ES2988130T3 - Método para el tratamiento de epilepsia - Google Patents

Abstract

En ciertas realizaciones, la presente divulgación se refiere a métodos y usos para tratar a un mamífero que padece un trastorno de convulsiones epilépticas o que está en riesgo de padecerlo, que comprende administrar ciertos enantiómeros de fenfluramina aislados divulgados en el presente documento que son sorprendentemente eficaces como fármacos antiepilépticos (FAE), a pesar de tener una potencia anticonvulsiva menor que el racemato de fenfluramina, en virtud de que también son menos cardiotóxicos que el racemato de fenfluramina. Las realizaciones preferidas contemplan el tratamiento del síndrome de Dravet; otras realizaciones preferidas contemplan el tratamiento de otros trastornos de convulsiones epilépticas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Método para el tratamiento de epilepsia

1. Campo

La presente divulgación está dirigida al uso del enantiómero (R) de fenfluramina o a una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para el tratamiento de epilepsia, que incluye el síndrome de Dravet.

2. Antecedentes

La epilepsia y los trastornos epilépticos representan una clase de enfermedades, trastornos y afecciones neurológicas que se estima que afectan a más de 65 millones de personas en todo el mundo, incluyendo al menos tres millones en los Estados Unidos. Aproximadamente se presentan 150000 nuevos casos de epilepsia en los Estados Unidos cada año. Los trastornos convulsivos epilépticos son afecciones crónicas caracterizadas por convulsiones esporádicas generalizadas o focales de frecuencia, intensidad y duración muy variables (por ejemplo, Berg et al.,2010Epilepsia51 (4):676-685). Las convulsiones epilépticas pueden manifestarse como una o más convulsiones transitorias, cese de la respiración, pérdida del conocimiento, alteraciones del habla o de las habilidades motoras, pérdida del tono postural, contracciones musculares involuntarias u otras consecuencias de la transmisión anómala y excesiva de señales por las neuronas corticales del sistema nervioso central (CNS). Las convulsiones epilépticas pueden, por lo tanto, afectar la capacidad de una persona para realizar actividades rutinarias de manera segura como caminar, nadar o conducir, o pueden ser la causa subyacente de lesiones corporales tales como hematomas, cortes, quemaduras, lesiones ortopédicas, lesiones por caídas, etc. Más drásticamente, las crisis epilépticas ocasionalmente pueden resultar en Muerte Súbita Inesperada en Epilepsia (SUDEP), de la cual se estima que hay 40000 casos en los Estados Unidos cada año.

Se han caracterizado y clasificado un gran número de trastornos convulsivos epilépticos, que incluyen convulsiones parciales (como simples, complejas, secundarias generalizadas y de inicio focal), convulsiones generalizadas (como ausencia, mioclónicas, atónicas, tónicas y tónico clónicas) y trastornos que incluyen epilepsia fotosensible, síncope autoinducido, epilepsia intratable, síndrome de Angelman, epilepsia rolándica benigna, trastorno CDKL5, epilepsia de ausencia infantil y juvenil, síndrome de Dravet, epilepsia del lóbulo frontal, síndrome de deficiencia de Glut1, hamartoma hipotalámico, espasmos infantiles/síndrome de West, epilepsia mioclónica juvenil, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de Lennox-Gastaut (LGS), epilepsia con ausencias mioclónicas, síndrome de Ohtahara, síndrome de Panayiotopoulos, epilepsia PCDH19, epilepsias mioclónicas progresivas, síndrome de Rasmussen, síndrome del cromosoma 20 de anillo, epilepsias reflejas, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsia mioclónica progresiva de Lafora, síndromes neurocutáneos, complejo de esclerosis tuberosa, encefalopatía epiléptica infantil temprana, encefalopatía epiléptica de inicio temprano, epilepsia generalizada con convulsiones febriles plus (GEFS+), síndrome de Rett, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, autismo, ataxia, y disquinesia paroxística.

Se han desarrollado aproximadamente 25 fármacos antiepilépticos (AED) para controlar o tratar las convulsiones epilépticas, muchos de los cuales actúan en el CNS como bloqueadores de los canales de sodio no selectivos. (Macdonald RL, Meldrum BS. Principles of antiepileptic drug action. In Antiepileptic Drugs, Cuarta Edición. Levy RH, Mattson RG, Meldrum BS, eds. Nueva York: Raven Press, 1995: 61-77). Sin embargo, la capacidad de respuesta a los AED varía entre los pacientes, lo que dificulta predecir la eficacia de un AED en particular en un sujeto determinado: ninguno de los AED se considera una cura para ningún trastorno convulsivo epiléptico. Además, los AED son ineficaces en aproximadamente un tercio de los pacientes con epilepsia, lo que hace que se reconozca que hay múltiples defectos genéticos distintos que subyacen a los diferentes trastornos convulsivos epilépticos (por ejemplo, Striano et al.,2016 Pharmacol. Res. 107:426-429).

El síndrome de Dravet, también conocido como epilepsia mioclónica severa en la infancia (SMEI), es un trastorno de ataques epilépticos que se describió por primera vez en 1978 (Dravet, 1978VieMéd 8:543-548). El síndrome de Dravet ocurre con una velocidad de natalidad aproximada de entre uno en 40 000 y uno en 20000 y se caracteriza por una convulsión en el primer año de vida, a menudo provocada inicialmente por fiebre, no siendo necesariamente provocadas por fiebre las convulsiones subsiguientes. Los pacientes con síndrome de Dravet pueden sufrir convulsiones frecuentes e impredecibles, convulsiones inducidas por temperatura o fotosensibilidad, anomalías motoras y/o desarrollo mental deteriorado, detenido o regresivo.

En 2001 se identificó un defecto genético en un canal de sodio dependiente de voltaje específico de neuronas (SCN1A) como una causa subyacente de la mayoría (pero no de todos) los casos de síndrome de Dravet (Claes et al.,2001 A.m. J. Hum. Genet. 68:1327-1332; Marini et al.,2011Epilepsia52(Suplemento 2):24-29; Ceulemans et al.,2012 Epilepsia 53(7):1131-1139). En consecuencia, los AED que tienen actividad de bloqueo de los canales de sodio neuronal, que incluye SCN1A como mecanismo de acción, están contraindicados para el tratamiento del síndrome de Dravet.

Fenfluramina ((fí/S)-W-etil-1-[3-(trifluorometil)fenil]propan-2-amina) es un fármaco anfetamínico que suprime el apetito que existe como una mezcla racémica de dos enantiómeros y se comercializó durante más de 20 años en una formulación con fentermina (2-metil-1-fenilpropan-2-amina) como medicamento contra la obesidad. La fenfluramina puede atravesar la barrera hematoencefálica (BBB) y aumenta los niveles de serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT) en el SNC al interrumpir las reservas vesiculares de 5-HT y revertir la absorción de 5-HT a través de transportadores selectivos de serotonina. Se cree que estos efectos serotoninérgicos subyacen a las propiedades supresoras del apetito de la fenfluramina, y también se han investigado los posibles efectos antiepilépticos en un modeloin vitrode corteza entorrinal de rata inducida por rata (Gentsch et al.,2000 Epilepsia 41 (8):925-928).

Sin embargo, la fenfluramina se retiró del mercado farmacéutico cuando se descubrió que era responsable de efectos cardiovasculares adversos, que incluyen hipertrofia de la válvula cardíaca, hipertensión pulmonar y fibrosis cardíaca como resultado de la actividad agonista de fenfluramina a través del receptor de serotonina 5-HT2B que se expresa en el tejido cardíaco (Andrejak et al., Arch. Cardiovascular Dis. (2013) 106:333-339; Elangbam et al.,Exp Toxicol Pathol (2008) 60(4-5):253-262; Cambon et al., Arch Cardiovascular Dis (2015) 108:172-180). La fenfluramina ha mostrado cierto grado de eficacia aparente, a través de su principal metabolito norfenfluramina, en la limitación de la frecuencia o gravedad de las convulsiones en cohortes de pacientes con síndrome de Dravet (Ceulemans et al.,2012; Boel et al.,1996 Neuropediatrics 27:171-173; Lagae, L. et al.,“ZX008 (Fenfluramine HCl Oral Solution) in Dravet Syndrome: Results of a Phase 3, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Trial,” Poster Núm. 2.434, American Epilepsy Society Annual Meeting, Dec. 1-5, 2017), pero sigue sin estar disponible como AED debido a su historial de cardiotoxicidad. El compuesto benfluorex estructuralmente relacionado ((fí/S)-2-(1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-ilamino)etil benzoato), que también es una mezcla racémica de dos enantiómeros, es un profármaco de norfenfluramina que promueve de manera similar la liberación de 5-HT (que tiene agonista actividad sobre los receptores 5HT2 a través de su metabolito norfenfluramina) y se comercializó como un agente antidiabético durante un tiempo antes de que también se retirara debido a efectos cardiovasculares adversos análogos a los asociados con la fenfluramina. Benfluorex, sin embargo, no se ha investigado previamente como un AED.

Claramente, sigue existiendo una necesidad en la técnica de tratamientos efectivos de epilepsia y otros trastornos convulsivos epilépticos, que incluye el síndrome de Dravet. La presente descripción aborda esta necesidad al proporcionar las composiciones y los métodos para tratar los trastornos convulsivos epilépticos y ofrece otras ventajas relacionadas.

El documento WO 2016/138138 A1 describe métodos para el tratamiento de un trastorno epiléptico utilizando un agonista del receptor de 5HT.

Richard B Rothman ET AL., Pharmacology, Biochemistry and Behaviour, 1 de enero de 2002 (2002-01-01), páginas 825-836 describe efectos neuroquímicos, terapéuticos y adversos de agentes que liberan serotonina.

Jo Sourbron ET AL., Frontiers in Pharmacology, vol. 8, 6 de abril de 2017 (2017-04-06) describe el análisis farmacológico de los mecanismos antiepilépticos de fenfluramina en el pez cebra mutante SCN1A,

3. RESUMEN

La presente invención es establece en las reivindicaciones adjuntas.

En particular, la presente invención se dirige a un compuesto para uso en el tratamiento de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico en un sujeto humano, incluyendo síndrome de Dravet, en donde el compuesto se selecciona a partir de norfenfluramina y una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde la norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma comprende (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma a un exceso enantiomérico (ee) mayor que 80 %.

La presente invención se dirige también a un compuesto para uso como un medicamento, en donde el compuesto se selecciona a partir de norfenfluramina y una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde la norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma comprende (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma a un exceso enantiomérico (ee) mayor que 80 %.

En ciertos aspectos, el trastorno convulsivo epiléptico es el síndrome de Dravet. En otros ciertos aspectos, el trastorno convulsivo epiléptico se selecciona de epilepsia fotosensible, síncope autoinducido, epilepsia intratable, síndrome de Angelman, epilepsia rolándica benigna, trastorno de CDKL5, epilepsia de ausencia infantil y juvenil, síndrome de Dravet, epilepsia del lóbulo frontal, síndrome de deficiencia de Glut1, hamartoma hipotalámico, espasmos infantiles/síndrome de West, epilepsia mioclónica juvenil, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de Lennox-Gastaut (LGS), epilepsia con ausencias mioclónicas, síndrome de Ohtahara, síndrome de Panayiotopoulos, epilepsia PCDH19, epilepsias mioclónicas progresivas, síndrome de Rasmussen, síndrome del cromosoma 20 de anillo, epilepsias reflejas, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsia mioclónica progresiva de Lafora, síndromes neurocutáneos, complejo de esclerosis tuberosa, encefalopatía epiléptica infantil temprana, encefalopatía epiléptica de aparición temprana, epilepsia generalizada con convulsiones febriles plus (GEFS+), síndrome de Rett, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, autismo, ataxia, hipotonía, disquinesia paroxística, convulsiones de inicio focal, convulsiones de inicio generalizado, convulsiones de ausencia, síndrome de Jeavon, encefalopatía epiléptica, síndrome de girasol, síndrome de X frágil, hemiplejía alternante, epilepsia autosómica dominante nocturna del lóbulo frontal (ADNFLE), epilepsia rolándica benigna, síndrome de Doose, encefalopatía mioclónica precoz, epilepsia de la infancia con crisis focales migratorias, epilepsia con crisis tónico-clónicas generalizadas, epilepsia con ausencias mioclónicas, encefalopatía epiléptica con picos y ondas continuas durante el sueño, crisis de ausencia juvenil, epilepsias mioclónicas progresivas, epilepsia relacionada con SCN8A, epilepsia relacionada con SCN2A, epilepsia relacionada con KCNQ2 y síndrome de discapacidad intelectual (ID) relacionado con el Dominio TBC1 que Contiene Quinasa (TBCK).

Típicamente, la (R)-fenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma tiene un exceso enantiomérico (ee) superior al 90 %, por ejemplo superior al 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o 99,5 %, o como un ee entre 80 % y 99 % o 90 % y 99 %. En ciertos aspectos, dicho compuesto para uso en un método para el tratamiento de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico reduce la frecuencia de las convulsiones epilépticas, por ejemplo, al reducir la frecuencia de las convulsiones o la frecuencia media de las crisis convulsivas desde la línea base en al menos 20 %, por ejemplo en al menos 25, 35, 50, 60, 6570, 75 u 80 % de la línea base, particularmente en al menos 25, 50 o 75 % de la línea base.

Estos y otros aspectos de la presente divulgación resultarán evidentes tras la referencia a la siguiente descripción detallada y los dibujos adjuntos.

4. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La FIG. 1 muestra los resultados de la prueba de compuestos AED candidatos en el ensayo de convulsiones de 6 Hz en ratones CF-1. Las barras representan el porcentaje de ratones protegidos después de la administración IP de fenfluramina racémica (Ejemplo de referencia), (R)-fenfluramina (Ejemplo de referencia), norfenfluramina racémica (Ejemplo de referencia) y (R)-norfenfluramina a 20 mg/kg, o control de vehículo, una hora antes del ensayoin vivo(n=16 por grupo).

La FIG. 2 muestra los resultados de los efectos anticonvulsivos de (R/S)-fenfluramina (Ejemplo de referencia) y (R)-fenfluramina (Ejemplo de referencia) en la prueba de convulsiones audiogénicas de ratón mediante el uso de ratones macho DBA/2 (n = 10/grupo). La puntuación de la respuesta audiogénica se asignó como 0 (sin convulsiones), 1 (carrera salvaje), 2 (convulsión clónica), 3 (extensión tónica) o 4 (muerte). Los resultados se expresan como media ± S.E.M con cada punto de datos individual mostrado.

5. DESCRIPCIÓN DETALLADA

5.1 Definiciones

Como se usa en la descripción y en las reivindicaciones adjuntas, a menos que se especifique lo contrario, los siguientes términos tienen el significado indicado:

"Enantiómeros" se refiere a moléculas asimétricas que pueden existir en dos formas isoméricas diferentes que tienen diferentes configuraciones en el espacio. Otros términos usados para designar o referirse a enantiómeros incluyen "estereoisómeros" (debido a la diferente disposición o estereoquímica alrededor del centro quiral; aunque todos los enantiómeros son estereoisómeros, no todos los estereoisómeros son enantiómeros) o "isómeros ópticos" (debido a la actividad óptica de los enantiómeros, que es la capacidad de diferentes enantiómeros para rotar la luz polarizada en el plano en diferentes direcciones). Debido a que no tienen un plano de simetría, los enantiómeros no son idénticos a sus imágenes especulares; las moléculas que existen en dos formas enantioméricas son quirales, lo que significa que puede considerarse que se encuentran en las formas "izquierda" y "derecha". La causa más común de quiralidad en moléculas orgánicas es la presencia de un carbono tetraédrico unido a cuatro sustituyentes o grupos diferentes. Tal carbono se denomina centro quiral o centro estereogénico. Un método para indicar el arreglo tridimensional de átomos (o la configuración) en un centro estereogénico es hacer referencia a la disposición de la prioridad de los grupos cuando el grupo de prioridad más baja está orientado lejos de un observador hipotético: Si el arreglo de los tres grupos restantes de mayor a menor prioridad es en el sentido de las agujas del reloj, el centro estereogénico tiene una configuración "R”; si la disposición es en sentido contrario a las agujas del reloj, el centro estereogénico tiene una configuración "S".

