ES3033759T3

ES3033759T3 - Pancreatitis treatment

Info

Publication number: ES3033759T3
Application number: ES23184730T
Authority: ES
Inventors: Gonul Velicelebi; Kenneth Stauderman; Michael Dunn; Jack Roos
Original assignee: Calcimedica Inc
Current assignee: Calcimedica Inc
Priority date: 2015-02-27
Filing date: 2016-02-26
Publication date: 2025-08-07
Anticipated expiration: 2036-02-26
Also published as: HK1244686A1; TW201639564A; ES2959658T3; KR102707159B1; AU2016224993B2; IL254116B2; US20220265645A1; WO2016138472A1; EP3261641B1; EP3261641A4; TW202310833A; ES2899197T3; CN107530333A; US20210038597A1; IL254116A0; TWI771269B; EP4275705C0; JP2021193097A; KR20180006880A; AR103807A1

Abstract

Se describen composiciones y métodos para el alivio de la pancreatitis mediante la manipulación farmacéutica de la señalización del calcio. Dichas composiciones y métodos pueden utilizarse para aliviar los síntomas de pancreatitis aguda o crónica, o para reducir la probabilidad o la gravedad de la pancreatitis en personas con riesgo de padecerla. En otras realizaciones, se describen composiciones y métodos para el alivio de enfermedades virales mediante la manipulación farmacéutica de la señalización del calcio. En otras realizaciones, se describen composiciones y métodos para el alivio de enfermedades inducidas por Th17 mediante la manipulación farmacéutica de la señalización del calcio. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Tratamiento de la pancreatitis

Referencia

La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente provisional estadounidense n.° 62/126,386, presentada el 27 de febrero de 2015.

Campo técnico

La presente invención se refiere a ciertos inhibidores de la señalización de calcio intracelular para su uso en un método de tratamiento de la pancreatitis.

Antecedentes

La pancreatitis aguda es la causa número uno de hospitalizaciones gastrointestinales y una carga de coste principal en los Estados Unidos. La pancreatitis aguda demuestra una tasa de mortalidad de un 10-25 % en pacientes graves, y una tasa de mortalidad global de un 3-5 %. Todavía no existe ningún tratamiento modificador de la enfermedad para los afectados.

Gerasimenko J.V.et al.(P.N.A.S., 2013, vol. 110 (32), 22 páginas 13186-13191), divulgan que el bloqueador del canal de calcio activado por la liberación de calcio (CRAC) GSK7975A inhibe la entrada de Ca2+ accionada por almacenamiento y prácticamente anula la necrosis así la como actividad de la tripsina y la proteasa en un modelo de pancreatitis aguda inducida por éster etílico de ácido palmitoleico (POAEE).

Sumario de la invención

Un primer aspecto de la invención se refiere a un compuesto que tiene la estructura de N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Un segundo aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende el compuesto N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Un tercer aspecto de la invención se refiere a un inhibidor de la señalización de calcio intracelular para su uso en un método de mejora de los síntomas de pancreatitis en un paciente que lo necesite, en donde dicho inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura de: N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina o N-(5-(7-cloro-2,3-dihidro-[1,4]dioxin[2,3-b]piridín-6-il)piridm-2-il)-2,6-difluorobenzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En una realización los síntomas son síntomas de pancreatitis aguda.

En una realización los síntomas son síntomas de pancreatitis crónica.

En una realización, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura de N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura de N-(5-(7-cloro-2,3-dihidro-[1,4]dioxin-[2,3-b]piridín-6-il)piridín-2-il)-2,6-difluorobenzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Breve descripción

La presente invención se define en las reivindicaciones. Toda materia que esté fuera del ámbito de aplicación de las reivindicaciones se proporciona únicamente a título informativo. Los métodos de tratamiento del cuerpo humano mediante terapia, a los que se hace referencia en la presente descripción, no forman parte de la presente invención como tales, sino que se describen en el presente documento en relación con compuestos y composiciones farmacéuticas para su uso en dichos métodos de tratamiento del cuerpo humano mediante terapia, según la presente invención.

En el presente documento se describen métodos de mejora de los síntomas de la pancreatitis en un mamífero tal como una persona.

Los métodos descritos en el presente documento pueden comprender las etapas de identificar a una persona que necesita mejorar los síntomas de la pancreatitis y a dicha persona se le administrarla un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, tal como se define en las reivindicaciones adjuntas, a una dosis suficiente para mejorar dichos síntomas.

En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC, como se define en las reivindicaciones adjuntas.

En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene una estructura de:

(colectivamente, "compuesto A") o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene una estructura del grupo de compuesto A o una formulación de nanopartículas del mismo, incluyendo una suspensión o emulsión de nanopartículas.

En algunos aspectos el inhibidor de la señalización de calcio intracelular se elige de los compuestos, N-(5-(7-cloro-2,3-dihidro-[1,4]dioxin-[2,3-b]piridín-6-il)piridín-2-il)-2,6-difluorobenzamida, N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, (colectivamente, “compuesto A”, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En algunos aspectos, los síntomas son síntomas de pancreatitis aguda. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de inflamación y edema del páncreas, dolor abdominal superior que irradia a la espalda, dolor del cuadrante superior izquierdo que irradia a la espalda, náuseas, vómitos, vómitos que empeoran al comer, ritmo cardiaco elevado, taquicardia, ritmo respiratorio elevado, hipertensión, hipotensión, deshidratación, sensibilidad abdominal, fiebre, escalofríos, peritonitis, inestabilidad hemodinámica y parálisis refleja del intestino. En algunos aspectos, los síntomas son síntomas de pancreatitis aguda grave. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de necrosis pancreática y lesión a órganos extrapancreáticos. En algunos aspectos, los síntomas son síntomas de pancreatitis crónica. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de dolor abdominal persistente, deficiencias digestivas, mala absorción de las grasas, dolor durante el consumo de alimentos, pérdida de peso, elevación de la actividad amilasa sérica, elevación de la actividad lipasa sérica, elevación de un marcador inflamatorio CRP, alteración de la producción de bicarbonato, niveles elevados de elastasa fecal, niveles elevados de tripsinógeno sérico, calcificación pancreática, niveles elevados de bilirrubina sérica y niveles elevados de fosfatasa alcalina. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de niveles elevados de ESR, niveles elevados de IgG4, factor reumatoide elevado, presencia de anticuerpo ANA, presencia de anticuerpo antimúsculo liso, de los que el ensayo de cualquiera de ellos puede indicar pancreatitis crónica en una persona. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de esteatorrea, tinción química con Sudán de las heces o excreción de grasa fecal de 7 gramos o más durante un periodo de 24 h en una dieta de 100 g de grasa y elastasa fecal en una muestra de deposición a un valor de menos de 200 pg/g. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de dolor abdominal, niveles aumentados de amilasa sanguínea, niveles aumentados de lipasa sanguínea, páncreas agrandado, náuseas, vómitos, hemorragia interna, parálisis intestinal, fiebre, ictericia, pérdida de peso y ritmo cardiaco elevado. En algunos aspectos, los síntomas comprenden niveles séricos elevados de amilasa. En algunos aspectos, los síntomas comprenden niveles séricos elevados de lipasa. En algunos aspectos, los síntomas comprenden hallazgos de necrosis por exploración de tomografía computarizada (TC). En algunos aspectos, los síntomas comprenden activación prematura de enzimas digestivas. En algunos aspectos, la activación prematura de enzimas digestivas se produce en el páncreas de dicha persona. En algunas realizaciones, la enzima comprende tripsina.

En el presente documento también se describen métodos de prevención o mejora de un síntoma asociado a un trastorno pancreático en una persona en riesgo de un trastorno pancreático. En algunas realizaciones el método comprende las etapas de identificar una persona que tenga un factor de riesgo asociado a un trastorno pancreático; y administrar un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas, a una dosis suficiente para evitar o mejorar dicho efecto secundario. En algunos aspectos, el inhibidor de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura del grupo de compuesto A, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunos aspectos, el trastorno pancreático comprende un síntoma de pancreatitis aguda. En algunos aspectos, el trastorno pancreático comprende un síntoma de pancreatitis crónica. En algunos aspectos, la persona tiene pancreatitis como resultado de someterse a una pauta farmacológica que comprende administración de al menos uno de un esteroide tal como un corticoesteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina tal como una estatina reductora del colesterol, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico, clozapina, risperidona y olanzapina. En algunos aspectos, la persona se identifica como portadora de una forma hereditaria de pancreatitis. En algunos aspectos, la persona porta un alelo mutante de al menos uno de tripsina1, que codifica tripsinógeno, SPINK1, que codifica un inhibidor de tripsina y regulador de la conductancia transmembranaria de fibrosis quística. En algunos aspectos, la persona tiene pancreatitis como resultado de padecer al menos uno de calcio sanguíneo elevado, hipotermia, colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP), páncreas dividido, una malformación congénita del páncreas, diabetesmellitusde tipo 2, cáncer de páncreas, cálculos en los conductos pancreáticos, vasculitis, inflamación de los vasos sanguíneos pequeños en el páncreas, infección por coxsackievirus y porfiria, tal como porfiria intermitente aguda y protoporfiria eritropoyética. En algunos aspectos, el estado de salud corporal de dicha persona se ha visto afectado por al menos uno de un cálculo biliar, envenenamiento por etanol, alcoholismo, traumatismo, paperas, un trastorno autoinmunitario, una picadura de escorpión, hiperlipidemia, hipotermia, hiperparatiroidismo y colangiopancreatografía retrógrada endoscópica, azatioprina y ácido valproico. En algunos aspectos, el estado de salud corporal de dicha persona se ha visto influido por al menos uno de un coxsackievirus, un citomegalovirus, un virus de la hepatitis B, un virus del herpes simple, paperas, un virus de varicela-zóster, una bacteriaLegionella,una bacteriaLeptospira,una bacteriaMycoplasma,una bacteriaSalmonella,un hongoAspergillus,un parásitoAscaris,una célula deCryptosporidiumy una célula deToxoplasma.

Algunas realizaciones se refieren a una composición que comprende un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas, y al menos un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunos aspectos, el fármaco se selecciona de la lista que consiste en: un esteroide, tal como un corticosteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina, tal como una estatina hipocolesterolemiante, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico clozapina, risperidona, olanzapina, azatioprina y ácido valproico. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura del grupo de compuesto A, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En el presente documento también se describe un régimen de dosificación, que comprende la administración a un individuo de un fármaco asociado a un impacto negativo en la actividad pancreática y la administración de un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas. En algunos aspectos, el fármaco se selecciona de la lista que consiste en: un esteroide, tal como un corticosteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina, tal como una estatina hipocolesterolemiante, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico clozapina, risperidona, olanzapina, azatioprina y ácido valproico. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura del grupo de compuesto A, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En el presente documento también se describe una composición para su uso en la mejora de los síntomas de pancreatitis en una persona, que comprende las etapas de identificar una persona que necesita mejorar los síntomas de pancreatitis y administrarla un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas, a una dosis suficiente para mejorar dichos síntomas. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura del grupo de compuesto A, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunos aspectos, la composición comprende además una medicación analgésica. En algunas realizaciones, la medicación analgésica comprende un opiáceo. En algunos aspectos, la medicación analgésica comprende morfina. En algunos aspectos, los síntomas son síntomas de pancreatitis aguda. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de inflamación y edema del páncreas, dolor abdominal superior que irradia a la espalda, dolor del cuadrante superior izquierdo que irradia a la espalda, náuseas, vómitos, vómitos que empeoran al comer, ritmo cardiaco elevado, taquicardia, ritmo respiratorio elevado, hipertensión, hipotensión, deshidratación, sensibilidad abdominal, fiebre, escalofríos, peritonitis, inestabilidad hemodinámica y parálisis refleja del intestino. En algunos aspectos, los síntomas son síntomas de pancreatitis grave. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de necrosis pancreática y lesión a órganos extrapancreáticos. En algunos aspectos, los síntomas son síntomas de pancreatitis crónica. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de dolor abdominal persistente, deficiencias digestivas, mala absorción de las grasas, dolor durante el consumo de alimentos, pérdida de peso, elevación de la actividad amilasa sérica, elevación de la actividad lipasa sérica, elevación de un marcador inflamatorio CRP, alteración de la producción de bicarbonato, niveles elevados de elastasa fecal, niveles elevados de tripsinógeno sérico, calcificación pancreática, niveles elevados de bilirrubina sérica y niveles elevados de fosfatasa alcalina. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de niveles elevados de ESR, niveles elevados de IgG4, factor reumatoide elevado, presencia de anticuerpo ANA, presencia de anticuerpo antimúsculo liso, cuyo ensayo de cualquiera de ellos puede indicar pancreatitis crónica en una persona. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de esteatorrea, tinción química con Sudán de las heces o excreción de grasa fecal de 7 gramos o más durante un periodo de 24 h en una dieta de 100 g de grasa y elastasa fecal en una muestra de deposición a un valor de menos de 200 pg/g. En algunos aspectos, los síntomas comprenden al menos uno de dolor abdominal, niveles aumentados de amilasa sanguínea, niveles aumentados de lipasa sanguínea, páncreas agrandado, náuseas, vómitos, hemorragia interna, parálisis intestinal, fiebre, ictericia, pérdida de peso y ritmo cardiaco elevado. En algunos aspectos, los síntomas comprenden activación prematura de enzimas digestivas. En algunos aspectos, la activación prematura de enzimas digestivas se produce en el páncreas de dicha persona. En algunos aspectos, la enzima comprende tripsina.

En el presente documento también se describe a una composición para su uso en la prevención o mejora de un síntoma asociado a un trastorno pancreático en una persona en riesgo de un trastorno pancreático, que comprende las etapas de identificar una persona que tenga un factor de riesgo asociado a un trastorno pancreático; y administrar un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas, a una dosis suficiente para evitar o mejorar dicho efecto secundario. En algunos aspectos, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura del grupo de compuesto A, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunos aspectos, el trastorno pancreático comprende un síntoma de pancreatitis aguda. En algunos aspectos, el trastorno pancreático comprende un síntoma de pancreatitis crónica. En algunos aspectos, la persona se somete a una pauta farmacológica que comprende administración de al menos uno de un esteroide tal como un corticoesteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina tal como una estatina hipocolesterolemiante, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico, clozapina, risperidona y olanzapina. En algunos aspectos, la persona se identifica como portadora de una forma hereditaria de pancreatitis. En algunas realizaciones, la persona porta un alelo mutante de al menos uno de tripsina 1, que codifica tripsinógeno, SPINK1, que codifica un inhibidor de tripsina y regulador de la conductancia transmembranaria de fibrosis quística. En algunos aspectos, la persona ha padecido al menos uno de calcio sanguíneo elevado, hipotermia, colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP), páncreas dividido, una malformación congénita del páncreas, diabetesmellitusde tipo 2, cáncer de páncreas, cálculos en los conductos pancreáticos, vasculitis, inflamación de los vasos sanguíneos pequeños en el páncreas, infección por coxsackievirus y porfiria, tal como porfiria intermitente aguda y protoporfiria eritropoyética. En algunos aspectos, el estado de salud corporal de dicha persona se ha visto afectado por al menos uno de un cálculo biliar, envenenamiento por etanol, alcoholismo, traumatismo, paperas, un trastorno autoinmunitario, una picadura de escorpión, hiperlipidemia, hipotermia, hiperparatiroidismo y colangiopancreatografía retrógrada endoscópica, azatioprina y ácido valproico. En algunas realizaciones, el estado de salud corporal de dicha persona se ha visto influido por al menos uno de un citomegalovirus, un virus de la hepatitis B, un virus del herpes simple, paperas, un virus de varicela-zóster, una bacteriaLegionella,una bacteriaLeptospira,una bacteriaMycoplasma,una bacteriaSalmonella,un hongoAspergillus,un parásitoAscaris,una célula deCryptosporidiumy una célula deToxoplasma.

Breve descripción de los dibujos

Las nuevas características de la invención se exponen con particularidad en las reivindicaciones adjuntas. Se obtendrá una mejor comprensión de las características y ventajas de la presente invención haciendo referencia a la siguiente descripción detallada que expone realizaciones ilustrativas, en que se utilizan los principios de la invención, y los dibujos adjuntos de los que:

La fig. 1A muestra necrosis de células acinares de ratón tras tratamiento con TLCS.

