portadores farmacéuticamente aceptables pueden incluir diluyentes, cargas, sales, tampones, estabilizantes, solubilizantes y otros materiales que son bien conocidos en la técnica. Se describen vehículos farmacéuticamente aceptables ilustrativos en la Patente de Estados Unidos Num. 5.211.657 y otros son conocidos por los expertos en la técnica. Tales preparaciones pueden contener rutinariamente sal, agentes tamponantes, conservantes, portadores compatibles y opcionalmente otros agentes terapéuticos. Cuando se utilizan en medicina, las sales deben ser farmacéuticamente aceptables, pero se pueden utilizar convenientemente sales no farmacéuticamente aceptables para preparar sales farmacéuticamente aceptables de las mismas y no están excluidas del alcance de la invención. Entre tales sales farmacológica y farmacéuticamente aceptables se incluyen, pero sin limitarse a, las preparadas a partir de los siguientes ácidos: clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, maleico, acético, salicílico, cítrico, fórmico, malónico, succínico y similares. Asimismo, las sales farmacéuticamente aceptables se pueden preparar en forma de sales de metales alcalinos o alcalinotérreos, tales como sales de sodio, potasio o calcio.

En algunas realizaciones de la invención, uno o más de: TS en VitE, VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer se administran directamente a un tejido. En algunas realizaciones, el tejido al que se administra el compuesto es un tejido en donde el cáncer está presente o es probable que esté presente o que surja. La administración directa al tejido se puede lograr lavando un tejido en un sujeto con una solución que incluye TS en VitE. Tal solución puede incluir, pero no necesariamente, uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer. La administración utilizando un medio de lavado también puede denominarse: lavado y puede incluir administrar TS en VitE a un sujeto haciendo fluir una solución que contiene la TS en VitE a un sujeto de una manera que la solución entre en contacto con células cancerosas en el sujeto. El contacto entre los tejidos de un sujeto y la TS en VitE se puede mantener durante un periodo de tiempo, tal como durante al menos 0,1,0,5, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 120, 180, 240, 300, 360, 420 o más minutos, incluyendo cada número entero dentro del intervalo de tiempos enumerado. La puesta en contacto de una célula cancerosa con TS en VitE también se puede conseguir utilizando inyección directa de una composición que comprende TS en VitE, u otros medios conocidos en la técnica. En algunas realizaciones de la invención, los métodos de tratamiento comprenden administrar una composición que comprende TS en VitE a un sujeto utilizando un lavado intra-pleural. Se entenderá que un tratamiento combinado de la invención puede incluir poner en contacto células en un sujeto con TS en VitE y también poner en contacto células en el sujeto con uno o más de VG, TLK-199 y otro compuesto terapéutico contra el cáncer utilizando un medio de lavado y poner en contacto células en el sujeto con otro de TS en VitE, VG, TLK-199 u otro compuesto terapéutico contra el cáncer utilizando un medio diferente, ejemplos no limitantes de los cuales son: administración IV, administración de liberación lenta, etc. Una composición que comprende TS en VitE se puede administrar una vez o, como alternativa, se puede administrar en una pluralidad de administraciones. Si se administra una o múltiples veces, la TS en VitE se puede administrar por la misma vía cada vez o utilizando una o más vías de administración diferentes. Por ejemplo, las primeras (o las primeras pocas) administraciones pueden realizarse directamente al tejido afectado, mientras que las administraciones posteriores pueden ser sistémicas.

En realizaciones de la invención en donde la TS en VitE se va a administrar sistémicamente, la composición de TS en VitE se puede formular para administración parenteral mediante inyección, p. ej., mediante inyección en bolo o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, p. ej., en ampollas o en recipientes multidosis, con o sin un conservante añadido. Las composiciones farmacéuticas pueden adoptar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión.

Las preparaciones para administración parenteral incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones estériles acuosas o no acuosas. Los ejemplos de disolventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solución salina y medios tamponados. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro sódico, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro sódico, lactato de Ringer o aceites fijados. Los vehículos intravenosos incluyen reponedores de fluidos y nutrientes, reponedores de electrolitos (tales como los basados en dextrosa de Ringer) y similares. También pueden estar presentes conservantes y otros aditivos tales como, por ejemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y gases inertes y similares. Las dosis más bajas serán el resultado de otras formas de administración, tales como la administración intravenosa. En caso de que la respuesta en un sujeto sea insuficiente a las dosis iniciales aplicadas, se pueden emplear dosis más altas (o dosis eficazmente más altas por una vía de administración diferente, más localizada) en la medida en que permita la tolerancia del paciente. Se pueden utilizar múltiples dosis al día según sea necesario para lograr niveles sistémicos o locales apropiados de TS en VitE.

