ES2927119T3

ES2927119T3 - Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CD38

Info

Publication number: ES2927119T3
Application number: ES16777327T
Authority: ES
Inventors: Heyue Zhou; John Gray
Original assignee: Sorrento Therapeutics Inc
Current assignee: Sorrento Therapeutics Inc
Priority date: 2015-04-08
Filing date: 2016-04-08
Publication date: 2022-11-02
Anticipated expiration: 2036-04-08
Also published as: JP7273101B2; CN113527495A; TW201702264A; JP7068825B2; US20160297888A1; CN107921122A; CN107921122B; JP2022118222A; EP3280443B1; US10059774B2; EP3280443A4; US20190048092A1; WO2016164669A3; US10800852B2; WO2016164669A2; US20200399395A1; JP2018513149A; US11999792B2; HK1253584A1; JP2021118754A

Abstract

Se describen composiciones y métodos relacionados o derivados de anticuerpos anti-CD38. Más específicamente, se describen anticuerpos completamente humanos que se unen a CD38, fragmentos que se unen al anticuerpo CD38 y derivados de tales anticuerpos, y polipéptidos que se unen a CD38 que comprenden dichos fragmentos. Aún más, se describen ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, células que comprenden dichos polinucleótidos, métodos para producir tales anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, y métodos para usar dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos. , incluidos los métodos para tratar una enfermedad. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Productos terapéuticos de anticuerpos que se unen a CD38

Campo técnico

La presente descripción proporciona composiciones y métodos relacionados o derivados de anticuerpos anti-CD38. Más específicamente, la presente descripción proporciona anticuerpos totalmente humanos que se unen a CD38, fragmentos de unión de anticuerpos hacia CD38 y derivados de tales anticuerpos, y polipéptidos de unión a CD38 que comprenden dichos fragmentos. Además, la presente descripción proporciona ácidos nucleicos que codifican dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, células que comprenden dichos polinucleótidos, métodos para producir tales anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, y métodos para usar dichos anticuerpos, fragmentos de anticuerpos y derivados y polipéptidos, incluyendo métodos para tratar una enfermedad. La referencia en la presente memoria a los métodos de tratamiento debe entenderse como los productos para el uso en el tratamiento.

Antecedentes

CD38 es una glicoproteína transmembrana de tipo II de 45 kD con un dominio extracelular C-terminal largo y un dominio citoplasmático N-terminal corto. La proteína CD38 es una ectoenzima bifuncional que puede catalizar la conversión de NAD+ en ADP-ribosa cíclica (cADPR) y también hidrolizar cADPR hasta ADP-ribosa. Durante la ontogenia, CD38 aparece en las células madre comprometidas CD34+ y los progenitores comprometidos con el linaje de células linfoides, eritroides y mieloides. La expresión de CD38 persiste principalmente en el linaje linfoide con niveles de expresión variables en las diferentes etapas del desarrollo de las células T y B.

CD38 está incrementado en muchas neoplasias malignas hematopoyéticas y en las líneas celulares derivadas de diversas neoplasias hematopoyéticas, incluido el linfoma no Hodgkin (LNH), el linfoma de Burkitt (LB), el mieloma múltiple (MM), la leucemia linfocítica crónica B (LLC-B), la leucemia linfocítica aguda (LLA) B y T, linfoma de células T (LCT), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia de células pilosas (LCP), linfoma de Hodgkin (LH) y leucemia mieloide crónica (LMC). Por otro lado, las células madre pluripotentes más primitivas del sistema hematopoyético son CD38-. La expresión de CD38 en las neoplasias malignas hematopoyéticas y su correlación con la progresión de la enfermedad hace de CD38 un objetivo atractivo para la terapia con anticuerpos anti-CD38.

Se ha informado que CD38 está involucrado en la movilización de Ca2+ (Morra et al., 1998, FASEB J., 12: 581-592; Zilber et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA, 97: 2840-2845) y en la transducción de señales a través de la fosforilación de tirosina de numerosas moléculas de señalización, incluidas la fosfolipasa C-y, ZAP-70, syk y c-cbl, en células o líneas celulares linfoides y mieloides (Funaro et al.. 1993, Eur J Immunol, 23: 2407-2411; Morra et al., 1998, FASEB J., 12: 581-592; Funaro et al., 1990, J Immunol, 145: 2390-2396; Zubiaur et al., 1997, J Immunol, 159: 193-205; Deaglio et al., 2003, Blood 102: 2146-2155; Todisco et al., 2000, Blood, 95: 535-542; Konopleva et al., 1998, J Immunol, 161: 4702-4708; Zilber et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA, 97: 2840-2845; Kitanaka et al., 1997, J Immunol, 159: 184 192; Kitanaka et al., 1999, J Immunol 162: 1952-1958; Mallone et al., 2001, Int Immunol, 13: 397-409). En base a estas observaciones, se propuso que CD38 es una molécula de señalización importante en la maduración y activación de las células linfoides y mieloides durante su desarrollo normal.

El papel exacto de CD38 en la transducción de señales y la hematopoyesis aún no está claro, especialmente porque la mayoría de estos estudios de transducción de señales han utilizado líneas celulares que sobreexpresan ectópicamente CD38 y anticuerpos monoclonales anti-CD38, que son ligandos no fisiológicos. Debido a que la proteína CD38 tiene una actividad enzimática que produce cADPR, una molécula que puede inducir la movilización de Ca2+ (Lee et al., 1989, J Biol Chem, 264:1608-1615; Lee y Aarhus, 1991, Cell Regul, 2: 203-209), se ha propuesto que la unión de CD38 mediante anticuerpos monoclonales desencadena la movilización de Ca2+ y la transducción de señales en linfocitos al aumentar la producción de cADPR (Lee et al., 1997, Adv Exp Med Biol, 419: 411-419). Contrariamente a esta hipótesis, el análisis del truncamiento y la mutación puntual de la proteína CD38 mostró que ni su cola citoplasmática ni su actividad enzimática son necesarias para la señalización mediada por anticuerpos anti-CD38 (Kitanaka et al., 1999, J Immunol, 162: 1952-1958; Lund et al., 1999, J Immunol, 162: 2693-2702; Hoshino et al., 1997, J Immunol, 158, 741-747).

La evidencia de la función de CD38 proviene de ratones con inactivación CD38-/-, que tienen un defecto en su inmunidad innata y una respuesta humoral dependiente de células T reducida debido a un defecto en la migración de las células dendríticas (Partida-Sánchez et al., 2004 Immunity, 20: 279-291; Partida-Sánchez et al., 2001, Nat Med, 7: 1209-1216). Sin embargo, no está claro si la función de CD38 en ratones es idéntica a la de los humanos, ya que el patrón de expresión de CD38 durante la hematopoyesis difiere mucho entre humanos y ratones: a) a diferencia de las células madre progenitoras inmaduras en humanos, las células madre progenitoras similares en ratones expresan un alto nivel de CD38 (Randall et al., 1996, Blood, 87: 4057-4067; Dagher et al., 1998, Biol Blood Marrow Transplant, 4: 69-74), b) mientras que durante el desarrollo de las células B humanas, se encuentran altos niveles de expresión de CD38 en las células B del centro germinal y en las células plasmáticas (Uckun, 1990, Blood, 76: 1908-1923; Kumagai et al., 1995, J Exp Med, 181: 1101-1110), en el ratón, los niveles de expresión de CD38 en las células correspondientes son bajos (Oliver et al., 1997, J Immunol, 158: 1108-1115; Ridderstad y Tarlinton 1998, J Immunol, 160: 4688-4695).

En la bibliografía se han descrito varios anticuerpos anti-CD38 humanos con diferentes propiedades proliferativas en diversas células tumorales y líneas celulares. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico OKT10 con Fab de ratón y Fc de IgG1 humana media en la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) de manera muy eficiente contra las células de linfoma en presencia de células efectoras mononucleares de sangre periférica de pacientes con MM o individuos normales (Stevenson et al., 1991, Blood, 77: 1071-1079). Se ha demostrado que una versión humanizada injertada con CDR del anticuerpo anti-CD38 AT13/5 tiene una potente actividad ADCC contra las líneas celulares positivas para CD38. Se ha demostrado que los anticuerpos monoclonales humanos anti-CD38 median en la destrucción in vitro de líneas celulares positivas para CD38 mediante ADCC y/o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), y para retrasar el crecimiento tumoral en ratones SCID que portan la línea celular de MM RPMI-8226 (documento WO2005/103083 A2). Por otro lado, varios anticuerpos anti-CD38, IB4, SUN-4B7 y OKT10, pero no IB6, AT 1 o AT2, indujeron la proliferación de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de individuos normales (Ausiello et al. 2000, Tissue Antigens, 56: 539-547).

Se ha demostrado que algunos de los anticuerpos del estado de la técnica pueden desencadenar la apoptosis en células B CD38+ . Sin embargo, solo pueden hacerlo en presencia de células del estroma o citocinas derivadas del estroma. Se ha informado que un anticuerpo anti-CD38 agonista (IB4) previene la apoptosis de las células B del centro germinal humano (GC) (Zupo et al. 1994, Eur J Immunol, 24:1218-1222), e induce la proliferación de células de LMA KG-1 y HL-60 (Konopleva et al. 1998, J Immunol, 161: 4702-4708), pero induce la apoptosis en las células linfoblásticas T Jurkat (Mora et al. 1998, FAS^eB J, 12: 581-592). Otro anticuerpo anti-CD38 T16 indujo la apoptosis de células linfoides inmaduras y células linfoblásticas leucémicas de un paciente con LLA (Kumagai et al. 1995, J Exp Med, 181: 1101-1110), y de células mieloblásticas leucémicas de pacientes con LMA (Todisco et al. 2000, Blood, 95: 535-542), pero T16 indujo la apoptosis solo en presencia de células del estroma o citocinas derivadas del estroma (IL-7, IL-3, factor de células madre). Los anticuerpos anti-CD38 se describen en Molecular Medicine 12, 11-12 (2006), págs. 245-346, documento WO2007/042309, Clinical Cancer Research 20, 17 (2014) págs. 4574-4583 y documento US2013/171154.

Resumen

Los aspectos y realizaciones de la presente invención se exponen en las reivindicaciones.

Esta descripción se refiere, al menos en parte, a proteínas capaces de unirse a CD38, p. ej., CD38 humano, incluidos los anticuerpos anti-CD38, y los fragmentos de unión al antígeno de los mismos.

En un aspecto, la presente descripción proporciona un anticuerpo totalmente humano aislado de una clase IgG que se une a un epítopo de CD38, en el que dicho anticuerpo comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos un 99 % idéntica, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N21, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227 y SEQ ID N229, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218 y SEQ ID N220

En un aspecto, la presente descripción proporciona un anticuerpo completamente humano de una clase IgG que se une a un epítopo de CD38 con una afinidad de unión de al menos 10-6 M, que tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N21, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227, SEQ ID N° 29, y combinaciones de los mismos, y tiene una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N2 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de los mismos.

En un aspecto, la presente descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38 completamente humano aislado que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 7, SEQ ID N° 9, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N2 25, SEQ ID N° 27 y SEQ ID N° 29; y que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218 y SEQ ID N220.

En un ejemplo, el anticuerpo anti-CD38 totalmente humano tiene tanto una cadena pesada como una cadena ligera, donde el anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2 (llamada C38A1 en la presente memoria), SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4 (llamada C38A2 en la presente memoria), SEQ ⁱD N° 5/SEQ ID N° 6 (llamada C38B1 en la presente memoria), SEQ ID N° 7/SEQ ID N° 8 (llamada C38B4 en la presente memoria), SEQ ID N° 9/SEQ ID N° 10 (llamada C38B7 en la presente memoria), ^sE^qID N° 11/SEQ ID N° 12 (llamada C38C4 en la presente memoria), SEQ ID N° 13/SEQ ID N° 14 (llamada C38C9 en la presente memoria), SeQ ID N° 15/SEQ ID N° 16 (llamada C38D1 en la presente memoria), SeQ ID N° 17/SEQ ID N° 18 (llamada C38D2 en la presente memoria), SeQ ID N° 19/SEQ ID N° 20 (llamada C38D5 en la presente memoria), S^eQ ID N° 21/SEQ ID N° 22 (llamada C38D8 en la presente memoria), SEQ ID N° 23/SEQ ID N° 24 (llamada C38D10 en la presente memoria), SEQ ID N° 25/SEQ ID N° 26 (llamada C38D11 en la presente memoria), SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28 (llamada C38F8 en la presente memoria), SeQ ID N° 29/SEQ ID N° 30 (llamada C38G8 en la presente memoria), y combinaciones de las mismas.

En un ejemplo, la presente descripción proporciona un fragmento Fab de anticuerpo completamente humano anti-CD38, que tiene una región del dominio variable de una cadena pesada y una región del dominio variable de una cadena ligera, en el que el dominio variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos un 99 % idéntica, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227, SEQ ID N229, y combinaciones de las mismos, y comprende un dominio variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica , a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N230, y combinaciones de las mismas. En un ejemplo, el fragmento Fab del anticuerpo completamente humano tiene una región del dominio variable de la cadena pesada y una región del dominio variable de la cadena ligera en la que el anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2, SEQ ID N23/SEQ ID N24, SEQ ID N25/SEQ ID N26, SEQ ID N27/SEQ ID N28, SEQ ID N29/SEQ ID N210, SEQ ID N211/SEQ ID N212, SEQ ID N213/SEQ ID N214, SEQ ID N215/SEQ ID N216, SEQ ID N217/SEQ ID N218, SEQ ID N219/SEQ ID N220, SEQ ID N221/SEQ ID N222, SEQ ID N223/SEQ ID N224, SEQ ID N225/SEQ ID N226, SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 29/SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

La descripción presenta un fragmento Fab de anticuerpo completamente humano, que comprende un dominio variable de la cadena pesada y un dominio variable de la cadena ligera, en el que el dominio variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227, SEQ ID N229, y el dominio variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N230.

