[go: up one dir, main page]

ES2971462T3 - Pauta posológica para el tratamiento de los trastornos cognitivos con productos de plasma sanguíneo - Google Patents

Pauta posológica para el tratamiento de los trastornos cognitivos con productos de plasma sanguíneo Download PDF

Info

Publication number
ES2971462T3
ES2971462T3 ES18791944T ES18791944T ES2971462T3 ES 2971462 T3 ES2971462 T3 ES 2971462T3 ES 18791944 T ES18791944 T ES 18791944T ES 18791944 T ES18791944 T ES 18791944T ES 2971462 T3 ES2971462 T3 ES 2971462T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
ppf
ppf1
plasma
mice
old
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES18791944T
Other languages
English (en)
Inventor
Steven P Braithwaite
Eva Czirr
Ian Gallager
Nina Huber
S Sakura Minami
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Alkahest Inc
Original Assignee
Alkahest Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alkahest Inc filed Critical Alkahest Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2971462T3 publication Critical patent/ES2971462T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A61K38/017—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from blood
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1722—Plasma globulins, lactoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A61K38/385—Serum albumin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0026—Blood substitute; Oxygen transporting formulations; Plasma extender
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Orthopedics, Nursing, And Contraception (AREA)

Abstract

Se describen métodos y composiciones para tratar y/o prevenir afecciones relacionadas con el envejecimiento. Las composiciones utilizadas en los métodos incluyen plasma sanguíneo y fracciones de plasma sanguíneo derivadas de plasma sanguíneo con eficacia para tratar y/o prevenir afecciones relacionadas con el envejecimiento tales como trastornos cognitivos. Los métodos se refieren a un régimen de dosificación pulsada de plasma sanguíneo o fracciones de plasma sanguíneo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Pauta posológica para el tratamiento de los trastornos cognitivos con productos de plasma sanguíneo
Campo
La invención se refiere a una fracción de proteínas plasmáticas para su uso en el tratamiento del deterioro cognitivo.
Antecedentes
Lo siguiente se ofrece únicamente como información de fondo y no se admite como técnica anterior de la presente invención.
El envejecimiento es un factor de riesgo importante para múltiples enfermedades humanas, incluidas el deterioro cognitivo, el cáncer, la artritis, la pérdida de visión, la osteoporosis, la diabetes, las enfermedades cardiovasculares y los accidentes cerebrovasculares. Además de la pérdida normal de sinapsis durante el envejecimiento natural, la pérdida de sinapsis es un acontecimiento patológico temprano común a muchas afecciones neurodegenerativas y es el mejor correlato del deterioro neuronal y cognitivo asociado a estas afecciones. Como tal, el envejecimiento sigue siendo el factor de riesgo predominante para las enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la demencia, tales como la enfermedad de Alzheimer (E<a>) (Bishop, N.A.et al.,Neural mechanisms of ageing and cognitive decline, Nature, 464(7288), 529-535 (2010); Heeden, Tet al.,Insights into the ageing mind: a view from cognitive neuroscience, Nat. Rev. Neurosci., 5(2), 87-96 (2004); Mattson, M.P.,et al.,Ageing and neuronal vulnerability, Nat. Rev. Neurosci., 7(4), 278-294 (2006)). El envejecimiento afecta a todos los tejidos y funciones del organismo, incluido el sistema nervioso central, y la neurodegeneración y el declive de funciones, tales como la cognición o la motricidad, pueden afectar gravemente a la calidad de vida. El tratamiento del declive cognitivo, el deterioro motor y los trastornos neurodegenerativos ha tenido un éxito limitado en la prevención y reversión del deterioro. Por tanto, es importante identificar nuevos tratamientos para mantener la integridad cognitiva protegiendo, contrarrestando o revirtiendo los efectos del envejecimiento. Además, cuando se desarrollan nuevos tratamientos, deben investigarse los paradigmas de administración para optimizar su eficacia.
El documento US 2015/157664, Boadaet al.(Neurología 2016, 31:473-481) y Villedaet al.(Nature Medicine, 2014, 20(6):659-663) describen el uso de productos de proteínas plasmáticas para el tratamiento de los deterioros cognitivos.
Aunque los experimentos de parabiosis entre ratones viejos y jóvenes han demostrado que la función cognitiva puede mejorar en ratones viejos por el intercambio de sangre heterocrónica con ratones jóvenes, informes recientes han descubierto que no hay mejora de la neurogénesis en ratones viejos por un intercambio de sangre joven (Rebo, J.et al.,A single heterochronic blood exchange reveals rapid inhibition of multiple tissues by old blood, Nat. Com., (2016)). Además, existen dudas de que la función cognitiva resultante de las infusiones de plasma joven y la neurogénesis estén relacionadas. Así pues, aún no se ha descrito una pauta posológica con plasma sanguíneo o fracciones de plasma sanguíneo que estimule la neurogénesis y mejore la función cognitiva.
Sumario
La invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención se refiere a una fracción de proteínas plasmáticas ("Plasma Protein Fraction", PPF) para su uso en el tratamiento del deterioro cognitivo. La presente invención reconoce, entre otras cuestiones, la necesidad de nuevas terapias para el tratamiento del deterioro cognitivo. Derivadas de sangre y plasma sanguíneo, las presentes composiciones de la invención se refieren a una solución para los fallos y deficiencias de las terapias actuales mediante la utilización de fracciones de plasma sanguíneo que son eficaces en el tratamiento del deterioro cognitivo.
La invención reconoce que las proteínas del plasma sanguíneo tienen una semivida media de 2 a 3 días. La invención utiliza una pauta posológica de PPF que optimiza la neurogénesis, la supervivencia celular, la disminución de la neuroinflamación y la mejora de la cognición o la función motora en el sujeto tratado. Se ha descubierto que la pauta posológica de la invención desencadena todos estos procesos (neurogénesis, supervivencia celular, mejora de la cognición, disminución de la neuroinflamación y mejora de la función motora) en los sujetos, y se ha descubierto que todos los procesos siguen activos incluso semanas después de la dosis final.
Una realización de la invención incluye una PPF para su uso en el tratamiento del deterioro cognitivo en un sujeto que lo necesita, mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de PPF, y, posteriormente, se puede hacer un seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva.
La PPF se administrará mediante una pauta posológica de al menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días consecutivos (denominado "administración en pulsos" o "dosis en pulsos" en el presente documento). La PPF puede administrarse mediante una pauta posológica de al menos 2 días consecutivos y después de la fecha de la última administración. Otra realización de la invención incluye la administración del plasma sanguíneo o de la fracción plasmática mediante una pauta posológica de 2 a 14 días no consecutivos, en el que cada intervalo entre las dosis puede ser de entre 0 y 3 días cada uno. Otra realización de la invención incluye el seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva al menos 3 días después de la fecha de la última administración. Otra realización de la invención incluye el seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva más allá de cuando se ha alcanzado la semivida media de las proteínas en la PPF.
En algunos casos, la administración en pulsos según la invención incluye la administración de un primer conjunto de dosis, por ejemplo, tal como se ha descrito anteriormente, seguido de un período sin administración , por ejemplo, un "período sin administración", que, a su vez, es seguido por la administración de otra dosis o conjunto de dosis. La duración de este periodo "sin administración" puede variar, pero en algunas realizaciones es de 7 días o más, tal como 10 días o más, incluidos 14 días o más, y en algunos casos el periodo sin administración oscila entre 15 y 365 días, tal como de 30 a 90 días e incluidos de 30 a 60 días. Como tales, las realizaciones de los procedimientos incluyen la administración no crónica (es decir, no continua), por ejemplo, la administración no crónica de una PPF. En algunas realizaciones, la pauta de la administración en pulsos seguida de un periodo sin administración se repite varias veces, según se desee, y en algunos casos esta pauta se mantiene durante 1 año o más, por ejemplo, 2 años o más, e incluye la vida del sujeto. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de 5 días consecutivos, con un periodo sin administración de 2 a 3 días, seguido de la administración durante 2 a 14 días consecutivos.
La invención actual también reconoce que las diferencias en el contenido de proteínas entre diferentes fracciones de plasma sanguíneo (por ejemplo, fracciones, efluentes, fracción de proteínas plasmáticas, solución de albúmina humana) pueden ser responsables de prevenir y/o mejorar determinados deterioros cognitivos o motores y aliviar enfermedades neurodegenerativas. A modo de ejemplo, y no de limitación, las realizaciones de la presente invención demuestran que la mera concentración más alta de albúmina de la albúmina humana recombinante o de las preparaciones de solución de albúmina humana ("Human Albumin Solution", HAS) no es la fuerza impulsora detrás de la mejora de la cognición, la mejora de la función motora, la reducción de la neuroinflamación, la supervivencia celular o la neurogénesis asociadas con las preparaciones de la fracción de proteínas plasmáticas (PPF) que incluyen concentraciones más bajas de albúmina.
La sangre y el plasma sanguíneo de donantes jóvenes han demostrado que provocan la mejora y la reversión de los efectos preexistentes del envejecimiento cerebral, incluido a nivel molecular, estructural, funcional y cognitivo (Saul A. Villeda,etal.,Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice, Nature Medicine, 20, 659-663 (2014)). La presente invención se refiere a fracciones y efluentes del plasma sanguíneo, algunos de los cuales se han utilizado tradicionalmente para tratar el choque emocional de los pacientes, y al descubrimiento de que son eficaces como procedimientos de tratamiento del deterioro cognitivo asociado al envejecimiento, la reducción de la función motora y la neuroinflamación o las enfermedades relacionadas con la neurodegeneración.
En una realización, la PPF puede ser, por ejemplo, una de varias fracciones de plasma sanguíneo obtenidas de un proceso de fraccionamiento sanguíneo, tal como el proceso de fraccionamiento de Cohn descrito a continuación. La fracción de plasma sanguíneo es un tipo de fracción de plasma sanguíneo conocida por los expertos en la materia como "fracción de proteínas plasmáticas" (PPF). Se eliminan sustancialmente todos los factores de coagulación para conservar la eficacia de la fracción con un riesgo reducido de trombosis. Las realizaciones de la invención también pueden incluir la administración, por ejemplo, de una fracción derivada de un donante joven o de un grupo de donantes jóvenes. Otra realización de la invención puede incluir el seguimiento de la mejora cognitiva en un sujeto tratado con una PPF.
Una realización de la invención incluye una PPF para su uso en el tratamiento de un sujeto diagnosticado con un deterioro cognitivo mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de la PPF. Otra realización de la invención incluye la administración de la cantidad eficaz de PPF y el posterior seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de al menos dos días consecutivos y el seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva al menos 2 días después de la fecha de la última administración. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de al menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días y el seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva al menos 3 días después de la fecha de la última administración. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de al menos 2 días consecutivos y, tras la fecha de la última administración, el seguimiento de la mejora cognitiva una vez alcanzada la semivida media de las proteínas en la PPF.
Una realización de la invención incluye que el sujeto siga un régimen de ejercicio después de la administración. Otra realización de la invención incluye seguir un régimen de ejercicio que se prescribe al sujeto. Otra realización de la invención incluye que el sujeto haga ejercicio a una intensidad más alta y/o con una frecuencia mayor que la que hacía antes de la administración. Otra realización de la invención incluye que el sujeto haga ejercicio a una intensidad y/o frecuencia similar a la que hacía antes de la administración.
Una realización de la invención incluye una PPF para su uso en el tratamiento de un sujeto diagnosticado con un deterioro cognitivo mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de la PPF en un sujeto que se está sometiendo, se someterá o ha recibido terapia con células madre. Las células madre utilizadas en la terapia pueden ser células madre embrionarias, células madre no embrionarias, células madre pluripotentes inducidas ("induced pluripotent stem cells", iPSC), células madre de sangre de cordón umbilical, células madre de líquido amniótico y similares.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1A muestra la distancia recorrida en una prueba de campo abierto en ratones tratados con PPF 1 utilizando dosis en pulsos y pautas posológicas de 3 veces por semana.
La figura 1B representa el tiempo de permanencia en el centro del campo abierto en ratones tratados con PPF 1 utilizando dosis en pulsos y pautas posológicas de 3 veces por semana.
La figura 2 muestra el peso corporal a lo largo del tiempo de los ratones tratados con PPF 1 utilizando dosis en pulsos y pautas posológicas de 3 veces por semana.
La figura 3 muestra el número de células marcadas con DCX en la capa granular del giro dentado en ratones tratados con PPF1 utilizando dosis en pulsos o pautas posológicas de 3 veces por semana.
La figura 4 muestra el número de células marcadas con BrdU en la capa granular del giro dentado en ratones tratados con PPF1 utilizando dosis en pulsos o pautas posológicas de 3 veces por semana.
La figura 5 muestra el número de células marcadas con DCX en la capa granular del giro dentado en ratones tratados con PPF1 utilizando dosis en pulsos o pautas posológicas de 3 veces por semana, plasma humano joven ("YP") o plasma humano viejo ("OP").
La figura 6 muestra el número de células marcadas con BrdU en la capa granular del giro dentado en los grupos de ratones tratados con PPF1 utilizando dosis en pulsos o pautas posológicas de 3 veces por semana, YP u OP.
La figura 7 muestra la latencia para encontrar el orificio diana por prueba y día en ratones con dosis en pulsos de PPF 1 o YP
La figura 8 muestra el número de células marcadas con DCX en la capa granular del giro dentado en grupos de ratones tratados con plasma humano joven (YP), plasma humano viejo (OP) o PPF1 utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos.
La figura 9 muestra el número de células marcadas con BrdU en la capa granular del giro dentado en grupos de ratones tratados con plasma humano joven (YP), plasma humano viejo (OP) o PPF1 utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos.
La figura 10 muestra el porcentaje del número total de entradas realizadas en la rama familiar o en la rama novedosa del total de entradas realizadas en cada rama por grupo de tratamiento en la prueba del laberinto en Y Ratones de doce meses fueron tratados con dosis en pulsos de PPF1 o PPF1 concentrado 5x.
La figura 11 muestra la proporción de intentos en la rama novedosa frente a la familiar de la prueba del laberinto en Y. Ratones de doce meses fueron tratados con dosis en pulsos de PPF1 o PPF1 concentrado 5x.
En la figura 12 se muestra el número de células marcadas con BrdU por sección del hipocampo en ratones de doce meses a los que se administró una dosis en pulsos de PPF1 o una dosis de PPF1 concentrado 5x. La figura 13 muestra el número de células marcadas con DCX por sección del hipocampo en ratones de doce meses de edad que recibieron una dosis en pulsos de PPF1 o PPF1 concentrado 5x.
La figura 14 muestra el número de células marcadas con DCX en la capa granular del giro dentado en ratones NSG de 10,5 meses de edad a los que se administró una dosis en pulsos de PPF1 o solución salina utilizando una de las siguientes pautas posológicas: (1) 5 días consecutivos [PPF1-5d]; (2) 7 días consecutivos [PPF1-7d]; (3) 5 días consecutivos con 5 días consecutivos adicionales ("refuerzo") de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [PPF1-5d-B]; o (4) 7 días consecutivos con 7 días consecutivos adicionales ("refuerzo") de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [PPF1-7d-B].
La figura 15 muestra el número de células marcadas con BrdU en la capa granular del giro dentado en ratones NSG de 10,5 meses de edad a los que se administró una dosis en pulsos de PPF1 o solución salina utilizando una de las siguientes pautas posológicas: (1) 5 días consecutivos [PPF1-5d]; (2) 7 días consecutivos [PPF1-7d]; (3) 5 días consecutivos con 5 días consecutivos adicionales ("refuerzo") de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [PPF 1-5d-B]; o (4) 7 días consecutivos con 7 días consecutivos adicionales ("refuerzo") de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [PPF1-7d-B].
La figura 16 muestra el número de células marcadas con EdU en la capa granular del giro dentado en ratones NSG de 10,5 meses de edad a los que se administró una dosis en pulsos de PPF1 o solución salina utilizando una de las siguientes pautas posológicas: (1) 5 días consecutivos [PPF1-5d]; (2) 7 días consecutivos [PPF1-7d]; (3) 5 días consecutivos con 5 días consecutivos adicionales ("refuerzo") de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [PPF1-5d-B]; o (4) 7 días consecutivos con 7 días consecutivos adicionales ("refuerzo") de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [PPF1-7d-B].
La figura 17 muestra el número de células marcadas con DCX en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 3 y 6 meses tratados con PPF1 o solución salina con o sin ruedas de actividad.
La figura 18 muestra el número de células marcadas positivamente con Ki67 en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 3 y 6 meses tratados con PPF1 o solución salina con o sin ruedas de actividad.
La figura 19 muestra el número de células marcadas positivamente con BrdU en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 3 y 6 meses tratados con PPF1 o solución salina con o sin ruedas de actividad.
La figura 20 muestra el número de revoluciones de la rueda de actividad durante determinados periodos de tiempo en ratones NSG de 11 meses de edad a los que se administró una dosis en pulsos de PPF1 o un control de solución salina. Las zonas sombreadas indican un ciclo de oscuridad, y la región encuadrada indica el momento en que se administró una prueba de placa caliente.
La figura 21A muestra el número de células marcadas con BrdU en la capa granular del giro dentado en tres grupos de tratamiento de ratones NSG de 10,5 meses de edad, tratados con plasma joven, albúmina humana recombinante ("rhAlbúmina") y control de solución salina.
La figura 21B muestra el número de células marcadas con DCX en la capa granular del giro dentado para tres grupos de tratamiento de ratones NSG de 10,5 meses de edad, tratados con plasma joven, albúmina humana recombinante ("rhAlbúmina") y control de solución salina.
La figura 22 muestra el grado de aumento de la actividad de la red neuronal en células neuronales mixtas disociadas derivadas de la corteza E16 de ratón tratadas con control, PPF1, HAS1 o rhAlbúmina.
La figura 23 muestra cuatro paradigmas de administración de plasma humano viejo aclarado (plasma viejo) o solución salina a ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes).
La figura 24A muestra el marcaje positivo de VCAM-1 en el hipocampo de ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dos dosis semanales de plasma viejo, 48 horas después de la administración de la última dosis.
La figura 24B muestra el marcaje positivo de VCAM-1 en el hipocampo en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dosis tres veces por semana de plasma viejo, 48 horas después de la administración de la última dosis.
La figura 24C muestra el marcaje positivo de VCAM-1 en el hipocampo en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dosis en pulsos de plasma viejo, 48 horas después de la administración de la última dosis.
La figura 24D muestra el marcaje positivo de VCAM-1 en el hipocampo en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dosis en pulsos de plasma viejo, 21 días después de la administración de la última dosis.
La figura 25A representa el número de células positivas a DCX en el giro dentado en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dos dosis semanales de plasma viejo, 48 horas después de la administración de la última dosis.
La figura 25B representa el número de células positivas a DCX en el giro dentado en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dosis tres veces por semana de plasma viejo, 48 horas después de la administración de la última dosis.
La figura 25C representa el número de células positivas a DCX en el giro dentado en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con dosis en pulsos de plasma viejo, 21 días después de la administración de la última dosis.
La figura 26 muestra el desarrollo temporal de la latencia de escape en el laberinto de Barnes e indica el tiempo para alcanzar y entrar en el orificio de escape para los ratones NSG tratados con plasma viejo y los tratados con solución salina de 8 semanas de edad (jóvenes). Los ratones se trataron durante 7 días consecutivos con plasma humano viejo o solución salina y se analizaron 4 semanas después de la última inyección.
La figura 27 muestra la latencia de escape promedio en las tres últimas pruebas del laberinto de Barnes en el día 4 de la prueba de ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) que fueron tratados durante 7 días consecutivos con plasma humano viejo o solución salina. Las pruebas se realizaron 4 semanas después de la última inyección.
La figura 28 muestra la diferencia en la latencia de escape entre las pruebas 1 y 3 del laberinto de Barnes en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) que fueron tratados durante 7 días consecutivos con plasma humano viejo o solución salina. Las pruebas se realizaron 4 semanas después de la última inyección.
La figura 29 muestra los resultados de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR), que cuantifica los niveles de ARNm de DCX, el receptor de glutamato vesicular (vglut1), la sinapsina 1 (syn1), la tubulina beta III (tuj 1) y el factor neurotrófico derivado del cerebro (bdnf) en ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) que fueron tratados durante 7 días consecutivos con plasma humano viejo o solución salina.
La figura 30 representa el paradigma de administración para ratones NSG de 8 semanas de edad (jóvenes) tratados con 35 mg/kg de ácido caínico o solución salina, y posteriormente tratados con PPF1 o solución salina a diario durante 5 días consecutivos.
La figura 31A muestra el porcentaje de superficie positiva a CD68 en la región CA1 del hipocampo de ratones tratados según el paradigma descrito en la figura 28.
La figura 31B muestra el porcentaje de superficie positiva a GFAP en la región CA1 del hipocampo de ratones tratados según el paradigma descrito en la figura 28.
La figura 32 muestra el número de células teñidas para BrdU en el giro dentado en ratones NSG de 6 meses de edad a los que se administró PPF 1 o control de solución salina durante 7 días consecutivos con administración simultánea de BrdU. Las dos primeras columnas constituyen una cohorte analizada 7 días después del último tratamiento de PPF1/control de solución salina y BrdU; las dos segundas columnas constituyen una cohorte analizada 14 días después del último tratamiento de PPF1/control de solución salina y BrdU.
La figura 33 muestra el aumento de células en proliferación (Ki67+) en el giro dentado de ratones NSG de 6 meses de edad 10 días después de la finalización de una pauta posológica de dosis en pulsos con PPF 1.
La figura 34 muestra secciones del giro dentado y de la zona subventricular de ratones NSG de 6 meses de edad 10 días después de la finalización de una pauta posológica de dosis en pulsos con PPF 1.
La figura 35A muestra el destino celular de las células del giro dentado en ratones NSG de 6 meses de edad tratados con PPF1 o control de solución salina con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días, en la que se administró BrdU durante 5 días consecutivos inmediatamente antes del inicio de la pauta posológica de dosis en pulsos. El grado de colocalización de NeuN+ teñido con BrdU indica el grado en que las células neuroprogenitoras se convirtieron en neuronas. El grado de colocalización de GFAP+ con BrdU indica el grado en que las células neuroprogenitoras se convirtieron en astrocitos.
La figura 35B muestra los resultados de un experimento similar al de la figura 35A, pero en ratones NSG de 12 meses.
La figura 36A muestra el destino celular de las células del giro dentado en ratones NSG de 3 meses de edad tratados con plasma viejo o control de solución salina con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días, en la que se administró BrdU durante 5 días consecutivos inmediatamente antes del inicio de la pauta posológica de dosis en pulsos. El grado de colocalización de NeuN+ teñido con BrdU indica el grado en que las células neuroprogenitoras se convirtieron en neuronas.
La figura 36B muestra los resultados del experimento detallado en la figura 36A, pero muestra el grado de colocalización de GFAP+ con BrdU, indicando el grado en que las células neuroprogenitoras se convirtieron en astrocitos
La figura 37 muestra el número de células positivas a cFos en (A) todo el cerebro, (B) la corteza y (C) la isocorteza de ratones de 18 meses tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días de PPF 1 o solución salina.
La figura 38 muestra el número de células positivas a cFos en (A) la corteza frontal, (B) la corteza orbital, (C) la corteza infralímbica, y (D) la corteza prelímbica de ratones de 18 meses tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días de PPF1 o solución salina.
La figura 39 muestra el número de células positivas a cFos en (A) el núcleo olfativo accesorio y en (B) el tubérculo olfativo de ratones de 18 meses tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días de PPF1 o solución salina.
La figura 40 muestra una visualización basada en estadísticas de vóxeles de la activación cortical local en la corteza frontal (FRP), la corteza orbital (ORB), la corteza infralímbica (ILA), la corteza prelímbica (PL) y el núcleo olfativo accesorio (AON) de ratones de 18 meses tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días de PPF1 o solución salina.
La figura 41A muestra el porcentaje de superficie inmunorreactiva a CD68 en el hipocampo de ratones C57BL/6J de tipo salvaje de 22 meses de edad tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días con PPF1 o control de solución salina.
La figura 41B muestra el porcentaje de superficie inmunorreactiva a Iba-1 en el hipocampo de ratones C57BL/6J de tipo salvaje de 22 meses de edad tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días con PPF1 o control de solución salina.
La figura 41C muestra el porcentaje de superficie inmunorreactiva a GFAP en el hipocampo en ratones C57BL/6J de tipo salvaje de 22 meses de edad tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días con PPF1 o control de solución salina.
La figura 42A muestra el cambio porcentual en la tinción de BrdU en ratones C57BL/6J de tipo salvaje 23 meses de edad tratados con PPF 1 en comparación con el control de solución salina a las 6, 9 y 12 semanas después de la administración utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos.
La figura 42B muestra el cambio porcentual en la tinción de DCX en ratones C57BL/6J de tipo salvaje de 23 meses de edad tratados con PPF 1 en comparación con el control de solución salina a las 6, 9 y 12 semanas después de la administración utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos.
Las figuras 43A y 43B indican los resultados de las mediciones del peso corporal de ratones alfa-sinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF1 o control de vehículo.
La figura 44 indica los resultados de la construcción de nidos en ratones alfa-sinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF1 o control de vehículo.
Las figuras 45A y 45B indican los resultados de la roedura de pasta y la mejora motora asociada, respectivamente, en ratones alfa-sinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF1 o control de vehículo.
La figura 46 indica los resultados de una prueba de suspensión de alambre en ratones alfa-sinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF 1 o control de vehículo.
La figura 47A muestra diferentes formas y tamaños de barras utilizadas en cinco pruebas diferentes de marcha sobre barras de dificultad creciente.
La figura 47B indica los resultados de cinco pruebas diferentes de marcha sobre barras en ratones alfasinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF1 o control de vehículo. Las pruebas de marcha sobre barras se realizaron 72 horas después de la última dosis de tratamiento.
