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ES2985668T3 - Profármacos de oxabicicloheptano para uso en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Profármacos de oxabicicloheptano para uso en el tratamiento del cáncer Download PDF

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ES2985668T3
ES2985668T3 ES20167812T ES20167812T ES2985668T3 ES 2985668 T3 ES2985668 T3 ES 2985668T3 ES 20167812 T ES20167812 T ES 20167812T ES 20167812 T ES20167812 T ES 20167812T ES 2985668 T3 ES2985668 T3 ES 2985668T3
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ES
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cancer
liver
plasma
brain
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ES20167812T
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English (en)
Inventor
John Kovach
Robert VOLKMANN
Anthony Marfat
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Lixte Biotechnology Inc
Original Assignee
Lixte Biotechnology Inc
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Abstract

La presente invención proporciona un compuesto que tiene la estructura. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Profármacos de oxabicicloheptano para uso en el tratamiento del cáncer
Esta solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud provisional de EE.UU N° 62/162,501, presentada el 15 de mayo de 2015.
Antecedentes de la invención
Los retinoides, metabolitos de vitamina A, se han examinado terapéuticamente contra una variedad de tumores, incluyendo gliomas (Yung et al. 1996). El correpresor del receptor nuclear (N-CoR) está estrechamente asociado al receptor retinoide y se libera al unirse el ligando al receptor (Bastien et al. 2004). Mediante prevención de la acción de la proteína fosfatasa-1 y la proteína fosfatasa-2A (PP2A), las antifosfatasas aumentan la forma fosforilada de N-CoR y promueven su posterior translocación citoplásmica (Hermanson et al. 2002).
El inhibidor de fosfatasa, cantadirina, tiene actividad antitumoral contra cánceres humanos de hígado (hepatomas) y del tracto gastrointestinal superior pero es tóxico para el tracto urinario (Wang, 1989). La cantaridina actúa como inhibidor de la proteína fosfatasa, lo que provocó un interés más general en compuestos con este tipo de estructura química (Li y Casida 1992). Anteriormente, se había encontrado que el congénere más simple y su producto de hidrólisis (disponible comercialmente como el herbicida Endothal) son hepatotóxicos (Graziani y Casida, 1997). Los estudios de unión han mostrado que la acción de ciertos homólogos de cantaridina es directa sobre la proteína fosfatasa-2A e indirecta sobre la proteína fosfatasa-1 (Honkanen et al., 1993; Li et al., 1993).
De los congéneres conocidos de este tipo de compuesto, solo el compuesto de origen, cantaridina y su derivado de bis(normetilo), norcantaridina, han encontrado algún uso como sustancias farmacológicas anticancerígenas y solo la norcantaridina se utiliza como agente antineoplásico (Tsauer et al. 1997).
A pesar de estos éxitos, pocos compuestos de este tipo han sido examinados para detectar actividad antitumoral o citotóxica. Actualmente existe una importante necesidad de desarrollar inhibidores de las proteínas fosfatasas que sean más activos, menos tóxicos y más específicos en su acción que las sustancias conocidas mencionadas anteriormente. En particular, la necesidad está presente para enfermedades como gliomas malignos de alto grado en niños y adultos.
El glioma pontino intrínseco difuso (DIPG) es un cáncer no operable del tronco encefálico en niños para el cual ningún tratamiento diferente a la radiación ha ofrecido una extensión de la vida, con una supervivencia con la mejor atención de aproximadamente 12 meses. Múltiples ensayos de quimioterapia adyuvante no han mejorado significativamente los resultados (Warren et al. 2011; Hawkins et al. 2011). Existen alrededor de 300 nuevos casos diagnosticados anualmente en los Estados Unidos. El glioblastoma multiforme (GBM) es un cáncer cerebral agresivo que se produce en alrededor de 20.000 adultos anualmente en los EE.UU, para el cual el tratamiento estándar (cirugía primaria, seguida de 6 semanas de radiación más temozolomida, seguida de temozolomida oral diaria) solo ha aumentado la esperanza de vida promedio de menos de un año a alrededor de 18 meses, a pesar de 50 años de pruebas de terapias experimentales (Stupp et al. 2009). Existe una necesidad urgente de nuevos tratamientos para estos gliomas.
Muchos agentes quimioterapéuticos utilizados para tratar el cáncer exhiben una toxicidad grave, lo que da lugar a efectos secundarios no deseados para los pacientes y reduce la eficacia al limitar las dosis que se pueden administrar de manera segura. Los profármacos, que se convierten en el fármaco activoin vivo,pueden ofrecer muchas ventajas sobre los fármacos originales, como una mayor solubilidad, una estabilidad potenciada, una mejor biodisponibilidad, menores efectos secundarios, mejor selectividad y entrada mejorada de las drogas en ciertos tejidos. La activación de profármacos puede implicar muchas enzimas a través de una variedad de mecanismos, incluida la activación hidrolítica (Yang, Y. et al. 2011). Las enzimas implicadas en la activación hidrolítica de profármacos incluyen carboxilesterasas y amidasas.
Endothall es el nombre común del ácido 7-oxabiciclo[2.2.1]heptano-2,3-dicarboxílico. Es un inhibidor de PP2A, una enzima presente tanto en plantas como en animales que está implicada en la desfosforilación de proteínas. Endothall es similar estructuralmente a cantaridina, un compuesto químico secretado por muchas especies de escarabajos ampolla. Endothall es conocido como un defoliante activo y un potente herbicida de contacto utilizado en muchas situaciones agrícolas. Se considera efectivo como desecante precosecha y como herbicida selectivo de preemergencia. Endothall se ha probado contra un número limitado de líneas celulares de cáncer humano (Thiery J.P. et al. 1999).
Los documentos WO 2008/097561 y WO 2015/073802 divulgan oxabicicloheptanos y oxabicicloheptenos, su preparación y uso.
Resumen de la invención
La presente invención proporciona un compuesto para uso en el tratamiento del cáncer, en donde el compuesto tiene la estructura:
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura:
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura:
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura:
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura:
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón de células grandes, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de estómago, cáncer de hígado, adenocarcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, leucemia promilocítica, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, linfoma, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, cáncer adrenocortical, cáncer de vesícula, osteosarcoma, cáncer cervical, esofágico, vesícula biliar, cáncer de cabeza y cuello, cáncer renal, melanoma, cáncer pancreático, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de garganta, cáncer de próstata, cáncer de pulmón o carcinoma hepatocelular.
En algunas realizaciones, el cáncer es cáncer cerebral y el cáncer cerebral es un glioma, astrocitoma pilocítico, astrocitoma difuso de bajo grado, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, ependimoma, meningioma, tumor de la glándula pituitaria, linfoma primario del sistema nervioso CNS, meduloblastoma, craneofaringioma o glioma pontino intrínseco difuso.
En algunas realizaciones, la presente invención proporciona dichos compuestos como una terapia complementaria para uso en el tratamiento del cáncer o dichos compuestos para uso en el tratamiento del cáncer en combinación con un agente anticancerígeno. En algunas realizaciones de este tipo, el compuesto y el agente anticancerígeno se administran de manera simultánea, separada o secuencial.
En el presente documento también se divulga un compuesto que tiene la estructura:
en donde
X es X es OR<1>, NR<2>R<3>, OH, O-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, O-arilo, O-alquilarilo, O-heteroarilo,
en donde R<1>es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, alquilarilo, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)R4, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)OR4, O(CrC4 alquil)-OP(O)(OR4)2, (C<1>-C<4>alquil) -OP(O)(O(CrC4 alquil)-O(CO)OR4)2, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(C1-C4 alquil)-O(CO)R4)2, (C<1>-C<4>alquil)NR4R5, (C<1>-C<4>alquil)NC(O)R4, (C<1>-C<4>alquil)C(O)OR4, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)aril(CrC4 alquil)P(O)(OR4)2, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(C<2>-C<4>alquenil)CO2R4, (C<1>-C<4>alquil)OC(O) (C<1>-C<4>alquil)NH<2>, (C<1>-C<4>alquil)C(O)NR4R5,
R<2>y R<3>son en cada caso independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO) R<4>, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)OR4, O(C1-C4 alquil) -OP (O)(OR4)2, (C<1>-C<4>alquil) -OP(O)(O(C1-C4 alquil)-O(CO)OR4)2, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(C1-C4 alquil)-O(CO)R4)2, (C<1>-C<4>alquil)NR4R5, (C<1>-C<4>alquil)NC(O)R4, (C<1>-C<4>alquil)C(O)OR4, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)arilo (C<1>-C<4>alquil)P(O)(OR4)2, (C<1>-C4 alquil)OC(O)(C2-C4 alquenil)CO2R4, (C1-C4 alquil)OC(O) (C1-C4 alquil)NH<2>, (C1-C4 alquil)C(O)NR4R5,
R<17>es H, alquilo, hidroxialquilo, alquenilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, alquilheteroarilo, C(O)O-t-Bu o -CH<2>CN;
R<18>es H o alquilo;
R<19>es (C<1>-C<4>alquil) -O(CO)R4, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)OR4, (C<1>- C<4>alquil)-OP(O)(OR4)2, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(C1C4 alquil)-O(CO)OR4)2, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(C1-C4 alquil) -O(CO)R4)2, (C<1>-C<4>alquil)NR4R5, (C<1>-C<4>alquil)NC(O)R4, (C<1>-C<4>alquil)C(O)OR4, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)arilo (C<1>-C<4>alquil)P(O)(OR4)2, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(C<2>-C<4>alquenil)CO<2>R<4>, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(C<1>-C<4>alquil)NH<2>, (C<1>-C<4>alquil)C(O)NR<4>R<5>,
en donde cada aparición de R<4>es, independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo; en donde cada aparición de R<5>es, independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo; en donde cada aparición de R6 y R<7>es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo; en donde cada aparición de R8 es, independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo; e Y es OR<9>o NR<10>R<11>,
en donde
R<9>es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, alquilarilo, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)R<12>, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)OR<12>, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(OR<12>)<2>, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(C1-C4 alquil)-O(CO)OR<12>)<2>, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(C4-C4 alquil)-O(CO)R<12>)<2>, (C<1>-C<4>alquil) NR<12>R<13>, (C<1>-C<4>alquil)NC(O)R<12>, (C<1>-C<4>alquil)C(O)OR42, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)arilo(C1-C4 alquil)P(O)(OR<12>)<2>, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(C<2>-C<4>alquenil)CO<2>R<12>, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(C1-C4 alquil)NH<2>, (C<1>-C<4>alquil)C(O)NR12R13,
Río es H; y
Ríí es (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)Rí<2>, (C<1>-C<4>alquil)-O(CO)ORí<2>, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(ORí<2>)<2>, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(Cí-C4 alquil) - O(CO)ORí<2>)<2>, (C<1>-C<4>alquil)-OP(O)(O(Cí-C4 alquil)-O(CO)Rí<2>)<2>, (C<1>-C<4>alquil) NR<12>R<13>, (C<1>-C<4>alquil)NC(O)Rí<2>, (C<1>-C<4>alquil)C(O)ORí<2>, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)arilo(Cí-C4 alquil)P(O)(ORí<2>)<2>, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(C2-C4 alquenil)CO<2>Rí<2>, (C<1>-C<4>alquil)OC(O)(Cí-C4 alquil)NH<2>, (Cí-C<4>alquil)C(O)NRí2Rí3,
en donde cada aparición de R<12>es, independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo; en donde cada aparición de R<13>es, independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo; en donde cada aparición de R<14>y R<15>es, independientemente, H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo;
en donde cada aparición de Rí6 es, independientemente, H, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo o heteroarilo,
en donde si Y es OR<9>donde R<9>es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, alquilarilo, X es
y
si X es
donde R<17>es CH<3>, X es diferente a -O(C4 alquil)-OP(O)(OEt)<2>o -NH(C4 alquil)-OP(O)(OEt)<2>,
o una sal o un éster del compuesto.
En el presente documento también se divulga un compuesto que tiene la estructura:
en donde R<20>y R<21>son en cada caso independientemente H, alquilo, hidroxialquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo o heteroarilo,
o una sal o un éster del compuesto.
En el presente documento también se divulga un compuesto que tiene la estructura:
en donde
X' es OH, O(alquilo) o NR<22>R<23>;
R<22>es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo o heteroarilo;
R<23>es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo o heteroarilo o R<22>y R<23>se combinan para formar una N-metipiperazina;
Y' es un agente anticancerígeno A que contiene al menos un nitrógeno de amina y el nitrógeno en el agente anticancerígeno se une directamente al carbono<y>mediante enlace covalente, o
Y' es un agente anticancerígeno A que contiene al menos un oxígeno de hidroxilo y el oxígeno en el agente anticancerígeno se une directamente al carbono y mediante enlace covalente, o
Y' es
en donde A es un agente anticancerígeno que contiene al menos un ácido carboxílico y el carbono carbonílico del ácido carboxílico en el agente anticancerígeno se une directamente al oxígeno ^ mediante enlace covalente, y R<24>es H o alquilo,
o una sal o un éster del compuesto.
Breve descripción de las figuras
Fig. 1A: Curvas de concentración frente a tiempo de compuesto 153 en plasma después de administración iv o po y en hígado y cerebro después de administración iv de compuesto 153 a ratas SD.
Fig. 1B: Curvas de concentración frente a tiempo de Endothall en plasma después de administración iv o po y en hígado después de administración iv de compuesto 153 a ratas SD.
Fig. 1C: Curvas de concentración frente a tiempo de compuesto 157 en plasma después de administración iv o po y en hígado y cerebro después de administración iv de compuesto 157 a ratas SD.
Fig. 1D. Curvas de concentración frente a tiempo de Endothall en plasma después de administración iv o po y en hígado después de administración iv de compuesto 157 a ratas SD.
Fig. 2A: Perfiles de concentración media plasmática y hepática-tiempo de compuesto 105 después de dosis IV de 1 mg/kg en ratas SD (N=2/punto temporal).
Fig. 2B: Perfiles de concentración media plasmática y hepática-tiempo de Endothall después de dosis IV de 1 mg/kg de compuesto 105 en ratas SD (N=2/punto temporal).
Fig. 2C: Perfiles de concentración media plasmática y hepática-tiempo de compuesto 105 y Endothall después de una dosis IV de 1 mg/kg de compuesto 105 en ratas SD (N=2/punto temporal).
Fig. 3A: Perfiles de concentración media en plasma, cerebro e hígado-tiempo de compuesto 113 después de dosis IV o PO de 1,4 mg/kg en ratas SD (N=2/punto temporal).
Fig. 3B: Perfiles de concentración media plasmática y hepática-tiempo de Endothall después de dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD (N=2/punto temporal)
Fig. 3C: Perfiles de concentración media plasmática y hepática-tiempo de compuesto 100 después de dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD (N=2/punto temporal)
Fig. 3D: Perfiles de concentración media en plasma, cerebro e hígado-tiempo de compuesto 113, compuesto 100 y Endothall después de dosis IV o PO de compuesto 113 a 1,4 mg/kg en ratas SD (N=2/punto temporal) Fig. 4A: Curvas de concentración frente a tiempo de compuesto 100 en plasma después de administración iv de compuesto 100 a ratas SD.
Fig. 4B: Curvas de concentración frente a tiempo de compuesto 100 en cerebro después de administración iv de compuesto 100 a ratas SD.
Fig. 4C: Curvas de concentración frente a tiempo de compuesto 100 en hígado después de administración iv de compuesto 100 a ratas SD.
Fig. 4D: Curvas de concentración frente a tiempo de endothall en plasma después de administración iv de compuesto 100 a ratas SD.
Fig. 4E: Curvas de concentración frente a tiempo de endothall en hígado después de administración iv de compuesto 100 a ratas SD.
Fig. 5. Resumen de los resultados del estudio de estabilidad de S9 hepática para LB151, LB100 POM y LB-100 carbonato.
Fig. 6A: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en S9 hepática de mono. Fig. 6B: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en S9 hepática humana. Fig. 6C: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en S9 hepática de rata. Fig. 6D: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en S9 hepática de mono. Fig. 6E: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en S9 hepática humana. Fig. 6F: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en S9 hepática de rata. Fig. 6G: Gráfico que muestra la formación de LB100 en S9 hepática de mono.
Fig. 6H: Gráfico que muestra la formación de LB100 en estudio en S9 hepática humana.
Fig. 6I: Gráfico que muestra la formación de LB100 en S9 hepática de rata.
Fig. 6J. Gráfico que muestra la formación de LB100 en S9 hepática de mono.
Fig. 6K. Gráfico que muestra la formación de LB100 en estudio en S9 hepática humana.
Fig. 6L: Gráfico que muestra la formación de LB100 en S9 hepática de rata.
Fig. 7. Resumen de los resultados de estudios de vida media en sangre entera para LB151, LB100 POM y LB-100 carbonato.
Fig. 8A: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en sangre entera de perro.
Fig. 8B: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en sangre entera humana.
Fig. 8C: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en sangre entera de mono.
Fig. 8D: Gráfico que muestra la formación de endothall en estudio en sangre entera de rata.
Fig. 8E: Gráfico que muestra la formación de LB100 en estudio en sangre entera de perro.
Fig. 8F: Gráfico que muestra la formación de LB100 en estudio en sangre entera humana.
Fig. 8G: Gráfico que muestra la formación de LB100 en estudio en sangre entera de mono.
Fig. 8H: Gráfico que muestra la formación de LB100 en estudio en sangre entera de rata.
Fig. 9. Resumen de los resultados de estudios de permeabilidad MDCK-MDR1 para LB151, LB100 POM y LB-100 carbonato.
Descripción detallada de la invención
La presente invención proporciona un compuesto para uso en el tratamiento del cáncer, en donde el compuesto tiene la estructura
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura
o una sal del compuesto
En algunas realizaciones, el compuesto tiene la estructura
o una sal del compuesto.
