ES2902034T3 - Combinaciones de probióticos de levadura y bacterias y métodos de uso para mejorar la producción porcina - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende: un cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus que comprende: Bacillus subtilis 1104 depositado con el número de registro ABS 1104 NRRL B-67258 y Bacillus subtilis 2084 depositado con el número de registro BS2084 NRRL B- 50013; y al menos uno de los extractos de levadura de Saccharomyces cerevisiae, una levadura de Saccharomyces cerevisiae hidrolizada y un cultivo de levadura Saccharomyces cerevisiae.

Description

DESCRIPCIÓN

Combinaciones de probióticos de levadura y bacterias y métodos de uso para mejorar la producción porcina

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad respecto de la Solicitud Provisional de Patente de los Estados Unidos n.° 62/484.058, presentada el 11 de abril de 2017.

Bibliografía

Las citas bibliográficas completas de las referencias citadas en el presente documento con el apellido del primer autor y el año de publicación entre paréntesis se encuentran en la sección Bibliografía, que precede a las reivindicaciones.

Campo de la invención

La divulgación se refiere a composiciones y a métodos para mejorar la producción porcina. Más particularmente, la divulgación se refiere a composiciones que incluyen cepas de Bacillus, levaduras Saccharomyces cerevisiae y a métodos de formulación y uso de las mismas para mejorar la producción porcina.

Antecedentes

Aumentar la productividad de las cerdas es clave para mejorar el coste de producción y optimizar la rentabilidad de los cerdos comercializados para carne. La divulgación proporcionada en el presente documento demuestra varias combinaciones de levadura y bacterias probióticas para mejorar la productividad de las cerdas y la inmunidad y supervivencia de los cerdos destetados.

Se han identificado varios tipos diferentes de microorganismos como probióticos beneficiosos que mejoran la salud del hospedador, incluidos Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus, Bacillus y levaduras. Los probióticos tienden a proporcionar beneficios al hospedador mediante tres modos de acción: 1) inmunomodulación del sistema inmunitario del hospedador; 2) cambios en la ecología microbiana gastrointestinal a través de efectos directos e indirectos sobre otros microorganismos; 3) efecto sobre los metabolitos bacterianos, ya sean toxinas producidas por organismos patógenos o compuestos que proporcionan una ventaja nutritiva a los organismos beneficiosos o al hospedador (Soccol et al., 2010). Los Bacillus y levaduras son suplementos probióticos utilizados en la alimentación del ganado, ya que tienden a ser estables y a mantener la viabilidad en las condiciones relativamente duras de la mezcla y el almacenamiento de los piensos, en comparación con los organismos Lactobacillus o Bifidobacterium. Por consiguiente, existen ejemplos en la bibliografía científica de los efectos beneficiosos de la administración de levaduras o Bacillus sobre la salud y la producción de las piaras de cerdos.

Se ha demostrado que la levadura formulada mejora el peso al nacer, mejora la supervivencia de los lechones (mortalidad reducida) y aumenta el número y el peso de los cerdos destetados (Bass et al., 2012). La investigación ha demostrado que la formulación de los componentes de la levadura a niveles específicos de beta-glucano, mananooligosacárido, contenido de nucleótidos y los metabolitos de la levadura pueden aumentar la respuesta de rendimiento de los animales cuando se incluye la levadura en las dietas, así como la previsibilidad de la respuesta (Lindemann et al., 2010). El componente de beta-glucano de la levadura activa y potencia la respuesta inmunitaria, mejorando la protección contra las bacterias patógenas en los cerdos (Vetvicka et al., 2014). Además, el betaglucano tiene la capacidad de aglutinar ciertas micotoxinas, así como de mejorar la función hepática. Se ha demostrado que los glucanos beta 1,3 y beta 1,6 mejoran la respuesta inmunitaria, mientras que el glucano beta 1,4 no mejora la respuesta inmunitaria (Galliano et al., 2012; Jang et al., 2013). Se ha demostrado que la levadura seca es un estimulante del sistema inmunitario que favorece el crecimiento de las bacterias beneficiosas, a la vez que inhibe las bacterias patógenas. (Jurgens et al., 1997). La alimentación de la cerca con levadura seca mejoró la IgG en la leche y no afectó al rendimiento de la lactancia, sin embargo, mejoró el rendimiento posterior después del destete. Los cerdos alimentados con mananooligosacáridos después del destete tuvieron un mejor rendimiento de crecimiento en comparación con los cerdos alimentados con el control (Miquel et al., 2004). El efecto es aún más pronunciado en los cerdos con un estado de salud más bajo.

El suministro de nucleótidos procedentes de levadura a cerdos jóvenes se ha relacionado con el aumento de la ingesta de alimentos y la mejora de la transición de la leche materna al alimento sólido (Plante et al., 2011). La leche suele ser rica en nucleótidos, mientras que los ingredientes típicos de los piensos son relativamente bajos. Al complementar los nucleótidos de la levadura, el crecimiento y la maduración intestinal se potencian durante un periodo de alto estrés causado por el destete del lechón de la madre (Plante et al., 2011). Los metabolitos de la levadura también contienen ácido glutámico, que favorece la ingesta de alimentos. El cerdo joven tiene una capacidad limitada de ingesta de alimentos, por lo tanto, estimular la ingesta de alimentos es una prioridad en los cerdos destetados para asegurar una transición positiva de la dieta láctea a los alimentos sólidos.

El cultivo de levadura se ha administrado a cerdas gestantes/en lactación en un intento de mejorar la mortalidad antes del destete y el aumento de peso de la camada (Kim et al., 2010; Veum et al., 1995). En ambos estudios, la alimentación con un cultivo de levadura no mejoró el rendimiento de los cerdos durante la lactancia, ni mejoró la utilización del alimento de las cerdas. En cambio, se ha demostrado que la alimentación con levadura seca mejora el rendimiento tras el destete, pero no afectó al rendimiento de la camada antes del destete (Jurgens et al., 1997). Mediante la formulación de levadura con componentes específicos y la alimentación de las cerdas durante la gestación y la lactancia, aumentaron el peso al nacer y el peso al destete de los lechones en comparación con las cerdas alimentadas con el control (Lindemann et al., 2010). El rendimiento posterior al destete también se vio afectado por la alimentación de las cerdas con un producto de levadura formulado durante la gestación y la lactancia. El peso al destete fue mayor en los cerdos alimentados con levadura en comparación con los alimentados con el control, lo que se traduce en una mayor ganancia media diaria (GMD) y pesos finales. Cuando los datos se ajustaron al peso inicial, los cerdos procedentes de cerdas alimentadas con levadura tuvieron también una mejor conversión alimentaria.

Se ha notificado que los probióticos de Bacillus aumentan la ganancia de peso corporal y mejoran la eficiencia de la utilización del pienso cuando se administran a cerdos (Chen et al., 2006; Davis et al., 2008; Hong et al., 2005). Los efectos promotores del crecimiento de los probióticos de Bacillus dados de comer a los cerdos se han atribuido a su capacidad para producir compuestos antimicrobianos e inhibir el crecimiento de patógenos entéricos (Hentges et al., 1992). Por consiguiente, mediante la producción de compuestos antimicrobianos y la inhibición de algunas especies microbianas entéricas, los probióticos de Bacillus modifican la población microbiana del tracto gastrointestinal, haciendo que el entorno entérico sea menos hospitalario para los organismos patógenos y aumentando las poblaciones beneficiosas de Lactobacillus (Cui, et al., 2013; Baker et al., 2013). Además, se han observado efectos beneficiosos en los lechones cuando se administró a las cerdas un probiótico Bacillus, incluido el aumento del peso al destete, menos brotes de diarrea, y reducción de los niveles de E. coli y Clostridium en el tracto gastrointestinal (Baker et al., 2013; Maruta et al., 1996). Estos efectos de los probióticos de Bacillus son similares a los beneficios de la administración de antibióticos promotores del crecimiento, y se ha informado de que los Bacillus mejoran el rendimiento del crecimiento en los cerdos de forma similar a la alimentación suplementada con antibióticos (Hu et al., 2014).