La figura 47C indica los resultados de cinco pruebas diferentes de marcha sobre barras en ratones alfasinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF 1 o control de vehículo. Las pruebas de marcha sobre barras se realizaron 3 semanas después de la última dosis de tratamiento.
Las figuras 48A a 48F indican los resultados histológicos de la tinción estriatal e hipocámpica en ratones alfasinucleína macho de 4 a 4,5 meses de edad (línea 61) (un modelo para la enfermedad de Parkinson) tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos con PPF 1 o vehículo control. Los marcadores histológicos examinados incluyen CD68, Iba-1 y NeuN.
La figura 49 muestra la latencia de escape del laberinto de Barnes en ratones NSG de 12 meses de edad tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de siete días consecutivos utilizando PPF1, HAS 1, o control de vehículo.
Descripción detallada
1. Introducción
La presente invención se refiere a la identificación y el descubrimiento de composiciones para el tratamiento del deterioro cognitivo, incluida la demencia asociada a la edad y/o la enfermedad neurodegenerativa. En el presente documento se describen composiciones para su uso en el tratamiento de sujetos que padecen dichos trastornos, que constituyen aspectos de la presente invención. En el presente documento también se describen pautas posológicas que desencadenan la neurogénesis o la disminución de la neuroinflamación y/o la mejora cognitiva o motora en sujetos que padecen deterioro cognitivo o motor. Los procedimientos y composiciones descritos en el presente documento son útiles para prevenir el deterioro cognitivo o motor, la demencia asociada a la edad, la neuroinflamación y/o la enfermedad neurodegenerativa; mejorar los síntomas del deterioro cognitivo o motor, la demencia asociada a la edad, la neuroinflamación y/o la enfermedad neurodegenerativa; ralentizar la progresión del deterioro cognitivo o motor asociado al envejecimiento, la demencia asociada a la edad, la neuroinflamación y/o la enfermedad neurodegenerativa; y/o invertir la progresión del deterioro cognitivo o motor asociado al envejecimiento, la demencia asociada a la edad, la neuroinflamación y/o la enfermedad neurodegenerativa. Una realización de la invención incluye PPF para su uso como tratamiento, tal como el obtenido a partir de procesos de fraccionamiento de la sangre, por ejemplo, el proceso de fraccionamiento de Cohn descrito a continuación.
Antes de describir la presente invención en detalle, debe entenderse que esta invención no se limita a un procedimiento o una composición concretos descritos, ya que éstos pueden, por supuesto, variar. También se entiende que la terminología utilizada en el presente documento sólo tiene el propósito de describir realizaciones concretas y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Las publicaciones comentadas en el presente documento se facilitan únicamente para su divulgación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud. Además, las fechas de publicación facilitadas pueden diferir de las fechas de publicación reales, que deberán confirmarse de forma independiente.
Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta la décima de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario, entre los límites superior e inferior de dicho intervalo también se divulga específicamente. La invención abarca todos los intervalos menores entre cualquier valor indicado o valor intermedio de un intervalo indicado y cualquier otro valor indicado o valor intermedio de ese intervalo indicado. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse o excluirse independientemente en el intervalo, y cada intervalo en el que uno, ninguno o ambos límites estén incluidos en los intervalos más pequeños también se engloba dentro de la invención, sujeto a cualquier límite específicamente excluido en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o ambos límites, los intervalos que excluyen uno o ambos límites incluidos también se incluyen en la invención.
Cabe señalar que las reivindicaciones pueden redactarse para excluir cualquier elemento opcional. Así, esta declaración pretende servir como base previa para el uso de terminología exclusiva como "únicamente", "sólo" y similares en relación con la lectura de los elementos de la reivindicación o el uso de una limitación "negativa".
Cualquier procedimiento nombrado puede llevarse a cabo en el orden de los acontecimientos nombrados o en cualquier otro orden que sea lógicamente posible.
2. Definiciones
A menos que se defina lo contrario, todos los términos y expresiones técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que suele entender los expertos en la técnica a la que pertenece la invención.
Cabe señalar que, tal como se utilizan en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singulares "un/una" y "el/la" incluyen referentes en plural, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de tales células y la referencia a "el péptido" incluye la referencia a uno o más péptidos y equivalentes de los mismos, por ejemplo, polipéptidos, conocidos por los expertos en la materia, y así sucesivamente.
Al describir los procedimientos de la presente invención, los términos "hospedador", "sujeto", "individuo" y "paciente" se utilizan indistintamente y se refieren a cualquier mamífero que necesite dicho tratamiento según los procedimientos divulgados. Dichos mamíferos incluyen, por ejemplo, seres humanos, ovinos, bovinos, equinos, porcinos, caninos, felinos, primates no humanos, ratones y ratas. En determinadas realizaciones, el sujeto es un mamífero no humano. En algunas realizaciones, el sujeto es un animal de granja. En otras realizaciones, el sujeto es un animal de compañía. En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero. En algunos casos, el sujeto es un ser humano. Otros sujetos pueden ser animales domésticos (por ejemplo, perros y gatos), ganado (por ejemplo, vacas, cerdos, cabras, caballos y similares), roedores (por ejemplo, ratones, cobayas y ratas, por ejemplo, tal como en los modelos animales de enfermedades), así como primates no humanos (por ejemplo, chimpancés y monos). Así, los sujetos de la invención incluyen, entre otros, a los mamíferos, por ejemplo, seres humanos y otros primates, tales como chimpancés y otras especies de simios y monos; y similares, y, en determinadas realizaciones, el sujeto son los seres humanos. El término sujeto también incluye a una persona u organismo de cualquier edad, peso u otra característica física, pudiendo ser un adulto, un niño, un lactante o un recién nacido.
Por "joven" o "individuo joven" se entiende un individuo que tiene una edad cronológica de 40 años o menos, por ejemplo, 35 años o menos, incluido 30 años o menos, por ejemplo, 25 años o menos, o 22 años o menos. En algunos casos, el individuo que sirve como fuente del hemoderivado que comprende plasma joven es un individuo que tiene 10 años o menos, por ejemplo, 5 años o menos, incluido 1 año o menos. En algunos casos, el sujeto es un recién nacido y la fuente del producto plasmático es el cordón umbilical, y el producto plasmático se recoge del cordón umbilical del recién nacido. Así, "joven" e "individuo joven" pueden referirse a un sujeto que tiene entre 0 y 40 años, por ejemplo, 0, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 o 40 años. En otros casos, "joven" e "individuo joven" pueden referirse a una edad biológica (en contraposición a la cronológica), tal como un individuo que no presenta los niveles de citocinas inflamatorias en el plasma que presentan los individuos comparativamente mayores. Por el contrario, los términos "joven" e "individuo joven" pueden referirse a una edad biológica (en contraposición a la cronológica) tal como, por ejemplo, un individuo que presenta mayores niveles de citocinas antiinflamatorias en el plasma en comparación con los niveles de individuos comparativamente mayores. A modo de ejemplo, y no de limitación, la citocina inflamatoria es la eotaxina, y la diferencia en número de veces entre un sujeto joven o un individuo joven y los individuos de más edad es de al menos 1,5 veces. Del mismo modo, la diferencia en número de veces entre individuos mayores y más jóvenes en otras citocinas inflamatorias puede utilizarse para indicar una edad biológica (véase la solicitud de patente de EE. UU. n.° 13/575437). Por lo general, el individuo está sano, por ejemplo, no padece ninguna neoplasia hematológica ni enfermedad autoinmunitaria en el momento de la extracción.
Por "un individuo que padece o corre el riesgo de padecer un deterioro cognitivo asociado al envejecimiento" se entiende un individuo que ha vivido aproximadamente más del 50 % de su esperanza de vida, por ejemplo, más del 60 %, por ejemplo, más del 70 %, por ejemplo, más del 75 %, del 80 %, del 85 %, del 90 %, del 95 % o incluso del 99 % de su esperanza de vida. La edad del individuo dependerá de la especie de que se trate. Así pues, este porcentaje se basa en la esperanza de vida prevista de la especie en cuestión. Por ejemplo, en los seres humanos, dicho individuo tiene 50 años o más, por ejemplo, 60 años o más, 70 años o más, 80 años o más, 90 años o más, y normalmente no más de 100 años, tal como 90 años, es decir, entre 50 y 100 años, por ejemplo, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 años o más, o cualquier edad comprendida entre 50 y 1000, que padezca una afección asociada al envejecimiento, tal como se describe más adelante, por ejemplo, deterioro cognitivo asociado al proceso natural de envejecimiento; una persona que tenga aproximadamente 50 años o más, por ejemplo, 60 años o más, 70 años o más, 80 años o más, 90 años o más, y normalmente no más de 100 años, es decir, entre 50 y 100 años, por ejemplo, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 años, que aún no ha empezado a mostrar síntomas de una enfermedad asociada al envejecimiento, por ejemplo, deterioro cognitivo; un individuo de cualquier edad que sufre un deterioro cognitivo debido a una enfermedad asociada al envejecimiento, tal como se describe más adelante, y un individuo de cualquier edad al que se le ha diagnosticado una enfermedad asociada al envejecimiento que suele ir acompañada de deterioro cognitivo, cuando el individuo aún no ha empezado a mostrar síntomas de deterioro cognitivo. Las edades correspondientes para los sujetos no humanos son conocidas y se pretenden que sean aplicables en el presente documento.
Tal como se usa en el presente documento, "tratamiento" se refiere a cualquiera de (i) la prevención de la enfermedad o el trastorno, o (ii) la reducción o la eliminación de los síntomas de la enfermedad o el trastorno. El tratamiento puede ser profiláctico (antes de la aparición de la enfermedad) o terapéutico (tras la aparición de la enfermedad). El efecto puede ser profiláctico, en referencia a la prevención total o parcial de una enfermedad o síntoma de la misma y/o puede ser terapéutico, en referencia a la curación parcial o completa de una enfermedad y/o un efecto adverso atribuible a la enfermedad. Por lo tanto, el término "tratamiento", tal como se utiliza en el presente documento, abarca cualquier tratamiento de una enfermedad o trastorno relacionado con el envejecimiento en un mamífero, e incluye: (a) prevenir la aparición de la enfermedad en un sujeto que puede estar predispuesto a padecerla, pero al que aún no se le ha diagnosticado; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo; o (c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar su regresión. El tratamiento puede dar lugar a una diversidad de manifestaciones físicas diferentes, por ejemplo, la modulación en la expresión génica, el rejuvenecimiento de tejidos u órganos, etc. El agente terapéutico puede administrarse antes, durante o después de la aparición de la enfermedad. El tratamiento de la enfermedad en curso, en el que el tratamiento estabiliza o reduce los síntomas clínicos indeseables del paciente, es de especial interés. Dicho tratamiento puede realizarse antes de la pérdida completa de función en los tejidos afectados. La terapia en cuestión puede administrarse durante la fase sintomática de la enfermedad y, en algunos casos, después de la fase sintomática de la enfermedad.
En algunas realizaciones, la afección asociada al envejecimiento que se trata es un deterioro de la capacidad cognitiva asociado al envejecimiento en un individuo. Por capacidad cognitiva, o "cognición", se entienden los procesos mentales que incluyen la atención y la concentración, el aprendizaje de tareas y conceptos complejos, la memoria (adquisición, retención y recuperación de información nueva a corto y/o largo plazo), el procesamiento de la información (tratamiento de la información recogida por los cinco sentidos), la función visuoespacial (percepción visual, percepción de la profundidad, uso de imágenes mentales, copia de dibujos, construcción de objetos o formas), la producción y comprensión del lenguaje, la fluidez verbal (búsqueda de palabras), la resolución de problemas, la toma de decisiones y las funciones ejecutivas (planificación y establecimiento de prioridades). Por "declive cognitivo" se entiende una disminución progresiva de una o más de estas capacidades, por ejemplo, un declive de la memoria, el lenguaje, el pensamiento, el sentido de la realidad, etc. Por "deterioro de la capacidad cognitiva" y "deterioro cognitivo", se entiende una reducción de la capacidad cognitiva en relación con un individuo sano, por ejemplo, un individuo sano de la misma edad, o en relación con la capacidad del individuo en un momento anterior, por ejemplo, 2 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 1 año, 2 años, 5 años o 10 años o más antes. Por "deterioro cognitivo asociado al envejecimiento" se entiende un deterioro de la capacidad cognitiva que suele asociarse al envejecimiento, incluido, por ejemplo, el deterioro cognitivo asociado al proceso natural de envejecimiento, por ejemplo, el deterioro cognitivo leve (DCL); y el deterioro cognitivo asociado a un trastorno asociado al envejecimiento, es decir, un trastorno que se observa con mayor frecuencia con el aumento de la senectud, por ejemplo, una afección neurodegenerativa, tal como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la demencia frontotemporal, la enfermedad de Huntington, la esclerosis lateral amiotrófica, la esclerosis múltiple, el glaucoma, la distrofia miotónica, la demencia vascular y similares.
En algunas realizaciones, la afección asociada al envejecimiento que se trata es un deterioro asociado al envejecimiento en la capacidad motora de un individuo. Por capacidad motora se entienden los procesos motores que incluyen la capacidad de realizar acciones musculares y nerviosas complejas que producen movimiento, tal como la motricidad fina que produce movimientos pequeños o precisos (por ejemplo, escribir, atarse los zapatos) y la motricidad gruesa para movimientos grandes (por ejemplo, andar, correr, dar patadas). Por "disminución motora" se entiende una disminución progresiva de una o más de estas capacidades, por ejemplo, una disminución del movimiento de búsqueda o de las habilidades motoras gruesas, etc. Por "deterioro motor" y "deficiencia motora" se entiende una reducción de la capacidad/habilidades motoras en relación con un individuo sano, por ejemplo, un individuo sano de la misma edad, o en relación con la capacidad del individuo en un momento anterior, por ejemplo, 2 semanas, 1 mes, 2 meses, 3 meses, 6 meses, 1 año, 2 años, 5 años o 10 años o más antes. Por "deterioro motor asociada al envejecimiento" se entiende un deterioro o disminución de la capacidad motora que se suele asociar con el envejecimiento, incluidos, por ejemplo, el deterioro motor asociado al proceso natural de envejecimiento y el deterioro o disminución motores asociados a un trastorno asociado al envejecimiento, es decir, un trastorno que se observa con mayor frecuencia con el aumento de la senectud, por ejemplo, una afección neurodegenerativa, tal como la enfermedad de Parkinson, la esclerosis lateral amiotrófica y similares.
En algunas realizaciones, la afección asociada al envejecimiento que se trata es un aumento de la neuroinflamación asociado al envejecimiento en un individuo. Por "neuroinflamación" se entienden las respuestas bioquímicas y celulares del sistema nervioso a lesiones, infecciones o enfermedades neurodegenerativas. Tales respuestas están dirigidas a disminuir los factores desencadenantes mediante la participación de la inmunidad del sistema nervioso central para defenderse contra el daño potencial. La neurodegeneración se produce en el sistema nervioso central y se caracteriza por la pérdida de estructura y función neuronal. Las enfermedades neuroinflamatorias o las afecciones o enfermedades asociadas a la neuroinflamación incluyen, a título de ejemplo y sin que sean limitantes, enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la esclerosis múltiple y otras similares.
Hemoderivados que comprenden componentes plasmáticos. En la práctica de los procedimientos en cuestión, se administra un hemoderivado que comprende componentes plasmáticos a un individuo que lo necesita, por ejemplo, un individuo que sufre o corre el riesgo de sufrir un deterioro cognitivo o motor, neuroinflamación y/o demencia relacionada con la edad. Así, los procedimientos según realizaciones de la invención incluyen administrar un hemoderivado que comprende componentes plasmáticos procedentes de un individuo (el "individuo donante" o "donante") a un individuo al menos en riesgo de sufrir o que sufre de deterioro cognitivo o motor, neuroinflamación, neurodegeneración y/o demencia relacionada con la edad (el "individuo receptor" o "receptor"). Por "hemoderivado que comprende componentes plasmáticos" se entiende cualquier producto derivado de la sangre que comprende plasma (por ejemplo, sangre total, plasma sanguíneo o fracciones del mismo). El término "plasma" se utiliza en su sentido convencional para referirse al componente líquido de color pajizo/amarillo pálido de la sangre compuesto por aproximadamente un 92 % de agua, un 7 % de proteínas, tales como albúmina, gammaglobulina, factor antihemofílico y otros factores de coagulación, y un 1 % de sales minerales, azúcares, grasas, hormonas y vitaminas. Algunos ejemplos no limitantes de hemoderivados que contienen plasma adecuados para su uso en los procedimientos en cuestión incluyen sangre total tratada con anticoagulantes (por ejemplo, EDTA, citrato, oxalato, heparina, etc.), hemoderivados producidos por filtración de sangre total para retirar los glóbulos blancos ("leucorreducción"), hemoderivados que consisten en plasma derivado de plasmaféresis o plasma derivado de aféresis, plasma fresco congelado, hemoderivados que consisten fundamentalmente en plasma purificado y hemoderivados que consisten fundamentalmente en fracciones de plasma. En algunos casos, el producto plasmático que se emplea es un producto plasmático de sangre no total, lo que significa que el producto no es sangre total, ya que carece de uno o más componentes que se encuentran en la sangre total, tales como eritrocitos, leucocitos, etc., al menos en la medida en que estos componentes están presentes en la sangre total. En algunos casos, el producto plasmático es sustancial, si no completamente, acelular, en el que, en tales casos, el contenido celular puede ser del 5 % en volumen o menos, tal como el 1 % o menos, incluido el 0,5 % o menos, en el que, en algunos casos, las fracciones de plasma acelulares son aquellas composiciones que carecen completamente de células, es decir, no incluyen células.
Recogida de hemoderivados que comprenden componentes plasmáticos. Las realizaciones de los procedimientos descritos en el presente documento incluyen la administración de hemoderivados que comprenden componentes plasmáticos que pueden derivarse de donantes, incluidos voluntarios humanos. La expresión "de origen humano" puede referirse a este tipo de productos. Los procedimientos de obtención de plasma que comprende hemoderivados de donantes son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, AABB TECHNICAL MANUAL (Mark A. Fung,et al.,eds., 18a ed. 2014)).
En una realización, las donaciones se obtienen por venopunción. En otra realización, la venopunción es una única venopunción. En otra realización, no se emplea la reposición de la volemia con solución salina. En una realización preferida, se utiliza el proceso de plasmaféresis para obtener el plasma que comprende los hemoderivados. La plasmaféresis puede consistir en la extracción de un volumen de plasma ajustado al peso con devolución de componentes celulares al donante. En la realización preferida, se utiliza el citrato de sodio durante la plasmaféresis para prevenir la coagulación celular. El volumen de plasma recogido de un donante se sitúa preferentemente entre 690 y 880 ml tras la administración de citrato, y se coordina preferentemente con el peso del donante.
3. Fracciones plasmáticas
Durante la Segunda Guerra Mundial, surgió la necesidad de un expansor de plasma estable que pudiera emplearse en el campo de batalla cuando los soldados perdían grandes cantidades de sangre. Como resultado, se desarrollaron procedimientos para preparar plasma liofilizado. Sin embargo, el uso de plasma liofilizado era difícil en situaciones de combate, ya que la reconstitución requería agua estéril. Como alternativa, el doctor E.J. Cohn sugirió que podía utilizarse albúmina y preparó una solución estable lista para usar que podía introducirse inmediatamente para el tratamiento del estado de choque (véase Johan, Current Approaches to the Preparation of Plasma Fractions en (Biotechnology of Blood) 165 (Jack Goldstein ed., ia ed., 1991)). El procedimiento del doctor Cohn para purificar las fracciones de plasma utiliza etanol frío por su efecto desnaturalizante y emplea cambios de pH y temperatura para lograr la separación.
Una realización de los procedimientos descritos en el presente documento incluye la administración de fracciones de plasma a un sujeto. El fraccionamiento es el proceso mediante el cual se separan del plasma determinados subconjuntos de proteínas. La tecnología de fraccionamiento es conocida en la técnica y se basa en las etapas desarrolladas por Cohnet al.durante la década de 1940 (E. Cohn, Preparation and properties of serum and plasma proteins. IV. A system for the separation into fractions of the protein and lipoprotein components of biological tissues and fluids, 68, J. Am. Chem. Soc., 459 (1946)). En este proceso intervienen varias etapas, cada una de las cuales implica concentraciones específicas de etanol, así como cambios de pH, temperatura y osmolalidad que dan lugar a la precipitación selectiva de proteínas. Los precipitados también se separan mediante centrifugación o precipitación. El "proceso de fraccionamiento de Cohn" original implicaba la separación de proteínas a través de precipitados en cinco fracciones, denominadas fracción I, fracción II+IN, fracción IV-1, fracción IV-4 y fracción V. La albúmina era el producto final (fracción V) originariamente identificado de este proceso. De acuerdo con las realizaciones de la invención, cada fracción (o efluente de una etapa de separación previa) contiene o puede contener fracciones de proteínas terapéuticamente útiles (véase Thierry Burnouf, Modern Plasma Fractionation, 21(2), Transfusion Medicine Reviews, 101 (2007); Adil Denizli, Plasma fractionation: conventional and chromatographic methods for albumin purification, 4, J. Biol. & Chem., 315, (2011); y T Brodniewicz-Proba, Human Plasma Fractionation and the Impact of New Technologies on the Use and Quality of Plasma-derived Products, 5, Blood Reviews, 245 (1991), y las patentes de EE. UU. n.° 3869431, 5110907, 5219995, 7531513 y 8772461). Se pueden ajustar los parámetros experimentales anteriores para obtener fracciones de proteínas específicas.
Más recientemente, el fraccionamiento ha alcanzado una mayor complejidad. Este reciente aumento de la complejidad se ha producido gracias a la introducción de la cromatografía, que ha dado lugar al aislamiento de nuevas proteínas a partir de fracciones existentes, tales como el crioprecipitado, el plasma criopobre y las fracciones de Cohn; el aumento de la recuperación de IgG mediante la integración de la cromatografía y el proceso de fraccionamiento en etanol; y la reducción/inactivación/eliminación viral(Id.).Para capturar proteínas a pH y fuerza iónica fisiológicos, puede utilizarse la cromatografía de intercambio aniónico. Esto conserva la actividad funcional de las proteínas y/o de las fracciones de proteínas. La heparina y los anticuerpos monoclonales también se utilizan en la cromatografía de afinidad. Un experto en la materia reconocerá que los parámetros descritos anteriormente pueden ajustarse para obtener fracciones que contengan proteínas plasmáticas específicas.
En una realización de la invención, el plasma sanguíneo se fracciona en un entorno industrial. El plasma congelado se descongela entre 1 °C y 4 °C. Se aplica la centrifugación refrigerada continua al plasma descongelado y se aísla el crioprecipitado. El crioprecipitado recuperado se congela a -30 °C o menos y se almacena. El plasma pobre en crioprecipitado ("criopobre") se procesa inmediatamente para la captura (por ejemplo, mediante cromatografía primaria) de los factores de coagulación lábiles, tales como el complejo del factor IX y sus componentes, así como de los inhibidores de proteasas, tales como la antitrombina y el inhibidor de la esterasa C1. La centrifugación en serie y el aislamiento del precipitado pueden aplicarse en etapas posteriores. Estas técnicas son conocidas por los expertos en la materia y se describen, por ejemplo, en las patentes de EE. UU. n.os 4624780,5219995,5288853 y las solicitudes de patente de EE. UU. n.os 20140343255 y 20150343025.
4. Productos de albúmina
Para los expertos en la materia, existen dos categorías generales de productos de albúmina plasmática ("Albumin Plasma Products", "APP"): la fracción de proteína plasmática ("PPF") y la solución de albúmina humana ("HAS"). La PPF se deriva de un proceso con un mayor rendimiento que la HAS, pero que tiene una pureza mínima de albúmina inferior a la de la HAS (>83 % para la PPF y > 95 % para la HAS) (Production of human albumin solution: a continually developing colloid, P Matejtschuket al.,British J. of Anaesthesia, 85(6): 887-895, en 888 (2000)). La PPF tiene una pureza de albúmina comprendida entre el 83 % y el 95 % o, como alternativa, entre el 83 % y el 96 %. La pureza de la albúmina puede determinarse por electroforesis u otros ensayos de cuantificación, tales como, por ejemplo, por espectrometría de masas. Además, algunos han señalado que la PPF tiene una desventaja debido a la presencia de "contaminantes" de proteínas, tales como la PKA(Id.).Como consecuencia de ello, los preparados de PPF han perdido popularidad como productos de albúmina plasmática, e incluso han sido suprimidos de las farmacopeas de algunos países (Id.). Contrariamente a estas preocupaciones, la invención hace un uso beneficioso de estos "contaminantes" Además de las a, p y y globulinas, así como la mencionada PKA, las composiciones de la invención utilizan proteínas adicionales u otros factores dentro de los "contaminantes" que estimulan procesos, tales como la neurogénesis, la supervivencia de las células neuronales, la mejora de la cognición o la función motora y la disminución de la neuroinflamación.
Los expertos en la materia reconocerán que existen, o han existido, varias fuentes comerciales de PPF (los "preparados comerciales de PPF") Entre ellos se incluyen Plasma-Plex™ PPF (Armour Pharmaceutical Co., Tarrytown, NY), Plasmanate™ PPF (Grifols, Clayton, NC), Plasmatein™ (Alpha Therapeutics, Los Ángeles, CA) y Protenate™ PPF (Baxter Labs, Inc. Deerfield, IL).
