ES2968023T3

ES2968023T3 - Derivados de oxoisoquinolina novedosos

Info

Publication number: ES2968023T3
Application number: ES17874560T
Authority: ES
Inventors: Wataru Kawahata; Takao Kiyoi; Takayuki Irie; Tokiko ASAMI; Masaaki Sawa; Shigeki Kashimoto
Original assignee: Carna Biosciences Inc
Current assignee: Carna Biosciences Inc
Priority date: 2016-11-25
Filing date: 2017-11-24
Publication date: 2024-05-06
Anticipated expiration: 2037-11-24
Also published as: EP3546462A1; US10793575B2; KR20190104142A; WO2018097234A1; MX2019006079A; RU2019119374A3; FI3546462T3; CN109963852A; CA3044933A1; AU2017364720A1; AU2017364720B2; RU2019119374A; EP3546462B1; EP3546462A4; CN109963852B; DK3546462T3; KR102565546B1; BR112019010617A2; US20190359616A1; JPWO2018097234A1

Abstract

En la presente invención, un derivado de oxoisoquinolina representado por la fórmula (I) (en la fórmula, Q y R1 son como se definen en la descripción), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es útil como inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton para tratar el cáncer, B -linfoma celular, leucemia linfocítica crónica y similares. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de oxoisoquinolina novedosos

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a un producto farmacéutico, y en particular a un novedoso derivado de oxoisoquinolina que tiene un efecto inhibidor de BTK, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a una composición farmacéutica que comprende el mismo y al uso médico del derivado de oxoisoquinolina novedoso o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Antecedentes de la invención

La tirosina quinasa de Bruton (BTK) es un miembro de la familia Tec de tirosina quinasas no receptoras, y es una enzima de señalización importante que se expresa en todos los tipos de células hematopoyéticas a excepción de los linfocitos T y las células asesinas naturales.

La BTK es un importante factor de control asociado con la supervivencia, la diferenciación, la proliferación y la activación de células B, y juega un papel importante en la señalización de las células B (Documentos no de patente 1 y 2). Un receptor de células B (BCR) de la superficie celular envía señales a las células a través de la BTK existente en la corriente abajo de BCR y, por lo tanto, se considera que la activación anormal de la ruta de señalización de las células B acelera la proliferación y la supervivencia de las células cancerosas del linfoma de células B, leucemia linfocítica crónica y similares (Documento no de patente 3). Se sabe que la BTK también juega un papel importante en la ruta de señalización de un gran número de otras células, y se dice que la BTK está implicada en enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias y similares (Documento no de patente 1).

Por ejemplo, se sabe que la BTK juega un papel importante en la señalización de un receptor de IgE de alta afinidad (F<ce>RI) en mastocitos, y disminuye la desgranulación y disminuye la producción de citocinas proinflamatorias en mastocitos deficientes en BTK (Documento no de patente 4). Se sugiere que la BTK está implicada en el lupus eritematoso sistémico (LES) en una prueba de un ratón deficiente en BTK (Documento no de patente 5). Además, el ratón mutante BTK presenta resistencia a la aparición de la artritis inducida por colágeno (Documento no de patente 6).

El ibrutinib es un inhibidor de BTK irreversible y se usa para el tratamiento de tumores de células B como un fármaco anticancerígeno. Recientemente se descubrió que la tolerancia al ibrutinib se generaba debido a la mutación C481S de BTK en el tratamiento con ibrutinib (Documento no de patente 7) . También se reportó que el p65 BTK, que es una isoforma de BTK, era expresado en una corriente abajo de la señal RAS en un cáncer sólido diferente a un cáncer de sangre, y que estaba involucrado en la proliferación de un cáncer sólido, como una célula de cáncer de colon (Documento no de patente 8) . Por lo tanto, el compuesto que tiene una actividad inhibidora de BTK es útil para el tratamiento de enfermedades que están implicadas en la señalización de BTK, por ejemplo, cáncer, linfoma de células B y leucemia linfocítica crónica, y también un cáncer sólido en el cual se expresa p65BTK. Además es útil para el tratamiento de enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunes y enfermedades inflamatorias.

Adicionalmente, se requiere de un inhibidor de BTK que sea efectivo para tratar un cáncer que tenga mutación de BTK y que sea tolerante a un inhibidor de BTK irreversible, como ibrutinib.

