ES2930467T3 - Dispositivo para determinar el estado bacteriano vivo/muerto y método para determinar el estado bacteriano vivo/muerto utilizando dicho dispositivo - Google Patents

Abstract

Se proporciona un dispositivo para determinar el estado bacteriano vivo/muerto, con el que es posible determinar el estado exacto de bacterias vivas/bacterias muertas a través de una imagen capturada en una operación relativamente fácil con la cual determinar el estado de una célula bacteriana es más preciso. que los métodos convencionales. Este dispositivo para determinar el estado bacteriano vivo/muerto comprende: un cuerpo de caja en el que se aloja un mecanismo de medición; un cuerpo de tapa de apertura/cierre que permite abrir y cerrar un puerto de inserción de base de hongos formado en el cuerpo de la caja; y el mecanismo de medición, que está alojado en el cuerpo de la caja y está configurado para medir el número de bacterias. El mecanismo de medición comprende: un mecanismo de sujeción de la base del hongo que inserta y fija una base del hongo sobre la que se coloca una célula bacteriana recolectada de una muestra; un mecanismo de irradiación de luz de excitación configurado para ser capaz de enfocar e irradiar una luz de excitación hacia la célula bacteriana en la base del hongo; una cámara de formación de imágenes dispuesta encima de la célula bacteriana en la base del hongo; y un mecanismo de ajuste de los ejes XY que ajusta y mueve minuciosamente, en los ejes XY, una plataforma XY que soporta el mecanismo de sujeción de la base del hongo y que comprende dos capas que se mueven por separado. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Dispositivo para determinar el estado bacteriano vivo/muerto y método para determinar el estado bacteriano vivo/muerto utilizando dicho dispositivo

Antecedentes de la invención

1. Campo de la invención

La presente invención se refiere a un dispositivo capaz de determinar un estado vivo y un estado muerto de microorganismos recogidos a partir de una muestra en la que se encuentran adheridos o mezclados bacterias o moho (en lo sucesivo en el presente documento, denominados de manera colectiva microorganismos), y especialmente a un dispositivo extremadamente adecuado para productores o distribuidores de alimentos, a través del cual se puede realizar la determinación de microorganismos de manera inmediata.

2. Descripción de la técnica relacionada

Los alimentos, en particular, los alimentos frescos o los alimentos procesados, etc. con un alto porcentaje de humedad tienen una condición bajo la cual es fácil que se produzca la reproducción de microorganismos, por lo que concluye que tales microorganismos se mezclan en una etapa primitiva de producción de alimentos o se mezclan cuando se dejan caer y tales microorganismos se reproducen en poco tiempo, por lo que se vuelve extremadamente insalubre y, a menudo, se invita a una mayor intoxicación alimentaria o se invita al deterioro o la corrupción del producto.

Por consiguiente, aunque los alimentos cárnicos se envuelven en un envase hecho de material de resina sintética o papel y se proporciona un mayor aislamiento contra el frío, a partir de entonces se proporciona para la circulación o el consumo, dado que no se lleva a cabo un tratamiento antibacteriano para tal envase o papel, no solo los microorganismos mezclados en el estado primitivo de producción se reproducen con el paso del tiempo, sino que también los microorganismos adheridos durante la circulación o el consumo o cuando se dejan caer se reproducen en una superficie exterior del envase o papel, por lo que tal alimento cárnico se lleva a un estado extremadamente insalubre.

Por otro lado, en cuanto a la comida procesada, aunque se intenta que se añadan conservantes sintéticos convencionalmente permitidos y se evite la reproducción de microorganismos, concluye que los conservantes sintéticos se consideran peligrosos según el reciente aumento de la conciencia sobre la salud. Por lo tanto, adicionalmente, junto con la Responsabilidad del Producto [Product Liability], es decir, aplicación de la ley de PL desde el punto de vista de la protección del consumidor, es un hecho que la gestión del saneamiento es muy deseada no solo por los productores de alimentos, sino también por los distribuidores.

Teniendo en cuenta la situación anterior, recientemente, ha aparecido una tecnología mediante la cual los microorganismos recogidos se inoculan en un medio colorante en el que el componente colorante, por ejemplo, tal como X-Gal, se mezcla apropiadamente y se cultiva durante 24 horas a 48 horas en un envase de incubación, tal como una incubadora retenida a la temperatura requerida, por lo que se forma una colonia y el componente colorante se descompone y se colorea por la enzima p-galactosidasa retenida por E. ^coI^í, etc., por lo que se determinan los microorganismos.

Sin embargo, esta tecnología tiene una desventaja de que requiere mucho tiempo de cultivo para determinar los microorganismos como medio de determinación de los microorganismos en los alimentos utilizados para la distribución y es deficiente para el uso práctico, y los microorganismos determinables se limitan a una parte de E. ^coI^í y bacterias viables en general y, además, no se pueden determinar bacterias vivas/bacterias muertas.

Además, también se propone un método como otra tecnología determinante que consiste en mezclar los microorganismos recogidos en solución colorante en la que se mezcla tinte fluorescente en solución salina fisiológica con una concentración adecuada y esta se cultiva durante 24 horas a 48 horas y se forma colonia, después lo cual los microorganismos se determinan mediante microscopio óptico.

Sin embargo, existen muchos problemas porque este método también requiere mucho tiempo para el cultivo y las células no se colorean lo suficiente, ya que es difícil que el tinte fluorescente entre en las células de los hongos y el tinte que penetra en las células es fácil de filtrar, por lo que la energía de emisión de luz es débil, por lo que el dispositivo de determinación necesario para usar lentes de gran aumento de precisión se vuelve de gran tamaño y alto coste. Como se ha mencionado, existen muchos problemas para determinar los microorganismos de los alimentos utilizados para su distribución.

Teniendo en cuenta estos problemas, como se describe en la patente japonesa n.° 2979383, se investiga que: el tinte fluorescente hecho de fluoresceína o derivados de esta es fácil de penetrar tanto en células bacterianas vivas como en células bacterianas muertas; el tinte fluorescente hecho de yoduro de propidio puede penetrar solo en las células de bacterias muertas; el tinte fluorescente hecho de fluoresceína o derivados de esta que penetra en las células de bacterias vivas absorbe la luz de excitación con una longitud de onda específica de 480 nm e indica una fuerte emisión de fluorescencia con una longitud de onda de 520 nm que es más larga que la de la luz absorbida según la ley de Stoke; el tinte fluorescente hecho de yoduro de propidio penetrado en las células de bacterias muertas indica una fuerte emisión fluorescente con una longitud de onda 625 más larga que la de la luz absorbida según la ley de Stoke, en función de la adsorción de la luz de excitación con una longitud de onda de 488 nm, por otro lado, el tinte fluorescente hecho de fluoresceína o derivados de esta queda capturado en las células de bacterias muertas y se inhibe la emisión fluorescente. Sobre la base de esto, se propone, en la publicación de solicitud de patente japonesa pendiente de examen n.° H09-275998, una tecnología a través de la cual se puede determinar de manera inmediata un número de emisión cada longitud de onda de luz fluorescente (bacterias vivas y bacterias muertas), una forma de emisión (tipo de bacteria) y un número de emisión (número de bacterias), etc. con bajo aumento al dispersar la luz sin cultivar una solución coloreada de hongo coloreada con tinte fluorescente basada en que la emisión de energía que conduce la emisión fluorescente al absorber la luz de excitación con una longitud de onda específica de 488 nm es extremadamente fuerte. El documento JP2008187935 describe un contador de microorganismos que comprende una unidad de juicio luminiscente para evaluar microorganismos como vivos o muertos.

Mediante esta tecnología, los microorganismos depositados y recogidos por medios apropiados a partir de muestras en las que se mezclan y adhieren microorganismos tales como bacterias o mohos pueden determinarse de manera inmediata como bacterias vivas y bacterias muertas, tipo de bacteria o número de bacterias, mediante un método extremadamente sencillo.

Sin embargo, si bien la tecnología para determinar el estado bacteriano vivo y el estado bacteriano muerto o el otro estado es una tecnología básica capaz de determinar resultados de manera inmediata, ya que el número de emisión de cada longitud de onda de la luz fluorescente, la forma de emisión, el número de emisión, etc. se visualizan a través de una lente de aumento, el trabajo de proceso para obtener realmente tales resultados determinados requiere experiencia y no es fácil de ejecutar para todo el mundo y, además, carece de precisión debido a que la tecnología de visualización se realiza mediante el uso de lentes de aumento.

Es decir, aunque la tecnología anterior es una tecnología excelente para distinguir las bacterias vivas y las bacterias muertas mediante el uso de emisión fluorescente para determinar hongos, finalmente se lleva a cabo la determinación mediante visualización. Por lo tanto, los trabajos que llegan a la visualización se vuelven complejos y la comprensión de la situación del hongo se vuelve imprecisa. Además, las imágenes se vuelven indefinidamente, ya que el estado del hongo se confirma visualmente a través de la lente de aumento cuando se lleva a cabo la visualización, por tanto, existe la desventaja de que la comprensión precisa de la situación de las bacterias vivas y las bacterias muertas se vuelve difícil.

Compendio de la invención

La presente invención ha resuelto los problemas anteriores como un dispositivo para determinar un estado vivo/muerto de microorganismos usando el dispositivo como se detalla en la reivindicación 1 y las reivindicaciones dependientes 2-5. El método correspondiente según la invención se detalla en la reivindicación 6. Además, se describe en el presente documento que la solución bacteriana se prepara como una preparación previa y se deja caer sobre un filtro, la luz de excitación se irradia con precisión desde arriba en diagonal sobre la solución bacteriana de tinción sobre el filtro a través de una pluralidad de ledes para la luz de excitación, se hace que los microorganismos del estado vivo y muerto emitan luz con una longitud de onda fluorescente predeterminada, se obtienen imágenes de los microorganismos mediante el sensor de imagen CMOS, por lo que se pueden obtener imágenes de los microorganismos con precisión.