Existen algunos ejemplos en la bibliografía que informan sobre los efectos de alimentar al ganado y a las aves de corral con una combinación de productos a base de levadura con probióticos Bacillus. Un producto de levadura hidrolizada enzimáticamente y un probiótico de Bacillus subtilis se suministraron por separado y en combinación a pollos de engorde, y el estudio concluyó que no se observó ninguna relación sinérgica en respuesta a esta combinación específica de levadura y Bacillus, aunque los efectos de la combinación podrían considerarse aditivos (Gómez et al., 2012). Un estudio que evaluó una combinación de cepas vivas de Saccharomyces y Bacillus dadas de comer a cerdos de engorde encontró que no había ningún beneficio en la combinación de levadura y Bacillus sobre la alimentación con la cepa de Bacillus sola (Giang et al., 2011). Una combinación de levaduras vivas, es decir, Saccharomyces cerevisiae, hongos, es decir, Aspergillus oryzae, y cepas bacterianas (Lactobacillus acidophilus y Bacillus subtilis) administrada a cerdos destetados mejoró el rendimiento del crecimiento respecto a los cerdos alimentados con una dieta de control no tratados, pero no se evaluaron los efectos de los componentes individuales de la combinación (Choi et al., 2011), Otro estudio que evaluó la combinación de un probiótico de Bacillus con un producto de levadura seca activa no informó de ninguna mejora adicional en el rendimiento del crecimiento cuando se alimentó a los cerdos destetados con respecto a lo observado cuando se les alimentó con los componentes individuales (Barker et al., 2003). Además, una levadura activa combinada con una combinación de probióticos de Bacillus subtilis y Bacillus licheniformis no mejoró el rendimiento de crecimiento ni la digestibilidad de los nutrientes en comparación con la combinación de levadura o Bacillus sola cuando se alimentó a cerdos destetados (Min et al., 2003). Estos datos sugieren que la combinación de algunos productos de levadura (ya sea una cepa viva o no viable) con un probiótico a base de Bacillus no aporta ningún beneficio adicional cuando se alimenta a los cerdos en comparación con los beneficios observados al dárselos por separado.

Los antibióticos promotores del crecimiento se utilizan ampliamente para controlar los problemas sanitarios, aumentar la ganancia de tejido magro y mejorar la eficiencia de la utilización del alimento en la producción porcina. Sin embargo, el uso de tecnologías antibióticas pronto será menos frecuente cuando se aplique la Directiva sobre piensos veterinarios implantada en la 2017, que restringe y regula agresivamente el uso de antibióticos en la dieta del ganado y las aves de corral. Los productores de cerdos desean alternativas eficaces a los antibióticos que proporcionen un beneficio similar a la eficiencia productiva que el uso de antibióticos subterapéuticos. Los efectos de los probióticos de levaduras y Bacillus expuestos en el presente documento ofrecen algunos de los mismos beneficios que los antibióticos promotores del crecimiento, aunque a menudo en menor grado y con menos consistencia. La industria porcina necesita tecnologías alternativas para gestionar la salud de su piara y la eficiencia de la producción a través de todas las etapas de producción de crecimiento porcino en ausencia de uso de antibióticos subterapéuticos. De manera óptima, esta alternativa a los antibióticos sería fácil de implementar en la granja y proporcionaría múltiples beneficios a la salud de la piara y a la producción porcina desde el nacimiento hasta la comercialización.

Sumario de la invención

La presente invención pretende resolver uno o varios de los problemas señalados anteriormente, y se expone en el juego de reivindicaciones adjunto.

De acuerdo con una realización preferida de la presente invención, la divulgación se refiere a una composición que comprende un cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus que comprende:

Bacillus subtilis 1104 (número de referencia ABS 1104 NRRL B-67258) y Bacillus subtilis 2084 (número de referencia BS2084 NRRL B-5001); y un producto de levadura formulado. Como se usa en el presente documento, el producto de levadura formulado puede comprender una combinación de extracto de levadura Saccharomyces cerevisiae que representa aproximadamente el 25-80 % del total del producto de levadura formulado en peso, levadura hidrolizada que representa aproximadamente el 5-40 % del total del producto de levadura formulado en peso, un cultivo de levadura que represente aproximadamente el 5-50 % del total del producto de levadura formulado en peso. La levadura formulada también puede comprender piedra caliza que represente aproximadamente el 5-50 % del total del producto de levadura formulada en peso.

En una realización, la invención se refiere a una composición que tiene un cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus que comprende: Bacillus subtilis 1104 y Bacillus subtilis 2084; y al menos uno de los extractos de levadura de Saccharomyces cerevisiae, una levadura de Saccharomyces cerevisiae hidrolizada y un cultivo de levadura Saccharomyces cerevisiae.

En una realización, el producto de levadura Saccharomyces cerevisiae puede contener entre el 25 y el 80 por ciento en peso del extracto de levadura Saccharomyces cerevisiae, entre el 5 y el 40 por ciento en peso de la levadura Saccharomyces cerevisiae hidrolizada, y entre el 5 y el 50 por ciento en peso del cultivo de levadura Saccharomyces cerevisiae.

En una realización, la composición puede comprender, al menos en parte, un agente microbiano alimentado directamente.

En una realización, la composición también puede incluir un portador seleccionado entre al menos uno de suero de leche, maltodextrina, sacarosa, dextrosa, piedra caliza, cáscaras de arroz y aluminato de sodio.

En una realización, la composición también puede incluir un conservante.

En una realización, la composición también puede incluir un pienso para animales.

En una realización, la composición también puede incluir un volumen de alimento.

En una realización, la composición en un pienso para animales tiene una concentración del cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus en la composición de aproximadamente entre 1 x 10e4 y 1 x 10e9 UFC/g.

En una realización, la composición en un pienso para animales es consumida por un animal y tiene una concentración resultante del cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus introducido en el animal en el intervalo de aproximadamente entre 1 x 10e5 y 1 x 10e11 UFC/animal/día.

En una realización, la composición es una composición microbiana de alimentación directa que comprende el cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus y un producto aislado de levadura Saccharomyces cerevisiae y en donde la composición microbiana de alimentación directa inhibe la Escherichia coli en el tracto gastrointestinal de un cerdo que ha ingerido una cantidad eficaz de dicha composición microbiana de alimentación directa.

En una realización:

(i) la composición es para su uso en el aumento del rendimiento de un cerdo;

(ii) la composición es para su uso en la mejora de la función del sistema inmunitario de un cerdo; y/o

(iii) la composición es una composición microbiana de alimentación directa para su uso en la inhibición de Escherichia coli en el tracto gastrointestinal de un cerdo que haya ingerido una cantidad eficaz de dicha composición microbiana de alimentación directa, en donde el aumento del rendimiento comprende la mejora de uno o más de diarreas, mortalidad, número de cerdos nacidos, nacidos vivos, peso de la camada al nacer, capacidad de supervivencia, función del sistema inmunitario e inflamación.

En una realización, la composición es para su uso en el aumento del rendimiento de un cerdo, comprendiendo el método administrar al cerdo una cantidad eficaz de la composición.

En una realización, la composición es para su uso en:

(i) mejorar la función del sistema inmunitario en el cerdo;

(ii) aumento de las inmunoglobulinas en el cerdo;

(iii) reducir la inflamación en el cerdo; y/o

(iv) aumentar el interferón gamma en el cerdo.

En una realización, la composición es para su uso en:

(i) reducir los recuentos de bacterias patógenas en el intestino de los cerdos; y/o

(ii) mejorar la función del sistema inmunitario en la descendencia nacida del cerdo, en donde el cerdo es una cerda a la que se le ha administrado una cantidad eficaz de la composición.