En algunas realizaciones de la invención, se pueden utilizar nanopartículas en la administración de una composición de la invención que comprende TS en VitE, y/o una composición que comprende uno o más de VG, TLK-199, y otro compuesto terapéutico contra el cáncer. Los métodos para utilizar nanopartículas para la administración de fármacos son conocidos en la técnica, por ejemplo, véase: Choi, Y. H. y Han, H. J. Pharm. Invest. (2018) 48:43-60; Onoue, S., et al., (2014) Int. J. Nanomed. 9: 1025-1037; y Schroeder, A. et al., (2011) Nat. Cancer, 23 de diciembre:12(1 )39-50.

En otras realizaciones más, un vehículo de suministro es una micropartícula o implante biocompatible que es adecuado para su implantación en el receptor mamífero. Los implantes bioerosionables ilustrativos que son útiles según este método se describen en numerosas publicaciones, véanse, por ejemplo, Song, R. et al., Drug Design, Development and Therapy 2018:123117-3145; Uler y, B., et al. J Polym Sci B Polym Phys. 15 de junio de 2011; 49(12): 832-864), que describen una matriz polimérica biocompatible y biodegradable para la administración de compuestos farmacéuticos. Tales medios de suministro son bien conocidos en la técnica y se pueden utilizar para lograr la liberación sostenida de un compuesto de la invención en un sujeto, y se pueden seleccionar para no degradarse, sino más bien, para liberarse por difusión durante un periodo de tiempo prolongado.

Se pueden utilizar matrices poliméricas tanto no biodegradables como biodegradables para suministrar un compuesto o composición terapéutica, incluyendo, pero sin limitarse a: TS en VitE, VG, TLK-199 u otro compuesto terapéutico contra el cáncer, a una célula y/o sujeto. En algunas realizaciones, la matriz puede ser biodegradable. Los polímeros de matriz pueden ser polímeros naturales o sintéticos. Se puede seleccionar un polímero basándose en el período de tiempo durante el cual se desea la liberación, generalmente del orden de unas pocas horas a un año o más. Típicamente, se puede utilizar la liberación durante un período que varía entre unas pocas horas y tres a doce meses. El polímero está opcionalmente en forma de un hidrogel que puede absorber hasta aproximadamente 90% de su peso en agua y adicionalmente, de manera opcional está reticulado con iones multivalentes u otros polímeros.

En ciertas realizaciones de la invención, se pueden administrar TS en VitE y/o uno o más de VG, TLK-199, u otro compuesto terapéutico contra el cáncer utilizando un implante bioerosionable por medio de difusión, o por degradación de la matriz polimérica. Los polímeros sintéticos ilustrativos para tal uso son bien conocidos en la técnica. Los polímeros biodegradables y los polímeros no biodegradables se pueden utilizar para el suministro de un compuesto terapéutico utilizado en un método de la invención utilizando métodos conocidos en la técnica. También se pueden utilizar polímeros bioadhesivos tales como hidrogeles bioerosionables para suministrar uno o más de TS en VitE, VG, TLK-199 y/u otro compuesto terapéutico contra el cáncer para una realización de un método de tratamiento del cáncer de la invención. Los sistemas de suministro adecuados adicionales pueden incluir sistemas de suministro de liberación prolongada, de liberación retardada o de liberación sostenida. Tales sistemas pueden evitar administraciones repetidas de uno o más TS en VitE, VG, TLK-199 y otro agente terapéutico contra el cáncer, lo que aumenta la conveniencia para el sujeto y el profesional sanitario. Muchos tipos de sistemas de suministro de liberación están disponibles y son bien conocidos por los expertos en la técnica. Además, se pueden utilizar sistemas de suministro de equipos basados en bombas, algunos de los cuales están adaptados para la implantación.