Efectos de la invención

Según el dispositivo de determinación para determinar un estado vivo/muerto de microorganismos, el dispositivo de determinación comprende un cuerpo de carcasa cuyo interior es un espacio de cuarto oscuro; un mecanismo de medición alojado en el cuerpo de carcasa y configurado para determinar si los microorganismos recogidos a partir de una muestra están vivos o muertos y para contar el número de microorganismos; en donde el mecanismo de medición comprende: un mecanismo de sujeción de base con microbios configurado para insertar y fijar la base con microbios sobre la que se ubican los microorganismos recogidos a partir de la muestra; un mecanismo de irradiación de luz de excitación dispuesto por encima del mecanismo de sujeción de base con microbios y configurado para ser capaz de irradiar intensamente hacia los microorganismos sobre la base con microbios; una cámara de obtención de imágenes dispuesta por encima de los microorganismos sobre la base con microbios a través de un marco de fijación; y un mecanismo de ajuste de ejes XY para mover y ajustar minuciosamente, en una dirección de los ejes XY, una platina XY que está constituida por dos capas que se mueven por separado y soporta el mecanismo de sujeción de base con microbios, caracterizado por que el dispositivo de determinación comprende, además, un cuerpo de tapa de apertura/cierre que abre o cierra un puerto de inserción que está formado en una cara frontal del cuerpo de carcasa y a través del cual se inserta la base con microbios; el mecanismo de irradiación de luz de excitación está constituido por 6 ledes de luz de excitación, que están separados respectivamente en un led para microorganismos vivos o un led para microorganismos muertos y dispuestos de manera alterna en forma circular para dividirse en tres ledes para microorganismos vivos y tres ledes para microorganismos muertos; y el mecanismo de ajuste de ejes XY está constituido de manera que cada árbol de salida de un motor de eje X y un motor de eje Y está enclavado y concatenado respectivamente a la platina XY con dos capas, se establece una posición de origen para la platina XY de antemano y, cuando la platina XY de dos capas se ajusta finamente y se mueve en la dirección de los ejes XY, la información de distancia de movimiento centrada en el origen se transmite a una porción de control de cada motor de eje X, motor de eje Y y se lleva a cabo la corrección del origen, a partir de lo cual se mueve la platina XY. De ese modo, a pesar de la operación comparativamente fácil, el estado del microorganismo se puede captar con precisión en comparación con la operación convencional. Además, el estado de los microorganismos de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos se puede captar con precisión a través de las imágenes tomadas anteriormente. Además, en una pieza de base con microbios, se coloca un filtro de medición a través del cual se filtran y se recogen los microorganismos recogidos a partir de la muestra. De ese modo, los microorganismos vivos/muertos atrapados en el filtro se pueden determinar directamente y, además, dado que el filtro se coloca sobre la base con microbios, el filtro que se convierte en la muestra se puede mover fácilmente junto con la base con microbios.

Además, un mecanismo de cambio de filtro para cambiar una pluralidad de filtros de paso de banda está dispuesto detrás de un marco de fijación y los filtros de paso de banda están dispuestos entre la base con microbios y la cámara de obtención de imágenes. De ese modo, el mecanismo de cambio de filtro se puede alojar de manera compacta dentro del cuerpo de carcasa.

Además, el mecanismo de sujeción de base con microbios está constituido por: unos rieles izquierdo y derecho que agarran los bordes laterales izquierdo y derecho de la base con microbios desde el lado exterior de ambos bordes laterales; un mecanismo de desplazamiento de rieles para liberar la base con microbios agarrada por los rieles izquierdo y derecho a través del desplazamiento de uno de los rieles izquierdo y derecho hacia el exterior; y una palanca de operación dispuesta fuera del uno de los rieles izquierdo y derecho para operar el mecanismo de desplazamiento de rieles desde el puerto de inserción y constituida para ser capaz de operar giratoriamente alrededor de una porción de soporte situada a medio camino de la palanca de operación; el mecanismo de desplazamiento de rieles está constituido por: un árbol deslizante proyectado horizontalmente sobre uno de los rieles izquierdo y derecho; una proyección de contacto de palanca de operación formada en una porción de cabeza del árbol deslizante; una porción de soporte de operación que soporta, en la pletina XY, una porción a medio camino de la palanca de operación, cuya porción superior está en contacto con la proyección de contacto de palanca de operación; y un resorte de compresión provisto entre una superficie lateral exterior de uno de los rieles izquierdo y derecho y la porción superior de la palanca de operación. De ese modo, el ajuste y la extracción de la base con microbios se pueden hacer fácilmente, además de que la base con microbios se puede mantener firmemente en el estado de medición.

El mecanismo de irradiación de luz de excitación está constituido por 6 ledes de luz de excitación dispuestos por encima del mecanismo de sujeción de base con microbios y los ledes están separados respectivamente en un led para microorganismos vivos o un led para microorganismos muertos y dispuestos de manera alterna en forma circular para dividirse en tres ledes para microorganismos vivos y tres ledes para microorganismos muertos. De ese modo, la luz de excitación irradiada desde cada uno de los ledes de luz de excitación no es inhibida por la base con microbios o el filtro, etc., por lo tanto, los microorganismos en el filtro se pueden irradiar directamente y se puede promover una emisión de fluorescencia eficaz. Además, basándose en que los ledes de excitación para microorganismos vivos y para microorganismos muertos están dispuestos de manera alterna, la luz de excitación se puede irradiar de manera uniforme para los microorganismos en el filtro.

Además, la cámara de obtención de imágenes está configurada para distinguir los microorganismos en el filtro de medición en un número predeterminado de secciones de cuadrícula y procesar una imagen, mediante un ordenador conectado por separado, utilizando la luz captada mediante un sensor de imagen CMOS con cada sección de la cuadrícula. De ese modo, en comparación con un caso en el que el número de microorganismos vivos y microorganismos muertos se cuenta visualmente mediante espéculo directo, la determinación del estado se puede llevar a cabo con precisión al mismo tiempo que se reduce drásticamente el esfuerzo y se puede llevar a cabo de manera estable sin diferencia individual del medidor.

El mecanismo de ajuste de ejes XY está constituido de manera que cada árbol de salida de un motor de eje X y un motor de eje Y está enclavado y concatenado respectivamente a la platina XY con dos capas, se establece una posición de origen para la platina XY de antemano y, cuando la platina XY de dos capas se ajusta finamente y se mueve en la dirección de los ejes XY, la información de distancia de movimiento centrada en el origen se transmite a una porción de control de cada motor de eje X, motor de eje Y y se lleva a cabo la corrección del origen, a partir de lo cual se mueve la platina XY. De ese modo, el mecanismo de sujeción de base con microbios en la platina XY se puede mover en la dirección de los ejes XY y se puede determinar el estado al mismo tiempo que se retiene con precisión la reproducibilidad de cada medición.

Además, una etapa para filtrar y recoger los microorganismos en el filtro de medición comprende las etapas de: una etapa 1 para dejar caer una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo; una etapa 2 para dejar caer el reactivo especial en el tubo de ensayo y para sellar y mantener el tubo de ensayo quieto después de agitarlo; una etapa 3 para alojar y configurar el filtro de medición en un alojamiento de filtro provisto por separado; una etapa 4 para conectar el alojamiento de filtro en el que se aloja el filtro de medición a una porción superior de una jeringa provista por separado y formar un estado de comunicación entre el lado interior del alojamiento de filtro y el lado interior de la jeringa; una etapa 5 para introducir la muestra en el tubo de ensayo en el lado interior de la jeringa; una etapa 6 para presionar el lado interior de la jeringa los microorganismos junto con la muestra hacia el filtro de medición en el alojamiento de filtro desde la porción superior de la jeringa, filtrando y recogiendo de ese modo solo los microorganismos teñidos en una superficie del filtro de medición; una etapa 7 para sacar el filtro de medición del alojamiento de filtro y colocar el filtro de medición sobre la base con microbios, para disponer de ese modo los microorganismos filtrados y recogidos sobre la superficie del filtro de medición sobre la base con microbios a través del filtro de medición; y una etapa 8 para insertar la base con microbios en el mecanismo de sujeción de base con microbios provisto en el dispositivo de determinación para determinar un estado vivo/muerto de los microorganismos, captar un estado de los microorganismos como imágenes utilizando el mecanismo de irradiación de luz de excitación y la cámara de obtención de imágenes provistos en el dispositivo de determinación, determinar el estado vivo/muerto de los microorganismos y contar el número de microorganismos. De ese modo, a pesar de la operación comparativamente fácil, el estado del microorganismo se puede captar con precisión en comparación con la operación convencional. Además, el estado vivo y muerto de los microorganismos se puede captar con precisión a través de las imágenes tomadas anteriormente.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es una vista explicativa que muestra una constitución de un sistema de determinación de estado.

La figura 2 es una vista explicativa que muestra una constitución de un dispositivo de determinación según la presente realización.

Las figuras 3A-3C son vistas explicativas que muestran una constitución de un mecanismo de sujeción de base con microbios y una platina XY.

Las figuras 4A-4C son vistas explicativas que muestran una etapa de filtración en la que los microorganismos teñidos fluorescentemente se filtran en un filtro.

La figura 5 es una vista en perspectiva despiezada que muestra una constitución de una parte principal de un mecanismo de medición.

La figura 6 es un diagrama de flujo que muestra procesos de imagen ejecutados en una porción de control.

La figura 7 es un diagrama de bloques que muestra una constitución eléctrica principal.

La figura 8 es una vista explicativa que muestra una tabla de cantidad de luz.

La figura 9 es un diagrama de flujo que muestra procesos ejecutados en la porción de control.

La figura 10 es una vista explicativa que muestra una tabla de cantidad de luz.

La figura 11 es un diagrama de flujo que muestra procesos ejecutados en la porción de control.

La figura 12 es una vista explicativa que muestra una tabla de cantidad de luz.

La figura 13 es un diagrama de flujo que muestra procesos ejecutados en la porción de control.

Descripción detallada

En lo sucesivo en el presente documento, haciendo referencia a los dibujos, se describirá un dispositivo para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto y un método para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto según la presente realización. La figura 1 es una vista explicativa que muestra un sistema para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto, estando el sistema constituido mediante su conexión eléctricamente a un dispositivo para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto (en lo sucesivo, denominado dispositivo de determinación A) según la presente invención y un ordenador C.

El dispositivo de determinación A está constituido por un cuerpo de carcasa 10 con una forma sustancialmente rectangular y un mecanismo de medición 11 alojado en el cuerpo de carcasa 10.

El cuerpo de carcasa 10 tiene una forma rectangular sustancialmente sellada y su interior está hecho como un espacio de cuarto oscuro. En este caso, para poner de manera estable este cuerpo de carcasa 10, se proporcionan pesos en una parte inferior del cuerpo de carcasa 10. En una pared lateral frontal, un cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 está dispuesto para que pueda abrirse y cerrarse.

El mecanismo de medición 11 es una pieza para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto y opera mediante energía suministrada desde una fuente de alimentación comercial (no mostrada) a través de un cable de alimentación 49 con el cual se proporciona un conversor de tensión 49a.

Cuando el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 se opera para abrirse, el mecanismo de medición 11 dentro del cuerpo de carcasa 10 se desactiva. Y cuando el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 se opera para cerrarse, el mecanismo de medición 11 se activa. El mecanismo de medición 11 y el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 están enclavados y concatenados.

Una abertura 13 abierta y cerrada mediante el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 está formado como puerto de inserción de base con microbios 14 y, dentro del puerto de inserción de base con microbios 14, está provisto un mecanismo de sujeción de base con microbios 15 que constituye una porción frontal como parte del mecanismo de medición 11.

