ES2929708T3

ES2929708T3 - Nuevo uso del derivado de sesquiterpeno

Info

Publication number: ES2929708T3
Application number: ES16908245T
Authority: ES
Inventors: Sangtaek Oh
Original assignee: Kookmin University
Current assignee: Kookmin University
Priority date: 2016-07-07
Filing date: 2016-10-14
Publication date: 2022-12-01
Anticipated expiration: 2036-10-14
Also published as: EP3482750A4; CN109414416B; US20200078338A1; AU2016413709B2; KR101674622B1; US10918625B2; EP3482750B1; JP2019524686A; EP3482750A1; AU2016413709A1; JP6667681B2; US20190290617A1; WO2018008803A1; CN109414416A

Abstract

La presente invención se refiere a un nuevo uso de un derivado de sesquiterpeno y, más específicamente, a una composición para prevenir, aliviar o tratar la degeneración macular o el edema macular causado por una fuga vascular en un globo ocular, la composición que comprende un compuesto derivado de sesquiterpeno representado por fórmula química 1 de la presente invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como ingrediente activo. Los agentes de tratamiento relacionados con enfermedades intraoculares en el mercado causan inconvenientes porque los agentes de tratamiento deben inyectarse directamente por vía intravítrea y, por lo tanto, se producen dolor y efectos secundarios. Por el contrario, el compuesto derivado de sesquiterpeno de la presente invención se distribuye al tejido diana (un ojo) a través de vías de administración (administración oral, inyección intraperitoneal y similares) distintas de la inyección intravítrea. En consecuencia, el compuesto derivado de sesquiterpeno tiene eficacia terapéutica sin estar restringido por las vías de administración, produciendo excelentes efectos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Nuevo uso del derivado de sesquiterpeno

Campo técnico

La presente descripción se refiere a un uso novedoso de un derivado de sesquiterpeno, más particularmente a una composición para prevenir, mejorar o tratar la degeneración macular o el edema macular provocado por una fuga vascular en el ojo, la composición que contiene un compuesto derivado de sesquiterpeno seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi -5-metoxvcvelohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

Antecedentes de la técnica

El edema macular se refiere a la inflamación de la mácula lútea. El edema es causado por la fuga de fluido del vaso sanguíneo de la retina. La sangre se filtra de las paredes débiles de los vasos sanguíneos y fluye hacia la mácula lútea repleta de conos de la retina que detectan el color y son responsables de la visión durante el día. Luego, las imágenes se desenfocan en el centro o en el lado derecho de la región central. La visión empeora gradualmente durante varios meses. Toda la degeneración macular relacionada con la edad (AMD) se asocia con el edema macular. Las fugas vasculares en el ojo se producen por diversas causas. Por ejemplo, el aumento continuo de la presión arterial en los pacientes hipertensos provoca la ruptura de la barrera hematorretiniana y el daño a la barrera hematorretiniana provoca edema retiniano debido a la fuga vascular. La mácula lútea a menudo se daña por la mácula tumentia después de eliminar el cristalino para el tratamiento de la catarata.

Para el tratamiento del edema macular se han empleado la fotocoagulación con láser, la vitrectomía o los esteroides sistémicos, intravítreos o subtenoniano, etc. La fotocoagulación con láser alivia la mácula tumentia al bloquear los vasos sanguíneos donde se producen la fuga de fluido. Sin embargo, se debe tener cuidado de evitar la fóvea cuando se irradia con láser porque es extremadamente vulnerable. Si la fóvea se daña durante la operación, la visión central puede verse afectada. Además, a menudo se necesitan más de un tratamiento con láser para eliminar la inflamación. La vitrectomía se emplea cuando el tratamiento con láser es inefectivo, pero este método se asocia a menudo con el alto riesgo de invasión tisular que provoca complicaciones postoperatorias. La administración intravítrea de esteroides puede causar hipertensión ocular, glaucoma inducido por esteroides y catarata subcapsular posterior. Además, la administración intravítrea de esteroides suele provocar complicaciones postoperatorias.

Además, se sabe que otros fármacos administrados directamente en la cavidad vítrea requieren administraciones repetidas con intervalos de 4 a 6 semanas. La administración directamente en la cavidad vítrea también provoca molestias de administración, dolor y efectos secundarios.

Los inventores de la presente descripción han investigado para desarrollar un medicamento que muestre un excelente efecto terapéutico para el edema macular o la degeneración macular relacionada con el mismo, el cual reduce las molestias de la administración y puede administrarse durante mucho tiempo. Al hacerlo, han identificado que un compuesto representado por la Fórmula Química 1 muestra efectos terapéuticos en un edema macular o en un modelo animal con degeneración macular al prevenir efectivamente la fuga vascular en el ojo y que el compuesto se dirige al ojo incluso cuando se administra por vía oral.

Referencias de técnica relacionada

[Documentos no patentados]

(Documento no patentado 1) Joo-Hyun Kim y otros, "Wnt5a attenuates the pathogenic effects of the Wnt/pcatenin pathway in human retinal pigment epithelial cells via down-regulating p-catenin and Snail", BMB Rep.

2015; 48(9): 525-530.

(Documento no patentado 2) Bokjun Ji y otros, "Increased Levels of Dickkopf 3 in the Aqueous Humor of Patients With Diabetic Macular Edema", Invest Ophthalmol Vis Sci. Abril 2016; 57; 2296-2304.

(Documento no patentado 3) Seoyoung Park y otros "Illimaquinone and Ethylsmenoquinone, Marine Sponge Metabolites, Suppress the Proliferation of Multiple Myeloma Cells by Down-Regulating the Level of [beta]-Catenin", Marine Drugs, Mayo 2014; 12; 3231-3244, describen que la ilimaquinona y la etilsmenoquinona, sesquiterpeno-nuinonas procedentes de una esponja marina, inhibieron la transcripción de la respuesta a la pcatenina inducida con el medio condicionado a Wnt3a, por la regulación negativa del nivel de p-catenina intracelular.

(Documento no patentado 4) En Hyung Hwang y otros, "Cytotoxic Activity of Rearranged Drimane Meroterpenoids against Colon Cancer Cells via Down-Regulation of [beta]-Catenin Expression. Journal of Natural Products, Marzo 2015; 78; 453-461 informan de la actividad citotóxica de los meroterpenoides drimanos reordenados contra las células de cáncer de colon a través de la regulación negativa de la expresión de pcatenina.

(Documento no patentado 5) Joo-Hyun Kim y otros, "Wnt5a attenuates the pathogenic effect of the Wnt/[beta]-catenin pathway in human retinal pigment epithelial cells via down-regulating [beta]-catenin and Snail". BMB reports, Septiembre 2015; 48; 525-530 describen que la activación de la vía Wnt/ p-catenina desempeña un papel patogénico en la degeneración macular relacionada con la edad (AMD).

(Documento no patentado 6) Chen Ying y otros, "Activation of the Wnt Pathway Plays a Pathogenic Role in Diabetic Retinopathy in Humans and Animal Models", American Journal of Pathology, Diciembre 2009; 175; 2676-2685 describen que los niveles de retina y la translocación nuclear de p-catenina se aumentan en humanos con retinopatía diabética y en tres modelos de retinopatía diabética.

(Documento no patentado 7) Guo Xiaoling y otros, "Matrigel and Activin A promote cell-cell contact and antiapoptotic activity in cultured human retinal pigment epithelium cells". Experimental Eye Research, Abril 2016; 147; 37-49, describen que el tratamiento con Matrigel y Activin A elevó los niveles de expresión proteica de pcatenina y sus proteínas diana.

[Documentos Patentados]

(Documento patentado 1) US 2009/074795 presenta métodos novedosos para abordar las etapas de enfermedad ocular caracterizados por angiogénesis o neovascularización por la inhibición de la vía de la señal wnt.

Resumen

La invención se expone en el conjunto de reivindicaciones adjuntas.

La presente descripción se dirige para proporcionar una composición farmacéutica para prevenir o tratar la degeneración macular o el edema macular causado por la fuga vascular en el ojo.

La presente descripción también se dirige para proporcionar una composición alimentaria para prevenir o mejorar la degeneración macular o el edema macular causado por la fuga vascular en el ojo.

Los objetos anteriores de la presente descripción se pueden lograr mediante la presente descripción como se describió más abajo.

La presente descripción proporciona una composición farmacéutica para el uso en un método para prevenir o tratar la degeneración macular o el edema macular, la cual contiene un compuesto seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

La presente descripción también proporciona una composición farmacéutica para el uso en un método para inhibir la fuga vascular en el ojo, la cual contiene el compuesto seleccionado de 3[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

La presente descripción también proporciona una composición alimentaria para el uso en un método para prevenir o mejorar la degeneración macular o el edema macular, la cual contiene el compuesto seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1 muestra un resultado de la investigación del efecto inhibidor de un compuesto de la presente descripción (Ejemplo de preparación 30 o Ejemplo de preparación 31) sobre la expresión de p-catenina en células HEK293, en las cuales la vía de Wnt/p-catenina se activa mediante el tratamiento con Wnt-3a CM, por transferencia western.

Figura 2 muestra un resultado de la investigación del efecto inhibidor de un compuesto de la presente descripción (Ejemplo de preparación 32) sobre la expresión de p-catenina en células HEK293, en las cuales la vía de Wnt/p-catenina se activa mediante el tratamiento con Wnt-3a CM, por transferencia western.

Figura 3 muestra un resultado de la investigación del efecto inhibidor de un compuesto de la presente descripción (Ejemplo de preparación 33 o Ejemplo de preparación 34) sobre la expresión de p-catenina en células epiteliales de la retina humana, en las cuales la vía de Wnt/p-catenina se activa mediante el tratamiento con Wnt-3a CM, por transferencia western.

Figura 4 muestra un resultado de la investigación del efecto inhibidor de la administración intravítrea de un compuesto de la presente descripción (Ejemplo de preparación 33) sobre la fuga vascular en un modelo de ratón con edema macular mediante angiografía con fluoresceína y tomografía de coherencia óptica (A y B son imágenes para un grupo control (compuesto no tratado) obtenidas después de la inyección de D^mS^oy C y D son imágenes para un grupo experimental (Ejemplo de preparación 33) obtenido después de la inyección. Las flechas indican los vasos sanguíneos).

Figura 5 muestra un resultado de la investigación del efecto inhibidor de la inyección intraperitoneal de un compuesto de la presente descripción (Ejemplo de preparación 33) sobre la fuga vascular en un modelo de ratón con edema macular mediante tomografía de coherencia óptica (A: grupo al que se le administró vehículo, B: grupo al que le administró 1 mg/kg del compuesto Ejemplo de preparación 33).

Figura 6 muestra un resultado de la administración oral de un compuesto de la presente descripción (Ejemplo de preparación 33) a un ratón ICR y la medición de la distribución del compuesto en los tejidos diana (particularmente, el ojo).

Mejor modo

Los inventores de la presente descripción han investigado para desarrollar un medicamento que muestre un excelente efecto terapéutico para el edema macular o la degeneración macular relacionada con el mismo, el cual reduce las molestias de la administración y puede administrarse durante mucho tiempo. Al hacerlo, han identificado que un compuesto representado por la Fórmula Química 1 muestra un efecto terapéutico para el edema macular o las enfermedades de degeneración macular al prevenir efectivamente la fuga vascular en el ojo, particularmente en la retina.

En consecuencia, en un aspecto, la presente descripción se relaciona con una composición farmacéutica para el uso en un método para prevenir o tratar la degeneración macular o el edema macular, el cual contiene un compuesto representado por la Fórmula Química 1 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo, en donde el compuesto de Fórmula Química 1 es un compuesto seleccionado de 3[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4atrimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona.

en donde

la línea discontinua indica un enlace simple o un enlace doble, en donde

i) si el enlace entre C-3 y C-4 y el enlace entre C-5 y C-6 son enlaces simples, R2b es inexistente y R2a es CH2;

ii) si el enlace entre C-3 y C-4 es un enlace doble, el enlace entre C-5 y C-6 es un enlace simple, R2b es inexistente y R2a es CH3; o

iii) si el enlace entre C-5 y C-6 es un enlace doble, el enlace entre C-3 y C-4 es un enlace simple y R2a y R2b son CH3,

R1 es H o CH3,

R3 es un grupo funcional seleccionado de un grupo que consiste de R3a mediante R3d,

en R3a,

i) cada uno de R4 y R7 es OH u OCH3 y R5, R6 y R8 son H; o

ii) R5 es COOCH3, R7 es H u OH, R8 es ^oH y R4 y R6 son H,

en R3b,

R9 es un grupo funcional seleccionado de un grupo que consiste de H, NH2, Ci-C8 alcoxi y R9a de R9j y Río es H u OH,

en Rao,

cada uno de Rn y Rⁱ2 es OH u OAo y Ria es H; o

cada uno de R11 y R12 es OH u OCH3 y R13 es CH3 y

en R3d,

R14 es OCH3 y R15 y R16 son CH3.

En la presente descripción, el término grupo alcoxi se refiere a un grupo alquilo unido al oxígeno (grupo O-alquilo). En la presente descripción, el grupo alcoxi puede ser un C1-C8 grupo alcoxi seleccionado de un grupo que consiste de un grupo metoxi (C1), un grupo etoxi (C2), un grupo propoxi (C3), un grupo butoxi (C4), un grupo pentiloxi (C5), un grupo hexiloxi (C6), un grupo heptiloxi (C7) y un grupo octiloxi (C8), aunque sin limitarse a ellos. Específicamente, el grupo alcoxi de la presente descripción puede ser un grupo metoxi o un grupo etoxi.

En la Fórmula Química 1,

i) la estructura en donde, si el enlace entre C-3 y C-4 y el enlace entre C-5 y C-6 son enlaces sencillos, R2b es inexistente y R2a es CH2 puede ser representado por<Fórmula Química 1-1>;

ii) la estructura en donde, si el enlace entre C-3 y C-4 es un enlace doble, el enlace entre C-5 y C-6 es un enlace simple, R2b es inexistente y R2a es CH3 puede ser representado por <Fórmula Química 1-2>; y

iii) la estructura en donde, si el enlace entre C-5 y C-6 es un enlace doble, el enlace entre C-3 y C-4 es un enlace simple y R2a y R2b son CH3 puede ser representado por <Fórmula Química 1-3>.

Fórmula Química 1-1

Específicamente, el compuesto de la presente descripción es el compuesto de acuerdo con la Fórmula Química 34 o la Fórmula Química 35 como se describió en la [Tabla 1 ]

Tabla 1

El compuesto de Fórmula Química 1 de la presente descripción es un compuesto seleccionado de un grupo que consiste de:

3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona;

3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona;

El compuesto de Fórmula Química 1 de la presente descripción se puede extraer de una esponja. Específicamente, el compuesto de Fórmula Química 1 para prevenir o tratar la degeneración macular o el edema macular causado por la fuga vascular en el ojo se puede obtener mediante un método que incluye una etapa de extracción de una o más esponjas seleccionadas de un grupo que consiste de Rhopaloeides sp., Spongia sp., Smenospongia sp., Hippospongia sp., Dactylospongia sp., Verongula sp., Dysidea sp., esponja SS-1047, esponja SS-265 y esponja SS-1208 agregando una C1-C6 solvente orgánico.

La C1-C6 el solvente orgánico se puede seleccionar de un grupo que consiste de un C1-C6 alcohol (metanol, etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol), acetona, un éter, benceno, cloroformo, acetato de etilo, cloruro de metileno, hexano, ciclohexano, acetonitrilo, diclorometano y éter de petróleo.

Específicamente, el compuesto de la presente descripción de Fórmula Química 1 se puede obtener mediante un método que incluye: una etapa de extracción de esponja mediante la adición de agua, un C1-C4 alcohol o una mezcla de su solvente, de esta manera se prepara un extracto de esponja; y una etapa de fraccionamiento del extracto agregando un segundo solvente y separando el mismo mediante cromatografía.

