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ES2914099T3 - Inhibidores novedosos de ULK1 y métodos de uso de los mismos - Google Patents

Inhibidores novedosos de ULK1 y métodos de uso de los mismos Download PDF

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ES2914099T3
ES2914099T3 ES15836833T ES15836833T ES2914099T3 ES 2914099 T3 ES2914099 T3 ES 2914099T3 ES 15836833 T ES15836833 T ES 15836833T ES 15836833 T ES15836833 T ES 15836833T ES 2914099 T3 ES2914099 T3 ES 2914099T3
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ES
Spain
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optionally substituted
ulk1
mmol
compound
calc
Prior art date
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Active
Application number
ES15836833T
Other languages
English (en)
Inventor
Reuben J Shaw
Daniel F Egan
Nicholas Cosford
Benjamin Turk
Mitchell Vamos
Dhanya Raveendra Panickar
Matthew Chun
Douglas James Sheffler
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yale University
Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute
Salk Institute for Biological Studies
Original Assignee
Yale University
Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute
Salk Institute for Biological Studies
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

Un inhibidor de ULK1 para uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesite, en donde el inhibidor de ULK1 se coadministra con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de mTOR; en donde: (a) el inhibidor de ULK1 es un compuesto que tiene la estructura: **(Ver fórmula)** en la que: R1 es H; R2 se selecciona entre: **(Ver fórmula)** y **(Ver fórmula)** R4 es -NR7R8, en donde R7 es H y R8 se selecciona entre: N-alquilbenzamida, fenilo, ciclobutilo, alcoxialquilo y haloalquilo; R5 se selecciona entre: H, hidroxi, haloalquilo, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o (b) el inhibidor de ULK1 es un compuesto que tiene la estructura: **(Ver fórmula)** en la que: R1 es H; R2 es: **(Ver fórmula)** R4 se selecciona entre: ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido; R5 se selecciona entre: H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido, en donde el alquilo opcionalmente sustituido es CF3 y halo es Br o Cl; y R6 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores novedosos de ULK1 y métodos de uso de los mismos
Antecedentes
La autofagia es un mecanismo celular central para la eliminación de proteínas dañadas, complejos proteicos y orgánulos. Este proceso conservado juega un papel crucial en la respuesta celular a la privación de nutrientes y otros tipos de estrés, además de ser requerido para la adecuada homeostasis celular y tisular durante el desarrollo embrionario y en defensa contra patógenos. Los defectos en las rutas de autofagia están asociados a determinadas patologías humanas, incluyendo enfermedades infecciosas, trastornos neurodegenerativos y cáncer. A pesar de estas funciones celulares fundamentales altamente conservadas, los detalles moleculares y bioquímicos de cómo se inicia la autofagia para diferentes cargas y la coordinación de las etapas que van desde la iniciación del autofagosoma hasta la fusión final con el lisosoma siguen sin comprenderse bien.
Los estudios pioneros en la levadura incipiente definieron por primera vez 36 genes centrales de autofagia ("ATG") necesarios para este proceso, la mayoría de los cuales se conservan en los mamíferos. Uno de los componentes más importantes de la ruta en la levadura es el gen Atg1, que es remarcable por ser el único gen ATG central que codifica una serina/treonina quinasa. Atg1 forma un complejo con múltiples subunidades reguladoras, incluyendo Atg13 y Atg17. En mamíferos, parece haber dos homólogos de Atg1, ULK1 (unc-51 tipo quinasa 1) y ULK2, que se unen de manera similar a un homólogo de Atg13 y a una proteína similar a Atg17, FIP200. El complejo ULK1 quinasa se activa en respuesta a la privación de nutrientes y se cree que sirve como un iniciador crítico de la autofagia inducida por inanición. Aún no está claro si el complejo ULK1 es necesario para la autofagia masiva en estado estacionario que experimentan algunos tipos de células, así como si ciertas formas de autofagia selectiva también pueden proceder sin la participación del complejo ULK1. En el contexto de la autofagia inducida por inanición, ULK1 recibe entradas del sensor de energía celular proteína quinasa activada por AMP (AMPK), que se activa después de estreses celulares que reducen los niveles intracelulares de ATP, incluyendo la privación de glucosa u oxígeno así como las siguientes agresiones mitocondriales. Otra entrada crítica para ULK1 es la diana mecanicista del complejo de rapamicina 1 (mTORC1). Algunos estreses de nutrientes tales como la abstinencia de aminoácidos no dan como resultado una activación aguda de AMPK, sino que desencadenan la inactivación rápida de mTORC1, lo que da como resultado la activación de ULK1 incluso sin la entrada estimulante de AMPK. ULK1 se fosforila directamente en al menos una serina, Ser757, por mTORC1, y se fosforila en al menos cuatro serinas diferentes por AMPK para activarlo. Como la mayoría de los estreses anteriormente mencionados dan como resultado tanto la activación de AMPK como la inhibición de mTOR, la inanición debería dar como resultado un aumento en la fosforilación de los sitios AMPK en ULK1 y la pérdida del sitio mTORC1. Además, un estudio reciente sugiere que AMPK puede fosforilar directamente tanto Beclina-1 como Vps34, los dos componentes centrales del complejo Vps34/Beclina que es responsable de la producción localizada de PI3P necesaria para la biogénesis del autofagosoma, por lo tanto mediando positivamente el flujo autofágico. Quedan por investigar los requisitos relativos para la fosforilación de AMPK de los componentes del complejo Beclina frente a la fosforilación del complejo Ulk1 en diversas formas de autofagia.
Existe una necesidad en la técnica de novedosos compuestos que inhiban ULK1 y puedan usarse para tratar enfermedades o trastornos asociados a ULK1. La presente invención aborda esta necesidad.
Sumario de la invención
Un primer aspecto de la invención es un inhibidor de ULK1 para su uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesita, en donde el inhibidor de ULK1 se coadministra con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de mTOR; en donde:
(a) el inhibidor de ULK1 es un compuesto que tiene la estructura:
Figure imgf000002_0001
en donde:
R1 es H;
R2 se selecciona entre:
Figure imgf000003_0001
R4 es -NR7R8, en donde R7 es H y R8 se selecciona entre: N-alquilbenzamida, fenilo, ciclobutilo, alcoxialquilo y haloalquilo;
R5 se selecciona entre: H, hidroxi, haloalquilo, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o
(b) el inhibidor de ULK1 es un compuesto que tiene la estructura:
Figure imgf000003_0002
en donde:
R1 es H;
R2 es:
Figure imgf000003_0003
R4 se selecciona entre: ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido;
R5 se selecciona entre: H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido, en donde el alquilo opcionalmente sustituido es CF3 y halo es Br o Cl; y R6 es H;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, la enfermedad o afección se selecciona de: inmunosupresión, antirreestenosis, cáncer, síndrome de Cowden, síndrome de Peutz-Jegher, TSC (Complejo de Esclerosis Tuberosa), LAM (linfoangiomioleiomatosis) y degeneración macular relacionada con la edad.
En una realización, la enfermedad o afección se selecciona de: carcinoma de células renales, cáncer pancreático, TSC, linfoma, cáncer de endometrio, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de próstata, glioblastoma, astrocitoma, mieloma múltiple y carcinoma hepatocelular.
En una realización, la enfermedad o afección es dependiente de mTOR.
Un segundo aspecto de la invención es un compuesto que tiene la estructura:
Figure imgf000004_0001
en donde:
R1 es H;
R2 se selecciona entre:
Figure imgf000004_0002
R4 es -NR7R8, en donde R7 es H y R8 se selecciona entre: N-alquilbenzamida, fenilo, ciclobutilo, alcoxialquilo y haloalquilo;
R5 se selecciona entre: H, hidroxi, haloalquilo, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y
R6 es H;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, R2 se selecciona entre:
Figure imgf000004_0003
y
En una realización, R2 es:
Figure imgf000005_0001
Un tercer aspecto de la invención es un compuesto que tiene la estructura:
Figure imgf000005_0002
en donde:
R1 es H;
R2 es:
Figure imgf000005_0003
R4 se selecciona entre: ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido;
R5 se selecciona entre: H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido, en donde el alquilo opcionalmente sustituido es CF3 y halo es Br o Cl; y
R6 es H;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, R4 se selecciona entre: fenoxi, alcoxi (C1-C6) y -O-(N-alquilbenzamida).
En una realización, R4 es:
Figure imgf000005_0004
Un cuarto aspecto de la invención es un compuesto seleccionado entre:
Figure imgf000006_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización, el compuesto es:
Figure imgf000006_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Un quinto aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables del segundo, tercer o cuarto aspecto, y al menos un aditivo farmacéuticamente aceptable.
En una realización, la composición farmacéutica comprende además al menos un inhibidor de mTOR.
Descripción
En el presente documento se describen compuestos y métodos para tratar una enfermedad o afección en un sujeto, que comprende coadministrar a un sujeto que lo necesita: una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de fórmula A y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de mTOR.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad resistente a agentes anticáncer en un sujeto, comprendiendo el método seleccionar un sujeto que tenga una enfermedad resistente a agentes anticáncer y administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de Fórmula A.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección mediada por autofagia en un sujeto, comprendiendo el método administrar al sujeto que necesite el mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de fórmula A, en donde la enfermedad o afección mediada por autofagia comprende enfermedades o afecciones que surgen de mutaciones en los genes STK11, PTEN, TSC1, TSC2 y/o PIK3CA o enfermedades o afecciones indicadas por un biomarcador de sustrato mTOR Fosfo-S6K o Fosfo-4ebp1.
En determinadas realizaciones, el compuesto de fórmula A es:
Figure imgf000007_0001
Fórmula A,
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde en la Fórmula A: R10 se selecciona entre el grupo que consiste en: halógeno; -OR11 en donde R11 es H, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; -NR1R2 en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno individualmente entre el grupo que consiste en H, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido o NR1R2 juntos forman un heterociclo; o R4 y R10 juntos forman una estructura cíclica; R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido, hidroxilo y halógeno; R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido o arilo opcionalmente sustituido, carboxilo opcionalmente sustituido, ciano y nitro, o R5 y R6 forman juntos una estructura cíclica; y R6 es H o haloalquilo.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto, comprendiendo el método coadministrar a un sujeto que lo necesita: una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de fórmula I y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de mTOR.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección en un sujeto, comprendiendo el método coadministrar a un sujeto que lo necesita: una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de ULK1 seleccionado del grupo que consiste en una 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)amino-5-halopirimidina, 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)amino-5-(halo)alquil-pirimidina, 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)oxo-5-halo-pirimidina, 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)oxo-5-(halo)alquil-pirimidina, 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)tio-5-halo-pirimidina y 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)tio-5-(halo)alquilpirimidina; y una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de mTOR.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad resistente a agentes anticáncer en un sujeto, comprendiendo el método seleccionar un sujeto que tenga una enfermedad resistente a agentes anticáncer y administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de Fórmula I.
También se describe en el presente documento un método para tratar una enfermedad o afección mediada por autofagia en un sujeto, comprendiendo el método administrar al sujeto que necesite el mismo una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de Fórmula I, en donde la enfermedad o afección mediada por autofagia comprende enfermedades o afecciones que surgen de mutaciones en los genes STK11, PTEN, TSC1, TSC2 y/o PIK3CA o enfermedades o afecciones indicadas por un biomarcador de sustrato mTOR Fosfo-S6K o Fosfo-4ebp1.
En determinadas realizaciones, el compuesto de Fórmula I es:
Figure imgf000008_0001
Fórmula I,
en donde en la Fórmula I: R1 y R2 se seleccionan cada uno individualmente entre el grupo que consiste en H, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido o NR1R2 juntos forman un heterociclo; R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido; R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se describe en el presente documento un método para determinar la eficacia de un tratamiento con un inhibidor de mTOR, comprendiendo el método: realizar uno o más ensayos que detectan el nivel de al menos uno de los sustratos de mTOR Phospho-S6K y Phospho-4ebp1 en una muestra biológica de un sujeto al que se le administró un inhibidor de mTOR; y comparar el nivel de al menos uno de los sustratos de mTOR Phospho-S6K y Phospho-4ebp1 con un nivel de control respectivo encontrado en un tejido normal.
También se describen en el presente documento compuestos o una sal farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen una estructura
Figure imgf000008_0002
en donde: R1 es H; R2 se selecciona entre el grupo que consiste en
Figure imgf000008_0003
; R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido; R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxi, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H.
También se describen en el presente documento compuestos o una sal farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen una estructura de
Figure imgf000008_0004
en donde: R1 es H; R2 se selecciona entre el grupo que consiste en arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido o NR1R2 juntos forman un heterociclo; R4 se selecciona entre el grupo que consiste en opcionalmente sustituido ariloxi, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido; R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H.
También se describen en el presente documento compuestos o una sal farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen una estructura
Figure imgf000009_0001
, en donde: R1 es H; R2 es una anillo condensado de heteroarilo opcionalmente sustituido; R4 es -NR7R8, en donde R7 es H y R8 es un anillo condensado de heteroarilo opcionalmente sustituido; R5 es H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido o arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H.
También se describen en el presente documento compuestos o una sal farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen una estructura
Figure imgf000009_0002
, en donde R1 es H; R2 se selecciona entre el grupo que consiste en
Figure imgf000009_0003
se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido; R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxi, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H.
También se describen en el presente documento composiciones farmacéuticas, que comprenden:
(a) un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, que tiene una estructura de Fórmula I:
Figure imgf000010_0001
Fórmula I, en donde en la Fórmula I: R1 y R2 se seleccionan cada uno individualmente entre el grupo que consiste en H, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido o NR1R2juntos forman un heterociclo; R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido; R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y R6 es H;
(b) un inhibidor de mTOR; y
(c) al menos un aditivo farmacéuticamente aceptable.
También se describe en el presente documento un péptido recombinante que comprende la secuencia YANWLAASIYLDGKKK (SEQ ID NO: 1).
También se describe en el presente documento un método de detección para identificar compuestos que inhiben la actividad quinasa de ULK1, comprendiendo el método: poner en contacto un compuesto candidato, ULK1 y el péptido recombinante descrito en el presente documento; detectar la fosforilación del péptido recombinante en presencia y ausencia del compuesto candidato; e identificar un compuesto que inhiba la actividad quinasa de ULK1 si la fosforilación del péptido recombinante disminuye en presencia del compuesto candidato en comparación con la ausencia del compuesto candidato.
Las realizaciones anteriores y otras características y ventajas serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada, que procede con referencia a las figuras adjuntas.
Breve descripción de los dibujos
La FIGURA 1 es un esquema ilustrativo que ilustra que las señales de diversos supresores de tumores y oncogenes convergen en el complejo TSC1-TSC2 y en el complejo mTOR-raptor (mTORCl) para controlar el crecimiento celular y la autofagia a través de los sustratos que se muestran allí.
Las FIGURAS 2A-2E ilustran ensayos desarrollados para analizar la función de ULK1.
La FIGURA 2A es una serie de imágenes que ilustran ensayos de IP-quinasa que usan GST-Atg101 como sustrato. La FIGURA 2B es una serie de imágenes que ilustran la formación endógena de puntos LC3.
La FIGURA 2C es una serie de imágenes que ilustran el flujo autofágico y la regulación del procesamiento de p62 y LC3.
La FIGURA 2D es una serie de imágenes que ilustran la cuantificación TEM del contenido mitocondrial.
La FIGURA 2E es una serie de imágenes que ilustran los efectos sobre la apoptosis detectada por FACS de AnnexinaV. ULK1/2 o Atg5 RNAi aumentan la muerte celular en condiciones de privación de nutrientes.
Las FIGURAS 3A-3B ilustran cascadas para el uso ilustrativo de inhibidores de ULK1.
La FIGURA 3A es un esquema que ilustra la hipótesis en donde los sitios de sustrato de ULK1 recién identificados aumentan después del tratamiento de células TSC y pacientes de TSC con inhibidores de mTOR y pueden probarse como marcadores de eficacia de la inhibición de mTOR.
La FIGURA 3B es un esquema que ilustra la hipótesis en la que la inhibición de ULK1 combinada con el inhibidor de mTOR convierte la respuesta citostática en una respuesta citotóxica.
La FIGURA 4A es un conjunto de imágenes que ilustran la especificidad de la secuencia del motivo del sustrato ULK1.
La FIGURA 4B es una matriz que ilustra selectividades específicas de posición para ULK1.
La FIGURA 4C es un gráfico que ilustra la actividad de la quinasa ULK1 in vitro (ULKtido es SEQ ID NO: 1).
La FIGURA 4D es un gráfico que ilustra las sustituciones de restos (-7E, 5K, -3M, -3R, 1D y 2D son, respectivamente, SEQ ID NO: 2-7).
Las FIGURAS 5A-5F ilustran la identificación de novedosos sitios de fosforilación dependientes de ULK1 in vivo. FIGURA 5A: TS ULK1 etiquetado con Myc (TS ULK1; arriba) o ULK1 quinasa inactiva marcada con Myc (KI ULK1; abajo) se transfectó en células HEK293T junto con Atg101 etiquetado con TS Flag (Flag-AtglOl) y se inmunoprecipitó con agarosa M2. El inmunoprecipitado se corrió en un gel SDS-PAGE y se tiñó con coomassie y se recortó la banda correspondiente a Flag-Atg101, se aisló y se sometió a digestión tríptica y análisis CL/EM/EM. Los sitios fosforilados que se ajustan al motivo de fosforilación de ULK1 óptimo que se identificaron mediante este análisis están encuadrados. Las barras verdes, indicadas como (G), indican cobertura de péptidos y los resaltados morados, indicados como (P), indican eventos de fosforilación. (Y) = amarillo.
FIGURA 5B: TS ULK1 o KIULK1 se transfectaron en células HEK293T junto con mutantes puntuales de serinatoalanina Flag-AtglOl o Flag-AtglOl. Los mutantes específicos usados en este análisis están indicados por la posición o posiciones del aminoácido sustituido (arriba). Los lisados celulares se aislaron 24 horas después de la transfección, se corrieron en un gel SDS-PAGE que contiene el reactivo Phos-Tag (centro) o un gel SDS-PAGE convencional que carece del reactivo Phos-Tag (abajo) y se transfiere a membranas de PVDF, que posteriormente se inmunotransfirieron con los anticuerpos indicados.
FIGURA 5C: Igual que la FIGURA 5A excepto que se usa Beclina1 etiquetado con TS Flag como sustrato. (Y) = amarillo; (G) = verde; (P) = morado; (B) = azul; (R) = rojo.
FIGURA 5D: Igual que la FIGURA 5A excepto que se usa Ambral etiquetado con TS Flag como sustrato. (B) = azul; (P) = morado.
FIGURA 5E: Igual que la FIGURA 5B excepto que se usan mutantes puntuales de serina a alanina de Sintenina-1 etiquetada con TS Flag (Flag-Sintenina-1) o Sintenina-1 etiquetada con Flag. Los mutantes específicos usados en este análisis están indicados por la posición o posiciones del aminoácido sustituido (arriba). Los lisados celulares se aislaron 24 horas después de la transfección, se corrieron en un gel SDS-PAGE que contiene el reactivo Phos-Tag (centro) o un gel SDS-PAGE convencional que carece del reactivo Phos-Tag (abajo) y se transfiere a membranas de PVDF, que posteriormente se inmunotransfirieron con los anticuerpos indicados. (B) = azul; (Y) = amarillo; (G) = verde; (R) = rojo.
FIGURA 5F: Alineación de todos los novedosos sitios de fosforilación de ULK1 identificados en este análisis, junto al sitio de fosforilación de STING, que es un sitio ULK1. Los sitios de fosforilación que contienen restos que se ajustan al motivo de fosforilación óptimo de ULK1 en las posiciones -3 (verde), 1 (verde) y 2 (amarilla) están resaltadas. Para la posición a: (G) para todas las posiciones resaltadas excepto (B) para Atg13 (Ser389), Beclina1 (Ser96), Beclina1 (ser337). Para la posición b: (G) para Atg13 (Ser389), Atg101 (ser11), Atg101 (Ser203), FIP200 (Ser1323), Sintenina 1 (ser 6), Sintenina1 (Ser61) y (P) para las posiciones resaltadas restantes. (G) = verde; (P) = morado.
Las FIGURAS 6A-6F ilustran el descubrimiento de que Vps34 Ser249 es un novedoso sitio de fosforilación de ULK1 in vivo.
FIGURA 6A: Ya sea TS ULK1 etiquetado con Myc (TS ULK1; derecha) o ULK1 quinasa inactiva marcada con Myc (KI ULK1; izquierda) se transfectó en células HEK293T junto con Vps34 etiquetado con TS Flag (Vps34 TS) y se inmunoprecipitó con agarosa M2. El inmunoprecipitado se corrió en un gel SDS-PAGE y se tiñó con coomassie y se recortó la banda correspondiente a TS Vps34, se aisló y se sometió a digestión tríptica y análisis CL/EM/EM. Las barras verdes indican la cobertura de péptidos y los resaltados morados indican eventos de fosforilación. La flecha indica la serina 249.
FIGURA 6B: La alineación de Clustal de Vps34 serina 249 entre especies muestra que se conserva a lo largo de la evolución y se ajusta al motivo de fosforilación óptimo de ULK1. (B) = azul; (G) = verde; (Y) = amarillo.
FIGURA 6C: Un ensayo de quinasa in vitro se realizó usando TS Vps34 etiquetado con Flag (Vps34 TS) o un Vps34 mutante puntual de serina-alanina etiquetado con Flag (Vps34 S249A) como sustratos para TS ULK1 o KI ULK1. El ensayo de quinasa in vitro se realizó en presencia de P-ATP radiomarcado y-32 (arriba). TS Vps34, Vps34 S249A, TS ULK1 y KI ULK1 se produjeron en células HEK293T (abajo).
FIGURA 6D: Vps34 TS o Vps34 S249A y TS ULK1 o KI ULK1 se transfectaron en células HEK293T. Los lisados celulares se aislaron 24 h después de la transfección, se corrieron en un gel SDS-PAGE y se transfirieron a membranas de PVDF, que posteriormente se sondaron con los anticuerpos indicados. La flecha indica un cambio de movilidad representativo de la fosforilación que solo se produce con la combinación Vps34 TS y TS ULK1. FIGURA 6E: Las células HEK293T se transfectaron con Vps34 TS o Vps34 S249A y TS ULK1, ULK2 etiquetado con TS Myc (ULK2) o ULK3 etiquetado con TS Myc (ULK3). Los lisados celulares se aislaron 24 h después de la transfección y se inmunotransfirieron con los anticuerpos indicados.
La FIGURA 6F muestra una comparación del anticuerpo fosfo-Ser249 Vps34 con un anticuerpo fosfo-Ser15 Beclina disponible en el mercado, demostrando la inducción paralela de cada sitio cuando se coexpresó la quinasa ULK1 de tipo silvestre pero no en las células HEK293T. (P) = morado; (G) = verde; (Y) = amarillo; (R) = rojo.
Las FIGURAS 7A-7F ilustran la identificación en pantalla de celuloide del compuesto 14 como un potente inhibidor de quinasa ULK1 frente a sus sitios de fosforilación de sustrato en dirección 3'.
FIGURA 7A: el valor de CI 50 para el compuesto 14 contra TS ULK1 y ULK2 se determinó usando un ensayo de quinasa in vitro (CI50 de 107 nM para ULK1 y 711 nM para ULK2). t S ULK1 (izquierda) y TS ULK2 (derecha) se analizaron usando MBP 10 pM en presencia de y-32P-ATP radiomarcado 30 pM. El compuesto 14 se probó por triplicado en un modo de CI50 de diez dosis con dilución en serie de 3 veces y una dosis de partida de 1 pM. FIGURA 7B: Las células de riñón embrionario humano (HEK293T) se transfectaron con ULK1 TS o quinasa inactiva (KI) etiquetado con Myc y Vps34 etiquetado con TS Flag (TS Vps34). A las 24 h después de la transfección, las células se trataron con un panel de supuestos inhibidores competitivos de ULK1 de una manera de respuesta a dosis (1, 10, 50 pM). Los lisados celulares se aislaron después de 1 h de tratamiento y se inmunotransfirieron con los anticuerpos indicados. Se muestran los resultados representativos para el compuesto 14.
FIGURA 7C: Las células HEK293T se transfectaron con Ts o KI ULK1 y TS Vps34 (izquierda) o Beclina1 marcado con TS Flag (TS Beclina1; derecha). A las 24 h después de la transfección, las células se trataron con el compuesto 14 (10 pM) o DMSO. Los lisados celulares se aislaron después de 1 h de tratamiento y se inmunotransfirieron con los anticuerpos indicados.
FIGURA 7D: Los fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) TS o con doble inactivación génica Ulk1/Ulk2 se trataron con medio fresco (medio Eagle modificado de Dulbecco [DMEM] que contenía FBS al 10 %) que contenía INK128 1 |jM, AZD8055 1 |jM o DMSO o con medio de inanición (EBSS) en presencia o ausencia de compuesto 1410 j M. Los lisados celulares se aislaron después de 1 h de tratamiento y se inmunotransfirieron con los anticuerpos indicados. El asterisco denota una banda no específica.
FIGURA 7E: (arriba) El perfil de selectividad de la quinasa para el compuesto 14 se determinó mediante el servicio de creación de perfiles DiscoverRx KINOMEscan. Resumiendo, el compuesto 14 se exploró a una dosis de 1 j M para su capacidad para alterar la unión de un panel de 456 quinasas al sustrato en un ensayo de unión in vitro. Las puntuaciones de las visitas a la pantalla principal se informan como un porcentaje del control DMSO (% de control). Las puntuaciones más bajas reflejan efectos inhibidores más fuertes del compuesto 14 en la quinasa diana. El compuesto 14 era muy selectivo, inhibiendo solamente 8 quinasas >95 % y 19 quinasas > 90 % cuando se probó a 10 j M. (abajo) Se realizaron ensayos de quinasa in vitro para quinasas seleccionadas. Estos ensayos se realizaron en presencia del compuesto 14 en una forma de respuesta a la dosis para identificar el valor de CI50 del compuesto 14 para cada una de estas quinasas individuales. Las quinasas cuyo valor de CI50 fue menos de 1 vez de diferencia que ULK1 se resaltan en amarillo. De las quinasas restantes, aquellas quinasas cuyo valor de CI50 fue menor que el identificado para ULK2 están resaltadas en marrón.
FIGURA 7F: Se generó un mapa de interacción TREEspot para representar visualmente el perfil de selectividad para el compuesto 14 contra el panel de quinasas probadas en 5A. Las quinasas cuya unión se inhibió por el compuesto 14 están marcadas con círculos rojos, indicando los círculos más grandes efectos inhibitorios más fuertes. Las quinasas probadas en este análisis se ordenan de acuerdo con sus agrupaciones filogenéticas en el kinoma humano.
La FIGURA 8A es un conjunto de imágenes que muestran que a las 24 h después de la privación de aminoácidos, el 20 % de los MEF tratados con vehículo dieron positivo para AnexinaV, un marcador apoptótico clásico, mientras que el 50 % de las células tratadas con compuesto 14 eran positivas para AnexinaV.
La FIGURA 8B es un conjunto de imágenes que muestran que un análisis de inmunotransferencia en el transcurso del tiempo de células privadas de aminoácidos reveló que la caspasa-3 escindida activa y la escisión de su PARP diana se observaron solo apreciablemente en células de inanición cotratadas con compuesto 14, que era paralelo a los marcadores apoptóticos por inmunocitoquímica (FIGURA 8C).
La FIGURA 9A es un conjunto de imágenes que muestran que en células de glioblastoma U87MG y células de carcinoma de pulmón Kras p53 murino, el compuesto 14 promovió la apoptosis (células AnexinaV+) de forma selectiva en el estado de inanición de nutrientes.
La FIGURA 9B es un conjunto de imágenes que muestran que, como se observa en MEF con privación de nutrientes combinada con el inhibidor ULK1, el análisis de inmunotransferencia reveló que solo la combinación de inhibidores de ULK1 y mTOR desencadenó la activación de caspasa en células A549, paralelo al análisis FACS de muerte celular.
La FIGURA 9C es un conjunto de imágenes que muestran que la inducción de células A549 apoptóticas Anexina-V+ aumentó aún más drásticamente con una dosificación de 10 o 20 j M del compuesto 14.
La FIGURA 9D es una tabla que muestra que iARN a ULK1 eliminó por completo la capacidad de AZD8055 de inducir puntos de LC3, mientras que iARN a FAK, Src, AuroraA o JAK3 no tuvieron ningún efecto. Se transfectaron células de próstata humana PC3 que expresan de manera estable una construcción que codifica LC3 fusionada con la proteína verde fluorescente (GFP-LC3) con ARNip contra las 18 quinasas principales cuya unión demostró ser inhibida por el compuesto 14. A las 48 h después de la transfección de iARN, las células se trataron con 1 j M de los inhibidores catalíticos de mTOR AZD8055 o INK128 durante 4 h y se evaluó la presencia de puntos de g FP-LC3. Se muestra el número promedio de puntos de GFPLC3 y SD para cada ARNip y tratamiento farmacológico. SRC, c-Src; c-Src quinasa, Cs K.
La FIGURA 9E es una imagen de inmunofluorescencia de células A549 tratadas en presencia o ausencia de compuesto 14 5 j M durante 2 h seguido de 4 j M del inhibidor catalítico mTOR AZD8055 durante 24 h. Las vacuolas autofágicas se detectaron con el kit de detección de autofagia Cyto-ID y se visualizan en verde, mientras que los núcleos celulares se contrastaron con DAPI y se visualizan en azul.
La FIGURA 9F son imágenes de inmunofluorescencia representativas de los datos mostrados en la FIGURA 9D. Los puntos GFP-LC3 se visualizan en verde y los núcleos celulares, que se contratiñeron con DAPI, se visualizan en azul.
Las FIGURAS 10A-10C son una serie de alineaciones de secuencias que ilustran el descubrimiento de múltiples sitios de serina en FIP200 y Atg13 que llevan el consenso de sustrato ULK1 cuya fosforilación fue inducida por ULK1 sobreexpresado in vivo. La FIGURA 11A muestra que en HEK293T, el compuesto 14 colapsó el cambio de banda que sobreexpresaron sintenina-1 y Atg13 cuando se coexpresaron con ULK1 de tipo silvestre.
La FIGURA 11B ilustra que el índice de selectividad S(35) del compuesto 14 = 0,123 donde S(35) es (número de quinasas no mutantes con % Ctrl <35)/(número de quinasas no mutantes probadas), según se mide por el % del kinoma inhibido por debajo del 35 % del control.
Descripción detallada
La autofagia es una respuesta celular a la pérdida de nutrientes en la cual las células catabolizan diversas proteínas y orgánulos para proporcionar componentes básicos y metabolitos críticos necesarios para la supervivencia celular. Además, la autofagia desempeña un papel homeostático crítico en muchos tejidos al retirar los agregados de proteínas y los orgánulos defectuosos que se acumulan con el daño celular con el tiempo. Aunque la genética definió por primera vez los componentes centrales de la autofagia conservados en todos los eucariotas, los detalles moleculares de cómo los diferentes complejos de autofagia se regulan entre sí y el orden temporal y espacial preciso de los eventos bioquímicos involucrados en la inducción de la autofagia son poco conocidos en la actualidad.
Se ha hecho mucho progreso en la decodificación de la función molecular del complejo TSC1-TSC2, el cual está codificado por genes inactivados en tumores y lesiones en pacientes con Complejo de Esclerosis Tuberosa. Las proteínas supresoras de tumores TSC son reguladores centrales del crecimiento celular a través de los efectos sobre un complejo quinasa compuesto por la quinasa diana de rapamicina en mamíferos (mTOR) y su subunidad reguladora Raptor y otros componentes (mTORC1). El complejo TSC recibe señales de diversas entradas celulares incluyendo del NF1, PTEN y supresores de tumores LKB1 y, en respuesta, el complejo TSC regula negativamente mTORC1. Los pacientes que heredan o adquieren mutaciones en el gen TSC1 o TSC2 muestran una actividad elevada de mTORC1, que dirige el sobrecrecimiento celular. El supresor de tumores LKB1 y su diana posterior, la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), regular directamente la fosforilación del supresor de tumores TSC2 y Raptor para regular negativamente la actividad de mTORC1 en condiciones en las que la energía intracelular es baja, tal como después de la privación de nutrientes.
El resultado mejor estudiado de la actividad de mTORC1 es el control del crecimiento celular, que se logra mediante la fosforilación de mTORC1 de sustratos en dirección 3' incluyendo los reguladores de traducción 6K1 y 4ebp1. Aunque se aprecia ampliamente el papel de mTORC1 en el crecimiento celular, más recientemente se ha apreciado un papel conservado para mTORC1 en el proceso celular de autofagia. Los estudios genéticos definieron por primera vez los genes implicados en la autofagia y el complejo más avanzado que controla el inicio de la autofagia está compuesto por la quinasa ATG1 en la levadura incipiente (ULK1 en mamíferos), cuya actividad se estimula cuando los nutrientes son bajos.
ULK1 se fosforila directamente en diversos restos por AMPK, que activa ULK1 (Ser467, Ser555, Thr575, Ser638). Por el contrario, la fosforilación directa de ULK1 por mTORC1 en un sitio distinto (Ser757) da como resultado la inactivación de ULK1 (FIGURA 1), en consonancia con los estudios que demuestran que mTORC1 inhibe el complejo ULK1 en células de mamíferos, en paralelo a cómo TOR inhibe los ortólogos Ulk1/Atg1 en eucariotas inferiores. Sin desear quedar ligado a teoría alguna, en células y tumores con mutaciones TSC y mTORC1 hiperactivo, ULK1 puede estar altamente fosforilado en Serina 757 por mTORC1 y mantenerse en estado inactivo. En determinadas realizaciones, en células deficientes de TSC, se suprime el proceso de autofagia. Aunque se requiere la fosforilación de ULK1 por AMPK para una autofagia adecuada después de la inanición, la inducción de autofagia mediante el tratamiento de células con inhibidores de mTOR no requiere AMPK, pero requiere ULK1 y regulación mTOR de ULK1. Esto indica que la inhibición farmacológica de mTOR es suficiente para activar ULK1 y que, de hecho, ULK1 se activa después del tratamiento con inhibidores de mTOR aunque la AMPK no esté activada.
Estos descubrimientos tienen implicaciones importantes para el origen y tratamiento de TSC. La restauración de la función de ULK1 y la autofagia dependiente de ULK1 pueden tener beneficios significativos en diferentes patologías implicadas en TSC. En consecuencia, el tratamiento con inhibidores de mTOR de células y tumores deficientes en TSC da como resultado una regulación positiva de la actividad de ULK1 y la autofagia. Aunque la autofagia es generalmente beneficiosa, en el contexto del tratamiento de tumores es un arma de doble filo que también promueve la supervivencia celular. ULK1 y otros componentes centrales de autofagia promueven la supervivencia celular en condiciones de estrés celular (FIGURA 2). Esta predicción biológica celular (el tratamiento con inhibidores de mTOR reduce el crecimiento celular pero también promueve la supervivencia celular de las células tratadas debido a la autofagia elevada) es consistente con observaciones clínicas recientes. Aunque los rapálogos exhiben determinada efectividad contra manifestaciones clínicas específicas de TSC, el efecto de los fármacos parece transitorio, ya que después de la retirada, los tumores vuelven rápidamente a su tamaño anterior al tratamiento. Esto sugiere que estos agentes son en gran parte citostáticos y, aunque provocan la regresión y el encogimiento de las células tumorales, no conducen a la muerte y eliminación de las células tumorales.
Dado que la inhibición de mTOR regula directamente ULK1, la inducción de autofagia y supervivencia celular por rapálogos y otros inhibidores de mTOR puede deberse en parte a la activación de ULK1. Un resultado es que la combinación de la inhibición de ULK1 con el tratamiento con el rapálogo convierte el efecto citostático convencional de la rapamicina en un efecto citotóxico una vez que se retira el beneficio de supervivencia de la autofagia de ULK1. Este resultado se demuestra en cultivo celular usando ARNip de ULK1 e inhibidores de quinasa ULK1 directos recién desarrollados descritos en el presente documento. La inhibición de ULK1 en el contexto del tratamiento con inhibidores de mTOR de hecho condujo a aumentos drásticos en la muerte celular de las células tumorales, convirtiendo una respuesta más citostática de los inhibidores de mTOR en muerte celular. En determinadas realizaciones, los inhibidores catalíticos de ULK1 son clínicamente útiles en el tratamiento de TSC.
ULK1 es el único componente central conservado de la ruta de autofagia que es una serina/treonina quinasa, haciéndolo una diana particularmente única de oportunidad para el desarrollo de compuestos para controlar la autofagia y, más específicamente, autofagia dependiente de mTOR. Igualmente importante para un índice terapéutico clínico para los agentes que inhiben ULK1, los ratones modificados genéticamente para carecer por completo de ULK1 son viables sin patología significativa.
Por lo tanto, un inhibidor selectivo de ULK1 quinasa puede ser bien tolerado por los tejidos normales, pero no por las células tumorales que se han vuelto dependientes de la autofagia para sobrevivir frente a la aplicación terapéutica de la inducción de la autofagia.
Aunque todo el proceso de autofagia promueve la supervivencia celular, actualmente los agentes mejor establecidos para inhibir farmacológicamente la autofagia son agentes lisotrópicos tales como la clorocina o la bafilomicina. De hecho, la clorocina tiene actividad antitumoral cuando se combina con terapias dirigidas y en el contexto de la deficiencia de TSC. Sin embargo, la exposición prolongada a dichos agentes que alteran el flujo de lisosomas en todos los tejidos puede tener más complicaciones clínicas que las potencialmente observadas con un inhibidor selectivo de ULK1 quinasa, haciendo de la inhibición de ULK1 una diana extremadamente selectiva y particularmente atractiva para el tumor TSC donde la activación de mTOR es fundamental para la patología.
Dado que el componente más en dirección 5' de la cascada de autofagia conservada codifica la única serina/treonina quinasa en la cascada, la fosforilación dependiente de ULK1 de otros componentes de la ruta puede instruir y proporcionar señales temporales y espaciales adecuadas. Aunque se ha apreciado una comprensión detallada de cómo ULK1 es controlado por eventos de fosforilación opuestos por AMPK y mTORC1, el requerimiento absoluto de ULK1/2 en diferentes formas de autofagia de mamíferos se ha vuelto menos claro debido a descubrimientos recientes de que AMPK y mTOR también regulan múltiples componentes del complejo Beclina-Vps34 en dirección 3' que inicia directamente la formación de lípidos PI3P que se incorpora al omegasoma y se mantiene para representar una iniciación física directa de los autofagosomas.
La inducción de la actividad de ULK1 quinasa después de la inhibición catalítica de mTORC1 sola (FIGURA 7D) es consistente con la inducción por privación de aminoácidos de la actividad de la ULK1 quinasa, que no parece implicar a AMPK. mTORC1 fosforila e inhibe ULK1 a través de al menos un sitio de serina bien establecido en ULK1, Ser757. Los inhibidores de mTOR se están probando ampliamente en ensayos clínicos para oncología y los análogos de rapamicina son el tratamiento convencional aprobado para el cáncer de riñón avanzado y otros tumores sólidos. Dado que ULK1 es una quinasa inhibida por mTORC1, una delimitación adicional de los sitios de fosforilación del sustrato ULK1 puede generar biomarcadores importantes para los inhibidores de mTOR, ya que su señal aumentará en las condiciones exactas cuando la fosforilación de los sustratos mTORC1 está disminuyendo.
Por otro lado, la autofagia proporciona una señal de supervivencia a las células que enfrentan la inhibición de mTORC1 y este efecto puede depender en gran medida de ULK1 como el mecanismo principal por el cual mTORC1 suprime la autofagia, a diferencia de la pérdida de nutrientes del tablero que puede comprometer las rutas de autofagia a través de medios dependientes de ULK1 e independientes de ULK1 (incluyendo fosforilación directa de complejos Beclin-Vps34 por quinasas de estrés como AMPK y p38, etcétera). La inhibición de ULK1 convierte la respuesta citostática a la inhibición de mTOR en una respuesta citotóxica debido a la pérdida de la capacidad de la autofagia para promover la supervivencia celular, como se demuestra en células A549 NSCLC (FIGURA 9C).
A pesar de la avalancha de estudios que identifican detalles moleculares de cómo los nutrientes regulan ULK1 a través de los efectos opuestos de mTORC1 y AMPK, las dianas críticas del complejo quinasa ULK1 en el inicio de la autofagia siguen siendo en gran parte desconocidos. A pesar de la falta de detalles moleculares de cómo ULK1 media el inicio de la autofagia, la interrupción genética de ULK1, similar a la interrupción genética de cualquier gen central de autofagia, da como resultado la pérdida de viabilidad celular en condiciones de escasez de nutrientes. La capacidad de la autofagia para promover la supervivencia celular después de diversos estreses celulares ha llevado al examen directo de los inhibidores de la autofagia para el tratamiento del cáncer. Hasta la fecha, sin embargo, los inhibidores de la autofagia potentes y selectivos han permanecido esquivos ya que la mayoría de las proteínas centrales de la autofagia no son enzimas susceptibles de tratamiento. Como ULK1 es la única serina/treonina quinasa conservada en la ruta de la autofagia, se desvelan en el presente documento los primeros inhibidores de quinasa competitivos con ATP de molécula pequeña para ULK1. En el presente documento se describe la capacidad de estos compuestos para mejorar la supervivencia celular después de diferentes estreses, incluyendo el tratamiento terapéutico de las células cancerosas.
El hecho de que ULK1 sea la única serina/treonina quinasa conservada en la cascada de la autofagia la convierte en una diana única y atractiva para el desarrollo terapéutico. El descubrimiento desvelado en el presente documento de que el compuesto 14 sinergiza potentemente con la privación de nutrientes para desencadenar la muerte celular en las células tumorales, aunque tiene efectos mínimos en las células que crecen en medios completos, corrobora los descubrimientos con pérdida genética de ULK1/2. El descubrimiento de que ULK1 y su compañero de unión Atg13 se degradan selectivamente mediante el tratamiento conjunto de inanición y compuesto 14, pero no después de ninguno solo, indica que el grupo activo del complejo quinasa ULK1 puede ser especialmente sensible a la degradación inducida por el compuesto 14. Esto proporciona biomarcadores adicionales para la inhibición de ULK1 in vivo, ya que sugiere que cuando las células dependen de ULK1 para su supervivencia, su ULK1 se degradará cuando se inhiba eficazmente mediante inhibidores competitivos de ATP en la diana. En determinadas realizaciones, los niveles totales de ULK1 o Atg13 pueden servir como un biomarcador para el direccionamiento y la supresión eficaces de ULK1 en contextos en los que se activa para actuar como un mecanismo de promoción de la supervivencia.
Colectivamente los datos indican que la supresión química de ULK1 conduce a un bloqueo en la capacidad de los inhibidores de mTOR para inducir la autofagia, que desencadena una rápida apoptosis en células tumorales adictas a la señalización de mTOR, tales como tumores que carecen de Pten, LKB1, TSC1, TSC2 o NF1 o con mutaciones oncogénicas en Kras, Rheb, p110a u otros componentes de la ruta Pi3K-mTOR. Dado que los inhibidores de la mTOR quinasa o los rapálogos se encuentran en ensayos oncológicos clínicos generalizados, los datos sugieren que la combinación de inhibidores de ULK1 como el compuesto 14 con inhibidores de mTOR convierte sus efectos en gran parte citostáticos observados en la clínica en efectos más citotóxicos, haciendo de la inhibición de ULK1 una nueva y emocionante vía terapéutica para evitar la resistencia terapéutica en los muchos pacientes tratados con inhibidores de mTOR.
También se describe en el presente documento un nuevo conjunto de señales bioquímicas que se alteran en las células alteradas en pacientes con TSC. Las señales forman un circuito llamado señal ULK1, que normalmente está activo en las células de nuestro cuerpo para proporcionar un mecanismo de control de calidad para garantizar la salud y el reciclaje de las partes celulares. En células defectuosas en los genes TSC tales como las que se encuentran en las lesiones, tubérculos y tumores de pacientes con TSC, esta señal ULK1 está bloqueada debido a elevaciones en la actividad de un complejo proteico llamado mTORC1, que es lo más importante para lo que sirven los genes TSC en las células: desactivar mTORC1. Entonces, cuando los genes TSC son defectuosos, la actividad de mTORC1 es alta y desactiva ULK1. Esto da como resultado una pérdida de control de calidad y reciclaje celular, lo que contribuye al crecimiento aberrante y al comportamiento celular de las células deficientes en TSC. Estos nuevos descubrimientos hacen una serie de predicciones sobre mejores formas de tratar y diagnosticar TSC, desde el uso actual de inhibidores de mTOR hasta su combinación con inhibidores de ULK1, y el uso de marcadores de actividad de ULK1 para determinar cuándo y dónde se interrumpe de manera efectiva mTOR en pacientes con TSC durante la terapia.
Los mejores tratamientos disponibles para TSC actualmente son medicamentos que pueden suprimir la mTOR elevada que se encuentra en las células de estos pacientes, tales como el fármaco rapamicina y sus análogos (llamados "rapálogos"). El tratamiento con rapálogos y fármacos inhibidores directos de mTOR más nuevos conducirá a una activación de ULK1 una vez que se alivie su bloqueo por mTOR. Esto significa que los marcadores de la actividad de ULK1 pueden usarse en biopsias y muestras de sangre de pacientes con TSC para determinar lo bueno que es el bloqueo de mTOR de los rapálogos u otros inhibidores de mTOR, ya que la señal de ULK1 "subirá" proporcionalmente conforme baje mTOR.
En el presente documento se describen marcadores que aumentan cuando mTOR se bloquea eficazmente en la terapia. Todos los marcadores actuales se reducen cuando mTOR está bloqueado, pero puede ser más fácil cuantificar una señal que es baja en el estado inicial y luego aumenta con el tratamiento, proporcional a cuán eficaz es el tratamiento. Para la combinación terapéutica de inhibidores de ULK1 y mTOR, el beneficio pueden ser respuestas mucho más durables y duraderas, lo que significa la erradicación completa de las células tumorales o la restauración de la función de los tipos de células deficientes en TSC que no son tumorales (por ejemplo, tubérculos cerebrales), sin que los pacientes necesiten mantener la rapamicina durante el resto de sus vidas.