En una realización, la composición es para su uso en donde la mejora de la función del sistema inmunitario en la descendencia nacida del cerdo se selecciona entre el grupo que comprende al menos uno de: aumento de las inmunoglobulinas en la descendencia, aumento del interferón gamma en la descendencia, reducción de la inflamación en la descendencia, reducción de la diarrea en las crías a los tres días después del destete, mejora de la transición de una dieta basada en leche a una dieta sólida de las crías, aumento del peso de la camada al destete de las crías, mejora de la supervivencia de un grupo de la descendencia, mejora de la capacidad de supervivencia del grupo de crías después del destete y reducción de la tasa de mortalidad del grupo de crías.

En una realización, la invención se refiere a un método de preparación de un pienso que comprende la mezcla de una cantidad eficaz de la composición con un componente del pienso.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. Una gráfica que muestra el análisis de componentes principales de los datos de la ecología microbiana fecal que compara las cerdas gestantes alimentadas con 1) control, dieta basal; 2) Bacillus subtilis de dos cepas microbianas de alimentación directa (DFM; Bacillus subtilis ABS1104 NRRL B-67258; Bacillus subtilis BS2084 NRRL B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura (Levadura); o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada (Y+DFM).

Figura 2. Una gráfica que muestra el análisis de componentes principales de los datos de la ecología microbiana fecal que compara las cerdas lactantes alimentadas con 1) control, dieta basal; 2) Combinación de dos cepas de Bacillus subtilis (ABS1104 NRRL B-67258; BS2084 Nr Rl B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura (Levadura); o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada (Y+DFM).

Figura 3. Una gráfica que muestra el análisis de componentes principales de los datos de la ecología microbiana fecal que compara los lechones de 5 días de cerdas alimentadas con 1) control, dieta basal; 2) Bacillus subtilis de dos cepas microbianas de alimentación directa (DFM; Bacillus subtilis ABS1104 NRRL B-67258; Bacillus subtilis BS2084 NRRL B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura (Levadura); o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada (Y+DFM).

Figura 4. Una gráfica que muestra el análisis de componentes principales de los datos de la ecología microbiana fecal que compara los lechones de 18 días de cerdas alimentadas con 1) control, dieta basal; 2) Bacillus subtilis de dos cepas microbianas de alimentación directa (DFM; Bacillus subtilis ABS1104 NRRL B-67258; Bacillus subtilis BS2084 NRRL B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura (Levadura); o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada (Y+DFM).

Figura 5. Una gráfica que muestra el análisis de componentes principales de los datos de la ecología microbiana fecal que compara los lechones de 24 días destetados nacidos de cerdas alimentadas con 1) control, dieta basal; 2) Bacillus subtilis de dos cepas microbianas de alimentación directa (DFM; Bacillus subtilis ABS1104 NRRL B-67258; Bacillus subtilis BS2084 NRRL B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura (Levadura); o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada (Y+DFM).

Figura 6. Una gráfica que muestra el análisis de componentes principales de los datos de la ecología microbiana fecal que compara los lechones de 35 días destetados nacidos de cerdas alimentadas con 1) control, dieta basal; 2) Bacillus subtilis de dos cepas microbianas de alimentación directa (DFM; Bacillus subtilis ABS1104 NRRL B-67258; Bacillus subtilis BS2084 NRRL B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura (Levadura); o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada (Y+DFM).

Antes de explicar en detalle las realizaciones de la invención, ha de entenderse que la invención no se limita en cuanto a su aplicación a los detalles de construcción y la distribución de los componentes expuesta en la siguiente descripción o ilustrada en los dibujos. Son posibles otras realizaciones de la invención o de ponerla en práctica o llevarla a cabo de diversas maneras. Asimismo, debe entenderse que la fraseología y la terminología empleadas en el presente documento son a efectos descriptivos, y no deben considerarse como limitativas.

Descripción detallada

A menos que definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entiende normalmente un experto en la materia a la que pertenece la presente divulgación. Singleton et al, DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20.a Ed., John Wiley and Sons, Nueva York (1994) y Hale y Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, N.Y. (1991) proporcionan al experto un diccionario general de muchos de los términos usados en la presente divulgación.

La presente divulgación no está limitada por los métodos y materiales ilustrativos divulgados en el presente documento, y cualquier método y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento puede utilizarse en la práctica o en la prueba de las realizaciones de la presente divulgación. Los intervalos numéricos incluyen los números que definen el intervalo.

Los encabezados proporcionados en el presente documento no son limitantes de los diversos aspectos o realizaciones de la presente divulgación, que se pueden obtener por referencia a la memoria descriptiva en su conjunto. Por consiguiente, los términos definidos inmediatamente a continuación se definen totalmente por referencia a la memoria descriptiva en su totalidad.

Cabe destacar que, como se usa en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "uno/una", y "el/la" incluyen los referentes en plural salvo que el contexto indique claramente lo contrario.

Los intervalos numéricos de la presente divulgación son aproximados y, por lo tanto, pueden incluir valores fuera del intervalo, a menos que se indique lo contrario. Los intervalos numéricos incluyen todos los valores entre e incluidos los valores inferiores y superiores, en incrementos de una unidad, siempre que haya una separación de al menos dos unidades entre cualquier valor inferior y cualquier valor superior. A modo de ejemplo, si una propiedad compositiva, física o de otro tipo, tal como, por ejemplo, peso molecular, índice de fusión, temperatura, etc., es de 100 a 1.000, se pretende que todos los valores individuales, tales como 100, 101, 102, etc., y subintervalos, tales como de 100 a 144, de 155 a 170, de 197 a 200, etc., están enumerados expresamente. Para los intervalos que contengan valores menores que uno o que contengan números fraccionarios mayores que uno (por ejemplo, 1,1, 1,5, etc.), se considera que una unidad es 0,0001, 0,001, 0,01 o 0,1, según sea adecuado. Para los intervalos que contienen números de un solo dígito inferiores a diez (por ejemplo, de 1 a 5), se suele considerar que una unidad es 0,1. Estos son solo ejemplos de lo que se pretende específicamente, y todas las posibles combinaciones de valores numéricos entre el valor más bajo y el valor más alto enumerado, se deben considerar establecidos expresamente en la presente divulgación. Se proporcionan intervalos numéricos en la presente divulgación para, entre otras cosas, las cantidades relativas de los componentes de una mezcla, y varios intervalos de temperatura y otros parámetros que se indican en los métodos.

Como se usa en el presente documento, "administrar" se entiende como la acción de introducir la cepa, la levadura formulada, y/o la combinación de las mismas a un entorno.

Como se usa en el presente documento, el término "animal" incluye, pero sin limitación, un ser humano, mamífero, anfibio, pájaro, reptil, cerdos, vacas, ganado, cabras, caballos, ovejas, aves de corral y otros animales mantenidos o criados en una granja o rancho, ovejas, ovejas de cuernos grandes, búfalos, antílopes, bueyes, burro, mula, ciervo, alce europeo, caribú, búfalo de agua, camello, llama, alpaca, conejo, ratón, rata, cobaya, hámster, hurón, perro, gato y otras mascotas, primate, mono, simio y gorila. En algunas realizaciones, los animales son cerdos, que incluyen, pero sin limitación, cerdas, lechones y cerdos de engorde.

Por "al menos una cepa", se entiende una sola cepa, pero también mezclas de cepas que comprenden al menos dos cepas de bacterias. Por "una mezcla de al menos dos cepas", se entiende una mezcla de dos, tres, cuatro, cinco, seis o más cepas. En algunas realizaciones de una mezcla de cepas, las proporciones pueden variar del 1 % al 99 %. En determinadas realizaciones, la proporción de una cepa usada en la mezcla es al menos del 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % o 95 %. Otras realizaciones de una mezcla de cepas son del 25 % al 75 %. Otras realizaciones de una mezcla de cepas son aproximadamente el 50 % para cada cepa. Cuando una mezcla comprende más de dos cepas, las cepas pueden estar presentes en proporciones sustancialmente iguales en la mezcla o en proporciones diferentes.

Como se usa en el presente documento, el término "pienso" se refiere a un pienso comercial. Los piensos pueden mezclarse a partir de diversas materias primas y aditivos. Estas mezclas se formulan en función de las necesidades específicas del animal de destino.