Como se muestra en la figura 2, el mecanismo de sujeción de base con microbios 15 está dispuesto en un marco de fijación 16 de tipo casi puerta que está provisto en el cuerpo de carcasa 10 y, como se muestra en las figuras 3A-3C, el mecanismo de sujeción de base con microbios 15 está constituido por: un par de rieles izquierdo y derecho 18L, 18R que agarran ambos bordes laterales longitudinales de una base con microbios 17 (véase la figura 1) desde los exteriores izquierdo y derecho, siendo la base con microbios 17 insertada por un usuario P y teniendo una forma rectangular en una vista en planta; un mecanismo de desplazamiento de rieles 19 que desplaza uno de los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R (riel izquierdo 18L en la presente realización) hacia el exterior y liberando el agarre de la base con microbios 17 mediante los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R; y una palanca de operación 20 dispuesta en el exterior del uno de los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R para operar el mecanismo de desplazamiento de rieles 19 desde la abertura de inserción de base con microbios 14 y constituida de modo que una operación de giro se pueda realizar alrededor de una porción de soporte 20a dispuesta a medio camino de la palanca de operación 20. El mecanismo de desplazamiento de rieles 19 está constituido por: un árbol deslizante 21 proyectado horizontalmente desde el uno de los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R; una proyección de contacto de palanca de operación 21a formada en una cabeza del árbol deslizante 21; una porción de soporte operativo 23 a través de la cual un medio camino de la palanca de operación 20, una porción superior de la cual entra en contacto con la proyección de contacto de palanca de operación 21a, se soporta en una platina XY 22; y un resorte de compresión 24 dispuesto entre el exterior del uno de los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R y la porción superior de la palanca de operación 20.

La base con microbios 17 insertada y fijada en el mecanismo de sujeción de base con microbios 15 tiene en esta los microorganismos recogidos a partir de la muestra. Concretamente, como se menciona en lo sucesivo en el presente documento, los microorganismos recogidos a partir de la muestra y tratados por la solución de tinción fluorescente se filtran mediante un filtro de medición 17a y se recogen y tal propio filtro de medición 17a sobre el que se adhieren los microorganismos tratados se coloca sobre la base con microbios 17, a partir de lo cual el filtro de medición 17a se coloca en el mecanismo de sujeción de base con microbios 15 en el mecanismo de medición 11.

Además, como se muestra en la figura 2, alrededor del mecanismo de sujeción de base con microbios 15, está dispuesto un mecanismo de irradiación de luz de excitación 25 y el mecanismo de irradiación de luz de excitación 25 está constituido por una pluralidad de ledes de luz de excitación 26 dispuestos por encima del mecanismo de sujeción de base con microbios 15. Cada uno de los ledes de luz de excitación 26 está dispuesto de manera alterna para dividirse en un led 26a para microorganismos vivos y un led 26b para microorganismos muertos.

Es decir, en total, seis ledes de luz de excitación 26 están dispuestos de manera alterna en forma circular para dividirse en tres ledes 26a para microorganismos vivos y tres ledes 26b para microorganismos muertos.

El led 26a para microorganismos vivos usa un diodo emisor de luz (led) capaz de irradiar luz de excitación azul que incluye una longitud de onda de 488 nm y el led 26b para microorganismos muertos usa un diodo emisor de luz (led) capaz de emitir luz de excitación verde que incluye una longitud de onda de 530 nm. Cada led de luz de excitación 26 está constituido de modo que la luz de excitación pueda irradiarse intensamente desde la periferia superior diagonal hacia el filtro de medición 17a sobre el que se adhieren los microorganismos tratados. Dicho de otro modo, cada led de luz de excitación 26 está dispuesto en forma circular para encerrar el filtro de medición 17a en el área superior del filtro de medición 17a y está constituido de manera que se puede llevar a cabo una irradiación de luz de excitación múltiple desde la periferia superior diagonal hacia los microorganismos en el filtro de medición 17a.

Además, en el marco de fijación 16, en una posición superior del filtro de medición 17a sobre el que se adhieren los microorganismos tratados mediante la solución de tinción, está dispuesta una cámara de obtención de imágenes 27 orientada hacia el filtro de medición 17a a través de un espacio interior de cada led de luz de excitación 26 dispuesto en forma circular.

La cámara de obtención de imágenes 27 transmite una señal receptora de luz a una porción de control 29 dispuesta en una parte trasera del mecanismo de medición 11 al distinguir los microorganismos en el filtro de medición 17a en un número predeterminado de secciones de celosía y por la luz recibida cada sección a través de un sensor de imagen CMOS 28. En la porción de control 29, un proceso de análisis de imagen se lleva a cabo mediante un método de coincidencia de patrones y los datos de imagen y los resultados del análisis se transmiten al ordenador C.

Concretamente, la cámara de obtención de imágenes 27 posee un sistema óptico para ampliar los microorganismos en el filtro de medición 17a en la medida en que los microorganismos pueden determinarse individualmente y la cámara de obtención de imágenes 27 obtiene imágenes respectivamente de los microorganismos adheridos al filtro de medición 17a cada sección virtual de 24 fotogramas que es virtualmente seccionada mediante, por ejemplo, mover el filtro de medición 17a en la dirección de los ejes XY de 24 fotogramas a través de una platina XY 22 mencionada más adelante, sin obtener imágenes de la totalidad del filtro de medición 17a por un marco todo al mismo tiempo.

En términos de resultados, un punto de obtención de imágenes de la cámara de obtención de imágenes 27 es que la cámara de obtención de imágenes 27 distingue virtualmente un área con un diámetro de 1 cm en el filtro de medición 17a en 24 fotogramas y obtiene imágenes de cada sección distinguida respectivamente. Por este motivo, el filtro de medición 17a es movido en la dirección de los ejes XY por la platina XY 22.

Entre la cámara de obtención de imágenes 27 y el filtro de medición 17a, un filtro de paso de banda 30 está dispuesto para eliminar los rayos misceláneos de modo que la luz de excitación innecesaria o los rayos misceláneos no se mezclen y no se obtengan imágenes cuando se recibe la fluorescencia.

El filtro de paso de banda 30 se constituye disponiendo dos tipos de filtros circulares para bacterias vivas y bacterias muertas en un marco rectangular 31 hacia delante y hacia detrás.

Los dos tipos de filtros de paso de banda 30 en el marco 31 se cambian a través de un mecanismo de cambio de filtro 32 que se puede cambiar correspondientemente para obtener imágenes de microorganismos vivos y microorganismos muertos.

El mecanismo de cambio de filtro 32 está constituido por: un solenoide de cambio 34 dispuesto en un extremo superior de un marco de cambio 33 instalado en el marco de fijación 16; un brazo de accionamiento 35 soportado y conectado a una parte superior de un émbolo del solenoide de cambio 34; una porción de soporte 36 que soporta la mitad de camino del brazo de accionamiento 35 al marco de cambio 33; un resorte 37 dispuesto entre el brazo de accionamiento 35 y el marco de cambio 33 debajo de la porción de soporte 36; un brazo de operación 38 móvil en la dirección delantera y trasera, estando una mitad de camino del brazo de operación 38 y un extremo inferior del brazo de accionamiento 35 soportados y conectados; y el marco 31 que posee el filtro de paso de banda 30 que está concatenado en un extremo frontal del brazo de operación 38.

Por lo tanto, basado en la operación eléctrica de avance/retroceso del solenoide, el filtro de paso de banda 30 concatenado y conectado a través de un mecanismo de enlace del brazo de accionamiento 35, el brazo de operación 38, la porción de soporte 36 y similares están constituidos de modo que se pueden disponer dos tipos de filtros entre la cámara de obtención de imágenes 27 y el filtro de medición 17a mediante el cambio del movimiento hacia delante y hacia detrás, por lo que se impide que se mezclen la luz de excitación o los rayos misceláneos innecesarios. Un mecanismo de ajuste de ejes XY 40 es para realizar el movimiento XY para obtener imágenes del mecanismo de sujeción de base con microbios 15 en el que está dispuesto el filtro de medición 17a con, por ejemplo, 24 fotogramas. Como se muestra en la figura 3C, el mecanismo de ajuste de ejes XY 40 está constituido de manera que cada árbol de salida de un motor de eje X 41 y un motor de eje Y 42 está enclavado y concatenado respectivamente a la platina XY de dos capas 22, se establece una posición de origen para la platina XY 22 de antemano y, cuando la platina XY de dos capas 22 se ajusta finamente y se mueve en la dirección de los ejes XY, la información de distancia de movimiento centrada en el origen se transmite a una porción de control de cada motor de eje X 41, motor de eje Y 42 y se lleva a cabo la corrección del origen, a partir de lo cual se mueve la platina XY 22.

Es decir, una placa X 43 que se desliza en la dirección del eje X y una placa Y 44 que se desliza en la dirección del eje Y están estratificados en el estado de dos capas bajo un estado en el que cada placa se mueve independientemente.

La placa X 43 está constituido para poder deslizarse en la dirección del eje X a través de un mecanismo de tornillo o un mecanismo de accionamiento predeterminado que incluye una cremallera, piñón, etc. para el árbol de accionamiento del motor de eje X 41.

Debajo de la placa X 43, la placa Y 44 está constituida para poder deslizarse en la dirección del eje Y a través de un mecanismo de accionamiento predeterminado para el árbol de accionamiento del motor de eje Y 42.

Al accionar el motor de eje X 41, la placa X 43 se mueve en la dirección del eje X y, debajo de la placa X 43, la placa Y 44 en una superficie superior en la que se coloca la placa X 43 se mueve integralmente en la dirección del eje Y junto con la placa X 43 en la superficie superior de esta cuando la placa Y 44 se mueve en la dirección del eje Y. Además, la placa Y 44 se mueve y ajusta desde el origen de las placas X, Y 43, 44, por lo que el ajuste posicional contra un punto de obtención de imágenes se realiza moviendo la cantidad correspondiente a 24 fotogramas.

En este caso, se constituye que el movimiento de la placa X 43 integral con la placa Y 44 se realiza junto con el motor de eje X 41.

Además, debajo de cada una de las placas XY 43, 44, están provistas unas placas de soporte XY 43a, 44a para soportar el movimiento en el plano XY de las placas XY 43, 44. La placa de soporte X 43a de la placa X 43 está constituido integralmente con la placa Y 44 y el movimiento del eje Y de la placa Y 44 se transmite desde la superficie superior de esta a la placa X 43, por lo que se solicita el movimiento del eje Y de la placa X 43.

Después, se describirá la tecnología para colocar los microorganismos filtrados en el filtro de medición 17a a partir de la muestra después de mezclar la muestra en la solución de tinción.

En primer lugar, la muestra sobre la que se adhieren los microorganismos se disuelve en la solución salina fisiológica y se prepara una solución en la que se mezcla dicho suero fisiológico y dos tipos del tinte fluorescente para microorganismos vivos y microorganismos muertos. Concretamente, en el objeto de medición, contra la muestra 1g que se obtiene utilizando un método de recogida diferente en cada caso en que la muestra a la que se adhieren los microorganismos existe dentro del objeto de medición y en el caso de que la muestra existe en la superficie del objeto de medición, se añade la solución salina fisiológica 9cc que está esterilizada y se diluye por agitación.