En el proceso de descifrar cómo se regula ULK1 por fosforilación, se han desarrollado varios ensayos de la función ULK1. En primer lugar, se caracterizaron anticuerpos ULK1 capaces de inmunoprecipitar ULK1 endógeno, permitiendo realizar ensayos de actividad de quinasa en ULK1 aislado de esta manera de células (FIGURA 5A). También se ha caracterizado la regulación de la autofagia y el flujo autofágico en diferentes tipos de células cuando se altera la función de ULK1. Los marcadores y ensayos mejor establecidos en los que se han caracterizado los efectos de la deficiencia de ULK1 son el componente de autofagosoma LC3b, que forma puntos agregados tras la inducción de la autofagia y que se somete a una lipidación covalente y un procesamiento cuando se localiza en autofagosomas maduros. Por lo tanto uno puede monitorizar la lipidación de LC3b endógeno mediante inmunotransferencia y formación de puntos por inmunofluorescencia indirecta en LC3b endógeno y cuantificación de puntos usando software morfométrico y NIH Image J (FIGURAS 5C, 5E). Se ha validado que un colorante lipófilo comercial para autofagosomas (CytoID autophagy, Enzo Lifesciences) es una lectura fiable de autofagosomas (FIGURA 10). Otro marcador de autofagia ampliamente usado es la proteína p62 Secuestrosoma-1, cuyo recambio se induce selectivamente por autofagia. Por lo tanto en condiciones de bloqueo farmacológico o genético de la autofagia, los niveles de p62 están elevados (FIGURA 5C). Uno de los orgánulos celulares que dependen críticamente de la autofagia para la retirada selectiva tras el daño es la mitocondria. La destrucción autofágica de las mitocondrias dañadas se conoce como mitofagia y los defectos en la mitofagia se caracterizan por la acumulación de mitocondrias de apariencia defectuosa por microscopía electrónica de transmisión (MET) y en el potencial de la membrana mitocondrial como se ensaña mediante el colorante molecular JC-1.
Otro proceso celular controlado por ULK1 en condiciones de estrés celular es la supervivencia celular. La supresión de la función ULK por iARN da como resultado tasas elevadas de apoptosis en células sujetas a privación de nutrientes.
Además de estos ensayos de la función de ULK1, se perfiló la especificidad de secuencia de qué aminoácidos prefiere ULK1 en sustratos peptídicos fosforilados en ensayos de quinasa in vitro. Este método reveló que ULK1 es una quinasa extraña que no prefiere restos cargados en ninguna posición particular, más bien favoreciendo restos hidrófobos en varias posiciones, más notablemente la posición -3, 1 y 3 con respecto al sitio fosfoaceptor (FIGURA 6A). En el transcurso de la evaluación de las interacciones de ULK1 con otros componentes centrales de la autofagia, se descubrió que la sobreexpresión de ULK1 de tipo silvestre pero no quinasa muerta con el complejo Vps34/Beclina condujo a un cambio de movilidad drástico de estos componentes complejos en SDS-PAGE. El análisis de la secuencia de Vps34 condujo a la identificación de una serina altamente conservada en Vps34 que coincidía con el motivo de sustrato ULK1 óptimo (FIGURA 6B). Consistente con Vps34 sirviendo un sustrato directo para ULK1, cantidades crecientes de quinasa ULK1 purificada condujeron a un desplazamiento de movilidad de Vps34 después del ensayo de quinasa in vitro (FIGURA 6B). Se usó espectrometría de masas en Vps34 purificada a partir de células que expresan ULK1 de tipo silvestre o quinasa inactiva para identificar eventos de fosforilación cuya abundancia se reguló de manera dependiente de ULK1 in vivo. Vps34 Serina 249 se fosforiló completamente en la muestra aislada de células que expresaban ULK1 de tipo silvestre pero no ULK1 quinasa muerta (FIGURA 6E). Además, este fue el único sitio fosforilado estequiométricamente en las células activadas con ULK1, lo que sugiere que la fosforilación de Vps34 Ser249 es extremadamente sensible a la actividad de la quinasa ULK1 in vivo en relación con otros sitios en Vps34. Finalmente, se probó si la fosforilación de Ser249 estaba implicada en el cambio de banda que sufre Vps34 en SDS-PAGE. De hecho, el mutante Vps34 Ser249Ala no fosforilable no experimenta un cambio de movilidad en presencia de ULK1 activo (FIGURA 6D). Colectivamente, estos datos sugieren que Vps34 Ser249 es una diana directa de la fosforilación de ULK1.
La fosforilación de sitios específicos en Vps34, Beclina y Ambral por ULK1 pueden servir como biomarcadores de la efectividad terapéutica de la inhibición de mTOR. Estos sitios son Vps34 Serina 249, Beclina Serina 15, 30, 96 y 337 y Ambral Serina 465 y 635 (FIGURA 5F). Todos los marcadores actuales de la actividad de mTOR se reducen cuando se bloquea mTOR (Fosfo-S6, Fosfo-S6K1, Fosfo-4ebp1), mientras que la fosforilación de estos sustratos de ULK1 aumenta cuando se inhibe mTOR y, por lo tanto, debería servir como lecturas alternativas útiles de la actividad de mTOR.
Definiciones
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen en general el mismo significado que el que entiende habitualmente un experto en la materia a la que pertenece la presente divulgación. Las siguientes referencias proporcionan a los expertos una definición general de muchos de los términos usados en esta divulgación: Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2a ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker, Ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5a ed., R. Rieger, et al. (Eds.), Springer Verlag (1991); y Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). En general, la nomenclatura usada en el presente documento y los procedimientos de laboratorio en medicina, química orgánica y química de polímeros son bien conocidos y comúnmente empleados en la técnica.
Como se usa en el presente documento, los artículos "un" y "una" se refieren a uno o más de uno (es decir, al menos a uno) del objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento.
Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente" será entendido por personas expertas en la materia y variará hasta cierto punto en función del contexto en el que se utilice. Como se usa en el presente documento cuando se refiere a un valor medible tal como una cantidad, una duración temporal y similares, el término "aproximadamente" pretende abarcar variaciones de ±20% o ±10%, más preferentemente ±5%, incluso más preferentemente ± 1 %, y aún más preferentemente ± 0,1 % del valor especificado, ya que dichas variaciones son apropiadas para realizar los métodos divulgados.
"Acilo" se refiere a un grupo que tiene la estructura -C(O)R, en donde R puede ser, por ejemplo, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. Los grupos "acilo inferior" son aquellos que contienen de uno a seis átomos de carbono.
"Aciloxi" se refiere a un grupo que tiene la estructura -OC(O)R-, en donde R puede ser, por ejemplo, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. Los grupos "aciloxi inferior" contienen de uno a seis átomos de carbono.
La expresión "sal de adición", como se usa en el presente documento anteriormente, también comprende los solvatos que los compuestos descritos en el presente documento son capaces de formar. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos y similares.
"Administración", como se usa en el presente documento, incluye la administración por parte de otra persona al sujeto o la autoadministración por parte del sujeto.
El término "alcoxi" se refiere a una configuración de hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico y sus combinaciones, que incluyen de 1 a 20 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 6 átomos de carbono (denominado "alcoxi inferior"), más preferentemente de 1 a 4 átomos de carbono, que incluyen un átomo de oxígeno en el punto de unión. Un ejemplo de un "grupo alcoxi" está representado por la fórmula -OR, en donde R puede ser un grupo alquilo, opcionalmente sustituido con un grupo alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, alquilo halogenado, alcoxi o heterocicloalquilo. Los grupos alcoxi adecuados incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, i-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi ciclopropoxi, ciclohexiloxi y similares.
"Alcoxicarbonilo" se refiere a un radical carbonilo sustituido con alcoxi, -C(O)OR, en donde R representa un alquilo opcionalmente sustituido, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo o resto similar.
El término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo saturado ramificado o no ramificado de 1 a 24 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, f-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, decilo, tetradecilo, hexadecilo, eicosilo, tetracosilo y similares. Un grupo "alquilo inferior" es un hidrocarburo saturado ramificado o no ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquilo preferidos tienen de 1 a 4 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden ser "alquilos sustituidos" en donde uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos con un sustituyente como halógeno, cicloalquilo, alcoxi, amino, hidroxilo, arilo, alquenilo o carboxilo. Por ejemplo, un alquilo inferior o alquilo (C-i-Ca) puede ser metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, iso-butilo, sec-butilo, pentilo, 3-pentilo o hexilo; cicloalquilo (C3-C6) puede ser ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; cicloalquil (C3-Ca)alquilo (Ci -Ca) puede ser ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentilmetilo, ciclohexilmetilo, 2-ciclopropiletilo, 2-ciclobutiletilo, 2-ciclopentil etilo o 2-ciclohexiletilo; haloalquilo (Ci -Ca) puede ser yodometilo, bromometilo, clorometilo, fluorometilo, trifluorometilo, 2-cloroetilo, 2-fluoroetilo, 2,2,2-trifluoroetilo o pentafluoroetilo; o hidroxialquilo(Ci -Ca) puede ser hidroximetilo, 1 -hidroxietilo, 2-hidroxietilo, 1-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, 1 -hidroxibutilo, 4-hidroxibutilo, 1-hidroxipentilo, 5-hidroxipentilo, 1-hidroxihexilo o 6-hidroxihexilo.
Como se usa en el presente documento, el término "mejorar", con referencia a una enfermedad o afección patológica, se refiere a cualquier efecto beneficioso observable del tratamiento. El efecto beneficioso se puede evidenciar, por ejemplo, por un inicio tardío de los síntomas clínicos de la enfermedad en un sujeto susceptible, una reducción en la gravedad de algunos o todos los síntomas clínicos de la enfermedad, una progresión más lenta de la enfermedad, una mejora en la salud general o el bienestar del sujeto, o por otros parámetros bien conocidos en la técnica que son específicos de la enfermedad en particular.
El término "amida" o "amido" está representado por la fórmula -C(O)NRR', en donde R y R' independientemente pueden ser un grupo hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, alquilo halogenado o heterocicloalquilo.
El término "amina" o "amino" se refiere a un grupo de fórmula -NRR', en donde R y R7 puede ser, independientemente, hidrógeno o un grupo alquilo, acilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, alquilo halogenado o heterocicloalquilo. Por ejemplo, un "alquilamino" o "amino alquilado" se refiere a -NRR', en donde al menos uno de R o R' es un alquilo. Un grupo carbonilamino puede ser -N(R)-C(O)-R (en donde R es un grupo sustituido o H). Un grupo amino adecuado es acetamido.
Como se usa en el presente documento, un "aminoácido" se representa por el nombre completo del mismo, por el código de tres letras, así como por el código de una letra que le corresponde, tal como se indica en la siguiente tabla. La estructura de los aminoácidos y sus abreviaturas también se pueden encontrar en la bibliografía química, tal como en Stryer, 1988, "Biochemistry", 3a ed., W. H. Freeman and Co., Nueva York.
El término "aminoalquilo" se refiere a grupos alquilo como se define anteriormente, donde al menos un átomo de hidrógeno se reemplaza con un grupo amino (por ejemplo, -CH2-NH2).
"Aminocarbonilo" solo o en combinación, significa un radical carbonilo (carbamoilo) sustituido con amino, en donde el radical amino puede estar opcionalmente mono o disustituido, tales como con alquilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alcanoílo, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo y similares.
Un "análogo" es una molécula que difiere en estructura química de un compuesto original, por ejemplo, un homólogo (diferencia por un incremento en la estructura química o masa, como una diferencia en la longitud de una cadena de alquilo o la inclusión de uno de más isótopos), un fragmento molecular, una estructura que difiere en uno o más grupos funcionales, o un cambio en la ionización. Un análogo no se sintetiza necesariamente a partir del compuesto original. Un derivado es una molécula derivada de la estructura base.
Un "animal" se refiere a organismos vertebrados multicelulares vivos, una categoría que incluye, por ejemplo, mamíferos y aves. El término mamífero incluye mamíferos humanos y no humanos. De forma análoga, el término "sujeto" incluye sujetos humanos y no humanos, incluidas aves y mamíferos no humanos, tales como primates no humanos, animales de compañía (tales como perros y gatos), ganado (tales como cerdos, ovejas, vacas), así como animales no domesticados, tales como los grandes felines. El término sujeto se aplica independientemente de la etapa del ciclo de vida del organismo. Por lo tanto, el término sujeto se aplica a un organismo en el útero o in ovo, según el organismo (es decir, si el organismo es un mamífero o un ave, como un ave domesticada o salvaje).
El término "aralquilo" se refiere a un grupo alquilo en el que un grupo arilo se sustituye por un hidrógeno del grupo alquilo. Un ejemplo de un grupo aralquilo es un grupo bencilo.
"Arilo" se refiere a un grupo carbocíclico aromático insaturado monovalente que tiene un solo anillo (por ejemplo, fenilo) o múltiples anillos condensados o fusionados (por ejemplo, naftilo o antrilo), que puede estar opcionalmente sin sustituir o sustituido. Un "grupo heteroarilo" se define como un grupo aromático que tiene al menos un heteroátomo incorporado dentro del anillo o anillos fusionados del grupo aromático. Ejemplos de heteroátomos incluyen, pero no se limitan a, nitrógeno, oxígeno, azufre y fósforo. Heteroarilo incluye, pero no se limita a, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isooxazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tiofenilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzoimidazolilo, benzooxazolilo, quinoxalinilo y similares. El grupo arilo o heteroarilo puede estar sustituido con uno o más grupos que incluyen, pero no se limitan a, alquilo, alquinilo, alquenilo, arilo, haluro, nitro, amino, éster, cetona, aldehído, hidroxi, ácido carboxílico, o alcoxi, o el grupo arilo o heteroarilo puede estar sin sustituir.
"Ariloxi" o "heteroariloxi" se refiere a un grupo de fórmula -OAr, en donde Ar es un grupo arilo o un grupo heteroarilo, respectivamente.
Como se usa en el presente documento, el término "AZD8055" se refiere a (5-(2,4-bis((S)-3-metilmorfolino)pirido[2,3-d]pirimidin-7-il)-2-metoxifenil)metanol, o una sal o solvato del mismo.
El término "carboxilato" o "carboxilo" se refiere al grupo -COO- o -COOH. El grupo carboxilo puede formar un ácido carboxílico. "Carboxilo sustituido" se refiere a -COOR en donde R es un grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, alquilo halogenado o heterocicloalquilo. Por ejemplo, un grupo carboxilo sustituido podría ser un éster de ácido carboxílico o una de sus sales (por ejemplo, un carboxilato).
El término "coadministración" o "coadministración" se refiere a la administración de un compuesto desvelado en el presente documento con al menos otro agente terapéutico o de diagnóstico dentro del mismo período de tiempo general, y no requiere la administración en el mismo momento exacto ( aunque la administración conjunta incluye la administración en el mismo momento exacto). Por lo tanto, la administración conjunta puede ser el mismo día o en días diferentes, o en la misma semana o en semanas diferentes. En determinadas realizaciones, se puede coadministrar una pluralidad de agentes terapéuticos y/o de diagnóstico combinando los agentes en una única forma o unidad de dosificación. El término "conjugado" se refiere a dos moléculas que están unidas entre sí, por ejemplo mediante enlaces covalentes. Un ejemplo de conjugado es una molécula (tal como un péptido) conjugada con un marcador detectable, tal como un fluoróforo.
Como se usa en el presente documento, los términos "compuesto 14", "SBI-0206965", "0206965", "SBI-6965" y "6965" se usan indistintamente para referirse al compuesto 2-(5-bromo-2-(3,4,5-trimetoxi fenilamino)pirimidin-4-il amino)-A/-metilbenzamida, o una sal o solvato del mismo (Tabla i).
El término "contactar" se refiere a la colocación en asociación física directa; incluye tanto en forma sólida como líquida.
El término "cicloalquilo" se refiere a un anillo basado en carbono no aromático compuesto por al menos tres átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y similares. El término "grupo heterocicloalquilo" es un grupo cicloalquilo como se define anteriormente en el que al menos uno de los átomos de carbono del anillo está sustituido con un heteroátomo tal como, pero no se limitan a, nitrógeno, oxígeno, azufre o fósforo.
Por "disminuciones" se entiende una alteración negativa de al menos aproximadamente un 10 %, 25 %, 50 %, 75 %, 100 % o más.
Una "marca detectable" es un compuesto o composición que se conjuga directa o indirectamente con otra molécula (tal como un oligonucleótido) para facilitar la detección de esa molécula. Los ejemplos específicos, ejemplos no limitativos de marcas incluyen, pero no se limitan a, isótopos radiactivos, sustratos enzimáticos, cofactores, ligandos, agentes quimioluminiscentes, fluoróforos, haptenos, enzimas y combinaciones de los mismos. Se analizan métodos de marcaje y directrices para la elección de marcadores adecuados para diversos fines, por ejemplo, en Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nueva York, 1989) y Ausubel et al. (en Current Protocols en Molecular Biology, John Wiley & Sons, Nueva York, 1998).
Por "enfermedad" o "trastorno" se entiende cualquier estado que daña o interfiere con la función normal de una célula, tejido u órgano.
Por "cantidad eficaz" se entiende la cantidad de un compuesto que se requiere para mejorar los síntomas de una enfermedad en relación con un paciente no tratado. La cantidad efectiva de compuesto(s) activo(s) usado(s) para el tratamiento terapéutico de una enfermedad varía dependiendo de la forma de administración, la edad, el peso corporal y el estado de salud general del sujeto. Finalmente, el médico o veterinario responsable decidirá la cantidad apropiada y el régimen de dosificación. Tal cantidad es la referida como una "cantidad eficaz".
El término "éster" se refiere a un resto que contiene un grupo carboxilo que tiene el hidrógeno reemplazado con, por ejemplo, un grupo alquilo C1-6 ("carboxilalquilo C1-6" o "alquiléster"), un grupo arilo o aralquilo ("ariléster" o "aralquiléster"), etc. Se prefieren los grupos alquilo CO2C1-3, tal como, por ejemplo, metiléster (CO 2Me), etiléster (CO2Et) y propiléster (CO2PO e incluye ésteres inversos de los mismos (por ejemplo, -OCOMe, -OCOEt y -OCOPr).
Por "fragmento" se entiende una porción de un polipéptido o molécula de ácido nucleico. Esta porción contiene, preferentemente, al menos aproximadamente un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% o 90% de la longitud total del polipéptido o molécula de ácido nucleico de referencia. Un fragmento puede contener aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o 1000 nucleótidos o aminoácidos.
Las expresiones "alquilo halogenado" o "grupo haloalquilo" se refieren a un grupo alquilo con uno o más átomos de hidrógeno presentes en estos grupos sustituido con un halógeno (F, Cl, Br, I).
El término "hidroxilo" está representado por la fórmula -OH.
El término "hidroxialquilo" se refiere a un grupo alquilo que tiene al menos un átomo de hidrógeno sustituido con un grupo hidroxilo. La expresión "grupo alcoxialquilo" se define como un grupo alquilo que tiene al menos un átomo de hidrógeno sustituido con un grupo alcoxi descrito anteriormente.
Por "identidad" se entiende la identidad de la secuencia de aminoácidos o ácidos nucleicos entre una secuencia de interés y una secuencia de referencia. La identidad de secuencia generalmente se mide utilizando un programa informático de análisis de secuencias (por ejemplo, el Paquete de Programa Informático de Análisis de Secuencias del Genetics Computer Group, Centro de Biotecnología de la Universidad de Wisconsin, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705, BLAST, BESTFIT, GAP o PILEUP/PRETTYBOX programas). Tal programa informático coincide con secuencias idénticas o similares mediante la asignación de grados de homología a varias sustituciones, deleciones y/u otras modificaciones. Las sustituciones conservativas incluyen generalmente sustituciones dentro de los siguientes grupos: glicina, alanina; valina, isoleucina, leucina; ácido aspártico, ácido glutámico, asparagina, glutamina; serina, treonina; lisina, arginina; y fenilalanina, tirosina. En un enfoque ilustrativo para determinar el grado de identidad, se puede usar un programa BLAST, con una puntuación de probabilidad entre e-3 y e-100 indicando una secuencia estrechamente relacionada.
Inhibir se refiere a inhibir el pleno desarrollo de una enfermedad o afección. "Inhibir" también se refiere a cualquier reducción cuantitativa o cualitativa en la actividad biológica o unión, en relación con un control.
Como se usa en el presente documento, el término "INK128" se refiere a 3-(2-amino-5-benzoxazolil)-1-(1-metiletil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina, o una sal o solvato de los mismos.
Como se usa en el presente documento, la expresión "material de instrucción" incluye una publicación, una grabación, un diagrama o cualquier otro medio de expresión que pueda usarse para comunicar la utilidad de las composiciones y métodos descritos en el presente documento. El material instructivo del kit puede, por ejemplo, adherirse a un contenedor que contenga las composiciones descritas en este documento o enviarse junto con un contenedor que contenga las composiciones. De manera alternativa, el material instructivo puede enviarse por separado del contenedor con la intención de que el destinatario utilice el material instructivo y las composiciones de manera cooperativa. Por ejemplo, el material instructivo es para uso de un kit; instrucciones de uso de las composiciones; o instrucciones para el uso de una formulación de las composiciones.
Un componente biológico "aislado" es un componente que ha sido sustancialmente separado o purificado de otros componentes biológicos en la célula del organismo en el que el componente se encuentra de forma natural, es decir, otro ADN y ARN cromosómico y extracromosómico, proteínas, lípidos y organelos. "Aislado" no requiere pureza absoluta. Por ejemplo, el componente biológico aislado deseado puede representar al menos el 50 %, particularmente al menos aproximadamente el 75 %, más particularmente al menos aproximadamente el 90 %, y más particularmente al menos aproximadamente el 98 %, del contenido total de la preparación. Los componentes biológicos aislados, como se describe en el presente documento, pueden aislarse mediante muchos métodos, como el fraccionamiento de sal, extracción de fenol, precipitación con disolventes orgánicos (por ejemplo, bromuro de hexadeciltrimetilamonio o etanol), cromatografía de afinidad, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía hidrófoba, cromatografía líquida de alto rendimiento, filtración en gel, enfoque isoeléctrico, separación física (por ejemplo, centrifugación o agitación) y similares.
"N-heterocíclico" se refiere a anillos o sistemas de anillos mono o bicíclicos que incluyen al menos un heteroátomo de nitrógeno. Los anillos o sistemas de anillos generalmente incluyen de 1 a 9 átomos de carbono además del(los) heteroátomo(s) y pueden ser saturados, insaturados o aromáticos (incluyendo pseudoaromáticos). El término "pseudoaromático" se refiere a un sistema de anillos que no es estrictamente aromático, pero que se estabiliza mediante deslocalización de electrones y se comporta de manera similar a los anillos aromáticos. Aromático incluye sistemas de anillos pseudoaromáticos, tales como anillos de pirrolilo.
Los ejemplos de N-heterociclos monocíclicos de 5 miembros incluyen pirrolilo, H-pirrolilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, oxazolilo, oxadiazolilo, (incluyendo 1,2,3 y 1,2,4 oxadiazolilos) isoxazolilo, furazanilo, tiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolilo, imidazolinilo, triazolilo (incluyendo 1,2,3 y 1,3,4 triazolilos), tetrazolilo, tiadiazolilo (incluyendo 1,2,3 y 1,3,4 tiadiazolilos) y ditiazolilo. Los ejemplos de N-heterociclos monocíclicos de 6 miembros incluyen piridilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirazinilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, piperazinilo y triazinilo. Los heterociclos pueden estar opcionalmente sustituidos con una amplia gama de sustituyentes, y preferentemente con alquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, halo, hidroxi, mercapto, trifluorometilo, amino, ciano o mono o di(alquil C1-6)amino. El grupo N-heterocíclico puede fusionarse con un anillo carbocíclico tal como fenilo, naftilo, indenilo, azulenilo, fluorenilo y antracenilo.
Los ejemplos de heterociclos bicíclicos de 8, 9 y 10 miembros incluyen 1H tieno[2,3-c]pirazolilo, indolilo, isoindolilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoisotiazolilo, benzoimidazolilo, indazolilo, isoquinolinilo, quinolinilo, quinoxalinilo, purinilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, benzotriazinilo y similares. Estos heterociclos pueden estar opcionalmente sustituidos, por ejemplo con alquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, halo, hidroxi, mercapto, trifluorometilo, amino, ciano o mono o di(alquil C1-6)amino. A menos que se defina de otro modo, los N-heterocíclicos opcionalmente sustituidos incluyen sales de piridinio y la forma N-óxido de nitrógenos anulares adecuados.
Como se usa en el presente documento, los términos "péptido", "polipéptido", o "proteína" se usan indistintamente y se refieren a un compuesto, comprendido por residuos de aminoácidos unidos covalentemente por enlaces peptídicos. Una proteína o péptido debe contener al menos dos aminoácidos, y no se establece ninguna limitación sobre el número máximo de aminoácidos que puede comprender la secuencia de una proteína o péptido. Los polipéptidos incluyen cualquier péptido o proteína que comprende dos o más aminoácidos unidos entre sí por enlaces peptídicos. Como se usa en el presente documento, el término se refiere tanto a cadenas cortas, que también se denominan comúnmente en la técnica como péptidos, oligopéptidos y oligómeros, por ejemplo, como a cadenas más largas, que generalmente se denominan en la técnica como proteínas, de las cuales hay muchos tipos. Los "polipéptidos" incluyen, por ejemplo, fragmentos biológicamente activos, polipéptidos sustancialmente homólogos, oligopéptidos, homodímeros, heterodímeros, variantes de polipéptidos, polipéptidos modificados, derivados, análogos y proteínas de fusión, entre otros. Los polipéptidos incluyen péptidos naturales, péptidos recombinantes, péptidos sintéticos o una combinación de los mismos. Un péptido que no es cíclico tiene un extremo N y un extremo C. El extremo N tiene un grupo amino, que puede estar libre (es decir, como un grupo NH2) o protegido adecuadamente (por ejemplo, con un grupo BOC o Fmoc). El extremo C tiene un grupo carboxílico, que puede estar libre (es decir, como un grupo COOH) o adecuadamente protegido (por ejemplo, como un éster bencílico o metílico). Un péptido cíclico no necesariamente tiene extremos N o C libres, ya que están unidos covalentemente a través de un enlace amida para formar la estructura cíclica.
Las "composiciones farmacéuticas" son composiciones que incluyen una cantidad (por ejemplo, una dosis unitaria) de uno o más de los compuestos descritos junto con uno o más aditivos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluidos vehículos, diluyentes y/o adyuvantes, y opcionalmente otros ingredientes biológicamente activos. Tales composiciones farmacéuticas se pueden preparar mediante técnicas de formulación farmacéutica estándar, tales como las desveladas en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA (19a edición).
Las expresiones "sal o éster farmacéuticamente aceptable" se refieren a sales o ésteres preparados por medios convencionales que incluyen sales, por ejemplo, de ácidos inorgánicos y orgánicos, inclunyendo pero sin limitarse a ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico o ácido fosfórico, ácidos carboxílicos orgánicos, ácidos sulfónicos, sulfoácidos o fosfoácidos o ácido sulfámico N-sustituido, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido fumárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido glucónico, ácido glucárico, ácido glucurónico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácido 2-fenoxibenzoico, ácido 2-acetoxibenzoico, ácido embónico, ácido nicotínico o ácido isonicotínico, y, además, con aminoácidos, por ejemplo con a-aminoácidos, y también con ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido 2-hidroximatanosulfónico, ácido etano-1,2-disulfónico, ácido bencenodisulfónico, ácido 4-metilbencenosulfónico, ácido naftaleno-2-sulfónico, 2- o 3-fosfoglicerato, glucosasfosfato o ácido N-ciclohexilsulfámico (con formación de ciclamatos) o con otros compuestos orgánicos ácidos, tal como ácido ascórbico.
Las "sales farmacéuticamente aceptables" de los compuestos descritos en la presente también incluyen las formadas a partir de cationes tales como sodio, potasio, aluminio, calcio, litio, magnesio, cinc y de bases tales como amoniaco, etilendiamina, N-metil-glutamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-bencilfenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)aminometano e hidróxido de tetrametilamonio. Los ejemplos particulares de bases de amina adecuadas (y sus iones de amonio correspondientes) para usar en los presentes compuestos incluyen, sin limitación, piridina, N,N-dimetilaminopiridina, diazabiciclononano, diazabicicloundeceno, N-metil-N-etilamina, dietilamina, trietilamina, diisopropiletilamina, mono-, bis- o tris-(2-hidroxietil)amina, 2-hidroxi-terc-butilamina, tris(hidroximetil)metilamina, N-N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina, tri-(2-hidroxietil)amina y N-metil-D-glucamina. Para ejemplos adicionales de "sales farmacológicamente aceptables", véase Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1 (1977). Estas sales se pueden preparar mediante procedimientos estándar, por ejemplo, haciendo reaccionar el ácido libre con una base orgánica o inorgánica adecuada. Cualquier compuesto químico mencionado en esta memoria descriptiva puede administrarse alternativamente como una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Las "sales farmacéuticamente aceptables" también incluyen las formas de ácido libre, base y zwitteriónico. Las descripciones de las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas se pueden encontrar en Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection and Use, Wiley VCH (2002). Cuando los compuestos desvelados en el presente documento incluyen una función ácida tal como un grupo carboxi, entonces los pares de cationes farmacéuticamente aceptables adecuados para el grupo carboxi son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen cationes alcalinos, alcalinotérreos, amoniaco, amonio cuaternario y similares. Tales sales son conocidas por los expertos en la materia. Para ejemplos adicionales de "sales farmacológicamente aceptables", véase Berge et al., J. Pharm. Sci. 66:1 (1977).
"Ésteres farmacéuticamente aceptables" incluye los derivados de los compuestos descritos en el presente documento que se modifican para incluir un grupo carboxilo. Un éster hidrolizable in vivo es un éster que se hidroliza en el cuerpo humano o animal para producir el ácido o alcohol original. Los ésteres representativos incluyen, por lo tanto, ésteres de ácido carboxílico en los que el resto no carbonilo de la porción de ácido carboxílico del grupo éster se selecciona de alquilo de cadena lineal o ramificada (por ejemplo, metilo, n-propilo, t-butilo o n-butilo), cicloalquilo, alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), aralquilo (por ejemplo bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo, fenoximetilo), arilo (por ejemplo, fenilo, opcionalmente sustituido mediante, por ejemplo, halógeno, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4) o amino); ésteres de sulfonato, tales como alquil- o aralquilsulfonilo (por ejemplo, metanosulfonilo); o ésteres de aminoácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo). Un "éster farmacéuticamente aceptable" también incluye ésteres inorgánicos tales como ésteres de mono-, di- o trifosfato. En tales ésteres, a menos que se especifique lo contrario, cualquier resto alquilo presente contiene ventajosamente de 1 a 18 átomos de carbono, particularmente de 1 a 6 átomos de carbono, más particularmente de 1 a 4 átomos de carbono. Cualquier resto cicloalquilo presente en tales ésteres contiene ventajosamente de 3 a 6 átomos de carbono. Cualquier resto arilo presente en tales ésteres comprende ventajosamente un grupo fenilo, opcionalmente sustituido como se muestra en la definición de carbocicililo anterior. Los ésteres farmacéuticamente aceptables incluyen así ésteres de ácidos grasos C1-C22, tales como acetilo, t-butilo o ácidos grasos monoinsaturados omega-6, lineales o ramificados, de cadena larga, tales como palmoílo, estearoílo y similares. Los ésteres de arilo o heteroarilo alternativos incluyen benzoílo, piridilmetiloílo y similares, cualquiera de los cuales puede estar sustituido, como se define en el carbociclilo anterior. Los ésteres farmacéuticamente aceptables adicionales incluyen ésteres de L-aminoácidos alifáticos tales como leucilo, isoleucilo y especialmente valilo.
Para uso terapéutico, las sales de los compuestos son aquellas en donde el contraión es farmacéuticamente aceptable. Sin embargo, las sales de ácidos y bases que no son farmacéuticamente aceptables también pueden encontrar uso, por ejemplo, en la preparación o purificación de un compuesto farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido y base farmacéuticamente aceptables que se mencionan anteriormente en este documento pretenden comprender las formas de sal de adición de ácido y base no tóxicas terapéuticamente activas que los compuestos son capaces de formar. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse convenientemente tratando la forma básica con dicho ácido apropiado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácidos hidrohálicos, por ejemplo ácido clorhídrico o bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico y ácidos similares; o ácidos orgánicos, tales como, por ejemplo, acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (es decir etanodióico), malónico, succínico (es decir ácido butanodióico), maleico, fumárico, málico (es decir ácido hidroxibutanodióico), tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamóico y ácidos similares. Por el contrario, dichas formas de sal se pueden convertir mediante tratamiento con una base apropiada en la forma de base libre. Los compuestos que contienen un protón ácido también se pueden convertir en sus formas de sales de adición de aminas o metales no tóxicos mediante tratamiento con bases orgánicas e inorgánicas apropiadas. Las formas de sal base apropiadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, por ejemplo las sales de litio, sodio, potasio, magnesio, calcio y similares, sales con bases orgánicas, por ejemplo las sales de benzatina, N-metil-D-glucamina, hidrabamina y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares.
"Prevenir" una enfermedad o afección se refiere a la administración profiláctica de una composición a un sujeto que no muestra signos de una enfermedad o solo muestra signos tempranos con el fin de disminuir el riesgo de desarrollar una patología o afección, o disminuir la gravedad de una patología o afección.
El término "purificado" no implica pureza absoluta; más bien, se concibe como un término relativo. Por lo tanto, por ejemplo, una preparación de péptido purificado es aquella en la que el péptido o la proteína están más enriquecidos que el péptido o la proteína en su entorno natural dentro de una célula. Por ejemplo, una preparación del compuesto se purifica de manera que el conjugado de proteína de polisacárido deseado represente al menos el 50 %, más particularmente al menos alrededor del 90 %, y más particularmente al menos alrededor del 98 %, del contenido total de la preparación.
La expresión "amina cuaternaria", tal como se usa en el presente documento anteriormente, define las sales de amonio cuaternario que los compuestos pueden formar por reacción entre un nitrógeno básico de un compuesto y un agente cuaternizante apropiado, tal como, por ejemplo, un haluro de alquilo, haluro de arilo o haluro de arilalquilo opcionalmente sustituido, por ejemplo metilydoruro o bencilyoduro. También se pueden usar otros reactivos con buenos grupos salientes, como trifluorometanosulfonatos de alquilo, metanosulfonatos de alquilo y p-toluenosulfonatos de alquilo. Una amina cuaternaria tiene un nitrógeno cargado positivamente. Los contraiones farmacéuticamente aceptables incluyen cloro, bromo, yodo, trifluoroacetato y acetato. El contraión de elección se puede introducir usando resinas de intercambio iónico.
Una proteína "recombinante" es aquella que tiene una secuencia que no se produce de forma natural o tiene una secuencia que se produce mediante una combinación artificial de dos segmentos de secuencia separados de otro modo.
El término "sujeto" incluye sujetos humanos y no humanos, incluidas aves y mamíferos no humanos, tales como primates no humanos, animales de compañía (tales como perros y gatos), ganado (tales como cerdos, ovejas, vacas), así como animales no domesticados, tales como los grandes felines. El término sujeto se aplica independientemente de la etapa del ciclo de vida del organismo. Por lo tanto, el término sujeto se aplica a un organismo en el útero o in ovo, según el organismo (es decir, si el organismo es un mamífero o un ave, como un ave domesticada o salvaje).
"Sustituido" o "sustitución" se refiere al reemplazo de un átomo de hidrógeno de una molécula o un grupo R con uno o más grupos R adicionales. A menos que se defina de otro modo, la expresión "opcionalmente sustituido" o "sustituyente opcional" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo que puede o no estar sustituido adicionalmente con 1, 2, 3, 4 o más grupos, preferentemente 1, 2 o 3, más preferentemente 1 o 2 grupos. Los sustituyentes pueden seleccionarse, por ejemplo, entre alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-8, hidroxilo, oxo, alcoxi C1-6, ariloxi, alcoxiarilo C1-6, halo, alquilhalo C1-6 (tal como CF3 y CHF2), alcoxihalo C1-6 (tal como OCF3 y OCHF2), carboxilo, ésteres, ciano, nitro, amino, amino sustituido, amino disustituido, acilo, cetonas, amidas, aminoacilo, amidas sustituidas, amidas disustituidas, tiol, alquiltio, tioxo, sulfatos, sulfonatos, sulfinilo, sulfinilo sustituido, sulfonilo, sulfonilo sustituido, sulfonilamidas, sulfonamidas sustituidas, sulfonamidas disustituidas, arilo, aralquilo C1-6, heterociclilo y heteroarilo en donde cada alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo y heterociclilo y grupos que los contienen pueden estar opcionalmente sustituidos. Los sustituyentes opcionales en el caso de los N-heterociclos también pueden incluir, entre otros, alquilo C1-6, es decir, /V-alquilo C1-3, más preferentemente metilo, particularmente V-metilo.
Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un agente específico suficiente para lograr un efecto deseado en un sujeto que está siendo tratado con ese agente. Por ejemplo, una cantidad terapéutica puede ser una cantidad de un inhibidor de ULK1 que sea suficiente para inhibir la autofagia en una célula deseada en un sujeto. De forma ideal, una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente es una cantidad suficiente para inhibir o tratar la enfermedad o afección sin causar un efecto citotóxico sustancial u otro efecto sustancialmente perjudicial en el sujeto. La cantidad terapéuticamente eficaz de un agente dependerá del sujeto que se esté tratando, la gravedad de la aflicción y la forma de administración de la composición terapéutica.
"Tiol" se refiere al grupo -SH. La expresión "tiol sustituido" se refiere a un grupo tiol que tiene el hidrógeno reemplazado con, por ejemplo, un grupo alquilo C1-6 ("-S (alquilo C1-6)"), un arilo ("-S (arilo)") o un aralquilo ("-S(alquil)(arilo)"), etc.
La expresión "tratar una enfermedad" se refiere a inhibir el desarrollo completo de una enfermedad, por ejemplo, en un sujeto que está en riesgo de padecer una enfermedad como la diabetes.
"Tratamiento" se refiere a una intervención terapéutica que mejora un signo o síntoma de una enfermedad o afección patológica después de que ha comenzado a desarrollarse, o administrar un compuesto o composición a un sujeto que no muestra signos de una enfermedad o muestra solo signos tempranos del propósito de disminuir el riesgo de desarrollar una patología o afección, o disminuir la severidad de una patología o afección.
Compuestos
En el presente documento se describen compuestos que funcionan como inhibidores de ULK1.
En determinadas realizaciones, el inhibidor de ULK1 es al menos uno seleccionado entre el grupo que consiste en una 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)amino-5-halo-pirimidina; 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)amino-5-(halo)alquilpirimidina; 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)oxo-5-halo-pirimidina; 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)oxo-5-(halo)alquilpirimidina; 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)tio-5-halo-pirimidina; y 2-(sustituido)amino-4-(sustituido)tio-5-(halo)alquilpirimidina; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
También se desvelan en el presente documento compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen una estructura de:
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Fórmula A, en donde en la Fórmula A:
R10 se selecciona entre el grupo que consiste en: halógeno; -OR11 en donde R11 es H, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; -NR1R2 en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno individualmente entre el grupo que consiste en H, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido o NR1R2 juntos forman un heterociclo; o R4y R10juntos forman una estructura cíclica;
R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido, hidroxilo y halógeno;
R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido o arilo opcionalmente sustituido, carboxilo opcionalmente sustituido, ciano y nitro, o R5 y R6 forman juntos una estructura cíclica; y
R6 es H o haloalquilo.
También se desvelan en el presente documento compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, que tienen una estructura de:
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Fórmula I, en donde en la Fórmula I:
R1 y R2 se seleccionan cada uno individualmente entre el grupo que consiste en H, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido o NR1R2 juntos forman un heterociclo;
R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, N-heterocíclico, tiol opcionalmente sustituido y alquilo opcionalmente sustituido;
R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y
R6 es H; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En determinadas realizaciones, R1 es H y R2 no es H. En otras realizaciones, R1 es H y R2 es un heteroarilo condensado opcionalmente sustituido o un arilo opcionalmente sustituido. El heteroarilo condensado opcionalmente sustituido, por ejemplo, puede ser un sistema bicíclico de anillos condensados que incluye al menos un heteroátomo de nitrógeno. En determinadas realizaciones, R1 es H y R2 es un sistema de anillo condensado bicíclico opcionalmente sustituido que incluye al menos un heteroátomo. En determinadas realizaciones, R1 es H y R2 es un sistema de anillo condensado bicíclico opcionalmente sustituido que incluye al menos un heteroátomo de nitrógeno. En determinadas realizaciones, R1 es H y R2 es un sistema de anillo condensado bicíclico opcionalmente sustituido que incluye al menos dos heteroátomos de nitrógeno. En determinadas realizaciones, R1 es H y R2 es un sistema de anillo condensado bicíclico opcionalmente sustituido que incluye al menos dos heteroátomos de oxígeno. El arilo opcionalmente sustituido, por ejemplo, puede ser un fenilo sustituido o sin sustituir. El fenilo, por ejemplo, puede estar sustituido con al menos un alcoxi, preferentemente alcoxi (C1-C6).
En determinadas realizaciones, R1 es H y R2 se selecciona entre el grupo que consiste en:
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y
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En determinadas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo que consiste en amino opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido.
En determinadas realizaciones, R4 se selecciona entre el grupo que consiste en opcionalmente sustituido ariloxi, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido. En realizaciones particulares, R4 se selecciona entre el grupo que consiste en fenoxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido. En realizaciones particulares, R4 se selecciona entre el grupo que consiste en fenoxi, alcoxi (Ci -Ca) y -O-(N-alquilbenzamida), particularmente -O-(N-alquilbenzamida (Ci -Ca)). En realizaciones particulares, R4 es
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En determinadas realizaciones, R4 es -NR7R8, en donde R7 y R8 se seleccionan cada uno individualmente entre el grupo que consiste en H, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo y alquilo opcionalmente sustituido o NR7R8 juntos forman un heterociclo. En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es N-alquilbenzamida, particularmente N-alquilbenzamida (Ci -Ca). En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es fenilo. En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es fenilo sustituido con alcoxi, particularmente alcoxi (Ci -Ca). En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es ciclopropilo. En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es ciclobutilo. En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es alcoxialquilo, particularmente alcoxi (Ci -Ca)alquilo (Ci -Ca). En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es haloalquilo. En determinadas realizaciones, R7 es H y R8 es acilo opcionalmente sustituido. En determinadas realizaciones, R4 es -NH2. En determinadas realizaciones, R4 -OH.
En determinadas realizaciones, R5 es haloalquilo, particularmente CF3. En determinadas realizaciones, R5 es Br. En ciertas realizaciones, R5 es Cl.
En determinadas realizaciones, R2 es un anillo de heteroarilo condensado y R4 es -NR7R8, en donde R7 es H y R8 es un anillo de heteroarilo condensado. En realizaciones particulares, R2 se selecciona entre el grupo que consiste en:
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En realizaciones particulares, R8 es
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Los compuestos ilustrativos se muestran en la Tabla 1 (junto con sus respectivos valores CI50 para el ensayo de inhibición de ULK1). Los CI50 se presentan en j M, con A representado CI50 < 0,2 j M, B representando 0,2 j M < CI50 < 2 j M y C representando CI50 > 2 j M. Un * indica probado como una mezcla de regioisómeros.
Tabla 1.
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(continuación)
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Los compuestos a modo de ejemplo se ilustran a continuación:
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Los ejemplos particulares de los compuestos desvelados en el presente documento incluyen uno o más centros asimétricos; por lo tanto, estos compuestos pueden existir en diferentes formas estereoisoméricas. En consecuencia, los compuestos y las composiciones pueden proporcionarse como enantiómeros puros individuales o como mezclas estereoisoméricas, incluyendo mezclas racémicas. En determinadas realizaciones, los compuestos desvelados en el presente documento se sintetizan o se purifican para estar, en forma sustancialmente enantiopura, tal como en un exceso enantiomérico del 90 %, un exceso enantiomérico del 95 %, un exceso enantiomérico del 97 % o incluso un exceso enantiomérico mayor del 99 %, tal como en una forma enantiopura.
También se describe en el presente documento un péptido recombinante que sirve como un sustrato para la enzima ULK1, denominado "ULKtido". El péptido ULKtido puede usarse como un marcador sustituto de la actividad de la ULK1 quinasa in vitro. También se describe en el presente documento un péptido recombinante que comprende la secuencia de aminoácidos YANWLAASIYLDGKKK (SEQ ID NO: 1). También se describe en el presente documento una variante del péptido ULKtido. Por ejemplo, el péptido variante tiene cualquier resto hidrófobo en la posición -3 (que corresponde al resto 5 de SEQ ID NO: 1), tal como una leucina. En otros ejemplos, el péptido tiene cualquier resto hidrófobo en la posición 1 (que corresponde al resto 9 de SEQ ID NO: 1), tal como una fenilalanina o una tirosina. En determinadas realizaciones, el péptido tiene algún resto hidrófobo en la posición 2 (que corresponde al resto 10 de SEQ ID NO: 1). En determinadas realizaciones, el péptido recombinante comprende una de las siguientes secuencias:
EANWLAASIYLDGKKK (SEQ ID NO: 2)
YANWLAASIYLDKKKK (SEQ ID NO: 3)
YANWMAASIYLDGKKK (SEQ ID NO: 4)
YANWRAASIYLDGKKK (SEQ ID NO: 5)
YANWLAASDYLDGKKK (SEQ ID NO: 6)
YANWLAASIDLDGKKK (SEQ ID NO: 7)
En determinadas realizaciones, el péptido recombinante se conjuga con un marcador detectable, tales como, pero no limitado a, un fluoróforo o un radioisótopo.
Los compuestos descritos en el presente documento pueden tener al menos un centro asimétrico o un centro geométrico, centro cis-trans(C=C, C=N). Todos los isómeros quirales, diastereoméricos, racémicos, meso, rotacionales y geométricos de las estructuras están abarcados a menos que se especifique lo contrario. Los compuestos pueden aislarse como un solo isómero o como una mezcla de isómeros. Todos los tautómeros de los compuestos también se consideran parte de la divulgación. Los compuestos actualmente desvelados también incluyen todos los isótopos de átomos presentes en los compuestos, que pueden incluir, pero no se limitan a, deuterio, tritio, 18F y así sucesivamente.
Los "profármacos" de los compuestos desvelados también se describen en el presente documento. Un profármaco es un compuesto activo o inactivo que se modifica químicamente a través de una acción fisiológica in vivo, tales como hidrólisis, metabolismo y similares, en un compuesto activo después de la administración del profármaco a un sujeto. El término "profármaco" como se usa a lo largo de este texto significa los derivados farmacológicamente aceptables tales como ésteres, amidas y fosfatos, de tal manera que el producto de biotransformación in vivo resultante del derivado es el fármaco activo como se define en los compuestos descritos en el presente documento. Los profármacos tienen preferentemente una excelente solubilidad acuosa, biodisponibilidad aumentada y se metabolizan fácilmente en los inhibidores activos in vivo. Los profármacos de compuestos descritos en el presente documento pueden prepararse modificando grupos funcionales presentes en el compuesto de tal manera que se escindan las modificaciones, ya sea por la manipulación de rutina o in vivo, en el compuesto precursor. La idoneidad y las técnicas implicadas en la fabricación y uso de profármacos se conocen bien por los expertos en la materia. Para un análisis general de profármacos que implican ésteres véase Svensson y Tunek, Drug Metabolism Reviews 165 (1988) y Bundgaard, Design of Prodrugs, Elsevier (1985).