La fig. 1B muestra necrosis de células acinares humanas tras tratamiento con TLCS.

La fig. 2A muestra puntuaciones de histopatología para pancreatitis aguda inducida por ceruleína.

La fig. 2B muestra puntuaciones de histopatología para pancreatitis aguda inducida por TLCS. La fig. 2C muestra puntuaciones de histopatología para pancreatitis aguda inducida por FAEE. La fig. 3A muestra una determinación de CI<50>para W-(5-(6-cloro-2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)pirazin-2-il)-2-fluoro-6-metilbenzamida ("compuesto I").

La fig. 3B muestra una determinación de CI<50>para 2,6-difluoro-N-(1-(4-hidroxi-2-(trifluorometil)bencil)-1H-pirazol-3-il)benzamida ("GSK-7975A").

La fig. 4A muestra la captación de calcio en ausencia de un inhibidor de C

La fig. 4B muestra la captación de calcio en presencia de un inhibidor de C

La fig. 5A muestra la entrada de calcio en presencia de inhibidor d compuesto I.

La fig. 5B muestra la entrada de calcio en presencia de inhibidor d GSK-7975A.

La fig. 6A muestra la entrada de calcio en ausencia de un inhibidor de CRA

La fig. 6B muestra la entrada de calcio relativa en presencia de los inhibidores de CRAC compuesto I y GSK-7975A en comparación con un control.

La fig. 7 muestra valores de CI<50>para compuesto I frente a varias citocinas.

La fig. 8A muestra puntuaciones de histopatología para un intervalo de concentraciones de compuesto I.

La fig. 8B muestra concentraciones de compuesto I en el páncreas como una función de la dosis.

La fig. 9A muestra los niveles de amilasa sérica en ratones no inducidos (normales) y ratones para los que se induce pancreatitis aguda, en presencia y ausencia de un inhibidor de CRAC.

La fig. 9B muestra los niveles de lipasa sérica en ratones no inducidos (normales) y ratones para los que se induce pancreatitis aguda, en presencia y ausencia de un inhibidor de CRAC.

La fig. 10 muestra puntuaciones de histopatología para ratones tratados terapéutica y profilácticamente tras inducción de pancreatitis aguda.

La fig. 11 muestra niveles de calcio inducidos por TLCS.

La fig. 12 muestra los niveles de liberación de amilasa en células acinares de ratón.

Descripción detallada

Los métodos y composiciones divulgadas en el presente documento se usan para modular el calcio intracelular para mejorar o evitar síntomas de pancreatitis. En algunos aspectos, la pancreatitis es pancreatitis aguda. En algunos aspectos, la pancreatitis es pancreatitis crónica. En algunos aspectos los compuestos proporcionados en el presente documento modulan la actividad del canal CRAC. En otro aspecto, los métodos y compuestos proporcionados en el presente documento reducen el número de canales CRAC funcionales. En algunos aspectos, los métodos y compuestos descritos en el presente documento son bloqueadores del canal CRAC o moduladores del canal CRAC.

El calcio desempeña una función vital en la función y supervivencia celular. Por ejemplo, el calcio es un elemento clave en la transducción de señales al interior y dentro de las células. Las respuestas celulares a factores de crecimiento, neurotransmisores, hormonas y otras diversas moléculas de señal se inician a través de procesos dependientes de calcio.

Casi todos los tipos celulares dependen de alguna manera de la generación de señales de Ca<2+>citoplasmáticas para regular la función celular, o para desencadenar respuestas específicas. Las señales de Ca<2+>citosólicas controlan una amplia gama de funciones celulares que varían desde respuestas a corto plazo tales como contracción y secreción a regulación a largo plazo del crecimiento y proliferación celular. Habitualmente, estas señales implican alguna combinación de liberación de Ca<2+>desde reservas intracelulares, tales como el retículo endoplasmático (ER) y el flujo entrante de Ca<2+>a través de la membrana plasmática. En un ejemplo, la activación celular comienza con un agonista que se une a un receptor de membrana superficial, que se acopla a fosfolipasa C (PLC) a través de un mecanismo de proteína G. La activación de PLC conduce a la producción de inositol 1,4,5-trifosfato (IP<3>), que a su vez activa al receptor de IP<3>provocando la liberación de Ca<2+>del ER. La bajada en Ca<2+>del ER entonces señaliza para activar los canales de calcio accionados por reserva (SOC) de membrana plasmática.

El flujo entrante de calcio accionado por reserva (SOC) es un proceso en la fisiología celular que controla dichas funciones diversas tales como, aunque sin limitación, rellenado de las reservas de Ca<2+>intracelulares (Putneyet al.,Cell, 75, 199-201, 1993), activación de actividad enzimática (Faganet al.,J. Biol. Chem. 275:26530-26537, 2000), transcripción génica (Lewis, Annu. Rev. Immunol. 19:497-521, 2001), proliferación celular (Nunezet al.,J. Physiol.

571.1, 57-73,2006) y liberación de citocinas (Winslowet al.,Curr. Opin. Immunol. 15: 299-307,2003). En algunas células no excitables, por ejemplo, células sanguíneas, inmunocitos, células hematopoyéticas, linfocitos T y mastocitos, células acinares pancreáticas (PAC), células epiteliales y ductales de otras glándulas (por ejemplo, glándulas salivales), células endoteliales y progenitoras endoteliales, el flujo entrante de SOC se produce a través de canales de calcio activados por liberación de calcio (CRAC), un tipo de canal SOC.

El mecanismo de flujo entrante de calcio se ha denominado entrada de calcio accionada por reserva (SOCE). Las proteínas de la molécula de interacción estromal (STIM) son un componente esencial de la función del canal SOC, que sirve como sensores para detectar la reducción de calcio de las reservas intracelulares y para activar los canales SOC.

Homeostasis de calcio

La homeostasis del calcio celular es un resultado de la suma de los sistemas reguladores implicados en el control de los niveles y movimientos de calcio intracelular. La homeostasis del calcio celular se consigue, al menos en parte, por unión del calcio y por movimiento del calcio al interior y el exterior de la célula a través de la membrana plasmática y dentro de la célula por movimiento de calcio a través de membranas de orgánulos intracelulares incluyendo, por ejemplo, el retículo endoplásmico, el retículo sarcoplasmático, mitocondrias y orgánulos endocíticos incluyendo endosomas y lisosomas.

El movimiento de calcio a través de membranas celulares se realiza por proteínas especializadas. Por ejemplo, el calcio desde el espacio extracelular puede entrar en la célula a través de diversos canales de calcio y un intercambiador de sodio/calcio y se extruye activamente desde la célula por bombas de calcio e intercambiadores de sodio/calcio. El calcio también puede liberarse de reservas internos a través de receptores de inositol trisfosfato o rianodina y puede captarse por estos orgánulos mediante bombas de calcio.

El calcio puede entrar en las células mediante cualquiera de varias clases generales de canales, incluyendo, aunque sin limitación, canales de calcio accionados por voltaje (VOC), canales de calcio accionados por reserva (SOC) e intercambiadores de sodio/calcio que funcionan en modo inverso. Los canales VOC se activan mediante despolarización de la membrana y se encuentran en células excitables como nervio y músculo y en su mayor parte no se encuentran en células no excitables. En algunas condiciones, el Ca2+ pueden entrar en las células mediante intercambiadores de Na+-Ca2+ que funcionan en modo inverso.

La endocitosis proporciona otro proceso por el que las células pueden captar calcio desde el medio extracelular a través de endosomas. Además, algunas células, por ejemplo, células exocrinas, pueden liberar calcio mediante exocitosis.

La concentración de calcio citosólico está muy regulada con niveles en reposo habitualmente estimados en aproximadamente 0,1 pM en células de mamífero, mientras que la concentración de calcio extracelular es normalmente aproximadamente 2 mM. Esta estricta regulación facilita la transducción de señales al interior y dentro de las células a través de un flujo de calcio transitorio a través de la membrana plasmática y membranas de los orgánulos intracelulares. Hay una multiplicidad de sistemas de transporte y tamponamiento del calcio intracelular en células que sirven para dar forma a las señales de calcio intracelular y mantener la baja concentración de calcio citoplasmático en reposo. En células en reposo, los componentes principales implicados en el mantenimiento de los niveles de calcio basales son bombas de calcio y rutas de extravasación tanto en el retículo endoplasmático como en la membrana plasmática. La alteración de los niveles de calcio citosólico en reposo puede afectar a la transmisión de señales dependientes de calcio y dar lugar a defectos en varios procesos celulares. Por ejemplo, la proliferación celular implica una secuencia de señalización de calcio prolongada. Otros procesos celulares que implican señalización de calcio incluyen, aunque sin limitación, secreción, señalización de factores de transcripción y fertilización.

Los receptores de superficie celular que activan la fosfolipasa C (PLC) crean señales de Ca<2+>citosólico desde fuentes intra y extracelulares. Una elevación transitoria inicial de [Ca<2+>]i (concentración de calcio intracelular) resulta de la liberación de Ca<2+>desde el retículo endoplasmático (ER), que se desencadena mediante el producto de PLC, inositol-1,4,5-trisfosfato (IP<3>), que abre los receptores de IP<3>en el ER (Strebet al.,Nature, 306, 67-69, 1983). Una fase posterior de la entrada de Ca<2+>mantenida a través de la membrana plasmática entonces garantiza, a través de canales de calcio accionados por reserva (SOC) especializados (en el caso de células no excitables como células PAC inmunitarias, los canales SOC son canales de calcio activados por liberación de calcio (CRAC)) en la membrana plasmática. La entrada de Ca<2+>accionada por reserva (SOCE) en el proceso en que el vaciado de los propios reservas de Ca<2+>activa los canales de Ca<2+>en la membrana plasmática para ayudar a rellenar los reservas (Putney, Cell Calcium, 7, 1-12, 1986; Parekhet al.,Physiol.Rev. 757-810; 2005). SOCE hace más que simplemente proporcionar Ca2+ para rellenar los reservas, aunque puede generar por sí mismo señales de Ca<2+>mantenidas que controlan funciones esenciales tales como expresión génica, metabolismo celular y exocitosis (Parekh y Putney, Physiol. Rev.

85, 757-810 (2005).

En linfocitos y mastocitos, la activación de receptores de o Fc, respectivamente provoca la liberación de Ca<2+>desde reservas intracelulares, lo que a su vez da lugar a un flujo entrante de Ca<2+>a través de canales CRAC en la membrana plasmática. La posterior elevación en el Ca<2+>intracelular activa la calcineurina, una fosfatasa que regula el factor de transcripción NFAT. En células en reposo, NFAT se fosforila y reside en el citoplasma, pero cuando se desfosforila por calcineurina, NFAT se traslada al núcleo y activa diferentes programas genéticos dependientes de condiciones de estimulación y tipo celular. En respuesta a infecciones y durante el rechazo de trasplantes, NFAT forma pareja con el factor de transcripción AP-1 (Fos-Jun) en el núcleo de linfocitos T "efectores", transactivando de este modo genes de citocina, genes que regulan la proliferación de linfocitos T y otros genes que orquestan una respuesta inmunitaria activa (Raoet al.,Annu Rev Immunol., 1997;15:707-47). Por el contrario, en linfocitos T que reconocen autoantígenos, NFAT se activa en ausencia de AP-1 y activa un programa transcripcional conocido como "anergia" que suprime las respuestas autoinmunitarias (Macianet al.,Transcriptional mechanisms underlying lymphocyte tolerance. Cell. 14 de junio de 2002;109(6):719-31). En una subclase de linfocitos T conocida como linfocitos T reguladores que suprimen la autoinmunidad mediada por linfocitos T efectores autorreactivos, NFAT forma pareja con el factor de transcripción FOXP3 para activar genes responsables de la función supresora (Wuet al.,Cell, 28 de julio de 2006;126(2):375-87; Rudensky AY, Gavin M, Zheng Y. Cell. 28 de julio de 2006;126(2):253-256).

El retículo endoplasmático (ER) realiza diversos procesos. El ER tiene una función tanto como de pileta de Ca<2+>como también de reserva de Ca<2+>sensible a agonista, y el plegamiento/procesamiento proteínico tiene lugar dentro de su luz. En el último caso, numerosas proteínas chaperonas dependientes de Ca<2+>garantizan que las proteínas recién sintetizadas se plieguen correctamente y se envíen a su destino apropiado. El ER también está implicado en el tráfico de vesículas, liberación de señales de tensión, regulación del metabolismo del colesterol y apoptosis. Muchos de estos procesos requieren Ca<2+>intraluminal y plegamiento incorrecto de proteínas, respuestas a tensión del ER y apoptosis, que pueden inducirse todos reduciendo del ER el Ca<2+>durante periodos prolongados de tiempo. Como contiene una cantidad finita de Ca<2+>, está claro que el contenido de Ca<2+>del ER puede caer después de la liberación de ese Ca<2+>durante la estimulación. Sin embargo, para conservar la integridad funcional del ER, es vital que el contenido de Ca<2+>no caiga demasiado bajo o se mantenga al menos a un nivel bajo. La reposición del ER con Ca<2+>, por lo tanto, es un proceso central para todas las células eucariotas. Como una caída en el contenido de Ca<2+>del ER activa los canales de Ca<2+>accionados por reserva en la membrana plasmática, se cree que una función principal de esta ruta de entrada de Ca<2+>es el mantenimiento de los niveles de Ca<2+>del ER, que son necesarios para la síntesis y plegamiento apropiados de proteínas. Sin embargo, los canales de Ca<2+>accionados por reserva tienen otras funciones importantes.

La comprensión de la entrada de calcio accionada por reserva se proporcionó por estudios electrofisiológicos que establecieron que el proceso de vaciado de las reservas activaba una corriente de Ca<2+>en mastocitos, denominada corriente de Ca<2+>activada por liberación de Ca<2+>o ICRAC. ICRAC no se activa por voltaje, es rectificadora hacia el interior y es notablemente selectiva para Ca<2+>. Se encuentra en varios tipos celulares principalmente de origen hematopoyético. ICRAC no es la única corriente accionada por reserva, y ahora es evidente que el flujo entrante accionado por reserva abarca una familia de canales permeables a Ca<2+>, con diferentes propiedades en diferentes tipos celulares. ICRAC fue la primera corriente de Ca<2+>accionada por reserva en describirse y sigue siendo un modelo popular para estudiar el flujo entrante accionado por reserva.

Los canales de calcio accionados por reserva pueden activarse por cualquier procedimiento que vacíe las reservas de Ca<2+>del ER; no parece importar la manera en que se vacíen los reservas, el efecto neto es la activación de la entrada de Ca<2+>accionada por reserva. Fisiológicamente, el vaciado de reservas se provoca por un aumento en los niveles de IP<3>u otras señales liberadoras de Ca<2+>seguido de liberación de liberación de Ca<2+>desde las reservas. Pero hay otros varios métodos para vaciar las reservas. Estos métodos incluyen los siguientes:

1) elevación de IP<3>en el citosol (después de estimulación del receptor o dializando el citosol con el propio IP<3>o congéneres relacionados como el análogo no metabolizable Ins(2,4,5)P<3>);

2) aplicación de un ionóforo de Ca<2+>(por ejemplo, ionomicina) para permeabilizar la membrana del ER;

3) diálisis del citoplasma con altas concentraciones de quelantes de Ca<2+>(por ejemplo, EGTA o BAPTA), que quelan Ca<2+>que filtra desde las reservas y, por tanto, evita el rellenado de la reserva;

4) exposición a los inhibidores de Ca<2+>-ATPasa del retículo sarcoplasmático/endoplasmático (SERCA) como tapsigargina, ácido ciclopiazónico y di-terc-butilhidroquinona;

5) sensibilización de los receptores de IP<3>a niveles en reposo de InsP3 con agentes como timerosal; y

6) carga de quelantes de metal Ca<2+>permeables de membrana como N,N,N',N'-tetraquis(2-piridilmetil)etilendiamina (TPEN) directamente en las reservas.

A través de la acción de masas, TPEN reduce la concentración de Ca<2+>intraluminal libre sin cambiar el Ca<2+>de la reserva total de modo que se genera la señal dependiente de reducción de la reserva.