Los enantiómeros tienen la misma fórmula química empírica y generalmente son químicamente idénticos en sus reacciones, propiedades físicas y propiedades espectroscópicas. Sin embargo, los enantiómeros pueden mostrar una reactividad química diferente hacia otros compuestos asimétricos y pueden responder de manera diferente a las alteraciones físicas asimétricas. La perturbación asimétrica más común es la luz polarizada.

Un enantiómero puede rotar luz polarizada en un plano; por tanto, un enantiómero es ópticamente activo. Dos enantiómeros diferentes del mismo compuesto rotarán la luz polarizada en el plano en la dirección opuesta; por lo tanto, la luz puede rotarse hacia la izquierda o en sentido contrario a las agujas del reloj para un observador hipotético (esto es levógiro o "l" o menos o "-") o puede rotarse hacia la derecha o en el sentido de las agujas del reloj (esto es dextrorrotatorio o "d" o positiva o "+"). El signo de rotación óptica (+) o (-), no está relacionado con la designaciónRo S. Una mezcla de cantidades iguales de dos enantiómeros quirales se denomina mezcla racémica, o racemato, y se indica con el símbolo (+/-) o con el prefijo "d/l" para indicar una mezcla de formas dextrorrotatoria y levorrotatoria. Los racematos o mezclas racémicas muestran una rotación óptica cero porque están presentes cantidades iguales de las formas (+) y (-). En general, la presencia de un solo enantiómero hace girar la luz polarizada en una sola dirección; por tanto, un solo enantiómero se denomina ópticamente puro.

Las designaciones“R"y "S” se usan para indicar la configuración absoluta de la molécula alrededor de su centro o centros quirales. Las designaciones pueden aparecer como prefijo o sufijo; pueden o no estar separadas del nombre del enantiómero por un guion; pueden estar unidas por guiones o no; y pueden o no estar entre paréntesis.

"Resolución" o "resolver" cuando se usa en referencia a un compuesto o mezcla racémica se refiere a la separación de un racemato en sus dos formas enantioméricas (es decir, (+) y (-); formas(R) y (S)).

"Exceso enantiomérico" o "ee" se refiere a un producto en donde un enantiómero está presente en exceso del otro, y se define como la diferencia absoluta en la fracción molar de cada enantiómero. El exceso enantiomérico se expresa típicamente como un porcentaje de un enantiómero presente en una mezcla con relación al otro enantiómero. Para los propósitos de esta descripción, el enantiómero (R) de un compuesto sujeto se considera que está "sustancialmente exento" del enantiómero (S) cuando el enantiómero (R) está presente en un exceso enantiomérico superior al 80 %, preferentemente superior al 90 %, más preferentemente superior al 95 % y del modo más preferente superior al 99 %.

El protocolo de denominación química y los diagramas de estructura usados en el presente documento son una forma modificada del sistema de nomenclatura de la IUPAC, mediante el uso del programa de software ACD/Name Versión 9.07. Por ejemplo, el enantiómero (R) de norfenfluramina, tiene la siguiente estructura:

y tiene un nombre químico de (R)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina.

"Profármaco" pretende indicar un compuesto que puede convertirse en condiciones fisiológicas o mediante solvólisis en un compuesto biológicamente activo de la presente divulgación. Por lo tanto, el término "profármaco" se refiere a un precursor metabólico de un compuesto de la presente divulgación que es farmacéuticamente aceptable. Un profármaco puede ser inactivo cuando se administra a un sujeto que lo necesita, pero se conviertein vivoen un compuesto activo de la presente divulgación. Los profármacos típicamente se transforman rápidamentein vivopara producir el compuesto de la presente descripción, por ejemplo, mediante hidrólisis en la sangre. El compuesto profármaco frecuentemente ofrece ventajas de solubilidad, compatibilidad tisular o liberación retardada en un organismo mamífero (véase, Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), páginas 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam)). Se proporciona una discusión de profármacos en Higuchi, et al.,"Pro-drugs as Novel Delivery Systems," A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, Ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.

El término "profármaco" también pretende incluir cualquier portador unido covalentemente, que libere el compuesto activo de la presente divulgaciónin vivocuando tal profármaco se administra a un sujeto mamífero.

Para los fines de esta descripción, tanto (R)-fenfluramina como (R)-benfluorex se consideran profármacos de (R)-norfenfluramina en que tanto (R)-fenfluramina como (R)-benfluorex se metabolizanin vivoa (R)-norfenfluramina, que demuestra la actividad antiepiléptica deseada de los métodos y usos de acuerdo con determinadas aspectos descritos en la presente divulgación.

La presente divulgación también pretende abarcar los enantiómeros (R) de los compuestos objeto que están etiquetados isotópicamente al tener uno o más átomos reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferente. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos divulgados incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O y 18F, respectivamente. Estos compuestos radioetiquetados podrían ser útiles para ayudar a determinar o medir la eficacia de los enantiómeros de los compuestos objeto mediante la caracterización, por ejemplo, del mecanismo de acción o la afinidad de unión al sitio de acción farmacológicamente importante. Los compuestos etiquetados isotópicamente son útiles en estudios de distribución tisular en fármaco y/o sustrato. Los isótopos radioactivos de tritio, es decir, 3H y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente útiles para este propósito en vistas de su fácil incorporación y rápidos medios de detección. Un radioligando que incorpora tritio (3H) es particularmente útil para estudios de unión de ligandos con membranas porque el tritio tiene una larga vida media de desintegración y la emisión es de energía relativamente baja y, por lo tanto, el radioisótopo es relativamente seguro. El radioligando se prepara típicamente mediante intercambio de tritio con un hidrógeno en un compuesto no marcado.

La sustitución con isótopos más pesados tal como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas como resultado de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, un incremento de la vida mediain vivoo reducción de los requerimientos de dosificación, y por lo tanto pueden ser preferentes en algunas circunstancias.

La sustitución con isótopos emisores de positrones, como 11C, 18F, 15O y 13N, puede ser útil en estudios de topografía de emisión de positrones (PET) para examinar la ocupación del receptor de sustrato. Los enantiómeros etiquetados isotópicamente de los compuestos objeto generalmente pueden prepararse mediante técnicas convencionales conocidas para los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en la presente divulgación mediante el uso de un reactivo etiquetado isotópicamente apropiado en lugar del reactivo no etiquetado previamente empleado.

"Selectividad" y "selectivo" como se usa en el presente documento es una medida relativa de la tendencia de un compuesto de la presente divulgación a asociarse preferentemente (por ejemplo, de manera estadísticamente significativa) con una cosa opuesta a otra (o grupo de otras).

"Enantiómero estable" y "estructura estable" pretenden indicar que un compuesto que es suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento en un grado útil de pureza a partir de una mezcla de reacción, y la formulación en un agente terapéutico eficaz.

"Mamífero" incluye los seres humanos y animales domésticos, como animales de laboratorio y mascotas domésticas, (por ejemplo, gatos, perros, cerdos, vacas, ovejas, cabras, caballos y conejos) y animales no domésticos como animales salvajes y similares.

"Portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable" incluye sin limitación cualquier adyuvante, portador, excipiente, deslizante, agente edulcorante, diluyente, conservante, tinte/colorante, potenciador del sabor, tensioactivo, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, estabilizador, agente isotónico, disolvente o emulsionante que es adecuado para uso en humanos o animales domésticos. Preferentemente, el portador, diluyente o excipiente ha sido aprobado por una agencia reguladora, por ejemplo, no limitativo, la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos, Health Canada o la Agencia Europea de Medicamentos, como aceptable para uso farmacéutico en humanos o animales.

Una "composición farmacéutica" se refiere a una formulación de un compuesto de la presente divulgación y un medio generalmente aceptado en la técnica para el suministro del compuesto biológicamente activo a mamíferos, por ejemplo, humanos. Tal medio incluye todos los portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables para ello.

Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación comprenden uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, que incluyen, entre otros, cualquier disolvente, adyuvante, potenciador de la biodisponibilidad, portador, deslizante, agente edulcorante, diluyente, conservante, tinte/colorante, potenciador del sabor, tensioactivo, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, estabilizador, agente isotónico, tampón y/o emulsionante. Preferentemente, uno o más excipientes están aprobados por, por ejemplo, la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos, Health Canada o la Agencia Europea de Medicamentos, como aceptables para su uso en humanos o animales domésticos.

"Prevenir" la epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico descrito en la presente divulgación se refiere a prevenir o reducir, de una manera estadísticamente significativa, (por ejemplo, con relación a un control apropiado), la posibilidad de que se produzca dicho trastorno en un mamífero, en particular, cuando dicho mamífero está predispuesto a la afección, pero aún no se ha diagnosticado que la padezca.

"Cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a la cantidad de un compuesto de la presente divulgación que, cuando se administra, es suficiente para efectuar el tratamiento, como se define a continuación, de epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico en el mamífero receptor, preferentemente un ser humano. La cantidad de un compuesto de la presente descripción que constituye una "cantidad terapéuticamente efectiva" variará en dependencia del compuesto, la afección epiléptica y su gravedad, la forma de administración y la edad del mamífero a tratar, pero puede determinarse rutinariamente por el experto en la técnica con la consideración de su propio conocimiento y con esta divulgación.

"Tratar" o "tratamiento" como se usa en el presente documento se refiere al tratamiento de epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico en un mamífero, preferentemente un ser humano, que tiene la enfermedad o condición de interés, e incluye uno o más de los siguientes ejemplos:

(i) inhibir la epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico, es decir, mediante la detención de su desarrollo, por ejemplo, mediante la ralentización de una manera estadísticamente significativa (por ejemplo, con relación a un control apropiado) el aumento de la gravedad, duración o frecuencia de las convulsiones epilépticas u otros síntomas del trastorno;

(ii) aliviar la epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico, es decir, causando regresión estadísticamente significativa (por ejemplo, con relación a un control apropiado) de la epilepsia; o

(iii) aliviar los síntomas resultantes de la epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico, por ejemplo, mediante la reducción de manera estadísticamente significativa (por ejemplo, con relación a un control apropiado) la gravedad, duración o frecuencia de las convulsiones epilépticas u otros síntomas del trastorno.

En ciertos aspectos, el tratamiento con uno o más de los enantiómeros (R) de los compuestos objeto, como se describe en la presente descripción, incluyen la reducción de la frecuencia de convulsiones epilépticas de una manera estadísticamente significativa (por ejemplo, con relación a un control apropiado), como la reducción de la frecuencia de las convulsiones o la frecuencia media de las convulsiones de la línea base. En algunos aspectos, el tratamiento con el enantiómero (R) de los compuestos objeto reducen la frecuencia de las convulsiones o la frecuencia media de las crisis convulsivas desde la línea base en al menos un 20 %, tal como en al menos un 25, 35, 50, 60, 65, 70, 75 u 80 % de la línea base, particularmente en al menos 25, 50 o 75 % de la línea base.

Como se usa en la presente descripción, los términos "mejorar", "mejora", "aliviar" o "alivio" deben recibir sus definiciones generalmente aceptables. Por ejemplo, "mejora" significa generalmente mejorar o una mejora de una afección relativa a la afección anterior al evento de mejora. "Aliviar" significa generalmente hacer que una condición sea más soportable con relación a la condición anterior al evento de alivio. Como se usa en la presente descripción, "mejorar" o "mejora" puede referirse a epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico o afecciones de epilepsia o trastorno convulsivo epiléptico que son mejores o han mejorado mediante la administración de un compuesto de acuerdo con los aspectos descritos en la presente divulgación. Como se usa en la presente descripción, "aliviar" o "alivio" puede referirse a epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico o una condición de epilepsia o tal otro trastorno convulsivo epiléptico que se hace soportable mediante la administración de un compuesto de acuerdo con los aspectos descritos en la presente divulgación. Por ejemplo, "aliviar" las convulsiones epilépticas incluiría reducir (por ejemplo, mediante la disminución de manera estadísticamente significativa) la gravedad o incidencia de las convulsiones epilépticas.

5.2 Enantiomeros (R) de la presente divulgación

Los enantiómeros (R) de la presente divulgación son el enantiómero (R) de fenfluramina, el enantiómero (R) de benfluorex y el enantiómero (R) de norfenfluramina, incluidos los enantiómeros (R) que tienen diversos excesos enantioméricos como se describe en el presente documento, así como también las sales, solvatos o profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. El enantiómero (R) de la presente invención es el enantiómero (R) de norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La fenfluramina, que es una mezcla racémica de dos enantiómeros, tiene la siguiente estructura:

y tiene un nombre químico de (R/S)-N-etil-1 -(3- (trifluorometil)fenil)propan-2-amina. La preparación de fenfluramina se divulgó por primera vez en la patente francesa M1658 (1963). El enantiómero (R) y el enantiómero (S) de fenfluramina tienen las siguientes estructuras, respectivamente:

y nombres químicos respectivos de (R)-N-etil-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina y (S)-N-etil-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina. Para los propósitos de la presente divulgación, el enantiómero (R) de fenfluramina se identifica en el presente documento como (R)-fenfluramina y el enantiómero (S) de fenfluramina se identifica en el presente documento como (S)-fenfluramina. Se entiende en la técnica que (R)-fenfluramina corresponde a levofenfluramina, /-fenfluramina, o (-)-fenfluramina y que (S)-fenfluramina corresponde a dexfenfluramina,d-fenfluramina o (+)-fenfluramina.

El benfluorex, que es una mezcla racémica de dos enantiómeros, tiene la siguiente estructura:

y el nombre químico de benzoato de (R/S)-2-(1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-ilamino)etilo. La preparación de benfluorex se describe en la patente de EE.UU. núm. 3,607,909.

El enantiómero (R) y el enantiómero (S) de benfluorex tienen las siguientes estructuras respectivas:

y los respectivos nombres químicos de benzoato de (R)-2-(1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-ilamino)etilo y benzoato de (S)-2-(1 -(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-ilamino)etilo. Para los propósitos de la presente divulgación, el enantiómero (R) de benfluorex se identifica en el presente documento como (R)-benfluorex y el enantiómero (S) de benfluorex se identifica en el presente documento como (S)-benfluorex.

El metabolito activo tanto de fenfluramina como de benfluorex es norfenfluramina, que también es una mezcla racémica de dos enantiómeros. La norfenfluramina tiene la siguiente estructura:

y el nombre químico de (R/S)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina. El racemato de norfenfluramina (Número de Registro CAS [1886-26-6]) está disponible comercialmente (por ejemplo, de Toronto Research Chemicals, North York, Ontario, Canadá; Clearsynth, Mississauga, Ontario, Canadá; o DrugImpurities, North Harrow, Reino Unido). Los enantiómeros de norfenfluramina pueden aislarse mediante técnicas de resolución estándar conocidas por un experto en la técnica, o pueden prepararse de acuerdo con métodos conocidos por un experto en la técnica o mediante los métodos divulgados en el presente documento.

El enantiómero (R) y el enantiómero (S) de norfenfluramina tiene las siguientes estructuras respectivas:

y los respectivos nombres químicos de (R)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina y (R)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina. Para los propósitos de la presente divulgación, el enantiómero (R) de la norfenfluramina se identifica en el presente documento como (R)-norfenfluramina y el enantiómero (S) de la norfenfluramina se identifica en el presente documento como (S)-norfenfluramina. Se entiende en la técnica que (R)-norfenfluramina corresponde a /-norfenfluramina, o (-)-norfenfluramina y que (S)-norfenfluramina corresponde ad-norfenfluramina o (+)-norfenfluramina.

