ES2904580T3 - Composiciones de éster de colina del ácido lipoico y métodos para generar formulaciones oftálmicas biocompatibles. - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica para el tratamiento de la presbicia, que comprende una sal farmacéuticamente aceptable del 0,1-10 % en peso de éster de colina del ácido lipoico, 0,1-2 % en peso de un agente de ajuste de la tonicidad, 0,003-0,01 % en peso de un conservante, un tampón seleccionado del grupo que consiste en tampones acetato, borato y acetato/ácido bórico, 0,05 %-1,0 % en peso de una fuente de energía bioquímica que es alanina, y agua.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones de éster de colina del ácido lipoico y métodos para generar formulaciones oftálmicas biocompatibles

I. Campo de la invención

La presente invención se refiere, en general, a composiciones oftálmicas de éster de colina del ácido lipoico y a procesos para producir colirios biocompatibles, estables y no irritantes. Las composiciones del presente documento se contemplan como tratamientos para (pero sin limitación) trastornos oculares, tales como la presbicia, la queratoconjuntivitis seca, las cataratas y la degeneración macular senil.

II. Antecedentes de la invención

El éster de colina del ácido lipoico (LACE) es un derivado sintetizado químicamente del ácido R-a-lipoico.

El ácido lipoico, también conocido como ácido tióctico, es un ácido graso de ocho carbonos con un enlace disulfuro que une los carbonos 6 y 8 para formar un anillo de 1,2-ditiolano. El ácido forma isómeros ópticos de los cuales el isómero ácido R-a-lipoico es el más bioactivo.

El éster de colina del ácido lipoico (LACE, estructura química, véase la FIG. 1) se diseñó para atravesar membranas biológicas con la incorporación de la cabeza de colina catiónica. Mientras que el ácido lipoico no penetra a través de la córnea, el derivado éster de colina del ácido lipoico sí penetra a través de la córnea, es hidrolizado por las esterasas corneales y se transforma en el ácido lipoico bioactivo. El LACE se ha formulado en una solución oftálmica que se aplica dos veces al día en forma de colirio para tratar la presbicia.

El LACE, que es un profármaco que consiste en ácido lipoico y colina, es una molécula única para tratar la presbicia. El ácido lipoico (LA) es el principio activo y la cabeza de colina sirve para ayudar a la permeabilidad en el ojo. Después de la administración del colirio, las esterasas hidrolizan los enlaces entre el La y la colina en la película lagrimal y la córnea. El ácido lipoico libre entra en el ojo y finalmente llega al cristalino. Allí se reduce a ácido dihidrolipoico por medio de oxidorreductasas endógenas que después provocan la hidrólisis de las proteínas citosólicas dentro de las células lenticulares alargadas superficiales. Esta escisión proteica permite un flujo libre del citosol y la inhibición de los procesos oxidativos asociados al endurecimiento del cristalino senil. Se espera que las soluciones oftálmicas preparadas a partir de LACE permitan la acomodación y mejoren el enfoque de la visión de cerca en personas con presbicia, la pérdida senil de la acomodación.

La presbicia es una incapacidad senil para enfocar objetos cercanos; esta afección es provocada por cambios fisiológicos en la microestructura del cristalino que producen una pérdida de flexibilidad en el autoajuste de la longitud focal y la curvatura del cristalino para enfocar el objeto visual. Esta afección se corrige con lentes correctoras. Se ha notificado que el éster de colina del ácido lipoico ("LACE") (véase, p. ej., la patente de EE.UU. n.° 8.410.462) puede restablecer la visión de cerca.

Como apoyo a esta afirmación están los estudios ex-vivo que demostraron que es posible inducir farmacológicamente el ablandamiento del cristalino en cristalinos de donantes humanos utilizando el agente reductor de disulfuro proteínico ditiotreitol (DTT), y en cristalinos de ratón con el ácido lipoico.

Este mecanismo de acción permite contemplar el tratamiento de múltiples enfermedades y trastornos oculares. Estos trastornos son, pero sin limitación, presbicia, degeneración macular senil, cataratas y queratoconjuntivitis seca.

Un aspecto que ha vuelto problemática la formulación de LACE ha sido la propensión a desestabilizarse mediante la apertura del anillo del enlace ditiolano para formar especies oxidadas que alteran la actividad de la molécula. A temperatura ambiente, el LACE se degrada rápidamente en especies oxidadas (véase "HPLC Chromatogram of LACE Ophthalmic Solution with Degradation Products", véase la FIG. 2). Incluso cuando se almacena a temperaturas de refrigeración, se produce una rápida oxidación durante el almacenamiento ya en la 1 semana, lo que daña la utilidad de la molécula como medicamento. Para que la solución oftálmica de LACE (también denominada solución oftálmica de EV06) se utilice en su máximo potencial como un medicamento, era fundamental que la formulación acuosa se estabilizara durante el almacenamiento y durante el uso.

Otro aspecto que frustró el desarrollo farmacéutico de las soluciones oftálmicas de LACE fue la incidencia de irritación de la superficie ocular observada in vivo en un modelo de irritación en conejos. La invención detalla parámetros inesperados responsables o causantes de irritación ocular, y procesos para eliminar o reducir al mínimo estos parámetros. Estos parámetros no estaban relacionados con la composición de la formulación ni con las propiedades de la sustancia farmacéutica, factores que normalmente se correlacionan con la irritación ocular o se atribuyen a esta.

Las composiciones y los métodos descritos en el presente documento describen métodos para estabilizar formulaciones oftálmicas de LACE a largo plazo. También se describen descubrimientos imprevistos en cuanto a la causa de la irritación de las formulaciones de LACE formuladas en determinadas condiciones de proceso. También eran obvios los parámetros críticos del proceso identificados como factores clave en la generación de soluciones oftálmicas finales y agradables de LACE (solución oftálmica EV06).

Las condiciones finales del proceso redujeron al mínimo la formación de las especies de degradación, así como la formación de especies que se atribuyeron a la irritación ocular.

III. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

FIG. 1: Estructura química del éster de colina del ácido lipoico.

FIG. 2: Especies micelares de LACE a los 8,1 minutos a las 1, 3 y 4 horas de la mezcla, formulación KW-LACE-01-86-2.

FIG. 3: Especies micelares de LACE a los 8,1 minutos a las 6, 8 y 24 horas de la mezcla, formulación KW-LACE-01-86-2.

FIG. 4: Las especies micelares de LACE (el máximo indicado por la flecha) son más altas cuando se mezclan a temperaturas de refrigeración

FIG. 5A: Las altas concentraciones micelares de LACE (indicadas por un gran máximo entre 7,9 y 8,5 minutos en la HPLC [High Performance Liquid Chromatography, cromatografía líquida de alta resolución]) se correlacionan con el IFA de cloruro de LACE "con grumos".

FIG. 5B: El LACE micelar inferior (el máximo indicado por la flecha) se correlaciona con el IFA de LACE sin grumos.

FIG. 6: Efecto de la alanina y del pH.

La FIG. 7 es un gráfico de formulaciones que comparan las siguientes variables: (a) Control (original) frente al Control cloruro de sodio al 0,25 %, Control cloruro de sodio al 0,25 %, sin glicerina, (b) Control (original) frente al control, sin cloruro de benzalconio (BAC), (c) Control (original) frente a la formulación original sin glicerina.

La FIG. 8 muestra el efecto del sulfito sobre la estabilidad del LACE a 57 °C. Se prepararon formulaciones que contenían sulfito a concentraciones del 0,05 % de sulfito (■, ▲ ) y del 0,1 % de sulfito (x) a pH 4 y 4,5. La adición de sulfito no estabilizó la formulación original (♦).

La FIG. 9 explora adicionalmente el efecto potencialmente estabilizador de la eliminación del cloruro de benzalconio. Todas las variaciones de formulación sin cloruro de benzalconio fueron superiores a la formulación original de control (pH 4,5). Las variaciones de formulación fueron composiciones sin BAC a pH 4 y 4,5 (▲, ■), sin glicerina/sin BAC cloruro sódico al 0,9 % (x), sin BAC sulfito al 0,05 % a pH 4 y 4,5

FIG. 10: Efecto de la eliminación de glicerina sobre la estabilidad del LACE.