Como cromatografía, puede usarse cualquiera conocida por los expertos en la técnica sin limitación, incluyendo la cromatografía en columna de gel de sílice, la cromatografía en columna LH-20, la cromatografía de intercambio iónico, la cromatografía líquida de presión media, la cromatografía en capa fina (TLC), la cromatografía líquida al vacío de gel de sílice, la cromatografía líquida de alta resolución, etc.

El alcohol C1-C4 que se usa para preparar el extracto de esponja se puede seleccionar de un grupo que consiste de metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol e isobutanol.

Como segundo solvente para fraccionar el extracto de esponja, puede usarse un alcohol C1-C4, n-hexano, cloruro de metileno, acetona, cloroformo, diclorometano, acetato de etilo, acetonitrilo o su mezcla.

El compuesto de la presente descripción de Fórmula Química 1 incluye su sal farmacéuticamente aceptable. En la presente descripción, el término "farmacéuticamente aceptable" significa ser fisiológicamente aceptable y no causar reacciones alérgicas tales como problemas gastroentéricos, mareos, etc. o de manera similar cuando se administra a seres humanos.

La sal farmacéuticamente aceptable incluye una sal de adición de ácido con un ácido inorgánico o un ácido orgánico. Como sal de adición de ácido, se usa una sal de adición de ácido formada por un ácido libre farmacéuticamente aceptable. Como ácido libre, puede usarse un ácido inorgánico o un ácido orgánico. Como ácido inorgánico, pueden usarse ácido clorhídrico, ácido brómico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, etc. Y, como ácido orgánico, puede usarse ácido cítrico, ácido acético, ácido láctico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido oxálico, ácido trifluoroacético, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido maleico, ácido benzoico, ácido glucónico, ácido glicólico ácido, ácido succínico, ácido 4-morfolinoetanosulfónico, ácido alcanforsulfónico, ácido 4-nitrobencenosulfónico, ácido hidroxi-O-sulfónico, ácido 4-toluenosulfónico, ácido galacturónico, ácido embónico, ácido glutámico, ácido aspártico, etc.

En un ejemplo de la presente descripción, se descubrió que el compuesto de la presente descripción de Fórmula Química 1 inhibe la p-catenina in vitro, lo que sugiere que puede inhibir la fuga vascular mediante la inhibición del mecanismo Wnt/p-catenina. En otro ejemplo de la presente descripción, se confirmó que el compuesto de la presente descripción muestra un efecto terapéutico al inhibir la fuga vascular en un modelo animal de edema macular in vivo. Además, se confirmó que muestra un efecto terapéutico independientemente de las vías de administración, ya que el compuesto se distribuyó en el tejido diana (ojo) incluso cuando se administró mediante otras vías de administración (administración oral, inyección intraperitoneal, etc.) en lugar de hacerlo directamente en la cavidad vítrea.

En consecuencia, en otro aspecto, la presente descripción se refiere a una composición farmacéutica para inhibir la fuga vascular en el ojo, la cual contiene el compuesto seleccionado de 3[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftaleno-il]metil)-2-hidroxv-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalina-]-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5- dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo. En la presente descripción, el término "fugas vasculares" se refiere a la fuga de fluido corporal o plasma sanguíneo debido a un daño en la integridad de los vasos sanguíneos. Las fugas vasculares en el ojo constituyen las principales condiciones patológicas de diversas enfermedades oculares. En la presente descripción, el término "fuga vascular en el ojo" se refiere a la fuga vascular en diversos tejidos (coroides, retina, etc.) que constituyen el ojo. Específicamente, se puede referir a la fuga vascular en la retina, aunque no se limita a ello.

La composición farmacéutica de la presente descripción tiene un efecto preventivo o terapéutico para una enfermedad causada por la fuga vascular en el ojo. La enfermedad provocada por la fuga vascular en el ojo puede ser cualquiera conocida en la técnica. Por ejemplo, incluye degeneración de la retina, la degeneración macular, el edema de la retina y el edema macular. Específicamente, en la presente descripción, la enfermedad causada por la fuga vascular en el ojo puede ser la degeneración macular o el edema macular.

La composición farmacéutica de acuerdo con la presente descripción puede contener únicamente el compuesto derivado de sesquiterpeno seleccionado de 3-[[lR,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno- 1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables o puede contener además uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Como vehículo farmacéuticamente aceptable, puede contener, además, por ejemplo, un vehículo para administración oral o un vehículo para administración parenteral. El vehículo para administración oral puede incluir lactosa, almidón, derivados de celulosa, estearato de magnesio, ácido esteárico, etc. Y, el vehículo para la administración parenteral puede incluir agua, aceites adecuados, solución salina fisiológica, glucosa soluble en agua, glicol, etc. La composición farmacéutica de la presente descripción puede contener además un estabilizador y un conservante. Un estabilizador adecuado incluye bisulfito de sodio, sulfito de sodio o un antioxidante como el ácido ascórbico. Un conservante adecuado incluye cloruro de benzalconio, metil- o propilparabeno y clorobutanol. Además de estos ingredientes, la composición farmacéutica de la presente descripción puede contener además un lubricante, un humectante, un edulcorante, un saborizante, un emulsionante, un agente de suspensión, etc. Para otros vehículos farmacéuticamente aceptables, se puede hacer referencia a la literatura (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19na ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

La composición de la presente descripción se puede administrar a mamíferos, incluido el ser humano, por cualquier medio. Por ejemplo, se puede administrar por vía oral o parenteral. El método de administración parenteral puede incluir administración intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intradural, intracardíaca, intraocular, intravítrea, transdérmica, subcutánea, intraabdominal, intranasal, intraintestinal, tópica, sublingual o intrarrectal, aunque no se limita a ello.

La composición farmacéutica de la presente descripción se puede preparar en una formulación para administración oral o administración parenteral en dependencia de las vías de administración.

Para la administración oral, la composición de la presente descripción se puede formular en forma de polvo, gránulo, tableta, píldora, tableta recubierta de azúcar, cápsula, solución, gel, jarabe, suspensión, etc. mediante el uso del método conocido en la técnica. Por ejemplo, como formulación para la administración oral, se puede preparar una tableta o una tableta recubierta de azúcar mezclando el ingrediente activo con un excipiente sólido, pulverizando la mezcla, añadiendo un adyuvante adecuado y luego el procesamiento en una mezcla de gránulos. Ejemplos del excipiente adecuado pueden incluir azúcares que incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, etc., almidones que incluyen almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, etc., celulosas que incluyen celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, hidroxipropilmetilcelulosa, etc. y rellenos tales como gelatina, polivinilpirrolidona, etc. Si es necesario, se puede añadir como disgregante polivinilpirrolidona reticulada, agar, ácido algínico, alginato de sodio, etc. Además, la composición farmacéutica de la presente descripción puede contener además un antiaglomerante, un lubricante, un humectante, un sabor, un emulsionante, un antiséptico, etc.

Para la administración parenteral, la composición se puede formular en una inyección, un colirio, un ungüento, una crema, una loción, un aceite, un gel, un aerosol o un inhalador nasal mediante el uso del método conocido en la técnica. Estas formulaciones se describen en la literatura generalmente conocida en el campo de la química farmacéutica (Remington's Pharmaceutical Science, 15ta Edición, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pensilvania 18042, capítulo 87: Blaug, Seymour).

Específicamente, la composición farmacéutica de la presente descripción se puede preparar en una formulación seleccionada de un grupo que consiste de un medicamento oral, una inyección, un colirio y un ungüento.

La cantidad efectiva total del compuesto derivado de sesquiterpeno de la presente descripción o su sal farmacéuticamente aceptable se puede administrar a un paciente con una dosis única o una dosis múltiple de acuerdo con el protocolo de tratamiento fraccionado para la administración a largo plazo. El contenido del ingrediente activo de la composición farmacéutica de la presente descripción puede variar en dependencia de la gravedad de la enfermedad. La dosis de administración efectiva del compuesto o de su sal farmacéuticamente aceptables se determina teniendo en cuenta diversos factores, que incluyen la vía y el número de administraciones de la composición farmacéutica, la edad, el peso corporal, el estado de salud y el sexo de un paciente, la gravedad de una enfermedad, la dieta, la velocidad de excreción, etc. Los expertos en la técnica serán capaces de determinar la dosis de administración efectiva adecuada del derivado de sesquiterpeno o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para la prevención o el tratamiento de una enfermedad causada por la fuga vascular en el ojo teniendo en cuenta estos factores. La composición farmacéutica de acuerdo con la presente descripción no está especialmente limitada en cuanto a la formulación, la vía de administración y el método de administración siempre que se pueda lograr el efecto de la presente descripción.

En otro aspecto, la presente descripción se relaciona con una composición alimentaria para el uso en un método para prevenir o mejorar la degeneración macular o el edema macular, que contiene el compuesto seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il)metil)-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-diona-1,4- diona y 3-[[1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona

o su sal farmacéuticamente aceptable como un ingrediente activo.

La composición alimentaria de la presente descripción incluye todas las formas, como un alimento funcional, un suplemento nutricional, un alimento saludable, un aditivo alimentario, un pienso, etc. y se proporciona para animales, incluidos los seres humanos o el ganado. La composición alimentaria se puede preparar en diversas formas de acuerdo con el método conocido en la técnica.

Por ejemplo, el alimento saludable puede prepararse preparando el derivado de sesquiterpeno de la presente descripción o un extracto de esponja que contiene el sesquiterpeno en té, jugo o bebida para beber o en un gránulo, una cápsula o un polvo. Además, se puede preparar una composición mezclando el derivado de sesquiterpeno de la presente descripción o un extracto de esponja que contiene el sesquiterpeno con un ingrediente activo que se conoce que es efectivo para mejorar y prevenir el edema macular o la degeneración macular.

Además, el alimento funcional se puede preparar agregando el derivado sesquiterpénico de la presente descripción o un extracto de esponja que contiene el sesquiterpeno para bebidas (incluidas bebidas alcohólicas, frutas o frutas procesadas (por ejemplo, frutas en conserva, embotellada, mermelada, etc.), pescado, carne o sus alimentos procesados (por ejemplo, jamón, salchichas de carne, etc.), pan o fideos (por ejemplo, udon, fideos de trigo sarraceno, fideos instantáneos, espaguetis, macarrones, etc.), zumos de frutas, bebidas, galletas, caramelos, productos lácteos (por ejemplo, mantequilla, queso, etc.), grasas y aceites vegetales, margarina, proteínas vegetales, alimentos empaquetados, alimentos congelados, condimentos (por ejemplo, pasta de soja, salsa de soja, etc.), etc.

Además, el derivado de sesquiterpeno de la presente descripción o un extracto de esponja que contiene el sesquiterpeno se puede preparar en forma de polvo o concentrado para usar como aditivo alimentario.

Modo para la Invención

A continuación, la presente descripción se describió en detalle a través de ejemplos.

Ejemplos

<Ejemplo de preparación 1>Preparación de metil 3-[[(1R,2S,4aR,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftalen-1-il]metil]-4,5-dihidroxibenzoato

Una muestra Hyrtios sp. (38 g de peso seco) conservada en EtOH se extrajo completamente mediante el uso de MeOH. Después de evaporar el extracto de MeOH al vacío, el residuo restante (15,6 g) se fraccionó mediante el uso de agua y un CH2Ch solvente. La fase orgánica se evaporó al vacío y se obtuvo una goma (5,32 g). Se sometieron 2,37 g de la goma a cromatografía flash mediante el uso de una columna de gel de Si y mediante el uso de hexano y concentraciones en aumento de EtOAc como eluyentes. Algunas de las fracciones resultantes se sometieron a cromatografía flash mediante el uso de una columna de gel de Si y mediante el uso de hexano/EtOAc (100:0 a 50:50). Se obtuvieron dos fracciones positivas-UV y se purificaron adicionalmente por HPLC (detección UV a 210 nm, eluyente 90:10 MeOH/H2O) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 1 (3 mg).

El compuesto obtenido del Ejemplo de preparación 1 tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'metil 3[[(1R,2S,4aR,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4,5-dihidroxibenzoato'. Sólido amorfo.

IR (película) 3339, 1680, 1303 cm-1.

UV (CH3OH) Amáx 221 (17440), 269 (7460), 305 nm (3341, sh).

UV (CHaOH/NaOH) Amáx 210 (18520), 241 (13176), 284 (4310), 322 nm (6950).

1H NMR (600 MHz) 87,49 (1H, d, 1,5), 7,45 (1H, d, 1,5), 5,32 (1H, bs), 3,87 (3H, s), 2,84 (1H, d, 14) y 2,60 (1H, d, 14) sistema AB, 1,64 (3H, bs), 0,98 (3H, d, 6), 0,95 (3H, s), 0,90 (3H, s).

13C NMR (CDCla, 150,87 MHz): ver [Tabla 2].

Tabla 2

<Ejemplo de preparación 2>Preparación de 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-2,5-dihidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona.

Una muestra de esponja (Smenospongia sp.) (2 kg) se sumergió en MeOH y se extrajo con CHCh/MeOH (mezcla l/l). El extracto se evaporó a presión reducida y una suspensión acuosa del mismo se extrajo con CH2Ch (extracto A). El extracto A (8 g) se sometió a cromatografía en gel de sílice (CHCh/MeOH con concentraciones en aumento). A partir de ella, se preparó una fracción 1 eluida con MeOH al 2 % (en CHCh) y una fracción 2 eluida con MeOH al 5 % (en CHCh). La fracción 1 se eluyó con AcOEt al 30 % (en hexano) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 2 (20 mg).

El compuesto obtenido del Ejemplo de preparación 2 tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2,5-dihidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona'. C21H28O4. m.p. > 350 °C.

SM m/e (%): 191 (40), 154 (12), 135 (44), 121 (65), 109 (56), 107 (87), 95 (100).

UV (EtOH) Amáx nm (e): 214, 286.

IR (KBr) v cm-1: 3324, 2940, 1645, 1535.

1H NMR (MeOD, 80 MHz) 8 ppm: 5,71 (1H, s), 4,76 (2H, br s), 2,40 (2H, br s), 1,01 (3H, s), 0,92 (3H, d, J = 7 HZ), 0,78 (3H, s).

13C NMR (8 ppm, CD3OD, 20,115 MHz): ver [Tabla 3].

<Ejemplo de preparación 3>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(3-metilbutilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona

44 g de esponja seca (Smenospongia sp.) se extrajo con CH2Ch y luego con MeOH (extracto B). El extracto B (4 g) se sometió a cromatografía mediante el uso de una columna de gel de sílice (CHCl3/con cantidades en aumento de MeOH) para obtener una fracción A eluida con MeOH al 2 % (en CHCh) y una fracción B eluida con MeOH al 5 % (en HCl3). La fracción A se purificó con una columna de Sephadex LH 20 (MeOH/CHCh: 60/40) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 3 (20 mg) y un compuesto del Ejemplo de preparación 4 (5 mg).

El compuesto obtenido del Ejemplo de preparación 3 tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(3-metilbutilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

C26H39NO3.

m.p.: 170-172 °C.

SM m/e (%): 413 (4), 311 (8), 283 (12), 223 (100), 191 (11), 167 (22), 153 (27), 149 (15), 135 (14), 121 (16), 109 (18), 107 (12), 95 (79).

m/e 191,179, calc.191,179 para C14H23; m/e 223,119, calc. 223,120 para C12H17NO3.

UV (EtOH) Amáx nm (e): 204 (27230), 324 (14070).

IR (KBr) v cm-1: 3417, 3275, 1640, 1592.

1H NMR (CDC13.200 MHz) 8 ppm: 8,41 (1H, exch., s), 6,41 (1H exch., t). 5,36 (1H, s), 4,43 (brs), 3,20 (2H, dt), 2,48 (d), 2,37 (d) (AB syst.), 2,31 (dt), 2,07 (2H, m), 1,85 (1H, m), 1,80-1,05 (11H, m), 1,04 (3H, s), 0,95 (9H, 3d superpuesto), 0,83 (3H, s), 0,78 (1H, dd).