El término "profármaco" también pretende incluir cualquier vehículo unido covalentemente que libere un fármaco parental activo descrito en el presente documento in vivo cuando el profármaco se administra a un sujeto. Dado que los profármacos a menudo tienen propiedades mejoradas en relación con el agente farmacéutico activo, tales como, solubilidad y biodisponibilidad, los compuestos descritos en el presente documento pueden administrarse en forma de profármaco. Por lo tanto, también se describen en el presente documento profármacos de los compuestos actualmente desvelados, métodos para administrar profármacos y composiciones que contienen dichos profármacos. Los profármacos de los compuestos desvelados normalmente se preparan modificando uno o más grupos funcionales presentes en el compuesto de tal manera que se escindan las modificaciones, tanto por manipulación rutinaria como in vivo, para producir el compuesto parental. Los profármacos incluyen compuestos que tienen un grupo fosfonato y/o amino funcionalizado con cualquier grupo que se escinde in vivo para producir el grupo amino y/o fosfonato correspondiente, respectivamente. Los ejemplos de profármacos incluyen, sin limitación, compuestos que tienen un grupo amino acilado y/o un grupo éster de fosfonato o amida de fosfonato. En ejemplos particulares, un profármaco es un éster de fosfonato de alquilo inferior, tal como un éster de fosfonato de isopropilo.
Los derivados protegidos de los compuestos desvelados también se describen en el presente documento. Diversos grupos protectores adecuados para su uso con los compuestos desvelados, se describen en Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis; 3a Ed.; John Wiley & Sons, Nueva York, 1999.
En general, los grupos protectores se retiran en condiciones que no afectarán a la parte restante de la molécula. Estos métodos son bien conocidos en la técnica e incluyen hidrólisis ácida, hidrogenólisis y similares. Un método preferido implica la retirada de un éster, tal como la escisión de un éster de fosfonato usando condiciones ácidas de Lewis, tal como en la escisión de éster mediada por TMS-Br para producir el fosfonato libre. Un segundo método preferido implica la retirada de un grupo protector, tales como la retirada de un grupo bencilo por hidrogenólisis utilizando paladio sobre carbono en un sistema disolvente adecuado tal como un alcohol, ácido acético y similares o mezclas de los mismos. Un grupo basado en t-butoxi, incluyendo grupos protectores de tbutoxi carbonilo pueden retirarse usando un ácido inorgánico u orgánico, tal como HCl o ácido trifluoroacético, en un sistema disolvente adecuado, tales como agua, dioxano y/o cloruro de metileno. Otro grupo protector ilustrativo, adecuado para proteger las funciones amino e hidroxi amino es tritilo. Se conocen otros grupos protectores convencionales y los expertos en la materia pueden seleccionar grupos protectores adecuados en consulta con Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis; 3a Ed.; John Wiley & Sons, Nueva York, 1999. Cuando se desprotege una amina, la sal resultante puede neutralizarse fácilmente para producir la amina libre. De forma similar, cuando un resto ácido, tal como un resto de ácido fosfónico se revela, el compuesto puede aislarse como el compuesto ácido o como una sal del mismo.
Los compuestos descritos en el presente documento pueden cristalizarse y proporcionarse en una forma monocristalina o como una combinación de diferentes polimorfos cristalinos. Como tal, los compuestos pueden proporcionarse en una o más formas físicas, tales como diferentes formas de cristal, formas cristalinas, líquidas cristalinas o no cristalinas (amorfas). Tales formas físicas diferentes de los compuestos pueden prepararse usando, por ejemplo, diferentes disolventes o diferentes mezclas de disolventes para la recristalización. Como alternativa o adicionalmente, pueden prepararse diferentes polimorfos, por ejemplo, realizando recristalizaciones a diferentes temperaturas y/o alterando las velocidades de enfriamiento durante la recristalización. La presencia de polimorfos puede determinarse mediante cristalografía de rayos X o, en algunos casos, mediante otra técnica espectroscópica, tal como la espectroscopia de RMN en fase sólida, espectroscopia IR o por calorimetría diferencial de barrido.
Métodos
Los compuestos descritos en el presente documento pueden ser útiles para tratar o inhibir enfermedades que están mediadas por autofagia aberrante o anormal. En tales enfermedades, los compuestos descritos en el presente documento pueden inhibir la autofagia excesiva o no deseada que induce, exacerba o mantiene la enfermedad. Las enfermedades ilustrativas incluyen enfermedades o afecciones que surgen de mutaciones en los genes STK11, PTEN, TSC1, TSC2 y/o PIK3CA o que están indicadas por un biomarcador de sustrato mTOR Fosfo-S 6 K o Fosfo-4ebp1. Las enfermedades ilustrativas incluyen, pero no se limitan a, complejo de esclerosis tuberosa (TSC), cáncer, neoplasias, enfermedad de Crohn, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer y encefalopatía estática de la infancia con neurodegeneración en la edad adulta (SENDA). Los cánceres ilustrativos incluyen, pero no se limitan a, glioblastoma, tumores sólidos metastásicos, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, carcinoma de células renales, leucemia linfocítica crónica de células B, melanoma, adenocarcinoma, cáncer colorrectal y de riñón.
En determinadas realizaciones, los compuestos mejoran afecciones o enfermedades en las cuales se ha iniciado o potenciado terapéuticamente una autofagia no deseada. En tales enfermedades o afecciones, la administración de un inhibidor de ULK1 en una terapia combinada inhibe la autofagia no deseada. Dicha terapia incluye la administración de inhibidores de mTOR. Los inhibidores de mTOR ilustrativos no limitantes incluyen rapamicina, sirolimus, temsirolimus, everolimus, ridaforolimus, NVPBEZ235, BGT226, XL765, GDC0980, SF1126, PKI587, PFO4691502, GSK2126458, INK128, TORKiCC223, OSI027, AZD8055, AZD2014 y Palomid 529. Los inhibidores de mTOR indirectos ilustrativos incluyen metformina y AICAR (5-amino-1-p-D-ribofuranosil-imidazol-4-carboxamida). Las enfermedades o afecciones ilustrativas para el tratamiento con un inhibidor de mTOR y, por lo tanto, susceptibles de tratamiento de coadministración con un inhibidor de ULK1, incluyen inmunosupresión (tal como para prevenir el rechazo del injerto), antirreestenosis (por ejemplo, después de una angioplastia), cáncer (por ejemplo, carcinoma de células renales, pancreático, TSC, linfoma, de endometrio, de mama, de colon, de próstata, glioblastoma, astrocitoma, mieloma múltiple, carcinoma hepatocelular), síndrome de Cowden, síndrome de Peutz-Jegher, Complejo de esclerosis tuberosa, LAM (linfoangiomioleiomatosis) y degeneración macular relacionada con la edad.
Los compuestos desvelados en el presente documento también pueden administrarse a un sujeto que tiene una enfermedad refractaria, tales como, por ejemplo, una enfermedad resistente a los inhibidores de mTOR. Las enfermedades refractarias ilustrativas no limitantes incluyen glioblastoma, tumores sólidos metastásicos, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, cáncer pancreático, carcinoma de células renales, leucemia linfocítica crónica de células B, melanoma, adenocarcinoma, cáncer colorrectal y de riñón.
En determinadas realizaciones, el sujeto necesita, o se ha reconocido que necesita, tratamiento con un inhibidor de ULK1. El sujeto puede seleccionarse como apto para el tratamiento con un inhibidor de ULK1. Por ejemplo, el sujeto puede necesitar un agente que inhiba la autofagia no deseada en las células tumorales provocada por la administración de un inhibidor de mTOR.
En determinadas realizaciones, la inhibición de la autofagia proporcionada por los compuestos desvelados en el presente documento estimula la eliminación de las células dañadas y acelera la resolución de las células dañadas y tumorigénicas.
Los tratamientos disponibles para TSC actualmente son medicamentos que pueden suprimir la mTOR elevada que se encuentra en las células de estos pacientes, tales como el fármaco rapamicina, sus análogos (llamados "rapálogos") y otros inhibidores de mTOR. El tratamiento con rapálogos y fármacos inhibidores directos de mTOR más nuevos conduce a la activación de ULK1 una vez que se alivie su bloqueo por mTOR. Por otro lado, ULK1 normalmente proporciona una señal de supervivencia a las células para que se mantengan vivas durante momentos de estrés al permitirles reciclar sus propias partes y metabolitos. Estos descubrimientos sugieren que en pacientes tratados con rapamicina u otros inhibidores de mTOR, la activación de ULK1 por estos fármacos en realidad mantiene vivas las células tumorales y otras células deficientes en TSC durante el tratamiento, impidiendo la erradicación total de las células tumorales. La combinación de inhibidores de mTOR con inhibidores de u LK1 como se describe en el presente documento puede convertir los efectos modestos pero positivos observados en TSC y linfangioleiomiomatosis ("LAM") con inhibidores de mTOR en una respuesta mucho más sostenida y sólida. De hecho, la combinación sinérgica en cultivo en células tumorales deficientes en LKB1 mostró una sinergia espectacular en la destrucción terapéutica. En determinadas realizaciones, los inhibidores de ULK1 descritos en el presente documento ayudan a todos los pacientes con TSC, así como a cualquier paciente con LAM o AML (angiomiolipomas) de origen espontáneo. Debido a que los componentes de ULK1 se expresan en todas las células del cuerpo, combinar los fármacos ULK1 y mTOR beneficia a todos los órganos afectados por TSC: cerebro (tubérculos, SEGA), riñón (AML), fibromas cutáneos, rabdomiosarcomas cardíacos y lesiones LAM pulmonares.
En determinadas realizaciones, la combinación terapéutica de inhibidores de ULK1 y mTOR proporciona respuestas más durables y duraderas, lo que puede significar la erradicación completa de las células tumorales o la restauración de la función de los tipos de células deficientes en TSC que no son tumorales (por ejemplo, tubérculos cerebrales), sin que los pacientes necesiten seguir tomando un inhibidor de mTOR por el resto de sus vidas. El descubrimiento de que ULK1 es bloqueado por mTOR en todos los tipos de células y el hecho de que se hayan descubierto inhibidores moleculares pequeños de ULK1 hace que esta sea una de las nuevas opciones terapéuticas más amplias posibles para combinar racionalmente con los fármacos mTOR.
El tratamiento con rapálogos y fármacos inhibidores directos de mTOR más nuevos conduce a una activación de ULK1 una vez que se alivie su inhibición por mTOR. Esto significa que los marcadores de la actividad de ULK1 pueden usarse en biopsias y muestras de sangre de pacientes con TSC para determinar la efectividad del bloqueo de mTOR de los rapálogos u otros inhibidores de mTOR, ya que la señal de ULK1 "subirá" proporcionalmente conforme baje mTOR. De manera importante, la inhibición de mTOR es suficiente para activar ULK1 y en esta condición no se necesita la fosforilación de ULK1 por AMPK.
Todos los marcadores actuales de la actividad de mTOR se reducen cuando se bloquea mTOR (Fosfo-S6, Fosfo-S6K1, Phospho-4ebp1), que también es útil, pero a veces es más fácil cuantificar una señal que es baja basalmente y después aumenta con el tratamiento, proporcional a cuán eficaz es el tratamiento. Por lo tanto el uso de una combinación de los dos conjuntos de anticuerpos (sitios de fosforilación del sustrato mTOR y sitios de fosforilación del sustrato ULK1) debería proporcionar un panel fructífero de anticuerpos que después pueden probarse contra muestras clínicas humanas.
También se describen métodos para determinar la probabilidad de que un inhibidor de mTOR sea eficaz para el tratamiento de una enfermedad. En algunas realizaciones, los métodos incluyen realizar uno o más ensayos que detectan el nivel de al menos uno de los sustratos de mTOR Fosfo-S6K o Fosfo-4ebp1 en una muestra biológica de un sujeto al que se le administró un inhibidor de mTOR y comparar el nivel de al menos uno de los mTOR sustratos Fosfo-S6K o Fosfo-4ebp1 a un nivel de control respectivo de un tejido correspondiente normal. La detección de un aumento en el nivel de al menos uno de los sustratos de mTOR Fosfo-S6K o Fosfo-4ebp1 en comparación con el control respectivo indica que el inhibidor de mTOR es eficaz para el tratamiento de una enfermedad en el sujeto.
En determinadas realizaciones, los inhibidores son mediadores selectivos de la autofagia, en el sentido de que inhiben un gen ATG en la ruta de la autofagia, en comparación con el uso mucho más generalizado de agentes lisomotrópicos como la clorocina y los derivados de la clorocina, que detienen la autofagia en virtud de la interrupción de la función del lisosoma, pero también provocan otras complicaciones potenciales, ya que son muy inespecíficos de la autofagia.
En determinadas realizaciones, los compuestos desvelados en el presente documento son agentes de unión competitivos con ATP que se unen al bolsillo catalítico de unión a ATP de ULK1. En determinadas realizaciones, los compuestos desvelados en el presente documento son inhibidores reversibles.
También se describe en el presente documento un ensayo de selección para identificar compuestos que inhiben la actividad quinasa de ULK1 usando el péptido ULKtido. En algunas realizaciones, el método de poner en contacto un compuesto candidato, ULK1 y un péptido ULKtido recombinante (o variante del mismo); detectar la fosforilación del péptido recombinante en presencia y ausencia del compuesto candidato; e identificar un compuesto que inhiba la actividad quinasa de ULK1 si la fosforilación del péptido recombinante disminuye en presencia del compuesto candidato en comparación con la ausencia del compuesto candidato.
Composiciones
También se describen en el presente documento composiciones farmacéuticas preparadas para la administración a un sujeto y que incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos desvelados en el presente documento. La cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto desvelado dependerá de la vía de administración, la especie del sujeto y las características físicas del sujeto que se está tratando. Los factores específicos que pueden tenerse en cuenta incluyen la gravedad y el estadio de la enfermedad, el peso, la dieta y los medicamentos concurrentes. Los expertos en la materia entienden la relación de estos factores para determinar una cantidad terapéuticamente eficaz de los compuestos desvelados. La composición farmacéutica puede incluir tanto un inhibidor de ULK1 como un inhibidor de mTOR en una única forma o unidad de dosificación.
Las composiciones farmacéuticas para la administración a un sujeto pueden incluir al menos otro aditivo farmacéuticamente aceptable tales como vehículos, espesantes, diluyentes, tampones, conservantes, agentes tensioactivos y similares además de la molécula de elección. Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir uno o más principios activos adicionales tales como agentes antimicrobianos, agentes antiinflamatorios, anestésicos y similares. Los vehículos farmacéuticamente aceptables útiles para estas formulaciones son convencionales. Remington's Pharmaceutical Sciences, por E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19a Edición (1995), describe composiciones y formulaciones adecuadas para el suministro farmacéutico de los compuestos desvelados en el presente documento.
En general, la naturaleza del vehículo dependerá del modo particular de administración que se emplee. Por ejemplo, las formulaciones parenterales habitualmente contienen líquidos inyectables que incluyen líquidos farmacéutica y fisiológicamente aceptables tales como agua, solución salina fisiológica, soluciones salinas equilibradas, dextrosa acuosa, glicerol o similares como vehículo. Para composiciones sólidas (por ejemplo, formas de polvo, píldora, comprimido o cápsula), los excipientes sólidos no tóxicos convencionales pueden incluir, por ejemplo, calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón o estearato de magnesio. Además de los vehículos biológicamente neutros, las composiciones farmacéuticas a administrar pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas, tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes y agentes tamponantes del pH y similares, por ejemplo, acetato sódico o monolaurato de sorbitán.
Las composiciones farmacéuticas desveladas en el presente documento incluyen aquellas formadas a partir de sales y/o solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos desvelados. Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse a sujetos mediante diversos modos de administración mucosal, incluyendo por suministro oral, rectal, intranasal, intrapulmonar o transdérmico o por suministro tópico a otras superficies. Opcionalmente, las composiciones pueden administrarse por vías no mucosas, incluyendo por las vías intramuscular, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intraarticular, intraperitoneal, intratecal, intracerebroventricular o parenteral. En otras realizaciones alternativas, el compuesto puede administrarse ex vivo por exposición directa a las células, tejidos u órganos procedentes de un sujeto.
Para formular las composiciones farmacéuticas, el compuesto puede combinarse con diversos aditivos farmacéuticamente aceptables, así como una base o vehículo para la dispersión del compuesto. Los aditivos deseados incluyen, pero no se limitan a, agentes de control del pH, tales como arginina, hidróxido sódico, glicina, ácido clorhídrico, ácido cítrico y similares. Además, pueden incluirse anestésicos locales (por ejemplo, alcohol bencílico), agentes isotonizantes (por ejemplo, cloruro sódico, manitol, sorbitol), inhibidores de adsorción (por ejemplo, Tween 80 o Miglyol 812), agentes que mejoran la solubilidad (por ejemplo, ciclodextrinas y derivados de las mismas), estabilizantes (por ejemplo, albúmina sérica) y agentes reductores (por ejemplo, glutatión). Los adyuvantes, tales como hidróxido de aluminio (por ejemplo, Amphogel, Wyeth Laboratories, Madison, NJ), adyuvante de Freund, MPL™ (monofosforil lípido A 3-O-desacilado; Corixa, Hamilton, IN) e IL-12 (Genetics Institute, Cambridge, MA), entre muchos otros adyuvantes adecuados bien conocidos en la técnica, pueden incluirse en las composiciones. Cuando la composición es un líquido, la tonicidad de la formulación, medida con referencia a la tonicidad de una solución salina fisiológica al 0,9 % (p/v) tomada como unidad, normalmente se ajusta a un valor en el que no se inducirá daño tisular irreversible sustancial en el sitio de administración. Generalmente, la tonicidad de la solución se ajusta a un valor de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 3,0, tal como de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2,0 o de aproximadamente 0,8 a aproximadamente 1,7.
El compuesto puede dispersarse en una base o vehículo, que puede incluir un compuesto hidrófilo que tenga una capacidad de dispersar el compuesto y cualquier aditivo deseado. La base puede seleccionarse de una amplio intervalo de compuestos adecuados, incluyendo pero no limitado a, copolímeros de ácidos policarboxílicos o sales de los mismos, anhídridos carboxílicos (por ejemplo, anhídrido maleico) con otros monómeros (por ejemplo, (met)acrilato de metilo, ácido acrílico y similares), polímeros de vinilo hidrófilos, tales como acetato de polivinilo, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, derivados de celulosa, tales como hidroximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa y similares y polímeros naturales, tales como quitosano, colágeno, alginato sódico, gelatina, ácido hialurónico y sales metálicas no tóxicas de los mismos. A menudo, se selecciona un polímero biodegradable como una base o vehículo, por ejemplo, ácido poliláctico, copolímero de poli(ácido láctico-ácido glicólico), ácido polihidroxibutírico, copolímero de poli(ácido hidroxibutírico-ácido glicólico) y mezclas de los mismos. Como alternativa o adicionalmente, los ésteres de ácidos grasos sintéticos tales como ésteres de ácidos grasos de poliglicerina, ésteres de ácidos grasos de sacarosa y similares pueden emplearse como vehículos. Los polímeros hidrófilos y otros vehículos pueden usarse solos o en combinación y puede impartirse una mayor integridad estructural al vehículo mediante cristalización parcial, enlaces iónicos, reticulación y similares. El vehículo puede proporcionarse en diversas formas, incluyendo soluciones fluidas o viscosas, geles, pastas, polvos, microesferas y películas para aplicación directa a una superficie mucosa.
El compuesto puede combinarse con la base o el vehículo de acuerdo con diversos métodos y la liberación del compuesto puede realizarse por difusión, desintegración del vehículo o formación asociada de canales de agua. En algunas circunstancias, el compuesto se dispersa en microcápsulas (microesferas) o nanocápsulas (nanoesferas) preparadas a partir de un polímero adecuado, por ejemplo, 2-cianoacrilato de isobutilo (véase, por ejemplo, Michael et al., J. Pharmacy Pharmacol. 43:1-5, 1991) y dispersarse en un medio de dispersión biocompatible, que produce un suministro sostenido y actividad biológica durante un tiempo prolongado.
Las composiciones de la divulgación pueden contener alternativamente, como vehículos farmacéuticamente aceptables según se requiera para aproximarse a las condiciones fisiológicas, sustancias tales como agentes de ajuste del pH y tamponantes, agentes de ajuste de la tonicidad, agentes humectantes y similares, por ejemplo, acetato sódico, lactato sódico, cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro cálcico, monolaurato de sorbitán y oleato de trietanolamina. Para composiciones sólidas, pueden usarse vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales que incluyen, por ejemplo, calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, glucosa, sacarosa, carbonato de magnesio y similares.
Las composiciones farmacéuticas para administrar el compuesto también pueden formularse como una solución, microemulsión u otra estructura ordenada adecuada para alta concentración de principios activos. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido y similares) y mezclas adecuadas de los mismos. Se puede mantener la fluidez adecuada para las soluciones, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento de un tamaño de partículas deseado en el caso de formulaciones dispersables y mediante el uso de tensioactivos. En muchos casos, será deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes, tales como manitol y sorbitol o cloruro sódico en la composición. Puede lograrse la absorción prolongada del compuesto incluyendo en la composición un agente que retrase la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.
En determinadas realizaciones, el compuesto puede administrarse en una formulación de liberación prolongada, por ejemplo, en una composición que incluya un polímero de liberación lenta. Estas composiciones pueden prepararse con vehículos que protegerán contra la liberación rápida, por ejemplo, un vehículo de liberación controlada tal como un polímero, sistema de suministro microencapsulado o gel bioadhesivo. El suministro prolongado en diversas composiciones de la divulgación puede lograrse incluyendo en la composición agentes que retrasen la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio, hidrogeles y gelatina. Cuando se desean formulaciones de liberación controlada, los aglutinantes de liberación controlada adecuados para su uso de acuerdo con la divulgación incluyen cualquier material de liberación controlada biocompatible que sea inerte al principio activo y que sea capaz de incorporar el compuesto y/u otro agente biológicamente activo. En la técnica se conocen numerosos materiales de este tipo. Los aglutinantes de liberación controlada útiles son materiales que se metabolizan lentamente en condiciones fisiológicas después de su administración (por ejemplo, en una superficie mucosa o en presencia de fluidos corporales). Los aglutinantes apropiados incluyen, pero no se limitan a, polímeros y copolímeros biocompatibles bien conocidos en la técnica para su uso en formulaciones de liberación sostenida. Dichos compuestos biocompatibles no son tóxicos y son inertes para los tejidos circundantes y no desencadenan efectos secundarios adversos significativos, tales como irritación nasal, respuesta inmunitaria, inflamación o similares. Se metabolizan en productos metabólicos que también son biocompatibles y se eliminan fácilmente del organismo.
Los ejemplos de materiales poliméricos para su uso en la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a, matrices poliméricas derivadas de poliésteres copoliméricos y homopoliméricos que tienen enlaces éster hidrolizables. Se sabe en la técnica que varios de estos son biodegradables y dan lugar a productos de degradación que tienen una toxicidad baja o nula. Los ejemplos de polímeros incluyen ácidos poliglicólicos y ácidos polilácticos, poli(ácido DL-láctico-coácido glicólico), poli(ácido D-láctico-co-ácido glicólico) y poli(ácido L-láctico-co-ácido glicólico). Otros polímeros biodegradables o bioerosionables útiles incluyen, pero no se limitan a, polímeros tales como poli(épsilon-caprolactona), poli(épsilon-aprolactona-CO-ácido láctico), poli(épsilon.-aprolactona-CO-ácido glicólico), poli(ácido beta-hidroxi butírico), poli(alquil-2-cianoacrilato), hidrogeles, tales como poli(metacrilato de hidroxietilo), poliamidas, poli(aminoácidos) (por ejemplo, L-leucina, ácido glutámico, ácido L-aspártico y similares), poli(éster urea), poli(2-hidroxietil DL-aspartamida), polímeros de poliacetal, poliortoésteres, policarbonato, polimaleamidas, polisacáridos y copolímeros de los mismos. Muchos métodos para preparar tales formulaciones son bien conocidos por los expertos en la materia (véase, por ejemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1978). Otras formulaciones útiles incluyen microcápsulas de liberación controlada (Patentes de EE.UU. N.° 4.652.441 y 4.917.893), copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico útiles para fabricar microcápsulas y otras formulaciones (Patentes de EE.UU. N.° 4.677.191 y 4.728.721) y composiciones de liberación sostenida para péptidos hidrosolubles (Patente de EE.UU. N.° 4.675.189).
Las composiciones farmacéuticas de la divulgación normalmente son estériles y estables bajo las condiciones de fabricación, almacenamiento y uso. Las soluciones estériles pueden prepararse incorporando el compuesto en la cantidad necesaria en un disolvente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados en el presente documento, según sea necesario, seguido de esterilización por filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto y/u otro principio biológicamente activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados en el presente documento. En el caso de polvos estériles, los métodos de preparación incluyen secado al vacío y secado por congelación que proporcionan un polvo del compuesto activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución de los mismos previamente esterilizada por filtración. La prevención de la acción de microorganismos puede lograrse mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares.
De acuerdo con los diversos métodos de tratamiento de la divulgación, el compuesto puede administrarse a un sujeto de manera consistente con las metodologías convencionales asociadas al tratamiento del trastorno para el que se busca tratamiento o prevención. De acuerdo con la divulgación en el presente documento, se administra una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz del compuesto y/u otro agente biológicamente activo a un sujeto que necesita dicho tratamiento durante un tiempo y en condiciones suficientes para prevenir, inhibir y/o mejorar una enfermedad o afección seleccionada o uno o más síntoma o síntomas de la misma.
La administración del compuesto de la divulgación puede ser con fines profilácticos o terapéuticos. Cuando se proporcionan de manera profiláctica, el compuesto se proporciona antes de cualquier síntoma. La administración profiláctica del compuesto sirve para prevenir o mejorar cualquier proceso patológico posterior. Cuando se proporciona terapéuticamente, el compuesto se proporciona al inicio de un síntoma de enfermedad o infección (o poco después).
Con fines profilácticos y terapéuticos, el compuesto puede administrarse al sujeto por vía oral o administración en un solo bolo, mediante suministro continuo (por ejemplo, suministro transdérmico continuo, mucoso o intravenoso) durante un período de tiempo prolongado o en un protocolo de administración repetida (por ejemplo, mediante un protocolo de administración repetida horaria, diaria o semanalmente). La dosificación terapéuticamente eficaz del compuesto puede proporcionarse como dosis repetidas dentro de un régimen de profilaxis o tratamiento prolongado que producirá resultados clínicamente significativos para aliviar uno o más síntomas o condiciones detectables asociadas con una enfermedad o afección específica como se establece en el presente documento. La determinación de dosis eficaces en este contexto se basa normalmente en estudios en modelos animales seguidos de ensayos clínicos en seres humanos y se guía por protocolos de administración que reducen significativamente la aparición o gravedad de síntomas o afecciones dirigidos en el sujeto. Los modelos adecuados a este respecto incluyen, por ejemplo, murino, rata, aviar, perro, oveja, porcino, felino, primate no humano y otros sujetos modelos animales aceptados conocidos en la técnica. Alternativamente, las dosificaciones eficaces pueden determinarse usando modelos in vitro. Usando tales modelos, solo se requieren cálculos y ajustes habituales para determinar una concentración y dosis apropiadas para administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto (por ejemplo, cantidades que son eficaces para aliviar uno o más síntomas de una enfermedad dirigida). En realizaciones alternativas, una cantidad eficaz o dosis eficaz del compuesto puede simplemente inhibir o mejorar una o más actividades biológicas seleccionadas correlacionadas con una enfermedad o afección, como se expone en el presente documento, ya sea con fines terapéuticos o de diagnóstico.
La dosificación real del compuesto variará de acuerdo con factores tales como la indicación de la enfermedad y el estado particular del sujeto (por ejemplo, la edad del sujeto, tamaño, forma física, extensión de los síntomas, factores de susceptibilidad y similares), el tiempo y la vía de administración, otros fármacos o tratamientos que se administran al mismo tiempo, así como la farmacología específica del compuesto para provocar la actividad o respuesta biológica deseada en el sujeto. Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar una respuesta profiláctica o terapéutica óptima. Una cantidad terapéuticamente eficaz también es una en la cual cualquier efecto secundario tóxico o perjudicial del compuesto y/u otro agente biológicamente activo se ve compensado en términos clínicos por los efectos terapéuticamente beneficiosos. Un intervalo no limitante para una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto y/u otro agente biológicamente activo dentro de los métodos y formulaciones de la divulgación es de aproximadamente 0,01 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 20 mg/kg de peso corporal, tal como de aproximadamente 0,05 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal o de aproximadamente 0,2 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg de peso corporal.
El médico tratante puede variar la dosificación para mantener una concentración deseada en un sitio diana (por ejemplo, los pulmones o la circulación sistémica). Pueden seleccionarse concentraciones más altas o más bajas basándose en el modo de administración, por ejemplo, suministro transepidérmico, rectal, oral, pulmonar, intraóseo o intranasal frente a suministro intravenoso, subcutáneo o intramuscular. La dosificación también puede ajustarse en función de la velocidad de liberación de la formulación administrada, por ejemplo, de un aerosol intrapulmonar frente a polvo, formulaciones de suministro transdérmico o de partículas orales frente inyectadas de liberación sostenida y así sucesivamente.
Los compuestos desvelados en el presente documento también pueden coadministrarse con un agente terapéutico adicional, particularmente un inhibidor de mTOR como se describe anteriormente. Los agentes adicionales para la coadministración incluyen, pero no se limitan a, un agente antidiabético, un agente reductor del colesterol, un agente antiinflamatorio, un agente antimicrobiano, un inhibidor de metaloproteasas de matriz, un inhibidor de lipooxigenasa, un antagonista de citocinas, un inmunosupresor, un agente antineoplásico, un agente antivírico, una citocina, un factor de crecimiento, un inmunomodulador, una prostaglandina o un compuesto contra la hiperproliferación vascular.
La presente divulgación también incluye kits, envases y unidades multi-recipiente que contienen las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento, principios activos y/o medios para administrar los mismos para su uso en la prevención y el tratamiento de enfermedades y otras afecciones en sujetos mamíferos. También se describen en el presente documento kits para uso diagnóstico. En determinadas realizaciones, estos kits incluyen un recipiente o formulación que contiene uno o más de los compuestos descritos en el presente documento. En un ejemplo, este componente se formula en una preparación farmacéutica para su suministro a un sujeto. El compuesto está contenido opcionalmente en un recipiente dispensador a granel o en una forma de dosificación unitaria o multiunitaria. Pueden proporcionarse medios de dosificación opcionales, por ejemplo, un aplicador de pulverización pulmonar o intranasal. Los materiales de envasado incluyen opcionalmente una etiqueta o instrucción que indica para qué fines de tratamiento y/o de qué manera puede usarse el agente farmacéutico envasado con ellos.
A menos que se indique de otra manera, todos los números que expresan cantidades de ingredientes, propiedades tales como el peso molecular, condiciones de reacción, etc., usadas en la memoria descriptiva y las reivindicaciones deben entenderse que están modificadas en todos los casos por el término "aproximadamente". En consecuencia, salvo que se indique lo contrario, los parámetros numéricos expuestos en la siguiente memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que se busca obtener mediante la presente divulgación. Como mínimo, y no como un intento de limitar la aplicación de la doctrina de los equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parámetro numérico debe interpretarse al menos a la luz del número de dígitos significativos indicados y mediante la aplicación de técnicas de redondeo habituales.
A pesar de que los intervalos numéricos y parámetros que establecen el amplio alcance de la divulgación sean aproximaciones, los valores numéricos establecidos en los ejemplos específicos se presentan de la forma más precisa posible. Cualquier valor numérico, sin embargo, contiene de forma inherente determinados errores que resultan necesariamente de la desviación típica encontrada en sus mediciones de ensayo respectivas.
Ha de entenderse que siempre que se describen valores e intervalos en el presente documento, todos los valores e intervalos englobados por estos valores e intervalos, se prevé que estén todos incluidos dentro del alcance de la presente divulgación. Por otro lado, todos los valores que se encuentren dentro de estos intervalos, así como los límites superior o inferior de un intervalo de valores, también se describen por la presente divulgación.
Los expertos en la materia reconocerán o serán capaces de determinar, usando únicamente la experimentación habitual, numerosos equivalentes a los procedimientos específicos, realizaciones, reivindicaciones y ejemplos descritos en el presente documento. Por ejemplo, debería entenderse, que se hagan modificaciones en las condiciones de reacción, que incluyan pero no se limitan a los tiempos de reacción, tamaño/volumen de la reacción y reactivos experimentales, tales como disolventes, catalizadores, presiones, condiciones atmosféricas, por ejemplo, atmósfera de nitrógeno y agentes reductores/oxidantes, con alternativas reconocidas en la técnica y que no usan más que la experimentación de rutina.
Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la materia una divulgación y descripción completas de cómo hacer y usar el ensayo, cribado y métodos terapéuticos descritos en el presente documento.
Ejemplos
La invención se describe ahora en referencia a los siguientes Ejemplos. Estos ejemplos se proporcionan únicamente con fines ilustrativos. A menos que se indique otra cosa, los materiales de partida para la síntesis descrita en el presente documento se obtuvieron de fuentes comerciales o procedimientos de síntesis conocidos y se usaron sin purificación adicional. Todos los disolventes se usaron como se adquirieron de fuentes comerciales.
Métodos
Las reacciones realizadas en irradiación de microondas se realizaron en un reactor de microondas CEM Discover utilizando recipientes de reacción CEM de 10 ml o un recipiente a presión de pared gruesa ChemGlass (100 ml, 38 mm x 190 mm). El progreso de la reacción se controló mediante HPLC de fase inversa y/o cromatografía en capa fina (TLC). La cromatografía líquida-espectrometría de masas se realizó utilizando instrumentos de HPLC de Waters o Shimadzu usando agua y acetonitrilo o metanol dopado con ácido fórmico al 0,1 %. Las purificaciones de fase inversa se realizaron con agua y acetonitrilo o metanol dopado con ácido fórmico al 0,1 %. La TLC se realizó usando placas precubiertas de gel de sílice 60 F254 (0,25 mm). La cromatografía ultrarrápida se realizó usando gel de sílice (tamaño de partícula de 32-63 pm) u óxido de aluminio (activado, básico, tamaño de malla ~150). Todos los productos se purificaron hasta la homogeneidad mediante análisis TLC (punto único, a menos que se indique lo contrario), usando una lámpara UV y/o yodo y/o CAM o KMnO 4 básico para fines de detección. Los espectros de RMN se registraron en espectrómetros de 400 MHz a temperatura ambiente. Los desplazamientos químicos de RMN 1 H y 13 C se notifican como 8 usando disolvente residual como patrón interno; CDCl3: 7,26, 77,16 ppm; CD 3 OD: 3,31, 49,00 ppm; DMSO-d 6 : 2,50, 39,52 ppm, CD 3 CN: 1,94 ( 1 H), 1,32 ( 13 C) ppm. Abreviaturas empleadas: espectrometría de masas (EM), paladio sobre carbono (Pd-C), acetonitrilo (MeCN), diclorometano (DCM), éter dietílico (Et 2 O), acetato de etilo (EtOAc), etanol (EtOH), metanol (MeOH), tetrahidrofurano (THF).
Ejemplo 1: Síntesis de derivados de 5-halo-2,4-(diarilamino/oxo/tio)-pirimidina
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E j e m p l o 2 : S í n t e s i s d e d e r i v a d o s d e 5 - h a l o - N 2, N 4- d i a r i l p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a ( u s a n d o c o n d i c i o n e s d e r e a c c i ó n A y C , M é t o d o 1 )
A una solución de la amina apropiada (10 mmol, 1 equiv.) en DMF (30 ml), se le añadieron 2,4,5-tricloro pirimidina (13 mmol, 1,3 equiv.) y K 2 CO 3 (13 mmol, 1,3 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a 75 °C durante 5 h. Después, se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en agua (300 ml). El precipitado resultante se recogió por filtración seguido de lavado con acetonitrilo acuoso al 50 % y se secó para proporcionar el derivado de 2,5-dihalo-N-arilpirimidin-4-amina deseado. El producto en bruto se usó para la siguiente etapa sin purificación adicional (Método 1a). Una mezcla de 2,5-dicloro-N-arilpirimidin-4-amina (1 mmol, 1 equiv.) y la anilina apropiada (2 mmol, 2 equiv.) se tomó en nBuOH (10 ml) y se calentó a 110 °C durante 12 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el exceso de disolvente se redujo a presión reducida. El residuo en bruto se purificó usando HPLC prep. automatizada para producir los derivados de 5-halo-N 2 ,N 4 -diarilpirimidin-2,4-diamina deseados (Método 1b).
E j e m p l o 3 : S í n t e s i s d e d e r i v a d o s d e 2 , 5 - d i c l o r o - N - a r i l o p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ( u s a n d o c o n d i c i o n e s d e r e a c c i ó n B y C , M é t o d o 2 )
A una solución de la amina apropiada (1 mmol, 1 equiv.) en nBuOH (10 ml), se le añadieron 2,4,5-tricloro pirimidina (1 mmol, 1 equiv.) y DIPEA (1 mmol, 1equiv.). La mezcla resultante se agitó a 110 °C durante 4-5 (Método 2a). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y a la misma mezcla de reacción se le añadió la anilina apropiada (1 mmol, 1 equiv.) y DIPEA (1 mmol, 1 equiv.) calentada a 110 °C durante 12 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y el exceso de disolvente se redujo a presión reducida. El residuo en bruto se purificó usando HPLC prep. automatizada para producir los derivados de 5-halo-N 2 ,N 4 -diarilpirimidin-2,4-diamina deseados (Método 2 b).
E j e m p l o 4 : S í n t e s i s d e d e r i v a d o s d e 2 , 5 - d i c l o r o - N - a r i l p i r i m i d i n - 4 - a m i n a ( u s a n d o la c o n d i c i ó n d e r e a c c i ó n D a p a r t i r d e l i n t e r m e d i o o b t e n i d o u s a n d o l a s c o n d i c i o n e s d e r e a c c i ó n A o B , M é t o d o 3 )
A una solución de derivado de 2,5-dihalo-N-arilpirimidin-4-amina (1 mmol, 1 equiv.) en EtOH (10 ml), se le añadieron la amina apropiada (1 mmol, 1 equiv.) y unas pocas gotas de HCl. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 4­ 5 h (Método 3a). Después, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (25 ml) y se neutralizó con una solución 1 N de NaOH y se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera y se secaron sobre Na 2 SO 4 anhidro. La retirada del disolvente a presión reducida proporcionó el producto en bruto. El residuo en bruto se purificó usando HPLC prep. automatizada para producir los derivados de 5-halo-N2, N 4 -diarilpirimidin-2,4-diamina deseados (Método 3b).
E j e m p l o 5 : S í n t e s i s d e d e r i v a d o s d e 2 -( 5 - t r i f l u o r o m e t i l - 2 -( a r i l a m i n o / o x o / t i o ) p i r i m i d i n - 4 - i l a m i n o ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000106_0002
E j e m p l o 6 : S í n t e s i s d e d e r i v a d o s d e N 2, N 4- d i a r i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a ( u s a n d o c o n d i c i o n e s d e r e a c c i ó n E y F , M é t o d o 4 )
A una solución de 5-triflurometil-2,4-dicloropirimidina (4,6 mmol, 1 equiv.) en DCE:tBuOH (1:1, 40 ml), se le añadió ZnCl2 (5,5 mmol, 1,2 equiv.) a 0 °C. Después de 1 h, se añadieron la anilina apropiada (1 equiv.) y trietilamina (4,6 mmol, 1,2 equiv.) en DCE:‘Bu0H (4 ml) a la mezcla de reacción. Después de agitar durante 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró para conseguir el producto en bruto. El producto en bruto se trituró con MeOH, se filtró y se secó para producir el derivado de 5-tr¡fluromet¡l-4-cloro-A/-ar¡lp¡r¡m¡d¡n-2-am¡na deseado (Método 4a). A una solución de derivado de 5-triflurometil-4-cloro-W-arilpirimidin-2-amina (1 mmol, 1 equiv.) en nBuOH (10 ml), se le añadieron la anilina apropiada (1 mmol, 1 equiv.) y DIPEA (1 mmol, 1 equiv.). La mezcla de reacción se agitó a 100 °C durante 16 h. Después, se enfrió a temperatura ambiente, el exceso de disolvente se redujo a presión reducida. El residuo en bruto se purificó usando HPLC prep. automatizada para producir los derivados de 5-triflurometil-W2,W4-diarilpirimidin-2,4-diamina deseados (Método 4b).
Ejemplo 7: Preparación de 2-(2,5-D¡clorop¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000107_0001
Preparada de acuerdo con el método 1a usando 2-amino-W-metil benzamida (1,5 g, 10 mmol), 2,4,5-tricloro pirimidina (2,38 g, 13 mmol) y K2CO3 (1,79 g, 13 mmol). Sólido de color blanco (2,6 g, 89 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 8 12,15 (s, 1H), 8,82 (s a, 1H), 8,48 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,76 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,18 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 2,76 (d, J = 2,3 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C ^ H ^ C h ^ O [M+H]+: 297,02; encontrado: 297,00.
Ejemplo 8 : Preparac¡ón de 2-(5-Bromo-2-clorop¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000107_0002
Preparada de acuerdo con el método 1a usando 2-amino-W-metil benzamida (1,5 g, 10 mmol), 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (2,75 g, 13 mmol) y K2CO3 (1,79 g, 13 mmol). Sólido de color amarillo (4,5 g, 66 %). RMN 1 H (400 MHz, DMS0-d6): 811,93 (s, 1H), 8,50 (s a, 1H), 8,48 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,75 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,17 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 2,76 (d, J = 2,3 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C12H1 üBrClN40 [M+H]+: 342,97; encontrado: 342,85.
Ejemplo 9: Preparac¡ón de 6-4-Cloro-5-tr¡fluoromet¡lp¡r¡m¡d¡n-2-¡lam¡no-3,4-d¡h¡droqu¡nol¡n-2(1H)-ona (Método 4a)
Figure imgf000107_0003
A una solución de 5-triflurometil-2,4-dicloropirimidina (1 g, 4,6 mmol) en DCE:‘Bu0H (1:1, 40 ml), se le añadió ZnCh (5,5 ml, 5,5 mmol) a 0 °C. Después de 1 h, se añadieron clorhidrato de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,938 g, 4,6 mmol) y trietilamina (1 g, 5,5 mmol) en DCE:‘Bu0H (4 ml) a la mezcla de reacción. Después de agitar durante 1,5 h, la mezcla de reacción se concentró para conseguir el producto en bruto. El producto en bruto se trituró con metanol y se filtró y se secó al vacío para proporcionar el compuesto. Sólido de color amarillo (1 g, 64 %). RMN 1 H (400 MHz, DMS0-d6): 5 10,51 (s, 1H), 10,04 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,39 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 2,76 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 7,3Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C14H10C F 3N4O [M+H]+: 343,05; encontrado: 342,90.
Ejemplo 10: Preparac¡ón de 4-Cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)-W-(3,4,5-tr¡metox¡feml) p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na
Figure imgf000108_0001
El compuesto del título se preparó por la reacción de 5-triflurometil-2,4-dicloro pirimidina (1 g, 4,6 mmol), ZnCh (5,5 ml, 5,5 mmol), 3,4,5-trimetoxianilina (0,841 g, 4,6 mmol) y trietilamina (1 g, 5,5 mmol) de acuerdo con el método 4a. Sólido de color amarillo pálido (1,38 g, 82 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 5 10,45 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 7,06 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,68 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C14H13C F 3N3O3 [M+H]+: 364,06; encontrado: 363,95.
Ejemplo 11: Preparación de 4-Cloro-W-(5-metoxi-2-metilfeml)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-amina
Figure imgf000108_0002
El compuesto del título se preparó por la reacción de 5-triflurometil-2,4-dicloro pirimidina (1 g, 4,6 mmol), ZnCh (5,5 ml, 5,5 mmol), 5-metoxi-2-metilanilina (0,60 g, 4,6 mmol) y trietilamina (1 g, 5,5 mmol) de acuerdo con Método 4a. Sólido incoloro (0,800 g, 53 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 58,04 (s, 1H), 7,20 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,9 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,11 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C13H11CF3N2O [M+H]+: 318,05; encontrado: 318,00.
Ejemplo 12: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(2-metoxi-4-morfolinofenilamino) pirimidm-4-ilammo)-N-metilbenzamida
Figure imgf000108_0003
Se procesaron 2-(2,5-dicloropirimidin-4-ilamino)-W-metilbenzamida (0,148 g, 0,5 mmol), 2-metoxi-4-morfolinoanilina (0,208 g, 1 mmol) y unas pocas gotas de HCl de acuerdo con el método 3. Sólido de color pardo (0,150, 64 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 11,56 (s, 1H), 8,68 (d, J = 4,6 Hz, 2H), 8,56 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,68 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,29 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 15,0 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 11,5, 2,8 Hz, 1H), 3,73-3,64 (superposición de singlete y triplete, 7H), 3,09 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,75 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C23H25ClN6O6[M+H]+: 469,17; encontrado: 469,10. HRMS (IEN) Calc. para C23H25ClN6O6[M+H]+: 469,1749; encontrado: 469,1749.
Ejemplo 13: Preparación de 2-(5-Bromo-2-(2-metoxi-4-morfolinofenilamino) pirimidm-4-ilammo)-W-metilbenzamida
Figure imgf000109_0001
Se procesaron 2-(5-bromo-2-clorop¡r¡m¡din-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,341 g, 1 mmol), 2-metox¡-4-morfolinoanilina (0,208 g, 1 mmol) y HCl de acuerdo con el método 3. Sólido de color castaño (0,258 g, 50 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 511,33 (s, 1H), 8,80 (s a, 1H), 8,50 (s a, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,64 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,27 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,43 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,71 (s, 1H), 3,72-3,68 (superposición de singlete y triplete, 7H), 3,06 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 2,75 (d, J = 4,3 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C23H25BrN6O3 [M+H]+: 515,12; encontrado: 515,05. HRMS (IEN) calc. para C23H25BrN6O3 [M+H]+: 515,1227; encontrado: 515,1226.