La presente descripción proporciona un anticuerpo humano de cadena sencilla anti-CD38, que tiene una región del dominio variable de una cadena pesada y una región del dominio variable de una cadena ligera y un conector peptídico que conecta las regiones del dominio variable de la cadena pesada y la cadena ligera, en el que el dominio variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y en el que el dominio variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N230, y combinaciones de las mismas.

La descripción incluye un anticuerpo de cadena sencilla totalmente humano que comprende una región del dominio variable de la cadena pesada y una región del dominio variable de la cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano de cadena sencilla tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N21/SEQ ID N22, SEQ ID N23/SEQ ID N24, SEQ ID N25/SEQ ID N26, SEQ ID N27/SEQ ID N28, SEQ ID N29/SEQ ID N210, SEQ ID N211/SEQ ID N212, SEQ ID N213/SEQ ID N214, SEQ ID N2 15/SEQ ID N216, SEQ ID N217/SEQ ID N218, SEQ ID N219/SEQ ID N220, SEQ ID N221/SEQ ID N222, SEQ ID N2 23/SEQ ID N224, SEQ ID N225/SEQ ID N226, SEQ ID N227/SEQ ID N228, SEQ ID N229/SEQ ID N230, y combinaciones de las mismas.

La descripción proporciona un anticuerpo humano de cadena sencilla anti-CD38, que comprende una región del dominio variable de una cadena pesada y una región del dominio variable de una cadena ligera y un conector peptídico que conecta las regiones del dominio variable de la cadena pesada y la cadena ligera, en el que el dominio variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227, SEQ ID N229, y en el que el dominio variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

También se incluye en la descripción un anticuerpo anti-CD38 aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) como se establece en una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 7, SEQ ID N° 9, SEQ ID N° 11, SEQ ID N° 13, SEQ ID N° 15, SEQ ID N° 17, SEQ ID N° 19, SEQ ID N° 21, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27 y SEQ ID N° 29, y que comprende una región variable de la cadena ligera que comprende CDR como se establece en una secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28 y SEQ ID N° 30.

En un ejemplo, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo totalmente humano anti-CD38 tiene un dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95% idéntico, al menos un 96% idéntico, al menos un 97% idéntico, al menos un 98% idéntico o al menos un 99% % idéntico, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 7, SEQ ID N° 9, SEQ ID N° 11, SEQ ID N° 13, SEQ ID N° 15, SEQ ID N° 17, SEQ ID N° 19, SEQ ID N° 21, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y combinaciones de los mismos, y tiene un dominio variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica, a una secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas. En un ejemplo, el anticuerpo completamente humano, o fragmento de anticuerpo, comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 7, SEQ ID N° 9, SEQ ID N° 11, SEQ ID N° 13, SEQ ID N° 15, SEQ ID N° 17, SEQ ID N° 19, SEQ ID N° 21, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y combinaciones de las mismas, y comprende un dominio variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

En algunos ejemplos, el anticuerpo completamente humano anti-CD38 tiene tanto una cadena pesada como una cadena ligera en donde el anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2 (llamada C38A1 en la presente memoria), SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4 (llamada C38A2 en la presente memoria), SEQ ID N° 5/SEQ ID N° 6 (llamada C38B1 en la presente memoria), SEQ ID N° 7/SEQ ID N° 8 (llamada C38B4 en la presente memoria), SEQ ID N° 9/SEQ ID N° 10 (llamada C38B7 en la presente memoria), SEQ ID N° 11/SEQ ID N° 12 (llamada C38C4 en la presente memoria), SEQ ID N° 13/SEQ ID N° 14 (llamada C38C9 en la presente memoria), SEQ ID N° 15/SEQ ID N° 16 (llamada C38D1 en la presente memoria), SEQ ⁱD N° 17/SEQ ID N° 18 (llamada C38D2 en la presente memoria), SEQ ⁱD N° 19/SEQ ID N° 20 (llamada C38D5 en la presente memoria), SEQ ID N° 21/SEQ ID N° 22 (llamada C38D8 en la presente memoria), SEQ ID N° 23/SEQ ID N° 24 (llamada C38D10 en la presente memoria), SEQ ID N° 25/SEQ ID N° 26 (llamada C38D11 en la presente memoria), SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28 (llamada C38F8 en la presente memoria), s Eq ID N° 29/SEQ ID N° 30 (llamada C38G8 en la presente memoria), y combinaciones de las mismas. En otros ejemplos, el anticuerpo de cadena sencilla totalmente humano tiene una región del dominio variable de la cadena pesada y una región del dominio variable de la cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano de cadena sencilla tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 5/SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 7/SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 9/SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 11/SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 13/SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 15/SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 17/SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 19/SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 21/SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 23/SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 25/SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 29/SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

La presente descripción proporciona además un método para tratar un amplio espectro de cánceres de mamíferos, que comprende administrar un polipéptido anti-CD38, p. ej., un anticuerpo anti-CD38 humano, o un fragmento de unión al antígeno del mismo.

En algunas realizaciones, el amplio espectro de cánceres de mamíferos a tratar se selecciona del grupo que consiste en linfoma no Hodgkin (LNH), linfoma de Burkitt (LB), mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica B (LLC-B), leucemia linfocítica aguda (LLA) B y T, linfoma de células T (LCT), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia de células pilosas (LCP), linfoma de Hodgkin (LH) y leucemia mieloide crónica (LMC).

En algunos ejemplos, el anticuerpo anti-CD38, o su fragmento de unión al antígeno, tiene una K^dde al menos 1 x 10 6 M. En otros ejemplos, el anticuerpo anti-CD38, o su fragmento de unión al antígeno, tiene una K^dde al menos 1 x 10-7 M. En otras realizaciones, el anticuerpo anti-CD38, o su fragmento de unión al antígeno, tiene una K^dde al menos 1 x 10-8 M; al menos 1 x 10-9 M, o al menos 1 x 10-10 M.

El anticuerpo anti-CD38 es una IgG. En algunos ejemplos, el anticuerpo anti-CD38 es un ¡sotipo IgG1. En otros ejemplos, el anticuerpo anti-CD38 es un isotipo IgG4.

En algunos ejemplos, el anticuerpo anti-CD38, o el fragmento de unión al antígeno, descrito en la presente memoria es recombinante. En algunos ejemplos, el anticuerpo anti-CD38, o el fragmento de unión al antígeno, descrito en la presente memoria es un anticuerpo humano, o un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo.

La descripción también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de anticuerpos anti-CD38 o los fragmentos descritos en la presente memoria, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Descripción del dibujo

La Figura 1 es un gráfico que muestra los resultados de un ensayo de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) para evaluar la capacidad de los anticuerpos anti-CD38 C38A2 ("38-A2"), C38D8 ("38-D8") y C38D4 ("38-D4") de unirse a las células que expresan CD38 y promover la actividad funcional. Se determinó el porcentaje (%) de citotoxicidad de cada uno de los anticuerpos ensayados. Los datos de la Figura 1 muestran que los anticuerpos anti-CD38 38-A2 y 38-D8 se unieron y promovieron la actividad de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC) contra las células Ramos seleccionadas como objetivo. Se usó un anticuerpo IgG coincidente como control. El ensayo de ADCC se realiza incubando células citolíticas naturales (células efectoras) con células tumorales recubiertas de anticuerpos (células objetivo). La proporción de células NK respecto de las células tumorales se denomina proporción E:T (proporción efector respecto del objetivo).

Descripción detallada

Definiciones

Cada uno de los términos "péptido", "polipéptido" y "proteína" se refiere a una molécula que comprende dos o más residuos de aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos. Estos términos abarcan, por ejemplo, las proteínas nativas y artificiales, fragmentos de proteínas y análogos de polipéptidos (tales como muteínas, variantes y proteínas de fusión) de una secuencia de proteínas, así como proteínas modificadas postraduccionalmente, o de otro modo covalentemente o no covalentemente. Un péptido, polipéptido o proteína puede ser monomérico o polimérico.

Una "variante" de un polipéptido (por ejemplo, una variante de un anticuerpo) comprende una secuencia de aminoácidos en la que se insertan, eliminan y/o sustituyen uno o más residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos respecto de otra secuencia polipeptídica. Las variantes descritas incluyen, por ejemplo, las proteínas de fusión.

Un "derivado" de un polipéptido es un polipéptido (p. ej., un anticuerpo) que se ha modificado químicamente, p. ej., mediante conjugación con otro resto químico (como, por ejemplo, polietilenglicol o albúmina, p. ej., albúmina sérica humana), fosforilación y glicosilación. A menos que se indique lo contrario, el término "anticuerpo" incluye, además de los anticuerpos que comprenden dos cadenas pesadas de longitud completa y dos cadenas ligeras de longitud completa, los derivados, variantes, fragmentos y muteínas de los mismos, cuyos ejemplos se describen a continuación.

Una "proteína de unión al antígeno" es una proteína que comprende una porción que se une a un antígeno y, opcionalmente, una porción de armazón o estructura que permite que la porción de unión al antígeno adopte una conformación que promueva la unión de la proteína de unión al antígeno con el antígeno. Los ejemplos de proteínas de unión al antígeno incluyen anticuerpos, fragmentos de anticuerpos (p. ej., una parte de un anticuerpo que se une al antígeno), derivados de anticuerpos y análogos de anticuerpos. La proteína de unión al antígeno puede comprender, por ejemplo, un armazón proteico alternativo o un armazón artificial con CDR injertadas o derivados de CDR. Dichos armazones incluyen, pero sin limitación, armazones derivados de anticuerpos que comprenden mutaciones introducidas, por ejemplo, para estabilizar la estructura tridimensional de la proteína de unión al antígeno, así como armazones totalmente sintéticos que comprenden, por ejemplo, un polímero biocompatible. Véase, por ejemplo, Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, volumen 53, número 1: 121-129; Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654. Además, se pueden usar moléculas miméticas de anticuerpos peptídicos ("PAM"), así como armazones basados en moléculas miméticas de anticuerpos que utilizan componentes de fibronectina como armazones.

Una proteína de unión al antígeno puede tener, por ejemplo, la estructura de una inmunoglobulina. Una "inmunoglobulina" es una molécula tetramérica, compuesta por dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, y cada par tiene una cadena "ligera" (alrededor de 25 kDa) y una cadena "pesada" (alrededor de 50-70 kDa). La porción amino-terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos principalmente responsables del reconocimiento del antígeno. La porción carboxi-terminal de cada cadena define una región constante principalmente responsable de la función efectora. Las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras kappa o lambda. Las cadenas pesadas se clasifican como mu, delta, gamma, alfa o épsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Preferiblemente, los anticuerpos anti-EGFR descritos en la presente memoria se caracterizan por sus secuencias de la región del dominio variable de las secuencias de aminoácidos de V^hpesada y V^lligera. El anticuerpo preferido es A6, que es un anticuerpo kappa IgG.

Dentro de las cadenas ligeras y pesadas, las regiones variables y constantes están unidas por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos, y la cadena pesada también incluye una región "D" de aproximadamente 10 aminoácidos más. Véase en general, Fundamental Immunology, cap. 7 (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N.Y. (1989)). Las regiones variables de cada par de cadenas ligera/pesada forman el sitio de unión del anticuerpo, de manera que una inmunoglobulina intacta tiene dos sitios de unión.

Las regiones variables de las cadenas de inmunoglobulinas exhiben la misma estructura general de regiones estructurales (FR) relativamente conservadas unidas por tres regiones hipervariables, también denominadas regiones determinantes de la complementariedad o CDR. Desde el extremo N hasta el extremo C, tanto la cadena ligera como la pesada comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio está de acuerdo con las definiciones de Kabat et al. en Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed., Departamento de Salud y Servicios Humanos de EE. UU., PHS, NIH, publicación del NIH n° 91-3242, 1991. Otros sistemas de numeración para los aminoácidos en las cadenas de inmunoglobulina incluyen IMGT.RTM. (sistema de información internacional ImMunoGeneTics; Lefranc et al, Dev. Comp. Immunol. 29:185-203; 2005) y AHo (Honegger y Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001).

Un "anticuerpo" se refiere a una inmunoglobulina intacta o a una porción de la misma que se une al antígeno que compite con el anticuerpo intacto por la unión específica, a menos que se especifique lo contrario. En un ejemplo, un anticuerpo comprende dos cadenas pesadas idénticas, cada una de las cuales comprende un dominio variable de la cadena pesada (VH) y regiones constantes de la cadena pesada C^h1, C^h2y C^h3; y comprende dos cadenas ligeras idénticas, cada una de las cuales comprende un dominio variable de la cadena ligera (VL) y una región constante de la cadena ligera (C^l). Las secuencias del dominio variable de la cadena pesada y ligera pueden seleccionarse de las descritas en la presente memoria en SEQ ID N°: 1 a 30.

En algunos ejemplos, los anticuerpos se pueden obtener de fuentes tales como suero o plasma que contienen inmunoglobulinas que tienen una especificidad antigénica variada. Si tales anticuerpos se someten a purificación por afinidad, pueden enriquecerse en una especificidad antigénica particular. Estas preparaciones enriquecidas de anticuerpos normalmente se fabrican con menos del 10% de anticuerpo que tiene una actividad de unión específica hacia el antígeno particular. Someter estas preparaciones a varias rondas de purificación por afinidad puede aumentar la proporción de anticuerpos que tienen una actividad de unión específica hacia el antígeno. Los anticuerpos preparados de esta manera a menudo se denominan "monoespecíficos".