FIG. 11: Efecto de las composiciones tamponadas sobre la estabilidad del LACE.

FIG. 12A: Correlación de la puntuación de la irritación (en un modelo de irritación en conejos) con el % de especies micelares de LACE medido mediante HPLC-UV (High-Pressure Liquid Chromatography with UV Detector, cromatografía líquida de alta resolución con detector ultravioleta).

FIG. 12B: Correlación de la puntuación de la irritación (en un modelo de irritación en conejos) con el % de especies micelares de LACE medido mediante HPLC-ELSD (High Performance Liquid Chromatography-Evaporative Light Scattering Detector, cromatografía líquida de alta resolución con detector de dispersión de luz evaporativa).

FIG. 13: Curva patrón de la osmolalidad del glicerol.

IV. BREVE SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención logra dos objetivos principales: (a) generar soluciones oftálmicas de LACE que sean estables durante al menos un año a temperaturas de almacenamiento de refrigeración de 2-5 °C y (b) generar y optimizar los parámetros del proceso para preparar soluciones oftálmicas de LACE que no sean irritantes para el ojo.

La estructura química del LACE muestra dos puntos de degradación. Uno es la apertura del anillo del diotiolano y el otro es la degradación oxidativa e hidrolítica. Como se ha mencionado anteriormente, el LACE interactúa con el oxígeno para generar rápidamente especies oxidadas. En el agua, el LACE también es susceptible a la hidrólisis del enlace éster para generar ácido lipoico y colina. La velocidad a la que se produce la hidrólisis está correlacionada con la temperatura; la hidrólisis es menor a temperaturas y pH inferiores.

Se realizaron estudios con derivados de la solución oftálmica de LACE, también denominada solución oftálmica de EV06, almacenados en frascos cuentagotas de colirio permeables de PEBD (polietileno de baja densidad), que son permeables a los gases. En el presente documento, se describen métodos que los inventores han desarrollado para reducir al mínimo la oxidación de la solución de LACE preparada durante el almacenamiento.

Además, extensos estudios de compatibilidad de mezclas de excipientes con LACE establecieron la importancia fundamental de determinados excipientes como factores estabilizadores, el papel del pH en la estabilización de la hidrólisis del LACE en agua, así como el efecto de agentes de ajuste de la osmolalidad tales como el cloruro de sodio y el glicerol. Lo más importante es que, en la presente invención, se ha descrito el efecto estabilizador de la alanina frente al LACE, en contraposición al citrato, fosfato y borato.

Al buscar las causad de la irritación, se descubrió que cuando el LACE se disuelve en agua, forma micelas y agregados micelares, comunes a los compuestos que son de naturaleza anfífila. Por definición, los ejemplos de compuestos formadores de micelas son la fosfatidilcolina, la fosfatidilcolina pegilada, el estearato de PEG, el sorbitol, etc. Aunque el fenómeno de formación de micelas de LACE no es inesperado debido a la naturaleza anfífila de la molécula, la formación de estos agregados a temperaturas inferiores resultaron sorprendentes. La presencia de los agregados se midió mediante un método de RP-HPLC (Reverse Phase-High Performance Liquid Chromatography, cromatografía líquida de alta resolución de fase inversa) desarrollado internamente. La medición se pudo realizar tanto con HPLC-UV (FIG. 3A) como con HPLC-ELSD (FIG. 3B)

Las soluciones acuosas de LACE formaron estructuras en forma de gel a temperaturas de refrigeración (2-5 °C). También se espera que el número y la agregación de estos agregados micelares aumenten al aumentar la concentración del fármaco formador de micelas. Los inventores han correlacionado el grado de agregación micelar del LACE con la irritación de la superficie ocular, un resultado inesperado y sorprendente, ya que los vehículos micelares se suelen contemplar como sistemas de suministro de fármacos para los compuestos insolubles. Por tanto, este es el primer informe sobre la irritación correlacionada con los agregados micelares. Una vez descubierto, había que reducir al máximo este fenómeno mediante métodos de preparación para correlacionarlo con el bienestar.

La formación de agregados micelares pareció estar correlacionada con la temperatura de la preparación (FIG. 4). La formación de autoensamblados es un fenómeno termodinámico, correlacionado con la reducción eficaz de la energía libre superficial para lograr un estado de energía reducido al mínimo. Cuando se preparó el LACE en agua a una temperatura inferior (5 °C), se formaron agregados que tenían una consistencia similar a un gel. Las composiciones formuladas a temperaturas de refrigeración fueron extremadamente irritantes para los ojos. Se pudo cuantificar el estado agregado mediante un método de RP-HPLC (véase el cromatograma mostrado en la FIG. 3A-3B). Una serie de experimentos de investigación demostró la ausencia de polímeros u oligómeros cuando se midió mediante cromatografía de exclusión por tamaño (SEC, Size Exclusión Chromatography). Otras investigaciones probaron la irritación ocular en función de procesos realizados en presencia de aire ambiental o en presencia de nitrógeno. No hubo correlación entre la irritación y el aire o el nitrógeno. Ambos resultaron igualmente agradables cuando se formularon a temperatura ambiente, aunque los productos de degradación fueron mayores en presencia de aire. Cuando se preparó el LACE a temperatura ambiente, la agregación micelar fue menor cuantificada mediante el método de HPLC. El LACE preparado a temperatura ambiente generó soluciones que eran agradables y no irritantes.

También fue inesperado el "desenredo" de los agregados micelares. Los agregados formados en las composiciones acuosas de LACE pudieron "desenredarse" cuando las soluciones se dejaron equilibrar en la mesa de trabajo a temperatura ambiente, según lo medido mediante HPLC. Otros experimentos demostraron que la mezcla enérgica lograba la desagregación. Por tanto, se demostró que estas especies no eran especies permanentes con enlaces covalentes, sino más bien un autoensamblado de agregados de LACE que parecían tener una concentración inferior a temperatura ambiente, en comparación con 5 °C. Cuando las soluciones acuosas de LACE se congelaron, formaron una consistencia fibrosa. Cuando estas soluciones se llevaron a temperatura ambiente y se almacenaron a esta temperatura, volvieron a parecer soluciones homogéneas, lo que dio mayor credibilidad al concepto de dependencia de la temperatura del autoensamblado.

Sin embargo, una vez preparadas, las soluciones de LACE sin agregados, pudieron almacenarse en condiciones de refrigeración para reducir al mínimo la degradación oxidativa e hidrolítica. Mediante estudios de estabilidad, se estableció que la temperatura ideal de almacenamiento del LACE es de 2-5 °C para reducir al mínimo las degradaciones.

Se determinó que las condiciones ideales de preparación eran a temperatura ambiente (22-25 °C) para producir la solución menos irritante, y que la condición ideal de almacenamiento era entre 2-5 °C para lograr una solución oftálmica estable y agradable de LACE para la presbicia.

Para ayudar aún más en la estabilización de las soluciones oftálmicas preparadas a partir de LACE, se colocaron paquetes eliminadores de oxígeno en bolsas de Mylar impermeables con los frascos oftálmicos de PEBD para evitar la degradación inducida por la oxidación. Amplios estudios de estabilidad demostraron el logro de la estabilidad durante un año de las soluciones oftálmicas de EV06.

En la presente invención, también se describen realizaciones de diferentes composiciones que estabilizan el LACE, incluyendo otros tipos de preparaciones acuosas que incluyen liposomas, emulsiones preparadas con el fin principal de estabilizar el fármaco.

V. Descripción detallada de la invención

A. DEFINICIONES DE TÉRMINOS

Se entiende que los términos "EV06" o "LACE", o la expresión "éster de colina del ácido lipoico" tienen la estructura química que se muestra en la FIG. 1.

Como se utilizan en el presente documento, las formulaciones de LACE se refieren a formulaciones de éster de colina del ácido lipoico. Por ejemplo, la formulación de 1,5 % de LACE se refiere a una formulación que tiene el 1,5 % de éster de colina del ácido lipoico en peso de la formulación. Como alternativa, en la solución oftálmica de EV06, el 1,5 % se refiere a una formulación que comprende el 1,5 % de éster de colina del ácido lipoico.