Como se usa en el presente documento, "cantidad eficaz" se entiende como una cantidad de cepa, levadura formulada y/o la combinación de las mismas para mejorar el rendimiento de un animal. La mejora del rendimiento puede medirse como se describe en el presente documento o mediante otros métodos conocidos en la técnica. Se puede administrar una cantidad efectiva al animal proporcionándole acceso libre a un alimento que contenga la cepa, la levadura formulada y/o la combinación de las mismas. La cepa, la levadura formulada y/o la combinación de las mismas también puede administrarse en una o más dosis.

Como se usa en el presente documento, el término "pienso" se utiliza en el presente documento como sinónimo de "producto alimenticio".

Como se usa en el presente documento, la expresión "componente del pienso" en referencia a la totalidad o a una parte del pienso parte del pienso puede significar un constituyente del pienso o más de un constituyente del pienso, por ejemplo 2 o 3 o 4. La expresión "componente del pienso" abarca una premezcla o componentes de la premezcla.

Como se usa en el presente documento, "rendimiento" se refiere a la productividad de un animal, tal como un cerdo o aves de corral, medido mediante uno o más de los siguientes parámetros: diarrea, mortalidad, número de cerdos nacidos, nacidos vivos, peso de la camada al nacer, capacidad de supervivencia, función del sistema inmunitario, inflamación. "Una mejora en el rendimiento" o "rendimiento mejorado", tal y como se utiliza en el presente documento, se refiere a una mejora en al menos uno de los parámetros enumerados en la definición de rendimiento.

Como se usa en el presente documento, el término "proteína" incluye proteínas, polipéptidos y péptidos.

En una realización, la divulgación se refiere a una composición que comprende las cepas bacterianas Bacillus subtilis 1104 y Bacillus subtilis 2084 (los depósitos se realizaron en virtud del Tratado de Budapest y se les asignaron los números de referencia, ABS1104 NRRL B-67258 y BS2084 NRRL B-50013, respectivamente) y una levadura formulada, de al menos un extracto de levadura de Saccharomyces cerevisiae, una levadura de Saccharomyces cerevisiae hidrolizada y un cultivo de levadura Saccharomyces cerevisiae. La levadura formulada puede comprender una combinación de extracto de levadura de Saccharomyces cerevisiae que represente aproximadamente el 25-80 % del total de la levadura formulada en peso, la levadura hidrolizada representa aproximadamente el 5-40 % del total de la levadura formulada en peso, un cultivo de levadura que representa aproximadamente el 5-50 % del total de la levadura formulada en peso. La levadura formulada también puede comprender piedra caliza que represente aproximadamente el 5-50 % del total del producto de levadura formulada en peso. La composición puede ser un líquido, una mezcla, un sólido, un polvo, una solución, una dispersión, estar liofilizada, criodesecada o cualquier combinación de las mismas.

En una realización, la composición es un aditivo de pienso. En una realización, las concentraciones de la composición pueden ajustarse como se describe en el presente documento para su administración en la fase animal deseada. En una realización, el animal es un cerdo.

En una realización, pueden añadirse uno o más portadores u otros ingredientes a la composición como se divulga en el presente documento. La composición puede administrarse en diversas formas físicas, por ejemplo, un suplemento añadido directamente al pienso, un concentrado soluble en agua, geles o cápsulas de gelatina. Los aditivos pueden incluir, pero sin limitación, sustratos de crecimiento, enzimas, azúcares, carbohidratos, extractos e ingredientes que promueven el crecimiento.

Las cepas de Bacillus pueden producirse por fermentación de las cepas bacterianas mediante su cultivo en un caldo nutritivo líquido. En al menos una realización, las cepas de Bacillus se cultivan hasta un nivel en el que se forma el mayor número de esporas. En un ejemplo no limitante, la fermentación puede iniciarse mediante la ampliación de un cultivo de siembra. Esto implica transferir de manera repetida y en condiciones de asepsia el cultivo a un volumen cada vez mayor para que sirva como inóculo para la fermentación, y esto se lleva a cabo en grandes fermentadores de acero inoxidable en un medio que contiene proteínas, carbohidratos y minerales necesarios para un crecimiento óptimo. Un ejemplo de medio ilustrativo no limitante es TSB. Después de añadir el inóculo al recipiente de fermentación, la temperatura y la agitación se controlan para permitir el máximo crecimiento. Una vez que el cultivo alcanza una densidad de población máxima, el cultivo se cosecha separando las células del medio de fermentación. Esto se realiza normalmente por centrifugación.

En una realización, para preparar las cepas de Bacillus, cada cepa de Bacillus se fermenta hasta un nivel de 5 * 103 UFC/ml a aproximadamente 4 * 1012 UFC/ml. Las bacterias se recogen por centrifugación y se elimina el sobrenadante. En algunas realizaciones, las bacterias son bacterias sedimentadas. en al menos algunas realizaciones, las bacterias sedimentadas se liofilizan y se mezclan con un portador. Las cepas también pueden utilizarse con o sin conservantes, y en forma concentrada, sin concentrar o diluida.

Posteriormente, puede determinarse el recuento del cultivo. La UFC o unidad formadora de colonias es el recuento de células viables de una muestra resultante de los métodos de emplacado estándar en microbiología.

El término se deriva del hecho de que una sola célula, cuando se coloca en un medio adecuado, prolifera y se convierte en una colonia viable en el medio de agar. Dado que múltiples células pueden dar lugar a una colonia visible, la expresión unidad formadora de colonias es una unidad de medida más útil que el número de células.

En otra realización, la divulgación se refiere a una composición de aditivos para piensos que puede utilizarse como pienso o en la preparación de un pienso. El alimento puede presentarse en forma de solución o como sólido, según el uso y/o el modo de aplicación y/o el modo de administración. Cuando se utiliza como alimento o en la preparación de un alimento, tal como pienso funcional, la composición de aditivo de pienso puede usarse junto con uno o más de los siguientes: un portador nutricionalmente aceptable, un diluyente nutricionalmente aceptable, un excipiente nutricionalmente aceptable, un adyuvante nutricionalmente aceptable, un ingrediente nutricionalmente activo. En una realización, la composición de aditivos para piensos divulgada en el presente documento se mezcla con un componente del pienso para formar un producto alimenticio. En una realización, el pienso puede ser un pienso compuesto, o una premezcla del mismo. En una realización, la composición de aditivos para piensos divulgada en el presente documento puede mezclarse con un pienso compuesto, un componente de un pienso compuesto o una premezcla de un pienso compuesto.

Los piensos compuestos pueden ser alimentos completos que aportan todos los nutrientes diarios necesarios, concentrados que aportan una parte de la ración (proteínas, energía) o suplementos que solo aportan micronutrientes adicionales, como minerales y vitaminas. Los principales ingredientes utilizados en los piensos compuestos son granos para piensos, que incluyen maíz, soja, sorgo, avena y cebada. Una premezcla, como se cita en el presente documento, puede ser una composición compuesta por microingredientes como vitaminas, minerales, conservantes químicos, antibióticos, productos de fermentación y otros ingredientes esenciales. Las premezclas suelen ser composiciones adecuadas para mezclarlas en las raciones comerciales.

En una realización, un pienso tal como se describe en el presente documento puede comprender una o más materias primas seleccionadas del grupo que comprende cereales, como granos pequeños (por ejemplo, trigo, cebada, centeno, avena y combinaciones de los mismos) y/o granos grandes como maíz o sorgo; subproductos de los cereales, como harina de gluten de maíz, granos de destilería, salvado de trigo, harinillas de trigo, salvado de trigo, salvado de arroz, cáscaras de grano de arroz, cáscaras de avena, palmiste y pulpa de cítricos; proteínas obtenidas de fuentes como soja, girasol, cacahuete, altramuz, guisantes, habas, algodón, colza doble cero, harina de pescado, proteína plasmática seca, harina de carne y huesos, proteína de patata, suero de leche, copra, sésamo; aceites y grasas obtenidos de fuentes vegetales y animales; y minerales y vitaminas.