13C NMR (8 ppm, CDCh, 20,115 MHz): ver[Tabla3].

Tabla 3

<Ejemplo de preparación 4>Preparación de 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-4-hidroxi-5-(2-metilpropilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 4 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 3. El compuesto obtenido (Ejemplo de preparación 4) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-metilpropilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

C25H37NO3.

SM m/e (%): 399 (5). 209 (100). 191(17), 166 (36). 152 (18), 135 (11), 121 (15), 109(15), 107 (12), 95 (66).

UV (EtOH) Amáx nm (e): 210 (14000), 329 (20150).

IR (KBr) v cm-1: 3417, 3275, 1640, 1592.

1H NMR (CDC1a, 200 MHz) 8 ppm: 6,53 (1H, s). 5,41 (1H, s), 4,45 (2H, br s), 2,95 (2H, dt), 2,48 (1H, d), 2,45 (1H, d, J = 13 Hz), 1,03 (3H, s), 0,97 (9H, 3d superpuesto), 0,82 (3H, s). 0,76 (1H, dd).

<Ejemplo de preparación 5>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-amino-4-hidroxiciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Se combinaron los extractos crudos de MeOH y DCM de Hippospongia sp. y se fraccionaron con MeOH, DCM, hexano y BuOH. Entre ellas, las fracciones de hexano, DCM y MeOH se sometieron a cromatografía ultrarrápida en columna y HPLC-RP semipreparativa para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 5.

El compuesto obtenido (Ejemplo de preparación 5) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-amino-4-hidroxiciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Sólido púrpura.

C21H30O3N (HRESIMS m/z 344,2295, [M+H]+).

UV (MeOH) Amáx (log e) 315 (3,58) nm.

IR (KBr) 3835, 3566, 1624, 1536 cm-1.

1H NMR (400 MHz, CD3DO) 8: 2,17/1,43 (2H, m H-1), 1,39 (2H,m, H-2), 1,50/1,38 (2H, m, H-3), 2,34/2,05 (2H, m, H-6), 1,23/1,82 (2H, m, H-7), 1,23 (1H, m, H-8), 0,82(1H, m, H-10), 4,44 (2H, s, H-11), 1,05 (3H, s, H-12), 0,98 (3H, d, J = 6,4 Hz H-13), 0,84 (3H, s, H-14), 2,47/2,40 (2H, dd, J = 13,7 Hz, H-15), 5,51 (1H, s, H-19).

13C NMR (100 MHz, CD3DO) 8: 22,8 (t, C-1), 27,5 (t, C-2), 36,4 (t, C-3), 160,1 (s, C-4), 39,9 (s, C-5), 32,5 (t, C -6), 28,3 (t, C-7), 37,6 (d, C-8), 42,1 (s, C-9), 49,7 (d, C-10), 101,1 (t, C-11), 19,4 (q, C-12), 16,9 (q, C-13), 16,2 (q, C-14), 31,6 (t, C-15), 113,7 (s, C-16), 159,4 (s, C- 17), 183,2 (s, C-18), 93,6 (d, C-19), 183,2 (s, C-21).

<Ejemplo de preparación 6>Preparación de ácido acético 2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien1-il]amino]

Después de liofilizar la esponja (Dactylospongia elegans), un extracto obtenido añadiendo MeOH ( 3 x 1 L) a la esponja liofilizada (33 g de peso seco) se concentró al vacío y se sometió a cromatografía líquida al vacío de fase inversa C 18 (0 %, 20 %, 50 %, 70 %, 90 %, 100 % MeOH en H2O y 1:1 CH2Ch/MeOH). Se obtuvieron fracciones de MeOH al 20 %, 50 % y 70 % y se sometieron a HPLC C preparativa 18 (4 ml/min, gradiente de elución de 3:7 H2O/MeCN/0,1 % de ácido fórmico a 100 % de MeCN/0,1 % de ácido fórmico durante 10 min, a través de una columna de Phenomenex fenil hexilo de 150 x 10 mm, 5 pm). A partir de ellos se obtuvieron un compuesto del Ejemplo de preparación 6 (11,7 mg, 0,035 %), un compuesto del Ejemplo de preparación 7 (1,4 mg, 0,004 %) y un compuesto del Ejemplo de preparación 8 (0,8 mg, 0,002 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 6 tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'ácido acético 2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien-1-il]amino]'.

Sólido rojo, amorfo;

[a]D+94,4 (c 0,018, MeOH).

UV (PDA, CH3CN/H2O) Amáx 218, 311, 494 nm.

IR (puro) Vmáx 3598, 2936, 2064, 1657 cm'1.

1H (300 MHz) y 13C (75 MHz) MNR (CD3OD): ver [Tabla 4].

HRESIMS m/z 424,2104 [M Na]+ (calcd para C23H3-iNO5Na, 424,2094, A 1,0 mmu).

[Tabla 4]

00^{. f f lU l T .^ ^ ( J e n H z)* * - C}05^{Y -}

^{d e , m t d l * * ^ ( J e n H z ) ^}

1 24^.2^{. C H -}2^.19^{, t r d (}12^.7⁾ _{H , - l H r}2_{. H}10 2.15 22^.7^{. C H ;}2^.09^{, m}

148_{, W} ^{H , -}1^{, H , -}2^{, H}-10 1^.35^{. m}

² 29^.7^{. C H i}1^.84^{. d d (}12^.7^.3^.0^{) H » A , H j , -}2^{. H};'3 2^{S a C H :}1^.74^{. m}

153^{. «} _{M . f W H r l}1^,(4^{. ra}

3 340^{. C H -}2^.35^{. d d d <}13^.8^.5^.2^.3^.0^{) H , -}2^{. H * -}3^{, H r l l}4 32^.1^{. C H :}223^{, m}

2^.04^{. d d (}13^.8^.5^.2^{) H t}2^{. H}r 3 1^,2^.4,11 1^.99^{. m}

4 ^J6^{M . C}1593^{. C}

5 41^{J . C m e}

6 37^.3^{. C H : l i l . i l J U . H}.-7 8.10 36^.4^{. C H :}1^.43^{. id}

141.0 ^{H i}-6 5^.7^,8,12 1^.27^{. d i}

7 28-8^{. C H :}140^{. o H}:-6 6^,3.9 27,6 ^{C H :}152^{, m}

U l . r o

3 33^.9^{. C H}1^.25.0 ^{H t -}7^{, H r l}3 7,13 37^{J . C H U}7^{. m}

⁹ 43^.7^{. C}422^{. C}

^{¡ 0} 50^.9^{, C H}055^{. 0} _{H r l}1^,3^,9^,12,15 49^.3^{, C H}0^.74^{, m}

^{I I}103^,1^{. C H .-}4^.40^{, i} _{H ( -}3_{. H r l l}3^.4.5 102^.9^{, C H :}440^{. s}

4^.37^{. s}

12 ^{m c H ,}1^.05^{. s}4^.5^,6.10 20^.2^{, C H ,}0^.97^{. í}

^U1^*6^{, C H ,}9^.93^.4⁽63^{) H}4 7^,3.9 ^{t t l . C H j}0.91 ^{d (}6^,2⁾

14 ^{l U C H , m . i}8^,9^.1(215 ^|7^{J , C H j}036^{. s}

¡5 33^.1^{. C H ¡ 1 5 0 . Í Ü 3.S ) H}.-15 8^.9^.10^.14^.16^.17.21 32^{J X C H j}256 ^{d (}116⁾

240^.4113^.8^{) f t}-15 8^.9^{. i a}14^.16^.17.21 2^.27^{. d (}136⁾

16 115^,4^{. C I}132^{. C}

ⁿ159-4^{. C}159^.7^{. C}

^IS182^.2^{. C}180^.4^{, C}

19 93^.6^{. C H}5^.27^{. s (}7^.18.21 92^.9^{. C H}5^.19^{. s}

20 150^,9^{. C}149^,5^{. C}

21 1^Í3^{. S . C I S}1^{. S . C}

²² 756.1 ⁽5^,8⁾

23 44^.7^{, C H .}3^.94^{, f c r s}20.24 42^.1^{, C H j}3^.88^{, d (}5^.8⁾

24 ^I71^.7^{. C}169^,8^{, C}

“C'DjOD. b75 MHz. ‘300 MU/. Las correlaciones dll.MBC son del(de los) protón(es) indicados a los carbonos indicados.

<Ejemplo de preparación 7>Preparación de ácido propanoico 3-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxocidohexa-1,5-dien1-il]amino]

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 7 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 6. El compuesto preparado (Ejemplo de preparación 7) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'ácido propanoico 3-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien-1-il]amino]'.

Sólido rojo, amorfo.

[a]D 13 (c 0,06, MeOH).

UV (PDA, CH3CN/H2O) Amáx 233, 314, 494 nm.

IR (puro) Vmáx 3410, 2930, 1686, 1632, 1567cm-1.

HRESIMS m/z 438,2264 [M Na]+ (calcd para C24H33NO5Na, 438,2251, A 1,3 mmu).

1H NMR (CD3OD, 300 MHz) 85,38 (1H, s, H-19), 4,40 (2H, s, H2- 11 ), 3,45 (2H, t, J = 6,8 Hz, H2-23), 2,59 (2H, t, J = 6,8 Hz, H2-24), 2,47 (1H, d, J = 13,6 Hz, Ha-15), 2,38 (1H, d, J = 13,6 Hz, Hb-15), 2,32 (1H, m, Ha-3), 2,16 (1H, m, Ha-1) , 2,04 (1H, m, Hb-3), 1,80 (1H, m, Ha-2), 1,48 (1H, m, Ha-6), 1,43 (1H, m, Hb-1), 1,41 (1H, m, Ha-7), 1,36 (1H, m, Hb-6), 1,35 (1H, m, Hb-7), 1,29 (1H, m, Hb-2), 1,21 (1H, m, H-8), 1,04 (3H, s, H3-12), 0,97 (3H, d, J = 6,4 Hz, H3-13), 0,83 (3H, s, H3-14), 0,81 (1H, m, H-10).13

13C NMR (CD3OD, 75 MHz) 8183,4 (C, C-21), 179,6 (C, C-18), 176,0 (C, C-25), 162,9 (C, C-4), 161,1 (C, C-17), 152,0 (C, C-20), 115,5 (C, C-16), 103,3 (CH2, C-11), 92,6 (CH, C-19), 51,1 (CH, C-10), 44,0 (C, C-9), 41,8 (C, C-5), 39,9 (CH2, C-23), 39,0 (CH, C-8), 38,2 (CH2, C-6), 34,5 (CH2, C-24), 34,2 (CH2, C-3), 33,4 (CH2, C-15), 30,0 (CH2, C-2) , 29,4 (CH2, C-7), 24,3 (CH2, C-1), 21,4 (CH3, C-12), 18,7 (CH3, C-13), 18,1 (CH3, C-14).

<Ejemplo de preparación 8>Preparación de 7-[[(lR,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-1,3-benzoxazol-5,6-diol.

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 8 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 6. El compuesto preparado (Ejemplo de preparación 8) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '7-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-1,3-benzoxazol-5,6-diol'.

Sólido incoloro.

[a]D -6,7 (c 0,075, MeOH).

UV (PDA, CH3CN/H2O) Amáx 236, 297, 323 (sh) nm.

IR (puro) Vmáx 3408, 2927, 1541 cm-1.

1H (300 MHz) y 13C (75 MHz) MNR (CD3OD): ver [Tabla 5].

HRESIMS m/z 378,2050 [M Na]+ (calcd para C22H2gNOaNa, 378,2040, A 1,0 mmu).

[Tabla 5]

fto. de. mull." ón (. J en Hz

C O S Y g H M B C

1 24.8. C H . 2.37, ni Hfc-1, H ,-2. H-IO 2

1.55. m H.-1. H 10

2 30.2, C H : 1.87, m H b-2. H.-3

1.28. m H .- l . H .* 2.H a-3

3 34.4. C H ; 2.32, m Hb-2, Hb-3 2. 4. 11

2.03. m H.-2. H*-3 5

4 161.8. C

5 41.8. C

6 38.3. C H ] 1.45. m S

7 29-5. C H ; 1.41. m

8 38.7. C H 1.41, m Hj-13

9 44.2. C

IO 51.1 .C H 0.94. m Hi-1 5. 9. 12. 14

11 103.4. C H ; 4.35, s 3.4 .5

4.32. s 3.4 .5

12 20.7. C H , 1.07. s 4. S, 6. 10

13 19.2. C H , l.OS, d (6.8) H H 7. 8.9

14 18.3. CH* 0.95. 5 8.9 . 10. 15

15 35.8. C H a 2.94, d (13.9) Hb-15 8. 9. 10. 14.

16. 17. 21

2.86. d ( 13.9) H.-15 8. 9. IO. 14.

16, 17,21

16 111.0. C

17 146.7. C

18 145.2. C

19 102.6. C H 6.96, s 17. 18. 20, 21

20 131.7. C

21 146.7, C

22 153.2, C H 8.20, s 20.21

*75 MHz. b300 MHz. Las correlaciones CHMBC son del(de los) protón(es) indicados a los carbonos indicados.

<Ejemplo de preparación 9>Preparación de acetato [7-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-6-acetiloxi-1,3-benzoxazol-5-il]

Como en el Ejemplo de preparación 5, después de liofilizar la esponja (Dactylospongia elegans), se preparó un extracto añadiendo MeOH ( 3x 1 L) a la esponja liofilizada (33 g de peso seco). La sustancia insoluble en MeOH (120 mg) se añadió a piridina (0,5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas después de tratarla con (CH3CO)2O (0,5 ml). La sustancia obtenida se concentró al vacío y se sometió a una separación secuencial por HPLC de fase inversa (A: H2O/MeCN ácido fórmico al 0,1 % (3:7) a MeCN al 100 % + ácido fórmico al 0,1 % durante 10 min a 4 ml/min y mantenido durante 10 min adicionales en una columna Phenomenex Luna C de 150 x 10 mm, 5 pm-18; B: H2O/MeOH con ácido fórmico al 0,1 % (3:7) a MeOH al 100 % con ácido fórmico al 0,1 % durante 10 min a 4 ml/min y mantenido durante 5 min adicionales en una columna Phenomenex Luna fenil hexilo de 150 x 10 mm, 5 pm). El compuesto obtenido del Ejemplo de preparación 9 (2,3 mg, 0,007 %) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'acetato [7-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-6-acetiloxi-1,3-benzoxazol-5-il]'.

Aceite incoloro.

[a]D -170 (c 0,003, CHCh).

UV (PDA, CH3CN/H2O) Amáx 233, 278, 284, 300 (sh) nm.

IR (puro) Vmáx 3488, 2927, 1775, 1630, 1458 cm-1.

HRESIMS m/z 462,2250 [M Na]+ (calcd para C26H3sNO5Na, 462,2251, A 0,1 mmu).

1H NMR (CDCla, 300 MHz) 88,07 (1H, s, H-22), 7,54 (1H, s, H-19), 4,42 (1H, d, J = 1,6 Hz, Ha-11), 4,38 (1H, d, J = 1,6 Hz, Hb-11), 2,83 (1H, d, J = 14,2 Hz, Ha-15), 2,76 (1H, d, J = 14,2 Hz, Hb-15), 2,35 (1H, m, Ha-3), 2,34 (s, a-OCOCH3), 2,30 (s, b-OCOCHa), 2,08 (1H, m, Hb-3), 1,92 (1H, m, Ha-2), 1,58 (1H, m, Ha-1), 1,49 (1H, m, Ha-6), 1,45 (1H, m, Hb-1), 1,43 (1H, m, H-8), 1,42 (2H, m, H2-7), 1,28 (1H, m, Hb-6), 1,26 (1H, m, Hb-2), 1,07 (3H, s, Hs-12), 0,97 (3H, d, J = 5,6 Hz, Hs-13), 0,94 (3H, s, Hs-14), 0,92 (1H, m, H-10).