Las preparaciones de anticuerpos monoespecíficos pueden estar formadas por aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 99 % , o 99,9 % de anticuerpo que tiene una actividad de unión específica hacia el antígeno particular.

En determinados ejemplos, una proteína de unión al antígeno, como un anticuerpo, puede tener uno o más sitios de unión. Si hay más de un sitio de unión, los sitios de unión pueden ser idénticos entre sí o pueden ser diferentes. Por ejemplo, una inmunoglobulina humana natural normalmente tiene dos sitios de unión idénticos, mientras que un anticuerpo "biespecífico" o "bifuncional" tiene dos sitios de unión diferentes.

Un "fragmento de anticuerpo" o "fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo intacto, y preferiblemente comprende los dominios variables o de unión al antígeno del anticuerpo. Los ejemplos de un fragmento de anticuerpo incluyen, pero sin limitación, un Fab, un Fab', un F(ab')², un fragmento Fv y un anticuerpo lineal. Los fragmentos de anticuerpos también se denominan "porciones de anticuerpos".

Las porciones (o fragmentos) de unión al antígeno de un anticuerpo pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante o mediante escisión enzimática o química de anticuerpos intactos. Las porciones de unión al antígeno incluyen, entre otras cosas, Fab, Fab', F(ab')², Fv, anticuerpos de dominio (dAbs) y fragmentos de la región determinante de la complementariedad (CDR), anticuerpos de cadena sencilla (scFv), anticuerpos quiméricos, diacuerpos, triacuerpos, tetracuerpos y polipéptidos que contienen al menos una porción de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir la unión específica del antígeno al polipéptido.

Un fragmento Fab es un fragmento monovalente que tiene los dominios VL, VH, CL y CH1; un fragmento F(ab^')2es un fragmento bivalente que tiene dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd tiene los dominios VH y CH1; un fragmento Fv tiene los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; y un fragmento dAb tiene un dominio VH, un dominio VL o un fragmento de unión al antígeno de un dominio VH o VL (patentes de EE. UU. 6.846.634; 6.696.245, publicaciones de solicitudes de EE. UU. 20/0202512; 2004/0202995; 2004/0038291; 2004/0009507;20 03/0039958, y Ward et al., Nature 341:544-546, 1989).

Los diacuerpos son anticuerpos bivalentes que comprenden dos cadenas polipeptídicas, donde cada cadena polipeptídica comprende dominios VH y VL unidos por un conector que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre dos dominios en la misma cadena, lo que permite que cada dominio se empareje con un dominio complementario de otra cadena polipeptídica (véase, por ejemplo, Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, y Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-23). Si las dos cadenas polipeptídicas de un diacuerpo son idénticas, el diacuerpo resultante de su emparejamiento tendrá dos sitios de unión al antígeno idénticos. Las cadenas polipeptídicas que tienen diferentes secuencias se pueden usar para hacer un diacuerpo con dos sitios de unión al antígeno diferentes. De manera similar, los tricuerpos y tetracuerpos son anticuerpos que comprenden tres y cuatro cadenas polipeptídicas, respectivamente, y que forman tres y cuatro sitios de unión al antígeno, respectivamente, que pueden ser iguales o diferentes.

El término "anticuerpo humano" incluye los anticuerpos que tienen una o más regiones variables y constantes derivadas de secuencias de inmunoglobulinas humanas. Todos los dominios variables y constantes del anticuerpo derivan de secuencias de inmunoglobulinas humanas (denominadas "anticuerpo completamente humano"). Estos anticuerpos se pueden preparar de diversas formas, ejemplos de los cuales se describen a continuación, incluida la inmunización con un antígeno de interés de un ratón modificado genéticamente para expresar anticuerpos derivados de genes humanos que codifican cadenas pesadas y/o ligeras. En un ejemplo preferido, se fabrica un anticuerpo completamente humano utilizando métodos recombinantes de manera que el patrón de glicosilación del anticuerpo es diferente al de un anticuerpo que tiene la misma secuencia si existiera en la naturaleza.

Un "anticuerpo humanizado" tiene una secuencia que difiere de la secuencia de un anticuerpo derivado de una especie no humana en una o más sustituciones, deleciones y/o adiciones de aminoácidos, de modo que es menos probable que el anticuerpo humanizado induzca una respuesta inmunitaria, y/o induce una respuesta inmunitaria menos grave, en comparación con el anticuerpo de especies no humanas, cuando se administra a un sujeto humano. En un ejemplo, algunos aminoácidos del armazón y los dominios constantes de las cadenas pesada y/o ligera del anticuerpo de especies no humanas se mutan para producir el anticuerpo humanizado. En otro ejemplo, los dominios constantes de un anticuerpo humano se fusionan con los dominios variables de una especie no humana. En otro ejemplo, se cambian uno o más residuos de aminoácidos en una o más secuencias de CDR de un anticuerpo no humano para reducir la probable inmunogenicidad del anticuerpo no humano cuando se administra a un sujeto humano, donde los residuos de aminoácidos modificados o no son críticos para la unión inmunoespecífica del anticuerpo a su antígeno, o los cambios en la secuencia de aminoácidos que se realizan son cambios conservativos, de modo que la unión del anticuerpo humanizado al antígeno no es significativamente peor que la unión del anticuerpo no humano al antígeno. Se pueden encontrar ejemplos de cómo hacer anticuerpos humanizados en las patentes de EE. UU. 6.054.297, 5.886.152 y 5.877.293.

El término "anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo que contiene una o más regiones de un anticuerpo y una o más regiones de uno o más anticuerpos. En un ejemplo, una o más de las CDR derivan de un anticuerpo anti-CD38 humano. En otro ejemplo, todas las CDR derivan de un anticuerpo anti-CD38 humano. En otro ejemplo, las CDR de más de un anticuerpo anti-CD38 humano se mezclan y emparejan en un anticuerpo quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer anticuerpo anti-PAR-2 humano, una CDR2 y una CDR3 de la cadena ligera de un segundo anticuerpo anti-CD38 humano y las CDR de la cadena pesada de un tercer anticuerpo anti-CD38. Son posibles otras combinaciones.

Además, las regiones del armazón pueden derivar de uno de los mismos anticuerpos anti-CD38, de uno o más anticuerpos diferentes, como un anticuerpo humano, o de un anticuerpo humanizado. En un ejemplo de un anticuerpo quimérico, una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica, homóloga o derivada de un anticuerpo de una especie particular o perteneciente a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la(s) cadena(s) es/son idéntica(s), homóloga(s) o derivada(s) de un/varios anticuerpo(s) de otra especie o perteneciente(s) a otra clase o subclase de anticuerpos. También se incluyen fragmentos de dichos anticuerpos que exhiben la actividad biológica deseada (es decir, la capacidad de unirse específicamente a CD38).

Un "anticuerpo injertado con CDR" es un anticuerpo que comprende una o más CDR derivadas de un anticuerpo de una especie o isotipo particular y el armazón de otro anticuerpo de la misma o diferente especie o isotipo.

Un "anticuerpo multiespecífico" es un anticuerpo que reconoce más de un epítopo en uno o más antígenos. Una subclase de este tipo de anticuerpo es un "anticuerpo biespecífico" que reconoce dos epítopos distintos en antígenos iguales o diferentes.

Una proteína de unión al antígeno "se une específicamente" a un antígeno (p. ej., CD38 humano) si se une al antígeno con una constante de disociación de 1 nanomolar o menos.

Un "dominio de unión al antígeno", "región de unión al antígeno" o "sitio de unión al antígeno" es una porción de una proteína de unión al antígeno que contiene residuos de aminoácidos (u otros restos) que interactúan con un antígeno y contribuyen a la especificidad de la proteína de unión al antígeno y a la afinidad por el antígeno. Para un anticuerpo que se une específicamente a su antígeno, esto incluirá al menos parte de al menos uno de sus dominios de CDR.

La expresión "polipéptido de Fc" incluye las formas nativas y de muteína de los polipéptidos derivados de la región Fc de un anticuerpo. También se incluyen las formas truncadas de tales polipéptidos que contienen la región bisagra que promueve la dimerización. Las proteínas de fusión que comprenden fracciones de Fc (y los oligómeros formados a partir de las mismas) ofrecen la ventaja de una fácil purificación mediante cromatografía de afinidad en columnas de Proteína A o Proteína G.

Un "epítopo" es la porción de una molécula que se une a una proteína de unión al antígeno (p. ej., a un anticuerpo). Un epítopo puede comprender porciones no contiguas de la molécula (p. ej., en un polipéptido, residuos de aminoácidos que no están contiguos en la secuencia primaria del polipéptido pero que, en el contexto de la estructura terciaria y cuaternaria del polipéptido, están lo suficientemente cerca uno del otro para unirse a una proteína de unión al antígeno).

El "porcentaje de identidad" o el "porcentaje de homología" de dos secuencias polinucleotídicas o polipeptídicas se determina comparando las secuencias utilizando el programa informático GAP (una parte del paquete GCG Wisconsin, versión 10.3 (Accelrys, San Diego, California)) utilizando sus parámetros predeterminados.

Los términos "polinucleótido", "oligonucleótido" y "ácido nucleico" se usan indistintamente e incluyen moléculas de ADN (por ejemplo, ADNc o ADN genómico), moléculas de ARN (por ejemplo, ARNm), análogos del ADN o ARN generados usando análogos de nucleótidos (por ejemplo, ácidos nucleicos peptídicos y análogos de nucleótidos no naturales) e híbridos de los mismos. La molécula de ácido nucleico puede ser monocatenaria o bicatenaria. En un ejemplo, las moléculas de ácido nucleico comprenden un marco de lectura abierto contiguo que codifica un anticuerpo, o un fragmento, derivado, muteína o variante del mismo.

Dos polinucleótidos monocatenarios son "el complemento" entre sí si sus secuencias se pueden alinear en una orientación antiparalela de modo que cada nucleótido de un polinucleótido esté opuesto a su nucleótido complementario en el otro polinucleótido, sin la introducción de huecos y sin nucleótidos desapareados en el extremo 5' o 3' de cualquiera de las secuencias. Un polinucleótido es "complementario" de otro polinucleótido si los dos polinucleótidos pueden hibridarse entre sí en condiciones moderadamente estrictas. Así, un polinucleótido puede ser complementario de otro polinucleótido sin ser su complemento.

Un "vector" es un ácido nucleico que se puede utilizar para introducir otro ácido nucleico unido a él en una célula. Un tipo de vector es un "plásmido", que se refiere a una molécula de ADN bicatenaria lineal o circular en la que se pueden ligar segmentos de ácido nucleico adicionales. Otro tipo de vector es un vector vírico (p. ej., retrovirus, adenovirus y virus adenoasociados sin capacidad de replicación), en el que pueden introducirse segmentos de ADN adicionales en el genoma vírico. Algunos vectores son capaces de replicación autónoma en una célula huésped en la que se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que comprenden un origen de replicación bacteriano y vectores episómicos de mamíferos). Otros vectores (p. ej., vectores de mamíferos no episómicos) se integran en el genoma de una célula huésped tras la introducción en la célula huésped y, por lo tanto, se replican junto con el genoma huésped. Un "vector de expresión" es un tipo de vector que puede dirigir la expresión de un polinucleótido elegido.

Una secuencia de nucleótidos está unida de forma operable a una secuencia reguladora si la secuencia reguladora afecta a la expresión (p. ej., el nivel, el momento o la ubicación de la expresión) de la secuencia de nucleótidos. Una "secuencia reguladora" es un ácido nucleico que afecta a la expresión (p. ej., el nivel, el momento o la ubicación de la expresión) de un ácido nucleico al que está unida de forma operable. La secuencia reguladora puede, por ejemplo, ejercer sus efectos directamente sobre el ácido nucleico regulado, o mediante la acción de una o más moléculas (por ejemplo, polipéptidos que se unen a la secuencia reguladora y/o al ácido nucleico). Los ejemplos de secuencias reguladoras incluyen promotores, potenciadores y otros elementos de control de la expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación). Otros ejemplos de secuencias reguladoras se describen, por ejemplo, en Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California y Baron et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:3605-06.

Una "célula huésped" es una célula que puede usarse para expresar un ácido nucleico. Una célula huésped puede ser un procariota, por ejemplo, E. coli, o puede ser un eucariota, por ejemplo, un eucariota unicelular (p. ej., una levadura u otro hongo), una célula vegetal (p. ej., una planta de tabaco o tomate), una célula animal (por ejemplo, una célula humana, una célula de mono, una célula de hámster, una célula de rata, una célula de ratón o una célula de insecto) o un hibridoma. Los ejemplos de células huésped incluyen la línea COS-7 de células de riñón de mono (ATCC CRL 1651) (véase Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), células L, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovario de hámster chino (CHO) o sus derivados, como Veggie CHO y líneas celulares relacionadas que crecen en medios sin suero (véase Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28:31) o la cepa CHO DX-B11, que es deficiente en DHFR (véase Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-20), células HeLa, líneas celulares BHK (ATCC CRL 10), la línea celular CV1/EBNA derivada de la línea celular de riñón de mono verde africano CV1 (ATCC CCL 70) (véase McMahan et al., 1991, EMBO J. 10:2821), células de riñón embrionario humano como 293, 293 EBNA o Ms R 293, células epidérmicas humanas A431, células Colo205 humanas, otras líneas celulares de primates transformadas, células diploides normales, cepas celulares derivadas del cultivo in vitro de tejido primario, explantes primarios, células HL-60, U937, HaK o Jurkat. En un ejemplo, una célula huésped es una célula huésped de mamífero, pero no es una célula huésped humana. Normalmente, una célula huésped es una célula cultivada que se puede transformar o transfectar con un ácido nucleico que codifica un polipéptido, que luego se puede expresar en la célula huésped. La frase "célula huésped recombinante" se puede utilizar para indicar una célula huésped que se ha transformado o transfectado con un ácido nucleico a expresar. Una célula huésped también puede ser una célula que comprende el ácido nucleico pero que no lo expresa a un nivel deseado a menos que se introduzca una secuencia reguladora en la célula huésped, de manera que se una de forma operable con el ácido nucleico. Se entiende que la expresión célula huésped se refiere no sólo a la célula objetivo particular, sino también a la progenie o la progenie potencial de tal célula. Debido a que pueden ocurrir algunas modificaciones en las generaciones sucesivas debido, por ejemplo, a la mutación o la influencia ambiental, dicha progenie puede, de hecho, no ser idéntica a la célula original, pero todavía está incluida dentro del alcance de la expresión como se usa en la presente memoria.