Después, en la solución obtenida por separación del residuo sólido de la muestra existente en la solución en la que la muestra se disuelve por filtración o centrifugación, la solución de tinte fluorescente para microorganismos vivos y para microorganismos muertos y el acelerador de tinte o el agente de prevención de derrames se mezclan y disuelven, preparándose de este modo la solución.

En este caso, como la solución de tinte fluorescente, por ejemplo, se puede utilizar fluoresceína para microorganismos vivos o derivados de esta y yoduro de propidio para microorganismos muertos.

La fluoresceína se dispersa en las células de los microorganismos vivos y se captura en las células de los microorganismos muertos y se presenta una fuerte emisión de fluorescencia de la longitud de onda central de 530 nm mediante la adsorción de la luz de excitación de la longitud de onda central de 480 nm.

Por otro lado, el yoduro de propidio no puede penetrar en las células de los microorganismos vivos y puede penetrar y dispersarse en las células de los microorganismos muertos. La fuerte emisión de fluorescencia de la longitud de onda central de 620 nm se presenta mediante la adsorción de la luz de excitación de la longitud de onda central de 530 nm.

Además, el tinte fluorescente hecho de fluoresceína para microorganismos vivos y yoduro de propidio para microorganismos muertos se prepara con una concentración de al menos más de 3 gmol/ml cuando se diluye en solución salina fisiológica para presentar una emisión de fluorescencia que se puede visualizar según la adsorción de la luz de excitación. En este caso, dado que existe el peligro de que una concentración excesiva dé un efecto adverso a los microorganismos vivos, es deseable que la concentración se limite a 15 gmol/ml como máximo.

Así mismo, puede ser concebible que el yoduro de propidio usado para la tinción fluorescente de los microorganismos vivos se disuelva en dimetilsulfóxido (DMSO) como disolvente mientras se espera un efecto promotor de tinción. Aunque la inhibición de la penetración del tinte fluorescente en las células provoca principalmente en la membrana celular, DMSO puede aumentar la penetración del tinte fluorescente en las células de los microorganismos.

Además, para evitar el derrame del tinte fluorescente penetrado en los microorganismos vivos y en los microorganismos muertos, se puede añadir el agente de prevención de derrames. Como prevención de derrames, por ejemplo, puede adoptarse una solución de cloruro de potasio.

Después, la solución en la que se dispersan los microorganismos y se mezcla el agente de tinción (en lo sucesivo, denominada solución de microorganismo de tinción) se calienta a temperatura ambiente o temperatura requerida si es necesario, preferiblemente se calienta a 25 a 35 °C, por lo que el tinte fluorescente penetra en las células del hongo y se lleva a cabo una tinción eficaz, además de la operación del agente promotor de tinción. Aunque el tiempo necesario para la tinción es algo diferente según las condiciones de calentamiento, tal tiempo es aproximadamente de 3 a 15 minutos.

Después, como se muestra en la figura 4A, la solución de microorganismo de tinción obtenida anteriormente se inyecta en una jeringa 45 y la solución de microorganismo de tinción se bombea a un cartucho de filtro 47 en el que se acomoda el filtro de medición 17a, por lo que los microorganismos 46 quedan atrapados en el filtro de medición 17a.

Según esta operación, como se muestra en la figura 4B, los microorganismos 46 teñidos por el tinte fluorescente se filtran fuera del filtro de medición 17a.

Además, como se muestra en las figuras 4B y 4C, el filtro de medición 17a en el que se filtran los microorganismos 46 se coloca sobre la base con microbios 17 utilizando unas tenacillas 48, etc. En lo sucesivo, el estado de microorganismo vivo/muerto se determina mediante el dispositivo de determinación A.

Después, se describirá en detalle un proceso de determinación de una muestra de medición preparada anteriormente mediante el dispositivo de determinación A.

En primer lugar, como se muestra en la figura 1, el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 del cuerpo de carcasa 10 se abre y la base con microbios 17 en la que se coloca el filtro de medición 17a que tiene los microorganismos 46 filtrados se inserta a través del puerto de inserción de base con microbios 14 y se fija en el mecanismo de sujeción de base con microbios 15.

Concretamente, como se muestra en la figura 5, las posiciones de los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R son desplazadas mediante la palanca de operación 20 a través del puerto de inserción de base con microbios 14, por lo que ambos bordes laterales de la base con microbios 17 están agarrados por los rieles izquierdo y derecho 18L, 18R desde los exteriores izquierdo y derecho y el ajuste de la base con microbios 17 se completa mientras se ajusta a una posición de medición correcta.

En lo sucesivo, el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 del cuerpo de carcasa 10 se cierra y el mecanismo de medición 11 se acciona. Además, se lleva a cabo una irradiación de seis vías mientras se cambian dos tipos de luces de excitación de luz azul del led 26a para microorganismos vivos y luz verde del led 26b para microorganismos muertos a través del mecanismo de irradiación de luz de excitación 25 dispuesto en la periferia del mecanismo de sujeción de base con microbios 15, obteniéndose de ese modo la emisión de luminiscencia desde cada uno de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos en el filtro de medición 17a.

Concretamente, mediante la irradiación de luz de excitación de 488 nm de longitud de onda incluida en la luz azul emitida desde el led 26a para microorganismos vivos del mecanismo de irradiación de luz de excitación 25, la emisión de la fluorescencia verde de 530 nm de longitud de onda más larga se obtiene a partir de los microorganismos vivos en el filtro de medición 17a en las células en las que penetra la fluoresceína, por otro lado, mediante la irradiación de luz de excitación de 530 nm de longitud de onda incluida en la luz verde emitida desde el led 26b para microorganismos muertos se obtiene la emisión de fluorescencia roja de 620 nm de longitud de onda más larga desde los microorganismos muertos en cuyas células penetra el yoduro de propidio.

En el estado de irradiación de la luz de excitación mencionado anteriormente, el filtro de paso de banda 30 dispuesto entre la cámara de obtención de imágenes 27 y el filtro de medición 17a se cambia para microorganismos vivos o para microorganismos muertos a través del mecanismo de cambio de filtro 32, cortándose de ese modo la luz de excitación o los rayos misceláneos.

Es decir, basado en la operación eléctrica de avance/retroceso del solenoide de cambio 34, el filtro de paso de banda 34 se cambia, por lo que se evita que se contaminen rayos misceláneos innecesarios cuando se obtienen imágenes de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos, respectivamente. En este caso, el cambio del filtro para microorganismos vivos y el filtro para microorganismos muertos en el filtro de paso de banda 30 se realiza junto con cada una de las tomas de la cámara de obtención de imágenes 27 a través de la porción de control 29.

La toma mediante la cámara de obtención de imágenes 27 se lleva a cabo de la siguiente manera. Es decir, el hongo 46 adherido del filtro de medición 17a colocado en el mecanismo de sujeción de base con microbios 15 es dividido virtualmente en 24 fotogramas por la platina XY 22 y se mueve en la dirección XY a través del mecanismo de ajuste de ejes XY 40 del mecanismo de sujeción de base con microbios 15, a continuación de lo cual la toma por parte de la cámara de obtención de imágenes 27 se lleva a cabo por separado para los microorganismos vivos y para los microorganismos muertos a través del filtro de paso de banda 30 cada sección de cuadrícula virtual de cada uno de los 24 fotogramas.

Es decir, en una sección de cuadrícula virtual, cada disparo de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos se lleva a cabo respectivamente en una sola vez, la información de distancia de movimiento que centra la posición de origen del mecanismo de ajuste de ejes XY 40 del mecanismo de sujeción de base con microbios 15 se transmite a la porción de control de cada uno de los motores de eje X y eje Y 41, 42 (se omite la ilustración), por lo que se lleva a cabo la corrección de la posición de origen.

Además, el filtro de medición 17a en la platina XY 22 se ajusta y se coloca en la otra sección de cuadrícula virtual que es el siguiente punto de obtención de imágenes, por lo que los microorganismos 46 adheridos en el filtro de medición 17a se toman en un total de 24 fotogramas, 24 veces respectivamente para microorganismos vivos y para microorganismos muertos, en total 48 veces, a través de la cámara de obtención de imágenes 27.

Además, con respecto a las imágenes tomadas por la cámara de obtención de imágenes 27, cada fuerza de emisión fluorescente obtenida a partir de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos por irradiación de la luz de excitación es captada por el sensor de imagen CMOS 28 (véase la figura 2) y el proceso de imagen de este se lleva a cabo en la porción de control 29.

En el proceso de imagen en la porción de control 29, es una etapa de conversión de imagen en escala de grises realizada aproximadamente, una etapa de patrón de coincidencia de microorganismos, una etapa de registro de número de coincidencia de microorganismos vivos, etc.

Concretamente, como se muestra en el diagrama de flujo de la figura 6, en primer lugar, se lleva a cabo la etapa de conversión de imagen en escala de grises (etapa S10) en la que los datos de imagen obtenidos a partir del sensor de imagen CMOS 28 se convierten en una imagen en escala de grises.

Después, basada en la información convertida en la imagen en escala de grises, se lleva a cabo la etapa de patrón de coincidencia de microorganismos para determinar el microorganismo.

La etapa de patrón de coincidencia de microorganismos se realiza verificando la coincidencia de patrones de forma específicos de especies de microorganismos registradas de antemano en la porción de control 29 y formas de sujetos representados en las imágenes en escala de grises para cada uno de los datos de imagen de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos.

Además, en cuanto al ajuste de este patrón de coincidencia de microorganismos, existen tres tipos de ajustes en los que el número de píxeles de los ejes XY es 5x5, 6x6 y 8x8 (etapa S11) para el patrón de forma específico de la especie de microorganismo registrada y la siguiente operación se lleva a cabo repetidamente en cada ajuste.

La verificación del patrón de forma específico de la especie de microorganismo registrada en la porción de control 29 y la forma de objeto representada en la imagen en escala de grises se lleva a cabo mediante verificación de escaneo para mover el patrón de forma específico en la dirección del eje Y cada un píxel desde un punto de inicio de imagen dentro de la sección de cuadrícula virtual de un fotograma en la imagen en escala de grises (etapa S12, etapa S15).

En ese momento, en caso de que se descubra en la imagen en escala de grises un punto que coincida con la forma específica de la especie de microorganismo registrada en la porción de control 29 (etapa S12: Sí), se adjunta una marca de punto al punto coincidente (etapa S13). Después del marcaje, el patrón de forma específico se mueve y ajusta en la cantidad correspondiente al patrón de forma específico ya marcado desde el punto de inicio de escaneo de la imagen (etapa S14) y se inicia la continuación de la verificación de escaneo (etapa S16: No).