El enantiómero (R) de norfenfluramina se emplea en los métodos, usos y composiciones como se describen en el presente documento en exceso enantiomérico (ee) superior al 80 %, como con un ee superior a 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 99,5 %. En algunos aspectos, el enantiómero (R) del compuesto objeto se emplea en los métodos, usos y composiciones como se describen en el presente documento con un ee entre 80 % y 99 %, como entre 85 % a 99 %, 90 % a 99 %, 95 % a 99 %, 96 % a 99 %, o 97 % a 99 %, particularmente 90 % a 99 %.

5.3 Utilidad y prueba de los compuestos de la presente divulgación

La presente divulgación se basa en parte en los descubrimientos inesperados y previamente impredecibles (i) de que el enantiómero (R) del compuesto objeto posee múltiples actividades beneficiosas específicas de fenfluramina (o su metabolito norfenfluramina) y, por tanto, es terapéuticamente efectivo para el tratamiento, como se proporciona en el presente documento, de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico, y (ii) que dicho enantiómero (R) terapéuticamente efectivo puede prepararse en una forma sustancialmente exenta (por ejemplo, superior al 80 % de ee) del correspondiente enantiómero (S), en el que reside la actividad deletérea específica de fenfluramina (o su metabolito norfenfluramina) que contribuye indeseablemente a la cardiotoxicidad nociva de fenfluramina.

Específicamente, en el presente documento se divulga por primera vez que las actividades anticonvulsivas deseables de fenfluramina residen en (R)-fenfluramina o su metabolito, (R)-norfenfluramina, y que estos enantiómeros específicos poseen solo niveles bajos de actividad cardiotóxica de fenfluramina indeseable y, por lo tanto, son AED efectivos. Por el contrario, la mayor parte de la actividad cardiotóxica de fenfluramina reside en (S)-fenfluramina o su metabolito, (S)-norfenfluramina, por lo que estos enantiómeros no son adecuados como AED candidatos. Como también se describe en el presente documento, al proporcionar el enantiómero (R) del compuesto objeto sustancialmente exento (por ejemplo, superior al 80 % de ee) del correspondiente enantiómero (S), por primera vez se divulgan composiciones farmacéuticas de AED, métodos y usos que proporcionan efectos de fenfluramina terapéuticamente beneficiosos para el tratamiento (como se proporciona en el presente documento) de trastornos convulsivos epilépticos mientras que evitan sustancialmente la cardiotoxicidad dañina asociada con fenfluramina y norfenfluramina.

Aún más específicamente, la cardiotoxicidad indeseable de fenfluramina reside en la actividad agonista del receptor 2B de serotonina (actividad agonista del receptor 5-HT2B), que se segrega predominantemente con (S)-fenfluramina y su metabolito (S)-norfenfluramina. Por lo tanto, la preparación de (R)-norfenfluramina sustancialmente exenta (por ejemplo, superior al 80 % de ee) de (S)-norfenfluramina sorprendentemente da como resultado una preparación enriquecida enantioméricamente caracterizada por efectos cardiotóxicos significativamente menores con relación a una preparación preparada a partir de (S)-fenfluramina, (S)-norfenfluramina, fenfluramina o norfenfluramina, proporcionando de esta manera un AED útil.

Adicionalmente, la preparación de (R)-fenfluramina sustancialmente exenta (por ejemplo, superior al 80 % de ee) de (S)-fenfluramina sorprendentemente da como resultado una composición enantiomérica de AED que posee actividad agonista del receptor 2A de serotonina (receptor 5-HT2A) y también actividad agonista del receptor 2C de serotonina (receptor 5-HT2C), y que puede metabolizarse a (R)-norfenfluramina, que exhibe una actividad agonista mejorada de 5-HT2A/5-HT2C junto con la propiedad AED conveniente de promover la liberación de norepinefrina (NE). De acuerdo con la teoría no limitante, para ciertos aspectos, un AED tiene el siguiente perfil de actividad: agonista de 5-HT2A/agonista de 5-HT2C/promotor de liberación de NE/agonista deficiente de 5-HT2B. Como se divulga en el presente documento, (R)-fenfluramina y su metabolito (R)-norfenfluramina muestra inesperadamente este perfil preferido para proporcionar un AED candidato sin precedentes para uso en la presente invención.

Antes de la presente divulgación, se apreciaba en la técnica que la potente actividad agonista de 5-HT2A, la potente actividad agonista de 5-HT2C y la potente actividad promotora de liberación de NE estaban presentes en (S)-norfenfluramina, que, por tanto, se habría considerado un AED candidato. Dado que (S)-norfenfluramina también exhibe una potente actividad agonista de 5-HT2B, sin embargo, también se habría considerado una fuente de cardiotoxicidad indeseable de fenfluramina que no podría separarse de las actividades convenientemente potentes de AED de fenfluramina. (Rothman et al., Pharmacol. Biochem. Behav. 71:825 (2002); Rothman et al.,J. Pharmacol. Exp. Terapéutica. 305:1191 (2003)).

La presente divulgación enseña por primera vez que puede obtenerse un AED terapéuticamente efectivo mediante la selección de la menos potente (R)-norfenfluramina, a pesar del hecho de que (R)-norfenfluramina exhibe actividades subóptimas de agonista 5-HT2A y promotor de liberación de NE (es decir, actividades que son menos potentes que para (S)-norfenfluramina). Sin querer ceñirse a la teoría, la presente selección de la menos potente (R)-norfenfluramina como un AED para el tratamiento (como se proporciona en la presente descripción) de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico proporciona eficacia terapéutica siempre que el enantiómero (R) también sea agonista pobre de 5-HT2B con relación a norfenfluramina. En consecuencia, las ventajas asociadas con la selección de (R)-norfenfluramina para uso en el presente método de tratamiento (como se proporciona en el presente documento) de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico no se habría predicho antes de la presente descripción, donde no se había reconocido previamente la idoneidad de estos enantiómeros como AED.

Por lo tanto, la presente descripción está dirigida a un compuesto para uso en el tratamiento de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico en un sujeto humano, en donde el compuesto se selecciona a partir de norfenfluramina y una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde la norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma comprende (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en un exceso enantiomérico (ee) superior a 80 %. La presente invención también se dirige a un compuesto para uso como medicamento, en donde el compuesto se selecciona a partir de norfenfluramina y una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y en donde la norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma comprende (R) norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en un exceso enantiomérico (ee) superior a 80 %.

5.3.1 Epilepsia y trastornos convulsivos epilépticos

La presente invención se dirige al tratamiento de humanos que tienen epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico.

La epilepsia y los trastornos convulsivos epilépticos se describen anteriormente. Los expertos en la técnica relevante estarán familiarizados con cualquier número de criterios diagnósticos, pronósticos, quirúrgicos, genéticos y/o clínicos para identificar a un sujeto o paciente que tiene o está en riesgo de tener epilepsia o cualquier trastorno convulsivo epiléptico, como puede indicar la idoneidad clínica y/o adaptabilidad de la administración de las composiciones de AED descritas en la presente descripción. Véase, por ejemplo, Sontheimer, Diseases of the Nervous System, 2015 Academic Press/Elsevier, Waltham, MA; "Neurologic Disorders'' en The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 19na Ed. (R.S. Porter, Ed., 2011, Merck, Inc., NJ); ''Neurological Diagnostic Tests and Procedures" en el sitio web del National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health, Bethesda, MD, www. ninds. nih. gov/disorders/ misc/ diagnostic_tests.htm; Neurology in Clinical Practice - Vol. II, 4a Edición, Bradley et al., (Ed), 2004 Butterworth Heinemann/ Elsevier, Filadelfia, PA; Non-Neoplastic Diseases of the Central Nervous System (fascículos de primera serie de Atlas of Nontumor Pathology), D.N. Lewis et al., (ed.), 2010 Amer. Registry of Pathology, Annapolis Junction, MD; Bradley’s Neurology in Clinical Practice (6a Ed.), Rb Daroff et al., (eds.), 2012 Saunders/Elsevier, Waltham, MA; véase también, por ejemplo, Wright et al., 2016 Molec. Genet. Genom. Med. 4(2): 197; Claes et al., 2001Am. J. Hum. Genet.68:1327-1332; Marini et al., 2011Epilepsia52 (Suplemento 2):24-29; Ceulemans et al., 2012 Epilepsia 53(7):1131-1139). Los criterios para el diagnóstico y el seguimiento clínico de pacientes que tienen o se sospecha que tienen epilepsia o cualquier otro trastorno convulsivo epiléptico son bien conocidos por los expertos en la técnica relevante.

En consecuencia, las composiciones y métodos descritos en el presente documento son útiles en el tratamiento (como se proporciona en el presente documento) de un amplio intervalo de enfermedades, trastornos o afecciones que se relacionan con la epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico, que incluyen, entre otros, epilepsia fotosensible, síncope autoinducido, epilepsia intratable, epilepsia de inicio focal, síndrome de Angelman, epilepsia rolándica benigna, trastorno CDKL5, epilepsia de ausencia infantil y juvenil, síndrome de Dravet, epilepsia del lóbulo frontal, síndrome de deficiencia de Glut1, hamartoma hipotalámico, espasmos infantiles/síndrome de West, epilepsia mioclónica juvenil, síndrome de Landau-Kleffner, síndrome de Lennox-Gastaut (LGS), epilepsia con ausencias mioclónicas, síndrome de Ohtahara, síndrome de Panayiotopoulos, epilepsia PCDH19, epilepsias mioclónicas progresivas, síndrome de Rasmussen, síndrome del cromosoma 20 de anillo, epilepsias reflejas, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsia progresiva de Lafora, síndromes neurocutáneos, complejo de esclerosis tuberosa, encefalopatía epiléptica infantil temprana, encefalopatía epiléptica de inicio temprano, epilepsia generalizada con convulsiones febriles plus (GEFS+), síndrome de Rett, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, autismo, ataxia, hipotonía y disquinesia paroxística.

5.3.2 Ensayos in vitro

Se conocen los ensayos in vitro para determinar la eficacia del enantiómero(R)como el compuesto objeto como agonista 5HT2C y/o 5HT2A. Véase, por ejemplo, Rothman et al., 2003 J. Pharmacol. Exp. Therapeut. 305(3): 1191 1199; Lawrence et al., 2000 Molecular Pharmacology, 57:75-81; Porter et al., 1999 Brit. J of Pharmacology 128:13-20.

5.3.3 Modelos Animales

Los modelos animales para probar la eficacia del enantiómero (R) del compuesto objeto en el tratamiento (como se proporciona en el presente documento) de epilepsia o trastornos convulsivos epilépticos se conocen bien. Véanse, por ejemplo, los modelos animales descritos más abajo en los Ejemplos Biológicos.

5.3.4 Dosis

Típicamente, un agente terapéutico satisfactorio de determinados aspectos descritos cumplirá algunos o todos los criterios siguientes. La disponibilidad oral debe ser igual o superior al 20 %. La eficacia del modelo animal es de menos de aproximadamente 0,1 pg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal y la dosis blanca en humanos está entre 0,1 pg y aproximadamente 100 mg / kg de peso corporal, aunque las dosis fuera de este intervalo pueden ser aceptables ("mg / kg" significa miligramos de compuesto por kilogramo de masa corporal del sujeto al que se le administra). El índice terapéutico (o relación entre la dosis tóxica y la dosis terapéutica) debe ser superior a 100. La potencia (por ejemplo, expresada por el valor de IC50 según lo determinado por la caracterización in vitro frente a su objetivo) debe ser inferior a 10 pM, preferentemente inferior a 1 pM y lo con la máxima preferencia más abajo de 50 nM.

En ciertos aspectos, los métodos y usos divulgados en la presente invención incluyen la administración de una dosis de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg de un enantiómero (R) del compuesto objeto, que incluye aproximadamente 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 5, 10, 15, 20 o 25 mg/kg hasta aproximadamente 35, 40, 45 o 50 mg/kg, como alrededor de 20 a 40 mg/kg o 25 a 35 mg/kg, tal como 20, 25, 30, 35 o 40 mg/kg /- 5 %, que incluye 30 mg/kg /- 5 %. En ciertos aspectos, los métodos y usos divulgados en la presente invención incluyen la administración de una dosis de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg de un enantiómero (R) del compuesto objeto, que incluye aproximadamente 0,25, 0,5, 0,75 o 1 mg/kg hasta aproximadamente 2, 2,5, 5 o 10 mg/kg, como aproximadamente 0,5 mg/kg hasta aproximadamente 2,5 mg/kg o aproximadamente 1 mg/kg hasta aproximadamente 2 mg/kg, tal como 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,25 o 2,5 mg/kg /- 5 %, incluyendo 1 mg/kg /- 5 % o 2 mg/kg /- 5 %. En un aspecto particular, se administra una dosis de 1 mg/kg a 2 mg/kg a un sujeto humano para el tratamiento de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico, por ejemplo, el síndrome de Dravet.

En algunos aspectos, los métodos y usos divulgados en la presente invención incluyen la administración de una dosis humana de un enantiómero (R) del compuesto objeto, que corresponde a una dosis de ratón de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg, incluyendo una dosis de ratón de aproximadamente 1,5, 10, 15, 20 o 25 mg/kg a aproximadamente 35, 40, 45 o 50 mg/kg, como aproximadamente 20 a 40 mg/kg o 25 a 35 mg/kg, como 20, 25, 30, 35 o 40 mg/kg /- 5 %, incluyendo 30 mg/kg /- 5 %.

5.4 Composiciones farmacéuticas de la presente divulgación y administración

La presente descripción también se refiere en determinados aspectos a composiciones farmacéuticas que comprenden el enantiómero (R) del compuesto objeto que tiene el exceso enantiomérico como se describe en el presente documento y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En un aspecto, la presente divulgación se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden el enantiómero (R) del compuesto objeto en un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable y en una cantidad efectiva para tratar (como se proporciona en el presente documento) epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico cuando se administra a un paciente humano.

En algunos aspectos, la presente divulgación se refiere a una composición farmacéutica que comprende (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, en donde la (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma está en exceso enantiomérico superior a 80 %, como superior a 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o 99,5 % de ee. En algunos aspectos, tal composición farmacéutica incluye una cantidad de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma que no sea de 30 mg, es decir, incluye una cantidad menor o mayor que 30 mg, como mayor que 31,32, 35, 40, 45 o 50 mg o menor que 29, 27 o 25 mg. En ciertos aspectos, la composición farmacéutica incluye una cantidad de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma de 31,32, 35, 40, 45 o 50 mg a 100, 150, 200, 250, 300, 350 o 400 mg, como 31 mg a 150 mg, 32 mg a 150 mg, 35 mg a 150 mg, 40 mg a 150 mg, 50 mg a 150 mg, 31 mg a 200 mg, 32 mg a 200 mg, 35 mg a 200 mg, 40 mg a 200 mg, 50 mg a 200 mg, 31 mg a 300 mg, 32 mg a 300 mg, 35 mg a 300 mg, 40 mg a 300 mg, 50 mg a 300 mg, 31 mg a 400 mg, 32 mg a 400 mg, 35 mg a 400 mg, 40 mg a 400 mg o 50 mg a 400 mg. En algunos aspectos, la composición farmacéutica incluye una cantidad de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma de 1, 2, 3, 5, 7 o 10 mg a 25, 27 o 29 mg, como de 5 mg a 25 mg, 5 mg a 27 mg, 5 mg a 29 mg, 10 mg a 25 mg, 10 mg a 27 mg o 10 mg a 29 mg. En algunos casos, la composición farmacéutica incluye una cantidad de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma de 5, 10, 15 o 20 mg a 100, 150, 200, 250, 300, 350 o 400 mg, tales como 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 75, 80, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 300, 350 o 400 mg.