En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón de células grandes, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de estómago, cáncer de hígado, adenocarcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, leucemia promilocítica, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, linfoma, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, cáncer adrenocortical, cáncer de vesícula, osteosarcoma, cáncer cervical, esofágico, vesícula biliar, cáncer de cabeza y cuello, cáncer renal, melanoma, cáncer pancreático, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de garganta, cáncer de próstata, cáncer de pulmón o carcinoma hepatocelular.
En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón de células grandes, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de estómago, cáncer de hígado, adenocarcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, leucemia promilocítica, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, linfoma, linfoma no Hodgkin o linfoma de Hodgkin.
En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer cerebral.
En algunas realizaciones, el cáncer cerebral es un glioma, astrocitoma pilocítico, astrocitoma difuso de bajo grado, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, ependimoma, meningioma, tumor de la glándula pituitaria, linfoma primario del sistema nervioso CNS, meduloblastoma, craneofaringioma o glioma pontino intrínseco difuso.
En algunas realizaciones, el método comprende además la administración al sujeto de un agente anticancerígeno. En algunas realizaciones, el agente anticancerígeno se selecciona a partir de radiación x o radiación ionizante. En el presente documento también se divulga un método de tratamiento de un sujeto afectado de cáncer que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la invención. En el presente documento también se divulga un método para potenciar la actividad anticancerígena de un agente anticancerígeno en un sujeto afectado de cáncer, que comprende la administración al sujeto de una cantidad terapéuticamente efectiva para potenciar la actividad anticancerígena del agente anticancerígeno.
En el presente documento también se divulga un método de tratamiento de un sujeto afectado de cáncer que comprende la administración periódica al sujeto:
a) una cantidad de un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y
b) un agente anticancerígeno,
en donde las cantidades, cuando se toman conjuntamente, son más efectivas para tratar al sujeto que cuando cada agente se administra por separado en la misma cantidad.
En el presente documento se divulga también una composición farmacéutica que comprende una cantidad de compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de un sujeto afectado de cáncer como una terapia complementaria o en combinación con, simultánea, contemporánea o concomitantemente con un agente anticancerígeno.
En algunas realizaciones, el compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es para uso como terapia o en combinación con un agente anticancerígeno en el tratamiento de un sujeto afectado de cáncer.
En algunas realizaciones, el compuesto y el agente anticancerígeno se administran de manera simultánea, separada o secuencial.
La presente invención proporciona también el compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un agente anticancerígeno para uso en el tratamiento del cáncer.
En algunas realizaciones, el compuesto atraviesa la barrera hematoencefálica del sujeto.
En algunas realizaciones, el compuesto y/o un metabolito atraviesa la barrera hematoencefálica del sujeto.
En el presente documento también se divulga un método de inhibición de la proliferación o la inducción de la apoptosis de una célula cancerosa en un sujeto humano, que comprende la administración al sujeto:
a) del compuesto de la presente invención o una sal del compuesto en una cantidad efectiva para inhibir la proliferación o para inducir la apoptosis de la célula cancerosa, y
b) un agente anticancerígeno en una cantidad efectiva para inhibir la proliferación o para inducir la apoptosis de la célula cancerosa.
En el presente documento también se divulga un método de inhibición de la proliferación o la inducción de apoptosis de una célula cancerosa en un sujeto humano que sobreexpresa la proteína tumoral controlada traslacionalmente (TCTP) que comprende la administración al sujeto
a) del compuesto de la presente invención o una sal del compuesto en una cantidad efectiva para inhibir la proliferación o para inducir la apoptosis de la célula cancerosa, y
b) un agente anticancerígeno en una cantidad efectiva para inhibir la proliferación o para inducir la apoptosis de la célula cancerosa.
En algunos ejemplos de los anteriores métodos, la célula cancerosa no sobreexpresa N-CoR.
En algunas realizaciones, el agente anticancerígeno se selecciona a partir de un agente que daña el ADN, un agente intercalante en el ADN, un agente estabilizador de microtúbulos, un agente desestabilizador de microtúbulos, una toxina fusiforme, abarelix, aldesleucina, alemtuzumab, alitertinoina, alopurinol, altretamina, amifostina, anakinra, anastrozol, trióxido de arsénico, asparaginasa, azacitidina, bevacizumab, bexaroteno, bleomicina, bortezomib, busulfán, calusterona, capecitabina, carboplatino, carmustina, celecoxib, cetuximab, clorambucilo, cisplatino, cladribina, clofarabina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, actinomicina D, dalteparina sódica, darbepoetina alfa, dasatinib, daunorubicina, daunomicina, decitabina, denileucina, dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, propionato de dromostanolona, exulizumab, epirubicina, epoetina alfa, erlotinib, estramustina, etopósido fosfato, etopósido, VP-16, exemestano, citrato de fentanilo, filgrastim, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, fulvestrant, gefitinib, gemcitabina, acetato de goserelina, acetato de histrelina, hidroxiurea, ibritumomab tiuxetano, idarubicina, ifosfamida, mesilato de imatinib, interferón alfa 2a, interferón alfa 2b, irinotecán, ditosilato de lapatinib, lenalidomida, letrozol, leucovrina, acetato de leuprolida, levamisol, lomustina, mecloretamina, acetato de megestrol, melfalán, mercaptopurina, mesna, metotrexato, metoxsaleno, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, fenopropionato de nandrolona, nelarabina, nofetumomab, oprelvekin, oxaliplatino, paclitaxel, palifermina, pamidronato, panitumumab, pegademasa, pegaspargasa, pegfilgrastim, peginterferón alfa 2b, pemetrexed disódico, pentostatina, pipobromán, plicamicina, mitramicina, porfímero sódico, procarbazina, quinacrina, rasburicasa, rituximab, sargrmostim, sorafenib, estreptozocina, sunitinib, maleato de sunitinib, talco, tamoxifeno, temozolomida, tenipósido, VM-26, testolactona, talidomida, tioguanina, G-TG, tiotepa, topotecán, toremifeno, tositumomab, trastuzumab, tretinoína ATRA, mostaza de uracilo, valrunicina, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vorinostat, zoledronato, ácido zoledrónico, abraxano y brentuximab vedotina.
En algunas realizaciones, el sujeto es un humano.
En algunas realizaciones, el cáncer es cualquiera entre cáncer adrenocortical, cáncer de vesícula, osteosarcoma, cáncer cervical, esofágico, vesícula biliar, cáncer de cabeza y cuello, linfoma, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, cáncer renal, melanoma, cáncer pancreático, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de garganta, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, melanoma, cáncer pancreático, cáncer de colon, cáncer de pulmón de células grandes, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de estómago, cáncer de hígado, adenocarcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, leucemia promilocítica, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, cáncer colorrectal, cáncer de ovario o carcinoma hepatocelular.
El compuesto de la presente invención puede inhibir la actividad de PP2A en el sujeto, por ejemplo en el cerebro del sujeto. El compuesto de la presente invención puede atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto.
Los compuestos de la presente invención pueden servir como profármacos del compuesto 100.
Los compuestos de la presente invención pueden servir como profármacos que pueden convertirse en el compuesto 100 mediante esterasas séricas y/o esterasas cerebrales.
Los compuestos de la presente invención pueden servir como profármacos de endothall.
Los compuestos de la presente invención pueden servir como profármacos que pueden convertirse en endothall mediante esterasas séricas y/o esterasas cerebrales.
Los compuestos de la presente invención pueden servir como profármacos que atraviesan la barrera hematoencefálica y suministran endothall al cerebro.
La administración de un profármaco de endothall es más efectiva al suministrar endothall a células objetivo en un sujeto que la administración del propio endothall.
El perfil metabólico de endothall es tal que la administración de un profármaco de endothall es más efectiva al suministrar endothall a células objetivo en un sujeto que la administración del propio endothall.
En algunas realizaciones, el compuesto se convierte primero en el compuesto 100in vivo,que a su vez se convierte en endothallin vivo.
Los compuestos de la presente invención actúan como profármacos de endothall, alterando el metabolismo mediante enmascaramiento de grupos ácidos con una amida o una fracción éster. El diseño del profármaco dará lugar a toxicidad reducida y a la exposición sistémica aumentada de endothall en el sujeto.
Tal como se utiliza en el presente documento, un "síntoma" asociado a una enfermedad incluye cualquier manifestación clínica o de laboratorio asociada a la enfermedad y no se limita a lo que el sujeto puede sentir u observar.
Tal como se utiliza en el presente documento, "tratamiento de las enfermedades", "tratamiento de la lesión" o "tratamiento", por ejemplo de una enfermedad, abarca inducción de la prevención, inhibición, regresión o estasis de la enfermedad o lesión o un síntoma o condición asociado a la enfermedad o la lesión.
Tal como se utiliza en el presente documento, "inhibición" de la enfermedad abarca la prevención o reducción de la progresión de la enfermedad y/o de la complicación de la enfermedad en el sujeto.
Tal como se utiliza en el presente documento, "sobreexpresión de N-CoR" significa que el nivel de correpresor del receptor nuclear (N-CoR) expresado en células de tejido analizado es elevado en comparación con los niveles de N-CoR medidos en células sanas normales del mismo tipo de tejido en condiciones análogas. El correpresor del receptor nuclear (N-CoR) de la invención objeto puede ser cualquier molécula que se una al dominio de unión a ligando del receptor de la hormona tiroidea (T3R) unido a ADN y del receptor de ácido retinoico (RAR) (Patente de EE.UU N° 6,949,624, Liu et al.). Los ejemplos de tumores que sobreexpresan N-CoR pueden incluir glioblastoma multiforme, cáncer de mama (Myers et al. 2005), cáncer colorrectal (Giannini y Cavallini 2005), carcinoma de pulmón de células pequeñas (Waters et al 2004) o cáncer de ovario (Havrilesky et al. 2001).
Tal como se utiliza en el presente documento, el término "fracción de aminoácido" o "AA" se refiere a cualquier aminoácido natural o no natural incluyendo su forma de sal, derivado de éster, derivado de amina protegido y/o sus formas isoméricas. Aminoácidos comprende, a modo de ejemplo no limitante: Agmatina, Alanina Beta-Alanina, Arginina, Asparagina, Ácido aspártico, Cisteína, Glutamina, Ácido glutámico, Glicina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina, Fenilalanina, Fenil Beta-Alanina, Prolina, Serina, Treonina, Triptófano, Tirosina y Valina. Los aminoácidos pueden ser aminoácidos L o D. El aminoácido se puede unir a través del ácido para formar un engarce de éster o a través de la amina para formar un engarce de amina secundaria.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término "fracción aminoácido" se refiere a H, OH, alquilo, bencilo, metilo, etilo, propilo, butilo, isopropilo, isobutilo, - (CH<2>)C(O)NH<2>, -(CH<2>)<2>C(O)NH<2>, -(CH<2>)C(O)OH, -(CH<2>)<2>C(O)OH, -(CH<2>)<5>C(O)OH, -CH(CH<3>)CH<2>CH<3>, propilo, butilo, -(CH<2>CH<2>CH<2>)NH<2>, -(CH<2>)SH, -(CH<2>CH<2>)SH, - (CH<2>)SCH<3>, -(CH<2>CH<2>) SCH<3>, -(CH<2>CH<2>)OH, -(CH<2>)OH, -(CH<2>)-indol, -(CH<2>)-tiofeno, -(CH<2>)-imidazol, -CH(OH)CH<3>, -CH(CH<3>)C(SH)(CH<3>)<2>, -CH2(4-metoxifenilo) o -(CH<2>)<3>NHC(NH)NH<2>.
Tal como se utiliza en el presente documento, "alquilo" pretende incluir grupos hidrocarburo alifáticos saturados ramificados y de cadena lineal con el número de átomos de carbono especificado. Por lo tanto, C<1>-Cn como en "alquilo C<1>-Cn" se define para incluir grupos con 1, 2..... , n-1 o n carbonos en una disposición lineal o ramificada, y específicamente incluye metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, isopropilo, isobutilo, sec-butilo, etcétera. Una realización puede ser alquilo C<1>-C<20>, alquilo C<2>-C<20>, alquilo C<3>-C<20>, alquilo C<4>-C<20>, etcétera. Una realización puede ser alquilo C<1>-C<30>, alquilo C<2>-C<30>, alquilo C<3>-C<30>, alquilo C<4>-C<30>, etcétera. "Alcoxi" representa un grupo alquilo como se describió anteriormente unido a través de un puente de oxígeno.
El término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo no aromático, lineal o ramificado, que contiene al menos 1 doble enlace carbono a carbono y en el que puede estar presente hasta el máximo número posible de dobles enlaces carbono-carbono no aromáticos. Por lo tanto, alquinilo C<2>-Cn se define para incluir grupos con 1,2...., n-1 o n carbonos. Por ejemplo, "alquenilo C<2>-C<6>" significa un radical alquenilo con 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono y al menos 1 doble enlace carbono-carbono y hasta, por ejemplo, 3 dobles enlace carbono-carbono en el caso de un alquenilo C6, respectivamente. Los grupos alquenilo incluyen etenilo, propenilo, butenilo y ciclohexenilo. Como se describe anteriormente con respecto a alquilo, la parte lineal, ramificada o cíclica del grupo alquenilo puede contener dobles enlaces y puede estar sustituida si se indica un grupo alquenilo sustituido. Una realización puede ser alquenilo C<2>-C<12>, alquenilo C<3>-C<12>, alquenilo C<2>-C<20>, alquenilo C<3>-C<20>, alquenilo C<2>-C<30>o alquenilo C<3>-C<30>.
El término "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo no aromático, lineal o ramificado, que contiene al menos 1 triple enlace carbono a carbono y en el que puede estar presente hasta el máximo número posible de triples enlaces carbono-carbono no aromáticos. Por lo tanto, alquinilo C<2>-Cn se define para incluir grupos con 1,2...., n-1 o n carbonos. Por ejemplo, "alquinilo C<2>-C<6>" significa un radical alquinilo con 2 o 3 átomos de carbono y 1 triple enlace carbonocarbono o con 4 o 5 átomos de carbono y hasta 2 triples enlaces carbono-carbono o con 6 átomos de carbono y hasta 3 triples enlaces carbono-carbono. Los grupos alquinilo incluyen etinilo, propinilo y butinilo. Como se describe anteriormente con respecto a alquilo, la parte lineal, ramificada o cíclica del grupo alquinilo puede contener triples enlaces y puede estar sustituida si se indica un grupo alquinilo sustituido. Una realización puede ser un alquinilo C<2>-Cn. Una realización puede ser alquinilo C<2>-C<12>o alquinilo C<3>-C<12>, alquinilo C<2>-C<20>, alquinilo C<3>-C<20>, alquinilo C<2>-C<30>o alquinilo C<3>-C<30>.
Tal como se utiliza en el presente documento, "arilo" pretende significar cualquier anillo de carbono monocíclico o bicíclico estable de hasta 10 átomos de carbono en cada anillo, en donde al menos un anillo es aromático. Algunos ejemplos de tales elementos de arilo incluyen fenilo, naftilo, tetrahidro-naftilo, indanilo, bifenilo, fenantrilo, antrilo o acenaftilo. En casos en los que el sustituyente arilo es bicíclico y un anillo no es aromático, se entiende que la unión se realiza a través del anillo aromático. Los arilos sustituidos incluidos en esta invención incluyen sustitución de cualquier posición adecuada con aminas, aminas sustituidas, alquilaminas, hidroxilos y alquilhidroxilos, en donde la parte "alquilo" de las alquilaminas y alquilhidroxilos es un alquilo C<2>-Cn como se define anteriormente. Las aminas sustituidas pueden sustituirse por grupos alquilo, alquenilo, alquinilo o arilo como se define anteriormente.
Los sustituyentes alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo pueden ser no sustituidos o no sustituidos, a menos que se defina específicamente lo contrario. Por ejemplo, un alquilo (C<1>-C<6>) puede estar sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados a partir de OH, oxo, halógeno, alcoxi, dialquilamino o heterociclilo, como morfolinilo, piperidinilo, etcétera.
Los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo pueden estar sustituidos además mediante reemplazo de uno o más átomos de hidrógeno por grupos no hidrógeno descritos en el presente documento en la medida de lo posible. Estos incluyen, entre otros, halo, hidroxi, mercapto, amino, carboxi, ciano y carbamoilo.
El término "sustituido" tal como se utiliza en el presente documento significa que una estructura dada tiene un sustituyente que puede ser un grupo alquilo, alquenilo o arilo como se define anteriormente. Se considerará que el término incluye múltiples grados de sustitución por un sustituyente nombrado. Cuando se divulguen o reivindiquen múltiples fracciones de sustituyente, el compuesto sustituido puede estar sustituido independientemente por una o más de las fracciones de sustituyente reivindicadas, individual o pluralmente. Por sustituido independientemente se entiende que los (dos o más) sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
Los ejemplos de grupos sustituyentes incluyen los grupos funcionales descritos anteriormente y halógenos (es decir, F, Cl, Br y I); grupos alquilo, como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, terc-butilo y trifluorometilo; hidroxilo; grupos alcoxi, como metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi; grupos ariloxi, como fenoxi; arilalquiloxi, como benciloxi (fenilmetoxi) y p-trifluorometilbenciloxi (4-trifluorometilfenimetoxi); grupos heteroariloxi; grupos sulfonilo, como trifluorometanosulfonilo, metanosulfonilo y p-toluenosulfonilo; nitro, nitrosilo; mercapto; grupos sulfanilo, como metilsulfanilo, etilsulfanilo y propilsulfanilo; ciano; grupos amino, como as amino, metilamino, dimetilamino, etilamino y dietilamino; y carboxilo. Cuando se divulguen o reivindiquen múltiples fracciones de sustituyente, el compuesto sustituido puede estar sustituido independientemente por una o más de las fracciones de sustituyente reivindicadas, individual o pluralmente. Por sustituido independientemente se entiende que los (dos o más) sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
Los sustituyentes pueden estar sustituidos o no sustituidos, a menos que se defina específicamente lo contrario.