Estos métodos de vaciado de las reservas no están desprovistos de posibles problemas. La característica clave de la entrada de Ca<2+>accionada por reserva es que es la caída en el contenido de Ca<2+>dentro de los reservas y no posterior elevación en la concentración de Ca<2+>citoplasmático lo que activa los canales. Sin embargo, la ionomicina y los bloqueadores de la bomba SERCA en general provocan una elevación en la concentración de Ca<2+>citoplasmático como consecuencia de la reducción de reservas y dicha elevación en Ca<2+>podría abrir los calanes de cationes activados por Ca<2+>permeables a Ca<2+>. Una manera para evitar dichos problemas es usar agentes en condiciones donde el Ca<2+>citoplasmático se halla tamponado fuertemente con altas concentraciones de quelante de Ca<2+>tal como EGTA o BAPTA.

Entrada de calcio accionada por reserva

La concentración de calcio reducida en las reservas de calcio intracelular, tales como el retículo endoplasmático resultante de la liberación de calcio desde las mismas, proporciona una señal para el flujo entrante de calcio desde el medio extracelular a la célula. Este flujo entrante de calcio, que produce una elevación "meseta" mantenida de la concentración de calcio citosólico, en general no se basa en canales de membrana plasmática abiertos por voltaje y no implica la activación de canales de calcio por calcio. Este mecanismo de flujo entrante de calcio se denomina entrada de calcio capacitiva (CCE), entrada de calcio activada por liberación de, accionada por reserva de o accionada por reducción de calcio. La entrada de calcio accionada por reserva puede registrarse como una corriente iónica con propiedades distintivas. Esta corriente se denomina I<soc>(corriente accionada por reserva) o I<crac>(corriente activada por liberación de calcio).

El análisis electrofisiológico de las corrientes accionadas por reserva o activadas por liberación de calcio revela distintas propiedades biofísicas (véase, por ejemplo, Parekh y Penner (1997) Physiol. Rev. 77:901-930) de estas corrientes. Por ejemplo, la corriente puede activarse por reducción de las reservas de calcio intracelular (por ejemplo, por activadores no fisiológicos tales como tapsigargina, CPA, ionomicina y BAPTA, y activadores fisiológicos tales como IP<3>) y puede ser selectiva para cationes divalentes, tal como calcio, sobre los iones monovalentes en soluciones y condiciones fisiológicas, puede verse incluida por cambios en los niveles de calcio citosólico y puede mostrar selectividad y conductividad alteradas en presencia de bajas concentraciones extracelulares de cationes divalentes. La corriente también puede bloquearse o potenciarse por 2-APB (dependiendo de la concentración) y bloquearse por SKF96365 y Gd<3+>y en general puede describirse como una corriente de calcio que no se abre por voltaje estrictamente.

Los estudios de pinzamiento zonal en mastocitos y linfocitos T leucémicos de Jurkat han establecido el mecanismo de entrada CRAC como un canal de iones con características biofísicas distintivas, incluyendo una alta selectividad para Ca<2+>emparejado con una conductancia excesivamente baja. Además, el canal CRAC demostró cumplir los criterios rigurosos para ser de los accionados por reserva, que es la activación únicamente por la reducción de Ca<2+>en el ER en lugar de por Ca<2+>citosólico u otros mensajeros generados por PLC (Prakriyaet al.,In Molecular and Cellular Insights into Ion Channel Biology (ed. Robert Maue) 121-140 (Elsevier Science, Ámsterdam, 2004)).

Regulación de entrada de calcio accionada por reserva por reservas de calcio intracelular

La entrada de calcio accionada por reserva se regula por el nivel de calcio dentro de una reserva de calcio intracelular. Las reservas de calcio intracelular pueden caracterizarse por sensibilidad a agentes, que pueden ser fisiológicos o farmacológicos, que activan la liberación de calcio desde las reservas o inhiben la captación de calcio en las reservas. Se han estudiado diferentes células en la caracterización de reservas de calcio intracelular, y las reservas se han caracterizado como sensibles a diversos agentes incluyendo, aunque sin limitación, IP<3>y compuestos que afectan al receptor de IP<3>, tapsigargina, ionomicina y/o ADP cíclico-ribosa (ADPcR) (véanse, por ejemplo, Berridge (1993) Nature 361:315-325; Churchill y Louis (1999) Am. J. Physiol. 276: C426-C434; Dargieet al.,(1990) Cell Regul. 1:279-290; Gerasimenkoet al.(1996) Cell 84: 473-480; Gromodaet al.,(1995) FEBS Lett. 360:303-306; Guseet al.(1999) Nature 398: 70-73).

La acumulación de calcio dentro de los orgánulos de almacenamiento retículo endoplasmático y retículo sarcoplasmático (SR; una versión especializada del retículo endoplasmático en músculo estriado) se consigue a través de ATPasas de calcio del retículo sarcoplasmático-endoplasmático (SERCA), habitualmente denominadas bombas de calcio. Durante la señalización (es decir, cuando los canales del retículo endoplasmático se activan para proporcionar la liberación de calcio desde el retículo endoplasmático al citoplasma), el calcio del retículo endoplasmático se repone por la bomba SERCA con calcio citoplasmático que ha entrado en la célula desde el medio extracelular (Yu y Hinkle (2000) J. Biol. Chem. 275:23648-23653); Hoferet al.(1998) EMBO J. 17:1986-1995).

Los canales de liberación de calcio asociados a los receptores de IP<3>y rianodina proporcionan liberación controlada de calcio desde el retículo endoplasmático y sarcoplasmático al citoplasma produciendo aumentos transitorios en la concentración de calcio citoplasmático. La liberación de calcio mediada por el receptor de IP<3>se desencadena por IP<3>formado por la descomposición de fosfoinosítidos de la membrana plasmática a través de la acción de fosfolipasa C, que se activa por unión de un agonista a un receptor acoplado a proteína G de membrana plasmática o tirosina cinasa. La liberación de calcio mediada por el receptor de rianodina se desencadena por un aumento en el calcio citoplasmático y se denomina liberación de calcio inducida por calcio (CICR). La actividad de los receptores de rianodina (que tienen afinidad por rianodina y cafeína) también puede regularse por ADP cíclico-ribosa.

Por tanto, los niveles de calcio en las reservas, y en el citoplasma, fluctúan. Por ejemplo, la concentración de calcio libre en el ER puede disminuir de un intervalo de aproximadamente 60-400 pM a aproximadamente 1-50 pM cuando las células HeLa se tratan con histamina, un agonista de los receptores de histamina ligados a PLC (Miyawakiet al.(1997) Nature 388:882-887). La entrada de calcio accionada por reserva se activa según se reduce la concentración de calcio libre en las reservas intracelulares. La reducción de calcio en la reserva, así como el aumento concomitante en la concentración de calcio citosólico, puede, por tanto, regular la entrada de calcio accionada por reserva al interior de las células.

Tamponamiento de calcio citoplasmático

La activación por agonista de los procesos de señalización en células puede implicar aumentos drásticos en la permeabilidad al calcio del retículo endoplasmático, por ejemplo, a través de la abertura de canales del receptor de IP<3>y la membrana plasmática a través de una entrada de calcio accionada por reserva. Estos aumentos en la permeabilidad al calcio están asociados a un aumento en la concentración de calcio citosólico que puede separarse en dos componentes: un "pico" de liberación de calcio desde el retículo endoplasmático durante la activación del receptor de IP<3>y una fase de meseta que es una elevación mantenida de los niveles de calcio resultante de la entrada de calcio en el citoplasma desde el medio extracelular. Tras la estimulación, la concentración de calcio libre intracelular en reposo de aproximadamente 100 nM puede elevarse globalmente a más de 1 pM y mayor en microdominios de la célula. La célula modula estas señales de calcio con tampones de calcio endógenos, incluyendo tamponamiento fisiológico por orgánulos tales como mitocondrias, retículo endoplasmático y aparato de Golgi. La captación mitocondrial de calcio a través del uniportador en la membrana interna está dirigida por el potencial de membrana mitocondrial negativo grande, y el calcio acumulado se libera lentamente a través de los intercambiadores dependientes e independientes de sodio y, en algunas circunstancias, el poro de transición de permeabilidad (PTP). Por tanto, las mitocondrias pueden actuar como tampones de calcio tomando calcio durante periodos de activación celular y pueden liberarlo lentamente después. La captación de calcio en el retículo endoplasmático está regulada por la ATPasa de calcio del retículo sarcoplasmático y endoplasmático (SERCA). La captación de calcio en el aparato de Golgi está mediada por una ATPasa de transporte de calcio de tipo P (PMR<1>/ATP2C<1>). Adicionalmente, hay evidencias de que una cantidad significativa del calcio liberado tras la activación del receptor de IP<3>se extruye desde la célula a través de la acción de la ATPasa de calcio de la membrana plasmática. Por ejemplo, las ATPasas de calcio de la membrana plasmática proporcionan el mecanismo dominante para la eliminación de calcio en linfocitos T humanos y células Jurkat, aunque el intercambio de sodio/calcio también contribuye a la eliminación de calcio en linfocitos T humanos. Dentro de los orgánulos de almacenamiento de calcio, los iones de calcio pueden unirse a proteínas tamponadoras de calcio especializadas tales como, por ejemplo, calsecuestrinas, calreticulinas y calnexinas. Adicionalmente, hay proteínas tamponadoras de calcio en el citosol que modulan los picos de calcio y ayudan en la redistribución de los iones de calcio. Por tanto, las proteínas y otras moléculas que participan en cualquiera de estos mecanismos y otros a través de los que pueden reducirse los niveles de calcio citosólicos son proteínas que están implicadas en, participan en y/o proporcionan tamponamiento del calcio citoplasmático. Por tanto, el tamponamiento de calcio citoplasmático ayuda a regular los niveles de Ca<2+>citoplasmático durante periodos de flujo entrante de calcio mantenido a través de canales SOC o ráfagas de liberación de Ca<2+>. Aumentos grandes en los niveles de Ca<2+>citoplasmático o rellenado de las reservas desactivan SOCE.

Acontecimientos posteriores mediados por entrada de calcio

Además de los cambios intracelulares en las reservas de calcio, la entrada de calcio accionada por reserva afecta a multitud de acontecimientos que son consecuentes a o además de los cambios accionados por reserva. Por ejemplo, el flujo entrante de Ca2+ provoca la activación de una gran cantidad de enzimas dependientes de calmodulina incluyendo la serina fosfatasa calcineurina. La activación de calcineurina por un aumento en el calcio intracelular provoca procesos de secreción aguda tales como desgranulación de mastocitos. Los mastocitos activados liberan gránulos preformados que contienen histamina, heparina, TNFa y enzimas tales como p-hexosaminidasa. Algunos acontecimientos celulares, tales como proliferación de linfocitos B y T, requieren señalización mantenida por calcineurina, que requiere un aumento mantenido en el calcio intracelular. Varios factores de transcripción se regulan por calcineurina, incluyendo NFAT (factor nuclear de linfocitos T activados), MEF2 y NFkB. Los factores de transcripción NFAT desempeñan funciones importantes en muchos tipos celulares, que incluyen las células inmunitarias. En los inmunocitos, NFAT media la transcripción de una gran cantidad de moléculas, entre las que se incluyen citocinas, quimiocinas y receptores de superficie celular. Se han encontrado elementos transcripcionales para NFAT dentro de los promotores de citocinas tales como IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-8, IL-13, así como el factor de necrosis tumoral alfa (TNFa), el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) e interferón gamma (y-IFN).

La actividad de las proteínas NFAT se regula por su nivel de fosforilación, que a su vez se regula tanto por calcineurina como por NFAT cinasas. La activación de calcineurina por un aumento en los niveles de calcio intracelular provoca la desfosforilación de NFAT y la entrada en el núcleo. La refosforilación de NFAT enmascara la secuencia de localización nuclear de NFAT y evita su entrada en el núcleo. A causa de su fuerte dependencia de la fosforilación mediada por calcineurina para la localización y actividad, NFAT es un indicador sensible de niveles de calcio libre intracelular.

Inhibidores del canal de calcio

En el presente documento se divulgan varios inhibidores del canal de calcio coherentes con los métodos, composiciones, pautas de administración y composiciones para el uso divulgado en el presente documento.

En algunas realizaciones el inhibidor de canal de calcio es un inhibidor de CRAC.

En algunas realizaciones, el compuesto es un compuesto que tiene la estructura de:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunos aspectos el inhibidor de la señalización de calcio intracelular se elige entre los compuestos, N-(5-(7-cloro-2,3-dihidro-[1,4]dioxin-[2,3-b]piridm-6-il)piridín-2-il)-2,6-difluorobenzamida, N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Señalización de calcio y salud pancreática

La señalización de calcio es central para la actividad pancreática saludable. Los alimentos estimulan la liberación de acetilcolina (ACh) y colecictocinina (CCK), que interactúan con receptores ligados a fosfolipasa C (PLC) en células acinares pancreáticas (PAC). En PAC sanas, los receptores de ACh o CCK desencadenan la formación de IP<3>, 1,4,5-inositol trifosfato, que difunde a la región apical y estimula los receptores de IP<3>en el retículo endoplasmático (ER) para liberar Ca<2+>de una manera pulsátil controlada. Las oscilaciones de Ca<2+>estimulan la liberación de zimógenos (proenzimas) en el conducto pancreático. Con el paso del tiempo, el Ca<2+>del ER tiene que reponerse, lo que se consigue mediante activación suave de los canales CRAC en la región basolateral de la célula.

En determinadas situaciones (por ejemplo, alcoholismo o ebriedad, cálculos biliares, etc.), los ésteres etílicos de ácido graso (FAEE) formados a partir de alcohol, o ácidos biliares que se acumulan debido a cálculos biliares difunden en las PAC. Dentro de las PAC, los FAEE y ácidos biliares provocan liberación masiva de Ca<2+>del ER activando los receptores de IP<3>. La hiperestimulación de receptores de CCK también puede provocar una fuerte liberación de Ca<2+>desde las reservas de ER. El vaciado de las reservas de Ca<2+>da lugar a hiperactivación de canales CRAC, provocando flujo entrante excesivo de Ca<2+>. El gran flujo entrante de Ca<2+>provoca liberación de enzimas desde gránulos de zimógeno, y activación inapropiada de tripsina intracelular, que por sí misma entonces activa otras enzimas digestivas pancreáticas e inicia la autodigestión y necrosis del páncreas que puede bloquearse por un inhibidor del canal CRAC tal como los compuestos de referencia Compuesto I, GSK-7975A, N-(5-(2,5-dimetilbenzo[d]oxazol-6-il)tiazol-2-il)-2,3,6-trifluorobenzamida ("Compuesto II") o 2,3,6-trifluoro-N-(3-fluoro-4-(1-metil-3-(trifluorometil)-1H-pirazol-5il)fenil)benzamida ("Compuesto III").

Si no se aborda, la liberación inapropiada y activación de enzimas digestivas, tales como tripsina, a partir de gránulos de zimógeno, puede dar lugar a autodigestión de células pancreáticas, dando lugar a pancreatitis. Como se ha mencionado anteriormente, la pancreatitis aguda o crónica puede tener un efecto negativo sustancial en la salud de un individuo.

Síntomas y causas de pancreatitis

La pancreatitis, aguda o crónica, está asociada a dolor urente grave del cuadrante superior izquierdo o abdominal superior que irradia a la espalda, náuseas y vómitos que empeoran al comer. Dependiendo de la intensidad de la afección, también puede producirse hemorragia interna. La tensión arterial, el ritmo cardiaco y respiratorio a menudo se elevan, aunque la deshidratación puede dar lugar a una disminución en lugar de un aumento en la tensión arterial. El abdomen a menudo se vuelve sensible, pero menos que el dolor en el propio páncreas. Normalmente se observa parálisis refleja del intestino en casos de pancreatitis, y fiebre o ictericia no son infrecuentes. Síntomas y signos comunes de pancreatitis incluyen: dolor epigástrico grave (dolor abdominal superior) que irradia a la espalda, náuseas, vómitos, pérdida de apetito, fiebre, escalofríos (temblores), inestabilidad hemodinámica (que incluye choque), taquicardia (ritmo cardiaco rápido), dificultad respiratoria y peritonitis.

