ES2988643T3 - Composiciones veterinarias para prevenir y/o tratar la leishmaniosis - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso para prevenir y/o tratar la leishmaniosis en un perro. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones veterinarias para prevenir y/o tratar la leishmaniosis

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo veterinario y, más particularmente, al campo de la parasitología en el tratamiento de la leishmaniosis en perros.

Antecedentes de la invención

La leishmaniosis (o leishmaniasis) y, más particularmente, la leishmaniosis visceral (VL) es una enfermedad sistémica infecciosa, grave y crónica. Es una zoonosis importante con una importante prioridad de control clínico y epidemiológico en el mundo: el perro doméstico es el principal reservorio animal, mientras que otros animales salvajes, como los zorros, desempeñan un papel en la transmisión selvática.Leishmania infantum(sin. L.chagasi)es el agente causante de la leishmaniosis visceral canina (CanL) y de la leishmaniosis visceral humana. En las últimas décadas, se han observado cambios epidemiológicos en la VL, incluidos el aumento de la incidencia y la tasa de letalidad y su propagación a áreas nuevas e incluso urbanas. El número de casos de leishmaniosis está aumentando en todo el mundo. Algunas de las razones son la falta de vacunas, las fallas en el control de los vectores y la creciente selección de parásitos resistentes a la quimioterapia.

La CanL es una enfermedad grave que afecta a varios millones de perros domésticos en países de ambas orillas del Océano Atlántico (principalmente en Europa y Sudamérica, pero que también se propaga en África y Asia) y puede matar a los perros infectados si no se trata. En los países mediterráneos, donde las tasas de infección llegan al 63 %, incluidos al menos 2,5 millones de perros seropositivos, la CanL representa una de las principales causas de muerte en perros. Es una enfermedad en expansión y se ha convertido en una de las enfermedades caninas más importantes importadas a Europa Central.

La gama de presentaciones clínicas y respuestas inmunitarias desarrolladas por los perros infectados por L.infantumes muy amplia y variable. En consecuencia, son varias las formas que pueden caracterizarse por sus numerosos signos clínicos, incluidas las formas cutáneas, mucocutáneas y viscerales.

Además, la infección porL. infantumen perros puede manifestarse como una infección subclínica, como una enfermedad autolimitada o como una enfermedad grave potencialmente mortal. Los perros infectados pueden permanecer durante mucho tiempo como reservorio y fuente de infecciones humanas.

El tratamiento de la CanL es un desafío debido a la localización intracelular del parásito. Además, la Organización Mundial de la Salud (OMS) ha sugerido reservar los fármacos contra la leishmaniosis usados para la VL humana para su uso exclusivo en la leishmaniosis humana y no para la medicina veterinaria, debido a la sospecha de que su uso en animales puede desarrollar farmacorresistencia. A pesar de esto, el tratamiento de primera línea para la CanL es actualmente el uso combinado de agentes leishmanicidas utilizados como fármacos de segunda línea para humanos (por ejemplo, antimoniales pentavalentes, miltefosina) y alopurinol. Algunos de los compuestos quimioterapéuticos usados para la CanL están incluidos en la 19a edición de la Lista modelo de medicamentos esenciales de la OMS (abril de 2015) contra la leishmaniosis: los antimoniales pentavalentes, la miltefosina, el desoxicolato de anfotericina B o formulados en formulaciones liposomales y la paromomicina. Sin embargo, algunos otros fármacos también son eficaces, tales como alopurinol, la pentamidina, la enrofloxacina, la marbofloxacina, el metronidazol, la espiramicina y el ketoconazol. La determinación del mejor fármaco se basa en el examen clínico y la clasificación de la CanL según los resultados de las pruebas de inmunodiagnóstico, los signos clínicos y las anomalías clínico-patológicas y la carga de parásitos. La mayoría de estos tratamientos son caros y no logran la curación completa de la enfermedad; algunos de ellos pueden provocar efectos secundarios importantes. Efectos como vómitos, letargo, diarrea y nefrotoxicidad son frecuentes durante los tratamientos actuales con antimoniales pentavalentes y miltefosina. La administración prolongada de alopurinol induce con frecuencia urolitiasis por xantina. El uso de antibióticos contra la leishmaniosis también es cuestionable debido al riesgo de desarrollo de resistencias en la población de bacterias patógenas. Además, la falta de tratamiento para los perros infectados pone en peligro a todos los seres humanos que viven cerca debido a la fácil transmisión deL. infantumde los perros reservorio a los humanos.

En la actualidad, el protocolo de referencia para el tratamiento de la CanL usa antimoniato de meglumina (Glucantime ®) y alopurinol (Zyloric®) (Bourdoiseau et Denerolle, Revue Méd. Vét., 2000, 151, 5, 395-400; Solano-Gallego y col., Parasites & Vectors, 2011,4:86). Sin embargo, además de los efectos secundarios del antimoniato de meglumina y el alopurinol, no se satisface la conveniencia del protocolo de referencia, ya que requiere la administración de dos productos e inyecciones repetidas durante varias semanas o incluso varios meses. Tales protocolos de tratamiento representan un riesgo de incumplimiento.

La actividad antiparasitaria de la artemisinina y sus derivados (ART) se ha explorado ligeramente. Por ejemplo, Loo y col., (Pharmacol Res., 2017, 117, 192-217) han informado de la eficacia de ART en el tratamiento de infecciones por protozoos más allá de la malaria (Loo y col., Pharmacol Res., 2017, 117, 192-217). Chollet y col. (Biomedicine & Pharmacotherapy, 2008, 62, 462-465) haninformado de una actividadin vitrode fluoroartemisininas contra formas de promastigote deL. donovani.Cortes y col. (Antimicrobial agents and chemotherapy, 2015, 59(8), 5032-5035) han demostrado que los siguientes compuestos, a saber, el artesunato, el artesunato desoxigenado, la dihidroartemisinina y la dihidroartemisinina desoxigenada mostraron actividad invitrocontra las formas de L.infantumen fase vital (promastigote y amastigote). Sin embargo, los tratamientos específicos para la leishmaniosis canina permanecen inexplorados hasta la fecha.

Por tanto, existe una necesidad urgente de medicamentos nuevos, eficientes, seguros y asequibles para el tratamiento de la leishmaniosis canina.

Resumen de la invención

En este contexto, los inventores han demostrado sorprendentemente el interés terapéutico del artesunato en el tratamiento de la leishmaniosis canina. Más particularmente, los inventores han proporcionado un tratamiento más eficaz y tolerante que comprende artesunato en comparación con el tratamiento inyectable de referencia que comprende la combinación de antimoniato de meglumina y alopurinol.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro. Más particularmente, el perro es un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum.