Los grupos alquilo, heteroalquilo, monociclo, biciclo, arilo, heteroarilo y heterociclo pueden estar sustituidos a mediante reemplazo de uno o más átomos de hidrógeno por grupos no hidrógeno alternativos. Estos incluyen, entre otros, halo, hidroxi, mercapto, amino, carboxi, ciano y carbamoilo.
Se entiende que los sustituyentes y los patrones de sustitución de los compuestos de la presente invención pueden ser seleccionados por un experto ordinario en la materia para proporcionar compuestos que sean químicamente estables y que puedan sintetizarse fácilmente mediante técnicas conocidas de la materia, así como los métodos que se exponen a continuación, a partir de materiales de partida fácilmente disponibles. Si un sustituyente está sustituido de por sí con más de un grupo, se entiende que estos múltiples grupos pueden estar en el mismo carbono o en diferentes carbonos, siempre que resulte una estructura estable.
Tal como se utiliza en el presente documento, un "compuesto" es una molécula pequeña que no incluye proteínas, péptidos o aminoácidos.
Tal como se utiliza en el presente documento, un compuesto "aislado" es un compuesto aislado a partir de una mezcla de reacción cruda o a partir de una fuente natural después de un acto afirmativo de aislamiento. El acto de aislamiento implica necesariamente la separación del compuesto de los demás componentes de la mezcla o fuente natural con algunas impurezas, productos secundarios desconocidos y cantidades residuales de otros componentes que permanecen. La purificación es un ejemplo de un acto afirmativo de aislamiento.
La "administración al sujeto" o la "administración al paciente (humano)" significa la provisión, dispensación o aplicación de medicinas, fármacos o remedios a un sujeto/paciente para aliviar, curar o reducir los síntomas asociados a una afección, por ejemplo una afección patológica. La administración puede ser administración periódica. Tal como se utiliza en el presente documento, "administración periódica" significa administración repetida/recurrente separada por un periodo de tiempo. El periodo de tiempo entre administraciones es preferentemente constante de vez en cuando. La administración periódica puede incluir administración, por ejemplo, una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día, semanalmente, dos veces a la semana, tres veces a la semana, cuatro veces a la semana, etc.
Tal como se utiliza en el presente documento, la "administración" de un agente puede realizarse utilizando cualquiera de los diversos métodos o sistemas de suministro bien conocidos por los expertos en la materia. La administración puede realizarse, por ejemplo, por vía oral, parenteral, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, rectal, transbucal, intranasal, liposomal, por inhalación, vaginal, intraocular, vía de suministro local, subcutánea, intraadiposa, intraarticular, intratecal, en un ventrículo cerebral, intraventricular, intratumoral, en parénquima cerebral o intraparenquimal.
Tal como se utiliza en el presente documento, "combinación" significa un conjunto de reactivos para uso en terapia por administración simultánea o contemporánea.
La administración simultánea se refiere a administración de una mezcla (ya sea una mezcla verdadera, una suspensión, una emulsión u otra combinación física) del compuesto y del agente anticancerígeno. La combinación puede ser la mezcla o recipientes separados que se combinan justo antes de la administración. La administración contemporánea se refiere a la administración separada, o a veces suficientemente cerca una de otra para que se observe una actividad sinérgica en relación con la actividad de cualquiera de las dos por separado.
Tal como se utiliza en el presente documento, "administración concomitante" o administración "de manera concomitante" significa la administración de dos agentes provistos en un tiempo suficientemente cercano para permitir que se superpongan los efectos terapéuticos individuales de cada agente.
Tal como se utiliza en el presente documento, "tratamiento complementario" o "terapia complementaria" significa un conjunto de reactivos para uso en terapia, en donde el sujeto que recibe la terapia comienza un primer régimen de tratamiento de uno o más reactivos antes de comenzar un segundo régimen de tratamiento de uno o más reactivos diferentes además del primer régimen de tratamiento, de modo que no todos los reactivos utilizados en la terapia se inicial al mismo tiempo.
Los siguientes sistemas de suministro, que emplean una serie de portadores farmacéuticos utilizados de forma rutinaria, pueden utilizarse pero solo son representativos de los muchos sistemas posibles previstos para la administración de composiciones de acuerdo con la invención.
Los sistemas de administración de fármacos inyectables incluyen soluciones, suspensiones, geles, microesferas e inyectables poliméricos, y pueden comprender excipientes como agentes que alteran la solubilidad (por ejemplo etanol, propilenglicol y sacarosa) y polímeros (por ejemplo policaprilactonas y PLGA).
Otros sistemas de suministro de drogas inyectables incluyen soluciones, suspensiones, geles. Los sistemas de suministro oral incluyen comprimidos y cápsulas. Estos pueden contener excipientes como aglutinantes (por ejemplo hidroxipropilmetilcelulosa, polivinilpirrolidona, otros materiales celulósicos y almidón), diluyentes (por ejemplo lactosa y otros azúcares, almidón, fosfato dicálcico y materiales celulósicos), agentes disgregantes (por ejemplo polímeros de almidón y materiales celulósicos) y agentes lubricantes (por ejemplo estearatos y talco).
Los sistemas implantables incluyen varillas y discos y pueden contener excipientes como PLGA y policaprolactona.
Los sistemas de suministro oral incluyen comprimidos y cápsulas. Estos pueden contener excipientes como aglutinantes (por ejemplo hidroxipropilmetilcelulosa, polivinilpirrolidona, otros materiales celulósicos y almidón), diluyentes (por ejemplo lactosa y otros azúcares, almidón, fosfato dicálcico y materiales celulósicos), agentes disgregantes (por ejemplo polímeros de almidón y materiales celulósicos) y agentes lubricantes (por ejemplo estearatos y talco).
Los sistemas de suministro transmucosa incluyen parches, comprimidos, supositorios, pesarios, geles y cremas, y pueden contener excipientes como solubilizantes y potenciadores (por ejemplo propilenglicol, sales biliares y aminoácidos) y otros vehículos (por ejemplo polietilenglicol, ésteres y derivados de ácidos grasos, y polímeros hidrófilos como hidroxipropilmetilcelulosa y ácido hialurónico).
Los sistemas de suministro dérmico incluyen, por ejemplo, geles acuosos y no acuosos, cremas, emulsiones múltiples, microemulsiones, liposomas, ungüentos, soluciones acuosas y no acuosas, lociones, aerosoles, bases y polvos de hidrocarburo, y pueden contener excipientes como solubilizantes, potenciadores de la permeación (por ejemplo ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos, alcoholes grasos y aminoácidos) y polímeros hidrófilos (por ejemplo policarbófilo y polivinilpirrolidona). En una realización, el portador farmacéuticamente aceptable es un liposoma o un potenciador transdérmico.
Las soluciones, suspensiones y polvos para sistemas de suministro reconstituibles incluyen vehículos como agentes de suspensión (por ejemplo gomas, zantanos, celulósicos y azúcares), humectantes (por ejemplo sorbitol), solubilizadores (por ejemplo etanol, agua, PEG y propilenglicol), tensioactivos (por ejemplo laurilsulfato de sodio, Spans, Tweens y cetilpiridina), conservantes y antioxidantes (por ejemplo parabenos, vitaminas E y C y ácido ascórbico), agentes antiaglomerantes, agentes de recubrimiento y agentes quelantes (por ejemplo EDTA).
Tal como se utiliza en el presente documento, "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un portador o excipientes que es adecuado para su uso en humanos y/o animales sin efectos secundarios adversos indebidos (como toxicidad, irritación y respuesta alérgica) proporcionales a una relación beneficio/riesgo razonable. Puede ser un disolvente farmacéuticamente aceptable, un agente de suspensión o un vehículo, para administrar los compuestos inmediatos al sujeto.
Los compuestos de la presente invención pueden estar en forma de sal. Tal como se utiliza en el presente documento, una "sal" es una sal de los compuestos instantáneos que ha sido modificada mediante la producción de sales ácidas o básicas de los compuestos. En el caso de los compuestos utilizados para tratar una infección o enfermedad, la sal es farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, entre otros, sales minerales o de ácidos orgánicos o residuos básicos como aminas; sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos como fenoles. Las sales se pueden producir utilizando un ácido orgánico o inorgánico. Tales sales ácidas son cloruros, bromuros, sulfatos, nitratos, fosfatos, sulfonatos, formatos, tartratos, maleatos, malatos, citratos, benzoatos, salicilatos, ascorbatos y similares. Las sales de fenoles son las sales de metales alcalinotérreos, sodio, potasio o litio. El término "sal farmacéuticamente aceptable" a este respecto se refiere a las sales de adición de ácido o base relativamente no tóxicas, inorgánicas y orgánicas, de los compuestos de la presente invención. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento final y la purificación de los compuestos de la invención o haciéndose reaccionar por separado un compuesto purificado de la invención en su forma de base libre o ácido libre con un ácido o base orgánico o inorgánico adecuado, y aislándose la sal formada de este modo. Las sales representativas incluyen las sales de hidrobromuro, hidrocloruro, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, vale rato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato y similares. (Véase, por ejemplo, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19).
Tal como se utiliza en el presente documento, una "cantidad" o "dosis" de un agente medida en miligramos se refiere a los miligramos de agente presente en un producto farmacéutico, independientemente de la forma del producto farmacéutico.
Tal como se utiliza en el presente documento, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" o "cantidad efectiva" se refiere a la cantidad de un componente que es suficiente para producir una respuesta terapéutica deseada sin efectos secundarios adversos indebidos (como toxicidad, irritación o respuesta alérgica) proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable cuando se utiliza de la manera de esta invención. La cantidad efectiva específica variará con factores tales como la condición particular que se está tratando, la condición física del paciente, el tipo de mamífero tratado, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia concurrente (si la hay) y las formulaciones específicas y la estructura de los compuestos o sus derivados.
Cuando se da un intervalo en la especificación, se entiende que el intervalo incluye todos los números enteros y 0,1 unidades dentro de este intervalo y cualquier subintervalo de los mismos. Por ejemplo, un intervalo de 77 a 90 % es una divulgación de 77, 78, 79, 80 y 81% etc.
Tal como se utiliza en el presente documento, "alrededor de" respecto a un número indicado abarca un intervalo de uno por ciento a -uno por ciento del valor indicado. Por lo tanto, a modo de ejemplo, alrededor de 100 mg/kg incluye 99, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, 99,9, 100, 100,1, 100,2, 100,3, 100,4, 100,5, 100,6, 100,7, 100,8, 100,9 y 101 mg/kg. En consecuencia, en una realización, alrededor de 100 mg/kg incluye 100 mg/kg.
Se entiende que cuando se proporciona un intervalo de parámetros, todos los números enteros dentro de este intervalo y las décimas de los mismos, también son proporcionados por la invención. Por ejemplo, "0,2-5 mg/kg/día" es una divulgación de 0,2 mg/kg/día, 0,3 mg/kg/día, 0,4 mg/kg/día, 0,5 mg/kg/día, 0,6 mg/kg/día etc. hasta 5,0 mg/kg/día.
Para las anteriores realizaciones, cada realización divulgada en el presente documento se considera aplicable a cada una de las otras realizaciones divulgadas. Por lo tanto, todas las combinaciones de los diversos elementos descritos en el presente documento están dentro del alcance de la invención.
Esta invención se entenderá mejor por referencia a los detalles experimentales que siguen, pero los expertos en la materia apreciarán fácilmente que los experimentos específicos detallados son solo ilustrativos de la invención tal como se describe detalladamente en las reivindicaciones que siguen a continuación.
Detalles experimentales
ABREVIATURAS
ACN -Acetonitrilo; AUCúltima - Área bajo la curva de concentración-tiempo desde el tiempo 0 hasta la última concentración cuantificable; AUCinf - Área bajo la curva de concentración-tiempo desde el tiempo<0>hasta el infinito; BQL - Por debajo del límite cuantificable; CL - Aclaramiento; Cmax - Concentración plasmática máxima; h o H - Hora; IV Intravenoso; kg - Kilogramo; L - Litro; LC Cromatografía líquida; LLOQ - Límite inferior de cuantificación; MeOH Metanol; mg Miligramo; MS - espectrometría de masas; NH4OAc - Acetato amónico; PK - Farmacocinética PO - Oral; SD Desviación estándar; t<1/2>- Vida media terminal; Tmax- Tiempo para alcanzar la concentración plasmática máxima; Vss - Volumen de distribución en estado estacionario
Materiales y métodos
Métodos representativos para la preparación de profármacos:
Se calienta una mezcla de anhídrido exo-7-oxabiciclo[2.2.1]heptano-2,3-dicarboxílico (50,0 mmol) y el alcohol alquílico apropiado (110,0 mmol) en tolueno a 70 - 75 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentra en un evaporador rotatorio y el sólido crudo se tritura con 20 mL de éter isopropílico mientras se calienta y se filtra para dar un sólido. A la mezcla de éster alquílico en cloruro de metileno se añade N-hidroxibenzotriazol (5 mmol) seguido de N-metilpiperazina (200 mmol) y EDC (75 mmol). La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente y se evapora a sequedad. El producto se purifica mediante cromatografía en columna y recristalización.
Se calienta una mezcla de anhídrido exo-3,6-epoxi -1,23,6-tetrahidroftálico (50,0 mmol) y el alcohol alquílico apropiado (110,0 mmol) en tolueno a 70 - 75 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentra en un evaporador rotatorio y el sólido crudo se tritura con 20 mL de éter isopropílico mientras se calienta y se filtra para dar un sólido. A la mezcla de éster alquílico en cloruro de metileno se añade N-hidroxibenzotriazol (5 mmol) seguido de N-metilpiperazina (200 mmol) y EDC (75 mmol). La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente y se evapora a sequedad. El producto se purifica mediante cromatografía en columna y recristalización.
A la mezcla de ácido en cloruro de metileno se añade TEA (1 mmol) seguido de ácido (1 mmol) y bromuro de alquilo (1,5 mmol). La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente y se evapora a sequedad. El producto se purifica entonces mediante cromatografía en columna y recristalización para proporcionar el profármaco puro.
A la mezcla de ácido en cloruro de metileno se añade TEA (1 mmol) seguido de cloruro de alquilo (1,5 mmol). La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente y se evapora a sequedad. El producto se purifica entonces mediante cromatografía en columna y recristalización para proporcionar el profármaco puro.
A la mezcla de ácido en cloruro de metileno se añade TEA (1 mmol) seguido de cloruro de alquilo (1,5 mmol). La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente y se evapora a sequedad. El producto se purifica entonces mediante cromatografía en columna y recristalización para proporcionar el profármaco puro.
A la mezcla de ácido en cloruro de metileno se añade trietilamina (1 mmol) seguido de cloruro de alquilo (1 mmol). La mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente y se diluye con H<2>O. La fase acuosa se extrae (3x) con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas se lavan entonces (3x) con bicarbonato sódico saturado. La capa orgánica se concentra y se purifica entonces mediante cromatografía en columna y recristalización para proporcionar el profármaco puro.
El compuesto 100 tiene la estructura:
El compuesto 105 tiene la estructura:
El compuesto 113 tiene la estructura:
El compuesto 151 tiene la estructura:
El compuesto 153 tiene la estructura:
El compuesto 157 tiene la estructura:
Los Ejemplos 10, 12, 13 y 14 se refieren explícitamente a los compuestos de la presente invención. Los otros ejemplos son solo comparativos.
Ejemplo 1. Estudio farmacocinético de compuestos 153 y 157
Los estudios farmacocinéticos en el compuesto 153, el compuesto 157 y su metabolito endothall se efectuaron en ratas SD. Se administraron el compuesto 153 a 1,25 mg/kg y el compuesto 157 a 1,5 mg/kg por vía iv y po en ratas SD. Se recogieron muestras de sangre, tejido hepático y cerebral de ratas en momentos predeterminados. Los métodos LC/MS/MS se desarrollaron para determinar el compuesto 153, el compuesto 157 y endothall en muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales. En el informe se presentaron las concentraciones de compuesto 153, compuesto 157 y endothall en muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales después de dosis iv. También se calculó la biodisponibilidad del compuesto 153 y del compuesto 157. Se diluyó el compuesto poco antes de uso en bicarbonato sódico al 4 % para inyección estéril (esta es la solución pediátrica estándar de NaHCOs con un pH de alrededor de 8,5).
Se asignaron a este estudio un total de 30 ratas SD hembra como se muestra en la tabla a continuación:
Se preparó el compuesto 153 fresco mediante dilución de los fármacos poco antes de uso en bicarbonato sódico al 4 % para inyección estéril (esta es la solución pediátrica estándar de NaHCOs con un pH de alrededor de 8,5). Las concentraciones finales de las soluciones de compuesto 153 eran 0,25 mg/mL. Se administraron soluciones de compuesto 153 por vía iv o po a un volumen de dosis de 5 ml/kg según el peso corporal más reciente. Se preparó el compuesto 157 fresco mediante dilución de los fármacos poco antes de uso en bicarbonato sódico al 4 % para inyección estéril (esta es la solución pediátrica estándar de NaHCOs con un pH de alrededor de 8,5). Las concentraciones finales de las soluciones de compuesto 153 eran 0,3 mg/mL. Se administraron soluciones de compuesto 157 por vía iv o po a un volumen de dosis de 5 ml/kg según el peso corporal más reciente.
Se dosificó compuesto 153 o compuesto 157 a doce (12) ratas SD hembra por grupo por vía iv. Las ratas se sometieron a ayuno durante la noche antes de la noche, con acceso libre a agua. Los alimentos se retuvieron durante 2 horas después de la dosis. Se recogieron muestras de sangre, tejido hepático y cerebral en dos animales de cada grupo en cada punto temporal dentro del 10 % de tiempo programado para cada punto temporal. Se utilizaron dos animales adicionales para el desarrollo del método analítico.