El uso de un implante de liberación sostenida a largo plazo puede ser particularmente adecuado para el tratamiento profiláctico de sujetos y para sujetos en riesgo de desarrollar un cáncer recurrente. La liberación a largo plazo, como se emplea en el presente documento, significa que el implante se construye y dispone para suministrar niveles terapéuticos del principio activo durante al menos 30 días, 60 días, 90 días o más. Los implantes de liberación sostenida a largo plazo son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen algunos de los sistemas de suministro descritos anteriormente.

Las formulaciones terapéuticas para su uso en realizaciones de métodos terapéuticos de la invención se pueden preparar para almacenamiento mezclando los compuestos TS, VG y/o TLK-199 que tienen el grado de pureza deseado con portadores, excipientes o estabilizantes opcionales farmacéuticamente aceptables [Remington's Pharmaceutical Sciences 21a edición, (2006)], en forma de formulaciones liofilizadas o soluciones acuosas. Los portadores, excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas, e incluyen, pero sin limitarse a: tampones tales como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (tales como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos tales como metil o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, tales como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparragina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos, disacáridos y otros hidratos de carbono que incluyen glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como sodio; complejos metálicos (p. ej., complejos Zn-proteína); y/o tensioactivos no iónicos tales como TWEEN®, PLURONICS® o polietilenglicol (PEG). Los ejemplos no limitantes de formulaciones para el suministro de uno o más compuestos terapéuticos contra el cáncer en una realización de un método de la invención incluyen, pero sin limitarse a, uno o más de: TS, VG, TLK-199, VitE-TPGS, DMSO, solución salina normal, Kolliphor-EL, dextrosa y cloruro sódico.

Determinación de la eficacia y ensayos

La presente divulgación incluye métodos para evaluar la eficacia de TS en solución con VitE en el tratamiento de un cáncer. Tales métodos pueden incluir comparar el efecto sobre una célula de prueba de cáncer puesta en contacto con la TS en VitE con el estado de una célula de control de cáncer sustancialmente similar que no está en contacto con la TS en VitE. Un cambio en uno o más de los efectos deseables tales como, pero sin limitarse a: mayor probabilidad de muerte de células cancerosas indica la eficacia de la TS en VitE para el tratamiento del cáncer. En algunas realizaciones, los métodos de ensayo pueden incluir obtener una muestra biológica de un sujeto, poner en contacto la muestra con TS en VitE y evaluar la respuesta de la célula (p. ej., mayor probabilidad de muerte celular, etc.). La respuesta de la célula de prueba se puede comparar con una célula cancerosa de control. Como se emplea en el presente documento, una muestra biológica puede ser una muestra biológicain vitro,o puede ser una muestra que se detecta (p. ej., se obtiene)in vivo.Como se emplea en el presente documento, una muestra biológica puede ser una muestra celular, muestra de tejido, muestra de sangre, muestra de fluido corporal, muestra subcelular, etc. Una muestra biológica puede incluir células, tejidos u orgánulos y puede incluir células tales como, pero sin limitarse a: células dérmicas, células de un espacio pleural, células del espacio peritoneal, células de tejido ovárico, células de tejido mamario, células musculares, células circulatorias, células de tejido conectivo, células madre, células óseas, células exocrinas, células endocrinas, células de órganos, células de mesénquima, células de tejido conectivo, células epiteliales, células endoteliales, células neuronales, células gliales, células glandulares, células estromales, células renales, células tiroideas, células madre, células hematopoyéticas, células linfoides, células mieloides, células eritroides, cardiomiocitos, hepatocitos, astrocitos, oligodendrocitos, ovocitos y adipocitos. En algunas realizaciones de la invención, una muestra biológica puede comprender una o más células cancerosas.

Los ensayos para evaluar un cáncer pueden incluir, pero sin limitarse a (1) caracterizar la eficacia de un tratamiento que comprende administrar TS en VitE en el tratamiento de un cáncer en un sujeto; (2) evaluar un tratamiento combinado que comprende administrar TS en VitE y administrar uno o más compuestos, agentes quimioterapéuticos, tratamientos de radiación, tratamientos quirúrgicos y otros tratamientos, (3) seleccionar un tratamiento para un cáncer basado al menos en parte en la eficacia determinada de la TS en VitE; y (4) administrar TS en VitE a un sujeto como al menos una porción de un tratamiento de un cáncer en el sujeto. Por lo tanto, los sujetos se pueden caracterizar, los regímenes de tratamiento se pueden verificar, los tratamientos se pueden seleccionar y se puede entender mejor el estado de las enfermedades.