En una realización particular, la composición veterinaria para su uso según la invención comprende una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre 0,1 y 100 mg/kg de peso corporal/día (peso corporal), preferiblemente entre 1 y 50 mg/kg de peso corporal/día, más preferiblemente entre 20 y 30 mg/kg de peso corporal/día. En una realización preferida, la composición veterinaria comprende una dosis terapéuticamente eficaz de 25 mg/kg de peso corporal/día.

En una realización particular adicional, la composición veterinaria para su uso según la invención se administra por vía oral. Preferiblemente, la composición veterinaria es un comprimido.

En una realización particular adicional, la composición veterinaria para su uso según la invención se administra en una sola dosis diaria. En una realización preferida, la composición veterinaria se administra durante al menos 6 días, preferiblemente desde 6 hasta 10 días, más preferiblemente durante 6 días.

Otro objeto de la invención es una composición veterinaria para su uso, tal como se define en la presente memoria, para controlar los signos clínicos de la leishmaniosis y/o la carga sanguínea deLeishmania infantumy/o los anticuerpos contraLeishmania infantum.

Un objeto preferido de la invención es una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum,en donde la composición veterinaria se administra al perro infectado por vía oral en una dosis diaria única de 25 mg/kg de peso corporal/día durante 6 días.

En una realización adicional, la composición veterinaria para su uso según la invención comprende además al menos un agente antiparasitario.

Otro objeto de la invención es un kit que comprende un primer compartimento que comprende artesunato o una sal del mismo, y un segundo compartimento que comprende al menos un agente antiparasitario como preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial, en particular para prevenir y/o tratar la leishmaniosis en un perro. En una realización particular, el kit comprende un aviso o una guía de instrucciones.

Leyenda de las figuras

Figura 1:Diagrama de flujo CONSORT que muestra los protocolos terapéuticos y los perros con leishmaniosis en cada etapa del estudio.

Figura 2:Evolución temporal de la puntuación clínica total (prueba de Kruskal-Wallis). Los veterinarios evaluaron las puntuaciones clínicas (media ± DE) de los perros (n = 42) en el momento de las visitas programadas en D0, D+30, D+90 y D+180.A.Todos los grupos.B.Grupo con Glucantime®/alopurinol.C.Grupo tratado con artesunato.

Figura 3:Comparación del porcentaje medio de reducción de la puntuación clínica entre los grupos tratados con Glucantime ®/alopurinol y artesunato (prueba de Mann-Whitney):A.Día 30 tras el tratamiento;B.Día 90 tras el tratamiento;C.Día 180 tras el tratamiento.

Figura 4:Monitorización serológica. Los títulos de anticuerpos (media ± DE) de los perros (n = 42) se evaluaron mediante IF AT cuantitativa en el momento de las visitas programadas en D0, D+30, D+90 y D+180 (prueba de Kruskal-Wallis/bilateral).A.Todos los perros.B.Grupo con Glucantime®/alopurinol. C. Grupo con artesunato

Figura 5:Comparación del porcentaje medio de reducción de los títulos de anticuerpos contra IFAT en perros con leishmaniosis tratados con artesunato o Glucantime/ alopurinol. Los datos se notificaron como media ± DE, artesunato frente a glucantime/alopurinol (prueba de Mann-Whitney) 30, 90 y 180 días después de los tratamientos.

Descripción detallada de la invención

Las referencias a los métodos de tratamiento en esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.

Como se ilustra en los ejemplos, los inventores han demostrado que el artesunato era más seguro y eficaz para controlar y reducir los signos clínicos de la leishmaniosis, la carga parasitaria y los anticuerpos que el antimoniato de meglumina/alopurinol en perros.

Por tanto, la presente invención se refiere al artesunato o una sal del mismo o a una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro. La invención se refiere además a una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y a un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis canina. (CanL). La invención también se refiere a una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis canina en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum.En una realización particular, la leishmaniosis es leishmaniosis visceral. En una realización particular adicional, la leishmaniosis canina (CanL) es leishmaniosis canina visceral.

La invención se refiere además a un método para tratar la leishmaniosis en un perro, que comprende administrar una cantidad eficaz de artesunato o una sal del mismo, o una composición veterinaria que comprende el mismo, en un perro, preferiblemente en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum.La invención también se refiere al uso de artesunato o una sal del mismo para la fabricación de una composición farmacéutica para prevenir y/o tratar la leishmaniosis en un perro, preferiblemente en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum.

El artesunato es un peróxido orgánico de tipo sesquiterpeno y, más particularmente, un derivado semisintético del grupo de la artemisinina que tiene la siguiente fórmula:

El artesunato se administra actualmente por vía intramuscular, intravenosa u oral (por vía oral) como tratamiento de primera línea para la malaria grave. Por ejemplo, se usa en productos combinados comercializados por Denk pharma con otros agentes antipalúdicos, a saber, pirimetamina y sulfametoxipirazina, o amodiaquina.

En el contexto de la invención, las sales de artesunato corresponden a sus sales farmacéuticamente aceptables. Una sal farmacéuticamente aceptable incluyen sales de ácido inorgánico, así como sales de ácido orgánico. Los ejemplos representativos de ácidos inorgánicos adecuados incluyen clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, fosfórico y similares. Los ejemplos representativos de ácidos orgánicos adecuados incluyen ácido fórmico, acético, tricloroacético, propiónico, benzoico, cinámico, fumárico, maleico, metanosulfónico y similares.

Tal como se usa en la presente memoria, la expresión “ dosis eficaz” o “ cantidad eficaz” o “ dosis terapéuticamente eficaz” significa la dosis o la cantidad suficiente para prevenir y/o tratar una leishmaniosis. Un experto en la técnica de adaptar la “ dosis eficaz” o la “ cantidad eficaz” o la “ dosis terapéuticamente eficaz” según la gravedad de la leishmaniosis y la salud general del perro.

En una realización particular, la composición veterinaria para su uso según la invención comprende una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre 0,1 y 100 mg/kg de peso corporal/día, preferiblemente entre 1 y 50 mg/kg de peso corporal/día, 10 y 40 mg/kg de peso corporal/día, más preferiblemente entre 20 y 30 mg/kg de peso corporal/día. “ BW” significa “ peso corporal” . En una realización preferida, la dosis terapéuticamente eficaz está comprendida entre 21 y 29 mg/kg de peso corporal/día, 22 y 28 mg/kg de peso corporal/día, 23 y 27 mg/kg de peso corporal/día y 24 y 26 mg/kg de peso corporal/día. En una realización más preferida, la dosis terapéuticamente eficaz es de 25 mg/kg de peso corporal/día.

La composición veterinaria se puede administrar una o varias tomas al día, preferiblemente, una o dos tomas al día, más preferiblemente una toma al día. Un objeto preferido de la invención es, por tanto, una composición veterinaria para su uso, en donde la composición veterinaria se administra en una sola dosis diaria o en una sola toma diaria.