Se recogió sangre (>0,3 mL) a través de la aorta abdominal en animales anestesiados en tubos que contenían heparina a los 15 min, 1, 2, 6, 10 y 24 horas después de administración iv. Se recogieron tejidos hepático y cerebral inmediatamente después de la muerte del animal. Se extirparon tejidos hepático y cerebral y se enjuagaron con solución salina fría para evitar sangre residual. Tras la recogida se colocó cada muestra en hielo y posteriormente se centrifugaron las muestras de sangre (4°C, 11000 rpm, 5 min) para separar plasma.
Se almacenaron el plasma, el tejido hepático y cerebral obtenidos a - 70°C hasta análisis por LC-MS/MS.
Se dosificó compuesto 153 o compuesto 157 a dos (2) ratas SD hembra por grupo por vía po. Las ratas se sometieron a ayuno durante la noche antes de la noche, con acceso libre a agua. Los alimentos se retuvieron durante 2 horas después de la dosis. Se recogieron muestras de sangre (>0,3 mL) a través de la aorta abdominal en animales anestesiados en tubos que contenían heparina a los 30 min, 1,2, 6, 10 y 24 horas después de administración po.
Preparación de muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales para el compuesto 153
Se descongelaron a temperatura ambiente muestras plasmáticas desconocidas congeladas y se agitaron a fondo en vortex. Con una pipeta se transfirieron 50 pL de plasma a un tubo Eppendorf de 1,5 mL. A cada muestra se añadieron 20 pL de IS-D (para muestras en blanco se añadieron 20 pL de acetonitrilo:agua (1:1)) y se añadieron 300 ul de acetonitrilo. Se agitó la mezcla de muestra en vortex durante aproximadamente 3 min. Tras la centrifugación a 10000 rpm durante 5 min a 4°C, se transfirieron 100 pL de la capa superior a un tubo nuevo y se añadieron 200 pL de ácido fórmico al 0,4 % en agua (pH 6,0). La mezcla se agitó en vortex durante aproximadamente 3 min antes de inyectarse en el sistema LC/MS/MS para análisis.
El día del ensayo, se descongelaron a temperatura ambiente sin ayuda las muestras hepáticas y cerebrales congeladas. Se colocó una muestra pesada de alrededor de 200 mg de cada tejido descongelado en un tubo de plástico con agua (0,6 mL) para facilitar la homogeneización. El procesamiento de tejidos se efectúo utilizando un homogeneizador durante aproximadamente 1 min, se transfirieron 200 pl de homogeneizado a un tubo Eppendorf fresco. A cada tubo se añadieron 50 pL de IS-D y se mezcló. Después se añadieron 600 ul de acetonitrilo y se agitó la mezcla en vortex durante aproximadamente 3 min. Tras centrifugación a 10000 rpm durante 5 min a 4°C, se transfirieron 400 pL de la capa superior a un tubo nuevo y se evaporó el sobrenadante hasta sequedad a 35 °C. Se reconstituyó el residuo con 200 pL de ácido fórmico al 0,4 % en agua (pH 6,0) y se agitó en vortex durante 3 min, se sometió a análisis por LC-MS/MS.
Preparación de muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales para el compuesto 157
Se descongelaron a temperatura ambiente muestras plasmáticas desconocidas congeladas y se agitaron a fondo en vortex. Con una pipeta se transfirieron 50 pL de plasma a un tubo Eppendorf de 1,5 mL. A cada muestra se añadieron 30 pL IS-D (para muestras en blanco se añadieron 20 pL de acetonitrilo:agua (1:1)) y se añadieron 300 ul de acetonitrilo. Se agitó la mezcla de muestra en vortex durante aproximadamente 3 min. Tras la centrifugación a 10000 rpm durante 5 min a 4°C, se transfirieron 100 pL de la capa superior a un tubo nuevo y se añadieron 200 pL de ácido fórmico al 0,4 % en agua (pH 6,0). La mezcla se agitó en vortex durante aproximadamente 3 min antes de inyectarse en el sistema LC/MS/MS para análisis.
El día del ensayo, se descongelaron a temperatura ambiente sin ayuda las muestras de hígado y cerebro congeladas. Se colocó una muestra pesada de alrededor de 200 mg de cada tejido descongelado en un tubo de plástico con agua (0,6 mL) para facilitar la homogeneización. El procesamiento de tejidos se efectúo utilizando un homogeneizador durante aproximadamente 1 min, se transfirieron 100 pl de homogeneizado a un tubo Eppendorf fresco. A cada tubo se añadieron 50 pL de IS-D y se mezcló. Después se añadieron 500 ul de acetonitrilo y se agitó la mezcla en vortex durante aproximadamente 3 min. Tras centrifugación a 10000 rpm durante 5 min a 4°C, se transfirieron 100 pL de la capa superior a un tubo nuevo y se evaporó el sobrenadante hasta sequedad a 35 °C. Se reconstituyó el residuo con 200 pL de ácido fórmico al 0,4 % en agua (pH 6,0) y se agitó en vortex durante 3 min, se sometió a análisis por LC-MS/MS.
Preparación de muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales para Endothall
Se descongelaron a temperatura ambiente muestras plasmáticas desconocidas congeladas y se agitaron a fondo en vortex. Con una pipeta se transfirieron 50 pL de plasma a un tubo Eppendorf de 2,0 mL. Se añadieron a cada muestra 50 pL de HCl 0,1N y 800 pL de acetato de etilo. Se agitó en vortex la mezcla de muestra durante aproximadamente 3 min. Tras centrifugación a 10000 rpm durante 5 min a 4°C se transfirió el sobrenadante de 600 pl a un tubo Eppendorf de 1,5 mL. Se extrajo el precipitado con 800 pL de acetato de etilo y de nuevo se transfirió el sobrenadante de 600 pl al mismo tubo y se evaporó hasta sequedad. El residuo se reconstituyó con 150 pL de IS-D (para muestras en blanco, 0,05 % de ácido fórmico en acetonitrilo) y se agitó en vortex durante 3 min. Se sometió a análisis por LC/MS/MS. El día del ensayo, se descongelaron a temperatura ambiente sin ayuda las muestras hepáticas y cerebrales congeladas. Se colocó una muestra pesada de alrededor de 200 mg de cada tejido descongelado en un tubo de plástico con agua (0,6 mL) para facilitar la homogeneización. Se transfirieron 150 pL de cada homogeneizado fresco a un tubo de Eppendorf fresco, se añadieron 150 pL de HCl 0,1N y 800 pL de éter acético en cada muestra de homogeneizado. La mezcla de muestra se agitó en vortex y se centrifugó a 10000 rpm durante 5 min a 4°C. Se transfirió el sobrenadante de 600 pl a un tubo Eppendorf de 1,5 mL, se extrajo el precipitado con 800 pL de acetato de etilo de nuevo y se transfirió el sobrenadante de 600 pl al mismo tubo y se evaporó hasta sequedad. El residuo se reconstituyó con 200 pL de IS-D (para muestras en blanco, 0,05 % de ácido fórmico en acetonitrilo) y se agitó en vortex durante 3 min. Se sometió a análisis por LC/MS/MS.
Preparación de muestras de calibración para el compuesto 153
1) Preparación de muestras de calibración para análisis de muestras plasmáticas
Se prepararon patrones de calibración mediante pipeteado de 25 pL de soluciones estándar de compuesto 153 en 25 pL de plasma de rata en blanco heparinizado. Las concentraciones estándar nominales en el plasma de ratón eran 2,00, 4,00, 10,0, 50,0, 100, 500, 900 y 1000 ng/mL.
2) Preparación de muestras de calibración para análisis de muestras de tejido hepático y cerebral
Con el fin de cuantificar el compuesto 153 en muestras de tejido hepático y cerebral se preparó una curva de calibración que consistía en 8 muestras estándar utilizando el mismo homogeneizado tisular en blanco que la matriz de muestra analizada (concentraciones finales: 1,00, 2,00, 5,00, 25,0, 50,0, 250, 450 y 500 ng/g).
Preparación de muestras de calibración para el compuesto 157
1) Preparación de muestras de calibración para análisis de muestras plasmáticas
Se prepararon patrones de calibración mediante pipeteado de 25 pL de soluciones estándar de compuesto 157 en 25 pL de plasma de rata en blanco heparinizado. Las concentraciones estándar nominales en el plasma de ratón eran 0,500, 1,00, 2,50, 12,5, 25,0, 125, 225 y 250 ng/mL.
2) Preparación de muestras de calibración para análisis de muestras de tejido hepático y cerebral Con el fin de cuantificar el compuesto 157 en muestras de tejido hepático y cerebral se preparó una curva de calibración que consistía en<8>muestras estándar utilizando el mismo homogeneizado de tejido en blanco que la matriz de muestra analizada (concentraciones finales: 0,500, 1,00, 2,50, 12,5, 25,0, 125, 225 y 250 ng/mL).
Preparación de muestras de calibración para Endothall
1) Preparación de muestras de calibración para análisis de muestras plasmáticas
Se prepararon patrones de calibración mediante pipeteado de 25 pL de soluciones estándar de endothall en 25 pL de plasma de rata en blanco heparinizado. Las concentraciones estándar nominales en el plasma de rata eran 20,0, 40,0, 100, 200, 400, 2000, 3600 y 4000 ng/mL.
2) Preparación de muestras de calibración para análisis de muestras de tejido hepático
Con el fin de cuantificar endothall en muestras de tejido hepático se preparó una curva de calibración que consistía en<8>muestras estándar utilizando el mismo homogeneizado tisular en blanco que la matriz de muestra analizada (concentraciones finales: 20,0, 40,0, 100, 200, 400, 2000, 3600 y 4000 ng/g).
Sistema LC/MS/MS
El análisis se realizó utilizando un sistema LC-MS/MS formado por los siguientes componentes: sistema HPLC: sistema Shimadzu UFLC 20-AD XR; sistema MS/MS: espectrómetro de masas de triple cuadrupolo API-5000 (Applied Biosystems); Sistema de datos: Watson LIMS versión 7.2.
1) Condiciones cromatográficas para el compuesto 153
2) Condiciones de espectrometría de masas para el compuesto 153
ÍCE1_:
1) Condiciones cromatográficas para el compuesto 157
2) Condiciones de espectrometría de masas para el compuesto 157
ÍCE1_:
1) Condiciones cromatográficas para endothall
La separación cromatográfica se efectuó a temperatura ambiente.
2) Condiciones de espectrometría de masas para endothall
ÍC E L
Cuantificación
La cuantificación se consiguió mediante el método estándar externo para 153, 157 y endothall. Se calcularon concentraciones del artículo de prueba utilizando una regresión lineal de mínimos cuadrados ponderados (W = 1/x2). Interpretación farmacocinética
Los parámetros farmacocinéticos se evaluaron utilizando Watson LIMS (versión 7.2), suponiendo un modelo no compartimental para absorción y distribución de fármaco.
• AUC<0>-t (AUCúltima) es el área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo desde el tiempo cero hasta el tiempo del último muestreo, calculada mediante la regla trapezoidal lineal.
• AUC<0>-~ (AUCinf) es el área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo con la última concentración extrapolada en base a la constante de tasa de eliminación.
Resultados:
La curva de calibración del compuesto 153 en plasma de rata era lineal durante todo el estudio en el rango de 2,00 1000 ng/mL. La ecuación lineal y el coeficiente de correlación de la curva de calibración es y=0,0252x+0,0127 y R2=0,9957.
La curva de calibración del compuesto 100 en los tejidos probados era lineal durante todo el estudio en el rango de 1,00-500 ng/g. La ecuación lineal y el coeficiente de correlación de la curva de calibración es y=0,0233x+0,0213 y R<2>=0,9939.
La curva de calibración del compuesto 157 en plasma de rata era lineal durante todo el estudio en el rango de 0,50 250 ng/mL. La ecuación lineal y el coeficiente de correlación de la curva de calibración es y=0,333x-0,0136 y R2=0,9986.
La curva de calibración del compuesto 157 en los tejidos probados era lineal durante todo el estudio en el rango de 0,50-250 ng/g. La ecuación lineal y el coeficiente de correlación de la curva de calibración es y=0,0467x+0,0034 y R2=0,9989.
La curva de calibración de endothall en plasma de rata era lineal durante todo el estudio en el rango de 20,0-4000 ng/mL. La ecuación lineal y el coeficiente de correlación de la curva de calibración es y=0,00155x-0,00162 y R2=0,9986.
La curva de calibración de endothall en los tejidos hepáticos de rata era lineal durante todo el estudio en el rango de 20,0-4000 ng/g. La ecuación lineal y el coeficiente de correlación de la curva de calibración es y=0,00349x+0,0177 y R<2>=0,997.
Después de la administración iv y po única de compuesto 153 a ratas SD, se determinaron concentraciones tanto de 153 como de endothall en plasma, tejido hepático y cerebral mediante el método LC/MS/MS descrito anteriormente. Las concentraciones plasmáticas, tejido hepático y cerebral en cada tiempo de muestreo se enumeran en las Tablas 6.1-6.8 y en las Figuras 1A-1B. Los parámetros farmacocinéticos calculados se enumeran en la Tabla 6.9-6.12.
El compuesto 153 estaba disponible oralmente a 1,25 mg/kg para ratas SD, la Cmax era 239 ng/mL, el AUC era 164 ngh/ml y el BA es 55,41 %.
La Cmax media en plasma era 557 ng/ml después de administración iv de compuesto 153. La Cmax media en hígado y cerebro era 762,0 ng/kg y 42,7 ng/kg, respectivamente. El AUCúltima en plasma era 295 ngh/ml, con 500 ngh /g en hígado y 39,4 ngh/g en cerebro, respectivamente. T<1/2>en plasma, hígado y cerebro era 0,921 h, 0,626 h y 0,596 h, respectivamente.
Como se muestra en la Tabla 6.5-6.8 y la Figura 1B, endothall era detectable en muestras plasmáticas y hepáticas después de administración iv única de 153 a 1,25 mg/kg, mientras que no era detectable en muestras cerebrales. La Cmax media en plasma e hígado era 70,5 ng/ml y 2068 ng/ml, respectivamente. El AUCúltima en plasma e hígado era 378 ngh/ml y 10820 ngh/g, respectivamente. T<1/2>en plasma e hígado era 5,20 h y 2,79 h, respectivamente.
Después de la administración iv y po única de compuesto 157 a ratas SD, se determinaron concentraciones tanto de compuesto 157 como de endothall en plasma, tejido hepático y cerebral mediante el método LC/MS/MS descrito anteriormente. Las concentraciones plasmáticas, tejido hepático y cerebral en cada tiempo de muestreo se enumeran en las Tablas 6.13-6.20 y en las Figuras 1C-1D. Los parámetros farmacocinéticos calculados se enumeran en la Tabla 6.21-6.24. 157 poco disponible oralmente a 1,5 mg/kg para ratas SD, la Cmax era 6,14 ng/mL, el AUC era 3,2 ngh/ml y el BA era<6 , 98>%.
La Cmax media en plasma era 115 ng/ml después de administración iv de compuesto 157 a 1,5 mg/kg a ratas SD. La Cmax media en hígado y cerebro era 297 ng/kg y 60,0 ng/kg, respectivamente. El AUCúltima en plasma era 47,2 ngh/ml, con 152 ngh /g en hígado y 24,6 ngh/g en cerebro, respectivamente. T<1/2>en plasma, hígado y cerebro era 0,391 h, 0,813 h y 0,162 h, respectivamente.
Como se muestra en la Tabla 6.17-6.20 y la Figura 1 D, endothall era detectable en muestras plasmáticas y hepáticas después de administración iv única de 157 a 1,5 mg/kg, mientras que endothall no era detectable en muestras cerebrales. La Cmax media en plasma e hígado era 98,1 ng/ml y 3720 ng/ml, respectivamente. El AUCúltima en plasma e hígado era 374 ng h/ml y 15025 ng h/g, respectivamente. T<1/2>en plasma e hígado era 5,94 h y 2,61 h, respectivamente.
El compuesto 153 estaba disponible oralmente a 1,25 mg/kg para ratas SD, la Cmax era 239 ng/mL, el AUC era 164 ngh/ml y el BA era 55,41 %. La Cmax media en plasma era 557 ng/ml después de administración iv de compuesto 153. La Cmax media en hígado y cerebro era 762,0 ng/kg y 42,7 ng/kg, respectivamente. El AUCúltima en plasma era 295 ngh/ml, con 500 ngh /g en hígado y 39,4 ngh/g en cerebro, respectivamente. T<1/2>en plasma, hígado y cerebro era 0,921 h, 0,626 h y 0,596 h, respectivamente.
Endothall era detectable en plasma y muestras hepáticas después de administración iv única de compuesto 153 a 1,25 mg/kg. La Cmax media en plasma e hígado era 70,5 ng/ml y 2068 ng/ml, respectivamente. El AUCúltima en plasma e hígado era 378 ng h/ml y 10820 ng h/g, respectivamente. T<1/2>en plasma e hígado era 5,20 h y 2,79 h, respectivamente. Sin embargo, endothall era indetectable en tejido cerebral.
El compuesto 157 estaba poco disponible oralmente a 1,5 mg/kg para ratas SD, la Cmax era 6,14 ng/mL, el AUC era 3,2 ngh/ml y el BA era 6,98 %.
La Cmax media en plasma era 115 ng/ml después de administración iv de compuesto 157 a 1,5 mg/kg a ratas SD. La Cmax media en hígado y cerebro era 297 ng/kg y 60,0 ng/kg, respectivamente. El AUCúltima en plasma era 47,2 ngh/ml, con 152 ngh /g en hígado y 24,6 ngh/g en cerebro, respectivamente. T<1/2>en plasma, hígado y cerebro era 0,391 h, 0,813 h y 0,162 h, respectivamente.