13C NMR (CDCls, 150 MHz) 8168,1 (C, a-OCOCHs), 167,9 (C, b-OCOCHs), 159,1 (C, C-4), 152,7 (CH, C-22), 147,9 (C, C-21), 140,4 (C, C-17), 137,4 (C, C-18), 136,6 (C, C-20), 118,3 (C, C-16), 111,9 (CH, C-19), 102,2 (CH2, C-11), 50,1 (CH, C-10), 43,0 (C, C-9), 40,3 (C, C-5), 37,6 (CH, C-8), 36,2 (CH2, C-6), 35,6 (CH2, C-15), 32,6 (CH2, C-3), 28,3 (CH2, C-2), 27,7 (CH2, C-7), 23,1 (CH2, C-1), 20,1 (2 x CH3, -OCOCH3), 19,9 (CH3, C-12), 18,1 (CH3, C-13), 16,8 (CH3, C-14).

<Ejemplo de preparación 10>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona

Una esponja (Spongiidae SS-1047, 0,30 kg, peso húmedo) se obtuvo como se describió en la literatura "Yohei Takahashi y otros, 2010" y se extrajo. Brevemente, las sustancias solubles en EtOAc (1,2 g) se fraccionaron mediante el uso de una columna de gel de sílice (n-hexano/EtOAc) y se prepararon una fracción 1, una fracción 2 y una fracción 3 de baja polaridad y una fracción polar 4. La fracción 3 se fraccionó y purificó por columna C18 (MeOH/H2O) y C18 HPLC (Luna 5u Fenil-Hexilo, 250 x 10 mm; eluyente, MeOH/H2O/CF3CO2H, 85:15:0,05; régimen de flujo, 2,5 ml/min; detección de UV a 320 nm) para obtener los compuestos del Ejemplo de preparación 10 y el Ejemplo de preparación 11.

El compuesto del Ejemplo de preparación 10 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona'.

m.p.: 95-98 °C.

[a]20579 64,4° (c 0,27 CHCh).

IR (película) 3341, 1652, 1645, 1609, 1243 cm'1.

UV(CHsOH) Amáx 213 (9600), 288 nm (13485).

UV (CHsOH/NaOH) Amáx 210 (12850), 290 (8930), 526 nm (1650).

1H NMR (600 MHz, CDCl3, 8, J en Hz): ver [Tabla 6].

13C NMR (150,87 MHz, CDCh): ver [Tabla 6].

HREIMS m/z 358,2151 [M+](12, calcd para C22H30O4, 358,2144), 191,1803 (15, calcd para C14H23, 191,1800), 168,0423 (41, calcd para C8H8O4, 168,0422), 121,1013 (12, calcd para C9H13, 121,1017), 107,0859 (30, calcd para C^bH-11, 107,0861), 95,0861 (100, calcd para C7H11, 95,0861).

Tabla 6

<Ejemplo de preparación 11>Preparación de 2-hidroxi-5-metoxi-3-[[(1R,2S)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8ahexahidronaftalen-1-il]metil]cidohexa-2,5-dieno-1,4-diona.

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 11 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 10. El compuesto obtenido (Ejemplo de preparación 11) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '2-hidroxi-5-metoxi-3[[(1R,2S)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a-hexahidronaftaleno-1-il]metil]ciclohexa-2,5-dienol , 4-diona'.

Sólido ligero amarillo pálido.

m. p. 108,5-109,5 °C.

C22H3004 (alta resolución FABMS (M+ 358,2146, A 0,2 mmu, C22H30O4; MH+ 359,2223, A 0,1 mmu, C22H31O4)). 1H NMR (500 MHz, CDCla) 8: 0,73 (s, 3H), 0,90 (sh, 1H), 0,92 (s, 3H), 0,96 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,99 (s, 3H), 1,12 (ddd, J = 13,5,13,5, 4,3 Hz, 1H), 1,33-1,45 (complejo mult., 4H), 1,73 (mult, 1H), 1,79 (br d, 1H), 1,95 (ddd, J = 18, 17,5, 4.5 Hz, 1H), 2,08 (br d, J = 13 Hz, 1H), 2,45 (d, cJ = 13,0 HZ, 1H), 2,58 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 3,84 (s, 3H), 5,35 (br s, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,45 (s, 1H);

13C NMR (500 MHz, CDCI3), 8 (mult, asignaciones de protones): 16,0 (q, 0,73, C-14), 16,5 (q, 0,92, C-11), 22,7 (t, 1,40, 1,46, C-2), 27,9 (q, 0,96, C-13), 29,7 (q, 0,99, C-12). 30,6 (t, 0,90, 1,79, C-l), 31,5 (t, 1,73, 1,95, C-7), 32,7 (t, 2,45,2,58, C-15), 36,3 (s, C-4), 36,4 (d, 1,36, C-8), 40,9 (s, C-g), 41,2 (t, 1,13, 1,32, C-3), 41,7 (s, 2,08, C-10), 56,8 (q, 3,86, C- 22), 102,0 (d, 5,85, C-19), 114,8 (d, 5,35, C-6), 118,3 (s, C-16), 146,3 (s, C-5), 152,8 (s, -OH, C-17), 161.5 (s, C-20), 182,0 (s, C-21), 182,4 (s, C-18).

<Ejemplo de preparación 12>Preparación de 3-[[(1R,2S,8aS)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-feniletilamino)cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona

La fracción 1 obtenida en el Ejemplo de preparación 10 se refraccionó por la columna C-is (MeOH/H2O) y C-is HPLC (Wakosil-II 5C18AR, Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 250 x 10 mm; eluyente, MeCN/H2O/CF3CO2H, 90:10:0,05; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 11 (2,8 mg, 0,00093 % en peso húmedo) y un compuesto del Ejemplo de preparación 12 (24,7 mg, 0,0082 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 12 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,8aS)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a- hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5(2-feniletilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]23D -14 (c 0,2, CHCla).

IR (película) vmáx 3290, 1730, 1650, 1590, 1510, 1460, 1380, 1360, 1220 cm'1.

UV (MeOH) Amáx 336 (log 4,28), 507 nm (2,84).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 7].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 7].

EIMS m/z (%) 447 (M+, 9), 257 (100), 191 (2), 166 (20), 152 (5), 105 (10), 95 (15); HREIMS m/z 447,2790 [M]+ (calcd para C29H37NO3, 447,2773).

[Tabla 7]

^{pos le}*C ^{(m. J en H} ²⁾ HMBC NOESY

) 30.5 CH; 1.65 <*n) 10 ,2a. 10. 14, 15*

« M (w) la , 3b

2 22.8 CH. 1.49 (o ) la . Ib. 7a Jfa

1.32 (aü 2a. 3a. 12

J 41.3 CH. 1J 7 (n ) 2.11.12 3b

1.16 (<MA 13.5.13.5.4.1 ) 2.4. 11. 12 2a.3a. 11

4 30.4 C

5 146.5 C

« 114.8 CH 5.38 b n 4 ,8. 7.10 7a. 7b. t i

7 31.6 CHi 196 (ddd, 17 J . 5,2. 5JZ) S .6.8.9 , 13 7b, 8 ,13

1.77 (dddA 17.3. 9.5.2.6. 2.6) 5.6.8.13 7a. A 13.14

6 36.3 CH 1.39 ím) 7.9.13 7a. 10. 13 ,15b 9 406 C

10 41.6 CH 2.10 (ro) 5 la , 2b. A 12, 15b

11 297 CHi 103* <b«) 3.4.5 ,12 3a, 3b

12 26.0 CH» 0.95* ( í) 3.4.5.11 2b. 10

13 16S CHi 099 * (A 6,7) 7 ,8 ,9 7a, 7b. A 14,15a, 15b 14 159 CH> 0.74* <a) 8.9.10 ,15 la, ib , 7b, 13 ,15a, 15b 12 32,7 CKt 2.54 (A 13.4) 8 ,9 ,19 , 14. 16 ,17.21 la, 13. 14.15 b

2.41 (A 13,4) A 9. 10.14.16 ,17.21 6.10.13.15a

16 114.7 C

17 156.5 C

1» 178,5 C

19 91.8 CH 5.42 (*> 17,21 22.23

20 149.9 C

21 183.0 C

22 44.0 CH, 3.44* (tó.69.4.1 ) 20. 23.24 19.23. 25

23 34.2 CH; 2.95* ti, 6.9) 22, 24.25 19.22 ,25

24 137.4 C

25 1285'C H 7,19* (A 7 23.27 77.21

26 128-9'CH 7.33* (6A 7,3. 7.3) 24.27

27 127.0 CH 7.26 (1, 7.3) 25

20-HH 6.54 (brO 19.21

211. b3 ll. C2C.

<Ejemplo de preparación 13>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-feniletilamino)cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 13 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 12. El compuesto obtenido (Ejemplo de preparación 13) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-feniletilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo púrpura. sólido amorfo.

[a]25D 180 (c 0,1, CHCla).

IR (película) vmáx 3270, 1730, 1640, 1590, 1510, 1460, 1380, 1210 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 335 (log 4,20), 502 nm (2,74).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 8].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 8].

EIMS m/z (%) 447 (M+, 25), 257 (100), 209 (17), 191 (18), 168 (45), 166 (48), 152 (17), 119 (42), 105 (40);

HREIMS m/z 447,2783 [M]+ (calcd para C29H37NO3, 447,2773).

[Tabla 8]

<Ejemplo de preparación 14>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-metilpropilamino)cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona.

La fracción 2 obtenida en el Ejemplo de preparación 10 se sometió a una columna C18 (MeOH/H2O/CF3CO2H) y C18 HPLC (Luna 5u Fenilo-Hexilo, Phenomenex, 250 x 10 mm; eluyente, MeCN/H2O/CF3CO2H, 80:20:0,05; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 14 (0,9 mg, 0,00030 %), una fracción ^yy una fracción 8.

El compuesto obtenido del Ejemplo de preparación 14 tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5(2-metilpropilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]23D 160 (c 0,1, CHCla).

IR (película) vmáx 3270, 1730, 1640, 1590, 1510, 1380, 1210 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 334 (log 4,29), 509 nm (2,86).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 9].

13C NMR (CDCl3): ver [Tabla 9].

EIMS m/z (%) 399 (M+, 8), 209 (100), 191 (3), 166 (11), 152 (9), 107 (9), 95(22).

HREIMS m/z 399,2790 [M]⁺(calcd para C²⁵H³⁷NO³, 399,2773).

[Tabla 9]

pDSiC ¡Ju (m. J en Hz) _{H M BC N O E SY}

1 19,9 CHj 2.04 (tu) 2.3. 5.9. 10 Ib . 3.10.15a

1.45 (dddd. 12.0. 12.0. 12.0.6.1 ) 2.5 , 10 la.14

2 27.1 CH¡ 1.99 (m ) Ib. 2b

1.86 (m ) 2a, 3 , 10

3 ^{120.8 CH 5.12 (b is) 12 la , 2b . 11}

4 144.1 C

5 38.S C

6 36.0 C ttj 1.61 (ddd. 12.7.3.2. 3.2 ) 7 6b . 7

1.04 (m ) 6a, 7

7 27.9 C H i 1.34 '(a i) S 6a, 6b . 13. 14

3 ^{37.7 CH 1.27 (m ) 10.13}

9 42.6 C

ib 47.6 CH 1.04 (m ) 1,2. 5 ,9 la, 2b . 8

l l IS .I CHj 1.53* (ta s) 3.4. 5.6 3.12

12 20,1 CHj 1-00* ( i ) 4 , 5.6. 10 11. 14

13 17.7 CHj 0,96* (d . 6.1 ) 7 , 8 , 9 7 ,8. ISb

Ib . 7. 12. 13. 15a. 14 17.3 C H i 0.82* (s) 8 ,9.10. 15 15b

15 32.4 CHj 2.56 (d . 13.9) 8.9.14. 16.17.21 la, 14.15b

2.42 (d. 13.9) 8.9. 10. 14. 16. 17.21 13.14.15a

16 113.9 C

17 157.1 C

13 178.1 C

19 91.6 CH 5.37 (s) 17.21 22

20 150.5 C

21 182.9 C

22 50 ,3 C H j 2.97" (dd, 6.4. 6.4 ) 20 , 23. 24 19. 23.24.20-N H 23 27.6 CH |.9fl" (m ) 22.24

24 20.2'' C H , 0.98* (d . 6.7 ) 22. 23 22.23

20-N H 6.53 ibas) 22

'211. b3H. ‘611. d2C.

<Ejemplo de preparación 15>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-[[(2S)-2-metilbutil]amino]ciciohexa-3,5-dieno-1,2-diona

La fracción ^yobtenida en el Ejemplo de preparación 14 se purificó por HPLC C18 (Luna 5u C18(2), Phenomenex, 250 x 10 mm; MeOH/H2O/Et2NH, 70:30:0,1; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 15 (1,4 mg, 0,00047 %) y un compuesto del Ejemplo de preparación 16 (4,0 mg, 0,0013%).

El compuesto del Ejemplo de preparación 15 tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametN-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-N]metN]-4-hidroxi-5[[(2S)-2-metilbutN]amino]ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]21D+136 (c 0,25, CHCl3).

IR (película) vmáx 3270, 1680, 1650, 1590, 1510, 1450, 1380, 1210 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 336 (log 4,09), 505 nm (2,67).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 10].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 10].

^{HREIMS m/z 413,2940 [M]+ (calcd para C}26^H39^NO3^{, 413,2930).}

[Tabla 10]

^{Pm .} fc ^{(m. J en Hz) H M B C TÍOESY}

1 19.9 C H i 2.04 <m> 2. 3 , 3 - IO Ib . 10. 15»

1.47 <ja*> 12. 14

2 27,1 CM- 199 (m > ib . 2b

1.85 <m> 2a. IO

120

3 * CM S .U <V») 2*. 2b . 11

144.

4 I C

S 30-5 c

0 30.0 CM . 1.02 0b . 7. t i . 12

1.04 0a

7 279 _{C H i}1 15 ' f k A

S 37.7 CM 1.27 10. 13

9 42.7 C

IO 47.0 C H 1.04 2. 5.9 1*.2b . *

1t l * . l C H i 1.53*

3.4.3 3.0 a

12 19,9 CH» 099 * < * ) 4. 5.0 O». 14

13 17.7 CM* 0.90* (d . 0.8 ) 7. * 1. 14. 13b

14 17.3 C H , Q.S2*<*) 8.9. IO. 15 Ib . 7. 12. 13.15a. 15b 32.4 CM; 2.55 (0 , 13.9 ) 8.9. 14. 10. 17.21 la . 14. 15b

2.42 id . 13.9 ) 8.9. 10. 14. 10. 17.21 13. 14. 15a

113-1* * C

1S7.

17 2 c

17*.

1S 1 c

19 * 1,5 C H 5.17 ( i ) 17.21 22a. 2 Ib . 2J

150.

20 0 c

1*2.

21 9 c

22 48.7 CM. 3.OS (0ddL. 132 0.5. 0.5 ) 20. 23. 24. 20 19.20. IO-MM

2.95 (004L 13.2. 0.7. 0.7 ) 20. 23. 24. 24 19, 26. 20 N H

23 34.0 C H 1.74 0d> 22.24 72*. 72b . 74* . 20

24 27.2 CM: 1.44 (m> 23.20 23. 24 b . 25

124 OM) 2 « 24* . 25

25 t l . l C H , 0.93 * f t 7 -4 ) 23.24 24*. 24b

2 » 17.4 C H , O.90* < 0. « ! ) 22. 23. 24 22*. 22b , 23

200 Í H

*2H. Mi

<Ejemplo de preparación 16>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(3-metilbutilamino)cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 16 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 15. Tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalina-1-il]metil]-4-hidroxi-5(3-metilbutilamino) ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]21D+124 (c 0,25, CHCh).

IR (película) vmáx 3270, 1680, 1640, 1590, 1510, 1380, 1210 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 336 (log 4,17), 515 nm (2,55).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 11].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 11].