Los presentes inventores reportan un derivado de triazina como un compuesto que tiene una actividad inhibidora de BTK (Documentos de patente 1 y 2). También se describen compuestos similares a los de la presente invención (Documentos de patente 3 y 4). También se describen compuestos bicíclicos heteroespecíficos, sus tautómeros, polimorfos, estereoisómeros, profármacos, solvatos, hidratos, N-óxidos, cocristales, sales farmacéuticamente aceptables y composiciones farmacéuticas que los contienen, que son útiles para el tratamiento, prevención, profilaxis, gestión o tratamiento complementario de todas las afecciones médicas relacionadas con la inhibición de la tirosina quinasa de Bruton (Documento de patente 5). Pero en esos documentos no se describe un derivado de oxoisoquinolina de la presente invención.

Documento(S) de la Técnica Anterior

Documento(S) de Patente

[Documento de patente 1] WO2013/133367

[Documento de patente 2] WO2015/012149

[Documento de patente 3] WO2013/157022

[Documento de patente 4] CN104211703

[Documento de patente 5] WO 2013/157022

Documento(s) no de Patente

[Documento no de patente 1] Satterthwaite, A. B. y Witte, O. N., Immunol. Rev., 2000, 175, 120-127. [Documento no de patente 2] Kurosaki, T., Curr. Opin. Immunol., 2000, 12, 276-281.

[Documento no de patente 3] Davis, R. E. et al., Nature, 2010, 463, 88-92.

[Documento no de patente 4] Ellmeier, W., et al., FEBS J., (2011), 278, 1990-2000.

[Documento no de patente 5] Halcomb, K. E., Mol. Immunol., 2008, 46(2), 233-241.

[Documento no de patente 6] Jansson, L. y Holmdahl, R., Clin. Exp. Immunol., 1993, 94, 459-465.

[Documento no de patente 7] Cheng,S. et al., Leukemia, 2015, 29, 895-900.

[Documento no de patente 8] Grassili.E., et al., Oncogene, 2016, 35, 4368-4378.

[Documento no de patente 9] Zhao X. et al., Bioorg. Med. Chem., 2015, 23, 891-901.

Divulgación de la invención

PROBLEMA QUE SERÁ RESUELTO POR MEDIO DE LA INVENCIÓN

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un producto farmacéutico, particularmente un novedoso derivado de oxoisoquinolina que tenga un efecto inhibidor de BTK, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, una composición farmacéutica que lo comprende y un uso médico del novedoso derivado de oxoisoquinolina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. MEDIOS PARA RESOLVER EL PROBLEMA

La presente invención se logra mediante los siguientes (1) a (12):

(1) un derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (I):

(I )

en donde R1 es un alquilo C1-3 opcionalmente sustituido

Q es una estructura (a);

en donde R2 y R3 son independientemente un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, un grupo arilo opcionalmente sustituido, un grupo heteroarilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

(2) el derivado de oxoisoquinolina de acuerdo con (1) anterior, en donde R1 es un grupo hidroximetilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

(3) el derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (Ia) de acuerdo con (1) anterior:

en donde R3a es un grupo tetrahidropiridilo opcionalmente sustituido,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

(4) el derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (Ia), en donde el sustituyente del grupo tetrahidropiridina se selecciona del grupo que consiste en un grupo oxetanilo, un grupo acetilo, un grupo propionilo, un grupo morfolinoacetilo, un grupo dimetilcarbamoílo, un grupo pirrolidincarbonilo, un grupo metilsulfonilo y un grupo isopropilsulfonilo,

o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos,

(5) el derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (Ia); en donde el sustituyente del grupo tetrahidropiridina es un grupo oxetanilo,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

(6) una composición farmacéutica que comprende el derivado de oxoisoquinolina de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (5) o una sal farmacéuticamente del mismo;

(7) el derivado de oxoisoquinolina de acuerdo con una cualquiera de (1) a (5), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como un medicamento;

(8) el derivado de oxoisoquinolina de acuerdo con uno cualquiera de (1) a (5), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso para prevenir o tratar una enfermedad implicada en la respuesta celular anómala a través de la tirosina quinasa de Bruton;

(9) el derivado de oxoisoquinolina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso de acuerdo con (8), en donde la enfermedad es una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad de los huesos o cáncer;

( 10 ) la composición farmacéutica de acuerdo con (6 ) para su uso como un medicamento;

(11) la composición farmacéutica de acuerdo con (6) para su uso para prevenir o tratar una enfermedad implicada en la respuesta celular anómala a través de la tirosina quinasa de Bruton;

(12) la composición farmacéutica para su uso de acuerdo con (11), en donde la enfermedad es una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad de los huesos o cáncer.