Endothall era detectable en plasma y muestras hepáticas después de administración iv única de compuesto 157 a 1,5 mg/kg. La Cmax media en plasma e hígado era 98,1 ng/ml y 3720 ng/ml, respectivamente. El AUCúltima en plasma e hígado era 374 ngh/ml y 15025 ngh/g, respectivamente. T<1/2>en plasma e hígado era 5,94 h y 2,61 h, respectivamente. Sin embargo, endothall era indetectable en tejido cerebral.
Tabla 6.1: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 153 (ng/mL) en ratas SD después de administración PO.
Tabla 6.2: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 153 (ng/mL) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.3: Datos analíticos de concentración hepática de compuesto 153 (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.4: Datos analíticos de concentración cerebral de compuesto 153 (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.5: Datos analíticos de concentración plasmática de endothall (ng/ml) en ratas SD después de administración po de compuesto 153.
Tabla 6.6: Datos analíticos de concentración plasmática de endothall (ng/ml) en ratas SD después de administración iv de compuesto 153.
Tabla 6.7: Datos analíticos de concentración hepática de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv de compuesto 153.
Tabla 6.8: Datos analíticos de concentración cerebral de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv de compuesto 153.
Tabla 6.9: Parámetros farmacocinéticos principales del compuesto 153 en ratas SD después de administración iv o po.
Tabla 6.10: Parámetros farmacocinéticos principales del compuesto 153 en hígado y cerebro de 153 de ratas SD después de administración iv o po.
Tabla 6.11: Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall en ratas SD después de administración iv o po única de compuesto 153.
Tabla 6.12: Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall en hígado y cerebro de ratas SD después de administración iv única de compuesto 153.
Tabla 6.13: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 157 (ng/mL) en ratas SD después de administración PO.
Tabla 6.14: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 157 (ng/mL) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.15: Datos analíticos de concentración hepática de compuesto 157 (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.16: Datos analíticos de concentración cerebral de compuesto 157 (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.17: Datos analíticos de concentración plasmática de endothall (ng/ml) en ratas SD después de administración po de compuesto 157.
Tabla 6.18: Datos analíticos de concentración plasmática de endothall (ng/ml) en ratas SD después de administración iv de compuesto 157.
Tabla 6.19: Datos analíticos de concentración hepática de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv de compuesto 157.
Tabla 6.20: Datos analíticos de concentración cerebral de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv de compuesto 157.
Tabla 6.21: Parámetros farmacocinéticos principales del compuesto en 157 en ratas SD después de administración iv o po.
Tabla 6.22: Parámetros farmacocinéticos principales del compuesto en 157 en hígado y cerebro de ratas SD después de administración iv.
Tabla 6.23: Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall en ratas SD después de administración iv y po única de compuesto 157.
Tabla 6.24: Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall en hígado y cerebro de ratas SD después de administración iv única de compuesto 157.
Ejemplo 2. Estudio farmacocinético del compuesto 105
El propósito de este estudio era determinar los parámetros farmacocinéticos del compuesto 105 y endothall en plasma e hígado después de administración intravenosa única de compuesto 105 a ratas SD macho. Se disolvió el compuesto 105 en NaHCOs al 4 % en solución salina para administración IV. El procedimiento detallado de preparación de la solución de dosificación se presentó en elApéndice I.
Fuente animal:
Se colocaron trece (13) animales en el estudio. Los animales en el brazo IV tenían acceso libre a comida y agua. Se utilizó un animal adicional para la generación de hígado y plasma en blanco (5 mL por animal). El hígado y el plasma en blanco resultantes se aplicaron entonces al desarrollo del método bioanalítico y al bioanálisis de muestras para todo el estudio.
Diseño de estudio en vivo
Dosificación, muestreo, procesamiento de muestras y almacenamiento de muestras
La inyección IV se efectuó a través de la vena dorsal del pie. Antes de la dosis, los animales tenían acceso libre a comida y agua.
El animal se sujeta manualmente. Se recogen aproximadamente 150 pL de sangre/punto temporal en el tubo de heparina sódica a través de una punción cardíaca para hemorragia terminal (anestesiado bajo dióxido de carbono). La muestra de sangre se pone en hielo y se centrifuga para obtener la muestra plasmática (2000g, 5 min bajo 4°C) en 10 minutos.
El animal se eutanasia con inhalación de dióxido de carbono. Se abre la cavidad abdominal con unas tijeras para exponer los órganos internos. Se sostiene el cadáver en posición vertical y se deja que los órganos caigan hacia delante. Se cortan los tejidos conectivos y se extraen los órganos. Después se enjuagan los órganos con solución salina fría, se secan en papel filtrado, se colocan en un tubo con tapa de rosca y se pesan, se congelan a presión mediante colocación inmediata en hielo seco.
Se almacenaron muestras plasmáticas y hepáticas aproximadamente -80°C hasta análisis. Las muestras de respaldo se desecharán después de tres semanas después de finalizar la vida útil a menos que se solicite. Las soluciones de dosificación no utilizadas se desecharán en las tres semanas posteriores a la finalización del estudio.
Método analítico de análisis por LC-MS-MS para el compuesto 105
Método analítico de análisis por LC-MS-MS para Endothall
Análisis farmacocinético
Software: Los parámetros PK se determinaron mediante el modelo no compartimental de la herramienta de análisis no compartimental, software, Pharsight Phoenix WinNonlin® 6.2.
Regla "BQL": Los datos de concentración por debajo de 80 % de LLOQ (LLOQ = 10,00 ng/mL en homogeneizado plasmático y hepático de rata para el compuesto 105 y 20,00 ng/mL para Endothall) se reemplazaron por "BQL" y se excluyeron de la gráfica y la estimación de parámetros PK. Los datos de concentración dentro del 80 %-120 % de LLOQ se consideraron dentro de la variación instrumental normal y se presentaron en los resultados.
Cálculo de ty2 terminal: Los puntos temporales se seleccionaron automáticamente mediante el modelo de "mejor ajuste" para la estimación del a vida media terminal como primera opción. Se aplicó la selección manual cuando el "mejor ajuste" no podía definir bien la fase terminal.
Observaciones clínicas
Los datos de concentración-tiempo y los parámetros farmacocinéticos del compuesto 105 y Endothall en plasma e hígado de rata después de administración IV se enumeraron en las Tablas 7.1 a 7.8 y se ilustraron en las Figuras 2A a2C.
Tabla 7.1: Datos individuales y medios de concentración plasmática-tiempo de compuesto 105 después de una dosis IV de 1 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media (ng/mL)
0,25 1930 1530 1730
1 263 228 246
2 45,2 21,5 33,4
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
Tiempo (h) individual Media (ng/mL) LLOQ del compuesto 105 en muestra plasmática es 10,0 ng/mL.
ULOQ del compuesto 105 en muestra plasmática es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 7.2: Datos individuales y medios de concentración hepática-tiempo de compuesto 105 después de una dosis IV de 1 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 1070 988 1029
1 576 446 511
2 99,2 131 115
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
Se homogeneizó la muestra hepática con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneización (PBS pH 7,4). Concentración hepática = conc. de homogeneizado hepático x 4, suponiendo que 1 g de tejido hepático húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ del compuesto 105 en muestra de homogeneizado hepático es 10,0 ng/mL.
ULOQ del compuesto 105 en muestra de homogeneizado hepático es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 7.3: Relación de concentración hepática-plasmática de compuesto 105 después de una dosis IV de 1 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media
0,25 0,554 0,646 0,600
1 2,19 1,96 2,07
2 2,19 6,09 4,14
6 NA NA NA
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
dosis IV de 1 mg/kg de 105 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/mL)
0,25 263 188 226
1 69,7 45,2 57,5
2 23,2 BQL 23,2
6 BQL BQL BQL
10 BQL 21,9 21,9
24 BQL BQL BQL
LLOQ de Endothall en muestra plasmática es 20,0 ng/mL.
ULOQ de Endothall en muestra plasmática es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 7.5: Datos individuales y medios de concentración hepática-tiempo de Endothall después de una dosis IV de 1 mg/kg de 105 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 475 462 469
1 541 386 464
2 151 304 228
6 76,9 163 120
10 70,0 156 113
24 BQL 63,8 63,8
Se homogeneizó la muestra hepática con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneización (PBS pH 7,4). Concentración hepática = conc. de homogeneizado hepático x 4, suponiendo que 1 g de tejido hepático húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ de Endothall en muestra de homogeneizado hepático es 20,0 ng/mL.
ULOQ de Endothall en muestra de homogeneizado hepático es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 7.6: Relación de concentración hepática-plasmática de Endothall después de una dosis IV de 1 mg/kg de 105 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media
0,25 1,81 2,46 2,13
1 7,76 8,54 8,15
2 6,51 NA 6,51
6 NA NA NA
10 NA 7,12 7,12 Tiempo (h) Individual Media
24 NA NA NA
NA: no aplicable
Tabla 7.8. Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall después de una dosis IV de 1 mg/kg de 105 en ratas SD macho
Vía de AUC( 0 - t ) AUC( 0 -«) t1 /2 Tm a x Cm a x AUCh e p á t ic a ú l t im a Matriz dosificación
(dosis) h*ng/mL h*ng/mL h h ng/mL AUCp la s m á t ic a ú l t im a Plasma355 673 10,1 0,250 226 NA
19,0
Hígado IV (1 mg/kg)3152 4896 469 888
0,250
NA: no aplicable
IV-1 mg/kg de compuesto 105
Después de una dosis IV de compuesto 105 a 1 mg/kg en ratas SD macho, la concentración de 105 en el plasma de rata disminuyó con una vida media terminal (T<1/2>) de 0,309 horas. El área bajo la curva desde el tiempo 0 hasta el último punto temporal (AUCúltima) y desde el tiempo 0 hasta el infinito (AUC<inf>) eran 1511 y 1526 h*ng/mL respectivamente. El aclaramiento total CL y el volumen de distribución en estado estacionario Vss eran 0,655 L/h/kg y 0,215 L/kg, respectivamente.
Los valores medios de Cmax en hígado eran 1029 ng/g y el correspondiente valor Tmax era 0,25 h. El valor medio de AUC(ü-última) era 1019 ng/g*h. La relación AUC(<0>-t) de hígado sobre plasma era 67,4.
Endothall
Después de administración intravenosa de 1 mg/kg de compuesto 105 a ratas SD macho, la concentración de Endothall en el plasma de rata disminuyó con una vida media terminal (T<1/2>) de 10,1 horas. El área bajo la curva desde el tiempo 0 hasta el último punto temporal (AUCúltima) y desde el tiempo 0 hasta el infinito (AUCINF) eran 355 y 673 h*ng/mL respectivamente. Los valores medios de Cmax y Tmax en plasma eran 226 ng/mL y 0,25 h, respectivamente. Los valores medios de Cmax en hígado eran 469 ng/g y el correspondiente valor Tmax era 0,25 h. El valor medio de AUC(ü-última) y AUC(<ü>-~) eran 3152 y 4896 ng/g*h, respectivamente. La relación AUC(0-t) de hígado sobre plasma era 888.
Ejemplo 3. Estudio farmacocinético del compuesto 113
El propósito de este estudio era determinar los parámetros farmacocinéticos del compuesto 113, compuesto 100 y Endothall después de administraciones intravenosa (IV) u oral (PO) única de compuesto 113 a ratas SD macho. Se disolvió el compuesto 113 en NaHCO3 al 4 % en solución salina para administración IV. El procedimiento detallado de preparación de la solución de dosificación se presentó en elApéndice I.
Fuente animal
Especies Género Proveedor N° de certificado
Ratas SD Macho SLAC Laboratory Animal Co. LTD SCXK (SH) 2007-0005
Se colocaron 15 animales en el estudio. Los animales en el brazo IV tenían acceso libre a comida y agua. Para el grupo de dosis PO, los animales se sometieron a ayuno durante la noche antes de la dosificación y la alimentación se prosiguió 4 horas después de la dosis. Se utilizó un animal adicional para la generación de hígado, cerebro y plasma en blanco (5 mL por animal). El hígado, el cerebro y el plasma en blanco resultantes se aplicaron entonces al desarrollo del método bioanalítico y al bioanálisis de muestras para todo el estudio.
Diseño de estudio en vivo
Dosificación, muestreo, procesamiento de muestras y almacenamiento de muestras
La inyección IV se efectuó a través de la vena dorsal del pie. PO a través de sonda nasogástrica.
Recogida de sangre: El animal se sujeta manualmente. Se recogen aproximadamente 200 pL de sangre/punto temporal en el tubo de heparina sódica a través de una punción cardíaca para hemorragia terminal (anestesiado bajo dióxido de carbono). La muestra de sangre se pone en hielo y se centrifuga para obtener la muestra plasmática (2000g, 5 min bajo 4°C) en 10 minutos.
Recogida de hígado: El animal se eutanasia con inhalación de dióxido de carbono. Se abre la cavidad abdominal con unas tijeras para exponer los órganos internos. Se sostiene el cadáver en posición vertical y se deja que los órganos caigan hacia delante. Se cortan los tejidos conectivos y se extraen los órganos.
Después se enjuagan los órganos con solución salina fría, se secan en papel filtrado, se colocan en un tubo con tapa de rosca y se pesan, se congelan a presión mediante colocación inmediata en hielo seco.
Recogida de cerebro: Se hace una incisión en la línea media en el cuero cabelludo de los animales y se retrae la piel. Con pequeños cortadores de hueso y rongeurs se extrae el cráneo que recubre el cerebro. Se extrae el cerebro con una espátula y se enjuaga con solución salina fría, se seca en papel filtrado, se coloca en un tubo con tapa de rosca y se pesa, se congela a presión mediante colocación inmediata en hielo seco. El tejido cerebral se homogeneiza durante 2 min con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneizado (PBS pH 7,4) justo antes del análisis. Se almacenaron muestras plasmáticas, cerebrales y hepáticas a aproximadamente -80°C hasta análisis. Las muestras de respaldo se desecharán después de tres semanas después de finalizar la vida útil a menos que se solicite. Las soluciones de dosificación no utilizadas se desecharán en las tres semanas posteriores a la finalización del estudio.
Método analítico de análisis por LC-MS-MS para el compuesto 113
Método analítico de análisis por LC-MS-MS para Endothall
Método analítico de análisis por LC-MS-MS para el compuesto 100
Análisis farmacocinético
Software: Los parámetros PK se determinaron mediante el modelo no compartimental de la herramienta de análisis no compartimental, software, Pharsight Phoenix WinNonlin® 6.2.
Regla "BQL": Datos de concentración por debajo de 80 % de LLOQ (LLOQ = 1,00 ng/mL en homogeneizado plasmático, cerebral y hepático de rata para 113. LLOQ = 20,00 ng/mL en homogeneizado plasmático, cerebral y hepático de rata para Endothall. LLOQ = 3,00 ng/mL para 100 in plasma de rata, 6,00 ng/mL para 100 en homogeneizado cerebral y hepático de rata) se sustituyó por "BQL" y se excluyó de la gráfica y de la estimación de parámetros PK. Los datos de concentración dentro del 80 %-120 % de LLOQ se consideraron dentro de la variación instrumental normal y se presentaron en los resultados.
Cálculo de terminal: Los puntos temporales se seleccionaron automáticamente mediante el modelo de "mejor ajuste" para la estimación del a vida media terminal como primera opción. Se aplicó la selección manual cuando el "mejor ajuste" no podía definir bien la fase terminal.
Resultados
No se observó ningún síntoma clínico anormal después de administraciones IV y PO.
Los datos de concentración-tiempo y los parámetros farmacocinéticos del compuesto 113, compuesto 100 y Endothall en plasma, cerebro e hígado de rata después de administración IV o PO se enumeraron en las Tablas 8.1 a 8.19 y se ilustraron en las Figuras 3A-3D.
Tabla 8.1: Datos individuales y medios de concentración plasmática-tiempo de compuesto 113 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg en ratas SD macho
Tabla 8.2: Datos individuales y medios de concentración plasmática-tiempo de compuesto 113 después de una dosis PO de 1,4 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media (ng/mL)
0,25 18,3 17,0 17,7
1 4,61 8,56 6,59
2 BQL 2,15 2,15
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
LLOQ del compuesto 113 en muestra plasmática es 1,00 ng/mL.
ULOQ del compuesto 113 en muestra plasmática es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.3: Datos individuales y medios de concentración hepática-tiempo de compuesto 113 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Media (ng/g)
Individual
0,25 55,5 36,9 46,2
1 14,6 11,8 13,2
2 BQL BQL BQL
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
Tiempo (h) Media (ng/g)
Individual
Se homogeneizó la muestra hepática con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneización (PBS pH 7,4).
Concentración hepática = conc. de homogeneizado hepático x 4, suponiendo que 1 g de tejido hepático húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ del compuesto 113 en muestra de homogeneizado hepático es 1,00 ng/mL.
ULOQ del compuesto 113 en muestra de homogeneizado hepático es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.4: Relación de concentración hepática-plasmática de compuesto 113 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media
0,25 0,321 0,191 0,256
1 1,35 1,18 1,27
2 NA NA NA
6 NA NA NA
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
Tabla 8.5: Datos individuales y medios de concentración cerebral-tiempo de compuesto 113 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 86,2 94,5 90,4
1 5,80 6,42 6,11
2 BQL BQL BQL
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
T ie m p o (h) in d iv id u a l M ed ia (ng /g )
Se homogeneizó la muestra cerebral a con 3 volúmenes (v/p) de solución de
homogeneización (PBS pH 7,4).
Concentración cerebral = conc. de homogeneizado cerebral x 4, suponiendo que 1 g de tejido cerebral húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ del compuesto 113 en muestra de homogeneizado cerebral es 1,00 ng/mL.