La expresión "anticuerpo recombinante" se refiere a un anticuerpo que se expresa a partir de una célula o línea celular transfectada con un vector de expresión (o más de un vector de expresión) que comprende la secuencia codificante del anticuerpo, o una porción de la misma (p. ej., una secuencia de ADN que codifica una cadena pesada o una cadena ligera). En un ejemplo, dicha secuencia codificante no está asociada naturalmente a la célula. En un ejemplo, un anticuerpo recombinante tiene un patrón de glicosilación que es diferente al patrón de glicosilación de un anticuerpo que tendría la misma secuencia si existiera en la naturaleza. En un ejemplo, un anticuerpo recombinante se expresa en una célula huésped de mamífero que no es una célula huésped humana. En particular, las células huésped de mamífero individuales tienen patrones de glicosilación únicos.

La expresión "cantidad eficaz", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a la cantidad de un anticuerpo, o una porción de unión al antígeno del mismo que se une a CD38, que es suficiente para efectuar el tratamiento de una enfermedad cuando se administra a un sujeto. Las cantidades terapéuticamente eficaces de los anticuerpos proporcionados en la presente memoria, cuando se usan solos o en combinación, variarán dependiendo de la actividad relativa de los anticuerpos y las combinaciones (p. ej., en la inhibición del crecimiento celular) y dependiendo del sujeto y el estado de la enfermedad que se esté tratando, el peso y la edad del sujeto, la gravedad del estado de la enfermedad, la forma de administración y similares, que alguien de experiencia habitual en la técnica puede determinar fácilmente.

El término "aislado" se refiere a una proteína (p. ej., un anticuerpo) que está sustancialmente libre de otro material celular. En un ejemplo, un anticuerpo aislado está sustancialmente libre de otras proteínas de la misma especie. En un ejemplo, una célula de una especie diferente expresa un anticuerpo aislado y está sustancialmente libre de otras proteínas de la especie diferente. Una proteína puede quedar sustancialmente libre de componentes asociados de forma natural (o componentes asociados con el sistema de expresión celular utilizado para producir el anticuerpo) mediante aislamiento, utilizando métodos de purificación de proteínas bien conocidos en la técnica. Los anticuerpos anti-CD38 de la invención están aislados.

Un "anticuerpo neutralizante" o un "anticuerpo inhibidor" es un anticuerpo que inhibe la activación proteolítica de CD38 cuando un exceso del anticuerpo anti-CD38 reduce la cantidad de activación en al menos un 20 % utilizando un ensayo como los descritos en la presente memoria en los ejemplos. En varios ejemplos, la proteína de unión al antígeno reduce la cantidad de activación proteolítica de CD38 en al menos un 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % , 97%, 99% y 99,9%.

Proteínas de unión al antígeno CD38

La presente descripción se refiere a proteínas de unión a CD38, en particular anticuerpos anti-CD38, o fragmentos de unión al antígeno de los mismos (por ejemplo, anticuerpos humanos anti-CD38 y fragmentos de anticuerpos) que se unen a CD38, por ejemplo, CD38 humano, y los usos de los mismos. Diversos aspectos de la descripción se relacionan con anticuerpos y fragmentos de anticuerpos, composiciones farmacéuticas, ácidos nucleicos, vectores de expresión recombinantes y células huésped para producir dichos anticuerpos y fragmentos. También se describen métodos de uso de los anticuerpos para detectar CD38 humano, para inhibir la actividad de CD38, ya sea in vitro o in vivo, y para prevenir o tratar trastornos tales como el cáncer.

Como se describe en la Tabla 1 más adelante, hay nuevas regiones variables de la cadena pesada y ligera del anticuerpo que son específicas de CD38. La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una cadena pesada que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 7, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N2 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27 y SEQ ID N° 29. La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una cadena ligera que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de S^eQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28 y SEQ ID N° 30. La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una cadena ligera que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28 y SEQ ID N° 30; y una cadena pesada que tiene un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227 y SEQ ID N229.

Las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) se conocen como regiones hipervariables tanto en los dominios variables de la cadena ligera como de la cadena pesada. Las porciones más altamente conservadas de los dominios variables se denominan armazones (FR). Las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) y las regiones del armazón (FR) de un anticuerpo dado pueden identificarse usando el sistema descrito por Kabat et al., anteriormente mencionado; Lefranc et al., anteriormente mencionado y/o Honegger y Pluckthun, anteriormente mencionado. También es familiar para los expertos en la técnica el sistema de numeración descrito en Kabat et al. (1991, Publicación del NIH 91-3242, Servicio Nacional de Información Técnica, Springfield, Va.). En este sentido, Kabat et al. definió un sistema de numeración para secuencias de dominio variable que es aplicable a cualquier anticuerpo. Alguien de experiencia habitual en la técnica puede asignar sin ambigüedades este sistema de "numeración de Kabat" a cualquier secuencia de aminoácidos del dominio variable, sin depender de ningún dato experimental más allá de la propia secuencia.

La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38 que comprende las CDR de un dominio variable de la cadena ligera y pesada como se describe en la Tabla 1 (SEQ ID N°: 1 a 30). Por ejemplo, la descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene CDR descritas en una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N21, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227 y SEQ ID N229. La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene CDR descritas en una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228 y SEQ ID N2 30. La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene CDR descritas en una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18 y SEQ ID N° 20; y una región variable de la cadena pesada que tiene CDR descritas en una secuencia de aminoácidos como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227 y SEQ ID N229.

La presente descripción proporciona un anticuerpo completamente humano de una clase IgG que se une a un epítopo de CD38 con una afinidad de unión de al menos 10-6 M, que tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID N21, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227, SEQ ID N229, y combinaciones de las mismas, y que tiene una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a las secuencias de aminoácidos que consisten en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas. En un ejemplo, el anticuerpo totalmente humano tiene tanto una cadena pesada como una cadena ligera, donde el anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2 (llamada C38A1 en la presente memoria), SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4 (llamada C38A2 en la presente memoria), SEQ ID N° 5/SEQ ID N° 6 (llamada C38B1 en la presente memoria), SEQ ID N° 7/SEQ ID N° 8 (llamada C38B4 en la presente memoria), SEQ ID N° 9/SEQ ID N° 10 (llamada C38B7 en la presente memoria), SEQ ID N° 11/SEQ ID N° 12 (llamada C38C4 en la presente memoria), SeQ ID N° 13/SEQ ID N° 14 (llamada C38C9 en la presente memoria), SEQ ID N° 15/SEQ ID N° 16 (llamada C38D1 en la presente memoria), SEQ ⁱD N° 17/SEQ ID N° 18 (llamada C38D2 en la presente memoria), SEQ ID N° 19/SEQ ID N° 20 (llamada C38D5 en la presente memoria), SEQ ID N° 21/SEQ ID N° 22 (llamada C38D8 en la presente memoria), SeQ ID N° 23/SEQ ID N° 24 (llamada C38D10 en la presente memoria), SEQ ID N° 25/SEQ ID N° 26 (llamada C38D11 en la presente memoria), SeQ ID N° 27/SEQ ID N° 28 (llamada C38F8 en la presente memoria), SEQ ID N° 29/SEQ ID N° 30 (llamada C38G8 en la presente memoria), y combinaciones de las mismas.

La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una cadena pesada que comprende un dominio CDR3 como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N2 19, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227 y SEQ ID N229, y que comprende un dominio variable que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 1, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227 y SEQ ID N229. La descripción proporciona un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una cadena ligera que comprende un dominio CDR3 como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 2, SeQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28 y SEQ ID N° 30, y que comprende un dominio variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % idéntica a una secuencia como se establece en cualquiera de SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N2 20, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228 y SEQ ID N230. Por lo tanto, en algunos ejemplos, el dominio CDR3 se mantiene constante, mientras que la variabilidad puede introducirse en las CDR restantes y/o regiones del armazón de las secuencias de la región variable de la cadena pesada y/o ligera descritas en la presente memoria, mientras que el anticuerpo o el fragmento de unión al antígeno del mismo, retiene la capacidad de unirse a CD38 y retiene las características funcionales, por ejemplo, la afinidad de unión, de la molécula original.

Las sustituciones realizadas dentro de una cadena pesada o ligera que es al menos un 95 % idéntica (o al menos un 96 % idéntica, o al menos un 97 % idéntica, o al menos un 98 % idéntica, o al menos un 99 % idéntica) son sustituciones conservativas de aminoácidos. Una "sustitución conservativa de aminoácidos" es aquella en la que un residuo de aminoácido se sustituye por otro residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral (grupo R) con propiedades químicas similares (p. ej., carga o hidrofobicidad). En general, una sustitución conservativa de aminoácidos no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. En los casos en los que dos o más secuencias de aminoácidos difieren entre sí por sustituciones conservativas, el porcentaje de identidad de secuencia o el grado de similitud puede ajustarse al alza para corregir la naturaleza conservativa de la sustitución. Los medios para realizar este ajuste son muy conocidos para los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Pearson (1994) Methods Mol. Biol.

24: 307-331. Los ejemplos de grupos de aminoácidos que tienen cadenas laterales con propiedades químicas similares incluyen (1) cadenas laterales alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; (2) cadenas laterales de hidroxilo alifático: serina y treonina; (3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; (4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina y triptófano; (5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina e histidina; (6) cadenas laterales ácidas: aspartato y glutamato, y (7) cadenas laterales que contienen azufre: cisteína y metionina.

La descripción se dirige a un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene las regiones de unión al antígeno de cualquiera de los anticuerpos descritos en la Tabla 1. Los anticuerpos de la descripción, incluidos los descritos en la Tabla 1, se unen a CD38 humano.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38A1. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 1, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 2. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 1, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 2. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 1, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 2. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38A2. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 3, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 4. En una realización, la invención se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 3 y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 4. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 3, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos 99% idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 4. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG 1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38B1. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 5, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 6. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 5, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 6. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 5, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 6. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38B4. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 7, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 8. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 7, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 8. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 7, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 8. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38B7. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 9, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 10. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 9, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 10. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 9, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 10. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38C4. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 11, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 12. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 11, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 12. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 11, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 12. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38C9. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 13, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 14. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 13, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 14. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 13, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 14. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38D1. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 15, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 16. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 15, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 16. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 15, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 16. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38D2. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 17, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 18. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 17, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SEQ ID N°: 18. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 17, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 18. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38D5. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 19, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 20. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 19, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de S^eQ ID N°: 20. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 19, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 20. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38D8. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 21, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 22. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 21, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de S^eQ ID N°: 22. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 21, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 22. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38D10. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 23, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 24. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 23, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de S^eQ ID N°: 24. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 23, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia expuesta en SEQ ID N°: 24. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38D11. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 25, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 26. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 25, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SeQ ID N°: 26. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 25, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 26. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38F8. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 27, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 28. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 27, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SeQ ID N°: 28. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 27, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 28. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

La descripción se dirige a un anticuerpo anti-CD38, o a un fragmento de unión al antígeno del mismo, que tiene regiones de unión al antígeno del anticuerpo C38G8. La descripción proporciona un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N°: 29, y una secuencia del dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N°: 30. La descripción se dirige a un anticuerpo que tiene un dominio variable de la cadena pesada que comprende las CDR de SEQ ID N°: 29, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende las CDR de SeQ ID N°: 30. La descripción presenta un anticuerpo humano aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que comprende una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 29, y comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia establecida en SEQ ID N°: 30. El anticuerpo puede ser además de un isotipo IgG1 o IgG4.

Los fragmentos de unión al antígeno de las proteínas de unión al antígeno de la invención pueden producirse mediante técnicas convencionales. Los ejemplos de tales fragmentos incluyen, pero sin limitación, fragmentos Fab y F(ab')².

La presente descripción proporciona un fragmento Fab de anticuerpo completamente humano, que tiene una región del dominio variable de una cadena pesada y una región del dominio variable de una cadena ligera, en el que la secuencia de dominio variable de la cadena pesada es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 7, SEQ ID N° 9, SEQ ID N° 11, SEQ ID N° 13, SEQ ID N° 15, SEQ ID N° 17, SEQ ID N° 19, SEQ ID N° 21, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y combinaciones de las mismas, y que tiene una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas. En algunos ejemplos, el fragmento Fab del anticuerpo completamente humano tiene tanto una región del dominio variable de la cadena pesada como una región del dominio variable de la cadena ligera en la que el anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 5/SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 7/SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 9/SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 11/SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 13/SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 15/SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 17/SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 19/SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 21/SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 23/SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 25/SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 29/SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas. La presente descripción proporciona un fragmento Fab anti-CD38 que comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 7, SEQ ID N° 9, SEQ ID N° 11, SEQ ID N° 13, SEQ ID N° 15, SEQ ID N° 17, SEQ ID N° 19, SEQ ID N° 21, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y un dominio variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N° 12, SEQ ID N° 14, SEQ ID N° 16, SEQ ID N° 18, SEQ ID N° 20, SEQ ID N° 22, SEQ ID N° 24, SEQ ID N° 26, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30.