El tratamiento tal como se define en la presente memoria se puede aplicar cada día durante un período limitado, por ejemplo, un mes (o 30 días), y preferiblemente durante un período corto de 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 día. En una realización particular, la composición veterinaria para su uso según la invención se administra durante al menos 6 días, preferiblemente de 6 a 10 días, de 6 a 9 días, de 6 a 8, más preferiblemente durante 6 días. Preferiblemente, un periodo definido por un número de días de X a Y significa que el tratamiento se aplica en un mínimo de X días y un máximo de Y días. En otras palabras, el tratamiento se aplica durante al menos X días y como máximo Y días.

Tal como se usa en la presente memoria, un “ excipiente farmacéuticamente aceptable” o un “ excipiente aceptable desde el punto de vista veterinario” es un ingrediente o un compuesto usado convencionalmente en el campo farmacéutico o veterinario para la preparación de composiciones y formulaciones farmacéuticas o veterinarias según la vía de administración. Preferiblemente, dicho excipiente aceptable no tiene un efecto terapéutico. Sin limitación, un excipiente aceptable desde el punto de vista farmacéutico o veterinario incluye agentes tamponantes, conservantes, antioxidantes, diluyentes, estabilizantes, agentes de tonicidad, agentes de solubilización, agentes de suspensión, surfactantes, lubricantes y disolventes.

Sin limitación, los ejemplos de disolventes son propilenglicol, etanol, jarabe de sorbitol, agua, aceites vegetales o combinaciones de los mismos, y similares. Los ejemplos de agentes amortiguadores son el fosfato de calcio, el bicarbonato de sodio, el fosfato de sodio, el lactato de sodio, el citrato de sodio o combinaciones de los mismos, y similares. Los ejemplos de agentes de suspensión incluyen metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, polisorbato 80, hidroxietilcelulosa, hidroxicelulosa, goma xantana, carboximetilcelulosa de sodio y monolaurato de sorbitán polietoxilado, o combinaciones de los mismos, y similares. Los ejemplos de estabilizantes incluyen sulfito de sodio, metalsulfito de sodio y éter. Ejemplos de agentes de tonicidad son manitol, cloruro de sodio, citrato de sodio, glicerina, lactosa, manitol, cloruro de sodio, dextrosa, sulfato de sodio, sorbitol o combinaciones de los mismos, y similares. Ejemplos de conservantes son p-hidroxibenzoato de etilo, p-hidroxibenzoato de w-propilo, p-hidroxibenzoato de metilo, ácido sórbico, fenol, cresol, clorocresol, ácido benzoico o sales de los mismos, metabisulfito de sodio, benzoato de sodio, cloruro de bencetonio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de benzalconio, acetato de sodio, parabenos y sales de los mismos, sacarosa o combinaciones de los mismos, y similares. Los ejemplos de agentes de solubilización incluyen aceite de ricino solidificado con polioxietileno, polisorbato 80, nicotinamida, monolaurato de sorbitán polietoxilado, macrogol y éster etílico de ácido graso de aceite de casta, o combinaciones de los mismos, y similares. Ejemplos de diluyentes son carbonato de calcio, fosfato de calcio, caolín, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de sodio, lactosa monohidratada o combinaciones de los mismos, y similares. Los ejemplos de antioxidantes incluyen: ácido ascórbico (vitamina C) o sales del mismo, ácido cítrico o sales del mismo, ácido málico, monotioglicerol, ácido fumárico, ácido fosfórico, metabisulfito de sodio, metabisulfito de potasio, ácido propiónico, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, metabisulfito de potasio, vitamina E (tocoferol), acetona, cisteína, gentísico etanolamina ácida, glutamato monosódico, formaldehído sulfoxilato sódico o combinaciones de los mismos, y similares. Los ejemplos de lubricantes incluyen aceites, ceras, ácido esteárico, estearatos (estearato de magnesio, estearato de calcio...), talco, ácidos grasos de cadena larga, polietilenglicol, ácido palmítico, aceites vegetales hidrogenados, estearilfumarato de sodio, benzoato de sodio y mezclas de los mismos. Los ejemplos de surfactantes incluyen poloxámero, polisorbato, polioxietileno (aceite de ricino hidrogenado...) y mezclas de los mismos.

La composición veterinaria para su uso según la invención puede administrarse al perro por cualquier vía, tal como la vía oral, la vía parenteral, incluida la inyección intramuscular y subcutánea, y la vía tópica. En una realización preferida, la composición veterinaria se administra por vía oral. Dicha administración oral es más conveniente para el usuario (propietario del perro o el veterinario) en comparación con la administración inyectable de antimoniato de meglumina utilizada en el tratamiento de referencia con alopurinol.

La composición veterinaria para su uso según la invención se puede formular en cualquier forma, tal como una forma de una solución líquida, suspensión, sólida o semisólida, polvo, gránulo, píldora recubierta de azúcar, cápsula, aerosol, pastilla, comprimido, pasta, implante o gel. Para una administración oral, se prefieren una solución líquida, una suspensión, un polvo sólido o semisólido, un masticable, un gránulo, una pastilla recubierta de azúcar o un comprimido. En una realización más preferida, la composición veterinaria para su uso según la invención es un comprimido. Un comprimido adecuado para implementar la invención es el comprimido de artesunato comercializado con la marca comercial AsunateDenk®.

Para una formulación en un comprimido o un gránulo adecuado para una administración oral, se pueden usar lactosa monohidratada, estearato de magnesio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, crospovidona, aromas y azúcares compresibles como excipientes, en un disolvente.

Un objeto preferido de la invención es una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum,en donde dicha composición veterinaria se administra a dicho perro infectado por vía oral en una dosis diaria única de 25 mg/kg de peso corporal/día durante 6 días. Otro objeto preferido de la invención es un método para tratar la leishmaniosis en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantumque comprende administrar por vía oral a dicho perro una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en una dosis diaria única de 25 mg/kg de peso corporal/día durante 6 días.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “tratamiento” o “ que trata” se refiere a cualquier acto destinado a mejorar el estado de salud de dicho perro, como la terapia, la prevención, la profilaxis, el retraso y la limitación del desarrollo de la leishmaniosis, tal como se describe en la presente memoria. En determinadas realizaciones, dicho término se refiere a la mejora o erradicación de la leishmaniosis debida a una infestación parasitaria, tal como laLeishmania infantum,o a los síntomas asociados con dicha enfermedad. En otras realizaciones, este término se refiere a minimizar la propagación o el empeoramiento de la leishmaniosis debido a la infestación parasitaria resultante de la administración de las composiciones descritas en la presente memoria a un perro infestado.