EIMS m/z (%) 413 (M+, 7), 223 (100), 191 (3), 166 (8), 152 (9), 107 (8), 95 (18);

^{HREIMS m/z 413,2947 [M]+ (calcd para C}26^H39^NO3^{, 413,2930).}

[Tabla 11]

os. Se Su (m. J en Hz) H M B C N O E 8Y

20.1 C H j 2.03 (m> 2.3 , 5. 9.10 Ib . 13a

1.44 (dddd. 12.1. 12.1.12.1.6.2 ) 2.5.10 14.8

^■J27.0 C H j 1.98 (ddd. 17.5. 5 J . 5.3 ) 2b. 3

1.85 (m ) 2a. 3

3 120,7 C U 5.10 (brs) 11 2a. 2b. 11 4 144.0 C

5 38.4 C

6 35.9 C H i 1.60 (ddd. 12.8. 3.3. 3.3 ) 0 b . 7

1.03 ^{(m> 6a. 8}

7 27.9 C H i 1.33 'ím ) Í .6. 8.9

8 37.6 CH 1.23 {m) 14 Ib

9 42.6 C

^{10 47.5 CH}103 m ⁸

11 18.1 C H j 1.52* (brs) 3.4.5 3. 12

12 19.8 CH _j0.98* (s) 4.5.6.10 Ib . 6a. 14

13 17.7 CHjt 0.94* (4.6.2 ) 7.9 7 .15b

14 17.2 C H j 0.61*(s) S .9.1 Ü . 15 Ib . 8. 12.15 * . 15b 15 32-4 C H i 2.54 (d, 14,0) 8.9.14.16 ,17.21 la . 14.15 *

2.41 (d . 14.0) 8.9.10.14.16.17 ,21 13.14. 15b

10 113.8 C

17 157-2 C

IG 178.0 C

19 91.3 CH S.37 (s) 17.21 22.23.25

20 150.3 C

21 182.8 C

22 41.1 C H j 3.1^ (d t . 7.3.6.6 ) 20. 23. 24 19. 23.25 23 36.3 CH_j1.55* (Id.7.3.6.7 ) 22.24. 25 19.22.25

24 25.9 C H 1.66 (d stjH . 6 ,7.6.7 ) 23.25 25

25 22.3 ' C H j 0.93 '(d . 6.7 ) 23.24 19.23.24

17-OH 7.92 (brs)

20-N H 6,46 (brs) 19 ,21 22

*2H. b3H. C6II. d2C.

<Ejemplo de preparación 17>Preparación de 3-[[(1R,2S,8aS)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-[[(2S)-2-metilbutil]amino]cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona.

La fracción 8 obtenida en el Ejemplo de preparación 14 se refraccionó por HPLC C18 (Luna 5u Fenilo-Hexilo, 250 x 10 mm; MeOH/H2O/Et2NH, 65:35:0,1; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección UV a 300 nm) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 17 (0,7 mg, 0,00023 %) y un compuesto del Ejemplo de preparación 18 (1,6 mg, 0,00053 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 17 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,8aS)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a- hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5[[(2S)-2-metilbutil]amino]ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]23D-42 (c 0,25, CHCla).

IR (película) vmáx 3290, 1680, 1650, 1590, 1520, 1460, 1390, 1200 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 338 (log 4,06), 511 nm (2,63).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 12].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 12].

EIMS m/z (%) 413 (M+, 15), 223 (100), 191 (10), 168 (15), 166 (14), 152 (16), 119 (18).

HREIMS m/z 413,2916 [M]+ (calcd para C26H39NO3, 413,2930).

[Tabla 12]

<Ejemplo de preparación 18>Preparación de 3-[[(1R,2S,8aS)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(3-metilbutilamino)cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 18 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 17. Tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como el compuesto '3-[[(1R,2S,8aS)-1,2,5,5-tetrametil-2,3,6,7,8,8a-hexahydronaphthalen-1-yl]metil]-4-hidroxi-5(3-metilbutilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona. Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]21D-38 (c 0,2, CHCla).

IR (película) vmáx 3270, 1680, 1650, 1590, 1510, 1460, 1380, 1200 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 338 (log 4,21), 515 nm (2,63).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 13].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 13].

EIMS m/z (%) 413 (M+, 24), 223 (100), 191 (13), 166 (20), 152 (17), 119 (20).

HREIMS m/z 413,2947 [M]+ (calcd para C29H37NO3, 413,2930).

[Tabla 13]

Pos _{5 c} ^{5 y (m. J en Hz)}HMBC NOESY

1 30.6 CHj I.S7 Oto) ib. 2a.2b. 10. 14.15a 0.93 (tu) la. 2a.2b. 14

2 22 A CHj 1.50 (m) la. Ib.2b.3a.3b

1.3S (m) 3a.3b. 12

3 41.4 CHi 1.3* (m) 2a.2b

1.16 (ddd. 13.0.13.0.4.2) 2a.2b

4 36.4 C

5 146.5 C

6 114.9 CH 5.39 0> rs) 4.7.8. 10 7a.7b. 11

7 31.6 CHj 1.93 (m) 6.7b, 8,13

1.77 (m) ^£6, 7a. 13.14

S 36.3 CH 1.33 (m) 7a.7b. 10. 15b

9 40.6 C

10 41.6 CH 2.11 (ni) la. 8.12.15a

11 29.7 CHi 1,03* (brs) 3.4.5.12 6

12 23.0 CH^j05>5*(s) 3.4.5. 11 2b. 10

13 16.6 CH] 0.99* (<L 6.7) 7.8.9 7a.7b.8.14.15a. 15b 14 16.0 CHj 0.74* (s) 8.9.10.15 la. Ib.7b.13, 15a, 15b 15 32.7 CH¡ 2.55 (d, 13.4) £.9.10.14.16.17.21 la, 13. 14.15b

2.42 (d, 13.4) 8.9,10.14,16,17,21 8, 10.13,14.1Ja

16 114.5 C

17 156.7 C

1S 173.3 C

19 91.5 CH 5.39 (S) 17,21

20 150.1 C

21 163.1 C

22 41.1 CHi 3.18* (Td.6.7.6.3) 20.23.24 23.25

22 36.9 CHj 1.57* (dt.6.7.6.7) 22.24.25 22.25

24 25.9 CH 1.68 (d sept.6.7,6.7) 25 25

25 22.3'CHj ^{0.95 * (d- superpuesto)}23.24 22.23.24

20-NH 6.43 (brs)

*2H. b3H. C6H. d2C.

<Ejemplo de preparación 19>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-[[(2S)-2-metilbutil]amino]cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Una esponja (Spongiidae SS-265) se obtuvo como se describió en la literatura 'Yohei Takahashi y otros, 2010' y se extrajo. Brevemente, se preparó un extracto añadiendo MeOH (4,3 y 3,2 L) a una esponja SS-265 (1,4 kg, peso húmedo). El extracto de MeOH (68,4 g) se fraccionó con CHCh y H2O. Las sustancias solubles en CHCh (2,3 g) se sometieron a una columna de gel de sílice (n-hexano/EtOAc), columna C18 (MeOH/H2O), columna de gel de sílice (nhexano/acetona) y una HPLC C18 (Wakosil-II 5C18AR, 250 x 10 mm; eluyente, MeCN/H2O/CF3CO2H, 90:10:0,1; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm y Luna 5u C18(2), 250 x 10 mm; MeOH/H2O/Et2NH, 70:30:0,1; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm) repetidamente para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 19 (1,8 mg, 0,00013 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 19 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5[[(2S)-2-metilbutil]amino]ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]22D 33 (c 0,2, CHCla).

IR (película) vmáx 3280, 1640, 1590, 1510, 1380, 1200 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 501 (log 2,88), 327 (4,17), 243 (3,86), 208 nm (4,25).

1H NMR (CDCla): ver [Tabla 14].

13C NMR (CDCla): ver [Tabla 14].

EIMS m/z (%) 413 (M+, 15), 223 (100), 191 (3), 166 (10), 152 (10), 95 (10).

HREIMS m/z 413,2934 [M]+ (calcd para C26H39NO3, 413,2930).

Tabla 14

1.43 (m> la . 2a. 3a ^y29.7 C H , 1.84 {m> Ib . 2b. 3a. 3b

1.14 (m ) 2a. 3b

3 332) C H , 2.22 (A id . 13.7. 13.7. 5.4) 2 ,4. U ib , 2a, 3b. 12

2.05 {m> 1.5 2 s .2 b . 3a. 11a

4 160.5 C

5 40.4 C

6 36.7 C H j 1.51 <m) 5. 7. 8. 10 «b. l i b

1.36 (m ) 6a. 11b

7 28.0 rH > 1.39* (m ) 12, 14

S 37.9 O I 1.18 m 10

9 42.9 C

tú 50.0 CH 0.78 ( « 1 11.6. 1.8) 1.5.8.9. 12. 14. 15 la . 2b. 6b.8. 15a

n 102.5 C H , 4.43 _{t í )}3.4.5 3b

4.42 _<*) 3.4.5 6a. 6b

12 20.5 CH % 1.04* _W4.5.6. 10 3a. 7.14

13 I7.9 r C H , 0.96 * ' {d . 6.4) 7, S. 9 7 , 15b

14 17.2 C H , 0.82* (* ) 8.9. 10, 15 7 , 12. 15a. 15b

15 32.5 C H , 2.48 (tf. 14.0) 8.9. 10. 14. 16. 17.21 13. 10. 14. 15b

2.39 ( 4 14.0) 8.9. 10. 14. 16. 17.21 8.13.14. 15a

14 1135 C

17 157.3 C

1S 178.1 C

14 91.6 C H 5.36 fs) 17.21 224.22b. 23

20 150.5 C

21 182.9 C

22 48.7 C H , 3.08 (A id . 13.2.6.6. 6.6) 20.23.24.26 19. 22b. 23.24a. 20 -N H

2.95 (A id . 13-2.6.7. 6.7) 20.23.24.26 19. 22a. 23. 20 -N H

23 34.0 C H , 1.75 22. 24.25.26 22a. 22b. 24a. 24b. 25.26

24 27.2 C H 1.45 (m ) 22.23.25.26 22a. 23. 24b. 25

123 m 22. 23. 25. 26 23. 24a

25 11.i C H , 0.93* (Í. 7.4) 23. 24 23. 24a

26 174 f C H , 0.96 *'' (A 6-8) 22. 23. 24 23

2Ó-NH 6,51 _{.Ü ZG i________________}22a. 22b. 23. 26

"2H. b3H. ‘intercambiable.

<Ejemplo de preparación 20>Preparación de 2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftalen-1-il]metil] ácido -6-hidroxi- 3,4-dioxocidohexa-1,5-dien1-il]amino]etanosulfónico

Una esponja (Spongiidae SS-1208) se obtuvo como se describió en la literatura 'Yohei Takahashi y otros, 2010' y se extrajo. Brevemente, se preparó un extracto añadiendo MeOH (3 x 0,8 L) y MeOH/tolueno (3:1, 1 x 0,8 L) a la esponja SS-1208 (0,4 kg, peso húmedo). La mezcla de extracto (15,9 g) se fraccionó con CHCh y H2O (3 x 500 ml). La fracción soluble en CHCh (2,7 g) se sometió a una columna de gel de sílice (n-hexano/EtoAc y CHCh/MeOH), una columna C18 (MeOH/H2O/CF3CO2H) y una HPLC C18 (Luna 5u Fenilo-Hexilo, 250 x 10 mm; eluyente, MeCN/H2O/CF3CO2H, 70:30:0,1; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm y Wakosil-II 5C18^aR, 250 x 10 mm; eluyente, MeCN/H2O/CF3CO2H, 75:25:0,1; velocidad de flujo, 2,0 ml/min; detección de UV a 300 nm) repetidamente para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 20 (0,8 mg, 0,00020 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 20 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como ácido etanosulfónico '2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien-1-il]amino]'.

Rojo-púrpura, sólido amorfo.

[a]22D+38 (c 0,2, MeOH).

IR (KBr) Vmáx 3450, 1640, 1600, 1530, 1380, 1210 cm-1.

UV (MeOH) Amáx 237 (log 2,8), 345 (4,00), 513 nm (2,47).

1H NMR (DMSO-da): ver [Tabla 15].

13C NMR (DMSO-da): ver [Tabla 15].

ESIMS (neg) m/z 450 [M-H]-.

HRESIMS (neg) m/z 450,1955 [M-H]-(calcd para C23H32NO6S, 450,1950).

[Tabla 15]

Pos. _6c5^h(m. J en Hz) HM BC NOESY 1 19 ,4 CH i 1-99 (m) Ib, 15a

1.33 (m) la, 2. 12. 14

²263 CH] i.8S*(m) ib, 10

3 120.8 CH 5.05 (bre) 12 2

4 143.1 C

5 37.8 C

6 354 C 1.53 (m) 6b. 7.12

0.96 (m) 6a

7 27.5 CHj 1.27“ (m) 6a. 13

S 37.1 CH 1.22 (m) 13, 14

!> 41.S C

10 47.0 CH 0.96 (m) 14 2. 15b

11 17.9 CKa 1.47* (bis) 3.4 ,5

12 19.9 CH j 0.93* (S) 4.5. 6.10 Ib, 6a. 14

13 17.8 CHj 0.90*(d,6.Q) 7 ,8 ,9 7.3

14 17.2 CHj 0.74*(s) S.9 ,10. 15 Ib. 8.12.15a

15 32.0 CHj 2.41 (6.13.6) 16.17. 21 la. 15b

2.30 (6.13.6) 9. 10. 16. 17.21 10.15a

14 113.6 C

17 158.ScC

18 178.0 C

19 91.6 CH 5.26 <s) 17.21 22. 23

20 éC

21 182,7cC

22 39.2f CHj 3.33' (superpuesto) 23

23 48.0 CHi 2.69* (bit, 6-4) 22 19,20-NH

20-NH 7.96 (bis) 23

*211. b3ll. ^asignado a partir del espectro HMBC. dno observado

<Ejemplo de preparación 21>Preparación de metilo 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-4-hidroxibenzoato

Después de liofilizar una esponja (Dactylospongia elegans), la esponja liofilizada (2,6 kg, peso húmedo) se cortó y se sumergió en MeOH durante la noche para preparar un extracto. El extracto de MeOH se fraccionó con hexano, metanol al 90 %, n-BuOH y H2O. La fracción de metanol al 90 % se evaporó a presión reducida para obtener 12 g de un extracto de MeOH al 90 %. Se separaron 2 g del extracto de MeOH al 90 % por una columna de SO2 (hexano-AcOEt-acetona-MeOH) para obtener tres fracciones, Fr. A (0,42 g), Fr. B (0,73 g) y el Fr. C (0,83 g). Entre las fracciones, Fr. A y Fr. B se separaron por una columna ODS (MeOH-H2O) o HPLC (Cosmosil 5SL, hexano-AcOEt = 7:1) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 21 (20 mg, 1 %) y un compuesto del Ejemplo de preparación 22 (17 mg, 0,85 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 21 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'metil 3[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxibenzoato'.

Sólido blanco.

[a]27D 17,3 (c 0,12, CHCh).

1H NMR (500 MHz, CDCI3) 5: 7,77 (1H, s), 7,77-7,74 (1H, m), 6,77 (1H, d, J = 8,0 Hz), 6,01 (1H, s), 4,41 (1H, s), 4,36 (1H, s), 3,87 (3H, s), 2,68 (1H, d, J = 14,3 Hz), 2,64 (1H, d, J = 14,3 Hz), 2,33 (1H, td, J = 13,7, 5,2 Hz), 2,08 (2H, d, J = 13,7 Hz), 1,93-1,89 (1H, m), 1,61-1,56 (1H, m), 1,47 (1H, dt, J = 12,2, 3,2 Hz), 1,41-1,38 (3H, m), 1,31-1,27 (1H, m), 1,22-1,19 (1H, m), 1,06 (3H, s), 1,02 (3H, d, J = 6,9 Hz), 0,96 (1H, dd, J = 12,0, 1,7 Hz), 0,88 (3H, s).