En caso de que la verificación de escaneo para una fila, es decir, se completa una fila longitudinal (etapa S16: Sí), el patrón de forma específico se mueve un píxel en la dirección del eje X desde el punto de inicio de escaneo de la imagen, es decir, se mueve en la dirección lateral (etapa S17), y la verificación de escaneo se lleva a cabo en la dirección longitudinal (etapa S18: No).

Como se ha mencionado, la verificación de escaneo se lleva a cabo sobre la sección longitudinal y lateral dentro de todas las áreas de la sección de cuadrícula virtual de un fotograma en la imagen en escala de grises y se lleva a cabo una operación de identificación para 24 fotogramas en los que se marca cada uno de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos (etapa S19).

Además, en la etapa de registro de número de coincidencia de microorganismos vivos, una cantidad de puntos marcados cada microorganismo vivo y los microorganismos muertos dentro de cada sección de cuadrícula virtual se reconoce como número de identificación para cada uno de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos y se registra cada sección de cuadrícula virtual (etapa S20).

La información determinada anteriormente del número de microorganismos vivos y los microorganismos muertos existentes en el filtro de medición se refleja en un monitor del ordenador C junto con los datos de imagen obtenidos por la cámara de obtención de imágenes 27, por lo que el estado de los microorganismos puede captarse como la imagen y puede determinarse el estado de microorganismo vivo/muerto.

Por otro lado, en la computadora C, cada dato de imagen obtenido en lo anterior se muestra y la información del número de microorganismos vivos y los microorganismos muertos detectados en cada dato de imagen también se muestra junto con los datos de imagen.

Como se ha mencionado, según el dispositivo de determinación A de la presente realización, no es necesario contar los microorganismos vivos y los microorganismos muertos uno por uno mientras el usuario lleva a cabo el espéculo a simple vista y tiene un contador en una mano. A pesar de la operación comparativamente fácil, el estado del microorganismo se puede captar con precisión en comparación con la operación convencional. Además, el estado de los microorganismos de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos se puede captar con precisión a través de las imágenes tomadas anteriormente. Es decir, puede estar provisto un dispositivo de medición de imagen de fluorescencia de microorganismos o un método de medición de imagen de fluorescencia de microorganismos, poseyendo ambos la constitución anterior.

Después, se describirá un dispositivo de determinación de estado de microorganismo vivo/microorganismo muerto según la primera modificación (en lo sucesivo, denominado dispositivo de determinación A2). En este caso, en cada modificación descrita en lo sucesivo en el presente documento, en cuanto a la constitución casi igual a la del mencionado dispositivo de determinación A, existirá un caso cuya explicación se omita. Y, en cuanto a la constitución de cada modificación descrita a continuación, por ejemplo, constitución eléctrica y similares, se puede entender que tal constitución también está provista en el dispositivo de determinación A anterior, por el contrario, también se puede entender que la constitución en el dispositivo de determinación A anterior se proporciona en cada modificación descrita en lo sucesivo en el presente documento.

El dispositivo de determinación A2 se caracteriza en un punto por el hecho de que el dispositivo está constituido de manera que el número de microorganismos puede contarse con mayor precisión. En el dispositivo de determinación A descrito anteriormente, la cantidad de luz de la luz de excitación irradiada desde el led 26a para microorganismos vivos o el led 26b para microorganismos muertos no está particularmente ajustada y, por ejemplo, en caso de que la cantidad de luz de la luz de excitación irradiada desde estos ledes 26 se haga constante, la cantidad de emisión de la fluorescencia procedente de todos los microorganismos aumenta cuando el microorganismo 46 por área predeterminada en el filtro de medición 17a es grande, por lo que un límite de una periferia exterior de algún hongo 46 y una periferia exterior de otro microorganismo 46 cercano al primero se vuelve ambiguo en la imagen obtenida. Por tanto, a pesar de que existen dos microorganismos 46, tales dos microorganismos 46 se fotografían como una masa ligera en la imagen, por lo que el reconocimiento de cada microorganismo 46 mediante la coincidencia de patrones, es decir, se vuelve difícil reconocer por separado los microorganismos 46 individuales, por tanto, se considerará un caso en el que el cálculo del número preciso de microorganismos se vuelve difícil.

Además, en caso de que el número de microorganismos por área predeterminada en el filtro de medición 17a sea pequeño, la cantidad de emisión de fluorescencia procedente de todos los microorganismos disminuye, por lo que se considera un problema la posibilidad de reconocer falsamente el ruido de fluorescencia emitido por los contaminantes teñidos con fluorescencia a medida que aumentan los microorganismos 46.

Por tanto, en el dispositivo de determinación A2, cuando se toma en el filtro de medición 17a, un valor aproximado del número de microorganismos se obtiene a partir del primer fotograma (toma de la primera sección de cuadrícula) que se vuelve el estándar. En lo sucesivo, en caso de que el valor obtenido del número de microorganismos sea superior a un valor predeterminado, la cantidad de luz de la luz de excitación emitida desde el led 26 se reduce, por lo que el límite de cada microorganismo 46 queda claro al suprimir la cantidad de emisión de fluorescencia. Además, en caso de que el valor obtenido del número de microorganismos sea inferior al valor predeterminado, la cantidad de emisión de fluorescencia aumenta al aumentar la cantidad de luz de la luz de excitación, por lo que se pueden obtener imágenes de la forma del microorganismo con mayor claridad. De ese modo, se puede realizar una medición precisa del número de microorganismos.

En lo sucesivo en el presente documento, en primer lugar, se describirá la constitución eléctrica del dispositivo de determinación A2, a continuación, se describirán los procesos en la porción de control 29.

La figura 7 es un diagrama de bloques que muestra la constitución eléctrica principal en el dispositivo de determinación A2. Como se muestra en la figura 7, la porción de control 29 posee una CPU 51, una ROM 52 y una RAM 53. En la ROM 52, se almacenan los programas necesarios para los procesos de la CPU 51 y la RAM 53 funciona como área de almacenamiento temporal cuando los programas, etc. se ejecutan.

Concretamente, en la RAM 53, datos de imagen tomados por el sensor de imagen CMOS 28, un valor de recuento del número de microorganismos y banderas de toma de los microorganismos muertos, etc. se almacenan. El valor de recuento del número de microorganismos es un número de los microorganismos detectados llevando a cabo el proceso de coincidencia de patrones a través de la CPU 51 y tanto un valor de recuento del número de microorganismos vivos como un valor de recuento del número de microorganismos muertos se almacenan. Además, la bandera de toma de los microorganismos muertos es una bandera utilizada para la determinación de si se produce o no un momento para tomar los microorganismos muertos. En caso de que el momento para tomar los microorganismos muertos no llegue a ser (por ejemplo, se vuelva el momento para tomar los microorganismos vivos), la bandera de toma se establece APAGADA y, en caso de que se vuelva el tiempo para tomar los microorganismos muertos, la bandera de toma se establece en ON.

En la ROM 52, programas para realizar diversos procesos necesarios para operar el dispositivo de determinación A2, imágenes de plantilla necesarias para la coincidencia de patrones, tablas a las que se hace referencia cuando la determinación es realizada por la CPU 51 se almacenan respectivamente en áreas predeterminadas. Por ejemplo, como las tablas, como se muestra en la figura 8, se almacena una tabla de cantidad de luz para cambiar la cantidad de luz de la luz de excitación procedente del led 26 correspondiente al número de microorganismos, etc. Es decir, esta tabla de cantidad de luz es una tabla en la que el número de los microorganismos detectados por la coincidencia de patrones y los procesos para un controlador de ledes 56 descritos a continuación se corresponden mutuamente.

Además, a la porción de control 29, como se muestra en las figuras 1 y 2, están conectados un interruptor de alimentación 54 y un interruptor de enclavamiento 55 enclavados con el cuerpo de tapa de apertura/cierre. El interruptor de alimentación 54 funciona como un interruptor principal para operar el dispositivo de determinación A2 y el interruptor de enclavamiento 55 es un interruptor para detectar si el cuerpo de tapa de apertura/cierre 12 está en un estado abierto o cerrado.

Además, a la porción de control 29, están conectados el solenoide de cambio 34, un controlador de ledes 56, un controlador de motor 57 y una unidad de obtención de imágenes 58.

La porción de control 29 transmite una señal de accionamiento de solenoide que incluye información sobre el tiempo para tomar cuál de los microorganismos vivos o los microorganismos muertos al solenoide de cambio 34. El solenoide de cambio 34 que recibe la señal de accionamiento de solenoide se activa correspondiente al contenido de la señal y opera el mecanismo de cambio de filtro 32, por lo que cambia el filtro de paso de banda 30.

El controlador de ledes 56 posee un circuito para cambiar el encendido del led 26a para bacterias vivas o el led 26b para microorganismos muertos y para realizar el ajuste de cantidad de luz de cada led 26 y opera correspondiente a una señal de excitación o una señal de ajuste de cantidad de luz transmitida desde la porción de control 29.

Además, el controlador de ledes 56 posee un área de almacenamiento en la que se almacena un valor de referencia de emisión para bacterias vivas y un valor de referencia de emisión para bacterias muertas (denominado, de manera colectiva, valor de referencia de emisión) que se refieren al momento del ajuste de cantidad de luz en el que se emite el led 26a para bacterias vivas o el led 26b para bacterias muertas. Como valor de referencia de emisión, se almacenan, como valores previstos, los valores correspondientes a la cantidad de luz de excitación del led 26 a partir de los cuales se obtiene una fluorescencia moderada en caso de que exista un número adecuado de hongo.

En la señal de excitación, información para instruir el encendido del led 26a para microorganismos vivos (en lo sucesivo en el presente documento, la señal de excitación que incluye esta información se denomina señal de excitación para microorganismos vivos al controlador de ledes 56 o información para instruir el encendido del led 26b para microorganismos muertos (en adelante, la señal de excitación que incluye esta información se denomina señal de excitación para microorganismos muertos) al controlador de ledes 56.

En caso de que el controlador de ledes 56 reciba la señal de excitación, por ejemplo, la señal de excitación para microorganismos vivos, el controlador de ledes 56 emite el led 26a para microorganismos vivos con una intensidad correspondiente al valor de referencia de emisión para microorganismos vivos y, en caso de que el controlador de ledes 56 reciba la señal de excitación para microorganismos muertos, el controlador de ledes 56 emite el led 26b para microorganismos muertos con una intensidad correspondiente al valor de referencia de emisión para microorganismos muertos

Además, en la señal de ajuste de cantidad de luz, la información de atenuación para instruir la atenuación al controlador de ledes 56 (en lo sucesivo en el presente documento, la señal de ajuste de cantidad de luz, incluida la información de atenuación, también se denomina señal de atenuación) o la información de refuerzo para instruir el refuerzo al controlador de ledes 56 (en lo sucesivo en el presente documento, la señal de ajuste de cantidad de luz que incluye la información de refuerzo también se denomina señal de refuerzo) o la información de que el led 26 que se atenuará o reforzará es cuál del led 26a para microorganismos vivos o el led 26b para microorganismos muertos, están incluidas.