El término “ tratamiento” o “ que trata” también incluye el tratamiento preventivo de un perro contra la leishmaniosis debida a una infestación de parásitos, que designa un tratamiento realizado antes de que el perro haya estado expuesto o en contacto con el agente causante de la enfermedad, como un parásito, o después de dicha exposición/contacto, pero antes de la aparición de los síntomas o en una fase temprana del desarrollo de la enfermedad debido a una infestación de parásitos. En una realización particular, el término “ tratamiento” o “ que trata” designa la protección de un perro contra la leishmaniosis, por ejemplo, contra el efecto de una exposición al agente causante, o contra el desarrollo de la leishmaniosis en perros expuestos. La invención es particularmente adecuada para proteger a los perros contra la leishmaniosis debida a una infección o infestación parasitaria. Un objeto de la invención es, por tanto, un método para proteger a un perro contra la leishmaniosis, que comprende administrar una cantidad eficaz o una dosis eficaz de una composición veterinaria tal como se describe en la presente memoria en un perro.

El término “ tratamiento” o “ que trata” también incluye el alivio de los síntomas, como la disminución de los síntomas clínicos o las manifestaciones clínicas, como las afecciones generales, en particular la emaciación, la anorexia, la apatía, la anemia y la hipertermia, los signos cutáneos, en particular la alopecia localizada, el prurito, la escamosa, la hiperqueratosis, la onicogrifosis y las úlceras, las lesiones viscerales, en particular la linfadenopatía, esplenomegalia, hepatomegalia y trastornos renales, afecciones oftálmicas, en particular la depilación alrededor de los ojos “ con anteojos” , conjuntivitis mucopurulenta, queratitis y/o uveítis, afecciones orales, en particular erosiones orales, afecciones esqueléticas, en particular artritis, sinovitis y dolor difuso del tren posterior, y otras afecciones como la epistaxis, la diarrea crónica y los signos neurológicos. Otros síntomas son la carga sanguínea de parásitos y anticuerpos, más particularmente la carga sanguínea deLeishmania infantumy anticuerpos deLeishmania infantum.

Otro objeto de la invención es una composición veterinaria para su uso, tal como se define en la presente memoria, para controlar los signos clínicos de la leishmaniosis. Un objeto adicional es un método para controlar los signos clínicos de la leishmaniosis en un perro que comprende administrar una composición veterinaria tal como se define en la presente memoria.

Otro objeto de la invención es una composición veterinaria para su uso, tal como se define en la presente memoria, para controlar la carga sanguínea deLeishmania infantum.Un objeto adicional es un método para controlar la carga sanguínea deLeishmania infantumen un perro que comprende administrar una composición veterinaria tal como se define en la presente memoria.

Otro objeto de la invención es una composición veterinaria para su uso como se define en la presente memoria para controlar los anticuerpos contraLeishmania infantum.Un objeto adicional es un método para controlar los anticuerpos contraLeishmania infantumen un perro que comprende administrar una composición veterinaria tal como se define en la presente memoria.

Tal como se usa en la presente memoria, los términos “ controlar” y “ que controla” significan, sin limitación, reducir, limitar el desarrollo, erradicar, disminuir y eliminar. En una realización particular, dichos términos significan un tratamiento profiláctico de perros infectados, previniendo así las infecciones humanas porL. infantum.

Tal como se usa en la presente memoria, el término “ comprende(n)” o “ que comprende” (y otros términos comparables, por ejemplo, “ que contiene” y “ que incluye” ) es “ abierto” y, en general, puede interpretarse de manera que se incluyan todas las características mencionadas específicamente y cualquier característica opcional, adicional y no especificada. Según realizaciones específicas, también puede interpretarse como la frase “ que consiste esencialmente en” , en la que se incluyen las características especificadas y cualquier característica opcional, adicional y no especificada que no afecte materialmente a las características básicas y novedosas de la invención reivindicada, o la frase “ que consiste en” , donde solo se incluyen las características especificadas, a menos que se indique lo contrario.

Por tanto, la composición veterinaria puede comprender además al menos un agente antiparasitario. Estos agentes antiparasitarios comprenden en particular reguladores del crecimiento de insectos, pesticidas antibióticos, pesticidas botánicos, compuestos organofosforados, carbamatos, amidinas, compuestos organoclorados, compuestos de fenilpirazol, piretroides, bencilureas, piretrinoides, formamidinas, semicarbazonas, neonicotinoides, diamidas, espinosinas, isoxazolinas, pesticidas que contienen cobre, agentes antihelmínticos, bencimidazoles, probenzimidazoles, salicilanilidas, imidazotiazoles, derivados del aminoacetonitrilo (AAD), espiroindoles, pirimidinas, fenoles sustituidos, y anticoccidiales.

Por ejemplo, el regulador del crecimiento de los insectos puede ser un inhibidor de la síntesis de quitina o una hormona de crecimiento juvenil sinóptica, tal como azadiractina, bistriflurón, diofenolano, fenoxicarb, hidropreno, kinopreno, metopreno, piriproxifeno, tetrahidroazadiractina, clorfluazurón, ciromazina, diflubenzurón, fluazurón, fluciclociclón xurón, flufenoxurón, hexaflumurón, lufenurón, novalurón, noviflumurón, tebufenozida, teflubenzurón o triflumurón. El pesticida antibiótico puede ser una toxina deBacillus thuringiensis subsp. israelensis.Los pesticidas botánicos pueden ser d-limoneno, timol, geraniol, linalol, carvacrol, nicotina, ryania o piretrinas. Los compuestos organofosforados se pueden elegir entre dicrotofos, terbufos, dimetoato, diazinón, disulfotón, triclorfón, azinfos-metilo, clorpirifos, malatión, oxidemetón-metilo, metamidofos, acefato, etil-paratión, paratión-metilo, mevinfos, forato, carbofenos. tión, fosalona, naftalofos o piraclofos. Los carbamatos se pueden elegir de carbaril, carbofurano, aldicarb o carbofurano. Los compuestos organoclorados se pueden elegir de metoxicloro, dicofol o un ciclodieno tal como el endosulfán. Los piretrinoides se pueden elegir de aletrina, resmetrina, permetrina, flumetrina, deltametrina y cipermetrina. Un ejemplo de formamidas es amitraz. Un ejemplo de semicarbazonas es metaflumizona. Los neonicotinoides se pueden elegir de imidacloprid, nitenpiram o dinotefurano. El pesticida que contiene cobre puede ser cobre (II) o un hidróxido o sulfato de oxicloruro de cobre, a saber (Cu2Cl(OH)3) mezclado con (Cu4(OH)6(SO4)). El agente antihelmíntico se puede elegir de una lactona macrocíclica tal como una avermectina (por ejemplo, ivermectina y moxidectina) o una milbemicina (por ejemplo, milbemicina oxima). Los bencimidazoles pueden ser albendazol o tiabendazol. Las salicilanilidas pueden ser closantel u oxiclozanida. El levamisol puede ser uno de los imidazotiazoles. El pirantel puede ser una de las pirimidinas. El nitroxinil puede ser uno de los fenoles sustituidos. El fipronil puede ser uno de los fenilpirazoles. Las isoxazolinas pueden ser 4-{5-[3-cloro-5- (trifluorometil)fenil]-5-(trifluorometil)-4,5-dihidroisoxazol-3-il}-N-{2-oxo-2-[(2,2,2-trifluoroetil)amino]etil}naftaleno-1-carboxamida (afoxolaner), 4-[5-(3,5-diclorofenol)il)-5-(trifluorometil)-4,5-dihidro-1,2-oxazol-3-il]-2-metil-N-{2-oxo-2-[(2,2,2-trifluoroetil)amino]etil}benzamida (fluranaler) o N-{2-cloro-{5-(3,5-diclorofenil)-5-trifluorometil-4,5-dihidroisoxazol-3-yeencilo}ciclopropanocarboxílico.