Ejemplo 14: Preparación de 2-(5-Bromo-2-(3,4,5-trimetoxifenilamino)pirimidin-4-il amino)-W-metilbenzamida
Figure imgf000109_0002
Se procesaron 2-(5-bromo-2-clorop¡r¡mid¡n-4-¡lam¡no)-W-met¡lbenzam¡da (0,341 g, 1 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,366 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 1b. Sólido de color castaño (0,325 g, 67 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,39 (s, 1H), 9,26 (s, 1H), 8,69-8,65 (m, 2H), 8,25 (s, 1H), 7,68 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,37 (t, J = 7,8Hz, 1H), 7,08 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,97 (s, 2H), 3,61 (s, 6H), 3,59 (s, 3H), 7,76 (d, J = 4,4 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C21H22BrN3O4 [M+H]+: 490,09; encontrado: 490,00. HRMS (IEN) calc. para C21H22BrN3O4 [M+H]+: 490,0910; encontrado: 490,0912.
Ejemplo 15: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(3,4,5-trimetoxifenilamino)pirimidin-4-il amino)-W-metilbenzamida
Figure imgf000109_0003
Una mezcla de 2-(2,5-d¡clorop¡r¡mid¡n-4-¡lam¡no)-W-met¡lbenzam¡da (0,296 g, 1 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,366 g, 2 mmol) se procesó de acuerdo con el método 1b. Sólido incoloro (0,160, 73 %). Rm N 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,63 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 8,27-8,71 (m, 2H), 8,18 (s, 1H), 7,70 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,69 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,08 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,98 (s, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,59 (s, 6H), 2,76 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C21H22ClN3O4 [M+H]+: 444,13; encontrado: 444,05. HRMS (IEN) calc. para C21H22ClN3O4 [M+H]+: 444,1433; encontrado: 444,1431.
Ejemplo 16: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(5-metoxi-2-metilfemlammo)pirimidm-4-ilammo)-N-metilbenzamida
Figure imgf000109_0004
Se procesaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡mid¡n-4-¡lam¡no)-W-met¡lbenzam¡da (0,296 g, 1 mmol) y 5-metoxi-2-metilan¡l¡na (0,274 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 1b. Sólido de color amarillo (0,232 g, 58%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,44 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,66 (d, J = 8,7 Hz, 1H), (d, J = 8,7 Hz, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,64 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,09­ 7,04 (m, 4H), 6,65 (d, J = 8,2 Hz,1H), 3,65 (s, 3H), 2,77 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 2,11 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H20ClN5O2 [M+H]+: 398,13; encontrado: 398,00. HRMS (IEN) calc. para C20H20ClN5O2 [M+H]+: 398,1378; encontrado: 398,1366.
Ejemplo 17: Preparación de 2-(5-Bromo-2-(5-metox¡-2-met¡lfemlammo)p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000110_0001
Se procesaron 2-(5-bromo-2-clorop¡r¡m¡din-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,341 g, 1 mmol) y 5-metoxi-2-metilanilina (0,274 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 1b. Sólido de color castaño (0,298 g, 67 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,61 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,73-8,72 (m, 2H), 8,20 (s, 1H), 7,72 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,30­ 7,10 (m, 3H), 6,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 2,77 (d, J = 4,1 Hz, 3H), 2,11 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H20BrN5O2[M+H]+: 444,08; encontrado: 443,95. HRMS (IEN) calc. para C20H20BrN5O2[M+H]+: 444,0855; encontrado: 444,0849.
Ejemplo 18: Preparac¡ón de 2-(2-(1H-mdol-5-¡lammo)-5-clorop¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000110_0002
El compuesto del título se preparó a partir de 2-(2,5-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,148 g, 0,5 mmol) y 1H-indol-5-amina (0,132 g, 1 mmol) se procesaron de acuerdo con el método 1b. Sólido de color castaño (0,172 g, 84 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,03 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 8,63-8,51 (m, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,53­ 7,38 (m, 1H), 7,14 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,15-7,09 (m, 3H), 7,00-6,96 (m, 1H), 6,81 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 2,77 (d, J = 4,2 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H17ClN6O [M+H]+: 393,12; encontrado: 392,95. HRMS (IEN) calc. para C20H17ClN6O [M+H]+: 393,1152; encontrado: 393,1213.
Ejemplo 19: Preparac¡ón de 2-(5-Cloro-2-(2-oxo-1,2,3,4-tetrah¡droqu¡nol¡n-6-¡lam¡no) p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000110_0003
Se procesaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡mid¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,148 g, 0,5 mmol) y 6-amino-3,4-d¡h¡droqu¡nolin-2(1H)-ona (0,162 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 1b para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,154 g, 73 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,87 (s, 1H), 9,99 (s, 1H), 9,74 (s, 1H), 8,80 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,56 (s a, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,74 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,40-7,38 (m, 2H), 7,24 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,15 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 677 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,72-2,76 (superposición de doblete y triplete, 5H), 2,39 (t, J = 7,3 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C21H-,9ClN6O2 [M+H]+: 423,13; encontrado: 423,00. HRMS (IEN) calc. para C21H-,9ClN6O2 [M+H]+: 423,1331; encontrado: 423,1303.
Ejemplo 20: Preparac¡ón de 2-((5-Bromo-2-((2-oxo-1,2,3,4-tetrah¡droqumolm-6-¡l)ammo)p¡r¡m¡dm-4-¡l)ammo)-N-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000111_0001
Se procesaron 2-(5-bromo-2-clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,171 g, 0,5 mmol) y 6-am¡no-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,162 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 1b para proporcionar el compuesto deseado. Sólido de color amarillo (0,193 g, 83 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 511,27 (s, 1H), 9,90 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 8,68 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,67 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,44-7,08 (m, 4H), 672 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,72­ 2,76 (superposición de doblete y triplete, 5H), 2,39 (t, J = 7,3 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C21H-igBrN6O2 [M+H]+: 467,08; encontrado: 467,00.
Ejemplo 21: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(2-oxomdolm-5-¡lammo)p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000111_0002
Se tomaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,148 g, 0,5 mmol) y 5-am¡no¡ndol¡n-2-ona (0,148 g, 1 mmol) en nBuOH. Después, se procesaron con el procedimiento general (método 1b) para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,147 g, 73 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,50 (s, 1H), 10,23 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 8,71 -8,70 (superposición de singlete y doblete, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,70 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,43 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7. 30 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,39 (s, 2H), 2,76 (d, J = 3,2 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H-i7ClN6O2 [M+H]+: 409,11; encontrado: 409,05.
Ejemplo 22: Preparac¡ón de Bromo-W 4 -(p¡r¡dm-2-¡l)-W 2 -(3,4,5-tr¡metox¡feml) p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡am¡na
Figure imgf000111_0003
Se procesaron 5-bromo-2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡na (0,227 g, 1 mmol), 2-am¡nop¡r¡d¡na (0,094 g, 1 mmol) 3,4,5-trimetoxianilina (0,183 g, 1 mmol) y disopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,240 g, 56 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,37 (s, 1H), 8,30-8,29 (superposición de singlete y multipletes, 4H), 8,16 (s, 1H), 7,71 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,63 (s, 6H). CL-EM (IEN) calc. para C^H-iaBr^Os [M+H]+: 434,05; encontrado: 433,95. HRMS (IEN) calc. para C18H1sBrN5O3 [M+H]+: 434,0647; encontrado: 434,0650.
Ejemplo 23: Preparac¡ón de 2-(2-(1H-mdol-5-¡lammo)-5-bromop¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-N-met¡lbenzam¡da Se procesaron 2-(5-bromo-2-clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,341 g, 1 mmol) 1H-indol-5-amina (0,264 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 1b para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,296 g, 68 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 511,28 (s, 1H), 10,91 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 8,68-8,67 (m, 2H), 8,19 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,66 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,27-7,18 (m, 4H), 7,06 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,29 (s, 1H), 2,76 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H-i7BrN6O [M+H]+: 439,06; encontrado: 439,00. HRMS (IEN) calc. para C20H-i7BrN6O [M+H]+: 439,0702; encontrado: 439,0693.
Ejemplo 24: Preparación de 5-Cloro-W 4-(6-metoxipiridm-3-M)-W 2 -(3,4,5-trimetoxi fenil)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000112_0001
Se procesaron 5-cloro-2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡na (0,183 g, 1 mmol), 6-metox¡-p¡r¡d¡n-3-am¡na (0,124 g, 1 mmol) 3,4,5-trimetoxianilina (0,183 g, 1 mmol) y d¡soprop¡let¡lam¡na (0,258 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporc¡onar el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,272 g, 65 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,13 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 8,7 Hz, 2,8 Hz, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,75 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,72 (s, 6H), 3,54 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C1gH20ClN5O4 [M+H]+: 418,12; encontrado: 418,00. HRMS-MS (IEN) calc. para C1gH20ClN5O4 [M+H]+: 418,1277; encontrado: 418,1275.
Ejemplo 25: Preparación de 5-Bromodoro-W 4 -(6-metoxipiridm-3-M)-W 2 -(3,4,5-trimetoxifenM)pirimidm-2,4-diamina
Figure imgf000112_0002
Se procesaron 5-bromo-2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡na (0,227 g, 1 mmol), 6-metox¡p¡r¡d¡n-3-am¡na (0,124 g, 1 mmol), diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,183 g, 1 mmol) de acuerdo con el procedimiento general (método 2) para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,232 g, 50 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,10 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,79 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,74 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,54 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,31 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C19H20BrN5O4 [M+H]+: 463,07; encontrado: 463,15.
Ejemplo 26: Preparación de 5-Bromo-W 2 -(5-metoxi-2-metNfenM)-W 4 -(piridm-2-N) pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000112_0003
Se tomaron 2-am¡no-p¡r¡d¡na (0,094 g, 1 mmol), 5-bromo-2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡na (0,227 g, 1 mmol) diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 5-metox¡-2-met¡lan¡l¡na (0,137 g, 2 mmol) en nBuOH (10 ml). Después se procesaron de acuerdo con el método 2 para producir el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,120 g, 31 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 58,86 (s, 1H), 8,25-8,24 (m, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,01 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,88 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,7 Hz, 1H),7,03-7,00 (m, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,70 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 2,08 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C-iyH-^BrNgO [M+H]+: 386,05; encontrado: 385,85.
Ejemplo 27: Preparación de 5-Cloro-W 2-(2-metoxi-4-morfoMnofenM)-W4-(6-metoxi piridin-3-il)pirimidin-2,4- diamina
Figure imgf000113_0001
Se tomaron 6-metoxipiridin-3-amina (0,124 g, 1 mmol), 2,4,5-tridorodoropirimidina (0,208 g, 1 mmol) diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 2-metoxi-4-morfolinoanilina (0,127 g, 1 mmol) en nBuOH (10 ml). Después se procesaron de acuerdo con el método 2 para producir el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,289 g, 65 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 58,76 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,67-7,72 (m, 2H), 7,86 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,43 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,30 (s, 1H), 7,43 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,73-3,72 (superposición de singlete y triplete, 8H), 3,02 (t, J = 4,6 Hz, 4H). CL-EM (IEN) calc. para C2-iH23ClN6O3 [M+H]+: 443,15; encontrado: 443,05.
Ejemplo 28: Preparación de 5-Bromo-W 2 -(2-metoxi-4-morfoMnofenM)-W 4 -(6-metoxi piridin-3-il)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000113_0002
Se tomaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,227 g, 1 mmol), 6-metoxipiridin-3-amina (0,124 g, 1 mmol), diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 2-metoxi-4-morfolinoanilina (0,208 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2 para producir el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,258 g, 53 %). r Mn 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,53 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,83 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,41 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,28 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,60 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 3,02 (t, J = 5,0 Hz, 4H). CL-EM (IEN) calc. para C2-iH23BrN6O3 [M+H]+: 487,11, encontrado: 487,00.
Ejemplo 29: Preparación de 5-Cloro-W 2 -(1H-mdol-5-M)-N4-(6-metoxipiridm-3-N) pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000113_0003
Se procesaron 5-cloro-2,4-dicloropirimidina (0,183 g, 1 mmol), 6-metoxipiridin-3-amina (0,124 g, 1 mmol), diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 1H-indol-5-amina (0,132 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2. Sólido de color amarillo pálido (0,158 g, 42 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,77 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,16-7,12 (m, 3H), 6,73 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 3,84 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C -iaH^C ^O [M+H]+: 367,10; encontrado: 367,45.
Ejemplo 30: Preparación de 5-Bromo-W 2 -(1H-mdol-5-M)-W 4 -(6-metoxipiridm-3-N) pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000114_0001
Se procesaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,227 g, 1 mmol), 6-metoxipiridin-3-amina (0,124 g, 1 mmol), diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 1H-indol-5-amina (0,132 g, 1 mmol) de acuerdo con el método general 2. Sólido incoloro (0,172 g, 42 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 510,77 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,16-7,12 (m, 3H), 6,73 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 3,84 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C-ieH^Br^O [M+H]+: 411,05; encontrado: 411,00.
Ejemplo 31: Preparación de W 4 -(3-(MetMsulfoml)bencM)-5-(trifluorometM)-W 2 -(3,4,5-trimetoxifenM)pirimidm-2,4-diamina
Figure imgf000114_0002
Se procesaron 4-cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)-W-(3,4,5-tr¡metox¡fen¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,036 g, 0,1 mmol), clorhidrato de (3-(metilsulfonil)fenil)metanamina (0,022 g, 0,1 mmol) y d¡soprop¡let¡l am¡na (0,013 g, 0,1 mmol) de acuerdo con el método 4b. Sólido incoloro (0,039 g, 76 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 59,44 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,76 (d, J = 6,8 HZ, 1H), 7,55-7,52 (m, 2H), 6,99 (s, 2H), 4,78 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,56 (s, 3H), 3,54 (s, 6H), 3,10 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C22H23F3N4O5S [M+H]+: 513,14; encontrado: 513,10. HRMS (IEN) calc. para C22H23F3N4O5S [M+H]+: 513,1414; encontrado: 513,1405.
Ejemplo 32: Preparación de 6-(4-(3-(Metilsulfonil)bencilamino)-5-(trifluorometil) pirimidm-2-ilammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000114_0003
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡rim¡d¡n-2-¡lam¡no)-3,4-d¡h¡droqu¡nol¡n-2(1H)-ona (0,034 g, 0,1 mmol), clorhidrato de (3-(metilsulfonil)fen¡l)metanam¡na (0,022 g, 0,1 mmol) y disopropiletil amina (0,013 g, 0,1 mmol) de acuerdo con el método 4b. Sólido incoloro (0,035 g, 71 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 59,89 (s, 1H), 9,43 (s a, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,82-7,75 (m, 3H), 7,56-7,54 (m, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,19 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,34 (s, 3H), 2,63 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,34 (t, J = 11,0 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C22H20F3N5O3S [M+H]+: 492,12; encontrado: 492,05. HRMS (IEN) calc. para C22H20F3N5O3S [M+H]+: 492,1312; encontrado: 492,1197.
Ejemplo 33: Preparación de 5-((4-((3-(Metilsulfonil)bencil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)in-dolin- 2 -ona
Figure imgf000115_0001
Se procesaron 5-((4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)indolin-2-ona (0,164 g, 0,5 mmol), clorhidrato de (3-(metilsulfonil)fenil)metanamina (0,100 g, 0,5 mmol) y disopropiletilamina (0,065 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método 4b. Sólido incoloro (0,190 g, 80 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 5 10,23 (s, 1H), 9,45 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,84­ 7,56 (m, 5H), 7,42 (s, 1H), 7,26 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,36 (s, 2H), 3,10 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C22H18F3N5O3S [M+H]+: 478,11; encontrado: 477,60.
Ejemplo 34: Preparación de 5-Cloro-W 2 -(5-metoxi-2-metNfenM)-W 4 -(6-metoxi piridin-3-il)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000115_0002
Se procesaron 5-cloro-2,4-dicloropirimidina (0,183 g, 1 mmol), 6-metoxipiridin-3-amina (0,124 g, 1 mmol), diisopropiletil amina (0,258 g, 2 mmol) y 5-metoxi-2-metilanilina (0,137 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2. Sólido incoloro (0,171 g, 46 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 58,74 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 2,05 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C18H1sClN5O2 [M+H]+: 372,11; encontrado: 372,00.
Ejemplo 35: Preparación de 5-Bromo-W 2 -(5-metoxi-2-metNfenM)-W 4 -(6-metoxi piridin-3-il)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000115_0003
Se procesaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,227 g, 1 mmol), 6-metoxipiridin-3-amina (0,124 g, 1 mmol), diisopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) y 5-metoxi-2-metilanilina (0,137 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2. Sólido incoloro (0,241 g, 58 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 58,51 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 2,05 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C18H18BrNsO2 [M+H]+: 417,06; encontrado: 417,00.
Ejemplo 36: Preparación de W-MetN-2-(5-(trifluorometM)-2-(3,4,5-trimetoxi fenilamino) pirimidin-4-ilamino)benzamida
Figure imgf000115_0004
Se procesaron 4-cloro-5-(trifluorometil)-W-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,363 g, 1 mmol), 2-amino-A/-metilbenzamida y disopropiletilamina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,232 g, 59 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 511,43 (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 8,72 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,42-8,40 (2H), 7,67 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,10 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,95 (s, 2H), 3,68 (s, 6H), 3,58 (s, 3H), 2,75 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C22H22F3N5O4 [M+H]+: 478,16; encontrado: 478,10. HRMS (IEN) calc. para C22H22F3N5O4 [M+H]+: 478,1683; encontrado: 478,1683.
Ejemplo 37: Preparación de W 4 -(6-Metoxipiridm-3-M)-5-(trifluorometM)-W 2 -(3,4,5-trimetoxifenM)pirimidm-2,4-diamina
Figure imgf000116_0001
Se procesaron 4-cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)-W-(3,4,5-tr¡metox¡fen¡l)p¡rim¡d¡n-2-am¡na (0,363 g, 1 mmol), 6-metoxi-p¡r¡d¡n-3-amina (0,124 g, 1 mmol) y disopropiletil amina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título. Sólido de color amarillo (0,330 g, 73 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 58,30 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,66 (dd, J = 8,4 Hz, 2,8 Hz, 1H), 7,56 (s a, 1H), 6,72-6,65 (m, 4H), 3,92 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,61 (s, 6H). CL-EM (IEN) calc. para C20H20F3N5O4 [M+H]+: 452,15; encontrado: 452,05. HRMS (IEN) calc. para C20H20F3N5O4 [M+H]+: 452,1540; encontrado: 452,1526.
Ejemplo 38: Preparación de W 4 -(Piridm-2-M)-5-(trifluorometM)-W 2 -(3,4,5-trimetoxi fenil)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000116_0002
Se procesaron 4-cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)-A/-(3,4,5-tr¡metox¡fen¡l)p¡rim¡d¡n-2-am¡na (0,181 g, 0,5 mmol), 2-aminopiridina (0,0047 g, 0,5 mmol) y disopropiletilamina (0,065 g) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,132 g, 63%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,83 (s, 1H), 10,20 (s, 1H), 8,86 (d, J = 4,6 Hz, 2H), 8,47 (s, 1H), 7,73 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,17 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,99 (s, 2H), 3,77 (s, 6H), 3,60 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C19H18F3N5O3 [M+H]+: 422,37; encontrado: 422,05.
Ejemplo 39: Preparación de 2-(2-(2-Metoxi-4-morfolmofemlammo)-5-(trifluorometM)pirimidm-4-Nammo)-W-metilbenzamida
Figure imgf000116_0003
Se procesaron 4-cloro-W-(2-metox¡-4-morfol¡nofen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)pir¡m¡d¡n-2-am¡na (0,194 g, 0,5 mmol), 2-amino-W-metilbenzamida y disopropiletilamina (0,065 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,125 g, 50%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,40 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,64 (s, 2H), 8,27 (s, 1H), 7,62 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,26-7,24 (m, 2H), 7,03 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,45 (dd, J = 10,0 Hz, J = 2,8 Hz, 1H), 3,73-3,71 (superposición de singlete y triplete, 7H), 3,09 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 2,73 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C24H25F3N6O3 [M+H]+: 503,19; encontrado: 503,05. HRMS (IEN) calc. para C24H25F3N6O3 [M+H]+: 503,2013; encontrado: 503,2001.
Ejemplo 40: Preparación de W 2 -(2-metoxi-4-morfoMnofenM)-W 4 -(6-metoxipiridm-3-M)-5-(trifluorometM)pirimidm- 2,4-diamina
Figure imgf000117_0001
Se procesaron 4-cloro-N-(2-metox¡-4-morfol¡nofen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡rim¡d¡n-2-am¡na (0,194 g, 0,5 mmol), 6-metoxipiridin-3-amina (0,062 g, 0,5 mmol) y disopropiletil amina (0,065 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método general 2. Sólido de color castaño (0,125 g, 50 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 58,55 (s, 1H), 8,21-8,11 (m, 3H), 7,17 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,70 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,24 (s, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,32 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 3,03 (t, J = 4,6 Hz, 4H). CL-EM (IEN) calc. para C22H23F3N6O3 [M+H]+: 477,45; encontrado: 477,00.
Ejemplo 41: Preparación de 5-Cloro-W 2 -(5-metoxi-2-metilfeml)-W 4 -(3-(metil sulfonil)bencil)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000117_0002
Se procesaron 5-cloro-2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡na (0,109 g, 0,6 mmol), clorhidrato de (3-(met¡lsulfon¡l)fen¡l) metanamina (0,110 g, 0,5 mmol), 6-metox¡p¡r¡d¡n-3-am¡na (0,082 g, 0,6 mmol) y disopropiletil amina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método general 2. Sólido de color amarillo (0,100 g, 46 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,35 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,76 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,46-7,43 (m, 1H), 7,12 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 4,53 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,12 (s, 3H), 2,02 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H2-iClN4O3S [M+H]+: 433,10; encontrado: 433,00.
Ejemplo 42: Preparación de 2-(2-(5-Metoxi-2-metilfenilamino)-5-(trifluorometil) pirimidm-4-ilammo)-W-metilbenzamida
Figure imgf000117_0003
Se procesaron 4-cloro-N-(5-metox¡-2-met¡lfen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡rim¡d¡n-2-am¡na (0,158 g, 0,5 mmol), 2-amino-N-metilbenzamida (0,075 g, 0,5 mmol) y disopropiletil amina (0,065 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,186 g, 86 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,53 (s, 1H), 9,26 (s, 2H), 8,67-8,66 (m, 2H), 8,32 (s, 1H), 7,63 (dd, J = 7,8 Hz, 1,7 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,73 (dd, J = 8,2 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,71 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 2,05 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C21H20F3N5O2 [M+H]+: 432,15; encontrado: 432,05. HRMS (IEN) calc. para C21H20F3N5O2 [M+H]+: 432,1642; encontrado: 432,1631.
Ejemplo 43: Preparación de 6-(4-(Bencilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000118_0001
Se procesaron 6-(4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,050 g, 0,15 mmol), bencilamina (0,031 g, 0,29 mmol) y disopropiletil amina (0,019 g, 0,15 mmol) de acuerdo con el método 4b. Sólido incoloro (0,038 g, 62 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 59,95 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,25-7,17 (m, 7H), 6,68 (J = 8,8 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 2,65 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,33 (t, J = 7,3 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C21H18F3N5O [M+H]+: 414,15; encontrado: 414,00.
Ejemplo 44: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(3-metox¡femlammo)p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000118_0002
Se tomaron 2-(2,5-dicloropirimidin-4-ilamino)-W-metilbenzamida (0,297 g, 1 mmol) y 3-metoxianilina (0,246 g, 2 mmol) en nBuOH (10 ml). Después, se procesaron de acuerdo con el método general 1b para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido incoloro (0,253 g, 66 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,6 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,73-8,72 (m, 2H), 8,19 (s, 1H), 7,29 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,12-7,10 (m, 4H), 6,51 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 2,77 (d, J = 4,1 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C19H1sClN5O2 [M+H]+: 384,11; encontrado: 384,00. HRMS (IEN) calc. para C19H1sClN5O2 [M+H]+: 384,1222; encontrado: 384,1210.
Ejemplo 45: Preparac¡ón de 2-(5-Cloro-2-(5-metox¡-2-met¡lfemlammo)p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W,W-d¡met¡lbencenosulfonam¡da
Figure imgf000118_0003
Se procesaron 5-cloro-2,4-dicloropirimidina (0,92 g, 0,5 mmol), 3-amino-W,A/-dimetilbenceno sulfonamida (0,100 g, 0,5 mmol), diisopropiletilamina (0,129 g, 1 mmol) y 5-metoxi-2-metilanilina (0,068 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método general 2 para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color amarillo (0,098 g, 44 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 59,14 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,21-8,18 (m, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,85-7,84 (m, 1H), 7,33-7,27 (m, 2H), 7,06 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H), 2,45 (s, 6H), 2,39 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H22ClN5OaS [M+H]+: 448,11; encontrado: 448,00.
Ejemplo 46: Preparac¡ón de W 2 -(2-Metox¡-4-morfolmofeml)-W 4 -(p¡r¡dm-2-¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l) p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡am¡na
Figure imgf000119_0001
Se procesaron 4-cloro-W-(2-metox¡-4-morfol¡nofen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,097 g, 0,25 mmol), 2-aminopiridina (0,023 g, 0,25 mmol) y disopropiletil amina (0,032 g, 0,25 mmol) de acuerdo con el método general 2b. Sólido de color pardo (0,045 g, 41 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 58,93 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,90-7,85 (m, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,11-6,92 (m, 1H), 6,98-6,94 (m, 1H), 6,84 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 2,3 Hz, 8,7 Hz, 1H), 3,79-3,70 (superposición de singlete y doblete, 7H), 3,11 (t, J = 5,6 Hz, 4H). CL-EM (IEN) calc. para C21H21F3N6O3 [M+H]+: 447,17; encontrado: 447,00.
Ejemplo 47: Preparación de W 2 -(2-Metoxi-4-morfolmofeml)-W 4 -(piridm-3-N)-5-(trifluorometM)pirimidm-2,4-diamina
Figure imgf000119_0002
Se procesaron 4-cloro-W-(2-metox¡-4-morfol¡nofen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,097 g, 0,25 mmol), 3-aminopiridina (0,023 g, 0,25 mmol) y disopropiletil amina (0,032 g, 0,25 mmol) de acuerdo con el método general 4b. Sólido de color pardo (0,037 g, 33 %). CL-EM (IEN) calc. para C21H21F3N6O3 [M+H]+: 447,12; encontrado: 447,00.
Ejemplo 48: Preparación de 6-(4-(Fenilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000119_0003
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡rim¡d¡n-2-¡lam¡no)-3,4-d¡h¡droqu¡nol¡n-2(1H)-ona (0,050 g, 0,15 mmol), anilina (0,014 g, 0,15 mmol) y disopropiletil amina (0,019 g, 0,15 mmol) de acuerdo con el método 4b. Sólido incoloro (0,022 g, 37%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,58 (s, 1H), 9,51 (s a, 1H), 8,57 (s a, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,42-7,12 (m, 7H), 6,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,31 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,46 (t, J = 6,9 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C20H16F3N5O [M+H]+: 400,13; encontrado: 400,00.
Ejemplo 49: Preparación de 2-(2-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-ilamino)-5-cloropirimidin-4-il amino)-N-metilbenzamida
Figure imgf000120_0001
Se tomaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,296 g, 1 mmol) y benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (0,274 g, 2 mmol) en nBuOH (10 ml). Después, se procesaron de acuerdo con el método 1b para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,162 g, 41 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,70 (s, 1H), 9,47 (s, 1H), 8,73 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,64 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,39 (dd, J = 8,2 Hz, J = 1,3 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,13 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,96-6,94 (m, 1H), 6,8 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,99 (s, 2H), 2,77 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C-igH^ClNgOa [M+H]+: 398,09; encontrado: 398,00.
Ejemplo 50: Preparación de W2-(2-metox¡-5-met¡lfeml)-N4-(3-(met¡lsulfoml) benc¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)pmm¡dm-2,4-diamina
Figure imgf000120_0002
Se procesaron 4-cloro-W-(5-metox¡-2-met¡lfen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,080 g, 0,25 mmol), clorhidrato de (3-(met¡lsulfon¡l)fen¡l)metanam¡na (0,110 g, 0,5 mmol) y d¡soprop¡let¡lam¡na (0,065 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporc¡onar el compuesto del título. Sól¡do de color amar¡llo (0,046 g, 39%). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 58,85 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,76 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,46-7,43 (m, 1H), 7,12 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,53 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 2,04 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C21H21F3N4O3S [M+H]+: 467,14; encontrado: 467,00. HRMS (IEN) calc. para C21H21F3N4O3S [M+H]+: 467,1359; encontrado: 467,1348.
Ejemplo 51: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(2,3-dih¡drobenzo[b][1,4]d¡oxin-6-¡lam¡no) p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000120_0003
Se tomaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,148 g, 0,5 mmol) y 2,3-d¡h¡drobenzo[b][1,4]d¡ox¡n-6-am¡na (0,151 g, 1 mmol) en nBuOH. Después, se procesaron de acuerdo con el método 1b para proporc¡onar el compuesto deseado en forma de un sól¡do de color castaño (0,172 g, 84 %). RMN 1H (400 MHz, DMSo-d6): 511,56 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 8,71-8,70 (m, 2H), 8,14 (s, 1H), 7,70 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,08 (t, J =7,3 Hz, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,71 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,18 (t, J = 5,5 Hz, 4H), 2,77 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H1aClN5O3[M+H]+: 412,11; encontrado: 412,00. HRMS (IEN) calc. para C20H1aClN5O3[M+H]+: 412,1171; encontrado: 412,1151.
Ejemplo 52: Preparac¡ón de W 2 -(2-Metox¡-4-morfolmofeml)-W 4 -(3-(met¡lsulfoml) benc¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡am¡na
Figure imgf000121_0001
Se procesaron 4-cloro-A/-(2-metox¡-4-morfol¡nofen¡l)-5-(tr¡fluoromethy1)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,097 g, 0,25 mmol), clorhidrato de (3-(met¡lsulfon¡l)fen¡l)metanam¡na (0,066 g, 0,3 mmol), y disopropiletil amina (0,040 g, 0,3 mmol) de acuerdo con general método 2b. Sólido de color amarillo (0,068 g, 5 l %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,01 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,78 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,53 (t, J = 7,8 Hz, 1), 7,51 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,42 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,62 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,70 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,23 (s, 3H), 3,10 (t, J = 7,3 Hz, 4H). CL-EM (IEN) calc. para C24H26F3N5O4S [m H]+: 538,16; encontrado: 538,00.
Ejemplo 53: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(o-tol¡lammo)p¡r¡m¡dm-4-¡lammo)-W-met¡lbenzam¡da
Figure imgf000121_0002
Se tomaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,148 g, 0,5 mmol) y 2-metil anilina (0,107 g, 1 mmol) en nBuOH (5 ml). Después, se procesaron de acuerdo con el método 1b para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,159 g, 88%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,76 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,70 (s a, 1H), 8,44 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,68 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,23-7,08 (m, 4H), 6,99 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 2,75 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 2,16 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C19H1sClN5O [M+H]+: 368,12; encontrado: 368,00. HRMS (IEN) calc. para C^H^ClNsO [M+H]+: 368,1273; encontrado: 368,1268.
Ejemplo 54: Preparac¡ón de 2-(3-(5-Cloro-2-(5-metox¡-2-met¡lfen¡lam¡no)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)fen¡l)aceton¡tr¡lo
Figure imgf000121_0003
Se procesaron 5-cloro-2,4-diclorop¡r¡mid¡na (0,183 g, 1 mmol), 2-(3-aminofenil)aceton¡tr¡lo (0,130 g, 1 mmol), diisopropilamina (0,258 g, 1 mmol) y 5-metoxi-2-metilan¡l¡na (0,136 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,168 g, 44%). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 58,97 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,60-7,58 (m, 2H), 7,16 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,98-6,96 (m, 2H), 6,66 (dd, J = 8,3 Hz, 2,8 Hz, 1H), 3,99 (2H), 3,66 (s, 3H), 2,07 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C20H1 aClN5O [M+H]+: 381,12; encontrado: 381,00.
Ejemplo 55: Preparac¡ón de 5-Cloro-W2 -(5-metox¡-2-met¡lfen¡l)-W4 -(4-met¡l p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2,4-d¡am¡na
Figure imgf000121_0004
Se procesaron 2,4,5-tricloropirimidina (0,091 g, 0,5 mmol), 4-metilpirimidin-2-amina (0,055 g, 0,5 mmol) 2-metoxi-5-metilanilina (0,069 g, 0,5 mmol) y disopropiletilamina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado. Sólido de color amarillo (0,020 g, 11 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5. Cl-e M (IEN) calc. para C ^ H ^ C l^ O [M+H]+: 357,12; encontrado: 357,00.
Ejemplo 56: Preparación de 6-((5-Fluoro-4-((3-(metMsulfoml)bencil)ammo)pirimidm-2-il)ammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000122_0001
Se procesaron 2,4-dicloro-5-fluoropirimidina (0,091 g, 0,5 mmol), clorhidrato de (3-(metilsulfonil)fenil)metanamina (0,110 g, 0,5 mmol), 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,075 g, 0,55 mmol) y disopropiletilamina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado. Sólido de color castaño (0,128 g, 58 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 510,00 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 8,04-8,03 (m, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,82 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,64-7,57 (m, 2H), 7,29 (s, 1H), 7,17 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,75 (dd, J = 2,3 Hz, 8,7 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,10 (s, 3H), 2,72 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 8,2 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C21H20FN5O3S [M+H]+: 442,13; encontrado: 442,00.
Ejemplo 57: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(6-metilbenzo[d][1,3]dioxol-5-ilamino) pirimidin-4-ilamino)-N-metilbenzamida
Figure imgf000122_0002
Se procesaron 2-(5-cloro-2-cloropirimidin-4-ilamino)-W-metilbenzamida (0,296 g, 1 mmol) y 6-metilbenzo[d][1,3]dioxol-5-amina (0,151 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2b. Sólido de color pardo (0,286 g, 69 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 511,62 (s, 1H), 8,68-8,67 (m, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,52 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,65 (dd, J = 7,8 Hz, 1,8 Hz, 1H), 7,20 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 7,02 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 5,90 (s, 2H), 2,75 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 2,10 (s, 3H). HRMS (IEN) calc. para C20H1 aClN5O3 [M+H]+: 412,1171; encontrado: 413,1158.
Ejemplo 58: Preparación de 6-(4-(Tiazol-2-ilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000122_0003
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidm-2-ilammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,086 g, 0,25 mmol), tiazol-2-amina (0,025 g, 0,25 mmol) y disopropiletil amina (0,033 g, 0,25 mmol) de acuerdo con el método 4b. Sólido de color amarillo (0,035 g, 32 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 510,47 (s, 1H), 10,02 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 7,37-7,35 (m, 3H), 6,78 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 2,79 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C17H13F3N6OS [M+H]+: 407,08; encontrado: 407,00.
Ejemplo 59: Esquema general para la síntesis de N-metil-2-(2-(3,4,5-trimetoxifemlammo)pirimidm-4- ilamino)benzamida
Figure imgf000123_0001
ESQUEMA 3
Ejemplo 60: Preparación de W-MetN-2-(2-(3,4,5-trimetoxifenNamino)pirimidin-4-Namino)benzamida
Figure imgf000123_0002
Se tomó 2-(5-bromo-2-(3,4,5-trimetoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino)-N-metilbenzamida (0,050 g, 0,1 mmol) en metanol y se añadió Pd/C (cat.) y se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de H2 durante 1 h. Después, la mezcla de reacción se pasó a través de un lecho corto de celite y se lavó con metanol. La retirada del disolvente a presión reducida produjo el producto en bruto que después se purificó mediante HPLC prep. automatizada para dar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,036 g, 88 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 511,55 (s, 1H), 10,11 (s a, 1H), 8,55 (d, J = 4,6Hz, 1H), 8,08 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,36 (t, J =7,8 Hz, 1H), 7,20 (t, J =8,6 Hz, 1H), 6,42 (d, J = 6,5 Hz, 1H),3,63 (s, 3H), 3,61 (s, 9H), 2,73 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C21H23N5O4 [M+H]+: 410,18; encontrado: 410,05. HRMS (IEN) calc. para C21H23N5O4 [M+H]+: 410,1823; encontrado: 410,1813.
Ejemplo 61: Preparación de 2-(3-(2-(2-Oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinoNn-6-Namino)-5-(trifluorometN)pirimidin-4-ilamino)fenil)acetonitrilo
Figure imgf000123_0003
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,342, 1 mmol), 2-(3-aminofenil)acetonitrilo (0,168 g, 1 mmol) y disopropiletil amina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (0,289 g, 66 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,87 (s, 1H), 9,63 (s a, 1H), 8,86 (s a, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,37-7,15 (m, 6H), 6,60 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 3,98 (s, 2H), 2,62 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,45 (t, J = 7,4 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C22H17F3N6O [M+H]+: 439,14; encontrado: 439,09. HRMS (IEN) calc. para C22H17F3N6O [M+H]+: 439,1489; encontrado: 439,1484.
Ejemplo 62: Preparación de 6-(4-(Benciltio)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000124_0001
Se procesaron 6-(4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,162 g, 0,5 mmol), fenilmetanotiol (0,062 g, 0,5 mmol) y disopropiletil amina (0,065 g, 0,5 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título. Sólido de color amarillo pálido (0,136 g, 63 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,04 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,34-7,20 (m, 6H), 6,76 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,51 (s, 2H), 2,48 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,34 (t, J = 6,9 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C21H17F3N4OS [M+H]+: 431,10; encontrado: 431,00.
Ejemplo 63: Esquema general para las síntesis de 6-(4-(femletmM)-5-(trifluorometM)pirimidm-2-Nammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000124_0002
Ejemplo 64: Preparación de 6-(4-(Feniletinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000124_0003
A una solución de 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,171 g, 0,5 mmol) en DMF seca (2,5 ml), se le añadieron dicloruro de bistrifenilfosfinapaladio (0,018 g, 0,025 mmol), yoduro de cobre (I) (0,005 g, 0,025 mmol) y trietilamina (0,202 g, 2 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100 °C en una atmósfera de N2 durante 1 h. Después de la filtración a través de un lecho corto de celite y la evaporación del disolvente produjo el producto en bruto que se purificó por HPLC de fase inversa. Sólido de color amarillo (0,188 g, 92 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,28 (s, 1H), 10,00 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,57-7,48 (m, 7 H), 6,68 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,82 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,40 (t, J = 7,4 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C22H15F3N4O [M+H]+: 409,12; encontrado: 409,00. Ejemplo 65: Esquema general para la síntesis de 6-((4-fenetN-5-(trifluorometM)pirimidm-2-N)ammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000125_0001
ESQUEMA 5
Ejemplo 66: Preparación de 6-((4-Fenetil-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000125_0002
Se tomó 6-(4-(feniletinil)-5-(trifluorometM)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinoMn-2(1H)-ona (0,010 g, 0,025 mmol) en 2 ml de MeOH. Se añadió Pd/C (cat) y se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de H2 durante 1 h. Después, se pasó la mezcla de reacción a través de un lecho corto de celite, se lavó con metanol. La retirada del disolvente a presión reducida produjo el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. automatizada para dar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,008 g, 80 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 510,04 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,42 (dd, J = 2,8 Hz, 8,7 Hz, 1H), 7,27-7,13 (m, 5H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,01-3,00 (m, 4H), 2,81 (t, J =6,8 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 7,8 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C22H19F3N4O [M+H]+: 413,41; encontrado: 413,00.
Ejemplo 67: Preparación de 6-((5-MetN-4-((3-(metNsulfonN)bencN)ammo)pirimidm-2-N)ammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000125_0003
Se procesaron 2,4-dicloro-5-metilpirimidina (0,089 g, 0,55 mmol), 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,081, 0,5 mmol), clorhidrato de (3-(metilsulfonil)fenil)metanamina (0,111 g, 0,5 mmol), y disopropiletilamina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,153 g, 70%). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 510,12 (s, 1H), 10,03 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,78 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,56-7,55 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 7,11 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 8,2 Hz,1H), 4,69 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,10 (s, 3H), 2,67 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,35 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,10 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C22H23N5OS [M+H]+: 438,15; encontrado: 438,00.
Ejemplo 68: Esquema general para la síntesis de (£)-6-(4-aril-5-(trifluorometN)pirimidm-2-Nammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000126_0001
Ejemplo 69: Preparación de (E)-6-(4-Estiril-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000126_0002
A un matraz de dos bocas equipado con un condensador, entrada de nitrógeno y barra de agitación, se le cargó con 6-(4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,171 g, 0,5 mmol) y paladiotetraquistrifenilfosfina (0,023 g, 0,02 mmol) en DME seco (3 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. A este carbonato potásico (0,138 g, 1 mmol) disuelto en agua (1,2 ml), se le añadió seguido de la adición de ácido transfenilvinil borónico (0,088 g, 0,6 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 24 h, se enfrió y se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro. La evaporación del disolvente a presión reducida y seguido de HPLC de fase inversa proporcionó el compuesto del título. Sólido de color amarillo (0,098 g, 48 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): ó 10,03 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,02 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 7,65-7,63 (m, 3 H), 7,62-7,42 (m, 4 H), 7,19 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 2,71 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,45 (t, J = 7,3 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C22H17F3N4O [M+H]+: 411,14; encontrado: 411,00.
Ejemplo 70: Esquema general para la síntesis de (E)-W-metil-2-((aril-2-((3,4,5-trimetoxifeml)ammo)pirimidm-4-il)amino)benzamida
Figure imgf000126_0003
ESQUEMA 7
Ejemplo 71: Preparación de (E)-W-Metil-2-((5-estiril-2-((3,4,5-trimetoxifeml)ammo) pirimidin-4-il)amino)benzamida
A un matraz de dos bocas equipado con un condensador, entrada de nitrógeno y barra de agitación, se le cargó con 2-(5-bromo-2-(3,4,5-trimetoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino)-A/-metilbenzamida (0,048 g, 0,1 mmol) y paladiotetraquistrifenilfosfina (0,005 g, 0,004 mmol) en DME seco (2 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. A este carbonato potásico (0,0276 g, 0,2 mmol) en agua (0,5 ml), se le añadió seguido de la adición de ácido transfenilvinil borónico (0,018 g, 0,12 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 12 h, se enfrió y se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro. La evaporación del disolvente a presión reducida y seguido de HPLC de fase inversa proporcionó el compuesto del título. Sólido de color blanco (0,024 g, 47 %). CL-EM (IEN) calc. para C29H29N5O4 [M+H]+: 512,22; encontrado: 512,10.
Ejemplo 72: Preparación de 6-(4-Fenil-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona
Figure imgf000127_0001
Preparada de acuerdo con un procedimiento similar descrito para (E)-6-(4-estiril-5-(trifluoro metil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona usando materiales de partida apropiados (Esquema 5). Sólido de color amarillo (0,122 g, 63 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-da): 510,19 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 7,49-7,48 (m, 7H), 6,75 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 2,79 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,38 (t, J = 6,9 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C20H15F3N4O [M+H]+: 385,11; encontrado: 384,96.
Ejemplo 73: Preparación de W-Metil-2-(5-feml-2-(3,4,5-trimetoxifemlammo) pirimidin-4-ilamino)benzamida
Figure imgf000127_0002
Preparada de acuerdo con un procedimiento similar descrito para (E)-A/-metil-2-((5-estiril-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)amino)benzamida usando materiales de partida apropiados. Sólido de color amarillo (0,041 g, 85 %). RMN 1 H (400 MHz, DMSO-d6): 511,01 (s, 1H), 9,79 (s, 1H), 8,55 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,58 (dd, J = 1,4 Hz, 7,8 Hz, 1H), 7,51-7,42 (m, 5H), 7,30 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,91 (s, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,61 (s, 6H), 2,58 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C27H27N5O4 [M+H]+: 486,20; encontrado: 486,00.
Ejemplo 74: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(2-clorofemlammo)pirimidm-4-ilammo)-N-metilbenzamida
Figure imgf000127_0003
Se tomaron 2-(2,5-dicloropirimidin-4-ilamino)-N-metilbenzamida (0,148 g, 0,5 mmol) y 2-cloro anilina (0,127 g, 1 mmol) en nBuOH (5 ml). Después, se procesaron con el procedimiento general (método 1b) para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,109 g, 56 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,7 (s, 1H), 8,9 (s, 1H), 8,69 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,1 (s, 1H), 7,68 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,32-7,18 (m, 3H), 7,02 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 2,75 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C1sH15Cl2N5O [M+H]+: 388,06; encontrado: 386,00.
Ejemplo 75: Preparación de 2-(5-Bromo-2-(2-metoxi-4-morfolinofenilamino) p¡rim¡dm-4-¡lammo)-W-metilbencenosutfonamida
Figure imgf000128_0001
Se procesaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,227 g, 1 mmol), 2-amino-N-metilbenceno sulfonamida (0,186 g, 1 mmol) 2-metoxi-4-morfolinoanilina (0,202 g, 1 mmol) y disopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color castaño (0,220 g, 40 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 59,44 (s, 1H), 8,75-8,73 (m, 1H), 8,27-8,22 (superposición de singlete y multiplete, 2H), 7,67-7,72 (m, 2H), 7,49 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,30-7,27 (m, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,42 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,73-3,72 (superposición de singlete y triplete, 7H), 3,10 (t, J = 4,6 Hz, 4H), 2,39 (s, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C22H25BrN6O4S [M+H]+: 551,08; encontrado: 551,10. HRMS (IEN) calc. para C22H25BrN6O4S [M+H]+: 551,0896; encontrado: 551,0895.
Ejemplo 76: Preparación de W-Met¡l-2-(2-(2-oxo-1,2,3,4-tetrah¡droqumolm-6-¡lammo)-5-(tr¡fluorometM)pmm¡dm-4-ilamino)benzamida
Figure imgf000128_0002
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidm-2-ilammo)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,085, 0,25 mmol), 2-amino-N-metil benzamida (0,037 g, 0,25 mmol) y disopropiletilamina de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,085 g, 75 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 511,32 (s, 1H), 9,95 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,67 ( d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,52-7,23 (m, 4H), 7,12 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,72 ( d, J = 8,7 Hz, 1H), 2,74-2,73 (superposición de dobletes y tripletes, 5H), 2,46 (t, J = 7,3 H, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C22H19F3N6O2 [M+H]+: 457,15; encontrado: 457,05. HRMS (IEN) calc. para C22H19F3N6O2 [M+H]+: 457,1594; encontrado: 457,1585.