Los anticuerpos de cadena sencilla pueden formarse uniendo fragmentos de dominio variable (región Fv) de cadena ligera y pesada a través de un puente de aminoácidos (conector peptídico corto), lo que da como resultado una cadena polipeptídica única. Estos Fv de cadena sencilla (scFv) se han preparado fusionando ADN que codifica un conector peptídico entre ADN que codifican los dos polipéptidos de dominio variable (V^ly V^h). Los polipéptidos resultantes pueden plegarse sobre sí mismos para formar monómeros de unión al antígeno o pueden formar multímeros (p. ej., dímeros, trímeros o tetrámeros), dependiendo de la longitud del conector flexible entre los dos dominios variables (Kortt et al., 1997, Prot. Eng. 10:423; Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108). Al combinar diferentes polipéptidos que comprenden V^ly V^h, se pueden formar scFv multiméricos que se unen a diferentes epítopos (Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40). Las técnicas desarrolladas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla incluyen las descritas en la patente de EE. UU. 4.946.778; Bird, 1988, Science 242:423; Houston et al., 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85:5879; Ward et al., 1989, Nature 334:544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:379-87.

En un ejemplo, la presente descripción proporciona un anticuerpo humano de cadena sencilla, que tiene una región del dominio variable de una cadena pesada y una región del dominio variable de una cadena ligera y un conector peptídico que conecta las regiones de los dominios variables de la cadena pesada y la cadena ligera, en el que la secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a las secuencias de aminoácidos seleccionadas del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N227, SEQ ID N° 29, y que tiene una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a la secuencia de aminoácidos que consiste en SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas. En determinados ejemplos, el anticuerpo de cadena sencilla totalmente humano tiene una región del dominio variable de la cadena pesada y una región del dominio variable de la cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano de cadena sencilla tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesadácadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4, SEQ ID N25/SEQ ID N26, SEQ ID N27/SEQ ID N28, SEQ ID N29/SEQ ID N210, SEQ ID N211/SEQ ID N212, SEQ ID N2 13/SEQ ID N214, SEQ ID N215/SEQ ID N216, SEQ ID N217/SEQ ID N218, SEQ ID N219/SEQ ID N220, SEQ ID N2 21/SEQ ID N222, SEQ ID N223/SEQ ID N224, SEQ ID N225/SEQ ID N226, SEQ ID N227/SEQ ID N228, SEQ ID N2 29/SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas. En un ejemplo, la presente descripción proporciona un anticuerpo humano de cadena sencilla que comprende un dominio variable de la cadena pesada y un dominio variable de la cadena ligera conectados a través de un conector peptídico, en el que el dominio variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y el dominio variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SEQ ID N° 8, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N2 24, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N230.

Se conocen técnicas para derivar un anticuerpo de una subclase o isotipo diferente a partir de un anticuerpo de interés, es decir, el cambio de subclase. Así, se pueden derivar anticuerpos IgG de un anticuerpo IgM, por ejemplo, y viceversa. Tales técnicas permiten la preparación de nuevos anticuerpos que poseen las propiedades de unión al antígeno de un anticuerpo dado (el anticuerpo original), pero que también exhiben propiedades biológicas asociadas con un isotipo o subclase de anticuerpo diferente del anticuerpo original. Pueden emplearse técnicas de ADN recombinante. El ADN clonado que codifica polipéptidos de anticuerpos particulares se puede emplear en dichos procedimientos, p. ej., ADN que codifica el dominio constante de un anticuerpo del isotipo deseado (Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178:303-16). Además, si se desea una IgG4, también se puede desear introducir una mutación puntual (CPSCP->CPPCP; SEQ ID N°s 31 y 32, respectivamente) en la región bisagra (Bloom et al., 1997, Protein Science 6:407) para aliviar la tendencia a formar enlaces disulfuro dentro de la cadena H que pueden conducir a la heterogeneidad en los anticuerpos IgG4. Así, en un ejemplo, el anticuerpo de la invención es un anticuerpo IgG1 humano. Así, en un ejemplo, el anticuerpo de la invención es un anticuerpo IgG4 humano.

La presente descripción proporciona una serie de anticuerpos estructuralmente caracterizados por las secuencias de aminoácidos de sus regiones del dominio variable. Sin embargo, las secuencias de aminoácidos pueden sufrir algunos cambios mientras conservan su alto grado de unión a sus objetivos específicos. Más específicamente, muchos aminoácidos en la región del dominio variable se pueden cambiar con sustituciones conservativas y es predecible que las características de unión del anticuerpo resultante no difieran de las características de unión de la secuencia del anticuerpo de tipo natural. Hay muchos aminoácidos en un dominio variable de anticuerpo que no interactúan directamente con el antígeno ni afectan a la unión del antígeno, y no son cruciales para determinar la estructura del anticuerpo. Por ejemplo, un residuo de aminoácido no esencial predicho en cualquiera de los anticuerpos descritos se reemplaza preferiblemente con otro residuo de aminoácido de la misma clase. Los métodos para identificar las sustituciones conservativas de aminoácidos que no eliminan la unión al antígeno son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); y Burks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)). Near et al. Mol. Immunol. 30:369-377, 1993 explica cómo impactar o no impactar en la unión a través de mutagénesis dirigida. Near et al. solo mutó residuos que pensó que tenían una alta probabilidad de cambiar la unión al antígeno. La mayoría tuvo un efecto modesto o negativo sobre la afinidad de unión (Near et al., Tabla 3) y la unión a diferentes formas de digoxina (Near et al., Tabla 2). Por lo tanto, la descripción también incluye secuencias variables que tienen al menos un 95 % de identidad, al menos un 96 % de identidad, al menos un 97 % de identidad, al menos un 98 % de identidad o al menos un 99 % de identidad con las secuencias descritas en la presente memoria.

En algunos ejemplos, un anticuerpo, o un fragmento de unión al antígeno del mismo, proporcionado en la presente memoria tiene una constante de disociación (K^d) de 1 x 10-6 M o menos; 5 x 10-7 M o menos; 1 x 10-7 M o menos; 5 x 10-8 M o menos; 1 x 10-8 M o menos; 5 x 10-9 M o menos; o 1 x 10-9 M o menos. En un ejemplo, el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo tiene una K^dde 1 x 10-7 M a 1 x 10-10 M. En un ejemplo, el anticuerpo o fragmento de unión al antígeno del mismo tiene una K^dde 1 x 10-8 M a 1 x 10-10 M.

Los expertos en la técnica apreciarán los métodos estándar conocidos para determinar la KD de un anticuerpo, o fragmento del mismo. Por ejemplo, la K^dse mide mediante un ensayo de unión al antígeno radiomarcado (RIA). En un ejemplo, se realiza un RIA con la versión Fab de un anticuerpo de interés y su antígeno. Por ejemplo, la afinidad de unión de la disolución de Fabs por el antígeno se mide equilibrando el Fab con una concentración mínima de antígeno marcado con 125I en presencia de una serie de titulaciones de antígeno no marcado, y luego capturando el antígeno unido con una placa recubierta de anticuerpo anti-Fab (véase, por ejemplo, Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)).

Según otro ejemplo, se mide la K^dutilizando un ensayo de resonancia de plasmones superficiales BIACORE. La expresión "resonancia de plasmones superficiales", como se usa en la presente memoria, se refiere a un fenómeno óptico que permite el análisis de las interacciones en tiempo real mediante la detección de alteraciones en las concentraciones de proteínas dentro de una matriz de biosensor, por ejemplo usando el sistema BIACORE (división de Ciencias de la Vida de Biacore de GE Healthcare, Piscataway, NJ).

En ejemplos particulares, las proteínas de unión al antígeno tienen una afinidad de unión (Ka) a CD38 de al menos 106 1/Ms. En otros ejemplos, las proteínas de unión al antígeno exhiben una Ka de al menos 1071/Ms, al menos 1081/Ms, al menos 109 1/Ms, o al menos 1010 1/Ms. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno exhibe una Ka sustancialmente igual que la de un anticuerpo descrito en la presente memoria en los Ejemplos.

En otro ejemplo, la presente descripción proporciona una proteína de unión al antígeno que tiene una baja velocidad de disociación de CD38. En un ejemplo, la proteína de unión al antígeno tiene una Koff de 1 x 10-4 a -1 s-1 o menos. En otro ejemplo, la Koff es 5 x 10-5 a -1 s-1 o menos. En otro ejemplo, la Koff es sustancialmente la misma que la de un anticuerpo descrito en la presente memoria. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno se une a CD38 con sustancialmente la misma Koff que un anticuerpo descrito en la presente memoria.

En otro aspecto, la presente descripción proporciona una proteína de unión al antígeno que inhibe la actividad de CD38. En un ejemplo, la proteína de unión al antígeno tiene una CI⁵⁰de 1000 nM o menos. En otro ejemplo, la CI⁵⁰es 100 nM o menos; en otro ejemplo, la CI⁵⁰es 10 nM o menos. En otro ejemplo, la CI⁵⁰es sustancialmente la misma que la de un anticuerpo descrito en la presente memoria en los Ejemplos. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno inhibe una actividad de CD38 con sustancialmente la misma CI⁵⁰que un anticuerpo descrito en la presente memoria.

En otro aspecto, la presente descripción proporciona una proteína de unión al antígeno que se une al CD38 humano expresado en la superficie de una célula y, cuando se une, inhibe la actividad de señalización de CD38 en la célula sin causar una reducción significativa en la cantidad de CD38 en la superficie de la célula. Puede usarse cualquier método para determinar o estimar la cantidad de CD38 en la superficie y/o en el interior de la célula. En otro ejemplo, la unión de la proteína de unión al antígeno a la célula que expresa CD38 provoca que se internalice menos del 75 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, 1 % o 0,1 % del CD38 de la superficie celular.

En otro aspecto, la presente descripción proporciona una proteína de unión al antígeno que tiene una vida media de al menos un día in vitro o in vivo (p. ej., cuando se administra a un sujeto humano). En un ejemplo, la proteína de unión al antígeno tiene una vida media de al menos tres días. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno tiene una vida media de cuatro días o más. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno tiene una vida media de ocho días o más. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno se derivatiza o modifica de modo que tenga una vida media más larga en comparación con la proteína de unión al antígeno no modificada o no derivatizada. En otro ejemplo, la proteína de unión al antígeno contiene una o más mutaciones puntuales para aumentar la vida media en suero, como se describe en el documento W02000/09560.

La presente descripción proporciona además proteínas de unión al antígeno multiespecíficas, por ejemplo, una proteína de unión al antígeno biespecífica, p. ej., una proteína de unión al antígeno que se une a dos epítopos diferentes de CD38, o a un epítopo de CD38 y un epítopo de otra molécula, a través de dos sitios o regiones de unión al antígeno diferentes. Además, la proteína de unión al antígeno biespecífica como se describe en la presente memoria puede comprender un sitio de unión a CD38 de uno de los anticuerpos descritos en la presente memoria y una segunda región de unión a CD38 de otro de los anticuerpos descritos en la presente memoria. Alternativamente, una proteína de unión al antígeno biespecífica puede comprender un sitio de unión al antígeno de uno de los anticuerpos descritos en la presente memoria y un segundo sitio de unión al antígeno de otro anticuerpo CD38 que se conoce en la técnica, o de un anticuerpo que se prepara mediante métodos conocidos o los métodos descritos en la presente memoria.

Se conocen en la técnica numerosos métodos para preparar anticuerpos biespecíficos. Tales métodos incluyen el uso de hibridomas híbridos como se describe en Milstein et al., 1983, Nature 305:537, y acoplamiento químico de fragmentos de anticuerpos (Brennan et al., 1985, Science 229:81; Glennie et al., 1987, J. Immunol. 139:2367; patente de EE. UU. 6.010.902). Además, los anticuerpos biespecíficos se pueden producir a través de medios recombinantes, por ejemplo, mediante el uso de restos de cremallera de leucina (es decir, a partir de las proteínas Fos y Jun, que preferentemente forman heterodímeros; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547) u otras estructuras de dominio interactivo de candado y llave como se describe en la patente de EE. UU. 5.582.996. Otras técnicas útiles incluyen las descritas en las patentes de EE. UU. 5.959.083; y 5.807.706.

En otro aspecto, la proteína de unión al antígeno comprende un derivado de un anticuerpo. El anticuerpo derivatizado puede comprender cualquier molécula o sustancia que imparta una propiedad deseada al anticuerpo, como una vida media aumentada en un uso particular. El anticuerpo derivado puede comprender, por ejemplo, un resto detectable (o marcador) (p. ej., una molécula radiactiva, colorimétrica, antigénica o enzimática, una perla detectable (como una perla magnética o electrodensa (p. ej., oro)), o una molécula que se une a otra molécula (p. ej., biotina o estreptavidina), una fracción terapéutica o de diagnóstico (p. ej., un resto radiactivo, citotóxico o farmacéuticamente activo), o una molécula que aumenta la idoneidad del anticuerpo para un uso particular (p. ej., la administración a un sujeto, como un sujeto humano, u otros usos in vivo o in vitro). Los ejemplos de moléculas que se pueden usar para derivatizar un anticuerpo incluyen albúmina (p. ej., albúmina de suero humano) y polietilenglicol (PEG). Los derivados de anticuerpos pegilados y unidos a albúmina se pueden preparar utilizando métodos bien conocidos en la técnica. En un ejemplo, el anticuerpo se conjuga o se une de otro modo a la transtiretina (TTR) o a una variante de la TTR. La TTR o la variante de TTR se puede modificar químicamente, por ejemplo, con un producto químico seleccionado del grupo que consiste en dextrano, poli(n-vinilpirrolidona), polietilenglicoles, homopolímeros de propilenglicol, copolímeros de poli(óxido de propileno/óxido de etileno), polioles polioxietilados y poli(alcoholes vinílicos).