Las distintas clases de parásitos y clases de agentes antiparasitarios, así como los agentes activos vendidos, se pueden encontrar en el sitio web de parasitipedia en la siguiente dirección: http://parasitipedia.net/; y en el sitio web del European Scientific Counsel Companion Animal Parasite (ESCCA), en la siguiente dirección: http://www.esccap.org/.

Otro objeto de la invención es un kit que comprende un primer compartimento que comprende artesunato o una sal del mismo, y un segundo compartimento que comprende al menos un agente antiparasitario tal como se define en la presente memoria como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial, en particular para prevenir y/o tratar la leishmaniosis en un perro. En una realización particular, el kit comprende un aviso o una guía de instrucciones.

Tal como se usa en la presente memoria, los términos “ separado” o “ secuencial” significan que el artesunato o una sal del mismo y el al menos un agente antiparasitario se administran sucesivamente. Por ejemplo, el artesunato o una sal del mismo se administra en primer lugar en un perro, y el al menos un agente antiparasitario se administra en segundo lugar en el mismo perro, o viceversa. En este contexto, el artesunato o una sal del mismo y el al menos un agente antiparasitario son físicamente lo suficientemente distintos de ser administrables por separado o secuencialmente.

En otro aspecto, la composición veterinaria para su uso según la invención no comprende ningún otro agente antiparasitario. Según esta realización, el artesunato es el único ingrediente activo contra la leishmaniosis en la composición veterinaria. Un objeto adicional de la invención es, por tanto, una composición veterinaria que consiste esencialmente en artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro. Un objeto adicional de la invención es una composición veterinaria que consiste en artesunato o una sal del mismo como único ingrediente activo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro.

Otros aspectos y ventajas de la invención se describirán en la siguiente sección experimental. Los ejemplos siguientes ilustran la presente invención y se proporcionan como ilustraciones no limitantes.

Ejemplos

Material y métodos

Declaración ética

El protocolo del estudio también fue aprobado por el colegio científico (Procés-Verbal du CSI N°6, 2018) del Instituto de Ciencias Veterinarias de la Universidad Constantine 1, Argelia. Para facilitar el trabajo de campo, se establecieron colaboraciones con los médicos veterinarios y sus asistentes que trabajan en estos establecimientos. Todos los dueños de perros dieron su consentimiento informado verbal y las muestras fueron recolectadas por un especialista veterinario. La evaluación del riesgo también fue presentada y aprobada por el comité ético y la junta de decisión de los veterinarios de las wilayas del norte de Argelia. Estas instituciones están afiliadas al Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural de Argelia (Directions des Services Vétérinaires).

Estudio

Se trataba de un ensayo clínico comparativo de campo, aleatorizado y abierto, realizado en el norte de Argelia. La prevalencia observada en esta área fue del 36 %. Se inscribieron perros propiedad de clientes de cualquier edad, raza o género y 11 veterinarios fueron responsables del monitoreo. Todos los perros habían sido infectados previamente de manera natural porL. infantumy presentaban signos clínicos. Los perros fueron monitorizados exhaustivamente y, si se observaba una alteración clínica, se podía cambiar el tratamiento por antimoniato de meglumina/alopurinol a petición del propietario. Se inscribieron un total de 187 perros para CanL. Entre ellos, se seleccionaron para este estudio 42 perros adultos enfermos (30 machos y 12 hembras), con una edad media de 3,8 años (mínimo = 1, máximo = 11 años), con un peso de entre 3 y 37 kg y de diferentes razas (8 pastores alemanes, 1 pastor belga malinois, 2 sloughi, 5 pointer, 6 bracos, 1 bagnole, 1 bastón americano, 1 beagle y 17 mestizos).

Criterios de inclusión, exclusión y eficacia

Los principales criterios de inclusión fueron: i) perros con al menos dos manifestaciones clínicas relacionadas con la CanL, tal como se detalla en la siguiente tabla 1) y ii) perros con serología positiva paraLeishmaniamediante la prueba rápida cualitativa de base inmunocromatográfica WITNESS®Leishmania(Zoetis, Francia) y/o la prueba cuantitativa de anticuerpos de inmunofluorescencia indirecta (IFAT> 100) o un resultado de PCR positivo obtenido en sangre.

Se excluyeron los perros con alteraciones significativas de la función renal y/o hepática o con otras enfermedades infecciosas. Se excluyeron los perros que padecían una enfermedad concomitante que pudiera interferir con la evaluación de la respuesta al tratamiento, si habían sido vacunados o tratados con un leishmanicida durante 3 meses o con un leishmanicida durante 1 mes antes de la inclusión. Por último, no se permitió ningún tratamiento previo con antibióticos o antimicóticos sistémicos dentro de los 7 días o con corticosteroides sistémicos de acción prolongada dentro del mes anterior a la preinclusión. Se excluyeron las perras gestantes y lactantes. Los perros pueden retirarse del estudio en cualquier momento si muestran intolerancia al tratamiento o si lo solicita el propietario.

Los criterios de eficacia se determinaron reduciendo las puntuaciones clínicas (es decir, la suma de las puntuaciones clínicas era inferior a la de antes del tratamiento) y disminuyendo los títulos de anticuerpos específicos contra laLeishmaniay el ADN del parásito. La puntuación se definió según la gravedad de cada signo clínico y el valor final se obtuvo de la suma de todos los valores (tabla 1). La carga parasitaria cuantitativa se estimó mediante qPCR y los títulos de anticuerpos mediante IFAT cuantitativa.

Tabla 1: Signos clínicos relacionados con la CanL definidos para evaluar las puntuaciones clínicas de los perros.