Síntomas observados menos frecuentemente, indicativos de enfermedad grave, incluyen varios "signos" médicos indicativos de malestar abdominal grave: signo de Grey-Turner (decoloración hemorrágica de los costados), signo de Cullen (decoloración hemorrágica del ombligo), efusiones pleurales (líquido en las bases de la cavidad pleural), signo de Grünwald (aparición de equimosis, hematomas grandes, alrededor del ombligo debido a lesión tóxica local de los vasos), signo de Korte (dolor o resistencia en la zona donde está localizada la cabeza del páncreas (en el epigastrio, 6-7 cm por encima del ombligo)), signo de Kamenchik (dolor con presión en la apófisis xifoides), signo de Mayo-Robson (dolor mientras se presiona en la parte superior del ángulo lateral a los músculos espinales erectores y por debajo de la 12.a costilla izquierda (ángulo costovertebral izquierdo (CVA)) tal como en el punto de Mayo-Robson (un punto en el límite del 2/3 interino con el 1/3 externo de la línea que representa la bisección del cuadrante abdominal superior izquierdo, donde existe sensibilidad a la presión en enfermedad del páncreas. En este punto la cola del páncreas se proyecta a la pared abdominal).

Una persona que padece pancreatitis puede demostrar algunos, todos o de pocos a ninguno de los síntomas mencionados anteriormente. En algunos casos, el dolor abdominal puede ser el único síntoma de la afección.

La pancreatitis crónica puede dar lugar a diabetes o cáncer pancreático. Defectos en el aporte de enzimas digestivas tales como tripsina pueden dar lugar a digestión alterada, dando lugar a pérdida de peso.

Tanto como un ochenta por ciento de los casos de pancreatitis están provocados por alcohol y cálculos biliares. Los cálculos biliares son la única etiología más común de pancreatitis aguda. El alcohol es la única etiología más común de pancreatitis crónica.

Sin embargo, además del alcohol y los cálculos biliares, hay varias causas adicionales de pancreatitis. Algunas medicaciones pueden estar asociadas a pancreatitis. Ejemplos de medicaciones asociadas a pancreatitis incluyen corticoesteroides tales como prednisolona, fármacos contra el VIH tales como didanosina y pentamidina, diuréticos, anticonvulsivos tales como ácido valproico, agentes quimioterápicos tales como L-asparaginasa y azatioprina, estrógeno, medicaciones que aumentan los triglicéridos sanguíneos, estatinas tales como estatinas hipocolesterolemiantes, agentes antihiperglucémicos como metformina y gliptinas tales como vildagliptina, sitagliptina, saxagliptina y linagliptina, tetraciclina, sulfonamidas, azatioprina, mercaptopurina, pentamidina, grimetoprimsuilfametoxazol y salicilatos. En algunos casos, fármacos que se usan para tratar afecciones asociadas a acontecimientos aumentados de pancreatitis también pueden estar ligados de manera fortuita a pancreatitis. Ejemplos incluyen estatinas en dislipidemia y gliptinas en diabetes. Adicionalmente, algunos antisicóticos atípicos tales como clozapina, risperidona y olanzapina también pueden ser responsables de provocar pancreatitis. Esta lista no es exhaustiva.

También se conocen causas no farmacéuticas de pancreatitis. Por ejemplo, se conocen formas hereditarias de pancreatitis que provocan la activación de tripsinógeno dentro del páncreas, dando lugar a autodigestión. Los genes implicados en la pancreatitis hereditaria incluyen tripsina 1, que codifica tripsinógeno, SPIMK1, que codifica un inhibidor de tripsina y regulador de la conductancia transmembranaria de fibrosis quística.

Otras causas no farmacéuticas comunes incluyen traumatismo, paperas, enfermedad autoinmunitaria, calcio sanguíneo elevado, hipotermia y someterse a colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP). El páncreas dividido es una malformación congénita común del páncreas que puede subyacer a algunos casos recurrentes. Las úlceras penetrantes también están asociadas a pancreatitis. La diabetes mellitus de tipo 2 está asociada a un riesgo 2,8 veces mayor de desarrollar síntomas de pancreatitis. Afecciones adicionales asociadas a pancreatitis incluyen cáncer pancreático, cálculos en los conductos pancreáticos, vasculitis (inflamación de los vasos sanguíneos pequeños en el páncreas), infección por coxsackievirus y porfiria, particularmente porfiria intermitente aguda y protoporfiria eritropoyética. El embarazo está asociado a pancreatitis en algunos casos. Correr maratones repetidamente, la anorexia y la bulimia, así como la necrosis grasa, la fibrosis quística y el veneno de escorpión están implicados en algunos casos de pancreatitis.

Varios agentes infecciosos están implicados en pancreatitis. Ejemplos incluyen infección vírica por virus tales como citomegalovirus, virus de la hepatitis B, virus del herpes simple, rubulavirus de las paperas, virus de varicela-zóster; infección bacteriana, tal como por bacterias de los génerosLegionella, Leptospira, MycoplasmaoSalmonella;infección fúngica tal como por hongos de los génerosAspergillus;o infección parasitaria por nematodos del géneroAscariso por apicomplejos alveolados de los génerosCryptosporidiumyToxoplasma;entre otros.

La regla nemotécnica de los estudiantes de medicina "GETSMASHED" se usa a menudo para recordar algunas de las causas comunes de pancreatitis: G - cálculos biliares E - etanol T - traumatismo S - esteroides M - paperas A -pancreatitis autoinmunitaria S - picadura de escorpión H - hiperlipidemia, hipotermia, hiperparatiroidismo E -colangiopancreatografía retrógrada endoscópica D - fármacos habitualmente azatioprina, ácido valproico.

La pancreatitis también puede ser idiopática, en cuyo caso no se identifica la causa.

Clasificación de pancreatitis

La pancreatitis, particularmente la pancreatitis aguda, se clasifica a menudo como "leve", "moderada" o "grave" dependiendo de la respuesta predominante a la lesión celular. Estas categorías están todas caracterizadas por la activación incorrecta de zimógenos pancreáticos tales como tripsinógenos dentro del páncreas, a menudo debido a la colocalización con la tripsinógeno maturasa catepsina, que activa el tripsinógeno en tripsina. Estas tres categorías se caracterizan por inflamación y edema del páncreas. La pancreatitis moderada y grave se caracterizan además por necrosis pancreática y lesión secundaria a órganos extrapancreáticos, padeciendo los pacientes con pancreatitis aguda moderada insuficiencia orgánica transitoria (<48 horas), mientras que los pacientes con pancreatitis aguda grave tienen insuficiencia orgánica persistente (>48 horas).

En respuesta a los problemas mencionados anteriormente, el páncreas puede sintetizar directamente mediadores inflamatorios tales como TNF-a e IL-1, asociados a una respuesta inflamatoria y reclutamiento de neutrófilos al páncreas, o debido a necrosis y extravasación de componentes celulares, activan de otro modo el sistema inmunitario. La respuesta inflamatoria puede dar lugar a manifestaciones secundarias de pancreatitis, tales como hipovolemia por permeabilidad capilar, síndrome de dificultad respiratoria aguda, coagulaciones intravasculares diseminadas, insuficiencia renal, insuficiencia cardiovascular y hemorragia gastrointestinal.

La pancreatitis aguda (necrosis pancreática hemorrágica aguda) puede caracterizarse además por inflamación aguda y necrosis del parénquima del páncreas, necrosis enzimática focal de la grasa pancreática y necrosis de los vasos (hemorragia) como resultado de la activación intrapancreática de las enzimas pancreáticas. La activación de la lipasa puede producir necrosis del tejido graso en el intersticio pancreático y los espacios peripancreáticos, así como daño en los vasos. La digestión de las paredes vasculares provoca trombosis y hemorragia. El infiltrado inflamatorio es rico en neutrófilos. Debido a que el páncreas carece de una cápsula, la inflamación y la necrosis pueden extenderse para incluir las capas fasciales en las cercanías inmediatas del páncreas.

La pancreatitis crónica es una inflamación de prolongada del páncreas que altera la estructura y función normales del órgano. Puede asociarse a episodios de pancreatitis aguda o con dolor abdominal persistente o defectos digestivos. Los que padecen pancreatitis crónica habitualmente demuestran dolor abdominal persistente y mala absorción de las grasas de los alimentos. También es común dolor durante el consumo de alimentos, particularmente el consumo de alimentos grasos o altos en proteínas. La pérdida de peso, debido a la mala absorción del consumo de alimentos o a una reducción en el consumo de alimentos debido a malestar, también es común.

Una complicación común de la pancreatitis crónica es diabetes.

El alcoholismo, el tabaquismo, desnutrición, traumatismo, hipercalcemia, cálculos calcificados, fibrosis quística y defectos hereditarios en el procesamiento y estabilidad del tripsinógeno están asociados habitualmente a pancreatitis crónica.

La pancreatitis crónica se diagnostica normalmente basándose en ensayos sobre la estructura y función pancreáticas. La amilasa y lipasa séricas pueden estar o no elevadas moderadamente en casos de pancreatitis crónica, debido a niveles indeterminados de daño de células productivas. La lipasa elevada es la más probablemente encontrada de las dos. La amilasa y la lipasa casi siempre se encuentran elevadas en estado agudo junto con un marcador inflamatorio CRP elevado que está ampliamente en línea con la gravedad de la afección.

Un ensayo de estimulación de secretina es quizá el ensayo funcional más preciso para el diagnóstico de pancreatitis crónica. La alteración de la producción de bicarbonato precoz en la pancreatitis crónica se usa para identificar personas en las primeras fases de enfermedad (sensibilidad de un 95 %). Los ensayos adicionales usados para determinar la pancreatitis crónica son medición de elastasa fecal en deposiciones, tripsinógeno sérico, tomografía computarizada (CT), ultrasonidos, EUS, MRI, ERCP y MRCP. Puede observarse calcificación pancreática en rayos X abdominales, así como exploraciones CT. Notablemente, sin embargo, la ERCP y los rayos X pueden desencadenar pancreatitis aguda.

Varios ensayos adicionales están disponibles para ensayar la pancreatitis crónica. Los niveles elevados de bilirrubina sérica y fosfatasa alcalina pueden indicar pancreatitis crónica, en algunos casos indicando estenosis del conducto biliar común debido a edema, fibrosis o cáncer. La pancreatitis crónica relacionada con respuesta autoinmunitaria puede verse acompañada por elevaciones en ESR, IgG4, factor reumatoide, ANA y anticuerpo antimúsculo liso, cuyo ensayo de cualquiera de ellos puede indicar pancreatitis crónica en una persona. Un síntoma clásico de pancreatitis crónica, esteatorrea o mala absorción de los alimentos, puede diagnosticarse por dos estudios diferentes: tinción química con Sudán de las heces o excreción de grasa fecal de 7 gramos o más durante un periodo de 24 h en una dieta de 100 g de grasa. Para comprobar la disfunción exocrina pancreática, un ensayo sensible y específico ilustrativo es la medición de elastasa fecal, que puede hacerse con una sola muestra de deposiciones, y un valor de menos de 200 |jg/g indica insuficiencia pancreática.

Se conocen varios métodos para evaluar la gravedad de la pancreatitis en una persona. Los ensayos comunes incluyen BISAP, Ranson's, ApACHE-II y CTSI. El ensayo BISAP, por ejemplo, se basa en los siguientes criterios evaluados en las primeras 24 horas después de la admisión: nitrógeno de la urea sanguíneo > 25 mg/dl (8,92 mmol/l); Estado mental alterado, se define como: desorientación, letargia, somnolencia, coma o sopor; criterios de síndrome de respuesta inflamatoria sistémica >2; edad > 60; y efusión pleural presente. Una evaluación positiva sobre cualquiera de estos criterios da como resultado un "punto" en una puntuación total que varía de 0 a 5. En algunas implementaciones del ensayo, las tasas de mortalidad variaban de menos de un 1 % en el grupo de menor riesgo a más de un 20 % en el grupo de mayor riesgo.

Varias referencias analizan ensayos para la gravedad de la pancreatitis, cada una de ellas incorporada por la presente por referencia: Wu BU, Johannes RS, Sun X, Tabak Y, Conwell DL, Banks P.A. The early prediction of mortality in acute pancreatitis: a large population-based study.Gut.diciembre de 2008; 57(12):1698-703. doi: 10.1136/gut.2008.152702. Epub 2 de junio de 2008. PubMed PMID: 18519429; Papachristou GI, Muddana V, Yadav D, O'Connell M, Sanders MK, Slivka A, Whitcomb DC. Comparison of BISAP, Ranson's, APACHE-II, and CTSI scores in predicting organ failure, complications, and mortality in acute pancreatitis. Am J Gastroenterol. febrero de 2010;105(2):435-41; quiz 442. doi: 10.1038/ajg.2009.622. Epub 2009 Oct 27. PubMed PMID: 19861954; y Gompertz M, Fernandez L, Lara I, Miranda JP, Mancilla C, Berger Z. [Bedside index for severity in acute pancreatitis (BISAP) score as predictor of clinical outcome in acute pancreatitis: retrospective review of 128 patients]. Rev Med Chil. agosto de 2012; 140(8): 977-83. doi: 10,1590/S0034-98872012000800002. Español. PubMed PMID: 23282769.

Mejora terapéutica de la pancreatitis

En el presente documento se divulgan composiciones y métodos para la mejora terapéutica de la pancreatitis y síntomas de la misma a través de la administración de un inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC, como se define en las reivindicaciones adjuntas. En algunas realizaciones, la pancreatitis es pancreatitis aguda. En algunas realizaciones, la pancreatitis es pancreatitis crónica. En algunas realizaciones, se divulga un método de mejora de los síntomas de pancreatitis en una persona. En algunas realizaciones, se divulga un método de mejora de los síntomas de pancreatitis en una persona, que comprende las etapas de identificar una persona que necesita mejora de síntomas de pancreatitis y administrarla un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas, a una dosis suficiente para mejorar dichos síntomas.

La persona puede identificarse usando, por ejemplo, un ensayo común para síntomas de pancreatitis, tales como BISAP, Ranson's, APACHE-II y CTSI. El ensayo puede ser BISA<p>. El ensayo puede ser de Ranson. El ensayo puede ser APACHE II. El ensayo puede ser CTSI. En algunas realizaciones, una persona se identifica como una persona que necesita mejora de síntomas de pancreatitis al tener una puntuación de BISAP de 5, 4, 3, 2 o 1. En algunas realizaciones, la persona se identifica por tener una puntuación de BISAP de 2. En algunas realizaciones, la persona se identifica por tener una puntuación de BISAP de 3. En algunas realizaciones, la persona se identifica por tener una puntuación de BISAP de 4. En algunas realizaciones, la persona se identifica por tener una puntuación de BISAP de 5. En algunas realizaciones, una persona se identifica por tener al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o más de 9 síntomas de pancreatitis, tal como los síntomas de pancreatitis divulgados en el presente documento. En algunas realizaciones, en lugar de una persona, el sujeto es un mamífero no humano.

En algunas realizaciones, los síntomas son síntomas de pancreatitis aguda. En algunas realizaciones, los síntomas son síntomas de pancreatitis crónica.