Se pueden utilizar diversos ensayos para determinar la eficacia de un tratamiento que comprende administrar una composición que comprende TS en VitE a una célula cancerosa y/o sujeto. Los métodos que son útiles para determinar la eficacia de un método de tratamiento de la invención en células, tejidos, sujetos y muestras (p. ej., de sujetos, en cultivo, etc.), incluyen, pero sin limitarse a: ensayos de diagnóstico para determinar la muerte de células cancerosas, etc. Se pueden realizar evaluaciones de la eficacia de TS en VitE para tratar un cáncerin vitro,por ejemplo, en cultivo celular, muestras celulares, suspensiones celulares, etc. o se pueden realizarin vivo,por ejemplo, en un sujeto vivo que utiliza evaluaciones de diagnóstico de cáncer y métodos de rastreo conocidos en la técnica.

Como apreciarán los expertos en la técnica, la evaluación de un tratamiento también se puede basar en una evaluación de los síntomas o puntos finales clínicos de un cáncer y tales evaluaciones se pueden utilizar junto con métodos de la invención para evaluar el estado de un cáncer y/o la eficacia de un tratamiento de la invención para un cáncer.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar casos específicos de la práctica de la presente invención y no se pretende que limiten el alcance de la invención. Como resultará evidente para un experto con un conocimiento práctico normal de la técnica, la presente invención encontrará aplicación en una variedad de composiciones y métodos.

Ejemplos

Ejemplo 1

Se realizaron estudios para probar los efectos sobre la viabilidad celular de células mesoteliales (LP9) y de mesotelioma maligno (HM) en cultivo cuando se pusieron en contacto con tioestreptona (TS) o TS diluida en vitamina E-TPGS (VitE-TPGS, succinato de D-alfa-tocoferol polietilenglicol 1000).

La tioestreptona es poco soluble en solución acuosa y, por lo tanto, esto limita el uso clínico del compuesto. Se realizaron estudios para determinar la capacidad de varias soluciones diferentes para solubilizar TS (véase el Ejemplo 4). Los resultados indicaron que una solución de VitE-TPGS al 5% solubilizó TS a concentraciones milimolares y esta solución se utilizó en estudios adicionales para determinar si la actividad de TS se retuvo en cultivo celular utilizando esta formulación.

Métodos

Las líneas celulares indicadas se colocaron en placas de 96 pocillos y se dejaron adherir durante la noche. Al día siguiente, los compuestos de ensayo se diluyeron en serie en pocillos duplicados sobre células en medios de cultivo tisular completos. Se diluyó seriadamente VitE-TPGS a partir de una concentración de partida de 0,025% (p/v) en NaCl al 0,9% y se añadió a células LP9 o HM (Fig. 1). La TS, disuelta en DMSO, se diluyó hasta una concentración de partida de 20 pM en medios de cultivo celular y se diluyó seriadamente o se diluyó a partir de una solución 1,5 mM de TS/Dm So /VitE-TPGS al 5% (33 mM)/NaCl al 0,9% hasta una concentración de partida de TS 20 pM/VitE-TPGS al 0,06% y se diluyó seriadamente en células LP9 o HM (Fig. 2). Las células se incubaron con compuestos de ensayo durante 48 horas antes de determinar el número de células utilizando una lectura indirecta de la viabilidad celular tiñendo las células residuales con cristal violeta. Se determinó la concentración inhibidora (CI50) en la que 50% de las células no son viables, para los compuestos probados.Resultados

Se determinó que VitE-TPGS era citotóxica tanto para las células mesoteliales normales (LP9) como para las células de mesotelioma maligno (HM) (Fig. 1). Las células HM mostraron aumento de citotoxicidad para VitE-TPGS en comparación con las células mesoteliales LP9 (CI50 para LP90,0014% frente a 0,0006% para células HM). La TS diluida en VitE-TPGS fue más citotóxica para células LP9 y HM en comparación con la TS sola (Fig. 2). Adicionalmente, las células HM fueron más sensibles a TS que las células LP9, una ventana terapéutica que se observó que se mantenía de manera constante cuando TS se combinó con VitE-TPGS en cualquier línea celular.

Ejemplo 2

Los estudios indicados en el Ejemplo 1 también se llevan a cabo en líneas celulares adicionales. Los resultados apoyan los resultados observados en el Ejemplo 1.