Ejemplo 77: Preparación de N-metil-2-((2-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)ammo)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)am¡no)bencenosulfonam¡da
Figure imgf000128_0003
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,085 g, 0,25 mmol), 2-aminobencenosulfonamida (0,051 g, 0,275 mmol) y disopropiletilamina (0,035 g, 0,275 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,068 g, 55 %). CL-EM (IEN) calc. para C21H19F3N6O2S [M+H]+: 493,12; encontrado: 493,00.
Ejemplo 78: Preparación de 2-(5-Cloro-2-(3,5-dimorfolmofemlammo)pirimidm-4-Nammo)-N-metilbenzamida
Figure imgf000129_0001
Se procesaron 2-(2,5-d¡clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-W-met¡lbenzam¡da (0,148 g, 0,5 mmol) y 3,5-dimorfolinoanilina (0,263 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 3 para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color parduzco (0,170 g, 65%). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 511,77 (s, 1H), 9,35 (s, 1H), 8,77-8,76 (m, 2H), 8,22 (s, 1H), 7,72 (dd, J = 8,2 Hz, 1,3 Hz, 1H), 7,41 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,78 (s, 2H), 6,23 (s, 1H), 3,71 (t, J = 4,6 Hz, 8H), 3,01 (t, J = 5,0 Hz, 8 H), 2,77 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C26H3üClNyO3 [M+H]+: 524,20; encontrado: 524,20. HRMS (IEN) calc. para C26H30ClN7O3 [M+H]+: 524,2171; encontrado: 524,2158.
E j e m p l o 79 : E s q u e m a g e n e r a l p a r a l a s í n t e s i s d e 2 -( 5 - B r o m o - 2 -( 2 - m e t o x ¡ - 4 - m o r f o l m f e m l a m m o ) p ¡ r ¡ m ¡ d m - 4 -¡ l a m m o ) - W - W - d ¡ m e t ¡ l b e n c e n o s u l f o n a m ¡ d a
Figure imgf000129_0002
E j e m p l o 80 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( 5 - B r o m o - 2 -( 2 - m e t o x i - 4 - m o r f o l i n o f e n ¡ l a m ¡ n o ) p ¡ r ¡ m ¡ d m - 4 - ¡ l a m m o ) - W - W -d ¡ m e t ¡ l b e n c e n o s u l f o n a m ¡ d a
Figure imgf000129_0003
A una soluc¡ón de 2-(5-bromo-2-(2-metox¡-4-morfol¡nofen¡lam¡no)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-W-met¡lbencenosulfonam¡da (0,055 g, 0,1 mmol) en DMF, se le añad¡eron carbonato potás¡co (0,069 g, 0,15 mmol) y yoduro de met¡lo (0,021 g, 0,15 mmol). La mezcla resultante se ag¡tó a 50 °C durante 1 h. Se enfr¡ó y la mezcla en bruto se pasó a través de un lecho corto de cel¡te y se lavó con metanol. La ret¡rada del d¡solvente a pres¡ón reduc¡da proporc¡onó el producto en bruto que se pur¡f¡có por HPLC prep. automat¡zada para produc¡r el compuesto del título en forma de un sól¡do de color pardo (0,039 g, 72 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,36 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,38 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,75 (dd, J = 9,6 Hz, 1,8 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 8,2 Hz, 1H), 7,31-7,26 (m, 2H), 6,62 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,44 (dd, J = 11,4 Hz, 5,7 Hz, 1H), 3,73-3,69 (superpos¡c¡ón de tr¡plete y s¡nglete, 7H), 3,10 (t, J = 7,3 Hz, 4H), 2,60 (s, 6H). CL-EM (IEN) calc. para C23H27BrN6O4S [M+H]+: 565,10; encontrado: 565,10. HRMS (IEN) calc. para C26H30ClN7O3 [M+H]+: 565,1053; encontrado: 565,1048.
E j e m p l o 81 : P r e p a r a c ¡ ó n d e 6 -( 4 -( B e n c ¡ l o x ¡ ) - 5 -( t r ¡ f l u o r o m e t ¡ l ) p ¡ r ¡ m ¡ d ¡ n - 2 - ¡ l a m ¡ n o ) - 3 , 4 - d ¡ h ¡ d r o q u ¡ n o l ¡ n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000130_0001
Se procesaron 6-(4-doro-5-(trifluorometil)pirimidn-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,103 g, 0,3 mmol), alcohol bencílico (0,065 g, 0,6 mmol) y disopropiletilamina (0,077 g, 0,6 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título. Sólido de color amarillo ( 0,081 g, 65 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,99 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 7,37-7,29 (m, 8H), 6,76 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 5,49 (s, 2H), 2,79 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,41 (t, J = 6,8 Hz, 2H). CL-EM (IEN) calc. para C21H17F3N4O2 [M+H]+: 415,13; encontrado: 415,00.
E j e m p l o 82 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( ( 4 - M e t o x i - 3 , 5 - d i m e t i l p i r i d m - 2 - i l ) m e t i l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 -i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000130_0002
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,103 g, 0,3 mmol), (2,6­ dimetilpiridin-4-il)metanamina (0,050 g, 0,3 mmol) y disopropiletilamina (0,039 g, 0,3 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título. Sólido de color blanco (0,083 g, 58 %). CL-EM (IEN) calc. para C23H23F3N6O2 [M+H]+: 473,18; encontrado: 473,00.
E j e m p l o 83 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( 2 , 3 - D i m e t i l f e n o x i ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000130_0003
Se procesaron 6-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,171 g, 0,5 mmol), 2,3­ dimetilfenol (0,122 g, 1 mmol) y disopropiletilamina (0,129 g, 1 mmol) de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título. Sólido de color amarillo (0,128 g, 60 %). CL-EM (IEN) calc. para C22H19F3N4O2 [M+H]+: 429,15; encontrado: 429,05.
E j e m p l o 84 : E s q u e m a g e n e r a l p a r a la s í n t e s i s d e W - m e t i l - 2 -( ( 5 -( f e m l e t i m l ) - 2 -( ( 3 , 4 , 5 -t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a
Figure imgf000131_0001
E S Q U E M A 9
E j e m p l o 85 : P r e p a r a c i ó n d e W - M e t i l - 2 -( ( 5 -( f e m l e t i m l ) - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a
Figure imgf000131_0002
A una mezcla agitada de dicloruro de bistrifenilfosfinapaladio ( 0,018 g, 0,025 mmol), 2-(5-bromo-2-(3,4,5-trimetoxifenilamino)pirimidin-4-ilamino)-N-metilbenzamida (0,244 g, 0,5 mmol) y trietilamina (0,202 g, 2 mmol) en 3 ml de DMF seca, se le añadió Cu(I)I (0,005 g, 0,25 mmol). Se añadió fenilacetileno (0,056 g, 0,55 mmol) a la mezcla de reacción anterior y se calentó a 100 °C durante 12 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato sódico anhidro. La evaporación del disolvente seguido de purificación HPLC de fase inversa del material en bruto produjo el compuesto deseado. Sólido de color blanco (0,050 g, 19 %). CL-EM (IEN) calc. para C 29 H 27 N 5 O 4 [M+H]+: 510,21; encontrado: 510,00.
E j e m p l o 86 : E s q u e m a g e n e r a l p a r a l a s í n t e s i s d e N - m e t i l - 2 -( ( 5 - f e n e t i l - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i r i m i d m -4 - i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a
Figure imgf000131_0003
E S Q U E M A 10
E j e m p l o 87 : P r e p a r a c i ó n d e N - M e t i l - 2 -( ( 5 - f e n e t i l - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a
Figure imgf000131_0004
Se tomó N-met¡l-2-((5-(fen¡let¡n¡l)-2-((3,4,5-tr¡metox¡fen¡l)am¡no)p¡rim¡d¡n-4-¡l) amino)benzamida (0,030 g, 0,059 mmol) en 2 ml de MeOH. Se añadió Pd/C (cat) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de H2 durante 1 h. Después, se pasó la mezcla de reacción a través de un lecho corto de celite, se lavó con metanol. La retirada del disolvente a presión reducida produjo el producto en bruto que se purificó por HPLC prep. automatizada para dar el compuesto del título en forma de un sólido incoloro (0,026 g, 87 %). CL-EM (IEN) calc. para C29H31N5O4 [M+H]+: 514,24; encontrado: 514,20.
E j e m p l o 88 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( 5 - B r o m o - 2 -( 3 , 4 , 5 - t r ¡ m e t o x ¡ f e m l a m m o ) p ¡ r ¡ m ¡ d m - 4 - ¡ l o x ¡ ) - W - m e t ¡ l b e n z a m ¡ d a
Figure imgf000132_0001
Se procesaron 5-bromo-2,4-d¡clorop¡r¡m¡d¡na (0,227 g, 1 mmol), 2-h¡droxi-A/-met¡lbenzam¡da (0,151 g, 1 mmol) 3,4,5-trimetoxianilina (0,183 g, 1 mmol) y disopropiletilamina (0,258 g, 2 mmol) de acuerdo con el método 2 para proporcionar el compuesto deseado en forma de un sólido de color pardo (0,100 g, 20 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 59,41 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,50-8,03 (m, 1H), 7,56 (dd, J = 7,8 Hz, 1,8 Hz, 1H), 7,50 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,32-7,29 (m, 2H), 6,80 (s, 2H), 3,62 (s, 9H), 2,60 (d, J = 4,5 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C21 H21BrN4O5 [M+H]+: 491,07; encontrado: 491,0. HRMS (IEN) calc. para C21H2-iBrN4O5 [M+H]+: 491,0751; encontrado: 491,0761.
E j e m p l o 89 : P r e p a r a c ¡ ó n d e W - M e t ¡ l - 2 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h ¡ d r o q u m o l m - 6 - ¡ l ) a m ¡ n o ) - 5 - f e n ¡ l p ¡ r ¡ m ¡ d ¡ n - 4 -¡ l ) a m ¡ n o ) b e n z a m ¡ d a
Figure imgf000132_0002
A un matraz de dos bocas equipado con un condensador, entrada de nitrógeno y barra de agitación, se le cargó con 2-(5-bromo-2-(3,4,5-tr¡metox¡íen¡lam¡no)p¡r¡m¡d¡n-4-¡lamino)-A/-met¡lbenzam¡da (0,100 g, 0,21 mmol) y paladiotetraquistrifenilfosfina (0,010 g, 0,0084 mmol) en DME seco (5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. A este carbonato potásico (0,056 g, 0,42 mmol) en agua (1 ml), se le añadió seguido de ácido fenil borónico (0,032 g, 0,25 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 12 h, se enfrió y se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3*10 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato sódico anhidro. La evaporación del disolvente a presión reducida y seguido de HPLC de fase inversa proporcionó el compuesto del título. Sólido de color amarillo pálido (0,030 g, 31 %). CL-EM (IEN) calc. para C27H24N6O2 [M+H]+: 465,20; encontrado: 465,15.
E j e m p l o 90 : P r e p a r a c ¡ ó n d e 2 -( 2 -( 3 , 5 - d ¡ m o r f o l ¡ n o f e n ¡ l a m ¡ n o ) - 5 -( t r ¡ f l u o r o m e t ¡ l ) p ¡ r ¡ m ¡ d m - 4 - ¡ l a m m o ) - W -m e t ¡ l b e n z a m ¡ d a
Figure imgf000132_0003
Se procesaron 4-cloro-N-(3,5-d¡morfolinofen¡l)-5-(tr¡fluoromet¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,110 g, 0,25 mmol), 2-amino-A/-metil benzamida y HCl (0,041 g, 0,275 mmol) de acuerdo con el método 3 para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color pardo (0,097 g, 70 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-da): 5 11,48 (s, 1H), 9,60 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,69 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,10 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,24 (s, 2H), 3,63 (s a, 8H), 2,96 (s a, 8H), 2,75 (d, J = 4,7 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C27H30F3N7O3 [M+H]+: 558,24; encontrado: 558,20. HRMS (IEN) calc. para C27H30F3N7O3 [M+H]+: 558,2435; encontrado: 558,2424.
E j e m p l o 91 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - B r o m o - 2 -( ( 3 , 5 - d i m o r f o N n o f e n N ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) a m m o ) - W -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000133_0001
Se procesaron 2-(5-bromo-2-clorop¡r¡m¡d¡n-4-¡lam¡no)-A/-met¡lbenzam¡da (0,071 g, 0,21 mmol) y 3,5-dimorfolinoanilina (0,055 g, 0,21 mmol) de acuerdo con el método 3 para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido de color parduzco (0,081 g, 68 %). CL-EM (IEN) calc. para C26H30BrN7O3 [M+H]+: 568,16; encontrado: 5678,00.
E j e m p l o 92 : P r e p a r a c i ó n d e W - M e t N - 2 -( 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) - 2 -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 -i l o x i ) b e n z a m i d a
Figure imgf000133_0002
Se procesaron 4-cloro-5-(tr¡fluoromet¡l)-A/-(3,4,5-tr¡metox¡fen¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-am¡na (0,1 g, 0,3 mmol), 2-hidroxi-W-metilbenzamida (0,054 g, 0,36 mmol) y disopropiletil amina de acuerdo con el método 4b para proporcionar el compuesto del título. Sólido de color blanco (0,075 g, 76 %). RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6): 510,06 (s a, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,08 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7,62-7,55 (m, 2H), 7,37-7,35 (m, 2H), 6,87 (s, 2H), 3,66 (s, 6H), 3,64 (s, 3H), 2,62 (d, J = 4,6 Hz, 3H). CL-EM (IEN) calc. para C24H26F3N5O4S [M+H]+: 479,15; encontrado: 479,00. HRMS (IEN) calc. para C22H21F3N4O5[M+H]+: 479,1537; encontrado: 479,1541.
E j e m p l o 93 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - h i d r o x i - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000133_0003
Se agitaron salicilato de metilo (8,7 g, 57,2 mmol, 1,0 equiv.) y metilamina (33 % en peso en etanol, 37,37 ml, 300 mmol, 5,25 equiv.) a 0 °C. La mezcla se calentó a 21 °C durante 3 h y después se agitó a esa temperatura durante 14 h. La mezcla se concentró al vacío y después se volvió a cristalizar a partir de MeOH caliente para producir 7,08 g de producto. EM calc. para [CaHgNO2+H]+: 152,07, encontrado 152,16.
E j e m p l o 94 : P r e p a r a c i ó n d e 3 - h i d r o x i - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000133_0004
Se agitaron salicilato de metilo (8,7 g, 57,2 mmol, 1,0 equiv.) y metilamina (33 % en peso en etanol, 12,36 ml, 171,6 mmol, 3,0 equiv.) a 21 °C. La mezcla se calentó a 35 °C durante 14 h. Se añadió un adicional de 6 ml de metilamina en EtOH y el calentamiento se continuó a 50 °C durante 5 h. La mezcla se concentró al vacío y después se purificó por cromatografía ultrarrápida (EtOAc al 10 % en DCM a EtOAc al 100 % en DCM durante un gradiente de 30 min) para producir 6,09 g de producto. EM calc. para [CaHgNO2+H]+: 152,07, encontrado 152,22.
E j e m p l o 95 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - m e r c a p t o - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000134_0001
Se agitaron tiosalicilato de metilo (5,07 g, 30,1 mmol, 1,0 equiv.) y metilamina (33 % en peso en etanol, 19,69 ml, 158 mmol, 5,25 equiv.) a 0 °C. La mezcla se calentó a 21 °C durante 3 h y después se agitó a esa temperatura durante 14 h. La mezcla se concentró al vacío y después se añadió 2-propanol y se enfrió. El sólido resultante se filtró y se recogió para producir 4,56 g del disulfuro. Después, este disulfuro (187 mg, 0,563 mmol, 1,0 equiv.) se disolvió en MeOH (5 ml) y se añadieron virutas de magnesio metálico recién molidas (68 mg, 2,81 mmol, 5,0 equiv.). La mezcla se calentó a 40 °C durante 14 h. La mezcla se filtró a través de Celite con MeOH para producir 92 mg del producto que se usó para la reacción posterior sin purificación adicional. EM calc. para [CaHgNOS+H]+: 168,05, encontrado 168,17.
E j e m p l o 96 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - a m i n o - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000134_0002
Se mezclaron 6-nitro-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (2,53 g, 13,1 mmol, 1,0 equiv.) y paladio sobre carbono (100 mg) en EtOH (40 ml). Se aplicó un globo de gas hidrógeno durante 8 h, después la mezcla se filtró a través de Celite con DCM y se concentró al vacío. El sólido resultante de color pardo (2,02 g) se usó sin purificación adicional. Este compuesto no se ioniza bien, por lo tanto no hay un pico de EM del producto. RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) 5: 9,65 (s, 1H), 6,54 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 6,39 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 6,35 (dd, 1H, J = 2,8, 8,4 Hz), 4,73 (s a, 2H), 2,70 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,33 (t, 2H, J = 7,2 Hz).
E j e m p l o 97 : P r e p a r a c i ó n d e 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - a m i n a
Figure imgf000134_0003
Se mezclaron 5-nitro-1H-pirrolo[2,3-b]piridina (1,0 g, 6,13 mmol, 1,0 equiv.) y paladio sobre carbono (75 mg) en EtOAc (20 ml). Se aplicó un globo de gas hidrógeno durante 18 h, después la mezcla se filtró a través de Celite con DCM y se concentró al vacío. El sólido resultante de color pardo (800 mg) se usó sin purificación adicional. EM calc. para [C7H7Ns+H]+: 134,07, encontrado 134,16.
E j e m p l o 98 : E s q u e m a d e s í n t e s i s g e n e r a l p a r a l a p r e p a r a c i ó n d e p i r i m i d i n a s t r i s u s t i t u i d a s :
Ejemplo 99: Preparación de N-metil-2-((2-(fenilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)oxi)benzamida
Figure imgf000135_0001
Una solución de 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg, 0,461 mmol, 1,0 equiv.), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg, 0,461 mmol, 1,0 equiv.) y N,N-diisopropil etilamina (0,08 ml, 0,461 mmol, 1,0 equiv.) en acetonitrilo (3 ml) se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min. La mezcla se concentró al vacío, después se añadieron anilina (0,042 ml, 0,461 mmol, 1,0 equiv.) y ácido acético (2 ml). Esta mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 min, después se concentró al vacío. Se purificó una fracción del producto en bruto por HPLC de fase inversa para producir el producto (13 mg). EM calc. para ^ - ^ - ^ 3 ^ 0 2 +^+: 389,12, encontrado 389,32.
Ejemplo 100: Preparación de 2-((2-((5-bromo-2-metilfenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida
Figure imgf000135_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 5-bromo-2-metilanilina (86 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 10 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 20 H 6 BrF 3 N 4 O 2 +H]+: 481,05, encontrado 481,26.
Ejemplo 101: Preparación de 2-((2-((5-metoxi-2-metilfenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida
Figure imgf000135_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 5-metoxi-2-metilanilina (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 14 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 21 H-I 9 F 3 N 4 O 3 +HJ+: 433,15, encontrado 433,41.
Ejemplo 102: Preparación de 2-((2-((3-bromo-4-metilfenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida
Figure imgf000135_0004
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 3-bromo-4-metilanilina (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 8 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 2 oHi 6 BrF 3 N 4 O 2 +H]+: 481,05, encontrado 481,26.
Ejemplo 103: Preparación de 2-((2-((2-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida
Figure imgf000136_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2-metoxianilina (57 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 46 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 20 H 17 F 3 N 4 O 3 +H]+: 419,13, encontrado 419,35.
Ejemplo 104: Preparación de 2-((2-((2,5-dimetilfenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida
Figure imgf000136_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2,5-dimetilanilina (56 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 36 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 21 H 1 gF 3 N 4 O 2 +H]+: 417,15, encontrado 417,40.
Ejemplo 105: Preparación de 2-((2-((4-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida y 2-((4-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-ol.
Figure imgf000136_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (150 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (104 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,12 ml) en la primera etapa, seguido de 4-metoxianilina (85 mg) y ácido acético (3 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 10 mg de 2-((2-((4-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida y 7 mg de 2-((4-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-ol después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 20 H 17 F 3 ^ O 3 +H]+: 419,13, encontrado 419,35. Em calc. para [C 12 H 10 F 3 N 3 O 2 +H]+: 286,08, encontrado 286,25.
Ejemplo 106: Preparación de 2-((2-((3,4-dimetilfenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida
Figure imgf000136_0004
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 3,4-dimetilanilina (56 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 13 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C21H-igF3N4O2+H]+: 417,15, encontrado 417,40.
E j e m p l o 107 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 2 - c l o r o - 4 - m e t i l f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - N ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000137_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2-cloro-4-metilanilina (65 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 13 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C20H-i6ClF3N402+H]+: 437,10, encontrado 437,35.
E j e m p l o 108 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 3 , 4 - d i c l o r o f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a y 2 -( ( 3 , 4 - d i c l o r o f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - o l
Figure imgf000137_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 4-metoxianilina (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 27 mg de 2-((2-((3,4-diclorofenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)oxi)-N-metil benzamida y 14 mg de 2-((3,4-diclorofenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-ol después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para ^ - ^ - ^ ^ 3^ 02+^+: 457,04, encontrado 457,28. EM calc. para [C11H6 Cl2F3N30+H]+: 323,99, encontrado 323,70.
E j e m p l o 109 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 2 , 5 - d i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a y 2 -( ( 2 , 5 - d i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - o l
Figure imgf000137_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2,5-dimetoxianilina (71 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 45 mg de 2-((2-((2,5-dimetoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)oxi)-N-metil benzamida y 6 mg de 2-((2,5-dimetoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-ol después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C21H19F3N404+H]+: 449,14, encontrado 449,35. e M calc. para [C14H-mF3N303+H]+: 316,09, observado 315,90
E j e m p l o 110 : P r e p a r a c i ó n d e N - m e t i l - 2 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) b e n z a m i d a
Figure imgf000138_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 28 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H-iaF 3 N 50 3 +H]+: 458,14, encontrado 458,40.
E j e m p l o 111 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( f e n i l a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000138_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (105 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de anilina (43 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 12 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 1 sH 15 BrN 4 O 2 +H]+: 399,05, encontrado 399,29.
E j e m p l o 112 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - m e t i l f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000138_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (105 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 5-bromo-2-metilanilina (86 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 6 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C-igH 16 Br 2 N 4 O 2 +H]+: 492,97, encontrado 492,80.
E j e m p l o 113 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 2 , 3 - d i f l u o r o f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000138_0004
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (69 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2,3-difluoroanilina (59 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 32 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para ^ ■ ^ ■ ^ 5 ^ 0 2 +^+: 425,10, encontrado 425,35.
E j e m p l o 114 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - c l o r o - N 2, N 4- d i f e n i l p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000139_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4,5-tricloropirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (82 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,095 ml) en la primera etapa, seguido de anilina (59 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 5 mg del producto inesperado después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C16H-i3ClN4+H]+: 297,09, encontrado 297,30.
E j e m p l o 115 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 2 , 3 - d i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a y 2 -( ( 2 , 3 - d i m e t o x i f e n M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 4 - o l
Figure imgf000139_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2,3-dimetoxianilina (70 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 15 mg de 2-((2-((2,3-dimetoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida y 6 mg de 2-((2,3-dimetoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-ol después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C21H^F3N4O4+M]+: 449,14, encontrado 449,39. Em calc. para [C13H12F3N O 3+H]+: 316,09, encontrado 316,05.
E j e m p l o 116 : P r e p a r a c i ó n d e N - m e t i l - 2 -( ( 2 -( ( 2 -( m e t i l t i o ) f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) o x i ) b e n z a m i d a y N 2 , N 4- b i s ( 2 -( m e t i l t i o ) f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000139_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 2-(metiltio)anilina (78 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 12 mg de N-metil-2-((2-((2-(metiltio)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)oxi)benzamida y 5 mg de N2,N4-bis(2-(metiltio)fenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C20H17F3N4O2S+H]+: 435,11, encontrado 435,36. EM calc. para [C19H17F3N4S2+H]+: 423,09, encontrado 422,95.
E j e m p l o 117 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 5 - m e t o x i - 2 - m e t i l f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) t i o ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000140_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-mercapto-N-metilbenzamida (92 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 5-metoxi-2-metilanilina (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 18 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 2 -iH-i 9 F 3 N 4 O 2 S+H]+: 449,13, encontrado 449,38.
E j e m p l o 118 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 - m o r f o l i n o f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( ( 2 - m o r f o l i n o f e n i l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 4 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 4 -( ( 2 - m o r f o l m o f e m l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - o l
Figure imgf000140_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-morfolinoanilina (82 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 13 mg de 6-((4-((2-morfolinofenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona, 13 mg de 6-((2-((2-morfolinofenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 9 mg de 4-((2-morfolinofenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ol después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 24 H 23 F 3 N 6 O 2 +H]+: 485,19, encontrado 485,45. EM calc. para [C 24 H 23 F 3 N 6 O 2 +H]+: 485,19, encontrado 485,45. EM calc. para [C 15 H 15 F 3 N 4 O 2 +H]+: 341,12, encontrado 341,32.
E j e m p l o 119 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 3 - m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000140_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 3-metoxianilina (57 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 45 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 21 H 1 sF 3 N 5 O 2 +H]+: 430,15, encontrado 430,43.
E j e m p l o 120 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 -( d i f l u o r o m e t o x i ) f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y N 2, N 4- b i s ( 2 -( d i f l u o r o m e t o x i ) f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y 6 , 6 ' -( ( 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i i l ) b i s ( a z a n e d i i l ) ) b i s ( 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a ) .
Figure imgf000141_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-(difluorometoxi)anilina (73 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 27 mg de 6-((4-((2-(difluorometoxi)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona, 9 mg de N2,N4-bis(2-(difluorometoxi)fenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 14 mg de 6,6-((5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diil)bis(azanediil))bis(3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona) después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 21 H-, 6 F 5 N 5 O 2 +H]+: 466,13, encontrado 466,39. EM calc. para [C-igH 13 F 7 N 4 O 2 +H]+: 463,10, encontrado 463,34. EM calc. para [C 23 H-i 9 F 3 N 6 O 2 +H]+: 469,16, encontrado 469,41.
E j e m p l o 121 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 3 -( b e n c i l o x i ) f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000141_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 3-(benciloxi)anilina (92 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 57 mg de producto después de la HpLC de fase inversa. EM calc. para [C 2 /H 22 F 3 N 5 O 2 +H]+: 506,18, encontrado 506,47.
E j e m p l o 122 : P r e p a r a c i ó n d e N - m e t i l - 3 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) b e n z a m i d a
Figure imgf000141_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 3-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 18 mg de producto después de la HpLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H-iaF 3 N 5 O 3 +H]+: 458,14, encontrado 458,40.
E j e m p l o 123 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 - m e t o x i - 4 - m o r f o l i n o f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) -3 .4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( ( 2 - m e t o x i - 4 - m o r f o l i n o f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) -3 .4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000142_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2-metoxi-4-morfolinoanilina (96 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 20 mg de 6-((4-((2-metoxi-4-morfolinofenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 2,7 mg de 6-((2-((2-metoxi-4-morfolinofenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 25 H 25 F 3 N 6 O 3 +H]+: 515,20, encontrado 515,52. EM calc. para [C 25 H 25 F 3 NaO 3 +H]+: 515,52, encontrado 515,52.
E j e m p l o 124 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 4 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y N 2, N 4 - b i s ( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a .
Figure imgf000142_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 9 mg de una mezcla de 6-((4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilamino)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 6-((2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 10 mg de N2,N4-bis(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 21 H-, 6 F 3 N 5 O 3 +H]+: 444,13, encontrado 444,38. EM calc. para [C-igH 13 F 3 N 4 O 4 +H]+: 419,10, encontrado 419,35.
E j e m p l o 1 2 5 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - ( ( 4 - ( ( 3 , 4 - d i m e t i l f e n i l ) a m i n o ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000142_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 3,4-dimetilanilina (47 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 31 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H 20 F 3 N 5 O+H]+: 428,17, encontrado 428,44.
E j e m p l o 1 2 6 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - ( ( 4 - ( n a f t a l e n - 1 - i l a m i n o ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y N 2, N 4-d i ( n a f t a l e n - 1 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000143_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), naftalen-1-amina (56 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 22 mg de 6-((4-(naftalen-1-ilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 4,5 mg de N2,N4-di(naftalen-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C24H-iaF3N5O+H]+: 450,15, encontrado 450,38. EM calc. para [C25H-i7F3N4+H]+: 431,15, encontrado 431,35.
E j e m p l o 127 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 5 , 6 , 7 , 8 - t e t r a h i d r o n a f t a l e n - 1 - i l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 -i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( ( 5 , 6 , 7 , 8 - t e t r a h i d r o n a f t a l e n - 1 - i l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000143_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-amina (58 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 37 mg de una mezcla de 6-((4-((5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 6-((2-((5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona de la Hp Lc de fase inversa. EM calc. para [C24H22FaN5O+H]+: 454,19, encontrado 454,43. EM calc. para [C24H22F3N5O+H]+: 454,19, encontrado 4454,43.
E j e m p l o 128 : P r e p a r a c i ó n d e N - m e t i l - 3 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a
Figure imgf000143_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 3-amino-N metilbenzamida (58 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 110 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H-igF 3 N 6 O 2 +H]+: 457,16, encontrado 457,41.
E j e m p l o 129 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - i n d e n - 5 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000144_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 2,3-dihidro-1H-inden-5-amina (52 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 7 mg de producto después de la HpLC de fase inversa. EM calc. para [C 23 H 20 F 3 N 5 O+H]+: 440,17, encontrado 440,40.
E j e m p l o 130 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - i n d e n - 2 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( ( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - i n d e n - 2 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a .
Figure imgf000144_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 2,3-dihidro-1H-inden-2-amina (52 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 8 mg de 6-((4-((2,3-dihidro-1H-inden-2-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 9 mg de 6-((2-((2,3-dihidro-1H-inden-2-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. LRMS calc. para [C 23 H 20 F 3 N 5 O+H]+: 440,17, encontrado 440,40. EM calc. para [C 23 H 20 F 3 N 50 +H]+: 440,40, encontrado 440,40.
E j e m p l o 131 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i c l o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( c i c l o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000144_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), ciclopropanamina (22 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 12 mg de 6-((4-(ciclopropilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 15 mg de 6-((2-(ciclopropilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 17 H-i 6 F 3 N 5 O+H]+: 364,14, encontrado 364,36. EM calc. para [C-i/H-^NgO+Hr: 364,14, encontrado 364,36.
E j e m p l o 132 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 4 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u m o M n - 6 - N ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m -4 - i l ) a m i n o ) f e n i l ) a c e t a m i d a
Figure imgf000145_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), N-(4-aminofenil)acetamida (59 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 62 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H-igF 3 N 6 O 2 +H]+: 457,16, encontrado 457,41.
E j e m p l o 133 : P r e p a r a c i ó n d e N 2-( 2 , 3 - d i h i d r o b e n z o [ b ] [ 1 , 4 ] d i o x i n - 6 - i l ) - N 4-( 3 - m e t o x i f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000145_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 3-metoxianilina (48 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-amina (59 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 31 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 20 Hi 7 F 3 N 4 O 3 +H]+: 419,l3, encontrado 419,39.
E j e m p l o 134 : P r e p a r a c i ó n d e 6 , 6 ' -( ( 5 - c l o r o p i r i m i d m - 2 , 4 - d i N ) b i s ( a z a n e d i M ) ) b i s ( 3 , 4 - d i h i d r o q u m o N n - 2 ( 1 H ) - o n a )
Figure imgf000145_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (46 mg), 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (41 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,044 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (41 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. El sólido en bruto se lavó con 10 ml cada uno de acetonitrilo, acetona, diclorometano y acetato de etilo para dar 64 mg de producto semipuro que se lavó adicionalmente con 10 ml de metanol para producir 46 mg de producto. EM calc. para [C 22 H 19 ClN 6 O 2 +H]+: 435,13, encontrado 435,43.
E j e m p l o 135 : P r e p a r a c i ó n d e 6 , 6 ' -( ( 5 - m e t o x i p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i i l ) b i s ( a z a n e d i i l ) ) b i s ( 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a )
Figure imgf000146_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (46 mg), 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (41 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (41 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. El sólido en bruto se lavó con 10 ml de diclorometano para dar 11 mg de producto puro. Se recuperaron otros 11 mg de producto después de la purificación por HPLC de fase inversa del filtrado anterior. EM calc. para [C 23 H 22 N 6 O 3 +H]+: 431,18, encontrado 431,42.
E j e m p l o 136 : P r e p a r a c i ó n d e N 2-( 3 - c l o r o - 4 -( t r i f l u o r o m e t o x i ) f e n i l ) - N 4-( 3 - m e t o x i f e m l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m -2 , 4 - d i a m i n a y N 4-( 3 - c l o r o - 4 -( t r i f l u o r o m e t o x i ) f e n i l ) - N 2-( 3 - m e t o x i f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000146_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 3-metoxianilina (48 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 3-cloro-4-(trifluorometoxi)anilina (83 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 26 mg de una mezcla de N2-(3-cloro-4-(trifluorometoxi)fenil)-N4-(3-metoxifenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N4-(3-cloro-4-(trifluorometoxi)fenil)-N2-(3-metoxifenil)-5-(trifuorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 19 H-i 3 ClF 6 N 4 O 2 +H]+: 479,07, encontrado 479,35. EM calc. para [C 19 H-, 3 ClF 6 N 4 O 2 +H]+: 479,07, encontrado 479,35.
E j e m p l o 137 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 4 -( ( 3 - m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) n a f t a l e n - 2 - o l y 3 -( ( 2 -( ( 3 - m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) n a f t a l e n - 2 - o l
Figure imgf000146_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), 3-metoxianilina (48 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 3-aminonaftalen-2-ol (62 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 25 mg de una mezcla de 3-((4-((3-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)naftalen-2-ol y 3-((2-((3-metoxifenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)naftalen-2-ol después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H-i 7 F 3 N 4 O 2 +H]+: 427,14, encontrado 427,44. EM calc. para ^ H i/F a N ^ H ]* : 427,14, encontrado 427,44.
E j e m p l o 138 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 -i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a y 3 -( ( 2 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) b e n z a m i d a
Figure imgf000147_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 3-aminobenzamida (53 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 34 mg de una mezcla de 3-((4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)benzamida y 3-((2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)benzamida después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 19 H 14 FsN 5 O 3 +H]+: 418,11, encontrado 418,36. EM calc. para [C^H^sNaOs+HF: 418,11, encontrado 418,36.
E j e m p l o 139 : P r e p a r a c i ó n d e N 2- 4 -( 1 H - p i r r o l - 1 - i l ) f e n i l ) - N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n -2 , 4 - d i a m i n a y N 4-( 4 -( 1 H - p i r r o l - 1 - i l ) f e n i l ) - N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000147_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 4-(1H-pirrol-1-il)anilina (62 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 22 mg de una mezcla de N2-(4-(1H-pirrol-1 -il)fenil)-N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N4-(4-(1H-pirrol-1-il)fenil)-N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 22 H 16 F 3 N 5 O 2 +H]+: 440,13, encontrado 440,40. EM calc. para [C 22 H 16 F 3 N 5 O 2 +H]+: 440,13, encontrado 440,40.
E j e m p l o 140 : P r e p a r a c i ó n d e N 4-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2-( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - m d e n - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 - d i a m m a y N 2- b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 4-( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - m d e n - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a .
Figure imgf000148_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 2,3-dihidro-1H-inden-5-amina (52 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 7 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(2,3-dihidro-1H-inden-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(2,3-dihidro-1H-inden-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C2-iH-i7F3N4O2+H]+: 415,14, encontrado 415,41. EM calc. para [C2-iH-i7F3N4O2+H]+: 415,14, encontrado 415,41.
E j e m p l o 141 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 2-( 2 - f l u o r o - 3 -( t r i f l u o r o m e t i l ) f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 4-( 2 - f l u o r o - 3 -( t r i f l u o r o m e t N ) f e n M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000148_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 2-fluoro-3-(trifluorometil)anilina (70 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 14 mg de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 6 mg de N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C1gHnF7N4O2+H]+: 461,08, encontrado 461,38. EM calc. para [C1gHnF7N4O2+H]+: 461,08, encontrado 461,38.
E j e m p l o 142 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 5 - b r o m o - 4 -( ( 3 - m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000148_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (93 mg), 3-metoxianilina (50 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,071 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (66 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 15 mg de producto después de la HPLC de fase inversa. e M calc. para [C20H1sBrN5O2+H]+: 440,07, encontrado 440,33.
E j e m p l o 143 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 5 - c l o r o - 4 -( ( 3 - m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a y 5 - c l o r o - N 2, N 4 - b i s ( 3 - m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000149_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4,5-tridoropirimidina (74 mg), 3-metoxianilina (50 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,077 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (59 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 18 mg de 6-((5-cloro-4-((3-metoxifenil)amino)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 1,2 mg de 5-cloro-N 2 ,N 4 -bis(3-metoxifenil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 20 H 1 sClN 5 O 2 +H]+: 396,12, encontrado 396,34. EM calc. para [C 1 sH 17 ClN 4 O 2 +H]+: 357,11, encontrado 357,33.
E j e m p l o 144 : P r e p a r a c i ó n d e N 4-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2-( 4 - m e t o x i f e n M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4-( 4 - m e t o x i f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000149_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 4-metoxianilina (48 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 29 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N 2 -(4-metoxifenil)-5-(trifluorometil) pirimidin-2,4-diamina y N 2 -(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N 4 -(4-metoxifenil)-5-(trifluoro metil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 19 H 15 FaN 4 O 3 +H]+: 405,12, encontrado 405,36. EM calc. para ^ - ^ - ^ 3 ^ 0 3 +^+: 405,12, encontrado 405,36.
E j e m p l o 145 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 2-( 5 - m e t o x i - 2 - m e t i l f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n -2 , 4 - d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4 -( 5 - m e t o x i - 2 - m e t i l f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000149_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 5-metoxi-2-metilanilina (53 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 25 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N 2 -(5-metoxi-2-metilfenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N 2 -(benzo[d][1,3]dioxol-5- il)-N4-(5-metoxi-2-metilfenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C2oHi7F3N4O3+H]+: 419,13, encontrado 419,39. EM calc. para [C2oHi7F3N4O3+H]+: 419,13, encontrado 419,39.
E j e m p l o 146 : P r e p a r a c i ó n d e N 4-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2-( 3 , 4 - d i m e t N f e n N ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2- ( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4- ( 3 , 4 - d i m e t i l f e n i l ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a .
Figure imgf000150_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 3,4-dimetilanilina (47 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 9 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(3,4-dimetilfenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(3,4-dimetilfenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C20H17FaN4O2+H]+: 403,14, encontrado 403,37.
E j e m p l o 147 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2-( 2 , 3 - d i c l o r o f e n M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4-( 2 , 3 - d i c l o r o f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000150_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 2,3-dicloroanilina (63 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 12 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(2,3-diclorofenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(2,3-diclorofenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C18HnCl2F3N4O2+H]+: 443,03, encontrado 443,28. EM calc. para [C1bHh CI2F3N4O2+H]+: 443,03, encontrado 443,28.
E j e m p l o 148 : P r e p a r a c i ó n d e N 4-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - N ) - N 2-( 3 - c l o r o - 4 - f l u o r o f e n M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m -2 , 4 - d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4 -( 3 - c l o r o - 4 - f l u o r o f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000150_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 3-cloro-4-fluoroanilina (57 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 36 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(3-cloro-4-fluorofenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(3-cloro-4-fluorofenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C1bHh CIF4N402+H]+: 427,06, encontrado 427,30. EM calc. para [C1bHh CIF4N402+H]+: 427,06, encontrado 427,30.
E j e m p l o 1 4 9 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - ( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2- ( 3 - f e n o x i f e n M ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4-( 3 - f e n o x i f e n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000151_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 3-fenoxianilina (73 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se recuperaron 36 mg de una mezcla de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(3-fenoxifenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(3-fenoxifenil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C24H17FaN4O3+H]+: 467,13, encontrado 467,41. EM calc. para ^ H -i/F a ^O a H r: 467,13, encontrado 467,41.
E j e m p l o 150 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i d o b u t M a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( c i d o b u t i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000151_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (70 mg), ciclobutanamina (23 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,056 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (52 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 12 mg de 6-((4-(ciclobutilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 18 mg de 6-((2-(ciclobutilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C18H1sF3N5O+H]+: 378,15, encontrado 378,35.
E j e m p l o 151 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 - m e t o x i e t M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( ( 2 - m e t o x i e t M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 4 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000151_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (70 mg), 2-metoxietan-1-amina (24 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,062 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (52 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 11 mg de 6-((4-((2-metoxietil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2( 1H)-ona y 20 mg de 6-((2-((2-metoxietil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. LRMS calc. para [C17H1sF3N5O2+H]+: 382,15, encontrado 382,33. e M calc. para [C17H1sF3N5O2+H]+: 382,15, encontrado 382,33.
E j e m p l o 152 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - d c l o p r o p N - N 2-( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d m - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2- c i c l o p r o p i l - N 4-( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000152_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), ciclopropanamina (22 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (52 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 13 mg de N4-ciclopropil-N2-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 9 mg de N2-ciclopropil-N4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. e M calc. para [C15H13F3N6+H]+: 335,12, encontrado 335,25. EM calc. para [C-i5H-i3F3N6+H]+: 335,12, encontrado 335,25.
E j e m p l o 153 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - N 2-( 1 H - i n d o l - 5 - i l ) - N 4 -( 3 -( m e t i l s u l f o n i l ) b e n c i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000152_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (150 mg), (3-(metilsulfonil)fenil)metanamina, sal HCl (50 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,229 ml) en la primera etapa, seguido de 1H-indol-5-amina (87 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 41 mg de producto después de cromatografía ultrarrápida usando fase inversa C18 gel de sílice. EM calc. para [C20H1sBrN5O2S+H]+: 472,04, encontrado 472,25.
E j e m p l o 154 : P r e p a r a c i ó n d e - 5 - b r o m o - N 2-( 1 H - i n d o l - 5 - i l ) - N 4 -( p i r i d i n - 2 - i l ) p i r i m i d i n a 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000152_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (150 mg), piridin-2-amina (62 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,117 ml) en la primera etapa, seguido de 1H-indol-5-amina (87 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 14 mg de producto después de cromatografía ultrarrápida usando fase inversa C18 gel de sílice. EM calc. para [C17H13BrN6+H]+: 381,05, encontrado 381,19.
E j e m p l o 155 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 5 - b r o m o - 4 -( p i r i d i n - 2 - i l a m i n o ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) -o n a
Figure imgf000153_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-didoropirimidina (150 mg), piridin-2-amina (62 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,117 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (107 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 12 mg de producto después de cromatografía ultrarrápida usando fase inversa C18 gel de sílice. EM calc. para [C1sH15BrN6O+H]+: 411,06, encontrado 411,22.
E j e m p l o 156 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 5 - b r o m o - 4 -( ( 6 - m e t o x i p i r i d m - 3 - N ) a m m o ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000153_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (150 mg), 6-metoxipiridin-3-amina (82 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,117 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (107 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 8 mg de producto después de cromatografía ultrarrápida usando fase inversa C18 gel de sílice. Em calc. para [C1gH-i7BrN6O2+H]+: 441,07, encontrado 441,15.
E j e m p l o 1 5 7 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - ( ( 4 - ( f e n i l a m i n o ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( f e n i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), anilina (36 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (64 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 23 mg de una mezcla de 6-((4-(fenilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 6-((2-(fenilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C20H-i6F3N5O+H]+: 400,14, encontrado 400,36. Em calc. para [C20H-i6F3N5O+H]+: 400,14, encontrado 400,36.
E j e m p l o 158 : P r e p a r a c i ó n d e N 4- c i d o p r o p N - N 2-( 2 , 3 - d i h i d r o b e n z o [ b ] [ 1 , 4 ] d i o x m - 6 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m -2 , 4 - d i a m i n a y N 2- c i c l o p r o p i l - N 4 -( 2 , 3 - d i h i d r o b e n z o [ b ] [ 1 , 4 ] d i o x i n - 6 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000154_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), ciclopropanamina (22 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-amina (59 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 15 mg de N4-ciclopropil-N2-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 8 mg de N2-ciclopropil-N4-(2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C-i6H-i5F3N4O2+H]+: 353,12, encontrado 353,31. EM calc. para [C-i6H-i5F3N4O2+H]+: 353,12, encontrado 353,31.
E j e m p l o 159 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 5 - b r o m o - 4 -( c i c l o p r o p i l a m i n o ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) -o n a
Figure imgf000154_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (80 mg), ciclopropanamina (26 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,092 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (57 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. se aislaron 10 mg de producto por filtración del sólido en bruto y aclarando con acetonitrilo. EM calc. para [C16H16BrN5O+H]+: 374,06, encontrado 374,26.
E j e m p l o 160 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( d d o p e n t N a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( d d o p e n t M a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 4 - N ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000154_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (120 mg), ciclopentanamina (47 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,096 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (90 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 65 mg de 6-((4-(ciclopentilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 86 mg de 6-((2-(ciclopentilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [Ci 9 H 20 F 3 N 50 +H]+: 392,17, encontrado 392,40. EM calc. para [Ci 9 H 2 oF 3 N 5 o+H]+: 392,17, encontrado 392,35.
E j e m p l o 161 : P r e p a r a c i ó n d e N 4- d d o b u t M - N 2-( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - N ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2- d d o b u t N - N 4-( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000155_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (120 mg), ciclobutanamina (49 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,120 ml) en la primera etapa, seguido de 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (92 mg) y ácido acético (3 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 50 mg de una N 4 -ciclobutil-N 2 -(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 60 mg de una mezcla de N 2 -ciclobutil-N 4 -(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y su regioisómero (relación 60:40) después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 16 H 15 F 3 N 6 +HF: 349,14, encontrado 349,35. EM calc. para [C 16 H 15 F 3 N 6 +H]+: 349,14, encontrado 349,25.
E j e m p l o 162 : E s q u e m a d e s í n t e s i s g e n e r a l p a r a l a p r e p a r a c i ó n d e p i r i m i d i n a s t r i s u s t i u i d a s c o m o s e d e s c r i b e a c o n t i n u a c i ó n :
Figure imgf000155_0002
E j e m p l o 163 : P r e p a r a c i ó n d e N 4-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 2-( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - i n d e n - 2 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4-( 2 , 3 - d i h i d r o - 1 H - i n d e n - 2 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000155_0003
Una solución de 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg, 0,392 mmol, 1,0 equiv.), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg, 0,392 mmol, 1,0 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml, 0,392 mmol, 1,0 equiv.) en acetonitrilo (3 ml) se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min. Después, se añadieron 2,3-dihidro-1H-inden-2-amina (52 mg, 0,392 mmol, 1,0 equiv.) y N,N-diisopropiletil amina (0,068 ml, 0,392 mmol, 1,0 equiv.). Esta mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min, después se concentró al vacío. Una fracción de producto en bruto se purificó por HPLC de fase inversa para producir 5,3 mg de N 4 -(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N 2 -(2,3-dihidro-1H-inden-2-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 3,5 mg de N 2 -(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N 4 -(2,3-dihidro-1H-inden-2-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina. EM calc. para [C 21 H^F 3 N 4 O 2 +H]+: 415,14, encontrado 415,34. EM calc. para [C 21 H 17 F 3 N 4 O 2 +H]+: 415,14, encontrado 415,34.