En caso de que el controlador de ledes 56 reciba la señal de ajuste de cantidad de luz, por ejemplo, la señal de atenuación relativa al led 26a para microorganismos vivos, el controlador de ledes 56 reescribe el valor de referencia de emisión para microorganismos vivos de modo que la intensidad de emisión del led 26a para microorganismos vivos sea baja y, en caso de que el controlador de ledes 56 reciba la señal de refuerzo relativa al led 26b para microorganismos muertos, el controlador de ledes 56 reescribe el valor de referencia de emisión para microorganismos muertos de modo que la intensidad de emisión del led 26b para microorganismos muertos sea alta.

El controlador de motor 57 es una porción de circuito que realiza el control de accionamiento del motor de eje X 41 y del motor de eje Y 42. La porción de control 29 emite una señal de accionamiento de motor al controlador de motor 57. El controlador de motor 57 que recibe la señal de accionamiento de motor mueve la platina XY 22 de modo que un intervalo de toma predeterminado (sección de cuadrícula) entre dentro de la sección de cuadrícula de toma según una coordenada almacenada de antemano.

La unidad de obtención de imágenes 58 posee el sensor de imagen CMOS 28, construye datos de imagen a partir de una señal obtenida por el sensor de imagen CMOS 28 y transmite los datos de imagen a la porción de control 29. Cuando la porción de control 29 transmite una señal de comando de obtención de imágenes a la unidad de obtención de imágenes 58, la unidad de obtención de imágenes 58 devuelve los datos de imagen obtenidos mediante la obtención de imágenes a la porción de control 29.

Además, la porción de control 29 posee un conector 59 y puede llevar a cabo una comunicación bidireccional con el ordenador C a través del conector 59.

Después, haciendo referencia a la figura 9, se describirá un proceso de recuento para microorganismos vivos/microorganismos muertos en el filtro de medición 17a (en lo sucesivo en el presente documento, denominado proceso de recuento para microorganismos vivos/microorganismos muertos) ejecutado en la porción de control 29. El proceso de recuento de microorganismos vivos/microorganismos muertos ejecutado en la porción de control 29 se ejecuta como parte del proceso general que supervisa el dispositivo de determinación A2 (en lo sucesivo en el presente documento, denominado rutina principal). En este caso, el proceso de recuento para bacterias vivas/microorganismos muertos se describirá concretamente y se omitirán diversos otros procesos de la rutina principal.

Como se muestra en la figura 9, en el proceso de recuento para bacterias vivas/microorganismos muertos, en primer lugar, la CPU 51 reescribe el valor de la bandera de obtención de imágenes para microorganismos muertos almacenado en una dirección predeterminada de la RAM 53 y establece APAGADA (etapa S31). Además, la CPU 51 transmite la señal de excitación para microorganismos vivos al controlador de ledes 56.

Después, la CPU 51 transmite la señal de accionamiento de solenoide al solenoide de cambio 34 haciendo referencia a la bandera de toma para microorganismos muertos, por lo que cambia el filtro de paso de banda 30 (etapa S32). Es decir, en caso de que la bandera de toma para microorganismos muertos esté APAGADA, la CPU 51 transmite la señal de accionamiento de solenoide, incluida la información de que es el momento de tomar los microorganismos vivos y dispone el filtro de paso de banda 30 entre el filtro de medición 17a y la cámara de obtención de imágenes 27. En caso de que la bandera de toma para microorganismos muertos esté ENCENDIDA, la CPU 51 transmite la señal de accionamiento de solenoide que incluye información de que es el momento de tomar los microorganismos muertos y dispone el filtro de paso de banda 30 para los microorganismos muertos.

Después, la CPU 51 transmite la señal de comando de toma a la unidad de obtención de imágenes 58 y hace que la cámara de obtención de imágenes 27 realice la toma (etapa S33), almacena los datos de imagen recibidos de la unidad de obtención de imágenes 58 en una dirección predeterminada de la RAM 53 (etapa S34) y convierte los datos de imagen en escala de grises (etapa S35).

Después, la CPU 51 lleva a cabo la coincidencia de patrones mientras remite la imagen de plantilla almacenada en la ROM 52 a la posición predeterminada en los datos de imagen almacenados en la RAM 53 (etapa S36). El método de coincidencia de patrones realizado aquí puede ser el método descrito en el dispositivo de determinación A anterior y puede adoptarse como método bien conocido.

Después, la CPU 51 determina si la coincidencia de patrones realizada en la posición predeterminada de los datos de imagen coincide o no con la imagen de plantilla (etapa S37). En este caso, en cuanto a la coincidencia con la imagen de plantilla, no es necesario que coincida completamente con la imagen de plantilla, por lo que también incluye un estado incluido dentro de un cierto intervalo permitido, tal como luminancia, tamaño, forma, etc.

En este caso, cuando se determina que la coincidencia de patrones coincide con la imagen de plantilla (etapa S37: Sí), la CPU 51 se refiere a la bandera de toma para microorganismos muertos y, cuando la bandera de toma para microorganismos muertos está APAGADA, la CPU 51 suma 1 al valor de recuento del número de microorganismos vivos y, cuando la bandera de toma para microorganismos muertos está ENCENDIDA, la CPU 51 suma 1 al valor de recuento del número de microorganismos muertos (etapa S38).

Por otro lado, cuando se determina que la coincidencia de patrones no coincide con la imagen de plantilla (etapa S37: No), la CPU 51 determina si el proceso de coincidencia de patrones de la totalidad de la imagen almacenada en la RAM 53 ha terminado o no (etapa S39). En este caso, cuando se determina que la coincidencia de patrones no ha terminado (etapa S39: No), la CPU 51 desplaza la posición de coincidencia de patrones en los datos de imagen (etapa S40) y devuelve el procedimiento a S36.

Por otro lado, cuando se determina que el proceso de coincidencia de patrones ha terminado (etapa S39: Sí), la CPU 51 determina si la coincidencia de patrones es o no la primera sección de cuadrícula de toma (etapa S41). En este caso, cuando se determina que la coincidencia de patrones no es la primera sección de cuadrícula de toma (etapa S41: No), la CPU 51 devuelve el procedimiento a la etapa S45. Por otro lado, cuando se determina que la coincidencia de patrones es la primera sección de cuadrícula de toma (etapa S41: Sí), la CPU 51 obtiene el valor de recuento del número de microorganismos en la RAM 53 mientras refiere la bandera de toma para 2 microorganismos muertos (etapa S42). Concretamente, la CPU 51 obtiene el valor de recuento del número de microorganismos vivos cuando la bandera de toma para microorganismos muertos está APAGADA y obtiene el valor de recuento del número de microorganismos muertos cuando la bandera de toma para microorganismos muertos está ENCENDIDA.

Después, la CPU 51 determina la cantidad de microorganismos haciendo referencia a la tabla de cantidad de luz almacenada en la ROM 52 (etapa S43) y transmite al controlador de ledes 56 la señal de ajuste de cantidad de luz correspondiente a la tabla. (etapa S44). Y, en ese momento, la CPU 51 produce la señal de ajuste de cantidad de luz que incluye información de que el led 26 que se atenuará o reforzará es cuál del led 26a para microorganismos vivos o el led 26b para microorganismos muertos correspondiente al estado de la bandera de toma para microorganismos muertos. En la presente modificación, la cantidad de microorganismos se determina como "grande" cuando el microorganismo se aproxima dentro de la sección de cuadrícula de toma, por lo que la cantidad de microorganismos es mayor que el número de microorganismos que genera una detección falsa, y la cantidad de microorganismos se determina como "moderada" cuando la cantidad de microorganismos es adecuada, y la cantidad de microorganismos se determina como "pequeña" cuando la cantidad de microorganismos es menor que el número de microorganismos cuya proporción S/N se deteriora. Sin embargo, no es necesario determinar mediante tres etapas, por lo que puede ser bueno, por supuesto, subdividir en más etapas. Y, por ejemplo, cuando se determina como "grande", la CPU 51 transmite la señal de atenuación al controlador de ledes 56 y, cuando se determina como "pequeña", la CPU 51 transmite la señal de refuerzo.

Después, la CPU 51 lleva a cabo el proceso de transmisión de datos para transmitir datos tales como los datos de imagen almacenados en la RAM 53, el valor de recuento de microorganismos vivos, el valor de recuento de microorganismos muertos, etc. al ordenador C a través del conector 59 (etapa S45).

A continuación, la CPU 51 determina si el valor de la bandera de toma para microorganismos muertos está APAGADA o no (etapa S46). En este caso, cuando se determina que el valor de la bandera de toma para microorganismos muertos está APAGADA (etapa S46: Sí), la CPU 51 reescribe el valor de la bandera de toma para microorganismos muertos almacenado en la RAM 53 en ENCENDIDA y transmite la señal de excitación para microorganismos muertos al controlador de ledes 56 (etapa S47) y devuelve el procedimiento a S32. Por otro lado, cuando se determina, en la etapa S46, que la bandera de toma para microorganismos muertos no está APAGADA (etapa S46: No), la CPU 51 determina si la coincidencia de patrones es o no la última sección de cuadrícula de toma (etapa S48). En este caso, cuando se determina que la coincidencia de patrones es la última sección de cuadrícula de toma (etapa S48: Sí), la CPU 51 finaliza el procedimiento y devuelve el procedimiento a la rutina principal si es necesario.

Por otro lado, en la etapa S48, cuando se determina que la coincidencia de patrones no es la última sección de cuadrícula de toma (etapa S48: No), la CPU 51 reescribe el valor de la bandera de toma para microorganismos muertos almacenado en la RAM 53 en APAGADA y transmite la señal de excitación para 2 microorganismos vivos al controlador de ledes 56 (etapa S49). Además, la CPU 51 transmite la señal de accionamiento de motor al controlador de motor 57 y mueve la platina XY 22 a la siguiente sección de cuadrícula de toma (etapa S50) y devuelve el procedimiento a S32.

Por lo tanto, según el dispositivo de determinación A2 de la presente primera modificación que posee la constitución anterior, en la primera sección de cuadrícula de toma, en primer lugar, en caso de que exista una cantidad adecuada de microorganismos, el valor aproximado del número de microorganismos se obtiene mediante la cantidad de luz de excitación del led 26 a partir del cual se puede obtener la fluorescencia apropiada y, cuando el valor obtenido del número de microorganismos es mayor que el valor predeterminado, la cantidad de luz de la luz de excitación se reduce y la cantidad de emisión de fluorescencia se suprime, por lo que el límite de cada hongo se puede hacer claro y se puede realizar una medición precisa del número de microorganismos.