La presente invención también se puede conseguir mediante el siguiente (13):

(13) un compuesto seleccionado del grupo que consiste en los siguientes compuestos;

2-[3-(2-amino-6-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 1)

2-[3-(2-amino-8-fenil-9H-purin-6-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 2)

2-[3-(6-amino-3-fenil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 3)

2-[3-(2-amino-9H-purin-6-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 4)

2-[3-(6-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pir imidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 5)

2-[3-(2-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 6)

2-[3-(2-amino-6-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 7)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(4-metilpiperazin-1-il)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 8)

2-[3-(2-amino-6-ciclopropil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 9)

2-[3-(6-amino-3-metil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 10)

2-{3-[2-amino-6-(hidroximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 11)

2-[3-(2-amino-8-ciclopropil-9H-purin-6-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 12)

2-{3-[2-amino-6-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 13)

2-{3-[2-amino-6-(2-metoxifenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 14)

2-{3-[2-amino-6-(3-metoxifenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 15)

2-{3-[2-amino-6-(4-metoxifenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 16)

2-{3-[2-amino-6-(pir idin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 17)

2-{3-[2-amino-8-(3-metoxifenil)-9H-purin-6-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 18)

2-{3-[2-amino-6-(pir idin-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 19)

2-{3-[6-ammo-3-(4-metoxifeml)-1H-pirazolo[3,4-d]pir imidm-4-il]-2-(hidroximetil)feml}-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 20)

2-{3-[6-ammo-3-(2-metoxifeml)-1H-pirazolo[3,4-d]pir imidm-4-il]-2-(hidroximetil)feml}-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 21)

2-{3-[6-amino-3-(3-metoxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 22)

2-(3-{2-amino-6-[1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)feml)-6-ddopropil-8-fluoroisoqumolin-1(2H)-ona (Ejemplo 23)

2-{3-[2-amino-8-(2-metoxifenil)-9H-purin-6-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 24)

2-{3-[2-amino-8-(pir idin-3-il)-9H-purin-6-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cic lopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 25)

2-(3-{2-amino-6-[4-(morfolinometil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 26)

4-{2-amino-4-[3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-2-(hidroximetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-6-il}benzonitrilo (Ejemplo 27)

2-[3-(2-ammo-5-feml-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)feml]-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 28)

2-{3-[2-amino-6-(3-fluorofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 29)

N-({2-amino-4-[3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-2-(hidroximetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-6-il}meti l)acrilamida (Ejemplo 30)

2-{3-[2-amino-8-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-9H-purin-6-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo de referencia 31)

2-{3-[2-amino-6-(tiofen-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 32)

2-{3-[2-amino-6-(2-fluorofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 33)

2-{3-[2-amino-6-(4-fluorofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 34)

2-{3-[2-amino-6-(2,4-dif luorofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 35)

2-{3-[2-amino-6-(3,4-dif luorofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 36)

2-(3-{2-amino-6-[4-(trif luorometil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-f luoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 37)

2-(3-{2-amino-6-[4-(trif luorometoxi)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 38)

2-{3-[2-amino-6-(aminometil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 39)

2-(3-{2-amino-6-[3-(trif luorometil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-f luoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 40)

2-(3-{2-amino-6-[4-(metilsulfonil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 41)

2-{3-[2-ammo-6-(6-fluoropÍNdm-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pÍNmidm-4-il]-2-(h idroximetil) feml}-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 42)

2-{3-[2-ammo-6-(2-fluorapmdm-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pÍNmidm-4-il]-2-(h idroximetil) feml}-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 43)

2-{3-[2-amino-6-(3,5-difluorofenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 44)

2-{3-[2-amino-6-(5-fluoropirid in-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 45)

