ES2906408T3 - Fosfato de calcio amorfo estabilizado dopado con iones fluoruro y un proceso para producir el mismo - Google Patents
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Abstract
Un proceso para la preparación de una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato que comprende las siguientes etapas: 1) proporcionar una primera solución de una sal de calcio y una sal citrato en donde la relación molar de ion citrato con respecto a ion calcio está en el intervalo de desde 1 hasta 2 obteniendo así una primera solución transparente; 2) proporcionar una segunda solución de una sal capaz de dar anión fosfato y una sal carbonato; 3) mezclar la primera solución transparente y la segunda solución a un pH en el intervalo de desde 8 hasta 11; 4) precipitar la nanopartícula; y 5) secar la nanopartícula obtenida de la etapa 4).
Description
DESCRIPCIÓN
Fosfato de calcio amorfo estabilizado dopado con iones fluoruro y un proceso para producir el mismo
Campo de la invención
La presente invención se refiere a biomateriales para su uso en medicina, preferentemente en odontología. Específicamente, la invención se refiere a partículas de fosfato de calcio amorfo revestidas de citrato, preferiblemente dopadas con iones fluoruro y un proceso para producir las mismas. La invención también se refiere al uso de las partículas de la invención como biomaterial en medicina, preferentemente en odontología como biomaterial para la remineralización dental y desensibilizante de la dentina.
Técnica anterior
El fosfato de calcio amorfo (ACP) es una de las fases de fosfato de calcio (CaP) más importantes en la ciencia de la biomineralización, así como en el campo de los materiales biomédicos. El ACP está presente en muchos sistemas biológicos, en especial en organismos primitivos, principalmente como reservorio de iones Ca2+ y PO43-. El ACP es la primera fase precipitada de una solución acuosa sobresaturada que contiene iones Ca2+ y PO43- debido a su menor energía superficial que la de la hidroxiapatita (HA) y el fosfato octacálcico (OCP). El ACP es una fase mineral con un orden de corto alcance, en lugar de un orden cristalino de largo alcance. La unidad estructural básica del ACP, propuesta por Betts y Posner, es una agrupación aproximadamente esférica de iones que tiene un diámetro promedio de 9,5 nm consistente con la composición química Cag(PO4)6.
Se sabe que el ACP es un material inestable y se transforma en fases de CaP termodinámicamente más estables (es decir, HA y OCP) tanto en solución como en estado seco, reaccionando con agua en la atmósfera, exacerbando así de forma evidente el problema de la estabilidad del ACP cuando se usa como biomaterial final.
El ACP se estudia actualmente para fabricar diversos biomateriales gracias a su excelente bioactividad, alta adhesión celular, biodegradación a medida y buena osteoconductividad. Se utiliza, por ejemplo, en la preparación de revestimientos sobre prótesis metálicas, cementos inyectables autofraguables y materiales compuestos híbridos con polímeros.
El ACP es un material particularmente atractivo en odontología como agente de remineralización del esmalte debido a su capacidad para liberar una cantidad significativa de iones Ca2+ y PO43-, en comparación con otra fase cristalina de CaP. Estos agentes pueden añadirse a materiales de restauración o aplicarse directamente sobre la superficie del diente para penetrar en las lesiones del subsuelo del esmalte. Se ha propuesto que el ACP es una fase precursora esencial durante la formación de tejido mineralizado. Por tanto, el uso de ACP puede proporcionar una estrategia de remineralización biomimética al imitar los procesos de biomineralización que forman una nueva fase mineral.
La desmineralización de los tejidos duros dentales (esmalte y dentina) es la principal responsable de la caries dental y de la hipersensibilidad de la dentina. Es causada por un ambiente de pH bajo que, a su vez, tiene tres causas principales: la ingesta de alimentos o bebidas ácidas, la presencia de enfermedad por reflujo gastroesofágico o la actividad acidogénica de una biopelícula oral patógena. Cuando el valor de pH de la saliva cae por debajo de 5,5, la hidroxiapatita (HA), que es el principal constituyente mineral de los tejidos dentales que representan en el esmalte y la dentina el 95% y el 75% en peso, respectivamente, comienza a disolverse.
La desmineralización es un proceso reversible si el tejido dañado se expone a un ambiente bucal que favorezca la remineralización. Por ejemplo, las cavidades del esmalte causadas por procesos de desmineralización se remineralizan de forma natural por el crecimiento epitaxial de cristales residuales que actúan como sitios de nucleación, proporcionando la saliva un entorno de iones Ca2+ y PO43- sobresaturado respecto a HA. Sin embargo, la remineralización del esmalte por la saliva rara vez se logra por completo, especialmente cuando hay un desequilibrio en la duración y el alcance de las fases de desmineralización/remineralización. Para revertir de manera eficiente la desmineralización y aumentar la remineralización, puede ser de ayuda el uso de una fuente externa que suministre iones Ca2+ y PO43- posiblemente en las lesiones cristalinas y en los huecos para aumentar la sobresaturación de HA y producir una ganancia mineral neta. Por tanto, se han descrito varias formulaciones que contienen diferentes formas de CaP (es decir, HA, fluorohidroxiapatita (FHA), fosfato tetracálcico (TTCP), fosfato beta-tricálcico (p-TCP), ACP, etc.) como agentes curativos para la desmineralización del esmalte. Sin embargo, el principal problema con la aplicación de una fase cristalina de CaP en la cavidad oral para promover la remineralización es su baja solubilidad, particularmente en presencia de iones fluoruro, de modo que los iones Ca2+ y PO43- no están disponibles.
Recientemente se describió que el citrato desempeña un papel dual clave en la cristalización de HA: impulsar una vía de crecimiento a través de un precursor amorfo y controlar el tamaño de las nanopartículas mediante el mecanismo de crecimiento de cristales de agregación orientada no clásica.