Ejemplo 3

Se realizaron experimentos en ratón para probar los efectos sobre células de mesotelioma maligno (MM) y el crecimiento tumoralin vivo,poniendo en contacto células de MM con combinaciones de TS y VitE-TPGSin vivo.Ejemplo 4

Este estudio se realizó para determinar la solubilidad intrínseca del artículo de ensayo en una variedad de sistemas de formulación como se detalla a continuación. En la prueba descrita, el artículo de ensayo fue Tioestreptona (TS).

Métodos

Este método midió la solubilidad en equilibrio después de 24 h de incubación con la mezcla de formulación deseada. La solubilidad del artículo de ensayo en cada mezcla de formulación se midió mediante comparación del AUC del espectro de LC/MS obtenido por inyección de la solución del artículo de ensayo en el disolvente deseado con el AUC de una solución patrón de referencia. Se realizaron estudios con TS como artículo de prueba, también denominado ingrediente farmacéutico activo (IFA). Se preparó la solución de referencia de nueva aportación para cada punto de tiempo. Los datos se calcularon después para proporcionar % de artículo de ensayo restante en función del tiempo. El procedimiento fue el siguiente:

1) Se preparó una solución madre del ingrediente farmacéutico activo (IFA) en 1,4-dioxano 10 mM.

2) Se dispensaron diecinueve porciones de 200 gl de material en 19 tubos de microcentrífuga limpios de 500 gl y el disolvente se retiró mediante una corriente de nitrógeno. Los 19 tubos se marcaron con los números 1-19. 3) Se dispensaron cinco porciones de 200 gl de solución madre en 5 tubos de microcentrífuga limpios de 200 gl y se eliminó el disolvente mediante una corriente de nitrógeno; estos tubos se marcaron: S1, S2, S3, S4 y S5 y se guardaron para su cuantificación mediante CL/EM.

4) Los vehículos se prepararon en una base p/p para los codisolventes, y en una base molar para las sales.

5) Se introdujeron 200 gl de cada vehículo en el tubo de microcentrífuga 1-19 apropiado, correspondiente a ese vehículo. La concentración final de IFA fue 10 mM. Estas fueron las muestras de prueba.

6) Los tubos de muestra 1-19 se sometieron a sonicación durante 30 min y después se agitaron durante 24 h.

7) El recipiente se centrifugó y se retiraron 50 gl del sobrenadante y se diluyó con 350 gl de acetonitrilo para análisis de CL/EM. Estas fueron las muestras de prueba.

8) Los tubos de microcentrífuga S1-S5 se reconstituyeron inmediatamente antes del análisis añadiendo 200 gl de acetonitrilo y 200 gl de 1,4-dioxano a los tubos y sometiéndolos a sonicación durante 30 min. Se combinaron y se secaron mediante ultrasonidos. Estos fueron los patrones.

9) Antes del análisis, los 24 tubos se centrifugaron.

10) Se retiraron 50 gl del sobrenadante transparente de los Tubos de muestra 1-19 y se diluyeron en 350 gl de acetonitrilo para análisis de CL/EM.

11) Se retiraron 100 gl del sobrenadante transparente de los Tubos convencionales patrón S1-S5 y se diluyeron en 300 gl de acetonitrilo para análisis de LC/MS.

12) La LC se realizó según la siguiente configuración:

13) La cuantificación se basó en la comparación con el AUC de la solución madre y fue relativa.

Resultados

Los patrones se realizaron en LC/MS y los espectros UV a 254 nm, la dispersión de luz evaporativa (ELSD) y el cromatograma de iones extraídos para el pico parental (457, M+H) se integraron para proporcionar el AUC para cada punto de tiempo. Se utilizó un patrón recién preparado para cada punto de tiempo. Utilizando estos datos, se calculó el % de artículo de ensayo restante (mostrado en la Tabla 1).

Tabla 1. Solubilidad intrínseca calculada en mM del artículo de ensayo en diversas formulaciones.