Síntomas Número de Manifestaciones clínicas

signos

Condiciones generales5 Adelgazamiento, anorexia, abatimiento, anemia, hipertermiaSignos cutáneos6 Alopecia localizada, prurito, escamosa, hiperqueratosis, onicogrifosa, úlceras

Lesiones viscerales4 Linfadenopatía, esplenomegalia, hepatomegalia, trastornos renalesNivel oftálmico4 Depilación alrededor de los ojos “ con gafas” , conjuntivitis mucopurulenta, queratitis y/o uveítis

Nivel oral1 Erosiones orales

Nivel esquelético3 Artritis, sinovitis, dolor difuso del tren posterior

Otros3 Epistaxis, diarrea crónica, signos neurológicos

A cada manifestación se le asignó una puntuación de gravedad que oscilaba entre 0 y 3, donde 0 = ninguna, 1 = leve, 2 = moderada y 3 = grave (puntuación clínica total máxima = 21). La mortalidad relacionada con la CanL se evaluó mediante la puntuación más alta (22).

Diseño experimental

Los perros seleccionados se incluyeron al azar en uno de los dos brazos de tratamiento. Perros (N = 26) en elgrupo 1:(control positivo) recibió 100 mg/kg de antimoniato de meglumina (Glucantime ®, Merial, Francia) diariamente durante 28 días por vía subcutánea y 30 mg/kg de alopurinol (Allopurinol Arraw® 300 mg, Francia) por vía oral todos los días durante un mes. Perros (N = 16) en elgrupo 2:(quimioterapia de la invención) recibió 25 mg/kg de artesunato (Asu-Denk®; Denk Pharma, Alemania) por vía oral durante 6 días. Después de cada administración, se observó a los perros durante 30 minutos para controlar la reactividad, los vómitos y/o la regurgitación para garantizar la absorción completa del fármaco. Los perros fueron seguidos durante 180 días (figura 1).

Calendario de visitas y recogida de muestras

Los animales se examinaron los días D0, D+30, D+90 y D+180 después de que el tratamiento hubiera comenzado y se recogieron muestras de sangre en cada punto temporal. En estos puntos se evaluaron y monitorizaron los signos clínicos y las lesiones asociadas a la leishmaniosis, el estado de la infección (carga parasitaria-qPCR y la serología).

Evaluación clínica

La eficacia de los tratamientos se evaluó en cada punto temporal en función de la respuesta clínica al tratamiento (evolución de las puntuaciones clínicas a lo largo del tiempo y el porcentaje de reducción de la puntuación clínica total). Para cada perro, el mismo veterinario realizó todas las evaluaciones clínicas para mantener la coherencia. Las puntuaciones clínicas se clasificaron según la gravedad de los signos clínicos enumerados en la tabla 1. La mortalidad por CanL constituye la puntuación más alta (22). El porcentaje de reducción se calculó según la fórmula:

Porcentaje de reducción de CS %= (CS en D+XX- CS en D+0)/ CS en D+0) x 100

Carga de parásitos mediante qPCR

Las muestras de sangre recogidas en cada punto temporal se analizaron para cuantificar la carga parasitaria mediante qPCR usando cebadores y sondas para la detección y cuantificación del ADN deL. infantum,que selecciona como diana una región conservada del ADN del minicírculo (kDNA) del cinetoplasto (secuencia repetida varias 1000 veces). Antes de la extracción del ADN, se digirieron 200 ml de sangre con proteinasa K y se incubaron a 56 °C durante la noche. La extracción se realizó usando un kit de extracción de<a>D<n>comercial (QIAamp DNA Mini Kit®, [Qiagen, Courtaboeuf, Francia]) y se realizó en BIOROBOT EZ1 (Qiagen, Qiagen, Courtaboeuf, Francia) según las instrucciones del fabricante. El ADN se eluyó en 200 pl de agua destilada y se almacenó a -20 °C hasta su análisis. Se preparó la qPCR y se realizó de la siguiente manera: El volumen final de 20 pl que contenía 10 pl de Eurogentec Master Mix Roche (Eurogentec, Lieja, Bélgica), 0,5 mM de cada cebador y la sonda, 0,5 pl de u Dg , 3 pl de agua destilada libre de ADNasa y ARNasa y 5 pl de la muestra de ADN, se amplificó en un sistema CFX96 Real-Time (BioRad Laboratories, Foster City, CA, EE. UU.) usando el siguiente perfil térmico: una etapa de incubación a 50 °C durante dos minutos y una etapa de desnaturalización inicial a 95 °C durante tres minutos, seguida de 40 ciclos de desnaturalización a 95 °C durante 15 segundos y extensión de hibridación a 60 °C durante 30 segundos. La cuantificación se basó en una curva de calibración que consistía en una dilución en serie de 8 veces del plásmido de 108 copias de ADN/ml de la región de kDNA, equivalente a 10000 parásitos/ml; se introdujeron en los tubos de reacción 5 pl de diluciones seriadas que oscilaban entre 10000 y 0,001 parásitos/ml. Los resultados se expresaron como el número de parásitos deLeishmaniapresentes en 1 ml de sangre, teniendo en cuenta el volumen (200 pl de sangre) y la elución (200 pl) introducidos durante el proceso de extracción.

Monitorización serológica

El día 0, se realizó la prueba rápida cualitativa basada en inmunocromatografía WITNESS®Leishmania(Zoetis, Francia) según las instrucciones del fabricante utilizando una gota (10 pl) de sangre entera de cada perro directamente después del muestreo. Se realizó IFAT cuantitativa para la titulación de inmunoglobulinas G (IgG) específicas anti-L.infantumen sueros para el monitoreo como se describió anteriormente. En resumen, los pocillos de las placas se sensibilizaron con 20 pl de antígenos comerciales deL. infantum(Zoetis, Francia). Después la dilución a 1:50, se aplicaron 20 pl de cada dilución de suero por pocillo y las placas se incubaron durante 30 minutos a 37 °C. Las placas se lavaron dos veces con PBS durante 5 minutos y una vez con agua destilada. Se añadieron a cada pocillo 20 pl de IgG antiperro conjugado con isotiacianato de fluoresceína (FITC) (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE. UU.). Las placas se incubaron durante 30 minutos a 37 °C en la oscuridad. Después de otra etapa de lavado, se añadieron algunas gotas de medio de montaje en las fundas de la cubierta y se realizó la lectura. Para evitar errores de observación, todas las muestras fueron examinadas por dos investigadores diferentes y se añadieron controles positivos y negativos en cada placa. Todas las muestras negativas a 1:50 se consideraron negativas. Los resultados positivos se investigaron más a fondo utilizando una dilución en serie de cinco veces con IFAT de 1:100 a 1:1600. En este punto, las muestras se clasificaron como altamente positivas paraL. infantum(> 1:1600).