Los oligómeros que contienen una o más proteínas de unión al antígeno pueden emplearse como antagonistas de CD38. Los oligómeros pueden estar en forma de dímeros, trímeros u oligómeros superiores enlazados covalentemente o no enlazados covalentemente. Se contempla el uso de oligómeros que comprenden dos o más proteínas de unión al antígeno, siendo un ejemplo un homodímero. Otros oligómeros incluyen heterodímeros, homotrímeros, heterotrímeros, homotetrámeros, heterotetrámeros, etc.

Un ejemplo se dirige a oligómeros que comprenden múltiples proteínas de unión al antígeno unidas mediante interacciones covalentes o no covalentes entre restos peptídicos fusionados con las proteínas de unión al antígeno. Dichos péptidos pueden ser conectores de péptidos (espaciadores) o péptidos que tienen la propiedad de promover la oligomerización. Las cremalleras de leucina y algunos polipéptidos derivados de anticuerpos se encuentran entre los péptidos que pueden promover la oligomerización de las proteínas de unión al antígeno unidas a ellas, como se describe con más detalle a continuación.

En ejemplos particulares, los oligómeros comprenden de dos a cuatro proteínas de unión al antígeno. Las proteínas de unión al antígeno del oligómero pueden estar en cualquier forma, como cualquiera de las formas descritas anteriormente, p. ej., variantes o fragmentos. Preferiblemente, los oligómeros comprenden proteínas de unión al antígeno que tienen actividad de unión a CD38.

Otro método para preparar proteínas oligoméricas de unión al antígeno implica el uso de una cremallera de leucina. Los dominios de cremallera de leucina son péptidos que promueven la oligomerización de las proteínas en las que se encuentran. Las cremalleras de leucina se identificaron originalmente en varias proteínas de unión al ADN (Landschulz et al., 1988, Science 240:1759), y desde entonces se han encontrado en una variedad de proteínas diferentes. Entre las cremalleras de leucina conocidas se encuentran péptidos naturales y derivados de los mismos que se dimerizan o trimerizan. Los ejemplos de dominios de cremallera de leucina adecuados para producir proteínas oligoméricas solubles se describen en el documento WO 94/10308, y la cremallera de leucina derivada de la proteína D del surfactante pulmonar (SPD) descrita en Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344:191. El uso de una cremallera de leucina modificada que permite la trimerización estable de una proteína heteróloga fusionada con ella se describe en Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78. En un enfoque, las proteínas de fusión recombinantes que comprenden un fragmento de anticuerpo anti-CD38 o derivado fusionado con un péptido de cremallera de leucina se expresan en células huésped adecuadas, y los fragmentos o derivados de anticuerpo anti-CD38 oligoméricos solubles que se forman se recuperan del sobrenadante del cultivo.

Las proteínas de unión al antígeno dirigidas contra CD38 se pueden usar, por ejemplo, en ensayos para detectar la presencia de polipéptidos de CD38, ya sea in vitro o in vivo. Las proteínas de unión al antígeno también pueden emplearse en la purificación de proteínas CD38 mediante cromatografía de inmunoafinidad. Las proteínas de unión al antígeno bloqueantes pueden usarse en los métodos descritos en la presente memoria. Dichas proteínas de unión al antígeno que funcionan como antagonistas de CD38 pueden emplearse en el tratamiento de cualquier afección inducida por CD38, incluidos, entre otros, varios tipos de cáncer.

Las proteínas de unión al antígeno se pueden emplear en un procedimiento in vitro, o se pueden administrar in vivo para inhibir la actividad biológica inducida por CD38. Los trastornos que se beneficiarían (directa o indirectamente) de la activación de CD38, cuyos ejemplos se proporcionan en la presente memoria, pueden tratarse así. La descripción proporciona un método terapéutico que comprende la administración in vivo de una proteína de unión al antígeno bloqueante de CD38 a un mamífero que lo necesita en una cantidad eficaz para reducir una actividad biológica inducida por CD38.

Las proteínas de unión al antígeno incluyen anticuerpos monoclonales completamente humanos que inhiben una actividad biológica de CD38.

Las proteínas de unión al antígeno, incluidos los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos descritos en la presente memoria, pueden prepararse mediante cualquiera de varias técnicas convencionales. Por ejemplo, pueden purificarse a partir de células que los expresan naturalmente (p. ej., un anticuerpo puede purificarse a partir de un hibridoma que lo produce) o producirse en sistemas de expresión recombinantes, utilizando cualquier método conocido en la técnica. Véase, por ejemplo, Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.), Plenum Press, Nueva York (1980); y Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Land (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1988)).

Puede usarse cualquier sistema de expresión conocido en la técnica para preparar los polipéptidos recombinantes de la invención, incluidos los anticuerpos y fragmentos de anticuerpos descritos en la presente memoria. En general, las células huésped se transforman con un vector de expresión recombinante que comprende ADN que codifica un polipéptido deseado. Entre las células huésped que pueden emplearse están las células procariotas, levaduras o eucariotas superiores. Los procariotas incluyen organismos gram negativos o gram positivos, por ejemplo E. coli o bacilli. Las células eucariotas superiores incluyen células de insecto y líneas celulares establecidas de origen mamífero. Los ejemplos de líneas de células huésped de mamífero adecuadas incluyen la línea COS-7 de células de riñón de mono (At Cc CRL 1651) (Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), células L, células 293, células C127, células 3T3 (ATCC CCL 163), células de ovario de hámster chino (CHO), células HeLa, líneas celulares BHK (ATCC CRL 10) y la línea celular CV1/EBNA derivada de la línea celular CV1 de riñón de mono verde africano (ATCC CCL 70) como se describe en McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821. Los vectores de clonación y expresión apropiados para su uso con hospedadores celulares bacterianos, fúngicos, de levadura y de mamíferos se describen en Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985).

Las células transformadas se pueden cultivar en condiciones que promuevan la expresión del polipéptido, y el polipéptido se puede recuperar mediante procedimientos convencionales de purificación de proteínas. Uno de estos procedimientos de purificación incluye el uso de cromatografía de afinidad, p. ej., sobre una matriz que tiene todo o una porción (p. ej., el dominio extracelular) de CD38 unido a la misma. Los polipéptidos contemplados para su uso en la presente memoria incluyen los polipéptidos recombinantes de anticuerpos anti-CD38 de mamíferos sustancialmente homogéneos sustancialmente libres de materiales endógenos contaminantes.

Las proteínas de unión al antígeno se pueden preparar, y seleccionar las propiedades deseadas, mediante cualquiera de varias técnicas conocidas. Algunas de las técnicas implican aislar un ácido nucleico que codifica una cadena polipeptídica (o una parte de la misma) de una proteína de unión al antígeno de interés (p. ej., un anticuerpo anti-CD38), y manipular el ácido nucleico mediante tecnología de ADN recombinante. El ácido nucleico puede fusionarse con otro ácido nucleico de interés o alterarse (p. ej., por mutagénesis u otras técnicas convencionales) para añadir, eliminar o sustituir uno o más residuos de aminoácidos, por ejemplo.

Los polipéptidos de la presente descripción se pueden producir utilizando cualquier método estándar conocido en la técnica. En un ejemplo, los polipéptidos se producen mediante métodos de ADN recombinante insertando una secuencia de ácido nucleico (un ADNc) que codifica el polipéptido en un vector de expresión recombinante y expresando la secuencia de ADN en condiciones que promueven la expresión.

La descripción presenta ácidos nucleicos que codifican los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos descritos en la presente memoria. Por ejemplo, la descripción incluye un ácido nucleico que codifica un dominio variable de la cadena pesada como se establece en SEQ ID N21, SEQ ID N23, SEQ ID N25, SEQ ID N26, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N223, SEQ ID N225, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y que codifica un dominio variable de la cadena ligera como se establece en SEQ ID N° 2, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N2 18, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N230.

Los ácidos nucleicos que codifican cualquiera de los diversos polipéptidos descritos en la presente memoria pueden sintetizarse químicamente. El uso de codones puede seleccionarse para mejorar la expresión en una célula. Dicho uso de codones dependerá del tipo de célula seleccionado. Se han desarrollado patrones de uso de codones especializados para E. coli y otras bacterias, así como células de mamíferos, células vegetales, células de levadura y células de insectos.

Las técnicas generales para la manipulación de ácidos nucleicos se describen, por ejemplo, en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2 ed., 1989, o F. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing y Wiley-Interscience: Nueva York, 1987) y las actualizaciones periódicas. El ADN que codifica el polipéptido se une de forma operable a elementos reguladores transcripcionales o traduccionales adecuados derivados de genes de mamíferos, virus o insectos. Dichos elementos reguladores incluyen un promotor transcripcional, una secuencia operadora opcional para controlar la transcripción, una secuencia que codifica sitios de unión ribosómicos del ARNm adecuados y secuencias que controlan la terminación de la transcripción y la traducción. Se incorpora adicionalmente la capacidad de replicarse en un huésped, normalmente conferida por un origen de replicación, y un gen de selección para facilitar el reconocimiento de los transformantes.

El ADN recombinante también puede incluir cualquier tipo de secuencia de etiqueta proteica que pueda ser útil para purificar la proteína. Los ejemplos de etiquetas proteicas incluyen, entre otros, una etiqueta de histidinas, una etiqueta FLAG, una etiqueta myc, una etiqueta HA o una etiqueta GST. Los vectores de clonación y expresión apropiados para su uso con hospedadores celulares bacterianos, fúngicos, de levadura y de mamíferos se pueden encontrar en Cloning Vectors: A Laboratory Manual (Elsevier, N.Y., 1985).

La construcción de expresión se introduce en la célula huésped usando un método apropiado para la célula huésped.

Se conocen en la técnica una variedad de métodos para introducir ácidos nucleicos en células huésped, que incluyen, entre otros, electroporación; transfección empleando cloruro de calcio, cloruro de rubidio, fosfato de calcio, DEAE-dextrano u otras sustancias; bombardeo de microproyectiles; lipofección; e infección (cuando el vector es un agente infeccioso). Las células huésped adecuadas incluyen procariotas, levaduras, células de mamífero o células bacterianas.

Las bacterias adecuadas incluyen organismos gram negativos o gram positivos, por ejemplo, E. coli o el género Bacillus. Las levaduras, preferentemente de la especie Saccharomyces, como S. cerevisiae, también pueden usarse para la producción de polipéptidos. También se pueden emplear varios sistemas de cultivo de células de insectos o mamíferos para expresar proteínas recombinantes. Los sistemas de Baculovirus para la producción de proteínas heterólogas en células de insectos se revisan en Luckow y Summers, (Bio/Technology, 6:47, 1988). Los ejemplos de líneas de células huésped de mamífero adecuadas incluyen las células endoteliales, células de riñón de mono COS-7, células CV-1, L, C127, 3T3, ovario de hámster chino (CHO), células de riñón embrionario humano, HeLa, 293, 293T y las líneas de células BHK. Los polipéptidos purificados se preparan mediante el cultivo de sistemas huésped/vector adecuados para expresar las proteínas recombinantes. Para muchas aplicaciones, el pequeño tamaño de muchos de los polipéptidos descritos en la presente memoria haría la expresión en E. coli el método preferido para la expresión. Luego, la proteína se purifica a partir de los medios de cultivo o extractos celulares.

Las proteínas también se pueden producir utilizando sistemas de traducción celular. Para tales fines, los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido deben modificarse para permitir la transcripción in vitro para producir ARNm y permitir la traducción libre de células del ARNm en el sistema libre de células particular que se utiliza (eucariótico, como un sistema de traducción libre de células de mamífero o de levadura, o procariótico tal como un sistema de traducción libre de células bacterianas).

Los polipéptidos de unión a CD38 también se pueden producir mediante síntesis química (como mediante los métodos descritos en Solid Phase Peptide Synthesis, 2a ed., 1984, The Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.). Las modificaciones de la proteína también se pueden producir mediante síntesis química.

Los polipéptidos de la presente descripción se pueden purificar mediante métodos de aislamiento/purificación para proteínas generalmente conocidos en el campo de la química de proteínas. Los ejemplos no limitantes incluyen la extracción, recristalización, desalación (p. ej., con sulfato de amonio o sulfato de sodio), centrifugación, diálisis, ultrafiltración, cromatografía de adsorción, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía hidrofóbica, cromatografía de fase normal, cromatografía de fase inversa, filtración en gel, cromatografía de permeación en gel, cromatografía de afinidad, electroforesis, distribución en contracorriente o cualquier combinación de estas. Después de la purificación, los polipéptidos pueden intercambiarse en diferentes tampones y/o concentrarse mediante cualquiera de una variedad de métodos conocidos en la técnica, que incluyen, entre otros, filtración y diálisis.

El polipéptido purificado está preferiblemente al menos un 85% puro, más preferiblemente al menos un 95% puro y lo más preferiblemente al menos un 98% puro. Independientemente del valor numérico exacto de la pureza, el polipéptido está lo suficientemente puro para su uso como producto farmacéutico.