(continuación)

Discusión

Los estudios mostraron que el artículo de ensayo presentaba una solubilidad bastante baja en soluciones acuosas, así como en una variedad de disolventes orgánicos. Se encontró que el artículo de ensayo (TS) era libremente soluble en 1,4-dioxano y cloroformo, además, se encontraron varias buenas mezclas de excipientes que aumentaron la solubilidad relativa en comparación con la solución salina normal. Los tres mejores se identificaron como: Capryol 90 al 30% en solución salina normal, VitE-TPGS al 5% en solución salina normal, Gelucire 44/14 al 20% en solución salina normal, y Cremofor al 10% en solución salina normal. Se realizaron estudios adicionales en líneas celulares utilizando VitE-TPGS con la TS. También se encontró que se pudo conseguir un aumento de solubilidad utilizando cantidades mayores de VitE-TPGS (se han utilizado cantidades de hasta 20%) o utilizando un codisolvente con el TPGS en solución salina.

Ejemplo 5

Se realizaron estudios para probar la actividad de inyecciones semanales individuales de tioestreptona (TS) y violeta de genciana (VG) utilizando VitE-TPGS como excipiente en un modelo de ratón de mesotelioma. El objetivo principal de este experimento fue determinar la citotoxicidad tumoralin vivode TS/GV cuando se administra en inyecciones semanales únicas utilizando VitE-TPGS como excipiente en comparación con la formulación patrón que solo tiene DMSO. Adicionalmente, se verificaron los cambios de peso en animales que recibieron la formulación de TS/GV/VitE en animales con y en animales sin tumores mesotelioma maligno (MM) para investigar los perfiles de toxicidad.

Métodos

A ratones SCID FOX-Chase macho se les inyectaron mediante inyección intraperitoneal (i.p.) 2,5 millones de células tumorales de mesotelioma maligno HM (HM-Luc) que expresaban luciferasa y se permitió que los tumores se injertaran durante 2 semanas. Los animales se dividieron en 4 grupos de 6 animales:

Grupos:

1. Control de vehículo de DMSO/PBS al 1.5%

2. Control de vehículo VitE al 2%/DMSO al 1,5%/PBS, [VitE-TPGS utilizada a 13 mM, dio como resultado

4 mg de VitE-TPGS suministrados por ratón por inyección]

3. 20 mg/kg TS 2 mg/kg VG/DMSO al 1,5%/PBS

4. 20 mg/kg de TS 2 mg/kg de VG/2% de VitE-TPGS/DMSO al 1,5%/PBS

Después de 2 semanas de injerto del tumor, se obtuvieron imágenes de los tumores cada lunes utilizando un formador de imágenes de animales vivos IVIS después de la inyección i.p. de luciferina. Se inyectaron soluciones de vehículo o fármaco (200 gl) i.p. los martes durante 4,5 semanas. Los animales recibieron un total de 4 inyecciones de fármaco. Los animales se recogieron 42 días después de la inyección del tumor debido a una pérdida de peso significativa en los grupos de control con vehículo.

Resultados

Los tumores se visualizaron en los animales después de la inyección i.p. de luciferina y la obtención de imágenes de animales vivos los días 14, 21, 28 y 35 después de la inyección (DPI). Los DPI 21, 28 y 35 corresponden al tamaño del tumor después de 1, 2 o 3 inyecciones una vez por semana de los compuestos de ensayo. No hubo diferencia significativa en el tamaño tumoral entre los grupos, según se evaluó mediante obtención de imágenes de animales vivos, antes de iniciar las inyecciones de fármaco (DPI 14). Los tumores en los grupos de control tanto de DMSO como de VitE crecieron a tasas similares durante el transcurso del experimento (Figura 3). El tamaño tumoral fue significativamente menor en los animales que recibieron TS/GV/VitE los días 21, 28 y 35 en comparación con los animales de control con vehículo de VitE. A los 35 DPI, los animales TS/GV/DMSO comenzaron a mostrar tumores significativamente más pequeños en comparación con los animales de control con DMSO. El crecimiento de tumores en animales que recibieron TS/GV/VitE creció a una velocidad más lenta en comparación con animales que recibieron TS/GV/DMSO (DPI 14- 28), pero esto no alcanzó significación estadística mediante un análisis estadístico ANOVA de 2 vías. Aunque no es estadísticamente significativo, los tumores en el grupo de TS/GV/VitE fueron ~50% más pequeños a 28 DPI en comparación con el grupo de TS/GV/DMSO, con aumento de número de animales que se esperaría que alcanzara significación estadística.