Como se utiliza en el presente documento, se entiende por "derivado" de éster de colina del ácido lipoico cualquier compuesto o mezcla de compuestos, excluyendo el ácido lipoico y la colina, formado a partir de la reacción del éster de colina del ácido lipoico con un excipiente farmacéutico no acuoso.

Como se utiliza en el presente documento, el término "autoensamblado" indica un ensamblaje termodinámico de moléculas para lograr el estado de energía más estable. Un ejemplo de autoensamblado son las micelas formadas en agua, normalmente formadas por moléculas con un componente hidrófobo y un componente hidrófilo. El componente hidrófilo de la molécula se encuentra en la superficie de las micelas, mientras que el interior contiene las partes hidrófobas; para el LACE, la cabeza de colina está en la superficie de la micela.

A menos que se indique específicamente o sea evidente por el contexto, como se utiliza en el presente documento, el término "excipiente" se refiere a un excipiente farmacéuticamente aceptable.

El término "tratar" se refiere a administrar un tratamiento en una cantidad, de una manera o de un modo eficaz para mejorar una afección, un síntoma o un parámetro asociado a una enfermedad o a un trastorno.

El término "prevenir" se refiere a impedir que un paciente desarrolle un trastorno, hacer que el paciente permanezca sin un trastorno durante un período de tiempo más prolongado o detener la progresión de un trastorno, ya sea en un grado estadísticamente significativo o en un grado detectable para un experto en la materia.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad de un principio activo (p. ej., LACE o derivados del mismo), que produce la prevención o el retraso de la aparición o la mejora de los síntomas de una enfermedad o un trastorno ocular (p. ej., presbicia) en un sujeto o la consecución de un resultado biológico deseado, tal como una amplitud acomodativa mejorada u otro parámetro adecuado que indique el cuadro clínico.

Como se utiliza en el presente documento, la expresión "estabilidad en almacenamiento" o "estable en almacenamiento" se entiende como un aspecto de o para caracterizar una composición o un principio activo (p. ej., LACE o derivados del mismo) que permanece sustancialmente invariable durante el almacenamiento. Se conocen métodos para determinar tal estabilidad en almacenamiento, por ejemplo, la estabilidad en almacenamiento se puede medir mediante HPLC para determinar el porcentaje de la composición o del principio activo (p. ej., éster de colina del ácido lipoico) que permanece o se ha degradado en una formulación tras el almacenamiento de la formulación durante un determinado período de tiempo. Por ejemplo, una composición farmacéutica estable en almacenamiento puede referirse a una composición que, después de almacenarse conforme a la norma farmacéutica (ICH, siglas del inglés International Council for Harmonisation, Consejo Internacional de Armonización), presenta al menos un 90 % (p. ej., 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o más de un 99 %) del principio activo (p. ej., éster de colina del ácido lipoico) en la composición, medido mediante HPLC.

Como se utiliza en el presente documento, la expresión "tiempo de retención relativo" o "TRR" de un compuesto, se puede calcular utilizando la ecuación "TRR = (t2-t0)/(t1 -tü)", en donde to = tiempo de evacuación, ti = tiempo de retención del éster de colina del ácido lipoico, y t2 = tiempo de retención del compuesto, medidos mediante HPLC.

El término "sujeto", como se utiliza en el presente documento, se refiere, en general, a un animal (p. ej., una mascota) o un ser humano, incluyendo un ser humano sano o un paciente con determinadas enfermedades o trastornos (p. ej., presbicia).

VI. Composiciones de LACE y realizaciones

Como se describe en el presente documento, la invención propuesta proporciona realizaciones de composiciones farmacéuticas que comprenden cantidades terapéuticamente eficaces de éster de colina del ácido lipoico, excipientes, tampones y condiciones que son compatibles, así como métodos y procesos que producen soluciones biocompatibles (no irritantes) y estables adecuadas como colirios.

La concentración de éster de colina del ácido lipoico o derivados del mismo en la composición farmacéutica puede ser cualquier concentración del 0,01-0,1 %, del 0,1 % al 10 % (p. ej., 0,1 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, la concentración del éster de colina del ácido lipoico en la composición farmacéutica es del 1 %. En algunas realizaciones, la concentración del éster de colina del ácido lipoico en la composición farmacéutica es del 3 %. En algunas realizaciones, la concentración del éster de colina del ácido lipoico en la composición farmacéutica es del 4 %. El intervalo preferido de LACE en la composición es del 1-3 %. Dentro de este intervalo, el intervalo de composición preferido es del 1,5-4 %.

En otra realización, las composiciones eficaces en la invención propuesta son formulaciones acuosas que contienen LACE y alanina, con la alanina a concentraciones de entre el 0,1 -0,5 %, 0,5 %-1 %, 1 %-1,5 %, 1,5 %-3 %. Dentro de este intervalo, la composición preferida es del 0,5 % de alanina y del 1,5 % de LACE.

En una realización preferida, la composición eficaz que contiene LACE y alanina contiene cloruro de benzalconio como conservante a concentraciones de entre 30-150 ppm.

En otra realización, en la formulación acuosa de LACE, como conservantes se incluyen otros conservantes, tales como el policuaternio SofZia, a concentraciones aprobadas para uso humano por la f Da (Food and Drug Administration, Administración de Medicamentos y Alimentos de los EE.UU.). Otros conservantes pueden ser 2-fenil-etanol, ácido bórico, edetato de disodio.

En otra realización, la solución oftálmica que contiene LACE es un producto estéril de dosis única sin conservante.

Dado que las soluciones micelares autoensambladas de LACE disueltas en agua a altas concentraciones pueden mostrar cierta irritación, un método para volver biocompatibles las soluciones puede ser la encapsulación en liposomas. En este caso, el LACE estará contenido en el interior de los liposomas. Los liposomas son generalmente biocompatibles con la superficie ocular.

En otra realización, la composición farmacéutica tiene glicerol a concentraciones del 0,1 %-10 %. En una realización preferida, la composición tiene una concentración de glicerol del 0,1-5 %.

En algunas realizaciones, el conservante es cloruro de benzalconio y la fuente de energía bioquímica es la alanina. En algunas realizaciones, el éster de colina del ácido lipoico tiene un contraión seleccionado del grupo que consiste en cloruro, bromuro, yoduro, sulfato, metanosulfonato, nitrato, maleato, acetato, citrato, fumarato, hidrogenofumarato, tartrato (p. ej., (+)-tartrato, (-)-tartrato o una mezcla de los mismos), bitartrato, succinato, benzoato y aniones de un aminoácido tal como ácido glutámico.

El agente tampón adecuado puede ser cualquiera de los conocidos en la técnica que pueda lograr un pH deseado (p. ej., el descrito en el presente documento) para la composición farmacéutica. Los ejemplos no limitantes incluyen tampones fosfato (p. ej., fosfato de sodio monobásico monohidratado, fosfato de sodio dibásico anhidro), tampón acetato, tampón citrato, tampones borato y HBSS (solución salina equilibrada de Hank). La cantidad adecuada de un agente tampón se puede calcular fácilmente basándose en un pH deseado. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el agente tampón está en una cantidad aceptable como producto oftálmico. Sin embargo, en algunas realizaciones, la composición farmacéutica no incluye un agente tampón. En algunas realizaciones, el pH de la solución acuosa o la composición farmacéutica final se ajusta con un ácido (p. ej., ácido clorhídrico) o una base (p. ej., hidróxido de sodio) al intervalo de pH deseado (p. ej., como se describe en el presente documento).

En otras realizaciones, el sistema tampón podría seleccionarse entre tampones borato, tampones fosfato, tampones calcio, y combinaciones y mezclas de los mismos. En la realización preferida, el tampón es un tampón de aminoácidos. En otra realización preferida, el tampón de aminoácidos comprende alanina.