Los síntomas pueden comprender al menos uno de dolor abdominal, niveles aumentados de amilasa sanguínea, niveles aumentados de lipasa sanguínea, páncreas agrandado, náuseas, vómitos, hemorragia interna, parálisis intestinal, fiebre, ictericia, pérdida de peso y ritmo cardiaco elevado. Los síntomas pueden comprender activación prematura de enzimas digestivas. La activación prematura de enzimas digestivas puede producirse, por ejemplo, en el páncreas de dicha persona. En algunas realizaciones, la enzima comprende tripsina.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica, en la que la medicación analgésica comprende un opiáceo. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica, en la que la medicación analgésica comprende morfina. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica, en la que la medicación analgésica comprende un fentanilo. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica, en la que la medicación analgésica comprende tramadol. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica, en la que la medicación analgésica comprende meperidina.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es igual a, de aproximadamente o mayor que el valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto. En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es 1,5x, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x, 11x, 12x, 13x, 14x, 15x, 16x, 17x, 18x,

19x, 20x, 21x, 22x, 23x, 24x, 25x, 26x, 27x, 28x, 29x, 30x, 31x, 32x, 33x, 34x, 35x, 36x, 37x, 38x, 39x, 40x, 41x,

63x, 64x, 65x, 87x, 88x, 89x, 91x, 92x, 93x, 94x, 95x, 96x, 97x, 98x, 99x, 100x o cualquier múltiplo no entero que varía de 1x a 100x del valor de

CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que varía de 1x a 100x, 2x a 80x, 3x a 60x, 4x a 50x, 5x a 45x, 6x a 44x, 7x a 43x, 8x a 43x,

9x a 41x o 10x a 40x o cualquier número no entero dentro de dicho intervalo, del valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 11 pM, 12 pM,

13 pM, 14 pM, 15 pM, 16 pM, 17 pM, 18 pM, 19 pM, 20 pM, 21 pM, 22 pM, 23 pM, 24 pM, 25 pM, 26 pM, 27 pM,

28 pM, 29 pM, 30 pM, 31 pM, 32 pM, 33 pM, 34 pM, 35 pM, 36 pM, 37 pM, 38 pM, 39 pM, 40 pM, 41 pM, 42 pM,

43 pM, 44 pM, 45 pM, 46 pM, 47 pM, 48 pM, 49 pM, 50 pM, 51 pM, 52 pM, 53 pM, 54 pM, 55 pM, 56 pM, 57 pM,

58 pM, 59 pM, 60 pM, 61 pM, 62 pM, 63 pM, 64 pM, 65 pM, 66 pM, 67 pM, 68 pM, 69 pM, 70 pM, 71 pM, 72 pM,

73 pM, 74 pM, 75 pM, 76 pM, 77 pM, 78 pM, 79 pM, 80 pM, 81 pM, 82 pM, 83 pM, 84 pM, 85 pM, 86 pM, 87 pM,

88 pM, 89 pM, 90 pM, 91 pM, 92 pM, 93 pM, 94 pM, 95 pM, 96 pM, 97 pM, 98 pM, 99 pM, 100 pM o cualquier múltiplo no entero que varíe de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 100 pM.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que varía de 1 pM a 100 pM, 2 pM a 90 pM, 3 pM a 80 pM, 4 pM a 70 pM, 5 pM a 60 pM,

6 pM a 50 pM, 7 pM a 40 pM, 8 pM a 30 pM, 9 pM a 20 pM o 10 pM a 40 pM o cualquier número entero o no entero dentro de dicho intervalo.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que varía de 9,5 pM a 10,5 pM, 9 pM a 11 pM, 8 pM a 12 pM, 7 pM a 13 pM, 5 pM a 15 pM,

2 pM a 20 pM o 1 pM a 50 pM o cualquier número entero o no entero dentro de dicho intervalo.

En algunas realizaciones, la mejora de la pancreatitis comprende la reducción en la gravedad de al menos un síntoma de pancreatitis. En algunas realizaciones, la mejora de la pancreatitis comprende la reducción en la gravedad de al menos un síntoma de pancreatitis de modo que dicho síntoma ya no afecte a la persona previamente afectada. En algunas realizaciones, la mejora comprende reducción de al menos un síntoma de modo que no tenga efecto sobre la persona. En algunas realizaciones, la mejora comprende un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %,

90 %, 95 % o 100 % de reducción en dicho síntoma. En algunas realizaciones, la mejora comprende reducción en la gravedad de una pluralidad de síntomas, tal como 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o más de 9 síntomas, hasta e incluyendo todos los síntomas, comprendiendo dicha reducción un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %

o 100 % de reducción en dichos síntomas.

En algunas realizaciones, la mejora comprende detener la progresión de la pancreatitis tal como pancreatitis aguda o pancreatitis crónica. En algunas realizaciones, la mejora comprende detener la progresión de la pancreatitis tal como pancreatitis aguda o pancreatitis crónica de modo que ya no se produzcan más síntomas graves tales como insuficiencia orgánica, necrosis del páncreas o muerte.

Mejora profiláctica de pancreatitis aguda y crónica

En el presente documento se divulgan composiciones y métodos para la mejora profiláctica de pancreatitis aguda y síntomas de la misma a través de la administración de un inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC, como se define en las reivindicaciones adjuntas. En algunas realizaciones se divulga un método de mejora de los síntomas de pancreatitis en una persona. En algunas realizaciones se divulga un método de mejora de los síntomas de pancreatitis en una persona, que comprende las etapas de identificar una persona que necesita mejora profiláctica de los síntomas de pancreatitis, y administrarla un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas, a una dosis suficiente para mejorar profilácticamente dichos síntomas.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor del canal CRAC, como se define en las reivindicaciones adjuntas. En algunas realizaciones, la mejora de los síntomas de pancreatitis comprende además administrar una medicación analgésica tal como un opiáceo. La morfina es un analgésico ilustrativo en algunas realizaciones.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es igual a, de aproximadamente o mayor que el valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto. En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es 1,5x, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x, 11x, 12x, 13x, 14x, 15x, 16x, 17x, 18x, 19x, 20x, 21x, 22x, 23x, 24x, 25x, 26x, 27x, 28x, 29x, 30x, 31x, 32x, 33x, 34x, 35x, 36x, 37x, 38x, 39x, 40x, 41x, 42x, 43x, 44x, 45x, 46x, 47x, 48x, 49x, 50x, 51x, 52x, 53x, 54x, 55x, 56x, 57x, 58x, 59x, 60x, 61x, 62x, 63x, 64x, 65x, 66x, 67x, 68x, 69x, 70x, 71x, 72x, 73x, 74x, 75x, 76x, 77x, 78x, 79x, 80x, 81x, 82x, 83x, 84x, 85x, 86x, 87x, 88x, 89x, 90x, 91x, 92x, 93x, 94x, 95x, 96x, 97x, 98x, 99x, 100x o cualquier múltiplo no entero que varía de 1x a 100x del valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que varía de 1x a 100x, 2x a 80x, 3x a 60x, 4x a 50x, 5x a 45x, 6x a 44x, 7x a 43x, 8x a 43x, 9x a 41x o 10x a 40x o cualquier número no entero dentro de dicho intervalo, del valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 11 pM, 12 pM, 13 pM, 14 pM, 15 pM, 16 pM, 17 pM, 18 pM, 19 pM, 20 pM, 21 pM, 22 pM, 23 pM, 24 pM, 25 pM, 26 pM, 27 pM, 28 pM, 29 pM, 30 pM, 31 pM, 32 pM, 33 pM, 34 pM, 35 pM, 36 pM, 37 pM, 38 pM, 39 pM, 40 pM, 41 pM, 42 pM, 43 pM, 44 pM, 45 pM, 46 pM, 47 pM, 48 pM, 49 pM, 50 pM, 51 pM, 52 pM, 53 pM, 54 pM, 55 pM, 56 pM, 57 pM, 58 pM, 59 pM, 60 pM, 61 pM, 62 pM, 63 pM, 64 pM, 65 pM, 66 pM, 67 pM, 68 pM, 69 pM, 70 pM, 71 pM, 72 pM, 73 pM, 74 pM, 75 pM, 76 pM, 77 pM, 78 pM, 79 pM, 80 pM, 81 pM, 82 pM, 83 pM, 84 pM, 85 pM, 86 pM, 87 pM, 88 pM, 89 pM, 90 pM, 91 pM, 92 pM, 93 pM, 94 pM, 95 pM, 96 pM, 97 pM, 98 pM, 99 pM, 100 pM o cualquier múltiplo no entero que varíe de aproximadamente 1 pM a aproximadamente 100 pM.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que varía de 1 pM a 100 pM, 2 pM a 90 pM, 3 pM a 80 pM, 4 pM a 70 pM, 5 pM a 60 pM, 6 pM a 50 pM, 7 pM a 40 pM, 8 pM a 30 pM, 9 pM a 20 pM o 10 pM a 40 pM o cualquier número entero o no entero dentro de dicho intervalo.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que varía de 9,5 pM a 10,5 pM, 9 pM a 11 pM, 8 pM a 12 pM, 7 pM a 13 pM, 5 pM a 15 pM, 2 pM a 20 pM o 1 pM a 50 pM o cualquier número entero o no entero dentro de dicho intervalo.

En algunas realizaciones el método comprende mejorar profilácticamente un síntoma de pancreatitis aguda. En algunas realizaciones el método comprende mejorar profilácticamente un síntoma de pancreatitis crónica.

La mejora profiláctica de un síntoma de pancreatitis puede comprender reducir la gravedad, probabilidad de aparición o duración de al menos un síntoma de pancreatitis. La mejora profiláctica de un síntoma de pancreatitis puede comprender reducir la gravedad, probabilidad de aparición o duración de al menos un síntoma de pancreatitis hasta el punto de que dicho al menos un síntoma no se produzca en la persona. En algunas realizaciones, la mejora profiláctica de un síntoma de pancreatitis puede comprender reducir la gravedad, probabilidad de aparición o duración de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o más de 9 síntomas de pancreatitis, hasta e incluyendo reducir la gravedad, probabilidad de aparición o duración de todos los síntomas de pancreatitis en una persona, tal como los síntomas de pancreatitis divulgados en el presente documento. En algunas realizaciones, en lugar de una persona, el sujeto es un mamífero no humano.

En algunas realizaciones, la persona se diagnostica por tener cálculos biliares. En algunas realizaciones, la persona muestra síntomas de tener un cálculo biliar, tal como dolor, por ejemplo, dolor intenso, en el lado superior derecho del abdomen y/o náuseas y vómitos, lo que puede aumentar paulatinamente desde aproximadamente 30 minutos a varias horas. Un paciente también puede experimentar dolor referido entre las escápulas o por debajo del hombro derecho.

En algunas realizaciones, la persona padece alcoholismo. En algunas realizaciones, la persona padece consumo crónico de alcohol. En algunas realizaciones, la persona ha padecido al menos un caso de envenenamiento agudo con alcohol.

En algunas realizaciones, la persona se somete a una pauta farmacológica que comprende administración de al menos uno de un esteroide tal como un corticoesteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina tal como una estatina hipocolesterolemiante, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico, clozapina, risperidona y olanzapina.

En algunas realizaciones, la persona se identifica como portadora de una forma hereditaria de pancreatitis. En algunas realizaciones la persona porta un alelo mutante de tripsina 1 asociado a pancreatitis hereditaria. En algunas realizaciones la persona porta una variante de la enzima tripsinógeno asociada a pancreatitis. En algunas realizaciones la persona porta un alelo mutante de SPINK1 asociado a pancreatitis hereditaria. En algunas realizaciones la persona porta un alelo mutante de un regulador de la conductancia transmembranaria de fibrosis quística asociado a pancreatitis hereditaria.

En algunas realizaciones, la persona ha padecido al menos uno de calcio sanguíneo elevado, hipotermia, colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP), páncreas dividido, una malformación congénita del páncreas, diabetesmellitusde tipo 2, cáncer de páncreas, cálculos en los conductos pancreáticos, vasculitis, inflamación de los vasos sanguíneos pequeños en el páncreas, infección por coxsackievirus y porfiria, tal como porfiria intermitente aguda y protoporfiria eritropoyética.

En algunas realizaciones el estado de salud corporal de dicha persona se ha visto afectado por al menos uno de un cálculo biliar, envenenamiento por etanol, alcoholismo, traumatismo, paperas, un trastorno autoinmunitario, una picadura de escorpión, hiperlipidemia, hipotermia, hiperparatiroidismo y colangiopancreatografía retrógrada endoscópica, azatioprina y ácido valproico.

En algunas realizaciones el estado de salud corporal de dicha persona se ha visto influido por al menos uno de un coxsackievirus, un citomegalovirus, un virus de la hepatitis B, un virus del herpes simple, paperas, un virus de varicelazóster, una bacteriaLegionella,una bacteriaLeptospira,una bacteriaMycoplasma,una bacteriaSalmonella,un hongoAspergillus,un parásitoAscaris,una célula deCryptosporidiumy una célula deToxoplasma.

Administración de combinación con un fármaco o fármacos asociados a la pancreatitis

En el presente documento se divulgan composiciones y pautas de administración para la administración combinada de un inhibidor del canal de calcio y un fármaco asociado a pancreatitis. En algunas realizaciones una pauta de administración comprende la administración a un individuo de un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática, y la administración de un inhibidor de la señalización de calcio intracelular, como se define en las reivindicaciones adjuntas.

En algunas realizaciones, el fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática es un fármaco seleccionado de la lista que consiste en: un esteroide tal como un corticoesteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina tal como una estatina hipocolesterolemiante, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico, clozapina, risperidona, olanzapina, azatioprina y ácido valproico.

En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un inhibidor de CRAC como se define en las reivindicaciones adjuntas.

En algunas realizaciones, la pauta de administración comprende la administración de un inhibidor del canal de calcio tal como un inhibidor de CRAC, como se define en las reivindicaciones adjuntas, en concierto con un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, se administra la misma semana que un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, se administra simultáneamente con cada administración de un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, se administra en un patrón de pauta de administración que es independiente del patrón de administración para un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, se administra a través de la misma vía de administración, tal como por vía oral o intravenosa, como un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, se administra a través de una vía separada de administración en comparación con un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio tal como un inhibidor de CRAC tal como compuesto I se administra a una persona que recibe un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática solamente después de que dicha persona muestre al menos un signo de un impacto de dicho fármaco sobre la actividad pancreática, por ejemplo, a través de un aumento en la actividad amilasa sanguínea o actividad lipasa sanguínea, o a través de la manifestación de al menos un síntoma de pancreatitis como se divulga en el presente documento. En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas se administra a una persona que recibe un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática en ausencia de cualquier evidencia en o de dicha persona relacionada con cualquier signo de un impacto de dicho fármaco sobre la actividad pancreática, por ejemplo, a través de un aumento en la actividad amilasa sanguínea o actividad lipasa sanguínea, o a través de la manifestación de al menos un síntoma de pancreatitis como se divulga en el presente documento.

En algunas realizaciones, el inhibidor del canal de calcio, tal como un inhibidor de CRAC de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas, se administra en una sola composición con un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. Por consiguiente, algunas realizaciones divulgadas en el presente documento se refieren a una composición que comprende un inhibidor de la señalización de calcio intracelular y al menos un fármaco asociado a un impacto negativo sobre la actividad pancreática. En algunas realizaciones, el al menos un fármaco se selecciona de la lista que consiste en: un esteroide tal como un corticoesteroide, prednisolona, un fármaco contra el VIH, didanosina, pentamidina, un diurético, ácido valproico, L-asparaginasa, azatioprina, estrógeno, una estatina tal como una estatina hipocolesterolemiante, un agente antihiperglucémico, metformina, una glipina tal como vildagliptina y sitagliptina, un antipsicótico atípico, clozapina, risperidona, olanzapina, azatioprina y ácido valproico.

En algunas realizaciones el inhibidor de la señalización de calcio intracelular se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es igual a, de aproximadamente o mayor que el valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto. En algunas realizaciones, el inhibidor de la señalización de calcio se administra para conseguir un nivel de concentración en el tejido que es 1,5x, 2x, 3x, 4x, 5x, 6x, 7x, 8x, 9x, 10x, 11x, 12x, 13x, 14x, 15x, 16x, 17x, 18x, 19x, 20x, 21x, 22x, 23x, 24x, 25x, 26x, 27x, 28x, 29x, 30x, 31x, 32x, 33x, 34x, 35x, 36x, 37x, 38x, 39x, 40x, 41x, 42x, 43x, 44x, 45x, 46x, 47x, 48x, 49x, 50x, 51x, 52x, 53x, 54x, 55x, 56x, 57x, 58x, 59x, 60x, 61x, 62x, 63x, 64x, 65x, 66x, 67x, 68x, 69x, 70x, 71x, 72x, 73x, 74x, 75x, 76x, 77x, 78x, 79x, 80x, 81x, 82x, 83x, 84x, 85x, 86x, 87x, 88x, 89x, 90x, 91x, 92x, 93x, 94x, 95x, 96x, 97x, 98x, 99x, 100x o cualquier múltiplo no entero que varía de 1x a 100x del valor de CI<50>in vitrodeterminado para el compuesto.

En algunas realizaciones, la composición comprende adicionalmente al menos uno de un excipiente, un solubilizante, un tensioactivo, un disgregante y un tampón. En algunas realizaciones, la composición es un líquido o una emulsión. En algunas realizaciones, la composición es un líquido, una nanopartícula, una suspensión de nanopartículas o una emulsión de nanopartículas. En algunas realizaciones, la composición es un comprimido.