Los expertos en la materia también reconocerán que existen, o han existido, varias fuentes comerciales de HAS (los "preparados comerciales de HAS") Entre ellos se incluyen Albuminar™ (CSL Behring), AlbuRx™ (CSL Behring), Albutein™ (Grifols, Clayton, NC), Buminate™ (Baxatla, Inc., Bannockburn, IL), Flexbumin™ (Baxatla, Inc., Bannockburn, IL) y Plasbumin™ (Grifols, Clayton, NC).
a. Fracción de proteínas plasmáticas (humanas) (PPF)
Según la Administración de Alimentos y Medicamentos (Food and Drug Administration ("FDA") de EE. UU., "Plasma Protein Fraction (Human)" fracción de proteínas plasmáticas), o PPF, es el nombre adecuado del producto definido como "una solución estéril de proteínas compuesta de albúmina y globulina, derivada de plasma humano" (Código de Reglamentos Federales [Code of Federal Regulations]
"CFR" 21 CFR 640.90). El material fuente de PPF es plasma recuperado de sangre total preparada como se prescribe en 21 CFR 640.1-640.5, o plasma fuente preparado como se prescribe en 21 CFR 640.60-640.76.
La PPF se prueba para determinar si cumple las siguientes normas según 21 CFR 640.92:
(a) El producto final será una solución de proteínas al 5,0 /- 0,30 %; y
(b) La proteína total del producto final consistirá en al menos un 83 % de albúmina y no más de un 17 % de globulinas. No más del 1 % de la proteína total será gammaglobulina. La composición de proteínas se determina mediante un procedimiento aprobado para cada fabricante por el director del Centro de Evaluación e Investigación Biológica de la Administración de Alimentos y Medicamentos.
Tal como se utiliza en el presente documento, la "fracción de proteínas plasmáticas" o "PPF" se refiere a una solución estéril de proteínas compuesta de albúmina y globulina, derivada de plasma humano, con un contenido de albúmina de al menos un 83% con no más del 17% de globulinas (incluidas a1, a2, p y y globulinas) y otras proteínas plasmáticas, y no más del 1 % de gammaglobulina determinada por electroforesis (Hink, J.H., Jr.,et al.,Preparation and Properties of a Heat-Treated Human Plasma Protein Fraction, VOX SANGUINIS, 2(174) (1957)). La PPF también puede referirse a una forma sólida que, cuando se suspende en disolvente, tiene una composición similar. La fracción de globulina total puede determinarse restando la albúmina de la proteína total (Busher, J., Serum Albumin and Globulin, CLINICAL METHODS: THE HISTORY, PHYSICAL, AND LABORATORY EXAMINATIONS, capítulo 10, Walker HK, Hall W.D., Hurst J.D., eds. (1990)).
b. Albúmina (humana) (HAS)
Según la FDA, "albúmina (humana)" (también denominada en el presente documento "HAS") es el nombre adecuado del producto definido como "solución estéril de albúmina derivada del plasma humano" (Código de Regulaciones Federales "CFR" 21 CFR 640.80). El material fuente para la albúmina (humana) es plasma recuperado de sangre total preparado como se prescribe en 21 CFR 640.1-640.5, o plasma fuente preparado como se prescribe en 21 CFR 640.60-640.76. Otros requisitos para la albúmina (humana) se enumeran en 21 CFR 640.80640.84.
La albúmina (humana) se prueba para determinar si cumple las siguientes normas según 21 CFR 640.82:
(a) Concentración de proteínas. El producto final deberá ajustarse a una de las siguientes concentraciones: 4,0 /-0,25 %; 5,0 /-0,30 %; 20,0 /-1,2 %; y 25,0 /-1,5 % de solución de proteínas.
(b) Composición de proteínas. Al menos el 96%de las proteínas totales del producto final deberán ser albúmina, determinada mediante un procedimiento aprobado para cada fabricante por el director del Centro de Evaluación e Investigación Biológica de la Administración de Alimentos y Medicamentos.
Tal como se utiliza en el presente documento, la "albúmina (humana)" o "HAS" se refiere a una solución estéril de proteínas compuesta de albúmina y globulina, derivada de plasma humano, con un contenido de albúmina de al menos un 95 %, con no más del 5 % de globulinas (incluidas a l, a2, p y<y>globulinas) y otras proteínas plasmáticas. La HAS también puede referirse a una forma sólida que, cuando se suspende en disolvente, tiene una composición similar. La fracción de globulina total puede determinarse restando la albúmina de la proteína total
Tal como puede reconocer un experto en la materia, la PPF y las fracciones de HAS también pueden liofilizarse o presentarse en otra forma sólida. Dichas preparaciones, con los aditivos adecuados, pueden utilizarse para fabricar comprimidos, polvos, gránulos o cápsulas, por ejemplo. La forma sólida puede formularse en preparados inyectables disolviéndolas, suspendiéndolas o emulsionándolas en un disolvente acuoso o no acuoso, tal como aceites vegetales u otros similares, glicéridos de ácidos alifáticos sintéticos, ésteres de ácidos alifáticos superiores o propilenglicol; y si se desea, con aditivos convencionales, tales como solubilizantes, agentes isotónicos, agentes de suspensión, agentes emulsionantes, estabilizantes y conservantes.
5. Preparación de fracciones de plasma
Los procedimientos para preparar PPF y otras fracciones de plasma son bien conocidos por los expertos en la materia. Una realización de la invención permite que la sangre utilizada en la preparación de la fracción de proteínas plasmáticas humanas se recoja en matraces con citrato o solución anticoagulante de citrato y dextrosa para la inhibición de la coagulación, con la separación posterior de las fracciones I, II III, IV y PPF según el procedimiento divulgado en Hinket al.(véase Hink, J.H., Jr.,et al.,Preparation and Properties of a Heat-Treated Human Plasma Protein Fraction, VOX SANGUINIS, 2(174) (1957)). Según este procedimiento, la mezcla puede recogerse a 2-8 °C. A continuación, el plasma puede separarse por centrifugación a 7 °C, extraerse y almacenarse a -20 °C. A continuación, el plasma puede descongelarse a 37 °C y fraccionarse, preferentemente en las ocho horas siguientes a su extracción del almacenamiento a -20 °C.
El plasma puede separarse de la fracción I utilizando etanol al 8 % a pH 7,2 y una temperatura de -2 a - 2,5 °C con una concentración de proteínas del 5,1 al 5,6 %. Se puede añadir etanol frío al 53,3 % (176 ml/l de plasma) con tampón acetato (200 ml de acetato de sodio 4 M, 230 ml de ácido acético glacialquantum satishasta 1 l con H2O) utilizando chorros a una velocidad, por ejemplo, de 450 ml/minuto durante la reducción de la temperatura del plasma hasta -2 °C. La fracción I puede separarse y retirarse del efluente (efluente I) mediante ultracentrifugación. El fibrinógeno puede obtenerse a partir de la fracción I por procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia.
La fracción II III puede ser separada del efluente I a través del ajuste del efluente a etanol al 21 % a pH 6,8, temperatura de -6 °C, con una concentración de proteínas del 4,3 %. Se puede añadir etanol frío al 95 % (176 ml/l de efluente I) con ácido acético 10 M utilizado para ajustar el pH utilizando chorros a una velocidad, por ejemplo, de 500 ml/minuto durante la reducción de la temperatura del efluente I hasta -6 °C. El precipitado resultante (fracción II III) puede retirarse por centrifugación a -6 °C. La gammaglobulina puede obtenerse a partir de la fracción II III utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la materia.
La fracción IV-1 puede separarse del efluente II III ("efluente II/III") mediante ajuste del efluente a etanol al 19 % a pH 5,2, temperatura de -6 °C y concentración de proteínas del 3 %. El H2O y el ácido acético 10 M utilizados para ajustar el pH pueden añadirse utilizando chorros mientras se mantiene el efluente II/III a -6 °C durante 6 horas. La fracción VI-1 precipitada puede sedimentarse a -6 °C durante 6 horas y separarse posteriormente del efluente por centrifugación a la misma temperatura. La fracción de proteína plasmática estable puede recuperarse del efluente IV-1 mediante el ajuste de la concentración de etanol al 30 % a pH 4,65, temperatura de -7 °C y concentración de proteínas del 2,5 %. Esto se puede conseguir ajustando el pH del efluente IV-1 con ácido-alcohol frío (dos partes de ácido acético 2 M y una parte de etanol al 95 %). Mientras se mantiene una temperatura de -7 °C, a cada litro de efluente IV-1 ajustado se añaden 170 ml de etanol frío (al 95%). Las proteínas que precipitan pueden dejarse sedimentar durante 36 horas y retirarse posteriormente por centrifugación a -7 °C.
Las proteínas recuperadas (fracción de proteínas plasmáticas estables) pueden secarse (por ejemplo, por liofilización) para eliminar el alcohol y el H2O. El polvo seco resultante puede disolverse en agua destilada estéril, por ejemplo, utilizando 15 litros de agua/kg de polvo, con la solución ajustada a pH 7,0 con NaOH 1 M. Puede alcanzarse una concentración final del 5 % de proteínas añadiendo agua destilada estéril que contenga acetiltriptofanato de sodio, caprilato de sodio y NaCl, ajustando a concentraciones finales de acetil-triptófano 0,004 M, caprilato 0,004 M y sodio 0,112 M. Por último, la solución puede filtrarse a 10 °C para obtener una solución transparente y posteriormente someterse a un tratamiento térmico para inactivar los agentes patógenos a 60 °C durante al menos 10 horas.
Un experto en la materia reconocería que cada una de las diferentes fracciones y efluentes descritos anteriormente podrían utilizarse con los procedimientos de la invención para tratar enfermedades. Por ejemplo, y no a modo de limitación, los efluentes I o los efluentes II/III pueden utilizarse para tratar enfermedades, tales como trastornos cognitivos, motores y neurodegenerativos y son realizaciones de la invención.
Los procedimientos anteriores de preparación de fracciones de plasma y la fracción de proteínas plasmáticas (PPF) son sólo ilustrativos y suponen únicamente realizaciones de la invención. Un experto en la materia reconocerá que estos procedimientos pueden variar. Por ejemplo, el pH, la temperatura y la concentración de etanol, entre otros factores, pueden ajustarse para producir diferentes variaciones de las fracciones de plasma y de la fracción de proteínas plasmáticas en las diferentes realizaciones y procedimientos de la invención. En otro ejemplo, otras realizaciones de la invención contemplan el uso de la nanofiltración para la eliminación/inactivación de patógenos de las fracciones de plasma y de la fracción de proteínas plasmáticas.
6. Tratamiento (no forma parte de la invención)
Algunos aspectos de los procedimientos descritos en el presente documento incluyen el tratamiento de un sujeto con una PPF, por ejemplo, como se ha descrito anteriormente. Una realización incluye el tratamiento de un sujeto humano con una PPF. Un experto en la materia reconocerá que los procedimientos de tratamiento de sujetos con PPF están reconocidos en la técnica. A modo de ejemplo, y no de limitación, una realización de los procedimientos descritos en el presente documento consiste en administrar plasma fresco congelado a un sujeto para el tratamiento del deterioro cognitivo y/o la demencia relacionada con la edad. En una realización, la PPF se administra inmediatamente, por ejemplo, en las 12-48 horas siguientes a la recogida de un donante, a la persona que sufre un deterioro cognitivo y/o demencia relacionada con la edad. En tales casos, el producto puede almacenarse refrigerado, por ejemplo, a 0-10 °C. En otra realización, el plasma fresco congelado es aquel que se ha almacenado congelado (crioconservado) a -18 °C o menos. Antes de su administración, el plasma fresco congelado se descongela y, una vez descongelado, se administra al sujeto entre 60 y 75 minutos después de iniciado el proceso de descongelación. Cada sujeto recibe preferentemente una sola unidad de plasma fresco congelado (200-250 ml), el plasma fresco congelado procede preferentemente de donantes de un intervalo de edad predeterminado. En una realización, el plasma fresco congelado es donado por individuos jóvenes (se deriva de los mismos) . En otra realización, el plasma fresco congelado es donado por donantes del mismo sexo (se deriva de los mismos) . En otra realización, el plasma fresco congelado es donado por donantes de edades comprendidas entre 18 y 22 años (se deriva de los mismos) .
En una realización, las PPF son clasificadas después de la donación según el grupo sanguíneo. En otra realización, el plasma que comprende los hemoderivados se analiza para detectar agentes de enfermedades infecciosas, tales como VIH I y II,<v>H<b>, VHC, HTLV I y 11, anti-HBc según los requisitos de 21 CFR 640.33 y las recomendaciones contenidas en los documentos de orientación de la FDA.
En otra realización, la PPF es uno de los preparados de PPF comerciales. En otra realización, la fracción de plasma es una PPF derivada de un grupo de individuos de un intervalo de edad específico, tales como individuos jóvenes, o es una fracción PPF modificada que ha sido sometida a fraccionamiento o procesamiento adicional (por ejemplo, PPF con una o más proteínas específicas parcial o sustancialmente retiradas). Una fracción de sangre que está "sustancialmente empobrecida" o que tiene proteínas específicas "sustancialmente retiradas", tales como la IgG, se refiere a una fracción de sangre que contiene menos de aproximadamente el 50 % de la cantidad presente en el producto de referencia o en el plasma sanguíneo completo, tal como menos del 45 %, del 40 %, del 35 %, del 30 %, del 25 %, del 20 %, del 15 %, del 5 %, del 4 %, del 3 %, del 2 %, del 1 %, del 0,5 %, del 0,25 %, del 0,1 %, niveles indetectables o cualquier número entero entre estos valores, medidos mediante ensayos convencionales bien conocidos en la técnica.
7. Administración
Una realización de la invención incluye una PPF para su uso en el tratamiento de un sujeto diagnosticado con un deterioro cognitivo mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de la PPF. Otra realización de la invención incluye el seguimiento posterior del sujeto para comprobar si ha mejorado su función cognitiva. Otra realización de la invención incluye una PPF para su uso en el tratamiento de un sujeto diagnosticado con un deterioro cognitivo mediante la administración al sujeto de una cantidad eficaz de la PPF, en la que la PPF se administra de una manera que dé como resultado la mejora de la función cognitiva después de haber alcanzado la semivida media o la mediana de la semivida de las proteínas de la PPF, en relación con la dosis administrada más reciente (denominado en el presente documento "administración en pulsos" o "dosis en pulsos"). Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de al menos dos días consecutivos y el seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva al menos 3 días después de la fecha de la última administración. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de al menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días consecutivos y el seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva al menos 3 días después de la fecha de la última administración. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de al menos 2 días consecutivos y después de la fecha de la última administración, el seguimiento de la mejora de la función cognitiva más allá de cuando se haya alcanzado la semivida media de las proteínas en la PPF. Otra realización de la invención incluye la administración de la PPF mediante una pauta posológica de 2 a 14 días no consecutivos, en la que cada intervalo entre dosis puede ser de entre 0 y 3 días cada uno.
En algunos casos, la administración en pulsos según la invención incluye la administración de un primer conjunto de dosis, por ejemplo, tal como se ha descrito anteriormente, seguido de un período sin administración , por ejemplo, un "período sin administración", que, a su vez, es seguido por la administración de otra dosis o conjunto de dosis. La duración de este periodo "sin administración" puede variar, pero en algunas realizaciones es de 7 días o más, tal como10 días o más, incluidos 14 días o más, en algunos casos, el periodo sin administración oscila entre 15 y 365 días, tal como de 30 a 90 días e incluye de 30 a 60 días. Así, las realizaciones de los procedimientos incluyen la administración no crónica (es decir, no continua), por ejemplo, la administración no crónica de un producto de plasma sanguíneo. En algunas realizaciones, la pauta de la administración en pulsos seguida de un periodo sin administración se repite varias veces, según se desee, y en algunos casos esta pauta se mantiene durante 1 año o más, por ejemplo, 2 años o más, e incluye la vida del sujeto. Otra realización de la invención incluye administrar el plasma sanguíneo o la fracción de plasma mediante una pauta posológica de 5 días consecutivos, con un periodo sin administración de 2 a 3 días, seguido de la administración durante 2 a 14 días consecutivos.
Desde el punto de vista bioquímico, una "cantidad eficaz" o "dosis eficaz" de principio activo significa una cantidad de principio activo que inhibirá, antagonizará, disminuirá, reducirá o suprimirá en aproximadamente un 20 % o más, por ejemplo, en un 30 % o más, en un 40 % o más, o en un 50 % o más, en algunos casos, en un 60 % o más, en un 70 % o más, en un 80 % o más, o en un 90 % o más, en algunos casos, en aproximadamente un 100 %, es decir, hasta cantidades insignificantes, y en algunos casos, invertirá la progresión del deterioro cognitivo o neuroinflamación, neurodegeneración o demencia asociada a la edad.
8. Fracción de proteínas plasmáticas
En la práctica de los procedimientos divulgados en el presente documento, se administra una fracción de plasma al sujeto. La fracción de plasma es la fracción de proteínas plasmáticas (PPF). En algunas realizaciones, la PPF se selecciona entre los preparados de PPF comerciales.
En otra realización, la PPF está compuesta por un 88 % de albúmina humana normal, un 12 % de alfa y beta globulinas y no más de un 1 % de gammaglobulina, según se determina por electroforesis. Otras realizaciones de esta realización utilizada en la práctica de la invención incluyen, por ejemplo, la realización en forma de una solución al 5 % de PPF tamponada con carbonato de sodio y estabilizada con caprilato de sodio 0,004 M y acetiltriptófano 0,004 M. En la práctica de la invención pueden utilizarse otras formulaciones, incluidas las que modifican el porcentaje de PPF (por ejemplo, de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 10 %, de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 20 %, de aproximadamente el 20 % al 25 %, de aproximadamente el 25 % al 30 %) en solución, así como las concentraciones de disolvente y estabilizantes.
9. Fracciones de plasma de donantes de una edad específica
Otras realizaciones de la invención incluyen una fracción de proteínas plasmáticas derivada del plasma de individuos de determinados intervalos de edad. Una realización incluye PPF que se ha derivado del plasma de individuos jóvenes. En otra realización de la invención, los individuos jóvenes son de una sola edad específica o de un intervalo de edad específico. En otra realización, la edad media de los donantes es inferior a la del sujeto o inferior a la edad media de los sujetos tratados.
Determinadas realizaciones de la invención incluyen la reunión de sangre o plasma sanguíneo procedente de individuos de intervalos de edad específicos y el fraccionamiento del plasma sanguíneo como se ha descrito anteriormente para obtener una PPF En una realización alternativa de la invención, la fracción de proteínas plasmáticas o la fracción específica de proteínas plasmáticas se obtiene de individuos específicos que se ajustan a un intervalo de edad especificado.
10. Indicaciones
Las PPF en cuestión se utilizan en el tratamiento del deterioro de la capacidad cognitiva de los individuos, por ejemplo, trastornos cognitivos, incluidos (entre otros) demencia asociada a la edad, afecciones inmunológicas, cáncer y declive físico y funcional; y trastornos motores, tales como (entre otros) la enfermedad de Parkinson. Entre las personas que padecen o corren el riesgo de padecer un deterioro cognitivo asociado al envejecimiento y que se beneficiarán del tratamiento con la PPF en cuestión, por ejemplo, mediante los procedimientos descritos en el presente documento, se incluyen las personas de 50 años o más, por ejemplo, 60 años o más, 70 años o más, 80 años o más, 90 años o más y 100 años o más, es decir, entre 50 y 100 años de edad, por ejemplo, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 o 100 años, y que sufren un deterioro cognitivo asociado al proceso natural de envejecimiento, por ejemplo, un deterioro cognitivo leve (DCL). Algunos ejemplos de trastornos cognitivos debidos al envejecimiento natural son los siguientes:
a. Deterioro cognitivo leve (DCL). El deterioro cognitivo leve es una alteración leve de la cognición que se manifiesta como problemas de memoria o de otras funciones mentales, tales como planificar, seguir instrucciones o tomar decisiones, que han empeorado con el tiempo, mientras que la función mental general y las actividades cotidianas no están alteradas. Así pues, aunque no suele producirse una muerte neuronal significativa, las neuronas del cerebro que envejece son vulnerables a alteraciones subletales relacionadas con la edad en la estructura, la integridad sináptica y el procesamiento molecular en la sinapsis, todo lo cual deteriora la función cognitiva.
Entre los individuos que sufren o corren el riesgo de desarrollar un deterioro cognitivo asociado al envejecimiento y que se beneficiarán del tratamiento con el hemoderivado o la fracción de plasma en cuestión, por ejemplo, mediante los procedimientos descritos en el presente documento, también se incluyen individuos de cualquier edad que sufren un deterioro cognitivo debido a un trastorno asociado al envejecimiento; e individuos de cualquier edad a los que se les ha diagnosticado un trastorno asociado al envejecimiento que suele ir acompañado de un deterioro cognitivo, cuando el individuo aún no ha empezado a presentar síntomas de deterioro cognitivo. Algunos ejemplos de estos trastornos asociados al envejecimiento son los siguientes:
b. Enfermedad de Alzheimer. La enfermedad de Alzheimer es una pérdida progresiva e inexorable de la función cognitiva asociada a un número excesivo de placas seniles en la corteza cerebral y la materia gris subcortical, que también contiene b-amiloide y ovillos neurofibrilares formados por proteína tau. La forma común afecta a personas >60 años, y su incidencia aumenta a medida que avanza la edad. Representa más del 65 % de las demencias en las personas mayores.
Se desconoce la causa de la enfermedad de Alzheimer. La enfermedad es hereditaria en aproximadamente un 15 20 % de los casos. El resto, los llamados casos esporádicos, tienen algunos determinantes genéticos. La enfermedad tiene un patrón genético autosómico dominante en la mayoría de los casos de aparición temprana y en algunos de aparición tardía, pero una penetrancia variable en la vejez. Los factores medioambientales son objeto de una investigación activa.
En el curso de la enfermedad, se pierden sinapsis y, en última instancia, neuronas dentro de la corteza cerebral, el hipocampo y las estructuras subcorticales (incluida la pérdida selectiva de células en el núcleo basal de Meynert), el locus cerúleo y el nucleus raphae dorsalis. La utilización y la perfusión cerebral de glucosa se reducen en algunas zonas del cerebro (lóbulo parietal y corteza temporal en la fase inicial de la enfermedad, corteza prefrontal en la fase avanzada). Las placas neuríticas o seniles (compuestas por neuritas, astrocitos y células gliales alrededor de un núcleo amiloide) y los ovillos neurofibrilares (compuestos por filamentos helicoidales pareados) desempeñan un papel en la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer. Las placas seniles y los ovillos neurofibrilares aparecen con el envejecimiento normal, pero son mucho más frecuentes en las personas con enfermedad de Alzheimer.
c. Enfermedad de Parkinson.
La enfermedad de Parkinson (EP) es un trastorno del SNC idiopático, lentamente progresivo y degenerativo caracterizado por movimientos lentos y disminuidos (bradicinesia), rigidez muscular, temblor en reposo (distonía), congelación muscular e inestabilidad postural. Aunque en un principio se consideraba principalmente un trastorno motor, ahora se reconoce que la EP también causa depresión y cambios emocionales. La EP también puede afectar a la cognición, el comportamiento, el sueño, la función autonómica y la función sensorial. Las alteraciones cognitivas más comunes incluyen un deterioro de la atención y la concentración, la memoria de trabajo, la función ejecutiva, la producción del lenguaje y la función visoespacial. Una característica de la EP es que los síntomas relacionados con la reducción de la función motora suelen preceder a los relacionados con el deterioro cognitivo, lo que ayuda a diagnosticar la enfermedad.
En la enfermedad de Parkinson primaria, las neuronas pigmentadas de la sustancia negra, el locus cerúleo y otros grupos de células dopaminérgicas del tronco cerebral degeneran. Se desconoce la causa. La pérdida de neuronas de la sustancia negra, que se proyectan al núcleo caudado y al putamen, provoca el agotamiento del neurotransmisor dopamina en estas zonas. La enfermedad suele aparecer después de los 40 años, con una incidencia creciente en los grupos de mayor edad.
Aproximadamente 60 000 estadounidenses reciben el primer diagnóstico de enfermedad de Parkinson cada año y actualmente afecta a aproximadamente un millón de estadounidenses. Aunque la EP no es mortal en sí misma, sus complicaciones son la decimocuarta causa de muerte en Estados Unidos. En la actualidad, la EP no puede curarse, y el tratamiento suele prescribirse para controlar los síntomas, con cirugía en los casos más graves y tardíos.
Las opciones de tratamiento para la EP incluyen la administración de fármacos para ayudar a controlar los déficits motores. Estas opciones aumentan o sustituyen al neurotransmisor dopamina, cuyas concentraciones cerebrales son bajas en los pacientes con EP. Dichos medicamentos incluyen carbidopa/levodopa (que crean más dopamina en el cerebro); apomorfina, pramipexolol, ropinirol y rotingotina (agonistas dopaminérgicos); selegilina y rasagilina (inhibidores de la MAO-B que impiden la degradación de la dopamina); entacapona y tolcapona (inhibidores de la catecol-O-metiltransferasa [COMT] que aumentan la disponibilidad de levodopa en el cerebro); benztropina y trihexifenidilo (anticolinérgicos); y amantadina (controla el temblor y la rigidez). También se suele prescribir ejercicio/fisioterapia para ayudar a mantener la función física y mental.