Aproximadamente a los 35 DPI, los animales de los grupos de control comenzaron a mostrar signos de doblegamiento a la carga tumoral según se evaluó mediante el examen físico de los animales (es decir, signos de aparición de ictericia) y pérdida de peso significativa (Figura 4). A los 41 DPI, todos los animales de los grupos de control y de los grupos TS/GV/DMSO habían perdido un peso corporal significativo y mostraron signos significativos de sufrimiento que requerían la finalización del experimento a los 42 DPI. Los animales en el grupo de TS/GV/VitE no mostraron una pérdida de peso significativa a lo largo del experimento, lo que indica que esta formulación sería ideal para estudios de supervivencia de Kaplan-Meier a largo plazo (Figura 4).

Los animales se sacrificaron por sobredosis de isoflurano y dislocación cervical antes de la recolección de órganos (pulmón, hígado, riñón) y masa tumoral residual. Los tumores se pesaron y midieron (volumen) antes de congelar instantáneamente en nitrógeno líquido, fijar en paraformaldehído o procesar para cultivo celular/crecimiento de organoides tumorales.

Los animales en el grupo de control con DMSO tenían ictericia visible y numerosos animales de control tenían 15- 60% de implicación tumoral en el diafragma, una indicación del crecimiento tumoral agresivo en este modelo. Todos los grupos tenían al menos 1 animal con ascitis sanguínea en la cavidad. También se observó cierta "acropaquia" del hígado en todos los grupos. Ninguna observación general, independiente de la implicación del diafragma en los ratones de control, fue específica para cualquier grupo, sugiriendo que la carga tumoral en todos los grupos era responsable de la mayoría de las manifestaciones clínicas observadas.

Los tumores extirpados quirúrgicamente de los animales tratados con TS/GV/DMSO y TS/GV/VitE no alcanzaron significación estadística en comparación con los controles, pero mostraron una reducción de 25% y 33% en la masa tumoral respectivamente (Figura 5). Esta tendencia apoya el aumento de la actividad de la formulación de TS/GV/VitE en comparación con la formulación de TS/GV/DMSO.

Discusión y conclusión

Las administraciones semanales únicas de TS/GV en una solución de DMSO al 1,5%/ VitE-TPGS al 2% ralentizaron la progresión tumoral en un modelo de xenoinjerto de ratón de punto de tiempo fijo de mesotelioma. TS/GV/VitE mostró toxicidad limitada (pérdida de peso, daño tisular bruto) cuando se administró cuatro veces durante 4,5 semanas a animales con o sin implantación tumoral. Estos resultados apoyan el uso de TS/GV/VitE en futuros estudios de supervivencia de Kaplan-Meier utilizando modelos de ratón de ovario y mesotelioma. Adicionalmente, estos datos proporcionan evidencia convincente de que TS/GV/VitE retiene la actividad en un modelo de ratón de mesotelioma, tiene mayor potencia y toxicidad inespecífica reducida en comparación con la formulación de TS/GV/DMSO y es una formulación apropiada para perseguir en la clínica.

Equivalentes

Aunque se han descrito e ilustrado en el presente documento varias realizaciones de la presente invención, los expertos en la técnica preverán fácilmente una variedad de otros medios y/o estructuras para realizar las funciones y/u obtener los resultados y/o una o más de las ventajas descritas en el presente documento. Más generalmente, los expertos en la técnica apreciarán fácilmente que se pretende que todos los parámetros, dimensiones, materiales, y/o configuraciones descritos en el presente documento sean ilustrativos y que los parámetros, dimensiones, materiales, y/o configuraciones reales dependerán de la aplicación o aplicaciones específicas para las cuales se utiliza o utilizan la enseñanzas de la presente invención. Los expertos en la técnica reconocerán, o serán capaces de determinar utilizando no más que experimentación rutinaria, muchos equivalentes a las realizaciones específicas de la invención descritas en el presente documento. Por lo tanto, se debe entender que las realizaciones anteriores se presentan solo a modo de ejemplo.

Se debe entender que todas las definiciones, como se definen y utilizan en el presente documento, controlan las definiciones de diccionario, las definiciones en documentos a los que se hace referencia en el presente documento y/o los significados ordinarios de los términos definidos.

Se debe interpretar que los artículos indefinidos "un", "uno" y "una", como se emplean en el presente documento en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, a menos que se indique claramente lo contrario, significan "al menos uno".