En determinados ejemplos, la presente descripción proporciona anticuerpos monoclonales que se unen a CD38. Los anticuerpos monoclonales se pueden producir utilizando cualquier método conocido en la técnica, p. ej., mediante la inmortalización de células de bazo recolectadas del animal transgénico después de completar el programa de inmunización. Las células del bazo se pueden inmortalizar utilizando cualquier método conocido en la técnica, p. ej., fusionándolas con células de mieloma para producir hibridomas. Las células de mieloma para su uso en los procedimientos de fusión que producen hibridomas preferiblemente no producen anticuerpos, tienen una alta eficiencia de fusión y deficiencias enzimáticas que las hacen incapaces de crecer en algunos medios selectivos que soportan solamente el crecimiento de las células fusionadas deseadas (hibridomas). Los ejemplos de líneas celulares adecuadas para el uso en las fusiones de ratón incluyen Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 41, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 y S194/5XX0 Bul; los ejemplos de líneas celulares utilizadas en fusiones de ratas incluyen R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F y 48210. Otras líneas celulares útiles para las fusiones celulares son U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 y UC729-6.

Los fragmentos de unión al antígeno de las proteínas de unión al antígeno se pueden producir mediante métodos convencionales conocidos en la técnica.

Modificaciones postraduccionales de polipéptidos

En determinados ejemplos, los polipéptidos de unión pueden comprender además modificaciones postraduccionales. Los ejemplos de modificaciones postraduccionales de proteínas incluyen la fosforilación, acetilación, metilación, ribosilación con ADP, ubiquitinación, glicosilación, carbonilación, sumoilación, biotinilación o adición de una cadena lateral polipeptídica o de un grupo hidrofóbico. Como resultado, los polipéptidos solubles modificados pueden contener elementos que no son aminoácidos, como lípidos, polisacáridos o monosacáridos y fosfatos. Una forma preferida de glicosilación es la sialilación, que conjuga uno o más restos de ácido siálico con el polipéptido. Los restos de ácido siálico mejoran la solubilidad y la vida media en suero al mismo tiempo que reducen la posible inmunogenicidad de la proteína. Véase Raju et al. Biochemistry, 2001 31; 40(30):8868-76.

En un ejemplo, las formas modificadas de los polipéptidos solubles en cuestión comprenden unir los polipéptidos solubles en cuestión a polímeros no proteináceos. En un ejemplo, el polímero es polietilenglicol ("PEG"), polipropilenglicol o polioxialquilenos, de la manera que se establece en las patentes de EE. UU. 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192 o 4.179.337.

PEG es un polímero soluble en agua que está disponible comercialmente o puede prepararse mediante polimerización de apertura de anillo de etilenglicol de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica (Sandler y Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, Nueva York, vol. 3, páginas 138-161). El término "PEG" se usa ampliamente para abarcar cualquier molécula de polietilenglicol, sin tener en cuenta el tamaño o la modificación en un extremo del PEG, y puede representarse mediante la fórmula: X--O(CH²CH²O)n-CH²CH²OH (1), donde n es 20 a 2300 y X es H o una modificación terminal, p. ej., un alquilo C^1-4. En un ejemplo, el PEG termina en un extremo con hidroxi o metoxi, es decir, X es H o CH³("metoxi PEG"). Un PEG puede contener otros grupos químicos que son necesarios para las reacciones de unión; que resulta de la síntesis química de la molécula; o que es un espaciador para la distancia óptima de partes de la molécula. Además, dicho PEG puede consistir en una o más cadenas laterales de PEG que están unidas entre sí. Los PEG con más de una cadena de PEG se denominan PEG multibrazo o ramificados. Los PEG ramificados se pueden preparar, por ejemplo, mediante la adición de poli(óxido de etileno) a varios polioles, incluidos el glicerol, el pentaeritriol y el sorbitol. Por ejemplo, se puede preparar un PEG ramificado de cuatro brazos a partir de pentaeritriol y óxido de etileno. Los PEG ramificados se describen, por ejemplo, en el documento EP-A 0473 084 y la patente de EE. UU.

5.932.462. Una forma de PEG incluye dos cadenas laterales de PEG (PEG2) unidas a través de los grupos amino primarios de una lisina (Monfardini et al., Bioconjugate Chem. 6 (1995) 62-69).

La tasa de aclaramiento sérico del polipéptido modificado con PEG puede disminuir en aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o incluso un 90 %, en relación con la tasa de aclaramiento del polipéptido de unión no modificado. El polipéptido modificado con PEG puede tener una vida media (t^1/2) que aumenta en relación con la vida media de la proteína no modificada. La vida media del polipéptido de unión a PEG puede aumentar al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 125 %, 150 %, 175 %, 200 %, 250 %, 300 %, 400 % o 500 %, o incluso en un 1000 % con respecto a la vida media del polipéptido de unión no modificado. En algunos ejemplos, la vida media de la proteína se determina in vitro, como en una disolución salina tamponada o en suero. En otros ejemplos, la vida media de la proteína es una vida media in vivo, tal como la vida media de la proteína en el suero u otro fluido corporal de un animal.

Métodos terapéuticos, formulaciones y modos de administración

La presente descripción proporciona además métodos para tratar un amplio espectro de cánceres de mamíferos, que comprenden la administración de anticuerpos anti-CD38 o fragmentos de unión al antígeno.

La presente descripción proporciona un método para tratar el cáncer que comprende administrar un anticuerpo anti-CD38, o un fragmento del mismo, seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo completamente humano de una clase IgG que se une a un epítopo de CD38 con una afinidad de unión de al menos 10-6 M; un fragmento de anticuerpo Fab completamente humano que comprende un dominio variable de una cadena pesada y un dominio variable de una cadena ligera; un anticuerpo humano de cadena sencilla, que comprende un dominio variable de una cadena pesada y un dominio variable de una cadena ligera y un conector peptídico que conecta los dominios variables de la cadena pesada y la cadena ligera. Las regiones variables de la cadena ligera y pesada (y las CDR dentro de dichas secuencias) que pueden usarse en los anticuerpos y fragmentos se describen en SEQ ID N°s 1-30 (Tabla 1).

En un ejemplo, los métodos descritos en la presente memoria incluyen el uso de un anticuerpo completamente humano que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos 99% idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SeQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N° 6, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y combinaciones de las mismas, y que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

En un ejemplo, los métodos descritos en la presente memoria incluyen el uso de un fragmento de anticuerpo Fab completamente humano que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos un 99 % idéntica, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N25, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N° 21, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y combinaciones de las mismas, y que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 2, SEQ ID N° 4, SEQ ID N° 6, SeQ ID N° 8, SEQ ID N° 10, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N° 28, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

En un ejemplo, los métodos descritos en la presente memoria incluyen el uso de un anticuerpo humano de cadena sencilla que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica, o al menos 99% idéntica, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1, SEQ ID N° 3, SEQ ID N° 5, SEQ ID N27, SEQ ID N29, SEQ ID N211, SEQ ID N213, SEQ ID N215, SEQ ID N217, SEQ ID N219, SEQ ID N221, SEQ ID N° 23, SEQ ID N° 25, SEQ ID N° 27, SEQ ID N° 29, y combinaciones de las mismas, y que comprende una secuencia del dominio variable de la cadena ligera que es al menos un 95 % idéntica, al menos un 96 % idéntica, al menos un 97 % idéntica, al menos un 98 % idéntica o al menos un 99 % idéntica, a una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N22, SEQ ID N24, SEQ ID N26, SEQ ID N28, SEQ ID N210, SEQ ID N212, SEQ ID N214, SEQ ID N216, SEQ ID N218, SEQ ID N220, SEQ ID N222, SEQ ID N224, SEQ ID N226, SEQ ID N228, SEQ ID N° 30, y combinaciones de las mismas.

En un ejemplo, el anticuerpo totalmente humano tiene tanto una cadena pesada como una cadena ligera, en el que el anticuerpo comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2 (llamada C38A1 en la presente memoria), SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4 (llamada C38A2 en la presente memoria), SEQ ID N° 5/SEQ ID N° 6 (llamada C38B1 en la presente memoria), SEQ ID N° 7/SEQ ID N° 8 (llamada C38B4 en la presente memoria), SeQ ID N° 9/SEQ ID N° 10 (llamada C38B7 en la presente memoria), s Eq ID N° 11/SEQ ID N° 12 (llamada C38C4 en la presente memoria), SEQ ID N° 13/SEQ ID N° 14 (llamada C38C9 en la presente memoria), SeQ ID N° 15/SEQ ID N° 16 (llamada C38D1 en la presente memoria), SeQ ID N° 17/SEQ ID N° 18 (llamada C38D2 en la presente memoria), SeQ ID N° 19/SEQ ID N° 20 (llamada C38D5 en la presente memoria), S^eQ ID N° 21/SEQ ID N° 22 (llamada C38D8 en la presente memoria), SEQ ID N° 23/SEQ ID N° 24 (llamada C38D10 en la presente memoria), SEQ ID N° 25/SEQ ID N° 26 (llamada C38D11 en la presente memoria), SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28 (llamada C38F8 en la presente memoria), S^eQ ID N° 29/SEQ ID N° 30 (llamada C38G8 en la presente memoria), y combinaciones de las mismas. Preferiblemente, el fragmento Fab del anticuerpo completamente humano tiene una región del dominio variable de la cadena pesada y una región del dominio variable de la cadena ligera en la que el anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N° 1/SEQ ID N° 2 (llamada C38A1 en la presente memoria), SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4 (llamada C38A2 en la presente memoria), SEQ ID N° 5/SEQ ID N° 6 (llamada C38B1 en la presente memoria), SEQ ⁱD N° 7/SEQ ID N° 8 (llamada C38B4 en la presente memoria), SEQ ID N° 9/SEQ ID N° 10 (llamada C38B7 en la presente memoria), SEQ ID N° 11/SEQ ID N° 12 (llamada C38C4 en la presente memoria), SEQ ID N° 13/SEQ ID N° 14 (llamada C38C9 en la presente memoria), SEQ ID N° 15/SEQ ID N° 16 (llamada C38D1 en la presente memoria), SeQ ID N° 17/SEQ ID N° 18 (llamada C38D2 en la presente memoria), SeQ ID N° 19/SEQ ID N° 20 (llamada C38D5 en la presente memoria), S^eQ ID N° 21/SEQ ID N° 22 (llamada C38D8 en la presente memoria), S^eQ ID N° 23/SEQ ID N° 24 (llamada C38D10 en la presente memoria), S^eQ ID N° 25/SEQ ID N° 26 (llamada C38D11 en la presente memoria), SEQ ID N° 27/SEQ ID N° 28 (llamada C38F8 en la presente memoria), s Eq ID N° 29/SEQ ID N° 30 (llamada C38G8 en la presente memoria), y combinaciones de las mismas.

En un ejemplo, el anticuerpo de cadena sencilla totalmente humano comprende una región del dominio variable de la cadena pesada y una región del dominio variable de la cadena ligera, en el que el anticuerpo totalmente humano de cadena sencilla comprende una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID N21/SEQ ID N22, SEQ ID N23/SEQ ID N24, SEQ ID N25/SEQ ID N26, SEQ ID N2 7/SEQ ID N28, SEQ ID N29/SEQ ID N210, SEQ ID N211/SEQ ID N212, SEQ ID N213/SEQ ID N214, SEQ ID N2 15/SEQ ID N216, SEQ ID N217/SEQ ID N218, SEQ ID N219/SEQ ID N220, SEQ ID N221/SEQ ID N222, SEQ ID N2 23/SEQ ID N224, SEQ ID N225/SEQ ID N226, SEQ ID N227/SEQ ID N228, SEQ ID N229/SEQ ID N230, y combinaciones de las mismas.

Los anticuerpos anti-CD38 y los fragmentos de anticuerpos se utilizan para tratar un amplio espectro de cánceres de mamíferos. En una realización, el cáncer comprende cualquier tumor sólido o célula leucémica que exprese CD38 en la superficie celular. En una realización, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en linfoma no Hodgkin (LNH), linfoma de Burkitt (LB), mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica B (LLC-B), leucemia linfocítica aguda (LLA) B y T, linfoma de células T (LCT), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia de células pilosas (LCP), linfoma de Hodgkin (LH) y leucemia mieloide crónica (LMC).

En un ejemplo, los anticuerpos anti-CD38 y los fragmentos de anticuerpos son útiles para tratar, retrasar la progresión, prevenir la recaída o aliviar un síntoma de un cáncer u otra afección neoplásica, incluidas las neoplasias malignas hematológicas y/o los tumores CD38+. En un ejemplo, los anticuerpos anti-CD38 y los fragmentos de anticuerpos son útiles para tratar un cáncer seleccionado del grupo que consiste en linfoma no Hodgkin (LNH), leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crónica (LLC), leucemia mielógena crónica (LMC), mieloma múltiple (MM), cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de vejiga, melanoma, cáncer colorrectal, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, leiomioma, leiomiosarcoma, glioma, glioblastoma y tumores sólidos, en los que los tumores sólidos se seleccionan del grupo que consiste en tumores de mama, tumores de ovario, tumores de pulmón, tumores de páncreas, tumores de próstata, melanomas, tumores colorrectales, tumores de pulmón, tumores de cabeza y cuello, tumores de vejiga, tumores de esófago, tumores de hígado y tumores renales.

Como se usa en la presente memoria, "cáncer hematológico" se refiere a un cáncer de la sangre e incluye leucemia, linfoma y mieloma, entre otros. "Leucemia" se refiere a un cáncer de la sangre en el que se producen demasiados glóbulos blancos que son ineficaces para combatir las infecciones, desplazando así a las otras partes que componen la sangre, como las plaquetas y los glóbulos rojos. Se entiende que los casos de leucemia se clasifican en agudos o crónicos.

Algunas formas de leucemia incluyen leucemia linfocítica aguda (LLA); leucemia mieloide aguda (LMA); leucemia linfocítica crónica (LLC); leucemia mielógena crónica (LMC); neoplasia/trastorno mieloproliferativo (MPD); y síndrome mielodisplásico. ''Linfoma'' puede referirse a un linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin tanto de escasa malignidad como agresivo, linfoma de Burkitt y linfoma folicular (de células pequeñas y de células grandes), entre otros. Mieloma puede referirse a mieloma múltiple (MM), mieloma de células gigantes, mieloma de cadenas pesadas y mieloma de cadenas ligeras o de Bence-Jones.