E j e m p l o 164 : P r e p a r a c i ó n d e N -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 2 -( p i r r o l i d i n - 1 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a y N -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 4 -( p i r r o l i d i n - 1 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000156_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 163 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de pirrolidina (28 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 2 mg de N-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-2-(pirrolidin-1-il)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-amina y 1,4 mg de N-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-4-(pirrolidin-1-il)-5-(trifluoro metil)pirimidin-2-amina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 16 H 15 F 3 N 4 O 2 +H]+: 353,12, encontrado 353,33. EM calc. para [C 16 H^F 3 N 4 O 2 +H]+: 353,12, encontrado 353,34.
E j e m p l o 165 : P r e p a r a c i ó n d e N 4-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000156_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 163 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de amoniaco (0,224 ml de una solución 7 M en MeOH) y N,N-diisopropil etilamina (0,068 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 15 mg de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 15 mg de N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. Em calc. para [C 12 HgFaN 4 O 2 +H]+: 299,08, encontrado 299,28. EM calc. para [C 12 HgF 3 N 4 O 2 +H]+: 299,08, encontrado 299,28.
E j e m p l o 166 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( a z e t i d i n - 1 - i l ) - N -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a y 4 -( a z e t i d m - 1 - M ) - N -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - a m m a
Figure imgf000156_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 163 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de azetidina, sal HCl (37 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,137 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 2,5 mg de 2-(azetidin-1-il)-N-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina y 1,4 mg de 4-(azetidin-1-il)-N-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-amina se recuperó después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [C 15 H 13 F 3 N 4 O 2 +H]+: 339,11, encontrado 339,29. EM calc. para [C 15 H-i 3 F 3 N 4 O 2 +H]+: 339,11, encontrado 339,29.
E j e m p l o 167 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 2-( c i c l o p r o p i l m e t i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a y N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4-( c i c l o p r o p i l m e t i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a .
Figure imgf000157_0001
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 163 usando 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (54 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de ciclopropilmetanamina (56 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 10 mg de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-(ciclopropilmetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 10 mg de N2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N4-(ciclopropilmetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. Em calc. para [C16H15F3N4¿ 2+H]+: 353,12, encontrado 353,32. EM calc. para [C16H-i5F3N4O2+H]+: 353,12, encontrado 353,32.
E j e m p l o 168 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2- c i d o b u t N - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 - d i a m m a , N 2-( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 4 - c i d o b u t N - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d m - 2 , 4 - d i a m m a y N 2 , N 4- d i c i c l o b u t i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000157_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 163 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (85 mg), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (48 mg, 0,89 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la primera etapa, seguido de ciclobutanamina (56 mg, 2 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,068 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 13 mg de N4-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N2-ciclobutil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina, 18 mg de N2-(benzo[d] [1,3]dioxol-5-il)-N4-ciclobutil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 4,5 mg de N2,N4-diciclobutil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. LRMS calc. para [C16H15F3N4Ü2+H]+: 353,12, encontrado 353,32. EM calc. para [C16H15F3N4Ü2+H]+: 353,12, encontrado 353,32. EM calc. para [C13H17F3N4+H]+: 287,15, encontrado 287,32.
E j e m p l o 1 69 : P r e p a r a c i ó n d e N 2, N 4 - d i c i c l o p r o p i l - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - diamina
Figure imgf000157_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 163 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (60 mg), ciclopropanamina (16 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,035 ml) en la primera etapa, seguido de ciclopropanamina (16 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,035 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 29 mg de N2,N4-diciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la HPLC de fase inversa. EM calc. para [CnH13F3N4+H]+: 259,12, encontrado 259,24.
E j e m p l o 1 7 0 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - ( ( 5 - m e t o x i - 2 - m e t i l f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000158_0001
Una solución de 5-bromo-2,4-didoropirimidina (53 mg, 0,232 mmol, 1,0 equiv.), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (35 mg, 0,232 mmol, 1,0 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,048 ml, 0,276 mmol, 1,2 equiv.) en 1-butanol (3 ml) se agitó a 0 °C durante 20 min, después a 21 °C durante 16 h. La mezcla se concentró al vacío, después se añadieron 5-metoxi-2-metilanilina (32 mg, 0,232 mmol, 1,0 equiv.), cloruro de cinc (solución 1 M en éter, 0,232 ml, 0,232 mmol, 1 equiv.) y ácido acético (2 ml). Esta mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 min, después se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por HPLC de fase inversa para producir 8 mg de 2-((5-bromo-2-((5-metoxi-2-metilfenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida. EM calc. para [C 20 H-igBrN 4 O 3 +H]+: 443,07, encontrado 443,35.
E j e m p l o 171 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a y N -( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) - 2 - h i d r o x i - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000158_0002
Una solución de 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (1,809 g, 7,94 mmol, 1,0 equiv.), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (1,2 g, 7.94 mmol, 1,0 equiv.), polvo de cobre metálico (50 mg, 0,794 mmol, 0,1 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (1,383 ml, 7.94 mmol, 1,0 equiv.) en DMF (10 ml) se calentó a 50 °C durante 2 h. Se añadió EtOAc (100 ml) y se lavó con salmuera (4 x 50 ml), después agua (3 x 50 ml), los orgánicos se secaron sobre sulfato sódico y se concentraron al vacío para dar 2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida. Las cantidades de reactivo se calcularon para la siguiente etapa asumiendo un rendimiento del 80 % del producto intermedio. A continuación, al intermedio en bruto en 1,2-DCE (15 ml) y t-butanol (15 ml), se le añadió cloruro de cinc (1,05 g, 7,71 mmol, 1,2 equiv.). Esta mezcla se sonicó para promover la solubilidad de los reactivos. Se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (1,177 g, 6,42 mmol, 1,0 equiv.) y trietilamina (1,074 ml, 7,71 mmol, 1,2 equiv.) y la mezcla se calentó a 45 °C durante 7 h, después se concentró al vacío. Al producto en bruto se le añadió DCM (300 ml) y se lavó con agua (1 x 50 ml) y salmuera (6 x 30 ml), se secó sobre sulfato sódico y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por C18 cromatografía ultrarrápida de fase inversa (gradiente de agua/MeCN, MeCN del 22 % al 44 % durante 40 min) para producir 560 mg de 2-((5-bromo-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida y 64 mg de N-(5-bromo-2-((3,4,5-trimetoxifenil) amino)pirimidin-4-il)-2-hidroxi-N-metilbenzamida. EM calc. para [C 2 -iH 2 -iBrN 4 O 5 +H]+: 489,08, encontrado 489,37.
E j e m p l o 172 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - N -( 2 - f l u o r o - 3 -( t r i f l u o r o m e t i l ) f e n i l ) - 4 - m e t o x i p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000158_0003
Una solución de 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (105 mg, 0,461 mmol, 1,0 equiv.), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (70 mg, 0,461 mmol, 1,0 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,096 ml, 0,553 mmol, 1,2 equiv.) en 1-butanol (3 ml) se agitó a 0 °C durante 20 min, después a 21 °C durante 16 h. La mezcla se concentró al vacío, después se añadieron 2-fluoro-3-(trifluorometil)anilina (82 mg, 0,461 mmol, 1,0 equiv.), cloruro de cinc (solución 1 M en éter, 0,461 ml, 0,461 mmol, 1 equiv.) y ácido acético (2 ml). Esta mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 min, después se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por HPLC de fase inversa (eluyente de agua/MeOH) para producir 6 mg de 5-bromo-N-(2-fluoro-3-(trifluorometil)fenil)-4-metoxipirimidin-2-amina. EM calc. para [C -^ ^ B ^ ^ O H ^ : 365,99, encontrado 365,25.
E j e m p l o 173 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 - b u t o x i - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000159_0001
Una solución de 5-bromo-2,4-didoropirimidina (170 mg, 0,748 mmol, 1,0 equiv.), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (113 mg, 0,748 mmol, 1,0 equiv.) y N,N-diisopropiletilamina (0,130 ml, 0,748 mmol, 1,0 equiv.) en 1-butanol (6 ml) se agitó a 21 °C durante 22 h. Después, se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (137 mg, 0,748 mmol, 1,0 equiv.), cloruro de cinc (solución 1 M en éter, 0,748 ml, 0,748 mmol, 1 equiv.). Esta mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min, después se concentró al vacío. El sólido en bruto de color blanco se filtró y se lavó con MeCN (20 ml) para producir 80 mg de 2-((5-bromo-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida. EM calc. para [C 17 H 22 BrNaO 4 +H]+: 412,09, encontrado 412,32.
E j e m p l o 174 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d m - 5 - i l ) p i r i m i d m - 2 , 4 - d i a m m a
Figure imgf000159_0002
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (200 mg), ciclopropanamina (50 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,153 ml) en la primera etapa, seguido de 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (117 mg) y ácido acético (4 ml) en la segunda etapa. se aislaron 54 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-MH 13 BrN 6 +H]+: 345,05, encontrado 344,80.
E j e m p l o 175 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 - c i c l o b u t o x i - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m - 2 ( 1 H ) -o n a
Figure imgf000159_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), ciclobutanol (33 mg) y N,N-diisopropiletilamina ( 0 ,080 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (75 mg) y ácido acético (3 ml) en la segunda etapa. Se aislaron 14 mg de 6-((4-ciclobutoxi-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-iaH 17 F 3 N 4 O 2 +H]+: 379,14, encontrado 379,10.
E j e m p l o 176 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 4 - c l o r o - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) - 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - a m i n a y N -( 2 -c l o r o - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 4 - i l ) - 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - a m i n a
Figure imgf000160_0001
A 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,4 g, 1,844 mmol) en diclorometano (5 ml) y t-Butanol (5,00 ml) a -10 °C en una atmósfera de nitrógeno, se le añadió cloruro de cinc (II) (0,502 g, 3,69 mmol). Se mantuvo de -10 a 0 °C durante 1 h. Después, se añadieron 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,245 g, 1,844 mmol) y trietilamina (0,283 ml, 2,028 mmol). Se dejó que baño de refrigeración se calentase a 21 °C. Se concentró para retirar DCM, después el sólido se filtró y se lavó con agua. Se aislaron 620 mg de una mezcla 70:30 de isómeros (N-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina principal). EM calc. para [C-^HyClFsNs+H]*: 314,04, encontrado 313,80.
E j e m p l o 177 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d m - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000160_0002
Se mezclaron N-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,100 g, 0,319 mmol, contiene el 30% del regioisómero), benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (0,044 g, 0,319 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,111 ml, 0,638 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 30 minutos y después se concentró. Se aislaron 5 mg del producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-igH13F3N6O2+H]+: 415,12, encontrado 415,20.
E j e m p l o 178 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 , 2 - d i f l u o r o b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 -i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( ( 2 , 2 - d i f t u o r o b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o t - 5 - y t ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t h y t ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000160_0003
Mismo procedimiento como en el Ejemplo 99 usando 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (100 mg), 2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-amina (80 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,08 ml) en la primera etapa, seguido de 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (60 mg) y ácido acético (2 ml) en la segunda etapa. Se recuperaron 24 mg de 6-((4-((2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 94 mg de 6-((2-((2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C21H-mF5N503+H]+: 480,11, encontrado 480,35.
E j e m p l o 179 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( 2 - m e t o x i e t i l ) - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a
Figure imgf000161_0001
Se mezclaron N-(4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,100 g, 0,319 mmol, contiene 30 % del regioisómero), 2-metoxietan-1-amina (24 mg) y N,N-diisopropiletilamina (0,111 ml) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 13 mg de N4-(2-metoxietil)-N2-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). e M calc. para [C-isH-isFaNaO+H]*: 353,14, encontrado 353,25.
E j e m p l o 180 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( 2 - m e t o x i e t i l ) - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a
Figure imgf000161_0002
Se mezclaron 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,100 g, 0,461 mmol), 2,3-dihidro-1H-inden-2-ol (0,065 g, 0,484 mmol) e hidruro sódico (0,028 g, 0,691 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos. Se concentró y después se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,075 g, 0,461 mmol) y ácido acético (0,527 ml, 9,22 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 15 mg de 6-((4-((2,3-dihidro-1H-inden-2-y l)oxi )-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 9 mg de 6-((2-((2,3-dihidro-1H-inden-2-il)oxi)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2( 1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C23H19FsN4O2+H]+: 441,16, encontrado 441,15.
E j e m p l o 181 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - f e n i l - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 4 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000161_0003
Se mezclaron N-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,100 g, 0,319 mmol, contiene 30 % del regioisómero), anilina (0,029 ml, 0,319 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,111 ml, 0,638 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 minutos y después se concentró. Para degradar el regioisómero del material de partida secundario sin reaccionar, se añadió amoníaco (455 ml, 7 M en MeOH) y la mezcla se calentó en el microondas a 120 °C durante 20 minutos. Se recuperaron 19 mg de N4-fenil-N2-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 15 mg de N4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C1sH13F3N6+H]+: 371,13, encontrado 371,10. EM calc. para [C-i2HgF3N6+H]+: 295,09, encontrado 294,85.
E j e m p l o 182 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - m e t i l - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 2 - m e t i l - N 4 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000162_0001
Se mezclaron N-(4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,100 g, 0,319 mmol, contiene 30 % del regioisómero) y metanamina (0,119 ml, 0,956 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 20 mg de N4-metil-N2-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 11 mg de N2-metil-N4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 13 H 11 FaN 6 +H]+: 309,11, encontrado 308,95.
E j e m p l o 183 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( 2 - m e t N a z i r i d m - 1 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 4 -( ( 2 - c l o r o p r o p M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 4 -( ( 1 - d o r o p r o p a n - 2 - N ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000162_0002
Se mezclaron 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,100 g, 0,461 mmol), 2-metilaziridina (0,033 ml, 0,461 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,060 g, 0,461 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 70 °C durante 10 minutos. Se concentró y se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,071 g, 0,438 mmol) y ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 16 mg de 6-((4-(2-metilaziridin-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona, 10 mg de 6-((4-((2-cloropropil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 12 mg de 6-((4-((1-cloropropan-2-il)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 17 H 16 F 3 N 5 O+H]+: 364,14, encontrado 364,05. EM calc. para [C-^H-^ClFaNsO+H^: 400,12, encontrado 400,10.
E j e m p l o 184 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( m e t M ( f e m l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 -( m e t i l ( f e n i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000162_0003
Se mezclaron 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,100 g, 0,461 mmol), N-metilanilina (0,050 ml, 0,461 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,080 ml, 0,461 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 90 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,075 g, 0,461 mmol) y ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 48 mg de 6-((4-(metil(fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidro quinolin-2(1H)-ona y 30 mg de 6-((2-(metil(fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 2 iH i 8 F 3 N 5 O+H]+: 414,16, encontrado 414,35.
E j e m p l o 185 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 1 H - m d a z o l - 5 - N ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000163_0001
Se mezclaron 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,100 g, 0,461 mmol), 1H-indazol-5-amina (0,061 g, 0,461 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,080 ml, 0,461 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 90 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,075 g, 0,461 mmol) y ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 30 mg de 6-((4-((1H-indazol-5-il)amino)-5- ( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-etanol). EM calc. para [C 2 -iH-i 6 F 3 N 7 0 +H]+: 440,15, encontrado 440,20.
E j e m p l o 186 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000163_0002
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,125 g, 0,549 mmol) y ciclopropanamina (0,038 ml, 0,549 mmol) en acetonitrilo (2 ml) a 5 °C. Después de 2 min, se añadió N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,096 ml, 0,549 mmol) y se calentó a 21 °C. La mezcla se sometió a microondas a 70 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (0,100 g, 0,549 mmol) y ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 120 mg de 5-bromo-N4-ciclopropil-N2-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2,4-diamina. EM calc. para [C 16 H-igBrN 4 O 3 +H]+: 395,07, encontrado 394,90.
E j e m p l o 187 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000163_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,090 g, 0,379 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,069 g, 0,379 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido de color blanco para dar 80 mg de 5-bromo-N4-ciclopropil-N2-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2,4-diamina. EM calc. para ^ - ^ - ^ 3 ^ 0 3 +^+: 385,15, encontrado 385,40.
E j e m p l o 188 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 1 H - b e n z o [ d ] [ 1 , 2 , 3 ] t r i a z o l - 6 - M ) - N 4 - c i c l o p r o p N - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 d i a m i n a
Figure imgf000164_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,090 g, 0,379 mmol) y 1H-benzo[d][1,2,3]triazol-5-amina (0,051 g, 0,379 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido de color blanco para dar 97 mg de N2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-6-il)-N4-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina. EM calc. para [Cl 4 H 12 FaN 7 +H]+: 336,12, encontrado 336,20.
E j e m p l o 189 : P r e p a r a c i ó n d e 4 -( c i d o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - o l
Figure imgf000164_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,099 g, 0,417 mmol) y 6-aminooxazolo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (0,063 g, 0,417 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. No se formó el producto deseado. Se recuperó 4-(ciclopropilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-ol después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 8 H 8 F 3 N 3 O+H]+: 220,07, encontrado 219,85.
E j e m p l o 190 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 3 , 4 - d i h i d r o - 2 H - b e n z o [ b ] [ 1 , 4 ] d i o x e p i n - 7 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000164_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,080 g, 0,337 mmol) y 3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepin-7-amina (0,056 g, 0,337 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. El producto se recuperó después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i 7 H-i 7 F 3 N 4 O 2 +H]+: 367,14, encontrado 367,30.
E j e m p l o 191 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - a m i n o o x a z o l o [ 4 , 5 - b ] p i r i d i n - 2 ( 3 H ) - o n a
Figure imgf000164_0004
Se mezclaron oxazolo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (1,0 g, 7,35 mmol) y tetrafluoroborato de nitronio (1,464 g, 11,02 mmol) en sulfolano (4 ml). Se calentó a 100 °C durante 14 h. La mezcla en bruto se lavó abundantemente a través de una columna de sílice corta con un disolvente mezcla 50:40:10 de DCM/EtOAc/MeOH. El producto se concentró, con sulfolano todavía restante. Después, se añadieron cinc (1,083 g, 16,56 mmol) y cloruro de amonio (1,184 g, 16,56 mmol). Se filtró a través de Celite con EtOAc y MeOH (1:1), después se concentró. El producto se recuperó después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). El sulfolano coeluyó, por lo que no fue posible calcular el rendimiento. El material se usó tal cual. Debido a la mala ionización, la CLEM no pudo observar la masa del producto.
E j e m p l o 192 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 2 , 3 - d i h i d r o b e n z o [ b ] [ 1 , 4 ] d i o x m - 6 - i l ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 -i l ) a m i n o ) o x a z o l o [ 4 , 5 - b ] p i r i d i n - 2 ( 3 H ) - o n a
Figure imgf000165_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,040 g, 0,176 mmol), 6-aminooxazolo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (0,027 g, 0,176 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,031 ml, 0,176 mmol) en sulfolano (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos. Después, se añadieron 2,3-dihidrobenzo[b][1,4]dioxin-6-amina (0,022 ml, 0,176 mmol) y ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró (restos de sulfolano). Se recuperaron 12 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i 8 H-i 3 BrN 6 O 4 +H]+: 457,03, encontrado 456,90.
E j e m p l o 193 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( o x e t a n - 3 - N a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000165_0002
Se mezclaron 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,090 g, 0,415 mmol), oxetan-3-amina (0,030 g, 0,415 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,072 ml, 0,415 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 70 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,067 g, 0,415 mmol) y ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 14 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i 7 H-i 6 F 3 N 5 O 2 +H]+: 380,14, encontrado 379,90.
E j e m p l o 194 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 -( o x e t a n - 3 - i l ) - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a
Figure imgf000165_0003
Se mezclaron N-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,100 g, 0,319 mmol, contiene 30% del regioisómero), oxetan-3-amina (0,016 g, 0,223 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,039 ml, 0,223 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 13 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i 5 H-i 3 F 3 N 6 O+H]+: 351,12, encontrado 350,95.
E j e m p l o 195 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 1 H - i n d a z o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000166_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,080 g, 0,337 mmol) y 1H-indazol-5-amina (0,045 g, 0,337 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y el sólido se filtró para dar 70 mg de producto. EM calc. para [C 15 H 13 FaN 6 +H]+: 335,13, encontrado 335,15.
E j e m p l o 196 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i d o p r o p N - N 2 -( p i r i d m - 3 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000166_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,080 g, 0,337 mmol) y piridin-3-amina (0,032 g, 0,337 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 27 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 13 H 12 F 3 N 5 +H]+: 296,11, encontrado 295,95.
E j e m p l o 197 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 - h i d r o x i e t M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000166_0003
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), 2-aminoetan-1-ol (0,012 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,036 ml, 0,204 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y el sólido se filtró para dar 53 mg de producto. EM calc. para [C 16 H 16 FaN 5 O 2 +H]+: 368,14, encontrado 368,10.
E j e m p l o 198 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( a z e t i d i n - 3 - i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 4 -( 3 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) a z e t i d i n - 1 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000167_0001
Se mezclaron 6-((4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), azetidin-3-amina2HCl (0,030 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropil propan-2-amina (0,107 ml, 0,613 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 90 °C durante 30 minutos, y después se concentró. Se añadieron agua y MeCN y se filtró el sólido (producto secundario) y se lavó con metanol y acetona para dar 41 mg de 6-((4-(3-((2-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)azetidin-1-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona. Se recuperaron 30 mg de 6-((4-(azetidin-3-ilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i/H-i/F s^ O H ^: 379,15, encontrado 379,05. EM calc. para [C31H26F6N1üO2+H]+: 685,22, encontrado 685,40.
E j e m p l o 199 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( 2 - e t i l h i d r a z i n i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 i l ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000167_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), etilhidrazin-ácido oxálico (0,031 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,107 ml, 0,613 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y el sólido se filtró para dar 61 mg de producto. EM calc. para [C16H17F3N6O+H]+: 367,15, encontrado 367,30.
E j e m p l o 200 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( 2 - e t M h i d r a z m M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000167_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropilpirimidin-4-amina (0,060 g, 0,354 mmol) y 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,057 g, 0,354 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 85 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-^H-i/NsO+H^: 296,15, encontrado 296,00.
E j e m p l o 201 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 -( ( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) -N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000168_0001
se mezclaron 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,085 g, 0,392 mmol), 2-amino-N-metilbenzamida (0,059 g, 0,392 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,068 ml, 0,392 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 90 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadieron 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,052 g, 0,392 mmol) y ácido acético (0,024 g, 0,392 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió metanol y el sólido se filtró, después se lavó con THF. se aislaron 34 mg de producto. EM calc. para [C 20 H-i 6 F 3 NyO+H]+: 428,15, encontrado 428,15.
E j e m p l o 202 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i d o p r o p M ( m e t M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000168_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,075 g, 0,219 mmol), N-metilciclopropanamina.HCl (0,024 g, 0,219 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,076 ml, 0,438 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 90 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió EtOAc y se filtró el sólido. EM calc. para [C 18 H 1 sF 3 N 5 O+H]+: 378,16, encontrado 378,30.
E j e m p l o 203 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - d d o p r o p N - N 2 -( p i r i m i d m - 5 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000168_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,070 g, 0,295 mmol) y pirimidin-5-amina (0,028 g, 0,295 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 3 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 12 HnF 3 N 6 +H]+: 297,11, encontrado 296,90.
E j e m p l o 204 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000168_0004
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropilpirimidin-4-amina (0,070 g, 0,413 mmol) y 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,055 g, 0,413 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 18 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [Ci 4Hi 4N6+H]+: 267,14, encontrado 266,80.
E j e m p l o 2 0 5 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p N - N 2 - ( p i r a z m - 2 - M ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000169_0001
La llama secó al matraz; también burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,075 g, 0,316 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,018 g, 0,032 mmol), diacetoxipaladio (3,54 mg, 0,016 mmol), pirazin-2-amina (0,030 g, 0,316 mmol) y CARBONATO DE CESIO (0,206 g, 0,631 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 160 °C durante 40 minutos. Se filtró a través de celite con metanol. Se concentró. Se añadió 2:1 de agua/MeCN y se filtró el sólido. De nuevo, se añadió una vez MeCN al sólido y se filtró el sólido resultante para dar 33 mg de producto. EM calc. para [Ci 2Hi i F3N6+H]+: 297,11, encontrado 296,95.
E j e m p l o 206 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 1 H - i n d o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000169_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,070 g, 0,295 mmol), 1H-indol-5-amina (0,039 g, 0,295 mmol) y ácido acético (0,017 ml, 0,295 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró para dar 72 mg de producto. EM calc. para [Ci 6Hi 4F3N5+H]+: 334,13, encontrado 334,15.
E j e m p l o 207 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 2 - a m i n o p i r i d i n - 3 - i l ) - N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000169_0003
La llama secó al matraz; también burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,075 g, 0,316 mmol), piridin-2,3-diamina (0,034 g, 0,316 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,018 g, 0,032 mmol), CARBONATO DE CESIO (0,206 g, 0,631 mmol) y diacetoxipaladio (3,54 mg, 0,016 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se añadió MeCN al producto en bruto y se filtró el sólido. Se recuperaron 19 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [Ci 3Hi 3F3N6+H]+: 311,13, encontrado 310,80.
E j e m p l o 208 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( b e n z o [ d ] o x a z o l - 6 - i l ) - N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y 6 -( ( 4 -( c i c l o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 2 , 3 - d i h i d r o b e n z o [ d ] o x a z o l - 2 - o l
Figure imgf000170_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,065 g, 0,274 mmol) y benzo[d]oxazol-6-amina (0,037 g, 0,274 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido. Se recuperaron 4 mg de N2-(benzo[d]oxazol-6-il)-N4-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 14 mg de 6-((4-(ciclopropilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-2,3-dihidrobenzo[d]oxazol-2-ol después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN) en el filtrado. EM calc. para [C-isH-^FaNsO+H]*: 336,11, encontrado 335,95. EM calc. para [Ci 5Hi 4F3N502+H]+: 354,12, encontrado 353,90.
E j e m p l o 209 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 - a m i n o - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000170_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), HCl de 2,2-difluorociclopropan-1-amina(0,026 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,036 ml, 0,204 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos. Se añadió Pd al 10 %-C (~20 mg) y la mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se añadió MeOH y se filtró el sólido. Se recuperaron 12 mg del producto secundario después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). EM calc. para [C-mHi2F3N50+H]+: 324,11, encontrado 323,80.
E j e m p l o 210 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 4 - a m i n o p i r i d i n - 3 - i l ) - N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000170_0003
La llama secó el matraz. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,070 g, 0,295 mmol), piridin-3,4-diamina (0,032 g, 0,295 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,017 g, 0,029 mmol) y diacetoxipaladio (3,31 mg, 0,015 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se recuperaron 16 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [Ci 3Hi 3F3N6+H]+: 311,13, encontrado 310,90.
E j e m p l o 211 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 1 H - b e n z o [ d ] i m i d a z o l - 6 - i l ) - N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a
Figure imgf000171_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,065 g, 0,274 mmol) y 1H-benzo[d]imidazol-6-amina (0,036 g, 0,274 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a l3o °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 41 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). EM calc. para [C-i5H-i3F3N6+H]+: 335,13, encontrado 335,00.
E j e m p l o 212 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( b i s ( 2 - h i d r o x i e t i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 4 -( 2 -( ( 2 - h i d r o x i e t M ) a m m o ) e t o x i ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000171_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), 2,2'-azanediilbis(etan-1-ol) (0,020 ml, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,036 ml, 0,204 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 18 mg de 6-((4-(bis(2-hidroxietil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 20 mg de 6-((4-(2-((2-hidroxietil)amino)etoxi)-5-( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). EM calc. para [C1bH20F3N5O3+H]+: 412,16, encontrado 412,10.
E j e m p l o 213 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 -d i a m i n a
Figure imgf000171_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (0,035 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos. Se recuperaron 56 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i5H-i3F3N4O2+H]+: 339,11, encontrado 339,00.
E j e m p l o 214 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i d o p r o p i l - N 2 -( i s o x a z o l - 3 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N -c i c l o p r o p i l - 2 - ( 3 - i m i n o i s o x a z o l - 2 ( 3 H ) - i l ) - 5 - (t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000172_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,070 g, 0,295 mmol) e isoxazol-3-amina (0,025 g, 0,295 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 3 mg de N4-ciclopropil-N2-(isoxazol-3-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 3 mg de N-ciclopropil-2-(3-iminoisoxazol-2(3H)-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [Ci i HiüF3N50+H]+: 286,09, encontrado 285,85.
E j e m p l o 215 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( 3 , 3 - d i f l u o r o a z e t i d i n - 1 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000172_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), 3,3-difluoroazetidina, HCl (0,026 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,071 ml, 0,409 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 62 mg de producto. EM calc. para [C-izH-mFsNsO+H^: 400,12, encontrado 400,20.
E j e m p l o 216 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( c i c l o p r o p i l m e t i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000172_0003
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), ciclopropilmetanamina (0,015 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,036 ml, 0,204 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió MeCN y se filtró el sólido. Se enjuagó también con acetona para dar 57 mg de producto. EM calc. para [Ci 8HibF3N50+H]+: 378,16, encontrado 378,30.
E j e m p l o 217 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a Se mezclaron 2,4-didoro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,060 g, 0,277 mmol), HCl de 2,2-difluorociclopropan-1-amina(0,036 g, 0,277 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,096 ml, 0,553 mmol) en acetonitrilo (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 70 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadieron 1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,037 g, 0,277 mmol) y ácido acético (0,016 ml, 0,277 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 9 mg de producto secundario después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 12 HgF 3 N 6 +H]+: 295,09, encontrado 294,90.
E j e m p l o 2 1 8 : P r e p a r a c i ó n d e m e t i l ( 2 - ( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u m o l m - 6 - i l ) a m m o ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 4 -i l j g l i c i n a t o
Figure imgf000173_0001
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), HCl de glicinato de metilo HCl (0,026 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,071 ml, 0,409 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 30 minutos y después se concentró. Se añadió MeCN y se filtró para dar 38 mg del producto en forma de un sólido. EM calc. para [C 17 H 16 F 3 N 5 O 3 +H]+: 396,13, encontrado 396,05.
E j e m p l o 219 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( e t o x i a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000173_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), HCl de O-etilhidroxilamina(0,020 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,071 ml, 0,409 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 30 minutos y después se concentró. Se recuperaron 29 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 16 H-i 6 F 3 N 5 O 2 +H]+: 368,14, encontrado 368,05.
E j e m p l o 220 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 3 - m e t i l o x e t a n - 3 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a , 6 -( ( 4 -( d i m e t i l a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 4 -( ( 2 -( d i m e t i l a m i n o ) - 1 - m e t o x i p r o p a n - 2 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Se mezclaron 6-((4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), 3-metiloxetan-3-amina (0,018 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,036 ml, 0,204 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 30 minutos y después se concentró. Se añadió MeOH-agua y se retiró por filtración el sólido. Se ejecutaron dos columnas de fase inversa separadas con el sólido y el filtrado (eluyente de agua-MeCN). Se recuperaron 8 mg de 6-((4-((3-metiloxetan-3-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona, 3 mg de 6-((4-(dimetilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 3 mg de 6-((4-((2-(dimetilamino)-1-metoxipropan-2-il)amino)-5-( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n -2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C18H1sF3N5O2+H]+: 394,15, encontrado 394,10. EM calc. para ^ - ^ - ^ 3 ^ 0 ^ : 352,14, encontrado 352,25. EM calc. para [C20H25F3N6O2+H]+: 439,21, encontrado 439,00.
E j e m p l o 221 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( p i r i d a z i n - 4 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 4 -d d o p r o p N - N 2 -( 4 -( d d o p r o p N a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) - N 2 -( p i r i d a z i n - 4 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000174_0001
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,070 g, 0,295 mmol), piridazin-4-amina (0,028 g, 0,295 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,017 g, 0,029 mmol), diacetoxipaladio (3,31 mg, 0,015 mmol) y carbonato de cesio (0,192 g, 0,589 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se filtró a través de Celite con metanol y se concentró. Se recuperaron 5 mg de N4-ciclopropil-N2-(piridazin-4-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina y 6 mg de N4-ciclopropil-N2-(4-(ciclopropilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-N2-(piridazin-4-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). e M calc. para [C12HnF3Na+H]+: 297,11, encontrado 296,75. EM calc. para [C20H-i7FaNg+H]+: 498,16, encontrado 498,35.
E j e m p l o 222 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 2 , 2 , 2 - t r i f l u o r o e t i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000174_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), 2,2,2-trifluoroetan-1-aminaHCl (0,028 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,071 ml, 0,409 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 22 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-THF al 10% en MeCN). e M calc. para [C-iaH13FaN5O+H]+: 406,11, encontrado 406,30.
E j e m p l o 223 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) a c e t a m i d a
Figure imgf000175_0001
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 6-((4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), acetamida (0,012 g, 0,204 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis (difenilfosfano) (0,012 g, 0,020 mmol), diacetoxipaladio (2,293 mg, 10,21 |jmol) y CARBONATO DE CESIO (0,100 g, 0,306 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se filtró a través de Celite con metanol y después se concentró. Se ejecutó la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). Se aisló 1 mg de producto después de una purificación adicional usando TLC prep. EM calc. para [C i6Hi4F3N5O2+H]+: 366,12, encontrado 366,00.
E j e m p l o 224 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i d o p r o p N - N 2 -( 2 , 3 - d i h i d r o b e n z o [ b ] [ 1 , 4 ] d i o x m - 6 - N ) p i r i m i d m - 2 , 4 - d i a m m a
Figure imgf000175_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropilpirimidin-4-amina (0,060 g, 0,354 mmol) y 2,3-dihidro benzo[b][1,4]dioxin-6-amina (0,053 g, 0,354 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 64 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). EM calc. para [C i5H i6N4O2+H]+: 285,14, encontrado 284,90.
E j e m p l o 225 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( d d o p r o p N a m m o ) - 1 , 3 , 5 - t r i a z m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o N n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000175_0003
Se mezclaron 2,4-dicloro-1,3,5-triazina (0,055 g, 0,367 mmol), 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,059 g, 0,367 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,064 ml, 0,367 mmol) en DMF ( i ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 minutos. Se añadió MeOH y se filtró el sólido. Se concentró el filtrado que contiene producto. Se recuperaron 7 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-DMF al 2 % en MeOH). EM calc. para [CisHi 6N6O+H]+: 297,15, encontrado 296,90.
E j e m p l o 2 2 6 : P r e p a r a c i ó n d e N - ( 2 - ( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 - (t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) m e t a n o s u l f o n a m i d a
Figure imgf000176_0001
Se mezclaron 6-((4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), metanosulfonamida (0,019 g, 0,204 mmol) y HIDRURO SÓDICO (0,016 g, 0,409 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se usó cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-DMF al 2 % en MeOH) para obtener un producto semipuro. Después de la concentración, el sólido se lavó con etanol para dar 2 mg del producto. EM calc. para [C-isH-nFaNsOaS+H]*: 402,09, encontrado 402,10.
E j e m p l o 227 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u m o M n - 6 - M ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 4 - M ) - L -p r o l i n a t o d e m e t i l o
Figure imgf000176_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), L-prolinato de metilo-HCl (0,034 g, 0,204 mmol) y N-etil-N-isopropil propan-2-amina (0,071 ml, 0,409 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se usó cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-THF al 10 % en MeCN) se usó para obtener un producto semipuro. Después de la concentración, el material se purificó adicionalmente por cromatografía de fase normal sobre gel de sílice (eluyente de MeOH al 3 %/DCM) para dar 18 mg de producto. EM calc. para [C 20 H 20 FaN 5 Oa+H]+: 436,16, encontrado 436,15.
E j e m p l o 2 2 8 : P r e p a r a c i ó n d e N - c i c l o p r o p i l - 2 - ( 2 - ( p i r i d i n - 3 - i l ) p i r r o l i d i n - 1 - i l ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000176_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,064 g, 0,269 mmol) y 3-(pirrolidin-2-il)piridina (0,040 g, 0,269 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 3 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-I 7 H-I 8 F 3 N 6 +H]*: 350,16, encontrado 349,90.
E j e m p l o 229 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 6 - m e t o x i p i r i d i n - 2 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000177_0001
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,065 g, 0,274 mmol), 6-metoxipiridin-2-amina (0,034 g, 0,274 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,016 g, 0,027 mmol), diacetoxipaladio (3,07 mg, 0,014 mmol) y CARBONATO DE CESIO (0,134 g, 0,410 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se filtró a través de Celite con MeOH y se concentró. Se recuperaron 9 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C-mH-mFsNsO+H]*: 326,13, encontrado 326,10.
E j e m p l o 230 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i d o p r o p N - N 2 -( 5 - m e t o x i p i r i d m - 3 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000177_0002
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,065 g, 0,274 mmol), 5-metoxipiridin-3-amina (0,034 g, 0,274 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,016 g, 0,027 mmol), diacetoxipaladio (3,07 mg, 0,014 mmol) y CARBONATO DE CESIO (0,134 g, 0,410 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se filtró a través de Celite con MeOH y se concentró. Se recuperaron 9 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-mH-mFsNsO+H]*: 326,13, encontrado 325,90.
E j e m p l o 231 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( o x e t a n - 3 - M o x i ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o l m -2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 4 - h i d r o x i - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000177_0003
El matraz de reacción y la barra de agitación se secaron con llama. Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), oxetan-3-ol (0,015 g, 0,204 mmol) e hidruro sódico (6,37 mg, 0,266 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 11 mg de 6-((4-(oxetan-3-iloxi)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona y 2 mg de 6-((4-hidroxi-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C-i7H-i5F3N4O3+H]+: 381,12, encontrado 381,00. EM calc. para [C14H11F3N5O2+HJ+: 325,09, encontrado 324,80.
E j e m p l o 2 3 2 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - ( ( 4 - ( c i c l o p r o p i l a m i n o ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 1 , 3 - d i h i d r o - 2 H - b e n z o [d] i m i d a z o l - 2 -o n a
Figure imgf000178_0001
El matraz de reacción y la barra de agitación se secaron con llama. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropilpirimidin-4-amina (0,060 g, 0,354 mmol) y 5-amino-1,3-dihidro-2H-benzo[d]imidazol-2-ona (0,053 g, 0,354 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 67 mg de producto. EM calc. para [Ci 4Hi 4N6O+H]+: 283,13, encontrado 282,85.
E j e m p l o 2 3 3 : P r e p a r a c i ó n d e 5 , 5 ' - ( ( 5 - b r o m o p i r i m i d m - 2 , 4 - d i M ) b i s ( a z a n e d i M ) ) b i s ( 1 , 3 - d i h i d r o - 2 H - b e n z o [ d ] i m i d a z o l - 2 - o n a )
Figure imgf000178_0002
El matraz de reacción y la barra de agitación se secaron con llama. Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,100 g, 0,439 mmol) y 5-amino-1,3-dihidro-2H-benzo[d]imidazol-2-ona (0,065 g, 0,439 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se añadió acetonitrilo y el sólido se filtró para dar 40 mg de producto. EM calc. para [Ci8Hi3BrNsO2+H]+: 453,04, encontrado 452,90.
E j e m p l o 2 3 4 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - d o r o - 2 - ( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n N ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) o x i ) - N - m e t N b e n z a m i d a y N -( 5 - d o r o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n M ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - M ) - 2 - h i d r o x i - N - m e t M b e n z a m i d a
Figure imgf000178_0003
Se mezclaron 2-((2,5-dicloropirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida (0,325 g, 1,090 mmol), 3,4,5-trimetoxianilina (0,200 g, 1,090 mmol), cloruro de cinc (II) (0,178 g, 1,308 mmol) y trietilamina (0,280 ml, 1,308 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) y t-Butanol (2 ml). Se calentaron a 60 °C durante 8 h, después la mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 10 mg de 2-((5-cloro-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida y 5 mg de N-(5-cloro-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)-2-hidroxi-N-metilbenzamida después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C2i H2i CIN4O5+H]+: 445,13, encontrado 445,25.
E j e m p l o 235 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( 1 H - p i r r o l - 1 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n -2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000179_0001
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 6-((4-doro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,070 g, 0,204 mmol), 1H-pirrol (0,015 g, 0,225 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (7,09 mg, 0,012 mmol), diacetoxipaladio (1,376 mg, 6,13 |jmol) y carbonato de cesio (0,087 g, 0,266 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 minutos. Se añadió MeCN y se filtró el sólido. El filtrado se concentró y se recuperaron 2 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 1 sH 14 F 3 N 5 O+H]+: 374,13, encontrado 373,85.
E j e m p l o 236 : P r e p a r a c i ó n d e 5 -( ( 5 - b r o m o - 4 -( c i c l o p r o p M a m m o ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) - 1 , 3 - d i h i d r o - 2 H - b e n z o [ d ] i m i d a z o l - 2 - o n a
Figure imgf000179_0002
El matraz de reacción y la barra de agitación se secaron con llama. Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,100 g, 0,439 mmol), ciclopropanamina (0,030 ml, 0,439 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,076 ml, 0,439 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 60 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió 5-amino-1,3-dihidro-2H-benzo[d]imidazol-2-ona (0,065 g, 0,439 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se añadió MeCN y se filtró el sólido para dar 112 mg de producto. EM calc. para [C-MH 13 BrN 6 O+H]+: 361,04, encontrado 360,80.
E j e m p l o 2 3 7 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - ( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n N ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) a m m o )- N -m e t i l b e n c e n o s u l f o n a m i d a
Figure imgf000179_0003
El matraz de reacción y la barra de agitación se secaron con llama. Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,080 g, 0,351 mmol), 2-amino-N-metilbencenosulfonamida (0,065 g, 0,351 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,061 ml, 0,351 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (0,064 g, 0,351 mmol) y ácido acético (0,021 g, 0,351 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 31 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 2 0H 22 BrN 5 O 5 S+H]+: 524,06, encontrado 524,30.
E j e m p l o 238 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000180_0001
Se mezclaron 2,4-didoropirimidina (1 g, 6,71 mmol), 2-hidroxi-N-metilbenzamida (1,015 g, 6,71 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (1,169 ml, 6,71 mmol) y cobre (0,043 g, 0,671 mmol) en DMF (10 ml). La mezcla se sometió a microondas, alcanzó 140 °C en 7 min y después se canceló la ejecución. La mezcla se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C12H1üCIN3O2+H]+: 264,06, encontrado 263,70.
E j e m p l o 239 : P r e p a r a c i ó n d e N - m e t i l - 2 -( ( 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) b e n z a m i d a
Figure imgf000180_0002
Se mezclaron 2-((2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida (1,529 g, 5,8 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,790 g, 5,80 mmol) en 1,2-dicloroetano (4 ml) y t-butanol (4 ml). Se agitó durante 1 h y después se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (1,063 g, 5,80 mmol) y trietilamina (0,808 ml, 5,80 mmol). Se sometió a microondas en un tubo cerrado herméticamente a 100 °C durante 20 min. Se transfirió a un matraz y se calentó en un baño de aceite a 80 °C durante un total de 24 h y después se concentró. Se recuperaron 74 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C2-iH22N4O5+H]+: 411,17, encontrado 411,20.
E j e m p l o 240 : P r e p a r a c i ó n d e 5 -( ( 4 -( c i d o p r o p N a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) m d o N n - 2 - o n a
Figure imgf000180_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y 5-aminoindolin-2-ona (0,037 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 min. Se filtró el sólido y se lavó con acetonitrilo para dar 18 mg de producto. EM calc. para [C-^H-mFsNsO+H^: 350,13, encontrado 350,10.
E j e m p l o 241 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a .
Figure imgf000180_0004
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,100 g, 0,439 mmol), 3-hidroxi-N-metilbenzamida (0,066 g, 0,439 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,076 ml, 0,439 mmol) y cobre (2,79 mg, 0,044 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 80 °C durante 20 min y después se concentró. Se usó tal cual. EM calc. para [Ci 2 HgBrClN 3 O 2 +H]+: 341,97, encontrado 341,65.
E j e m p l o 242 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000181_0001
Se mezclaron 3-((5-bromo-2-doropirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida (0,147 g, 0,43 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,079 g, 0,430 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 min. Se añadió cloruro de cinc (II) (0,059 g, 0,430 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 13 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 2 -iH 2 -iBrN 4 O 5 +H]+: 489,08, encontrado 488,95.
E j e m p l o 243 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 3 - a m i n o - 1 H - 1 , 2 , 4 - t r i a z o l - 5 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) -3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000181_0002
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,072 g, 0,210 mmol), 1H-1,2,4-triazol-3,5-diamina (0,021 g, 0,210 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,037 ml, 0,210 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min. Se añadió cobre (6,68 mg, 0,105 mmol) y más base y la mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 7 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-DMF al 3 % en MeCN). EM calc. para [C 16 H 14 F 3 N 9 O+H]+: 406,14, encontrado 406,10.
E j e m p l o 2 4 4 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N , N - d i m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000181_0003
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-hidroxi-N,N-dimetilbenzamida (0,109 g, 0,658 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,115 ml, 0,658 mmol) y cobre (4,18 mg, 0,066 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se sometió a 60 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 13 H 11 BrClNaO 2 +H]+: 355,98, encontrado 355,70.
E j e m p l o 245 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N , N -d i m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000182_0001
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-doropirimidin-4-il)oxi)-N,N-dimetilbenzamida (0,203 g, 0,57 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,078 g, 0,570 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) y t-butanol (2,000 ml). Se agitó durante 15 min, después se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (0,104 g, 0,570 mmol) y trietilamina (0,079 ml, 0,570 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 80 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 29 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 22 H 23 BrN 4 O 5 +H]+: 503,10, encontrado 503,00.
E j e m p l o 2 4 6 : P r e p a r a c i ó n d e 4 - ( 2 - ( ( 4 - ( c i d o p r o p i l a m i n o ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) e t i l ) f e n o l
Figure imgf000182_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,055 g, 0,231 mmol), 4-(2-aminoetil)fenol (0,032 g, 0,231 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,040 ml, 0,231 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró a través de Celite. Se concentró el filtrado para dar 60 mg de producto. EM calc. para [C-i 6 H-i 7 F 3 N 4 O+H]+: 339,15, encontrado 339,20.
E j e m p l o 247 : P r e p a r a c i ó n d e ( R ) - 6 -( ( 4 -( 3 - m e t i l m o r f o l i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000182_0003
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,055 g, 0,160 mmol), (R)-3-metilmorfolina (0,016 g, 0,160 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,028 ml, 0,160 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 6 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). EM calc. para [C-i9H20F3N5O2+H]+: 408,17, encontrado 408,35.