Sin embargo, las opciones de tratamiento actuales, aunque tratan los síntomas de la EP, no son curativas y no consiguen prevenir la progresión de la enfermedad. Además, los medicamentos actuales tienden a perder eficacia en las fases avanzadas de la EP. El fármaco más recetado, la levodopa, suele provocar efectos adversos entre 5 y 10 años después de empezar a tomarlo. Estos efectos adversos pueden ser graves y dar lugar a fluctuaciones motoras y oscilaciones impredecibles del control motor entre dosis, así como espasmos/contracciones (discinesia) que son difíciles de controlar y resultan incluso tan incapacitantes como los propios síntomas de la EP Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad de nuevas terapias con nuevos mecanismos de acción que puedan administrarse junto con los medicamentos actuales para la EP o en combinación con ellos.
d. Parkinsonismo. El parkinsonismo secundario (también denominado enfermedad de Parkinson atípica o Parkinson plus) es el resultado de la pérdida o interferencia de la acción de la dopamina en los ganglios basales debido a otras enfermedades degenerativas idiopáticas, fármacos o toxinas exógenas. La causa más común de parkinsonismo secundario es la ingestión de fármacos antipsicóticos o reserpina, que producen parkinsonismo al bloquear los receptores de dopamina. Otras causas menos frecuentes son la intoxicación por monóxido de carbono o manganeso, la hidrocefalia, las lesiones estructurales (tumores, infartos que afectan al mesencéfalo o a los ganglios basales), el hematoma subdural y los trastornos degenerativos, incluida la degeneración nigroestriatal. Determinados trastornos, tales como la parálisis supranuclear progresiva (PSP), la atrofia multisistémica (AMS), la degeneración corticobasal (DCB) y la demencia con cuerpos de Lewy (DCL) pueden presentar síntomas de parkinsonismo antes de que puedan aparecer los síntomas cardinales necesarios para el diagnóstico específico, por lo que pueden calificarse como "parkinsonismo."
e. Demencia frontotemporal. La demencia frontotemporal (DFT) es una enfermedad resultante del deterioro progresivo del lóbulo frontal del cerebro. Con el tiempo, la degeneración puede avanzar hasta el lóbulo temporal. Segunda en prevalencia tras la enfermedad de Alzheimer (EA), la DFT representa el 20 % de los casos de demencia presenil. Los síntomas se clasifican en tres grupos según las funciones de los lóbulos frontal y temporal afectadas:
La variante conductual de la DFT (DFTvc), cuyos síntomas incluyen letargo y aspontaneidad, por un lado, y desinhibición, por otro; la afasia progresiva no fluente (APNF), en la que se observa un deterioro de la fluidez del habla debido a dificultades de articulación, errores fonológicos y/o sintácticos, pero se conserva la comprensión de las palabras; y la demencia semántica (DS), en la que los pacientes mantienen la fluidez con fonología y sintaxis normales, pero tienen dificultades crecientes para nombrar y comprender las palabras. Otros síntomas cognitivos comunes a todos los pacientes con DFT incluyen un deterioro de la función ejecutiva y de la capacidad de concentración. Otras capacidades cognitivas, tales como la percepción, las habilidades espaciales, la memoria y la praxis, suelen permanecer intactas. La DFT puede diagnosticarse mediante la observación de una atrofia reveladora del lóbulo frontal y/o del lóbulo temporal anterior en resonancias magnéticas estructurales.
Existen varias formas de DFT, cualquiera de las cuales puede ser tratada o prevenida usando los procedimientos y composiciones en cuestión. Por ejemplo, una forma de demencia frontotemporal es la demencia semántica (DS). La DS se caracteriza por una pérdida de memoria semántica tanto en el ámbito verbal como en el no verbal. Los pacientes con DS suelen presentar dificultades para encontrar palabras. Los signos clínicos incluyen afasia fluente, anomia, deterioro de la comprensión del significado de las palabras y agnosia visual asociativa (incapacidad para emparejar imágenes u objetos semánticamente relacionados). A medida que la enfermedad progresa, suelen observarse cambios en el comportamiento y la personalidad similares a los observados en la demencia frontotemporal, aunque se han descrito casos de demencia semántica "pura" con pocos síntomas conductuales tardíos. La resonancia magnética estructural muestra un patrón característico de atrofia en los lóbulos temporales (predominantemente a la izquierda), con mayor afectación inferior que superior y mayor atrofia del lóbulo temporal anterior que del posterior.
Como otro ejemplo, otra forma de demencia frontotemporal es la enfermedad de Pick (EP). Una característica definitoria de la enfermedad es la acumulación de proteínas tau en las neuronas, que se acumulan en agregados esféricos que se tiñen con plata conocidos como "cuerpos de Pick" Los síntomas incluyen pérdida del habla (afasia) y demencia. Los pacientes con disfunción orbitofrontal pueden volverse agresivos y presentan un comportamiento social impropio. Pueden robar o presentar comportamientos estereotipados obsesivos o repetitivos. Los pacientes con disfunción frontal dorsomedial o dorsolateral pueden presentar despreocupación, apatía o disminución de la espontaneidad. Los pacientes pueden demostrar una ausencia de autocontrol, una autoconciencia anómala y una incapacidad para comprender el significado. Los pacientes con pérdida de materia gris en la corteza orbitofrontal posterolateral bilateral y en la ínsula anterior derecha pueden presentar cambios en las conductas alimentarias, tales como un gusto patológico por lo dulce. Los pacientes con una pérdida más focal de materia gris en la corteza orbitofrontal anterolateral pueden desarrollar hiperfagia. Aunque algunos de los síntomas pueden aliviarse inicialmente, la enfermedad progresa y los pacientes suelen morir en un plazo de dos a diez años.
f. Enfermedad de Huntington. La enfermedad de Huntington (EH) es un trastorno neurodegenerativo progresivo hereditario caracterizado por el desarrollo de anomalías emocionales, conductuales y psiquiátricas; pérdida del funcionamiento intelectual o cognitivo; y anomalías del movimiento (alteraciones motoras). Los signos clásicos de la EH incluyen el desarrollo de corea (movimientos involuntarios, rápidos, irregulares y espasmódicos que pueden afectar a la cara, los brazos, las piernas o el tronco), así como un declive cognitivo que incluye la pérdida gradual del procesamiento del pensamiento y de las capacidades intelectuales adquiridas. Puede haber alteraciones de la memoria, el pensamiento abstracto y el sentido de la realidad; percepciones inadecuadas del tiempo, el lugar o la identidad (desorientación); aumento de la agitación; y cambios de personalidad (desintegración de la personalidad). Aunque los síntomas suelen hacerse evidentes durante la cuarta o quinta décadas de la vida, la edad de aparición es variable y oscila entre la primera infancia y la edad adulta tardía (por ejemplo, 70 u 80 años).
La EH se transmite dentro de las familias como un rasgo autosómico dominante. El trastorno se produce como resultado de secuencias anormalmente largas o "repeticiones" de instrucciones codificadas dentro de un gen del cromosoma 4 (4p16.3). La pérdida progresiva de la función del sistema nervioso asociada a la EH es el resultado de la pérdida de neuronas en determinadas zonas del cerebro, incluidos los ganglios basales y la corteza cerebral.
g. Esclerosis lateral amiotrófica. La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurológica que progresa con rapidez y que siempre es mortal, que ataca a las neuronas motoras. La debilidad y atrofia muscular y los signos de disfunción de las células del asta anterior se observan inicialmente con mayor frecuencia en las manos y con menor frecuencia en los pies. El lugar de aparición es aleatorio y la progresión es asimétrica. Los calambres son frecuentes y pueden preceder a la debilidad. En raras ocasiones, un paciente sobrevive 30 años; el 50 % muere a los 3 años de la aparición, el 20 % vive 5 años y el 10 % vive 10 años.
Las características diagnósticas incluyen aparición en la edad adulta media o tardía y afectación motora progresiva y generalizada sin anomalías sensoriales. Las velocidades de conducción nerviosa son normales hasta una fase avanzada de la enfermedad. Estudios recientes han documentado también la presencia de alteraciones cognitivas, en concreto una reducción de la memoria verbal inmediata, la memoria visual, el lenguaje y la función ejecutiva.
Se ha notificado una disminución de la superficie del cuerpo celular, del número de sinapsis y de la longitud sináptica total incluso en neuronas de aspecto normal de pacientes con ELA. Se ha sugerido que cuando la plasticidad de la zona activa alcanza su límite, una pérdida continuada de sinapsis puede conducir a un deterioro funcional. Estimular la formación de nuevas sinapsis o prevenir la pérdida de sinapsis puede mantener la función neuronal en estos pacientes.
h. Esclerosis múltiple. La esclerosis múltiple (EM) se caracteriza por diversos síntomas y signos de disfunción del SNC, con remisiones y exacerbaciones recurrentes. Los síntomas reveladores más frecuentes son parestesias en una o más extremidades, en el tronco o en un lado de la cara; debilidad o torpeza de una pierna o una mano; o alteraciones visuales, por ejemplo, ceguera parcial y dolor en un ojo (neuritis óptica retrobulbar), visión borrosa o escotomas. Entre las deficiencias cognitivas más comunes se encuentran las alteraciones de la memoria (adquisición, retención y recuperación de información nueva), la atención y la concentración (sobre todo la atención dividida), el procesamiento de la información, las funciones ejecutivas, las funciones visoespaciales y la fluidez verbal. Los primeros síntomas habituales son parálisis ocular que provoca visión doble (diplopía), debilidad transitoria de una o más extremidades, ligera rigidez o fatiga atípica de una extremidad, pequeños trastornos de la marcha, dificultad para controlar la vejiga, vértigo y trastornos emocionales leves; todos ellos indican una afectación dispersa del SNC y a menudo se producen meses o años antes de que se reconozca la enfermedad. El exceso de calor puede acentuar los síntomas y signos.
El curso es muy variado, impredecible y, en la mayoría de los pacientes, remitente. Al principio, los episodios pueden estar separados por meses o años de remisión, especialmente cuando la enfermedad comienza con una neuritis óptica retrobulbar. Sin embargo, algunos pacientes sufren ataques frecuentes y quedan incapacitados con rapidez; para unos pocos, el curso puede progresar con rapidez.
i. Glaucoma. El glaucoma es una enfermedad neurodegenerativa frecuente que afecta a las células ganglionares de la retina (CGR). Las pruebas apoyan la existencia de programas de degeneración compartimentados en las sinapsis y las dendritas, incluidas las CGR. Pruebas recientes indican también una correlación entre el deterioro cognitivo en los adultos mayores y el glaucoma (Yochim B.P,et al.Prevalence of cognitive impairment, depression, and anxiety symptoms among older adults with glaucoma, J. Glaucoma., 2012, 21(4):250-254).
j. Distrofia miotónica. La distrofia miotónica (DM) es un trastorno multisistémico autosómico dominante caracterizado por debilidad muscular distrófica y miotonía. El defecto molecular es una repetición trinucleotídica expandida (CTG) en la región no traducida 3' del gen de la miotoninproteína cinasa en el cromosoma 19q. Los síntomas pueden aparecer a cualquier edad y la gama de gravedad clínica es amplia. La miotonía es notable en los músculos de la mano, y la ptosis es común incluso en los casos leves. En los casos graves, se produce una marcada debilidad muscular periférica, a menudo con cataratas, calvicie prematura, facies de hacha, arritmias cardiacas, atrofia testicular y anomalías endocrinas (por ejemplo, diabetes mellitus). El retraso mental es frecuente en las formas congénitas graves, mientras que en las formas adultas más leves del trastorno se observa un declive de las funciones cognitivas frontales y temporales relacionado con el envejecimiento, sobre todo del lenguaje y las funciones ejecutivas. Las personas gravemente afectadas mueren a los 50 años.
k. Demencia. La demencia describe una clase de trastornos que presentan síntomas que afectan a las capacidades de pensamiento y sociales con la gravedad suficiente para interferir en la actividad diaria. Otros casos de demencia, además de la demencia observada en las últimas fases de los trastornos asociados al envejecimiento comentados anteriormente, incluyen la demencia vascular y la demencia con cuerpos de Lewy, descrita más adelante.
En la demencia vascular, o "demencia multiinfarto", el deterioro cognitivo está causado por problemas en el suministro de sangre al cerebro, normalmente por una serie de infartos menores, o, a veces, un gran infarto precedido o seguido de otros infartos menos intensos. Las lesiones vasculares pueden ser el resultado de una enfermedad cerebrovascular difusa, tal como la enfermedad de vasos pequeños, o de lesiones focales, o de ambas. Los pacientes que sufren demencia vascular presentan deterioro cognitivo, de forma aguda o subaguda, tras un acontecimiento cerebrovascular agudo, tras el cual se observa un declive cognitivo progresivo. Las alteraciones cognitivas son similares a las observadas en la enfermedad de Alzheimer, incluidas las alteraciones del lenguaje, la memoria, el procesamiento visual complejo o la función ejecutiva, aunque los cambios relacionados en el cerebro no se deben a la patología de la EA, sino a la reducción crónica del flujo sanguíneo en el cerebro, que acaba provocando demencia. La obtención de neuroimágenes por tomografía computarizada por emisión monofotónica ("single photon emission computed tomography", SPECT) y tomografía por emisión de positrones ("positron emission tomography", PET) puede utilizarse para confirmar el diagnóstico de demencia multiinfarto, junto con evaluaciones que incluyan el examen del estado mental.
La demencia con cuerpos de Lewy (DCL, también conocida con otros nombres, tales como demencia por cuerpos de Lewy, enfermedad difusa con cuerpos de Lewy, enfermedad cortical con cuerpos de Lewy y demencia senil de tipo Lewy) es un tipo de demencia caracterizada desde el punto de vista anatómico por la presencia de cuerpos de Lewy (aglomeraciones de las proteínas alfa-sinucleína y ubiquitina) en las neuronas, detectables en la histología cerebralpost mortem.Su característica principal es el declive cognitivo, en concreto, del funcionamiento ejecutivo. El estado de alerta y la memoria a corto plazo aumentarán y disminuirán.
Las alucinaciones visuales persistentes o recurrentes con imágenes vívidas y detalladas suelen ser un síntoma diagnóstico temprano. La d Cl se confunde a menudo en sus primeras fases con la enfermedad de Alzheimer y/o la demencia vascular, aunque, mientras que la enfermedad de Alzheimer suele comenzar de forma bastante gradual, la DCL suele tener un inicio rápido o agudo. Los síntomas de la DCL también incluyen síntomas motores similares a los del Parkinson. La DCL se distingue de la demencia que a veces aparece en la enfermedad de Parkinson por el lapso de tiempo en el que aparecen los síntomas de demencia en relación con los síntomas de Parkinson. La enfermedad de Parkinson con demencia (EPD) sería el diagnóstico cuando el inicio de la demencia se produce más de un año después de la aparición del Parkinson. La DCL se diagnostica cuando los síntomas cognitivos comienzan al mismo tiempo o en el plazo de un año tras los síntomas de Parkinson.
l. Parálisis supranuclear progresiva. La parálisis supranuclear progresiva (PSP) es un trastorno cerebral que causa problemas graves y progresivos de control de la marcha y el equilibrio, junto con complejos movimientos oculares y problemas de pensamiento. Uno de los signos clásicos de la enfermedad es la incapacidad para dirigir los ojos correctamente, que se produce debido a lesiones en la zona del cerebro que coordina los movimientos oculares. Algunas personas describen este efecto como un desenfoque. Los individuos afectados suelen mostrar alteraciones del estado de ánimo y del comportamiento, incluidas depresión y apatía, así como demencia leve progresiva. El nombre largo del trastorno indica que la enfermedad comienza lentamente y sigue empeorando (progresiva), y causa debilidad (parálisis) al dañar determinadas partes del cerebro situadas sobre unas estructuras del tamaño de un guisante llamadas núcleos que controlan los movimientos oculares (supranucleares). La PSP se describió por primera vez como un trastorno distinto en 1964, cuando tres científicos publicaron un artículo en el que distinguían la enfermedad de la de Parkinson. A veces se denomina síndrome de Steele-Richardson-Olszewski, que refleja los nombres combinados de los científicos que definieron el trastorno. Aunque la PSP empeora progresivamente, nadie muere a causa de la propia PSP
m. Fragilidad. El síndrome de fragilidad ("fragilidad") es un síndrome geriátrico caracterizado por un declive funcional y físico que incluye disminución de la movilidad, debilidad muscular, lentitud física, escasa resistencia, baja actividad física, desnutrición y pérdida involuntaria de peso. Este declive suele ir acompañado y ser consecuencia de enfermedades, tales como la disfunción cognitiva y el cáncer. Sin embargo, la fragilidad puede producirse incluso sin enfermedad. Las personas que padecen fragilidad tienen un mayor riesgo de pronóstico negativo por fracturas, caídas accidentales, discapacidad, comorbilidad y mortalidad prematura (C. Buigues,et al.,Effect of a Prebiotic Formulation on Frailty Syndrome: A Randomized, Double-Blind Clinical Trial, Int. J. Mol. Sci., 2016, 17, 932). Además, los individuos que padecen fragilidad tienen una mayor incidencia de gastos sanitarios más elevados(Id.).
Los síntomas habituales de fragilidad pueden ser determinados por algunos tipos de pruebas. Por ejemplo, la pérdida de peso involuntaria implica una pérdida de al menos 4,5 kg o superior al 5 % del peso corporal en el año precedente; la debilidad muscular puede determinarse por la reducción de la fuerza de prensión en el 20 % más bajo del valor de referencia (ajustado por sexo e IMC); la lentitud física puede basarse en el tiempo necesario para caminar una distancia de 4,5 m; la escasa resistencia puede determinarse por la autodeclaración de agotamiento del individuo; y la escasa actividad física puede medirse utilizando un cuestionario normalizado (Z. Palaceet al.,The Frailty Syndrome, Today's Geriatric Medicine, 7(1), en 18 (2014)).
En algunas realizaciones, las composiciones en cuestión se utilizan para ralentizar la progresión del deterioro o afección cognitiva asociada al envejecimiento. En otras palabras, las capacidades o condiciones cognitivas del individuo disminuirán más lentamente tras el tratamiento con los procedimientos divulgados que antes o en ausencia de tratamiento con los procedimientos divulgados. En algunos de estos casos, los procedimientos de tratamiento en cuestión incluyen la medición de la progresión de la capacidad cognitiva o la disminución de los síntomas después del tratamiento, y la determinación de que la progresión del deterioro se ha reducido. En algunos de estos casos, la determinación se realiza comparando con una referencia, por ejemplo, la tasa de disminución en el individuo antes del tratamiento, por ejemplo, tal como se determina midiendo las capacidades cognitivas o las condiciones previas en dos o más puntos temporales antes de la administración del hemoderivado en cuestión.
Las composiciones en cuestión también pueden usarse en la estabilización de las capacidades o condiciones cognitivas de un individuo, por ejemplo, un individuo que sufre de declive cognitivo asociado al envejecimiento. Por ejemplo, el individuo puede mostrar cierto deterioro cognitivo asociado al envejecimiento, y la progresión del deterioro cognitivo observada antes del tratamiento con los procedimientos divulgados se detendrá tras el tratamiento con los procedimientos divulgados.
Las composiciones en cuestión también pueden usarse en la reducción del deterioro cognitivo en un individuo que sufre de un deterioro asociado al envejecimiento. En otras palabras, la capacidad afectada mejora en el individuo tras el tratamiento con los procedimientos en cuestión. Por ejemplo, la capacidad cognitiva en el individuo se incrementa, por ejemplo, en 2 veces o más, en 5 veces o más, en 10 veces o más, en 15 veces o más, en 20 veces o más, en 30 veces o más, o en 40 veces o más, incluidas en 50 veces o más, en 60 veces o más, en 70 veces o más, en 80 veces o más, en 90 veces o más, o en 100 veces o más después del tratamiento con los procedimientos en cuestión, en relación con la capacidad cognitiva que se observa en el individuo antes del tratamiento con los procedimientos en cuestión.
En algunos casos, el tratamiento con los procedimientos y composiciones en cuestión restablece la capacidad cognitiva en el individuo que sufre de declive cognitivo asociado al envejecimiento, por ejemplo, al nivel que presentaba el individuo cuando tenía aproximadamente 40 años o menos. En otras palabras, se anula el deterioro cognitivo.
Procedimientos de diagnóstico y seguimiento para comprobar la mejora (no forma parte de la invención)
En algunos casos, entre la diversidad de procedimientos para diagnosticar y realizar el seguimiento de la progresión de la enfermedad y la mejora de la enfermedad cognitiva, los siguientes tipos de evaluaciones se utilizan solos o en combinación con sujetos que padecen una enfermedad neurodegenerativa, según se desee. Los siguientes tipos de procedimientos se presentan como ejemplos y no se limitan a los procedimientos mencionados. Se puede utilizar cualquier procedimiento oportuno para realizar el seguimiento de la enfermedad, según se desee.
a. Cognición general
Las realizaciones de los procedimientos divulgados en el presente documento comprenden además procedimientos de seguimiento del efecto de un medicamento o tratamiento en un sujeto para tratar el deterioro cognitivo y/o la demencia relacionada con la edad, comprendiendo el procedimiento la comparación de la función cognitiva antes y después del tratamiento. Los expertos en la materia reconocen que existen procedimientos bien conocidos para evaluar la función cognitiva. Por ejemplo, y no a modo de limitación, el procedimiento puede comprender la evaluación de la función cognitiva basada en la historia clínica, los antecedentes familiares, los exámenes físicos y neurológicos realizados por médicos especializados en demencia y función cognitiva, las pruebas de laboratorio y la evaluación neuropsicológica. Otras realizaciones incluyen la evaluación de la consciencia, por ejemplo, mediante la escala de coma de Glasgow (EMV); el examen del estado mental, incluida el test mental abreviado ("abbreviated mental test score", AMTS) o el miniexamen del estado mental ("mini-mental state examination", MMSE) (Folsteinet al.,J. Psychiatr. Res., 1975, 12:1289-198); la evaluación global de las funciones superiores; el cálculo de la presión intracraneal, por ejemplo, mediante fundoscopia. En una realización, el seguimiento del efecto sobre el deterioro cognitivo y/o la demencia relacionada con la edad incluye una mejora de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 puntos utilizando la escala de evaluación de la enfermedad de Alzheimer-Subescala cognitiva ("Alzheimer's Disease Assessment Scale-Cognitive Subscale", ADAS-COG).
En una realización, los exámenes del sistema nervioso periférico pueden utilizarse para evaluar la función cognitiva, incluido cualquiera de los siguientes: sentido del olfato, campos visuales y agudeza, movimientos oculares y pupilas (simpáticos y parasimpáticos), función sensorial de la cara, fuerza de los músculos faciales y de la cintura escapular, audición, gusto, movimiento y reflejo faríngeo, movimientos de la lengua, que pueden ensayarse individualmente (por ejemplo, la agudeza visual puede ensayarse mediante una tabla de Snellen; un martillo de reflejos utilizado para probar los reflejos, incluido el tendón del masetero, el bíceps y el tríceps, el tendón del tobillo y el plantar (es decir, el signo de Babinski); la fuerza muscular, a menudo en la escala MRC de 1 a 5; el tono muscular y los signos de rigidez.
b. Enfermedad de Parkinson
Las realizaciones de los procedimientos divulgados en el presente documento comprenden además procedimientos de seguimiento del efecto de un medicamento o tratamiento en un sujeto para tratar el deterioro motor, comprendiendo el procedimiento la comparación de la función motora antes y después del tratamiento. Los expertos en la materia reconocen que existen procedimientos bien conocidos para evaluar la función motora. Por ejemplo, y no a modo de limitación, el procedimiento puede comprender la evaluación de la función motora basada en la historia clínica, los antecedentes familiares, los exámenes físicos y neurológicos realizados por médicos especializados en neurodegeneración y deterioro motor, las pruebas de laboratorio y la evaluación neurodegenerativa. Otras realizaciones incluyen el empleo de las escalas de valoración que se comentan a continuación.
Se han utilizado varias escalas de valoración para evaluar la progresión de la EP Las escalas más utilizadas incluyen la escala unificada de evaluación de la enfermedad de Parkinson ("Unified Parkinson's Disease Rating Scale", UPDRS, que se introdujo en 1987) (J. Rehabil Res. Dev., 2012, 49(8): 1269-1276), y la escala de Hoehn y Yahr (Neurology, 1967, 17(5): 427-442). Otras escalas incluyen la escala UPDRS actualizada de la Sociedad de Trastornos del Movimiento (Movement Disorder Society,<m>D<s>) (MDS-UPDRS), así como la escala de actividades de la vida diaria ("Activities of Daily Living", ADL) de Schwab y England.
La escala UPDRS evalúa 31 cuestiones que se incluyen en tres subescalas: (1) mentalidad, comportamiento y estado de ánimo; (2) actividades de la vida diaria; y (3) exploración motora. La escala de Hoehn y Yahr clasifica la EP en cinco estadios con subestadios discretos: 0: sin signos de enfermedad; 1: síntomas en un solo lado; 1,5: síntomas en un solo lado, pero que afectan también al cuello y la columna vertebral; 2: síntomas en ambos lados sin alteración del equilibrio; 2,5: síntomas leves en ambos lados, con recuperación al realizar la prueba del "tirón"; 3: alteración del equilibrio con enfermedad de leve a moderada; 4: discapacidad grave, pero capacidad para caminar o permanecer de pie sin ayuda; y 5: necesidad de silla de ruedas o encamamiento si no recibe ayuda. La escala de Schwab y England clasifica la EP en varios porcentajes (desde el 100%, totalmente independiente, hasta el 10%, totalmente dependiente).
La función motora general puede evaluarse utilizando escalas ampliamente utilizadas, incluida la escala de función motora general ("General Motor Function", GMF). Ésta ensaya tres componentes: dependencia, dolor e inseguridad (Aberg A.C.,et al.(2003), Disabil. Rehabil., 6 de mayo de 2003, 25(9):462-472.). La función motora también puede evaluarse mediante sensores situados en el hogar o portátiles. Por ejemplo, la marcha (velocidad de locomoción, variabilidad, rigidez de las piernas) puede detectarse mediante un acelerómetro; la postura (inclinación del tronco) mediante un giroscopio; el movimiento de las piernas mediante un acelerómetro; el movimiento de las manos mediante un acelerómetro y un giroscopio; el temblor (amplitud, frecuencia, duración, asimetría) mediante un acelerómetro; la caída mediante un acelerómetro; la congelación de la marcha mediante un acelerómetro; la discinesia mediante un acelerómetro, un giroscopio y sensores inerciales; la bradicinesia (duración y frecuencia) mediante un acelerómetro y un giroscopio, y la afasia (tono) mediante un micrófono (Pastorino M.,et al.,Journal of Physics: Conference Series, 450 (2013), 012055).
c. Esclerosis múltiple
Además de realizar el seguimiento de la mejora de los síntomas asociados con la cognición, se puede realizar el seguimiento de la progresión o la mejora de la neurodegeneración asociada con la esclerosis múltiple (EM) usando técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica. A modo de ejemplo, y no de limitación, el seguimiento puede realizarse mediante técnicas tales como el control del líquido cefalorraquídeo (LCR); la resonancia magnética (RM) para detectar lesiones y el desarrollo de placas desmielinizantes; estudios de potenciales evocados; y el control de la marcha.