La administración del enantiómero (R) de la presente descripción, en forma pura o en una composición farmacéutica apropiada, puede llevarse a cabo mediante cualquiera de los modos aceptados de administración de agentes para servir utilidades similares. Las composiciones farmacéuticas de la presente descripción pueden prepararse mediante la combinación de un compuesto objeto con un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable apropiado, y pueden formularse en preparaciones en formas sólidas, semisólidas, líquidas o gaseosas, como comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, soluciones, supositorios, inyecciones, inhalantes, geles, microesferas y aerosoles. Las vías típicas de administración de tales composiciones farmacéuticas incluyen, entre otras, oral, tópica, transdérmica, inhalatoria, parenteral, sublingual, rectal, vaginal e intranasal. El término parenteral, como se usa en el presente documento, incluye inyecciones subcutáneas, intravenosas, intramusculares, inyección intraesternal o técnicas de infusión. Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación se formulan para permitir que los ingredientes activos contenidos en ellos estén biodisponibles tras la administración de la composición a un paciente. Las composiciones que se administrarán a un sujeto o paciente, preferentemente un mamífero, con mayor preferencia un humano, pueden adoptar la forma de una o más unidades de dosificación, donde, por ejemplo, un comprimido puede ser una única unidad de dosificación, y un recipiente de un compuesto de la invención en forma de aerosol puede contener una pluralidad de unidades de dosificación. Los métodos reales de preparación de tales formas de dosificación son conocidos, o resultarán evidentes para los expertos en esta técnica; por ejemplo, véase The Science and Practice of Pharmacy, 20ma Edición (Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000). La composición a administrar contendrá, en cualquier caso, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto sujeto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento o la prevención (como se proporciona en la presente descripción) de una enfermedad o afección de interés de acuerdo con las enseñanzas de esta divulgación.

Las composiciones farmacéuticas útiles en el presente documento también contienen un portador farmacéuticamente aceptable, que incluye cualquier diluyente o excipiente adecuado, que incluye cualquier agente farmacéutico que no induzca por sí mismo la producción de anticuerpos dañinos para el individuo que recibe la composición y que puede administrarse sin toxicidad indebida. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen, entre otros, líquidos, tales como agua, solución salina, glicerol y etanol, y similares. En Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., NJ, edición actual) se presenta una discusión exhaustiva de portadores, diluyentes y otros excipientes farmacéuticamente aceptables.

Una composición farmacéutica de la presente divulgación puede estar en forma sólida o líquida. En un aspecto, el (los) portador(es) son particulados, de modo que las composiciones están, por ejemplo, en forma de comprimido o polvo. El (los) portador(es) puede(n) ser líquido(s), siendo las composiciones, por ejemplo, un jarabe oral, un líquido inyectable o un aerosol, que es útil, por ejemplo, en la administración inhalatoria.

Cuando se destina a la administración oral, la composición farmacéutica está preferentemente en forma sólida o en forma líquida, donde las formas semisólidas, semilíquidas, en suspensión y en gel se incluyen dentro de las formas consideradas en la presente descripción como sólidas o líquidas.

Como una composición sólida para administración oral, la composición farmacéutica puede formularse en forma de polvo, gránulo, comprimido prensado, píldora, cápsula, goma de mascar, oblea o formas similares. Una composición sólida de este tipo contendrá típicamente uno o más diluyentes inertes o portadores comestibles. Además, pueden estar presentes uno o más de los siguientes: aglutinantes como carboximetilcelulosa, etil celulosa, celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; excipientes como almidón, lactosa o dextrinas, agentes disgregantes como ácido algínico, alginato de sodio, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes como estearato de magnesio o Sterotex; agentes de deslizamiento como dióxido de silicio coloidal; agentes edulcorantes como sacarosa o sacarina; un agente saborizante como menta, salicilato de metilo o saborizante de naranja; y un agente colorante.

Cuando la composición farmacéutica está en forma de una cápsula, por ejemplo, una cápsula de gelatina, puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un vehículo líquido tal como polietilenglicol o aceite.

La composición farmacéutica puede estar en forma de un líquido, por ejemplo, un elixir, jarabe, solución, emulsión o suspensión. El líquido puede ser para administración oral o para suministro por inyección, como dos ejemplos. Cuando se destina a la administración oral, las composiciones preferidas contienen, además de los enantiómeros (R) de los compuestos objeto, uno o más de un agente edulcorante, conservantes, tinte/colorante y potenciador del sabor. En una composición destinada a administrarse por inyección, pueden incluirse uno o más de un tensioactivo, conservante, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, tampón, estabilizante y agente isotónico.

Las composiciones farmacéuticas líquidas de la presente divulgación, ya sean soluciones, suspensiones u otra forma similar, pueden incluir uno o más de los siguientes adyuvantes: diluyentes estériles como agua para inyección, solución salina, preferentemente solución salina fisiológica, solución de Ringer, cloruro de sodio isotónico, aceites fijos tal como monoglicéridos o diglicéridos sintéticos que pueden servir como disolvente o medio de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes; agentes antibacterianos como alcohol bencílico o metil parabeno; antioxidantes como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes como ácido etilendiaminotetraacético (EDTA); tampones como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad como cloruro de sodio o dextrosa. La preparación parenteral puede encerrarse en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiples hechos de vidrio o plástico. La solución salina fisiológica es un adyuvante preferido. Una composición farmacéutica inyectable es preferentemente estéril.

Una composición farmacéutica líquida de la presente divulgación destinada a la administración parenteral u oral debe contener una cantidad del enantiómero (R) del compuesto objeto de manera que se obtenga una dosificación adecuada. Típicamente, esta cantidad de enantiómero (R) del compuesto objeto es al menos 0,01 % en peso de la composición. Cuando se destina a la administración oral, esta cantidad puede variarse entre 0,1 y aproximadamente 70 % en peso de la composición. Las composiciones farmacéuticas orales preferidas contienen entre aproximadamente un 4 % y aproximadamente un 50 % de un enantiómero (R) de los compuestos objeto, como entre aproximadamente 5 %, 7 %, 10 % o 15 % a aproximadamente 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 % o 45 %. Las composiciones y preparaciones farmacéuticas preferidas de acuerdo con la presente divulgación se preparan de modo que una unidad de dosificación parenteral contenga entre 0,01 y 10 % en peso de enantiómero (R) del compuesto objeto antes de la dilución, como entre 0,01 % y 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 % o 9 % en peso antes de la dilución, o entre 0,01 %, 0,2 %, 0,5 %, 0,8 %, 1 %, 1,5 %, 2 %, 3 %, 4 % o 5 % a 10 % en peso antes de la dilución.

La composición farmacéutica de la presente divulgación puede estar destinada a la administración tópica, en cuyo caso el portador puede comprender adecuadamente una base de solución, emulsión, pomada o gel. La base, por ejemplo, puede comprender una o más de las siguientes: vaselina, lanolina, polietilenglicoles, cera de abeja, aceite mineral, diluyentes como agua y alcohol, y emulsionantes y estabilizadores. Los agentes espesantes pueden estar presentes en una composición farmacéutica para administración tópica. Si se destina a la administración transdérmica, la composición puede incluir un parche transdérmico o un dispositivo de iontoforesis. Las formulaciones tópicas pueden contener una concentración de enantiómero (R) del compuesto objeto de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 % p/v (peso por unidad de volumen), como entre 0,01 % a 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 % o 9 % en peso antes de la dilución, o entre 0,01 %, 0,2 %, 0,5 %, 0,8 %, 1 %, 1,5 %, 2 %, 3 %, 4 % o 5 % a 10 % en peso antes de la dilución.

La composición farmacéutica de la presente divulgación puede estar destinada a la administración rectal, en la forma, por ejemplo, de un supositorio, que se derretirá en el recto y liberará el fármaco. La composición para la administración rectal puede contener una base oleaginosa como un excipiente no irritante adecuado. Tales bases incluyen, entre otros, lanolina, manteca de cacao y polietilenglicol.

Una formulación típica para administración intramuscular o intratecal consistirá en una suspensión o solución de principio activo en un aceite o solución de ingrediente activo en un aceite, por ejemplo, aceite de cacahuete o aceite de sésamo. Una formulación típica para administración intravenosa o intratecal consistirá en una solución acuosa isotónica estéril que contiene, por ejemplo, ingrediente activo y dextrosa o cloruro de sodio o una mezcla de dextrosa y cloruro de sodio. Las composiciones de la presente descripción pueden formularse para proporcionar una liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo, es decir, el enantiómero (R) del compuesto objeto después de la administración al paciente mediante el empleo de procedimientos conocidos en la técnica. Los sistemas de suministro de fármacos de liberación controlada incluyen sistemas de bomba osmótica y sistemas de disolución que contienen depósitos recubiertos de polímero o formulaciones de matriz de fármaco-polímero. Se dan ejemplos de sistemas de liberación controlada en las patentes de EE.UU. Núm. 3,845,770 y 4,326,525 y en P. J. Kuzma et al., Regional Anesthesia 1997, 22(6):543-551.

Las composiciones de la presente divulgación también pueden suministrarse a través de sistemas de suministro de fármacos intranasales para terapias médicas locales, sistémicas y de nariz a cerebro. Los expertos en la técnica conocen la tecnología de dispersión de partículas controladas (CPD)™, los tradicionales frascos de pulverización nasal, inhaladores o nebulizadores para proporcionar un suministro local y sistémico efectivo de fármacos dirigidos a la región olfativa y los senos paranasales.

La presente divulgación también se refiere a una cubierta intravaginal o un dispositivo central de suministro de fármacos adecuado para la administración a la hembra humana o animal. El dispositivo puede estar compuesto por el ingrediente farmacéutico activo en una matriz polimérica, rodeado por una envoltura y capaz de liberar el enantiómero (R) de los compuestos objeto en un patrón de orden sustancialmente cero en una base diaria de manera similar a los dispositivos usados para aplicar testosterona como se describe en la Solicitud de Patente Publicada PCT N° WO 98/50016 y la Patente de EE.UU. Núm. 6,416,780.

La vía de administración más adecuada dependerá de la naturaleza y gravedad de la afección que se esté tratando. Los expertos en la técnica también están familiarizados con la determinación de los métodos de administración (por ejemplo, oral, intravenosa, inhalatoria, subcutánea, rectal, etc.), formas de dosificación, excipientes farmacéuticos adecuados y otros asuntos relevantes para el suministro de un enantiómero (R) de los compuestos objeto a un sujeto que lo necesite.

La composición farmacéutica de la presente divulgación puede incluir varios materiales, que modifican la forma física de una unidad de dosificación sólida o líquida. Por ejemplo, la composición puede incluir materiales que formen una cubierta de recubrimiento alrededor de los ingredientes activos. Los materiales que forman la cubierta de recubrimiento son típicamente inertes y pueden seleccionarse, por ejemplo, de azúcar, goma laca y otros agentes de recubrimiento entérico. Alternativamente, los ingredientes activos pueden envolverse en una cápsula de gelatina.

La composición farmacéutica de la presente divulgación en forma sólida o líquida puede incluir un agente que se une al enantiómero (R) de los compuestos objeto y, de esta manera, ayuda al suministro del compuesto. Los agentes adecuados que pueden actuar en esta capacidad incluyen un anticuerpo monoclonal o policlonal, una proteína o un liposoma.

La composición farmacéutica de la presente divulgación puede consistir en unidades de dosificación que pueden administrarse como aerosol. El término aerosol se usa para indicar una variedad de sistemas que van desde aquellos de naturaleza coloidal hasta sistemas que consisten de paquetes presurizados. El suministro puede ser mediante un gas licuado o comprimido o mediante un sistema de bomba adecuado que dispense los ingredientes activos. Los aerosoles de un enantiómero (R) de los compuestos objeto pueden suministrarse en sistemas monofásicos, bifásicos o trifásicos con el fin de suministrar el (los) ingrediente(s) activo(s). El suministro del aerosol incluye el recipiente, activadores, válvulas, subcontenedores y similares, que pueden formar conjuntamente un kit. Un experto en la técnica, sin experimentación excesiva, puede determinar los aerosoles preferidos.

Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación pueden prepararse mediante una metodología bien conocida en la técnica farmacéutica. Por ejemplo, una composición farmacéutica destinada a la administración por inyección puede prepararse mediante la combinación de un enantiómero (R) del compuesto objeto con agua destilada estéril para formar una solución. Puede añadirse un tensioactivo para facilitar la formación de una solución o suspensión homogénea. Los tensioactivos son compuestos que interaccionan de forma no covalente con un enantiómero (R) de los compuestos objeto para facilitar la solución o suspensión homogénea del compuesto en el sistema de suministro acuoso.

Generalmente, una dosis diaria terapéuticamente efectiva de un enantiómero (R) del compuestos objeto es (para un mamífero de 70 kg) de aproximadamente 0,001 mg/kg (es decir, 0,07 mg) a aproximadamente 100 mg/kg (es decir, 7,0 g); preferentemente, una dosis diaria terapéuticamente efectiva es (para un mamífero de 70 kg) de aproximadamente 0,01 mg/kg (es decir, 0,70 mg) a aproximadamente 50 mg/kg (es decir, 3,5 g); y con mayor preferencia una dosis diaria terapéuticamente efectiva es (para un mamífero de 70 kg) de aproximadamente 1 mg/kg (es decir, 70 mg) a aproximadamente 25 mg/kg (es decir, 1,75 g). En algunos aspectos, una dosis diaria terapéuticamente efectiva del enantiómero (R) del compuestos objeto es (para un mamífero de 70 kg), de aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 2,5 mg/kg, como de 0,75 mg/kg a aproximadamente 2,25 mg/kg, 1 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, o aproximadamente 1 mg/kg o aproximadamente 2 mg/kg.

Los rangos de dosis efectivas proporcionados en el presente documento no pretenden ser limitantes y representan rangos de dosis preferidos. Sin embargo, la dosis más preferida se adaptará al sujeto individual, como lo entenderá y determinará un experto en las técnicas relevantes (véase, por ejemplo, Berkow et al., Eds., The Merck Manual, 19na edición, Merck y Co., Rahway, N.J., 2011; Brunton et al., Eds., The Pharmacological Basis of Therapeutics de Goodman y Gilman, 12da edición, McGraw-Hill 2011; Avery’s Drug Treatment: Principles and Practice of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 3a edición, ADIS Press, LTD., Williams y Wilkins, Baltimore, MD. (1987), Ebadi, Pharmacology, Little, Brown y Co., Boston, (1985); Osolci al., eds., Remington's Pharmaceutical Sciences, edición actual, Mack Publishing Co., Easton, PA; Katzung, Basic and Clinical Pharmacology, Appleton y Lange, Norwalk, CT (1992)).

La dosis total requerida para cada tratamiento puede administrarse en múltiples dosis o en una sola dosis durante el transcurso del día, si se desea. Generalmente, el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas, que son menores a la dosis óptima del compuesto. A partir de entonces, la dosis se aumenta mediante incrementos pequeños hasta que se alcanza el efecto óptimo bajo las circunstancias. El presente compuesto o composición farmacéutica puede administrarse solo o junto con otros diagnósticos y/o productos farmacéuticos dirigidos a la patología, o dirigidos a otros síntomas de la patología. Las cantidades efectivas del enantiómero (R) del compuesto objeto o la composición farmacéutica de la presente descripción son de aproximadamente 0,1 jg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal, administrados a intervalos de 4-72 horas, durante un período de 2 horas a 1 año, y/o cualquier intervalo o valor en el mismo, tal como 0,0001 -0,001, 0,001 -0,01, 0,01 -0,1, 0,1-1,0, 1,0-10, 5-10, 10-20, 20-50 y 50-100 mg/kg, en los intervalos de 1-4, 4-10, 10-16, 16-24, 24-36, 24-36, 36-48, 48-72 horas, durante un periodo de 1-14, 14-28 o 30-44 días, o 1 -24 semanas, o cualquier rango o valor dentro del mismo.