E j e m p l o 2 4 8 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t o x i b e n z a m i d a
Figure imgf000183_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-hidroxi-N-metoxi benzamida (0,110 g, 0,658 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,115 ml, 0,658 mmol) y cobre (4,18 mg, 0,066 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se sometió a 60 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 12 HgBrClN 3 O 3 +H]+: 357,96, encontrado 357,70.
E j e m p l o 249 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) b e n z a m i d a
Figure imgf000183_0002
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-metoxibenzamida (0,179 g, 0,500 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,075 g, 0,550 mmol) en 1,2-dicloroetano (1 ml) y t-butanol (1,000 ml). Después de 1 h, se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (0,092 g, 0,500 mmol) y trietilamina (0,070 ml, 0,500 mmol) y se sometieron a 80 °C durante 20 min y después se concentraron. Se recuperaron 19 mg de producto secundario después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C 20 H-i 9 BrN 4 O 5 +H]+: 475,06, encontrado 474,90.
E j e m p l o 250 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( p i r i m i d i n - 4 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000183_0003
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,070 g, 0,295 mmol), pirimidin-4-amina (0,028 g, 0,295 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,017 g, 0,029 mmol), diacetoxipaladio (3,31 mg, 0,015 mmol) y carbonato de cesio (0,144 g, 0,442 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se recuperaron 13 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeOH). EM calc. para [C 12 HnF 3 N 6 +H]+: 297,11, encontrado 297,05.
E j e m p l o 251 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - 3 - m e t o x i - N - m e t i l b e n z a m i d a
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-hidroxi-3-metoxi-N-metilbenzamida (0,119 g, 0,658 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,115 ml, 0,658 mmol) y cobre (4,18 mg, 0,066 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se sometió a 60 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 13 H 11 BrClN 3 Oa+H]+: 371,98, encontrado 371,70.
E j e m p l o 252 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t N m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i n m i d m - 4 - N ) o x i ) - 3 - m e t o x i - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000184_0001
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-3-metoxi-N-metilbenzamida (0,220 g, 0,590 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,080 g, 0,590 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) y t-butanol (2,000 ml). Después de 90 min, se añadieron 3,4,5-trimetoxianilina (0,108 g, 0,590 mmol) y trietilamina (0,082 ml, 0,590 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 57 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN). EM calc. para [C22H23BrN4O6+H]+: 519,09, encontrado 519,05.
E j e m p l o 253 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) a c e t a m i d a
Figure imgf000184_0002
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,117 ml, 0,658 mmol) y N-(2-hidroxifenil)acetamida (0,100 g, 0,658 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C-i 2 HgBrClN 3 O 2 +H]+: 341,97, encontrado 341,60.
E j e m p l o 254 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) a c e t a m i d a y 4 -( 2 - a m i n o f e n o x i ) - 5 - b r o m o - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000184_0003
Se mezclaron N-(2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)fenil)acetamida (0,220 g, 0,642 mmol) y cloruro de cinc(II) (0,088 g, 0,642 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) y t-butanol (2,000 ml). Se agitó durante 1 h. Se añadieron trietilamina (0,090 ml, 0,642 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,118 g, 0,642 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 20 min y después se concentró y se purificó primero por cromatografía de fase normal sobre gel de sílice (DCM-EtOAc), después por cromatografía automatizada de fase inversa (eluyente de agua-MeCN) para dar 43 mg de N-(2-((5-bromo-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)fenil)acetamida y 39 mg de 4-(2-aminofenoxi)-5-bromo-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina. EM calc. para [C 2 -iH 2 -iBrN 4 O 5 +H]+: 489,08, encontrado 488,95. EM calc. para [C 19 H-i 9 BrN 4 O 4 +H]+: 447,07, encontrado 446,90.
E j e m p l o 255 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 4 -( c i d o p r o p M a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) f e n o l
Figure imgf000185_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y 2-aminofenol (0,028 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió EtOAc y se filtró el sólido para dar 57 mg de producto. EM calc. para [C-mH-i3F3N40+H]+: 311,11, encontrado 311,15.
E j e m p l o 2 5 6 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - d o r o p i r i m i d m - 4 - M ) o x i ) - 6 - h i d r o x i - N - m e t M b e n z a m i d a
Figure imgf000185_0002
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,115 ml, 0,658 mmol) y 2,6-dihidroxi-N-metilbenzamida (0,110 g, 0,658 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C12HgBrClN3O3+H]+: 357,96, encontrado 357,70.
E j e m p l o 257 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - 6 - h i d r o x i - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000185_0003
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-6-hidroxi-N-metilbenzamida (0,143 g, 0,400 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,055 g, 0,400 mmol) en 1,2-dicloroetano (1 ml) y t-butanol (1,000 ml). Después de 1 h, se añadieron trietilamina (0,056 ml, 0,400 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,073 g, 0,400 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se purificó primero por cromatografía de fase normal sobre gel de sílice (DCM-EtOAc), después mediante cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN) para dar 41 mg de producto. EM calc. para [C2-iH2-iBrN4O6+H]+: 505,07, encontrado 504,95.
E j e m p l o 258 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i d o p r o p i l - N 2 -( 2 , 2 - d i f l u o r o b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n -2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000186_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,050 g, 0,210 mmol) y 2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-amina (0,036 g, 0,210 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 35 mg de producto después de una cromatografía de fase normal sobre gel de sílice (DCM). EM calc. para [C 15 HnF 4 N 4 O 2 +H]+: 375,09, encontrado 375,20.
E j e m p l o 259 : P r e p a r a c i ó n d e 1 -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) p r o p a n - 1 - o n a
Figure imgf000186_0002
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 1-(2-hidroxifenil)propan-1-ona (0,099 g, 0,658 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,115 ml, 0,658 mmol) y cobre (4,18 mg, 0,066 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se sometió a 80 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 1 aH 1 üBrClN 2 O 2 +H]+: 340,97, encontrado 340,65.
E j e m p l o 260 : P r e p a r a c i ó n d e 1 -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) p r o p a n - 1 - o n a
Figure imgf000186_0003
Se mezclaron 1-(2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)fenil)propan-1-ona (0,200 g, 0,585 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,080 g, 0,585 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) y t-butanol (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min. Se recuperaron 34 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 %/MeCN). EM calc. para [C 22 H 22 BrNaO 5 +H]+: 488,08 encontrado 487,90.
E j e m p l o 261 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) o x i ) e t i l ) c a r b a m a t o d e b e n c i l o
Figure imgf000186_0004
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,120 g, 0,350 mmol), (2- hidroxietil)carbamato de bencilo (0,068 g, 0,350 mmol) e hidruro sódico (0,017 g, 0,420 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 4 mg de producto después de la HPLC de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C24H22F3NsO4+H]+: 502,17 encontrado 502,30. E j e m p l o 262 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - d d o p r o p N - N 2 -( n a f t a l e n - 1 - N m e t M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 , 4 - d i a m m a
Figure imgf000187_0001
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,055 g, 0,231 mmol), naftalen-1-ilmetan-amina (0,036 g, 0,231 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,044 ml, 0,255 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió MeCN al 50 % en agua y se filtró el sólido para dar 32 mg de producto. EM calc. para [C1gH17F3N4+H]+: 359,15 encontrado 359,40.
E j e m p l o 263 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( d d o p r o p M a m m o ) q u m a z o N n - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o N n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000187_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropilquinazolin-4-amina (0,055 g, 0,250 mmol) y 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,041 g, 0,250 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 80 mg de producto. EM calc. para [C20H-igN5O+H]+: 346,17 encontrado 346,30.
E j e m p l o 264 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i d o p r o p i l - N 2 -( q u i n o l i n - 6 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000187_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol), cobre (1,605 mg, 0,025 mmol) y quinolin-6-amina (0,036 g, 0,253 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido. Se recuperaron 7 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN) en el filtrado. EM calc. para [C17H-mF3N5+H]+: 346,13 encontrado 345,95.
E j e m p l o 265 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 2 - c l o r o - 4 - f e n o x i p i r i m i d i n a
Figure imgf000188_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), fenol (0,062 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en DMF (3 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 10 H 6 BrClN 2 O+H]+: 284,95 encontrado 284,50.
E j e m p l o 266 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 - f e n o x i - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a .
Figure imgf000188_0002
Se mezclaron 5-bromo-2-cloro-4-fenoxipirimidina (0,180 g, 0,630 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,086 g, 0,630 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml) y t-butanol (1 ml). Después de 40 min, se añadieron trietilamina (0,097 ml, 0,693 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,115 g, 0,630 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 78 mg de producto después de una cromatografía de fase normal sobre gel de sílice (EtOAc-DCM). EM calc. para [C-igH 18 BrN 3 O 4 +H]+: 432,06, encontrado 431,90.
E j e m p l o 267 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 5 - b r o m o - 2 - d o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000188_0003
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 3-hidroxi-N-metilbenzamida (0,100 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 12 H 9 BrClN 3 O 2 +H]+: 341,97, encontrado 341,70.
E j e m p l o 268 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000188_0004
Se mezclaron 3-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida (0,075 g, 0,219 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,030 g, 0,219 mmol) en 1,2-dicloroetano (4 ml) y t-butanol (1 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (0,034 ml, 0,241 mmol) y 6-amino-3,4-dihidro quinolin-2(1H)-ona (0,036 g, 0,219 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 11 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 21 H 1 sBrN 5 O 3 +H]+: 468,07 encontrado 467,90.
E j e m p l o 269 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - d o r o p i r i m i d m - 4 - M ) o x i ) - N - d d o p r o p M b e n z a m i d a
Figure imgf000189_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), N-ciclopropil-2-hidroxi benzamida (0,117 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 14 HnBrClN 3 O 2 +H]+: 367,98 encontrado 367,70.
E j e m p l o 2 7 0 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - ( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -c i c l o p r o p i l b e n z a m i d a
Figure imgf000189_0002
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-ciclopropilbenzamida (0,230 g, 0,624 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,085 g, 0,624 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml) y se añadieron t-butanol (0,5 ml). trietilamina (0,096 ml, 0,686 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,114 g, 0,624 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 67 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 21 H 21 BrN 4 O 5 +H]+: 515,10 encontrado 515,05.
E j e m p l o 271 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 5 - d d o b u t i M H - p i r a z o l - 3 - N ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) -3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a .
Figure imgf000189_0003
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,060 g, 0,175 mmol), 5-ciclobutil-1H-pirazol-3-amina (0,024 g, 0,175 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,034 ml, 0,193 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 30 min y después se concentró. Se recuperaron 14 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 21 H 2 0F 3 NyO+H]+: 444,18 encontrado 444,15.
E j e m p l o 272 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 - c l o r o - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000190_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (1,5 g, 6,58 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,897 g, 6,58 mmol) en 1,2-dicloroetano (8 ml) y t-butanol (2 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (1,009 ml, 7,24 mmol) y 3,4,5­ trimetoxianilina (1,206 g, 6,58 mmol). La mezcla se sometió a 80 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C-i 3 H-i 3 BrClN 3 O 3 +H]+: 373,99, encontrado 373,75.
E j e m p l o 273 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 2 - c l o r o - 4 -( 2 -( m e t o x i m e t i l ) f e n o x i ) p i r i m i d i n a
Figure imgf000190_0002
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-(metoximetil)fenol (0,091 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,115 ml, 0,658 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 80 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 12 H 1 üBrClN 2 O 2 +H]+: 328,97, encontrado 328,70.
E j e m p l o 274 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 -( 2 -( m e t o x i m e t i l ) f e n o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000190_0003
Se mezclaron 5-bromo-2-cloro-4-(2-(metoximetil)fenoxi)pirimidina (0,200 g, 0,607 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,083 g, 0,607 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml) y t-butanol (1,00 ml). Después de 15 min, se añadieron trietilamina (0,093 ml, 0,668 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,111 g, 0,607 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 27 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 2 -iH 22 BrN 3 O 5 +H]+: 476,08 encontrado 475,95.
E j e m p l o 275 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( q u i n o l i n - 3 - i l ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000190_0004
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y quinolin-3-amina (0,036 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró la impureza sólida. Se recuperaron 8 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN) en el filtrado. EM calc. para [C17H14FN5+H]+: 346,13 encontrado 345,80.
E j e m p l o 2 7 6 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - d o r o p i r i m i d m - 4 - M ) o x i ) f e m l ) ( p i r r o M d m - 1 - M ) m e t a n o n a
Figure imgf000191_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), (2-hidroxifenil)(pirrolidin-1-il)metanona (0,126 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C-i5H-i3BrClN3O2+H]+: 382,00, encontrado 381,70.
E j e m p l o 277 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) ( p i r r o l i d i n - 1 -i l ) m e t a n o n a
Figure imgf000191_0002
Se mezclaron (2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)fenil)(pirrolidin-1-il)metanona (0,200 g, 0,523 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,071 g, 0,523 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml) y t-butanol (1 ml). Se añadieron trietilamina (0,080 ml, 0,575 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,096 g, 0,523 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 66 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C24H25BrN4O5+H]+: 529,11 encontrado 529,00.
E j e m p l o 2 7 8 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 - ( q u i n o l i n - 5 - i l ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000191_0003
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol), quinolin-5-amina (0,036 g, 0,253 mmol) y ácido acético (0,015 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 42 mg de producto. EM calc. para [C-i7H-mF3N5+H]+: 346,13 encontrado 345,80.
E j e m p l o 279 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 - h i d r o x i f e n i l ) c i c l o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Se mezclaron 2-aminofenol (3 g, 27,5 mmol), cloruro de ciclopropanocarbonilo (2,87 g, 27,5 mmol) y trietilamina (4,21 ml, 30,2 mmol) en tetrahidrofurano (30 ml). Se calentó a 40 °C durante 8 h y después se concentró. Se usó cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (hexanos-EtOAc/DCM) para purificar el material. El compuesto doblemente acilado (245 uma) contaminó el producto deseado después de la purificación. El material se usó a pesar de esta impureza. e M calc. para [C1üH11NO2+H]+: 178,09 encontrado 177,85.
E j e m p l o 280 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d m - 4 - N ) o x i ) f e n M ) c i c l o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Figure imgf000192_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), N-(2-hidroxifenil) ciclopropanocarboxamida (0,117 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C14H11 BrClN3O2+H]+: 367,98 encontrado 367,70.
E j e m p l o 281 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) o x i ) f e n i l ) c i c l o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Figure imgf000192_0002
Se mezclaron N-(2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)fenil)ciclopropanocarboxamida (0,220 g, 0,597 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,081 g, 0,597 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml) y t-butanol (1 ml). Después de 2 h, se añadieron trietilamina (0,092 ml, 0,657 mmol) y 3,4,5-trimetoxi anilina (0,109 g, 0,597 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min y después se concentró. EM calc. para [C21H21BrN4O5+H]+: 515,10 encontrado 515,00.
E j e m p l o 282 : P r e p a r a c i ó n d e 1 -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) - N , N - d i m e t i l m e t a n a m i n a
Figure imgf000192_0003
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-((dimetilamino)metil)fenol (0,100 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 70 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C13H-i3BrClN3O+H]+: 342,00 encontrado 341,65.
E j e m p l o 283 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 -( 2 -( ( d i m e t i l a m i n o ) m e t i l ) f e n o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 -a m i n a
Figure imgf000193_0001
Se mezclaron 1-(2-((5-bromo-2-doropirimidin-4-il)oxi)fenil)-N,N-dimetilmetanamina (0,170 g, 0,496 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,068 g, 0,496 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml) y t-butanol (1 ml). Después de 20 min, se añadieron trietilamina (0,076 ml, 0,546 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,091 g, 0,496 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se usó primero cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM) para purificar parcialmente el material, entonces se recuperaron 5 mg después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN) es ese material semipuro. EM calc. para [C 24 H 25 BrN 4 O 5 +H]+: 529,11 encontrado 529,00.
E j e m p l o 284 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 - e t o x i - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000193_0002
Se mezclaron 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (2,3 g, 6,14 mmol) e hidróxido sódico (10,23 ml, 30,7 mmol) en agua (1 ml) y etanol (10 ml). Se calentaron a 100 °C durante 8 h, después se mantuvieron a 23 °C durante 6 d. Se añadió una solución de cloruro de amonio para neutralizar, después se retiró el disolvente orgánico apropiado mediante un rotovapor. Se filtró el sólido y se lavó con agua. Se purificaron 60 mg del sólido por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc) para dar 41 mg de producto. EM calc. para [C 15 H 1 sBrN 3 O 4 +H]+: 384,06 encontrado 383,90.
E j e m p l o 285 : P r e p a r a c i ó n d e á c i d o 2 - d o r o - 4 -( c i d o p r o p i l a m i n o ) p i r i m i d i n - 5 - c a r b o x í l i c o
Figure imgf000193_0003
Se mezclaron ácido 2,4-dicloropirimidin-5-carboxílico (0,100 g, 0,518 mmol), ciclopropanamina (0,036 ml, 0,518 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,099 ml, 0,570 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a 70 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [CsH 8 ClN 3 O 2 +H]+: 214,04 encontrado 213,65.
E j e m p l o 286 : P r e p a r a c i ó n d e á c i d o 4 -( d d o p r o p N a m m o ) - 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u m o N n - 6 -i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 5 - c a r b o x í l i c o
Figure imgf000194_0001
Se mezclaron ácido 2-doro-4-(cidopropilamino)pirimidin-5-carboxílico (0,100 g, 0,468 mmol) y 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,076 g, 0,468 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido. Se añadió MeOH al sólido previo y se filtró para dar 74 mg de producto final. EM calc. para [C-i 7 H-i 7 N 5 O 3 +H]+: 340,14 encontrado 340,00.
Ejemplo 287: Preparación de 4-(ddopropilammo)-2-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroqumoMn-6-M)ammo)pirimidm-5-carbonitrilo y 2-(cidopropilamino)-4-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)amino)pirimidin-5-carbonitrilo.
Figure imgf000194_0002
Se mezclaron 2,4-dicloropirimidin-5-carbonitrilo (0,100 g, 0,575 mmol), ciclopropanamina (0,040 ml, 0,575 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,110 ml, 0,632 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 70 °C durante 10 min y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,093 g, 0,575 mmol) y ácido acético (0,035 g, 0,575 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 14 mg de 4-(ciclopropilamino)-2-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)amino)pirimidin-5-carbonitrilo y 14 mg de 2-(ciclopropilamino)-4-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)amino)pirimidin-5-carbonitrilo después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 17 H-i 6 N 6 O+H]+: 321,15 encontrado 321,00.
Ejemplo 288: Preparación de N2-(1H-benzo[d]imidazol-2-il)-N4-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina.
Figure imgf000194_0003
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,065 g, 0,274 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5-diil)bis(difenilfosfano) (0,016 g, 0,027 mmol), diacetoxipaladio (3,07 mg, 0,014 mmol), 1H-benzo[d]imidazol-2-amina (0,036 g, 0,274 mmol) y carbonato de cesio (0,107 g, 0,328 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 13 mg de producto. EM calc. para [C 15 H 13 FN 6 +H]+: 335,13 encontrado 335,10.
Ejemplo 289: Preparación de 2-(2-((5-bromo-2-doropirimidin-4-il)oxi)fenil)-4-metiloxazol
Figure imgf000195_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-(4-metiloxazol-2-il)fenol (0,115 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a 120 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C-i 4 HgBrClN 3 O 2 +H]+: 365,97 encontrado 365,70.
E j e m p l o 290 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 -( 2 -( 4 - m e t i l o x a z o l - 2 - i l ) f e n o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000195_0002
Se mezclaron 2-(2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)fenil)-4-metiloxazol (0,230 g, 0,627 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,094 g, 0,690 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (0,105 ml, 0,753 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,115 g, 0,627 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 min y después se concentró. Se usó cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM) para aislar un producto semipuro. Se recuperaron 18 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10% en MeCN). EM calc. para [C 21 H 21 BrN 4 O 5 +H]+: 513,08 encontrado 512,95.
E j e m p l o 291 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i d o p r o p M a m m o ) - 5 - m t r o p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u m o M n - 2 ( 1 H ) -o n a y N 2 , N 4 - d i c i c l o p r o p i l - 5 - n i t r o p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000195_0003
A 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (0,070 g, 0,361 mmol) en acetonitrilo (2 ml) a 0 °C, se le añadió ciclopropanamina (0,025 ml, 0,361 mmol). Después de 5 min, se añadió N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,069 ml, 0,397 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 60 °C durante 10 min y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,059 g, 0,361 mmol) y ácido acético (0,022 g, 0,361 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 17 mg de 6-((4-(ciclopropilamino)-5-nitropirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona, con el filtrado que contenía 20 mg de N2,N4-diciclopropil-5-nitropirimidin-2,4-diamina después de la concentración. EM calc. para [C 16 H 16 N 6 O 3 +H]+: 341,14 encontrado 341,00. EM calc. para [C 1 üH 13 N 5 O 2 +H]+: 236,12 encontrado 236,00.
E j e m p l o 292 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 2 - c l o r o - N - f e n i l p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000196_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), anilina (0,060 ml, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 10 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 10 H 7 BrClN 3 +H]+: 283,96 encontrado 283,55.
E j e m p l o 293 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - N 4 - f e n i l - N 2 -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000196_0002
Se mezclaron 5-bromo-2-cloro-N-fenilpirimidin-4-amina (0,175 g, 0,615 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,101 g, 0,738 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 30 min, la mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min. Se añadió amoniaco en metanol (200 pl, 7 M). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min para consumir el material de partida y simplificar la purificación. Se usó cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM) para dar material semipuro, entonces se recuperaron 40 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 1 gH 1 gBrN 4 O 3 +H]+: 431,07 encontrado 430,90.
E j e m p l o 294 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 1 H - 1 , 2 , 4 - t r i a z o l - 3 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000196_0003
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,085 g, 0,248 mmol), diacetoxipaladio (1,671 mg, 7,44 pmol), 1H-1,2,4-triazol-3-amina (0,023 g, 0,273 mmol) y carbonato de cesio (0,105 g, 0,322 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se añadió MeOH y se filtró el sólido de color amarillo. Se lavó con acetona y DCM para retirar impurezas no polares y dar 35 mg de producto. EM calc. para [C 16 H 13 F 3 NsO+H]+: 391,13 encontrado 391,00.
E j e m p l o 295 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) c a r b a m a t o d e m e t i l o
Figure imgf000197_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), (2-hidroxifenil)carbamato de metilo (0,110 g, 0,658 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,126 ml, 0,724 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a 120 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 12 HgBrClN 3 O 3 +H]+: 357,96 encontrado 357,70.
E j e m p l o 296 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) c a r b a m a t o d e m e t i l o
Figure imgf000197_0002
Se mezclaron (2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)fenil)carbamato de metilo (0,220 g, 0,614 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,100 g, 0,736 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 1 h, se añadieron trietilamina (0,103 ml, 0,736 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,112 g, 0,614 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min. Se añadieron ácido acético (0,037 g, 0,614 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,112 g, 0,614 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 10 min y después se concentró. Se usó cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc) para dar material semipuro, entonces se recuperaron 36 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 2 -iH 2 -iBrN 4 O 6 +H]+: 505,07, encontrado 504,95.
E j e m p l o 297 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 1 H - b e n z o [ d ] i m i d a z o l - 6 - M ) - N 4 -( 5 - c i c l o b u t i l - 1 H - p i r a z o l - 3 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000197_0003
Se mezclaron 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,087 g, 0,401 mmol), 5-ciclobutil-1H-pirazol-3-amina (0,055 g, 0,401 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,077 ml, 0,441 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 80 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadieron 1H-benzo[d]imidazol-6-amina (0,053 g, 0,401 mmol) y ácido acético (0,024 g, 0,401 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 14 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C-igH 17 F 3 N 8 +H]+: 415,16, encontrado 415,20.
E j e m p l o 298 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 2 - c l o r o - 4 -( 2 -( t r i f l u o r o m e t i l ) f e n o x i ) p i r i m i d i n a
Figure imgf000198_0001
Se mezclaron 5-bromo-2,4-didoropirimidina (0,150 g, 0,658 mmol), 2-(trifluorometil)fenol (0,117 g, 0,724 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,138 ml, 0,790 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla se sometió a 120 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [CnH 5 BrClF 3 N 2 O+H]+: 352,93, encontrado 352,60.
E j e m p l o 299 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 -( 2 -( t r i f l u o r o m e t i l ) f e n o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000198_0002
Se mezclaron 5-bromo-2-cloro-4-(2-(trifluorometil)fenoxi)pirimidina (0,220 g, 0,622 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,110 g, 0,809 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (0,121 ml, 0,871 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,114 g, 0,622 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 45 mg de producto después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc). EM calc. para [C 20 H-i 7 BrF 3 N 3 O 4 +H]+: 500,05, encontrado 500,00.
E j e m p l o 300 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 - f e n o x i - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a y 6 -( ( 2 - f e n o x i - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000198_0003
Se mezclaron 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,080 g, 0,369 mmol), fenol (0,035 g, 0,369 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,071 ml, 0,406 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 min y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,060 g, 0,369 mmol) y ácido acético (0,022 g, 0,369 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió una mezcla 50:50 de MeCN-agua y se filtró el sólido. A este sólido se le añadió acetona y ese sólido se filtró para dar los 23 mg de 6-((4-fenoxi-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona. El filtrado de MeCN-agua anterior se purificó usando cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN) para dar 8 mg de 6-((2-fenoxi-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona. EM calc. para [C 20 H-, 5 F 3 N 4 O 2 +H]+: 401,12, encontrado 401,20.
E j e m p l o 301 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i d o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o n a f t a l e n - 1 ( 2 H ) - o n a
Figure imgf000199_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y 6-amino-3,4-dihidronaftalen-1(2H)-ona (0,041 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió DCM-EtOAc y se filtró el sólido para dar 61 mg de producto. EM calc. para [C 18 H 17 F 3 N 4 O+H]+: 363,15, encontrado 363,15.
E j e m p l o 302 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 - d o r o p i r i m i d m - 4 - M ) a m m o ) f e n M ) m e t a n o l
Figure imgf000199_0002
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,100 g, 0,439 mmol), (2-aminofenil)metanol (0,054 g, 0,439 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,084 ml, 0,483 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a 100 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C-nHgBrCl^O+H^: 313,97, encontrado 313,60. E j e m p l o 303 : P r e p a r a c i ó n d e ( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) f e n i l ) m e t a n o l
Figure imgf000199_0003
Se mezclaron (2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)amino)fenil)metanol (0,125 g, 0,397 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,065 g, 0,477 mmol) en 1,2-dicloroetano (2 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (0,072 ml, 0,517 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,073 g, 0,397 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 140 °C durante 20 min y después se concentró. El material se purificó usando cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN) para dar material semipuro. Se purificó adicionalmente mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc) para dar 22 mg de producto. EM calc. para [C 2 gH 2 -iBrN 4 O 4 +H]+: 461,08, encontrado 460,90.
E j e m p l o 304 : P r e p a r a c i ó n d e N 2 -( 4 - a m i n o f e n i l ) - N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a y N 2 , N 2 ' -( 1 , 4 - f e n i l e n o ) b i s ( N 4 - c i c l o p r o p i l - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a )
Figure imgf000199_0004
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y benceno-1,4-diamina (0,055 g, 0,505 mmol) en butan-1-ol (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido para dar 36 mg de N2,N2-(1,4-fenileno)bis(N4-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina). El filtrado se concentró para dar 92 mg de N2-(4-aminofenil)-N4-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina. EM calc. para [C-mH-mF3N5+H]+: 310,13, encontrado 310,00. EM calc. para [C22H20FaN8+H]+: 511,18, encontrado 511,30.
E j e m p l o 305 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - d d o p r o p N - N 2 - ( q u m o x a M n - 6 - M ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t N ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000200_0001
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y quinoxalin-6-amina (0,037 g, 0,253 mmol) en ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 17 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C-iaH-iaFaNa+Hr: 347,13, encontrado 347,10.
E j e m p l o 3 0 6 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - ( ( 4 - ( d d o p r o p N a m m o ) - 6 - ( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - N ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000200_0002
Se mezclaron 2,4-dicloro-6-(trifluorometil)pirimidina (0,110 g, 0,507 mmol), ciclopropanamina (0,035 ml, 0,507 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,088 ml, 0,507 mmol) en etanol (3 ml). Se agitó a 23 °C durante 3 h y después se concentró. Se añadieron 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,082 g, 0,507 mmol) y ácido acético (0,030 g, 0,507 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min. El intermedio todavía estaba presente. Se concentró la mezcla de reacción y se añadieron 1,2-dicloroetano (4 ml) y cloruro de cinc (II) (0,069 g, 0,507 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se aislaron 20 mg de producto después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc). EM calc. para [C17H16F3N5O+H]+: 364,14, encontrado 364,20.
E j e m p l o 3 0 7 : P r e p a r a c i ó n d e N - ( 2 - ( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 - (t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 -i l ) c i c l o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Figure imgf000200_0003
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,080 g, 0,233 mmol), diacetoxipaladio (1,572 mg, 7,00 |jmol), ciclopropanocarboxamida (0,022 g, 0,257 mmol) y carbonato de cesio (0,099 g, 0,303 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se aislaron 4 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 1 sH 16 F 3 N 5 O 2 +H]+: 392,14, encontrado 392,05.
E j e m p l o 308 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i d o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o i s o q u i n o l i n a - 2 ( 1 H ) - c a r b o x i l a t o d e t e r e - b u t i l o
Figure imgf000201_0001
Matraz secado a la llama y barra de agitación. Se burbujeó nitrógeno a través de reactivos y disolventes antes del calentamiento. Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,100 g, 0,421 mmol), diacetoxipaladio (2,83 mg, 0,013 mmol), 6-amino-3,4-dihidroisoquinolina-2(1H)-carboxilato de tere-butilo (0,115 g, 0,463 mmol) y carbonato de cesio (0,178 g, 0,547 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min. Se filtró a través de Celite con MeOH y después se concentró. Se añadió acetona y se filtró el sólido; el producto estaba en el filtrado, que se concentró. Se aislaron 166 mg de producto después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc). EM calc. para [C 22 H 26 F 3 N 5 O 2 +H]+: 450,21, encontrado 450,55.
E j e m p l o 309 : P r e p a r a c i ó n d e N 4 - c i c l o p r o p i l - N 2 -( 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o i s o q u m o l m - 6 - M ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m -2 , 4 - d i a m i n a - . H C l
Figure imgf000201_0002
Se mezclaron 6-((4-(ciclopropilamino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroisoquinolina-2(1H)-carboxilato de tere-butilo (0,132 g, 0,294 mmol) y cloruro de hidrógeno en agua (0,489 ml, 1,468 mmol, 3M en agua) en metanol (1 ml). Se calentó a 60 °C durante 16 h y después se concentró. El sólido se lavó con DCM para dar 109 mg de producto. EM calc. para [C 17 H 1 sF 3 N 5 +H]+: 350,16, encontrado 350,05.
E j e m p l o 310 : P r e p a r a c i ó n d e ( 3 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 -l ) a m i n o ) p r o p i l ) c a r b a m a t o d e t e r e - b u t i l o
Figure imgf000201_0003
Se mezclaron 6-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,200 g, 0,584 mmol), 5­ aminopentanoato de tere-butilo (0,101 g, 0,584 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,102 ml, 0,584 mmol) en DMF (5 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 20 min y después se concentró. Se aislaron 242 mg de producto después de una cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-MeOH). EM calc. para [C 22 H 27 F 3 NaO 3 +H]+: 481,22, encontrado 481,55.
E j e m p l o 3 1 1 : P r e p a r a c i ó n d e N - ( d i d l o p r o p a n o d a r b o m l ) - N - ( 4 - ( ( 4 - ( d i d o p r o p i l a m m o ) - 5 - ( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 -i l ) a m m o ) f e m l ) d d o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Figure imgf000202_0001
Se mezclaron N2-(4-aminofenil)-N4-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina (0,043 g, 0,139 mmol), cloruro de ciclopropanocarbonilo (0,016 g, 0,153 mmol) y N-etil-N-isopropil propan-2-amina (0,029 ml, 0,167 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 60 °C durante 10 min. Se añadió más cloruro de ciclopropanocarbonilo (0,016 g, 0,153 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 60 °C durante 10 min. Se aislaron 10 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 22 H 22 F 3 NsO 2 +H]+: 446,18, encontrado 446,35.
E j e m p l o 312 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 4 -( ( 4 -( d i d o p r o p i l a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 -i l ) a m i n o ) f e n i l ) d i d l o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Figure imgf000202_0002
Se mezclaron N2-(4-aminofenil)-N4-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina (0,020 g, 0,065 mmol), cloruro de ciclopropanocarbonilo (6,16 pl, 0,068 mmol) y trietilamina (0,012 ml, 0,084 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 60 °C durante 10 min y después se concentró. Se aislaron 3 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 18 H 1 sF 3 N 5 O+H]+: 378,16, encontrado 378,00.
E j e m p l o 313 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( ( 3 - a m m o p r o p i l ) a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d m - 2 - i l ) a m m o ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a - H C l
Figure imgf000202_0003
Se mezclaron (3-((2-((2-oxo-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)amino)propil)carbamato de ferc-butilo (0,232 g, 0,483 mmol) y cloruro de hidrógeno, H 2 O (0,644 ml, 1,931 mmol) en metanol (2 ml). Se concentró para dar 195 mg de producto. EM calc. para [C-^H-^Fa^O+H^: 381,17, encontrado 381,10.
E j e m p l o 314 : P r e p a r a c i ó n d e 5 -( ( 4 -( c i c l o p r o p M a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) i s o m d o t m e - 1 , 3 -d i o n a
Figure imgf000203_0001
Se mezclaron 2-doro-N-cidopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,060 g, 0,253 mmol) y 5-aminoisoindolina-1,3-diona (0,041 g, 0,253 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se aisló 1 mg de producto se aisló después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-DMF al 3 % en MeCN). EM calc. para [C-i 6 H-i 2 F 3 N 5 O 2 +H]+: 364,10, encontrado 364,00.
E j e m p l o 315 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 5 - b r o m o - 2 - c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l p r o p a n a m i d a
Figure imgf000203_0002
Se mezclaron 3-hidroxi-N-metilpropanamida (0,068 g, 0,658 mmol) e hidruro sódico (0,026 g, 0,658 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a 80 °C durante 20 min y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 8 HgBrClN 3 O 2 +H]+: 293,97, encontrado 293,60.
E j e m p l o 316 : P r e p a r a c i ó n d e 3 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N -m e t i l p r o p a n a m i d a
Figure imgf000203_0003
Se mezclaron 3-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-metilpropanamida (0,175 g, 0,594 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,105 g, 0,772 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (0,083 ml, 0,594 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,109 g, 0,594 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se aislaron 31 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 17 H 21 BrN 4 O 5 +H]+: 441,08, encontrado 440,85.
E j e m p l o 317 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) a m i n o ) f e n o l
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-doropirimidin-4-il)amino)fenol (0,180 g, 0,599 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,098 g, 0,719 mmol) en 1,2-dicloroetano (4 ml). Se añadieron trietilamina (0,100 ml, 0,719 mmol) y 3,4,5-trimetoxianilina (0,110 g, 0,599 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 20 min y después se concentró. Se usó cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc) para dar material semipuro, entonces se recuperaron 19 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 1 gH 1 gBrN 4 O 4 +H]+: 447,07, encontrado 446,85.
E j e m p l o 318 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) o x i ) - 4 - m e t o x i - N -m e t i l b e n z a m i d a y 2 -( ( 5 - b r o m o - 4 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) o x i ) - 4 - m e t o x i - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000204_0001
Se mezclaron 2-hidroxi-4-metoxi-N-metilbenzamida (0,048 g, 0,267 mmol) e hidruro sódico (0,014 g, 0,347 mmol) en DMF (3 ml). Después, se añadió 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxi fenil)pirimidin-2-amina (0,100 g, 0,267 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 min, y después de concentrarse se añadió una solución de cloruro de amonio. Los extractos orgánicos se extrajeron con DCM, se secó sobre sulfato sódico y se concentró. Se recuperaron 12 mg de 2-((5-bromo-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)-4-metoxi-N-metilbenzamida y 6 mg de 2-((5-bromo-4-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-2-il)oxi)-4-metoxi-N-metilbenzamida después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 2 -iH 2 -iBrN 4 O 6 +H]+: 519,09, encontrado 519,05.
E j e m p l o 319 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 - h i d r o x i f e n i l ) p i v a l a m i d a
Figure imgf000204_0002
Se mezclaron 2-aminofenol (2 g, 18,33 mmol), cloruro de pivaloílo (2,483 ml, 20,16 mmol) e hidrogenocarbonato sódico (4,62 g, 55,0 mmol) en agua (60 ml) y acetato de etilo (50 ml). Se añadió HCl 1 M y se extrajo una vez con EtOAc y una vez con DCM. La mezcla se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró al vacío. También se formó el producto doblemente acilado. Se lavó con hexano para retirar las impurezas y se usó tal cual. EM calc. para [C 11 H 15 NO 2 +H]+: 194,12, encontrado 194,00.
E j e m p l o 320 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) p i v a l a m i d a
Figure imgf000204_0003
Se mezclaron N-(2-hidroxifenil)pivalamida (0,062 g, 0,320 mmol) e hidruro sódico (9,99 mg, 0,416 mmol) en DMF (3 ml). Después, se añadió 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil) pirimidin-2-amina (0,120 g, 0,320 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 16 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 24 H 27 BrN 4 O 5 +H]+: 531,13, encontrado 531,05.
E j e m p l o 321 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 2 -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l a m i n o ) - 5 - b r o m o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) a c e t a m i d a y 4 -( 2 - a m i n o f e n o x i ) - N -( b e n z o [ d ] [ 1 , 3 ] d i o x o l - 5 - i l ) - 5 - b r o m o p i r i m i d i n - 2 - a m i n a
Figure imgf000205_0001
Se mezclaron N-(2-((5-bromo-2-doropirimidin-4-il)oxi)fenil)acetamida (0,170 g, 0,496 mmol) y cloruro de cinc (II) (0,081 g, 0,595 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 15 min, se añadieron trietilamina (0,069 ml, 0,496 mmol) y benzo[d][1,3]dioxol-5-amina (0,068 g, 0,496 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 8 mg de N-(2-((2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-ilamino)-5-bromopirimidin-4-il)oxi)fenil)acetamida y 26 mg de 4-(2-aminofenoxi)-N-(benzo[d][1,3]dioxol-5-il)-5-bromopirimidin-2-amina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10% en MeCN). EM calc. para [C 1 gH 15 BrN 4 O 4 +H]+: 443,04, encontrado 442,85. EM calc. para [C-i 7 H-i 3 BrN 403 +H]+: 401,03, encontrado 400,80.
E j e m p l o 322 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 2 , 5 - d i c l o r o p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000205_0002
Se mezclaron 2,4,5-tricloropirimidina (0,170 g, 0,927 mmol), N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,161 ml, 0,927 mmol) y 2-hidroxi-N-metilbenzamida (0,140 g, 0,927 mmol) en n-Butanol (5 ml). Se calentó a 60 °C durante 16 h y después se concentró y se usó tal cual. EM calc. para [C 12 H 9 ChN 302 +H]+: 298,02, encontrado 297,65.
E j e m p l o 323 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) o x i ) f e m l ) - 2 , 2 , 2 -t r i f l u o r o a c e t a m i d a
Figure imgf000205_0003
Se mezclaron 4-(2-aminofenoxi)-5-bromo-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,190 g, 0,425 mmol), trietilamina (0,065 ml, 0,467 mmol) y 2,2,2-anhídrido trifluoroacético (0,059 ml, 0,425 mmol) en acetonitrilo (4,00 ml). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 10 mg de producto después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM). EM calc. para [C 19 H-i 5 BrN 404 +H]+: 443,04, encontrado 442,85. EM calc. para [C 21 H 1 sBrF 3 N 405 +H]+: 543,05, encontrado 543,00.
E j e m p l o 324 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 -( q u i n o l i n - 8 - i l o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a y 5 - b r o m o -2 -( q u i n o l i n - 8 - i l o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000206_0001
Se mezclaron quinolin-8-ol (0,046 g, 0,320 mmol) e hidruro sódico (0,017 g, 0,416 mmol) en DMF (2 ml). Después se añadió 5-bromo-4-doro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,120 g, 0,320 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 28 mg de 5-bromo-4-(quinolin-8-iloxi)-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina y 24 mg de 5-bromo-2-(quinolin-8-iloxi)-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-4-amina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10% en MeCN). EM calc. para [C 22 H-i 9 BrN 4 O 4 +H]+: 483,07, encontrado 482,90.
E j e m p l o 3 2 5 : P r e p a r a c i ó n d e 2 - ( ( 5 - b r o m o - 2 - ( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u m o M n - 6 - N ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) o x i ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000206_0002
Se mezclaron 2-((5-bromo-2-cloropirimidin-4-il)oxi)-N-metilbenzamida (0,140 g, 0,409 mmol), que se preparó como anteriormente, y cloruro de cinc (II) (0,067 g, 0,490 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml). Después de 30 min, se añadieron trietilamina (0,063 ml, 0,450 mmol) y 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,066 g, 0,409 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 130 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 32 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 21 H 1 sBrN 5 O 3 +H]+: 468,07, encontrado 467,95.
E j e m p l o 326 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 1 H - p i r r o l o [ 2 , 3 - b ] p i r i d i n - 5 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 4 - o l
Figure imgf000206_0003
Se mezclaron N-(4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-amina (0,102 g, 0,325 mmol), 2-amino-N-metilbenzamida (0,029 g, 0,195 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,057 ml, 0,325 mmol) en DMF (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadió 2:1 de agua/MeCN para precipitar un sólido, que se filtró. El filtrado se concentró y se recuperaron 20 mg de producto secundario después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C 12 HsF 3 N 5 O+H]+: 296,08, encontrado 295,85.
E j e m p l o 327 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n i l ) - N -m e t i l a c e t a m i d a
Figure imgf000207_0001
Se mezclaron 2-(2-Hidroxifenil)-N-metilacetamida (0,044 g, 0,267 mmol) e hidruro sódico (8,33 mg, 0,347 mmol) en DMF (2 ml). Después de 5 min, se añadió 5-bromo-4-doro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,100 g, 0,267 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 50 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 22 H 23 BrN 4 O 5 +H]+: 503,10, encontrado 503,00.
E j e m p l o 328 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) b e n c i l ) a c e t a m i d a
Figure imgf000207_0002
Se mezclaron 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,110 g, 0,294 mmol), N-(2-hidroxibenzil)acetamida (0,049 g, 0,294 mmol) e hidruro sódico (0,015 g, 0,382 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 31 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 22 H 23 BrN 4 O 5 +H]+: 503,10, encontrado 503,05.
E j e m p l o 329 : P r e p a r a c i ó n d e 4 -( ( 1 H - i n d o l - 7 - i l ) o x i ) - 5 - b r o m o - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 - a m i n a y 2 -( ( 1 H -i n d o l - 7 - i l ) o x i ) - 5 - b r o m o - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000207_0003
Se mezclaron 1H-indol-7-ol (0,039 g, 0,294 mmol) e hidruro sódico (0,015 g, 0,382 mmol) en DMF (3 ml). Después se añadió 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,110 g, 0,294 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 44 mg de 4-((1H-indol-7-il)oxi)-5-bromo-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina y 6 mg de 2-((1H-indol-7-il)oxi)-5-bromo-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-4-amina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 21 H-i 9 BrN 4 O 4 +H]+: 471,07, encontrado 470,95.
E j e m p l o 330 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - b r o m o - 4 -( ( 5 , 6 , 7 , 8 - t e t r a h i d r o n a f t a l e n - 1 - i l ) o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 -a m i n a y 5 - b r o m o - 2 -( ( 5 , 6 , 7 , 8 - t e t r a h i d r o n a f t a l e n - 1 - i l ) o x i ) - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000208_0001
Se mezclaron 5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-ol (0,044 g, 0,294 mmol) e hidruro sódico (0,015 g, 0,382 mmol) en DMF (3 ml). Después de 5 min, se añadió 5-bromo-4-doro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,110 g, 0,294 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 66 mg de 5-bromo-4-((5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-il)oxi)-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina y 14 mg de 5-bromo-2-((5,6,7,8-tetrahidronaftalen-1-il)oxi)-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-4-amina después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 23 H 24 BrN 3 O 4 +H]+: 486,11, encontrado 486,05.
E j e m p l o 331 : P r e p a r a c i ó n d e 4 -( 1 H - b e n z o [ d ] [ 1 , 2 , 3 ] t r i a z o M - M ) - 5 - b r o m o - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n M ) p i r i m i d m - 2 -a m i n a y 2 -( 1 H - b e n z o [ d ] [ 1 , 2 , 3 ] t r i a z o l - 1 - i l ) - 5 - b r o m o - N -( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) p i r i m i d i n - 4 - a m i n a
Figure imgf000208_0002
Se mezclaron 1H-benzo[d][1,2,3]triazol (0,035 g, 0,294 mmol) e hidruro sódico (0,015 g, 0,382 mmol) en DMF (3 ml). Después de 5 min, se añadió 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,110 g, 0,294 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 70 mg de 4-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-5-bromo-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina y 28 mg de 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-5-bromo-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-4-amina después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc). EM calc. para [C 23 H 24 BrN 3 O 4 +H]+: 486,11, encontrado 486,05.
E j e m p l o 332 : P r e p a r a c i ó n d e c i c l o p r o p i l ( 6 -( ( 4 -( c i c l o p r o p i l a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n - 2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 -d i h i d r o i s o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - i l ) m e t a n o n a
Figure imgf000208_0003
Se mezclaron HCl de N4-ciclopropil-N2-(1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina(0,018 g, 0,047 mmol), cloruro de ciclopropanocarbonilo (4,23 pl, 0,047 mmol) y trietilamina (0,026 ml, 0,187 mmol) en DMF (3 ml). Se calentó a 60 °C durante 8 h. Se añadió MeOH y se concentró. Se recuperaron 8 mg de producto después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-EtOAc). EM calc. para [C 2 -iH 22 F 3 N 5 O+H]+: 418,19, encontrado 418,00.
E j e m p l o 333 : P r e p a r a c i ó n d e N -( 3 -( ( 2 -( ( 2 - o x o - 1 , 2 , 3 , 4 - t e t r a h i d r o q u i n o l i n - 6 - i l ) a m i n o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d i n -4 - i l ) a m i n o ) p r o p i l ) c i c l o p r o p a n o c a r b o x a m i d a
Figure imgf000209_0001
Se mezclaron 6-((4-((3-aminopropil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidro quinolin-2(1H)-onaHCl (0,024 g, 0,058 mmol), cloruro de ciclopropanocarbonilo (5,22 pl, 0,058 mmol) y trietilamina (0,020 ml, 0,144 mmol) en DMF (1 ml). Se añadió MeOH y se agitó durante 1 h, y después se concentró. Se recuperaron 19 mg de producto después de la cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-MeOH). EM calc. para [C 2 -iH 23 F 3 N 6 O 2 +H]+: 449,19, encontrado 449,00.