2-{3-[2-amino-6-(5-fluoropirid in-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 46)

2-(3-{2-amino-6-[6-(metilamino)piridin-3-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-f luoro isoquinolin- l(2H)-ona (Ejemplo 47)

2-{3-[2-amino-6-(6-morfolinopiridin-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-f luoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 48)

2-{3-[2-amino-6-(2-metoxipir id in-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 49)

2-(3-{2-amino-6-[2-(metilamino)piridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-f luoro isoquinolin- l(2H)-ona (Ejemplo 50)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(dimetilamino)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 51)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(dietilamino)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-cidopropil-8-f luoro isoquinolin- l(2H)-ona (Ejemplo 52)

2-(3-{2-amino-6-[4-(pirrolid in-1-ilmetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ddopropil-8-fluoroisoqumolm-1(2H)-ona (Ejemplo 53)

2-(3-{2-amino-6-[4-(piperidin-1-ilmetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 54)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(4-metil-3-oxopiperazin-1-il)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximeti l)fenil]-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 55)

2-{3-[2-amino-6-(p-to lil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 56)

2-{3-[2-amino-6-(terc-butil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 57)

2-{3-[2-amino-6-(1-bencil-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ddopropil-8-fluoroisoqumolm-1(2H)-ona (Ejemplo 58)

2-(3-{2-amino-6-[6-(dimetilamino)piridin-3-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 59)

2-[3-(2-amino-6-{5-[(2-metoxietil)amino]piridin-3-il}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 60)

2-{3-[2-amino-6-(4-{[4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il]metil}fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 61)

2-{3-[2-amino-6-(1-eti l-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-f luoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 62)

2-{3-[2-amino-6-(1-isopropil-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ddopropil-8-fluoroisoqumolm-1(2H)-ona (Ejemplo 63)

2-{3-[2-ammo-6-(1-femMH-pirazol-4-il)-7H-pirro lo[2,3-d]pinmidm-4-il]-2-(hidroximetil) feml}-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 64)

2-{3-[2-ammo-6-(6-metoxip indm-3-il)-7H-pirro lo[2,3-d]pinmidm-4-il]-2-(h idroximetil)feml}-6-ddopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 65)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(3-oxopiperazin-1-il)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 66)

2-(3-{2-amino-6-[4-(tiazolidin-3-ilmetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 67)

4-{2-amino-4-[3-(6-cidopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-2-(hidroximetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il}-5,6-dihidropirid ina-1(2H)-carboxilato de terc-buti lo (Ejemplo 68)

2-{3-[6-(1-acetiM ,2,3,6-tetrahidropindm-4-il)-2-ammo-7H-pirro lo[2,3-d]pinmidm-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 69)

2-(3-{2-amino-6-[1-(morfolino-4-carbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 70)

2-(3-{2-amino-6-[1-(4-metilpiperazin-1-carbonil)-1,2,3,6-tetrahidropirid in-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 71)

2-(3-{2-amino-6-[1-(terc-butil)-1H-pirazol-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 72)

2-[3-(2-ammo-6-{4-[(4-hidroxipipendm-1-il)metil)feml}-7H-pirrolo[2,3-d]pinmidm-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 73)

2-[3-(2-ammo-6-{4-[(4-metoxipipendm-1-il)metil]feml}-7H-pirrolo[2,3-d]pinmidm-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 74)

2-[3-(6-{4-[(4-acetilp iperazin-1-il)metil]fenil}-2-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 75)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(2,6-dimetilmorfolino)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 76)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(4,4-difluoropiperidin-1-il)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 77)

2-{3-[2-amino-6-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 78)

2-{3-[2-amino-6-(4-{[4-(2,2,2-trifluoroetil)piperazin-1-il]metil}fenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 79)

2-[3-(2-amino-6-{4-[(3,3-dimetilpiperidin-1-il)metil]fenil}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 80)

2-{3-[2-amino-6-(ciclohex-1-en-1-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 81)

2-{3-[2-amino-6-(3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 82)

2-{3-[2-amino-6-(1,1-dioxido-3,6-dihidro-2H-tiopiran-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 83)

2-{3-[2-amino-6-(1-propionil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 84)

2-[3-(2-amino-6-{1-[2-(dimetilamino)acetil]-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il}-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 85)

2-(3-{2-amino-6-[1-(2-morfolinoacetil)-1,2,3,6-tetrahidropirid in-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 86)

4-{2-amino-4-[3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-2-(hidroximetil)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-6-il}-N,N-dimetil-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxamida (Ejemplo 87)

2-(3-{2-amino-6-[1-(pirrolid in-1-carbonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 88)

2-(3-{2-amino-6-[1-(metilsulfonil)-1,2,3,6-tetrahidropirid in-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 89)

2-(3-{2-amino-6-[1-(isopropilsulfonil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 90)

2-{3-[2-amino-6-(1-etil-1,2,3,6-tetrahidropirid in-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 91)

2-(3-{2-amino-6-[1-(cidopropilmetil)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 92)

2-{3-[2-amino-6-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-2-(hidroximetil)fenil}-6-cidopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona (Ejemplo 93)

Los compuestos indicados anteriormente como “ Ejemplo de referencia” no entran dentro del alcance de las reivindicaciones.

EFECTO DE LA INVENCIÓN

Los presentes inventores han estudiado intensamente para resolver los problemas anteriores, y descubrieron que un derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (I) antes descrito, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tiene una excelente actividad inhibidora de BTK, y también confirmaron un potente efecto anti-tumor cuando dicho derivado de oxoisoquinolina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, era administrado oralmente a un modelo de ratón de cáncer utilizando la cepa OCI-Ly10 para completar la presente invención.

La presente invención proporciona un compuesto que es útil para prevenir o tratar enfermedades de las cuales se sabe que están involucradas en la respuesta celular anormal a través de BTK, por ejemplo, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades de los huesos, y cánceres como linfoma, y de preferencia se usa una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto como un ingrediente activo, en especial cuando se administra oralmente.

El compuesto provisto por la presente invención también es útil, como un inhibidor de BTK, para reactivos que serán utilizados en pruebas e investigaciones.

MEJOR MODO DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN

La presente invención se explica a continuación en detalle.

Un novedoso derivado de oxoisoquinolina de la presente invención es un compuesto de la fórmula (I):

(I )

en donde R1 es un grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, y

Q es una estructura (a) a continuación:

R2 y R3 son independientemente un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, un grupo arilo opcionalmente sustituido, un grupo heteroarilo opcionalmente sustituido y un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido.

La estructura (a) es preferible como una estructura de Q.

En la especif icación de la presente solicitud, una porción del grupo alquilo C1-3 en el “grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido” puede ser cualquiera de un grupo alquilo lineal o ramificado que tiene de uno a tres átomos de carbono, y específicamente se puede ejemplificar con un grupo metilo, un grupo etilo, y un grupo isopropilo, etc.

Una porción del grupo cicloalquilo en el “grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido” puede ser cualquiera de un grupo cíclico que tiene de tres a seis átomos de carbono, y específicamente un grupo ciclopropilo, un grupo ciclobutilo, un grupo ciclohexilo, etc. se pueden ejemplificar.

Una porción del grupo arilo en el “grupo arilo opcionalmente sustituido” puede ser cualquiera de un grupo arilo monocíclico o bicíclico que tiene de 6 a 14 átomos de carbono, y el grupo arilo bicíclico puede estar parcialmente hidrogenado. Específicamente, se puede ejemplificar un grupo fenilo, un grupo naftilo, un grupo tetrahidronafti lo, un grupo indenilo, etc.

Una porción del grupo heteroarilo en el “grupo heteroarilo opcionalmente sustituido” incluye un grupo heterocíclico aromático monocíclico y un grupo heterocíclico aromático condensado, y un grupo heterocíclico aromático monocíclico de 5 o 6 miembros que contiene un heteroátomo por lo menos seleccionado de un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno como el grupo heterocíclico aromático monocíclico. Específicamente, se pueden ejemplificar pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, tienilo, tiazolilo, furanilo, piridilo, pirimidilo, piridazilo, etc., y ejemplos del grupo heterocíclico aromático condensado incluyen un grupo heterocíclico bicíclico condensado en el que se usa un anillo de 3 a 8 miembros que contiene un heteroátomo por lo menos seleccionado de un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno. Específicamente, se pueden ejemplificar tetrahidroisoquinolilo, benzotiofenilo, bencimidazolilo, benzooxazolilo, benzotiazolilo, indolilo e isoquinolilo.

Una porción del grupo heterocíclico en el “grupo heterocíclico opcionalmente sustituido” es un grupo heterocíclico saturado monocíclico de 4 a 6 miembros que contiene un heteroátomo por lo menos seleccionado de un átomo de nitrógeno, un átomo de azufre y un átomo de oxígeno, y puede incluir un enlace insaturado parcialmente en el anillo. Específicamente, se puede ejemplificar un grupo dihidrotiopiranilo, grupo 1,1 -dioxo-dihidrotiopiranilo, y grupo tetrahidropiridilo, y el ejemplo especialmente preferido es el grupo tetrahidropiridilo.

Un sustituyente de la expresión “opcionalmente sustituido” en el grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, el grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, el grupo arilo opcionalmente sustituido, el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido, y el grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, pueden ser iguales o diferentes cuando el grupo anterior tiene dos o más sustituyentes, y el grupo puede estar sustituido con uno, o dos o más de cualquier tipo de sustituyente(s) en cualquier posición que sea químicamente permisible.

Ejemplos del sustituyente en el grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido incluyen, por ejemplo, un átomo de halógeno, un grupo alcoxi C1-C4, un grupo amino opcionalmente sustituido con uno o dos de grupo alquilo C1-C4, un grupo nitro, un grupo ciano, un grupo hidroxi, un grupo carbamoílo opcionalmente sustituido con uno o dos de un grupo alquilo C1-C4, un grupo carboxilo, un grupo formilo, un grupo acetilo, un grupo mesilo, un grupo benzoílo, un grupo acilamino C1-C6, un grupo aciloxi C1-C6, etc. Como el grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido se puede ejemplificar un grupo hidroximetilo.

Ejemplos de un sustituyente relacionado con la expresión de “opcionalmente sustituido” en el grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, el grupo arilo opcionalmente sustituido, el grupo heteroarilo opcionalmente sustituido y el grupo heterocíclico opcionalmente sustituido incluyen un átomo de halógeno, un átomo de oxígeno, un grupo alquilo C1-C4, un grupo alcoxi C1-C4, un grupo amino opcionalmente sustituido con uno o dos de un grupo alquilo C1-C4, un grupo nitro, un grupo ciano, un grupo hidroxi, un grupo carbamoílo opcionalmente sustituido con uno o dos de un grupo alquilo C1-C4, un grupo sulfonilo opcionalmente sustituido con un grupo alquilo C1-C4, un grupo carboxi, un grupo formilo, un grupo acetilo, un grupo mesilo, un grupo benzoílo, un grupo oxetanilo, un grupo acilamino C1-C6, y un grupo aciloxi C1-C6, etc.

Pueden existir isómeros en el compuesto (I) de la presente invención, dependiendo del tipo del sustituyente. En la presente especificación, los isómeros pueden estar descritos por una estructura química de sólo una forma de los mismos, pero la presente invención incluye los isómeros geométricos y ópticos y tautómeros que se puedan formar estructuralmente, y también incluye los isómeros mencionados anteriormente solos, o una mezcla de los mismos.

Ejemplos de una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto (I) de la presente invención incluyen sales de ácido inorgánico con ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido carbónico, y ácido fosfórico, etc.; y sales de ácido orgánico con ácido fumárico, ácido maleico, ácido metanosulfónico, y ácido ptoluenosulfónico, etc. La presente invención también incluye sales amonio, además de sales de metal alcalino con sodio y potasio; sales de metal alcalinotérreo con magnesio y calcio; sales de amina orgánica con trieti lamina y etanolamina; y sales de aminoácido básico con lisina, arginina y ornitina, etc.

El compuesto (I) y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la presente invención, se pueden producir, por ejemplo, mediante los métodos mostrados a continuación. Cuando un grupo definido puede ser afectado químicamente bajo las condiciones de un método ejemplificado en el método de producción mostrado a continuación, o no es adecuado para usarlo para llevar a cabo el método, es posible producirlos fácilmente mediante un método que se utiliza usualmente en química sintética orgánica, por ejemplo, un método de aplicación de medios tales como protección o desprotección de un grupo funcional [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a edición, John Wiley & Sons, Inc., 1999]. Si es necesario, también se puede cambiar el orden de un paso de reacción, como la introducción de sustituyentes.

Los significados de las abreviaturas y símbolos utilizados en la siguiente descripción son los siguientes.

DCM: diclorometano

THF: tetrahidrofurano

DIEA: N,N-diisopropiletilamina

DMF: N,N-dimeti lformamida

DMSO: dimetilsulfóxido

Pd(PPh3)4 : tetraquis[trifenilfosfina]Paladio(0)

[Método para la preparación del compuesto (I) de la presente invención]

Un compuesto (I) de la presente invención se puede preparar de acuerdo con la reacción química 1, por ejemplo;

en donde W es un grupo boronilo o un grupo éster boronato, y R1 y Q son iguales que antes.

El compuesto (I) de la presente invención se puede producir por medio de una reacción de acoplamiento cruzado, como una reacción de acoplamiento de Suzuki, usando un compuesto (II) y un compuesto (III) (con respecto a las condiciones de la reacción de acoplamiento de Suzuki, véanse, por ejemplo, las literaturas, N. Miyaura et al., J. Am. Chem. Soc., 107, 972 (1985)., N. Miyaura, A. Suzuki, Chem. Rev. 95, 2457 (1995)). Es decir, la reacción se puede realizar en la presencia de un catalizador de metal como paladio o níquel, si es necesario, usando una base y aditivos.

Ejemplos de un solvente usado en la reacción incluyen THF, dioxano, tolueno, dimetoxietano, metanol, etanol, y acetonitrilo. También es adecuado usar dos o más tipos de estos solventes, o usarlos en combinación con agua. El solvente es preferiblemente un solvente mixto de THF y agua, o un solvente mixto de tolueno, metanol y agua, o dioxano.

El compuesto (II) se utiliza preferiblemente en una cantidad equivalente o en exceso, y más preferiblemente en una cantidad de 1 equivalente a 5 equivalentes, con base en el compuesto (III). Si es necesario, se puede agregar una base con el fin de acelerar la reacción, y carbonato de sodio, carbonato de cesio, y carbonato de potasio se utilizan usualmente como la base. La cantidad de la base que será utilizada es de 1 equivalente a 10 equivalentes, y preferiblemente de 1 equivalente a 5 equivalentes, con base en el compuesto (III). Es posible usar, como un catalizador metálico, un catalizador de paladio disponible comercialmente (por ejemplo, PdCh(dppf), Pd2(dba)3, Pd(PPh3)4, etc.) que se utiliza en el acoplamiento cruzado, y de preferencia el catalizador se usa en una cantidad catalítica, es decir, una cantidad de 0,1 equivalente a 0,5 equivalente, con base en el compuesto (III).

Si es necesario, se pueden agregar aditivos a fin de acelerar la reacción. El aditivo incluye, por ejemplo, rac-BINAP y se puede utilizar en una cantidad de 0,01 equivalente a 1 equivalente con base en el compuesto (III). Es posible sintetizar el producto haciéndolo reaccionar a una temperatura que varía de 0 ° C a 200 °C durante varios minutos a varios días, y de preferencia de 10 °C a 100 °C durante 1 hora a 36 horas. También es posible sintetizar el producto mediante la reacción bajo la condición de temperatura de 60 °C a 150 °C durante varios minutos a varias horas, utilizando un equipo de síntesis de microondas.

También se puede preparar el compuesto (I) de la presente invención por medio de la protección de grupos funcionales del compuesto (II) y (III), si es necesario, usando una técnica común que se utiliza en una química orgánica sintética, y desprotegiéndolos después de la reacción de acoplamiento.

Además, el compuesto (II) utilizado en la reacción química 1 como material de partida, está disponible de acuerdo con un método descrito en el Documento de patente 2.

El compuesto (III-a) en el que Q es una estructura (a) es uno del compuesto (III) utilizado como material de partida en la reacción química 1, y se puede preparar de acuerdo con la reacción química 2 por ejemplo;

Reacción Química 2

en donde X es un átomo de halógeno y R2 y R3 son los mismos que antes.