Los receptores de administración del enantiómero (R) del compuesto objeto y/o de composiciones farmacéuticas de la presente descripción pueden ser cualquier mamífero, que incluye los mamíferos del Orden Primate (que incluye humanos, simios y monos), Arteriodactyla (que incluye caballos, cabras, vacas, ovejas, cerdos), Rodenta (que incluye ratones, ratas y hámsteres), Lagamorpha (que incluye conejos) y Carnivora (que incluye gatos y perros). Los receptores más preferidos son los humanos.

5.5 Terapia combinada

El enantiómero (R) del compuesto sujeto puede combinarse de manera útil con uno o más de otros agentes terapéuticos o como cualquier combinación de los mismos, en el tratamiento o prevención (como se proporciona en el presente documento) de epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico en mamíferos, preferentemente humanos. Por ejemplo, el enantiómero (R) del compuesto objeto puede administrarse simultáneamente, secuencialmente o por separado en combinación con otros agentes terapéuticos, que incluyen, entre otros:

• agonistas de TAAR1, como fentermina (que de acuerdo con la teoría no limitante puede aumentar la liberación de noradrenalina como complemento o suplemento de, por ejemplo, los efectos de (R)-norfenfluramina sobre los receptores 5HT2C y/o 5HT2A como se describe en el presente documento);

• analgésicos opiáceos, por ejemplo, morfina, heroína, cocaína, oximorfona, levorfanol, levalorfano, oxicodona, codeína, dihidrocodeína, propoxifeno, nalmefeno, fentanilo, hidrocodona, hidromorfona, meripidina, metadona, nalorfina, naloxona, nalocodona y naltrexina, buprenporina, buprenporina;

• analgésicos no opiáceos, por ejemplo, acetaminofén, salicilatos (por ejemplo, aspirina);

• medicamentos antiinflamatorios no esteroides (NSAID), por ejemplo, ibuprofeno, naproxeno, fenoprofeno, ketoprofeno, celecoxib, diclofenaco, diflusinal, etodolac, fenbufeno, fenoprofeno, flufenisal, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolac, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, nabumetona, naproxeno, nimesulida, nitroflurbiprofeno, olsalazina, oxaprozina, fenilbutazona, piroxicam, sulfasalazina, sulindac, tolmetina y zomepirac;

• anticonvulsivos, por ejemplo, carbamazepina, oxcarbazepina, lamotrigina, valproato, topiramato, gabapentina y pregabalina;

• antidepresivos como antidepresivos tricíclicos, por ejemplo, amitriptilina, clomipramina, despramina, imipramina y nortriptilina,

• inhibidores selectivos de COX-2, por ejemplo, celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib, deracoxib, etoricoxib y lumiracoxib;

• alfa-adrenérgicos, por ejemplo, doxasozina, tamsulosina, clonidina, duanfacina, dexmetatomidina, modafinilo y 4-amino-6,7-dimetoxi-2-(5-metanosulfonamido-1,2,3,4-tetrahidroisoquinol-2-il)-5-(2-piridil)quinazolina;

• sedantes barbitúricos, por ejemplo, amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metabital, metohexital, pentobarbital, fenobartital, secobarbital, talbutal, teamilal y tiopental;

• antagonista de la taquiquinina (NK), particularmente un antagonista de NK-3, NK-2 o NK-1, por ejemplo, (aR,9R)-7-[3,5-bis(trifluorometil)bencil)]-8,9,10,11 -tetrahidro-9-metil-5-(4-metilfenil)-7H-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]-naftiridin-6-13-diona (TAK-637), 5-[[2R,3S)-2-[(1 R)-1 -[3,5-bis(trifluorometilfenil]etoxi-3-(4-fluorofenil)-4-morfolinil]-metil]1,2-dihidro-3H-1,2,4-triazol-3-ona (MK-869), aprepitant, lanepitant, dapitant o 3-[[2-metoxi5-(trifluorometoxi)fenil]-metilamino]-2-fenilpiperidina (2S,3S);

analgésicos de alquitrán de hulla, por ejemplo, acetaminofeno;

inhibidores de reabsorción de serotonina, por ejemplo, paroxetina, sertralina, norfluoxetina (metabolito de fluoxetina desmetilo), metabolito desmetilsertralina, ‘3 fluvoxamina, paroxetina, citalopram, metabolito de citalopram desmetilcitalopram, escitalopram, d,l-fenfluramina, femoxetina, ifoxetina, cianodotiepina, litoxetina, dapoxetina, nefazodona, cericlamina, trazodona y fluoxetina;

inhibidores de reabsorción de noradrenalina (norepinefrina), por ejemplo, maprotilina, lofepramina, mirtazepina, oxaprotilina, fezolamina, tomoxetina, mianserina, buproprión, metabolito de bupropión hidroxibupropión, nomifensina y viloxazina (Vivalan®), especialmente un inhibidor selectivo de reabsorción de noradrenalina, como reboxetina, en particular (S,S)-reboxetina y sedantes/ansiolíticos neurolépticos de venlafaxina duloxetina; inhibidores duales de la reabsorción de serotonina-noradrenalina, como venlafaxina, metabolito de venlafaxina O-desmetilvenlafaxina, clomipramina, metabolito de clomipramina desmetilclomipramina, duloxetina, milnacipran e imipramina;

inhibidores de acetilcolinesterasa como donepezil;

antagonistas de 5-HT3 como ondansetrón;

antagonistas o agonistas del receptor metabotrópico de glutamato (mGluR) o potenciadores alostéricos del glutamato en los mGluR;

anestésicos locales tal como mexiletina y lidocaína;

corticosteroide como dexametasona;

antiarrítmicos, por ejemplo, mexiletina y fenitoína;

antagonistas muscarínicos, por ejemplo, tolterodina, propiverina, cloruro de tropsio t, darifenacina, solifenacina, temiverina e ipratropio;

agonistas muscarínicos o potenciadores alostéricos de acetilcolina en los receptores muscarínicos cannabinoides o potenciadores alostéricos de endorfinas en receptores cannabinoides;

agonistas (por ejemplo, resinferatoxina) o antagonistas (por ejemplo, capsazepina) del receptor vanilloide; sedantes por ejemplo, glutetimida, meprobamato, metacualona y dicloralfenazona;

ansiolíticos como benzodiazepinas,

antidepresivos como mirtazapina,

agentes tópicos (por ejemplo, lidocaína, capsaicina y resiniferotoxina);

relajantes musculares como benzodiazepinas, baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, metocarbamol y orfrenadina;

antihistamínicos o antagonistas de H1;

antagonistas del receptor NMDA;

agonistas/antagonistas del receptor 5-HT;

inhibidores de PDEV;

Tramado®;

analgésicos colinérgicos (nicotínicos);

ligandos de alfa-2-delta;

antagonistas del subtipo de prostaglandina E2;

antagonistas de leucotrieno B4; e

• inhibidores de 5-lipoxigenasa.

Como se usa en la presente descripción, "combinación" se refiere a cualquier mezcla o permutación del enantiómero (R) del compuesto objeto con uno o más agentes terapéuticos adicionales. A menos que el contexto indique claramente lo contrario, "combinación" puede incluir el suministro simultáneo o secuencial del enantiómero(R)del compuesto objeto con uno o más agentes terapéuticos, incluyendo otro enantiómero (R) de los otros compuestos descritos en el presente documento. A menos que el contexto indique claramente lo contrario, "combinación" puede incluir las formas de dosificación del enantiómero (R) del compuesto objeto con otro agente terapéutico. A menos que el contexto lo indique de cualquier otra manera, "combinación" puede incluir las vías de administración del enantiómero (R) del compuesto objeto con otro agente terapéutico. A menos que el contexto lo indique de cualquier otra manera, "combinación" puede incluir las formulaciones del enantiómero (R) del compuesto objeto con otro agente terapéutico. Las formas de dosificación, las vías de administración y las composiciones farmacéuticas incluyen, entre otras, las descritas en el presente documento.

En un aspecto, la presente divulgación se refiere a un método descrito en el presente documento que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del enantiómero (R) del compuesto objeto simultáneamente, secuencialmente o por separado en combinación con fentermina. Asimismo, la presente divulgación se refiere a un uso descrito en el presente documento del enantiómero (R) del compuesto objeto simultáneamente, secuencialmente o por separado en combinación con fentermina.

5.6 Kits de partes

La presente divulgación también proporciona kits que contienen una composición farmacéutica descrita en el presente documento. El kit también incluye instrucciones para el uso de la composición farmacéutica para el tratamiento o la prevención (como se proporciona en la presente descripción) de epilepsia u otro trastorno convulsivo epiléptico. Preferentemente, un kit contendrá una o más dosis unitarias de la composición farmacéutica. Por ejemplo, tal dosis unitaria puede ser una cantidad suficiente para la preparación de una inyección intravenosa. Será evidente para los expertos en la técnica que tales composiciones que son sensibles a la luz y/o al aire pueden requerir un envase y/o una formulación especial. Por ejemplo, pueden usarse envases que sean opacos a la luz y/o estén sellados contra el contacto con el aire ambiente y/o formulados con recubrimientos o excipientes adecuados.

5.7 Preparación de los enantiómeros

A. Preparación de (R)-fenfluramina y (S)-fenfluramina.

(R)-fenfluramina y (S)-fenfluramina pueden prepararse mediante el uso de sintones quirales o reactivos quirales por métodos conocidos por un experto en la técnica, o pueden resolverse a partir de fenfluramina mediante el uso de técnicas convencionales, como HPLC mediante el uso de una columna quiral. La resolución óptica de fenfluramina por cristalización en su enantiómero (R) y su enantiómero (S) se describió, por ejemplo, en Coquerel et al., Chemistry Letters (1988), págs. 1081-1084.

B. Preparación de (R)-norfenfluramina y (S)-norfenfluramina.

(R)-norfenfluramina y (S)-norfenfluramina pueden prepararse mediante el uso de sintones quirales o reactivos quirales mediante métodos conocidos por un experto en la técnica, o pueden resolverse a partir de norfenfluramina (disponible comercialmente, por ejemplo, de Toronto Research Chemicals, North York, Ontario, Canadá) mediante el uso de técnicas convencionales, como HPLC mediante el uso de una columna quiral.

(R)-norfenfluramina y (S)-norfenfluramina también pueden prepararse según los métodos descritos en los Esquemas de Reacción 1 y 2 a continuación, en donde se usan las siguientes abreviaturas:

Ni Raney se refiere a níquel Raney;

atm se refiere a la atmósfera;

AcOH se refiere a ácido acético;

MeOH se refiere a metanol;

h se refiere a horas;

Pd/C se refiere a paladio sobre carbono; y

rt se refiere a la temperatura ambiente.

El Esquema de Reacción 1 muestra la preparación de (R)-norfenfluramina:

E sq u em a d e r ea cc ió n 1.

(R)-norfenfluramina

Los compuestos 101 y 102 están disponibles comercialmente o pueden prepararse mediante los métodos conocidos por un experto en la técnica.

En general, se puede preparar (R)-norfenfluramina mediante el método que se muestra en el Esquema de Reacción 1 tratando primero el compuesto 101 con el compuesto 102 en condiciones estándar de aminación reductora para formar el compuesto 103, que se trata a continuación en condiciones estándar de hidrogenación catalítica para formar (R)-norfenfluramina.

De forma similar, se prepara (S)-norfenfluramina como se muestra más abajo en el Esquema de Reacción 2 en donde los compuestos 101 y 201 están disponibles comercialmente.

C. Preparación de (R)-benfluorex y (S)-benfluorex.

(R)-benfluorex y (S)-benfluorex pueden prepararse a partir de (R)-norfenfluramina y (S)-norfenfluramina mediante los métodos descritos en el documento EP 1321445. Específicamente, esta metodología implica la reacción de (R)-norfenfluramina y (S)-norfenfluramina con óxido de etileno para formar los correspondientes aminoalcoholes, seguida de acilación de la fracción alcohol con cloruro de benzoilo.

Los siguientes ejemplos, que están dirigidos a la síntesis de los enantiómeros de norfenfluramina; y los siguientes ejemplos biológicos se proporcionan como una guía para ayudar en la práctica de los métodos presentes y el uso de los compuestos objeto, y no pretenden ser una limitación del alcance de la invención reivindicada.

6. EJEMPLOS

6.1 Ejemplo Sintético 1

Síntesis de (R)-norfenfluramina ((R)-1-((3-trifluorometil)fenil)propan-2-amina)

A. A una mezcla de 1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-ona (10,0 g, 49,5 mmol) en metanol (60 mL) se añadió (R)-1-feniletan-1 -amina (6,00 g, 49,5 mmol), níquel Raney (800 mg de una suspensión al 50 % p/p en agua) y ácido acético glacial (1,49 g). La mezcla se purgó durante 5 minutos con gas hidrógeno, se calentó a 75 °C y se agitó durante 24 h bajo una atmósfera de hidrógeno (8 atm). La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas. El pH del filtrado se ajustó a pH ~1 mediante la adición de ácido clorhídrico concentrado (5 mL). Se añadió agua (30 mL) y la mezcla se agitó a 40 °C durante 1 h. Después, la mezcla se enfrió a 5 °C y se dejó reposar durante 20 minutos a esta temperatura, tiempo durante el cual se depositó un precipitado incoloro. El sólido se recogió por filtración y se lavó con una mezcla de metanol y agua (1:1 v/v, 200 mL) para producir (R)-N-((R)-1-feniletil)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina (7,65 g, 22,2 mmol, 45 %) como su correspondiente sal de hidrocloruro. El filtrado se concentró mediante secado al vacío y el residuo se lavó con éter dietílico (3 x 30 mL) para proporcionar una cantidad adicional de (R)-N-((R)-1-feniletil)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina (4,52 g, 13,1 mmol, 26 %) como su correspondiente sal de hidrocloruro. El rendimiento total era 71 %.

B. Una disolución de hidrocloruro de (R)-N-((R)-1 -feniletil)-1 -(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina (2,23 g, 6,50 mmol) en metanol (25 mL) se purgó con nitrógeno seco durante 10 minutos. Se añadió paladio sobre carbono (0,44 g, 10 % p/p de Pd). La mezcla se purgó con nitrógeno seco durante 10 minutos y posteriormente con hidrógeno durante 10 minutos. Después, la mezcla se agitó durante 20 h bajo una atmósfera de hidrógeno (1 atm, globo) y se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró mediante secado al vacío y el residuo se disolvió en ácido clorhídrico 0,2 M (20 mL). La disolución resultante se lavó con hexanos (3 x 20 mL) y el pH de la capa acuosa se ajustó luego a pH ~12 mediante la adición de hidróxido de sodio (~1 g). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (50 mL), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron mediante secado al vacío para producir (R)-norfenfluramina ((R)-1-((3-trifluorometil)fenil)propan-2-amina) (1,12 g, 5,52 mmol, 85 %) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, cDch): 8 7,52-7,39 (m, 4H), 3,22-3,18 (m, 1H), 2,80-2,73 (m, 1H), 2,63-2,56 (m, 1H), 1,13 (d, J = 6,0 Hz, 3H); MS (ES+) 204,2 (M H); [a]D20 -16,0° (c = 1,0, CHCl3).