En algunas realizaciones, el éster de colina del ácido lipoico tiene un contraión seleccionado del grupo que consiste en cloruro, bromuro, yoduro, sulfato, metanosulfonato, nitrato, maleato, acetato, citrato, fumarato, hidrogenofumarato, tartrato (p. ej., (+)-tartrato, (-)-tartrato o una mezcla de los mismos), succinato, benzoato y aniones de un aminoácido tal como ácido glutámico. Otros contraiones son estearato, propionato y furoato.

En algunas realizaciones, la formulación oftálmica tiene un pH de 4 a 8. En algunas realizaciones, la formulación oftálmica tiene un pH de 4,5. En algunas realizaciones, la formulación oftálmica comprende al menos un ingrediente seleccionado del grupo que consiste en una fuente de energía bioquímicamente aceptable, un conservante, un agente tampón, un agente de tonicidad, un tensioactivo, un agente modificador de la viscosidad y un antioxidante.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica contiene un antioxidante. En algunas realizaciones preferidas, el antioxidante comprende ascorbato. En otra realización preferida, el antioxidante contiene glutatión. El antioxidante adecuado puede ser cualquiera de los conocidos en la técnica. Los ejemplos no limitantes incluyen ácido ascórbico, estearato de ácido L-ascórbico, alfatioglicerina, ácido etilendiaminotetraacético, ácido eritórbico, clorhidrato de cisteína, N-acetilcisteína, L-carnitina, ácido cítrico, acetato de tocoferol, dicloroisocianurato de potasio, dibutilhidroxitolueno, 2,6-dif-butil-4-metilfenol, lecitina de soja, tioglicolato de sodio, tiomalato de sodio, vitamina E natural, tocoferol, pastiminato de ascorbilo, pirosulfito de sodio, butilhidroxianisol, 1,3-butilenglicol, tetraquis[3-(3,5-di-f-butil-4-hidroxifenil)]propionato de pentaeritil, galato de propilo, 2-mercaptobencimidazol y sulfato de oxiquinolina. La cantidad adecuada de antioxidante puede estar en el intervalo del 0,1 % al 5 % (p. ej., 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el antioxidante está en una cantidad que es oftálmicamente aceptable.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se prepara en un entorno inerte tal como nitrógeno o argón de alta pureza. En una realización preferida, la composición farmacéutica se prepara en un entorno de nitrógeno con menos de 2 ppm de oxígeno.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se prepara a temperaturas de entre 20-25 °C.

En una realización preferida, la molécula de LACE sólida se muele en un polvo fino. Preferentemente, la molécula de LACE sólida se muele en un polvo sin grumos. En una realización, el tamaño de partícula será inferior a 500 micrómetros. En otra realización preferida, el tamaño de partícula será inferior a 100 micrómetros.

En una realización preferida, la composición farmacéutica se prepara mediante la desaireación inicial de la solución acuosa mantenida a temperatura ambiente (20-25 °C), a continuación, la disolución de los excipientes en la solución, seguida de la adición del LACE sólido en partes lentamente con disolución enérgica con burbujeo lento de nitrógeno.

En una realización, la composición farmacéutica se agita vigorosamente durante 4 a 24 horas. En una realización preferida, la composición farmacéutica se agita vigorosamente de 4 horas a 8 horas. En otra realización preferida, la composición farmacéutica se agita vigorosamente durante 8 horas.

La composición farmacéutica preparada mediante cualquier método puede tener una estabilidad en almacenamiento de al menos 3 meses (p. ej., 3 meses, 6 meses, 9 meses, 1 año o más de 1 año).

La composición farmacéutica también puede tener perfiles favorables de producto de degradación relacionado con el fármaco (p. ej., impurezas totales relacionadas con el fármaco o cantidad de una impureza específica relacionada con el fármaco) tras el almacenamiento a 5 °C durante un determinado período de tiempo. Se conocen herramientas analíticas (p. ej., HPLC) para medir la cantidad de producto de degradación relacionado con el fármaco en una formulación.

La fuente de energía bioquímicamente aceptable adecuada puede ser cualquiera de las conocidas en la técnica. Por ejemplo, la fuente de energía bioquímica aceptable puede ser cualquiera de las que pueden facilitar la reducción al participar como un producto intermedio de las vías metabólicas de la energía, en particular, la vía metabólica de la glucosa. Los ejemplos no limitantes de una fuente de energía bioquímicamente aceptable adecuada incluyen aminoácidos o derivados de los mismos (p. ej., alanina, glicina, valina, leucina, isoleucina, 2-oxoglutarato, glutamato y glutamina, etc.), un azúcar o metabolitos de la misma (p. ej., glucosa, glucosa-6-fosfato (G6P)), piruvato (p. ej., piruvato de etilo), lactosa, lactato o derivados del mismo), un lípido (p. ej., un ácido graso o derivados del mismo como monoglicéridos, diglicéridos y triglicéridos, y fosfolípidos) y otros (p. ej., NADH). La cantidad adecuada de una fuente de energía bioquímicamente aceptable puede estar en el intervalo del 0,01 % al 5 % (p. ej., 0,05 %, 0,1 %, 0,2 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, la fuente de energía bioquímica es piruvato de etilo. En algunas realizaciones, la fuente de energía bioquímica es alanina. En algunas realizaciones, la cantidad de piruvato de etilo o de alanina está en el intervalo del 0,05 % al 5 % (p. ej., 0,05 %, 0,1 %, 0,2 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, la cantidad de alanina es del 0,5 % en peso de la composición. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, la fuente de energía bioquímicamente aceptable está en una cantidad que es oftálmicamente aceptable.

Los conservantes adecuados pueden ser cualquiera de los conocidos en la técnica. Los ejemplos no limitantes incluyen cloruro de benzalconio (BAC), cetrimonio, clorobutanol, edetato disódico (EDTA), policuaternio-1 (Polyquad®), polihexametilen-biguanida (PHMB), complejo de oxicloro estabilizado (PURITE®), perborato de sodio y SofZia®. La cantidad adecuada de un conservante en la composición farmacéutica puede estar en el intervalo del 0,005 % al 0,1 % (p. ej., 0,005, 0,01,0,02 %, 0,05 %, 0,1 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, el conservante es cloruro de benzalconio. En algunas realizaciones, el cloruro de benzalconio está en una cantidad del 0,003 % al 0,1 % (p. ej., 0,003, 0,01, 0,02 %, 0,05 %, 0,1 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, el cloruro de benzalconio está en una cantidad del 0,01 % en peso de la composición. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el conservante está en una cantidad que es oftálmicamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica no contiene conservantes.

Los agentes de tonicidad adecuados pueden ser cualquiera de los conocidos en la técnica. Los ejemplos no limitantes incluyen cloruro de sodio, cloruro de potasio, manitol, dextrosa, glicerina, propilenglicol y mezclas de los mismos. La cantidad adecuada de agente de tonicidad en la composición farmacéutica es cualquier cantidad que pueda lograr una osmolalidad de 200-460 mOsm (p. ej., 260-360 mOsm o 260-320 mOsm). En algunas realizaciones, la composición farmacéutica es una composición isotónica. En algunas realizaciones, la cantidad de un agente de tonicidad (p. ej., cloruro de sodio) es del 0,1 % al 5 % (p. ej., 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el agente de tonicidad está en una cantidad que es oftálmicamente aceptable.