En un ejemplo, la presente descripción presenta métodos para tratar o prevenir la infección por S. aureus que comprende administrar anticuerpos anti-CD38 o fragmentos de unión al antígeno.

Las técnicas y las dosis para la administración varían según el tipo de polipéptido específico y la afección específica que se está tratando, pero el experto en la técnica puede determinarlas fácilmente. En general, las agencias reguladoras exigen que un reactivo proteico que se va a usar como agente terapéutico se formule para que tenga niveles aceptablemente bajos de pirógenos. En consecuencia, las formulaciones terapéuticas generalmente se distinguirán de otras formulaciones en que están sustancialmente libres de pirógenos, o al menos no contienen más que niveles aceptables de pirógenos según lo determine la agencia reguladora correspondiente (p. ej., la FDA).

Las composiciones terapéuticas de la presente descripción pueden administrarse con un diluyente, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, en una forma farmacéutica unitaria. La administración puede ser parenteral (p. ej., intravenosa, subcutánea), oral o tópica, como ejemplos no limitantes. Además, puede emplearse cualquier técnica de terapia génica que utilice ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos, como la administración de ADN desnudo, genes y vectores recombinantes, administración basada en células, incluida la manipulación ex vivo de células de los pacientes y similares.

La composición puede estar en forma de píldora, comprimido, cápsula, líquido o comprimido de liberación sostenida para administración oral; o un líquido para administración intravenosa, subcutánea o parenteral; gel, loción, ungüento, crema o un polímero u otro vehículo de liberación sostenida para administración local.

En determinados ejemplos, los anticuerpos descritos se administran mediante inhalación, pero la aerosolización de anticuerpos IgG completos puede resultar limitante debido a su tamaño molecular (~ 150 kDa). Para maximizar los dispositivos de aerosolización comerciales disponibles, es posible que se requieran fragmentos Fab más pequeños.

Los métodos bien conocidos en la técnica para hacer formulaciones se encuentran, por ejemplo, en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20a ed., ed. A. R. Gennaro, 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, Pa.). Las formulaciones para administración parenteral pueden contener, por ejemplo, excipientes, agua estéril, disolución salina, polialquilenglicoles como el polietilenglicol, aceites de origen vegetal o naftalenos hidrogenados. Se pueden usar polímeros de lactida biocompatibles y biodegradables, copolímeros de lactida/glicolida o copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno para controlar la liberación de los compuestos. Se pueden usar formulaciones de nanopartículas (p. ej., nanopartículas biodegradables, nanopartículas lipídicas sólidas, liposomas) para controlar la biodistribución de los compuestos. Otros sistemas de administración parenteral potencialmente útiles incluyen partículas de copolímero de etileno-acetato de vinilo, bombas osmóticas, sistemas de infusión implantables y liposomas. La concentración del compuesto en la formulación varía dependiendo de una serie de factores, incluida la dosis del fármaco a administrar y la vía de administración.

El polipéptido se puede administrar opcionalmente como una sal farmacéuticamente aceptable, como sales de adición de ácido atóxicas o complejos metálicos que se usan comúnmente en la industria farmacéutica. Los ejemplos de sales de adición de ácido incluyen ácidos orgánicos tales como ácido acético, láctico, pamoico, maleico, cítrico, málico, ascórbico, succínico, benzoico, palmítico, subérico, salicílico, tartárico, metanosulfónico, toluenosulfónico o trifluoroacético o similares; ácidos poliméricos tales como ácido tánico, carboximetilcelulosa o similares; y ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico o similares. Los complejos metálicos incluyen zinc, hierro y similares. En un ejemplo, el polipéptido se formula en presencia de acetato de sodio para aumentar la estabilidad térmica.

Las formulaciones para uso oral incluyen comprimidos que contienen el/los ingrediente(s) activo(s) en una mezcla con excipientes atóxicos farmacéuticamente aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes o rellenos inertes (p. ej., sacarosa y sorbitol), agentes lubricantes, deslizantes y antiadhesivos (p. ej., estearato de magnesio, estearato de zinc, ácido esteárico, sílices, aceites vegetales hidrogenados o talco).

Las formulaciones para uso oral también se pueden proporcionar como comprimidos masticables o como cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, o como cápsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso.

Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere a una dosis que produce los efectos terapéuticos para los que se administra. La dosis exacta dependerá del trastorno a tratar, y un experto en la técnica puede determinarla utilizando métodos conocidos. En general, el polipéptido se administra en una cantidad de aproximadamente 0,01 pg/kg a aproximadamente 50 mg/kg por día, preferiblemente de 0,01 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg por día, más preferiblemente de 0,1 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg por día. El polipéptido se puede administrar diariamente (p. ej., una, dos, tres o cuatro veces al día) o preferiblemente con menos frecuencia (p. ej., cada semana, cada dos semanas, cada tres semanas, mensualmente o trimestralmente). Además, como se sabe en la técnica, pueden ser necesarios ajustes por la edad, así como por el peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo de administración, interacción farmacológica y la gravedad de la enfermedad, y los expertos en la técnica podrán determinarlos mediante experimentación rutinaria.

Un polipéptido de unión a CD38 se puede administrar solo o en combinación con una o más terapias adicionales, como quimioterapia, radioterapia, inmunoterapia, intervención quirúrgica o cualquier combinación de estas. La terapia a largo plazo es igualmente posible como terapia adyuvante en el contexto de otras estrategias de tratamiento, como se describió anteriormente.

En algunos ejemplos de dichos métodos, se pueden administrar uno o más agentes terapéuticos polipeptídicos, juntos (simultáneamente) o en diferentes momentos (secuencialmente). Además, los agentes terapéuticos polipeptídicos se pueden administrar con otro tipo de compuestos para tratar el cáncer o para inhibir la angiogénesis.

En algunos ejemplos, los agentes de anticuerpos anti-CD38 en cuestión se pueden usar solos.

En algunos ejemplos, los polipéptidos de unión o fragmentos de los mismos pueden estar marcados o no marcados con fines de diagnóstico. Normalmente, los ensayos de diagnóstico implican la detección de la formación de un complejo resultante de la unión de un polipéptido de unión a CD38. Los polipéptidos o fragmentos de unión se pueden marcar directamente, de forma similar a los anticuerpos. Se puede emplear una variedad de marcadores, incluidos, entre otros, radionúclidos, moléculas fluorescentes, enzimas, sustratos de enzimas, cofactores de enzimas, inhibidores de enzimas y ligandos (p. ej., biotina, haptenos). El experto en la técnica conoce numerosos inmunoensayos apropiados (véanse, por ejemplo, las patentes de EE. UU. 3.817.827; 3.850.752; 3.901.654; y 4.098.876). Cuando no están marcados, los polipéptidos de unión se pueden usar en ensayos, como los ensayos de aglutinación. Los polipéptidos de unión no marcados también se pueden usar en combinación con otro u otros reactivos adecuados que se pueden usar para detectar el polipéptido de unión, como un anticuerpo marcado reactivo con el polipéptido de unión u otro reactivo adecuado (p. ej., proteína A marcada).

En un ejemplo, los polipéptidos de unión se pueden utilizar en inmunoensayos enzimáticos, en los que los polipéptidos en cuestión se conjugan con una enzima. Cuando una muestra biológica que comprende una proteína CD38 se combina con los polipéptidos de unión en cuestión, se produce la unión entre los polipéptidos de unión y la proteína CD38. En un ejemplo, una muestra que contiene células que expresan una proteína CD38 (p. ej., células endoteliales) se combina con los anticuerpos del sujeto, y la unión se produce entre los polipéptidos de unión y las células que portan una proteína CD38 reconocida por el polipéptido de unión. Estas células unidas pueden separarse de los reactivos no unidos y la presencia del conjugado polipéptido de unión-enzima específicamente unido a las células puede determinarse, por ejemplo, poniendo en contacto la muestra con un sustrato de la enzima que produce un color u otro cambio detectable cuando es procesado por la enzima. En otro ejemplo, los polipéptidos de unión en cuestión pueden estar sin marcar, y se puede añadir un segundo polipéptido marcado (p. ej., un anticuerpo) que reconoce el polipéptido de unión en cuestión.

En algunos aspectos, también se pueden preparar kits para el uso en la detección de la presencia de una proteína CD38 en una muestra biológica. Dichos kits incluirán un polipéptido de unión a CD38 que se une a una proteína CD38 o a una parte de dicho receptor, así como uno o más reactivos auxiliares adecuados para detectar la presencia de un complejo entre el polipéptido de unión y la proteína receptora o partes de la misma. Las composiciones polipeptídicas se pueden proporcionar en forma liofilizada, solas o en combinación con anticuerpos adicionales específicos para otros epítopos. Los polipéptidos y/o anticuerpos de unión, que pueden estar marcados o no, pueden incluirse en los kits con ingredientes auxiliares (p. ej., tampones, como Tris, fosfato y carbonato, estabilizadores, excipientes, biocidas y/o proteínas inertes, por ejemplo, albúmina de suero bovino). Por ejemplo, los polipéptidos y/o anticuerpos de unión pueden proporcionarse como una mezcla liofilizada con los ingredientes auxiliares, o los ingredientes auxiliares pueden proporcionarse por separado para que el usuario los combine. Generalmente, estos materiales auxiliares estarán presentes en menos del 5% en peso respecto de la cantidad de polipéptido o anticuerpo de unión activo, y normalmente estarán presentes en una cantidad total de al menos aproximadamente un 0,001% en peso respecto de la concentración de polipéptido o anticuerpo. Cuando se emplea un segundo anticuerpo capaz de unirse al polipéptido de unión, dicho anticuerpo puede proporcionarse en el kit, por ejemplo, en un vial o contenedor separado. El segundo anticuerpo, si está presente, normalmente está marcado y puede formularse de manera análoga a las formulaciones de anticuerpos descritas anteriormente.

Las secuencias polipeptídicas se indican usando las abreviaturas estándar de una o tres letras. A menos que se indique lo contrario, cada secuencia polipeptídica tiene los extremos amino a la izquierda y los extremos carboxilo a la derecha; cada secuencia de ácido nucleico monocatenario y la cadena superior de cada secuencia de ácido nucleico bicatenario tiene el extremo 5' a la izquierda y el extremo 3' a la derecha. Una secuencia polipeptídica particular también se puede describir explicando cómo difiere de una secuencia de referencia.

Habiendo descrito ahora la presente invención en detalle, la misma se entenderá más claramente con referencia a los siguientes ejemplos, que se incluyen únicamente con fines ilustrativos y no pretenden ser limitantes de la invención.

Ejemplo

Se identificaron y seleccionaron anticuerpos humanos específicos para CD38 humano por sus características terapéuticas, incluida la especificidad hacia CD38 y un alto grado de afinidad hacia CD38 (p. ej., al menos 10-6 M). Los anticuerpos identificados se describen en la Tabla 1.

La capacidad de los anticuerpos anti-CD38 de unirse a las células que expresan CD38 y promover la actividad funcional se determinó mediante un ensayo de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC). En este ensayo, se añadieron células Ramos, una línea celular de linfoma de Burkitt, a los pocillos a 5x103 células por pocillo. A continuación, se añadieron anticuerpos de prueba (C38A2 ("38-A2"), C38D8 ("38-D8") y C38D4 ("38-D4") e IgG de control) a 1 microgramo por ml y se incubaron con las células Ramos durante 20 minutos a 37 °C. Después del lavado, las células efectoras se añadieron a diferentes concentraciones, lo que resultó en tres proporciones de efector respecto del objetivo. Las células efectoras eran células citolíticas naturales (NK) purificadas que habían sido incubadas durante la noche en presencia de IL-2 (100 U/ml). Se permitió que el ensayo prosiguiera durante al menos 4 horas, después de lo cual se evaluó la citotoxicidad utilizando un kit Promega Cyto-glo.

Los datos de la Figura 1 muestran que los anticuerpos anti-CD38 C38A2 y C38D8 se unieron y promovieron la actividad de ADCC contra las células Ramos seleccionadas como objetivo.

Tabla 1. Secuencias de aminoácidos de los dominios variables de la cadena ligera y pesada

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo totalmente humano aislado de una clase IgG que se une a un epítopo de CD38, en el que dicho anticuerpo tiene una secuencia del dominio variable de la cadena pesada/cadena ligera de SEQ ID N° 3/SEQ ID N° 4.

2. El anticuerpo completamente humano de la reivindicación 1, que es un anticuerpo IgG1.

3. Una célula huésped que comprende un vector de expresión recombinante que comprende ADN que codifica el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2.

4. Un método para preparar el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2, que comprende producir el anticuerpo en un sistema de expresión recombinante y, opcionalmente, purificar el anticuerpo.

5. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo anti-CD38 de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

6. El anticuerpo completamente humano de la reivindicación 1 o 2 o la composición farmacéutica de la reivindicación 5 para el uso en terapia.

7. El anticuerpo completamente humano para el uso de la reivindicación 1 o 2 o la composición farmacéutica para el uso de la reivindicación 5, en donde la terapia es el tratamiento del cáncer.

8. El anticuerpo completamente humano de la reivindicación 1 o 2 o la composición farmacéutica de la reivindicación 5 para el uso en el tratamiento de un linfoma no Hodgkin (LNH), linfoma de Burkitt (LB), mieloma múltiple (MM), leucemia linfocítica crónica B (LLC-B), leucemia linfocítica aguda (LLA) B y T, linfoma de células T (LCT), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia de células pilosas (LCP), linfoma de Hodgkin (LH) o leucemia mieloide crónica (LMC).