Se debe entender que la expresión "y/o", como se emplea en el presente documento en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, significa "uno o ambos" de los elementos así unidos, es decir, elementos que están presentes de manera conjunta en algunos casos y presentes de manera disyuntiva en otros casos. Pueden estar presentes opcionalmente otros elementos distintos de los elementos identificados específicamente por la cláusula "y/o", ya sea relacionados o no con aquellos elementos identificados específicamente, a menos que se indique claramente lo contrario.

El alcance de protección está definido por las reivindicaciones.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende Tioestreptona y Vitamina E-TPGS.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde la composición comprende adicionalmente:

i) dimetilsulfóxido; y/o

ii) uno o más de un portador y excipiente farmacéuticamente aceptables.

3. La composición de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde:

a) la concentración molar de Tioestreptona en la composición está en un intervalo de 10 nM a 5000 pM; y/o

b) la concentración molar de vitamina E-TPGS en la composición está en un intervalo de 10 nM a 132 mM.

4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende adicionalmente violeta de genciana, en donde opcionalmente la concentración molar de violeta de genciana en la composición está en un intervalo de 10 nM a 10 mM.

5. Una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para su uso en el tratamiento del cáncer en un sujeto, comprendiendo el tratamiento administrar la composición al sujeto.

6. La composición para su uso en el tratamiento de la reivindicación 5, en donde el tratamiento comprende adicionalmente administrar violeta de genciana, opcionalmente administrando la composición como se define en la reivindicación 4 al sujeto.

7. La composición para su uso en el tratamiento de la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en donde la etapa de administración comprende administración sistémica,

en donde opcionalmente la administración sistémica comprende una o más de administración entérica y administración parenteral.

8. La composición para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde:

a) la cantidad de Tioestreptona administrada en un período de 24 horas está en un intervalo de 10 ng a 5 g, y/o

b) la cantidad de violeta de genciana administrada en un período de 24 horas está en un intervalo de 10 ng a 200 mg; y/o

c) la cantidad de vitamina E-TPGS administrada en un período de 24 horas está en un intervalo de 10 ng a 30 g; y/o

d) la cantidad de vitamina E-TPGS administrada en un período de 24 horas se administra en múltiples dosis, opcionalmente en donde la cantidad total de vitamina E-TPGS administrada en las múltiples dosis en el período de 24 horas está en un intervalo de 0,01 g a 500 g.

9. La composición para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en donde el sujeto:

a) es un mamífero, opcionalmente un ser humano; y/o

b) presenta un cáncer que presenta una efusión múltiple; y/o

c) tiene cáncer de ovario o mesotelioma maligno.

10. La composición para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en donde las células cancerosas se ubican en el sujeto en uno o más de:

a) la pleura de los pulmones, el peritoneo, el pericardio y latúnica vaginalis;o

b) los ovarios, la cavidad peritoneal, el fluido peritoneal y el peritoneo.

11. La composición para su uso en el tratamiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 10, en donde: a) la administración comprende la infusión de Tioestreptona y Vitamina E-TPGS, y opcionalmente violeta de genciana, a una cavidad corporal del sujeto; en donde la infusión comprende opcionalmente utilizar un catéter para administrar la composición en una cavidad del sujeto; y/o

b) la administración comprende un tratamiento primario proporcionado al sujeto; y/o

c) al sujeto se le administra adicionalmente uno o más de un régimen quirúrgico, un régimen de radioterapia y un régimen de quimioterapia.

12. Un métodoin vitropara reducir la viabilidad celular en una población de células que comprende células cancerosas, comprendiendo el método:

poner en contacto una población de células con Tioestreptona y vitamina E-TPGS,

en donde la población de células comprende células cancerosas y el contacto esin vitro.

13. El método de la reivindicación 12, en donde la etapa de contacto comprende poner en contacto una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 con la población de células.

14. El método de la reivindicación 12 o la reivindicación 13, en donde el método comprende adicionalmente poner en contacto la población de células con violeta de genciana, opcionalmente poniendo en contacto las células con la composición como se define en la reivindicación 4.

15. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en donde:

a) el método comprende adicionalmente proporcionar una población de células que comprende células cancerosas; y/o

b) la etapa de puesta en contacto comprende suministrar una composición que comprende la Tioestreptona y vitamina E-TPGS a las células cancerosas; y/o

c) las células cancerosas comprenden células de mesotelioma maligno o células de cáncer de ovario.