El tensioactivo adecuado puede ser cualquiera de los conocidos en la técnica, incluyendo los tensioactivos iónicos y los tensioactivos no iónicos. Los ejemplos no limitantes de tensioactivos no iónicos útiles incluyen ésteres grasos de polioxietileno (p. ej., polisorbato 80 [monooleato de poli(oxietilen)sorbitán], polisorbato 60 [monoestearato de poli(oxietilen)sorbitán], polisorbato 40 [monopalmitato de poli(oxietilen)sorbitán], monolaurato de poli(oxietilen)sorbitán, trioleato de poli(oxietilen)sorbitán o polisorbato 65 [triestearato de poli(oxietilen)sorbitán]), aceites de ricino hidrogenados de polioxietileno (p. ej., aceite de ricino hidrogenado de polioxietileno 10, aceite de ricino hidrogenado de polioxietileno 40, aceite de ricino hidrogenado de polioxietileno 50 o aceite de ricino hidrogenado de polioxietileno 60), polioxipropilenglicoles de polioxietileno (p. ej., polioxipropilen(30) glicol de polioxietileno (160) [Pluronic F681], polioxipropilen (67) glicol de polioxietileno (42) [Pluronic P123], polioxietileno(54) glicol de polioxietileno (39) [Pluronic P85], polioxipropilen(67)glicol de polioxietileno (196) [Pluronic F1271] o polioxipropilen (20) glicol de polioxietileno (20) [Pluronic L-441]), estearato de polioxilo 40, ésteres grasos de sacarosa y una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el tensioactivo es polisorbato 80. La cantidad adecuada de tensioactivo en la composición farmacéutica puede estar en el intervalo del 0,01 % al 5 % (p. ej., 0,05, 0,1, 0,2 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, el tensioactivo es polisorbato 80, y la cantidad de polisorbato 80 está en el intervalo del 0,05 % al 5 % (p. ej., 0,05, 0,1, 0,2 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En algunas realizaciones, la cantidad de polisorbato 80 es del 0,5 % en peso de la composición. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el tensioactivo está en una cantidad que es oftálmicamente aceptable. Sin embargo, en algunas realizaciones, la composición farmacéutica no contiene tensioactivos.

El agente modificador de la viscosidad adecuado puede ser cualquiera de los conocidos en la técnica. Los ejemplos no limitantes incluyen geles de carbopol, agentes celulósicos (p. ej., hidroxipropilmetilcelulosa), policarbófilo, alcohol polivinílico, dextrano, gelatina glicerina, polietilenglicol, poloxámero 407, alcohol polivinílico y polivinilpirrolidona, y mezclas de los mismos. La cantidad adecuada de agente modificador de la viscosidad puede estar en el intervalo del 0,1 % al 5 % (p. ej., 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 % o cualquier intervalo basado en estos valores numéricos especificados) en peso de la composición. En cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, el agente modificador de la viscosidad está en una cantidad que es oftálmicamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica no contiene un agente modificador de la viscosidad (p. ej., un agente modificador de la viscosidad polimérico tal como hidroxipropilmetilcelulosa).

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se caracteriza por uno o más de los siguientes:

(a) tener una concentración del éster de colina del ácido lipoico del 0,1 % al 10 % (p. ej., 0,1 %, 1,0 %, 1,5 %, 3 %, 4 %, 5 % o cualquier intervalo entre los valores numéricos especificados) en peso de la composición;

(b) tener una concentración de un conservante (p. ej., cloruro de benzalconio) del 0,003 % al 0,1 % (p. ej., 0,01 %) en peso de la composición;

(c) tener una fuente de energía bioquímica (p. ej., alanina) del 0,1 % al 5 % (p. ej., 0,5 %) en peso de la composición; y

(d) tener una concentración de glicerol del 0,5 % al 5 % (p. ej., 2,7 %) en peso de la composición.

En algunas realizaciones, la composición farmacéutica consiste esencialmente en el 1-3 % en peso de glicerina, el 0,5 % en peso de alanina, el 0,005-0,01 % en peso de cloruro de benzalconio, el 1-3 % en peso de éster de colina del ácido lipoico y agua, en donde el pH de la composición farmacéutica es de 4,3 a 4,7.

En una realización, la composición oftálmica se administra en cada ojo del sujeto una vez al día, dos veces al día, tres veces al día y cuatro veces al día.

En algunas realizaciones, la invención también proporciona un sistema para almacenar una composición farmacéutica que comprende un principio activo en una solución acuosa, en donde el principio activo (p. ej., éster de colina del ácido lipoico o derivados del mismo) es susceptible de hidrólisis en la solución acuosa. En una realización preferida, la composición farmacéutica se almacena en un frasco cuentagotas de colirio de PEBD, se recubre con nitrógeno durante el proceso de llenado, se tapa y después se envasa en una bolsa secundaria de Mylar impermeable a los gases que contiene un absorbente de oxígeno.

En otra realización, el frasco o la unidad cuentagotas de colirio es polietilen-tereftalato (PET). En otra realización, el frasco cuentagotas de colirio está construido de un material que tiene baja permeabilidad a los gases.

En otra realización, el frasco cuentagotas de colirio puede construirse de cualquier material que tenga una baja permeabilidad a los gases. En otra realización, el frasco cuentagotas de colirio puede ser de dosis unitaria, llenado mediante técnicas de sellado de llenado por soplado.

En una realización, la composición farmacéutica se almacena a 2-5 °C, durante un período de 3 meses a 2 años.

VII. Métodos de tratamiento

Las composiciones farmacéuticas que comprenden éster de colina del ácido lipoico o derivados del mismo (p. ej., como los descritos en el presente documento) se pueden emplear en un método para tratar o prevenir una enfermedad o un trastorno asociado al daño oxidativo. Se conocen enfermedades o trastornos asociados con el daño oxidativo.

En algunas realizaciones, la invención proporciona un método para tratar una enfermedad ocular en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar en el ojo del sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento.

En algunas realizaciones, las enfermedades oculares son presbicia, queratoconjuntivitis seca, cataratas, degeneración macular (incluyendo la degeneración macular senil), retinopatías (incluyendo la retinopatía diabética), glaucoma o inflamaciones oculares. En algunas realizaciones, la enfermedad ocular es la presbicia.

La cantidad adecuada de composiciones farmacéuticas para los métodos de tratamiento o prevención de una enfermedad ocular en el presente documento puede ser cualquier cantidad terapéuticamente eficaz. En algunas realizaciones, el método comprende administrar en el ojo del sujeto una cantidad de la composición farmacéutica eficaz para aumentar la amplitud acomodativa del cristalino en al menos 0,1 dioptrías (D) (p. ej., 0,1,0,2, 0,5, 1, 1,2, 1,5, 1,8, 2, 2,5, 3 o 5 dioptrías). En algunas realizaciones, el método comprende administrar en el ojo del sujeto de 1 a 5 gotas (aproximadamente 40 |jl por gota) de la composición farmacéutica. En algunas realizaciones, el ojo del sujeto se trata con la composición farmacéutica 1,2, 3, 4, 5 o más de 5 veces al día, cada vez con 1-5 gotas (aproximadamente 40 j l por gota). En algunas realizaciones, el cristalino o el ojo del sujeto se trata con 1, 2, 3, 4, 5 o más de 5 gotas de la composición farmacéutica cada vez. En algunas realizaciones, el ojo del sujeto se trata con la composición farmacéutica del presente documento dos o tres veces al día, cada vez con 1 o 2 gotas (aproximadamente 40 ul por gota).

Los métodos incluyen métodos preventivos que se pueden realizar en pacientes de cualquier edad. Los métodos también incluyen métodos terapéuticos que se pueden realizar en pacientes de cualquier edad, en particular pacientes que tienen entre 20 y 75 años.

Los siguientes ejemplos son ilustrativos y no limitan el alcance de las realizaciones reivindicadas.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Tabla 1: Propi n r l l r lin l i li i LA E

Ejemplo 2

Cinética de especies micelares correlacionada con la duración de la mezcla de las soluciones de proceso de LACE Los experimentos descritos en este apartado demuestran que las especies micelares de LACE se estabilizan y disminuyen con duraciones de mezcla prolongadas a 25 °C. Los resultados demostraron que la naturaleza reversible de estas especies es característica de los sistemas autoensamblados tales como las micelas y los agregados micelares.

Las especies micelares formadas mediante el autoensamblado espontáneo de moléculas son impulsadas por la energía libre total del sistema equilibrado. El experimento demostró la cinética del logro de ese estado equilibrado con duraciones más largas de mezcla.