En otra realización más, un pienso puede comprender al menos una materia prima rica en fibra y/o al menos un subproducto de la materia prima rica en fibra para proporcionar un pienso rico en fibra. Algunos ejemplos de materias primas con alto contenido en fibra incluyen: trigo, cebada, centeno, avena, subproductos de los cereales, como harina de gluten de maíz, granos de destilería, salvado de trigo, harinillas de trigo, salvado de trigo, salvado de arroz, cáscaras de grano de arroz, cáscaras de avena, palmiste y pulpa de cítricos. Algunas fuentes de proteína también pueden considerarse ricas en fibra: proteínas obtenidas de fuentes como girasol, altramuz, habas y algodón.

En otra realización más, el pienso puede ser uno o más de los siguientes: un pienso compuesto y una premezcla, que incluye gránulos, un cultivo o un residuo de cultivo: maíz, soja, sorgo, avena, cebada, copra, paja, tamo, pulpa de remolacha; harina de pescado; hierba recién cortada y otras plantas forrajeras; harina de carne y huesos; melaza; torta de aceite y torta de prensado; oligosacáridos; plantas forrajeras conservadas: heno y ensilado; algas marinas; semillas y granos, ya sean enteros o preparados por trituración, molienda, etc.; granos y legumbres germinados; extracto de levadura.

En una realización, la composición divulgada en el presente documento se mezcla con el producto alimentario. Como alternativa, la composición puede incluirse en la emulsión o en los ingredientes en bruto de un pienso.

En una realización, la divulgación se refiere a métodos para aumentar las métricas de rendimiento de un animal. En otra realización, la divulgación se refiere a métodos para aumentar las métricas de rendimiento de un cerdo como se ha descrito anteriormente.

La administración de la composición de acuerdo con la presente divulgación es posible en cualquier momento, con o sin pienso. Sin embargo, como se describe en el presente documento, una administración preferida es con pienso.

Por tanto, en al menos algunas realizaciones, la cantidad eficaz de la composición de acuerdo con la presente divulgación se administra en un animal complementando un pienso destinado al animal. Como se usa en el presente documento, "complementar", se refiere a la incorporación de una cantidad eficaz de la composición proporcionada en el presente documento en el pienso para el animal. De este modo, el animal ingerirá la composición proporcionada en el presente documento durante la alimentación.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se proporcionan con fines únicamente ilustrativos. Los ejemplos se incluyen en el presente documento con el único objetivo de ayudar a comprender más completamente la invención descrita en el presente documento. Los ejemplos no limitan el alcance de la invención descrita o reivindicada de cualquier modo en el presente documento.

Ejemplo 1

La combinación de levadura y Bacillus administrada a cerdas aumenta el rendimiento, disminuye la carga de patógenos y modula la respuesta inmunitaria de las cerdas y sus crías.

Objetivos

Se alimentó a las cerdas con un producto combinado de levadura y Bacillus durante todo el periodo de gestación y lactancia para determinar el impacto en el rendimiento reproductivo. Se midió el rendimiento posterior de sus crías para determinar si los tratamientos alimenticios durante la gestación y la lactancia tenían algún impacto en el rendimiento y la supervivencia de los cerdos.

Animales y dietas experimentales

Para este estudio se identificaron un total de 500 cerdas a los 3 días de la cubrición. En el primer día del experimento, se asignó aleatoriamente a cada subgrupo a uno de cuatro grupos de tratamiento y se bloqueó en función de la paridad.

Los tratamientos incluyeron 1) un control, dieta basal; 2) Combinación de dos cepas de Bacillus subtilis (ABS1104 NRRL B-67258; BS2084 NRRL B-50013); 3) combinación de levadura formulada para contener extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura; o 4) combinación de Bacillus+levadura formulada. Los tratamientos 2, 3 y 4 se aplicaron como suplemento añadido directamente al pienso para la dieta basal de Control (tabla 1). Después del destete, a un total de 1.100 cerdos de ambos sexos procedentes de las cerdas alimentadas con las dietas de control, con combinación de dos cepas de Bacillus subtilis, con levadura formulada o con la combinación de Bacillus + levadura formulada se les alimentó con dietas estándar para determinar si los tratamientos administrados a la cerda tuvieron algún impacto en el rendimiento de la descendencia después del destete.

Diseño experimental, procedimientos y recogida de datos (cerda)

Alojamiento de los animales

Se alimentó a las cerdas dos veces al día en función de su puntuación de condición corporal mediante un alimentador/agua durante el periodo de gestación. El agua estaba disponible a voluntad. Aproximadamente en el día 112 de la gestación, se trasladó a las cerdas al paridero y fueron asignadas aleatoriamente a los corrales de maternidad. Las dietas se cambiaron de gestación a dietas de lactancia y se dieron de comer a voluntad durante todo el periodo de lactancia.

Dietas experimentales

Las dietas basales fueron dietas estándar de gestación y lactancia (tabla 2). La levadura y el Bacillus formulados se suministraron a las cerdas como suplemento añadido directamente al pienso. Durante el periodo de gestación, la adición directa al pienso se realizó a diario dejando caer la levadura, el Bacillus, o ambos, en los comederos con la ración en la proporción indicada cuando se las alimentó por la mañana. Se trató de garantizar que no se proporcionase agua hasta que la última cerda hubiese terminado de comer su ración.

Después del parto y durante todo el periodo de lactancia, la adición directa al pienso de levadura, Bacillus, o ambos a la tasa prescrita para la lactancia se realizó diariamente hasta el destete. El día del destete, se controló a las cerdas para determinar el intervalo desde el destete hasta la recría.

Recogida de datos

Se midió el peso corporal de cada una de las cerdas (1) el día que se transfirió a las cerdas al paridero y (2) en el momento del destete. Los datos se utilizaron para calcular la pérdida de peso corporal durante el periodo de lactancia utilizando la fórmula: Pérdida de PC de la cerda = Destete -(PRE -(LW LW/5,5)), donde Destete = peso de la cerda al destete; PRE = peso de la cerda antes del parto; LW = peso de la camada; LW/5,5 = peso estimado de la placenta (Fahmy y Bernard, 1971). Se registraron los días de lactancia y los días desde el destete hasta el celo. El número de lechones nacidos (vivos y muertos), peso individual al nacer (vivo y muerto), el peso individual al destete y el número de lechones muertos durante el periodo de lactancia se registraron para cada camada. Se permitieron los cruces y la retirada de los cerdos que no prosperasen dentro de las 24 horas posteriores al nacimiento y solo dentro de los tratamientos o a camadas que no fueran de prueba.

Se seleccionaron veinticinco cerdas de muestreo de cada tratamiento y se recogieron muestras fecales al final de la gestación (día 112-114) antes de entrar en el paridero y al final de la lactación (día 17-19) para la medición y recuento de E. coli y Clostridium.

Se tomaron muestras de sangre de las mismas cerdas de muestreo al final de la gestación y de la lactancia para analizar el nitrógeno ureico en sangre (BUN), ácidos grasos no esterificados (AGNE) y glucosa. De cada camada de cerdas de muestreo, se recogieron muestras fecales de los días 3 a 7 de edad y de los días 16 a 20 (al destete) para realizar los mismos recuentos microbianos en los lechones. Se tomaron muestras de sangre de lechones de 2 cerdos por camada (una cerda y un lechón) del día 2 al 4 de edad y al destete para realizar los mismos análisis que a las cerdas. Se recogió suero de un subconjunto de muestras de sangre obtenidas de cada cerda y lechón para realizar mediciones inmunológicas, incluida la glicoproteína alfa-1-ácido, interferón-gamma y factor de necrosis tumoral-alfa.