13C NMR (125 MHz, CDCI3) 5: 167,6, 160,0, 159,2, 135,0, 129,3, 125,2, 121,6, 115,3, 102,8, 52,0, 48,0, 42,0, 40,2, 37.0, 36,5, 36,3, 33,0, 27,8, 27,7, 23,2, 20,5, 17,62, 17,59.

IR(KBr): 3341, 1686, 1601, 1426, 1287cm'1.

MS (ESI-TOF) m/z: 379 [M+Na]+.

HRMS (ESI-TOF) m/z: 379,2249 (calcd para C23H32O3Na; encontrado: 379,2266).

<Ejemplo de preparación 22>Preparación de metil 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-4,5-dihidroxibenzoato

Se preparó un compuesto del Ejemplo de preparación 22 de la misma manera que en el Ejemplo de preparación 21. Tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'metil 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4,5-dihidroxibenzoato'.

Sólido blanco.

[a]26: ^d+10,4 (c 0,19, CHCh).

1H NMR (500 MHz, CDCh) 5: 7,49 (1H, d, J = 2,0 Hz), 7,40 (1H, d, J = 2,0 Hz), 5,90 (2H, S), 4,41 (1H, s), 4,37 (1H, s), 3,87 (3H, s), 2,68 (1H, d, J = 14,3 Hz), 2,65 (1H, d, J = 14,3 Hz), 2,34 (1H, td, J = 13,7, 5,0 Hz), 2,09 (2H, d, J = 14,3 Hz), 1,93-1,91 (1H, m), 1,60-1,55 (1H, m), 1,47 (1H, dt, J = 11,6, 2,7 Hz), 1,43-1,35 (3H, m), 1,33-1,19 (2H, m), l , 06 (3H, s), 1,03 (3H, d, J = 6,3 Hz), 0,96 (1H, d, J = 11,5 Hz), 0,88 (3H, s).

13C NMR (125 MHz, CDCh) 5: 167,7, 160,1, 148,7, 142,3, 127,4, 125,2, 120,3, 114,0, 102,8, 52,1, 48,0, 42,1, 40,2, 37.0, 36,5, 36,3, 33,0, 27,9, 27,7, 23,2, 20,6, 17,64, 17,59.

IR(KBr): 3341, 1686, 1601, 1426, 1287cm'1.

MS (ESI-TOF) m/z: 395 [M+Na]+.

HRMS (ESI-TOF) m/z: 395,2198 (calcd para C23H32O4Na; encontrado: 395,2214).

<Ejemplo de preparación 23>Preparación de (-)-(1R,4aS,8aS)-16,26,46,-trimetil-1a[(2',5'-dimetoxifenil)metil]-5-exometileno-(3H)-1,4,4a,5,6,7,8,8aa-octahidronaftaleno

Después de añadir terc-butóxido de potasio anhidro al 95 % (217 mg, 1,93 mmol) a 7,5 ml de benceno, se preparó una suspensión por agitación de la misma. Luego se añadieron 657 mg (0,62 mmol) de bromuro de metiltrifenilfosfonio. La solución de color amarillo claro preparada se calentó durante 30 minutos a reflujo. Se añadió gota a gota una solución calentada de iluro a una solución de 212 mg (0,62 mmol) de la cetona (-)-(1R,4aS,8aS)-1p,2p,4ap-trimetil-1a[(2',5'-dimethoyphenyl)metil]-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8aa-decahidronaftaleno-5-une disuelta en 3 ml de benceno. Después de un tratamiento térmico adicional durante 22 horas, la mezcla de reacción se enfrió y se diluyó por agitación rápidamente mientras se añadían secuencialmente 10 ml de éter y 3 ml de H2O. Después de que se completó la fase de separación, la fase orgánica se lavó con 2 ml de H2O y 3 ml de salmuera saturada y después se secó (MgSO4). Un aceite casi incoloro obtenido por concentración a presión reducida se separó por cromatografía en columna de gel de sílice (10 x 2,5 cm) utilizando EtOAc al 5 % (en hexano) como eluyente para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 23 (180 mg, 85 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 23 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '(-)-(1R,4aS,8aS)-1p,2p,4p,-trimetil-1a[(2',5'-dimetoxifenil)metil]-5-exo-metileno(3H)-1, 4,4a,5,6,7,8,8aaoctahidronaftaleno'.

[a]25D -40,4 ° (c 0,5, CH2Ch).

m. p.: 77-78 °C.

Gel de sílice TLC Rf 0,70 (EtOAc al 15 % en hexano).

1H NMR (CDCla) 50,86 (s, 3H), 1,01 (d, 3H, J = 5,5 Hz), 1,07 (s, 3H), 1,15-1,65 (m, 7H), 1,70-1,95 (m, 2H), 2,05-2,15 (m, 2H), 2,20-2,45 (m,1H), 2,64 (AB q, 2H, J = 14 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,33-4,47 (m, 2H), 6,65-6,77 (m, 3H).

Anal calcd para C23H34O2: C, 80,65; H, 10,00. encontrado: C, 80,82; H, 10,04.

<Ejemplo de preparación 24>Preparación de dimetil éter de 2-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftalen-1-il]metil]benceno -1,4-diol.

El compuesto del Ejemplo de preparación 23 (108,5 mg, 0,317 mmol) y el hidrato de tricloruro de rodio (16,7 mg, 0,06 mmol, 20 % en moles) se añadieron a 11 ml de solución de EtOH y la mezcla preparada se calentó a reflujo. Después de un tratamiento térmico durante 20 horas, la mezcla de reacción se enfrió y se inactivó agregando 5 ml de H2O. La fase acuosa se extrajo tres veces con 10 ml de CH2Ch y el extracto se combinó, se secó (MgSO4) y se concentró para obtener un aceite ligeramente coloreado. El residuo se purificó con un tapón de gel de sílice (EtOAc al 10 % en hexano) y se concentró para obtener un aceite transparente e incoloro. Después, se obtuvo un compuesto del Ejemplo de preparación 24 por solidificación lentamente del mismo bajo condición de alta presión. El compuesto del Ejemplo de preparación 24 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como 'éter dimetílico de 2[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]bencenol , 4-diol'.

[a]25D+8,88 °(c 0,18, CH2Ch).

m. p.: 63-68 °C.

Gel de sílice TLC Rf 0,71 (EtOAc al 15 % en hexano), 0,37 (EtOAc al 5 % en hexano).

1H NMR (CDCla) 50,75-1,15 (m, 4H), 0,87 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 1,24-1,65 (m, 9H), 2,0-2,15 (br m, 3H), 2,70 (br s, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 5,15 (br s, 1H), 6,65-6,85 (m, 3H).

Espectro de masas (ionización química, ion negativo), m/z 341 (M-1)-.

<Ejemplo de preparación 25>Preparación de 2-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]ciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona.

Una solución obtenida añadiendo el compuesto del Ejemplo de preparación 24 (70,0 mg, 0,204 mmol) a 3,5 ml de THF se añadió gota a gota a 448 mg (0,82 mmol) de una solución de nitrato de amonio cérico (en 3,5 ml de H2O) bajo agitación. 15 minutos más tarde, la mezcla de reacción se diluyó secuencialmente con 3 ml de salmuera saturada y 10 ml de éter etílico. Después de que se completó la separación de fase, la fracción de la fase acuosa se extrajo tres veces con 10 ml de CH2Ch. La solución extraída se combinó, se secó (MgSO4), se concentró y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice ( 15 x 2 cm) para obtener un aceite naranja. Se eluyó con EtOAc al 5 % (en hexano) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 25 (25 mg, 40 %). El compuesto obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '2-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]ciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona'.

[a]25D 21 ° (c 0,02, CH2Cl2).

Gel de sílice TLC Rf 0,55 (EtOAc al 15 % en hexano); Amáx (CH3OH) 292 nm.

1H NMR (CDCls) 50,80-2,15 (m, 5H), 0,85 (s, 3H), 0,93 (d, 3H, J = 6,5 Hz), 1,00 (s, 3H), 1,53 (br s, 1H), 2,45-2,67 (AB q, 2H, J = 13,5 Hz), 5,14 (brs, 1H), 6,51 (br s, 1H), 6,71 (m, 2H).

Espectro de masas (ionización química) m/z 312 [M+1]+; espectro de masas (impacto de electrones), m/z 311,199 (C21H27O2 requiere 311,201).

<Ejemplo de preparación 26>Preparación de 2-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]benceno-1,4-diol.

Se disolvieron 25 mg (0,08 mmol) del compuesto del Ejemplo de preparación 25 en 2 ml de éter etílico y una solución de Na2S2O4 (56 mg Na2S2O4 en 2 ml de H2O, 0,32 mol) se añadió gota a gota a la solución resultante bajo agitación vigorosa. 45 minutos más tarde, la mezcla de reacción se diluyó con 2 ml de salmuera saturada y 10 ml de éter etílico. Después que se completó la separación de fases, la fracción de la fase acuosa extraída se extrajo tres veces más con 10 ml de éter etílico. La solución éter extraída se combinó, se secó (Na2SO4), se concentró y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (18 x 1 cm) para obtener un residuo aceitoso. Se eluyó con una solución de EtOAc al 15 % (en hexano) para obtener un aceite transparente e incoloro. El aceite se solidificó al vacío para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 26 (23 mg, 92 %). El compuesto obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '2-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftalina -1-il]metil]benceno-1,4-diol'.

(+)-1: [a]25D 22,0 ° (c 1,35, CDCI3).

(-)-1: [a]25D -19,5 ° (c 1,0, CKCI3).

m.p.: 125-127 °C.

Gel de sílice TLC Rf 0,10 (EtOAc al 15 % en hexano); Amáx (DMSO) 305 nm.

1H NMR (CDCl3) 80,86 (s, 3H), 0,99 (d, 3H, J = 8 Hz), 1,02 (s, 3H), 1,51 (br s, 3H), 1,2-1,65 (m, 7H), 1,9-2,15 (m, 3H), 2,54-2,70 (AB q, 2H, J = 14 HZ), 4,38 (br s, 1H), 4,41 (br s, 1H), 5,14 (br s, 1H) y 6,59 (m, 3H); espectro de masas (ionización química), m/z 315 [M+1]+.

Espectro de masas (impacto de electrones), m/z 314,225 [M]+ (C21H30O2 requiere 314,225).

<Ejemplo de preparación 27>Preparación de ácido acético 2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien1-il]amino]

El compuesto del Ejemplo de preparación 10 (3,0 mg, 8,4 pmol) y glicina (0,8 mg, 10 pmol) se añadieron a EtOH (1 ml) y se agitaron durante 24 horas a temperatura ambiente en presencia de NaHCO3 (11 mg, 130 pmol). Un residuo preparado por filtración y evaporación se sometió a HPLC de fase inversa C18 (YMC-Pack AM-323, 1,0 x 25 cm; régimen de flujo 2,5 ml/min; detección de UV a 300 nm; eluyente CH3CN/H2O/CF3CO2H, 85:15:0,1) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 27 (1,6 mg, 47 %).

El compuesto del Ejemplo de preparación 27 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como ácido acético '2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien-1-il]amino]'.

m.p.: 156-158 °C.

[a]20D -71,7 °(C 1,0, MeOH).

IR (KBr) Vmáx 3300, 1720, 1640, 1580, 1370, 1200 cm'1.

UV(MeOH) Amáx 317 (e 11800) y 488 nm (860).

ELMS m/z (%) 401 (M+, 1). 385(1), 357(4), 343(3), 211(20), 191(25) y 95(100).

FABMS (positivo) m/z 404 [M+2H+H]+; HRFABMS m/z 404,2461 [M+2H+H]+, calcd para C23H34NO5, 404,2437. 1H NMR (CD3OD): ver [Tabla 16].

13C NMR (CD3OD): ver [Tabla 16].

[Tabla 16]

_posición

1 110 m 21.1 t

1.44 m

2 1.93® m 28.0 I H-10

3 3,04 tan 121.9 4 h-i i

4 144.9 1 H-ll.M-12

5 39.6 1 H-10, H-ll, H42

6 1-63 a 37.4 t H-12

1.03 m

7 1-36® m 29.2 t H-13

8 1.32 m 39.0 d H-10* H-14, H-15

₉ 43.6 1 H-10, H-13, H-14, H-15

10 1.10 m 49.9 ⁱ H-12, H-14, H-15

11 IJO t 18.4 q

12 1.00 l 20^l7 q H-10

13 0.97 d 7.0 18.4 q

14 0.82 s 17.8 q H-10, H-15

15 2.57 d 13.6 33.3 t H-14

2.42 d 13-6

16 115.9 # H-15

17 159.6 » H-15.H-I9

1» 180.8 »

19 3.28 « 93.8 d

30 líl- í a H-22

21 184.0 a H-15, H-19

22 3.96 1 44.9 t

23 171,9 4 H-22

a ) 8 en ppin b) correlaciones HMBC' c) 2H

<Ejemplo de preparación 28>Preparación de (2S)-2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftaleno-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxocidohexa-1,5-dien1-il]amino]-3-ácido hidroxipropanoico

El compuesto del Ejemplo de preparación 10 (3,0 mg, 8,4 pmol) y L-serina (1,3 mg, 10 pmol) se añadieron a EtOH (1 ml) y se agitaron durante 24 horas a 40 °C en presencia de NaHCO3 (27 mg, 34 pmol). Un residuo preparado por filtración y evaporación se sometió a HPLC de fase inversa C-is (YMC-Pack AM-323, 1,0 x 25 cm; régimen de flujo 2,5 ml/min; detección de UV a 300 nm; eluyente CH3CN/H2O/CF3CO2H, 85:15:0,1) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 28 (1,7 mg, 46%).

El compuesto del Ejemplo de preparación 28 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '(2S)-2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8a-hexahidronaftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien-1-il]amino]-3-ácido hidroxipropanoico'.

m.p.: 198-200 °C.

[a]17D -71 ° (c 0,73, EtOH).

IR (K Br) Vmáx 3400, 1670, 1630, 1590, 1540, 1380, 1200 cm'1.

UV (MeOH) Amáx 321 (£ 12100) y 498 nm (920).

FABMS (negativa, matriz de dietanolamina) m/z 432 [M+2H-H]'.

HRFABMS m/z 432,2381 [M+2H-H]', calcd para C24H34NO6432,2386.

1H NMR (DMSO-d6): ver [Tabla 17].

13C NMR (DMSO-d6): ver [Tabla 17].

[Tabla 17]

posición ■ H * W z ) ^UC»H acoplado con C"

1 2.01 ^tn ^{18.9 t H-L} 0

_{1.39 m} ^H -10

2 ^{1.92® m} _25.8 1

^{3 5.05} ^{b rs}121.0 ^d ^{H s - l l}

_{4 142.8} ₉ ^H 5 ^{- l l . H j . i} 2

5 37.2 S H-3, H ^j41,H 3 'Í2

6 ^{1.53 m 34.9 l H j-12}

0.98

7 I.33C m 26.9 l H j-13

8 ^1.30 m _36.8 ^{d H-} 6 ^{, H -10, H j-14, H i-15} ₉ 41.2 $ H-10, H j-13 , H j-14, H2-I5 10 1.02 ^{m 46.5 d H j-12 , H j-14, M j-15}I I 1.48 5 17,5 q H-3

12 _0.93s ^19.3 _q

13 0.90 d 7.0 17.2 q

U 0.78 1 16.5 q H-10, H2-15

15 2.43 d 13.6 31.4 t H j-14

2.32 d 13.6

16 113.5 B H p l5

17 158.5 i Hj-15, H-19

18 178.8 i H-19, NH-20

19 5.35 s 93.1 d NH-20

20 ^{147.1 »}

2Q-NH 7.15 d S.O

21 182.0 ^{s Hr l5, H-19, NH-20} 22 _{4,20 m 56,5} _d

23 171,9 s H j-24

24 3.78 <td 11.4, 2.9 59.8 t

3.82 dd 11.4, 2.9

a ) 5 en ppm b) correlaciones I1MBC c) 211

<Ejemplo de preparación 29>Preparación de (2S)-2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,8,8ahexahidronaftaleno-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxocidohexa-1,5-dien1-il]amino]-3-ácido hidroxibutanoico.