Objetivos:

o Establecer un intervalo duración del proceso estableciendo si las especies micelares en crecimiento se han estabilizado.

o Establecer un "tiempo de espera"

Procedimiento:

o Se prepararon dos lotes de 200 g de 1,5 % de LACE a 25 °C después de desoxigenar el vehículo con nitrógeno burbujeado. Se burbujeó nitrógeno de manera continua durante la disolución del LACE. o Un lote se preparó utilizando el Lote n.° 2 de PCF (Prácticas Correctas de Fabricación) (G2-14LAC) tal cual, con gran cantidad de grumos, el otro se preparó utilizando una muestra de G2-14LAC que se había molido hasta obtenerse un polvo fino utilizando un mortero y una mano de mortero.

o Después de la disolución del LACE y del ajuste del pH, los lotes se agitaron durante 24 horas con una capa de nitrógeno constante, manteniendo el oxígeno disuelto a ~1,6 ppm (frente a 8,2 ppm de solubilidad saturada). En los puntos temporales de 1 h, 3 h, 4 h, 6 h, 8 h, 9 h y 24 h, se extrajeron aproximadamente 5-15 ml con una jeringa, y se esterilizaron por filtración en frascos cuentagotas de colirio (5 ml/frasco), sin capa de nitrógeno en el frasco (el aparato estaba en uso para los lotes a granel). o Se diluyeron las muestras de todos los puntos temporales a 10 mg/g y luego se inyectaron para el análisis de RP-HPLC con detección de ELSD durante los 30 minutos de eliminación de la solución a granel.

o Después del punto temporal de 24 horas, las soluciones a granel se esterilizaron por filtración y se dividió cada una en dos porciones de ~50 ml, una mantenida a 5 °C y la otra porción de 50 ml mantenida a 25 °C. Todas las porciones se recubrieron con nitrógeno soplado en el recipiente.

o Al final del tiempo de espera adicional de 24 horas, cada porción se introdujo en frascos cuentagotas de colirio con una capa de nitrógeno en el frasco.

Observaciones sobre la disolución

o La porción con grumos de G2-14LAC se añadió a la formulación KW-LACE-01-86-1 durante aproximadamente 5 minutos, y algunos de los grumos requirieron otros 20 minutos para disolverse.

o El G2-14LAC en polvo se añadió a la formulación KW-LACE-01-86-2 durante aproximadamente 15 minutos, debido a que cada espátula completa se agregaba en una balsa fina de material que flotaba en la superficie, que no se dispersaba de inmediato. Por lo tanto, no se añadió otra porción hasta que las porciones anteriores se hubieron introducido en el vórtice. El tiempo estimado para que se disolviera cada una de las porciones fue de aproximadamente 10 minutos, y todo el proceso duró aproximadamente 25 minutos.

Resultados

o Se hizo evidente un máximo de TR = 8 minutos (correlacionado con las especies micelares) en ambas formulaciones desde el primer punto temporal tomado.

o No hubo diferencias consistentes entre los dos lotes en el % de área del máximo de 8 min (especies micelares), aunque el 2.° lote, elaborado con LACE en polvo, tuvo niveles más altos de especies micelares en algunos puntos temporales.

o El % de área del máximo de 8 min se redujo significativamente a las 24 horas, como se muestra en la siguiente tabla.

o El pH final fue de 4,54, para ambos lotes.

Tabla 2:

Cinética de^ l f rm i n l m r i n i mi l r LA E n n m z l r l n

Los resultados demuestran que, a los 8,1 minutos, las especies micelares de LACE se reducen al mínimo con duraciones de mezcla prolongadas. El máximo a los 8,1 minutos se reduce drásticamente con duraciones de mezcla más prolongadas.

En cada una de las soluciones también se midieron los productos de degradación del éster de colina del ácido lipoico. Como se ha mencionado anteriormente, el mecanismo de degradación del LACE es oxidativo e hidrolítico, lo que produce especies oxidadas e hidrolizadas.

Tabla 3:

Análisis de im urezas sustancias relacionadas de la solución oftálmica de EV06 en función de la mezcla

Los datos muestran que los productos de degradación de LACE aumentan con un duración prolongada de la mezcla. Por lo tanto, las condiciones finales del proceso para la preparación de la solución oftálmica de EV06 implicaron un máximo de 8 horas para lograr una solución no irritante con los productos de degradación reducidos al mínimo.

Ejemplo 3

Correlación de la temperatura de mezcla con la presencia de especies mlcelares de LACE

Los datos mostrados en la FIG. 4 son de una solución de cloruro de LACE formulada bajo argón y en condiciones de refrigeración. La solución fue extremadamente irritante para la superficie ocular. El porcentaje de especies micelares fue del 8-10 % del máximo principal de IFA de LACE (especies micelares indicadas por una flecha, en el tiempo de retención de 7,9-8,1 minutos), una concentración que normalmente no se observa en las soluciones mezcladas a temperatura ambiente.

Ejemplo 4

Correlación de los grumos con la formación de especies micelares de LACE

La FIG. 5A es un cromatograma de cloruro de RP-HPLC de solución oftálmica de EV06 preparada a partir de un lote de LACE que tenía "grumos" sólidos. La solución preparada a partir de este lote de IFA (ingrediente farmacéutico activo, sustancia farmacéutica de LACE sólida) mostró un porcentaje más alto (10-15 %) de especies micelares de LACE (mostrado con una flecha) que las soluciones preparadas a partir de una gran cantidad de IFA en polvo (FIG. 5B). Por lo tanto, aunque ambas soluciones parecían completamente disueltas, la solución formulada a partir de IFA sin grumos tenía una concentración más baja de especies de LACE micelar. Cuando se correlaciona con la irritación ocular, la solución mostrada en la FIG. 5A tuvo puntuaciones más altas de irritación en un modelo de conejo. Esto condujo a la incorporación de procedimientos para deshacer los grumos a fin de convertir el material en polvo, antes de la preparación.

Ejemplo 5

Estudios de compatibilidad de excipientes con LACE

Sumario

El fin de estos experimentos fue descubrir posibles variables desestabilizadoras en la formulación, a través de variaciones sistemáticas en la composición de la formulación y el microambiente (tales como el pH). El ácido lipoico y cualquier derivado del ácido lipoico estarían sujetos a degradación y a polimerización con calor, luz y oxígeno, lo que conduciría a la apertura del anillo de ditiolano. Por lo tanto, la presencia de excipientes que puedan inducir la escisión de radicales libres oxidativos podría ser un factor desestabilizador. Los cuadros de formulaciones 1 y 2 investigaron sistemáticamente el efecto de los excipientes ya presentes en la formulación como posibles factores desestabilizadores.

Las formulaciones para el LACE en estos experimentos contienen la sustancia farmacéutica, alanina, glicerina, cloruro de benzalconio en agua purificada, con hidróxido de sodio 1 N o ácido clorhídrico 1 N añadido para lograr un pH entre 4,4­ 4,6 y una osmolalidad de 290-300 mOsm/kg. Los experimentos descritos en este documento fueron estudios de compatibilidad para identificar los excipientes que pudieran estabilizar las soluciones oftálmicas de LACE.

El Cuadro de formulaciones n.° 1 probó las siguientes variables dadas en (a)-(e). Las formulaciones se prepararon en una cabina de bioseguridad con guantes purgada con nitrógeno y se esterilizaron por filtración. Todas las formulaciones se probaron en condiciones aceleradas a 57 °C y se probaron mediante HPLC para el análisis y la determinación de impurezas en t = 0, 3,5 días y 7 días. Se probó un total de 19 formulaciones del Cuadro n.° 1.

(a) Efecto del pH: Las formulaciones se prepararon a pH 3,5, 4 y 5 y se compararon con la formulación de control a pH 4,5. Como se muestra en la FIG. 6, la tasa de degradación del LACE fue equivalente en todos los niveles de pH en el intervalo de 3,5-5.

(b) Efecto de la alanina: El papel de la alanina en la formulación se dedujo comparando las tasas de degradación con la formulación original (control). Como se muestra en la FIG. 6, la ausencia de alanina pareció acelerar la tasa de degradación del LACE. Por lo tanto, la alanina es un excipiente fundamental en las formulaciones oftálmicas de EV06.