Diseño y procedimientos experimentales (criadero)

Alojamiento de los animales

Se trasladó a un total de 1.100 cerdos de ambos sexos, que representaban el 22,8 % de todos los lechones destetados de la fase de cerdas, al Centro de Investigación de Criaderos para evaluar el rendimiento posterior al destete. Se agrupó a los cerdos con crotales del mismo color y se les asignó aleatoriamente a 44 corrales con 19-27 cerdos por corral en el momento de su llegada (d 0). El número de cerdos y cerdas jóvenes se equilibró dentro de cada corral. Los cerdos fuera de la prueba (los que no se han presentado y/o los que no tienen crotal) fueron trasladados a la sala de no prueba.

Tratamientos dietéticos

El día 0, los cerdos se pesaron por corral. Los corrales fueron clasificados y bloqueados por la dieta de las cerdas, el PC inicial y la fecha de adjudicación. Todos los corrales recibieron una dieta común durante todas las fases para la evaluación de la supervivencia post-destete. Esto dio lugar a una dieta basal para las fases de cría y a un total de cuatro tratamientos de la fase de cerda (tabla 3).

Procedimiento experimental

La fase de cría se llevó a cabo durante 51 días en un programa de alimentación de 4 fases (tabla 4) inmediatamente después del destete. El alimento se suministró a través del sistema FeedLogic®, lo que permitió recoger los datos de ingesta de alimento por corral. La composición de las dietas basales suministradas durante cada fase del periodo de cría se muestra en la tabla 5.

Recogida de datos

Se recogieron muestras fecales en dos momentos de cada corral para realizar recuentos microbianos el día 3 y el 14 después del destete. Se seleccionaron dos cerdos castrados de cada corral y se marcaron para futuros muestreos, y se recogió sangre el día 0, al final de la fase 2, y al final de la fase 4 con pesos individuales en cada punto de tiempo para los análisis inmunológicos.

Análisis estadístico

Los datos se analizaron utilizando ANOVA mediante el procedimiento MIXED de SAS. Para la fase de cerda, la cerda/camada sirvió como unidad experimental. El modelo estadístico incluía el efecto fijo de los tratamientos dietéticos y una covariable de paridad. Para la fase de cría, el corral sirvió como unidad experimental. El modelo estadístico incluía el efecto fijo de los tratamientos de las cerdas y el efecto aleatorio del bloque. El peso corporal inicial del corral ("PC") se utilizó como covariable para el análisis de los parámetros de la fase de cría. Las comparaciones múltiples entre tratamientos se realizaron mediante la opción de ajuste Tukey de SAS. Todos los resultados se presentan como medias de mínimos cuadrados. El nivel de significación elegido fue a = 0,05. El efecto del tratamiento se consideró significativo si P < 0,05, mientras que los valores entre 0 ,05<P <0,10 se consideraron tendencias estadísticas.

Resultados:

Rendimiento de la camada de cerdas (número total de nacidos, total de nacidos vivos, peso de la camada al nacer, etc.) no se vio afectado por los tratamientos administrados a las cerdas (tabla 6). El peso de los lechones al destete solo se vio ligeramente alterado cuando el producto de levadura formulado o los tratamientos con Bacillus se administraron por separado, pero se observó un aumento del 1 % cuando se alimentó a las cerdas con el producto de levadura formulado y los tratamientos con Bacillus en combinación. Se observó una ligera disminución de los recuentos de E. coli en las muestras fecales de las cerdas, tanto antes del parto como en el destete, en las cerdas alimentadas con el tratamiento con Bacillus (-1,3 % y -1,9 %, respectivamente), mientras que se observó un ligero aumento de los recuentos de E. coli fecal durante los mismos períodos de tiempo cuando se alimentó a las cerdas con el producto de levadura formulado (+1,5 % y 1,2 %, respectivamente); (tabla 7). Sin embargo, cuando el tratamiento con Bacillus y los productos de levadura formulados se administraron a las cerdas en combinación, se observó una reducción mucho mayor de los recuentos de E. coli fecal de las cerdas tanto antes del parto como en el destete (-6,4 % y -7,2 %, respectivamente; (tabla 7).

La proteína de fase aguda, glicoproteína alfa-1-ácido, disminuyó ligeramente en el suero de las cerdas al destete cuando el tratamiento con Bacillus o el producto de levadura formulado se administró por separado a las cerdas (­ 13,1 % frente a -14,2% para el DFM frente al producto de levadura formulado, respectivamente), sin embargo, la proteína de fase aguda disminuyó sustancialmente más cuando se combinaron el tratamiento con Bacillus y el producto de levadura formulado y se administró a la cerda (-48,0 %; (tabla 8). El factor de necrosis tumoral alfa aumentó en el suero de los lechones al destete cuando se administró el tratamiento con Bacillus o el producto de levadura formulado a sus cerdas por separado, pero disminuyó (-6,8%) en las crías al destete de las cerdas tratadas tanto con el tratamiento con Bacillus como con la levadura formulada en combinación (tabla 8). Se observó una ligera disminución en los lechones procedentes de cerdas a las que se administró el tratamiento con Bacillus o el producto de levadura formulado por separado (-2,8 % y -9,5 %, respectivamente), sin embargo, se observó una disminución sustancialmente mayor en los lechones cuando los dos aditivos alimentarios se administraron a las cerdas en combinación (-16,3 %). En el destete, las concentraciones séricas de glicoproteína alfa-1-ácido aumentaron en los cerdos procedentes de cerdas a las que se administró el tratamiento con Bacillus o el producto de levadura formulado por separado, pero se redujo en los cerdos procedentes de cerdas alimentadas con los dos aditivos alimentarios en combinación (-6,8 %). En conjunto, estos datos indican que alimentar a las cerdas con el tratamiento con Bacillus en combinación con un producto de levadura formulado disminuye sustancialmente la inflamación asociada a la producción en las cerdas y sus lechones en los primeros años de vida, en comparación con la administración de cualquiera de los dos a la cerda por separado.

Además, los cerdos procedentes de cerdas alimentadas con el tratamiento de levadura tenían concentraciones fecales de E. coli reducidas 3 días después del destete en comparación con los cerdos procedentes de cerdas no suplementadas, mientras que los cerdos procedentes de cerdas alimentadas con el tratamiento con Bacillus presentaban mayores poblaciones de bacterias lácticas (tabla 10).

La administración de la levadura formulada y de la combinación de Bacillus a las cerdas durante la gestación y la lactancia tuvo el mayor efecto sobre la competencia inmunológica de sus crías durante el periodo de cría posterior al destete. En relación con los cerdos de control, el interferón-6 (IFN-6) aumentó en un 180,8 % al destete en los cerdos nacidos de cerdas alimentadas con la combinación de levadura+Bacillus, en comparación con el 17,1 % y el 50,3 % en los cerdos nacidos de cerdas alimentadas con los tratamientos de Bacillus o de levadura, respectivamente (tabla 11). También en el destete, el factor de necrosis tumoral-a (TNF-a) aumentó en relación con los cerdos de control en un 98,5 % en los cerdos nacidos de la combinación levadura+Bacillus, en comparación con solo un 67,2 % en los cerdos nacidos de cerdas alimentadas con Bacillus y una reducción (-16,6%) en los cerdos de cerdas alimentadas con levadura. AL final del periodo de cría de la fase 2, el TNF-a aumentó en relación con los cerdos de control en un 254,3 % en los cerdos nacidos de cerdas alimentadas con la combinación de levadura+Bacillus en comparación con el 61,6 % y el 56,0 % en los cerdos nacidos de cerdas alimentadas con los tratamientos de Bacillus o de levadura, respectivamente.

T l 1. Tr mi n i i mini r l r r n l f i n l n i

1La dosis se calculó suponiendo que la ingesta media de alimento de las cerdas en gestación es de 2,3 kg/día. 2La dosis se calculó suponiendo que la ingesta media de alimento de las cerdas en lactación es de 5,45 kg/día. 3La levadura se formula para que contenga extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura.