El compuesto del Ejemplo de preparación 10 (3,0 mg, 8,4 pmol) y L-treonina (1,3 mg, 13 pmol) se añadieron a EtOH (1 ml) y se agitaron durante 24 horas a 40 °C en presencia de NaHCO3 (11 mg, 130 pmol). Un residuo preparado por filtración y evaporación se sometió a HPLC de fase inversa C-is (YMC-Pack AM-323, 1,0 x 25 cm; régimen de flujo 2,5 ml/min; detección de UV a 300 nm; eluyente CH3CN/H2O/CF3CO2H, 85:15:0,1) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 29 (1,3 mg, 35%).

El compuesto del Ejemplo de preparación 29 obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '(2S)-2-[[5-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a,5-tetrametil-2,3,4,7,S,Sa-hexahidronaftalen-1-il]metil]-6-hidroxi-3,4-dioxociclohexa-1,5-dien-1-il]amino]-3-ácido hidroxibutanoico'.

m.p.: 188-191 °C.

[a]17D -183° (c 1,0, EtOH).

IR (K Br) Vmáx 3400, 1670, 1630, 1590, 1540, 1380, 1200 cm'1.

UV (MeOH) Amáx 317 (£ 12600) y 490 nm (1000).

FABMS (negativa, matriz de dietanolamina) m/z 446 [M+2H+H]'.

HRFABMS m/z 446,2524 [M+2H-H]', calcd para C25H36NO6, 446,2906.

1H NMR (DMSO-d6): ver [Tabla 18].

13C NMR (DMSO-da): ver [Tabla 18].

[T abla 18]

1 1.99 _m19.9 1 _{T 5}

^{U S m}H-10

2 ^{l.SBt m}26.2 _i

3 5.05 bra 120.5 d H j- l l

4 143.5 5 H j-12

5 37.5 _aH-3, H3- 11 t H3-12 ₆1.56 ^m35.7 1 H y I 2

5.95 m

^{7 l.28 c m 28.5}t ^{H j-B}

8 [.25 ^m37.2 _dH -!0 , H 3- B , H3-I 4 ,H 2*15 ⁹ 41-9 3 H 10, H313, H] 14, H215 10 0.98 ^m46.9 ^dH3-I2 , ^Hj-t4 t H r l5 ^{M 1.48}

12 0.94 s ^17.9 _q ^H~3

5 20.0 _q

13 0.92 _d7.0 18.0 _q

14 0.78 s 17.1 _qH-10

^{15 2,47 d 13.7 31.7}t ^{H j-14}

2.32 d 13.7

16 114.1 ^S Ha-15

J7 158.1 3 H2-15

13 179.1 a H -I9

\ 9 5.33 $ 93.0 d

20 149.5 s

^{20-NH 6.95}brd ^7.0

21 183.1 i Hj-15, H-19

22 4.07 m 60.2 d NH-20, H3-25

23 171.0 t

24 4.27 m 66.5 d H-22

^{25 1,09 d 7.0 20.8}q

a)5enppm b) correlaciones HMBC c) 2H

<Ejemplo de preparación 30>Preparación de 18-metoxi-22,22-dimetil-16-[{(5R,8S,9R,10S)-5,8,9-trimetil-4-metilendecahidronaftalen-9-il}metil]benzo[d]-oxazol -17(2H)-ona

Smenospongia aurea y Smenospongia cerebriformis fueron homogeneizados e incubados con Verongula rígida en etanol durante una semana. Un extracto de etanol seco (3,6 kg) de la mezcla de las tres especies de esponjas se sometió a VLC de gel de sílice (36 kg, 14 (H) x 17,5 (D) cm) y se eluyó secuencialmente con hexano (100 %), hexano-acetona (80:20, 60:40, 50:50, 40:60, 20:80), acetona (100 %), acetona: MeOH (80:20, 60:40, 50:50), MeOH (100 %), MeOH-H2O (50:50) y H2O (100 %) para obtener 13 fracciones (Fr. 1-13). La fracción 10 (39,3 g) se fraccionó además con mezclas de hexano-acetona (95:5, 90:10, 85:15, 80:20), MeOH (100 %) y MeOH-^O (50:50) mediante el uso de un VLC de gel de sílice (12 (H) x 17,5 (D) cm) en 9 fracciones (Fr. 10-1 a 10-9). La fracción 10-7 (3,7 g) se sometió a MPLC C18 (15,5 x 4 cm) en condiciones isocráticas de MeOH-H2O (85:15) para preparar 6 subfracciones (Fr. 10-7-1 a 10-7-6). La fracción 10-7-3 (115,8 mg) se sometió a cromatografía de HPLC C18 (250 x 21,20 mm, 10 pm) mediante el uso de MeOH-H2O (83:17) para preparar 3 fracciones (Fr. 10-7-3-1 a 10-7-3-3). La fracción 10-7-3-2 (12,4 mg) se sometió a HPLC C18 (250 x 4,60 mm y 150 x 4,60 mm, 5 pm, conectado en línea) mediante el uso de MeOH-H2O (75:25) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 30 y su mezcla de epímeros.

La sustancia obtenida tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '18-metoxi-22,22-dimetil-16-[{(5R,8S,9R,10S)-5,8,9-trimetil-4-metilendecahidronaftalina-9 -il}metil]benzo[d]-oxazol-17(2H)-ona'.

Amarillo, Sólido amorfo.

[a]25D 21 (c 0,1, MeOH).

UV (MeOH) Amáx 297 nm.

^{1H NMR (150 MHz, CDCI}3^{): ver [Tabla 19].;}

13C NMR (150 MHz, CDCI3): ver [Tabla 19].

HRFABMS m/z 398,2696 [M+H]+ (calcd para C25H36NO3, 398,2695), 420,2509 [M+Na]+ (calcd para C25H35NO3Na, 420,2515).

Tabla 19

<Ejemplo de preparación 31>Preparación de 18-metoxi-22-metiM6-[1(5S,8S,9R,10S)-5,8,9-trimetN-4-metilendecahidronaftaleno-9-il}metil]benzo[d]-oxazol-17-ol.

Durante el procedimiento del Ejemplo de preparación 30, la fracción 10-7-3-3 (9,7 mg) se sometió a HPLC C18 (250 x 4.60 mm y 150 x 4,60 mm, 5 pm, conectado en línea) mediante el uso MeOH-H2O (78:22) y luego a HPLC C18 (250 x 4.60 mm, 5 pm) durante 120 minutos con concentraciones variables de MeOH-H2O (80:20 ^ 100:0) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 31 (1,8 mg).

El compuesto obtenido (Ejemplo de preparación 31) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '18-metoxi-22-metil-16[{(5S,8S,9R,10S)-5,8,9-trimetil-4- metilenodecahidronaftalen-9-il}metil]benzo[d]-oxazol-17-ol'.

Blanco, sólido amorfo.

[a]25D -29 (c 0,1, MeOH).

UV (MeOH) Amáx 295 nm.

1H NMR (150 MHz, CDCh): ver [Tabla 20].

13C NMR (150 MHz, CDCla): ver [Tabla 20].

HRFABMS m/z 384,2540 [M+H]+ (calcd para C24H34NO3, 384,2539), 406,2357 [M+Na]+ (calcd para C24H33NO3Na, 406,2358).

Tabla 20

<Ejemplo de preparación 32>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-feniletilamino)cidohexa-3,5-dieno-1,2-diona

Después de preparar las subfracciones Fr. 10-7-1 a 10-7-6 de acuerdo con el mismo método que en el Ejemplo de preparación 30, Fr. 10-7-4 (53 mg) se sometió a HPLC C-is (25 x 2,1 cm, 10 |jm) repetidamente bajo condiciones isocráticas de MeOH-H2O (87:13) para obtener un compuesto del Ejemplo de preparación 32 (tR = 113 min).

El compuesto obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a -hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-4-hidroxi-5-(2-feniletilamino)ciclohexa-3,5-dieno-1,2-diona'.

C29H37NO3.

m.p.: 168-170 °C.

SM m/e (%): 447 (7), 257 (64), 191 (11), 166 (59), 152 (25), 135 (16), 121 (23), 109 (23), 107 (20), 95 (100). m/e 166,0495. calc. 166,0504 para CsHsNO3; m/e 191,1795. calc. 191,1799 para C14H23; m/e 257,104, calc. 257,105 para C15H15NO3.

IR (KBr) v cm'1: 3265, 1600, 1395.

1H NMR (CDCla, 250 MHz) 8 ppm: 6,47 (1H exch., s), 5,41 (1H, s), 4,45 (2H, br s). 3,43 (2H, q), 2,87 (2H, t), 2,52 2,51 (dd, syst., AB, J = 14 y 2 Hz), 1,05 (3H, s), 0,98 (3H, d, J = 7,5 Hz), 0,84 (3H, s), 0,79 (1H, dd, J = 11,2 y 2 Hz).

13C NMR (ppm; CDCh): ver [Tabla 21].

Tabla 21

<Ejemplo de preparación 33>Preparación de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxicidohexa-2,5-dieno-1,4-diona.

Se mezclaron tres especies de esponjas Smenospongia aurea, Smenospongia cerebriformis y Verongula rígida y se preparó un extracto etanólico añadiendo etanol (98 %). El extracto etanólico se separó con una columna de gel de sílice mediante el uso de hexano, acetona, metanol, agua, etc. para obtener un total de 13 fracciones. Entre ellas, las fracciones 4, 5, 6 y 10 se concentraron y se separaron por cromatografía en columna RP C-is mediante el uso de una fase móvil (metanol:agua = 1:1 a 3:1) para obtener un compuesto puro (compuesto del Ejemplo de preparación 33). El compuesto se identificó por HPLC (Agilent Technologies 1260 Infinity) mediante el uso de un espectrofotómetro UV (203 nm) y una columna Bluespher AB2 (150 x 2 mm). La HPLc se realizó a un régimen de flujo de 1 ml/min y 40 °C mediante el uso de agua-metanol (78:22) como fase móvil y los picos del compuesto se detectaron a los 114 minutos.

El compuesto obtenido tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona'.

Sólido amarillo.

C22H30O4.

Peso molecular: 358,47.

m.p.: 72,5 °C.

IT-TOF/MS: m/z 381,1972 [M Na]+.

1H-NMR (CDCl3, 600 MHz): 2,08, 1,42 (cada 1H, m, H2-1 ), 1,84, 1,16 (cada 1H, m, H2-2), 2,29, 2,05 (cada 1H, ddd, J = 13,7, 8,6, 5,4, H2-3), 1,49,1,32 (cada 1H, m, H2-6), 1,37 (2H, m, H2-7), 1,14 (1H, m, H-8), 0,74 (1H, d, J = 12,0, H-10), 4,43, 4,41 (cada 1H, s, H2-11), 1,02 (3H, s, H3-12), 0,96 (3H,d, J = 6,4, H3-13), 0,82 (3H, s, H3-14), 2,51, 2,45 (cada 1H, d, J = 13,7, H2-15), 5,83 (1H, s, H-19), 3,84 (3H, s, H3-22).

13C NMR (CDCl3, 150 MHz): 23,34 (C-1), 28,11 (C-2), 33,13 (C-3), 160,69 (C-4), 40,63 (C-5), 36,82 (C-6), 28,80 (C-7), 38,25 (C-8), 43,50 (C-9), 50,30 (C-10), 102,66 (C-11), 20,73 (C-12), 18,01 (C-13), 17,52 (C-14), 32,52 (C-15), 117,49 (C-16), 153,49 (C-17), 182,51 (C-18), 102,17 (C-19), 161,90 (C-20), 182,20 (C-21), 57,01 (C -22).

<Ejemplo de preparación 34>Preparación de 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-ilo]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona

Se disolvieron 400 mg del compuesto del Ejemplo de preparación 33 en 20 ml de etanol en un matraz redondo. Después de agregar 10,5 ml de una solución de hidróxido de potasio (KOH) 1 M, la mezcla de reacción se agitó a 70 °C durante una hora. Después de agregar una solución de ácido clorhídrico 1 M a la mezcla de reacción agitada y concentrarla bajo presión reducida, la mezcla se transfirió a un embudo de separación y se fraccionó disolviéndola en acetato de etilo y agua destilada. La capa de acetato de etilo se combinó, se deshidrató con sulfato de magnesio, se filtró y luego se concentró bajo presión reducida. Para obtener un producto de reacción puro, el concentrado resultante se separó por cromatografía en columna de gel de sílice mediante el uso de una fase móvil (nhexano:acetato de etilo = 10:1) para obtener el compuesto final (Ejemplo de preparación 34).

El compuesto final obtenido (Ejemplo de preparación 34) tenía las siguientes propiedades fisicoquímicas y se identificó como '3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona'.

Semisólido Amarillo.

C23H32O4.

Peso molecular: 372,5.

TI: TOF/MS: m/z 395,2146 [M+Na]+.

1H NMR (CDCl3, 600 MHz): 7,47 (1H, s), 5,83 (1H, s), 4,46, 4,44 (cada 1H, s), 4,06 (2H, q, J = 7,2 Hz), 2,50 (2H, dd, J = 12, 6,0 Hz), 2,33 (1H, dt, J = 12, 6,0 Hz), 2,17-1,66 (4H, m), 1,49 (3H, t, J = 7,2 Hz), 1,46-1,09 (7H, m), 1,04 (3H, m), 0,98 (3H, d, J = 6 Hz), 0,84 (3H, s).

13C NMR (CDCla, 150 MHz): 182,68, 182,26, 161,19, 160,75, 153,35, 117,45, 102,63, 102,40, 66,10, 50,35, 43,45, 40,63, 38,29, 36,82, 33,14, 32,63, 28,79, 28,12, 23,32, 20,73, 18,46, 18,05, 13,97.

<Ejemplo 1>Evaluación de la actividad inhibidora de la vía Wnt/p-catenina.

Se investigó si los compuestos preparados inhiben la Wnt/p-catenina para algunos compuestos estructuralmente representativos.

<1-1>Actividad inhibidora de la vía Wnt/p-catenina de los compuestos de los Ejemplos de Preparación 30 y 31. Las células HEK293 (células de riñón embrionario humano) y células L secretoras de Wnt3a se obtuvieron de la ATCC (American Type Culture Collection, USA) y se cultivaron en DMEM (medio de Eagle modificado de Dulbecco) complementado con un 10 % de FBS (suero bovino fetal), 120 pg/ml de penicilina y 200 pg/ml de estreptomicina. El Wnt3a-CM (Wnt3a-medio condicionado) se preparó cultivando células L secretoras Wnt3a en DMEM suplementado con FBS al 10 % [v/v] (suero bovino fetal) durante 4 días y se recuperó el medio DMEM y se esterilizó por filtración a través de un filtro de 0,22 pm. Luego, después de agregar un medio DMEM fresco (complementado con 10 % [v/v] FBS) a las células y cultivarlas durante 3 días, el medio se recuperó por el mismo método y luego se combinó con el Wnt3a-CM previamente preparado.

Después de tratar las células HEK293 con el Wnt3a-CM, el compuesto del Ejemplo de preparación 30 o el compuesto del Ejemplo de preparación 31 (10, 20 o 40 pM) durante 15 horas y extraer las proteínas citoplasmáticas de las células, se investigó la cantidad de p-catenina que regula la CRT (transcripción de respuesta de p-catenina) de la vía Wnt/p-catenina en las células por transferencia western mediante el uso de un anticuerpo p-catenina (BD Transduction Laboratories, USA) y el sistema ECL (Santa Cruz Biotechnology). Los resultados se muestran en la Figura 1.

Como se ve en el resultado de la transferencia western de la Figura 1, las células tratadas con Wnt3a-CM mostraron un aumento en la expresión de p-catenina en el citoplasma, pero las células tratadas con el compuesto del Ejemplo de preparación 30 o el compuesto del Ejemplo de preparación 31 de la presente descripción mostraron que disminuyó el nivel de p-catenina.