Además, cuando el valor obtenido del número de microorganismos es menor que el valor predeterminado, la cantidad de luz de la luz de excitación aumenta, por lo que la cantidad de emisión de fluorescencia aumenta y se pueden obtener imágenes de la forma del microorganismo con mayor claridad, por lo que se puede realizar una medición precisa del número de microorganismos.

Después, haciendo referencia a las figuras 10 y 11, se describirá un dispositivo de determinación para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto según la segunda modificación (en lo sucesivo en el presente documento, denominado dispositivo de determinación A3).

Similar al dispositivo de determinación A2, aunque el dispositivo de determinación A3 tiene también la característica de que el dispositivo de determinación A3 está constituido para poder contar con mayor precisión el número de microorganismos, el dispositivo de determinación A3 tiene una constitución diferente en un punto en el que la cantidad de luz de la luz de excitación se ajusta especialmente correspondiente al grado de tinción de los microorganismos. Entre los microorganismos que se medirán, existen microorganismos fáciles de teñir y microorganismos difíciles de teñir, en función del tipo de microorganismos. Esto concluye: cuando la cantidad de luz de la luz de excitación (luz led) se hace constante, a pesar de que la cantidad de irradiación de la luz de excitación es la misma, existirán los microorganismos con suficiente emisión de fluorescencia y los microorganismos con insuficiente emisión de fluorescencia. En particular, en cuanto a los microorganismos con insuficiente emisión de fluorescencia, tales microorganismos no serán objeto de la coincidencia de patrones, conducirán a un recuento deficiente, por lo que existirá un caso en el que resulte difícil contar con precisión el número de microorganismos.

Por tanto, en el dispositivo de determinación A3, cuando se toma en el filtro de medición 17a, se lleva a cabo el proceso de coincidencia de patrones de los datos de imagen obtenidos en el primer fotograma (toma de la primera sección de cuadrícula) que se convierte en el estándar, la luminancia se calcula para una pluralidad de puntos de luz reconocidos como microorganismos a través de la coincidencia de patrones, se obtiene un valor promedio de luminancia de los múltiples puntos de luz, la cantidad de emisión de fluorescencia aumenta al aumentar la cantidad de luz de la luz de excitación cuando el valor promedio obtenido de la luminancia es menor que el valor predeterminado, por lo que se pueden obtener imágenes de la forma del microorganismo con mayor claridad y el número de microorganismos puede medirse con mayor precisión.

La constitución concreta del dispositivo de determinación A3 es aproximadamente la misma que la del dispositivo de determinación A y el dispositivo de determinación A2, por lo que la mayoría de las explicaciones confían en la explicación anterior. Describiendo la diferencia de características, en primer lugar, en el área de almacenamiento predeterminada de la ROM 52 proporcionada en la porción de control 29, se almacena una tabla de cantidad de luz en la que se corresponden la luminancia que se muestra en la figura 10 y el proceso del controlador de ledes 56.

Además, en lugar de la etapa S42 ~ etapa S44 en el diagrama de flujo que se muestra en la figura 9, se ejecutarán la etapa S61 ~ etapa S63 mostradas en la figura 11.

Por lo tanto, la porción de control 29 inicia los procesos según el diagrama de flujo que se muestra en las figuras 9 y 11, instruye tomar contra la unidad de obtención de imágenes 58 después de configurar el filtro de paso de banda 30 para bacterias vivas (etapa S31 ~ etapa S33), almacena los datos de imagen recibidos de la unidad de obtención de imágenes 58 en la RAM 53 y convierte los datos de imagen en escala de grises (etapa S34 ~ etapa S35) y lleva a cabo el proceso de coincidencia de patrones sobre todos los datos de imagen y cuenta el número de microorganismos vivos (etapa S36 ~ etapa S40).

Después, cuando la sección de cuadrícula de toma es la primera sección de cuadrícula de toma (etapa S41: Sí), como se muestra en la figura 11, la CPU 51 calcula el valor promedio de la luminancia a partir de la luminancia de una pluralidad de partes en los datos de imagen reconocidos como microorganismos a través del proceso de coincidencia de patrones (etapa 61).

Después, la CPU 51 determina la luminancia haciendo referencia a la tabla de cantidad de luz almacenada en la ROM 52, es decir, la tabla que se muestra en la figura 10 (etapa S62), y transmite la señal de ajuste de cantidad de luz correspondiente a la tabla al controlador de ledes 56 (etapa S63). Por ejemplo, cuando se determina que se detectan muchos microorganismos comparativamente difíciles de teñir, se determina como baja luminancia, por lo que conduce a que la señal de refuerzo se transmita al controlador de ledes 56. En la presente modificación, en cuanto a la determinación de la luminancia, se determina como "baja luminancia" cuando el valor promedio de luminancia del punto de luz determinado como el hongo en la sección de cuadrícula de toma es menor que la luminancia en la medida en que aumenta el temor a la fuga de detección. Cuando el valor promedio es la luminancia apropiada, se determina como "luminancia media" y, cuando el valor promedio es una luminancia alta en la medida en que aumenta el temor a desviarse del patrón de coincidencia, se determina como "alta luminancia". Sin embargo, no es necesario determinar mediante tres etapas y puede ser, por supuesto, bueno subdividir en etapas.

Además, una vez realizado el proceso de transmisión de datos al ordenador (etapa S45), el proceso similar descrito anteriormente se lleva a cabo nuevamente para los datos de imagen obtenidos a través de la toma de los microorganismos muertos (etapa S46: Sí) y el número de microorganismos se calcula mediante el proceso de coincidencia de patrones mientras se toma con la luminancia ajustada para la sección de cuadrícula de toma posterior a la segunda sección de cuadrícula de toma.

Como se ha mencionado, según el dispositivo de determinación A3, la luminancia se mide para una pluralidad de puntos de luz en la imagen reconocidos como microorganismos a través de la coincidencia de patrones en el primer fotograma que se convierte en el estándar y se obtiene el valor promedio de luminancia, la cantidad de emisión de fluorescencia aumenta al aumentar la cantidad de luz de la luz de excitación cuando el valor promedio obtenido de la luminancia es menor que el valor predeterminado, por lo que se pueden obtener imágenes de la forma del microorganismo 2 con mayor claridad y el número de microorganismos puede medirse con mayor precisión.

Después, haciendo referencia a las figuras 12 y 13, se describirá un dispositivo de determinación para determinar un estado de microorganismo vivo/muerto según la tercera modificación (en lo sucesivo en el presente documento, denominado dispositivo de determinación A4).

Similar a los dispositivos de determinación A2 y A3, aunque el dispositivo de determinación A4 tiene también la característica de que el dispositivo de determinación A4 está constituido para poder contar con mayor precisión el número de microorganismos, el dispositivo de determinación A4 tiene una constitución diferente en un punto en el que se lleva a cabo un proceso para que se pueda realizar un recuento lo más preciso posible del número de microorganismos en el caso de que existan muchos hongos en la sección de cuadrícula de toma y la mayoría de estos microorganismos sean microorganismos difíciles de teñir con fluorescencia.

Dicho de otro modo, el dispositivo de determinación A4 es un dispositivo de determinación que posee el punto característico del dispositivo de determinación A2 y A3 y, cuando se detectan muchos microorganismos difíciles de teñir, el dispositivo de determinación A4 se atreve a reducir la cantidad de luz de excitación y realiza una pluralidad de tomas para cada uno de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos con respecto a una sección de cuadrícula de toma, por lo que el dispositivo de determinación A4 resuelve dos problemas, uno de los cuales es un problema relativo a la detección separada de dos microorganismos adyacentes entre sí y el otro es un problema relativo a la proporción S/N.

Concretamente, en primer lugar, en el área de almacenamiento predeterminada de la ROM 52 proporcionada en la porción de control 29, se almacena una tabla de cantidad de luz en la que, como se muestra en la figura 12, la luminancia y el número del hongo, procesados al controlador de ledes 56, se corresponden mutuamente.

Además, en lugar de la etapa S42 ~ etapa S44 en el diagrama de flujo que se muestra en la figura 9, se ejecutan la etapa S71 ~ etapa S74 mostradas en la figura 13.

Además, en la dirección predeterminada de la RAM 53, se asigna una bandera de toma múltiple que indica si se van a realizar tomas múltiples o no. Esta bandera de toma múltiple toma dos valores de ENCENDIDA o APAGADA y un valor inicial de estos se establece en APAGADA.

Por lo tanto, cuando la porción de control 29 del dispositivo de determinación A4 inicia los procesos según el diagrama de flujo que se muestra en las figuras 9 y 13, la porción de control 29 establece la bandera de toma para microorganismos muertos y la bandera de toma múltiple APAGADA (etapa S31) y, después de configurar el filtro de paso de banda 30 para tomar los microorganismos vivos, la porción de control 29 transmite la señal de comando de toma que incluye el estado de la bandera de toma múltiple a la unidad de obtención de imágenes 58 e instruye tomar (etapa S32 ~ etapa S33), almacena los datos de imagen recibidos de la unidad de obtención de imágenes 58 en la RAM 53 y convierte los datos de imagen en escala de grises (etapa S34 ~ etapa S35) y lleva a cabo el proceso de coincidencia de patrones sobre todos los datos de imagen y cuenta el número de microorganismos vivos (etapa S36 ~ etapa S40).

Después, cuando la sección de cuadrícula de toma es la primera sección de cuadrícula de toma (etapa S41: Sí), como se muestra en la figura 13, la CPU 51 obtiene el valor de recuento del número de microorganismos en la RAM 53 después de referir la bandera de toma para microorganismos muertos (etapa S71). En este caso, ya que la bandera de toma para microorganismos muertos está APAGADA, se obtiene el valor de recuento de microorganismos vivos. Después, la CPU 51 calcula el valor promedio de luminancia a partir de la luminancia de una pluralidad de partes en los datos de imagen reconocidos como microorganismos mediante el proceso de coincidencia de patrones (etapa S72).

Después, la CPU 51 determina el número de microorganismos y la luminancia haciendo referencia a la tabla de cantidad de luz almacenada en la ROM 52, es decir, la tabla que se muestra en la figura 12 (etapa S73), y transmite la señal de ajuste de cantidad de luz correspondiente a la tabla al controlador de ledes 56 (etapa S74). Por ejemplo, cuando el número detectado de los microorganismos es muchos y la luminancia temor de estos microorganismos es una luminancia de la medida en que aumenta el miedo a la fuga de detección, se determina como "baja luminancia" y "muchos hongos" y se transmite la señal de atenuación al controlador de ledes 56 y se enciende la bandera de toma múltiple. Puede ser, por supuesto, bueno subdividir la determinación de luminancia y el número de los microorganismos en la presente modificación, como se describe en el dispositivo de determinación A2 y el dispositivo de determinación A3 anteriores.