4 El probiótico de Bacillus se compone de un 50 % de Bacillus subtilis cepa ABS1104 (NRRL B-67258) y un 50 % de Bacillus subtilis cepa BS2084 (NRRL B-50013) con un objetivo de 3,75 * 105 UFC por gramo de pienso

Tabla 2. Composición de la dieta y de los nutrientes para las dietas basales de gestación y de lactancia basándose en la alimentación

Gestación Lactación

Ingrediente, Kg Dieta Dieta

Maíz 691 573 Harina de soja 135 272 Sal 5,44 5,44 Carbonato de calcio al 38 % 12 7 Fosfato dicálcico 11,7 10,44 Grasa - Sebo animal 1,13 32,4 Clorhidrato de L-lisina al 78,8 % 0,00 1,47 DL Metionina-Seca al 99 % -- --Treonina 0,00 0,32 Triptófano al 100 % --Fitasa 0,13 0,16 Cloruro de cobre tribásico -- --Premezcla de vitaminas y 2,27 2,27 oligoelementos

Harinillas de trigo 45,36 0,00 Cloruro de colina- 60 0,42 0,00

SALCURB 2,94 2,94

Total 907,18 907,18 Composición nutricional calculada

Proteína en bruto, % 13,22 18,70 Grasas, % 2,65 5,65 Energía neta SW NE, kcal/kg 2.250,00 2.400,00 Lisina, % 0,65 1,15 Lisina digerible, % 0,57 1,04 Calcio, % 0,81 0,61

(continuación)

Gestación Lactación

Ingrediente, Kg Dieta Dieta

Fósforo, % 0,60 0,58 Relación calcio/fósforo 1,35 1,05

Tabla 3. Tratamientos experimentales para evaluar los efectos de arrastre de los tratamientos de las cerdas en el criadero.

1 Los tratamientos dietéticos administrados a las cerdas durante las fases de gestación y lactancia se describen detalladamente en la tabla 2.

2 Las dietas basales del criadero para cada fase se describen en la tabla 5.

Tabla 4. Programa de alimentación para las fases de cría.

Fase de cría Dieta1 Días con pienso

Fase 1: 4-7 kg PC Basal 11

Fase 2: 7-11 kg PC Basal 12

Fase 3: 11-18 kg PC Basal 14

Fase 4: 18-25 kg PC Basal 14

1 Las dietas basales del criadero para cada fase se describen en la tabla 5.

Tabla 5. Composición de las dietas basales suministradas a los cerdos en cada fase de cría, basándose en la cantidad alimentada.

^{, . . . . . . Dietas basales} my leuienie, r\y/iun _{Fase 1 Fase 2 Fase 3 Fase 4} Maíz 387,43 466,7 402,6 453,18 Harina de soja 158,75 204,11 288,04 187,22 Granos secos de destilería 181,43 226,79 Suero lácteo seco 189,14 113,4

Harina de pescado - Menhaden 43,54 19

Proteína de soja 68 45,35

Plasma sanguíneo 2,72 1,36

Clorhidrato de lisina al 78,8 % 2,54 2,49 3,75 6,05 DL Metionina al 99 % 1,38 1,27 0,51 0,93 Treonina al 98,5 % 0,99 0,95 0,99 1,8 Triptófano al 100 % 0,09 0,48 Fosfato monocálcico 6,12 12,02 0,76

Carbonato cálcico 4,62 7,16 12,32 13,02 Sal 4,98 3,22 4,08 4,08 Cloruro de colina al 60 % 0,45 0,45

Vitaminas/oligoelementos 1,36 1,36 1,36 1,36 Premezcla

Grasa 30,4 23,13 10,44 11,42 Fitasa 0,16 0,16 Hemicelulasa 0,22 0,22 Cloruro de cobre tribásico 0,38 0,38 Levadura formulada 0,91 0,91

Óxido de cinc 3,76 3,76

Total, Kg 907,18 907,18 907,18 907,18

Ejemplo 2

Un probiótico formulado de levadura y Bacillus administrado a la cerda altera la ecología microbiana de las cerdas y sus crías

Se asignó aleatoriamente a un total de 500 cerdas a uno de cuatro grupos de tratamiento y se bloqueó en función de la paridad. Los métodos detallados de este estudio se han descrito anteriormente en el ejemplo 1. En resumen, los tratamientos administrados a las cerdas incluían 1) un control, dieta basal; 2) Bacillus subtilis de dos cepas microbianas de alimentación directa (DFM; Bacillus subtilis ABS1104 NRRL B-67258; Bacillus subtilis BS2084 NRRL B-50013); 3) levadura formulada con extracto de levadura, levadura hidrolizada y cultivo de levadura; o 4) Bacillus DFM+levadura formulada. Se recogieron muestras fecales de 25 cerdas/tratamiento al final de la gestación y durante la fase de lactancia, de los cerdos de las camadas de las cerdas a los 5 días de edad y a los 18 días de edad, y de los cerdos durante la fase de cría posterior al destete a los 24 días de edad y a los 35 días de edad. Se aisló el ADN microbiano de las muestras fecales y se evaluó la ecología bacteriana mediante un análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción terminal (TRFLP).

El ADN se extrajo de las muestras fecales utilizando el kit de aislamiento de ADN MoBio Powersoil (Mo Bio Laboratories, Carlsbad, CA) según las instrucciones del fabricante. El ADN extraído se purificó adicionalmente utilizando el kit de eliminación de inhibidores de PCR de Zymo (Zymo Research, Irvine, CA). Para cada muestra se realizaron reacciones de amplificación por PCR para amplificar los genes totales del ARNr 16S bacteriano utilizando el cebador universal directo, 27F-YM, marcado con 6-carboxifluoresceína (FAM) y el cebador universal inverso, 785R. Los amplicones marcados de la reacción en cadena de la polimerasa se purificaron utilizando el kit Zymo DNA Clean & Concentrator™. Los amplicones de ADN bacteriano purificados se digirieron utilizando las enzimas de restricción HaeIII y MspI.

La detección de fragmentos se realizó en la Universidad de Illinois, Centro de secuenciación de ADN de Urbana-Champaign. El análisis de los fragmentos se realizó con Genemapper 5 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). Las tablas de picos resultantes se importaron a la versión 7.1 de BioNumerics (Applied Maths, Sint-Martens-Latem Bélgica) para su análisis comparativo. En la medida de lo posible, se realizaron identificaciones putativas de los picos de TRFLP hasta el nivel taxonómico más bajo posible utilizando la base de datos MiCA (Universidad de Idaho, Moscú, ID). La comparación de la composición de la comunidad y la determinación de la cantidad de varianza atribuible al tratamiento se realizaron con Canoco 5 (Microcomputer Power, Ithaca, NY).

El análisis de componentes principales no reveló diferencias en la ecología microbiana fecal de las cerdas durante la gestación (figura 1) o la lactancia (figura 2). Los fragmentos de restricción terminal (TRF) que indican los miembros microbianos representativos de la comunidad se identifican para las cerdas en gestación y lactancia en la tabla 12 y la tabla 13, respectivamente. Cuando se analizó mediante PCA, la ecología microbiana de los cerdos de 5 días de edad procedentes de cerdas alimentadas con el tratamiento Levadura+Bacillus DFM fue diferente (P = 0,10) en comparación con los cerdos procedentes de cerdas alimentadas con los otros tres tratamientos (figura 3). Varios TRF no identificables (235; 81) y TRF identificados como de Enterobacteriaceae (249), Bacillus (334), Bacillus subtilis (225) y Lactobacillus salivarius (327) estaban presentes en los lechones de 5 días en proporciones muy diferentes en el tratamiento Levadura+Bacillus que en cualquiera de los otros. (Tabla 14). No se observaron diferencias en los lechones de 18 días de edad procedentes de cerdas alimentadas con cualquiera de los cuatro tratamientos (figura 4; (tabla 15). La ecología microbiana de las muestras fecales recogidas de cerdos destetados de 24 días de edad nacidos de cerdas alimentadas con el tratamiento de Levadura+Bacillus DFM fue diferente (P = 0,11) de los cerdos nacidos de cerdas alimentadas con los otros tres tratamientos (figura 5). Los TRF no identificables (276) y los TRF identificados como Clostridiales (265) y Bacteroides (255) estaban presentes en los cerdos de cría de 24 días de edad después del destete en proporciones muy diferentes en el tratamiento Levadura+Bacillus que en cualquiera de los otros. (Tabla 16). La ecología microbiana fecal de los cerdos destetados de 35 días de edad nacidos de cerdas alimentadas con el tratamiento de levadura se diferenció (P = 0,01) de los otros tres tratamientos (figura 6); sin embargo, muchos TRF estaban presentes en proporciones mucho más bajas en el tratamiento con Levadura+Bacillus que en cualquiera de los otros, como varios TRF no identificables (81, 239, 321), Lactobacillus crispatus (272), y Lactobacillus sp. (288).