(c) Efecto del cloruro de benzalconio y de la glicerina: Se planteó la hipótesis de que los peróxidos contenidos en la glicerina pueden catalizar la oxidación; de manera similar, se planteó la hipótesis de que el BAC podría desestabilizar la sustancia farmacéutica debido a la escisión de los radicales libres y a la oxidación posterior. Como se observa en la FIG. 7, la formulación sin cloruro de benzalconio fue sustancialmente más estable que el control. El prototipo sin glicerina también fue más estable que el control. Además, el cloruro de sodio añadido a la formulación (en lugar del glicerol, para ajustar la osmolalidad) pareció tener un efecto desestabilizador (también mostrado en la FlG. 7). En otro experimento con diferentes combinaciones de glicerina, cloruro de sodio, sulfito y pH con todas las variaciones sin cloruro de benzalconio, cabe señalar que todas las formulaciones sin cloruro de benzalconio fueran más estables que el control (FlG. 5). Los experimentos de las FlG. 7 y 9 demuestran que la eliminación del cloruro de benzalconio en el LACE puede estabilizar la formulación. Para las composiciones oftálmicas de EV06, la reducción al mínimo del contenido de cloruro de benzalconio a 50 ppm puede tener un importante factor estabilizador. El cloruro de sodio demostró un efecto desestabilizador, por lo que el glicerol se consideró más adecuado como agente tónico en las composiciones finales de EV06.

(d) Efecto del sulfito: Se realizaron diferentes experimentos con sulfito (FlG. 8), con combinaciones de diferentes niveles de sulfito. Se añadió sulfito a la formulación como antioxidante (FlG. 8), a diferentes niveles de pH (4, 4,5) y concentraciones. La presencia de sulfito no pareció mejorar sustancialmente la estabilidad del LACE. No estaba claro si hubo un efecto perjudicial, ya que el 0,1 % de sulfito en la formulación era equivalente al control.

(e) Efecto de la glicerina: El efecto de la glicerina se investigó en diferentes combinaciones de formulaciones mediante la eliminación sistemática de la glicerina. Como se muestra en las FlG. 7 y 10, las combinaciones sin glicerina parecieron ser más estables que el control. Sin embargo, debido al alto efecto desestabilizador del cloruro de sodio, se seleccionó la glicerina como el excipiente fundamental para el ajuste de la tonicidad.

(f) Efecto del tampón: Se probaron diferentes composiciones tamponadas. El tampón acetato y acetato ácido bórico parecieron estabilizar la formulación.

Apartados experimentales

a) Configuración del método de HPLC: El análisis de HPLC consistió en un gradiente de fase móvil de 50 minutos compuesto por (A) fosfato de sodio monobásico 0,05 M, sal sódica del ácido 1-heptanosulfónico 0,005 M, trietilamina al 0,2% v/v, ajustado a pH 4,5 con ácido fosfórico; y (B) acetonitrilo. La columna analítica utilizada es una YMC Pack ODS AQ (4,6 x 250 mm, 5 |jm, 120 A), P/N AQ125052546WT; la longitud de onda de detección analítica es de 225 nm.

b) Formulaciones

Las formulaciones se prepararon con mucho cuidado para garantizar que el IFA de LACE no se expusiera al oxígeno ni al calor. El IFA se dividió en alícuotas, en viales de vidrio limpios bajo una atmósfera inerte de N2 dentro de la bolsa de bioseguridad con guantes y se almacenó envuelto en papel de aluminio en un congelador a -20 °C hasta su uso. Las formulaciones se prepararon con excipientes de alta pureza y material de vidrio estéril. Todos los excipientes se prepararon previamente en soluciones madre y se mezclaron antes de la adición del IFA y los ajustes finales de pH. Las formulaciones se tabulan en el Apéndice A.

II. Resultados y exposición

La FIG. 6 es un gráfico del % de IFA de LACE frente a los días a 57 °C (durante t = 0, 3,5 días y 7 días), comparando sistemáticamente las formulaciones que se prepararon a pH 3,5, 4, 4,5 (original), 5 y el control sin alanina. Incluso a t = 0, la formulación sin alanina se había degradado considerablemente en cuanto al contenido de IFA. Como se observa en la FIG. 6, las formulaciones fueron equivalentes en estas condiciones a pH 3,5-5. La FIG. 7 es un gráfico de formulaciones que comparan las siguientes variables: (a) Control (original) frente al Control cloruro de sodio al 0,25 %, Control cloruro de sodio al 0,25 %, sin glicerina, (b) Control (original) frente al control, sin cloruro de benzalconio, (c) Control (original) frente a la formulación original sin glicerina.

Como se observa en la FIG. 7, la adición de cloruro de sodio a la formulación original no estabilizó la formulación.

La FIG. 8 muestra el efecto del sulfito sobre la estabilidad del LACE a 57 °C. Se prepararon formulaciones que contenían sulfito a concentraciones del 0,05 % de sulfito (■, ▲ ) y del 0,1 % de sulfito (x) a pH 4 y 4,5. La adición de sulfito no estabilizó la formulación original (♦).

La FIG. 9 explora adicionalmente el efecto potencialmente estabilizador de la eliminación del cloruro de benzalconio. Todas las variaciones de formulación sin cloruro de benzalconio fueron superiores a la formulación original de control (pH 4,5). Las variaciones de formulación fueron composiciones sin BAC a pH 4 y 4,5 (▲, ■), sin glicerina/sin BAC cloruro sódico al 0,9 % (x), sin BAC sulfito al 0,05 % a pH 4 y 4,5 (•, ■).

Las FIG. 7 y 10 comparan el efecto de eliminar la glicerina, en diferentes composiciones, en función del pH, sulfito y cloruro de sodio. La formulación sin glicerina y sin BAC en presencia de cloruro de sodio y sulfito (+) y la formulación sin glicerina y con BAC (*) fueron superiores a la formulación original (♦).

La FIG. 11 exploró el uso de diferentes composiciones tamponadas sobre la estabilidad del LACE. La formulación original (pH 4,5) se comparó con composiciones con tampón acetato (■, x, *, •) y borato a pH 7,5. El edetato de sodio añadido como antioxidante no estabilizó la formulación. El tampón acetato y el tampón acetato ácido bórico parecieron ser superiores a la formulación de control.

Resumiendo, la eliminación del cloruro de benzalconio pareció potenciar la estabilidad consecuentemente. La eliminación de glicerol también puede ser un paso positivo. Se sabe que el glicerol tiene una presencia residual de formaldehído que ocasionalmente conduce a la degradación del IFA. Curiosamente, la adición de edetato o sulfito no tuvo un efecto positivo. Otro antioxidante tal como el ascorbato de sodio puede tener un efecto positivo.

Tabla 4:

Formulaciones ex erimentales con com atibilidad

4

Ejemplo 6:

Correlación de la Irritación ocular con el porcentaje de especies mlcelares de LACE

Las FIG. 12A y 12B generalmente proporcionan una instantánea de la correlación de la irritación con las especies micelares de LACE en una serie de lotes preparados.

Ejemplo 7

Método de ajuste de la osmolalidad con glicerol

El intervalo de osmolalidad requerido para las formulaciones que contienen fármacos y el placebo es de 280-320 mOsm/kg. Preferentemente, todas las formulaciones de LACE deben estar dentro de 290-310 mOsm/kg.

Dado que el LACE contribuye a la osmolalidad, cada formulación tendrá concentraciones variables de glicerol para lograr la osmolalidad requerida.