Además, una vez finalizado el proceso de transmisión de datos al ordenador (etapa S45), el proceso similar al proceso anterior se lleva a cabo de nuevo para los datos de imagen obtenidos mediante la toma de los microorganismos muertos (etapa S46: Sí). Después de que el proceso de recuento, etc. de los microorganismos muertos en la primera sección de cuadrícula de toma haya terminado, se inician los procesos para las secciones de cuadrícula de toma posteriores a la segunda sección de cuadrícula de toma (etapa S48: No ~ etapa S50^etapa S32).

En este caso, cuando se realice la toma para la sección de cuadrícula de toma posterior a la segunda sección de cuadrícula de toma, la CPU 51 transmite la señal de comando de toma que incluye información del valor de la bandera de toma múltiple, es decir, la bandera de toma múltiple = ENCENDIDA a la unidad de obtención de imágenes 58 e instruye tomar.

La unidad de obtención de imágenes 58 que recibe la información de la bandera de toma múltiple = ENCENDIDA realiza la toma de hojas múltiples predeterminadas (por ejemplo, 2 ~ 10 hojas) en la misma posición y transmite estos datos de imagen a la porción de control 29.

En la porción de control 29 que recibe los datos de imagen de múltiples hojas, la CPU 51 convierte cada dato de imagen a la escala de grises, a continuación de lo cual la CPU 51 produce datos de imagen promediados de luminancia en los que la luminancia en la posición predeterminada en la totalidad del intervalo de toma se hace como la luminancia promedio entre los datos de imagen (etapa S35).

Además, el proceso de coincidencia de patrones se realiza contra los datos de imagen promediados de luminancia obtenidos, llevándose a cabo de ese modo el recuento del número de hongos.

Como se ha mencionado, según el dispositivo de determinación A4, se mide la luminancia para una pluralidad de puntos de luz reconocidos como microorganismos a través de la coincidencia de patrones en el primer fotograma que se convierte en el estándar y se obtiene el valor promedio de la luminancia y el valor aproximado del número de microorganismos, la cantidad de luz de la luz de excitación se ajusta cuando se realiza la toma para la sección de cuadrícula de toma posterior a la segunda sección de cuadrícula de toma correspondiente a la luminancia obtenida y al número de microorganismos.

En particular, cuando el valor promedio obtenido de la luminancia es menor que el valor predeterminado y el número de microorganismos detectados es muchos, la cantidad de luz de la luz de excitación se reduce y el proceso de coincidencia de patrones se realiza en la sección de cuadrícula de toma posterior a la segunda sección de cuadrícula de toma en función de los datos de imagen promediados de luminancia obtenidos al tomar múltiples hojas. De ese modo, el contorno de los microorganismos se puede hacer más claro al reducir la cantidad de luz y el ruido aleatorio, etc. que interfieren en la coincidencia de patrones se pueden diluir produciendo los datos de imagen promediados de luminancia, por lo que el número de microorganismos se puede medir con mayor precisión.

El dispositivo de determinación de la presente invención se define en su sentido más amplio en las reivindicaciones adjuntas. Por lo tanto, no es necesario contar los microorganismos vivos y los microorganismos muertos uno por uno mientras el usuario lleva a cabo el espéculo a simple vista y tiene un contador en una mano. A pesar de la operación comparativamente fácil, el estado del microorganismo se puede captar con precisión en comparación con la operación convencional. Además, el estado de los microorganismos vivos y los microorganismos muertos se puede realizar con precisión a través de las imágenes tomadas en lo anterior.

Claims (6)

REIVINDICACIONES

1. Un dispositivo de determinación para determinar un estado vivo/muerto de microorganismos (46) que comprende: un cuerpo de carcasa (10) cuyo interior es un espacio de cuarto oscuro;

un mecanismo de medición (11) alojado en el cuerpo de carcasa y configurado para determinar si los microorganismos recogidos a partir de una muestra están vivos o muertos y para contar el número de microorganismos;

en donde el mecanismo de medición comprende:

un mecanismo de sujeción de base con microbios (15) configurado para insertar y fijar la base con microbios (17) sobre la que se colocan los microorganismos recogidos a partir de la muestra;

un mecanismo de irradiación de luz de excitación (25) dispuesto por encima del mecanismo de sujeción de base con microbios (15) y configurado para ser capaz de irradiar intensamente hacia los microorganismos sobre la base con microbios (17);

una cámara de obtención de imágenes (27) dispuesta por encima de los microorganismos sobre la base con microbios (17) a través de un marco de fijación (16); y

un mecanismo de ajuste de ejes XY (40) para mover y ajustar minuciosamente, en una dirección de los ejes XY, una platina XY (22) que está constituida por dos capas que se mueven por separado y soporta el mecanismo de sujeción de base con microbios (15), caracterizado por que

el dispositivo de determinación comprende, además, un cuerpo de tapa de apertura/cierre (12) que abre o cierra un puerto de inserción (13) que está formado en una cara frontal del cuerpo de carcasa y a través del cual se inserta la base con microbios (17);

el mecanismo de irradiación de luz de excitación (25) está constituido por 6 ledes de luz de excitación (26), que están separados respectivamente en un led (26a) para microorganismos vivos o un led (26b) para microorganismos muertos y dispuestos de manera alterna en forma circular para dividirse en tres ledes (26a) para microorganismos vivos y tres ledes (26b) para microorganismos muertos; y

el mecanismo de ajuste de ejes XY (40) está constituido de manera que cada árbol de salida de un motor de eje X (41) y un motor de eje Y (42) está enclavado y concatenado respectivamente a la platina XY (22) con dos capas, se establece una posición de origen para la platina XY (22) de antemano y, cuando la platina XY de dos capas (22) se ajusta finamente y se mueve en la dirección de los ejes XY, la información de distancia de movimiento centrada en el origen se transmite a una porción de control de cada motor de eje X (41), motor de eje Y (42) y se lleva a cabo la corrección del origen, a partir de lo cual se mueve la platina XY (22).

2. El dispositivo de determinación según la reivindicación 1, que comprende, además, un filtro de medición (17a) a través del cual se filtran y se recogen los microorganismos recogidos a partir de la muestra y el cual se coloca en una pieza de base con microbios; y en donde la cámara de obtención de imágenes (27) comprende, además un sistema óptico para agrandar los microorganismos en el filtro de medición (17a) en la medida en que los microorganismos pueden determinarse individualmente y la cámara de obtención de imágenes (27) toma imágenes respectivamente de los microorganismos adheridos al filtro de medición (17a);

estando la cámara de obtención de imágenes (27) configurada para transmitir una señal receptora de luz a una porción de control (29) dispuesta en una parte trasera del mecanismo de medición (11) y para distinguir virtualmente un área con un diámetro de 1 cm en el filtro de medición (17a) en 24 fotogramas y para obtener imágenes de cada sección respectivamente distinguida moviendo el filtro de medición (17a) en la dirección de los ejes XY por la platina XY (22);

en donde la porción de control (29) está configurada para emitir una señal para mover la platina XY (22) de modo que el filtro de medición (17a) en la platina XY (22) se ajuste y coloque en la otra sección de cuadrícula virtual que es la siguiente punto de obtención de imágenes.

3. El dispositivo de determinación según la reivindicación 1 o 2, que comprende, además:

un mecanismo de cambio de filtro (32) para cambiar una pluralidad de filtros de paso de banda (30) está dispuesto detrás de un marco de fijación (16); estando dichos filtros de paso de banda (30) dispuestos entre la base con microbios y la cámara de obtención de imágenes.

4. El dispositivo de determinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,

en donde el mecanismo de sujeción de base con microbios está constituido por:

unos rieles izquierdo y derecho (18L, 18R) que agarran los bordes laterales izquierdo y derecho de la base con microbios desde el lado exterior de ambos bordes laterales;

un mecanismo de desplazamiento de rieles (19) para liberar la base con microbios agarrada por los rieles izquierdo y derecho, a través del desplazamiento de uno de los rieles izquierdo y derecho hacia el exterior; y

una palanca de operación (20) dispuesta fuera de uno de los rieles izquierdo y derecho para operar el mecanismo de desplazamiento de rieles desde el puerto de inserción y configurada para ser capaz de operar giratoriamente alrededor de una porción de soporte (20a) situada a medio camino de la palanca de operación;

en donde el mecanismo de desplazamiento de rieles está constituido por:

un árbol deslizante (21) proyectado horizontalmente hacia uno de los rieles izquierdo y derecho;

una proyección de contacto de palanca de operación (21 a) formada en una porción de cabeza del árbol deslizante; una porción de soporte de operación (23) que soporta, en la pletina XY, una porción a medio camino de la palanca de operación, cuya porción superior está en contacto con la proyección de contacto de palanca de operación; y un resorte de compresión (24) provisto entre una superficie lateral exterior de uno de los rieles izquierdo y derecho y la porción superior de la palanca de operación.

5. El dispositivo de determinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4,

en donde la cámara de obtención de imágenes está configurada para distinguir los microorganismos en el filtro de medición en un número predeterminado de secciones de cuadrícula y procesar una imagen, mediante un ordenador conectado por separado, utilizando luz captada por un sensor de imagen CMOS (28) con cada sección de cuadrícula.

6. Un método para determinar un estado vivo/muerto de microorganismos utilizando el dispositivo de determinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5,

comprendiendo el método un proceso para filtrar y recoger los microorganismos en el filtro de medición, comprendiendo tal proceso las etapas de:

una etapa 1 para dejar caer una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo;

una etapa 2 para dejar caer reactivo especial en el tubo de ensayo y para sellar y agitar y, luego, dejar reposar el tubo de ensayo;

una etapa 3 para alojar y configurar el filtro de medición en un alojamiento de filtro provisto por separado; una etapa 4 para conectar el alojamiento de filtro en el que se aloja el filtro de medición a una porción superior de una jeringa provista por separado y formar un estado de comunicación entre el lado interior del alojamiento de filtro y el lado interior de la jeringa;

una etapa 5 para introducir la muestra en el tubo de ensayo en el lado interior de la jeringa;

una etapa 6 para introducir, presurizando el lado interior de la jeringa, los microorganismos junto con la muestra hacia el filtro de medición en el alojamiento de filtro desde la porción superior de la jeringa, filtrando y recogiendo de ese modo solo los microorganismos teñidos en una superficie del filtro de medición;

una etapa 7 para sacar el filtro de medición del alojamiento de filtro y colocar el filtro de medición sobre la base con microbios, disponiendo así los microorganismos filtrados y recogidos en la superficie del filtro de medición, sobre la base con microbios a través del filtro de medición; y

una etapa 8 para insertar la base con microbios en el mecanismo de sujeción de base con microbios provisto en el dispositivo de determinación para determinar un estado vivo/muerto de los microorganismos, captar un estado de los microorganismos como imágenes utilizando el mecanismo de irradiación de luz de excitación y la cámara de obtención de imágenes provistos en el dispositivo de determinación, determinar el estado vivo/muerto de los microorganismos y contar el número de microorganismos.