El análisis del LCR puede realizarse, por ejemplo, mediante punción lumbar para obtener la presión, el aspecto y el contenido del LCR. Los valores normales suelen ser los siguientes: presión (70-180 mm H20); aspecto transparente e incoloro; proteína total (15 60 mg/100 ml); la IgG constituye el 3-12 % de la proteína total; la glucosa está en 50-80 mg/100 ml; el recuento celular es 0-5 leucocitos y sin eritrocitos; cloruro (110-125 mEq/l). Los resultados anómalos pueden indicar la presencia o la progresión de la EM.
La resonancia magnética (RM) es otra técnica que puede realizarse para el seguimiento de la progresión y la mejora de la enfermedad. Los criterios para el seguimiento de la EM con RM suelen incluir la aparición de zonas dispersas de sustancia blanca anómala en el hemisferio cerebral y en zonas paraventriculares, lesiones presentes en el cerebelo y/o tronco cerebral, así como en las regiones cervical o torácica de la médula espinal.
Los potenciales evocados pueden utilizarse para realizar el seguimiento de la progresión y la mejora de la EM en sujetos. Los potenciales evocados miden la ralentización de los impulsos eléctricos, como en las respuestas evocadas visuales (REv ), las respuestas evocadas auditivas del tronco cerebral (REAT) y las respuestas evocadas somatosensoriales (RES). Las respuestas anómalas ayudan a indicar que existe una disminución de la velocidad de conducción en las vías sensoriales centrales.
El control de la marcha también puede utilizarse para realizar el seguimiento de la progresión y la mejora de la enfermedad en sujetos con EM. La EM suele ir acompañada de un deterioro de la movilidad y una marcha anómala debidos en parte a la fatiga. El control puede realizarse, por ejemplo, con el uso de dispositivos de control móviles que portan los sujetos (Moon, Y.,et al.,Monitoring gait in multiple sclerosis with novel wearable motion sensors, PLOS One, 12(2):e0171346 (2017)).
d. Enfermedad de Huntington
Además de realizar el seguimiento de la mejora de los síntomas asociados a la cognición, puede realizarse el seguimiento de la progresión o la mejora de la neurodegeneración asociada a la enfermedad de Huntington (EH) utilizando técnicas bien conocidas por los expertos en la materia. A modo de ejemplo, y no de limitación, el seguimiento puede realizarse mediante técnicas tales como la función motora; el comportamiento; la evaluación funcional; y la obtención de imágenes.
Algunos ejemplos de función motora que puede seguirse como indicación de progresión o mejora de la enfermedad incluyen corea y distonía, rigidez, bradicinesia, disfunción oculomotora y cambios en la marcha/equilibrio. Las técnicas para llevar a cabo el seguimiento de estos parámetros son bien conocidos por los expertos en la materia (véase Tang C.,et al.,Monitoring Huntington's disease progression through preclinical and early stages, Neurodegener. Dis. Manag., 2(4):421-435 (2012)).
Los efectos psiquiátricos de la EH pueden utilizarse para realizar el seguimiento de la progresión y mejora de la enfermedad. Por ejemplo, pueden realizarse diagnósticos psiquiátricos para determinar si el sujeto sufre depresión, irritabilidad, agitación, ansiedad, apatía y psicosis con paranoia(Id.).
La evaluación funcional también puede emplearse para realizar el seguimiento de la progresión o la mejora de la enfermedad. Se han descrito técnicas de evaluación funcional total (Id.), y a menudo disminuye un punto al año en algunos grupos de EH.
La RM o la PET pueden emplearse también para realizar el seguimiento de la progresión o la mejora de la enfermedad. Por ejemplo, hay una pérdida de neuronas de proyección estriatal en la EH, y el cambio en el número de estas neuronas puede ser seguido en los sujetos. Las técnicas para determinar el cambio neuronal en sujetos con EH incluyen la obtención de imágenes de la unión del receptor de dopamina D2 (Id.).
e. ELA
Además de realizar el seguimiento de la mejora de los síntomas asociados con la cognición, puede realizarse el seguimiento de la progresión o la mejora de la neurodegeneración asociada con la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) usando técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica. A modo de ejemplo, y no de limitación, el seguimiento puede realizarse mediante técnicas tales como evaluación funcional; determinación de la fuerza muscular; medición de la función respiratoria; medición de la pérdida de las neuronas motoras inferiores ("lower motor neuron", LMN); y medición de la disfunción de las neuronas motoras superiores ("upper motor neuron", UMN).
La evaluación funcional se puede realizar utilizando una escala funcional bien conocida por los expertos en la técnica, tal como la escala de valoración funcional de la ELA ("Amyotrophic Lateral Sclerosis Functional Rating Scale", ALSFRS-R), que evalúa los síntomas relacionados con la función bulbar, de las extremidades y respiratoria. El índice de cambio es útil para predecir la supervivencia, así como la progresión o mejora de la enfermedad. Otra medición incluye la evaluación combinada de función y supervivencia ("Combined Assessment of Function and Survival", CAFS), que clasifica los resultados clínicos de los sujetos combinando el tiempo de supervivencia con el cambio en la ALSFRS-R (Simon N.G.,et al.,Quantifying Disease Progression in Amyotrophic Lateral Sclerosis, Ann. Neurol., 76:643-657 (2014)).
La fuerza muscular puede ensayarse y cuantificarse mediante el uso de la valoración compuesta de la prueba muscular manual ("Manual Muscle Testing", m Mt ). Se trata de promediar las medidas adquiridas en varios grupos musculares utilizando la escala de graduación de la fuerza muscular del Consejo de Investigación Médica (Medical Research Council, MRC)(Id.).También puede utilizarse la dinamometría manual ("hand-held dynamometry", HHD), entre otras técnicas(Id.).
La función respiratoria puede llevarse a cabo mediante unidades de espirometría portátiles, utilizadas para obtener el valor de referencia de la capacidad vital forzada (CVF) para predecir la progresión o la mejora de la enfermedad. Además, se puede determinar la presión inspiratoria máxima, la presión inspiratoria nasal máxima ("sniff nasal inspiratory pressure", SNIP) y la CVF en decúbito supino, y se pueden utilizar para supervisar la progresión/mejora de la enfermedad(Id.).
La pérdida de neuronas motoras inferiores es otro parámetro que puede utilizarse para el seguimiento de la progresión o la mejora de la enfermedad en la ELA. El índice neurofisiológico puede determinarse midiendo los potenciales de acción muscular compuestos ("compound muscle action potentials", CMAP) en estudios de conducción nerviosa motora, entre cuyos parámetros se incluyen la amplitud CMAP y la frecuencia de la onda F(Id.y de Carvalho M,et al.,Nerve conduction studies in amyotrophic lateral sclerosis, Muscle Nerve, 23:344-352 (2000)). También puede calcularse el número de unidades de neuronas motoras inferiores (MUNE). En MUNE, se calcula el número de axones motores residuales que irrigan un músculo mediante el cálculo de la contribución de las unidades motoras individuales a la respuesta CMAP máxima, y se utiliza para determinar la progresión o la mejora de la enfermedad (Simon N.G.,et al., supra).Otras técnicas para determinar la pérdida de LMN incluyen las pruebas de excitabilidad nerviosa, la miografía de impedancia eléctrica y el uso de ultrasonidos musculares para detectar cambios en el grosor de los músculos(Id.).
La disfunción de las neuronas motoras superiores es otro parámetro que puede utilizarse para el seguimiento de la progresión o la mejora de la enfermedad en la ELA. Las técnicas para determinar la disfunción incluyen la realización de resonancias magnéticas o tomografías por emisión de positrones en el cerebro y la médula espinal, la estimulación magnética transcraneal y la determinación de los niveles de biomarcadores en el líquido cefalorraquídeo (LCR).
f. Glaucoma
Además de realizar el seguimiento de la mejora de los síntomas asociados con la cognición, también se puede realizar el seguimiento de la progresión o la mejora de la neurodegeneración asociada con el glaucoma utilizando técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica. A modo de ejemplo, y no de limitación, el seguimiento puede realizarse mediante técnicas tales como la determinación de la presión intraocular; la evaluación del disco óptico o de la cabeza del nervio óptico para detectar daños; pruebas de campo visual para detectar la pérdida de la visión periférica; y la obtención de imágenes del disco óptico y de la retina para el análisis topográfico.
g. Parálisis supranuclear progresiva (PSP)
Además de realizar el seguimiento de la mejora de los síntomas asociados con la cognición, también puede realizarse el seguimiento de la progresión o la mejora de la neurodegeneración asociada con la parálisis supranuclear progresiva (PSP) usando técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica. A modo de ejemplo, y no de limitación, el seguimiento puede realizarse mediante técnicas tales como la evaluación funcional (actividades de la vida diaria, o AVD); la evaluación motora; la determinación de síntomas psiquiátricos; y la resonancia magnética (RM) volumétrica y funcional.
El nivel de función de un sujeto en términos de independencia, dependencia parcial de otros o dependencia completa puede ser útil para determinar la progresión o la mejora de la enfermedad (véase Duff, K.,et al.,Functional impairment in progressive supranuclear palsy, Neurology, 80:380-384 (2013)). La escala de valoración de la parálisis supranuclear progresiva (PSPRS) es una escala de valoración que comprende veintiocho parámetros en seis categorías: actividades cotidianas (por historia); comportamiento; bulbar, motor ocular, motor de las extremidades y marcha/línea media. El resultado es una puntuación que oscila entre 0 y 100. Seis cuestiones se califican de 0 a 2 y veintidós de 0 a 4, para un total posible de 100. Las calificaciones PSPRS son medidas prácticas y predictores sólidos de la supervivencia de los pacientes. También son sensibles a la progresión de la enfermedad y útiles para seguir su avance o mejora (Golbe L.I.,et al.,A clinical rating scale for progressive supranuclear palsy, Brain, 130: 1552-1565 (2007)).
La sección de ADL de la UPDRS (escala unificada de evaluación de la enfermedad de Parkinson) también puede usarse para cuantificar la actividad funcional en sujetos con PSP (Duff K.,et al., supra).Del mismo modo, la escala de actividades de la vida diaria de Schwab y England (SE-ADL) puede utilizarse para evaluar la independencia(Id.).Además, las secciones de la función motora de la UPDRS son útiles como medida fiable para evaluar la progresión de la enfermedad en pacientes con PSP. La sección motora puede contener, por ejemplo, 27 medidas diferentes para cuantificar la función motora en pacientes con PSP. Algunos ejemplos son el temblor en reposo, la rigidez, el golpeteo de los dedos, la postura y la marcha. La progresión o la mejora de la enfermedad de un sujeto también puede evaluarse realizando una evaluación neuropsicológica de referencia completada por personal médico capacitado, la evaluación utilizando el inventario neuropsiquiátrico ("Neuropsychiatric Inventory", NPI) para determinar la frecuencia e intensidad de las anomalías del comportamiento (por ejemplo, delirios, alucinaciones, agitación, depresión, ansiedad, euforia, apatía, desinhibición, irritabilidad y comportamiento motor aberrante) (Id.).
La RM funcional (RMf) también puede emplearse para el seguimiento de la progresión y la mejora de la enfermedad. La RMf es una técnica que utiliza la RM para medir los cambios en la actividad cerebral en determinadas regiones del cerebro, normalmente basándose en el flujo sanguíneo hacia esas regiones. Se considera que el flujo sanguíneo se correlaciona con la activación de regiones cerebrales. Los pacientes con trastornos neurodegenerativos, tales como la PSP, pueden ser sometidos a pruebas físicas o mentales antes o durante su exploración en un escáner de RM. A modo de ejemplo, y no de limitación, las pruebas pueden ser un paradigma de control de la fuerza bien establecido en el que se pide a los pacientes que hagan fuerza con la mano más afectada por la PSP y se mide la contracción voluntaria máxima (CVM) mediante RMf inmediatamente después de que tenga lugar la prueba (Burciu, R.G.,et al.,Distinct patterns of brain activity in progressive supranuclear palsy and Parkinson's disease, Mov. Disord., 30(9):1248-58 (2015)).
La RM volumétrica es una técnica en la que los escáneres de RM determinan las diferencias de volumen en el volumen regional del cerebro. Esto puede hacerse, por ejemplo, contrastando distintos trastornos o determinando las diferencias de volumen de una región cerebral en un paciente a lo largo del tiempo. La RM volumétrica puede emplearse para determinar la progresión o la mejora de la enfermedad en trastornos neurodegenerativos, tales como la PSP. Esta técnica es bien conocida por los expertos en la materia (Messina D.,et al.,Patterns of brain atrophy in Parkinson's disease, progressive supranuclear palsy and multiple system atrophy, Parkinsonism and Related Disorders, 17(3): 172-176 (2011)). Algunos ejemplos de regiones cerebrales que pueden medirse son, entre otros, el volumen intracraneal, la corteza cerebral, la corteza cerebelosa, el tálamo, el caudado, el putamen, el pálido, el hipocampo, la amígdala, los ventrículos laterales, el tercer ventrículo, el cuarto ventrículo y el tronco encefálico.
h. Neurogénesis
La invención también contempla la PPF para su uso en el tratamiento o la mejora de la neurogénesis en un sujeto con neurogénesis en declive o deteriorada, que puede manifestarse, por ejemplo, a través de una función cognitiva reducida. Una realización de la invención incluye la PPF para su uso en el tratamiento de un sujeto con neurogénesis reducida o deteriorara mediante la administración de una PPF utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos.
Una realización de la invención también contempla determinar el nivel de neurogénesis antes, durante y/o después de la administración de la PPF. Se han descrito técnicas no invasivas para evaluar la neurogénesis (Tamura Yet al.,J. Neurosci. (2016), 36(31):8123-8131). La tomografía por emisión de positrones (PET) utilizada con el trazador [18F]FLT junto con el inhibidor del transportador BBB probenecid, permite la acumulación del trazador en regiones neurogénicas del cerebro. Estas imágenes permiten evaluar la neurogénesis en pacientes tratados por enfermedades neurodegenerativas.
i. Neuroinflamación
La invención también contempla la PPF para su uso en el tratamiento o la mejora de la neuroinflamación en un sujeto con neuroinflamación aumentada, que puede manifestarse, por ejemplo, a través de una función cognitiva reducida. Una realización de la invención incluye la PPF para su uso en el tratamiento de un sujeto con neuroinflamación mediante la administración de una PPF utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos.
Una realización de la invención también contempla determinar el nivel de neuroinflamación antes, durante y/o después de la administración de la PPF. Se han descrito técnicas no invasivas para evaluar la neuroinflamación, tales como la tomografía por emisión de positrones TSPO (TSPO PET) con 11C-PK11195 y otros trazadores similares (véase Vivash L.,et al.,J. Nucl. Med., 2016, 57: 165-168; y Janssen B.,et al.,Biochim. et Biophys. Acta, 2016, 425-441). Las técnicas invasivas para evaluar la neuroinflamación incluyen la extracción de líquido cefalorraquídeo y la detección, por ejemplo, de los niveles de expresión de marcadores o factores neuroinflamatorios, tales como (entre otros) prostaglandina E2, ciclooxigenasa-2 TNF-alfa, IL-6, IFN-gamma, IL-10, eotaxina, microglobulina beta-2, VEGF, factor neurotrófico derivado de la línea celular glial, quiotriosidasa-1, MMP-9, quimiocina 13 con motivo CXC, complejo terminal del complemento, proteína 1 similar a la quitinasa-3 y osteopontina (véase Vinther-Jensen T,et al.,Neurol. Neurimmunol. Neuroinflamm., 2016, 3(6): e287; y Mishraet al.,J. Neuroinflamm., 2017, 14:251).
12. Terapia combinada de células madre y administración de dosis en pulsos
En una realización de la invención, el sujeto se está sometiendo, se someterá o ha recibido terapia con células madre. Las células madre utilizadas en la terapia pueden ser células madre embrionarias, células madre no embrionarias, células madre pluripotentes inducidas ("induced pluripotent stem cells", iPSC), células madre de sangre de cordón umbilical, células madre de líquido amniótico y similares.
La terapia con células madre y las técnicas para llevarla a cabo son conocidas por los expertos en la materia (Andres R.H.,et al.,Brain, 2011, 134; 1777-1789; Daadi M.M.,et al.,Cell Transplant., 2013, 22(5):881-892; Horie N.,et al.,Stem Cells, 2011, 29(2):doi: 10.1002/stem.584; Thomsen G.M.,et al.,Stem Cells, 2018, doi: 10.1002/stem.2825; solicitudes de patente de EE. UU. n.os 09/973 198; 12/258210; 12/596884 y 13/290439).
13. Procedimientos de cribado de composiciones
También se proporcionan procedimientos para evaluar la actividad de las composiciones en el tratamiento del deterioro cognitivo o motor, la reducción de la neuroinflamación o el aumento de la neurogénesis. Dichos procedimientos incluyen los descritos en los ejemplos experimentales que figuran a continuación. Entre las composiciones que pueden someterse al cribado se incluyen composiciones biológicas (por ejemplo, proteínas, combinaciones de proteínas, anticuerpos, antagonistas de molécula pequeña); fracciones de plasma u otras composiciones sanguíneas. Los resultados de los procedimientos de cribado de composiciones incluyen, entre otros, los resultados de la inflamación/marcadores de la inflamación en el hipocampo (por ejemplo, giro dentado) u otras regiones del SNC; los resultados de la proliferación celular en el hipocampo u otras regiones del SNC; la supervivencia celular en el hipocampo u otras regiones del SNC; el destino celular (por ejemplo, astrocitos, nuevas neuronas) de las células neuroprogenitoras (CNP) en proliferación en el hipocampo u otras regiones del SNC; y la neurogénesis en el hipocampo u otras regiones del SNC.
Otras realizaciones de procedimientos de cribado de composiciones para la actividad en el tratamiento del deterioro cognitivo o motor, la reducción de la neuroinflamación o el aumento de la neurogénesis incluyen la determinación de los efectos agudos de las composiciones sobre la proliferación y la inflamación del hipocampo, que comprenden: de 5 a 7 dosis diarias consecutivas de BrdU con administración simultánea de 5 a 7 dosis diarias consecutivas de la composición sometida a cribado o control (dosis en pulsos) en roedores u otro modelo animal. Hasta 10 días (es decir, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, o 10 días) después de la conclusión de la administración de las dosis en pulsos de la composición sometida a cribado, se determina el número de células en el giro dentado mediante tinción con BrdU y se determina el porcentaje de superficie que muestra tinción con CD-68 (un indicador de la inflamación).
Otra realización de procedimientos de cribado de composiciones para la actividad en el tratamiento del deterioro cognitivo o motor, la reducción de la neuroinflamación o el aumento de la neurogénesis incluye la administración de BrdU durante 5 días consecutivos (una vez al día) antes de comenzar una pauta posológica de dosis en pulsos de 5 a 7 días de la composición que se está cribando o de control en roedores u otro modelo animal. Cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once o doce semanas después, se determina la supervivencia de las células del hipocampo como el número de células en el giro dentado teñidas con BrdU, se determina la neurogénesis como el número de células en el giro dentado teñidas con doblecortina (DCX), y se determina el destino celular de las células neuroprogenitoras que se convierten en astrocitos (asociados con el envejecimiento) o neuronas (no asociados con el envejecimiento) por la colocalización de BrdU con los marcadores GFAP o NeuN, respectivamente.
Otra realización de procedimientos de cribado de composiciones para la actividad en el tratamiento del deterioro cognitivo o motor, la reducción de la neuroinflamación o el aumento de la neurogénesis incluye la administración de BrdU y la composición que se está cribando o el control simultáneamente (y a diario) durante 5 a 7 días, y la determinación posterior del grado de neurogénesis mediante tinción con DCX en el hipocampo o el destino celular de las CNP en proliferación como se ha descrito anteriormente.
Otra realización de procedimientos de cribado de composiciones para la actividad en el tratamiento del deterioro cognitivo o motor, la reducción de la neuroinflamación, o el aumento de la neurogénesis incluyen la administración de una pauta posológica de dosis en pulsos de la composición que se está cribando o de control, y la determinación de la mejora en la función cognitiva o motora en roedores u otro modelo animal como se describe en los ejemplos siguientes.
14. Reactivos, dispositivos y kits (no forman parte de la invención)
También se proporcionan reactivos, dispositivos y kits de los mismos para practicar uno o más de los procedimientos descritos anteriormente. Los reactivos, dispositivos y kits en cuestión pueden variar enormemente.
Los reactivos y dispositivos de interés incluyen los mencionados anteriormente con respecto a los procedimientos de preparación de hemoderivados que contienen plasma para la transfusión a un sujeto que los necesite, por ejemplo, anticoagulantes, crioconservantes, tampones, soluciones isotónicas, etc.
Los kits también pueden comprender bolsas de recogida de sangre, tubos, agujas, tubos de centrifugación y similares. En otras realizaciones, los kits descritos en el presente documento incluyen dos o más recipientes del producto de plasma sanguíneo, tal como la fracción de proteínas plasmáticas, tales como tres o más, cuatro o más, cinco o más, incluidos seis o más recipientes del producto de plasma sanguíneo. En algunos casos, el número de recipientes distintos del producto de plasma sanguíneo en el kit puede ser 9 o más, 12 o más, 15 o más, 18 o más, 21 o más, 24 o más 30 o más, incluidos 36 o más, por ejemplo, 48 o más. Cada recipiente puede tener asociada información de identificación que incluya diversos datos sobre el producto de plasma sanguíneo contenido en el mismo, información de identificación que puede incluir uno o más de la edad del donante del producto de plasma sanguíneo, detalles de procesamiento relativos al producto de plasma sanguíneo, por ejemplo, si el producto de plasma se procesó para retirar proteínas por encima de un peso molecular medio (como se ha descrito anteriormente), detalles del grupo sanguíneo, etc. En algunos casos, cada recipiente del kit incluye información identificativa sobre el plasma sanguíneo contenido en el mismo, y la información identificativa incluye información sobre la edad del donante del producto de plasma sanguíneo, por ejemplo, la información identificativa proporciona datos confirmatorios relacionados con la edad del donante del producto de plasma sanguíneo (en la que dicha información identificativa puede ser la edad del donante en el momento de la extracción). En algunos casos, cada recipiente del kit contiene un producto de plasma sanguíneo procedente de un donante de una edad sustancialmente igual, es decir, todos los recipientes incluyen producto procedente de donantes que tienen sustancialmente la misma edad, si no la misma. Por edad sustancialmente igual se entiende que la edad de los diversos donantes de los que se obtienen los productos de plasma sanguíneo de los kits difiere entre ellos, en algunos casos, en 5 años o menos, tal como 4 años o menos, por ejemplo, 3 años o menos, incluidos 2 años o menos, tal como 1 año o menos, por ejemplo, 9 meses o menos, 6 meses o menos, 3 meses o menos, incluido 1 mes o menos. La información de identificación puede estar presente en cualquier componente adecuado del recipiente, tal como una etiqueta, un chip RFID, etc. La información de identificación puede ser leída por seres humanos, puede leerse por ordenador, etc., según se desee. Los recipientes pueden tener cualquier configuración adecuada. Aunque el volumen de los recipientes puede variar, en algunos casos los volúmenes oscilan entre 10 ml y 5000 ml, por ejemplo, entre 25 ml y 2500 ml, por ejemplo, entre 50 ml y 1000 ml, incluidos entre 100 ml y 500 ml. Los recipientes pueden ser rígidos o flexibles, y pueden fabricarse con cualquier material adecuado, por ejemplo, materiales poliméricos, incluidos materiales plásticos de calidad médica. En algunos casos, los recipientes tienen una configuración de bolsa. Además de los recipientes, dichos kits pueden incluir también dispositivos de administración, por ejemplo, tal como se ha descrito anteriormente. Los componentes de dichos kits pueden suministrarse en cualquier envase adecuado, por ejemplo, una caja o estructura análoga, configurada para contener los recipientes y otros componentes del kit.
Además de los componentes anteriores, los kits en cuestión incluirán instrucciones para practicar los procedimientos en cuestión. Estas instrucciones pueden estar presentes en los kits en cuestión en una diversidad de formas, una o más de las cuales pueden estar presentes en el kit. Una forma en la que pueden estar presentes estas instrucciones es en forma de información impresa en un medio o sustrato adecuado, por ejemplo, una o varias hojas de papel en las que esté impresa la información, en el embalaje del kit, en un prospecto, etc. Otro medio sería un soporte legible por ordenador, por ejemplo, un disquete, un<c>D, una unidad flash portátil, etc., en el que se haya grabado la información. Otro medio que puede estar presente es una dirección de sitio web que puede utilizarse a través de Internet para acceder a la información en un sitio remoto. En los kits puede haber cualquier medio conveniente.
15. Ejercicio
El ejercicio puede caracterizarse por una actividad aeróbica o anaeróbica, y puede implicar una actividad de elevada quema de calorías y una actividad de quema de calorías moderada. El ejercicio puede incluir entrenamiento de fuerza (por ejemplo, entrenamiento con pesas o ejercicios isométricos). El ejercicio también puede consistir, por ejemplo, en correr, montar en bicicleta, caminar, bailar, marchar, nadar, hacer yoga, taichí, ejercicios de equilibrio, flexiones de piernas, saltar a la comba, hacer surf, remar, rotar o flexionar los brazos o las piernas, trabajar en el jardín, limpiar, juegos activos, tales como los bolos, aeróbic, pilates y artes marciales.
Un régimen de ejercicios puede incluir la realización de un único ejercicio con una frecuencia determinada, o una combinación de ejercicios con una frecuencia determinada. La frecuencia puede ser de una, dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete veces por semana. La frecuencia puede variar de una semana a otra. El régimen de ejercicio puede tener el mismo nivel de intensidad y/o realizarse con la misma frecuencia que el practicado por el sujeto antes de la administración de las composiciones de la invención. El régimen de ejercicio también puede tener un nivel más alto de intensidad y/o realizarse con más frecuencia en comparación con los niveles que el sujeto practicaba antes de la administración de las composiciones de la invención. El régimen de ejercicio puede haber sido sugerido o prescrito por un profesional de la salud o de la forma física, o puede haberlo iniciado el propio sujeto.
16. Ejemplos experimentales
a. Ejemplo 1
Se administró plasma humano joven aclarado (plasma joven) o una PPF disponible en el mercado ("PPF1") a ratones inmunocomprometidos envejecidos (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). La PPF 1 es una PPF con aproximadamente un 88 % de albúmina humana normal (en relación con la proteína total), un 12 % de alfa y beta globulinas y no más de un 1 % de gammaglobulina, según lo determinado por electroforesis. Excepto cuando se indique lo contrario, la PPF1 se administra en los ejemplos del presente documentoin vivoutilizando una solución al 5 % (p/v, 50 g/l). Todos los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento de acuerdo con 4 criterios diferentes: puntuación de nido en la jaula de alojamiento, peso corporal inicial, distancia recorrida en campo abierto y porcentaje de tiempo en el centro del campo abierto. Tras la determinación de los grupos, se inyectó a los ratones por vía intraperitoneal (IP) BrdU (5-bromo-2'-desoxiuridina) formulado en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 150 mg/kg durante 5 días. A continuación, los ratones fueron inyectados por vía intravenosa (IV) 3 veces por semana con 150 pl de PPF1 durante 4 semanas. Las pruebas de comportamiento tuvieron lugar en las semanas 5 y 6, en las que los ratones recibieron 2 inyecciones por semana para evitar inyecciones durante los días de las pruebas. Los ratones recibieron eutanasia 24 horas después de la última inyección intravenosa, para un total de 16 inyecciones durante un periodo de 6 semanas. Dos cohortes adicionales de ratones fueron inyectadas por vía intravenosa (IV) durante siete días consecutivos con 150 pl de PPF1 o solución salina (dosis en pulsos). Las pruebas de comportamiento se realizaron en las semanas 5 y 6 al mismo tiempo que en el grupo de 3 veces por semana.
Los ensayos de comportamiento se analizaron utilizando el software CleverSys (Reston, VA). Se utilizó CleverSys TopScan V3.0 para seguir el comportamiento de los ratones en el laberinto cero, el laberinto de Barnes, el campo abierto y el laberinto en Y Los laberintos de Barnes fueron construidos por CleverSys. El medidor de fuerza de agarre fue diseñado y fabricado por Columbus Instruments (Columbus, OH). Las cámaras de laberinto en Y y de campo abierto se construyeron de acuerdo con las indicaciones de San Diego Instruments (San Diego, CA). El análisis histológico de las secciones del hipocampo se realizó en un microscopio de obtención de imágenes Leica (Buffalo Grove, IL), modelo DM5500B, con cámara de microscopio de campo claro/fluorescente en color DCF7000T
Pruebas de comportamiento: La figura 1A muestra que los grupos que recibieron la dosis en pulsos de PPF1 tendieron a aumentar la distancia recorrida en la prueba de campo abierto en comparación, tanto con el grupo de control de solución salina, como con el grupo tratado tres veces por semana con PPF1. Este resultado indica una tendencia hacia una mayor motilidad en el grupo de dosis en pulsos. La figura 1B muestra que los grupos que recibieron la dosis en pulsos de PPF1 tendieron a aumentar el porcentaje de tiempo pasado en el centro del campo abierto en comparación, tanto con el grupo de control de solución salina, como con el grupo tratado tres veces por semana con p PF1. Este resultado indica una tendencia a la disminución de la ansiedad en el grupo de dosis en pulsos.
Peso corporal: La figura 2 muestra el efecto de la PPF1 sobre el peso corporal. Los dos grupos tratados con PPF1 (mediante administración de dosis en pulsos o tres veces por semana) no mostraron efectos perjudiciales como resultado de la inyección.
Histología: La figura 3 muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en la capa granular del giro dentado. Hubo un aumento significativo de la neurogénesis entre el grupo tratado con dosis en pulsos de PPF1 en comparación con el grupo tratado tres veces por semana y el grupo con solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. * *p < 0,01 ANOVA unidireccional con análisisa posterioride comparaciones múltiples de Dunnett (n: solución salina = 8, dosis en pulsos de PPF1 = 10, PPF1 3 veces por semana = 10). La figura 4 muestra el número de células marcadas positivamente con BrdU en la capa granular del giro dentado de tres grupos de ratones tratados por separado. Se observó un aumento significativo de la supervivencia celular entre el grupo tratado con dosis en pulsos de PPF 1 en comparación con el grupo tratado tres veces por semana y el grupo tratado con solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. ****p< 0,0001, *p< 0,05 ANOVA unidireccional con análisisaposterioride comparaciones múltiples de Dunnett (n: solución salina = 8, PPF1 en pulsos = 10, PPF1 3 veces por semana = 10).
El análisis de las secciones del hipocampo se realizó en un microscopio de obtención de imágenes Leica (Buffalo Grove, IL), modelo DM5500B, con cámara de microscopio de campo claro/fluorescente en color DCF7000T. Tinción Ki67 Abcam (ab15580) a 1:500 y el anticuerpo secundario es anticonejo de cabra (Alex Fluor 555) (ab150090) a 1:300.
b. Ejemplo 2
Se administró plasma humano joven (YP) aclarado, plasma humano viejo (OP) o una PPF disponible en el mercado ("PPF1") a ratones inmunocomprometidos envejecidos (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj1/SzJ, "NSG"). Todos los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento de acuerdo con 4 criterios diferentes: puntuación de nido en la jaula de alojamiento, peso corporal inicial, distancia recorrida en campo abierto y porcentaje de tiempo en el centro del campo abierto. Tras la determinación de los grupos, se inyectó a los ratones por vía intraperitoneal (IP) BrdU formulado en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 150 mg/kg durante 5 días. A continuación, se inyectó a los ratones por vía intravenosa (IV): 1) Tres veces por semana durante 6 semanas ("3x/Semana"); 2) Tres veces en una semana solamente ("3x"); 3) 7 días en una semana con 150 pl de plasma humano joven aclarado o PPF1. A un grupo adicional de ratones se les administró solución salina en pulsos durante 7 días por vía intravenosa. El último grupo de ratones recibió plasma humano envejecido durante 3 veces en una semana o durante 7 días en una semana. Todos los ratones fueron sacrificados 6 semanas después del inicio de la administración de plasma joven o envejecido, PPF1 o vehículo.
Histología: La figura 5 muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en la capa granular del giro dentado de nueve grupos de ratones tratados por separado con plasma humano joven (YP), plasma humano viejo (OP), PPF1 o solución salina. Los ratones tratados con PPF1, ya sea con dosis en pulsos o tres veces por semana, mostraron un aumento de la neurogénesis en comparación con los otros grupos. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; *p < 0,05, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett. Tratamiento con PPF1 (en pulsos o 3 veces por semana) y tratamiento con solución salina (n: solución salina = 4, PPF1 en pulsos = 5, PPF1 3 veces por semana = 5, PPF1 3x = 4, YP en pulsos = 6, YP 3 veces por semana = 6, YP 3x = 4, A<p>en pulsos = 6, AP 3x = 6)
La figura 6 muestra el número de células marcadas positivamente con BrdU en la capa granular del giro dentado de nueve grupos de ratones tratados por separado con plasma humano joven (YP), plasma humano viejo (OP), PPF1 o solución salina. Los ratones tratados con PPF1 mostraron un aumento significativo de la supervivencia celular en comparación con los otros grupos, y los ratones tratados con PPF1 administrada en dosis en pulsos mostraron una diferencia significativa mayor que los ratones tratados con PPF1 administrada tres veces por semana. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; **p < 0,01,*p< 0,05, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett. Tratamiento con PPF1 (en pulsos o 3 veces por semana) y tratamiento con solución salina (n: solución salina = 4, PPF1 en pulsos = 5, PPF1 3 veces por semana = 5, PPF1 3x = 4, YP en pulsos = 6, YP 3 veces por semana = 6, YP 3x = 4, AP en pulsos = 6, AP 3x = 6).
c. Ejemplo 3
Se administró plasma humano joven (YP) aclarado, plasma humano viejo (OP) o una PPF disponible en el mercado ("PPF1") a ratones inmunocomprometidos envejecidos (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj1/SzJ, "NSG"). Los ratones fueron tratados con una pauta posológica de 7 dosis intravenosas (IV) diarias en 1 semana.
Todos los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento de acuerdo a 4 criterios diferentes: puntuación de nido en la jaula de alojamiento, peso corporal inicial, distancia recorrida en campo abierto y porcentaje de tiempo en el centro del campo abierto. Tras la determinación de los grupos, se inyectó a los ratones por vía intraperitoneal (IP) BrdU formulado en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 150 mg/kg durante 5 días. A todos los ratones se les inyectó por vía intravenosa (IV) durante siete días consecutivos (lo que se conoce como administración de dosis en pulsos) 150 ul de plasma humano joven o envejecido, PPF1 o solución salina. Tres semanas después de completar la administración de las dosis en pulsos, se inyectó a los ratones por vía intraperitoneal (IP) EdU (5-etil-2'-desoxiuridina) formulado en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 30 mg/kg durante 5 días. El laberinto de Barnes se realizó durante la semana 8 (6 semanas después del final de la administración de las dosis en pulsos).
Los ensayos de comportamiento se analizaron utilizando el software CleverSys (Reston, VA). Se utilizó CleverSys TopScan V3.0 para seguir el comportamiento del ratón en el laberinto de Barnes. El laberinto de Barnes fue construido por CleverSys. El análisis de las secciones del hipocampo se realizó en un microscopio de obtención de imágenes Leica (Buffalo Grove, IL), modelo DM5500B, con cámara de microscopio de campo claro/fluorescente en color DCF7000T.
Pruebas de comportamiento: La figura 7 muestra la latencia para encontrar el orificio diana por prueba y día para cada grupo de tratamiento según la prueba del laberinto de Barnes. Los ratones tratados con la dosis en pulsos de PPF1 mostraron una disminución significativa de la latencia de las pruebas en varias sesiones de pruebas individuales, lo que indica una mejora de la capacidad cognitiva.*p <0,05 media ± e.e.m; prueba de lat paradatos independientes (n: solución salina = 13, PPF1 = 13, AP = 14, YP = 14).
Histología: La figura 8 muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en la capa granular del giro dentado de cuatro grupos de ratones tratados por separado con plasma humano joven (YP), plasma humano viejo (OP), PPF1 o solución salina. Se observaron aumentos significativos de la neurogénesis en PPF1 en dosis en pulsos de PPF1 y plasma humano joven en dosis en pulsos en comparación con el tratamiento con solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.;****p < 0,0001, **p < 0,01, ANOVA unidireccional con análisisa posterioride comparaciones múltiples de Dunnett (n: solución salina = 14, PPF1 = 14, AP = 14, YP = 15)
La figura 9 muestra el número de células marcadas con BrdU en la capa granular del giro dentado de ratones tratados con plasma humano joven (YP), plasma humano viejo (OP), PPF1 o solución salina. Se produjeron aumentos significativos de la supervivencia celular en PPF1 en dosis en pulsos e YP en dosis en pulsos en comparación con el tratamiento con solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.;****p < 0,0001; media ± e.e.m.; ANOVA unidireccional con análisisa posterioride comparaciones múltiples de Dunnett (n: solución salina = 14, PPF1 = 14, AP = 14, YP = 15).
d. Ejemplo 4
Se administró una PPF disponible en el mercado ("PPF1") a ratones inmunocomprometidos envejecidos (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). Se trató a ratones de 12 meses de edad con una pauta posológica de 7 dosis intravenosas (IV) diarias por la vena de la cola en 1 semana. Tras el tratamiento, se permitió a los ratones permanecer en el entorno de su jaula de alojamiento durante 4,5 semanas antes de realizar las pruebas de comportamiento. Todas las inyecciones y pruebas de comportamiento tuvieron lugar en el transcurso de 7 semanas para cada cohorte y se llevaron a cabo en un periodo total de 9 semanas. Todos los ratones recibieron BrdU por vía intraperitoneal durante 5 días antes de la primera dosis. Los ratones fueron sacrificados un día después de la conclusión de la última prueba de comportamiento.
Los ensayos de comportamiento se analizaron utilizando el software CleverSys (Reston, VA). Se utilizó CleverSys TopScan V3.0 para seguir el comportamiento del ratón en el laberinto Y
Pruebas de comportamiento: La figura 10 muestra el porcentaje del número total de entradas realizadas en la rama familiar o en la rama novedosa del total de entradas realizadas en cada rama por grupo de tratamiento en la prueba del laberinto en Y. Ratones de doce meses de edad fueron tratados con dosis en pulsos de solución salina, PPF1, o 5x PPF1 concentrado. Los ratones tratados con dosis en pulsos de PPF1 y PPF1 (5x) mostraron un aumento significativo en la entrada en la rama novedosa en comparación con la cantidad de entradas en la rama novedosa por los ratones tratados con solución salina, lo que indica una mejora en la cognición. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. *p < 0,05, prueba de latpara datos emparejados.
La figura 11 muestra la proporción de intentos en la rama novedosa frente a la rama familiar del laberinto en Y para cada grupo de tratamiento. Ratones de doce meses de edad fueron tratados con dosis en pulsos de solución salina, PPF1, o 5x PPF1 concentrado. Los ratones tratados con dosis en pulsos de PPF1 y PPF1 (5x) mostraron ambos una tendencia a una mayor entrada en la rama novedosa en comparación con los ratones tratados con solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.
Histología: La figura 12 muestra el número de células marcadas positivamente con BrdU en todas las secciones del hipocampo. Los ratones tratados con dosis en pulsos de PPF1 mostraron una tendencia a una mayor supervivencia celular en comparación con los ratones tratados con solución salina y PPF 1 (5x). Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.
La figura 13 muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en todas las secciones del hipocampo. Los ratones tratados con dosis en pulsos de PPF1 y p PF1 (5x) mostraron una tendencia al aumento de la neurogénesis en comparación con los ratones tratados con solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.
e. Ejemplo 5
Se administró PPF disponible en el mercado ("PPF1") a ratones inmunocomprometidos envejecidos (10,5 meses de edad) (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). Todos los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento de acuerdo con cuatro criterios diferentes: puntuación de nido en la jaula de alojamiento, peso corporal inicial, distancia recorrida en campo abierto y porcentaje de tiempo en el centro del campo abierto. Tras la determinación de los grupos, se inyectó a los ratones por vía intraperitoneal (IP) BrdU formulado en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 150 mg/kg durante 5 días. A continuación, se inyectó PPF1 por vía intravenosa (IV) a los ratones durante: 1) 5 días consecutivos [PPF1-5d], 2) 7 días consecutivos [PPF1-7d], 3) 5 días consecutivos con 5 días consecutivos adicionales de dosis reforzada (B) 6 semanas después de la finalización de la dosis inicial [PPF1-5d-B], 4) 7 días consecutivos con 7 días consecutivos adicionales de dosis reforzada (B) 6 semanas después de la finalización de la dosis inicial [PPF1-7d-B]. A un grupo adicional se le inyectó solución salina durante 7 días consecutivos con otros 7 días consecutivos de administración 6 semanas después de la finalización de la administración inicial [SAL-7d-B]. Cinco semanas después de la administración de las dosis en pulsos, se inyectó por vía intraperitoneal a los ratones EdU (5-etil-2'-desoxiuridina) formulado en PBS a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 30 mg/kg durante 5 días. Todos los ratones fueron sacrificados 12 semanas después de la finalización de la administración de las dosis en pulsos de PPF 1 o vehículo.
El análisis de las secciones del hipocampo se realizó en un microscopio de obtención de imágenes Leica (Buffalo Grove, IL), modelo DM5500B, con cámara de microscopio de campo claro/fluorescente en color DCF7000T La figura 14 muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en la capa granular del giro dentado en animales tratados con PPF 1 y con solución salina. Estos resultados muestran que existe una mejora significativa en el grupo tratado durante 5 días consecutivos seguidos de un refuerzo, que es comparable a la del grupo tratado durante 7 días consecutivos. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; PPF1-7d, PPF1-5d-B frente a solución salina*p< 0,05, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett (n: solución salina = 5, PPF1-5d = 8, PPF1-7d = 7, PPF1-5d-B = 8, PPF1-7d-B = 7).
La figura 15 muestra el número de células marcadas positivamente con BrdU en la capa granular del giro dentado en animales tratados con PPF1 y con solución salina. Estos resultados muestran que, por lo que respecta a las células en proliferación, la inducción aumenta de forma importante en el grupo tratado durante 5 días consecutivos seguidos de un refuerzo, en comparación con los grupos tratados durante 5 o 7 días consecutivos sin refuerzo. Además, el tratamiento de refuerzo aumenta significativamente la supervivencia global de las células. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. PPF1-5d-B, PPF1-7d-B frente a solución salina ***p <0,001, *p < 0,05, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett. PPF1-5d frente a PPF1-5d-Bp< 0,05, prueba de latpara datos independientes (n: solución salina = 7, PPF1-5d = 8, PPF1-7d = 7, PPF1-5d-B = 8, PPF1-7d-B = 7).
La figura 16 muestra el número de células marcadas positivamente con EdU en la capa granular del giro dentado en animales tratados con plasma joven, PPF 1 y solución salina. Estos resultados demuestran que los efectos observados con la dosis de refuerzo no se deben a un aumento del número total de células en proliferación presentes, sino a un mecanismo de supervivencia potenciado provocado por la administración de refuerzo. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m; (n: solución salina = 4, PPF1-5d = 7, PPF1-7d = 6, PPf1-5d-B = 7, PPf1-7d-B = 6).
f. Ejemplo 6
Se administró PPF disponible en el mercado ("PPF1") a ratones adultos (de 3 y 6 meses de edad) inmunocomprometidos (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). Todos los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento según cuatro criterios diferentes: puntuación de nido en la jaula de alojamiento, peso corporal inicial, distancia recorrida en campo abierto y porcentaje de tiempo en el centro del campo abierto. Tras la determinación de los grupos, se inyectó a los ratones por vía intraperitoneal (IP) BrdU formulado en PBS (solución salina tamponada con fosfato) a una concentración final de 10 mg/ml administrado a 150 mg/kg durante 5 días. A continuación, se inyectó a los ratones solución salina o PPF1 por vía intravenosa (IV) durante 7 días consecutivos (administración de dosis en pulsos). A un subconjunto de ratones de los tratamientos con solución salina y PPF1 se les proporcionaron ruedas de actividad en su jaula de alojamiento. Los ratones fueron sacrificados a los 3, 10 o 42 días tras la finalización de la administración de las dosis en pulsos.
La figura 17 muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 3 meses de edad tratados con PPF1 o con solución salina con o sin ruedas de actividad. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m; Rueda de actividad+PPF1 42d post, Rueda de actividad 42d post frente a solución salina 42d post ****p<0,0001,*p< 0,05, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett. Rueda de actividad frente a PPF1 42d post ++p < 0,001, prueba de latpara datos independientes (n: solución salina 3d post = 8, PPF1 3d post = 8, PPF1 10d post = 7, vehículo 42d post = 8, PPF 142d post = 8, rueda de actividad 42d post = 8, rueda de actividad+PPF142d post = 8). La figura 17 también muestra el número de células marcadas positivamente con DCX en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 6 meses de edad tratados con PPF 1 o con solución salina con o sin ruedas de actividad. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; Rueda de actividad+PPF1 42d post, Rueda de actividad 42d post frente a solución salina 42d post****p <0,0001,**p< 0,01, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett. Rueda de actividad frente a PPF1 42d post ++p<0,001, prueba de latpara datos independientes. PPF1 42d post frente a solución salina 42d post p < 0,05, prueba de latpara datos independientes (n: solución salina 3d post = 7, PPF1 3d post = 8, PPF1 10d post = 6, solución salina 42d post = 8, PPF1 42d post = 6, Rueda de actividad 42d post = 8, Rueda de actividad+PPF1 42d post = 9).
La figura 18 muestra el número de células marcadas positivamente con Ki67 en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 3 meses de edad tratados con PPF1 o con un tratamiento con solución salina con o sin ruedas de actividad. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; Rueda de actividad+PPF1 42d frente a solución salina 42d post***p <0,001, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett (n: solución salina 3d post = 6, PPF1 3d post = 6, PPF1 10d post = 7, solución salina 42d post = 8, PPF1 42d post = 8, Rueda de actividad 42d post = 8, Rueda de actividad+PPF1 42d post = 8).
La figura 18 también muestra el número de células marcadas positivamente con Ki67 en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 6 meses de edad tratados con PPF1 o tratamiento con solución salina con o sin ruedas de actividad. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; Rueda de actividad+PPF1 42d post, Rueda de actividad 42d post frente a solución salina 42d post***p <0,001,*p <0,05, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett (n: solución salina 3d post = 7, PPF1 3d post = 7, PPF1 10d post = 8, solución salina 42d post = 8, PPF1 42d post = 7, Rueda de actividad 42d post = 7, Rueda de actividad+PPF 142d post = 9).
La figura 19 muestra el número de células marcadas positivamente con BrdU en la capa granular del giro dentado en animales NSG de 3 y 6 meses de edad tratados con PPF1 o con un tratamiento con solución salina con o sin ruedas de actividad. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m.; Rueda de actividad+PPF1 42d vs. Vehículo 42d post ***p < 0,001, ANOVA con análisisa posterioride Dunnett (****p< 0,0001; ***p< 0,001; **p< 0,01; *p< 0,05, A<n>O<v>A con análisisa posterioride Dunnett).
Estos resultados muestran que hay una mejora significativa en la neurogénesis con PPF1 y la rueda de actividad en comparación con el vehículo 6 semanas después de la administración en ratones NSG de 3 meses de edad. Además, hay una mejora significativa en la neurogénesis con PPF1 y la rueda de actividad en comparación con la rueda de actividad sola, 6 semanas después de la administración en ratones NSG de 3 meses de edad. También hay una mejora significativa en la neurogénesis con PPF1 y la rueda de actividad en comparación con el vehículo, 6 semanas después de la administración en ratones NSG de 6 meses de edad. Estos resultados también muestran una mejora significativa en la neurogénesis con PPF 1 y la rueda de actividad en comparación con la rueda de actividad sola, 6 semanas después de la administración en ratones NSG de 6 meses de edad. Además, hay una mejora significativa en la proliferación de células progenitoras con PPF 1 y la rueda de actividad en comparación con el vehículo, 6 semanas después de la administración en ratones NSG de 3 y 6 meses de edad.
Estos hallazgos en ratones NSG adultos a los 6 meses de edad indican efectos sinérgicos potenciales entre el ejercicio y la administración de PPF1 que producen en una mejora significativa de la neurogénesis en comparación con los tratamientos de ejercicio o PPF1 por separado. Esto respalda la posible utilidad del tratamiento con PPF1 junto con un régimen de ejercicio en entornos clínicos. Además, estos datos demuestran que existe una capacidad significativa de neurogénesis en el cerebro a la que se puede acceder a través de múltiples mecanismos independientes o superpuestos.
g. Ejemplo 7
Se administró PPF1 o control de solución salina a dos grupos de tratamiento de ratones inmunocomprometidos de 11 meses de edad (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). Todos los ratones recibieron inyecciones IV de 150 |jl de PPF1 o solución salina por dosis durante siete días consecutivos. Se colocó una rueda de actividad (MedAssociates) en las jaulas de los ratones denominados corredores (n = 8, n = 8 para PPF 1 y solución salina) a partir de la semana 7 del estudio. Se registró el número de revoluciones de la rueda durante 5 días consecutivos, día y noche.
La figura 20 indica el número de revoluciones de la rueda durante determinados periodos de tiempo, con zonas sombreadas que indican un ciclo de oscuridad. Se utilizó una prueba de latpara datos independientes para evaluar la significación estadística de la carrera total de los grupos tratados y no tratados en los ciclos de luz y oscuridad. Los perfiles de expresión rítmica se extrajeron y caracterizaron mediante un análisis en el dominio del tiempo y la frecuencia para una serie de 13 puntos temporales, por separado para cada ratón de los grupos tratados y no tratados, con cinco series de 13 puntos temporales por ratón. El período, la fase y la amplitud fueron los parámetros definidos para cada ritmo y se compararon entre los dos grupos mediante la prueba de latpara datos independientes bilateral. Los ratones tratados con PPF 1 corrieron significativamente más que los animales no tratados, un indicador de la mejora de la actividad motora. Se sometió a los ratones a una prueba de placa caliente para controlar la sensación normal de dolor en las patas. La pérdida de sensibilidad podría haber afectado a las lecturas conductuales previas. La prueba de la placa caliente dio lugar a un ligero aumento de la actividad tras volver al entorno de la jaula con la rueda de actividad, como evidencia el pico de revoluciones de la rueda indicado en el segmento recuadrado de la figura 20.
h. Ejemplo 8
Se administró albúmina humana recombinante ("rhAlbúmina", Albumedix, Ltd, Nottingham, Reino Unido), plasma humano joven aclarado ("YP"), o control de solución salina a ratones inmunocomprometidos de 10,5 meses de edad (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). Todos los animales recibieron 50 mg/kg de BrdU por vía intraperitoneal en la semana 1 antes de la administración de la dosis en pulsos de 7 días. La rhAlbúmina y el YP se diluyeron hasta 50 mg/ml en agua para inyecciones ("water for injections", WFI, solución salina al 0,9 %). Todos los ratones recibieron inyecciones IV de 150 j l de rhAlbúmina, YP o solución salina por dosis durante 7 días consecutivos. Los ratones fueron sacrificados 6 semanas después del último día de tratamiento.
La figura 21A muestra la cantidad de supervivencia celular en los 3 grupos de tratamiento determinada por el número de células marcadas con BrdU en el giro dentado ("dentate gyrus", "DG"). El plasma joven aumentó significativamente la supervivencia celular en comparación con la solución salina y la rhAlbúmina, mientras que la rhAlbúmina no tuvo ningún efecto significativo sobre la supervivencia celular. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (***p< 0,001 mediante la prueba de latpara datos independientes).
La figura 21B muestra la cantidad de tinción con DCX en los 3 grupos de tratamiento determinada por el número de células positivas a DCX en el giro dentado ("DG"). El plasma joven aumentó significativamente la neurogénesis en comparación con la solución salina y la rhAlbúmina, mientras que la rhAlbúmina se asoció con una disminución de la neurogénesis en comparación con el control de solución salina. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (**p< 0,01; ***p <0,001 mediante la prueba de latpara datos independientes).
i. Ejemplo 9
Células neuronales mixtas disociadas derivadas de la corteza E16 de ratón fueron sembradas y cultivadas en una placa de matriz multielectrodo de 48 pocillos (Axion Biosystems). Cada pocillo contenía 16 electrodos que estaban en contacto físico con las células neuronales en la placa y medían cambios sutiles en las propiedades de la membrana celular. Esta configuración permite evaluar una diversidad de parámetros diferentes para obtener información sobre los picos de actividad neuronal y el comportamiento de activación a nivel de electrodo único, así como información sobre el alcance de la conectividad neuronal mediante la evaluación de la sincronía de las propiedades de activación neuronal a través de múltiples electrodos dentro de un pocillo.
Los cultivos neuronales se mantuvieron en presencia de las condiciones de tratamiento a partir del día 1. Las condiciones de tratamiento comprendieron medio Neurobasal más suplementos B27 que contenían, en un 10 % (v/v): albúmina humana recombinante ("rhAlbúmina", Albumedix, Ltd, Nottingham, Reino Unido); PPF1; o HAS 1. El PBS constituyó el control. La actividad neuronal se midió a los 7 y 14 días de cultivo.
La figura 22 demuestra que 7 días de tratamiento con PPF1 conduce a un aumento de la actividad de la red neuronal en comparación con el control, rhAlbúmina, o el tratamiento con HAS1. HAS1 es una HAS disponible en el mercado con más del 95 % de albúmina humana (en relación con la proteína total) en una solución al 5 % (p/v, 50 g/l), preparada por un procedimiento de fraccionamiento en frío con alcohol, y derivada de una mezcla de plasma humano de donantes. Tanto PPF 1 como HAS 1 se presentan en una solución al 5 % (p/v, 50 g/l) y se diluyeron 1:10 en medio Neurobasal más suplementos B27. El efecto de la PPF1 sobre la actividad de la red neuronal persiste hasta 14 días en cultivo. Esto indica que la PPF1 está asociada a la estimulación de la maduración de la red neuronal. Los datos se expresan como media ± e.e.m. (*p <0,05 mediante la prueba de latpara datos independientes).
j. Ejemplo 10
Se administró plasma humano viejo aclarado (OP) o solución salina estéril a ratones inmunocomprometidos (NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wjl/SzJ, raza "NSG") de 8 semanas de edad (jóvenes). En cada experimento los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento por peso. Todos los ratones fueron inyectados por vía intraperitoneal en 5 días consecutivos con 150 mg/kg de BrdU en<p>B<s>estéril. La inyección de BrdU fue seguida de la administración IV de plasma viejo en diferentes paradigmas de tratamiento a 150 pl por dosis. Todos los paradigmas se describen en la figura 23.
El paradigma 1 implica inyecciones dos veces por semana para un total de 10 inyecciones durante 5 semanas. El análisis histológico se realizó 48 horas después de la última dosis de plasma. El paradigma 2 implica inyecciones tres veces por semana para un total de 10 inyecciones durante 4 semanas, con un análisis histológico 48 horas después de la última dosis. En el paradigma 3, los ratones recibieron inyecciones diarias durante 7 días consecutivos y se analizaron histológicamente 48 horas después de la última dosis. En el paradigma 4, los ratones recibieron inyecciones diarias durante 7 días consecutivos y analizados 21 días después de la última dosis. Se analizaron los cerebros de ratones tratados con plasma viejo para detectar un marcador de inflamación endotelial, VCAM-1, en el hipocampo, y el número de neuronas recién nacidas, marcadas por células positivas a doblecortina (DCX) en el giro dentado. Se tomaron imágenes de VCAM-1 en un Hamamatsu NanoZoomer HT (Hamamatsu) después de la inmunohistoquímica en secciones flotantes libres de 30 pm y se analizaron utilizando el software Image Pro (Media Cybernetics). Las células positivas a DCX en el giro dentado se contaron en estado vivo en un microscopio Leica de campo amplio (Leica).
El análisis del porcentaje de superficie positiva a VCAM-1 en el hipocampo (figura 24) demuestra que la inflamación endotelial aumenta significativamente 48 horas después de la última administración de plasma, con una tendencia en la administración dos veces por semana (figura 24A) y aumentos significativos después de la administración tres veces por semana (figura 24B) y la administración de dosis en pulsos (figura 24C). Los niveles de VCAM-1 dejaron de aumentar significativamente 21 días después de la administración de la última dosis de plasma (figura 24D).
Los efectos sobre la doblecortina sólo pudieron observarse después de un periodo de tiempo de 3 a 4 semanas, por lo que se analizó el número de células positivas a DCX en el giro dentado en los paradigmas 1,2 y 4. El análisis reveló que no había ningún efecto del plasma viejo sobre la neurogénesis con paradigmas de administración dos veces por semana (figura 25A) o tres veces por semana (figura 25B), aunque la administración de las dosis en pulsos durante 7 días consecutivos (figura 25C) dio lugar a una disminución significativa en el número de células positivas a DCX. Estos datos sugieren que sólo la administración de dosis en pulsos de plasma humano viejo tuvo efectos significativos sobre la neurogénesis.
k. Ejemplo 11
Ratones NSG de ocho semanas de edad tratados durante 7 días consecutivos con plasma humano viejo (origen 65 68 años) fueron sometidos a la prueba del laberinto de Barnes modificado 4 semanas después de la última inyección de plasma viejo. La figura 26 muestra el curso temporal de la latencia de escape del laberinto de Barnes e indica el tiempo para alcanzar y entrar en el orificio de escape para los ratones NSG tratados con plasma viejo y con solución salina. No hubo diferencias significativas en la latencia de escape entre los grupos, pero en el día 4, los ratones viejos tratados con plasma obtuvieron peores resultados que los controles con solución salina. Estos datos indican una reducción del aprendizaje y la memoria en una tarea de memoria espacial asociada a la función del hipocampo. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (ANOVA de dos vías, prueba a posteriori de Sidak).
La figura 27 representa la latencia media de escape en las tres últimas pruebas del laberinto de Barnes en el día 4. Los ratones tratados con plasma viejo mostraron una tendencia hacia una mayor latencia de escape, indicativa de un deterioro de la función de memoria. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (prueba de latpara datos independientes).
La figura 28 representa la diferencia en la latencia de escape entre las pruebas 1 y 3 del laberinto de Barnes y muestra que estas pruebas pueden usarse como medida de aprendizaje en un solo día. Los ratones tratados con plasma viejo presentan una diferencia significativamente menor en la latencia de escape entre estas pruebas, lo que revela una menor capacidad de aprendizaje. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (*p< 0,05 mediante la prueba de latpara datos independientes).
La figura 29 muestra los resultados de la qPCR que se utilizó para cuantificar los niveles de ARNm de diferentes marcadores asociados con la neurogénesis y la función sináptica. Los niveles de expresión relativa de doblecortina (DCX), un marcador de las neuronas recién nacidas, disminuyeron de acuerdo con el análisis histológico del mismo marcador. Además, se observaron tendencias hacia la disminución de los niveles de vglut1 (transportador vesicular de glutamato 1), un marcador de las sinapsis glutamatérgicas, el marcador sináptico syn1 (sinapsina 1), tuj 1 (tubulina beta III) y bdnf ("brain-derived neurotrophic factor", factor neurotrófico derivado del cerebro). Estas disminuciones indican un deterioro general de la red sináptica y neuronal en los cerebros de los ratones inyectados con plasma viejo. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (*p< 0,05 mediante la prueba de latpara datos independientes).
l. Ejemplo 12
Ratones inmunocomprometidos jóvenes (8 semanas de edad) (NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wjl/SzJ, raza "NSG") se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento por peso. Los animales fueron inyectados por vía subcutánea (s.c.) con 35 mg/kg de ácido caínico (Sigma) en solución salina estéril o solución salina control. La administración periférica de ácido caínico provocó actividad convulsiva aguda, inflamación en el hipocampo y, en un subconjunto de ratones, también pérdida neuronal en la región CA1 del hipocampo. Dos horas después de la inyección de ácido caínico, se administró a los ratones una dosis intravenosa de 150 pl de PPF1 o solución salina. La administración de PPF1 o solución salina continuó a diario durante un total de 5 días (figura 30). Se recogieron tejidos para su análisis el día 6. Se analizaron los cambios inflamatorios en la región CA1 del hipocampo tras la tinción inmunofluorescente para la activación microglial (CD68) y la activación astrocitaria (GFAP). Se tomaron imágenes de las secciones en un Hamamatsu NanoZoomer HT (Hamamatsu) después de la inmunohistoquímica en secciones flotantes libres de 30 pm y se analizaron utilizando el software Image Pro (Media Cybernetics).
El análisis del porcentaje de superficie positiva a CD68 en la región CA1 del hipocampo demuestra que la administración de ácido caínico produce un aumento de la inmunorreactividad a CD68, lo que sugiere un aumento de la activación microglial (figura 31A). Cinco días de administración de PPF1 producen una disminución significativa del porcentaje de superficie positiva a CD68 y, por tanto, una reducción de la activación microglial. Del mismo modo, el análisis del porcentaje de superficie positiva a GFAP (figura 31B) muestra un aumento significativo tras la administración de ácido caínico, que se reduce significativamente tras la administración de PPF1. Los datos sugieren que la PPF1 tiene un efecto antiinflamatorio agudo en los cerebros de ratones que han recibido dosis de ácido caínico. *p< 0,05 ANOVA unidireccional con análisisa posterioride comparaciones múltiples de Dunnett.
m. Ejemplo 13
Ratones NSG de 6 meses de edad recibieron inyecciones diarias durante una semana (7 días), IV, de PPF1 o control de solución salina en una dosis de 150 pl (10 mg/ml). Todos los ratones fueron tratados con BrdU 50 mg/kg por vía intraperitoneal una vez al día en los mismos días que recibieron PPF1 o control de solución salina. A continuación, los ratones se dividieron en dos cohortes. La primera cohorte fue sacrificada un día inmediatamente después de los 7 días de tratamiento concurrente con BrdU y PPF1. La segunda cohorte fue sacrificada 7 días después, y recibió 7 días adicionales de administración diaria de BrdU.
La figura 32 muestra el número de células teñidas en el giro dentado de las cohortes 1 y 2 (de izquierda a derecha). Ambas cohortes mostraron un aumento de la proliferación celular en el giro dentado en comparación con el control de solución salina (***p< 0,001 prueba de latpara datos independientes).
n. Ejemplo 14
Ratones NSG de 3 o 6 meses de edad recibieron inyecciones diarias durante una semana (7 días), IV, de PPF1 o vehículo de solución salina. Posteriormente, los ratones fueron sacrificados 3, 10 o 42 días después de la administración de las 7 dosis diarias. Los cerebros se tiñeron con Ki67, un marcador nuclear sólo presente en las células en proliferación que marca las células madre neurales y progenitoras en la lámina del giro dentado. La figura 33 muestra que los ratones de 6 meses presentaban un aumento del total de células progenitoras (positivas a Ki67 o "Ki67+") en el giro dentado a los 10 días de la finalización de la pauta posológica de dosis en pulsos durante 7 días consecutivos utilizando PPF1. La figura 34 muestra la tinción (zonas brillantes) de Ki67 en el giro dentado a los 10 días en ratones NSG tras la finalización de la pauta posológica de dosis en pulsos durante 7 días consecutivos utilizando PPF1. Esto demuestra que un posible mecanismo de acción de la PPF1 en el aumento de la supervivencia celular total y la neurogénesis a los 42 días del cese de la dosis podría deberse a un aumento de las células progenitoras totales (células madre neurales).
o. Ejemplo 15
Se administró PPF disponible en el mercado ("PPF1") o control de solución salina a dos poblaciones diferentes de ratones inmunocomprometidos de 6 y 12 meses de edad (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj1/SzJ, "NSG"). Todos los animales recibieron 50 mg/kg de BrdU en la semana 1 antes de la administración de dosis en pulsos de 7 días del agente de ensayo. Todos los ratones recibieron inyecciones IV de 150 pl de PPF1 o solución salina por dosis durante 7 días consecutivos. Se utilizó una cohorte de cada grupo de tratamiento para investigar la proliferación y se sacrificó a los animales 6 semanas después de la última dosis administrada.
La figura 35A indica que la cohorte de ratones de 6 meses de edad tratados con PPF1 presentó un aumento significativo en el número de células progenitoras diferenciadas en neuronas (NeuN+), en comparación con el control de solución salina, y una reducción en el número de células progenitoras diferenciadas en astrocitos (GFAP+) en comparación con el control. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (**p <0,01 mediante la prueba de latpara datos independientes).
La figura 35B indica que la cohorte de ratones de 12 meses de edad tratados con PPF1 presentó un aumento significativo en el número de células progenitoras diferenciadas en neuronas (NeuN+), en comparación con el control de solución salina, y una diferencia estadísticamente no significativa en el número de células progenitoras diferenciadas en astrocitos en comparación con el control. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (**p< 0,01 mediante la prueba de latpara datos independientes).
p. Ejemplo 16
Se administró plasma humano viejo aclarado (plasma viejo) o solución salina estéril a ratones de 3 meses de edad (raza NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj 1/SzJ, "NSG"). En cada experimento los ratones se distribuyeron de modo homogéneo en los grupos de tratamiento por peso. Todos los ratones fueron inyectados por vía intraperitoneal en 5 días consecutivos con 150 mg/kg de BrdU en solución salina estéril. La inyección de BrdU fue seguida de la administración IV de plasma viejo o solución salina estéril a 150 pl por dosis a diario durante 7 días consecutivos y se analizó histológicamente 4 semanas después de la última dosis.
La figura 36 representa el destino celular de las células progenitoras neurales en proliferación marcadas con BrdU 4 semanas después de la última dosis. En ratones inyectados con plasma viejo, las células supervivientes marcadas con BrdU se diferencian significativamente menos en neuronas que en astrocitos. Esto indica que el plasma humano viejo cambia el destino celular de las células progenitoras neurales en ratones jóvenes hacia el linaje de los astrocitos (figura 37B) e impacta negativamente en el número de neuronas recién nacidas en el giro dentado (figura 36A) (n = 12 por grupo). Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (***p< 0,001; ****p< 0,0001 mediante la prueba de latpara datos independientes).
q. Ejemplo 17
Activación cortical.Ratones C57BL/6 de edad avanzada (18 meses) recibieron inyecciones intravenosas diarias de 150 ul de PPF1 o solución salina estéril al 0,9% durante 7 días. Dos horas y media (2,5) después de la última administración del agente de ensayo, los ratones fueron sacrificados mediante perfusión transcárdica con solución salina al 0,9 %, seguida de formaldehído al 4% con anestesia profunda con ketamina y xilacina. Los cerebros fueron disecados, posteriormente fijados y luego procesados con el procedimiento iDisco para visualizar las células positivas a cFos mediante microscopía de fluorescencia de hoja de luz ("Light Sheet Fluorescence Microcopy", LSFM) a una resolución de vóxeles de 2 x 2 x 3 micrómetros. Las imágenes cerebrales se alinearon en forma de volúmenes 3D y las células positivas a cFos positivas activadas se detectaron con una técnica informática. La comparación estadística entre grupos se realizó mediante regresión binomial negativa corregida para comparaciones múltiples por la tasa de falsos descubrimientos (* indica un valor de q inferior a 0,05).
El análisis del cerebro de los ratones mostró un aumento general del número de células positivas a cFos en todo el volumen cerebral, así como en la corteza y la isocorteza en los ratones de 18 meses tratados con PPF1 (figura 37). Utilizando la regresión binomial corregida para comparaciones múltiples, las diferencias de estos aumentos en el número total de positivas a cFos no alcanzó la significación. Sin embargo, el análisis de zonas corticales más definidas, tales como la corteza frontal, orbital, infralímbica y prelímbica, mostró un aumento significativo del número de células positivas a cFos (figura 38), lo que indica una mayor actividad neuronal. El aumento de la actividad en la zona de la corteza prefrontal se correlaciona con una mejora del rendimiento cognitivo, lo que sugiere que el tratamiento con PPF1 produce mejoras cognitivas en ratones C57BL/6 envejecidos. En el núcleo olfativo accesorio y en el tubérculo olfativo también se observaron aumentos significativos similares en el número de células positivas a cFos (figura 39). Estas zonas están asociadas con el procesamiento de la información olfativa y el aumento de la actividad sugiere una mayor función olfativa. La visualización basada en estadísticas de vóxeles de la activación de cFos en rojo mostró el aumento de la señal de cFos en la corteza de los ratones tratados con PPF1 (figura 40).
r. Ejemplo 18
Se administró PPF disponible en el mercado ("PPF1") o control de solución salina a ratones de tipo salvaje (WT) de 22 meses de edad (C57BL/6J, "WT", código de raza 0664, Jackson Labs, Bar Harbor, ME). Todos los animales recibieron 50 mg/kg de BrdU en la semana 1 antes de la administración de dosis en pulsos durante 7 días. Posteriormente, todos los ratones recibieron inyecciones IV de 150 pl de PPF1 o solución salina por dosis durante siete días consecutivos. Los ratones fueron sacrificados 10 días después de la última inyección de PPF1 o solución salina y los cerebros fueron procesados para la histología.
La figura 41A muestra del porcentaje de superficie inmunorreactiva a CD68 en el hipocampo (n = 10, 10). La figura 41B muestra el porcentaje de superficie inmunorreactiva a Iba-1 en el hipocampo (n = 10, 10). La figura 41C muestra el porcentaje de superficie inmunorreactiva a GFAP en el hipocampo (n = 10, 10). Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (*p< 0,05; **p< 0,01 mediante la prueba de latpara datos independientes). Estos resultados muestran una disminución significativa de los marcadores microgliales CD68 e Iba-1 en el hipocampo de ratones viejos tratados con PPF 1.
s. Ejemplo 19
Se administró PPF disponible en el mercado ("PPF1") o control de solución salina a animales de 23 meses de edad de tipo salvaje (C57BL/6J, "WT", código de raza 0664, Jackson Labs, Bar Harbor, ME). Todos los animales recibieron 50 mg/kg de BrdU en la semana 1 antes de la administración de dosis en pulsos durante siete días consecutivos. Posteriormente, todos los ratones recibieron inyecciones IV de 150 pl de PPF1 o solución salina por dosis durante siete días consecutivos. Se utilizó una cohorte de cada grupo de tratamiento para investigar los marcadores histológicos de la neuroinflamación y se sacrificó a los animales 6 semanas después de la última dosis administrada.
La figura 42A muestra el cambio porcentual en la expresión de BrdU comparado con el control de solución salina a las 6, 9 y 12 semanas después de la administración, que es un indicador de la supervivencia celular en el hipocampo. Los animales fueron tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días consecutivos.
La figura 42B muestra el cambio porcentual en la expresión de doblecortina (DCX) en comparación con el control de solución salina a las 6, 9 y 12 semanas después de la administración, que es un indicador de neurogénesis en el hipocampo. Los animales fueron tratados con una pauta posológica de dosis en pulsos de 7 días consecutivos.
t. Ejemplo 20
Treinta (30) ratones transgénicos para alfa-sinucleína macho (línea 61, trasfondo de tipo salvaje C57BL/6J), de 4 a 4,5 meses de edad, se dividieron en dos grupos de 15 y se trataron con PPF1 o vehículo durante siete (7) días consecutivos. El tratamiento con PPF1 se administró por vía intravenosa a razón de 5 pl por gramo de peso corporal. Los ratones alfa-sinucleína sirven como modelo transgénico de la enfermedad de Parkinson y sobreexpresan la proteína alfa-sinucleína. Este modelo transgénico no está inmunocomprometido, a diferencia de los ratones NSG.
Un día después del último tratamiento con PPF1 o vehículo, se sometió a todos los ratones a pruebas de comportamiento y función motora, tales como construcción de nidos, roedura de pasta, suspensión de un alambre, varilla giratoria y marcha sobre barras. La roedura de pasta, la suspensión del alambre y la marcha sobre barras se ejecutaron por segunda vez al final del estudio. Las pruebas se realizaron en un orden aleatorio.
Los animales fueron pesados una vez por semana. Las figuras 43A y 43B muestran que no hubo diferencias significativas entre los ratones transgénicos para alfa-sinucleína ("Tg") tratados con PPF1 y con vehículo (veh).
La figura 44 muestra los resultados de la construcción de nidos. Los ratones se alojaron individualmente en jaulas con lecho de virutas de madera y un cuadrado de algodón prensado ("nido"). No había ningún otro material de nidificación (por ejemplo, lana de madera). El nido se introdujo el día anterior a la evaluación del estado del nido en unas 2 o 3 horas antes de iniciarse la fase de oscuridad y el siguiente comportamiento de construcción se evaluó al día siguiente del experimento en aproximadamente 2 o 3 horas después de iniciarse la fase de luz. El lapso de tiempo entre la introducción del cuadrado de algodón y la evaluación del siguiente estado fue el mismo para todos los exámenes. Se evaluó la manipulación del nido y la constitución del nido construido, según una escala de cinco puntos (Deacon, R.M., 2006, Assessing nest building in mice, Nat. Protoc., 1: 1117-1119.) Tal como se muestra en la figura 44, hubo una tendencia creciente en el comportamiento de anidamiento en los ratones tratados con PPF1 en comparación con los ratones tratados con vehículo.
Las figuras 45A y 45B demuestran que hubo un aumento significativo en la roedura de pasta en el grupo tratado con PPF1 en comparación con el grupo tratado con vehículo 3 semanas después del último tratamiento, lo que indica una mejora motora (figura 45B). La prueba se desarrolló para estudiar los déficits motores en pequeños roedores. Los animales fueron introducidos en la sala de experimentación al menos 2 horas antes de la prueba. Se retiraron la tapa de la jaula, el bebedero y el pienso y se colocó en la jaula un pequeño trozo de espagueti seco (aprox. 5 mm). Se colocó un micrófono sobre los trozos de espagueti. La grabación se iniciaba en cuanto el animal empezaba a comer. Se evaluó el número de mordeduras por episodio de roedura y la frecuencia de mordeduras, y se analizó el patrón de roedura utilizando el software Avisoft SASLab Pro. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (*p< 0,05 mediante la prueba de latpara datos independientes).
La figura 46 muestra los resultados de una prueba de suspensión de un alambre, que evalúa las anomalías neuromusculares de la fuerza motora. Hubo un aumento significativo del tiempo hasta la caída en el grupo tratado con PPF1 en comparación con el grupo tratado con vehículo 3 semanas después del último tratamiento. Para realizar la prueba, se utilizó la tapa de la jaula de alambre y se colocó cinta aislante alrededor del perímetro para evitar que el ratón se saliera. El animal se colocó en la parte superior de la tapa de la jaula. Se sacudió ligeramente la tapa tres veces para obligar al ratón a agarrarse a los alambres y luego se le dio la vuelta. La tapa se mantuvo a una altura aproximada de 50-60 cm por encima de una base blanda, lo suficientemente alta como para evitar que el ratón saltara, pero no lo suficiente como para causar daños en caso de caída. Se cuantificó la latencia a la caída y se utilizó un tiempo límite de 300 segundos. Normalmente, un ratón de tipo salvaje puede estar colgado boca abajo durante varios minutos.
Las figuras 47A, 47B y 47C muestran los resultados de una prueba de marcha sobre barras. La figura 47A muestra las diferentes formas y tamaños de las barras (barras cuadradas o cilíndricas) utilizadas en cinco pruebas diferentes de dificultad creciente. La figura 47B muestra los resultados de las cinco pruebas 72 horas después del último tratamiento. La figura 47C muestra los resultados de las cinco pruebas 3 semanas después del último tratamiento. Los ratones tratados con PPF1 mostraron un éxito significativamente mayor al atravesar la barra durante la prueba 5 del ensayo 1 (72 horas después del tratamiento) y durante la prueba 4 de ensayo 2 (3 semanas después del tratamiento). Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (**p< 0,01 mediante una prueba binomial).
Las figuras 48A a 48F muestran los resultados histológicos de la tinción estriatal e hipocámpica. La figura 48A muestra la tinción de CD68 estriatal. La figura 48B muestra la tinción de CD68 en el hipocampo. La figura 48C muestra la tinción de Iba-1 estriatal. La figura 48D muestra la tinción de Iba-1 en el hipocampo.
La figura 48E muestra la tinción de NeuN estriatal. La figura 48F muestra la tinción de NeuN en el hipocampo. Estas figuras demuestran que los ratones tratados con PPF1 mostraron una disminución de la microgliosis (neuroinflamación) por Iba-1 y CD68 tanto en el estriado como en el hipocampo y un aumento de la supervivencia neuronal por tinción de NeuN en el estriado y el hipocampo. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (*p< 0,05, **p< 0,01, ***p< 0,001 mediante la prueba de latpara datos independientes).
u. Ejemplo 21
Se administraron PPF1, HAS1 o control de solución salina a ratones de 12 meses de edad (NOD.Cg-Prkdscid Il2rgtm 1 Wj1/SzJ, raza "NSG"). HAS1 es una HAS disponible en el mercado con más del 95 % de albúmina humana (en relación con la proteína total) en una solución al 5 % (p/v, 50 g/l), preparada por un procedimiento de fraccionamiento en frío con alcohol, y derivada de una mezcla de plasma humano de donantes. Excepto cuando se indique lo contrario, HAS 1 se administró en los ejemplos del presente documentoin vivoal 5 %. Los ratones recibieron inyecciones IV de PPF1, HAS1, o solución salina estéril a 150 pl por dosis a diario durante 7 días consecutivos y se analizó su conducta 4 semanas después de la última dosis.
La figura 49 muestra la latencia de escape en el laberinto de Barnes para que un ratón entre en el orificio de escape para ratones tratados con PPF1, HAS1 y vehículo. Los animales tratados con PPF1 encontraron el orificio de escape significativamente más rápido que los animales tratados con vehículo. Estos datos muestran que la PPF1 mejora eficazmente la cognición en animales NSG envejecidos, mientras que el tratamiento con HAS 1 no tiene ningún efecto sobre la memoria dependiente del hipocampo. Todos los datos mostrados son la media ± e.e.m. (*p< 0,05 mediante la prueba de latpara datos independientes).
v. Ejemplo 22
Paradigmas clínicos con PPF.
(1)EA leve a moderada.Hombres y mujeres de 60 años o más con EA de leve a moderada se asignaron aleatoriamente para recibir 100 ml o 250 ml una vez al día de PPF1 durante 5 días ("dosis en pulsos") durante las semanas 1 y 13 del estudio con una duración total de 6 meses. Durante los dos periodos de administración de 5 días, los sujetos residen en unidades de observación hospitalaria para facilitar la evaluación de la seguridad, y todos los sujetos se someten a una visita de cribado, una visita inicial, visitas de tratamiento, visitas de seguimiento y una visita de fin de estudio/finalización anticipada. En cada visita se evalúan la seguridad y la tolerabilidad. e realizan evaluaciones neurocognitivas y motoras al inicio del tratamiento y en visitas intermedias periódicas tras la administración.
Los criterios de valoración primarios son la seguridad, la tolerabilidad y la viabilidad de cada pauta posológica. La seguridad se mide por la incidencia de acontecimientos adversos emergentes del tratamiento. La tolerabilidad se mide por el número de sujetos que completan 8 semanas tras recibir al menos 5 infusiones y sujetos que completan 24 semanas tras recibir al menos 10 infusiones. La viabilidad del estudio se mide por el número de sujetos que completan 5 y 10 infusiones. Los criterios de valoración secundarios evalúan los efectos potenciales sobre la cognición utilizando diversas medidas cognitivas establecidas, incluida la escala de evaluación de la enfermedad de Alzheimer-Subescala cognitiva. Los criterios de valoración exploratorios incluyen la evaluación de los cambios en la composición y distribución de los biomarcadores sanguíneos, así como los cambios en las imágenes de resonancia magnética.
(2)EA leve a moderada.Dos grupos de sujetos diagnosticados de EA de leve a moderada se asignan aleatoriamente al tratamiento activo de forma doble enmascaramiento. Todos los sujetos reciben una infusión al día a la dosis aleatorizada durante 5 días consecutivos durante las semanas 1 y 13, con una duración total del estudio de 6 meses. Los sujetos son asignados aleatoriamente a uno de los dos niveles de dosis siguientes: 100 ml y 250 ml de PPF1. Los grupos de administración también se estratificaron por sexo. La duración de la administración es de 2 a 2,5 horas, y los caudales se valoran de acuerdo con las directrices específicas para cada dosis, de modo que se administre la dosis completa.
Los sujetos participan en una investigación opcional de biomarcadores del LCR. Estos sujetos se someten a dos punciones lumbares para la recogida de LCR, la primera antes de la dosis inicial y la segunda después de la dosis final. Se realizan evaluaciones neurocognitivas y motoras al inicio del tratamiento y evaluaciones intermedias periódicas tras la administración.
Se determina la seguridad, la tolerabilidad y la viabilidad de cada pauta posológica. A lo largo del estudio se determinan y resumen las valoraciones cognitivas, que incluyen: miniexamen del estado mental (MMSE); escala de evaluación de la enfermedad de Alzheimer-Subescala cognitiva de 11 cuestiones (ADAS-Cog/11); prueba del tablero de clavijas ranurado; prueba de fluidez en categorías ("Category Fluency Test", CFT); escala de valoración de la demencia clínica-Suma de casillas ("Clinical Dementia Rating Scale-Sum of Boxes", CDR-SOB); estudio cooperativo de la enfermedad de Alzheimer-Actividades de la vida diaria ("Alzheimer's Disease Cooperative Study-Activities of Daily Living", ADCS-ADL); estudio cooperativo de la enfermedad de Alzheimer-Impresión clínica global del cambio ("Alzheimer's Disease Cooperative Study -Clinical Global Impression of Change", ADCS-CGIC); cuestionario del inventario neuropsiquiátrico ("Neuropsychiatric Inventory Questionnaire", NPI-Q); y evaluaciones neurocognitivas de Savonix y capacidad de memoria de dígitos.
(3) Enfermedad de Parkinson.Los sujetos con enfermedad de Parkinson y deterioro cognitivo son asignados aleatoriamente a dos grupos: 2 periodos de tratamiento activo y placebo. Los sujetos reciben una infusión al día de tratamiento activo o placebo durante 5 días consecutivos ("administración de dosis en pulsos") durante la primera semana del estudio. Durante la semana 13, ambos grupos reciben tratamiento activo durante 5 días consecutivos y la duración del estudio es de aproximadamente 7 meses. La duración de la administración es de 2 a 2,5 horas, y los caudales se valoran de acuerdo con las directrices específicas para cada dosis, de modo que se administre la dosis completa.
Se determina la seguridad, la tolerabilidad y la viabilidad de cada pauta posológica. La función cognitiva y motora se resumen a lo largo del estudio e incluyen: MoCA; continuidad y potencia de la atención, memoria de trabajo y memoria episódica en el CDR-CCB; MDS-UPDRS3; MDS-UPDRS2; SE-ADL y CISI-PD.
Debe entenderse que la presente invención no se limita a los aspectos concretos descritos, ya que éstos pueden variar. Asimismo, debe entenderse que la terminología empleada en el presente documento tiene como único objeto describir aspectos concretos y no pretende ser limitante, ya que el alcance de la presente invención estará limitado únicamente por las reivindicaciones adjuntas.
Cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, hasta la décima de la unidad del límite inferior, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario, entre el límite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor mencionado o intermedio en ese intervalo mencionado, está comprendido dentro de la invención. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse independientemente en los intervalos más pequeños y también se engloban dentro de la invención, sin perjuicio de cualquier límite específicamente excluido en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o ambos límites, los intervalos que excluyen uno o ambos límites incluidos también se incluyen en la invención.
A menos que se definan de otro modo, todos los términos y expresiones técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que suelen entender los expertos en la técnica a la que pertenece esta invención.
Las fechas de publicación facilitadas pueden diferir de las fechas de publicación reales, que deberán confirmarse de forma independiente.
Cabe señalar que, tal como se utilizan en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un/una" y "el/la" incluyen los referentes en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Cabe señalar además que las reivindicaciones pueden redactarse de forma que excluyan cualquier elemento opcional. Así, esta declaración pretende servir como base previa para el uso de terminología exclusiva, tal como "únicamente", "sólo" y similares en relación con el enunciado de los elementos de la reivindicación, o el uso de una limitación "negativa".
El alcance de la presente invención, por lo tanto, no pretende limitarse a los aspectos ilustrativos mostrados y descritos en el presente documento. Más bien, el alcance de la presente invención se plasma en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Una fracción de proteínas plasmáticas ("Plasma Protein Fraction", PPF) para su uso en el tratamiento del deterioro cognitivo en un sujeto que lo necesite, en la que la PPF tiene un contenido en proteínas total que consiste en al menos un 83 %, pero menos de un 95% de albúmina, no más de un 17 % de globulinas y otras proteínas plasmáticas, y no más de un 1 % de gammaglobulina, en la que dicha PPF se deriva de plasma humano, y en la que una cantidad eficaz de la PPF se administra utilizando una pauta posológica de dosis en pulsos.
2. La PPF para su uso según la reivindicación 1, en la que la PPF comprende aproximadamente un 88 % de albúmina.
3. La PPF para su uso según la reivindicación 1 o 2, en la que la PPF es una PPF disponible en el mercado.
4. La PPF para su uso según la reivindicación 1, en la que la PPF es un producto de proteínas plasmáticas enriquecido en proteínas.
5. La PPF para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la PPF se deriva del plasma de un grupo de individuos humanos jóvenes que tienen una edad cronológica de 40 años o menos.
6. La PPF para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicho deterioro cognitivo es un deterioro cognitivo relacionado con la edad.
7. La PPF para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que se realiza un seguimiento del sujeto para comprobar la mejora de la función cognitiva.
8. La PPF para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el sujeto es un mamífero, preferentemente un ser humano.
9. La PPF para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la pauta posológica de dosis en pulsos comprende la administración de la PPF durante cinco a siete días consecutivos.
10. La PPF para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el sujeto sigue un régimen de ejercicio después de que la pauta posológica de dosis en pulsos se haya administrado completamente.
ES18791944T 2017-04-26 2018-04-24 Pauta posológica para el tratamiento de los trastornos cognitivos con productos de plasma sanguíneo Active ES2971462T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762490519P 2017-04-26 2017-04-26
US201762584571P 2017-11-10 2017-11-10
US201862623468P 2018-01-29 2018-01-29
US201862641194P 2018-03-09 2018-03-09
PCT/US2018/029189 WO2018200560A1 (en) 2017-04-26 2018-04-24 Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2971462T3 true ES2971462T3 (es) 2024-06-05

Family

ID=63915938

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES18791944T Active ES2971462T3 (es) 2017-04-26 2018-04-24 Pauta posológica para el tratamiento de los trastornos cognitivos con productos de plasma sanguíneo

Country Status (20)

Country Link
US (3) US10357513B2 (es)
EP (2) EP3615057B1 (es)
JP (3) JP7625364B2 (es)
KR (1) KR20190135059A (es)
CN (2) CN110709098B (es)
AU (2) AU2018257921B2 (es)
BR (1) BR112019022402A2 (es)
CA (1) CA3061194A1 (es)
CL (1) CL2019003076A1 (es)
CO (1) CO2019012385A2 (es)
DK (1) DK3615057T3 (es)
ES (1) ES2971462T3 (es)
IL (2) IL270125B2 (es)
MA (1) MA48480A (es)
MX (1) MX2019012795A (es)
SG (1) SG11201909927RA (es)
TW (2) TW202332455A (es)
UA (1) UA127828C2 (es)
WO (1) WO2018200560A1 (es)
ZA (1) ZA202301009B (es)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10973431B2 (en) * 2014-02-14 2021-04-13 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Electrical impedance myography
BR112019003172A2 (pt) * 2016-08-18 2019-05-28 Alkahest Inc frações de plasma sanguíneo como tratamento para distúrbios cognitivos associados ao envelhecimento
DK3615057T3 (da) 2017-04-26 2024-01-02 Alkahest Inc Doseringsskema til behandling af kognitive svækkelser med blodplasmaprodukter
CA3097083A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Alkahest, Inc. Treatment of aging-associated disease with modulators of leukotriene a4 hydrolase
BR112021000653A2 (pt) * 2018-07-20 2021-04-13 Alkahest, Inc. Regime de dosagem para tratamento de comprometimentos cognitivo e motor com plasma sanguíneo e produtos de plasma sanguíneo
IL282227B2 (en) * 2018-10-26 2024-08-01 Alkahest Inc Use of plasma and plasma fractions to improve pain, wound healing and recovery after surgery
WO2020129834A1 (ja) * 2018-12-17 2020-06-25 株式会社夏目綜合研究所 脳疾患の診断装置
GB201904810D0 (en) 2019-04-05 2019-05-22 Cynapsedx Ltd The treatment of protein aggregation diseases
US20220346699A1 (en) * 2019-09-17 2022-11-03 Hoffmann-La Roche Inc. Improvements in Personalized Healthcare for Patients with Movement Disorders
AU2020378245A1 (en) 2019-11-04 2022-04-07 Alkahest, Inc. Blood plasma fractions for use in muscle regeneration
EP4061384A4 (en) 2019-11-20 2023-11-01 Alkahest, Inc. Blood plasma fractions for use in liver regeneration
US11484551B2 (en) 2019-11-20 2022-11-01 Alkahest, Inc. Method of treating liver failure with plasma fraction IV-4
KR20230088914A (ko) * 2020-10-30 2023-06-20 선전 프로트젠 엘티디. 질환 치료에서 인간 혈청 알부민의 응용
CA3221177A1 (en) 2021-11-01 2023-05-04 Meghan Kerrisk Campbell Benzodioxane modulators of leukotriene a4 hydrolase (lta4h) for prevention and treatment of aging-associated diseases
EP4216225A1 (en) * 2022-01-20 2023-07-26 Koninklijke Philips N.V. Cognitive impairment determination apparatus
US20240033279A1 (en) * 2022-07-06 2024-02-01 Yuvan Research, Inc. Rna-enriched anti-aging compositions and uses thereof

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3869431A (en) 1973-03-12 1975-03-04 Firestone Tire & Rubber Co Polyamides and their production
US4624780A (en) 1982-06-28 1986-11-25 Alpha Therapeutic Corporation Fractionation of blood plasma
US4708713A (en) 1984-11-16 1987-11-24 Anisa Medical, Inc. Method and system for removing immunosuppressive components from the blood of mammals
DE3612137A1 (de) 1986-04-10 1987-10-15 Biotest Pharma Gmbh Steriles plasmaaustauschmittel
US5110907A (en) 1989-08-01 1992-05-05 Alpha Therapeutic Corporation Factor viii complex purification using heparin affinity chromatography
US5288853A (en) 1992-04-30 1994-02-22 Alpha Therapeutic Corporation Factor viii purification process
US5219995A (en) 1992-07-14 1993-06-15 Alpha Therapeutic Corporation Plasma fraction purification
US6544761B2 (en) 1994-12-13 2003-04-08 Human Genome Sciences, Inc. Human tissue inhibitor of metalloproteinase-4
US5916202A (en) 1996-08-30 1999-06-29 Haswell; John N. Umbilical cord blood collection
US6416487B1 (en) 1997-07-30 2002-07-09 Renal Tech International Llc Method of removing beta-2 microglobulin from blood
UA35656C2 (uk) 1999-12-27 2001-04-16 Олександр Миколайович Макаренко Спосіб лікування безперервно прогредієнтних ослабоумлюючих психічних захворювань
US6946546B2 (en) 2000-03-06 2005-09-20 Cambridge Antibody Technology Limited Human antibodies against eotaxin
US6632174B1 (en) 2000-07-06 2003-10-14 Cognifit Ltd (Naiot) Method and apparatus for testing and training cognitive ability
US20020151064A1 (en) 2001-02-07 2002-10-17 Children's Hospital Medical Center Regulation of CCR3 expression
US20040127445A1 (en) 2002-08-28 2004-07-01 Chondrogene Limited Beta-2 microglobulin (B2M) and B2M related gene products for the regulation of osteoarthritis pathogenesis and chondrocyte proliferation
US20040120937A1 (en) 2002-12-19 2004-06-24 Therapy Patent Corporation Blood therapy process
US7785601B2 (en) 2002-12-31 2010-08-31 Sygnis Bioscience Gmbh & Co. Kg Methods of treating neurological conditions with hematopoietic growth factors
GB0305133D0 (en) 2003-03-06 2003-04-09 Sinvent As Product
RU2380356C2 (ru) 2003-03-24 2010-01-27 Актимис Фармасьютикалз, Инк. Производные 2-фенокси и 2-фенилсульфонамида с ссr3 антагонистической активностью для лечения астмы и других воспалительных или иммунологических заболеваний
WO2004093802A2 (en) 2003-04-17 2004-11-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Prevention of deficits in neurogenesis with anti-inflammatory agents
US20060094064A1 (en) 2003-11-19 2006-05-04 Sandip Ray Methods and compositions for diagnosis, stratification, and monitoring of alzheimer's disease and other neurological disorders in body fluids
AU2004294178C1 (en) 2003-11-19 2011-10-27 Rules-Based Medicine, Inc. Methods for diagnosis, stratification, and monitoring of Alzheimer's disease
US20130121979A1 (en) * 2003-12-29 2013-05-16 Allan Mishra Method of treating cancer using platelet compositions
WO2005106492A2 (en) 2004-04-30 2005-11-10 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with c-c chemokine receptor 3 (ccr3)
WO2006066089A1 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Neuralab Limited Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition
WO2007059135A2 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Satoris, Inc. Methods of treating alzheimer's disease
US10344095B2 (en) 2006-02-16 2019-07-09 University Of Kentucky Research Foundation CCR3 inhibition for ocular angiogenesis and macular degeneration
ES2257225B1 (es) 2006-02-17 2007-03-16 Grifols, S.A Preparacion terapeutica de fviia de muy alta pureza y metodo para su obtencion.
JP2009149524A (ja) 2006-03-16 2009-07-09 Kyushu Univ アルツハイマー病の予防・治療剤
WO2007123976A2 (en) 2006-04-18 2007-11-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Antibody profiling for determination of patient responsiveness
EP2924440A3 (en) 2006-06-07 2016-03-09 Health Diagnostic Laboratory, Inc. Markers associated with arteriovascular events and methods of use thereof
US7592009B2 (en) 2006-10-10 2009-09-22 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Polypeptide ligands for targeting cartilage and methods of use thereof
BRPI0815551A2 (pt) 2007-08-15 2015-02-18 Univ South Florida Tratamento através de hucbc de doença beta-amiloide
US8097645B2 (en) 2007-10-12 2012-01-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compounds for activating TGF-β signaling
US20090227018A1 (en) 2007-10-25 2009-09-10 Revalesio Corporation Compositions and methods for modulating cellular membrane-mediated intracellular signal transduction
US20100310609A1 (en) 2007-10-25 2010-12-09 Revalesio Corporation Compositions and methods for treatment of neurodegenerative diseases
ES2332846B1 (es) * 2007-10-26 2010-07-08 Grifols, S.A. Utilizacion de albumina humana terapeutica para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de pacientes afectados por desordenes cognitivos.
ES2394841T5 (es) 2007-12-06 2021-10-29 Asahi Kasei Medical Co Ltd Membrana de fibras huecas porosa para el tratamiento de la sangre
CA2721037C (en) 2008-04-15 2018-05-22 Talecris Biotherapeutics, Inc. Methods for preparing a concentrated plasma product formulation using ultrafiltration/diafiltration
US20090297485A1 (en) * 2008-05-28 2009-12-03 Allan Mishra Compositions and methods for treating psychiatric and neurodegenerative disorders
US20100124756A1 (en) 2008-10-10 2010-05-20 Sandip Ray Collection of biomarkers for diagnosis and monitoring of alzheimer's disease in body fluids
US20110117100A1 (en) 2008-11-03 2011-05-19 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions and methods for diagnosis, stratification and treatment of amyloidogenic diseases
US10626399B2 (en) 2010-01-28 2020-04-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of treating cognitive symptoms of an aging-associated impairment by modulating C-C chemokine receptor type 3 (CCR3)
US20160208011A1 (en) 2010-01-28 2016-07-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Ccr3 modulation in the treatment of aging-associated impairments, and compositions for practicing the same
WO2011094535A2 (en) 2010-01-28 2011-08-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Biomarkers of aging for detection and treatment of disorders
US20110202284A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Mcreynolds Cristopher Novel groups of biomarkers for diagnosing alzheimer's disease
RU2428997C1 (ru) 2010-03-01 2011-09-20 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Волгоградская государственная сельскохозяйственная академия Способ получения лечебных препаратов из пуповины плода
AR080698A1 (es) 2010-04-01 2012-05-02 Imclone Llc Anticuerpo o fragmento del mismo que especificamente enlaza la variante de csf -1r humano, composicion farmaceutica que lo comprende, su uso para la manufactura de un medicamento util para el tratamiento de cancer y metodo para determinar si un sujeto es candidato para tratamiento de cancer basado e
CN107011438B (zh) 2010-05-04 2020-11-20 戊瑞治疗有限公司 结合csf1r的抗体
US9161968B2 (en) 2011-04-08 2015-10-20 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of neuroprotection involving macrophage colony stimulating factor receptor agonists
RU2470677C1 (ru) 2011-10-19 2012-12-27 Надежда Михайловна Цулая Способ стимуляции репаративных и трофических процессов в коже
US20150079045A1 (en) 2012-02-13 2015-03-19 Wuyi Kong Nprcps, pfdncs and uses thereof
EP2827887A4 (en) 2012-03-20 2016-04-20 Einstein Coll Med METHOD FOR IMPROVING THE EFFECTIVENESS OF BLOOD TRANSFUSIONS
US20130302322A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
US20150217046A1 (en) * 2012-06-05 2015-08-06 Synagile Corporation Dosing regimens for subcutaneously infusible acidic compositions
US9512052B2 (en) 2012-10-29 2016-12-06 China Petroleum & Chemical Corporation Adsorption desulfurization process for hydrocarbons and a reaction apparatus therefor
PT2994160T (pt) * 2013-05-06 2019-08-07 Baxalta Inc Tratamento de sub-populações com doença de alzheimer com imunoglobulina g combinada
US20150061767A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Texas Instruments Incorporated Telescopic Amplifier with Improved Common Mode Settling
US10905779B2 (en) 2013-12-09 2021-02-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for screening human blood products comprising plasma using immunocompromised rodent models
NZ720949A (en) 2013-12-09 2019-03-29 Univ Leland Stanford Junior Methods and compositions for treating aging-associated conditions
ES2524516B1 (es) 2014-05-29 2015-03-31 Grifols Worldwide Operations Limited Procedimiento de preparación de albúmina humana con nivel de oxígeno disuelto reducido
AU2016265948B2 (en) 2015-05-18 2018-12-06 Alkahest, Inc. Methods and compositions for treating aging-associated impairments
SI3307296T1 (sl) 2015-06-15 2022-04-29 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Office of the General Counsel TIMP2 za uporabo pri zdravljenju s starostjo povezanih stanj
US11628190B2 (en) * 2015-08-28 2023-04-18 University Of South Florida Plasma derived from human umbilical cord blood for the treatment of neurodegenerative disorders
BR112019003172A2 (pt) * 2016-08-18 2019-05-28 Alkahest Inc frações de plasma sanguíneo como tratamento para distúrbios cognitivos associados ao envelhecimento
EA039316B1 (ru) 2016-10-24 2022-01-12 Алкахест, Инк. Фракции плазмы крови в качестве лечения когнитивных расстройств, связанных со старением
DK3615057T3 (da) 2017-04-26 2024-01-02 Alkahest Inc Doseringsskema til behandling af kognitive svækkelser med blodplasmaprodukter

Also Published As

Publication number Publication date
IL270125B1 (en) 2023-10-01
IL305904A (en) 2023-11-01
MA48480A (fr) 2020-03-04
US11413308B2 (en) 2022-08-16
NZ758615A (en) 2023-09-29
EP3615057A4 (en) 2020-09-30
AU2018257921A1 (en) 2019-11-14
UA127828C2 (uk) 2024-01-17
EP4299129A2 (en) 2024-01-03
TW201841646A (zh) 2018-12-01
WO2018200560A1 (en) 2018-11-01
DK3615057T3 (da) 2024-01-02
JP2023036856A (ja) 2023-03-14
CN110709098B (zh) 2024-01-30
CA3061194A1 (en) 2018-11-01
JP7625364B2 (ja) 2025-02-03
AU2024216537A1 (en) 2024-09-19
IL270125B2 (en) 2024-02-01
CL2019003076A1 (es) 2020-01-31
US10357513B2 (en) 2019-07-23
EP3615057B1 (en) 2023-11-29
MX2019012795A (es) 2020-02-13
JP2025000786A (ja) 2025-01-07
SG11201909927RA (en) 2019-11-28
ZA202301009B (en) 2023-10-25
CN110709098A (zh) 2020-01-17
EP4299129A3 (en) 2024-03-20
US20210060063A1 (en) 2021-03-04
KR20190135059A (ko) 2019-12-05
TWI782009B (zh) 2022-11-01
TW202332455A (zh) 2023-08-16
US20190282617A1 (en) 2019-09-19
US10874692B2 (en) 2020-12-29
US20180311280A1 (en) 2018-11-01
BR112019022402A2 (pt) 2020-05-19
IL270125A (es) 2019-12-31
AU2018257921B2 (en) 2024-06-06
CN117899111A (zh) 2024-04-19
JP2020517693A (ja) 2020-06-18
EP3615057A1 (en) 2020-03-04
CO2019012385A2 (es) 2020-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2971462T3 (es) Pauta posológica para el tratamiento de los trastornos cognitivos con productos de plasma sanguíneo
US11040068B2 (en) Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products
AU2019306477B2 (en) Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products
HK40112177A (en) Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products
NZ758615B2 (en) Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products
EA046284B1 (ru) Схема применения плазмы крови и препаратов плазмы крови для лечения когнитивных и двигательных нарушений
HK40019104B (zh) 用血浆和血浆制品治疗认知障碍和运动障碍的给药方案
HK40019104A (en) Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products
EA042179B1 (ru) Схема применения плазмы крови и препаратов плазмы крови для лечения когнитивных и двигательных нарушений