ULOQ del compuesto 113 en muestra de homogeneizado cerebral es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.6: Relación de concentración cerebral-plasmática de compuesto 113 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg en ratas SD macho
Tiempo (h) Individual Media
0,25 0,498 0,490 0,494
1 0,537 0,645 0,591
2 NA NA NA
6 NA NA NA
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
Tabla 8.7: Datos individuales y medios de concentración plasmática-tiempo de Endothall después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/mL)
0,25 24,9 61,2 43,1
1 41,6 36,1 38,9
2 43,3 17,4 30,4
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
LLOQ de Endothall en muestra plasmática es 20,0 ng/mL.
ULOQ de Endothall en muestra plasmática es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.8: Datos individuales y medios de concentración hepática-tiempo de Endothall después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 727 988 858
1 902 1230 1066
2 998 795 897
6 526 477 502
10 288 157 223
24 66,9 68,8 67,9
Se homogeneizó la muestra hepática con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneización
(PBS pH 7,4).
Concentración hepática = conc. de homogeneizado hepático x 4, suponiendo que 1 g de tejido
hepático húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ de Endothall en muestra de homogeneizado hepático es 20,0 ng/mL.
ULOQ de Endothall en muestra de homogeneizado hepático es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.9: Relación de concentración hepática-plasmática de Endothall después de una dosis IV de 1,4
mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media
0,25 29,2 16,1 22,7
1 21,7 34,1 27,9
2 23,0 45,7 34,4
6 NA NA NA
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
Tabla 8.10: Datos individuales y medios de concentración cerebral-tiempo de Endothall después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 BQL BQL BQL
1 BQL BQL BQL
2 BQL BQL BQL
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
T ie m p o (h) ind iv idu a l M ed ia (ng /g ) Se homogeneizó la muestra cerebral con 3 volúmenes (v/p) de solución de
homogeneización (PBS pH 7,4).
Concentración cerebral = conc. de homogeneizado cerebral x 4, suponiendo que 1 g de tejido cerebral húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ de Endothall en muestra de homogeneizado cerebral es 20,0 ng/mL.
ULOQ de Endothall en muestra de homogeneizado cerebral es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.11: Relación de concentración cerebral-plasmática de Endothall después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media
0,25 NA NA NA
1 NA NA NA
2 NA NA NA
6 NA NA NA
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
Tabla 8.12: Datos individuales y medios de concentración plasmática-tiempo de compuesto 100 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/mL)
0,25 510 598 554
1 273 170 222
2 135 45,3 90,2
6 3,25 BQL 3,25
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
LLOQ del compuesto 100 en muestra plasmática es 3,00 ng/mL.
ULOQ del compuesto 100 en muestra plasmática es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.13. Datos individuales y medios de concentración hepática-tiempo de compuesto 100 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 2090 1700 1895
1 1360 690 1025
2 425 306 366
6 23,8 21,8 22,8
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
Se homogeneizó la muestra hepática con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneización
(PBS pH 7,4).
Concentración hepática = conc. de homogeneizado hepático x 4, suponiendo que 1 g de
tejido hepático húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ del compuesto 100 en muestra de homogeneizado hepático es 6,00 ng/mL.
ULOQ del compuesto 100 en muestra de homogeneizado hepático es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.14. Relación de concentración hepática-plasmática de compuesto 100 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media
0,25 4,10 2,84 3,47
1 4,98 4,06 4,52
2 3,15 6,75 4,95
6 7,32 NA 7,32
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
Tabla 8.15. Datos individuales y medios de concentración cerebral-tiempo de compuesto 100 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media (ng/g)
0,25 BQL BQL BQL
1 BQL BQL BQL
2 BQL BQL BQL
6 BQL BQL BQL
10 BQL BQL BQL
24 BQL BQL BQL
T ie m p o (h) in d iv id u a l M ed ia (ng /g ) Se homogeneizó la muestra cerebral con 3 volúmenes (v/p) de solución de homogeneización (PBS pH 7,4).
Concentración cerebral = conc. de homogeneizado cerebral x 4, suponiendo que 1 g de tejido cerebral húmedo es igual a 1 mL.
LLOQ del compuesto 100 en muestra de homogeneizado cerebral es 6,00 ng/mL.
ULOQ del compuesto 100 en muestra de homogeneizado cerebral es 3000 ng/mL.
BLQ: por debajo del límite de cuantificación
Tabla 8.16: Relación de concentración cerebral-plasmática de compuesto 100 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD
Tiempo (h) Individual Media
0,25 NA NA NA
1 NA NA NA
2 NA NA NA
6 NA NA NA
10 NA NA NA
24 NA NA NA
NA: no aplicable
��Tabla 8.18: Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD macho
Tabla 8.19: Parámetros farmacocinéticos principales de compuesto 100 después de una dosis IV de 1,4 mg/kg de compuesto 113 en ratas SD macho
IV-1,4 mg/kg de compuesto 113
Después de una dosis IV de compuesto 113 a 1,4 mg/kg en ratas SD macho, el área bajo la curva desde el tiempo 0 al último punto temporal (AUCúltima) era 155 h*ng/mL.
Los valores medios de Cmax en hígado eran 46,2 ng/g y el correspondiente valor Tmax era 0,25 h. El valor medio de AUC(<0>-última) era 28,1 ng/g*h. La relación AUC(<0>-t) de hígado sobre plasma era 18,1.
Los valores medios de Cmax en cerebro eran 90,4 ng/g y el correspondiente valor Tmax era 0,25 h. El valor medio de AUC(<0>-última) era 47,5 ng/g*h. La relación AUC(<0>-t) de hígado sobre plasma era 30,6.
PO-1,4 mg/kg de compuesto 113
Después de una dosis PO de compuesto 113 a 1,4 mg/kg, el valor de Cmax en plasma de rata era 17,7 ng/mL y el correspondiente valor de Tmax era 0,250 h. El área bajo la curva desde el tiempo 0 hasta el último punto temporal AUCúltima era 15,7 h*ng/mL. Después de la dosis IV de 1,4 mg/kg y la dosis PO de 1,4 mg/kg, se estimó que la biodisponibilidad de este compuesto en ratas SD era 10,1 %.
Endothall
Después de administración intravenosa de 1,4 mg/kg de compuesto 113 a ratas SD macho, el área bajo la curva desde el tiempo 0 al último punto temporal (AUCúltima) era 70,7 h*ng/mL. Los valores medios de Cmax y Tmax en plasma eran 43,1 ng/mL y 0,25 h, respectivamente.
Los valores medios de Cmax en hígado eran 1066 ng/g y el correspondiente valor Tmax era 1,00 h. El valor medio de AUC(ü-última) y AUC(ü-~) eran 8086 y 8678 ng/g*h, respectivamente. La relación AUC(0-t) de hígado sobre plasma era 11438.
Compuesto 100
Los valores medios de Cmax y Tmax en plasma eran 554 ng/mL y 0,25 h, respectivamente. El valor medio de AUC(<0>-última) y AUC(<0>-~) eran 703 ng/mL*h y 707 ng/mL*h, respectivamente.
Los valores medios de Cmax en hígado eran 1895 ng/g y el correspondiente valor Tmax era 0,25 h. El valor medio de AUC(<0>-úitima) y AUC(<0>-~) eran 2804 ng/g*h y 2834 ng/g*h, respectivamente. La relación AUC(0-t) de hígado sobre plasma era 399.
Ejemplo 4. Estudio farmacocinético del compuesto 151
Se efectuó un estudio farmacocinético del compuesto 151 en ratas SD. El estudio consistía en dos niveles de dosis a 1,0 (iv) y 10 (oral) mg/kg. Se recogieron muestras de sangre de ratas en tiempos predeterminados y se centrifugaron para separar plasma. Se desarrolló un método de LC/MS/MS para determinar el artículo de prueba en muestras de plasma. Se calcularon los parámetros farmacocinéticos del compuesto 151 después de administración iv y oral a ratas SD. Se evaluó la biodisponibilidad absoluta.
Diseño del estudio
Se asignaron a este estudio un total de 5 ratas SD macho como se muestra en la tabla a continuación:
dosis Volumen de dosis Grupos<Número de ratas>Vía de Nivel de
(macho)administración (mg/kg) (ml/kg)
1 3 oral 10 10
2 2 iv 1,0 5,0
Preparación de dosis y administración de dosis
Se preparó el compuesto 151 (MW 282,34, pureza 99,2 %, n° de lote 20110512) mediante disolución del artículo en PBS (pH 7,4) el día de la dosis. La concentración final del artículo de prueba era 0,2 mg/mL para administración iv y 1,0 mg/mL para administración oral. Se administraron las soluciones de artículo de prueba utilizando el peso corporal más reciente de cada animal.
Recogida de muestras
Se recogió sangre (aproximadamente 0,3 mL) a través del plexo orbitario en tubos que contenían heparina sódica a 0,25, 0,5, 1,2, 3, 5, 7, 9 y 24 horas después de administración oral; a los 5 min, 15 min, 0,5, 1,2, 3, 5, 7, 9 y 24 horas después de administración iv. Se centrifugaron las muestras durante 5 min a 4°C con la centrífuga ajustada a 11.000 rpm para separar el plasma. Se almacenaron las muestras de plasma obtenidas congeladas a una temperatura de alrededor de -70°C hasta análisis.
Preparación de muestras plasmáticas
Se descongelaron a temperatura ambiente muestras plasmáticas congeladas y se agitaron a fondo en vortex. Con una pipeta se transfirió una alícuota (30 pL) de plasma a un tubo de polipropileno cónico de 1,5-mL. A cada muestra se añadieron 160 pL de acetonitrilo. Después se mezclaron las mezclas en vortex vigorosamente durante 1 min. Después de la centrifugación a 11000rpmdurante 5 min se inyecto una alícuota de 15 pL de sobrenadante en el sistema LC-MS/MS para análisis.
Preparación de muestras de calibración
Se prepararon patrones de calibración mediante pipeteado de 30 pL de soluciones estándar de compuesto 151 en 30 pL de plasma de rata en blanco heparinizado. Las concentraciones estándar nominales en la curva de calibración eran 1,00, 3,00, 10,0, 30,0, 100, 300, 1000 y 3000 ng/mL.
Sistema LC/MS/MS
El análisis se realizó utilizando un sistema LC-MS/MS formado por los siguientes componentes - sistema de HPLC: Instrumento de la serie Agilent 1200 formado por desgasificador de vacío G1312B, bomba binaria G1322A, horno de columna G1316B y automuestreador G1367D (Agilent, USA); sistema MS/MS: Espectrómetro de masas de triple cuadrupolo Agilent 6460, equipado con una interfaz APCI (Agilent, USA); sistema de datos: Software MassHunter (Agilent, USA).
Condiciones cromatográficas
La separación cromatográfica se efectuó a temperatura ambiente - columna analítica: Columna C8 (4,6 mm x 150 mm I.D., 5 pm, Agilent, USA); fase móvil: Acetonitrilo: acetato amónico 10 mM (75: 25, v/v); tasa de flujo: 0,80 mL/min; volumen de inyección: 15 pL.
Condiciones de espectrometría de masas
El espectrómetro de masas se hizo funcionar en modo positivo. La ionización se realizó aplicando los siguientes parámetros: temperatura de gas, 325°C; temperatura de vaporizador, 350°C; flujo de gas, 4 L/min; nebulizador, 20 psi; voltaje capilar, 4500 V; corriente corona, 4 pA. Se detectó 151 utilizando MRM de las transicionesm/z283 ->m/z123 ym/z283 ->m/z251, simultáneamente. Se utilizaron las energías de colisión optimizadas de 25 eV y 10 eV param/z123 ym/z251, respectivamente.
Cuantificación
La cuantificación se consiguió mediante el método de patrón externo. Se calcularon concentraciones del artículo de prueba utilizando una regresión lineal de mínimos cuadrados ponderados (W = 1/x2).
Interpretación farmacocinética
Los parámetros farmacocinéticos se evaluaron utilizando WinNonlin versión 5.3 (Pharsight Corp., Mountain View, CA, USA), suponiendo un modelo no compartimental para absorción y distribución de fármaco.
• AUCü-t es el área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo desde el tiempo cero hasta el tiempo del último muestreo, calculada mediante la regla trapezoidal lineal.
• AUC<0>-~ es el área bajo la curva de concentración plasmática tiempo desde el tiempo cero extrapolando hasta el infinito.
• T<1/2>es la vida media de eliminación asociada a la fase de eliminación terminal (log-lineal) que se estima a través de regresión lineal de tiempo frente a log de concentraciones.
• CL es el aclaramiento corporal total.
• Vss es el volumen de distribución en estado estacionario.
Curva de calibración para muestras plasmáticas
La curva de calibración para L151 en plasma de rata era lineal durante todo el estudio en el rango de 1,00-3000 ng/mL. La ecuación de regresión lineal de la curva de calibración era y = 885,6448 x 791,9622, r2 = 0,9927, donde y representa el área de pico de 151 y x representa las concentraciones plasmáticas de 151.
Concentraciones plasmáticas de compuesto 151 en ratas SD
Después de la administración iv (1,0 mg/kg) y oral (10 mg/kg) de compuesto 151 a ratas SD, se determinaron concentraciones plasmáticas de los artículos de prueba mediante el método LC/MS/MS descrito anteriormente. Las concentraciones plasmáticas en cada tiempo de muestreo se enumeran en las Tablas 9.1 y 9.2.
Interpretación de farmacocinética
Los principales parámetros farmacocinéticos del compuesto 151 en plasma se resumen en las Tablas 9.3 y 9.4. Después de administración oral de 10 mg/kg a ratas SD (n = 3), el compuesto 151 se absorbió rápidamente con concentración plasmática máxima a las 0,5 h después de la dosis. La eliminación del compuesto 151 era rápida, con una vida media de 1,26 h. Después de administración iv de 1,0 mg/kg (n = 2), la vida media de eliminación de 151 era 0,89 h. El aclaramiento del compuesto 151 de plasma de rata y el volumen de distribución en estado estacionario eran 859 ml/h/kg y 736 ml/kg. En base a la exposición (AUC<0>-~), la biodisponibilidad absoluta (F) del compuesto 151 era 54,6 % después de administración oral a 10 mg/kg a ratas SD.
Tabla 9.1: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 151 (ng/mL) en ratas SD después de administración PO a 10 mg/kg.
N° de Tiempo (h)
ratas 0,25 0,501 , 02,0 3,0 5,0 7,0 9,0 24
1 2231 2451 2204 1100 521 125 42,6 52,1 BLQ
2 2029 3934 2581 1237 660 99,4 20,7 38,2 BLQ
3 2731 3343 2538 1582 794 192 68,0 66,1 BLQ
Media 2330 3243 2441 1306 658 139 43,8 52,1
N° de T ie m p o (h)
SD 361 747 206 248 136 48 23,6 13,9
BLQ: por debajo del límite de cuantificación de 1,00 ng/mL.
Tabla 9.2: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 151 (ng/mL) en ratas SD después de administración IV a 1,0 mg/kg.
N2 de Tiempo
(h)
ratas 0,083 0,250 0,50 1,0 2,0 3,0 5,0 7,0 9,0 24
4 1677 1160 760 381 95,8 39,6 9,75 12,2 BLQ BLQ
5 1301 949 607 314 103 28,1 3,63 1,83 2,01 BLQ
Media 1489 1055 683 348 99,6 33,8 6,69 7,02 1,00
Tabla 9.3 Los parámetros farmacocinéticos principales del compuesto 151 en ratas SD después de administración PO a 10 mg/kg.
N2 de Tmax Cmax AUCü-t AUC0-~ T1/2 (h) MRT (h) F (%) ratas (ng/ml) (ng/ml)
(ng-h/ml) (ng-h/ml)
1 0,50 2451 5399 5499 1,33 1,86
2 0,50 3934 6423 64841 , 101,62
3 0,50 3343 7199 7328 1,35 1,95
Media 0,50 3243 6340 6437 1,26 1,81 54,6 SD 0,00 747 903 916 0,14 0,17
CV 0,0 23,0 14,2 14,211 , 09,4
(%)
Tabla 9.4: Los parámetros farmacocinéticos principales del compuesto 151 en ratas SD después de administración Iv a 1,0 mg/kg.
N° de ratas AUC<0>-t (ng-h/ml) AUC0- T<1/2>(h) MRT Vss (ml/kg) CL
~ (ng-h/ml) (h) (ml/h/kg)
4 1293 1309 0,91 0,91 696 764
5 1045 1047 0,87 0,81 775 955
Media 1169 1178 0,89 0,86 736 859 También se midieron concentraciones de LB100 de las muestras plasmáticas LB151 y se calcularon parámetros farmacocinéticos. LB151 se convirtió a LB100 (véanse las Tablas 9.5-9.8).
Tabla 9.5: Concentraciones plasmáticas del compuesto 100 después de administración PO de 10 mg/kg de compuesto 151 a rata SD (ng/mL)
Grupo N2 de Tiempo (h)
ratas 0,25 0,50 1,0 2,0 3,0 5,0 7,0 9,0 24 PO-10
mg/kg1 966 1426 882 734 236 81,1 37,9 31,6 BLQ
2 522 1489 1141 645 396 79,4 20,3 22,5 BLQ 3 1056 1439 1447 963 624 185 56,0 39,6 BLQ Media 848 1451 1156 781 419 115 38,1 31,3
SD 286 33 283 164 195 61 17,9 8,6
BLQ: Por debajo del límite inferior de cuantificación 10,0 ng/mL
Tabla 9.6: Concentraciones plasmáticas del compuesto 100 después de administración iv de 1,0 mg/kg de compuesto 151 a rata SD (ng/mL)
Grupo N2 de Tiempo (h)
ratas 0,083 0,25 0,5 1,0 2,0 3,0 5,0 7,0 9,0 24
IV-1
mg/kg4 646 345 308 257 125 32,2 10,2 BLQ BLQ BLQ
5 430 239 231 182 114 33,3 BLQ BLQ BLQ BLQ Media 538 292 270 219 120 32,7 5,10
BLQ: Por debajo del límite inferior de cuantificación 1,00 ng.