Terminología específica

Salvo que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que se entiende habitualmente al que pertenece la materia objeto reivindicada. En el caso en el que exista una pluralidad de definiciones para los términos en el presente documento, prevalecen los de esta sección. Cuando se hace referencia a una URL u otro identificador o dirección de este tipo, se entiende que dichos identificadores pueden cambiar y la información particular en Internet puede aparecer y desaparecer, pero puede encontrarse información equivalente buscando en Internet. La referencia a los mismos evidencia la disponibilidad y diseminación pública de dicha información.

Obsérvese que la descripción general anterior y la descripción detallada a continuación tienen una finalidad únicamente ilustrativa y explicativa y no restringen ninguna materia objeto reivindicada. En la presente solicitud, el uso del singular incluye el plural a menos que se indique específicamente otra cosa. Cabe señalar que, como se usa en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un/o", "una", "el/la" incluyen las referencias en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. En la presente solicitud, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se indique otra cosa. Además, el uso de la expresión "que incluye", así como otras formas, tales como "incluyen", "incluye", e "incluido/a", no es limitante.

La definición de términos químicos estándar se puede encontrar en obras de referencia, incluyendo, aunque sin limitación, Carey y Sundberg "Advanced Organic Chemistry 4.a Ed." Vol. A (2000) y B (2001), Plenum Press, Nueva York. Salvo que se indique de otro modo, se emplean métodos convencionales de espectroscopia de masas, RMN, HPLC, química de proteínas, bioquímica, técnicas de ADN recombinante y farmacología.

Salvo que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura empleada en relación con, y los procedimientos y las técnicas de laboratorio de, química analítica, química orgánica sintética y química médica y farmacéutica que se describen en el presente documento son los reconocidos en el campo. Pueden usarse técnicas convencionales para síntesis química, análisis químicos, preparación farmacéutica, formulación y administración, y tratamiento de pacientes. Pueden usarse técnicas convencionales para ADN recombinante, síntesis de oligonucleótidos y cultivo y transformación de tejidos (por ejemplo, electroporación, lipofección). Las reacciones y técnicas de purificación pueden realizarse, por ejemplo, usando kits de especificaciones del fabricante o como se consigue normalmente en la técnica o como se describe en el presente documento. Las técnicas y procedimientos anteriores pueden realizarse en general de métodos convencionales y como se describe en diversas referencias generales y más específicas que se citan y analizan a lo largo de la presente memoria descriptiva.

Debe entenderse que los métodos y composiciones descritos en el presente documento no se limitan a la metodología, protocolos, líneas celulares, construcciones y reactivos descritos en el presente documento ya que pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en el presente documento tiene la finalidad única de describir realizaciones particulares.

El término "kit" y la expresión "artículo de fabricación" se usan como sinónimos.

El término "sujeto" o "paciente" abarca mamíferos y animales que no son mamíferos. Ejemplos de mamíferos incluyen, aunque sin limitación, cualquier miembro de la clase de mamíferos: seres humanos, primates no humanos tales como chimpancés, y otros simios y especies de monos; animales de granja, tales como ganado vacuno, caballos, ovejas, cabras, cerdos; animales domésticos, tales como conejos, perros y gatos; animales de laboratorio incluyendo roedores, tales como ratas, ratones y cobayas. Ejemplos de animales que no son mamíferos incluyen aves y peces. En una realización de los métodos y composiciones proporcionados en el presente documento, el mamífero es un ser humano.

Los términos "tratar", "tratando" o "tratamiento", como se usan en el presente documento, incluyen aliviar, disminuir o mejorar los síntomas de una enfermedad o afección, prevenir síntomas adicionales, mejorar o prevenir las causas subyacentes de los síntomas, inhibir la enfermedad o afección, por ejemplo, detener el desarrollo de la enfermedad o afección, aliviar la enfermedad o afección, provocar la regresión de la enfermedad o afección, aliviar una afección causada por la enfermedad o afección o detener los síntomas de la enfermedad o afección de forma profiláctica y/o terapéutica.

Como se usa en el presente documento, la expresión "proteína diana" se refiere a una proteína o una parte de una proteína que puede unirse por, o interactuar con, un compuesto descrito en el presente documento, tal como un compuesto con una estructura del grupo de compuesto A. En determinadas realizaciones, una proteína diana es una proteína STIM. En determinadas realizaciones, una proteína diana es una proteína Orai.

Como se usa en el presente documento, "proteína STIM" incluye, aunque sin limitación, STIM-1 de mamífero, tal como STIM-1 humana y de roedor (por ejemplo, ratón), D-STIM deDrosophila melanogaster,C-STIM deC. elegans,STIM deAnopheles gambiaey STlM-2 mamífero, tal como STIM-2 humana y de roedor (por ejemplo, ratón). (Véanse los párrafos [0211] a [0270] del documento US 2007/0031814, así como la tabla 3 del documento US 2007/0031814).

Como se describe en el presente documento, dichas proteínas se han identificado como implicadas en, participantes en y/o que proporcionan entrada de calcio accionada por reserva o modulación de la misma, tamponamiento de calcio citoplasmático y/o modulación de los niveles de calcio en o movimiento de calcio a, dentro o fuera de reservas de calcio intracelular (por ejemplo, retículo endoplasmático).

Como se usa en el presente documento, una "proteína Orai" incluye Orai1 (SEQ ID NO: 1 como se describe en el documento WO 07/081804), Orai2 (SEQ ID NO: 2 como se describe en el documento WO 07/081804) u Orai3 (SEQ ID NO: 3 como se describe en el documento WO 07/081804). La secuencia de ácido nucleico de Orai1 corresponde al número de acceso en GenBank NM_032790, la secuencia de ácido nucleico de Orai2 corresponde al número de acceso en GenBank BC069270 y la secuencia de ácido nucleico de Orai3 corresponde al número de acceso en GenBank NM_152288. Como se usa en el presente documento, Orai se refiere a uno cualquiera de los genes Orai, por ejemplo, Orai1, Orai2, Orai3 (véase la tabla I del documento WO 07/081804). Como se describe en el presente documento, dichas proteínas se han identificado como implicadas en, participantes en y/o que proporcionan entrada de calcio accionada por reserva o modulación de la misma, tamponamiento de calcio citoplasmático y/o modulación de los niveles de calcio en o movimiento de calcio a, dentro o fuera de reservas de calcio intracelular (por ejemplo, retículo endoplasmático).

El término "fragmento" o "derivado", cuando se refiere a una proteína (por ejemplo, STIM, Orai) significa proteínas y polipéptidos que conservan esencialmente la misma función biológica o actividad en al menos un ensayo que la una o más proteínas naturales. Por ejemplo, los fragmentos o derivados de la proteína referenciada mantienen al menos aproximadamente un 50 % de la actividad de las proteínas naturales, al menos un 75 %, al menos aproximadamente un 95 % de la actividad de las proteínas naturales, como se determina, por ejemplo, por un ensayo de flujo entrante de calcio.

Como se usa en el presente documento, la mejora de los síntomas de una enfermedad particular, trastorno o afección mediante administración de un compuesto particular o composición farmacéutica se refiere a cualquiera de reducción de la gravedad, retardo en la aparición, ralentización de la progresión o acortamiento de la duración, ya sea permanente o temporal, duradera o transitoria, que puede atribuirse a o asociarse a la administración del compuesto o composición.

El término "modular", como se usa en el presente documento, significa interactuar con una proteína diana, directa o indirectamente, para alterar la actividad de la proteína diana, incluyendo, a modo de ejemplo solamente, inhibir la actividad de la diana, o limitar o reducir la actividad de la diana.

Como se usa en el presente documento, el término "modulador" se refiere a un compuesto que altera una actividad de una diana. Por ejemplo, un modulador puede provocar un aumento o disminución en la magnitud de una determinada actividad de una diana en comparación con la magnitud de la actividad en ausencia del modulador. En determinadas realizaciones, un modulador es un inhibidor, que disminuye la magnitud de una o más actividades de una diana. En determinadas realizaciones, un inhibidor evita completamente una o más actividades de una diana.

Como se usa en el presente documento, "modulación", con referencia al calcio intracelular, se refiere a cualquier alteración o ajuste en el calcio intracelular incluyendo, aunque sin limitación, alteración de la concentración de calcio en el citoplasma y/u orgánulos de almacenamiento de calcio intracelular, por ejemplo, retículo endoplasmático, y alteración de la cinética de los flujos de calcio hacia, desde y dentro de células. En un aspecto, la modulación se refiere a reducción.

Como se usa en el presente documento, la expresión "actividad diana" se refiere a una actividad biológica que puede modularse por un modulador. Determinadas actividades diana ilustrativas incluyen, aunque sin limitación, afinidad de unión, transducción de señales, actividad enzimática, crecimiento tumoral, inflamación o procesos relacionados con inflamación, y mejora de uno o más síntomas asociados a una enfermedad o afección.

Los términos "inhibe", "que inhibe" o "inhibidor" de la actividad del canal SOC o la actividad del canal CRAC, como se usan en el presente documento, se refieren a la inhibición de la actividad del canal de calcio accionado por reserva o la actividad del canal de calcio activada por liberación de calcio.

El término "aceptable" con respecto a una formulación, composición o ingrediente, como se usa en el presente documento, significa que no tiene un efecto perjudicial persistente en la salud general del sujeto que se esté tratando.

La expresión "farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, se refiere a un material, tal como un vehículo, diluyente o formulación, que no suprima la actividad o las propiedades biológicas del compuesto, y que sea relativamente atóxico, es decir, el material puede administrarse a un individuo sin causar efectos biológicos indeseables o interactuar de manera perjudicial con cualquiera de los componentes de la composición en la que está contenido.

La expresión "combinación farmacéutica", como se usa en el presente documento, significa un producto que es el resultado de la mezcla o combinación de más de un principio activo e incluye combinaciones tanto fijas como variables de los principios activos. La expresión "combinación fija" significa que un principio activo, por ejemplo, un compuesto con una estructura del grupo de compuesto A y un agente conjunto, se administran a un paciente como entidades separadas, de forma simultánea, concurrente o secuencial sin límites de tiempo intermedios específicos, en la que dicha administración proporciona niveles eficaces de los dos compuestos en el organismo del paciente. Esto último también se aplica a las politerapias, por ejemplo, la administración de tres o más principios activos.

La expresión "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un compuesto con una estructura del grupo de compuesto A, descrito en el presente documento con otros componentes químicos, tales como vehículos, estabilizantes, diluyentes, tensioactivos, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes y/o excipientes. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. Existen en la técnica múltiples técnicas de administración de un compuesto, que incluyen, aunque sin limitación: administración intravenosa, oral, en aerosol, parenteral, oftálmica, subcutánea, intramuscular, pulmonar y tópica.

Las expresiones "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz", como se usan en el presente documento, se refieren a una cantidad suficiente de un agente o un compuesto que se administra que aliviará hasta cierto punto uno o más de los síntomas de la enfermedad o afección que se está tratando. El resultado puede ser la reducción y/o el alivio de los signos, síntomas o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Por ejemplo, una "cantidad eficaz" para usos terapéuticos es la cantidad de la composición que incluye un compuesto con una estructura del grupo de compuesto A, requerida para proporcionar una disminución clínicamente significativa en los síntomas de la enfermedad. Una cantidad "eficaz" apropiada en cualquier caso individual puede determinarse usando técnicas, tales como un estudio de aumento escalonado de la dosis.

Las expresiones "mejorar" o "que mejora", como se usan en el presente documento, significan aumentar o prolongar la potencia o la duración de un efecto deseado. Por tanto, con respecto a potenciar el efecto de los agentes terapéuticos, la expresión "que mejora" se refiere a la capacidad de aumentar o prolongar, en potencia o en duración, el efecto de otros agentes terapéuticos en un sistema. Una "cantidad eficaz potenciadora", como se usa en el presente documento, se refiere a una cantidad adecuada para potenciar el efecto de otro agente terapéutico en un sistema deseado.

Los términos "coadministración" o similares, como se usan en el presente documento, pretenden abarcar la administración de los agentes terapéuticos seleccionados a un solo paciente y se pretende que incluyan pautas de tratamiento en las que los agentes se administran por la misma vía de administración o una diferente o en el mismo momento o uno diferente.

El término "vehículo", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos o agentes químicos relativamente atóxicos que facilitan la incorporación de un compuesto en células o tejidos.

El término "diluyente" se refiere a compuestos químicos que se usan para diluir el compuesto de interés antes de su administración. Los diluyentes también pueden usarse para estabilizar compuestos porque pueden proporcionar un entorno más estable. Se utilizan en la técnica sales disueltas en soluciones tamponadas (que también pueden proporcionar control o mantenimiento del pH) como diluyentes, incluyendo, aunque sin limitación, una solución salina tamponada con fosfato.

Un "metabolito" de un compuesto divulgado en el presente documento es un derivado de dicho compuesto que se forma cuando se metaboliza el compuesto. La expresión "metabolito activo" se refiere a un derivado biológicamente activo de un compuesto que se forma cuando se metaboliza el compuesto. El término "metabolizado", como se usa en el presente documento, se refiere a la suma de los procesos (incluyendo, aunque sin limitación, reacciones de hidrólisis y reacciones catalizadas por enzimas) mediante los que una sustancia particular se modifica por un organismo. Por tanto, las enzimas pueden producir alteraciones estructurales específicas en un compuesto. Por ejemplo, el citocromo P450 cataliza diversas reacciones oxidativas y reductoras, mientras que las uridina difosfato glucuroniltransferasas catalizan la transferencia de una molécula de ácido glucurónico activada a alcoholes aromáticos, alcoholes alifáticos, ácidos carboxílicos, aminas y grupos sulfhidrilo libres. Puede obtenerse más información sobre el metabolismo de The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9.a edición, McGraw-Hill (1996). Los metabolitos de los compuestos divulgados en el presente documento pueden identificarse mediante la administración de los compuestos a un hospedador y el análisis de las muestras de tejido del hospedador o por incubación de compuestos con células hepáticasin vitroy el análisis de los compuestos resultantes.

"Biodisponibilidad" se refiere al porcentaje del peso del compuesto divulgado en el presente documento (por ejemplo, un compuesto del grupo de compuesto A) que se administra en la circulación general del animal o ser humano que se está estudiando. La exposición total (ABC(0-~)) de un fármaco cuando se administra por vía intravenosa se define habitualmente como un 100% biodisponible (% F). "Biodisponibilidad oral" se refiere al grado en que un compuesto divulgado en el presente documento, se absorbe en la circulación general cuando la composición farmacéutica se toma por vía oral en comparación con inyección intravenosa.

"Concentración en plasma sanguíneo" se refiere a la concentración de un compuesto con una estructura del grupo de compuesto A, en el componente plasmático de la sangre en un sujeto. Se entiende que la concentración plasmática de compuestos descritos en el presente documento puede variar significativamente entre sujetos, debido a la variabilidad con respecto al metabolismo y/o interacciones posibles con otros agentes terapéuticos. De acuerdo con una realización divulgada en el presente documento, la concentración en plasma sanguíneo de los compuestos divulgados en el presente documento puede variar de un sujeto a otro. Asimismo, valores tales como la concentración plasmática máxima (Cmáx) o tiempo hasta alcanzar la concentración plasmática máxima (Tmáx), o el área total bajo la curva del tiempo de concentración plasmática (ABC(O-~)) pueden variar de un sujeto a otro. Debido a esta variabilidad, la cantidad necesaria para constituir "una cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto puede variar de un sujeto a otro.

Como se usa en el presente documento, "homeostasis de calcio" se refiere al mantenimiento de un equilibrio global en los niveles y movimientos de calcio intracelular, incluyendo la señalización de calcio, dentro de una célula.

Como se usa en el presente documento, "calcio intracelular" se refiere al calcio localizado en una célula sin especificación de una localización celular particular. Por el contrario, "citosólico" o "citoplasmático" con referencia al calcio se refiere al calcio localizado en el citoplasma celular.