I. Sumario: Composiciones finales ajustadas

Tabla 5:

Composici n fin l l i n f lmi EV n n nr i n li r l

II. Detalles experimentales:

A. Placebos que contienen glicerol

Se preparó una serie de placebos. Todos los placebos y las soluciones que contenían LACE que se prepararon posteriormente contenían lo siguiente, con cantidades variables de glicerol:

• 0,5 % (5 mg/g) de alanina

• 0,005 % (0,05 mg/g) de cloruro de benzalconio

• Pequeñas cantidades de hidróxido de sodio 1 N, ácido clorhídrico 1 N, para ajustar el pH a 4,5

• Agua para inyección (añadida para el peso final)

Tabla 6:

Placebo que c ni n li r l f l n nr i n li r l

B. Formulaciones que contienen LACE

Basándose en la curva patrón de osmolalidad del glicerol anterior (véase la Tabla 6) y en las observaciones del solicitante, que mostraron 44-55 mOsm/kg adicionales (promedio de 48 mOsm/kg) por cada 1 % de LACE, se preparó una serie de soluciones para confirmar la contribución osmótica real del LACE. La osmolalidad total deseada era de 300 mOsm/kg. Tabla 7:

Concentraci n li r l r m i i n EV ^

Estos datos indican que el efecto del LACE sobre la osmolalidad es algo mayor de lo esperado, del orden de 57­ 60 mOsm/kg por cada 1 %. Por consiguiente, se preparó una serie completa de soluciones con osmolalidades deseadas ligeramente alteradas para las soluciones sin LACE y, por lo tanto, diferentes contenidos de glicerol deseados. Todas las soluciones se prepararon utilizando la misma solución madre de alanina/cloruro de benzalconio a pH 4,5 que se utilizó en los placebos, de modo que la composición final fuera consecuentemente:

0,5 % (5 mg/g) de alanina

0,005 % (0,05 mg/g) de cloruro de benzalconio

Pequeñas cantidades de hidróxido de sodio 1 N, ácido clorhídrico 1 N, para ajustar el pH a 4,5

Agua para inyección (añadida hasta un peso final de 5,0 g por formulación)

Tabla 8:

Ajuste de la osmolalidad de las com osiciones de EV06

C. Preparaciones estériles

Basándose en estos resultados experimentales, se prepararon lotes de 10,0 g esterilizados por filtración de cada formulación, con las siguientes composiciones deseadas, y se envasaron en frascos cuentagotas de colirio estériles (2 ml por frasco):

Tabla 9:

Cuadro de com osición final de com osiciones de EV06

Ejemplo 8

Método de preparación de composiciones farmacéuticas de LACE

Un método para preparar la composición farmacéutica de LACE es el siguiente:

o A temperatura ambiente, se añade agua para inyectables (WFI, Water for Injection) al 80 % del peso del lote al recipiente de preparación de vidrio. Se purga el agua con nitrógeno para lograr <10 ppm de oxígeno.

o Se añaden progresivamente alanina, glicerina y BAC, y se mezclan hasta que se disuelvan.

o Se ajusta el pH a 4,4-4,6 con HCl o NaOH.

o Se muele el LACE en un mortero con la mano de mortero bajo nitrógeno para deshacer los grumos y se añade lentamente mientras se mezcla.

o Se añade agua desoxigenada para inyección para lograr el peso deseado del lote final.

o Se mezcla el lote durante un total de 8 horas para garantizar una completa dispersión y disolución. o El pH se puede ajustar a 4,4-4,6 con NaOH o HCl si es necesario.

o La osmolalidad se puede ajustar a 290-310 con glicerol si es necesario.

o Después de 8 horas de mezcla, la solución de medicamento a granel de EV06 se filtra asépticamente a través de un filtro esterilizante SHC de cápsula de 0,5/0,2 |jm en una bolsa de retención.

o Se mantiene la solución de producto a granel en la bolsa de retención a 5 °C mediante refrigeración o baño de hielo.

o Se realiza una prueba del punto de burbuja del filtro para garantizar la integridad del filtro.

o Se transfiere la solución a granel esterilizada por filtración asépticamente a la sala de Clase 100 y se llena en frascos previamente esterilizados.

o Se aplican puntas y tapones estériles a los frascos bajo una capa de nitrógeno.

o Se transfieren los frascos sellados a bandejas que se embolsan con una purga de nitrógeno y se transfieren de inmediato a un almacenamiento a 5 °C.

Ejemplo 9

Estudios de estabilidad de formulaciones de LACE

Los primeros prototipos de formulación contenían edetato de sodio y 0,01 % de cloruro de benzalconio. Los estudios de estabilidad con y sin estos excipientes demostraron que el edetato de sodio no estabilizó el LACE. La presencia de un exceso de cloruro de benzalconio desestabilizó ligeramente el fármaco. Por lo tanto, la formulación final no contiene edetato de sodio ni 0,005 % de cloruro de benzalconio. Mediante pruebas microbiológicas, se demostró que el 0,004 % de cloruro de benzalconio en la composición de la formulación actual era eficaz como conservante en el medicamento. En un esfuerzo por estabilizar aún más la formulación del fármaco, se llevaron a cabo estudios de estabilidad sistemáticos (5 °C, 25 °C y 40 °C) en lotes de I D (Research and Development, investigación y desarrollo) a mediana escala, con la solución oftálmica de EV06 en frasco en presencia y ausencia de paquetes eliminadores de oxígeno contenidos en bolsas de papel de aluminio impermeables al vapor con cierre de cremallera. Los frascos de producto almacenados a 5 °C en presencia de un paquete eliminador de oxígeno sellado en bolsas de papel de aluminio resellables, demostraron estabilidad a los 12 meses.

A lo largo del proceso de desarrollo, se tomaron precauciones adicionales para estabilizar la formulación final frente a la degradación debida a la exposición al oxígeno ambiental y a las condiciones de no refrigeración. Se implementó la manipulación de la sustancia farmacéutica bajo nitrógeno (exclusión de oxígeno y reducción al mínimo de la humedad) y la preparación protegida con una atmósfera de nitrógeno para reducir al mínimo la exposición al oxígeno. Después de la preparación, se introduce el producto en una bolsa de retención impermeable al vapor y se almacena en condiciones de refrigeración hasta que se produce el envasado en frascos. La bolsa de retención que contiene la solución a granel se mantiene fría durante el llenado. Se protege la solución de fármaco de cada frasco con una atmósfera de nitrógeno para reducir al mínimo la exposición al oxígeno.

T l 1 : E ili l l i n f lmi EV _______________________________________

y tapa del cuentagotas____________________

Compuestos relacionados: LA = cido R-a-Lipoico (Norma USP [United States Pharmacopeia, Farmacopea de los Estados Unidos])

Claims (16)

REIVINDICACIONES:

1. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la presbicia, que comprende una sal farmacéuticamente aceptable del 0,1-10 % en peso de éster de colina del ácido lipoico, 0,1-2 % en peso de un agente de ajuste de la tonicidad, 0,003-0,01 % en peso de un conservante, un tampón seleccionado del grupo que consiste en tampones acetato, borato y acetato/ácido bórico, 0,05 %-1,0 % en peso de una fuente de energía bioquímica que es alanina, y agua.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde la sal farmacéuticamente aceptable del éster de colina del ácido lipoico es una sal de cloruro, bromuro o yoduro.

3. La composición de la reivindicación 1 o 2, en donde el agente de ajuste de la tonicidad es glicerol.

4. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la composición no contiene conservantes.

5. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la composición no contiene cloruro de benzalconio.

6. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el conservante es cloruro de benzalconio.

7. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la composición tiene un pH de 4 a 8.

8. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que tiene una estabilidad en almacenamiento de al menos 3 meses, al menos 6 meses, al menos 9 meses o al menos 1 año.

9. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que es una solución de colirio no irritante.

10. Un método para producir la composición farmacéutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende:

moler finamente la sal farmacéuticamente aceptable de éster de colina del ácido lipoico en un polvo que tenga un tamaño medio de partícula no superior a 5 mm,

añadir la sal molida a agua, en donde el agua tiene menos de 5 ppm, preferentemente menos de 2 ppm de oxígeno, mezclar durante 6 a 8 horas, preferentemente durante 8 horas, a temperatura ambiente, para formar una mezcla, llenar un frasco oftálmico con la mezcla y añadir una capa de gas inerte antes de tapar,

envasar el frasco oftálmico lleno y tapado en una bolsa impermeable a gases, y

almacenar el envase a 2-8 °C.

11. El método de la reivindicación 10, en donde la bolsa contiene un eliminador de oxígeno.

12. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 11, en donde la temperatura de mezcla está entre 20 y 25 °C.

13. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en donde el gas inerte es nitrógeno.

14. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en donde el frasco oftálmico es un frasco de polipropileno de baja densidad (PEBD), polietilen-tereftalato (PET) o politetrafluoroetileno (PTFE).

15. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, en donde el frasco oftálmico es una unidad de soplado, llenado y sellado.

16. Una solución de colirio estable en almacenamiento y/o no irritante preparada mediante un método cualquiera de las reivindicaciones 10 a 15.