Tabla 9.7: Parámetros PK del compuesto 100 después de administración PO de 10 mg/kg de compuesto 151 a rata SD
Grupo N2 de Tmax (h) Cmax (ng/ml) AUCü-t (ng - AUC<0>-~ (ng T<1/2>(h) MRT ratas h/ml) ■h/ml) (h)
PO- 1 0,50 1426 2795 2862 1,45 2,06
10
mg/kg
2 0,50 1489 3006 3046 1,25 1,96
3 1,00 1447 4309 4391 1,43 2,29 Media 0,67 1454 3370 3433 1,38 2,10
SD 0,29 32 820 8350 , 110,17
CV (%) 43,3 2,2 24,3 24,3 8,1 8,1
Tabla 9.8: Parámetros PK del compuesto 100 después de administración iv de 1,0 mg/kg de compuesto 151 a rata SD
Grupo N2 de Tmax (h) Cmax (ng/ml) AUC0- AUC<0>- T<1/2>(h) MRT
ratas t (ng-h/ml) ~ (ng-h/ml) (h)
IV-1 4 0,083 646 681 694 0,88 1,16
mg/kg
5 0,083 430 481 526 0,93 1,27
Media 0,083 538 581 610 0,91 1,21
Ejemplo 5. Estudio farmacocinético del compuesto 100
Los estudios farmacocinéticos en el compuesto 100 y su metabolito endothall se efectuaron en ratas SD. Se administró el compuesto 100 por vía iv a 0,5, 1,0 y 1,5 mg/kg en ratas SD. Se recogieron muestras de sangre, tejido hepático y cerebral de ratas en momentos predeterminados. Los métodos LC/MS/MS se desarrollaron para determinar el compuesto 100 y endothall en muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales. En el informe se presentaron las concentraciones de compuesto 100 y endothall en muestras plasmáticas, hepáticas y cerebrales.
Recogida de muestras
Se dosificó compuesto 100 a doce (12) ratas SD hembra por grupo por vía iv. Las ratas se sometieron a ayuno durante la noche antes de la noche, con acceso libre a agua. Los alimentos se retuvieron durante 2 horas después de la dosis. Se recogieron muestras de sangre, tejido hepático y cerebral en dos animales de cada grupo en cada punto temporal dentro del 10 % de tiempo programado para cada punto temporal. Se utilizaron dos animales adicionales para el desarrollo del método analítico. Se recogió sangre (>0,3 mL) a través de la aorta abdominal en animales anestesiados en tubos que contenían heparina a los 15 min, 1, 2, 6, 10 y 24 horas después de administración iv. Se recogieron tejidos hepático y cerebral inmediatamente después de la muerte del animal. Se extirparon tejidos hepático y cerebral y se enjuagaron con solución salina fría para evitar sangre residual. Tras la recogida se colocó cada muestra en hielo y posteriormente se centrifugaron las muestras de sangre (4°C, 11000 rpm, 5 min) para separar plasma. Se almacenaron el plasma, el tejido hepático y cerebral obtenidos a -70°C hasta análisis por LC-MS/MS.
Interpretación farmacocinética
Los parámetros farmacocinéticos se evaluaron utilizando WinNonlin versión 5.3 (Pharsight Corp., Mountain View, CA, USA), suponiendo un modelo no compartimental para absorción y distribución de fármaco. AUCü-t (AUCúltima) es el área bajo la curva de concentración plasmática-tiempo desde el tiempo cero hasta el tiempo del último muestreo, calculada mediante la regla trapezoidal lineal. AUC<0>-~ (AUCinf) es el área bajo la curva de concentración plasmáticatiempo con la última concentración extrapolada en base a la constante de tasa de eliminación.
Concentraciones en plasma, tejido hepático y cerebral de artículos de prueba en ratas SD
Después de la administración iv única de compuesto 100 a ratas SD, se determinaron concentraciones tanto de compuesto 100 como de endothall en plasma, tejido hepático y cerebral de ratas SD mediante el método LC/MS/MS descrito anteriormente. Las concentraciones plasmáticas, tejido hepático y cerebral en cada tiempo de muestreo se enumeran en las Tablas 10.1-10.6 y en las Figuras 4A-4D. Los parámetros farmacocinéticos calculados se enumeran en la Tabla 10.7-10.8. 100 atravesaría la barrera hematoencefálica (BBB) después de administración iv a 0,5, 1,0 y 1,5 mg/kg a ratas SD. La Cmax media en plasma era 1110~3664 ng/ml. La Cmax media en hígado y cerebro eran 586~2548 ng/kg y 17,4~43,5 ng/kg, respectivamente. El AUCúltima en plasma era 695,8~ 7399,6 ng-h/ml, con 758,6~ 9081,0 ngh /g en hígado y 10,8~ 125,5 ngh/g en cerebro, respectivamente. T<1/2>en plasma, hígado y cerebro eran 0,31 ~ 2,20 h, 0,78~ 2,01 h 1,67~1,93 h, respectivamente.
Como se muestra en la Tabla 10.4-10.6 y la Figura 4D-4E, endothall era detectable en muestras plasmáticas y hepáticas después de administración iv única de compuesto 100 a 0,5, 1,0 y 1,5 mg/kg y las concentraciones en plasma e hígado aumentaron con el nivel de dosis de 100, mientras que endothall no era detectable en muestras cerebrales. La Cmax media en plasma e hígado era 577- 1230 ng/ml y 349- 2964 ng/ml, respectivamente. El AUCúltima en plasma e hígado era 546- 4476 ngh/ml y 2598-18434 ngh/g, respectivamente. T<1/2>en plasma e hígado era 6,25-7,06 h y 4,57- 10,1 h, respectivamente.
Después de la administración iv única, la Cmax media de compuesto 100 in plasma era 1110~3664 ng/ml y T<1/2>en plasma era 0,31 ~2,20 h. El AUCúltima en plasma era 695,8~7399,6 ng^h/ml, y AUC aumentó proporcionalmente con el nivel de dosis de compuesto 100. Después de la administración iv única, el compuesto 100 era detectable en muestras de tejido tanto hepático como cerebral. La concentración de compuesto 100 en muestras hepáticas era mucho más elevada que la de muestras cerebrales en el mismo punto temporal de muestreo, pero el compuesto 100 en tejidos hepáticos y cerebrales estaba en ambos casos por debajo del límite de cuantificación 24 horas después de administración iv. Después de la administración iv única de compuesto 100, endothall era detectable y permanecía durante un tiempo prolongado en el plasma y el tejido hepático. La Cmax media en plasma e hígado era 577- 1230 ng/ml y 349- 2964 ng/ml, respectivamente. El AUCúltima en plasma e hígado era 546- 4476 ngh/ml y 2598-18434 ngh/g, respectivamente. T<1/2>en plasma e hígado era 6,25-7,06 h y 4,57- 10,1 h, respectivamente. Sin embargo, endothall era indetectable en tejido cerebral.
Tabla 10.1: Datos analíticos de concentración plasmática de compuesto 100 (ng/mL) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 10.2 Datos analíticos de concentración hepática de compuesto 100 (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 10.3: Datos analíticos de concentración cerebral de compuesto 100 (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 10.4: Datos analíticos de concentración plasmática de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv.
Tabla 10.5: Datos analíticos de concentración hepática de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv de compuesto 100.
Tabla 10.6: Datos analíticos de concentración cerebral de endothall (ng/g) en ratas SD después de administración iv de compuesto 100.
Tabla 10.7 Parámetros farmacocinéticos principales del compuesto 100 en ratas SD después de administración iv.
Analito Dosis Tejido T1/2 Tmax Cmax AUCúltima AUCINF ng- MRT de LB- h h ng/ml ng-h/ml o ng h/ml o ng- h 100 o ng/g hg h/g mg/kg
Cerebro / 0,25 174 10,8 / / 0,5 Hígado 0,78 0,25 586 758,6 902,2 1,17 Plasma 0,31 0,25 1110 695,8 706,0 0,45 Cerebro 1,67 0,25 33,9 35,3 72,5 2,68 100 10 Hígado 0,79 0,25 1371 3526,5 3537,7 1,51
Plasma 0,99 0,25 2383 1923,5 2830,2 1. 57 Cerebro 1,93 0,25 43,5 125,5 140,8 2,57 1,5 Hígado 2,01 1,0 2548 9081,0 10449,1 2,90 Plasma 2,20 0,25 3664 7399,6 8641,4 2,82 Tabla 10.8 Parámetros farmacocinéticos principales de Endothall en ratas SD después de administración iv única de compuesto 100.
Analito Dosis Tejido T1/2 Tmax Cmax AUCúltima AUCINF MRT
de LB- h h ng/ml ng-h/ml o ng-h/ml o h
100 o ng-hg ng-h/g mg/kg ng/g
Cerebro / / / / / /
0,5 Hígado 10,1 0,25 349 2598 3095 7,90
Plasma 6,65 0,25 577 546 828 2,96
Cerebro / / / / / /
Endothall 10 Hígado 6,10 0,25 1425 6673 7370 6,14
Plasma 7,06 0,25 1230 2487 2750 4,38
Cerebro / / / / / /
1,5 Hígado 4,57 0,25 2964 184,34 18850 4,54
Plasma 6,25 0,25 1178 4476 4730 4,57
Se midieron concentraciones de Endothall de las muestras plasmáticas 100 y se calcularon parámetros farmacocinéticos. LB100 se convirtió en endothall.
Ejemplo 6. Administración de compuesto
Los compuestos 100, 105, 113, 153 y 157 son inhibidores de PP2A. La presente invención proporciona análogos de compuestos 100, 105, 113, 153 y 157, que son inhibidores de PP2Ain vitroen células cancerosas humanas y en xenoinjertos de células tumorales humanas en ratones cuando se administran a ratones por vía parenteral. Estos compuestos inhiben el crecimiento de células cancerosas en sistemas modelo de ratón. Se administran los análogos de compuestos 100, 105, 113, 153 y 157 a ratones por vía intraperitoneal y se mide la actividad de PP2A en hígado y cerebro. Los análogos de compuestos 100, 105, 113, 153 y 157 reducen la actividad de PP2A en hígado y cerebro.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso. La cantidad de compuesto es efectiva para tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para tratar al sujeto.
Se administra de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto y tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso. La cantidad de compuesto es efectiva para atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto y tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto y tratar al sujeto.
Ejemplo 7. Administración de compuesto en combinación con un agente anticancerígeno
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención en combinación con un agente anticancerígeno a un sujeto afectado de cáncer. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena del agente anticancerígeno.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención en combinación con radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena de la radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención en combinación con un agente anticancerígeno a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso o glioblastoma múltiple. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena del agente anticancerígeno.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención en combinación con radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso o glioblastoma múltiple. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena de la radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida.
Ejemplo 8. Profármacos de Endothall
Como se demuestra en los datos contenidos en el presente documento, los compuestos 105, 113, 153 y 157 se metabolizan a endothallin vivo.Los análogos de compuestos 105, 113, 153 y 157 contenidos en el presente documento se metabolizan también a endothallin vivoy actúan como profármacos de endothall. Los análogos diméricos de endothall contenidos en el presente documento se metabolizan también a endothallin vivoy actúan como profármacos de endothall.
Además, aunque no se desea estar vinculado a una teoría, se cree que los profármacos de la presente solicitud permiten el suministro dirigido de endothall a células específicas, es decir, células cancerosas, en un sujeto. La administración directa de endothall es indeseable debido a la toxicidad. Los profármacos proporcionan absorción mejorada, que da lugar a una mayor biodisponibilidad del compuesto activo.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de cáncer. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a células cancerosas en el sujeto.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a células cancerosas cerebrales en el sujeto.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso o glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a células de glioma pontino intrínseco difuso o células de glioblastoma multiforme.
Se administra una cantidad de cualquiera de los compuestos de la presente invención a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a través de la barrera hematoencefálica del sujeto.
Ejemplo 9. Profármaco dual de Endothall/agente quimioterapéutico
Como se demuestra en los datos contenidos en el presente documento, los compuestos 105, 113, 153 y 157 se metabolizan a endothallin vivo.Los análogos de compuestos 105, 113, 153 y 157 contenidos en el presente documento se metabolizan también a endothallin vivoy actúan como profármacos duales de endothall/agentes quimioterapéuticos. Los profármacos duales contenidos en el presente documento se metabolizan también a endothallin vivoy actúan como profármacos de endothall. Sin embargo, el metabolismo a endothall libera simultáneamente un agente quimioterapéutico.
Además, aunque no se desea estar vinculado a una teoría, se cree que los profármacos duales de la presente solicitud permiten el suministro dirigido de endothall y un agente quimioterapéutico a células específicas, es decir, células cancerosas, en un sujeto. La administración directa de endothall y/o un agente quimioterapéutico es indeseable debido a la toxicidad.
Además, aunque no se desea estar vinculado a una teoría, se cree que los profármacos duales de la presente solicitud permiten el suministro dirigido de endothall y un agente quimioterapéutico a células específicas, es decir, células cancerosas, en un sujeto. Además, los profármacos duales tienen la ventaja de disponer de dos compuestos bioactivos combinados en un fármaco (estructura nueva). Esas estructuras en sí mismas tienen sus propias ventajas, por ejemplo absorción mejorada que da lugar a una mayor biodisponibilidad de cualquiera de los constituyentes. Además, la administración directa de endothall y/o un agente quimioterapéutico podría ser indeseable debido a la toxicidad intrínseca de cualquiera de estos.
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LB-100 POM Éster
A una solución de LB-100 (106 mg, 0,4 mmol) en DMF (5 mL) se añade CS<2>CO<3>(386 mg, 1,2 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitación durante 5 min. Se añade pivalato de clorometilo (178 mmg, 1,2 mmol). La mezcla resultante se agita durante la noche a temperatura ambiente. Se añade agua (10 ml), se extrae la mezcla con acetato de etilo (5 x 10 ml). Se seca la fase orgánica sobre MgSO4, se filtra y se elimina el disolvente. El residuo se valora con hexano y se filtra para dar un sólido blanco (103 mg, 68 % de rendimiento). 1H NMR (CDCh) 1,20 (s, 9H), 1,52 (d, 2H), 1,84 (d, 2H), 2,28-2,52 (m, 7H), 2,88 (d, 1H), 3,16 (d, 1H), 3,36-3,52 (m, 3H), 3,72 (m, 1 H), 4,80 (s, 1H), 5,00 (s, 1 H), 5,68 (d, 1 H), 5,72 (d, 1H).
LB-100 Carbonato
A una solución de LB-100 (150 mg, 0,56 mmol) en DMF (5 mL) se añade Cs2CO3 (546 mg, 1,7 mmol) a temperatura ambiente. Después de agitación durante 5 min. Se añade etilcarbonato de clorometilo (232 mmg, 1,7 mmol). La mezcla resultante se agita durante la noche a temperatura ambiente. Se añade agua (10 ml), se extrae la mezcla con acetato de etilo (5 x 10 ml). Se seca la fase orgánica sobre MgSO4, se filtra y se elimina el disolvente. El residuo se valora con hexano y se filtra para dar un sólido blanco (124 mg, 60 % de rendimiento). 1HNMR (CDCl3) 1,23 (t, 3H), 1,52 (d, 2H), 1,84 (d, 2H), 2,28-2,52 (m, 7H), 2,84 (d, 1H), 3,18 (d, 1H), 3,36-3,52 (m, 3H), 3,72 (m, 1H),4,20 (q, 2H), 4,80 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 5,62 (d, 1 H), 5,80 (d, 1H).
Ejemplo 12. Administración de LB-100 Carbonato o LB-100 POM
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso. La cantidad de compuesto es efectiva para tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto y tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso. La cantidad de compuesto es efectiva para atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto y tratar al sujeto. Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para atravesar la barrera hematoencefálica del sujeto y tratar al sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM en combinación con un agente anticancerígeno a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena del agente anticancerígeno.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM en combinación con radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena de la radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM en combinación con un agente anticancerígeno a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso o glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena del agente anticancerígeno.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM en combinación con radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso o glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para potenciar la actividad anticancerígena de la radiación ionizante, radiación x, docetaxel o temozolomida.
Ejemplo 13. Profármacos de LB-100 Carbonato y LB-100 POM
Como se demuestra en los datos contenidos en el presente documento, LB-100 Carbonato y LB-100 POM se metabolizan a endothallin vivoy actúan como profármacos de endothall. Además, aunque no se desea estar vinculado a una teoría, se cree que los profármacos de la presente solicitud permiten el suministro dirigido de endothall a células específicas, es decir, células cancerosas, en un sujeto. La administración directa de endothall es indeseable debido a la toxicidad. Los profármacos proporcionan absorción mejorada, que da lugar a una mayor biodisponibilidad del compuesto activo.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de cáncer. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a células cancerosas en el sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a células cancerosas cerebrales en el sujeto.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de glioma pontino intrínseco difuso o glioblastoma multiforme. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a células de glioma pontino intrínseco difuso o células de glioblastoma multiforme.
Se administra una cantidad de LB-100 Carbonato o LB-100 POM a un sujeto afectado de cáncer de cerebro. La cantidad de compuesto es efectiva para suministrar endothall a través de la barrera hematoencefálica del sujeto.
Ejemplo 14. Ensayos hepáticos y de sangre entera
Se evaluaron la estabilidad (sangre entera, S9 hepática, SGF, SIF y tampón PBS) y la permeabilidad monocapa MDCK-MDR1 de LB100, LB-100 Carbonato y LB-100 POM.
Desarrollo de método analítico
Se optimizó la señal de analito para cada compuesto mediante ionización positiva o negativa ESI. Se utilizó un escáner MS2 o un escáner SIM para optimizar el voltaje del fragmentador y se utilizó un análisis de iones de producto para identificar el mejor fragmento para el análisis, y se optimizó la energía de colisión utilizando un escáner de iones de producto o MRM. Se asignó una clasificación de ionización que indica la facilidad de ionización del compuesto.