6.2 Ejemplo Sintético 2

Síntesis de (S)-norfenfluramina ((S)-1-((3-trifluorometil)fenil)propan-2-amina)

A. A una mezcla de 1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-ona (10,0 g, 49,5 mmol) en metanol (60 mL) se añadió (S)-1-feniletan-1 -amina (6,00 g, 49,5 mmol), níquel Raney (800 mg de una suspensión al 50 % p/p en agua) y ácido acético glacial (1,49 g). La mezcla se purgó durante 5 minutos con gas hidrógeno, se calentó a 75 °C y se agitó durante 24 h bajo una atmósfera de hidrógeno (8 atm). La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente y se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas. El pH del filtrado se ajustó a pH ~1 mediante la adición de ácido clorhídrico concentrado (5 mL). Se añadió agua (30 mL) y la mezcla se agitó a 40 °C durante 1 h. Después, la mezcla se enfrió a 5 °C y se dejó reposar durante 20 minutos a esta temperatura, tiempo durante el cual se depositó un precipitado incoloro. El sólido se recogió por filtración y se lavó con una mezcla de metanol y agua (1:1 v/v, 200 mL) para producir (S)-N-((S)-1-feniletil)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina (8,01 g, 23,3 mmol, 47 %) como su correspondiente sal de hidrocloruro. El filtrado se concentró mediante secado al vacío y el residuo se lavó con éter dietílico (3 x 30 mL) para proporcionar una cantidad adicional de (S)-N-((S)-1-feniletil)-1-(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina (4,78 g, 13,9 mmol, 28 %) como su correspondiente sal de hidrocloruro. El rendimiento total era 75 %.

B. Una disolución de (S)-N-((S)-1 -feniletil)-1 -(3-(trifluorometil)fenil)propan-2-amina (2,23 g, 6,50 mmol) en metanol (25 mL) se purgó con nitrógeno seco durante 10 minutos. Se añadió paladio sobre carbono (0,44 g, 10 % p/p de Pd). La mezcla se purgó con nitrógeno seco durante 10 minutos y subsecuentemente con hidrógeno durante 10 minutos. Después, la mezcla se agitó durante 20 h bajo una atmósfera de hidrógeno (1 atm, globo) y se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas. El filtrado se concentró mediante secado al vacío y el residuo se disolvió en ácido clorhídrico 0,2 M (20 mL). La disolución resultante se lavó con hexanos (3 x 20 mL) y el pH de la capa acuosa se ajustó luego a pH ~12 mediante la adición de hidróxido de sodio (~1 g). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 mL) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con cloruro de sodio acuoso saturado (50 mL), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se concentraron mediante secado al vacío para producir (S)-norfenfluramina ((S)-1-((3-trifluorometil)fenil)propan-2-amina) (1,16 g, 5,72 mmol, 88 %) como un aceite incoloro. 1H RMN (400 MHz, c Dc I3): 8 7,52-7,39 (m, 4H), 3,22-3,18 (m, 1H), 2,80-2,73 (m, 1H), 2,63-2,56 (m, 1H), 1,13 (d, J = 6,0 Hz, 3H); MS (ES+) 204,2 (M H); [a]D20 16,0° (c = 1,0, CHCI3).

6.3 Ensayos Biológicos

Se conocen varias técnicas en la materia para probar la actividad del enantiómero (R) de la invención. Para que la invención descrita en el presente documento pueda entenderse más completamente, se exponen los siguientes ensayos biológicos. Debe entenderse que estos ejemplos tienen propósitos ilustrativos solamente y no deben interpretarse como limitantes de esta invención de ninguna manera.

6.3.1 Ejemplo Biológico 1. Modelo de Ratón con Síndrome de Dravet

El síndrome de Dravet, una encefalopatía epiléptica, es causada por una mutación heterocigótica de pérdida de función (LOF) en el gen que codifica el canal de sodio dependiente de voltaje específico de la neurona, SCN1A. Los ratones que tienen una deleción dirigida heterocigota del gen que codifica SCN1A recapitulan muchas características del síndrome de Dravet y proporcionan un modelo de enfermedad útil para probar fenfluramina y compuestos relacionados con fenfluramina como se describe en el presente documento, incluyendo enantiómeros aislados de tales compuestos. Los ratones heterocigotos con Scn1a inactivado (Scn1a /-) también tienen convulsiones y son un modelo del Síndrome de Dravet.

Por ejemplo, los ratones Scn1a /- F1 de las cepas 129S6/SvEvTac y C57BL/6J presentan epilepsia grave y letalidad prematura y se consideran un modelo de mamífero del síndrome de Dravet en humanos. En las interneuronas del hipocampo de ratones F1 Scn1a /- se describió una densidad de corriente de sodio reducida (INa), así como también un disparo de potencial de acción alterado, lo que resultó en una neurotransmisión GABAérgica inhibitoria dependiente del potencial de acción reducido y una mayor excitabilidad neuronal (Han et al., 2012) Nature 489:385; Mistry et al., 2014 Neurobiol. Dis. 65:1). Estos ratones son susceptibles a convulsiones inducidas por hipertermia a partir de la tercera semana de vida, según lo informado por Oakley et al., (2009) Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU. 106(10) :3994-3999; Oakley et al., (2013) J. Pharmacol. Exp. Ther. 345(2):215-224).

Inducción de convulsiones de flurotilo. Se colocaron ratones Scn1a /- F1 de entre 5 y 12 semanas de edad en una cámara de Plexiglas™ transparente (Poli(metacrilato de metilo), PMMA) y se introdujo flurotilo (2,2,2-trifluoroetiléter) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) lentamente en la cámara mediante una bomba de jeringa a una velocidad de 20 mL/min y se dejó volatilizar. Los umbrales de las convulsiones se determinan mediante la medición de la latencia hasta la primera MJ (sacudida mioclónica) y la GTCS (convulsión tónico clónica generalizada). Los umbrales de las convulsiones pueden medirse cuando los ratones reciben una dosis de control de vehículo o compuesto activo (por ejemplo, enantiómero de fenfluramina aislado) administrado en vehículo. La MJ es la primera respuesta conductual observable y se caracteriza por una breve sacudida de los hombros y/o el cuello. La GTCS se caracteriza por convulsiones de todo el cuerpo y pérdida de postura. Los ratones también se puntúan para la progresión de la GTCS a la extensión tónica de las extremidades traseras.

Inducción de convulsiones de KA. Se inyectan intraperitonealmente (i.p.) ratones Scn1a /- F1 de entre 3 y 4 meses de edad con 15, 20 o 30 mg/kg de ácido kaínico KA (Ocean Produce International, Shelburne, Nueva Escocia, Canadá). Se disuelve KA en solución salina acuosa al 0,9 % (p/v) hasta una concentración de 2,5 mg/mL para obtener un volumen de inyección apropiado. A todos los ratones se les inyecta entre las 12 del mediodía y las 4 pm para minimizar la variación de comportamiento debido al ritmo circadiano. Después de la inyección de KA, los ratones se observan durante 2 h y se puntúan de acuerdo con una escala de Racine modificada (Racine, R.J. 1972 Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 32(3):281-294). Esta escala modificada se basa en los siguientes criterios: etapa 0 - sin respuesta; etapa 1 - mirar fijamente; etapa 2 - inclinación de cabeza; etapa 3 - clono de extremidades anteriores; etapa 4 - levantamiento y caída; etapa 5 - GTCS; etapa 6 - muerte. Las puntuaciones de la escala de Racine modificada se comparan para ratones a los que se les administró vehículo solo (control) y ratones que recibieron compuesto derivado de la fenfluramina activo.

Ensayo de convulsiones inducidas por temperatura. Las convulsiones se logran induciendo hipertermia en crías de ratón Scn1a /- F1. Se coloca un ratón P14 a P22 en una cámara de Plexiglas™ PMMA, cuya parte inferior está forrada con papel absorbente. La temperatura central del cuerpo del ratón se controla mediante una sonda de temperatura rectal conectada a un controlador de temperatura para roedores y se permite que los ratones se aclimaten a la cámara de prueba de PMMA durante 10 minutos, manteniendo su temperatura central a 37,0 °C. A continuación, la temperatura central se eleva 0,5 °C cada 2 minutos mediante el uso de una lámpara de calor colocada sobre la cámara de prueba hasta que comienzan los comportamientos que indican convulsiones o hasta que la temperatura central del cuerpo alcanza los 42,5 °C. Se anotan la temperatura central al inicio de las convulsiones, el comportamiento y el tiempo. La duración máxima de la hipertermia es de 22 minutos.

Criterios de Valoración Experimentales y Clínicos: una convulsión se define como sacudidas mioclónicas, clono de la pata delantera y/o extensión tónica de las extremidades. Se registran la latencia y la duración de las convulsiones. Los compuestos con actividad proconvulsiva disminuyen la latencia hasta la convulsión, mientras que los compuestos con actividad anticonvulsiva la aumentan. La duración total de la exposición a la hipertermia es de 22 minutos y todos los animales se sacrifican al final del ensayo.

Inducción Térmica y EEG. En un grupo de ratones Scn1a /- F1 se sigue continuamente la temperatura corporal central de cada animal por una sonda de temperatura rectal y se controla por un circuito de retroalimentación en línea con una lámpara de calor. La temperatura corporal se incrementa en etapas de 0,5 °C a intervalos de 2 min hasta que se produce una convulsión o se alcanza una temperatura de 42 °C. El umbral de convulsión se mide por la latencia hasta la primera convulsión y se compara cuando se dosifica a los ratones con vehículo (control) o compuesto activo administrado en el vehículo. A continuación, el animal se enfría y se devuelve a su jaula de origen. La inducción térmica se realiza en P22, y el proceso de inducción y las convulsiones resultantes se registran mediante seguimiento por video. Las convulsiones se puntúan en la escala de Racine mediante el uso de los mismos criterios como se describe más abajo en el registro y análisis de convulsiones espontáneas.

Registro y Análisis de Convulsiones Espontáneas. Se siguen continuamente ratones Scnla /- F1 por video desde P19 a P27. Los archivos de video resultantes se revisan, por ejemplo, en velocidad de ~8x. A continuación, se revisan los supuestos episodios de convulsiones a una velocidad reducida, por ejemplo, a una velocidad 2x, y se puntúan de 1 a 5 para la gravedad de las convulsiones según el sistema de puntuación de Racine: 1, movimientos faciales y bucales; 2, inclinación de cabeza; 3, clono de extremidades anteriores, generalmente una extremidad; 4, clono de extremidades anteriores con levantamiento; y 5, convulsión tónico-clónica generalizada (GTC), levantamiento, clono y caída. Las puntuaciones de Racine se comparan para ratones a los que se les administró el vehículo solo (control) frente a los que recibieron el compuesto activo en el vehículo (prueba).

En la línea C57BL/6J (B6), el 50 % de los heterocigotos nulos para Scn1a /- desarrollan convulsiones espontáneas y muerte esporádica a partir de la tercera semana de vida (Yu et al., 2006 Nat. Neurosci. 9:1142-1149; Mistry et al., 2014 Neurobiol. Dis. 65:1-11). Se colocan ratones heterocigotos P17-P20 (n=2-4) en una cámara de registro. Se les proporciona comida y agua a voluntad. El comportamiento del ratón se registra continuamente las 24 horas del día durante 10 a 14 días mediante el uso de cámaras analógicas (una por cámara) conectadas a una grabadora DVR o una computadora. Los ratones se sacrifican dentro de las cinco horas posteriores a la última grabación. Un grupo de control de ratones tratados con vehículo solo se incluye en cualquier estudio que pruebe la eficacia de los AED candidatos frente a convulsiones espontáneas. Los compuestos se administran diaria o crónicamente mediante el uso de una bomba osmótica de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Alzet Inc., Cupertino, CA, EE.UU.) en dependencia de sus propiedades.

Análisis de Archivos de Video: los investigadores que desconocen el estado del grupo experimental (control frente a compuesto de prueba) analizan los videos, buscando convulsiones conductuales ya sea manualmente o mediante el uso de software de detección de convulsiones (Ethovision XT, Noldus Information Technology, Leesburg, VA).

Análisis estadístico. Para conjuntos de datos paramétricos, el análisis estadístico se realiza mediante el uso de la prueba t de Student. Los conjuntos de datos dicotómicos (el número de ratones que exhiben GTCS y las tasas de mortalidad) se analizan para determinar la significación estadística mediante el uso de la prueba Exacta de Fisher, mientras que los datos no paramétricos (la etapa de convulsión KA) se analizan mediante una prueba de Suma de Rangos de Mann-Whitney.

Los siguientes ejemplos describen otros modelosin vivode epilepsia en los que se prueban los enantiómeros (R) de la presente divulgación.

6.3.2 Ejemplo Biológico 2. Prueba de Convulsiones de 6 Hz

Este ensayo prueba la capacidad de un compuesto de prueba para bloquear una convulsión psicomotora inducida por una estimulación de larga duración y baja frecuencia (6 Hz) y proporciona un modelo aceptado en la técnica de convulsión parcial resistente a la terapia (Brown et al., 1953 J. Pharmacol. Exp. Therapeut. 107(3):273-283; White HS, Woodhead JH, Wilcox KS, General principles: discovery and preclinical development of antiepileptic drugs, En: Levy RH, Mattson RH, Meldrum BS, Perucca E, editores. Antiepileptic drugs 5a ed. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; 2002. págs. 36-48; Hartman et al., 2008 Epilepsia 49(2):334-339).

Los compuestos de investigación tales como el enantiómero (R) de la invención descrito en el presente documento (por ejemplo, "compuestos de prueba"), incluidos los que se encuentran inactivos en la convulsión máxima por electrochoque (MES) (Suzuki et al., 1995 Neuroscience 64(3):665-674; Bouilleret et al., 1999 Neuroscience 89(3):717-729; Riban et al., 2002 Neuroscience 112(1 ):101-111) o Metrazol subcutáneo (sc Met) (Swinyard, EA, 1969 Epilepsia 10(2): 107-119), se examinan por su capacidad para bloquear las convulsiones psicomotoras inducidas por un estímulo de baja frecuencia (6 Hz) y larga duración (3 segundos) suministrado a través de electrodos corneales. Por ejemplo, el levetiracetam es muy efectivo (ED50: 19 mg/kg, 30 min después de la inyección i.p.) en el modelo de 6 Hz descrito originalmente a principios de la década de 1950 (Toman et al., 1952 Texas Reports on Biology and Medicine 10:96; Swinyward, E.A. Electrically induced convulsions, in Experimental Models of Epilepsy, D.B. Purpura, et al., Editores.

1972, Raven Press: Nueva York. págs. 443-458; Swinyard, E.A., Experimental Models of Epilepsy: A Manual for the Laboratory Worker, in Electrically Induced Convulsions, eds. J.K.P. D.P Purpura, D. Tower, D.M. Woodbry, R. Walter.

1972, Nueva York: Raven Press, págs. 433-438) mientras que es inefectivo en la prueba MES (Barton et al., 2001 Epilepsy Res. 47(3):217-227). Además, la prueba de 6 Hz demuestra una resistencia de parcial a completa a los bloqueadores de los canales de Na+ conocidos, incluidos muchos AED, lo que hace que esta prueba sea útil como prueba de detección temprana y diferenciación de los AED candidatos. Por tanto, los compuestos que se ha demostrado que son efectivos en este ensayo de baja frecuencia (6 Hz) y de larga duración pueden ser eficaces en el tratamiento de convulsiones parciales resistentes a la terapia.

Métodos. Se tratan previamente por vía intraperitoneal (i.p.) ratones CF1 macho adultos (18-25 g) con el compuesto de ensayo a una dosis de 20-100 mg/kg. Si se observa toxicidad en una pantalla previa a la prueba de efectos tóxicos cuando el compuesto de prueba se administra i.p. en dosis variables, la dosis se modifica para evitar efectos tóxicos evidentes. Cada grupo de tratamiento (n = 4-16 ratones/grupo) se examina para determinar los efectos anticonvulsivos en uno o más de cinco momentos (1/4, 1/2, 1,2 y 4 h) después del tratamiento con el compuesto de prueba. Después del pretratamiento, cada ratón recibe una gota de hidrocloruro de tetracaína al 0,5 % aplicada a cada ojo. A continuación, se somete el ratón a estimulación de baja frecuencia (6 Hz) durante 3 segundos suministrada a través de electrodos corneales. Los estímulos de baja frecuencia y larga duración se suministran inicialmente a una intensidad de 32 mA. Los animales se inmovilizan y sueltan manualmente inmediatamente después de la estimulación y se observan para detectar la presencia o ausencia de actividad convulsiva. Si el compuesto de prueba es efectivo en el cribado de 32 mA, se realiza un ensayo adicional en el que la corriente de estimulación se aumenta a 44 mA, pero de cualquier otra manera mediante el uso del mismo protocolo que se describió anteriormente. Para los estudios de dosis-respuesta, se usa un n de 8 ratones por dosis y se genera una curva de dosis-respuesta en el momento del efecto máximo (TPE) a la intensidad de estimulación específica.