Además, el flúor es el agente profiláctico más utilizado para reducir y prevenir la desmineralización del esmalte, siendo hasta ahora el agente más eficaz para la prevención de la caries. Se cree que el fluoruro funciona mediante dos mecanismos diferentes: i) reemplazar los grupos hidroxilo del HA recién formado, lo que da como resultado fluorapatita [FHA, Ca5(PO4)3F], que es menos soluble y por tanto más resistente al ataque ácido que e1HA; ii) inhibir las rutas
metabólicas y fisiológicas de los microorganismos en la película cariogénica que producen ácidos orgánicos para desmineralizar el tejido dental.
Por tanto, un primer objeto de la presente invención es la liberación de Ca2+, PO43- y F- en las lesiones del esmalte dando lugar a un efecto remineralizante mejorado, y al mismo tiempo a la oclusión de los túbulos dentinarios.
En el documento WO2016/012452A1 se describe un proceso de obtención de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas de citrato dopadas con fluoruro, que pueden ser aplicadas en medicina y en productos para odontología tales como enjuagues bucales, dentífricos, chicles como agente de remineralización del esmalte y la dentina.
De forma específica, el proceso aquí descrito comprende las siguientes etapas:
• la preparación de una solución de CaCh a una concentración comprendida entre 0,08 M y 0,12 M y citrato de sodio a una concentración comprendida entre 0,35 M y 0,50 M;
• la preparación de una segunda solución formada por Na2HPO4 a una concentración comprendida entre 0,10 M y 0,15 M con Na2CO30,2 M y un compuesto de fluoruro;
• mezcla bajo agitación de las dos soluciones preparadas en las etapas anteriores en la proporción 1:1 v/v a un pH comprendido entre 8,3 y 8,7 (ajustado, por ejemplo, con HCl) y a temperatura ambiente durante un período de tiempo menor de 2 minutos;
• tres ciclos sucesivos de sedimentación por centrifugación, separación del sobrenadante y lavado del precipitado con agua ultrapura; y
• liofilización del precipitado húmedo.
Este proceso permite obtener nanopartículas que resultaron tener una respuesta biológica en las células osteoblásticas, específicamente se observó una proliferación celular a diferentes concentraciones de nanopartículas, siendo completamente biocompatibles en contacto con la célula osteoblástica.
Incluso si las nanopartículas del documento WO2016/012452 resultaron ser un buen biomaterial adaptado para la remineralización del esmalte, aún existe la necesidad de disponer de biomateriales que sean efectivos y capaces de actuar como agente remineralizante en un breve período de tiempo.
Compendio de la invención
Los autores de la presente invención han encontrado sorprendentemente un proceso para la preparación de una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato que comprende las siguientes etapas:
1) proporcionar una primera solución de una sal de calcio y una sal citrato donde la relación molar de ion citrato a ion calcio está en el intervalo de 1 a 2 obteniendo así una primera solución transparente;
2) proporcionar una segunda solución de una sal capaz de producir anión fosfato y una sal carbonato;
3) mezclar la primera solución transparente y la segunda solución a un pH en el intervalo de 8 a 11;
4) precipitar la nanopartícula; y
5) secar la nanopartícula obtenida de la etapa 4).
En el proceso de la invención, la primera solución es transparente antes de que se lleve a cabo la etapa de mezclado. La expresión "primera solución transparente" significa que la primera solución está sustancialmente libre de cualquier tipo de partículas.
De forma ventajosa, la etapa 5) es una etapa de liofilización.
En otro aspecto la invención se refiere a una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato que puede obtenerse por el proceso según la invención, donde la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización, estando dicha nanopartícula caracterizada por un área superficial de 250 m2g-1 a 360 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm medido por imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
Por ello, en una primera realización, el área superficial de la nanopartícula está en el intervalo de 250 m2g-1 a 360 m2g-1 medida con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán Italia) y dicha nanopartícula tiene preferiblemente una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm. Todos los instrumentos utilizados para determinar el diámetro son instrumentos capaces de tomar imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
Ventajosamente, la etapa 5) es una etapa de secado por pulverización.
En otro aspecto la invención se refiere a un aglomerado de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas de citrato que puede obtenerse por el proceso según la invención, donde la etapa 5) de secado es una etapa de secado por pulverización, estando dicho aglomerado de nanopartículas caracterizado por un área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y por tener una forma redonda con un diámetro en el intervalo de 2 a 25 pm medido por microscopía electrónica de barrido (SEM).
Como será evidente también por la siguiente parte experimental cuando la etapa 5) consiste en una etapa de secado por pulverización, el producto final es un aglomerado de nanopartículas que corresponde a una micropartícula que tiene un diámetro en el intervalo de 2 a 25 pm. Por tanto, en una segunda realización, el área superficial del aglomerado de nanopartículas está en el intervalo de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán, Italia) y dicho aglomerado de nanopartículas tiene preferiblemente una forma redonda y un diámetro en el intervalo de 2 a 25 pm. Todos los instrumentos utilizados para determinar el diámetro son instrumentos de microscopía electrónica de barrido (SEM).
En un aspecto adicional y preferido de la invención, permite obtener una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor disponiendo la adición de un compuesto de fluoruro en la segunda solución de la etapa 2).