Como se usa en el presente documento, un efecto sobre el calcio intracelular es cualquier alteración de cualquier aspecto del calcio intracelular, incluyendo, aunque sin limitación, una alteración en los niveles de calcio intracelular y la localización y movimiento del calcio hacia, desde o dentro de una célula o reserva u orgánulo de calcio intracelular. Por ejemplo, un efecto sobre el calcio intracelular puede ser una alteración de las propiedades, tal como, por ejemplo, la cinética, sensibilidades, tasa, amplitud y características electrofisiológicas, del flujo o movimiento de calcio que se produce en una célula o parte de la misma. Un efecto sobre el calcio intracelular puede ser una alteración en cualquier proceso modulador del calcio intracelular, incluyendo, entrada de calcio accionada por reserva, tamponamiento de calcio citosólico y/o niveles o movimiento de calcio a, desde o dentro de una reserva de calcio intracelular. Cualquiera de estos aspectos puede evaluarse de diversas maneras incluyendo, aunque sin limitación, evaluación de los niveles de calcio u otro ion (particularmente catión), movimiento de calcio u otro ion (particularmente catión), fluctuaciones en los niveles de calcio u otro ion (particularmente catión), cinética de los flujos de calcio u otro ion (particularmente catión) y/o transporte de calcio u otro ion (particularmente catión) a través de una membrana. Una alteración puede ser cualquiera de estos cambios que sea estadísticamente significativo. Por tanto, por ejemplo, si en una célula de ensayo y una célula de control se dice que el calcio intracelular difiere, dicha diferencia puede ser una diferencia estadísticamente significativa.

Como se usa en el presente documento, "implicado en" con respecto a la relación entre una proteína y un aspecto de calcio intracelular o regulación de calcio intracelular significa que, cuando la expresión o actividad de la proteína en una célula se reduce, altera o elimina, hay una reducción, alteración o eliminación concomitante o asociada de uno o más aspectos de calcio intracelular o regulación de calcio intracelular. Dicha alteración o reducción en la expresión o actividad puede producirse debido a una alteración de la expresión de un gen que codifica la proteína o al alterar los niveles de la proteína. Una proteína implicada en un aspecto de calcio intracelular, tal como, por ejemplo, entrada de calcio accionada por reserva, por tanto, puede ser una que proporcione o participe en un aspecto de calcio intracelular o regulación de calcio intracelular. Por ejemplo, una proteína que proporciona entrada de calcio accionada por reserva puede ser una proteína STIM y/o una proteína Orai.

Como se usa en el presente documento, una proteína que es un componente de un canal de calcio es una proteína que participa en un complejo multiproteínico que forma el canal.

Como se usa en el presente documento, "basal" o "en reposo" con referencia a los niveles de calcio citosólico se refiere a la concentración de calcio en el citoplasma de una célula, tal como, por ejemplo, una célula no estimulada, que no se ha sometido a una condición que provoque movimiento de calcio al interior o exterior de la célula o dentro de la célula. El nivel de calcio citosólico basal o en reposo puede ser la concentración de calcio libre (es decir, calcio que no se une a una sustancia de unión a calcio celular) en el citoplasma de una célula, tal como, por ejemplo, una célula no estimulada, que no se ha sometido a una condición que provoque movimiento de calcio al interior o exterior de la célula.

Como se usa en el presente documento, "movimiento" con respecto a iones, incluyendo cationes, por ejemplo, calcio, se refiere a movimiento o traslado, tal como, por ejemplo, flujo, de iones al interior, desde o dentro de una célula. Por tanto, el movimiento de iones puede ser, por ejemplo, movimiento de iones desde el medio extracelular al interior de una célula, desde dentro de una célula al medio extracelular, desde dentro de un orgánulo intracelular o sitio de reserva al citosol, desde el citosol a un orgánulo intracelular o sitio de reserva, desde un orgánulo intracelular o sitio de serva a otro orgánulo intracelular o sitio de reserva, desde el medio extracelular a un orgánulo intracelular o sitio de reserva, desde un orgánulo intracelular o sitio de reserva al medio extracelular y desde una localización a otra dentro del citoplasma celular.

Como se usa en el presente documento, "entrada de cationes" o "entrada de calcio" en una célula se refiere a entrada de cationes, tal como calcio, en la localización intracelular, tal como el citoplasma de una célula o a la luz de un orgánulo intracelular o sitio de reserva. Por tanto, la extrada de cationes puede ser, por ejemplo, el movimiento de cationes al citoplasma celular desde el medio extracelular o desde un orgánulo intracelular o sitio de reserva, o el movimiento de cationes a un orgánulo intracelular o sitio de reserva desde el citoplasma o medio extracelular. El movimiento de calcio al citoplasma desde un orgánulo intracelular o sitio de reserva también se denomina "liberación de calcio" desde el orgánulo o sitio de reserva.

Como se usa en el presente documento, "proteína que modula el calcio intracelular" se refiere a cualquier proteína celular que esté implicada en la regulación, control y/o alteración del calcio intracelular. Por ejemplo, dicha proteína puede estar implicada en la alteración o ajuste del calcio intracelular de varias maneras, incluyendo, aunque sin limitación, a través del mantenimiento de los niveles de calcio citoplasmático en reposo o basales, o a través de la implicación en una respuesta celular a una señal que se transmite en una célula a través de un mecanismo que incluye una desviación en el calcio intracelular desde los estados en reposo o basales. En el contexto de una "proteína que modula el calcio intracelular", una proteína "celular" es una que está asociada a una célula, tal como, por ejemplo, una proteína citoplasmática, una proteína asociada a membrana plasmática o una proteína de membrana intracelular. Proteínas que modular el calcio intracelular incluyen, aunque sin limitación, proteínas de transporte de iones, proteínas de unión a calcio y proteínas reguladoras que regulan proteínas de transporte de iones.

Como se usa en el presente documento, el término "mejorar" significa reducir, evitar, aliviar y/o reducir el impacto de una enfermedad, síntoma o afección, para conseguir mejora en una enfermedad o afección o al menos un alivio parcial de los síntomas asociados a una enfermedad o afección hasta e incluyendo reducción completa de modo que dicho impacto sea cero o prácticamente cero.

Como se usa en el presente documento, "respuesta celular" se refiere a cualquier respuesta celular que resulte del movimiento de iones al interior o exterior de una célula o dentro de una célula. La respuesta celular puede estar asociada a cualquier actividad celular que dependa, al menos en parte, de iones tales como, por ejemplo, calcio. Dichas actividades pueden incluir, por ejemplo, activación celular, expresión génica, endocitosis, exocitosis, tráfico celular y muerte celular apoptótica.

Como se usa en el presente documento, "inmunocitos" incluye células del sistema inmunitario y células que realizan una función o actividad en una respuesta inmunitaria, tal como, aunque sin limitación, linfocitos T, linfocitos B, linfocitos, macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, eosinófilos, basófilos, mastocitos, plasmocitos, leucocitos, células presentadoras de antígeno y linfocitos citolíticos naturales.

Como se usa en el presente documento, "citocina" se refiere a proteínas solubles pequeñas secretadas por células, que pueden alterar el comportamiento o las propiedades de la célula secretora u otra célula. Las citocinas se unen a receptores de citocinas y desencadenan un comportamiento o propiedad dentro de la célula, por ejemplo, proliferación celular, muerte o diferenciación. Citocinas ilustrativas incluyen, aunque sin limitación, interleucinas (por ejemplo, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-1a, IL-1 p e IL-1 RA), factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), oncostatina M, eritropoyetina, factor inhibidor de leucemia (LIF), interferones, B7.1 (también conocida como CD80), B7.2 (también conocida como B70, CD86), miembros de la familia de TNF (TNF-a, TNF-p, LT-p, ligando de CD40, ligando Fas, ligando de CD27, ligando de CD30, 4-1BBL, Trail) y MIF.

"Entrada de calcio accionada por reserva" o "SOCE" se refiere al mecanismo por el que la liberación de iones de calcio desde las reservas intracelulares se coordina con el flujo de iones a través de la membrana plasmática.

"Inhibidor selectivo de la actividad del canal SOC" significa que el inhibidor es selectivo para canales SOC y no afecta sustancialmente a la actividad de otros tipos de canales de iones.

"Inhibidor selectivo de la actividad del canal CRAC" significa que el inhibidor es selectivo para canales CRAC y no afecta sustancialmente a la actividad de otros tipos de canales de iones y/u otros canales SOC.

Como se usa en el presente documento, el término "calcio" puede usarse para hacer referencia al elemento o al catión divalente Ca2+.

Aunque en el presente documento se han mostrado y descrito realizaciones preferidas de la presente invención, será obvio para los expertos en la materia que dichas realizaciones se proporcionan únicamente a modo de ejemplo. Numerosas variaciones, cambios y sustituciones se producirán ahora por los expertos en la materia.

Ejemplos

Ejemplo 1: La inhibición del canal CRAC por GSK-7975A bloquea la necrosis en células acinares pancreáticas de ratón y humanas(Ejemplo de Referencia)

Se extrajeron células acinares pancreáticas (PAC) de ratón y se incubaron con un vehículo (control) o con ácido biliar natural TLCS (3-sulfato de ácido taurolitocólico) en ausencia o presencia de GSK-7975A. Las células se contaron con yoduro de propidio para ensayar la necrosis celular. El tratamiento con TLCS en células individual imitain vitroel efecto de un cálculo biliar u otro bloqueo en la secreción pancreáticain vivo.

Como se indica en la fig. 1A, TLCS indujo necrosis en aproximadamente un 45 % de las células durante el periodo de tiempo del experimento. La adición de GSK-7975A a 10 pM redujo este porcentaje de necrosis a la mitad, hasta aproximadamente un 23 %. El asterisco indica un cambio estadísticamente significativo. Las células no tratadas con TLCS demostraron una necrosis de aproximadamente un 10 %. Este resultado demuestra que GSK-7975A reduce el efecto inductor de necrosis de TLCS en PAC de ratón.

Se extrajeron PAC humanas y se incubaron con un vehículo (control) o con ácido biliar natural TLCS en ausencia o presencia de GSK-7975A. Las células se contaron con yoduro de propidio para ensayar la necrosis celular. El tratamiento con TLCS en células individual imitain vitroel efecto de un cálculo biliar u otro bloqueo en la secreción pancreáticain vivo.

Como se indica en la fig. 1B, TLCS indujo necrosis en aproximadamente un 45%de las células durante el periodo de tiempo del experimento. La adición de GSK-7975A a 10 pM redujo este porcentaje hasta aproximadamente un 30 %. El asterisco indica un cambio estadísticamente significativo. Las células no tratadas con TLCS demostraron una necrosis en aproximadamente un 23 %. Este resultado demuestra que GSK-7975A reduce el efecto inductor de necrosis de TLCS en PAC humanas.

Ejemplo 2: El inhibidor del canal CRAC (GSK-7975A) bloquea los cambios histopatológicos en modelos de ratón de AP(Ejemplo de Referencia)

Se usaron modelos de pancreatitis aguda de ratón para evaluar el efecto de un inhibidor de CRAC sobre la progresión histopatológica del páncreas. Se usa ceruleína para hiperestimular receptores de CCK en la ruta normal de señalización de calcio en el páncreas de ratón. Se usa TLCs para inducir pancreatitis aguda a través de simulación de un exceso de ácido biliar, como se experimentaría en una pancreatitis aguda inducida por cálculo biliar. Se usan ésteres etílicos de ácido graso (FAEE) para simular pancreatitis aguda inducida por alcohol. Los ratones se trataron con el agente de pancreatitis aguda (ceruleína, fig. 2A, TLCS, fig. 2B o FAEE, fig. 2C) en solitario o con el inhibidor de CRAC GSK-7975A a 10x o 40x la CI<50>del inhibidor de CRAC.

Se observa que GSK-7975A reduce sustancialmente la puntuación de histopatología total de ratones tratados con respecto a ratones tratados con el agente en ausencia del inhibidor de CRAC. Este efecto fue estadísticamente significativo y sustancialmente más pronunciado a 40x CI<50>que a 10x CI<50>, pero se observó a la baja concentración también. El asterisco indica un cambio estadísticamente significativo. GSK-7975A a dosis que consiguen niveles en el tejido 10 o 40 veces por encima de su valor de CI<50>in vitroproduce reducciones significativas en la histopatología pancreática.

Los resultados presentados en las fig. 2A, 2B y 2C indican que un inhibidor de CRAC puede mejorar los síntomas histopatológicos de pancreatitis aguda. Este efecto se observa independiente del agente inductor o el tipo de pancreatitis aguda que se esté modelando.

Ejemplo 3: El compuesto I y GSK-7975A inhiben canales CRAC(Ejemplo de Referencia)

Los compuestos de referencia, compuesto I y GSK-7975A se ensayaron para determinar su efecto inhibidor sobre canales CRAC. Se ensayaron canales que comprenden Orai 1/STIM1 y Orai2/STIM1. Como se presenta en la fig. 3A, se determinó que compuesto I inhibía los canales Orai1/STIM1 con una CI<50>media de 119 nM y canales Orai2/STIM1 con una CI<50>media de 895 nM. Como se presenta en la fig. 3B, se determinó que GSK-7975A inhibía canales Orai 1/STIM1 con un CI<50>media de 398 nM y canales Orai2/STIM1 con una CI<50>media de 1453 nM. El compuesto I es aproximadamente 4 veces más potente sobre canales CRAC de tipo Orai1 en comparación con GSK-7975A. Ambos compuestos son más potentes sobre canales CRAC de tipo Orai1 que Orai2.

Estos resultados indican que el efecto observado para GSK-7975A sobre la señalización de calcio es generalizable a inhibidores de CRAC, y que inhibidores de CRAC distintos de GSK-7975A pueden superar a GSK-7975A en algunos parámetros.

Ejemplo 4: El compuesto I bloquea la entrada de Ca2+ accionada por reserva (SOCE) en células acinares pancreáticas de ratón(Ejemplo de Referencia)

Se aislaron PAC de ratón y se ensayaron para el efecto de los inhibidores de CRAC sobre la captación de calcio en el ER. Las células se trataron con ácido ciclopiazónico (CPA) en solitario (fig. 4A) o en combinación con el inhibidor de CRAC compuesto I (fig. 4B) para activar canales CRAC para liberar Ca<2+>. A los 15 minutos después de la liberación de calcio, a las células se les proporcionó un exceso de calcio y se supervisaron para la captación de calcio en el ER. Se observa que las células tratadas con inhibidor de CRAC no demuestran recaptación de calcio.

Este resultado indica que los inhibidores de CRAC pueden bloquear la capacidad de la célula de recargar su ER con calcio para sucesivas rondas de señalización.

Ejemplo 5: El compuesto I y GSK-7975A bloquean SOCE en células acinares pancreáticas de ratón de una manera dependiente de la dosis(Ejemplo de Referencia)

Se trataron PAC de ratón con los inhibidores de CRAC compuesto I (fig. 5A) o compuesto de referencia GSK-7975A (fig. 5B) y se supervisaron para su tasa de captación de calcio. Ambos inhibidores de CRAC redujeron la tasa de entrada de calcio accionada por reserva en el ER hasta un 50 % de los niveles de control tras tratamiento con 700 nM de inhibidor. El compuesto I bloque el 100 % de la recaptación a 10 mM.

Este ejemplo demuestra que múltiples inhibidores de CRAC actúan cada uno inhibiendo SOCE en PAC de mamífero.

Ejemplo 6: El compuesto I bloquea la entrada de Ca2+ inducida por CCK en células acinares pancreáticas de ratón(Ejemplo de Referencia)

Se supervisaron PAC de ratón para su captación de calcio tras tratamiento con CCK a 10 nM. Las células se trataron con CCK, y después se les proporcionó calcio 1,8 mM y se supervisó la recaptación de calcio. Se observó que las células pretratadas con inhibidores de CRAC (fig. 6B) demostraban recaptación de calcio sustancialmente reducida en comparación con células no tratadas (fig. 6A). El pretratamiento con compuesto I redujo la recaptación de calcio a casi un 0 % del control. GSK-7975A redujo la recaptación de calcio hasta aproximadamente un 30 % del control.

Estos resultados indican que los inhibidores de CRAC pueden ser eficaces en reducir la señalización de calcio sobreactiva en PAC.

Ejemplo 7: El compuesto I inhibe múltiples citocinas(Ejemplo de Referencia)

Se ensayó el compuesto I para su efecto inhibidor sobre varias citocinas. Las citocinas INF-gamma, IL-4 e IL-4 cuyos receptores se expresan en células acinares, las citocinas IL-1beta, IL-6, IL-10 y TNF-alfa, expresadas en células acinares, e IL-2 e IL-7, citocinas importantes en la función de linfocitos T, se ensayaron para el efecto inhibidor del inhibidor de CRAC compuesto I. Los linfocitos T en PBMC humanos en bruto se estimularon con anticuerpo anti-CD3/anti-CD28 unido a placa en tampón 10 % de suero durante 48 h. Se midieron las citocinas liberadas por Luminex en Millipore. Los resultados se presentan en la fig. 7. En PBMC humanos, el compuesto I inhibe potentemente la liberación de múltiples citocinas que desempeñan funciones importantes en los linfocitos T.