Típicamente, la estimulación de 6 Hz da como resultado una convulsión caracterizada por una fase clónica mínima seguida de comportamientos estereotipados y automatizados, que incluyen clono de la mandíbula, clono de las extremidades anteriores, contracciones de las vibrisas y/o cola de Straub. Los animales que no muestran tales comportamientos se consideran protegidos. La puntuación de las convulsiones puede usarse como una medida adicional de la eficacia del compuesto en investigación (Racine, R.J. 1972 Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol.

32(3):281-294). Los datos se analizan mediante la prueba U de Mann-Whitney, y se determina que p<0,05 es estadísticamente significativo. Para los datos obtenidos en cada momento, los resultados se expresan como el número total de animales protegidos del número de animales probados a lo largo del tiempo (por ejemplo, 2/4 representa que 2 de los 4 ratones analizados están protegidos).

Los compuestos de prueba que producen efectos anticonvulsivos (por ejemplo, al menos 2/4 protegidos en dos o más momentos) se prueban opcionalmente en otros modelos de epilepsia crónica o farmacorresistencia, que incluye la prueba de ratón inducido corneal (Rowley y White 2010 Epilepsy Res. 92(2-3):163-169), la prueba de rata inducida en el hipocampo (Lothman, E.W. 1988 Epilepsy Res. 2(6):367-379) o la prueba de rata inducida en la amígdala resistente a lamotrigina (Srivastava y White 2013 Epilepsy Res. 104:26).

Las convulsiones típicas inducidas por el modelo de 6 Hz muestran un aturdimiento momentáneo inicial seguido inmediatamente por un clono de las extremidades anteriores, contracciones de las vibrisas y cola de Straub (Barton et al., 2001). Estos comportamientos proporcionan relevancia de traducción, ya que originalmente se describieron como similares al aura de los pacientes humanos con convulsiones parciales (Toman et al., 1952 Texas Reports on Biology and Medicine 10:96; Roman, J.E.P., 1951 Neurology 1:444). Las convulsiones de 6 Hz son sensibles a las benzodiazepinas, succinamidas, barbitúricos, ácido valproico y otros FAE que elevan el umbral convulsivo (Barton et al., 2001).

6.3.3 Ejemplo Biológico 3. Modelo de Rata Inducida en el Hipocampo

Este modelo prueba la capacidad de un compuesto de prueba para bloquear las convulsiones conductuales y/o disminuir la duración de la descarga posterior (ADD) en un modelo de rata inducida en el hipocampo de convulsiones focales. El modelo de inducción ha sido un complemento útil de las pruebas anticonvulsivas más tradicionales para identificar la utilidad potencial de una sustancia de prueba para el tratamiento de convulsiones parciales complejas. La rata inducida en el hipocampo proporciona un modelo experimental de convulsiones focales que se generalizan secundariamente, por ejemplo, el modelo con inducción del hipocampo descrito por Lothman y colegas (Lothman, E.W. 1988).

Métodos. En primer lugar, los animales se preparan quirúrgicamente para la adquisición de la inducción. Se implantan quirúrgicamente electrodos bipolares en ratas Sprague-Dawley macho adultas (275-300 g) (Lothman, E.W. 1988). Brevemente, se implanta estereotáxicamente un electrodo bipolar en el hipocampo ventral (AP -3,6, ML -4,9, VD -5,0 de barra dura, incisiva 5,0) bajo anestesia con ketamina-xilazina. Se deja que los animales se recuperen durante una semana antes de que comience el régimen de inducción. El paradigma de inducción rápida en el hipocampo consiste en aplicar un régimen de estimulación repetida en días alternos durante un total de 5 días de estímulo, como se describió anteriormente (Lothman y Williamson 1994 Brain Res. 649(1-2):71-84). Durante el régimen de estimulación, se suministra una serie de 50 Hz, 10 segundos de pulsos bifásicos de 200 |uA de 1 ms cada 30 minutos durante 6 horas, dando de esta manera 12 estimulaciones por día de estímulo. Una vez que los animales son inducidos para presentar consistentemente una convulsión conductual de la Etapa 5, se evalúa la capacidad del compuesto de ensayo para modificar la convulsión inducida completamente expresada y la duración de la descarga posterior después de un período de una semana sin estimulación. A cada rata inducida se le permiten al menos cinco días entre pruebas para "eliminar" cualquier compuesto de investigación después de la prueba.

Convulsiones Focales en Ratas inducidas en el Hipocampo. Las sustancias candidatas se evalúan por su capacidad para bloquear las convulsiones secundariamente generalizadas completamente inducidas después de la adquisición de la inducción (Lothman, E.W. 1988). Las puntuaciones de las convulsiones conductuales (BSS) se clasifican de acuerdo con los siguientes criterios (Racine, R.J. 1972):

Etapa 1 - clono facial y bucal

Etapa 2: etapa 1 más inclinación de cabeza

Etapa 3 - etapa 2 más clono de las extremidades anteriores

Etapa 4 - etapa 3 más levantamiento

Etapa 5 - etapa 4 más levantamiento y caída repetidas

Para las siguientes pruebas ("Prueba 11", "Prueba 12", Prueba 13 "), los valores medios y S.E.M. se calculan para la duración de la descarga posterior (ADD), y los valores p se determinan mediante la prueba t de Student. Las diferencias significativas en BSS de los grupos de control y tratados se determinan mediante la prueba no paramétrica U de Mann-Whitney, determinándose p <0,05 como estadísticamente significativo.

Prueba 11: Identificación de la neurotoxicidad y capacidad para bloquear convulsiones focales estimuladas en el hipocampo.

En preparación para la prueba de rata inducida en el hipocampo, se determina una dosis apropiada del AED candidato (desprovisto de deterioro motor mínimo (MMI)). Para el estudio de MMI, a tres grupos de dos ratas por momento se les administra el compuesto de prueba a 300, 100 y 30 mg/kg y el MMI se efectúa seguimiento a 1/4, 1/2, 1, 2 y 4 h en un campo abierto. Con base en los resultados del estudio MMI, a dos ratas inducidas se les administra una dosis no tóxica del fármaco de prueba y se les administra la estimulación inducida a los 15, 45, 75, 105, 135, 165 y 195 minutos después de la administración del fármaco. Se registran los efectos del tratamiento sobre sus BSS y la duración de la descarga posterior. Si los resultados de esta selección inicial sugieren que un AED candidato posee actividad contra la convulsión inducida completamente expresada, el tamaño del grupo se incrementa a ocho ratas para las pruebas posteriores (Pruebas 12 y 13).

Para cada grupo de tiempo, los resultados se expresan como el número total de animales protegidos del número de animales probados a lo largo del tiempo (por ejemplo, 2 de 2 protegidos). Los compuestos de prueba que producen los efectos anticonvulsivos (por ejemplo, al menos 1/2 protegido en dos o más momentos) se volverá a analizar con un aumento de n (por ejemplo, n=6-8). Los compuestos activos son entonces candidatos para otros modelos de farmacorresistencia, incluida la prueba de 6 Hz(supra)y la prueba de rata inducida con amígdala resistente a lamotrigina (Srivastava y White 2013Epilepsy Re.104:26)

Prueba 13: Cuantificación de la capacidad de un fármaco antiepiléptico candidato para bloquear las convulsiones focales en base a las BSS.

Los grupos separados de ratas inducidas (n = 6-8) reciben dosis crecientes del AED candidato en base a los resultados de la Prueba 11 (supra). Las ratas se analizan después a los 15, 45, 75, 105, 135, 165 y 195 minutos después de la administración del fármaco. Se anotan las BSS y ADD de cada rata, calculándose la media y S.E.M. Los animales que muestran una puntuación de convulsiones de 3 o menos se consideran protegidos. Estos datos se usan para establecer una curva de respuesta a la dosis y la ED50 posterior. También se registran cambios significativos en ADD. Cuando se observa que un AED (fármaco de prueba) candidato reduce significativamente tanto la puntuación de convulsiones (3 o menos) como la duración de la descarga posterior (ADD), se inicia un estudio de dosis-respuesta. Las BSS y ADD para cada dosis se promedian en el momento del efecto máximo (TPE), y la media y la S.E.M. se comparan con los valores del control mediante la prueba no paramétrica U de Mann-Whitney. Se cuantifica la capacidad de un AED candidato para reducir la gravedad de las convulsiones y se determina una ED50 mediante análisis probit.

Las BSS y ADD para cada dosis de AED candidato se promedian en el TPE, se calcula la S.E.M. y se comparan con los valores del control. La capacidad de una sustancia candidata para reducir la gravedad de las convulsiones se cuantifica mediante los resultados recopilados de varias dosis que demuestran protección (BSS <3) y se determina una ED50 mediante análisis probit.

Prueba 12: Efecto sobre el Umbral de Descarga posterior en Ratas Inducidas en el Hipocampo.

Este ensayo de modelo animal evalúa la capacidad de un fármaco antiepiléptico (AED) candidato para aumentar el Umbral de Descarga Posterior (ADT) en la rata completamente inducida. La estimulación inicial se realiza a una intensidad de 20 pA. La intensidad del estímulo se aumenta en incrementos de 10 pA cada 1 - 2 min hasta que se produce una descarga posterior. Quince minutos después de la determinación del umbral previo al fármaco, se administra una dosis única del fármaco de prueba a cada uno de los dos animales. A continuación, se vuelve a determinar el ADT para cada rata individual en distintos momentos, por ejemplo, 1/4, 1, 2 y 4 horas después de la administración del fármaco. Tanto BSS como ADD se registran en cada uno de los momentos probados. La puntuación de las convulsiones y ADD también se registran en el ADT. Las convulsiones conductuales se califican de acuerdo con los criterios descritos anteriormente (Racine, R.J. 1972). Se registran las puntuaciones de las convulsiones individuales, ADD y ADT. En el caso de un fármaco candidato (de prueba) que exhibe actividad AED putativa, se usan cuatro o más animales, y luego se promedian los resultados y se calculan la media del grupo y la S.E.M.

6.3.4 Ejemplo Biológico 4. Modelo Quimioconvulsivo

Este modelo evalúa el efecto de un AED candidato frente a los efectos de los quimioconvulsivos conocidos, bicuculina y picrotoxina. En este modelo animal aceptado en la técnica, se induce una convulsión por el antagonista del receptor GABA A (GABAA), bicuculina (BIC), y el bloqueador del canal de cloruro GABAA, picrotoxina (PIC) (véase, por ejemplo, White et al., 2012 Epilepsia 53(1 ):134-146; Shih et al., 2001 Toxicol. 162(1):35-42; White et al., 1997 Epilepsy Res. 28:167; Swinyard et al., 1993 Epilepsy Res. 15(1):35-45; Coleman et al., 1985 Life Sci. 37(8):749-755; Wood, J.D. 1975 Prog. Neurobiol. 5:77-95; Snodgrass, S.R. 1992 J. Child Neurol. 7(1):77-86; Newland and Cull-Candy 1992 J. Physiol. 447(1 ):191 -213).

Métodos. En los estudios iniciales, el fármaco de prueba (AED candidato) se administra a ratones de laboratorio en varias dosis en un vehículo adecuado para evaluar su capacidad para prevenir una convulsión clónica producida por la inyección subcutánea (s.c.) de BIC (2,7 mg/kg) o PIC (2,5 mg/kg); los grupos control reciben vehículo y BIC o PIC, o solo vehículo. Después de la administración de BIC, los ratones CF1 se colocan en jaulas de aislamiento y se observan durante 30 min para detectar la presencia o ausencia de convulsiones; los que reciben PIC se observan durante 45 min debido a la absorción más lenta de este convulsivo. Las convulsiones inducidas por BIC y PIC consisten típicamente en un episodio de espasmos clónicos de las extremidades anteriores y posteriores, mandíbulas y vibrisas. Las convulsiones clónicas inducidas por BIC generalmente van seguidas de extensión tónica de las extremidades traseras y muerte.

Para los compuestos AED candidatos en las dosis que exhiben una capacidad para prevenir, retrasar el inicio o reducir la gravedad de la convulsión clónica en los estudios iniciales, la actividad se cuantifica en grupos de seguimiento de ocho animales y la ED50 y el intervalo de confianza del 95 % del compuesto de prueba se determina mediante análisis probit.

6.3.5 Ejemplo Biológico 5. Modelo de Pez Cebra

Este modelo evalúa el efecto in vivo de un AED candidato en un modelo aceptado en la técnica que emplea el pez cebra mutante(Danio rerio)para la caracterización conductual y electrofisiológica de los efectos de los AED en un organismo vertebrado intacto (Dinday et al., 2015 ENEURO 2(4) e0068-15.2015 1-19). Los peces cebra que son homocigotos para una mutación en el canal de sodio neuronal controlado por voltaje scn1Lab recapitulan un fenotipo similar al síndrome de Dravet caracterizado por convulsiones, muerte temprana y resistencia a varios AED. Los peces cebra scn1 Lab mutantes homocigotos se crían y seleccionan como se describió (Dinday et al., 2015).

Seguimiento de Convulsiones. Para evaluar los efectos de los AED candidatos sobre el comportamiento del pez cebra, se colocan larvas de scn1Lab mutantes homocigotas individuales (5-6 días después de la fertilización) en pocillos individuales de una placa de 96 pocillos de fondo plano en “medio embrionario” (Dinday et al., 2015 ) que contienen azul de metileno, en ausencia o presencia de 1-500 gM (por ejemplo, 100 gM) del AED candidato, y sometido a seguimiento para la actividad de nado mediante el uso del equipo de video de detección de movimiento con software de trazado de locomoción como se describió(Id.).La actividad se clasifica en una escala de cero (poca o ninguna actividad de nado), etapa I (episodios breves de actividad de nado), etapa II (nado rápido en círculos) o etapa III (convulsiones paroxísticas de todo el cuerpo con breve pérdida de postura). Se considera que los AED candidatos que reducen los niveles de actividad desde la etapa II o etapa III a la etapa cero o etapa I sin toxicidad tienen actividad anticonvulsiva potencial para el seguimiento electrofisiológico.

Electrofisiología. Las mediciones electrofisiológicas se realizan de los mismos organismos en los que se observa una actividad anticonvulsiva aparente del AED sin toxicidad en al menos dos ensayos independientes de la prueba de actividad de nado, como se describió (Dinday et al., 2015). Brevemente, el pez cebra se paraliza de manera transitoria con a-bungarotoxina (1 mg/mL) y se inmoviliza en agarosa al 1,2 % y las estructuras del prosencéfalo específicas deseadas (por ejemplo, telencéfalo, tectum óptico, etc.) se ponen en contacto con electrodos de campo local para electroencefalografía para evaluar la actividad de descarga electrográfica epileptiforme en ausencia o presencia del AED candidato como se describió (Id.).

Ejemplo Biológico 6. Efectos anticonvulsivos en la prueba de convulsiones de 6 HzIn vivo

En este Ejemplo, los efectos anticonvulsivosin vivode los AED candidatos se probaron en ratones mediante el uso de la prueba de convulsiones de 6 Hz. La prueba de convulsiones de 6 Hz se realizó esencialmente como se describió con anterioridad en el Ejemplo Biológico 2, con modificaciones menores como se presenta aquí, que incluye la recogida de datos en un momento que era una hora después de la administración de los AED candidatos.

Materiales y Métodos.