Análisis de datos

Para el análisis estadístico se usó la versión 2018.7 de XLSTAT Addinsoft. Se realizó un análisis descriptivo de los datos según la naturaleza de las variables para cada visita de seguimiento y tratamiento asignado. Se usó la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis/bilateral para comparar los promedios tomados en los puntos temporales de evaluación para ambos grupos, el grupo 1 y el grupo 2 únicamente. Se utilizó una comparación múltiple por pares siguiendo el procedimiento de prueba Dunn/bilateral para los títulos de CS, parasitemia y anticuerpos. Los efectos del tratamiento se compararon entre los dos grupos mediante el análisis del porcentaje de reducción de los signos clínicos, la carga parasitaria y los anticuerpos contra la leishmania. La prueba de Mann-Whitney se utilizó para comparar la eficacia de los tratamientos utilizando la diferencia entre D0 y D+30 días, D0 y D+90 días y D0 y D+180 días. El nivel de significación utilizado para las pruebas fue del 5 % (Nivel de significación corregido de Bonferroni: 0,0083).

Resultados

Perros incluidos y monitoreo

No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en cuanto a la edad, el sexo, la raza (mestizo o reproductor), el estado clínico de los perros, las medias de parasitemia y los títulos de anticuerpos contra la leishmania entre los dos grupos el día de la inclusión (valor P > 0,05).

Los exámenes clínicos de los perros seleccionados revelaron la presencia de signos generales en el 92,85 % (39/42), cutáneos en el 83,33 % (35/42), viscerales en el 38,1 % (16/42), oftálmicos en el 23,8 % (10/42) y musculoesqueléticos en el 4,76 % (2/42). Un perro (2,30 %) presentó una erosión oral, otro presentó epistaxis y dos perros (4,76 %) tenían trastornos neurológicos.

Tabla 2: Características de los perros asignados a cada grupo de tratamiento y datos del análisis de homogeneidad, expresados como media ± desviación estándar y frecuencias (%)

Variable Grupo experimental (n = Grupo experimental (n = 16)

26)

Edad, año3,71 ± 2,11 3,94 ± 1,45

(mín- máx) (1- 11) (2,5- 8)

Sexo, masculino (%)17 (65,39) 13 (81,25)

Raza

Criador (%) 17 (65,39) 8 (50)

Mestizo (%) 9 (34,61) 8 (50)

Puntuación clínica:puntos 7,46 ± 4,04 6,67 ± 2,30

(mín- máx) (3- 20) (3- 11)

N.° de positivos por PCR (%)7 (26,92) 5 (31,25)

Parasitemia mediante qPCR (Leish/ml)1108,72 ± 4154,5 78,04 ± 98,98

(mín- máx) (0- 21000) (0- 233)

N°. PCR positiva (%*) 7 (26,92) 5 (25)

Títulos de anticuerpos contra la leishmania,476,92 ± 448,38 390,62 ± (507,35)

IFAT:

(mín- máx) (100- 1600) (50- 1600)

%*: (Número de positivos por PCR/número de positivos totales) x 100.

El análisis estadístico se realizó en 42 perros, ya que un perro del grupo 2 se perdió para el seguimiento antes del punto temporal D+30. Durante los 6 meses de seguimiento, cuatro perros del grupo 1 perdieron el seguimiento dos meses después del inicio de los tratamientos, dos de ellos debido a que los clientes no regresaron para las últimas visitas los días D+90 y D+180. Otros dos por causa de muerte no relacionada con el CanL. Además, seis perros murieron en el periodo comprendido entre el D+60 después del inicio de los tratamientos y antes de la visita D+90, con un aumento de los signos clínicos relacionados con la CanL. Cuatro de ellos estaban en el grupo 1 y dos en el grupo 2 (figura 1).

Resultado clínico

En general, se observó una mejora de las puntuaciones clínicas totales en ambos grupos de tratamiento a lo largo del estudio en comparación con la puntuación clínica inicial. Dado al resultado de mortalidad la puntuación más alta (22), la media de las puntuaciones clínicas disminuyó con el tiempo de 7,16 ± 3,47 en D0 a 4,24 ± 4,37 en la visita D+ 30, volvió a aumentar un poco en D+ 90 (5,75 ± 8,25), pero se mantienen inferiores a D0 y se mantienen constantes (5,60 ± 8,35) después de eso en D+ 180. Se observó la misma cinética de las puntuaciones clínicas en los dos grupos por separado (figura 2).

Si se toma la puntuación clínica (CS) en D0 y D+30 como punto inicial y final, respectivamente, el porcentaje medio de reducción de la puntuación clínica fue del 43,3 o más del 47,8 %. En cada momento: D+30, D+90 y D+180, se observó una diferencia estadísticamente significativa (p<0,0001) para el porcentaje medio de reducción de la puntuación clínica entre los dos grupos. Se han observado más mejoras en el grupo 2 (artesunato) que en el grupo 1 (Glucantime®/alopurinol) (figura 3). En cuanto a las respuestas individuales, aproximadamente el 26,66 % (4/15) de los perros del grupo 2 se recuperaron por completo (CS de 0) frente al 18,18 (4/22) del grupo 1, mientras que aproximadamente la mitad de los perros mostraron una mejoría parcial a los 6 meses de seguimiento en ambos grupos, con 54. 54 % (12/22) y 46,66 (7/15) en el grupo de control y artesunato, respectivamente. En D+180, las tasas de agravamiento clínico fueron muy similares en ambos grupos, con un 27,27 % (6/22), incluido el 18,18 % (4/22) de mortalidad en el grupo de control, frente al 26,66 % (4/15) de agravamiento, incluido el 13,33 % (2/15) de mortalidad en el grupo de artesunato. Los detalles sobre los cambios clínicos a lo largo del tiempo en los perros seguidos se describen en la tabla 3.

Acontecimientos adversos

No se notificaron efectos secundarios importantes relacionados con estos tratamientos en ningún perro. Ambos compuestos del estudio se toleraron bien en todos los perros, excepto en dos perros que tenían dolores locales leves y prurito, después de 15 días de tratamiento con Glucantime®/ alopurinol.

Tabla 3: Cambios clínicos individuales en perros a lo largo del tiempo.

GRUPOS VISITA MEJORA MEJORA SIN AGRAVAMIENTO (%)

COMPLETA (%) PARCIAL (%) CAMBIOS

(%)

GRUPO COND+30(n=15) - 12 (80) - 3 (20)ARTESUNATOD+90 (n=15) 3 (20) 8 (53,33) 1 (6,66) 3 (20)

D+180 (n=15) 4 (26,66) 7 (46,66) - 4 (26,66)

GRUPO COND+30 (n=26) 2 (7,69) 17 (65,38) 1 (3,84) 6 (23,07)GLUCANTIME/

ALOPURINOLD+90 (n=23) 3(13,(4) 13 (56,52) 1 (4,34) 6 (26,08)

D+180 (n=22) 4 (18,18) 12 (54,54) - 6 (2727)

TOTAL DE PERROSD+30(N=41) 2 (4,87) 29 (70,73) 1 (2,44) 9 (21,91)

D+90(N=38) 6 (15,79) 21 (5526) 2(526) 9 (23,68) D+180(N=37) 8 (21,62) 19 (51,35) - 10 (27,02) Se incluyó la mortalidad relacionada con la CanL.