Estos datos de citocinas, junto con los datos de PAC, apoyan la conclusión de que compuesto I tiene un efecto doble en pancreatitis aguda, inhibiendo tanto las rutas de señalización de inmunocitos y células acinares pancreáticas como su muerte.

Ejemplo 8: El compuesto I muestra eficacia robusta en un modelo de calcineurina de ratón de pancreatitis aguda(Ejemplo de Referencia)

Los ratones se trataron con un inhibidor de CRAC o un vehículo profilácticamente, y después se expusieron con CCK para desencadenar pancreatitis aguda. El compuesto I, administrado i.p. profilácticamente, produjo reducciones significativas y dependientes de la dosis en la patología inducida de ceruleína en el páncreas de ratón (ratones Cs7B6). Este efecto estuvo significativamente por debajo del control positivo CsA a 5 mg/kg, y aumentó de una manera dependiente de la dosis. Véase la fig. 8A. El tratamiento demostró un aumento proporcional a la dosis de los niveles de compuesto I en el páncreas después de inyección i.p. (véase la fig. 8B), que correspondían a los resultados positivos de la fig. 8A, anteriormente.

Estos resultados indican que la administración de CRAC, antes de o simultáneamente con un segundo fármaco sospechoso de desencadenar pancreatitis aguda o aumentar el riesgo de pancreatitis aguda, puede proteger profilácticamente contra o reducir el riesgo de pancreatitis aguda.

Ejemplo 9: El compuesto I reduce los niveles de amilasa sérica y lipasa sérica en modelo de ceruleína de ratón de pancreatitis aguda(Ejemplo de Referencia)

Los ratones se dejaron sin tratar (normal), se trataron con CCK solamente (vehículo) o se trataron con CCK en combinación con CsA o un inhibidor de CRAC a la dosis indicada. Se midió la actividad de amilasa sérica (fig. 9A) y la actividad de lipasa sérica (fig. 9B) (UI/l).

El inhibidor de CRAC compuesto I funcionó tan bien como o mejor que el control positivo CsA a concentraciones máximas de 20 mg/kg. El compuesto I produjo reducciones significativas y dependientes de la dosis en las actividades de amilasa sérica y lipasa sérica inducidas por ceruleína.

Ejemplo 10: El compuesto I reduce la patología pancreática en modelo terapéutico de ceruleína de ratón(Ejemplo de Referencia)

Se administraron siete inyecciones i.p. a la hora de ceruleína para inducir pancreatitis, sacrificándose los animales 8 h después de la 1.a inyección. Se administró compuesto I i.p. 30 min antes de la 1.a inyección de ceruleína (profiláctica) o después de la 3.a inyección (terapéutica). Se administró CsA p.o. en la misma planificación que compuesto I. Los resultados se representan en la fig. 10.

Se midieron las puntuaciones de histopatología en vista de la observación de la generación de células acinares, necrosis por coagulación y mediciones de inflamación y edema. El compuesto I produjo una reducción significativa de un 35 % en la patología inducida por ceruleína en el páncreas cuando se administraba después de la 3.a inyección de ceruleína, coherente con la eficacia en un modo terapéutico. El tratamiento profiláctico con compuesto I también redujo la patología en un 26 %.

Estos resultados indican que los inhibidores de CRAC tales como compuesto I tienen un efecto sustancial sobre las puntuaciones de histopatología del páncreas cuando se administran profiláctica o terapéuticamente.

Ejemplo 11: El compuesto I bloquea la entrada de Ca2+ inducida por TLCS en células acinares pancreáticas de ratón(Ejemplo de Referencia)

Se trataron PAC ratón con TLCS 500 pM y 0, 1 pM o 3 pM del inhibidor de CRAC compuesto I. Se midieron los niveles de calcio citosólico (medidos como relaciones de F345/F38O) para cada tratamiento. TLCS libera Ca2+ de las reservas intracelular (no mostrado), iniciando SOCE. En este experimento, el compuesto I a 1 o 3 pM bloqueó completamente la entrada de Ca2+ inducida por TLCS. Los resultados se representan en la fig. 11.

Estos resultados indican que los inhibidores de CRAC pueden ser eficaces en influir positivamente en la señalización de calcio en pancreatitis aguda relacionada con cálculo biliar en mamíferos.

Ejemplo 12: El compuesto I y otros CCI inhiben la liberación de amilasa inducida por TLCS en células acinares pancreáticas de ratón(Ejemplo de Referencia)

La liberación de amilasa desde PAC tiene un componente dependiente de calcio del ER y uno dependiente de CRAC/calcio citosólico. El componente dependiente de calcio se bloquea mediante la introducción del agente EGTA quelante del catión divalente. Se trataron células acinares de ratón con TLCS y vehículo, EGTA o un inhibidor de CRAC tal como compuesto I, GSK-7975A o compuesto II y se supervisaron para la liberación de amilasa. Se observa que los inhibidores de CRAC imitan al EGTA en su efecto sobre la liberación de amilasa. Véase la fig. 12.

Este resultado indica que los inhibidores de CRAC bloquean la recaptación de calcio en el ER después de liberación de calcio inducida por TLCS, imitando de ese modo el efecto de EGT<a>sobre la inhibición de la liberación de amilasa.

Ejemplo 13: El compuesto I inhibe la necrosis inducida por TLCS en células acinares pancreáticas de ratón(Ejemplo de Referencia)

Se trataron PAC de ratón con DMSO, DMSO más TLCS 500 pM o DMSO más TLCS 500 pM más 1 pM del inhibidor de CRAC compuesto I. La necrosis celular se midió como el % de captación de PI. El inhibidor de CRAC compuesto I inhibe la necrosis inducida por TLCS en PAC de ratón.

Estos datos, junto con los datos de Ca2+ y amilasa, indican que el compuesto I es eficaz en el modelo de TLCS de AP.

Ejemplo 14: Ensayo clínico en fase II de la seguridad y eficacia de los compuestos compuesto I, GSK-7975A y compuesto II en pacientes con pancreatitis aguda(Ejemplo de Referencia)

El propósito de este ensayo en fase II es investigar la seguridad, tolerabilidad, PK, PD y eficacia de infusiones intravenosas individuales y repetidas de un inhibidor de la señalización de calcio tal como compuesto I, GSK-7975A y compuesto II, o compuestos seleccionados del grupo de compuesto A, en pacientes con pancreatitis aguda y SIRS consiguiente.

Pacientes: El estudio reclutará 30 pacientes en alto riesgo de desarrollar pancreatitis moderada o grave, evaluada por una puntuación de SIRS de 2 o más al entrar en el estudio.

Criterios:

Criterios de inclusión:

• Todos los sujetos deben usar anticoncepción aceptable para garantizar que no se producen embarazos durante el transcurso del estudio y durante al menos 12 semanas después de dosificación a hombres y durante 32 semanas después de dosificación a mujeres;

• Índice de masa corporal dentro del intervalo de 18,5 - 35 kg/m2 incluidos, además de un intervalo de peso de 55 -95 kg;

• El sujeto debe poder dar su consentimiento informado y poder cumplir con los requisitos y programación del estudio;

• Hombres y mujeres con edad de 18 o más son elegibles.

• Los sujetos deben estar experimentando el primer episodio de su vida de pancreatitis aguda.

• El diagnóstico de pancreatitis aguda debe basarse en 2 de los 3 siguientes criterios: (1) dolor abdominal superior típico; (2) elevación de amilasa y/o lipasa sérica al menos 3 veces el límite superior del normal; (3) exploración CT potenciada con material de contraste o sonograma abdominal que demuestre cambios de pancreatitis aguda. • Los sujetos deben demostrar un historial que sostenga la etiología alcohólica, hipertrigliceridémica o biliar del actual episodio de pancreatitis (para pancreatitis biliar, un sonograma debe excluir una obstrucción por cálculo en el momento de la selección en el estudio).

• Los sujetos deben demostrar una puntuación BISAP de 3 o mayor

• El inicio del tratamiento del estudio es posible en 48 h desde la aparición del síntoma

Criterios de exclusión:

Alta probabilidad de intervención invasiva del conducto intrabiliar (por ejemplo, ERCP) en la semana siguiente. Episodio recurrente de pancreatitis.

Evidencia de CT de necrosis pancreática al entrar en el estudio.

Insuficiencia renal crónica grave (modificación de la dieta en enfermedad renal de fórmula de 30 ml/min o dependencia de diálisis renal).

Insuficiencia cardiaca de clase II o mayor según la New York Heart Association.

Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) dependiente de oxígeno.

Cirrosis hepática.

Anemia grave (hemoglobina menor de 8 g/dl).

Hematocrito por debajo de un 35 % o por encima de un 45 % al entrar en el estudio (pueden administrarse líquidos para corregir el hematocrito antes de la asignación aleatoria siembre que el tratamiento del estudio empiece en 48 horas desde la aparición de los síntomas).

Alanina aminotransferasa sérica por encima de 250 UI/l al entrar en el estudio.

Sospecha clínica de colangitis ascendente al entrar en el estudio,

Hemorragia gastrointestinal activa.

Neoplasia en ese momento que no está en remisión (distinta de carcinoma basocelular de la piel).

Estado mental alterado.

Embarazo o en lactancia en ese momento.

Mujeres con posibilidad de tener descendencia (menos de 2 años tras la menopausia o no esterilizadas quirúrgicamente) que no quieren usar medidas anticonceptivas adecuadas o eficaces

Hipersensibilidad conocida a algún componente del producto en investigación.

Relación dependiente con el investigador o el patrocinador.

Participación en un estudio con fármaco en investigación durante este ensayo clínico o en 30 días antes del inicio de este ensayo clínico.

Diseño del estudio: El estudio es un estudio aleatorizado, con doble enmascaramiento, controlado con placebo, de múltiples centros, en múltiples países, de grupos paralelos que compara un grupo de placebo con un grupo de inhibidor de CRAC tratado por vía intravenosa con un inhibidor de CRAC dos veces al día durante hasta 7 días consecutivos.

El estudio reclutará 45 pacientes en alto riesgo de desarrollar pancreatitis moderada o grave, evaluada por una puntuación de SIRS de 2 o más al entrar en el estudio.

El criterio principal de valoración del estudio es el efecto de un inhibidor de CRAC sobre la inflamación sistémica en pancreatitis aguda reflejada por un cambio en la puntuación SIRS o los niveles plasmáticos de proteína C-reactiva (CRP).

La administración del material del ensayo clínico comenzará en 24 horas desde la aparición de los síntomas de pancreatitis aguda, o 18 horas desde la admisión hospitalaria. Los sujetos se asignarán aleatoriamente en una relación de 1:1 para recibir un inhibidor de CRAC en una de dos dosis o placebo. También se supervisarán los niveles séricos de un inhibidor de CRAC al final de cada infusión de 2 horas.

La duración del estudio por sujeto individual será de 14 días, consistiendo en una evaluación de selección seguida de un periodo de tratamiento con doble enmascaramiento de hasta 7 días, que formará parte de un periodo de observación en el hospital de al menos 7 días, y una visita final de seguimiento en el día 14.

Medidas de los resultados principales:

• Concentración sérica de proteína C-reactiva.

• Cambio en SIRS a las 48 horas

• Nivel en sangre de amilasa y lipasa.

Medidas de los resultados secundarios, inhibidor de CRAC frente a placebo:

• Seguridad de un inhibidor de CRAC en esta población de pacientes (a través de pruebas analíticas de seguridad rutinarias,

• Examen físico y control de los signos vitales, ECG e informe de acontecimientos adversos),

• Efectos de un inhibidor de CRAC sobre otros marcadores inflamatorios plasmáticos (interleucina-6, metaloproteinasa de matriz 9, factor de necrosis tumoral alfa, etc.)

• Efectos del inhibidor de CRAC sobre la evolución clínica de pancreatitis (basada en cambios en las escalas de clasificación clínica tales como el índice clínico de gravedad en pancreatitis aguda (BISAP), síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) y puntuaciones de evaluación fisiológica aguda y de salud crónica II (APACHE II), y en tomografía computarizada (CT) abdominal potenciada con material de contraste,

• Progresión en la puntuación de evaluación de insuficiencia orgánica secuencial (SOFA)

• Progresión en la puntuación de disfunción multiorgánica (MODS)

• Progresión en el síndrome de respuesta inflamatoria sistémica

• Progresión en los mediadores inflamatorios y antiinflamatorios (IL-1RA, IL-10, IL-6, IL-18, TNF-a, ICAM-1, IL-10, etc.).

• Incremento de cuidados de alta dependencia o en unidad de cuidados intensivos y duración la estancia hospitalaria.

Ejemplo 15: El compuesto I inhibe la gemación del virus de Junín en células VeroE6 infectadas(Ejemplo de Referencia)

Células VeroE6 infectadas con Candid-1 JUNV vivo atenuado se trataron con DMSO, DMSO más TLCS 500 μM<,>DMSO más TLCS 500 μM más 1 μM del inhibidor de CRAC compuesto I, DMSO más TLCS 500 μM más compuesto I 10 μM<,>DMSO más TLCS 500 μM más compuesto I 25 μM<,>o DMSO más TLCS 500 μM más compuesto I 50 μM<.>Los viriones infecciosos producidos desde estas células se cuantifican en un ensayo de formación de focos. La enumeración de los focos de JUNV revela una reducción dependiente de la dosis estadísticamente significativa en la producción de virus JUNV después de tratamiento con compuesto I.

Estos datos, junto con los datos de Ca2+. indican que el compuesto I es eficaz en inhibir la gemación vírica del virus JUNV.

Ejemplo 16: El compuesto I inhibe de forma diferencial la diferenciación de Th1, Th2 y Th17 dependiente de entrada de Ca2+ accionada por reserva(Ejemplo de Referencia)

Linfocitos T murinos vírgenes y estimulados cultivados en condiciones de polarización Th1, Th2 y Th17 se tratan con DMSO, DMSO más TLCS 500 μM<,>o DMSO más TLCS 500 μM más 1 μM del inhibidor de CRAC compuesto I. La entrada de Ca2+ accionada por reserva (SOCE) se cuantifica en cada tratamiento. El compuesto I bloquea SOCE más fuerte en linfocitos Th17 diferenciados que en linfocitos vírgenes, Th1 o Th2. Además, la producción de IL-17A por linfocitos Th17 es ve más intensamente afectada en comparación con la producción de IFN-γ e IL-4 por linfocitos Th1 y Th2, respectivamente, en presencia de compuesto I.

Estos datos, junto con los datos de Ca2+ y de expresión de factor de transcripción adicional (es decir, IL-17A, RORa y RORyt), indican que el compuesto I es eficaz en inhibir la diferenciación de Th17.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que tiene la estructura de:

N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una sal de la reivindicación 1 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

3. Un inhibidor de la señalización de calcio intracelular para su uso en un método de mejora de los síntomas de la pancreatitis en un paciente que lo necesite,

en donde dicho inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura de:

N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, o

N-(5-(7-cloro-2,3-dihidro-[1,4]dioxin[2,3-b]piridín-6-il)piridín-2-il)-2,6-difluorobenzamida,

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

4. El inhibidor de la señalización de calcio intracelular para el uso de la reivindicación 3, en donde los síntomas son síntomas de pancreatitis aguda.

5. El inhibidor de la señalización de calcio intracelular para el uso de la reivindicación 3, en donde los síntomas son síntomas de pancreatitis crónica.

6. El inhibidor de la señalización de calcio intracelular para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 3-5, en donde dicho inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura de N-(2,6-difluorobencil)-5-(1-etil-3-(tiazol-2-il)-1H-pirazol-5-il)pirimidin-2-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. El inhibidor de la señalización de calcio intracelular para el uso de una cualquiera de las reivindicaciones 3-5, en donde dicho inhibidor de la señalización de calcio intracelular es un compuesto que tiene la estructura de N-(5-(7-cloro-2,3-dihidro-[1,4]dioxin[2,3-b]piridín-6-il)piridín-2-il)-2,6-difluorobenzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.