3.3 Análisis de muestras (ensayos de estabilidad química, estabilidad de sangre entera y estabilidad de S9)
Análisis de muestras (ensayos de estabilidad química, estabilidad de sangre entera y estabilidad de S9)
Se analizaron las muestras mediante LC-MS/MS utilizando un espectrómetro de masas SCIEX QTrap 5500 acoplado a un Agilent 1290 HPLC Infinity series, automuestreador refrigerado CTC PAL, todos controlados por el software Analyst. Después de la separación en una columna de HPLC C18 de fase inversa (Acquity UPLC HSS T3, 1,8, 2,1 x 50 mm) utilizando un sistema de gradiente acetonitrilo-agua, se analizaron los picos mediante espectrometría de masas (MS) utilizando ionización ESI en modo MRM.
Análisis de muestras (ensayo de permeabilidad MDCK-MDR1)
Se analizaron las muestras mediante LC/ MS/MS utilizando un espectrómetro de masas Xevo II acoplado a un Acquity HPLC y un automuestreador refrigerado CTC PAL, todos controlados por MassLynx (Waters). Después de la separación en una columna de HPLC C18 de fase inversa (Waters Acquity UPLC HSS T3, 1,8 um, 1 x 50 mm) utilizando un sistema de gradiente acetonitrilo-agua, se analizaron los picos mediante espectrometría de masas (MS) utilizando ionización ESI en modo MRM.
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Gradiente de HPLC (permeabilidad MDCK-MDR1)
Estabilidad química: Condiciones experimentales
Procedimiento experimental: El compuesto se incubó por duplicado con tampón PBS (pH 7,4), SGF (pH 1,2) o SIF (pH 6,5) a 37°C. En los tiempos indicados se extrajo una alícuota de cada reacción experimental y se mezcló con tres volúmenes de solución de parada enfriada con hielo (metanol con propranolol/diclofenaco/bucetina como patrones internos analíticos). Se incubaron las reacciones detenidas durante diez minutos a -20°C. Se centrifugaron las muestras y se analizaron los sobrenadantes mediante LC/MS/MS para cuantificar el compuesto de origen restante, así como la formación de metabolitos. Los datos se convirtieron en % mediante división entre el valor de concentración de tiempo cero. Los datos se ajustaron a un modelo de descomposición de primer orden para determinar la vida media.
Estabilidad de S9 hepática: Condiciones experimentales
Procedimiento experimental: Se incuba el agente de prueba por duplicado con S9 hepática a 37°C. La reacción contiene proteína S9 hepática en fosfato potásico 100 mM, NADPH 2mM, MgCl<2>3 mM, pH 7,4. Se ejecuta un control para cada agente de prueba omitiendo NADPH para detectar la degradación libre de NADPH. En los tiempos indicados se extrae una alícuota de cada reacción experimental y de control y se mezcla con un volumen igual de solución de parada enfriada con hielo (metanol que contiene patrón interno propranolol). Se incuban las reacciones detenidas durante 10 minutos a -20°C. Se centrifugan las muestras para eliminar proteína precipitada y se analizan los sobrenadantes mediante LC/MS/MS para cuantificar el compuesto de origen restante y la formación de metabolitos. Los datos se presentan como % mediante división entre el valor de concentración de tiempo cero.
Estabilidad de sangre entera: Condiciones experimentales
Procedimiento experimental:En primer lugar se diluyó la solución madre en acetonitrilo a una concentración 100 veces superior a la concentración final deseada. Se incubó por duplicado con sangre entera a 37°C. En los tiempos indicados se extrajo una alícuota de cada reacción experimental y se mezcló con tres volúmenes de solución de parada enfriada con hielo (metanol con propranolol como patrón interno). Se incubaron las reacciones detenidas durante diez minutos a -20°C. Se centrifugaron las muestras para eliminar proteína y se analizaron los sobrenadantes mediante LC/MS/MS para cuantificar el compuesto de origen restante, así como la formación de metabolitos.
Los datos se convirtieron en % mediante división entre el valor de concentración de tiempo cero. Los datos se ajustaron a un modelo de descomposición de primer orden para determinar la vida media.
Permeabilidad MDCK-MDR1: Condiciones experimentales
Procedimiento experimental: Las células MDCK-MDR1 cultivadas en matraces de cultivo tisular se tripsinizan, se suspenden en medio y las suspensiones se aplican a pocillos de una placa Millipore de 96 pocillos. Se deja que las células crezcan y se diferencien durante tres semanas, alimentándose a intervalos de 2 días. Para la permeabilidad Apical a Basolateral (A^-B) se añade el agente de prueba al lado apical (A) y se determina la cantidad de permeación en el lado basolateral (B); para la permeabilidad Basolateral a Apical (B^-A) se añade el agente de prueba al lado B y se determina la cantidad de permeación en el lado A. El tampón del lado A contiene colorante Lucifer Yellow 100 pM, en Tampón de Transporte (1,98 g/L de glucosa en HEPES 10 mM, 1x Solución Salina Equilibrada de Hank) pH 7,4, y el tampón del lado B es Tampón de Transporte a pH 7,4. Las células MDCK-MDR1 se incuban con estos tampones durante 2 h y el tampón del lado receptor se extrae para análisis mediante LC/MS/MS (utilizando propranolol como patrón interno analítico). Para verificar que las monocapas celulares MDCK-MDR1 están formadas correctamente, se analizan alícuotas de los tampones celulares mediante fluorescencia para determinar el transporte del colorante impermeable Lucifer Yellow. Se informa de dada desviación de los valores de control.
Desarrollo del método de espectrometría de masas: MS/MS
Se controlaron los metabolitos de LB-151 (LB-100, Endothall y Endothall éster metílico), LB-100 Carbonato (LB-100 y Endothall) y LB-100 POM (LB-100 y Endothall).
Artículo de MW Polarización Precursor Producto Clasificación de prueba ESI m/z m/z ionización
LB-151282,34 positiva 283,15 251,153 1
LB-100 POM382,46 positiva 383,196 251,17 1
Éster
LB-100370,4 positiva 371,153 251,137 1
Carbonato
Metabolitos
controlados
LB-100268,31 positiva 269,171 251,138 1
Endothall186,16 negativa 184,986 140,92 1
Endothall éster200,19 negativa 198,94 110,89 1
metílico
1 = altamente ionizable, 2 = intermedio, 3 = débilmente ionizable
m/z: relación masa a carga de analito
En el estudio de estabilidad de S9 hepática se observaron metabolitos de LB-100 y endothall tanto en LB-100 carbonato como en LB-100 POM éster en presencia y ausencia de NADPH (especies cruzadas), lo que sugiere que estos metabolitos se formaron por enzimas no dependientes de NADPH (por ejemplo esterasas y amidasas). No se observaron metabolitos en muestras de LB-151 (véase la Figura 5). Se estudiaron los metabolitos de LB-100 carbonato y LB-100 POM éster en rata, perro, mono y humano (véase la Figura 6).
En el estudio de vida media en sangre entera se observó la formación de endothall y LB-100 en LB-100 carbonato y LB-100 POM éster (especies cruzadas). No se detectaron metabolitos en muestras de LB-151 (véase la Figura 7). En el estudio de metabolitos en sangre entera se metabolizaron LB-100 carbonato y LB-100 POM éster a endothall y LB-100 en rata, perro, mono y humano (véase la Figura 8).
En el estudio de permeabilidad MDCK-MDR1 no se observaron metabolitos en todas las muestras (véase la Figura 9).
Discusión
La inhibición de PP2A interfiere con múltiples aspectos del mecanismo de reparación de daños de ADN (DDR) y con la salida de la mitosis. Estos mecanismos sensibilizan las células cancerosas frente a tratamientos de cáncer que provocan lesiones agudas en el ADN. El compuesto 100 (véase la publicación de patente de EE.UU N°7,998,957 B2) tiene actividad anticancerígena cuando se utiliza por separado (Lu el al. 2009a) y potencia significativamentein vivo,sin aumento observable en la toxicidad, la actividad antitumoral de fármacos anticancerígenos citotóxicos estándar, incluyendo temozolomida (Lu et al. 2009b, Martiniova et al. 2010), doxorubicina (Zhang et al. 2010) y docetaxel. 100 se aprobó recientemente para la evaluación clínica de Fase I por separado y en combinación con docetaxel y se encuentra en ensayo clínico.
El compuesto 100 es un inhibidor de serina-treonina fosfatasa que potencia la actividad de fármacos quimioterapéuticos estándar y la radiación. El mecanismo de potenciación es el deterioro de múltiples pasos en un proceso de reparación del daño de ADN y la inhibición de la salida de la mitosis. Se ha demostrado que el compuesto 100 potencia la actividad de temozolomida, doxorubicina, taxotere y la radiación contra una variedad de líneas celulares cancerosas humanas que crecen como xenoinjertos subcutáneos. El tratamiento con compuesto 100 produce un factor de potenciación de la dosis de radiación de 1,45. Los ratones portadores de xenoinjertos subcutáneos (sc) de células GBM humanas U251 se trataron con el compuesto 100 por vía intraperitoneal junto con radiación, administrándose a cada uno diariamente durante 5 días x 3 ciclos. La combinación de fármaco/radiación no era más tóxica que la radiación por separado y eliminó un 60 % de xenoinjertos (más de 6 meses de seguimiento). El 40 % restante de xenoinjertos tratados con la combinación recidivaron dos meses después que los xenoinjertos tratados solo con radiación. Wei et al. (2013) demostraron que la inhibición de PP2A por el compuesto 100 potenciaron la efectividad de la radiación dirigida en la inhibición del crecimiento de xenoinjertos de cáncer de páncreas humano en un modelo animal. Por lo tanto, 100 parecía ser un agente ideal para combinar con radiación para tratar cánceres localizados como tumores cerebrales.
El compuesto 100 es altamente efectivo contra xenoinjertos de gliomas humanos en combinación con temozolomida y/o radiación. El compuesto 100, que tiene una IC<50>de 1 -3 pM para un amplio espectro de líneas celulares cancerosas humanas, es un zwitterión altamente soluble en agua que no atraviesa fácilmente la barrera hematoencefálica (BBB) como se determina en ratas y primates no humanos. Se realizaron estudios toxocinéticos de GLP del compuesto 100 administrado por vía intravenosa durante 5 días en ratas y perros. Las principales toxicidades esperadas a dosis clínicamente tolerables que se espera que inhiban la enzima diana, PP2A, in vivo (3-5 mg/m2) son cambios microscópicos reversibles en el túbulo proximal renal y alteraciones microscópicas en las células epicárdicas. Es interesante que la fostriecina, un inhibidor selectivo de PP2A de producto natural, se evaluó administrada iv diariamente durante 5 días en ensayos de fase I hace varios años. La toxicidad limitante de la dosis no se consiguió antes de terminar los estudios debido a una falta de suministro fiable de fármaco. En esos estudios, las principales toxicidades eran aumentos reversibles no acumulativos de creatinina sérica y enzimas hepáticas.
El compuesto 100 se considera estable en relación con verapamilo en presencia de microsomas de ratón, rata, perro, mono y humano. El compuesto 100 se absorbe débilmente o se descompone en el intestino, por lo que se presenta en el plasma en pequeña cantidad después de administración oral. En estudios glp en ratas Sprague Dawley macho y hembra, los parámetros PK para el compuesto 100 administrado por bolo iv lento x 5 días también eran dependientes de la dosis y comparables el día 1 y el día 4. Los valores para ratas hembra después del fármaco a 0,5, 0,75 y 1,25 mg/kg el día 4 eran respectivamente: Co (ng/ml) 1497, 2347 y 3849; AUCúltima (ng.h/ml) 452, 691 y 2359; SC AUCúltima (ng.h/ml) 17,7, 54,0 y 747; DN AUCúltima 904, 921 y 1887; AUC* (ng.h/ml) 479, 949, and 2853; % AUC* extrapolada 5,6, 27 y 17; T<1/2>(h) 0,25, 0,59 y 1,8; Cl (mL/h/kg) 1045, 790, 438 (MACHO 1071, 1339, 945); Vz (ml/kg) 378, 677 y 1138. En estudios GLP en perros macho y hembra, los parámetros toxicocinéticos para el compuesto 100 administrado iv durante 15 minutos durante 5 días también eran dependientes de la dosis y comparables el día 1 y el día 4. Los valores para perras después del fármaco a 0,15, 0,30 y 0,50 mg/kg el día 4 eran respectivamente: Co (ng/ml) 566, 857 y 1930; AUCúltima (ng .h/ml) 335, 1020 y 2120; Cmax (ng/ml) 370, 731,1260; Tmax(h) 0,25, 0,35 y 0,25; y T<1/2>(h) 0,47, 0,81 y 1,2 (N° IND 109.777: compuesto 100 para Inyección). Se ha demostrado que la inhibición de la abundante PP2A en glóbulos blancos circulantes (aislados por Ficoll-Hypaque) es dependiente de la dosis en la rata tras administración iv lenta del compuesto 100 a 0,375, 0,75 y 1,5 mg/kg, dando como resultado un 9, 15 y 25 % de inhibición, respectivamente.
El éster metílico del compuesto 100, el compuesto 151, que tiene una biodisponibilidad oral de alrededor del 60 % frente al 1 % para el compuesto 100, se administró por vía oral a ratas. El tratamiento con compuesto 151 dio lugar a niveles sustanciales de compuesto 100 en el plasma con una vida media aparentemente mucho mayor en comparación con el compuesto 100 administrado por vía intravenosa.
En base a los datos contenidos en los Ejemplos 8-11, los compuestos 105, 113, 153 y 157 se convierten en endothall en el plasma cuando se administran a ratas. En consecuencia, los compuestos 105, 113, 151, 153 y 157 y sus derivados son útiles como profármacos de endothall. Los compuestos de la presente solicitud contienen diferentes sustituyentes que se disocianin vivocuando se administran a un sujeto, liberando endothall de este modo. Estos compuestos contienen grupos X o Y que se disocian más eficientementein vivo.
El Glioma Pontino Intrínseco Difuso (DIPG) es un tumor cerebral uniformemente mortal en niños, para el cual no hay otro tratamiento estándar disponible que no sea radiación. Los neurooncólogos pediátricos creen que es apropiado tratar incluso a pacientes no tratados previamente en un protocolo de investigación que ofrece un nuevo enfoque. No ha habido avances en la supervivencia general de pacientes con Glioblastoma Multiforme (GBM) desde la mejoría definitiva pero marginal mostrada hace años por la adición de temozolomida a radiación después de la cirugía. El GMB múltiple se trata frecuentemente con avastina como terapia de segunda línea, pero después de una recaída tras avastina, el tratamiento experimental es el estándar. Es de interés con respecto a la inhibición de PP2A en tumores cerebrales el reciente informe de que se presentan niveles aumentados de PP2A en GBM y los pacientes con los niveles más altos de PP2A en sus gliomas tienen el peor pronóstico (Hoffstetter et al., 2012).
Como se muestra en los estudios de PK y PD presentados en este documento, el propio LB-100 entra en tejidos y se convierte en parte en endothall en los tejidos. Como inhibidor de la proteína diana purificada de LB-100, la proteína fosfatasa PP2A, endothall es potente con una IC<50>de ~90 nM. In vivo, endothall tiene una vida media más larga que LB-100 en el orden de 6 horas en comparación con alrededor de 1 hora o menos para LB-100. Por lo tanto, LB-100 es un agente anticancerígeno activo en sí mismo y aumenta la duración efectiva de la inhibición del objetivo previsto, PP2A, en tejidos mediante su conversión in vivo en endothall. Una vida media de varias horas de actividad es clínicamente más deseable que duraciones mucho más cortas. La modificación de sustituyentes de LB-100 proporciona oportunidades de mejora adicional de la utilidad clínica de LB-100, por ejemplo, mejorando la absorción oral, la absorción en órganos específicos que soportan el proceso de la enfermedad, por ejemplo el cerebro, y modificando adicionalmente la tasa de conversión para el suministro efectivo de compuesto de origen y/o endothall a los tejidos.
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Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1.Un compuesto para uso en el tratamiento del cáncer, en donde el compuesto tiene la estructura:
    o una sal del compuesto. 2.El compuesto para uso de la reivindicación 1, en donde el compuesto tiene la estructura:
    o una sal del compuesto. 3.El compuesto para uso de la reivindicación 1, en donde el compuesto tiene la estructura:
    o una sal del compuesto. 4.El compuesto para uso de la reivindicación 2, en donde dicho compuesto tiene la estructura^
    o una sal del compuesto. 5.El compuesto para uso de la reivindicación 3, en donde dicho compuesto tiene la estructura:
    o una sal del compuesto. 6.El compuesto de uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, en donde el cáncer es un cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón de células grandes, adenocarcinoma de pulmón, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de estómago, cáncer de hígado, adenocarcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, leucemia promilocítica, leucemia mielógena crónica, leucemia linfoblástica aguda, cáncer colorrectal, cáncer de ovario, linfoma, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, cáncer adrenocortical, cáncer de vesícula, osteosarcoma, cáncer cervical, esofágico, vesícula biliar, cáncer de cabeza y cuello, cáncer renal, melanoma, cáncer pancreático, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de garganta, cáncer de próstata, cáncer de pulmón o carcinoma hepatocelular. 7.El compuesto para uso de la reivindicación 6, en donde el cáncer es cáncer cerebral y el cáncer cerebral es un glioma, astrocitoma pilocítico, astrocitoma difuso de bajo grado, astrocitoma anaplásico, glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, ependimoma, meningioma, tumor de la glándula pituitaria, linfoma primario del sistema nervioso CNS, meduloblastoma, craneofaringioma o glioma pontino intrínseco difuso. 8.El compuesto para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 como una terapia complementaria o en combinación con un agente anticancerígeno. 9.El compuesto para uso de la reivindicación 8, en donde el compuesto y el agente anticancerígeno se administran de manera simultánea, separada o secuencial.
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