Por tanto, en otro aspecto preferido, la invención se refiere a una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor que puede obtenerse por el proceso según la invención y que comprende la adición de un compuesto de fluoruro en la etapa 2), donde la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización, estando dicha nanopartícula caracterizada por un área superficial de 250 m2g-1 a 370 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm medido por imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
Por tanto, en una primera realización, el área superficial de la nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor está en el intervalo de 250 m2g-1 a 370 m2g-1 medida con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán, Italia) y dicha nanopartícula tiene preferiblemente una forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm. Todos los instrumentos utilizados para determinar el diámetro son instrumentos capaces de tomar imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
En otro aspecto preferido, la invención se refiere a un aglomerado de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas con citrato dopadas con flúor que se puede obtener mediante el proceso según la invención y que comprende la adición de un compuesto de fluoruro en la etapa 2), donde la etapa 5) de secado es una etapa de secado por pulverización, estando dicho aglomerado de nanopartículas caracterizado por un área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y por tener un diámetro en el intervalo de 2 a 25 pm medido mediante microscopía electrónica de barrido (SEM).
El área superficial se mide con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán, Italia).
En otro aspecto la invención se refiere al uso de la nanopartícula o el aglomerado de nanopartículas de la invención como biomaterial en el tratamiento de la cavidad oral, generalmente en odontología. Preferentemente el biomaterial se utiliza como agente remineralizante, preferentemente para la remineralización de los tejidos duros dentales, o como desensibilizante dentinario, siendo en este último caso su acción preferentemente para rellenar y ocluir los túbulos dentinarios.
De forma específica, el biomaterial es un agente de remineralización, preferentemente en caso de abfracción, erosión, cavidad, abrasión, manchas blancas e hipomineralización.
En otro aspecto más, la invención se refiere al uso de una partícula de la invención como biomaterial en aplicaciones ortopédicas.
De forma sorprendente, la nanopartícula estabilizada con citrato y la nanopartícula estabilizada con citrato dopada con fluoruro de la invención tienen una elevada área superficial que resultó ser capaz de liberar iones Ca2+ y F1- de forma muy rápida, ciertamente más rápida que las nanopartículas del estado de la técnica tales como las descritas en el documento WO2016/012452.
Sin estar ligado a ninguna teoría específica y como se explicará con detalle en la parte experimental, los autores de la invención consideran que la sorprendente propiedad de liberar de forma muy rápida los iones Ca2+ y F1- se debe al proceso, es decir, la relación molar de ion citrato a ion calcio en el intervalo de 1 a 2.
Descripción de las figuras
La Figura 1A muestra una micrografía TEM de ACP4 preparado en el ejemplo 1; (recuadro: patrón SAED correspondiente);
La Figura 1B muestra patrones XRD de ACP4 preparado en el ejemplo 1;
La Figura 1C muestra espectros FT-IR de ACP4 preparado en el ejemplo 1;
La Figura 2A muestra una micrografía TEM de F-ACP4 preparado en el ejemplo 1; (recuadro: patrón SAED correspondiente)
La Figura 2B muestra el patrón XRD de F-ACP4 preparado en el ejemplo 1;
La Figura 2C muestra espectros FT-IR de F-ACP4 preparado en el ejemplo 1;
La Figura 3A muestra una micrografía TEM de ACP1, preparado en el ejemplo 2; (recuadro: patrón SAED correspondiente)
La Figura 3B muestra patrones XRD de ACP2345, ACP1, F-ACP1, F-ACP2 preparados en el ejemplo 2;
La Figura 3C muestra espectros FT-IR de ACP2, ACP1, F-ACP1, F-ACP2 preparados en el ejemplo 2;
La Figura 4A presenta el Ca2+ acumulado liberado de muestras ACP preparadas en el ejemplo 1 y el ejemplo 2; los datos se expresan como media ± desviación estándar (n = 5);
La Figura 4B presenta el Ca2+ acumulado liberado de muestras de F-ACP preparadas en el ejemplo 1 y el ejemplo 2; los datos se expresan como media ± desviación estándar (n = 5);
La Figura 4C presenta el F- acumulado muestras de F-ACP preparadas en el ejemplo 1 y el ejemplo 2; los datos se expresan como media ± desviación estándar (n = 5);
La Figura 5 muestra el patrón XRD de F-ACP1 secado por pulverización del ejemplo 8;
La Figura 6 muestra micrografías SEM con diferentes aumentos de F-ACP1 secado por pulverización del ejemplo 8; La Figura 7 muestra patrones XRD de ACP2, ACP1, F-ACP2, F-ACP1 preparados en el ejemplo 2, un año después de la síntesis, almacenados a temperatura ambiente del ejemplo 9;
La Figura 8 muestra patrones XRD de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 preparados en el ejemplo 2bis;
La Figura 9 muestra espectros FT-IR de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 preparados en el ejemplo 2bis;
La figura 10A presenta el Ca2+ acumulado liberado de muestras de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 preparadas en el ejemplo 2bis; los datos se expresan como media ± desviación estándar (n = 5 );y
La figura 10B presenta el F- acumulado liberado de muestras de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 preparadas en el ejemplo 2bis; los datos se expresan como media ± desviación estándar (n = 5).
Descripción detallada de la invención
Por tanto, la invención se refiere a un proceso para la preparación de una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato, que comprende las siguientes etapas:
1) proporcionar una primera solución de una sal de calcio y una sal citrato donde la relación molar de ion citrato a ion calcio está en el intervalo de 1 a 2 obteniendo así una primera solución transparente;
2) proporcionar una segunda solución de una sal capaz de producir anión fosfato y una sal carbonato;
3) mezclar la primera solución transparente y la segunda solución a un pH en el intervalo de 8 a 11;
4) precipitar la nanopartícula; y
5) secar la nanopartícula obtenida de la etapa 4).
La etapa 1) del proceso consiste en proporcionar una primera solución de una sal de calcio y de una sal citrato, donde la relación molar de ion citrato a ion calcio está en el intervalo de 1 a 2. La primera solución así obtenida es transparente.
La sal de calcio está formada preferiblemente por un anión seleccionado del grupo que consiste en cloruro, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, más preferiblemente el anión es cloruro.
La sal citrato está formada preferiblemente por un catión seleccionado del grupo que consiste en sodio y potasio, más preferiblemente el catión es sodio.
Más preferiblemente, la relación molar de ion citrato a ion calcio es aproximadamente 1.
Aún más preferiblemente, la relación molar de ion citrato a ion calcio es aproximadamente 2. En una realización preferida, la primera solución de la etapa 1) del proceso según la invención comprende al menos una sal adicional seleccionada del grupo de: sal de estroncio y sal de magnesio.
La sal de estroncio está formada preferiblemente por un anión seleccionado del grupo que consiste en cloruro, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, más preferiblemente el anión es cloruro.
La sal de magnesio está formada preferiblemente por un anión seleccionado del grupo que consiste en cloruro, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, más preferiblemente el anión es cloruro.
La etapa 2) consiste en proporcionar una segunda solución de una sal capaz de dar anión fosfato y una sal carbonato. Preferiblemente, la relación entre el anión carbonato y el fosfato está en el intervalo de 1 a 1,66.
Preferiblemente, la sal capaz de dar anión fosfato es una sal fosfato, hidrógeno fosfato o hidrógeno fosfato. La sal capaz de dar anión fosfato está formada preferiblemente por un catión seleccionado del grupo que consiste en sodio, potasio y amonio, más preferiblemente el catión es sodio.
La etapa 3) consiste en mezclar la primera y la segunda solución a un pH en el intervalo de 8 a 11, preferiblemente 8,5-10,7.
En un aspecto ventajoso, la relación de la primera y la segunda solución está en el intervalo de 1:1 a 1:1,5.
Según la invención, la etapa 3) de mezcla se lleva a cabo después de que la primera solución sea transparente. Preferiblemente, la segunda solución se añade a la primera solución transparente para la etapa de mezcla.
La etapa 4) consiste en precipitar la nanopartícula.
La etapa de precipitación puede llevarse a cabo ventajosamente disponiendo ciclos de sedimentación por centrifugación, después de los cuales puede llevarse a cabo la separación del líquido sobrenadante según métodos bien conocidos. Tan pronto como se recoja el precipitado, se puede lavar preferiblemente con agua ultrapura. A continuación, el precipitado húmedo se seca según métodos de secado conocidos en la técnica.
La etapa 5) consiste en una etapa de secado de la nanopartícula precipitada de la invención.
La etapa de secado se puede llevar a cabo con cualquier medio adecuado conocido en la técnica.
Preferiblemente, la etapa de secado se puede seleccionar de liofilización, secado por pulverización y secado en estufa ventilada. Este último se lleva a cabo preferentemente después de lavado con etanol y a una temperatura de unos 40°C.
En un aspecto preferido, la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización.
En otro aspecto la invención se refiere a una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato que puede obtenerse por el proceso según la invención, donde la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización, estando dicha nanopartícula caracterizada por un área superficial de 250 m2g-1 a 360 m2g-1, preferiblemente desde 270 m2g-1 a 360 m2g-1, medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm medido por imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
Por tanto, en una primera realización, el área superficial de la nanopartícula está en el intervalo de 250 m2g-1 a 360 m2g-1, preferiblemente desde 270 m2g-1 a 360 m2g-1, medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán Italia) y dicha nanopartícula tiene preferentemente una forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm. Todos los instrumentos utilizados para determinar el diámetro son instrumentos capaces de tomar imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
En otro aspecto ventajoso, la etapa 5) de secado es una etapa de secado por pulverización.
En otro aspecto la invención se refiere a un aglomerado de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas de citrato que puede obtenerse por el proceso según la invención, donde la etapa 5) de secado es una etapa de secado por pulverización, estando dicho aglomerado de nanopartículas caracterizado por un área superficial de 3 m2g-1 a
10 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de 2 a 25 gm medido por microscopía electrónica de barrido (SEM).
Por tanto, en una primera realización, el área superficial del aglomerado de nanopartículas está en el intervalo de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán, Italia) y dicho aglomerado de nanopartículas tiene preferiblemente una forma redonda y un diámetro en el intervalo de 2 a 25 gm. Todos los instrumentos utilizados para determinar el diámetro son instrumentos de microscopía electrónica de barrido (SEM).
En un aspecto adicional y preferido de la invención, permite obtener una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor disponiendo la adición de un compuesto de fluoruro en la segunda solución de la etapa 2).
Preferiblemente, el compuesto de fluoruro es un fluoruro de un catión seleccionado del grupo que consiste en sodio y potasio.
Por tanto, en otro aspecto preferido, la invención se refiere a una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor que se puede obtener mediante el proceso según la invención y que comprende la adición de un compuesto de fluoruro en la etapa 2), donde la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización, estando dicha nanopartícula caracterizada por un área superficial de 250 m2g-1 a 370 m2g-1, preferiblemente desde 270 m2g-1 a 370 m2g-1, medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y por tener una forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm medido por imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
Por tanto, en una primera realización, el área superficial de la nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor está en el intervalo de 250 m2g-1 a 370 m2g-1, preferiblemente desde 270 m2g-1 a 370 m2g-1, medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán Italia) y dicha nanopartícula tiene preferentemente una forma redonda con un diámetro en el intervalo de 30 a 80 nm. Todos los instrumentos utilizados para determinar el diámetro son instrumentos capaces de tomar imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
En otro aspecto preferido, la invención se refiere a un aglomerado de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas con citrato dopadas con flúor que se puede obtener mediante el proceso según la invención y que comprende la adición de un compuesto de fluoruro en la etapa 2), donde la etapa 5) de secado es un secado por pulverización, estando dicho aglomerado de nanopartículas caracterizado por un área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 medido con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y por tener una forma redonda con un diámetro en el intervalo de 2 a 25 gm medido por microscopía electrónica de barrido (SEM).
El área superficial se mide con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) utilizando muestras en polvo y un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán, Italia).
En otro aspecto, la invención se refiere al uso de una partícula de la invención como biomaterial para su uso en aplicaciones odontológicas. Preferentemente el biomaterial se utiliza para la remineralización de los tejidos duros dentarios o como desensibilizante dentinario, siendo en este último caso su acción preferentemente rellenar y ocluir los túbulos dentinarios.
En otro aspecto más, la invención se refiere al uso de una partícula de la invención como biomaterial en aplicaciones ortopédicas.
Parte experimental
Materiales
Se adquirieron de Sigma Aldrich (St. Luis, MO, EE. UU.) cloruro de calcio dihidrato (CaCl2-2H2Ü, >99,0% puro), citrato de sodio tribásico dihidrato (Na3(C6H5O7)2H2O, >99,0% puro (en lo sucesivo, Na3(Cit)), fosfato de sodio dibásico dihidrato (Na2HPO4-2H2O, >99,0% de pureza), cloruro de estroncio hexahidrato (SrCl2 -6 H2O, >99,0% de pureza), cloruro de magnesio hexahidrato (MgCl2 -6 H2O, >99,0% de pureza), carbonato de sodio monohidrato (Na2CO3-2H2O, >99,0% puro), fluoruro de sodio (NaF, >99,0% puro), cloruro de potasio (KCI >99,5% puro), tiocianato de potasio (KSCN >98,0% puro), carbonato de sodio monobásico (NaHCO3, >99,7% puro) y ácido láctico (C3H6O3 >90,0% de pureza). Todas las soluciones se prepararon con agua ultrapura (0,22 gS, 25°C, MilliQ©, Millipore).
Instrumentos y métodos de evaluación
Los patrones de difracción de rayos X (XRD) de las muestras presentadas en la Tabla 1 se registraron en un difractómetro D8 Advance (Bruker, Karlsrnhe, Alemania) equipado con un detector sensible a la posición Lynx-eye usando radiación de Cu Ka (A = 1,54178 Á) generada a 40 kV y 40 mA. Los espectros se registraron en el intervalo de 20 de 10 a 60° con un tamaño de paso (20) de 0,021 y un tiempo de conteo de 0,5 s.
Los análisis de espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FT-IR) se llevaron a cabo en un espectrómetro Nicolet 5700 (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, EE. UU.) con una resolución de 2 cm-1 por acumulación de 64 barridos que cubren el intervalo de 4000 a 400 cm-1, utilizando el método de gránulos de KBr.
La evaluación de microscopía electrónica de transmisión (TEM) y difracción de electrones de área seleccionada (SAED) se llevó a cabo con el microscopio Tecnai F20 (Fei Corp., Hillsboro, OR, EE. UU.) que opera a 120 kV. Las muestras de polvo se dispersaron ultrasónicamente en agua ultrapura y luego se depositaron unas pocas gotas de la suspensión en rejillas TEM de cobre de malla 200 cubiertas con películas delgadas de carbono amorfo y se incubaron durante varios minutos.
La cuantificación de Ca y P, Mg y Sr se llevó a cabo mediante un espectrómetro de emisión atómica de plasma acoplado inductivamente (ICP-OeS) (Agilent Technologies 5100 ICP-OES, Santa Clara, CA, EE. UU.), mientras que el F se cuantificó con un electrodo de iones fluoruro (Intellical™ ISEF121, Hach Lange, Loveland, CO, EE. UU.). Las muestras se prepararon disolviendo una alícuota de polvo en una solución de HNO3 al 1% en peso.
Los análisis de termogravimetría (TGA) se llevaron a cabo utilizando un aparato STA 449 Jupiter (Netzsch GmbH, Selb, Alemania). Se pesaron aproximadamente 10 mg de muestra en un crisol de platino y se calentaron desde temperatura ambiente hasta 1200°C bajo un flujo de aire con una velocidad de calentamiento de 10°C/min.
Se empleó el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) para medir el área de superficie específica (SSA) de muestras en polvo utilizando un Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milán, Italia).
La evaluación por microscopía electrónica de barrido (SEM) se llevó a cabo empleando un Sigma NTS Gmbh (Carl Zeiss, Oberkochen, Alemania). Las muestras de polvo se montaron en soportes de aluminio utilizando cinta de carbono y, antes de los análisis, se revistieron por pulverización con oro en un Sputter Coater E5100 (Polaron Equipment, Watford, Hertfordshire, Reino Unido) bajo argón a 10-3 mbar durante 4 minutos con una corriente de pulverización de 30 mA.
Ejemplo 1
Preparación de la nanopartícula del documento WO2016/016012452 de la técnica anterior
Se sintetizó polvo seco de ACP (fosfato de calcio amorfo) mezclando dos soluciones (1:1 v/v, 200 ml en total) a temperatura ambiente de (i) CaCl2 100 mM Na3 (Cit) 400 mM y (ii) Na2HPO4120 mM Na2CO3200 mM. El pH se ajustó a 8,5 con solución de HCl. Cuando la mezcla se volvió lechosa, las partículas se lavaron tres veces con agua ultrapura por centrifugación a 5000 rpm durante 15 min termostatizada a 4°C y luego se liofilizaron durante la noche a -50°C bajo un vacío de 3 mbar.
Las muestras de F-ACP se prepararon de manera similar a las de ACP, salvo que se añadió NaF250 mM a la solución (ii).
Ejemplo 2
Preparación de la nanopartícula de la invención
Siguiendo la misma preparación del ejemplo 1, también se prepararon las muestras de ACP y F-ACP (dopadas con NaF2 50 mM) disminuyendo la relación Cit/Ca molar inicial a 2 y 1 (en lo sucesivo codificado como ACP2, F-ACP2 y ACP1, F-ACP1, respectivamente).
Ejemplo 2bis
Preparación de la nanopartícula de la invención con Mg y Sr
Siguiendo la preparación del ejemplo 2, también se prepararon muestras de SrF-ACP, MgF-ACP y SrMgF-ACP de manera similar a F-ACP salvo que se añadieron a la solución (i) SrCl2 5 mM o MgCl240 mM, o ambos. Se utilizó la relación Cit/Ca molar inicial de 2 y 1 (en lo sucesivo codificada como SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2 y SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1, respectivamente).
Los códigos de las muestras y la concentración de los reactivos químicos usados para la preparación del ejemplo 1 y el ejemplo 2 se presentan en la siguiente Tabla 1.
Tabla 1
Las muestras del estado de la técnica tienen una relación molar entre citrato y calcio de 4, mientras que las muestras de la presente invención se prepararon con una relación molar en el intervalo de 1 a 2.
Ejemplo 3: Evaluación de las características físicas y de las composiciones de las partículas de ACP4 preparado en el ejemplo 1
Se evaluó polvo seco de ACP4 preparado en el ejemplo 1 en lo que se refiere a propiedades físicas con los instrumentos indicados anteriormente.
En la Figura 1A se muestra una micrografía TEM de ACP4, que revela nanopartículas de forma redonda en lugar de la forma facetada y angular típica del CaP cristalino, con tamaños que oscilan entre 20 y 50 nm. El patrón SAED recopilado para tales nanopartículas (recuadro superior derecho en la Fig. 1A) demuestra su naturaleza amorfa debido a la presencia de alas difusas en lugar de manchas.
El patrón XRD de ACP4 (Fig. 1B) revela una banda ancha a aproximadamente 30° (20) típica de una fase sin una regularidad periódica de largo alcance que confirma la estructura no cristalina de ACP4 y que excluye la presencia de HA y otras fases cristalinas de CaP. El espectro FT-IR (Fig. 1C) muestra bandas anchas sin resolver características de CaP que tiene una estructura amorfa. En particular, las bandas de adsorción a aproximadamente 560 y 1050 cm-1 se asociaron a los modos de flexión y extensión de grupos fosfato, respectivamente; aquellos a aproximadamente 870 cm-1 y en el intervalo 1400-1500 cm-1 se atribuyeron a los iones carbonato, mientras que la banda a aproximadamente 1605 cm-1 se asignó al agua adsorbida, así como a la extensión de COO- de citrato.
Por tanto, las Figuras 1A, 1B, 1C confirmaron la forma esférica de nanopartículas formadas por fosfato de calcio amorfo.
Ejemplo 4: Evaluación de las características físicas y de las composiciones de las partículas de F-ACP preparadas en el ejemplo 1
Con referencia al ejemplo 1, en una primera etapa la concentración de los reactivos, así como la relación Cit/Ca se mantuvieron constantes respecto al protocolo utilizado para la preparación de ACP4, mientras que se añadió NaF para dopar ACP4 (en lo sucesivo denominado F-ACP4)).
La imagen TEM de F-ACP4 (Fig. 2A) muestra partículas de forma redonda que tienen un tamaño y una morfología similar a la de ACP4. El patrón SAED recopilado para tales nanopartículas (recuadro superior derecho en la Fig. 2A) demuestra su naturaleza amorfa debido a la presencia de alas difusas en lugar de manchas. Los patrones XRD de F-ACP4 (Fig. 2B) muestran el mismo pico de difracción amplio a aproximadamente 30° (20) del registrado para ACP4 lo que indica que la presencia de iones F- no causó la precipitación de la sal fluoruro u otras fases cristalinas de CaP. Los espectros FT-IR de F-ACP4 también muestran bandas anchas no resueltas similares a las presentadas en el espectro FT-IR de ACP4 (Fig. 2C).
Ejemplo 5: Evaluación de las características físicas y de las composiciones de las partículas de ACP y F-ACP preparadas en el ejemplo 2
Como se presentó anteriormente, se prepararon dos muestras de ACP cambiando la relación nominal Cit/Ca de los reactivos según la invención, que se fijó en 4 según el estado de la técnica, en 2 o 1 (en lo sucesivo denominada ACP2 y ACP1, respectivamente) según la invención para evaluar el efecto de la relación molar Cit/Ca sobre las características fisicoquímicas de estos materiales amorfos. Además, para dopar ACP2 y ACP1 se empleó la misma cantidad de NaF utilizada para la síntesis de F-ACP4, y estas muestras se llamaron F-ACP2 y F-ACP1 respectivamente.
Las imágenes TEM de ACP2 (no se muestra) y ACP1 (Fig. 3A) muestran partículas de forma redonda que tienen un tamaño y una forma comparables a ACP4. El patrón SAED recopilado para ACP1 (recuadro superior derecho en la Fig. 3A) demuestra su naturaleza amorfa debido a la presencia de alas difusas en lugar de manchas. También en este
caso la adición de F- no indujo cambios en el tamaño y la morfología en comparación con los homólogos no dopados. Los patrones XRD de ACP2, ACP1, F-ACP2 y F-ACP1 (Fig. 3B) mostraron la misma banda ancha de difracción característica de una fase amorfa pura. Los espectros FT-IR de ACP2, ACP1, F-ACP2 y F-ACP1 (Fig. 3C) también mostraron bandas anchas no resueltas similares a las presentadas en los otros espectros FT-IR.
Por tanto, las partículas de ACP o F-ACP según la invención tenían forma redonda y dimensiones similares a las de la técnica anterior.
Ejemplo 5 bis
Los patrones XRD de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 (Fig. 8) mostraron la misma banda ancha de difracción característica de una fase amorfa pura. Los espectros FT-IR de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 (Fig. 9) también mostraron bandas anchas no resueltas similares a las presentadas en los otros espectros FT-IR.
Ejemplo 6: Composición química de las muestras preparadas en el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2 y el Ejemplo 2bis
La composición química de las muestras preparadas en el ejemplo 2 se resume en la Tabla 2.
Tabla 2
(a) Cuantificado por ICP-OES;
(b) Cuantificado por electrodo de iones fluoruro;
(c) Cuantificado por TGA;
(d) Calculado a partir de la adsorción BET.
El SSAbet se determinó también para la muestra del estado de la técnica preparada en el ejemplo 1.
Se obtuvieron los siguientes valores:
ACP4 200±20 m2g-1
F-ACP4 213±21 m2g-1
El valor de SSAbet resultó ser una característica diferenciadora de los ACP y F-ACP obtenidos con el proceso del estado de la técnica y el proceso de la invención.
La curva TGA de las muestras según la invención presenta principalmente cuatro pérdidas de peso, que pueden atribuirse al agua adsorbida (de temperatura ambiente a 150°C), agua estructural (de 150 a 350°C), citrato (de 350 a 700°C) y carbonato (de 700 a 1000°C). Según estas pérdidas, se estimó el contenido de citrato y carbonato y se reportó en la Tabla 2.
La relación calcio/fosfato de ACP2 fue similar a la de ACP1 mientras que F-ACP2 y F-ACP1 muestran mayores contenidos de calcio y mayores relaciones Ca/P que sus homólogos no dopados. La relación calcio/fosfato de F-ACP2 era similar a F-ACP1.
La relación calcio+estroncio+magnesio/fosfato de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 fue similar al valor calculado para las muestras F-ACP2 y F-ACP1. El contenido de citrato y carbonato no varió entre las muestras dopadas con Sr y Mg y fue similar al valor calculado para las muestras F-ACP2 y F-ACP1, Curiosamente, se encontró que cuando se incluye Mg, solo o en combinación con Sr, en la preparación, la cantidad de fluoruro aumenta.
Sin estar ligado a ninguna teoría, los autores de la invención consideran que las áreas superficiales más altas se debieron al proceso de la invención que proporciona una relación molar de ion citrato a ion calcio en el intervalo de 1 a 2.
Los datos anteriores demuestran que las partículas revestidas con citrato y las partículas revestidas con citrato dopadas con flúor obtenidas mediante el proceso de la invención son diferentes y, por tanto, novedosas con respecto a las partículas revestidas con citrato dopadas con flúor del documento WO2016/012452.
Ejemplo 7: Liberación de iones en saliva artificial de muestras preparadas en el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2
La aplicación de ACP en productos de tratamiento dental se basa en el principio de liberación de iones de calcio y fosfato para generar una sobresaturación local para desencadenar la remineralización del esmalte. Por tanto, este efecto ha sido probado in vitro. Se ha probado la liberación in vitro de iones en saliva artificial ácida (una solución que imita la saliva humana después de comer, sin sus componentes macromoleculares).
Se dispersaron 200 mg de polvos de ACP o F-ACP preparados en los ejemplos 1 y 2 en 10 ml de saliva artificial preparada como solución modificada de Tani-Zucchi que contenía KCI 20 mM, KSCN 5,3 mM, Na2HPO4 1,4 mM, NaHCO315 mM y ácido láctico 10 mM. La suspensión se mantuvo a 37°C bajo agitación. A tiempos programados, se retiraron 8 ml del líquido sobrenadante (que se separó bien de la fase sólida por centrifugación a 5000 rpm durante 15 min) para la cuantificación de Ca2+ y F- por ICP-OES y electrodo de iones fluoruro, respectivamente. Después de eso, las muestras se aclararon con 8 ml de saliva artificial fresca y la suspensión se mantuvo a 37°C con agitación y se trató como se describió anteriormente en el siguiente punto de tiempo.
Todas las muestras de los ejemplos 1 y 2 muestran una liberación sostenida de iones Ca2+ y F- en las primeras dos horas (Fig. 4). Las muestras con una relación Cit/Ca según la invención mostraron tasas de liberación de iones sorprendentemente más altas, revelándose de este modo como un producto mejorado y ventajoso con respecto al estado de la técnica.
Sin estar ligado por ninguna teoría, los autores de la invención consideran que este sorprendente efecto se debió probablemente a las características peculiares de las partículas de la invención que tenían áreas superficiales más altas, debido a la relación molar específica utilizada en el proceso para producir las nanopartículas.
Ejemplo 7bis
Se ha probado en las mismas condiciones del ejemplo 7 la liberación in vitro de iones en saliva artificial ácida de SrF-ACP2, MgF-ACP2, SrMgF-ACP2, SrF-ACP1, MgF-ACP1, SrMgF-ACP1 preparados según el ejemplo 2bis.
Todas las muestras del ejemplo 2bis, similares a las de los ejemplos 1 y 2, muestran una liberación sostenida de iones Ca2+ y F- en las primeras dos horas (Fig. 10A y 10B). Las muestras del ejemplo 2bis según la invención mostraron velocidades de liberación de iones comparables a las muestras del ejemplo 2, revelándose de este modo como un producto mejorado y ventajoso con respecto al estado de la técnica.
Ejemplo 8: Preparación de la nanopartícula de la invención aglomerada en micropartículas (aglomerado de nanopartículas de la invención)
Para evaluar la viabilidad de secar las muestras del ejemplo 2 con un atomizador sin afectar su característica amorfa, se han resuspendido en agua al 3,5 % p/v ACP2, ACP1, F-ACP2 y F-ACP1 después de los lavados y como se obtuvieron en el ejemplo 2, y se han secado mediante secado por pulverización (Mini Spray Dryer B-290, Büchi Labortechnik AG, Suiza) en las siguientes condiciones: diámetro de la boquilla 0,7 mm, caudal de alimentación 3 ml/min, caudal de argón 450 lh-1, temperatura de entrada 120°C y tasa de aspiración 70%. El patrón XRD de polvo de F-ACP1 secado por pulverización (Fig. 5) mostró solo una banda ancha a unos 30° (20), corroborando el hecho de que se conserva la fase amorfa. Las micrografías SEM de polvo de F-ACP1 secado por pulverización (Fig. 6) revelaron que la muestra consiste en partículas esféricas de aproximadamente 2-25 gm de diámetro que a su vez están compuestas por nanopartículas aglomeradas independientemente de la relación Cit/Ca y la presencia de fluoruro. El valor de SSAbet del polvo seco estaba en el intervalo de 3-10 m2 g-1 independientemente de la relación Cit/Ca y de la presencia de flúor.
Ejemplo 9 : Estabilidad del polvo seco de las muestras preparadas en el Ejemplo 2
El ACP es inestable que los polimorfos cristalinos de CaP, por lo que se convierte en la fase cristalina incluso en estado seco reaccionando con agua atmosférica. Por tanto, su uso y manipulación es difícil a menos que se desarrolle un material estable. Se ha evaluado la estabilidad de polvos de ACP2, ACP1, F-ACP2 y F-ACP1 almacenados a temperatura ambiente analizando su estructura mediante la recolección de XRD hasta por un año (Fig. 7). Curiosamente, el patrón XRD permaneció sin cambios, lo que establece que la naturaleza amorfa de todas las muestras se conserva durante este período de tiempo.
Claims (18)
1. Un proceso para la preparación de una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato que comprende las siguientes etapas:
1) proporcionar una primera solución de una sal de calcio y una sal citrato en donde la relación molar de ion citrato con respecto a ion calcio está en el intervalo de desde 1 hasta 2 obteniendo así una primera solución transparente;
2) proporcionar una segunda solución de una sal capaz de dar anión fosfato y una sal carbonato;
3) mezclar la primera solución transparente y la segunda solución a un pH en el intervalo de desde 8 hasta 11;
4) precipitar la nanopartícula; y
5) secar la nanopartícula obtenida de la etapa 4).
2. El proceso según la reivindicación 1, en donde la sal de calcio está formada por un anión seleccionado del grupo que consiste en cloruro, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, preferiblemente el anión es cloruro.
3. El proceso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la sal de citrato está formada por un catión seleccionado del grupo que consiste en sodio y potasio, preferiblemente el catión es sodio.
4. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde la relación molar de ion citrato con respecto a ion calcio es de aproximadamente 2.
5. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, en donde la primera solución de la etapa 1) comprende al menos una sal adicional seleccionada del grupo de: sal de estroncio y sal de magnesio.
6. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde la sal capaz de dar anión fosfato es una sal de fosfato, hidrógeno fosfato o hidrógeno fosfato, preferiblemente formada por un catión seleccionado del grupo que consiste en sodio, potasio y amonio.
7. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el pH de la etapa 3) está en el intervalo de 8,5-10,7.
8. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde en la etapa 3) de mezclado se añade la segunda solución a la primera solución transparente.
9. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -8, en donde en la etapa 4) la precipitación se lleva a cabo proporcionando ciclos de sedimentación por centrifugación, separación del sobrenadante, recogida y lavado del precipitado.
10. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la etapa 5) de secado se selecciona de liofilización, secado por pulverización y secado en estufa ventilada.
11. El proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, en donde en la etapa 1) se añade un compuesto de fluoruro.
12. El proceso según la reivindicación 11, en donde el compuesto de fluoruro es un fluoruro de un catión seleccionado del grupo que consiste en sodio y potasio.
13. Una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato que puede obtenerse mediante el proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización, estando dicha nanopartícula caracterizada por un área superficial de desde 250 m2g-1 hasta 360 m2g-1 medida con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de desde 30 hasta 80 nm medido por imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
14. Un aglomerado de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas con citrato que puede obtenerse mediante el proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, en donde la etapa 5) de secado es una etapa de secado por pulverización, estando dicho aglomerado de nanopartículas caracterizado por un área superficial de desde 2 m2g-1 hasta 10 m2g-1 medida con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de desde 2 hasta 25 pm medido mediante microscopía electrónica de barrido (SEM).
15. Una nanopartícula de fosfato de calcio amorfo revestida de citrato dopada con flúor que puede obtenerse mediante el proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde la etapa 5) de secado es una etapa de liofilización, estando dicha nanopartícula caracterizada por un área superficial de desde 250 m2g-1 hasta 370 m2g-1 medida con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma
redonda con un diámetro en el intervalo de desde 30 hasta 80 nm medido por imágenes de microscopía electrónica de transmisión (TEM).
16. Un aglomerado de nanopartículas de fosfato de calcio amorfo revestidas con citrato dopadas con flúor que puede obtenerse mediante el proceso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en donde la etapa 5) de secado es una etapa de secado por pulverización, estando dicho aglomerado de nanopartículas caracterizado por un área superficial de desde 3 m2g-1 hasta 10 m2g-1 medida con el método de adsorción de gas de Brunauer-Emmett-Teller (BET) y que tiene una morfología de forma redonda con un diámetro en el intervalo de desde 2 hasta 25 gm medido mediante microscopía electrónica de barrido (SEM).
17. Una nanopartícula o un aglomerado de nanopartículas según una cualquiera de las reivindicaciones 13-16 como biomaterial para su uso en aplicación odontológica.
18. La nanopartícula como biomaterial para su uso según la reivindicación 17, en donde el biomaterial se utiliza como agente de remineralización o como desensibilizante de la dentina.
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