Tabla 12: La proporción de fragmentos de restricción terminal (TRF) como porcentaje basado en la altura total del pico, en las comunidades fecales de las cerdas gestantes, así como la identificación taxonómica putativa de esos

TRF.

continuación

Tabla 13: La proporción de fragmentos de restricción terminal (TRF) como porcentaje basado en la altura total del pico, en las comunidades fecales de las cerdas lactantes, así como la identificación taxonómica putativa de esos

TRF.

Tabla 14: La proporción de fragmentos de restricción terminal (TRF), como porcentaje basado en la altura total del pico, en las comunidades fecales de los lechones de 5 días, así como la identificación taxonómica putativa de esos

TRF.

Tabla 15: La proporción de fragmentos de restricción terminal (TRF) como porcentaje basado en la altura total del pico, en las comunidades fecales de los lechones de 18 días, así como la identificación taxonómica putativa de esos

TRF.

TRF IDENTIFICACIÓN CONTROL DFM LEVADURA LEVADURA+DFM

31 No identificado 6,8 13,3 21,0 9,5

245 Bacteroides 3,5 8,2 6,7 3,6

272 L. crispatus 7,0 9,4 7,2 8,5

265 Clostridiales 7,8 4,6 4,7 4,4

235 No identificado 4,7 7,8 3,9 4,8

259 No identificado 5,1 2,2 4,6 3,7

262 Clostridium 5,5 7,5 5,6 5,3

255 Bacteroides 3,3 1,1 2,8 1,8

317 Veillonellaceae 6,5 2,7 5,3 5,9

288 Lactobacillus sp. 2,0 0,8 1,1 0,8

61 No identificado 3,4 2,0 2,2 4,3

276 No identificado 2,9 1,0 1,5 6,3

221 Clostridium 1,6 1,2 4,5 1,5

81 No identificado 4,9 2,6 2,7 4,6

249 Enterobacteriaceae 0,6 4,6 0,4 2,6

239 No identificado 5,2 2,0 4,3 4,2

299 No identificado 1,7 2,8 2,0 1,8

321 No identificado 1,3 1,4 0,5 0,7

293 No identificado 1,3 1,9 0,9 0,7

303 No identificado 2,8 1,1 3,2 2,1

281 No identificado 1,9 0,2 0,2 1,8

158 No identificado 1,0 0,4 0,3 0,4

307 No identificado 1,3 0,9 0,9 1,0

334 Bacillus 1,1 0,3 1,5 1,0

225 Bacillus subtilis 0,2 0,1 0,1 0,3

327 L. salivarius 0,1 1,4 0,4 2,9

Picos menores 16,6 18,6 11,4 15,5

Tabla 16: La proporción de fragmentos de restricción terminal (TRF) como porcentaje basado en la altura total del pico, en las comunidades fecales de los lechones de 24 días, así como la identificación taxonómica putativa de esos

TRF.

Tabla 17: La proporción de fragmentos de restricción terminal (TRF) como porcentaje basado en la altura total del pico, en las comunidades fecales de los lechones de 35 días, así como la identificación taxonómica putativa de esos

TRF.

continuación

BIBLIOGRAFIA

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Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende:

un cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus que comprende: Bacillus subtilis 1104 depositado con el número de registro ABS 1104 Nr Rl B-67258 y Bacillus subtilis 2084 depositado con el número de registro BS2084 NRRL B-50013; y al menos uno de los extractos de levadura de Saccharomyces cerevisiae, una levadura de Saccharomyces cerevisiae hidrolizada y un cultivo de levadura Saccharomyces cerevisiae.

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que además comprende un portador, en donde opcionalmente, el portador se selecciona entre un grupo que consiste en: suero de leche, maltodextrina, sacarosa, dextrosa, piedra caliza, cáscaras de arroz y aluminato de sodio.

3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el producto de levadura de Saccharomyces cerevisiae comprende además entre el 25 y el 80 por ciento en peso del extracto de levadura de Saccharomyces cerevisiae, entre el 5 y el 40 por ciento en peso de la levadura Saccharomyces cerevisiae hidrolizada, y entre el 5 y el 50 por ciento en peso del cultivo de levadura Saccharomyces cerevisiae.

4. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde:

(i) el cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus es un producto microbiano de alimentación directa; y/o (ii) la composición comprende además un pienso para animales.

5. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la composición tiene una concentración del cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus en la composición de aproximadamente entre 1 x 10e4 y 1 x 10e9 UFC/g.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la composición en un pienso para animales está configurada para ser consumida por un animal y dar lugar a una concentración del cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus introducidas en el animal en el intervalo de aproximadamente entre 1 x 10e5 y 1 x 10e11 UFC/animal/día.

7. La composición de la reivindicación 1, en donde la composición es una composición microbiana de alimentación directa que comprende el cultivo biológicamente puro de cepas de Bacillus y un producto aislado de levadura Saccharomyces cerevisiae y en donde la composición microbiana de alimentación directa inhibe la Escherichia coli en el tracto gastrointestinal de un cerdo que ha ingerido una cantidad eficaz de dicha composición microbiana de alimentación directa.

8. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde:

(i) la composición es para su uso en el aumento del rendimiento de un cerdo;

(ii) la composición es para su uso en la mejora de la función del sistema inmunitario de un cerdo; y/o

(iii) la composición es una composición microbiana de alimentación directa para su uso en la inhibición de Escherichia coli en el tracto gastrointestinal de un cerdo que haya ingerido una cantidad eficaz de dicha composición microbiana de alimentación directa, en donde el aumento del rendimiento comprende la mejora de uno o más de diarreas, mortalidad, número de cerdos nacidos, nacidos vivos, peso de la camada al nacer, capacidad de supervivencia, función del sistema inmunitario e inflamación.

9. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para su uso en el aumento del rendimiento de un cerdo, comprendiendo el método administrar al cerdo una cantidad eficaz de la composición.

10. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la composición es para su uso en:

(i) mejorar la función del sistema inmunitario en el cerdo;

(ii) aumento de las inmunoglobulinas en el cerdo;

(iii) reducir la inflamación en el cerdo; y/o

(iv) aumentar el interferón gamma en el cerdo.

11. La composición para el uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la composición es para su uso en:

(i) reducir los recuentos de bacterias patógenas en el intestino del cerdo; y/o

(ii) mejorar la función del sistema inmunitario en la descendencia nacida del cerdo,

en donde el cerdo es una cerda a la que se le ha administrado una cantidad eficaz de la composición.

12. La composición para el uso de la reivindicación 11, en donde la mejora de la función del sistema inmunitario en la descendencia nacida del cerdo se selecciona entre el grupo que comprende al menos uno de: aumento de las inmunoglobulinas en la descendencia, aumento del interferón gamma en la descendencia, reducción de la inflamación en la descendencia, reducción de la diarrea en las crías a los tres días después del destete, mejora de la transición de una dieta basada en leche a una dieta sólida de las crías, aumento del peso de la camada al destete de las crías, mejora de la supervivencia de un grupo de la descendencia, mejora de la capacidad de supervivencia del grupo de crías después del destete y reducción de la tasa de mortalidad del grupo de crías.

13. Un método de preparación de un alimento, comprendiendo el método mezclar una cantidad eficaz de la composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 con un componente de pienso.