Compuestos: Los compuestos AED candidatos se prepararon como se describió anteriormente a menos que se indique lo contrario y eran los siguientes:

Fenfluramina racémica (hidrocloruro de [racjfenfluramina) (Ejemplo de Referencia);

(R)-fenfluramina (hidrocloruro de [fí]-(-)-fenfluramina) (Ejemplo de Referencia);

Norfenfluramina racémica ([rac]-norfenfluramina) (Ejemplo de Referencia) se adquirió de Toronto Research Chemicals, North York, Ontario, Canadá;

(R)-norfenfluramina ([fí]-(-)-norfenfluramina.

Animales: Los ratones albinos CF-1 macho adultos (25-35 g) se adquirieron de Harlan-Envigo (East Millstone, NJ). Los ratones se alojaron cuatro por jaula y tuvieron acceso a agua filtrada y comida a voluntad durante todo el experimento.

Preparación y Administración del Compuesto: Los cuatro compuestos se solubilizaron en solución salina acuosa estéril (NaCl al 0,9 %). Los compuestos se administraron a animales (16 ratones en cada grupo de tratamiento) mediante inyección intraperitoneal (IP) a 10 mL/kg de volumen, una hora antes del ensayo. Los animales control sólo recibieron el vehículo (solución salina).

Ensayo de 6Hz: Se examinó la capacidad de los compuestos AED candidatos, una hora después de la administración a los animales de prueba, para bloquear las convulsiones psicomotoras inducidas por un estímulo de baja frecuencia (6 Hz) de corriente alterna (44 mA) de larga duración (3 segundos) que se suministró a través de electrodos corneales. Se cree que estas convulsiones son el modelo de convulsiones parciales observadas en humanos. Se colocó una gota de solución de Alcaine al 0,5 % en la córnea del ojo de cada animal antes del suministro de suministro de corriente eléctrica. Posteriormente se colocaron suavemente sobre los ojos del animal electrodos conectados a un suministro de energía regulado (Unidad de Terapia Electroconvulsiva Modelo 57800, Ugo Basile Srl, Gemonio, Italia) y se inició la descarga eléctrica al activar un pulso de corriente de tres segundos (6 Hz, 44 mA) mediante el uso de un actuador de pedal. Los animales se sujetaron con la mano y se soltaron suavemente mientras se suministraba la descarga eléctrica y comenzaba la convulsión. Típicamente, la convulsión se caracterizó por un aturdimiento momentáneo inicial seguido inmediatamente por clono de la mandíbula, clono de las extremidades anteriores, contracciones de las vibrisas y cola de Straub que duraron al menos un segundo. Los animales que no mostraban este comportamiento se consideraban "protegidos".

Distribución farmacológica y bioanálisis. Inmediatamente después de la caracterización de los comportamientos convulsivos en el ensayo de 6 Hz, los animales se sacrificaron de forma humanitaria y se recogieron muestras de cerebro y plasma para analizar la distribución de los compuestos administrados a estos compartimentos tisulares.

Homogeneización de muestras de cerebro. Se descongelaron los cerebros completos de ratón pesados previamente y se añadieron 1 mL de agua desionizada y 1 mL de acetonitrilo a cada vial de muestra que contenía tejido cerebral. Las muestras se homogeneizaron mediante el uso de un homogeneizador portátil Omni™ TH (Omni International, Kennesaw, GA, EE.UU.) hasta que se obtuvo una suspensión uniforme. Se transfirieron alícuotas de 1 mL de la suspensión a tubos Eppendorf de plástico limpios de 1,5 mL y los tubos se centrifugaron a 13.000 rpm (15.871 x g) durante 20 minutos. El sobrenadante se recogió y se almacenó en viales Eppendorf de plástico etiquetados limpios a -80 °C.

Preparación de las muestras de homogeneizado de cerebro y plasma de ratón. Se extrajeron por precipitación de proteínas los homogeneizados de cerebro de ratón y las muestras de plasma de ratón, así como también los patrones de calibración y las muestras de QC preparadas a partir de plasma de ratón del control ("blanco") sin tratar. Brevemente, se mezclaron 50 gl de cada homogeneizado de cerebro y muestra de plasma de ratón (así como también cada estándar de calibración, muestra de control de calidad y muestra blanco de plasma de ratón) con 50 gl de disolución patrón interna [una disolución de 2500 ng/mL de (S)-5-((1 -bencilpirrolidin-3-il)(metil)amino)-6-metil-N-(tiazol-4-il)piridin-2-sulfonamida en agua desionizada/acetonitrilo (1:1 v/v)], seguido de adición de 50 gl de ácido fosfórico al 6 % (v/v) en agua. A esto siguió la adición de 200 gl de acetonitrilo. Las muestras se agitaron en vórtex durante 30 segundos y luego se centrifugaron durante 20 min a 13.000 rpm (15.871 x g). Los sobrenadantes se diluyeron cuatro veces más con acetonitrilo: agua (1:1 v/v) y se transfirieron a una placa de 96 pocillos antes del análisis. Las muestras de calibración y QC se prepararon en plasma de ratón K2EDTA blanco en el intervalo de concentración de 2,3 ng/mL a 4800 ng/mL con muestras de QC, incluido QC bajo (14 ng/mL), QC medio (225 ng/mL) y QC alto (3600 ng/mL).

Análisis por UHPLC-ESI-MS/MS. A continuación, las muestras se analizaron mediante cromatografía líquida de presión ultraelevada/espectroscopía de masas en tándem de ionización por electropulverización (UHPLC-ESI MS/MS) mediante el uso de un espectrómetro de masas Sciex™ TQ-5500 (AB Sciex™ LP, Concord, ON, Canadá) equipado con una Bomba Shimadzu Nexera™ UHPLC, un compartimento de columna y un automuestreador (Shimadzu Scientific Instruments, Inc., Columbia, MD, EE.UU.), mediante el uso de una elución en gradiente binario que comienza con 80 % de agua (A)/ 20 % de acetonitrilo (B), conteniendo ambos disolventes ácido fórmico al 0,1 %. Después de 0,6 minutos, la fase móvil B se incrementó linealmente a 100 % a 1 minuto y la elución se mantuvo al 100 % de fase móvil B hasta 1,5 minutos, y después se reequilibró en la relación inicial de 80 % de fase móvil A y 20 % de fase móvil B durante un tiempo de ejecución total de 2,5 minutos a una tasa de flujo de 0,4 mL/min. La columna usada fue ACE Excel™ 2 C18-PFP (2,1 mm i.d. x 5,0 mm de longitud, tamaño de partícula de 2 gm) (Advanced Chromatography Technologies Ltd, Aberdeen, Escocia). Los analitos y el patrón interno se ionizaron mediante electropulverización en el modo de iones positivos y se detectaron mediante seguimiento de reacciones múltiples (MRM) mediante el uso de las transiciones enumeradas en la Tabla 1.

Tabla 1: Seguimiento de Reacciones Múltiples (MRM) para Fenfluramina, Norfenfluramina y el Patrón

Interno

Resultados. Los animales se asignaron aleatoriamente al vehículo (n = 16) o a grupos de dosis diferentes (n = 16 por dosis) y el ensayo de 6 Hz fue realizado por un experimentador ciego a las condiciones del tratamiento. Tanto (rac)-fenfluramina como (R)-fenfluramina, cuando se administraron a los animales a 20 mg/kg, mostraron una tendencia similar en el porcentaje de ratones que estaban protegidos frente a convulsiones psicomotoras (Fig. 1). El porcentaje de animales que eran protegidos por (rac)-fenfluramina era 37,5 % (p=0,018 por la prueba exacta de Fisher) y por (R)-fenfluramina era 31,3 % (p=0,043) y solo por el vehículo (control) era 0 %. De manera similar, la administración de (rac)-norfenfluramina y (R)-norfenfluramina a los animales a 20 mg/kg mostró niveles de protección similares frente a las convulsiones psicomotoras (Fig. 1). El porcentaje de animales que eran protegidos por (rac)-norfenfluramina era 50 % (p=0,002 por la prueba exacta de Fisher) y por (R)-norfenfluramina era 50 % (p=0,002) y solo por el vehículo (control) era 0 %.

El análisis por UHPLC-ESI-MS/MS de las muestras de cerebro y plasma de ratones recogidas inmediatamente después de la prueba de eficacia en el ensayo de 6 Hz reveló las siguientes concentraciones totales en el cerebro y plasma de los compuestos administrados (Tabla 2):

Tabla 2. Análisis de la Biodistribución In Vivo de Fenfluramina/Norfenfluramina

En resumen, en el ensayo de 6 Hz, tanto fenfluramina como norfenfluramina mostraron actividad protectora contra las convulsiones en el ensayo de convulsiones psicomotoras de 6 Hz. Los enantiómeros (R) de fenfluramina y norfenfluramina proporcionaron niveles similares de protección frente a las convulsiones en el ensayo de 6 Hz en comparación con las preparaciones racémicas de fenfluramina y norfenfluramina.

6.3.7 Ejemplo Biológico 7. Efectos Anticonvulsivos de (R/S)-fenfluramina y (R)-fenfluramina en la Prueba de Convulsiones Audiogénicas

DBA/2 es una cepa endogámica de ratón ampliamente usada susceptible a convulsiones audiogénicas debido a la mutación asp2. Casi el 100 % de la cepa DBA/2 de ratones experimentan una susceptibilidad dependiente de la edad a las convulsiones audiogénicas y exhiben una carrera salvaje seguida de convulsiones clónicas y una extensión tónica, que a menudo terminan en paro respiratorio y muerte cuando se exponen a un sonido de alta intensidad (DeSarro et al., 2017 Epilepsy Behav. 71:165-173). El objetivo de este estudio era evaluar la actividad anticonvulsiva de (R/S)-fenfluramina y compararla con (R)-fenfluramina en el ratón DBA/2.

El método sigue el descrito por Dürmüller et al., Neuroreport 4(6):683-686. Los ratones (DBA/2, 3-4 semanas de edad) se transfirieron individualmente (a intervalos de 3-5 minutos) desde la sala de preparación a una sala experimental adyacente y se colocaron en un frasco de Plexiglas™ (Diámetro = 40 cm; Altura = 35 cm) montado con una campana eléctrica (110-120 dB). Al activar la campana, se midieron las apariciones y latencias de ataques de carrera salvaje, convulsiones clónicas y tónicas. También se registró el número de muertes. Se asignó una puntuación de respuesta audiogénica a cada ratón como 0 (sin convulsiones), 1 (carrera salvaje), 2 (convulsión clónica), 3 (extensión tónica) o 4 (muerte). La campana se activó hasta que se produjo una convulsión tónica o durante un máximo de 60 segundos. Se estudiaron diez (10) ratones por grupo. La prueba se realizó a ciegas. Todos los compuestos de prueba se disolvieron en solución salina al 0,9 % (vehículo) y se administraron mediante inyección intraperitoneal (IP) a un volumen de dosis de 10 mL/kg. El vehículo solo, (R/S)-fenfluramina (15 o 30 mg/kg) o (R)-fenfluramina (30 mg/kg) se administraron 60 minutos antes de la inducción de las convulsiones. El compuesto de referencia positivo (valproato; 180 mg/kg) se administró 30 minutos antes de la inducción de las convulsiones.

La FIG. 2 y la Tabla 3 muestran los resultados de los efectos anticonvulsivos de (R/S)-fenfluramina y (R)-fenfluramina en la prueba de convulsiones audiogénicas de ratón mediante la utilización de ratones macho DBA/2 (n = 10/grupo).

En los controles de vehículo, todos los ratones DBA/2 mostraron una carrera salvaje seguida de convulsiones clónicas y tónicas. Los síntomas convulsivos se observaron con una latencia media comprendida entre 2,8 ± 0,4 y 8,1 ± 0,8 segundos después de la activación de la campana. De los 10 probados murieron dos ratones. La puntuación global de la respuesta audiogénica era 3,2 ± 0,13. (R/S)-fenfluramina (15 y 30 mg/kg) disminuyó de forma dependiente de la dosis el número de ratones que presentaban convulsiones clónicas (-40 % y -90 %, respectivamente) y convulsiones tónicas (-100 % para cada dosis) y aumentó las latencias para convulsiones clónicas (+ 441 % y 853 %, respectivamente) y tónicas (+ 641 % por cada dosis). La puntuación de la respuesta audiogénica general se redujo en un 50 % y un 72 % a 15 y 30 mg/kg, respectivamente. (R)-Fenfluramina (30 mg/kg) disminuyó el número de ratones que mostraban convulsiones clónicas (-40 %), suprimió totalmente las convulsiones tónicas (-100 %) y aumentó la latencia a las convulsiones clónicas y tónicas (+ 450 % y 641 %, respectivamente). La puntuación global de la respuesta audiogénica se redujo en un 50 %.

Estos resultados demuestran una clara actividad anticonvulsiva para (R/S)-fenfluramina a 15 y 30 mg/kg y (R)-fenfluramina a 30 mg/kg en la prueba de convulsiones audiógenas en el ratón DBA/2. La magnitud del efecto anticonvulsivo era comparable entre (R/S)-fenfluramina a 15 mg/kg y (R)-fenfluramina a 30 mg/kg.

Tabla 3. Resumen de los efectos anticonvulsivos de (fí/S)-fenfluramina o (fí)-fenfluram¡na en la prueba de convulsiones audiogénicas de ratón mediante la utilización de ratones macho DBA/2 (n = 10/grupo)

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto para uso en el tratamiento de epilepsia o un trastorno convulsivo epiléptico en un sujeto humano, en donde el compuesto se selecciona a partir de norfenfluramida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, y en donde la norfenfluramida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma comprende (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en un exceso enantiomérico (ee) superior a 80 %.

2. El compuesto para uso de la reivindicación 1, en donde el compuesto tiene un ee de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma superior a 90 %, más preferentemente superior a 95 %, aún más preferentemente superior a 97 %, del modo más preferente superior a 99 %.

3. El compuesto para uso de la reivindicación 1, en donde el compuesto tiene un ee de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma entre 80 % y 99 %.

4. El compuesto para uso de la reivindicación 3, en donde el compuesto tiene un ee de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma entre 90 % y 99 %.

5. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sujeto padece el síndrome de Dravet.

6. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el sujeto padece el síndrome de Lennox-Gastaut.

7. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el uso reduce la frecuencia de convulsiones epilépticas en el sujeto, preferentemente en donde el uso reduce la frecuencia de convulsiones o la frecuencia media de convulsiones desde la línea base en al menos 20 %.

8. El compuesto para uso de la reivindicación 7, en donde el uso reduce la frecuencia de las convulsiones o la frecuencia media de las crisis convulsivas desde la línea base en al menos 25 %.

9. El compuesto para uso de la reivindicación 8, en donde el uso reduce la frecuencia de las convulsiones o la frecuencia media de las crisis convulsivas desde la línea base en al menos 50 %, en al menos 75 % o en al menos 80 %.

10. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el uso comprende la administración del compuesto al sujeto en combinación con fentermina.

11. Un compuesto para uso como un medicamento, en donde el compuesto se selecciona a partir de norfenfluramina y una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y en donde la norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma comprende (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma en un exceso enantiomérico (ee) superior a 80 %.

12. El compuesto para uso de la reivindicación 11, en donde el compuesto tiene un ee de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma superior a 90 %, más preferentemente superior a 95 %, aún más preferentemente superior a 97 %, del modo más preferente superior a 99 %.

13. El compuesto para uso de la reivindicación 11, en donde el compuesto tiene un ee de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma entre 80 % y 99 %.

14. El compuesto para uso de la reivindicación 13, en donde el compuesto tiene un ee de (R)-norfenfluramina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma entre 90 % y 99 %.

15. El compuesto para uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el uso comprende la administración del compuesto al sujeto a una dosis de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg.

16. El compuesto para uso según la reivindicación 15, en donde el uso comprende la administración del compuesto al sujeto a una dosis de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg, aproximadamente 0,5 mg/kg a aproximadamente 2,5 mg/kg o aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg.