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ES2989886T3 - Lípidos catiónicos que comprenden una fracción esteroidal - Google Patents

Lípidos catiónicos que comprenden una fracción esteroidal Download PDF

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ES2989886T3
ES2989886T3 ES19733242T ES19733242T ES2989886T3 ES 2989886 T3 ES2989886 T3 ES 2989886T3 ES 19733242 T ES19733242 T ES 19733242T ES 19733242 T ES19733242 T ES 19733242T ES 2989886 T3 ES2989886 T3 ES 2989886T3
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Spain
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alkenyl
alkyl
cationic lipid
mol
unsubstituted
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ES19733242T
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Yi Zhang
Shrirang Karve
Frank Derosa
Michael Heartlein
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Original Assignee
Translate Bio Inc
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Abstract

Se describen lípidos catiónicos que son compuestos de Fórmula I. Los lípidos catiónicos proporcionados en este documento pueden ser útiles para la administración y expresión de ARNm y proteína codificada, por ejemplo, como un componente de un vehículo de administración liposomal, y en consecuencia pueden ser útiles para tratar diversas enfermedades, trastornos y afecciones, tales como aquellos asociados con la deficiencia de una o más proteínas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Lípidos catiónicos que comprenden una fracción esteroidal
REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS
La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional de EE. UU. N° 62/677.821, presentada el 30 de mayo de 2018.
ANTECEDENTES
La administración de ácidos nucleicos se ha explorado ampliamente como una posible opción terapéutica para ciertos estados patológicos. En particular, la terapia con ARN mensajero (ARNm) se ha convertido en una opción cada vez más importante para el tratamiento de diversas enfermedades, incluidas aquellas asociadas con la deficiencia de una o más proteínas. El documento WO-A-2017/177869 divulga lípidos catiónicos para la transfección de genes en células de mamíferos, que no portan un sustituyente correspondiente a los grupos X1 y X2 de los compuestos de la presente invención.
RESUMEN
La presente invención proporciona, entre otras cosas, compuestos útiles para la administración de ARNm. La administración de ARNm proporcionada por los lípidos catiónicos descritos en el presente documento puede dar lugar a una administración dirigida, reducir la frecuencia de administración, mejorar la tolerabilidad del paciente y proporcionar una terapia de ARNm más potente y menos tóxica para el tratamiento de una variedad de enfermedades, incluyendo, por ejemplo, cáncer, enfermedades cardiovasculares, fibrosis quística, enfermedades infecciosas y neurológicas.
En un aspecto, la presente invención proporciona un lípido catiónico que tiene una estructura según la Fórmula (I):
en donde
R<1>y R<2>son cada uno independientemente alquilo C<1>-C<30>, alquenilo C<2>-C<30>, alquinilo C<2>-C<30>, heteroalquilo C<1>-C<30>, heteroalquenilo C<1>-C<30>, heteroalquinilo C<1>-C<30>, un polímero, cicloalquilo C<5>-C<6>, heterocicloalquilo de 5 a
6 miembros, arilo C<5>-C<6>o heteroarilo de 5 a 6 miembros, donde dicho alquilo C<1>-C<30>no está sustituido o está sustituido con
uno o más de halógenos, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', -NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o-SO<2>R', en donde cada caso de R' independientemente es C<1>-C<20>alifático; o en donde R<1>y R<2>son cada uno independientemente C<6>-C<30>alquilo sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster;
X<1>y X<2>son cada uno independientemente OH, OR<a>o NR<b>R<c>;
L<1>es alquileno C<1>-C<10>; alquenileno C<2>-C<10>; o alquinileno C<2>-C<10>;
X<3>es CH<2>, O, S, NH o NR<d>;
X<4>es O o S;
R<a>y R<d>son cada uno independientemente alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-alquinilo C<2>-C<6>;
R<b>y R<c>son cada uno independientemente H, alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>; o
Rb y Rc, junto con el átomo de nitrógeno a través del cual están conectados, forman un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 a 6 miembros; y
©
es un esterol natural o no natural.
En realizaciones, el lípido catiónico tiene una estructura según la Fórmula (Ia):
en donde
X<1>y X<2>son cada uno independientemente OH, OR<a>, o NR<b>R<c>.
En realizaciones, X<1>es OH.
En realizaciones, X<2>es OH.
En realizaciones, X<3>es O.
En realizaciones, R<1>y R<2>son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<30>.
En realizaciones, R<1>y R<2>son cada uno independiente alquilo C<6>-C<30>no sustituido.
En realizaciones, R<1>y R<2>se seleccionan independientemente a partir de -C<6>H<13>, -C<7>H<15>, -C<8>H<17>, -C<9>H<19>, -C<10>H<21>, -C<11>H<23>, -C<12>H<25>, -C<13>H<27>, -C<14>H<29>, -C<15>H<31>, -C<16>H<33>, -C<17>H<35>, -C<18>H<37>, -C<19>H<39>, -C<20>H<41>, -C<21>H<43>, -C<22>H<45>, -C<23>H<47>, -C<24>H<49>y -C<25>H<51>.
En realizaciones, R<1>y R<2>son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<30>sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster.
En realizaciones, R<1>y R<2>son cada uno independientemente alquenilo C<6>-C<30>o alquenilo C<8>-C<20>.
En realizaciones, R<1>y R<2>se seleccionan independientemente a partir de alquenilo C<8>, alquenilo C<9>, alquenilo C<10>, alquenilo C<11>, alquenilo C<12>, alquenilo C<13>, alquenilo C<14>, alquenilo C<15>, alquenilo C<16>, alquenilo C<17>, alquenilo C<18>, alquenilo C<19>, alquenilo y alquenilo C<20>.
En realizaciones, R<1>y R<2>se seleccionan independientemente a partir de alquenilo C<8>no sustituido, alquenilo C<9>no sustituido, alquenilo C<10>no sustituido, alquenilo C<11>no sustituido, alquenilo C<12>no sustituido, alquenilo C<13>no sustituido, alquenilo C<14>no sustituido, alquenilo C<15>no sustituido, alquenilo C<16>no sustituido, alquenilo C<17>no sustituido, alquenilo C<18>no sustituido, alquenilo C<19>no sustituido y alquenilo C<20>no sustituido.
En realizaciones, R<1>y R<2>se seleccionan independientemente a partir de -(CH<2>)<4>CH=CH<2>, -(CH<2>)<5>CH=CH<2>, -(CH<2>)<6>CH=CH<2>, -(CH<2>)<7>CH=CH<2>, -(CH<2>)<8>CH=CH<2>, -(CH<2>)<9>CH=CH<2>, -(CH<2>)<10>CH=CH<2>, -(CH<2>)<11>CH=CH<2>, -(CH<2>)<12>CH=CH<2>, -(CH<2>)<13>CH=CH<2>, -(CH<2>)<14>CH=CH<2>, -(CH<2>)<15>CH=CH<2>, -(CH<2>)<16>CH=CH<2>, -(CH<2>)<17>CH=CH<2>, -(CH<2>)<18>CH=CH<2>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<3>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<5>CH<3>, -(CH<2>)<4>CH=CH(CH<2>)<8>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<7>CH<3>, -(CH<2>)<6>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>, -(CH<2>)<3>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<3>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>, -(CH<2>)<11>CH=CH(CH<2>)<7>CH<3>y -(CH<2>)<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>.
En realizaciones, R<1>y R<2>se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste en:
en realizaciones, R1 es heteroarilo de 5 a 6 miembros.
En realizaciones, R2 es heteroarilo de 5 a 6 miembros.
En realizaciones, R1 y/o R2 es imidazolilo o un derivado del mismo.
En realizaciones, X4 es O.
En realizaciones, L1 es alquileno C<1>-C<10>.
En realizaciones, L1 es -(CH<2>)<2>-, -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5- o -(CH<2>)<6>-.
En realizaciones,
e ©s un zooesterol o una forma oxidada o reducida del mismo.
En realizaciones,
es un fitosterol o una forma oxidada o reducida del mismo.
En realizaciones,
es un esterol sintético o una forma oxidada o reducida del mismo.
En realizaciones,
es un esterol seleccionado a partir de colesterol, una forma oxidada de colesterol, una forma reducida de colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol y sitosterol.
En realizaciones,
es un esterol seleccionado a partir de una forma oxidada de colesterol, una forma reducida de colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol y sitosterol.
En realizaciones,
es un esterol seleccionado a partir de
(alquil litocolato),
(estigmastanol),
(campesterol),
En realizaciones,
©
es un esterol que es
En realizaciones,
©
es un esterol seleccionado a partir de
En donde R es alquilo C<1>-C<20>.
En realizaciones, el lípido catiónico tiene la siguiente estructura:
En otro aspecto, la invención presenta una composición que comprende un ARNm que codifica un péptido o un polipéptido, encapsulado dentro de un liposoma, en donde el liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, opcionalmente uno o más lípidos no catiónicos, opcionalmente uno o más lípidos a base de colesterol, y opcionalmente uno o más lípidos modificados con PEG, en donde al menos un lípido catiónico es como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)).
En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR).
En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica para un antígeno (por ejemplo un antígeno de un agente infeccioso).
En otro aspecto, la invención presenta una composición que comprende un ácido nucleico encapsulado dentro de un liposoma, en donde el liposoma comprende un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)).
En realizaciones, una composición comprende además uno o más lípidos seleccionados a partir del grupo que consiste en uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, y uno o más lípidos modificados con PEG.
En realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica un péptido o polipéptido.
En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración o tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar. En realizaciones, un ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR).
En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración o tratamiento del hígado de un sujeto o una célula hepática. En realizaciones, un ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC). En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en una vacuna. En realizaciones, un ARNm codifica un antígeno (por ejemplo un antígeno de un agente infeccioso).
En realizaciones, una composición se formula para administración intravenosa (IV).
En realizaciones, una composición se formula para administración intramuscular (IM).
En realizaciones, una composición se formula para administración por inhalación (por ejemplo una composición se formula para nebulización).
En algunos aspectos, la presente invención proporciona los compuestos de la invención para uso en métodos de tratamiento de una enfermedad en un sujeto que comprende administrar al sujeto una composición (por ejemplo una composición farmacéutica) tal como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)).
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE CIERTAS REALIZACIONES
Definiciones
Para que la presente invención se entienda más fácilmente, a continuación se definen primero ciertos términos. A lo largo de la memoria descriptiva se establecen definiciones adicionales para los siguientes términos y otros términos.
Aminoácidos:Como se usa en el presente documento, el término "aminoácido", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que pueda incorporarse a una cadena polipeptídica. En algunas realizaciones, un aminoácido tiene la estructura general H<2>N-C(H)(R)-COOH. En algunas realizaciones, un aminoácido es un aminoácido de origen natural. En algunas realizaciones, un aminoácido es un aminoácido sintético; en algunas realizaciones, un aminoácido es un d-aminoácido; en algunas realizaciones, un aminoácido es un l-aminoácido. "Aminoácido estándar" se refiere a cualquiera de los veinte l-aminoácidos estándar que se encuentran comúnmente en péptidos naturales. "Aminoácido no estándar" se refiere a cualquier aminoácido distinto de los aminoácidos estándar, independientemente de que se prepare sintéticamente o se obtenga a partir de una fuente natural. Como se utiliza en el presente documento, "aminoácido sintético" abarca aminoácidos modificados químicamente, incluyendo, entre otros, sales, derivados de aminoácidos (tales como amidas) y/o sustituciones. Los aminoácidos, incluyendo los aminoácidos carboxi y/o amino terminales en péptidos, pueden modificarse mediante metilación, amidación, acetilación, grupos protectores y/o sustitución con otros grupos químicos que pueden cambiar la vida media circulante del péptido sin afectar negativamente su actividad. Los aminoácidos pueden participar en un enlace disulfuro. Los aminoácidos pueden comprender una o más modificaciones postraduccionales, como asociación con una o más entidades químicas (por ejemplo grupos metilo, grupos acetato, grupos acetilo, grupos fosfato, fracciones de formilo, grupos isoprenoides, grupos sulfato, fracciones de polietilenglicol, fracciones lipídicas, fracciones de hidratos de carbono, fracciones de biotina, etc.). El término "aminoácido" se utiliza indistintamente con "resto de aminoácido", y puede referirse a un aminoácido libre y/o a un resto de aminoácido de un péptido. Por el contexto en el que se utiliza el término, será evidente si se refiere a un aminoácido libre o a un resto de un péptido.
Animal:Como se utiliza en el presente documento, el término "animal" se refiere a cualquier miembro del reino animal. En algunas realizaciones, "animal" se refiere a seres humanos, en cualquier etapa de desarrollo. En algunas realizaciones, "animal" se refiere a animales no humanos, en cualquier etapa de desarrollo. En ciertas realizaciones, el animal no humano es un mamífero (por ejemplo un roedor, un ratón, una rata, un conejo, un mono, un perro, un gato, una oveja, ganado vacuno, un primate y/o un cerdo). En algunas realizaciones, los animales incluyen, pero no se limitan a, mamíferos, aves, reptiles, anfibios, peces, insectos y/o gusanos. En algunas realizaciones, un animal puede ser un animal transgénico, un animal modificado genéticamente y/o un clon.
Aproximadamente o alrededor de:Como se utiliza en el presente documento, el término "aproximadamente" o "alrededor de", aplicado a uno o más valores de interés, se refiere a un valor que es similar a un valor de referencia establecido. En ciertas realizaciones, el término "aproximadamente" o "alrededor de" se refiere a un intervalo de valores que caen dentro de 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, o menos en cualquier dirección (mayor o menor que) del valor de referencia establecido, a menos que se indique lo contrario o sea evidente de otro modo a partir del contexto (excepto cuando tal número excedería el 100 % de un valor posible).
Biológicamente activo:Como se utiliza en el presente documento, la expresión "biológicamente activo" se refiere a una característica de cualquier agente que tenga actividad en un sistema biológico, y particularmente en un organismo. Por ejemplo, un agente que, cuando se administra a un organismo, tiene un efecto biológico sobre ese organismo, se considera biológicamente activo.
Administración:Como se utiliza en el presente documento, el término "administración" abarca tanto la administración local como sistémica. Por ejemplo, la administración de ARNm abarca situaciones en las que un ARNm se administra a un tejido diana y la proteína codificada se expresa y retiene en el tejido diana (también denominada "distribución local" o "administración local"), y situaciones en las que un ARNm se administra a un tejido diana y la proteína codificada se expresa y secreta en el sistema circulatorio del paciente (por ejemplo, suero) y se distribuye sistemáticamente y es absorbida por otros tejidos (también denominada "distribución sistémica" o "administración sistémica").
Expresión: Como se usa en el presente documento, "expresión" de una secuencia de ácido nucleico se refiere a la traducción de un ARNm en un polipéptido, ensamblaje de múltiples polipéptidos en una proteína intacta (por ejemplo enzima) y/o modificación postraduccional de un polipéptido o proteína totalmente ensamblada (por ejemplo enzima). En esta solicitud, los términos "expresión" y "producción", y equivalente gramatical, se utilizan indistintamente.
Funcional:Como se utiliza en el presente documento, una molécula biológica "funcional" es una molécula biológica en una forma en la que exhibe una propiedad y/o actividad por la que se caracteriza.
Vida media:Como se utiliza en el presente documento, la expresión "vida media" es el tiempo necesario para que una cantidad tal como concentración o actividad del ácido nucleico o de la proteína descienda a la mitad de su valor medido al comienzo de un período de tiempo.
Mejorar, aumentar, o reducir: Como se usa en el presente documento, los términos "mejorar", "aumentar" o "reducir", o equivalentes gramaticales, indican valores que son relativos a una medición basal, como una medición en el mismo individuo antes del inicio del tratamiento descrito en el presente documento, o una medición en un sujeto de control (o sujeto de control múltiple) en ausencia del tratamiento descrito en el presente documento. Un "sujeto de control" es un sujeto que padece la misma forma de enfermedad que el sujeto que está siendo tratado, que tiene aproximadamente la misma edad que el sujeto que está siendo tratado.
In vitro:Como se utiliza en el presente documento, la expresión”in vitro”se refiere a acontecimientos que ocurren en un ambiente artificial, por ejemplo en un tubo de ensayo o vaso de reacción, en cultivo celular, etc., en lugar de dentro de un organismo pluricelular.
In vivo:Como se utiliza en el presente documento, la expresión”in vivo”se refiere a acontecimientos que ocurren dentro de un organismo pluricelular, tal como un ser humano y un animal no humano. En el contexto de los sistemas basados en células, el término puede utilizarse para referirse a acontecimientos que se producen dentro de una célula viva (a diferencia de, por ejemplo, los sistemasin vitro).
Aislado:Como se usa en el presente documento, el término "aislado" se refiere a una sustancia y/o entidad que (1) se ha separado de al menos algunos de los componentes con los que estaba asociado cuando se produjo inicialmente (ya sea en la naturaleza y/o en un ámbito experimental); y/o (2) se ha producido, preparado y/o fabricado por la mano del hombre. Las sustancias y/o entidades aisladas pueden estar separadas alrededor de 10 %, alrededor de 20 %, alrededor de 30 %, alrededor de 40 %, alrededor de 50 %, alrededor de 60 %, alrededor de 70 %, alrededor de 80 %, alrededor de 90 %, alrededor de 91 %, alrededor de 92 %, alrededor de 93 %, alrededor de 94 %, alrededor de 95 %, alrededor de 96 %, alrededor de 97 %, alrededor de 98 %, alrededor de 99 % o más de alrededor de 99 % de los demás componentes con los que estaban inicialmente asociadas. En algunas realizaciones, los agentes aislados son alrededor de 80 %, alrededor de 85 %, alrededor de 90 %, alrededor de 91 %, alrededor de 92 %, alrededor de 93 %, alrededor de 94 %, alrededor de 95 %, alrededor de 96 %, alrededor de 97 %, alrededor de 98 %, alrededor de 99 %, o más de alrededor de 99 % puros. Como se utiliza en el presente documento, una sustancia es "pura" si está sustancialmente libre de otros componentes. Como se utiliza en el presente documento, el cálculo del porcentaje de pureza de sustancias y/o entidades aisladas no debe incluir excipientes (por ejemplo tampón, disolvente, agua, etc.).
Liposoma:Como se utiliza en el presente documento, el término "liposoma" se refiere a cualquier vesícula de nanopartículas laminares, multilaminares, o sólidas. Normalmente, un liposoma como se utiliza en el presente documento puede formarse mezclando uno o más lípidos, o mezclando uno o más lípidos y polímero(s). En algunas realizaciones, un liposoma adecuado para la presente invención contiene uno o más lípidos catiónicos y opcionalmente lípido(s) no catiónicos, opcionalmente lípido(s) a base de colesterol y/u opcionalmente lípido(s) modificados con PEG.
ARN mensajero (ARNm):Como se usa en el presente documento, la expresión "ARN mensajero (ARNm)" o "ARNm" se refiere a un polinucleótido que codifica al menos un polipéptido. El ARNm, como se usa en el presente documento, abarca tanto ARN modificado como no modificado. La expresión "ARNm modificado" se refiere a un ARNm que comprende al menos un nucleótido químicamente modificado; el ARNm puede contener una o más regiones codificantes y no codificantes. El ARNm puede purificarse a partir de fuentes naturales, producirse usando sistemas de expresión recombinantes y opcionalmente purificarse, sintetizarse químicamente, etc. Cuando sea apropiado, por ejemplo en el caso de moléculas sintetizadas químicamente, el ARNm puede comprender análogos de nucleósidos como análogos que tienen bases o azúcares modificados químicamente, modificaciones de la cadena principal, etc. Una secuencia de ARNm se presenta en la dirección 5' a 3', a menos que se indique lo contrario. En algunas realizaciones, un ARNm es o comprende nucleósidos naturales (por ejemplo, adenosina, guanosina, citidina, uridina); análogos de nucleósidos (por ejemplo, 2-aminoadenosina, 2-tiotimidina, inosina, pirrolo-pirimidina, 3-metil adenosina, 5-metilcitidina, C-5 propinil-citidina, C-5 propinil-uridina, 2-aminoadenosina, C5-bromouridina, C5-fluorouridina, C5-yodouridina, C5-propinil-uridina, C5-propinil-citidina, C5-metilcitidina, 2-aminoadenosina, 7-deazaadenosina, 7-deazaguanosina, 8-oxoadenosina, 8-oxoguanosina, O(6)-metilguanina y 2-tiocitidina); bases modificadas químicamente; bases modificadas biológicamente (por ejemplo, bases metiladas); bases intercaladas; azúcares modificados (por ejemplo, 2'-fluoribosa, ribosa, 2'-desoxirribosa, arabinosa y hexosa); y/o grupos fosfato modificados (por ejemplo, fosforotioatos y enlaces 5'-N-fosforamidita).
Ácido nucleico: Como se utiliza en el presente documento, la expresión "ácido nucleico", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que está o puede incorporarse a una cadena polinucleotídica. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un compuesto y/o sustancia que se incorpora o se puede incorporar en una cadena polinucleotídica mediante un enlace de fosfodiéster. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" se refiere a restos de ácido nucleico individuales (por ejemplo nucleótidos y/o nucleósidos). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" se refiere a una cadena de polinucleótidos que comprende residuos de ácido nucleico individuales. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ARN así como ADN y/o ADNc de cadena sencilla y/o de doble cadena. En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ácidos ribonucleicos (ARN), que incluyen, entre otros, uno o más ARN de interferencia (ARNi), ARN pequeño de interferencia (ARNpi), ARN de horquilla corta (ARNhc), ARN antisentido (ARNa), ARN mensajero (ARNm), A<r>N mensajero modificado (ARNmm), ARN largo no codificante (ARNlnc), microARN (miARN), ácido nucleico codificante multimérico (MCNA), ácido nucleico codificante polimérico (PCNA), ARN guía (ARNg) y ARN de CRISPR (ARNcr). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca ácido desoxirribonucleico (ADN), que incluye, entre otros, uno o más de ADN monocatenario (ADNmc), ADN bicatenario (ADNbc) y ADN complementario (ADNc). En algunas realizaciones, "ácido nucleico" abarca tanto ARN como ADN. En realizaciones, el ADN puede estar en forma de ADN antisentido, ADN plasmídico, partes de un ADN plasmídico, ADN precondensado, un producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (por ejemplo, P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), casetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico o derivados de estos grupos. El ARN puede estar en forma de ARN mensajero (ARNm), ARN ribosómico (ARNr), ARN de partículas de reconocimiento de señal (ARN 7 SL o ARN SRP), ARN de transferencia (ARNt), ARN mensajero de transferencia (ARNtm), ARN pequeño nuclear (ARNpn), ARN pequeño nucleolar (ARNpno), ARN SmY, ARN pequeño específico del cuerpo de Cajal (ARNpca), ARN guía (ARNg), ribonucleasa P (RNasa P),<a>R<n>Y, componente de ARN de telomerasa (TERC), ARN líder empalmado (ARN SL), ARN antisentido (ARNa o ARNas), transcrito antisentido natural cis (cis-NAT), Ar N de CRISPR (ARNcr), ARN largo no codificante (ARNlnc), microARN (miARN), ARN que interacciona con piwi (piARN), ARN pequeño de interferencia (ARNpi), ARNpi de transacción (ARNpita), ARNpi asociado a repetición (ARNpiar), ARN de 73 K, retrotransposones, un genoma viral, un viroide, ARN satélite, o derivados de estos grupos. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica una proteína, tal como una enzima.
Paciente:Como se utiliza en el presente documento, el término "paciente" o "sujeto" se refiere a cualquier organismo al que se le puede administrar una composición proporcionada, por ejemplo con fines experimentales, de diagnóstico, profilácticos, cosméticos y/o terapéuticos. Los pacientes típicos incluyen animales (por ejemplo, mamíferos tales como ratones, ratas, conejos, primates no humanos y/o seres humanos). En algunas realizaciones, un paciente es un ser humano. Un ser humano incluye formas pre- y posnatales.
Farmacéuticamente aceptable:El término "farmacéuticamente aceptable", tal como se usa en el presente documento, se refiere a sustancias que, dentro del alcance del criterio médico sensato, son adecuadas para uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable.
Sal farmacéuticamente aceptable:Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al. describen sales farmacéuticamente aceptables con detalle en J. Pharmaceutical Sciences (1977) 66:1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos adecuados. Ejemplos de sales de adición de ácido no tóxicas farmacéuticamente aceptables son sales de un grupo amino formado con ácidos inorgánicos, como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico, o con ácidos orgánicos, como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico, o usando otros métodos usados en la técnica, como intercambio iónico. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canfosulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2-hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato y similares. Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos, metales alcalinotérreos, amonio y N<+>(alquilo C<1-4>)<4>. Las sales representativas de metales alcalinos o alcalino-térreos incluyen sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen, cuando proceda, cationes amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos formados usando contraiones como haluro, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato y arilsulfonato. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales formadas a partir de la cuaternización de una amina usando un electrófilo apropiado, por ejemplo un haluro de alquilo, para formar una sal de amino alquilada cuaternizada.
Distribución o administración sistémica:Como se utiliza en el presente documento, las expresiones "distribución sistémica", "administración sistémica" o equivalente gramatical se refieren a un mecanismo o enfoque de administración o distribución que afecta a todo el cuerpo o a todo un organismo. Normalmente, la distribución o administración sistémica se logra a través del sistema circulatorio del cuerpo, por ejemplo el torrente sanguíneo. En comparación con la definición de "distribución o administración local".
Sujeto: Como se utiliza en el presente documento, el término "sujeto" se refiere a un ser humano o cualquier animal no humano (por ejemplo, ratón, rata, conejo, perro, gato, ganado vacuno, cerdos, ovejas, caballos o primates). Un ser humano incluye formas pre- y posnatales. En muchas realizaciones, un sujeto es un ser humano. Un sujeto puede ser un paciente, que se refiere a un ser humano que se presenta a un proveedor médico para el diagnóstico o tratamiento de una enfermedad. El término "sujeto" se utiliza en el presente documento indistintamente con "individuo" o "paciente". Un sujeto puede sufrir o ser susceptible a una enfermedad o trastorno, pero puede mostrar o no síntomas de la enfermedad o trastorno.
Sustancialmente:Como se utiliza en el presente documento, el término "sustancialmente" se refiere a la condición cualitativa de exhibir una extensión o grado total o casi total de una característica o propiedad de interés. Alguien con conocimientos normales en las técnicas biológicas comprenderá que los fenómenos biológicos y químicos rara vez, o nunca, llegan a su fin y/o transcurren hasta su plenitud o logran o evitan un resultado absoluto. Por lo tanto, el término "sustancialmente" se utiliza en el presente documento para expresar la posible falta de exhaustividad inherente a muchos fenómenos biológicos y químicos.
Tejidos diana:Como se utiliza en el presente documento, la expresión "tejidos diana" se refiere a cualquier tejido que esté afectado por una enfermedad a tratar. En algunas realizaciones, los tejidos diana incluyen aquellos tejidos que presentan patología, síntoma o característica asociada a la enfermedad.
Cantidad terapéuticamente eficaz:Como se utiliza en el presente documento, la expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" de un agente terapéutico significa una cantidad que es suficiente, cuando se administra a un sujeto que padece o es susceptible a una enfermedad, trastorno y/o afección, para tratar, diagnosticar, prevenir y/o retrasar la aparición del o de los síntomas de la enfermedad, trastorno y/o afección. Los expertos en la técnica apreciarán que una cantidad terapéuticamente eficaz normalmente se administra mediante un régimen de dosificación que comprende al menos una dosis unitaria.
Tratando:Como se utiliza en el presente documento, el término "tratar", "tratamiento" o "tratando" se refiere a cualquier método usado para aliviar, mejorar, mitigar, inhibir, prevenir, retrasar la aparición, reducir la gravedad y/o reducir la incidencia, de forma parcial o completa, de uno o más síntomas o características de una enfermedad, trastorno y/o afección particular. El tratamiento se puede administrar a un sujeto que no muestra signos de una enfermedad y/o que muestra sólo signos tempranos de la enfermedad, con el fin de disminuir el riesgo de desarrollar patología asociada con la enfermedad.
Alifático:Como se utiliza en el presente documento, el término alifático se refiere a hidrocarburos C<1>-C<40>, e incluye hidrocarburos tanto saturados como insaturados. Un alifático puede ser lineal, ramificado o cíclico. Por ejemplo, los alifáticos C<1>-C<20>pueden incluir alquilos C<1>-C<20>(por ejemplo alquilos saturados C<1>-C<20>lineales o ramificados), alquenilo C<2>-C<20>(por ejemplo dienilos C<4>-C<20>lineales o ramificados, trienilos C<6>-C<20>lineales o ramificados y similares) y alquinilos C<2>-C<20>(por ejemplo alquinilos C<2>-C<20>lineales o ramificados). Los alifáticos C<1>-C<20>pueden incluir alifáticos C<3>-C<20>cíclicos (por ejemplo cicloalquilos C<3>-C<20>, cicloalquenilos C<4>-C<20>o cicloalquinilos C<8>-C<20>). En ciertas realizaciones, el alifático puede comprender uno o más alifáticos cíclicos y/o uno o más heteroátomos, tales como oxígeno, nitrógeno o azufre, y puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alquilo, halo, alcoxilo, hidroxi, amino, arilo, éter, éster o amida. Un grupo alifático no está sustituido o está sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe en el presente documento. Por ejemplo, un alifático puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', - OCOR', -OCO<2>R', -NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada caso deR'es independientemente C<1>-C<20>alifático (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>). En realizaciones,R'es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>no sustituido). En realizaciones,R'es independientemente alquilo C<1>-C<3>no sustituido. En realizaciones, el alifático no está sustituido. En realizaciones, el alifático no incluye ningún heteroátomo.
Alquilo:Como se utiliza en el presente documento, el término "alquilo" significa grupos hidrocarburo acíclicos lineales y ramificados, por ejemplo "alquilo C<1>-C<20>" se refiere a grupos alquilo que tienen 1-20 carbonos. Un grupo alquilo puede ser lineal o ramificado. Ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo terc-pentilhexilo, isohexilo, etc. Otros grupos alquilo serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica dado el beneficio de la presente descripción. Un grupo alquilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe en el presente documento. Por ejemplo, un grupo alquilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', - NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada casode R'es independientemente C<1>-C<20>alifático (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>). En realizaciones,R'es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>no sustituido). En realizaciones,R'es independientemente alquilo C<1>-C<3>no sustituido. En realizaciones, el alquenilo está sustituido (por ejemplo con 1, 2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe en el presente documento). En realizaciones, un grupo alquilo está sustituido con un grupo -OH, y también puede denominarse en el presente documento como un grupo "hidroxialquilo", en el que el prefijo indica el grupo -OH, y "alquilo" es como se describe en el presente documento.
Alquileno:El término "alquileno", como se utiliza en el presente documento, representa un grupo hidrocarburo divalente saturado de cadena lineal o ramificada, y está ejemplificado por metileno, etileno, isopropileno y similares. Asimismo, el término "alquenileno", como se utiliza en el presente documento, representa un grupo hidrocarburo divalente insaturado de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono insaturados que pueden aparecer en cualquier punto estable a lo largo de la cadena, y el término "alquinileno" representa aquí un grupo hidrocarburo divalente insaturado de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más triples enlaces carbonocarbono insaturados que pueden aparecer en cualquier punto estable a lo largo de la cadena. En ciertas realizaciones, un grupo alquileno, alquenileno, o alquinileno puede comprender uno o más alifáticos cíclicos y/o uno o más heteroátomos, tales como oxígeno, nitrógeno o azufre, y puede estar opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, tales como alquilo, halo, alcoxilo, hidroxi, amino, arilo, éter, éster o amida. Por ejemplo, un alquileno, alquenileno o alquinileno puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5 o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', - NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada caso deR'es independientemente C<1>-C<20>alifático (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>). En realizaciones,R'es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>no sustituido). En realizaciones,R'es independientemente alquilo C<1>-C<3>no sustituido. En ciertas realizaciones, un alquileno, alquenileno, o alquinileno no está sustituido. En ciertas realizaciones, un alquileno, alquenileno o alquinileno no incluye ningún heteroátomo.
Alquenilo: Como se utiliza en el presente documento, "alquenilo" significa cualquier cadena de hidrocarburo lineal o ramificada, que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono insaturados que pueden aparecer en cualquier punto estable a lo largo de la cadena; por ejemplo, "alquenilo C<2>-C<20>" se refiere a un grupo alquenilo que tiene 2-20 carbonos. Por ejemplo, un grupo alquenilo incluye prop-2-enilo, but-2-enilo, but-3-enilo, 2-metilprop-2-enilo, hex-2-enilo, hex-5-enilo, 2,3-dimetilbutil-2-enilo, y similares. En realizaciones, el alquenilo comprende 1, 2 o 3 dobles enlaces carbonocarbono. En realizaciones, el alquenilo comprende un único doble enlace carbono-carbono. En realizaciones, se conjugan múltiples dobles enlaces (por ejemplo, 2 o 3). Un grupo alquenilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe en el presente documento. Por ejemplo, un grupo alquenilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', -NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada caso deR'es independientemente C<1>-C<20>alifático (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>). En realizaciones,R'es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>no sustituido). En realizaciones,R'es independientemente alquilo C<1>-C<3>no sustituido. En realizaciones, el alquenilo no está sustituido. En realizaciones, el alquenilo está sustituido (por ejemplo, con 1, 2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe en el presente documento). En realizaciones, un grupo alquenilo está sustituido con un grupo -OH, y también puede denominarse en el presente documento como un grupo "hidroxialquenilo", en el que el prefijo indica el grupo -OH, y "alquenilo" es como se describe en el presente documento.
Alquinilo: Como se utiliza en el presente documento, "alquinilo" significa cualquier cadena de hidrocarburo de configuración lineal o ramificada, que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono que se encuentran en cualquier punto estable a lo largo de la cadena; por ejemplo, "alquinilo C<2>-C<20>" se refiere a un grupo alquinilo que tiene 2-20 carbonos. Ejemplos de un grupo alquinilo incluyen prop-2-inilo, but-2-inilo, but-3-inilo, pent-2-inilo, 3-metilpent-4-inilo, hex-2-inilo, hex-5-inilo, etc. En realizaciones, un alquinilo comprende un triple enlace carbono-carbono. Un grupo alquinilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe en el presente documento. Por ejemplo, un grupo alquinilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', -NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada caso deR'es independientemente C<1>-C<20>alifático (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>). En realizaciones,R'es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>no sustituido). En realizaciones,R'es independientemente alquilo C<1>-C<3>no sustituido. En realizaciones, el alquinilo no está sustituido. En realizaciones, el alquenilo está sustituido (por ejemplo, con 1,2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe aquí).
Arilo:Los términos "arilo" y "ar-", utilizados solos o como parte de una fracción mayor, por ejemplo "aralquilo", "aralcoxi" o "ariloxialquilo", se refieren a una fracción de hidrocarburo aromático C<6-14>opcionalmente sustituido que comprende uno a tres anillos aromáticos. Por ejemplo, el grupo arilo es un grupo C<6-10>(es decir, fenilo y naftilo). Los grupos arilo incluyen, entre otros, fenilo, naftilo o antracenilo opcionalmente sustituidos. Los términos "arilo" y "ar-", tal como se usan en este documento, también incluyen grupos en los que un anillo de arilo se fusiona a uno o más anillos cicloalifáticos para formar una estructura cíclica opcionalmente sustituida como un anillo tetrahidonaftilo, indenilo o indanilo. El término "arilo" puede utilizarse indistintamente con los términos "grupo arilo", "anillo arílico" y "anillo aromático".
Cicloalquilo:Tal como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo" significa un grupo cíclico no aromático, saturado, por ejemplo "cicloalquilo C<3>-C<10>". En las realizaciones, un cicloalquilo es monocíclico. En las realizaciones, un cicloalquilo es policíclico (por ejemplo bicíclico o tricíclico). En los grupos cicloalquilo policíclicos, los anillos individuales pueden ser fusionados, puenteados o espirocíclicos. Ejemplos de un grupo cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, norboranilo, biciclo[3,2.1]octanilo, octahidro-pentalenilo y espiro[4,5]decanilo y similares. El término "cicloalquilo" puede utilizarse indistintamente con el término "carbociclo". Un grupo cicloalquilo puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos sustituyentes como se describe en el presente documento. Por ejemplo, un grupo cicloalquilo puede estar sustituido con uno o más (por ejemplo 1,2, 3, 4, 5, o 6 sustituyentes seleccionados independientemente) de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', -NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada caso deR'es independientemente C<1>-C<20>alifático (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>). En realizaciones,R'es independientemente un alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<1>-C<15>, alquilo C<1>-C<10>o alquilo C<1>-C<3>no sustituido). En realizaciones,R'es independientemente alquilo C<1>-C<3>no sustituido. En realizaciones, el cicloalquilo no está sustituido. En realizaciones, el cicloalquilo está sustituido (por ejemplo, con 1,2, 3, 4, 5, o 6 grupos sustituyentes como se describe en el presente documento).
Halógeno:Como se utiliza en el presente documento, el término "halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo.
Heteroalquenilo.El término "heteroalquenilo" se refiere a un grupo alquenil ramificado o no ramificado que tiene de 2 a 14 átomos de carbono además de 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, O, S y P. Un heteroalquenilo puede incluir opcionalmente anillos monocíclicos, bicíclicos o tricíclicos, en los que cada anillo tiene deseablemente tres a seis miembros. El grupo heteroalquenilo puede estar sustituido o no sustituido.
Heteroalquinilo.El término "heteroalquinilo" se refiere a un grupo alquinilo ramificado o no ramificado que tiene de 2 a 14 átomos de carbono además de 1,2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, O, S y P. Un heteroalquinilo puede incluir opcionalmente anillos monocíclicos, bicíclicos o tricíclicos, en los que cada anillo tiene deseablemente tres a seis miembros. El grupo heteroalquinilo puede estar sustituido o no sustituido.
Heteroalquilo:El término "heteroalquilo" significa un grupo alquilo, alquenilo, o alquinilo, ramificado o no ramificado, que tiene de 1 a 14 átomos de carbono, además de 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados independientemente del grupo que consiste en N, O, S y P. Los heteroalquilos incluyen, sin limitación, aminas terciarias, aminas secundarias, éteres, tioéteres, amidas, tioamidas, carbamatos, tiocarbamatos, hidrazonas, iminas, fosfodiésteres, fosforamidatos, sulfonamidas y disulfuros. Un grupo heteroalquilo puede incluir opcionalmente anillos monocíclicos, bicíclicos o tricíclicos, en el que cada anillo tiene deseablemente tres a seis miembros. El grupo heteroalquilo puede estar sustituido o no sustituido. Ejemplos de heteroalquilos incluyen, sin limitación, poliéteres, como metoximetilo y etoxietilo.
Heteroarilo:Los términos "heteroarilo" y "heteroar-", usados solos o como parte de una fracción mayor, por ejemplo "heteroaralquilo" o "heteroaralcoxi", se refiere a grupos que tienen 5 a 14 átomos de anillo, preferiblemente 5, 6, 9 o 10 átomos de anillo; que tienen 6, 10 o 14 electrones n compartidos en un conjunto cíclico; y que tienen, además de átomos de carbono, de uno a cinco heteroátomos. Un grupo heteroarilo puede ser mono-, bi-, tri- o policíclico, por ejemplo, mono-, bi- o tricíclico (por ejemplo mono- o bicíclico). El término "heteroátomo" se refiere a nitrógeno, oxígeno o azufre, e incluye cualquier forma oxidada de nitrógeno o azufre, y cualquier forma cuaternizada de un nitrógeno básico. Por ejemplo, un átomo de nitrógeno de un heteroarilo puede ser un átomo de nitrógeno básico y también puede oxidarse opcionalmente al N-óxido correspondiente. Cuando un heteroarilo es sustituido por un grupo hidroxi, también incluye su tautómero correspondiente. Los términos "heteroarilo" y "heteroar-", como se usan en este documento, también incluyen grupos en los que un anillo heteroaromático se fusiona con uno o más anillos arilo cicloalifáticos o heterocicloalifáticos. Ejemplos no limitativos de grupos heteroarilo incluyen tienilo, furanilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolizinilo, purinilo, naftiridinilo, pteridinilo, indolilo, isoindolilo, benzotienilo, benzofuranilo, dibenzofuranilo, indazolilo, bencimidazolilo, bencitiazolilo, quinolilo, isoquinolilo, cinnolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 4H-quinolizinilo, carbazolilo, acridinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo y pirido[2,3-b]-1,4-oxazina-3(4H)-ona. El término "heteroarilo" puede usarse indistintamente con los términos "anillo heteroarilo", "grupo heteroarilo" o "heteroaromático", cualquiera de los cuales incluye anillos que se sustituyen opcionalmente. El término "heteroaralquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido por un heteroarilo, en el que las porciones alquilo y heteroarilo están sustituidas independientemente.
Heterociclilo:Como se usa en el presente documento, los términos "heterociclo", "heterociclilo", "radical heterocíclico" y "anillo heterocíclico" se usan indistintamente y se refieren a un resto heterocíclico estable monocíclico de 3 a 8 miembros o bicíclico de 7-10 miembros que está o saturado o parcialmente insaturado, y que tiene, además de átomos de carbono, uno o más, tales como uno a cuatro, heteroátomos, como se ha definido anteriormente. Cuando se usa en referencia a un átomo de anillo de un heterociclo, el término "nitrógeno" incluye un nitrógeno sustituido. Como un ejemplo, en un anillo saturado o parcialmente insaturado que tiene 0-3 heteroátomos seleccionados a partir de oxígeno, azufre o nitrógeno, el nitrógeno puede ser N (como en 3,4-dihidro- 2H-pirrolilo), NH (como en pirrolidinilo) o NR<+>(como en pirrolidinilo N-sustituido).
Un anillo heterocíclico se puede unir a su grupo colgante en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que resulte en una estructura estable y cualquiera de los átomos del anillo puede estar opcionalmente sustituido. Ejemplos de tales radicales heterocíclicos saturados o parcialmente insaturados incluyen, sin limitación, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, piperidinilo, decahidroquinolinilo, oxazolidinilo, piperazinilo, dioxanilo, dioxolanilo, diazepinilo, oxazepinilo, tiazepinilo, morfolinilo y tiamorfolinilo. Un grupo heterociclilo puede ser mono-, bi-, tri- o policíclico, preferiblemente mono-, bi-, o tricíclico, más preferiblemente mono- o bicíclico. El término "heterociclilalquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido por un heterociclilo, en el que las porciones alquilo y heterociclilo están sustituidas independientemente. Además, un anillo heterocíclico también incluye grupos en los que el anillo heterocíclico se fusiona con uno o más anillos arílicos.
Lípidos catiónicos
Los vehículos basados en liposomas se consideran un vehículo atractivo para agentes terapéuticos, y siguen sujetos a esfuerzos de desarrollo continuos. Aunque los vehículos liposomales que comprenden determinados componentes lipídicos han mostrado resultados prometedores en cuanto a encapsulación, estabilidad y localización del sitio, sigue habiendo una gran necesidad de mejorar los sistemas de administración liposomales. Por ejemplo, un inconveniente importante de los sistemas de administración liposomales se refiere a la construcción de liposomas que tienen suficiente cultivo celular o estabilidadin vivopara alcanzar las células diana y/o compartimentos intracelulares deseados, y la capacidad de tales sistemas de administración liposomales para liberar eficientemente sus materiales encapsulados a tales células diana.
En particular, sigue existiendo la necesidad de compuestos lipídicos mejorados que demuestren propiedades farmacocinéticas mejoradas y que sean capaces de administrar macromoléculas, tales como ácidos nucleicos, a una amplia variedad de tipos de células y tejidos con mayor eficiencia. Es importante destacar que también sigue existiendo una necesidad particular de nuevos compuestos lipídicos que se caractericen por tener una toxicidad reducida y sean capaces de administrar eficientemente ácidos nucleicos y polinucleótidos encapsulados a células, tejidos y órganos diana.
En el presente documento se describen nuevos lípidos catiónicos, composiciones que comprenden dichos lípidos, y métodos relacionados de su uso. En las realizaciones, los compuestos descritos en este documento son útiles como composiciones liposomales o como componentes de las composiciones liposomales para facilitar la entrega y posterior transfección de una o más células diana.
Los lípidos catiónicos divulgados aquí comprenden un grupo funcional básico ionizable (por ejemplo una amina o un heteroarilo que contiene nitrógeno, como se describe en el presente documento), que está presente en forma neutra o cargada. Por ejemplo, un grupo funcional básico ionizable puede referirse a un grupo funcional nitrogenado (por ejemplo NH<2>, guanidina, amidina, mono- o dialquilamina, heterocicloalquilo de 5 a 6 miembros o heteroarilo que contiene nitrógeno de 5 a 6 miembros) que puede convertirse en un grupo cargado por protonación con un ácido o desprotonación con una base. En consecuencia, en realizaciones, X1 es NH<2>, guanidina, amidina, mono- o dialquilamina, heterocicloalquilo de 5 a 6 miembros o heteroarilo que contiene nitrógeno de 5 a 6 miembros. Por ejemplo, en realizaciones, X1 es
En realizaciones, los compuestos descritos en el presente documento pueden proporcionar una o más características o propiedades deseadas. Es decir, en ciertas realizaciones, los compuestos descritos en el presente documento se pueden caracterizar por tener una o más propiedades que proporcionan a tales compuestos ventajas con respecto a otros lípidos clasificados de manera similar. Por ejemplo, los compuestos divulgados en el presente documento pueden permitir el control y la adaptación de las propiedades de las composiciones liposomales (por ejemplo, nanopartículas lipídicas) de las que son un componente. En particular, los compuestos divulgados en el presente documento pueden caracterizarse por eficiencias de transfección mejoradas y su capacidad para provocar resultados biológicos específicos. Tales resultados pueden incluir, por ejemplo, una absorción celular mejorada, capacidades de alteración endosómica/lisosomal y/o promoción de la liberación de materiales encapsulados (por ejemplo, polinucleótidos) intracelularmente.
Lípidos catiónicos de las Fórmulas (I)-(V)
En una realización, la presente invención proporciona un lípido catiónico que tiene una estructura según la Fórmula (I).:
en donde
R<1>y R<2>son cada uno independientemente alquilo C<1>-C<30>, alquenilo C<2>-C<30>, alquinilo C<2>-C<30>, heteroalquilo C<i>-C<30>, heteroalquenilo C<1>-C<30>, heteroalquinilo C<1>-C<30>, un polímero, cicloalquilo C<5>-C<6>, heterocicloalquilo de 5 a 6 miembros, arilo C<5>-C<6>o heteroarilo de 5 a 6 miembros, donde dicho alquilo C<1>-C<30>no está sustituido o está sustituido con
uno o más de halógenos, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', - NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', donde cada caso de R' independientemente es C<1>-C<20>alifático; o en donde R<1>y R<2>son cada uno independientemente C<6>-C<30>-alquilo sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster;
X<1>y X<2>son cada uno independientemente OH, OR<a>o NR<b>R<c>;
L<1>es alquileno C<1>-C<10>; alquenileno C<2>-C<10>; o alquinileno C<2>-C<10>;
X<3>es CH<2>, O, S, NH o NR<d>;
X<4>es O o S;
R<a>y R<d>son cada uno independientemente alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>;
R<b>y R<c>son cada uno independientemente H, alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>; o
R<b>y R<c>, junto con el átomo de nitrógeno a través del cual están conectados, forman un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 a 6 miembros; y
es un esterol natural o no natural.
En las realizaciones, un lípido catiónico de la Fórmula (I) tiene una estructura según la Fórmula (II),
En las realizaciones, un lípido catiónico de la Fórmula (I) tiene una estructura según la Fórmula (III),
En realizaciones, R<1>es alquilo C<1>-C<30>donde dicho alquilo C<1>-C<30>no está sustituido o está sustituido como se indicó anteriormente, alquenilo C<2>-C<30>, alquinilo C<2>-C<30>, heteroalquilo C<1>-C<30>, heteroalquenilo C<1>-C<30>, heteroalquinilo C<1>-C<30>, un polímero, cicloalquilo C<5>-C<6>, heterocicloalquilo de 5 a 6 miembros, arilo C<5>-C<6>, o heteroarilo de 5 a 6 miembros. En realizaciones, R<2>es alquilo C<1>-C<30>donde dicho alquilo C<1>-C<30>no está sustituido o está sustituido como se indicó anteriormente, alquenilo C<2>-C<30>, alquinilo C<2>-C<30>, heteroalquilo C<1>-C<30>, heteroalquenilo C<1>-C<30>, heteroalquinilo C<1>-C<30>, un polímero, cicloalquilo C<5>-C<6>, heterocicloalquilo de 5 a 6 miembros, arilo C<5>-C<6>, o heteroarilo de 5 a 6 miembros. En realizaciones, R<1>es alquilo C<6>-C<30>no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster.
En realizaciones, R<2>es alquilo C<6>-C<30>, no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster.
En realizaciones, cada R<1>es alquilo C<6>-C<30>no sustituido.
En realizaciones, cada R<2>es alquilo C<6>-C<30>no sustituido.
En realizaciones, R<1>es -C<6>H<13>, -C<7>H<15>, -C<8>H<17>, -C<9>H<19>, -C<10>H<21>, -C<11>H<23>, -C<12>H<25>, - C<13>H<27>, -C<14>H<29>, -C<15>H<31>, -C<16>H<33>, -C<17>H<35>, -C<18>H<37>, -C<19>H<39>, -C<20>H<41>, -C<21>H<43>, -C<22>H<45>, - C<23>H<47>, -C<24>H<49>o -C<25>H<51>
En realizaciones, R<2>es -C<6>H<13>, -C<7>H<15>, -C<8>H<17>, -C<9>H<19>, -C<10>H<21>, -C<11>H<23>, -C<12>H<25>, - C<13>H<27>, -C<14>H<29>, -C<15>H<31>, -C<16>H<33>, -C<17>H<35>, -C<18>H<37>, -C<19>H<39>, -C<20>H<41>, -C<21>H<43>, -C<22>H<45>, - C<23>H<47>, -C<24>H<49>, or -C<25>H<51.>
En realizaciones, R<1>es alquilo C<6>-C<30>sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster.
En realizaciones, R<2>es alquilo C<6>-C<30>sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster.
En realizaciones, R<1>es alquenilo C<6>-C<30>o alquenilo C<8>-C<20>.
En realizaciones, R<2>es alquenilo C<6>-C<30>o alquenilo C<8>-C<20>.
En realizaciones, R<1>se selecciona a partir de alquenilo C<8>, alquenilo C<9>, alquenilo C<10>, alquenilo C<11>, alquenilo C<12>, alquenilo C<13>, alquenilo C<14>, alquenilo C<15>, alquenilo C<16>, alquenilo C<17>, alquenilo C<18>, alquenilo C<19>, alquenilo y alquenilo C<20>.
En realizaciones, R<2>se selecciona a partir de alquenilo C<8>, alquenilo C<9>, alquenilo C<10>, alquenilo C<11>, alquenilo C<12>, alquenilo C<13>, alquenilo C<14>, alquenilo C<15>, alquenilo C<16>, alquenilo C<17>, alquenilo C<18>, alquenilo C<19>, alquenilo y alquenilo C<20>.
En realizaciones, R<1>se selecciona a partir de alquenilo C<8>no sustituido, alquenilo C<9>no sustituido, alquenilo C<10>no sustituido, alquenilo C<11>no sustituido, alquenilo C<12>no sustituido, alquenilo C<13>no sustituido, alquenilo C<14>no sustituido, alquenilo C<15>no sustituido, alquenilo C<16>no sustituido, alquenilo C<17>no sustituido, alquenilo C<18>no sustituido, alquenilo C<19>no sustituido y alquenilo C<20>no sustituido.
En realizaciones, R<2>se selecciona a partir de alquenilo C<8>no sustituido, alquenilo C<9>no sustituido, alquenilo C<10>no sustituido, alquenilo C<11>no sustituido, alquenilo C<12>no sustituido, alquenilo C<13>no sustituido, alquenilo C<14>no sustituido, alquenilo C<15>no sustituido, alquenilo C<16>no sustituido, alquenilo C<17>no sustituido, alquenilo C<18>no sustituido, alquenilo C<19>no sustituido y alquenilo C<20>no sustituido.
En realizaciones, R<1>es -(CH<2>)<4>CH=CH<2>, -(CH<2>)<5>CH=CH<2>, -(CH<2>)<6>CH=CH<2>, -(CH<2>)<7>CH=CH<2>, -(CH<2>)<8>CH=CH<2>, -(CH<2>)<9>CH=CH<2>, -(CH<2>)<10>CH=CH<2>, -(CH<2>)<11>CH=CH<2>, -(CH<2>)<12>CH=CH<2>, -(CH<2>)<13>CH=CH<2>, -(CH<2>)<14>CH=CH<2>, -(CH<2>)<15>CH=CH<2>, -(CH<2>)<16>CH=CH<2>, -(CH<2>)<17>CH=CH<2>, -(CH<2>)<18>CH=CH<2>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<3>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<5>CH<3>, (CH<2>)<4>CH=CH(CH<2>)<8>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<7>CH<3>, - (CH<2>)<6>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>, -(CH<2>)<3>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<3>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>, -(CH<2>)<11>CH=CH(CH<2>)<7>CH<3>, o -(CH<2>)<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>.
En realizaciones, R<2>es -(CH<2>)<4>CH=CH<2>, -(CH<2>)<5>CH=CH<2>, -(CH<2>)<6>CH=CH<2>, -(CH<2>)<7>CH=CH<2>, -(CH<2>)<8>CH=CH<2>, -(CH<2>)<9>CH=CH<2>, -(CH<2>)<10>CH=CH<2>, -(CH<2>)<11>CH=CH<2>, -(CH<2>)<12>CH=CH<2>, -(CH<2>)<13>CH=CH<2>, -(CH<2>)<14>CH=CH<2>, -(CH<2>)<15>CH=CH<2>, -(CH<2>)<16>CH=CH<2>, -(CH<2>)<17>CH=CH<2>, -(CH<2>)<18>CH=CH<2>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<3>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<5>CH<3>, -(CH<2>)<4>CH=CH(CH<2>)<8>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CH(CH<2>)<7>CH<3>, -(CH<2>)<6>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<7>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>, -(CH<2>)<3>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CH(CH<2>)<4>CH<3>, -(CH<2>)<3>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>, -(CH<2>)<11>CH=CH(CH<2>)<7>CH<3>y -(CH<2>)<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH=CHCH<2>CH<3>.
En realizaciones, cada R<1>y R<2>se selecciona a partir del grupo que consiste en:
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, R<1>es heteroarilo de 5 a 6 miembros.
En realizaciones, R<2>es heteroarilo de 5 a 6 miembros.
En realizaciones, R<1>es imidazolilo o un derivado del mismo.
En realizaciones, R<2>es imidazolilo o un derivado del mismo.
En realizaciones, X<1>es OH.
En realizaciones, X<1>es NR<b>R<c>, en donde R<b>y R<c>son cada uno independientemente H, alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>.
En realizaciones, X<1>es NR<b>R<c>, en donde R<b>y R<c>, junto con el átomo de nitrógeno a través del cual están conectados, forman un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 a 6 miembros.
En realizaciones, X<2>es OH.
En realizaciones, X<2>es NR<b>R<c>, en donde R<b>y R<c>son cada uno independientemente H, alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>.
En realizaciones, X<2>es NR<b>R<c>, en donde R<b>y R<c>, junto con el átomo de nitrógeno a través del cual están conectados, forman un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 a 6 miembros.
En realizaciones, L<1>es alquileno C<1>-C<10>, como, por ejemplo, alquileno C<1>, alquileno C<2>, alquileno C<3>, alquileno C<3>, alquileno C<3>, alquileno C<4>, alquileno Cs, alquileno C<6>, alquileno C<7>, alquileno C<8>, alquileno C<9>o alquileno C<10>.
En realizaciones, L<1>es alquenileno C<2>-C<10>como, por ejemplo, alquenileno C<1>, alquenileno C<2>, alquenileno C<3>, alquenileno C<3>, alquenileno C<3>, alquenileno C<4>, alquenileno C<5>, alquenileno C<6>, alquenileno C<7>, alquenileno C<8>, alquenileno C<9>o alquenileno C<10>.
En realizaciones, L<1>es alquinileno C<2>-C<10>, como, por ejemplo, alquinileno C<1>, alquinileno C<2>, alquinileno C<3>, alquinileno
C<3>, alquinileno C<3>, alquinileno C<4>, alquinileno Cs, alquinileno C<6>, alquinileno C<7>, alquinileno alquinileno C<10>.
En realizaciones, X<3>es CH<2>.
En realizaciones, X<3>es O.
En realizaciones, X<3>es S.
En realizaciones, X<3>es NH.
En realizaciones, X<3>es NR<d>, en donde R<d>es alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo
C<2>-C<6>.
En realizaciones, X<4>es O.
En realizaciones, X<4>es S.
En realizaciones,
©
es un zooesterol o una forma oxidada o reducida del mismo. En realizaciones,
©
es un zooesterol.
En realizaciones,
es una forma oxidada de un zooesterol.
En realizaciones,
es una forma reducida de un zooesterol.
En realizaciones,
es un fitosterol o una forma oxidada o reducida del mismo.
En realizaciones,
©
es un fitosterol.
En realizaciones,
es una forma oxidada de un fitosterol.
En realizaciones,
es una forma reducida de un fitosterol.
En realizaciones,
©
es un esterol sintético (por ejemplo, no natural), o una forma oxidada o reducida del mismo. En realizaciones,
©
es un esterol sintético.
En realizaciones,
es una forma oxidada de un esterol sintético.
En realizaciones,
e©s una forma reducida de un esterol sintético.
En algunas realizaciones,
©
es una forma oxidada de un esterol como se describe aquí.
En algunas realizaciones, una forma oxidada de un esterol es aquella en la que el esterol original ha sido modificado para incluir más grupos que contienen oxígeno.
En realizaciones, una forma oxidada de un esterol incluye uno o más (por ejemplo 1, 2, 3 o 4) grupos hidroxilo adicionales y/o grupos que contienen carbonilo (por ejemplo una cetona, un aldehído, un ácido carboxílico o una fracción de éster carboxílico) en comparación con el esterol original.
En algunas realizaciones, una forma oxidada de un esterol es aquella en la que el esterol original ha sido modificado para incluir enlaces carbono-carbono insaturados (por ejemplo dobles enlaces carbono-carbono). En realizaciones, una forma oxidada de un esterol incluye uno o más (por ejemplo 1,2 o 3) dobles enlaces carbono-carbono adicionales en comparación con el esterol original.
En algunas realizaciones,
©
es una forma reducida de un esterol como se describe en el presente documento.
En algunas realizaciones, una forma reducida de un esterol es aquella en la que el esterol original ha sido modificado para incluir menos grupos que contienen oxígeno. En realizaciones, una forma reducida de un esterol incluye un número reducido (por ejemplo 1, 2, 3 o 4 fracciones menos) de grupos hidroxilo y/o grupos que contienen carbonilo (por ejemplo una cetona, un aldehído, un ácido carboxílico o una fracción de éster carboxílico) en comparación con el esterol original.
En algunas realizaciones, una forma reducida de un esterol es aquella en la que el esterol original ha sido modificado para incluir menos enlaces carbono-carbono insaturados (por ejemplo dobles enlaces carbono-carbono). En realizaciones, una forma reducida de un esterol incluye un número reducido (por ejemplo 1, 2, o 3 menos) de dobles enlaces carbono-carbono en comparación con el esterol original.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol o sitosterol, o cualquier forma oxidada o reducida del mismo.
En algunas realizaciones,
©
es un esterol seleccionado a partir de colesterol, una forma oxidada de colesterol, una forma reducida de colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol y sitosterol.
En algunas realizaciones,
©
es un esterol seleccionado a partir de una forma oxidada de colesterol, una forma reducida de colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol y sitosterol.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol o sitosterol. En algunas realizaciones,
es un esterol que es una forma oxidada de: colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol o sitosterol.
En algunas realizaciones,
©
es un esterol que es una forma reducida de: colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol o sitosterol.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es el colesterol, una forma oxidada de colesterol o una forma reducida de colesterol.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es alquil litocolato, una forma oxidada de alquil litocolato o una forma reducida de alquil litocolato. En algunas realizaciones,
es un esterol que es el estigmasterol, una forma oxidada de estigmasterol o una forma reducida de estigmasterol. En algunas realizaciones,
es un esterol que es estigmastanol, una forma oxidada de estigmastanol o una forma reducida de estigmastanol. En algunas realizaciones,
es un esterol que es campesterol, una forma oxidada de campesterol o una forma reducida de campesterol.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es ergosterol, una forma oxidada de ergosterol o una forma reducida de ergosterol.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es sitosterol, una forma oxidada de sitosterol o una forma reducida de sitosterol.
En algunas realizaciones,
es un esterol que es un ácido biliar o un éster de alquilo del mismo o una forma oxidada del mismo o una forma reducida del mismo.
En algunas realizaciones,
©
es un esterol que es ácido cólico o un éster de alquilo del mismo o una forma oxidada del mismo o una forma reducida del mismo.
En algunas realizaciones,
es un esterol seleccionado a partir de
(alquil litocolato),
(campesterol),
(sitosterol), y
(ácido cólico), en donde R es alquilo C<1>-C<20>opcionalmente sustituido y R' es H o alquilo C<1>-C<20>opcionalmente sustituido.
En realizaciones,
es un esterol que es
En algunas realizaciones,
©
es un esterol seleccionado a partir de
(estigmastanol),
(ergosterol),
(ácido cólico), en donde R es alquilo C<1>-C<20>opcionalmente sustituido y R' es H o alquilo C<1>-C<20>opcionalmente sustituido.
En realizaciones, un lípido catiónico de la Fórmula (I) tiene una estructura según la Fórmula (IV):
En realizaciones, un lípido catiónico de la Fórmula (I) tiene una estructura según la Fórmula (V):
En realizaciones, L<1>es -CH<2>-. En realizaciones, L<1>es -(CH<2>)<2>-. En realizaciones, L<1>es -(CH<2>)<3>-. En realizaciones, L<1>es -(CH<2>)<4>-. En realizaciones, L<1>es -(CH<2>)<5>-. En realizaciones, L<1>es -(CH<2>)<6>-.
En realizaciones, R<1>y R<2>son diferentes. En las realizaciones, R<1>y R<2>son iguales. En realizaciones, cada R<1>y R<2>se selecciona a partir del grupo que consiste en:
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
En realizaciones, cada R 1 y R2 es
Lípidos catiónicos ejemplares
Uno de los lípidos catiónicos ejemplares de la presente invención es el lípido catiónico (1),
Otro lípido catiónico ejemplar de la presente invención es el lípido catiónico (2),
Otro lípido catiónico ejemplar adicional de la presente invención es el lípido catiónico (3),
Síntesis de lipidos cationicos
Lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2), y / o compuesto (3)) se puede preparar según los métodos conocidos en la técnica.
El Esquema 1proporciona una síntesis ejemplar para los lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo lípido catiónico (3)).
Esquema 1
Por ejemplo, un agente alquilante comoel compuesto ase puede tratar con magnesio para formar un reactivo de Grignard y reaccionar, por ejemplo, con epiclorhidrina, para formar un intermedio difuncional comoel compuesto b.
La eterificación posterior en condiciones básicas proporcionaun compuesto cnucleofílico. El tratamiento delcompuesto dde amina primaria conel compuesto cproporciona uncompuesto ede amina terciaria. Los grupos hidroxilo delcompuestoe pueden protegerse utilizando grupos y condiciones de protección conocidas en la técnica (por ejemplo TBSCl/imidazol) para proporcionar el correspondientecompuesto fprotegido con hidroxilo. Los esteroles, comoel compuesto h,pueden acoplarse al ácido carboxílico delcompuestof para formar lípidos catiónicos (por ejemplocompuesto i).Cuando dichos lípidos constituyen grupos protectores, la desprotección (por ejemplo HF/piridina cuando P<g>= TBS) puede proporcionar los lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo lípido catiónico (3)).
Ácidos nucleicos
Los lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) se pueden utilizar para preparar composiciones útiles para la administración de ácidos nucleicos.
Síntesis de ácidos nucleicos
Los ácidos nucleicos según la presente invención pueden sintetizarse según cualquier método conocido. Por ejemplo, los ARNm según la presente invención pueden sintetizarse mediante transcripciónin vitro(TIV). Brevemente, la TIV generalmente se realiza con una plantilla de ADN lineal o circular que contiene un promotor, un conjunto de ribonucleótido trifosfatos, un sistema tampón que puede incluir DTT e iones de magnesio, y una ARN polimerasa apropiada (por ejemplo ARN polimerasa de T3, T7, T7 mutada, o SP6), ADNasa I, pirofosfatasa y/o inhibidor de ARNasa. Las condiciones exactas variarán según la aplicación específica.
En algunas realizaciones, para la preparación de ARNm según la invención, se transcribe una plantilla de ADNin vitro.Una plantilla de ADN adecuada normalmente tiene un promotor, por ejemplo un promotor T3, T7, T7 mutado, o SP6, para la transcripciónin vitro,seguido de la secuencia nucleotídica deseada para el ARNm deseado, y una señal de terminación.
La(s) secuencia(s) de ARNm deseada(s) según la invención pueden determinarse e incorporarse en un molde de ADN usando métodos estándar. Por ejemplo, a partir de una secuencia de aminoácidos deseada (por ejemplo, una secuencia enzimática), se lleva a cabo una traducción inversa virtual basada en el código genético degenerado. Después, se pueden usar algoritmos de optimización para la selección de codones adecuados. Normalmente, por un lado, el contenido de G/C se puede optimizar para lograr el contenido de G/C más alto posible, y por otro lado, teniendo en cuenta lo mejor posible la frecuencia de los ARNt según el uso de codones. La secuencia de ARN optimizada puede establecerse y visualizarse, por ejemplo, con la ayuda de un dispositivo de visualización adecuado, y puede compararse con la secuencia original (tipo salvaje). También se puede analizar una estructura secundaria para calcular propiedades o, respectivamente, regiones del ARN estabilizadoras y desestabilizadoras.
Como se describió anteriormente, la expresión "ácido nucleico", en su sentido más amplio, se refiere a cualquier compuesto y/o sustancia que está o puede incorporarse a una cadena polinucleotídica. El ADN puede estar en forma de ADN antisentido, ADN plasmídico, partes de un ADN plasmídico, ADN precondensado, un producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (por ejemplo, P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), casetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico o derivados de estos grupos. El ARN puede estar en forma de a Rn mensajero (ARNm), ARN ribosómico (ARNr), ARN de partículas de reconocimiento de señal (ARN 7 SL o ARN SRP), ARN de transferencia (ARNt), ARN mensajero de transferencia (ARNtm), ARN pequeño nuclear (ARNpn), ARN pequeño nucleolar (ARNpno), ARN SmY, ARN pequeño específico del cuerpo de Cajal (ARNpca), ARN guía (ARNg), ribonucleasa P (RNasa P), ARN Y, componente de ARN de telomerasa (TERC), ARN líder empalmado (ARN SL), Ar N antisentido (ARNa o ARNas), transcrito antisentido natural cis (cis-NAT), a Rn de CRISPR (ARNcr), ARN largo no codificante (ARNlnc), microARN (miARN), ARN que interacciona con piwi (piARN), ARN pequeño de interferencia (ARNpi), ARNpi de transacción (ARNpita), ARNpi asociado a repetición (ARNpiar), ARN de 73 K, retrotransposones, un genoma viral, un viroide, ARN satélite o derivados de estos grupos. En algunas realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica una proteína.
Síntesis de ARNm
Los ARNm según la presente invención pueden sintetizarse según cualquiera de una variedad de métodos conocidos. Por ejemplo, los ARNm según la presente invención pueden sintetizarse mediante transcripciónin vitro(TIV). Brevemente, la TIV se realiza normalmente con una plantilla de ADN lineal o circular que contiene un promotor, un conjunto de trifosfatos de ribonucleótidos, un sistema tampón que puede incluir DTT e iones magnesio, y una ARN polimerasa adecuada (por ejemplo, ARN polimerasa T3, T7 o SP6), DNAsa I, pirofosfatasa y/o inhibidor de RNAsa. Las condiciones exactas variarán según la aplicación específica. Las condiciones exactas variarán según la aplicación específica. La presencia de estos reactivos es indeseable en el producto final según varias realizaciones, y por lo tanto pueden denominarse impurezas, y una preparación que contiene una o más de estas impurezas puede denominarse preparación impura. En algunas realizaciones, la transcripciónin vitrose produce en un único lote.
En algunas realizaciones, para la preparación de ARNm según la invención, se transcribe una plantilla de ADNin vitro.Una plantilla de ADN adecuada normalmente tiene un promotor, por ejemplo un promotor T3, T7, o SP6, para la transcripciónin vitro,seguido de la secuencia nucleotídica deseada para el ARNm deseado, y una señal de terminación.
La(s) secuencia(s) de ARNm deseada(s) según la invención pueden determinarse e incorporarse en una plantilla de ADN usando métodos estándar. Por ejemplo, a partir de una secuencia de aminoácidos deseada (por ejemplo, una secuencia enzimática), se lleva a cabo una traducción inversa virtual basada en el código genético degenerado. Después, se pueden usar algoritmos de optimización para la selección de codones adecuados. Normalmente, por un lado, el contenido de G/C se puede optimizar para lograr el contenido de G/C más alto posible, y por otro lado, teniendo en cuenta lo mejor posible la frecuencia de los ARNt según el uso de codones. La secuencia de ARN optimizada puede establecerse y visualizarse, por ejemplo, con la ayuda de un dispositivo de visualización adecuado, y puede compararse con la secuencia original (tipo salvaje). También se puede analizar una estructura secundaria para calcular propiedades o, respectivamente, regiones del ARN estabilizadoras y desestabilizadoras.
ARNm modificado
En algunas realizaciones, el ARNm según la presente invención puede sintetizarse como ARNm no modificado o modificado. El ARNm modificado comprende modificaciones de nucleótidos en el ARN. Un ARNm modificado según la invención puede incluir, por lo tanto, la modificación de nucleótidos que son, por ejemplo, modificaciones de esqueleto, modificaciones de azúcar o modificaciones de base. En algunas realizaciones, los ARNm pueden sintetizarse a partir de nucleótidos naturales y/o análogos de nucleótidos (nucleótidos modificados), incluyendo, entre otros, purinas (adenina (A), guanina (G)) o pirimidinas (timina (T), citosina (C), uracilo (U)), y como análogos de nucleótidos modificados o derivados de purinas y pirimidinas, como, por ejemplo, 1-metil-adenina, 2-metil-adenina, 2-metiltio-N-6-isopentenil-adenina, N6-metil-adenina, N6-isopentenil-adenina, 2-tio-citosina, 3-metil-citosina, 4-acetilcitosina, 5-metil-citosina, 2,6-diaminopurina, 1-metil-guanina, 2-metil-guanina, 2,2-dimetil-guanina, 7-metil-guanina, inosina, 1-metil-inosina, pseudouracilo (5-uracilo), dihidro-uracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouracilo, 5-(carboxihidroximetil)-uracilo, 5-fluoro-uracilo, 5-bromo-uracilo, 5-carboximetilaminometil-uracilo, 5-metil-2-tio-uracilo, 5-metil-uracilo, éster metílico del ácido N-uracilo-5-oxiacético, 5-metilaminometil-uracilo, 5-metoxiaminometil-2-tio-uracilo, 5'-metoxicarbonilmetil-uracilo, 5-metoxi-uracilo, éster metílico del ácido uracilo-5-oxiacético, ácido uracilo-5-oxiacético (v), 1-metil-pseudouracilo, queosina, beta-D-manosil-queosina, wibutoxosina, y fosforamidatos, fosforotioatos, nucleótidos peptídicos, metilfosfonatos, 7-deazaguanosina, 5-metilcitosina e inosina. La preparación de dichos análogos es conocida por el experto en la técnica, por ejemplo, a partir de la patente de EE. UU. n.° 4.373.071, la patente de EE. UU. n.° 4.401.796, la patente de EE. Uu . n.° 4.415.732, la patente de EE. UU. n.° 4.458.066, la patente de EE. UU. n.° 4.500.707, la patente de EE. UU. n.° 4.668.777, la patente de EE. UU. n.° 4.973.679, la patente de EE. UU. n.° 5.047.524, la patente de EE. UU. n.° 5.132.418, la patente de EE. UU. n.° 5.153.319, la patente de EE. UU. n.25.262.530 y 5.700.642.
En algunas realizaciones, los ARNm pueden contener modificaciones de la cadena principal del ARN. Normalmente, una modificación de la cadena principal es una modificación en la que los fosfatos de la cadena principal de los nucleótidos contenidos en el ARN se modifican químicamente. Las modificaciones de la cadena principal ejemplares normalmente incluyen, entre otras, modificaciones del grupo que consiste en metilfosfonatos, metilfosforamidatos, fosforamidatos, fosforotioatos (por ejemplo, citidina 5'-O-(1-tiofosfato)), boranofosfatos, grupos guanidinio cargados positivamente, etc., lo que significa sustituir el enlace de fosfodiéster por otros grupos aniónicos, catiónicos o neutros.
En algunas realizaciones, los ARNm pueden contener modificaciones del azúcar. Una modificación típica del azúcar es una modificación química del azúcar de los nucleótidos que contiene, incluyendo, entre otras, modificaciones del azúcar elegidas a partir del grupo que consiste en 4'-tio-ribonucleótido (véase, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente de EE. UU. n.° US 2016/0031928), 2'-desoxi-2'-fluoro-oligoribonucleótido (2'-fluoro-2'-desoxicitidina 5'-trifosfato, 2'-fluoro-2'-desoxiuridina 5'-trifosfato), 2'-deoxi-2'-deamina-oligoribonucleótido (2'-amino-2'-deoxicitidina 5'-trifosfato, 2'-amino-2'-desoxiuridina 5'-trifosfato), 2'-O-alquiloligoribonucleótido, 2'-desoxi-2'-C-alquiloligoribonucleótido (2'-O-metilcitidina 5'-trifosfato, 2'-metiluridina 5'-trifosfato), 2'-C-alquiloligorribonucleótido, y sus isómeros (2'-aracitidina 5'-trifosfato, 2'-arauridina 5'-trifosfato), o azidotrifosfatos (2'-azido-2'-desoxicitidina 5'-trifosfato, 2'-azido-2'-desoxiuridina 5'-trifosfato).
En algunas realizaciones, los ARNm pueden contener modificaciones de las bases de los nucleótidos (modificaciones de las bases). Un nucleótido modificado que contiene una modificación de las bases también se denomina nucleótido modificado en la base. Ejemplos de tales nucleótidos modificados en la base incluyen, pero no se limitan a, 2-amino-6-cloropurina ribósido 5'-trifosfato, 2-aminoadenosina 5'-trifosfato, 2-tiocitidina 5'-trifosfato, 2-tiouridina 5'-trifosfato, 4-tiouridina 5'-trifosfato, 5-aminoalilcitidina 5'-trifosfato, 5-aminoaliluridina 5'-trifosfato, 5-bromocitidina 5'-trifosfato, 5-bromouridina 5'-trifosfato, 5-yodocitidina 5'-trifosfato, 5-yodouridina 5'-trifosfato, 5-metiluridina 5'-trifosfato, 5-metiluridina 5'-trifosfato, 6-azacitidina 5'-trifosfato, 6-azauridina 5'-trifosfato, 6-cloropurina ribósido 5'-trifosfato, 7-deazaadenosina 5'-trifosfato, 7-deazaguanosina 5'-trifosfato, 8-azaadenosina 5'-trifosfato, 8-azidoadenosina 5'-trifosfato, bencimidazol ribósido 5'-trifosfato, N1-metiladenosina 5'-trifosfato, N1-metilguanosina 5'-trifosfato, N6-metiladenosina 5'-trifosfato, O6-metilguanosina 5'-trifosfato, pseudouridina 5'-trifosfato, puromicina 5'-trifosfato, o xantosina 5'-trifosfato.
Normalmente, la síntesis de ARNm incluye la adición de una "cubierta" en el extremo N-terminal (5'), y una "cola" en el extremo C-terminal (3'). La presencia de la cubierta es importante para proporcionar resistencia a las nucleasas que se encuentran en la mayoría de las células eucariotas. La presencia de una "cola" sirve para proteger el ARNm de la degradación por parte de la exonucleasa.
Por tanto, en algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cubierta en 5'. Una cubierta en 5' se añade normalmente de la siguiente manera: en primer lugar, una fosfatasa terminal de ARN elimina uno de los grupos fosfato terminales del nucleótido 5', dejando dos fosfatos terminales; a continuación, se añade guanosina trifosfato (GTP) a los fosfatos terminales mediante una guanilil transferasa, produciendo un enlace 5'5'5 trifosfato; y el 7-nitrógeno de la guanina se metila mediante una metiltransferasa. Los ejemplos de estructuras de cubierta incluyen, pero no se limitan a, m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A y G(5')ppp(5')G.
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(A) en 3'. Una cola de poli-A en el extremo 3' del ARNm incluye normalmente alrededor de 10 a 300 nucleótidos de adenosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 200 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de adenosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de adenosina, o alrededor de 20 a 60 nucleótidos de adenosina). En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(C) en 3'. Una cola de poli-C adecuada en el extremo 3' del ARNm incluye normalmente alrededor de 10 a 200 nucleótidos de citosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de citosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 60 nucleótidos de citosina o alrededor de 10 a 40 nucleótidos de citosina). La cola de poli-C puede añadirse a la cola de poli-A, o puede sustituir la cola de poli-A.
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una región no traducida en 5' y/o 3'. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' incluye uno o más elementos que afectan la estabilidad o traducción de un ARNm, por ejemplo un elemento reactivo a hierro. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' puede tener entre aproximadamente 50 y 500 nucleótidos de longitud.
En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' incluye una o más de una señal de poliadenilación, un sitio de unión para proteínas que afectan la estabilidad de la ubicación de un ARNm en una célula, o uno o más sitios de unión para los miARN. En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' puede tener una longitud de entre 50 y 500 nucleótidos o más.
Estructura de cubierta
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cubierta en 5'. Una cubierta en 5' se añade normalmente de la siguiente manera: en primer lugar, una fosfatasa terminal de ARN elimina uno de los grupos fosfato terminales del nucleótido 5', dejando dos fosfatos terminales; a continuación, se añade guanosina trifosfato (GTP) a los fosfatos terminales mediante una guanilil transferasa, produciendo un enlace 5'5'5 trifosfato; y el 7-nitrógeno de la guanina se metila mediante una metiltransferasa. Los ejemplos de estructuras de cubierta incluyen, pero no se limitan a, m7G(5')ppp (5'(A,G(5')ppp(5')A y G(5')ppp(5')G.
Las estructuras de cubierta naturales comprenden una 7-metil guanosina que se une mediante un enlace trifosfato al extremo 5' del primer nucleótido transcrito, lo que da lugar a una cubierta de dinucleótido de m7G(5')ppp(5')N, donde N es cualquier nucleósido.In vivo,la cubierta se añade enzimáticamente. La cubierta se añade en el núcleo, y es catalizada por la enzima guanilil transferasa. La adición de la cubierta al extremo 5' terminal del ARN se produce inmediatamente después del inicio de la transcripción. El nucleósido terminal es típicamente una guanosina, y está en orientación inversa a todos los demás nucleótidos, es decir, G(5')ppp(5')GpNpNp.
Una cubierta común para el ARNm producido mediante la transcripciónin vitroes m7G(5')ppp(5')G, que se ha usado como la cubierta de dinucleótidos en la transcripción con T7 o SP6 ARN polimerasain vitropara obtener ARN que tienen una estructura de cubierta en sus extremos 5'. El método predominante para la síntesisin vitrode ARNm caPPEd emplea un dinucleótido preformado de la forma m7G(5')ppp(5')G ("m7GpppG") como iniciador de la transcripción.
Hasta la fecha, una forma habitual de una cubierta dinucleotídica sintética usada en experimentos de traducciónin vitroes el análogo de cubierta antirreverso ("ARCA") o ARCA modificado, que es generalmente un análogo de cubierta modificado en el que el grupo OH 2' o 3' se sustituye por -OCH<3>.
Los análogos de cubierta adicionales incluyen, entre otros, estructuras químicas seleccionadas a partir del grupo que consiste en m7GpppG, m7GpppA, m7GpppC; análogos de cubierta no metilados (por ejemplo, GpppG); análogo de cubierta dimetilado (por ejemplo, m27GpppG), análogo de cubierta trimetilado (por ejemplo, m2-2-7GpppG), análogos de cubierta simétricos dimetilados (por ejemplo, m7Gpppm7G) o análogos de cubierta antirreverso (por ejemplo, ARCA; m7,2OmeGpppG, m72dGpppG, m7’3OmeGpppG, m73dGpppG y sus derivados de tetrafosfato) (véase, por ejemplo, Jemielity, J. et al., "Novel 'anti-reverse' cap analogs with superior Translational Properties", RNA , 9: 1108-1122 (2003)).
En algunas realizaciones, una cubierta adecuada es un 7-metil guanilato ("m7G") enlazado mediante un puente trifosfato al extremo 5' del primer nucleótido transcrito, lo que da lugar a m7G(5')ppp(5')N, donde N es cualquier nucleósido. Una realización preferida de una cubierta m7G usada en realizaciones de la invención es m7G(5')ppp(5')G.
En algunas realizaciones, la cubierta es una estructura Cap0. Las estructuras Cap0 carecen de un resto 2'-O-metilo de la ribosa unido a las bases 1 y 2. En algunas realizaciones, la cubierta es una estructura Cap1. Las estructuras Cap1 tienen un resto 2'-O-metilo en la base 2. En algunas realizaciones, la cubierta es una estructura Cap2. Las estructuras Cap2 tienen un resto 2'-O-metilo unido a las bases 2 y 3.
Se conoce en la técnica una variedad de cubiertas m7G, muchas de las cuales están disponibles comercialmente. Estas incluyen m7GpppG descrita anteriormente, además de los análogos de cubierta ARCA 3'-OCH3 y 2'-OCH3 (Jemielity, J. et al., RNA, 9: 1108-1122 (2003)). Análogos de cubierta adicionales para uso en las realizaciones de la invención incluyen los análogos de dinucleósido tetrafosfato N7 bencilado (descritos en Grudzien, E. et al., RNA, 10: 1479-1487 (2004)), análogos de cubierta de fosforotioato (descritos en Grudzien-Nogalska, E., et al., RNA, 13: 1745 1755 (2007)), y análogos de cubierta (incluidos análogos de cubierta biotinilados) descritos en las patentes de EE. UU. n.28.093.367 y 8.304.529.
Estructura de cola
Normalmente, la presencia de una "cola" sirve para proteger el ARNm de la degradación por exonucleasas. Se cree que la cola de poli A estabiliza los mensajeros naturales y el ARN codificante sintético. Por lo tanto, en ciertas realizaciones se puede añadir una cola larga de poli A a una molécula de ARNm, haciendo así que el ARN sea más estable. Las colas de poli A se pueden añadir usando una variedad de técnicas reconocidas en la técnica. Por ejemplo, se pueden añadir colas largas de poli A a ARN sintético o transcritoin vitrousando poli A polimerasa (Yokoe, et al. Nature Biotechnology. 1996; 14: 1252-1256). Un vector de transcripción también puede codificar colas largas de poli A. Además, se pueden añadir colas de poli A mediante transcripción directamente a partir de productos de PCR. Poli A también puede ligarse al extremo 3' de un ARN sentido con ARN ligasa (véase, por ejemplo, Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2.a ed., ed. por Sambrook, Fritsch y Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: edición de 1991)).
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(A) en 3'. Normalmente, la longitud de la cola de poli A puede ser de al menos alrededor de 10, 50, 100, 200, 300, 400 y al menos 500 nucleótidos. En algunas realizaciones, una cola de poli-A en el extremo 3' del ARNm incluye típicamente alrededor de 10 a 300 nucleótidos de adenosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 200 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de adenosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de adenosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de adenosina, o alrededor de 20 a 60 nucleótidos de adenosina). En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una estructura de cola de poli(C) en 3'. Una cola de poli-C adecuada en el extremo 3' del ARNm incluye normalmente alrededor de 10 a 200 nucleótidos de citosina (por ejemplo, alrededor de 10 a 150 nucleótidos de citosina, alrededor de 10 a 100 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 70 nucleótidos de citosina, alrededor de 20 a 60 nucleótidos de citosina o alrededor de 10 a 40 nucleótidos de citosina). La cola de poli-C puede añadirse a la cola de poli-A, o puede sustituir la cola de poli-A.
En algunas realizaciones, la longitud de la cola de poli A o poli C se ajusta para controlar la estabilidad de una molécula de ARNm codificante modificada de la invención, y por tanto la transcripción de la proteína. Por ejemplo, dado que la longitud de la cola de poli A puede influir en la vida media de una molécula de ARNm codificante, la longitud de la cola de poli A puede ajustarse para modificar el nivel de resistencia del ARNm a nucleasas y controlar de ese modo el transcurso del tiempo de la expresión polinucleotídica y/o la producción de polipéptidos en una célula diana.
Región no traducida en 5' y 3'
En algunas realizaciones, los ARNm incluyen una región no traducida en 5' y/o 3'. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' incluye uno o más elementos que afectan la estabilidad o traducción de un ARNm, por ejemplo un elemento reactivo a hierro. En algunas realizaciones, una región no traducida en 5' puede tener entre aproximadamente 50 y 500 nucleótidos de longitud.
En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' incluye una o más de una señal de poliadenilación, un sitio de unión para proteínas que afectan la estabilidad de la ubicación de un ARNm en una célula, o uno o más sitios de unión para los miARN. En algunas realizaciones, una región no traducida en 3' puede tener una longitud de entre 50 y 500 nucleótidos o más.
Se pueden derivar secuencias de 3' y/o 5' UTR ejemplares a partir de moléculas de ARNm que son estables (por ejemplo, globina, actina, GAPDH, tubulina, histona, o enzimas del ciclo del ácido cítrico) para aumentar la estabilidad de la molécula de ARNm codificante. Por ejemplo, una secuencia 5' UTR puede incluir una secuencia parcial de un gen 1 temprano inmediato (IE1) de CMV, o un fragmento del mismo para mejorar la resistencia a nucleasas y/o mejorar la vida media del polinucleótido. También se contempla la inclusión de una secuencia que codifica la hormona del crecimiento humano (hGH), o un fragmento de la misma, en el extremo 3' o región no traducida del polinucleótido (por ejemplo, ARNm) para estabilizar aún más el polinucleótido. Generalmente, estas modificaciones mejoran la estabilidad y/o las propiedades farmacocinéticas (por ejemplo, vida media) del polinucleótido con respecto a sus homólogos no modificados, e incluyen, por ejemplo, modificaciones realizadas para mejorar la resistencia de tales polinucleótidos a la digestión con nucleasasin vivo.
Formulaciones farmacéuticas de lípidos catiónicos y ácidos nucleicos
En ciertas realizaciones, los compuestos descritos en el presente documento (por ejemplo, un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (la), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto 3)), así como las composiciones farmacéuticas y liposomales que comprenden dichos lípidos, pueden usarse en formulaciones para facilitar la administración de materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más polinucleótidos, tales como ARNm), y la posterior transfección de una o más células diana. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los lípidos catiónicos descritos en el presente documento (y composiciones tales como composiciones liposomales que comprenden dichos lípidos) se caracterizan por dar como resultado una o más de endocitosis mediada por receptores, endocitosis mediada por clatrina y mediada por caveolas, fagocitosis y macropinocitosis, fusogenicidad, alteración endosómica o lisosomal y/o propiedades liberables que proporcionan a tales compuestos ventajas con respecto a otros lípidos clasificados de manera similar.
Según la presente invención, un ácido nucleico, por ejemplo, ARNm que codifica una proteína (por ejemplo, una longitud completa, fragmento o porción de una proteína) como se describe en el presente documento puede administrarse a través de un vehículo de administración que comprende un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo, un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto 3)),
Como se usa en el presente documento, los términos "vehículo de administración", "vehículo de transferencia", "nanopartícula" o equivalente gramatical se usan indistintamente.
Por ejemplo, la presente invención proporciona una composición (por ejemplo una composición farmacéutica) que comprende un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) y uno o más polinucleótidos. Una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) puede comprender además uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol y/o uno o más lípidos modificados con PEG.
En ciertas realizaciones, una composición muestra una capacidad potenciada (por ejemplo, aumentada) para transfectar una o más células diana. Por consiguiente, también se proporcionan aquí métodos para transfectar una o más células diana. Tales métodos generalmente comprenden la etapa de poner en contacto una o más células diana con los lípidos catiónicos y/o composiciones farmacéuticas divulgados en el presente documento (por ejemplo, una formulación liposomal que comprende un compuesto divulgado en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el líquido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3) que encapsula uno o más polinucleótidos) de manera que la una o más células diana se transfectan con los materiales encapsulados en ellas (por ejemplo uno o más polinucleótidos). Como se utiliza en el presente documento, los términos "transfectar" o "transfección" se refieren a la introducción intracelular de uno o más materiales encapsulados (por ejemplo ácidos nucleicos y/o polinucleótidos) en una célula, o preferiblemente en una célula diana. El polinucleótido introducido puede mantenerse estable o transitoriamente en la célula diana. El término "eficacia de transfección" se refiere a la cantidad relativa de dicho material encapsulado (por ejemplo polinucleótidos) absorbida, introducida y/o expresada por la célula diana sometida a transfección. En la práctica, la eficiencia de la transfección se puede estimar mediante la cantidad de un producto polinucleotídico informador producido por las células diana después de la transfección. En ciertas realizaciones, los compuestos y composiciones farmacéuticas descritos en el presente documento demuestran altas eficiencias de transfección, mejorando así la probabilidad de que las dosis apropiadas de los materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más polinucleótidos) lleguen al lugar de la patología y se expresen posteriormente, al tiempo que se minimizan los posibles efectos adversos sistémicos o la toxicidad asociada con el compuesto o su contenido encapsulado.
Tras la transfección de una o más células diana por, por ejemplo, los polinucleótidos encapsulados en la una o más nanopartículas lipídicas que comprenden las composiciones farmacéuticas o liposomales divulgadas en el presente documento, puede estimularse preferentemente la producción del producto (por ejemplo un polipéptido o proteína) codificado por dicho polinucleótido y se potencia la capacidad de dichas células diana para expresar el polinucleótido y producir, por ejemplo, un polipéptido o proteína de interés. Por ejemplo, la transfección de una célula diana mediante uno o más compuestos o composiciones farmacéuticas que encapsulan ARNm potenciará (es decir, aumentará) la producción de la proteína o enzima codificada por tal ARNm.
Además, los vehículos de administración descritos en el presente documento (por ejemplo, los vehículos de administración liposomal) pueden prepararse para distribuirse preferentemente a otros tejidos, células u órganos diana, tales como el corazón, los pulmones, los riñones, el bazo. En realizaciones, las nanopartículas lipídicas de la presente invención se pueden preparar para lograr una administración mejorada a las células y tejidos diana. Por ejemplo, los polinucleótidos (por ejemplo, ARNm) encapsulados en uno o más de los compuestos o composiciones farmacéuticas y liposomales descritos aquí pueden administrarse a y/o transfectarse en células o tejidos específicos. En algunas realizaciones, los polinucleótidos encapsulados (por ejemplo, ARNm) son capaces de ser expresados y de producir productos polipeptídicos funcionales (y en algunos casos excretados) por la célula diana, confiriendo así una propiedad beneficiosa a, por ejemplo, las células o tejidos diana. Tales polinucleótidos encapsulados (por ejemplo, ARNm) pueden codificar, por ejemplo, una hormona, enzima, receptor, polipéptido, péptido u otra proteína de interés.
Vehículos de administración liposomales
En algunas realizaciones, una composición es un vehículo de administración adecuado. En realizaciones, una composición es un vehículo de administración liposomal, por ejemplo una nanopartícula lipídica.
Las expresiones "vehículo de administración liposomal" y "composición liposomal" se usan indistintamente.
El enriquecimiento de composiciones liposomales con uno o más de los lípidos catiónicos divulgados en el presente documento puede usarse como un medio para mejorar (por ejemplo reducir) la toxicidad o conferir de otro modo una o más propiedades deseadas a dicha composición liposomal enriquecida (por ejemplo mejorar la administración de los polinucleótidos encapsulados a una o más células diana y/o reducir la toxicidadin vivode una composición liposomal). Por consiguiente, también se contemplan composiciones farmacéuticas, y en particular composiciones liposomales, que comprenden uno o más de los lípidos catiónicos descritos aquí.
Así, en ciertas realizaciones, los compuestos divulgados en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el líquido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) son lípidos catiónicos que se pueden utilizar como componente de una composición liposomal para facilitar o potenciar la administración y la liberación de materiales encapsulados (por ejemplo, uno o más agentes terapéuticos) a una o más células diana (por ejemplo mediante permeación o fusión con las membranas lipídicas de dichas células diana).
Como se usa en el presente documento, los vehículos de administración liposomal, por ejemplo las nanopartículas lipídicas, se caracterizan normalmente por ser vesículas microscópicas que tienen un espacio acuoso interior secuestrado de un medio exterior por una membrana de una o más bicapas. Las membranas bicapa de los liposomas suelen estar formadas por moléculas anfifílicas, tales como lípidos de origen sintético o natural que comprenden dominios hidrófilos e hidrófobos espacialmente separados (Lasic, Trends Biotechnol., 16: 307-321, 1998). Las membranas bicapa de los liposomas también pueden estar formadas por polímeros anfífilos y tensioactivos (por ejemplo polimerosomas, niosomas, etc.). En el contexto de la presente invención, un vehículo de administración liposomal normalmente sirve para transportar un ARNm deseado a una célula o tejido diana.
En ciertas realizaciones, dichas composiciones (por ejemplo composiciones liposomales) se cargan con o encapsulan de otro modo materiales, como, por ejemplo, uno o más polinucleótidos biológicamente activos (por ejemplo, ARNm).
En realizaciones, una composición (por ejemplo, una composición farmacéutica) comprende un ARNm que codifica una proteína, encapsulado dentro de un liposoma. En realizaciones, un liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol y uno o más lípidos modificados con PEG, y al menos un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el líquido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica una proteína (por ejemplo cualquier proteína descrita en el presente documento). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR). En realizaciones, una composición comprende un ARNm que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC).
En realizaciones, una composición (por ejemplo una composición farmacéutica) comprende un ácido nucleico encapsulado dentro de un liposoma, en el que el liposoma comprende cualquier lípido catiónico (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) como se describe en el presente documento.
En realizaciones, un ácido nucleico es un ARNm que codifica un péptido o polipéptido. En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración o tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar (por ejemplo un ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR)). En realizaciones, un ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración o tratamiento del hígado de un sujeto o una célula hepática (por ejemplo un ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC)). En el presente documento aún se describen otros ARNm ejemplares.
En realizaciones, un vehículo de administración liposomal (por ejemplo una nanopartícula lipídica) puede tener una carga positiva neta.
En realizaciones, un vehículo de administración liposomal (por ejemplo una naopartícula lipídica) puede tener una carga negativa neta.
En realizaciones, un vehículo de administración liposomal (por ejemplo una nanopartícula lipídica) puede tener una carga neutra neta.
En realizaciones, una nanopartícula lipídica que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo ARNm que codifica un péptido o polipéptido) comprende uno o más lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)).
Por ejemplo, la cantidad de un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) en una composición se puede describir como un porcentaje ("% en peso") del peso seco combinado de todos los lípidos de una composición (por ejemplo el peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición liposomal).
En realizaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento, un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (la), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en peso a alrededor de 30 % en peso (por ejemplo alrededor de 0,5 % en peso a alrededor de 20 % en peso) del peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición (por ejemplo una composición liposomal).
En realizaciones, un lípido catiónico como el descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es alrededor de 1 % en peso a alrededor de 30 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 20 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 15 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 10 % en peso, o alrededor de 5 % en peso a alrededor de 25 % en peso del peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición (por ejemplo una composición liposomal). En realizaciones, un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (la), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en peso a alrededor de 5 % en peso, alrededor de 1 % en peso a alrededor de 10 % en peso, alrededor de 5 % en peso a alrededor de 20 % en peso, o alrededor de 10 % en peso a alrededor de 20 % en peso de las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en una composición como un vehículo de administración liposomal.
En realizaciones, la cantidad de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (la), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es al menos alrededor de 5 % en peso, alrededor de 10 % en peso, alrededor de 15 % en peso, alrededor de 20 % en peso, alrededor de 25 % en peso, alrededor de 30 % en peso, alrededor de 35 % en peso, alrededor de 40 % en peso, alrededor de 45 % en peso, alrededor de 50 % en peso, alrededor de 55 % en peso, alrededor de 60 % en peso, alrededor de 65 % en peso, alrededor de 70 % en peso, alrededor de 75 % en peso, alrededor de 80 % en peso, alrededor de 85 % en peso, alrededor de 90 % en peso, alrededor de 95 % en peso, alrededor de 96 % en peso, alrededor de 97 % en peso, alrededor de 98 % en peso, o alrededor de 99 % en peso del peso seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo, una composición liposomal).
En realizaciones, la cantidad de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad no mayor que alrededor de 5% en peso, alrededor de 10% en peso, alrededor de 15% en peso, alrededor de 20% en peso, alrededor de 25% en peso, alrededor de 30% en peso, alrededor de 35% en peso, alrededor de 40% en peso, alrededor de 45% en peso, alrededor de 50 % en peso, alrededor de 55 % en peso, alrededor de 60 % en peso, alrededor de 65 % en peso, alrededor de 70 % en peso, alrededor de 75 % en peso, alrededor de 80 % en peso, alrededor de 85 % en peso, alrededor de 90 % en peso, alrededor de 95 % en peso, alrededor de 96% en peso, alrededor de 97% en peso, alrededor de 98% en peso, o alrededor de 99% en peso del peso seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo una composición liposomal).
En realizaciones, una composición (por ejemplo un vehículo de administración liposomal como una nanopartícula lipídica) comprende alrededor de 0,1 % en peso a alrededor de 20 % en peso (por ejemplo alrededor de 0,1 % en peso a alrededor de 15 % en peso) de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)). En realizaciones, un vehículo de administración (por ejemplo un vehículo de administración liposomal como una nanopartícula lipídica) comprende alrededor de 0,5 % en peso, alrededor de 1 % en peso, alrededor de 3 % en peso, alrededor de 5 % en peso, o alrededor de 10 % en peso de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)). En realizaciones, un vehículo de administración (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal como una nanopartícula lipídica) comprende hasta alrededor de 0,5 % en peso, alrededor de 1 % en peso, alrededor de 3 % en peso, alrededor de 5 % en peso, alrededor de 10 % en peso, alrededor de 15 % en peso, o alrededor de 20 % en peso de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)). En realizaciones, el porcentaje da como resultado un efecto beneficioso mejorado (por ejemplo administración mejorada a tejidos diana como el hígado o el pulmón).
La cantidad de un lípido catiónico como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) en una composición también se puede describir como un porcentaje ("% en moles") de las cantidades molares combinadas de lípidos totales de una composición (por ejemplo las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en un vehículo de administración liposomal).
En realizaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en moles a alrededor de 30 % en moles (por ejemplo, alrededor de 0,5 % en moles a alrededor de 20 % en moles) de las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en una composición tal como un vehículo de administración liposomal.
En realizaciones, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es alrededor de 0,5 % en moles a alrededor de 5 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 10 % en moles, alrededor de 5 % en moles a alrededor de 20 % en moles, o alrededor de 10 % en moles a alrededor de 20 % en moles de las cantidades molares combinadas de todos los lípidos presentes en una composición, tal como vehículo de administración liposomal. En realizaciones, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es alrededor de
1 % en moles a alrededor de 30 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 20 % en moles, alrededor de
1 % en moles a alrededor de 15 % en moles, alrededor de 1 % en moles a alrededor de 10 % en moles, o alrededor de 5 % en moles a alrededor de 25 % en moles del peso seco combinado de todos los lípidos presentes en una composición, tal como un vehículo de administración liposomal.
En ciertas realizaciones, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) puede comprender alrededor de 0,1 % en moles a alrededor de 50 % en moles, o del 0,5 % en moles a alrededor de 50 % en moles, o alrededor de 1 % en moles a alrededor de 25 % en moles, o de alrededor de 1 % en moles a alrededor de 10 % en moles de la cantidad total de lípidos en una composición (por ejemplo, un vehículo de administración liposomal).
En ciertas realizaciones, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) puede comprender más de alrededor de 0,1 % en moles, o más de alrededor de 0,5 % en moles, o más de alrededor de 1 % en moles, o más de alrededor de 5 % en moles de la cantidad total de lípidos en la nanopartícula lipídica.
En ciertas realizaciones, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) puede comprender menos de alrededor de 25 % en moles, o menos de alrededor de 10 % en moles, o menos de alrededor de 5 % en moles, o menos de alrededor de 1 % en moles de la cantidad total de lípidos en una composición (por ejemplo un vehículo de administración liposomal).
En realizaciones, la cantidad de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es al menos alrededor de 5 % en moles, alrededor de 10 % en moles, alrededor de 15 % en moles, alrededor de 20 % en moles, alrededor de 25 % en moles, alrededor de 30 % en moles, alrededor de 35 % en moles, alrededor de 40 % en moles, alrededor de 45 % en moles, alrededor de 50 % en moles, alrededor de 55 % en moles, alrededor de 60 % en moles, alrededor de 65 % en moles, alrededor de 70 % en moles, alrededor de 75 % en moles, alrededor de 80 % en moles, alrededor de 85 % en moles, alrededor de 90 % en moles, alrededor de 95 % en moles, alrededor de 96 % en moles, alrededor de 97 % en moles, alrededor de 98 % en moles, o alrededor de 99 % en moles del peso seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo una composición liposomal).
En realizaciones, la cantidad de un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) está presente en una cantidad que es no mayor que alrededor de 5 % en moles, alrededor de 10 % en moles, alrededor de 15 % en moles, alrededor de 20 % en moles, alrededor de 25 % en moles, alrededor de 30 % en moles, alrededor de 35 % en moles, alrededor de 40 % en moles, alrededor de 45 % en moles, alrededor de 50 % en moles, alrededor de 55 % en moles, alrededor de 60 % en moles, alrededor de 65 % en moles, alrededor de 70 % en moles, alrededor de 75 % en moles, alrededor de 80 % en moles, alrededor de 85 % en moles, alrededor de 90 % en moles, alrededor de 95 % en moles, alrededor de 96 % en moles, alrededor de 97 % en moles, alrededor de 98 % en moles, o alrededor de 99 % en moles del peso seco combinado de lípidos totales en una composición (por ejemplo una composición liposomal).
En realizaciones, el porcentaje da como resultado un efecto beneficioso mejorado (por ejemplo administración mejorada a tejidos diana tales como el hígado o el pulmón).
En realizaciones, una composición comprende además uno más lípidos (por ejemplo uno más lípidos seleccionados a partir del grupo que consiste en uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol, y uno o más lípidos modificados con PEG).
En ciertas realizaciones, tales composiciones farmacéuticas (por ejemplo liposomales) comprenden uno o más de un lípido modificado con PEG, un lípido no catiónico, y un lípido de colesterol. En realizaciones, tales composiciones farmacéuticas (por ejemplo liposomales) comprenden: uno o más lípidos modificados con PEG; uno o más lípidos no catiónicos; y uno o más lípidos de colesterol. En realizaciones, dichas composiciones farmacéuticas (por ejemplo liposomales) comprenden: uno o más lípidos modificados con PEG; uno o más lípidos no catiónicos; y uno o más lípidos de colesterol.
En realizaciones, una composición (por ejemplo nanopartícula lipídica) que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo ARNm que codifica un péptido o polipéptido) comprende uno o más lípidos catiónicos como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) y uno o más lípidos seleccionados a partir del grupo que consiste en un lípido catiónico, un lípido no catiónico, y un lípido PEGilado.
En realizaciones, una composición (por ejemplo, nanopartícula lipídica) que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo ARNm que codifica un péptido o polipéptido) comprende uno o más lípidos catiónicos como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)); uno o más lípidos seleccionados a partir del grupo que consiste en un lípido catiónico, un lípido no catiónico, y un lípido PEGilado; y comprende además un lípido a base de colesterol.
En realizaciones, una nanopartícula lipídica que encapsula un ácido nucleico (por ejemplo ARNm que codifica un péptido o polipéptido) comprende uno o más lípidos catiónicos como se describe en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)), así como uno o más lípidos seleccionados a partir del grupo que consiste en un lípido catiónico, un lípido no catiónico, un lípido PEGilado, y un lípido a base de colesterol.
Según diversas realizaciones, la selección de lípidos catiónicos, lípidos no catiónicos y/o lípidos modificados con PEG comprendidos por la nanopartícula lipídica, así como la proporción molar relativa de tales lípidos entre sí, se basa en las características del (de los) lípido(s) seleccionado(s), la naturaleza de las células diana previstas, las características del ARNm que se va a administrar. Consideraciones adicionales incluyen, por ejemplo, la saturación de la cadena alquílica, así como el tamaño, la carga, el pH, el pKa, la fusogenicidad y la toxicidad del (de los) lípido(s) seleccionado(s). Por tanto, las relaciones molares pueden ajustarse en consecuencia.
Más lípidos catiónicos
Además de cualquiera de los lípidos catiónicos descritos en este documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)), una composición puede comprender uno o más lípidos catiónicos adicionales.
En algunas realizaciones, los liposomas pueden comprender uno o más lípidos catiónicos adicionales. Como se utiliza en el presente documento, la expresión "lípido catiónico" se refiere a cualquiera de varias especies de lípidos que tienen una carga positiva neta a un pH seleccionado, tal como un pH fisiológico. En la bibliografía se han descrito varios lípidos catiónicos, muchos de los cuales están disponibles comercialmente.
Los lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2010/144740. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, 4-(dimetilamino)butanoato de (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo, que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos ionizables como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2013/149140. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de una de las siguientes fórmulas:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R<1>y R<2>se seleccionan cada uno independientemente a partir del grupo que consiste en hidrógeno, un alquilo C<1>-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado, y un acilo C<6>-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado; en donde Li y L<2>se seleccionan cada uno independientemente a partir del grupo que consiste en hidrógeno, un alquilo C<1>-C<30>opcionalmente sustituido, un alquenilo C<1>-C<30>variablemente insaturado opcionalmente sustituido, y un alquinilo C<1>-C<30>opcionalmente sustituido; en donde m y o se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en cero y cualquier número entero positivo (por ejemplo donde m es tres); y en donde n es cero o cualquier número entero positivo (por ejemplo, donde n es uno). En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-(9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il) tetracosa-15,18-dien-1-amina ("HGT5000"), que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico (15Z, 18Z)-N,N-dimetil-6-(9Z,12Z)-octadeca-9,12- dien-1-il)tetracosa-4,15,18-trien-1-amina ("HGT500Í'), que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico y (15Z,18Z)-N,N-dimetil-6-((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1-il)tetracosa-5,15,18-trien-1-amina ("HGT5002"), que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos descritos como lipidoides de aminoalcoholes en la Publicación de Patente Internacional WO 2010/053572. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2016/118725. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2016/118724 En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adecuados para uso en las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la fórmula de 14,25-ditridecil-15,18,21,24-tetraaza-octatriacontano, y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en las Publicaciones de Patente Internacional WO 2013/063468 y WO 2016/205691. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o sus sales farmacéuticamente aceptables, en donde cada caso de RL es independientemente alquenilo de C<6>-C<40>opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2015/184256. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde cada X es independientemente O o S; cada Y es independientemente O o S; cada m es independientemente 0 a 20; cada n es independientemente 1 a 6; cada R<a>es independientemente hidrógeno, alquilo C1-50 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-50 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-50 opcionalmente sustituido, carbociclilo C3-10 opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3-14 miembros opcionalmente sustituido, arilo C6-14 opcionalmente sustituido, heteroarilo de 5-14 miembros opcionalmente sustituido, o halógeno; y cada R<b>es independientemente hidrógeno, alquilo C1-50 opcionalmente sustituido, alquenilo C2-50 opcionalmente sustituido, alquinilo C2-50 opcionalmente sustituido, carbociclilo C3-10 opcionalmente sustituido, heterociclilo de 3-14 miembros opcionalmente sustituido, arilo C6-14 opcionalmente sustituido, heteroarilo de 5 a 14 miembros opcionalmente sustituido, o halógeno. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "Diana 23", que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2016/004202. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en J. McClellan, M. C. King, Cell 2010, 141, 210-217 y en Whitehead et al., Nature Communications (2014) 5:4277. En ciertas realizaciones, los lípidos catiónicos de las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura del compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2015/199952. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/004143.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/075531. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde uno de L o L es -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O)x, -S-S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa-, NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)NRa-, o -NRaC(=O)O-; y el otro de L1 o L2 es -O(C=O)-, -(C=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S(O) x, -S-S-, -C(=O)S-, SC(=O)-, -NRaC(=O)-, -C(=O)NRa, NRaC(=O)NRa-, - OC(=O)NRa- o -NRaC(=O)O- o un enlace directo; G1 y G2 son cada uno independientemente alquileno C<1>-C<12>o alquenileno C<1>-C<12>no sustituido; G3 es alquileno C<1>-C<24>, alquenileno C<1>-C<24>, cicloalquileno C<3>-C<8>, cicloalquenileno C<3>-C<8>; Ra es H o alquilo C<1>-C<12>; R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<24>o alquenilo C<6>-C<24>; R3 es H, OR5, CN, - C(=O)OR4, -OC(=O)R4 o -NR5 C(=O)R4; R4 es alquilo C<1>-C<12>; R5 es H o alquilo Ci-Ca; y x es 0, 1 o 2.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/117528. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene la estructura del compuesto:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/049245. En algunas realizaciones, los lípidos catiónicos de las composiciones y métodos de la presente invención incluyen un compuesto de una de las siguientes fórmulas:
y sus sales farmacéuticamente aceptables. Para cualquiera de estas cuatro fórmulas, R<4>se selecciona independientemente a partir de -(CH<2>)nQ y -(CH<2>)nCHQR; Q se selecciona a partir del grupo que consiste en -OR, -OH, -O(CH<2>)nN(R)<2>, -OC(O)R, -CX<3>, -CN, -N(R)C(O)R, - N(H)C(O)R, -N(R)S(O)<2>R, -N(H)S(O)<2>R, -N(R)C(O)N(R)<2>, -N(H)C(O)N(R)<2>, - N(H)C(O)N(H)(R), -N(R)C(S)N(R)<2>, -N(H)C(S)N(R)<2>, -N(H)C(S)N(H)(R) y un heterociclo; R se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo C<1-3>, alquenilo C<2-3>y H; y n es 1, 2 o 3.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen los lípidos catiónicos como se describen en la Publicación de Patente Internacional WO 2017/173054 y WO 2015/095340.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos a base de colesterol. En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen éster de imidazol colesterol o "ICE", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Otros lípidos catiónicos adicionales adecuados para uso en las composiciones incluyen lípidos catiónicos disociables como se describe en la Publicación de Patente Internacional WO 2012/170889. En algunas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico de la siguiente fórmula:
en donde R<1>se selecciona a partir del grupo que consiste en imidazol, guanidinio, amino, imina, enamina, un alquilamino opcionalmente sustituido (por ejemplo un alquilamino como dimetilamino) y piridilo; en donde R<2>se selecciona a partir del grupo que consiste en una de las dos fórmulas siguientes:
y en donde cada uno de R<3>y R<4>se selecciona independientemente a partir del grupo que consiste en un alquilo C6-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado, y un acilo C<6>-C<20>opcionalmente sustituido, variablemente saturado o insaturado; y en as que n es cero o cualquier número entero positivo (por ejemplo uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, dieciséis, diecisiete, dieciocho, diecinueve, veinte o más).
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4001", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4002", que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4003", que tiene una estructura de compuesto de:
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4004", que tiene una estructura de compuesto de:
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
En ciertas realizaciones, las composiciones incluyen un lípido catiónico, "HGT4005", que tiene una estructura de compuesto de:
En algunas realizaciones, las composiciones incluyen el lípido catiónico cloruro de N-[1-(2,3-dioleiloxi)propil]-N,N,N-trimetilamonio ("DOTMA"). Feigner et al. (Proc. Nat'l Acad. Sci. 84, 7413 (1987); patente de EE. UU. n° 4.897.355. DOTMA se puede formular solo o se puede combinar con un lípido neutro (por ejemplo, dioleoilfosfatidil-etanolamina o "DOPE"), o incluso otros lípidos catiónicos o no catiónicos, en un vehículo de transferencia liposomal o una nanopartícula lipídica, y tales liposomas se pueden usar para mejorar la administración de ácidos nucleicos a células diana. Otros lípidos catiónicos adecuados para las composiciones incluyen, por ejemplo, 5carboxiespermilglicinadioctadecilamida ("DOGS"); 2,3-dioleiloxi-N-[2(espermina-carboxamido)etil]-N,N-dimetil-1-propanaminio ("DOSPA") (Behr et al. Proc. Nat.'l Acad. Sci. 86, 6982 (1989), patente de EE. UU. n.° 5.171.678; Patente de EE. UU. N° 5.334.761); 1,2-dioleoil-3-dimetilamonio-propano ("DODAP"); 1,2-dioleoil-3-trimetilamonio-propano ("DOTAP").
Lípidos catiónicos ejemplares adicionales adecuados para las composiciones también incluyen: 1,2-diesteariloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DSDMA"); 1,2-dioleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DODMA"); 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DLinDMA"); 1,2-dilinoleniloxi-N,N-dimetil-3-aminopropano ("DLenDMA"); cloruro de N-dioleil-N,N-dimetilamonio ("DODAC"); bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilaminonio ("DDAB"); bromuro de N-(1,2-dimiristiloxiprop-3-il)-N,N-dimetil-N-hidroxietilamonio ("DMRIE"); 3-dimetilamino-2-(colest-5-en-3-beta-oxibutan-4-oxi)-1 -(cis,cis-9,12-octadecadienoxi)propano ("CLinDMA"); 2-[5'-(colest-5-en-3-beta-oxi)-3'-oxapentoxi)-3-dimetilI-1 -1 -(cis,cis-9',1-2'-octadecadienoxi)propano ("CpLinDMA"); N,N-dimetil-3,4-dioleiloxibencilamina ("DMOBA"); 1,2-N,N'-dioleilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DOcarbDAP"); 2,3-Dilinoleoiloxi-N,N-dimetilpropilamina ("DLinDAP"); 1,2-N,N'-Dilinoleilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DLincarbDAP"); 1,2-Dilinoleoilcarbamil-3-dimetilaminopropano ("DLinCDAP"); 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano ("DLin-K-DMA"); 2-((8-[(3P)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]propano-1 -amina ("Octil-CUnDMA"); (2R)-2-((8-[(3beta)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,N-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9, 12-dien-1 -iloxi]propan-1 -amina ("Octil-CLinDMA (2R)"); (2S)-2-((8-[(3P)-colest-5-en-3-iloxi]octil)oxi)-N,fsl-dimetil-3-[(9Z, 12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -iloxi]propan-1-amina ("Octil-CLinDMA (2S)"); 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioxolano ("DLin-K-XTC2-DMA"); y 2-(2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dien-1 -il)-1,3-dioxolan-4-il)-N,N-dimetiletanamina ("DLin-KC2-DMA") (véase el documento WO 2010/042877; Semple et al., Nature Biotech. 28: 172-176 (2010)). (Heyes, J., et al., J Controlled Release 107: 276-287 (2005); Morrissey, DV., et al., Nat. Biotechnol. 23(8): 1003-1007 (2005); Publicación de Patente Internacional WO 2005/121348). En algunas realizaciones, uno o más de los lípidos catiónicos comprenden al menos una fracción de imidazol, dialquilamino, o guanidinio.
En algunas realizaciones, uno o más lípidos catiónicos adecuados para las composiciones incluyen 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminoetil-[1,3]-dioxolano ("XTC"); (3aR,5s,6aS)-N,N-dimetil-2,2-di((9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienil)tetrahidro-3aH-ciclopenta[d][1,3]dioxol-5-amina ("Al NY-100") y/o 4,7,13-tris(3-oxo-3-(undecilamino)propil)-N1 ,N16-diundecil-4,7,10,13-tetraazahexadecano-1,16-diamida ("NC98-5").
En algunas realizaciones, el porcentaje de lípidos catiónicos totales en una composición (por ejemplo una composición liposomal) no puede ser más de 10%, no más de 20%, no más de 30%, no más de 40%, no más de 50%, no más de 60%, no más de 70%, no más de 80%, no más de 90%, o no más de 95% de los lípidos totales medidos por proporciones molares (% en moles) o por peso (% en peso).
En algunas realizaciones, el porcentaje de lípidos catiónicos totales en una composición (por ejemplo una composición liposomal) puede ser mayor de 10%, mayor de 20%, mayor de 30%, mayor de 40%, mayor de 50%, mayor de 60%, mayor de 70%, mayor de 80%, mayor de 90%, o mayor de 95% de los lípidos totales medidos por proporciones molares (% en moles) o por peso (% en peso).
En algunas realizaciones, el (los) lípido(s) catiónico(s) constituye(n) alrededor de 30-50 % (por ejemplo alrededor de 30-45 %, alrededor de 30-40 %, alrededor de 35-50 %, alrededor de 35-45 %, o alrededor de 35-40 %) del liposoma en peso. En algunas realizaciones, el lípido catiónico constituye alrededor de 30 %, alrededor de 35 %, alrededor de 40 %, alrededor de 45 %, o alrededor de 50 % de una composición (por ejemplo una composición liposomal) por proporción molar. En algunas realizaciones, el (los) lípido(s) catiónico(s) constituye(n) alrededor de 30-50 % (por ejemplo alrededor de 30-45 %, alrededor de 30-40 %, alrededor de 35-50 %, alrededor de 35-45 %, o alrededor de 35-40 %) del liposoma en peso. En algunas realizaciones, el lípido catiónico constituye alrededor de 30%, alrededor de 35%, alrededor de 40%, alrededor de 45%, o alrededor de 50% de una composición (por ejemplo una composición liposomal) en peso.
Lípidos no catiónicos / auxiliares
Las composiciones (por ejemplo, composiciones liposomales) también pueden comprender uno o más lípidos no catiónicos ("auxiliares"). Como se utiliza en el presente documento, la expresión "lípido no catiónico" se refiere a cualquier lípido neutro, zwitteriónico o aniónico. Como se utiliza en el presente documento, la expresión "lípido aniónico" se refiere a cualquiera de varias especies de lípidos que portan una carga negativa neta a un pH seleccionado, tal como un pH fisiológico. Los lípidos no catiónicos incluyen, pero no se limitan a, distearoilfosfatidilcolina (Ds Pc ), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoiloleoilfosfatidilcolina (POPC), palmitoiloleoilfosfatidiletanolamina (POPE), 4-(N-maleimidometil)-ciclohexano-1-carboxilato de dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE-mal), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE), 16-O-monometil PE, 16-O-dimetil PE, 18-1-trans PE, 1-estearoil-2-oleoil-fosfatidiletanolamina (SOPE), o una mezcla de los mismos.
En realizaciones, un lípido no catiónico o auxiliar es dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE).
En algunas realizaciones, un lípido no catiónico es un lípido neutro, es decir, un lípido que no porta una carga neta en las condiciones en las que se formula y/o administra la composición.
En algunas realizaciones, un lípido no catiónico puede estar presente en una proporción molar (% en moles) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, los lípidos no catiónicos totales pueden estar presentes en una proporción molar (% en moles) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5 % en moles, mayor que alrededor de 10 % en moles, mayor que alrededor de 20 % en moles, mayor que alrededor de 30 % en moles o mayor que alrededor de 40 % en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5 % en moles, mayor que alrededor de 10 % en moles, mayor que alrededor de 20 % en moles, mayor que alrededor de 30 % en moles, o mayor que alrededor de 40 % en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma no es mayor que alrededor de 5 % en moles, no mayor que alrededor de 10 % en moles, no mayor que alrededor de 20 % en moles, no mayor que alrededor de 30 % en moles, o no mayor que alrededor de 40 % en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser no mayor que alrededor de 5 % en moles, no mayor que alrededor de 10 % en moles, no mayor que alrededor de 20 % en moles, no mayor que alrededor de 30 % en moles, o no mayor que alrededor de 40 % en moles.
En algunas realizaciones, un lípido no catiónico puede estar presente en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, los lípidos no catiónicos totales pueden estar presentes en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 5 % a alrededor de 90 %, alrededor de 5 % a alrededor de 70 %, alrededor de 5 % a alrededor de 50 %, alrededor de 5 % a alrededor de 40 %, alrededor de 5 % a alrededor de 30 %, alrededor de 10 % a alrededor de 70 %, alrededor de 10 % a alrededor de 50 %, o alrededor de 10 % a alrededor de 40 % de los lípidos totales presentes en una composición. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5 % en peso, mayor que alrededor de 10 % en peso, mayor que alrededor de 20 % en peso, mayor que alrededor de 30 % en peso, o mayor que alrededor de 40 % en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser mayor que alrededor de 5 % en peso, mayor que alrededor de 10 % en peso, mayor que alrededor de 20 % en peso, mayor que alrededor de 30 % en peso, o mayor que alrededor de 40 % en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido no catiónico en un liposoma no es más de alrededor de 5 % en peso, no más de alrededor de 10 % en peso, no más de alrededor de 20 % en peso, no más de alrededor de 30 % en peso, o no más de alrededor de 40 % en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje total de lípidos no catiónicos en un liposoma puede ser no más de alrededor de 5 % en peso, no más de alrededor de 10 % en peso, no más de alrededor de 20 % en peso, no más de alrededor de 30 % en peso, o no más de alrededor de 40 % en peso.
Lípidos a base de colesterol
En algunas realizaciones, una composición (por ejemplo una composición liposomal) comprende uno o más lípidos a base de colesterol. Por ejemplo, los lípidos a base de colesterol adecuados incluyen colesterol y, por ejemplo, DC-Chol (N,N-dimetil-N-etilcarboxamidocolesterol), 1,4-bis(3-N-oleilamino-propil)piperazina (Gao, et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. 179, 280 (1991); Wolf et al. BioTechniques 23, 139 (1997); Patente de EE. UU. n.° 5.744.335), o éster de imidazol colesterol (ICE), que tiene la siguiente estructura,
En las realizaciones, un lípido a base de colesterol es colesterol.
En algunas realizaciones, un lípido a base de colesterol puede estar presente en una proporción molar (% en moles) de alrededor de 1 % a alrededor de 30 %, o alrededor de 5 % a alrededor de 20 % de los lípidos totales presentes en un liposoma. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser mayor que alrededor de 5 % en moles, mayor que alrededor de 10 % en moles, mayor que alrededor de 20 % en moles, mayor que alrededor de 30 % en moles, o mayor que alrededor de 40 % en moles. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser no más de alrededor de 5 % en moles, no más de alrededor de 10 % en moles, no más de alrededor de 20 % en moles, no más de alrededor de 30 % en moles, o no más de alrededor de 40 % en moles.
En algunas realizaciones, un lípido a base de colesterol puede estar presente en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 1 % a alrededor de 30 %, o alrededor de 5 % a alrededor de 20 % de los lípidos totales presentes en un liposoma. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser mayor que alrededor de 5 % en peso, mayor que alrededor de 10 % en peso, mayor que alrededor de 20 % en peso, mayor que alrededor de 30 % en peso, o mayor que alrededor de 40 % en peso. En algunas realizaciones, el porcentaje de lípido a base de colesterol en la nanopartícula lipídica puede ser no más de alrededor de 5 % en peso, no más de alrededor de 10 % en peso, no más de alrededor de 20 % en peso, no más de alrededor de 30 % en peso, o no más de alrededor de 40 % en peso.
Lípidos PEGilados
En algunas realizaciones, una composición (por ejemplo una composición liposomal) comprende uno o más lípidos PEGilados.
Por ejemplo, la presente invención también contempla el uso de fosfolípidos modificados y lípidos derivatizados con polietilenglicol (PEG), tales como ceramidas derivatizadas (PEG-CER), incluyendo N-octanoil-esfingosina-1-[succinil(metoxi polietilenglicol)-2000] (ceramida C8 PEG-2000) en combinación con uno o más de los lípidos catiónicos y, en otras realizaciones, otros lípidos conjuntamente que comprenden el liposoma. En algunas realizaciones, los lípidos intercambiables particularmente útiles son PEG-ceramidas que tienen cadenas de acilo más cortas (por ejemplo C<14>o C<18>).
En realizaciones, un lípido modificado por PEG es 1,2-dimiristoil-sn-glicerol, metoxipolietilenglicol (DMG-PEG2000).
Lípidos modificados con PEG contemplados (también denominados en el presente documento lípido PEGilado, término que es intercambiable con lípido modificado con PEG) incluyen, pero no se limitan a, una cadena de polietilenglicol de hasta 5 kDa de longitud unida covalentemente a un lípido con cadena(s) de alquilo de C<6>-C<20>de longitud. En algunas realizaciones, un lípido modificado con PEG o PEGilado es colesterol PEGilado o PEG-2K. La adición de tales componentes puede prevenir la agregación de complejos, y también puede proporcionar un medio para aumentar la vida útil en circulación y aumentar la administración de la composición de lípidos y ácidos nucleicos a la célula diana (Klibanov et al. (1990) FEBS Letters, 268 (1): 235-237), o pueden seleccionarse para intercambiarse rápidamente fuera de la formulación in vivo (véase la patente de EE. UU. n.° 5.885.613).
Otros fosfolípidos modificados con PEG y lípidos derivatizados de la presente invención pueden estar presentes en una proporción molar (% en moles) de alrededor de 0% a alrededor de 15%, alrededor de 0,5% a alrededor de 15%, alrededor de 1% a alrededor de 15%, alrededor de 4 % a alrededor de 10 %, o alrededor de 2 % del lípido total presente en la composición (por ejemplo una composición liposomal).
Otros fosfolípidos modificados con PEG y lípidos derivatizados de la presente invención pueden estar presentes en una relación en peso (% en peso) de alrededor de 0% a alrededor de 15%, alrededor de 0,5% a alrededor de 15%, alrededor de 1% a alrededor de 15%, alrededor de 4 % a alrededor de 10 %, o alrededor de 2 % del lípido total presente en la composición (por ejemplo una composición liposomal).
Formulaciones farmacéuticas y usos terapéuticos
Los lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (la), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) pueden usarse en la preparación de composiciones (por ejemplo para construir composiciones liposomales) que facilitan o potencian la administración y la liberación de materiales encapsulados (por ejemplo uno o más polinucleótidos terapéuticos) a una o más células diana (por ejemplo mediante permeación o fusión con las membranas lipídicas de dichas células diana).
Por ejemplo, cuando una composición liposomal (por ejemplo una nanopartícula lipídica) comprende o está enriquecida de otro modo con uno o más de los compuestos descritos en el presente documento, la transición de fase en la bicapa lipídica de la una o más células diana puede facilitar la administración de los materiales encapsulados (por ejemplo uno o más polinucleótidos terapéuticos encapsulados en una nanopartícula lipídica) en la una o más células diana.
Del mismo modo, en ciertas realizaciones, los lípidos catiónicos descritos en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3))) pueden ser utilizado para preparar vehículos liposomales que se caracterizan por su toxicidad reducidain vivo.En ciertas realizaciones, la toxicidad reducida es una función de las altas eficiencias de transfección asociadas con las composiciones descritas en el presente documento, de modo que se puede administrar una cantidad reducida de tal composición al sujeto para lograr una respuesta o resultado terapéutico deseado.
Por lo tanto, las formulaciones farmacéuticas que comprenden un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) y ácidos nucleicos proporcionados por la presente invención pueden utilizarse para diversos fines terapéuticos. Para facilitar la administración de ácidos nucleicosin vivo,un compuesto descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) y los ácidos nucleicos pueden formularse en combinación con uno o más vehículos farmacéuticos adicionales, ligandos diana o reactivos estabilizadores. En algunas realizaciones, un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) puede formularse a través de una solución lipídica premezclada. En otras realizaciones, una composición que comprende un lípido catiónico descrito en el presente documento (por ejemplo un lípido catiónico de cualquiera de las Fórmulas (I)-(V), como el lípido catiónico de la Fórmula (Ia), compuesto (1), compuesto (2) y/o compuesto (3)) puede formularse usando técnicas de post-inserción en la membrana lipídica de las nanopartículas. Las técnicas para la formulación y administración de fármacos se pueden encontrar en "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., última edición.
Las vías de administración adecuadas incluyen, por ejemplo, administración oral, rectal, vaginal, transmucosa, pulmonar incluyendo intratraqueal o inhalada, o intestinal; administración parenteral, incluyendo inyecciones intradérmicas, transdérmicas (tópicas), intramusculares, subcutáneas, intramedulares, así como intratecales, intraventriculares directas, intravenosas, intraperitoneales, o intranasales. En realizaciones particulares, la administración intramuscular es a un músculo seleccionado del grupo que consiste en músculo esquelético, músculo liso y músculo cardíaco. En algunas realizaciones, la administración da como resultado el suministro de los ácidos nucleicos a una célula muscular. En algunas realizaciones, la administración da como resultado el suministro de los ácidos nucleicos a un hepatocito (es decir, una célula hepática). En realizaciones, la administración es intramuscular. En realizaciones, la administración es intravenosa.
Alternativa o adicionalmente, las formulaciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar de manera local en lugar de sistémica, por ejemplo mediante inyección de la formulación farmacéutica directamente en un tejido diana, preferiblemente en una formulación de liberación sostenida. La administración local puede verse afectada de diversas maneras, dependiendo del tejido al que se dirige. Los tejidos ejemplares en los que se puede administrar y/o expresar ARNm administrado incluyen, pero no se limitan a, hígado, riñón, corazón, bazo, suero, cerebro, músculo esquelético, ganglios linfáticos, piel y/o líquido cefalorraquídeo. En realizaciones, el tejido al que se dirigirá es el hígado. Por ejemplo, los aerosoles que contienen composiciones de la presente invención se pueden inhalar (para administración nasal, traqueal, o bronquial); las composiciones de la presente invención se pueden inyectar en el sitio de la lesión, manifestación de la enfermedad, o dolor, por ejemplo; las composiciones se pueden proporcionar en forma de grageas para aplicación oral, traqueal, o esofágica; puede suministrarse en forma líquida, comprimido o cápsula para administración en el estómago o los intestinos, puede suministrarse en forma de supositorio para aplicación rectal o vaginal; o incluso puede administrarse al ojo mediante el uso de cremas, gotas, o incluso inyecciones.
En las realizaciones, la administración es vía pulmonar. Como se usa en el presente documento, administración pulmonar se refiere a la administración a través del pulmón, por ejemplo, cavidad nasal, tráquea, bronquios, bronquiolos y/u otro sistema pulmonar. En realizaciones, una composición descrita aquí se formula para nebulización. En realizaciones, el vehículo de entrega puede estar en una composición aerosolizada que puede ser inhalada. En realizaciones, la administración pulmonar implica inhalación (por ejemplo para administración nasal, traqueal o bronquial). En realizaciones, una composición se nebuliza antes de la inhalación.
La presente invención proporciona métodos para administrar una composición que tiene moléculas de ARNm de longitud completa que codifican un péptido o polipéptido de interés para uso en el tratamiento de un sujeto, por ejemplo un sujeto humano o una célula de un sujeto humano o un célula que se trata y se suministra a un sujeto humano.
Por consiguiente, en ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en el suministro o el tratamiento del pulmón de un sujeto o una célula pulmonar. En ciertas realizaciones, la presente divulgación proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína del miembro 3 de la subfamilia A del casete de unión a ATP. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la cadena intermedia 1 del axonema de dineína. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la cadena pesada axonemal de dineína 5 (DNAH5). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína alfa-1-antitripsina. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica la proteína P3 de la caja de horquilla (FOXP3). En ciertas realizaciones, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una o más proteínas tensioactivas, por ejemplo una o más de la proteína tensioactiva A, la proteína tensioactiva B, la proteína tensioactiva C y la proteína tensioactiva D.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento del hígado de un sujeto o una célula hepática. Tales péptidos y polipéptidos pueden incluir los asociados con un trastorno del ciclo de la urea, los asociados con un trastorno de almacenamiento lisosomal, con un trastorno de almacenamiento de glucógeno, los asociados con un trastorno del metabolismo de aminoácidos, los asociados con un metabolismo de lípidos o trastorno fibrótico, los asociados con acidemia metilmalónica o los asociados con cualquier otro trastorno metabólico para el cual el suministro al o el tratamiento del hígado o de una célula hepática con ARNm de longitud completa enriquecido proporciona un beneficio terapéutico.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un trastorno del ciclo de la urea. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína arginosuccinato sintetasa 1. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína carbamoil fosfato sintetasa I. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína arginosuccinato liasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína arginasa.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un trastorno de almacenamiento lisosomal. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína alfa galactosidasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína glucocerebrosidasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína iduronato-2-sulfatasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína iduronidasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína N-acetil-alfa-D-glucosaminidasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína heparán N-sulfatasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína galactosamina-6 sulfatasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína beta-galactosidasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína lipasa lisosomal. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína arilsulfatasa B (N-acetilgalactosamina-4-sulfatasa). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica el factor de transcripción EB (TFEB).
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un trastorno de almacenamiento de glucógeno. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína alfa-glucosidasa ácida. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína glucosa-6-fosfatasa (G6PC). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína glucógeno fosforilasa hepática. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína fosfoglicerato mutasa muscular. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la enzima desramificadora de glucógeno.
En ciertas realizaciones la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con el metabolismo de aminoácidos. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la enzima fenilalanina hidroxilasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la enzima glutaril-CoA deshidrogenasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la enzima propionil-CoA caboxilasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la enzima oxalasa alanina-glioxilato aminotransferasa.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con un metabolismo lipídico o trastorno fibrótico. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica un inhibidor de mTOR. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína ATPasa transportadora de fosfolípidos 8B1 (ATP8B1). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica uno o más inhibidores de NF-kappa B, tal como uno o más de I-kappa B alfa, regulador del desarrollo relacionado con el interferón 1 (IFRD1) y sirtuina 1 (SIRT1). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína PPAR-gamma o una variante activa.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica una proteína asociada con la acidemia metilmalónica. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica la proteína metilmalonil CoA mutasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína metilmalonil CoA epimerasa.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa para el cual la administración al o el tratamiento del hígado puede proporcionar beneficios terapéuticos. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica la proteína ATP7B, también conocida como proteína de la enfermedad de Wilson. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica la enzima porfobilinógeno desaminasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una o enzimas de coagulación, como el factor VIII, el factor IX, el factor VII y el factor X. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la hemocromatosis humana (HFE).
En ciertas realizaciones la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en el suministro al o el tratamiento de la cardiovasculatura de un sujeto o una célula cardiovascular. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína A del factor de crecimiento endotelial vascular. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína relaxina. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína-9 morfogenética ósea. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína-2 receptor proteína morfogenética ósea.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento del músculo de un sujeto o una célula muscular. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína distrofina. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína frataxina. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento del músculo cardíaco de un sujeto o una célula muscular cardíaca. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína que modula uno o ambos de un canal de potasio y un canal de sodio en el tejido muscular o en una célula muscular. En ciertas realizaciones la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína que modula un canal Kv7.1 en el tejido muscular o en una célula muscular. En ciertas realizaciones la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína que modula un canal Nav1.5 en el tejido muscular o en una célula muscular.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento del sistema nervioso de un sujeto o una célula del sistema nervioso. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína de supervivencia de la motoneurona 1. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína de supervivencia de la motoneurona 2. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína frataxina. En ciertas realizacioejemplnes, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína del miembro D de la subfamilia de casete de unión a ATP 1 (ABCD1). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína CLN3.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento de la sangre o la médula ósea de un sujeto o una célula sanguínea o la médula ósea. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica la proteína beta-globina. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína tirosina quinasa de Bruton. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una o enzimas de coagulación, como el factor VIII, el factor IX, el factor VII y el factor X.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento del riñón de un sujeto o una célula renal. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína de la cadena alfa 5 del colágeno tipo IV (COL4A5).
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración al o el tratamiento del ojo de un sujeto o una célula ocular. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína del miembro 4 de la subfamilia A de casete de unión a ATP (ABCA4). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína retinosquisina. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína de 65 kDa específica del epitelio pigmentario retiniano (RPE65). En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica la proteína centrosomal de 290 kDa (CEP290).
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración a, o el tratamiento con una vacuna para, un sujeto o una célula de un sujeto. Por ejemplo, en ciertas realizaciones la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un agente infeccioso, como un virus. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de la gripe. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus sincitial respiratorio. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de la rabia. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del citomegalovirus. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del rotavirus. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus de la hepatitis, tal como el virus de la hepatitis A, el virus de la hepatitis B o el virus de la hepatitis C. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus del papiloma humano. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus herpes simple, como el virus herpes simple 1 o el virus herpes simple 2. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus de inmunodeficiencia humana, como el virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 o el virus de inmunodeficiencia humana tipo 2. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un metapneumovirus humano. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno de un virus de la parainfluenza humana, como el virus de la parainfluenza humana tipo 1, el virus de la parainfluenza humana tipo 2 o el virus de la parainfluenza humana tipo 3. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de la malaria. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus del Zika. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno del virus de Chikungunya.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un antígeno asociado con un cáncer de un sujeto o identificado a partir de una célula cancerosa de un sujeto. En ciertas realizaciones, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica un antígeno determinado a partir de la propia célula cancerosa de un sujeto, es decir, para proporcionar una vacuna contra el cáncer personalizada. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica un antígeno expresado a partir de un gen KRAS mutante.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo. En ciertas realizaciones, el anticuerpo puede ser un anticuerpo biespecífico. En ciertas realizaciones, el anticuerpo puede ser parte de una proteína de fusión. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra OX40. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra VEGF. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra el factor de necrosis tisular alfa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra CD3. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un anticuerpo contra CD19.
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica un inmunomodulador. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica interleucina 12. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica interleucina 23. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica interleucina 36 gamma. En ciertos casos, la presente descripción proporciona un método para producir una composición terapéutica que tiene ARNm de longitud completa que codifica una variante constitutivamente activa de una o más proteínas estimuladoras de genes de interferón (STING).
En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una endonucleasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína endonucleasa de ADN guiada por el ARN, como la proteína Cas 9. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica enriquecida con ARNm de longitud completa que codifica una proteína meganucleasa. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína nucleasa efectora similar a un activador de la transcripción. En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método para producir una composición terapéutica que comprende ARNm de longitud completa que codifica una proteína nucleasa de dedo de zinc.
Los usos terapéuticos resultan de la administración de ARNm que codifica una proteína segregada. Por consiguiente, las composiciones de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una proteína segregada. Las composiciones y métodos de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una o más proteínas secretadas enumeradas en laTabla 1; por lo tanto, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína enumerada en laTabla 1(o un homólogo de la misma) junto con otros componentes establecidos en el presente documento, y los métodos de la invención pueden comprender la preparación de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína enumerada en laTabla 1(o un homólogo de la misma) junto con otros componentes establecidos en el presente documento.
Tabla 1. Proteínas se re adas
Las composiciones y los métodos de la invención proporcionan la administración de uno o más ARNm que codifican una o más proteínas a modo de ejemplo adicionales enumeradas en laTabla 2; por lo tanto, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína enumerada en laTabla 2(o un homólogo de la misma) junto con otros componentes establecidos en el presente documento, y los métodos de la invención pueden comprender la preparación de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína seleccionada a partir de las proteínas enumeradas en laTabla 2(o un homólogo de la misma) junto con otros componentes establecidos en el presente documento.
T l 2. Pr ín m l r i i n l
Los ID de Uniprot expuestos en laTabla 1y laTabla 2se refieren a las versiones humanas de las proteínas enumeradas, y cuyas secuencias están disponibles en la base de datos de Uniprot. Las secuencias de las proteínas enumeradas también están generalmente disponibles para diversos animales, incluidos diversos mamíferos y animales de interés veterinario o industrial. Por consiguiente, las composiciones y los métodos de la invención proporcionan la administración de uno o más ARNm que codifican una o más proteínas elegidas de homólogos de mamífero u homólogos de un animal de interés veterinario o industrial de las proteínas secretadas enumeradas en laTabla 1y laTabla 2; por lo tanto, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína elegida de homólogos de mamífero u homólogos de un animal de interés veterinario o industrial de una proteína enumerada en laTabla 1y laTabla 2, junto con otros componentes establecidos en el presente documento, y los métodos de la invención pueden comprender la preparación de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína elegida de homólogos de mamífero u homólogos de un animal de interés veterinario o industrial de una proteína enumerada en laTabla 1y laTabla 2junto con otros componentes establecidos en el presente documento. En algunas realizaciones, los homólogos de mamíferos se escogen de homólogos de ratón, rata, hámster, jerbo, caballo, cerdo, vaca, llama, alpaca, visón, perro, gato, hurón, oveja, cabra o camello. En algunas realizaciones, el animal de interés veterinario o industrial se escoge de los mamíferos enumerados anteriormente y/o pollo, pato, pavo, salmón, bagre o tilapia.
Las composiciones de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una proteína lisosomal elegida de laTabla 3. Las composiciones y los métodos de la invención proporcionan la administración de uno o más ARNm que codifican una o más proteínas lisosomales y/o relacionadas enumeradas en laTabla 3; por lo tanto, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína enumerada en laTabla 3(o un homólogo de la misma) junto con otros componentes establecidos en el presente documento, y los métodos de la invención pueden comprender la preparación de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína elegida de las proteínas enumeradas en laTabla 3(o un homólogo de las mismas) junto con otros componentes establecidos en el presente documento.
Tabla 3. Proteínas lisosomales y relacionadas
a-fucosidasa
La información sobre las proteínas lisosomales está disponible en Lubke et al., "Proteomics of the Lysosome", Biochim Biophys Acta. (2009) 1793: 625-635. En algunas realizaciones, la proteína enumerada en la Tabla 3 y codificada por ARNm en las composiciones y los métodos de la invención es una proteína humana. Las secuencias de las proteínas enumeradas también están disponibles para diversos animales, incluidos diversos mamíferos y animales de interés veterinario o industrial como se describe anteriormente.
Las composiciones y los métodos de la invención proporcionan la administración de ARNm que codifica una proteína terapéutica (por ejemplo, citosólica, transmembrana, o segregada) tal como las enumeradas en laTabla 4.Las composiciones y los métodos de la invención proporcionan la administración de un ARNm que codifica una proteína terapéutica útil en el tratamiento de una enfermedad o trastorno (es decir, indicación) enumerado en laTabla 4; por lo tanto, las composiciones de la invención pueden comprender un ARNm que codifica una proteína terapéutica enumerada o no enumerada en laTabla 4(o un homólogo de la misma, como se trata a continuación) junto con otros componentes establecidos en el presente documento para tratar una enfermedad o trastorno (es decir, indicación) enumerada en laTabla 4, y los métodos de la invención pueden comprender la preparación de una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína de este tipo (o un homólogo de la misma, como se trata a continuación) junto con otros componentes expuestos en el presente documento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno enumerado en laTabla 4.
Tabla 4. Indicaciones e em lares roteínas relacionadas
En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención se divulgan para uso en la prevención, el tratamiento y/o la curación de un sujeto afectado con una enfermedad o trastorno enumerado o asociado con las proteínas enumeradas en lasTablas 1,2, 3o4. En algunas realizaciones, un ARNm codifica uno o más de regulador de la conductancia transmembrana de fibrosis quística (CFTR), argininosuccinato sintetasa (ASS1), Factor IX, motoneurona 1 de supervivencia (SMN1) o fenilalanina hidroxilasa (PAH).
Si bien ciertos compuestos, composiciones y métodos de la presente invención se han descrito con especificidad según ciertas realizaciones, los siguientes ejemplos sirven sólo para ilustrar los compuestos de la invención y no pretenden limitarlos.
EJEMPLOS
Ejemplo 1: Síntesis ejemplar de lípido catiónico (3)
Los lípidos catiónicos descritos en el presente documento pueden prepararse según la síntesis ejemplar del Esquema 1. En el presente documento se proporciona una síntesis ejemplar de lípido catiónico (3)
Síntesis de 4-(bis((R)-2-((terc-butildimetilsilil)oxi)dodecil)amino)butanoato de (3S,10fí,13fí)-10,13-dimetil-17-(fí)-6-metilheptano-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1 H-ciclopenta[a]fenantreno-3-ilo (Compuesto i)
co estero
A una mezcla ácido de 4-(bis((R)-2-((íerc-butildimetilsilil)oxi)dodecil)aminobutanoicoCompuesto g(1,0 g, 1,4 mmol) y colesterol (Compuestoh; 580 mg, 1,5 mmol) en 10 mL de diclorometano se añadió DMAP (50 mg, 0,43 mmol) y EDCI (550 mg, 2,8 mmol), y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (15 mL) y después se lavó con agua y salmuera. Después de secarse sobre sulfato de sodio, la capa orgánica se filtró y concentró. El residuo fue purificado por cromatografía de columna flash (120 g de SiO<2>: 0-30% de acetato de etilo en gradiente de hexano) para dar 1,25 g del producto deseadoCompuesto icomo aceite incoloro (rendimiento: 82%).
Síntesis de 4-(bis((R)-2-hidroxidodecil)amino)butanoato de (3S,10fí,13fí)-10,13-dimetil-17-(fí)-6-metilheptano-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H-ciclopenta[a]fenantreno-3-ilo (Lípido catiónico 3)
En un matraz de teflón de 100 ml se enfrió 0 °C una solución deCompuesto i(500 mg, 0,468 mmol) en 5 mL de tetrahidrofurano y después se añadió gota a gota solución de HF-piridina (2 mL, 70% en peso/30% en peso). La mezcla resultante se calentó lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Después de que el análisis de espectrometría de masas indicara la conversión completa, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano y se neutralizó con solución acuosa de bicarbonato de sodio. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con diclorometano. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. Se purificó el residuo por cromatografía de columna flash (12 g SIO<2>: 0-50% acetato de etilo en gradiente de hexano) para dar 335 mg del producto deseadoLípido catiónico 3como sólido blanco (rendimiento: 85%).
Ejemplo 2: Formulación de nanopartículas lipídicas usando lípido catiónico (3) y expresión in vivo
de eritropoyetina humana (hEPO) en ratones CD1
Los lípidos catiónicos descritos en el presente documento se pueden usar en la preparación de nanopartículas lipídicas según métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los métodos adecuados incluyen métodos descritos en la Publicación Internacional n° WO 2018/089801.
Un proceso ejemplar para la formulación de nanopartículas lipídicas es elProceso Adel documento WO 2018/089801 (véase, por ejemplo, el Ejemplo 1 y la Figura 1 del documento WO 2018/089801). El Proceso A ("A") se refiere a un método convencional de encapsulación de ARNm mediante mezclado de ARNm con una mezcla de lípidos, sin preformar primero los lípidos en nanopartículas lipídicas En un proceso ejemplar, se prepararon por separado una solución lipídica de etanol y una solución tamponada acuosa de ARNm. Se preparó una solución de mezcla de lípidos (lípido catiónico, lípidos auxiliares, lípidos zwitteriónicos, lípidos de PEG, etc.) mediante disolución de lípidos en etanol. La solución de ARNm se preparó mediante disolución de ARNm en tampón citrato, dando lugar a ARNm a una concentración de 0,0833mg/ml en tampón citrato con un pH de 4,5. Ambas mezclas se calentaron a 65 °C antes de la mezcla. Después se mezclaron estas dos soluciones utilizando un sistema de bombeo. En algunos casos se mezclaron las dos soluciones utilizando un sistema de bombeo de engranajes. En ciertas realizaciones se mezclaron las dos soluciones usando una unión en T (o unión en "Y"). La mezcla se purificó entonces mediante diafiltración con un proceso TFF. La formulación resultante se concentró y se almacenó a 2-8 °C hasta su posterior uso.
Un segundo proceso ejemplar para la formulación de nanopartículas lipídicas es elProceso Bdel documento WO 2018/089801 (véase, por ejemplo, el Ejemplo 2 y la Figura 2 del documento WO 2018/089801). El Proceso B ("B") se refiere a un proceso de encapsulación de ARN mensajero (ARNm) mediante mezclado de nanopartículas lipídicas preformadas con ARNm. En el Proceso B se puede emplear un rango de condiciones diferentes, como temperaturas variables (es decir, calentamiento o no calentamiento de la mezcla), tampones y concentraciones. En un proceso ejemplar se mezclaron lípidos disueltos en etanol y tampón citrato utilizando un sistema de bombeo. El mezclado instantáneo de las dos corrientes dio lugar a la formación de nanopartículas lipídicas vacías, lo que era un proceso de autoensamblaje. La mezcla de formulación resultante era de nanopartículas lipídicas vacías en tampón citrato que contenía alcohol. Después se sometió la formulación a un proceso de purificación TFF, en donde se produjo el intercambio de tampón. La suspensión resultante de nanopartículas lipídicas vacías preformadas se mezcló entonces con ARNm usando un sistema de bombeo. Para ciertos lípidos catiónicos, el calentamiento de la solución después del mezclado dio lugar a un mayor porcentaje de nanopartículas lipídicas que contenían ARNm y un mayor rendimiento total de ARNm.
La administración intravenosa (IV) de formulaciones de nanopartículas lipídicas que comprenden un lípido catiónico ejemplar y ARNm que codifica hEPO se llevó a cabo con el fin de estudiar la administración de ARNm y la expresión de hEPO resultante. Se preparó una formulación de nanopartículas de lípido catiónico (3) y ARNm hEPO mediante el Proceso A descrito anteriormente para administración intravenosa en una composición como se muestra en laTabla 5a continuación. La formulación se preparó en una proporción % en moles de la siguiente manera: Lípido catiónico: DMG-PEG2000; Colesterol: DPPC: DOPE = 20:5:25:20:30.
T l . F rm l i n m l r n n r í l li í i
Se administró a ratones CD1 macho de 6-8 semanas una única inyección intravenosa de la formulación de LNP a un nivel de dosificación de 1 mg/kg. Las muestras de sangre se recogieron por corte de cola a las 6 y 24 horas después de la dosis. Se midieron los niveles de expresión de proteína hEPO en las muestras de sueros mediante ELISA, lo que mostró la expresión de hEPO en los sueros de aproximadamente 3,47ng/ml. Este estudio demostró que los lípidos catiónicos descritos en el presente documento son altamente eficaces en la administración de ARNm in vivo, lo que da lugar a alta expresión de la proteína o polipéptido codificado por el ARNm administrado.

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un lípido catiónico que tiene una estructura según la Fórmula (I):
    en donde R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo C<1>-C<30>, alquenilo C<2>-C<30>, alquinilo C<2>-C<30>, heteroalquilo C<1>-C<30>, heteroalquenilo C<1>-C<30>, heteroalquinilo C<1>-C<30>, un polímero, cicloalquilo C<5>-C<6>, heterocicloalquilo de 5 a 6 miembros, arilo C<5>-C<6>o heteroarilo de 5 a 6 miembros, en donde dicho alquilo C<1>-C<30>no está sustituido o está sustituido con un o más de halógeno, -COR', -CO<2>H, -CO<2>R', -CN, -OH, -OR', -OCOR', -OCO<2>R', - NH<2>, -NHR', -N(R')<2>, -SR' o -SO<2>R', en donde cada caso de R' es independientemente C<1>-C<20>alifático; o en donde R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<30>no sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster; X1 y X2 son cada uno independientemente OH, ORa o NRbRc ; L1 es alquileno C<1>-C<10>; alquenileno C<2>-C<10>; o alquinileno C<2>-C<10>; X3 es CH<2>, O, S, NH o NRd; X4 es O o S; Ra y Rd son cada uno independientemente alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>; Rb y Rc son cada uno independientemente H, alquilo C<1>-C<6>, alcoxi C<1>-C<6>, cicloalquilo C<3>-C<6>, alquenilo C<2>-C<6>o alquinilo C<2>-C<6>; o Rb y Rc, junto con el átomo de nitrógeno a través del cual están conectados, forman un anillo heterocíclico saturado o insaturado de 5 a 6 miembros; y
    es un esterol natural o no natural.
  2. 2. El lípido catiónico de la reivindicación 1 (a) que tiene una estructura según la Fórmula (Ia):
    en donde X1 y X2 son cada uno independientemente OH, ORao NRbRc y/o (b) en donde X1 es OH y/o (c) en donde X2 es OH y/o (d) en donde X3 es O.
  3. 3. El lípido catiónico de la reivindicación 1 o 2, (a) en donde R1 y R2 son cada uno independiente alquilo C<6>-C<30>, opcionalmente (a)(i) en donde R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<30>no sustituido, por ejemplo en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente a partir de -C<6>H<13>, -C<7>H<15>, -C<8>H<17>, -C<9>H<19>, -C<10>H<21>, -C<11>H<23>, -C<12>H<25>, -C<13>H<27>, -C<14>H<29>, -C<15>H<31>, - C<16>H<33>, -C<17>H<35>, -C<18>H<37>, -C<19>H<39>, -C<20>H<41>, -C<21>H<43>, -C<22>H<45>, -C<23>H<47>, -C<24>H<49>y - C<25>H<51>o (a) (ii) en donde R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo C<6>-C<30>sustituido con uno o más sus sustituyentes seleccionados a partir de halógeno, hidroxilo, amino, tiol, éster y tioéster o (b) en donde R1 y R2 son cada uno independientemente alquenilo C<6>-C<30>o alquenilo C<8>-C<20>o (c) en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente a partir de alquenilo C8, alquenilo C<9>, alquenilo C<10>, alquenilo C<11>, alquenilo C<12>, alquenilo C<13>, alquenilo C<14>, alquenilo C<15>, alquenilo C<16>, alquenilo C<17>, alquenilo C<18>, alquenilo C<19>y alquenilo C<20>, opcionalmente en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente a partir de alquenilo C8 no sustituido, alquenilo C<9>no sustituido, alquenilo C<10>no sustituido, alquenilo C<11>no sustituido, alquenilo C<12>no sustituido, alquenilo C<13>no sustituido, alquenilo C<14>no sustituido, alquenilo C<15>no sustituido, alquenilo C<16>no sustituido, alquenilo C<17>no sustituido, alquenilo C<18>no sustituido, alquenilo C<19>no sustituido y alquenilo C<20>no sustituido o (d) en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente a partir de -(CH2)4CH=CH2, - (CH2)5CH=CH2, -(CH2)6CH=CH2, -(CH2)7CH=CH2, -(CH2)8CH=CH2, -(CH2)9CH=CH2, -(CH2)10CH=CH2, -(CH2)11CH=CH2, -(CH2)12CH=CH2, -(CH2)13CH=CH2, -(CH2)14CH=CH2, -(CH2)15CH=CH2, -(CH2)16CH=CH2, -(CH2)17CH=CH2, -(CH2)18CH=CH2, -(CH2)7CH=CH(CH2)3CH3, -(CH2)7CH=CH(CH2)5CH3, -(CH2)4CH=CH(CH2)8CH3, -(CH2)7CH=CH(CH2)7CH3, - (CH2)6CH=CHCH2CH=CH(CH2)4CH3, -(CH2)7CH=CHCH2CH=CH(CH2)4CH3, -(CH2)7CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH3, -(CH2)3CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CH(CH2)4CH3, -(CH2)3CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH3, -(CH2)11CH=CH(CH2)7CH3, and -(CH2)2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH=CHCH2CH3 o (e) en donde R1 y R2 se seleccionan independientemente a partir del grupo formado por:
    o (f) en donde R1 es heteroarilo de 5 a 6 miembros.
  4. 4. El lípido catiónico de cualquiera de las reivindicaciones 1,2 y 3(f), (a) en donde R2 es heteroarilo de 5 a 6 miembros y/o (b) en donde R1 y/o R2 es imidazol o un derivado del mismo.
  5. 5. El lípido catiónico de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, (a) en donde X4 es O y/o (b) en donde L1 es alquileno C<1>-C<10>, opcionalmente en donde L1 es -(CH<2>)<2>-, -(CH2)3-, -(CH2)4-, -(CH2)5- o -(CH<2>)<6>-.
  6. 6. El lípido catiónico de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, (a) en donde e ©s un zooesterol o una forma oxidada o reducida del mismo o (b) en donde
    es un fitosterol o una forma oxidada o reducida del mismo o (c) en donde
    es un esterol no natural o una forma oxidada o reducida del mismo o (d) en donde
    es un esterol seleccionado a partir de colesterol, una forma oxidada de colesterol, una forma reducida de colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol y sitosterol o (e) en donde
    es un esterol seleccionado de una forma oxidada de colesterol, una forma reducida de colesterol, alquil litocolato, estigmasterol, estigmastanol, campesterol, ergosterol y sitosterol o (f) en donde e ©s un esterol seleccionado a partir de
    (alquil litocolato),
    (estigmastanol),
    (sitosterol), en donde R es alquilo C<1>-C<20>, opcionalmente en donde
    (colesterol) o (g) en donde
    es un esterol seleccionado a partir de
    (campesterol),
    (sitosterol), en donde R es alquilo C<1>-C<20>.
  7. 7. El lípido catiónico de la reivindicación 1, (a) que tiene una estructura según la Fórmula (II),
    o (b) que tiene una estructura según la fórmula (III),
    o (c) que tiene una estructura según la Fórmula (IV),
    (d) que tiene una estructura según la fórmula (V),
    o (e) que tiene la estructura de:
    o
  8. 8. Una composición que comprende un ARNm que codifica una proteína, encapsulada dentro de un liposoma, en donde el liposoma comprende uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos, uno o más lípidos a base de colesterol y uno o más lípidos modificados con PEG, en donde al menos un lípido catiónico es según cualquiera de las reivindicaciones 1-7.
  9. 9. La composición de la reivindicación 8, (a) que comprende un ARNm que codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de fibrosis quística (CFTR), o (b) que comprende un ARNm que codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC) o (c) que comprende un ARNm que codifica un antígeno, opcionalmente en donde el antígeno es de un agente infeccioso.
  10. 10. Una composición que comprende un ácido nucleico encapsulado dentro de un liposoma, en donde el liposoma comprende un lípido catiónico según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.
  11. 11. La composición de la reivindicación 10, que comprende además uno o más lípidos seleccionados a partir del grupo que consiste en uno o más lípidos catiónicos, uno o más lípidos no catiónicos y uno o más lípidos modificados con PEG.
  12. 12. La composición de la reivindicación 10 u 11, en donde el ácido nucleico es un ARNm que codifica un péptido o polipéptido.
  13. 13. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 10-12, (a) en donde el ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración o el tratamiento del pulmón de un sujeto o de una célula pulmonar; opcionalmente en donde el ARNm codifica la proteína reguladora de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) o (b) en donde el ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en la administración o el tratamiento del hígado de un sujeto o de una célula hepática; opcionalmente en donde el ARNm codifica la proteína ornitina transcarbamilasa (OTC) o (c) en donde el ARNm codifica un péptido o polipéptido para uso en vacuna, opcionalmente en donde el ARNm codifica un antígeno, por ejemplo en donde el antígeno es de un agente infeccioso.
  14. 14. La composición de cualquiera de las reivindicaciones 10-13, (a) en donde la composición se formula para administración intravenosa (IV) o (b) en donde la composición se formula para administración intramuscular (IM) o (c) en donde la composición se formula para administración por inhalación, opcionalmente en donde la composición se formula para nebulización.
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