Parasitemia cinética cuantitativa por PCR en tiempo real

En el D0, 12/42 (28,5 %) de los perros dieron positivo por qPCR en sangre. Se observó una eliminación parasitaria con el tiempo tras el tratamiento con artesunato y todos los perros inicialmente positivos (5/5) resultaron ser negativos para laLeishmania.Mientras que 6/7 perros con PCR positivos tratados con Glucantime®/alopurinol resultaron negativos y 1/7 perros permanecieron positivos. Además, dos perros tratados con Glucantime®/alopurinol dieron positivo, mientras que antes habían sido negativos. La evolución individual de la parasitemia durante el seguimiento se muestra en la tabla 4.

Tabla 4. Carga de parásitos, número de parásitos por ml de sangre y porcentaje de reducción a lo largo del tiempo.

Identificación Tratamiento Parasitemia n.° Leish/ml de sangre (% de reducción)

del perro

D0 D+30 D+ 90 D+ 180

13Glucantime/ Alopurinol 1500 288,7 (80,75) 30,28 (97,98) 357 (76,2)

50 0 (0,00) 176 (-100) * 177 (-100) *A11N120 46,6 (-100)* N/A* N/A*Identificación Tratamiento Parasitemia n.° Leish/ml de sangre(%de reducción) del perro

D0 D+30 D+ 90 D+ 180

S262400 19,8 (99,18) 2 (99,92) 0 (100)

S273800 0 (100) 0 (100) 0 (100)

S3321000 0 (100) 0 (100) N

S547,7 0 (100) 0 (100) N

C4P2G2101 16,2 (83,96) 0 (100) 0 (100)

C1G2P418 0 (100) 0 (100) 0 (100)

10Artesunato 6,8 0 (100) 0 (100) 0 (100)

S5017,4 14 (19,54) 29 (-66,67) 0 (100)

A9N9122 44 (63,93) N N

T11 C2P1233 1,7 (99,27) 0 (100) 0 (100)

A8 N811 0,17 (98,45) 0 (100) 0 (100)

Todos los demás perros fueron negativos y permanecieron negativos durante todo el seguimiento.

N/A*: Mortalidad relacionada con la CanL

N/A: Perdido en el seguimiento

Estado serológico

Inicialmente, todos los perros dieron positivo tanto en la prueba Witness® como en la IFAT y no se observaron diferencias significativas (P > 0,05) entre los grupos. La media de los títulos de anticuerpos contra laLeishmaniadisminuyó con el tiempo (media ± DE, 444,05 ± 467,50 en D0, 181,25 ± 234,71 en D+ 30, 120,69 ± 298,36 en D+ 90 y 118,97 ± 297,73 en D+ 180) después de los tratamientos (figura 4). Se observaron reducciones significativas en comparación con los valores basales (P < 0,012, serología IFAT) en ambos grupos a los 30 días (media ± DE, artesunato 128,57 ± 212,78; Glucantime® /alopurinol (209,61 ± 244,96). Continuaron disminuyendo (media ± DE, artesunato 37,50 ± 60,77); Glucantime ® /alopurinol (176,471 ± 379,604) a D+ 180 (figura 3). Al comparar los grupos, el grupo de artesunato mostró un mayor porcentaje de reducción en los títulos de anticuerpos al final del estudio (P < 0,0001) (figura 5). A nivel individual, el 78,57 % (11/14) de los perros tratados con artesunato necesitaron una disminución de los niveles de anticuerpos a D+ 30 y el 50 % (7/14) de ellos pasaron a ser absolutamente seronegativos. Por el contrario, en el grupo de Glucantime®/alopurinol, el 57,7 % (15/26) necesitó una disminución de la serología a D+ 30 y solo el 15,38 % (4/26) pasó a ser seronegativo. Al final del seguimiento, el 41,37 % (12/29) de los perros se volvieron seronegativos al final del seguimiento, lo que incluye: El 29,41 % (5/17) en el grupo 1frente al58,33 % (7/12) del grupo 2 (valor de P, prueba Z/bilateral = 0,227).

En conclusión, estos resultados indican que el artesunato es un tratamiento eficaz mejorado contra la leishmaniosis visceral canina en comparación con la combinación de referencia antimoniato de meglumina/alopurinol. Además, el artesunato era más seguro, más fácil de administrar (por vía oral) con un tratamiento de periodo corto y es menos costoso que el antimoniato de meglumina y el alopurinol.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro.

2. Una composición veterinaria para su uso según la reivindicación 1, en donde dicho perro es un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum.

3. Una composición veterinaria para su uso según las reivindicaciones 1 o 2, en donde dicha composición veterinaria comprende una dosis terapéuticamente eficaz comprendida entre 0,1 y 100 mg/kg de peso corporal/día, preferiblemente entre 1 y 50 mg/kg de peso corporal/día, más preferiblemente entre 20 y 30 mg/kg de peso corporal/día.

4. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicha composición veterinaria comprende una dosis terapéuticamente eficaz de 25 mg/kg de peso corporal/día.

5. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicha composición veterinaria se administra por vía oral.

6. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dicha composición veterinaria es un comprimido.

7. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde dicha composición veterinaria se administra en una sola dosis diaria.

8. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde dicha composición veterinaria se administra durante al menos 6 días, preferiblemente desde 6 hasta 10 días, más preferiblemente durante 6 días.

9. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para controlar los signos clínicos de la leishmaniosis.

10. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para controlar la carga sanguínea deLeishmania infantum.

11. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para controlar los anticuerpos contraLeishmania infantum.

12. Una composición veterinaria que comprende artesunato o una sal del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de la leishmaniosis en un perro infectado de manera natural porLeishmania infantum,en donde dicha composición veterinaria se administra a dicho perro infectado por vía oral en una dosis diaria única de 25 mg/kg de peso corporal/día durante 6 días.

13. Una composición veterinaria para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde dicha composición veterinaria comprende además al menos un agente antiparasitario.

14. Un kit que comprende un primer compartimento que comprende artesunato o una sal del mismo, y un segundo compartimento que comprende al menos un agente antiparasitario como preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial, para prevenir y/o tratar la leishmaniosis en un perro, dicho kit comprende opcionalmente un aviso o una guía de instrucciones.