E j e m p l o 334 : P r e p a r a c i ó n d e 6 -( ( 4 -( c i d o p r o p M a m m o ) - 5 -( t r i f l u o r o m e t M ) p i r i m i d m - 2 - M ) a m m o ) - 2 , 3 - d i h i d r o f t a l a z m -1 , 4 - d i o n a
Figure imgf000209_0002
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,055 g, 0,231 mmol) y 6-amino-2,3-dihidroftalazin-1,4-diona (0,041 g, 0,231 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 20 min y después se concentró. Se añadieron MeOH y DMF al 5 % y se filtró el sólido para dar 35 mg de producto. EM calc. para [C 16 H 13 F 3 N 6 O 2 +H]+: 379,12, encontrado 379,00.
E j e m p l o 335 : P r e p a r a c i ó n d e 1 -( 8 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i r i m i d m - 4 - N ) o x i ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 1 ( 2 H ) - i l ) e t a n - 1 - o n a y 1 - ( 8 - ( ( 5 - b r o m o - 4 - ( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e m l ) a m m o ) p i r i m i d m - 2 - N ) o x i ) - 3 , 4 -d i h i d r o q u i n o l i n - 1 ( 2 H ) - i l ) e t a n - 1 - o n a
Figure imgf000209_0003
Se mezclaron 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,100 g, 0,267 mmol), 1-(8-hidroxi-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etan-1-ona (0,051 g, 0,267 mmol) e hidruro sódico (0,014 g, 0,347 mmol) en DMF (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 min y después se concentró. Se recuperaron 52 mg de 1-(8-((5-bromo-2-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-4-il)oxi)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etan-1-ona y 36 mg de 1-(8-((5-bromo-4-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)pirimidin-2-il)oxi)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etan-1-ona después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C 24 H 25 BrN 4 O 5 +H]+: 529,11, encontrado 529,10.
E j e m p l o 336 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) f e n o l
Figure imgf000210_0001
Se mezclaron pirocatecol (0,032 g, 0,294 mmol) e hidruro sódico (0,015 g, 0,382 mmol) en DMF (2 ml). Después se añadió 5-bromo-4-doro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,110 g, 0,294 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 10 min y después se concentró. Se recuperaron 31 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-THF al 10 % en MeCN). EM calc. para [C-igH 18 BrN 3 O 5 +H]+: 448,05, encontrado 447,95.
E j e m p l o 337 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( h i d r o x i m e t i l ) - N - m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000210_0002
Se mezclaron 2-metilisoindolina-1,3-diona (1,08 g, 6,70 mmol) y BOROHIDRURO SÓDICO (0,761 g, 20,10 mmol) en 2-propanol (15 ml), tolueno (2,500 ml) y agua (2,500 ml). Se añadió HCl 1 M para inactivar el reactivo, después se concentró para retirar 2-propanol. Se extrajo dos veces con EtOAc, se secó sobre sulfato sódico y se concentró y el producto se usó tal cual. Los datos coincidieron con los informados en Tetrahedron Letters 39, (1998), 5017-5018.
E j e m p l o 338 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( ( 5 - b r o m o - 2 -( ( 3 , 4 , 5 - t r i m e t o x i f e n i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n - 4 - i l ) o x i ) m e t i l ) - N -m e t i l b e n z a m i d a
Figure imgf000210_0003
Se mezclaron 2-(hidroximetil)-N-metilbenzamida (0,044 g, 0,267 mmol) e hidruro sódico (0,014 g, 0,347 mmol) en DMF (3 ml). Después se añadió 5-bromo-4-cloro-N-(3,4,5-trimetoxifenil)pirimidin-2-amina (0,100 g, 0,267 mmol). La mezcla se sometió a microondas a 150 °C durante 10 min y después se concentró. El material se sometió a cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (DCM-MeOH) para dar un sólido semipuro, que después se lavó con acetona para dar 18 mg de producto. EM calc. para [C 22 H 23 BrN 4 O 5 +H]+: 503,10, encontrado 503,00.
E j e m p l o 339 : P r e p a r a c i ó n d e 5 - C l o r o - N 2 -( 5 - m e t o x i - 2 - m e t i l f e n i l ) - N 4 -( 2 -( 5 - m e t i l - 1 , 2 , 4 - o x a d i a z o l - 3 -i l ) f e n i l ) p i r i m i d i n - 2 , 4 - d i a m i n a
Figure imgf000210_0004
Se tomaron 2,5-dicloro-N-(2-(5-metil-1,2,4-oxadiazol-3-il)fenil)pirimidin-4-amina (0,161 g, 0,5 mmol) y 5-metoxi-2-metilanilina (0,137 g, 1 mmol) en nBuOH (5 ml) y se procesaron de acuerdo con el método general 1b. Sólido de color amarillo pálido (0,122 g, 58 %). CLEM calc. para C 21 H 19 ClN 6 O 2 [M+H]+: 423,13. Encontrado: 423,00.
E j e m p l o 340 : P r e p a r a c i ó n d e 2 -( ( 3 - b r o m o - 5 - n i t r o p i r i d i n - 2 - i l ) ( e t i l ) a m i n o ) e t a n - 1 - o l
Figure imgf000211_0001
Se mezclaron 3-bromo-2-cloro-5-nitropiridina (2 g, 8,42 mmol), trietilamina (1,174 ml, 8,42 mmol) y 2-(etilamino)etan-1 -ol (0,751 g, 8,42 mmol) en acetonitrilo (30 ml). Se calentó a 80 °C durante 14 h y después se concentró. Se recuperaron 1,76 g de producto después de la cromatografía automatizada sobre gel de sílice (DCM-EtOAc).
E j e m p l o 3 4 1 : P r e p a r a c i ó n d e 4 - e t i l - 7 - n i t r o - 3 , 4 - d i h i d r o - 2 H - p i r i d o [ 3 , 2 - b ] [ 1 , 4 ] o x a z i n a
Figure imgf000211_0002
Se mezclaron 2-((3-bromo-5-nitropiridin-2-il)(etil)amino)etan-1-ol (0,182 g, 0,627 mmol), 2-(di-terc-butilfosfanil)-N,N-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (0,013 g, 0,038 mmol), Pd2(dba)3 (0,017 g, 0,019 mmol) y 2-metilpropan-2-olato sódico (0,090 g, 0,941 mmol) en tolueno (5 ml). Se calentó a 100 °C durante 16 h y después se concentró. Se añadió agua y se extrajo tres veces con DCM y una vez con EtOAc. Se secó sobre sulfato sódico y se concentró. El material se sometió a cromatografía ultrarrápida sobre alúmina (DCM) para dar 51 mg del producto. CLEM calc. para [CgHuNaOa+H]*: 210,09, encontrado: 210,21.
E j e m p l o 342 : P r e p a r a c i ó n d e 4 - e t i l - 3 , 4 - d i h i d r o - 2 H - p i r i d o [ 3 , 2 - b ] [ 1 , 4 ] o x a z i n - 7 - a m i n a
Figure imgf000211_0003
Se mezclaron 4-etil-7-nitro-3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazina (0,051 g, 0,244 mmol) y paladio (2,59 mg, 0,024 mmol) en metanol (3 ml). Se añadió un globo de hidrógeno y se agitó durante 2 d, después se filtró a través de Celite con DCM y MeOH y se concentró para dar 47 mg de producto que se usó tal cual. CLEM calc. para [CgH-nNaOa+H]*: 210,09, encontrado: 210,21.
E j e m p l o 3 4 3 : P r e p a r a c i ó n d e 6 - ( ( 5 - b r o m o - 4 - ( ( 4 - e t i l - 3 , 4 - d i h i d r o - 2 H - p i r i d o [ 3 , 2 - b ] [ 1 , 4 ] o x a z i n - 7 - i l ) a m i n o ) p i r i m i d i n -2 - i l ) a m i n o ) - 3 , 4 - d i h i d r o q u i n o l i n - 2 ( 1 H ) - o n a
Figure imgf000211_0004
Se mezclaron 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (0,051 g, 0,223 mmol), 4-etil-3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-7- amina (0,04 g, 0,223 mmol) y N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,039 ml, 0,223 mmol) en acetonitrilo (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 100 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se añadió 6-amino-3,4-dihidroquinolin-2(1H)-ona (0,032 g, 0,200 mmol) junto con ácido acético (1 ml). La mezcla se sometió a microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró. Se recuperaron 5 mg de producto después de la HPLC de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [Cz>H 22 BrN 7 O 2 +H]+: 496,11, encontrado 496,32.
Ejemplo 344: Preparación de N4-ciclopropil-N2-(4-etil-3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b][1,4] oxazin-7-M)-5-(trifluorometil)pirimidin-2,4-diamina
Figure imgf000212_0001
Se mezclaron 2-cloro-N-ciclopropil-5-(trifluorometil)pirimidin-4-amina (0,120 g, 0,505 mmol) y 4-etil-3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-7-amina (0,091 g, 0,505 mmol) en ácido acético (2 ml). La mezcla se sometió a microondas a 110 °C durante 10 minutos y después se concentró. Se recuperaron 76 mg de producto después de la cromatografía automatizada de fase inversa (agua-MeCN). EM calc. para [C-^H-^Fa^O+H^: 381,17, encontrado 381,33.
En el presente documento se describen ejemplos adicionales:
Figure imgf000212_0002
continuación
Figure imgf000213_0001
(continuación)
Figure imgf000214_0001
E j e m p l o 357 :
M é t o d o s
Plásmidos
El ADNc que codifica la Atg13 humana (KIAA0652/AB014552) se obtuvo del Kazusa DNA Research Institute en Japón. Los ADNc para las construcciones FIP200 humano, ULK1 de ratón y ULK2 de ratón se obtuvieron de Open Biosystems (clones 3908134, 6834534 y 5709559 respectivamente). Atg101 humano, VPS34 humano, Ambral humano y Beclina-1 humana se obtuvieron de Invitrogen. El ADNc para Sintenina-1 de ratón se clonó a partir de una biblioteca de ADNc preparada a partir de fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) y se verificó la secuencia para que coincidiera con la secuencia de la variante de transcripción 1 de Sintenina-1 de ratón (NM_001098227.1).
Los sitios de etiqueta Flag y attL1 (para la reacción de BP) se amplificaron por PCR usando el procedimiento convencional. Los ADNc se subclonaron en pDONR221 con clonasa BP (Invitrogen) y se realizó mutagénesis dirigida al sitio usando Quik-Change II XL (Stratagene). La quinasa muerta ULK1 se logró mediante una mutación K46I. La quinasa muerta VPS34 se logró mediante la doble mutación D747N/N748K. Los alelos de tipo silvestre y mutantes en pDONR221 se secuenciaron en su totalidad para verificar que no se introdujeron mutaciones adicionales durante la PCR o las etapas de mutagénesis y después se colocaron en el vector de expresión de mamíferos pcDNA3 Myc o Flag o pcDNA6.2 V5 dest (Invitrogen) o el vector de destino retrovírico pQCXIN (Addgene 17399) por reacción LR (Invitrogen). pMXspuro-GFP-DFCPI fue un amable obsequio de Noboru Mizushima y pEGFP-p40PX fue un amable obsequio de Seth Field (UCSD).
Anticuerpos y reactivos
Anticuerpos de señalización celular usados: 4EBP-1 total (n.° 9452), Beclina total (n.° 3495), Parp (n.° 9542), Atg13 total (n.° 6940), pAMPK Thr172 (n.° 2535), AMPK alfal total (n.° 2532), pACC Ser79 (n.° 3661), ACC total (n.° 4190), pAurora (n.° 2914), pRaptor Ser792 (n.° 2083), raptor total (n.° 4978), fosfo ULK1 ser555 (n.° 5869), pS6 (n.° 4858), Myc (n.° 2278), LC3B (n.° 3868), VPS34 total (n.° 4263), pJak2 (n.° 4406). El anticuerpo fosfo VPS34 ser249 fue desarrollado en colaboración con Gary Kasof en Cell Signaling Technology.
Anticuerpos Abgent usados: gabarap (PM037). pFAK Y397 de Abcam (ab4803). FAK total de Epitomics (2146-1). Anticuerpos Sigma usados: ULK1 total (A7481) tubulina (T5168) y Flag policlonal (F7425). Anticuerpo antisecuestrosoma p62 de cobaya de Progen, Heidelberg Alemania (03-GPP62-C). pBeclina-1 ser15 de Abbiotec (254515).
EBSS (14155-063) y medio sin glucosa (11966-025) de Gibco/Life Technologies. Clorocina de Sigma. AZD-8055 (A-1008) de Active Biochem. Kit de detección de apoptosis de anexina V-PE de BD Biosciences. Phos-tag™ AAL-107 de NARD (n.° 304-93521). Ad5-CMV-Cre adquirido del núcleo adenovírico de la Universidad de lowa.
Cultivo celular, transfecciones transitorias, lisis celular y análisis de cambio de movilidad Phos-tag™
Se cultivaron células de fibroblastos embrionarios de ratón (MEF) de tipo silvestre inmortalizadas HEK293T, U87MG, PC3, A549 y SV40 en DMEM (Mediatech, Manassas, VA) que contiene suero bovino fetal al 10 % (Hyclone, Thermo Scientific) y penicilina/estreptomicina a 37 °C en CO 2 al 10%. Los FAK ME fueron un amable obsequio de David Schlaepfer (UCSD), MEF ULK1 KO y ULK1/2 DKO de Craig Thompson (MSKCC) VPS34flox/flox MEF de Wei-Xing Zong (SUNYSB) y MEF Atg5 de Jay Debnath (UCSF).
Para la expresión transitoria en HEK293T, las células se transfectaron con 2 ug de cada plásmido de ADN por placa de 6 cm usando Lipofectamine 2000 (Invitrogen) siguiendo el protocolo del fabricante. Las células se recogieron 24 horas después de la transfección y se enjuagaron una vez con PBS enfriado con hielo y se lisaron en tampón de lisis SDS hirviendo (Tris 10 mM pH 7,5, NaCl 100 mM, SDS al 1 %). Después de la trituración, los lisados se equilibraron para los niveles de proteína usando el método BCA (Pierce) y se resolvieron en geles SDS-PAGE Phostag ™ del 8 al 15 % de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Resumiendo, Phos-tag™ AAL-107 (NARD n.° 304-93521) se añadió a la mezcla de acriamida SDS-PAGE a una concentración final de 50 pM junto con NMCh a una concentración final de 100 pM. Antes de la transferencia, el gel se sumerge en tampón de transferencia que contiene 1 mmol/l de EDTA durante 30 min con agitación suave para retirar los iones de manganeso del gel. El gel se transfiere a una membrana de PVDF y se sonda con los anticuerpos indicados de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Preparación lenti- y retro-vírica e infección vírica
La transducción de ARNhc lentivírico y la expresión de genes retrovíricos se realizaron como se describió anteriormente. Resumiendo, la construcción pQCXIN Flag ULK1 se transfectó junto con el plásmido de empaquetamiento anfo en 293T en crecimiento. Los sobrenadantes que contenían virus se recogieron 48 horas después de la transfección, se filtraron para retirar las células y se infectaron ULK1-/-MEF o A549 diana en presencia de polibreno. 24 horas después, las células se seleccionaron con neomcina. Los vectores pLKO ARNhc que codifican ARNhc se transfectaron en células HEK293T con plásmidos de empaquetamiento lentivíricos vsvg, GAG/pol y REV usando Lipofectamine 2000. Los virus se recogieron 48 horas después de la transfección y los MEF (ARNhc n.° 93 contra mULK2) y U2OS (ARNhc n.° 8 y n.° 91 contra hULK1 y hULK2 respectivamente) que ya expresaban Myc ULK1 de manera estable se infectaron con los virus recolectados durante 4 h en presencia de polibreno para atenuar la proteína humana endógena, pero no Myc ULK1, que es de ratón. Ensayos de quinasa ULK1
Los ensayos de Gama-32P para medir la actividad de la quinasa ULK1 se realizaron como se describió anteriormente. Resumiendo, Flag ULK1 se transfectó en células HEK293T y 20 horas después se trató como se indica. El inmunoprecipitado se lavó en tampón IP 3 veces y se lavó en tampón quinasa (MOPS 25 mM, pH 7,5, EGTA 1 mM, Na 3 VO 4 0,1 mM, MgCh 15 mM). Se añadió ATP frío y caliente a una concentración final de 100 pM. Como sustratos, GST o la proteína recombinante GST-Atg101 purificada a partir de E. coli se usaron a 1 pg para cada reacción. Las reacciones se hirvieron, se corrieron en el gel SDS page. El gel se secó y se tomaron imágenes utilizando el software Phospholmager. Para ensayos en frío para evaluar ULK1, Flag ULK1 que se sobreexpresó transitoriamente y se inmunoprecipitó a partir de células HEK293T. Las reacciones se corrieron en gel de SDS page, se transfirieron a una membrana de PVDF y se secaron para los niveles totales.
Microscopía de fluorescencia
vps34floxl/flox MEF se reconstituyeron con Flag-VPS34 y p40FX o GFP-DFCP1. 48 horas después de la infección con adenovirus que expresan Cre recombinasa (MOI de 100), las células se sembraron en cubreobjetos de vidrio a una densidad de 3*105 células por pocilio en placas de cultivo de tejidos de 6 pocilios. 18 h después, las células se fijaron en PFA al 4 % en PBS durante 10 minutos y se permeabilizaron en Triton al 0,2 % en PBS durante 10 minutos. Se usaron los siguientes anticuerpos primarios: epítopo anti-Myc de ratón y anticuerpo LC3B XP (2276 y 3868 respectivamente, Cell Signaling Technologies). Los anticuerpos secundarios fueron anti-conejo Alexa488 y anti-ratón Alexa594 (Molecular Probes, 1:1000. Las células se fijaron después y se contratiñeron con DAPI. Los cubreobjetos se montaron en FluoromountG (SouthernBiothech). Las imágenes se adquirieron en un microscopio de epifluorescencia Zeiss Axioplan2 acoplado al software Openlab. Las imágenes confocales del mitotracker se tomaron en un microscopio confocal de barrido láser Zeiss LSM 710. Se adquirieron 10 campos aleatorios por condición utilizando el objetivo de 100x y las imágenes representativas que se muestran. Los cubreobjetos de vidrio se montaron directamente en la placa con FluoromountG y las imágenes se tomaron en el microscopio de epifluorescencia Zeiss Axioplan2.
Detección de bibliotecas de péptidos
Las mezclas de péptidos (50 mM) se incubaron durante 2 horas a 30 °C en placas de varios pocillos en presencia de la quinasa indicada en h Ep ES 50 mM, pH 7,4, MgCh 25 mM, DTT 0,25 mM, b-glicerofosfato 12,5 mM, EGTA 5 mM, EDTA 2 mM, Tween 20 al 0,1 % y ATP 50 mM (0,03 mCi/ml). Se transfirieron alícuotas de cada reacción a una membrana recubierta de estreptavidina (Promega), que se inactivó, se lavó y se secó como se ha descrito anteriormente. Las membranas se expusieron a una pantalla de imágenes de fósforo para cuantificar la incorporación del radiomarcador. Los mapas de calor se generaron usando Microsoft Excel.
Espectrometría de masas
Myc ULK1 sobreexpresado en células 293T se trató con cualquiera de vehículo, A769662 o fenformina, IP'd con anticuerpo anti Myc (Cell Signaling), se corrieron en el gel SDS page y se tiñeron con Coomassie. Se cortaron las bandas del gel correspondientes a ULK1 y se sometieron a reducción con ditiotreitol, alquilación con yodoacetamida y digestión en gel con tripsina o quimotripsina durante la noche a pH 8,3, seguido de espectrometría de masas en tándem/microcapilar de fase inversa (CL/Em /EM). CL/EM/EM se llevó a cabo usando un HPLC de nanoflujo Easy-nLC (Proxeon Biosciences) con una columna C-is 75 pm id * 15 cm autoempaquetada acoplada a un espectrómetro de masas LTQ-Orbitrap XL (Thermo Scientific) en el modo de adquisición dependiente de datos y de iones positivos a 300 nl/min. Los iones peptídicos de los sitios de fosforilación predichos de AMPK también se seleccionaron en modo EM/EM para análisis cuantitativos. Los espectros de EM/EM recopilados a través de la disociación inducida por colisión en la trampa de iones se compararon con la diana concatenada y el señuelo (invertido) ULK1 de entrada única y las bases de datos completas de proteínas Swiss-Prot usando Sequest (Proteomics Browser Software, Thermo Scientific) con modificaciones diferenciales para fosforilación de Ser/Thr/Tyr (+79,97) y artefactos de procesamiento de muestras Oxidación de Met (+15,99), desamidación de Asn y Gln (+0,984) y alquilación de Cys (+57,02). Las secuencias peptídicas fosforiladas y no fosforiladas se identificaron si inicialmente superaban los siguientes umbrales de puntuación de Sequest frente a la base de datos diana: iones 1+, Xcorr > 2,0 Sf > 0,4, P > 5; iones 2+, Xcorr > 2,0, Sf > 0,4, P > 5; iones 3+, Xcorr > 2,60, Sf > 0,4, P > 5 contra la base de datos de proteínas diana. Los espectros de EM/EM que pasan se inspeccionaron manualmente para asegurarse de que todos los iones de fragmentos b - e y - se alineen con la secuencia asignada y los sitios de modificación. La determinación de los sitios exactos de fosforilación se ayudó usando Fuzzylons y GraphMod y los mapas de sitios de fosforilación se crearon usando el software ProteinReport (Proteomics Browser Software suite, Thermo Scientific). Las tasas de descubrimiento falso (FDR) de mutaciones de péptidos (fosforilados y no fosforilados) se estimaron por debajo del 1,5 % según las mutaciones de la base de datos invertida.
Análisis de apoptosis - Transferencia Western y citometría de flujo
Se sembraron células A549 (ATCC n.° CCL185) y MEF a una concentración de 2,5 x 105 células/ml (es decir, 750.000 células por placa de 6 cm), se cultivaron durante la noche (18 horas) y se trataron como se indica en las leyendas de las figuras. A menos que se indique de otra manera, "inanición" es EBSS y "control" es DMEM con suero completo para los puntos de tiempo indicados. Las muestras para la transferencia Western se lavaron una vez en PBS enfriado con hielo 1x y se lisaron en tampón de lisis SDS hirviendo (Tris 10 mM pH 7,5, NaCl 100 mM, SDS al 1 %). Después de la trituración, los lisados se equilibraron para los niveles de proteína usando el método BCA (Pierce) y se resolvieron en geles SDS-PAGE del 8 al 15 %, dependiendo del tamaño de la proteína. Las membranas de PVDF se probaron con los anticuerpos indicados durante la noche de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Para el análisis por citometría de flujo, las células se recogieron en el punto de tiempo apropiado, se lavaron una vez en PBS, se tripsinizaron y se sedimentaron. Para la tinción de Anexina V, las células se lavaron en tampón de anexina V 1x y se trataron como se describe en el protocolo de tinción de anexina V (BD Pharmingen, San Diego, CA). Resumiendo, las células se resuspendieron en tampón de anexina V a una concentración de un millón por ml, después se tiñeron 100.000 células con 5 pl de anticuerpo de anexina V conjugado con ficoeritrina (PE) (BD Pharmingen, San Diego, CA) y 5 pl de 7-amino-actinomicina D (7AAD) y después se incubó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después se añadieron 400 pl de tampón de anexina V a cada muestra con mezcla suave. Las células teñidas se analizaron usando un citómetro de flujo FACScan (Becton Dickinson, San José, CA). Los datos de citometría de flujo se analizaron utilizando el software FlowJo 8.6 (Tree Star Inc., Ashland, OR).
Perfilado de selectividad
Los ensayos de perfiles de especificidad de inhibidores de quinasas se realizaron por primera vez usando el ensayo de unión de competición DiscoveRx KINOMEscan contra un panel de 456 quinasas www.discoverx.com) usando compuesto 141 pM. Las quinasas que potencialmente interactuaron con el compuesto 14 (inhibidos a menos del 10 % del control DMSO) se probaron después en ensayos de quinasa in vitro con una curva de dosis de compuesto 14 para monitorizar la actividad enzimática y determinar las curvas de CI50 usando Biología de Reacción.
Análisis
Determinación del sitio de fosforilación consenso de la quinasa ULK1
Para identificar novedosos sustratos de ULK1 que puedan ser importantes para su función, los presentes inventores identificaron un motivo de consenso de sitio de fosforilación de ULK1 óptimo usando bibliotecas de péptidos degenerados en matriz, como han hecho anteriormente para AMPK. Para generar ULK1 activo para estos experimentos, ULK1 etiquetado con epítopo se coexpresó con sus subunidades FIP200 y Atg13 en células HEK293T y el péptido se eluyó de la resina de afinidad. Estudios previos han demostrado que se requiere la asociación de FIP200 y Atg13 para la actividad adecuada de ULK1. Para examinar la actividad quinasa in vitro de los presentes complejos ULK1/FIP200/Atg13 inmunoprecipitados, los presentes inventores utilizaron Atg13 como un sustrato de quinasa in vitro, ya que es un sustrato de ULK1 conservado a lo largo de la evolución y uno de los primeros sustratos de ULK1 informados en células de mamíferos. El complejo ULK1 purificado exhibió una fuerte actividad quinasa hacia Atg13 en una forma de respuesta a la dosis. Esta fuente de complejo ULK1 purificado se sometió a ensayos de quinasa in vitro en bibliotecas de péptidos degenerados ordenados, revelando la transferencia selectiva de 32y-ATP a bibliotecas de péptidos específicas que reflejan las preferencias de secuencia de ULK1 hacia sus sustratos.
La especificidad de la secuencia del motivo del sustrato de ULK1 que los presentes inventores determinaron (FIGURA 4A) coincide extremadamente bien con los datos recientes sobre el ortólogo de levadura de ULK1, Atg1, pero es bastante singular en comparación con la mayoría de las quinasas estudiadas hasta la fecha. En particular, ULK1 prefiere restos hidrófobos en la posición -3, particularmente metionina y leucina. Además, los restos hidrófobos, especialmente los restos voluminosos como la fenilalanina y la tirosina están enriquecidos en la posición 1, correlacionándose bien con el motivo óptimo de Atg1 (FIGURA 4B). Los presentes inventores generaron un péptido óptimo, Ulktido, basado en la secuencia consenso de sustrato ULK1 óptima, validando su uso eficiente como un sustituto de la actividad de la quinasa ULK1 in vitro (FIGURA 4B). Comenzando con este péptido, se probaron las sustituciones en restos clave incluyendo las posiciones -3 y 1 para determinar la actividad como sustrato en unos ensayos de quinasa in vitro que revelan que ambas posiciones son importantes para una especificidad de secuencia óptima (FIGURA 4D).
Identificación de novedosos sustratos ULK1
Se usó una matriz de las selectividades específicas de posición de ULK1 (FIGURA 4B) para buscar bioinformáticamente en el proteoma humano sitios que coincidieran estrechamente con el consenso de sustrato de ULK1. Los presentes inventores se centraron primero en aquellos sustratos candidatos con roles altamente conservados bien establecidos en la autofagia. Para definir los sitios de fosforilación de ULK1 in vivo, los presentes inventores aprovecharon el hecho de que ULK1 de tipo silvestre es constitutivamente activo cuando se sobreexpresa, por lo tanto, compararon eventos de fosforilación global en objetivos candidatos etiquetados con epítopo cuando se coexpresan con ULK1 tipo silvestre o quinasa muerta en células HEK293T. El uso de espectrometría de masas para determinar todos los fosfopéptidos en proteínas candidatas en estas condiciones reveló que varias proteínas candidatas que tenían múltiples sitios de consenso de ULK1 contenían péptidos que estaban altamente fosforilados en presencia de ULK1 de tipo silvestre pero no de quinasa muerta. Centrándose en las proteínas centrales de autofagia que tienen un sitio de fosforilación ULK1 candidato de consenso, fue notable que ninguno de los componentes ATG en dirección 3' contenía este consenso (por ejemplo, ATG5, ATG7, ATG3, ATG12), sin embargo, muchos de los componentes en dirección 5' (FIP200, ATG13, ATG14, Beclina) llevaban dichas secuencias. Los presentes inventores primero se enfocaron en los componentes del propio complejo de quinasa ULK1, incluyendo FIP200, ATG13 y ATG101.
Atg101 se identificó por primera vez mediante espectrometría de masas en ULK1 y se descubrió que codifica un componente integral altamente conservado del complejo ULK1-AT13-FIP200 en inmunoprecipitaciones de células de mamíferos. Se descubrió que ATG101 se une directamente a Atg13 y es fundamental para la estabilización de Atg13 y su estimulación resultante de la actividad de la quinasa ULK1. Para mapear posibles eventos de fosforilación dependientes de ULK1 en Atg101, los presentes inventores coexpresaron ATG101 marcado con FLAG con ULK1 de tipo silvestre o quinasa muerta y realizaron un análisis EM/EM del péptido total en los inmunoprecipitados FLAG-Atg101 para mapear los sitios de fosforilación total en Atg101 en las dos condiciones. Los presentes inventores observaron que dos sitios de serina específicos (Ser11, Ser203) dentro de Atg101 humana se fosforilaron métricamente de forma estequiométrica en células que portan un ULK1 de tipo silvestre pero no en células que coexpresan ULK1 quinasa muerta (FIGURA 5A). En particular, estos dos sitios de fosforilación dependientes de ULK1 se ajustan bien al motivo de sustrato óptimo de ULK1, lo que sugiere que pueden ser sustratos directos de ULK1 in vivo. Para explorar más a fondo la fosforilación de ULK1 in vivo, los presentes inventores examinaron su migración en un gel Phos-tag SDS-PAGE, que usa un complejo metálico dinuclear de unión a fosfato para acentuar los cambios de movilidad en proteínas que contienen eventos de fosforilación. Comparando el patrón de ATG101 en un gel que contiene Phostag cuando se sobreexpresa en células HEK293 con controles de vector o ULK1 de tipo silvestre o quinasa muerta, reveló un cambio de movilidad robusto indicativo de fosforilación (FIGURA 5A, panel inferior). La mutación de ATG101 Ser11 eliminó gran parte del cambio de movilidad, que se mejoró aún más en un doble mutante Ser11/Ser203, corroborando así su identificación como potencial dependiente de ULK1 por espectrometría de masas. Después los presentes inventores realizaron un análisis similar de los eventos de fosforilación de FIP200 y ATG13, descubriendo múltiples sitios de serina en FIP200 y Atg13 que llevan el consenso de sustrato ULK1 cuya fosforilación fue inducida por u LK1 sobreexpresado in vivo. (Figuras 10A-10C)
A continuación los presentes inventores examinaron los componentes del complejo Beclina/Vps34 que se encuentra en dirección 3' del complejo ULK1 en el inicio de la autofagia. Aquí los presentes inventores identificaron múltiples serinas en Beclina que se ajustan al consenso Ulk1 óptimo y contribuyen al cambio de movilidad de Beclina en geles Phostag (Figura 5C). Uno de estos sitios, Ser15, se descubrió recientemente y se informó que desempeña un papel conservado en la inducción de la autofagia. Los presentes datos que examinan la movilidad de Beclina en geles Phostag sugieren que cuando se coexpresa con ULK1 activo, solo cuando se suprimen tres serinas (Ser15, Ser30, Ser337), se reduce la movilidad a niveles de control. El examen de otro componente del complejo Beclina, Ambral reveló múltiples eventos de fosforilación dependientes de ULK1 in vivo, lo que sugiere que muchos componentes del complejo Beclina-Vps34 pueden ser la diana de ULK1. (FIGURA 10C) Finalmente, los presentes inventores examinaron un interactor ULK1 conocido, Sintenina-1, que también se informó recientemente como un sustrato ULK1. Aquí los presentes inventores encontraron que el sitio de fosforilación in vitro informado anteriormente, Ser6, junto con un segundo sitio Ser61, son responsables de la movilidad alterada de Sintenina-1 en presencia de ULK1 in vivo (FIGURA 5E). De manera notable, ambos sitios coinciden con el consenso ULK1 que los presentes inventores definieron usando bibliotecas de péptidos.
A diferencia de todos estos sustratos que contienen entre 2 y 4 sitios de fosforilación dependientes de ULK1, solo se encontró una sola proteína con un sitio aparentemente único regulado: Vps34. La Ser249 altamente conservada de Vps34 se fosforiló estequiométricamente en células HEK293 cuando se coexpresó con ULK1 de tipo silvestre pero no quinasa muerta (FIGURA 6A-6B). Los ensayos de quinasa in vitro que usan Vps34 quinasa muerta como sustrato revelaron que una sola sustitución de serina por alanina en Ser249 abolió la fosforilación in vitro de Vps34 por ULK1 (FIGURA 6C), que fue paralela a la abolición de un cambio de movilidad significativo de la proteína Vps34 con el mutante Ser249Ala incluso en un gel SDS-PAGE normal cuando se coexpresa con ULK1 (FIGURA 6D).
Los presentes inventores exploraron la función potencial para la fosforilación de Vps34 por ULK1 mediante la introducción de mutantes no fosforilables (Ser249Ala) o fosfomiméticos (Ser49Asp) en fibroblastos embrionarios murinos floxed Vps34 condicionales. Después de corroborar primero el requisito de Vps34 para la autofagia adecuada y la viabilidad celular final, los presentes inventores probaron los efectos de los mutantes en cuatro ensayos de la función Vps34 en autofagia: recambio de LC3 y p62 en MEF después de la inanición, producción de PI3P in vivo según lo detectado por la inmunolocalización de p40FX-GFP, formación de autofagosoma detectada por inmunolocalización de GFP-DFCP1 in vivo, viabilidad celular después de la inanición y el recambio de EGFR como una medida de la función general de Vps34 independiente de la autofagia. Vps34 Ser249 no pareció controlar ninguna de estas actividades en las condiciones que los presentes inventores examinaron. Dado que ULK1 también regula múltiples eventos de fosforilación en Beclina y Ambral al mismo tiempo que induce Ser249, esto sugiere que la suma de los efectos de Ulk1 en los diferentes subcomplejos Beclina-Vps34 será una serie de eventos altamente regulados que requieren más estudio.
A continuación los presentes inventores desarrollaron un anticuerpo fosfoespecífico para Vps34 Ser249, cuya señal se aumentó cuando ULK1 o ULK2, pero no ULK3, se coexpresó con un mutante Ser-249Ala de tipo silvestre pero no en células HEK293T (FIGURA 6E). Usando este anticuerpo fósforo-Ser249 Vps34, a continuación, los presentes inventores compararon directamente su sensibilidad con un anticuerpo fosfo-Ser15 Beclina disponible en el mercado, demostrando la inducción paralela de cada sitio cuando se coexpresó la quinasa ULK1 de tipo silvestre pero no en las células HEK293T (FIGURA 6F). De manera notable, los restos que flanquean Ser15 de Beclina y Ser249 de Vps34 comparten una amplia homología de secuencia, más allá de los sitios selectivos de ULK1 en -3 y 1 (FIGURA 6F).
Desarrollo de novedosos inhibidores de ULK1 competitivos con ATP
Para examinar adicionalmente cómo ULK1 regula la autofagia, los presentes inventores buscaron identificar inhibidores de quinasa competitivos de ATP de molécula pequeña de ULK1. Explorando una biblioteca de compuestos químicos para inhibidores de la actividad de la quinasa ULK1 in vitro, los presentes inventores identificaron un compuesto líder que se elaboró aún más a través de un esfuerzo de química médica para producir el compuesto 14. El análisis de respuesta a dosis del compuesto 14 reveló una CI50 in vitro de 107 nM para ULK1 y 711 nM para la actividad quinasa de ULK2 (FIGURA 7A). Para caracterizar aún más la capacidad del compuesto 14 y derivados relacionados de inhibir ULK1 en células, los presentes inventores probaron la capacidad de estos compuestos para inhibir la fosforilación de Vps34 Ser249 cuando Vps34 etiquetado con epítopo se coexpresó en células HEK293T con un ADNc de ULK1 de tipo silvestre. Explorando 40 compuestos, los presentes inventores descubrieron que el compuesto 14 inhibió P-Vps34 en Vps34 sobreexpresado cuando se usó a ~5 pM (FIGURA 7B). A continuación los presentes inventores examinaron la sensibilidad de la fosforilación de Vps34 Serina 249 frente a Beclina Serina 15 a dos inhibidores de ULK1 estructuralmente distintos, cuando se introdujeron los ADNc que portaban cada uno en las células HEK293T. Los presentes inventores descubrieron que en HEK293T, el compuesto 14 inhibió Beclina Ser15 y Vps34 Ser249 en grados comparables (FIGURA 7C), así como colapsó el cambio de banda que experimentan la sintenina-1 y la Atg13 sobreexpresadas cuando se coexpresan con ULK1 de tipo silvestre. (FIGURA 11A).
Después los presentes inventores examinaron si el compuesto 14 inhibe la actividad endógena de ULK1. Para activar ULK1 endógeno, los presentes inventores trataron los MEF con medios de privación de aminoácidos (solución salina equilibrada de Earle [EBSS]) o los inhibidores competitivos de mTOR ATP INK128 o AZD8055. En TS MEF, los presentes inventores observaron un cambio de movilidad en Beclina1 y Atg13 endógenos en respuesta a los medios de inanición de EBSS o los inhibidores catalíticos de mTOR, que fue abolido en los MEF deficientes en Ulk1/2 (FIGURA 7D). El cambio de movilidad inducido por EBSS y el inhibidor de mTOR en Beclina1 y Atg13 fue inhibido por el tratamiento conjunto con 6965 en TS m Ef (FIGURA 7D). Ni Beclina1 ni Atg13 experimentaron un cambio de movilidad tras el tratamiento con EBSS o los inhibidores catalíticos de mTOR en MEF con deficiencia de Ulk1/2, y no se observó una disminución adicional en su movilidad basal con el tratamiento conjunto con 6965. En determinadas realizaciones, los cambios de movilidad observados en Beclina1 y Atg13 endógenos inducidos por inhibidores de mTOR y medios de inanición reflejan la fosforilación de Beclin1/Atg13 endógeno por ULK1/2 endógeno, ya que solo se producen en MEF TS pero no en deficientes en Ulk1/2.
El compuesto 14 es un inhibidor de ULK1 altamente selectivo
A continuación los presentes inventores examinaron la especificidad del compuesto 14 usando el panel DiscoverRx KINOMEscan de 456 quinasas humanas purificadas y el posterior ensayo de unión competitiva. Como se observa en la FIGURA 7D, el compuesto 14 era muy selectivo, inhibiendo solamente 8 quinasas >95 % y 19 quinasas > 90 % cuando se probó a 10 pM. El índice de selectividad S(35) del compuesto 14 = 0,123 donde S(35) = (número de quinasas no mutantes con % Ctrl <35)/(número de quinasas no mutantes probadas), medido por el % del kinoma inhibido por debajo del 35 % del control (FIGURA 11B), que es comparable a varios inhibidores de quinasa de uso generalizado en oncología clínica, incluyendo Gleevac y Lapatinib y más selectivo que varios otros inhibidores de la quinasa en uso clínico oncológico incluyendo Erlotinib, Sorafenib y Dasatinib. De manera notable, por este ensayo de competición de bolsillo de unión a ATP, el compuesto 14 inhibió FAK, Src, Abl y Jak3 con una CI50 similar a Ulk1 (FIGURA 7D), que es notable como otro que ULK1, todas las demás quinasas afectadas por el compuesto actúan sobre los restos de tirosina.
Para usar una medida mejor establecida de la selectividad del compuesto 14 contra sus quinasas de unión superior, los presentes inventores examinaron las curvas de dosis-respuesta para su inhibición de estas quinasas en un ensayo de quinasa in vitro clásico. Aquí los presentes inventores probaron las diez quinasas más suprimidas por el compuesto 1 4 por el ensayo de unión de ATP. A partir de este análisis, ULK1, FAK, JAK2 y AuroraA quinasa surgieron inhibidas de manera equivalente por el compuesto 14 . Es importante tener en cuenta que, aunque el compuesto 14 inhibe estas 4 quinasas de manera bastante equivalente en todos los diferentes ensayos que los presentes inventores han examinado, esto es aún mayor selectividad que todos excepto un puñado de inhibidores de quinasas competitivos con ATP ampliamente utilizados en oncología clínica en la actualidad. A continuación los presentes inventores examinaron la capacidad del compuesto 14 de suprimir la señalización posterior de diversas quinasas en células en cultivo. Los presentes inventores descubrieron que a 1 pM, el compuesto 14 redujo la señalización de FAK y AuroraA quinasa en un grado comparable a la inhibición de Ulkl en células HEK293. De forma similar, el compuesto 14 inhibió FAK y AuroraA de manera comparable a ULK1 en MEF también.
SBI-0206965 suprime la autofagia inducida por la inhibición de mTOR y esto es fenocopiado por ARNip de ULK1
Para probar la capacidad del compuesto 14 de bloquear la autofagia y la supervivencia celular, los estudios iniciales se realizaron en células de cáncer de pulmón A549, que son muy sensibles a la inhibición de mTOR. Los presentes inventores observaron que el inhibidor catalítico de la mTOR quinasa competitivo con ATP AZD8055 indujo una autofagia robusta como se visualiza mediante la acumulación del colorante de autofagia Cyto-ID y este efecto fue fuertemente suprimido por el tratamiento con 6965 5 pM (FIGURA 9E). A continuación, los presentes inventores evaluaron genéticamente el requerimiento de ULK1 frente a otras quinasas inhibidas por el compuesto 14 para inducir la autofagia después de la inhibición farmacológica de mTOR. Se estableció un método de microscopía sólido de alto rendimiento para cuantificar los puntos GFP-LC3 usando una línea celular de cáncer de próstata PC3 que expresa de manera estable una construcción GFP-LC3. Usando este ensayo, los presentes inventores realizaron un análisis de iARN enfocado de las 20 quinasas principales identificadas en la pantalla DiscovRx como la mejor unión al compuesto 14 . La medición cuantitativa en pocillos de células transfectadas con ARNip control reveló una inducción consistente de 2 veces en la formación de puntos GFP-LC3 después del tratamiento con cualquiera de los inhibidores catalíticos de mTOR INK128 o AZD8055 (FIGURAS 9D y 9F). Sorprendentemente, de las 18 quinasas probadas, solo un ARNip de quinasa, ULK1, abolió casi por completo el punto LC3 inducido por los inhibidores de mTOR (FIGURA 9D). La capacidad del ARNip de ULK1 de suprimir casi por completo la respuesta autofágica inducida por la inhibición de mTOR sugiere que, en esta línea celular al menos, ULK1 es esencial para estimular la autofagia en respuesta a la supresión de mTOR.

Claims (1)

  1. R E I V I N D I C A C I O N E S
    1. Un inhibidor de ULK1 para uso en el tratamiento de una enfermedad o afección en un sujeto que lo necesite, en donde el inhibidor de ULK1 se coadministra con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de mTOR; en donde:
    (a) el inhibidor de ULK1 es un compuesto que tiene la estructura:
    Figure imgf000223_0001
    en la que:
    R1 es H;
    R2 se selecciona entre:
    Figure imgf000223_0002
    R4 es -NR7R8, en donde R7 es H y R8 se selecciona entre: N-alquilbenzamida, fenilo, ciclobutilo, alcoxialquilo y haloalquilo;
    R5 se selecciona entre: H, hidroxi, haloalquilo, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y
    R6 es H;
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o
    (b) el inhibidor de ULK1 es un compuesto que tiene la estructura:
    Figure imgf000223_0003
    en la que:
    R1 es H;
    R2 es:
    Figure imgf000224_0001
    R 4 se selecciona entre: ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido;
    R 5 se selecciona entre: H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido, en donde el alquilo opcionalmente sustituido es CF 3 y halo es Br o Cl; y R 6 es H;
    o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
    2. Un inhibidor de ULK1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad o la afección se seleccionan de: inmunosupresión, antirreestenosis, cáncer, síndrome de Cowden, síndrome de Peutz-Jegher, TSC (Complejo de Esclerosis Tuberosa), LAM (linfoangiomioleiomatosis) y degeneración macular relacionada con la edad.
    3. Un inhibidor de ULK1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la enfermedad o afección se selecciona de: carcinoma de células renales, cáncer pancreático, TSC, linfoma, cáncer de endometrio, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de próstata, glioblastoma, astrocitoma, mieloma múltiple y carcinoma hepatocelular.
    4. Un inhibidor de ULK1 para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la enfermedad o la afección son dependientes de mTOR.
    5. Un compuesto que tiene la estructura:
    Figure imgf000224_0002
    en la que:
    R 1 es H;
    R 2 se selecciona entre:
    Figure imgf000225_0001
    R 4 es -NR 7 R8, en donde R 7 es H y R 8 se selecciona entre: N-alquilbenzamida, fenilo, ciclobutilo, alcoxialquilo y haloalquilo;
    R 5 se selecciona entre: H, hidroxi, haloalquilo, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido; y
    R 6 es H;
    o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
    6 . Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 5, en donde R 2 se selecciona entre:
    Figure imgf000225_0002
    7. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 5 o 6 , en donde R 2 es:
    Figure imgf000225_0003
    8 . Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en donde R 4 es N-alquilbenzamida.
    9. Un compuesto que tiene la estructura:
    Figure imgf000225_0004
    en la que:
    R 1 es H;
    R 2 es:
    Figure imgf000226_0001
    R 4 se selecciona entre: ariloxi opcionalmente sustituido, heteroariloxi opcionalmente sustituido y alcoxi opcionalmente sustituido;
    R 5 se selecciona entre: H, hidroxilo, alquilo opcionalmente sustituido, halo, alcoxi opcionalmente sustituido y arilo opcionalmente sustituido, en donde el alquilo opcionalmente sustituido es CF 3 y halo es Br o Cl; y
    R 6 es H;
    o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
    10. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 9, en donde R4 se selecciona entre: fenoxi, alcoxi (C 1 -C 6 ) y -O-(N-alquilbenzamida).
    11. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 9 o 10, en donde R 4 es:
    Figure imgf000226_0002
    12. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en donde R 5 se selecciona entre: CF 3 , Br y Cl.
    13. Un compuesto seleccionado entre:
    Figure imgf000227_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
    14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, es decir:
    Figure imgf000227_0002
    o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
    15. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 14, y al menos un aditivo farmacéuticamente aceptable.
    16. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, que comprende además al menos un inhibidor de mTOR.
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