<1-2>Actividad inhibidora de la vía de Wnt/p-catenina del compuesto del Ejemplo de preparación 32.

La actividad inhibidora de la ruta de Wnt/p-catenina del compuesto del Ejemplo de preparación 32 se evaluó de la misma manera que en el Ejemplo <1-1>. Brevemente, después de tratar las células HEK293 con Wnt3a-CM o el compuesto del Ejemplo de preparación 32 (10 o 20 pM) durante 15 horas y extraer las proteínas citoplasmáticas de las células, se investigó la cantidad de p-catenina que regula la CRT (transcripción de respuesta de p-catenina) de la vía Wnt/p-catenina en las células por transferencia western mediante el uso de un anticuerpo p-catenina (BD Transduction Laboratories, USA) y el sistema ECL (Santa Cruz Biotechnology). Los resultados se muestran en la Figura 2.

Como se ve en el resultado de la transferencia western de la Figura 2, las células tratadas con Wnt3a-CM mostraron un aumento de la expresión de p-catenina en el citoplasma, pero las células tratadas con el compuesto del Ejemplo de preparación 32 de la presente descripción mostraron que disminuyó el nivel de p-catenina.

<1-3>Actividad inhibidora de la vía Wnt/p-catenina de los compuestos del Ejemplo de preparación 33 y 34

Las células ARPE-19 (células epiteliales de la retina humana) y las células L secretoras de Wnt3a se obtuvieron de la ATCC (American Type Culture Collection, USA) y se cultivaron en DMEM (medio de Eagle modificado por Dulbecco) suplementado con FBS al 10 %, 120 pg/ml penicilina y estreptomicina 200 pg/ml. El Wnt3a-CM (Wnt3amedio condicionado) se preparó cultivando células L secretoras Wnt3a en DMEM suplementado con FBS al 10 % [v/v] (suero bovino fetal) durante 4 días y se recuperó el medio DMEM y se esterilizó por filtración a través de un filtro de 0,22 |jm. Luego, después de agregar DMEM fresco (complementado con 10 % [v/v] FBS) a las células y cultivarlas durante 3 días, se recuperó el Wnt3a-CM.

Después de tratar las células ARPE-19 con Wnt3a-CM, el compuesto del Ejemplo de preparación 33 o el compuesto del Ejemplo de preparación 34 (3 o 6 pM) durante 24 horas y extraer las proteínas citoplasmáticas de las células, se investigó la cantidad de p-catenina que regula la CRT (transcripción de respuesta de p-catenina) de la vía Wnt/pcatenina en las células por transferencia western mediante el uso de un anticuerpo p-catenina (BD Transduction Laboratories, USA) y el sistema ECL (Santa Cruz Biotechnology). Los resultados se muestran en la Figura 3.

Como se ve en la Figura 3, las células tratadas con Wnt3a-CM mostraron un aumento de la expresión de p-catenina en el citoplasma, pero las células tratadas con el compuesto del Ejemplo de preparación 33 o el compuesto del Ejemplo de preparación 34 de la presente descripción mostraron que disminuyó el nivel de p-catenina, lo que sugiere que los compuestos inhiben la vía Wnt/p-catenina en las células epiteliales de la retina humana. Mientras tanto, esta actividad no se identificó en el extracto de etanol en esponja usado para aislar el compuesto del Ejemplo de preparación 33 (datos no mostrados).

<Ejemplo 2>Evaluación de la actividad inhibidora de la fuga vascular en el ojo

<2-1>Administración intravítrea

Para el compuesto del Ejemplo de preparación 33 que mostró buena actividad en el Ejemplo 1, se investigó la actividad inhibidora de la fuga vascular, que es una causa de degeneración macular o edema macular, en un modelo de ratón inducido por edema macular. Se indujo edema macular en un ratón C57BL/6 de 10 semanas de edad por irradiación con láser. Después de anestesiar al ratón con ketamina (70 mg/kg) y xilazina (30 mg/kg), se dilató la pupila con tropicamida al 1 %. Se dejó caer hidroxipropilmetilcelulosa sobre el ojo y se usó un cubreobjetos de microscopio como lente de contacto. Luego, se realizaron cinco quemaduras con láser en el espacio entre los vasos sanguíneos alrededor del disco óptico (Zeiss 1149-630, potencia del láser 180 mW, duración 0,1 s, tamaño del punto 50 pm). En esta etapa, se investigó el tamaño y la permeabilidad de los vasos sanguíneos por angiografía con fluoresceína (FA) y tomografía de coherencia óptica (OCT). 24 horas después de la irradiación con láser, se inyectaron 0,5 jL de DMSO (sulfóxido de dimetilo) a un grupo control y 100 ng/0,5 jL del compuesto del Ejemplo de preparación 33 disuelto en DMSO a un grupo experimental, en la cavidad vítrea del ratón. Una semana más tarde, se volvió a realizar una angiografía con fluoresceína y tomografía de coherencia óptica. La Figura 4 muestra las imágenes del grupo control y el grupo tratado con el compuesto.

Como se ve en los resultados de la angiografía con fluoresceína y la tomografía de coherencia óptica de la Figura 4, el grupo experimental (Figura 4, C, D) mostró claramente que disminuyó la fuga vascular, lo cual es una causa de la degeneración macular o edema macular, en comparación con el grupo control (Figura 4, A, B).

<2-2>Administración intraperitoneal

Después de inducir edema macular en un ratón C57BL/6 y administrar por vía intraperitoneal el compuesto del Ejemplo de preparación 33, se investigó la fuga vascular en la retina.

Brevemente, después de anestesiar un ratón C57BL/6 de 8 a 12 semanas de edad con Zoletil (40 mg/kg) y xilazina (5 mg/kg), se dilató la pupila con tropicamida al 1 %. Se dejó caer hidroxipropilmetilcelulosa sobre el ojo y se usó un cubreobjetos de microscopio como lente de contacto. Luego, se realizaron de 3 a 5 quemaduras con láser en el espacio entre los vasos sanguíneos de la retina alrededor del disco óptico (Zeiss 1149-630, potencia del láser 200 mW, duración 0,05 s, tamaño del punto 50 jm).

Después de la irradiación con láser, se administraron por vía intraperitoneal 10 ml/kg de agua destilada como vehículo a un grupo control (Figura 5, A) y 1 mg/kg del compuesto del Ejemplo de preparación 33 (agua destilada disuelta) a un grupo experimental (Figura 5, B) cada día durante 7 días. El día 6, se administró fluoresceína de sodio al 10 % por vía intraperitoneal y se realizó una tomografía de coherencia óptica.

Como se ve en la Figura 5, se confirmó que el compuesto de la presente descripción inhibía la fuga vascular, la cual es una causa de degeneración macular o edema macular, incluso cuando se inyectaba por vía intraperitoneal.

<Ejemplo 31>In vivo PK (farmacocinética) después de la administración oral

Se compraron ratones macho ICR (8 semanas, 30-35 g) de Samtako Co. (Osan, Corea). Los animales de experimentación se aclimataron durante una semana bajo las siguientes condiciones: temperatura 23 ± 2 °C, humedad relativa 55 ± 10 %, intensidad de iluminación 150-300 lux, frecuencia de ventilación 15-20 veces/h, ciclo de iluminación 12 h (07:00 h-19:00). Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Uso y Cuidado de Animales de la Universidad Nacional de Kyungpook (Estudio No. 2016-0043).

Los ratones se mantuvieron en ayunas durante 12 horas antes de la administración del fármaco. Se les suministró alimento y agua ad libitum. El compuesto del Ejemplo de preparación 33 se disolvió en DW:PEG 400 (= 60:40 (v/v)) y se administró por sonda oral a una dosis de 10 mg/kg.

0,5 horas y 2 horas después de la administración oral, se tomaron muestras de sangre de la arteria abdominal. 50 ml de una muestra de plasma obtenida después de centrifugar la muestra de sangre a 13000 rpm durante 5 minutos se almacenó a -80 °C hasta su uso para el análisis. Una muestra tomada del ojo del ratón se homogeneizó 9 veces con solución salina para obtener un homogeneizado celular al 10 %. Las alícuotas de 50 ml obtenidas se almacenaron a -80 °C hasta su uso para el análisis.

Se añadieron 50 pL de la alícuota a 200 pL de una solución de acetonitrilo que contenía 0,5 ng/ml de propranolol. Después de mezclar en vórtex durante 10 minutos, seguido de centrifugación a 13000 rpm durante 10 minutos, el sobrenadante se transfirió a un tubo nuevo y se evaporó bajo un flujo de gas de nitrógeno. El residuo se añadió a 150 pL de una fase móvil y se inyectó una alícuota de 5 pL directamente en el sistema LC-MS/MS para su análisis. Para investigar la distribución del compuesto de la presente descripción en el tejido diana, el compuesto se administró por vía oral a una dosis de 10 mg/kg y se midió la concentración del compuesto en el plasma sanguíneo y en el ojo. Los tiempos de muestreo se determinaron en 0,5 horas y 2 horas en función de la concentración plasmática máxima y la fase de distribución. Como se ve en la Figura 6, el compuesto de la presente descripción (particularmente, el compuesto del Ejemplo de preparación 33) mostró una alta permeabilidad para el tejido diana y se encontró que era altamente dirigido al ojo incluso cuando se administraba por vía oral. A través de este resultado, se confirmó que el compuesto del Ejemplo de preparación 33 de la presente descripción puede exhibir un efecto terapéutico incluso cuando se administra a través de diferentes vías de administración (administración oral, inyección intraperitoneal, inyección intravenosa, etc.) en vez de administrarse directamente en la cavidad vítrea. Es decir, mientras que los agentes terapéuticos actualmente disponibles relacionados con las enfermedades oculares causan molestias, dolor y efectos secundarios porque deben administrarse directamente en la cavidad vítrea, se confirmó que el compuesto de la presente descripción puede administrarse por vía oral.

<Ejemplo 4>Evaluación de la seguridad del compuesto

<4-1>Evaluación de la toxicidad aguda

Este experimento se realizó para determinar la toxicidad aguda (dentro de las 24 horas) y la letalidad cuando el compuesto del Ejemplo de preparación 33 se administró en cantidades excesivas en un corto período de tiempo. 20 ratones ICR normales se dividieron en un grupo control y un grupo experimental, con 10 ratones por cada uno. Al grupo control se le administró PEG 400:Tween 80:etanol (8:1:1, v:v:v) únicamente y al grupo experimental se le administró por vía oral el compuesto del Ejemplo de preparación 33 disuelto en PEG 400:Tween 80:etanol. (8:1:1, v:v:v). Cuando se investigó la letalidad 24 horas después de la administración, todos los ratones del grupo control y los ratones del grupo experimental a los que se administró el compuesto del Ejemplo de preparación 33 a una dosis de 2 g/kg/día sobrevivieron.

<4-2>Evaluación de la toxicidad tisular.

Se realizó una prueba de toxicidad a largo plazo administrando el compuesto del Ejemplo de preparación 33 en diferentes dosis a ratones C57BL/6J (10 ratones por grupo) durante 8 semanas. Con el fin de investigar el efecto sobre diferentes órganos (tejidos) de los animales, se extrajo sangre de los animales del grupo experimental al que se le administró el compuesto del Ejemplo de preparación 33 y del grupo control al que solamente se le administró PEG 400:Tween 80:etanol (8:1:1, v:v:v) 8 semanas más tarde y se midió el nivel de la GPT (glutamato-piruvato transferasa) y del BUN (nitrógeno ureico en sangre) mediante el uso Select E (Vital Scientific NV, Países Bajos). Como resultado, no hubo diferencias significativas entre el grupo control y el grupo experimental en la GPT, la cual se sabe que está relacionada con la toxicidad hepática, y el BUN, el cual se sabe que está relacionado con la toxicidad renal. Además, no se observó ninguna anormalidad especial en los tejidos de hepáticos y renales tomados de los animales cuando se prepararon en secciones de tejido y se observaron bajo un microscopio óptico de acuerdo con el método común.

<Ejemplo de Formulación Preparación de formulaciones farmacéuticas>.

<Ejemplo de Formulación 1>Preparación de tableta

Se mezclaron 200 g del compuesto de la presente descripción con 175,9 g de lactosa, 180 g de almidón de patata y 32 g de silicato coloidal. Después de añadir una solución de gelatina al 10 %, la mezcla se pulverizó y se pasó por un tamiz de malla 14. Una mezcla obtenida por el secado de la misma y la adición de 160 g de almidón de patata, 50 g de talco y 5 g de estearato de magnesio se preparó en forma de tableta.

<Ejemplo de Formulación 2>Preparación de la inyección

Se disolvieron 1 g del compuesto de la presente descripción, 0,6 g de cloruro de sodio y 0,1 g de ácido ascórbico en agua destilada para obtener 100 ml. La solución resultante se colocó en una botella y se esterilizó calentando a 20 °C durante 30 minutos.

Como se describió anteriormente, la presente descripción se refiere a un uso novedoso de un derivado de sesquiterpeno, más particularmente a una composición para prevenir, mejorar o tratar la degeneración macular o el edema macular causado por la fuga vascular en el ojo, que contiene el compuesto derivado de sesquiterpeno representado por Chemical Fórmula 1 de la presente descripción o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

El compuesto de la presente descripción de Fórmula Química 1 tiene un efecto terapéutico para una enfermedad causada por la fuga vascular en el ojo, como edema macular, degeneración macular, etc., por inhibición de la fuga vascular en el ojo, particularmente en la retina. Además, mientras que los agentes de tratamiento relacionados con enfermedades intraoculares disponibles en el mercado deben inyectarse directamente en la cavidad vítrea, causando así dolor y efectos secundarios, el compuesto derivado de sesquiterpeno de la presente descripción se suministra al tejido diana (ojo) a través de diferentes vías de administración (oral, intraperitoneal, etc.) distintas de la vía intravítrea. En consecuencia, el compuesto derivado de sesquiterpeno proporciona un excelente efecto terapéutico sin estar restringido por las vías de administración. En consecuencia, es altamente aplicable industrialmente.

Aplicabilidad Industrial

El compuesto de la presente descripción de Fórmula Química 1 tiene un efecto terapéutico para una enfermedad causada por la fuga vascular en el ojo, como edema macular, degeneración macular, etc., por inhibición de la fuga vascular en el ojo, particularmente en la retina. Mientras que los agentes de tratamiento relacionados con enfermedades intraoculares disponibles en el mercado deben inyectarse directamente en la cavidad vítrea, causando así dolor y efectos secundarios, el compuesto derivado de sesquiterpeno de la presente descripción se suministra al tejido diana (ojo) a través de diferentes vías de administración (oral, intraperitoneal, etc.) que no sea la vía intravítrea. En consecuencia, el compuesto derivado de sesquiterpeno proporciona un excelente efecto terapéutico sin estar restringido por las vías de administración.

Claims

REIVINDICACIONES

Una composición farmacéutica para el uso en un método para prevenir o tratar la degeneración macular o el edema macular, que comprende un compuesto seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxicidohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

La composición farmacéutica para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la composición se prepara en una formulación seleccionada de un grupo que consiste de un medicamento oral, una inyección, un colirio y un ungüento.

Una composición farmacéutica para el uso en un método para inhibir la fuga vascular en el ojo, que comprende un compuesto seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8ahexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.

Una composición alimenticia para el uso en un método para prevenir o mejorar la degeneración macular o el edema macular, que comprende un compuesto seleccionado de 3-[[(1R,2S,4aS,8aS)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-2-hidroxi-5-metoxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona y 3-[[(1S,2R,4aR,8aR)-1,2,4a-trimetil-5-metilideno-3,4,6,7,8,8a-hexahidro-2H-naftalen-1-il]metil]-5-etoxi-2-hidroxiciclohexa-2,5-dieno-1,4-diona o una de sus sales farmacéuticamente aceptables como un ingrediente activo.