El compuesto (III-a) se obtiene por medio de ciclocondensación de 2,4-diamino-6-hidroxipirimidina y el compuesto (IV) y una reacción de cloración posterior por medio de oxicloruro fosoforoso. Es decir, el compuesto (V) se obtiene por la reacción de 1 a 5 equivalentes, de preferencia de 1 a 1,5 equivalentes del compuesto (IV) con 2,4-diamino-6-hidroxipirimidina en un solvente polar y, si es necesario, bajo la presencia de un catalizador de base.

Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usan agua y DMF. La temperatura de reacción normalmente es de 0 °C a 200 °C, de preferencia de temperatura ambiente a 150 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 48 horas, y de preferencia se ejemplifican de 1 a 24 horas.

El compuesto (IlI-a) se obtiene haciendo reaccionar de 1 a 50 equivalentes, de preferencia de 5 a 20 equivalentes de oxicloruro de fósforo con el compuesto (V). La temperatura de reacción normalmente es de temperatura ambiente a 200 °C, de preferencia de 50 °C a 150 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifica de 1 a 48 horas, y de preferencia se ejemplifica de 5 a 24 horas.

Uno de los materiales de partida en la reacción química 2, 2,4-diamino-6-hidroxipirimidina está disponible comercialmente, y el compuesto (IV) también está disponible comercialmente o se prepara por un procedimiento bien conocido o el procedimiento acorde al mismo.

El compuesto (III-b) en el que Q es una estructura (b) no entra dentro del alcance de las reivindicaciones y es uno del compuesto (III) utilizado como material de partida en la reacción química 1, y se puede preparar de acuerdo con la reacción química 3 por ejemplo;

Reacción Química 3

en donde R3 es el mismo que el anterior.

El compuesto (III-b) se obtiene por la condensación de 2,5,6-triaminopirimidin-4(3H)-ona y el cloruro ácido (VI), y una subsiguiente reacción de deshidrociclación y cloración por medio de oxicloruro de fósforo. Es decir, el compuesto (VII) se obtiene por la reacción de 1 a 10 equivalentes, de preferencia de 1 a 3 equivalentes del cloruro ácido (VI) con 2,5 6-triaminopirimidin-4(3H)-ona en un solvente bajo la presencia de una base.

Normalmente se usa una base orgánica como DIEA, tr ieti lamina etc. o una base inorgánica como hidróxido de sodio o carbonato de potasio, etc., y se agregan de 1 a 10 equivalentes, de preferencia de 1 a 5 equivalentes de la base, con base en el cloruro ácido (VI). Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usan agua, DMF y THF. La temperatura de reacción normalmente es de -20 °C a 100 °C, de preferencia de 0 °C a 80 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 48 horas, y de preferencia se ejemplifican de 1 a 24 horas.

El compuesto (III-b) se obtiene haciendo reaccionar de 1 a 100 equivalentes, de preferencia de 10 a 50 equivalentes de oxicloruro de fósforo con el compuesto (VII). La temperatura de reacción normalmente es de temperatura ambiente a 200 °C, de preferencia de 50 °C a 150 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifica de 1 a 48 horas, y de preferencia se ejemplifica de 5 a 24 horas.

Uno de los materiales de partida en la reacción química 3, 2,5,6-triaminopirimidin-4(3H)-ona está disponible comercialmente, y el compuesto (VI) también está disponible comercialmente o se prepara por un procedimiento bien conocido o el procedimiento acorde al mismo.

El compuesto (III-c) en el que Q es una estructura (c) no entra dentro del alcance de las reivindicaciones tampoco y es uno del compuesto (III) utilizado como material de partida en la reacción química 1, y se puede preparar de acuerdo con la reacción química 4 por ejemplo;

en donde R2 y X son los mismos que antes.

El compuesto (III-c) se obtiene por la condensación de 2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-carbaldehído y R2MgX, y una subsiguiente reacción de oxidación y ciclación por medio de monohidrato de hidrazina. Es decir, el compuesto (VIII) se obtiene haciendo reaccionar 1-10 equivalentes, de preferencia 1-5 equivalentes de R2MgX con 2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-carbaldehído en un solvente.

Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usa THF. La temperatura de reacción normalmente es de -100 °C a -30 °C, de preferencia de -80 °C a -60 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,1 a 12 horas, y de preferencia se ejemplifican de 0,2 a 6 horas.

El compuesto (IX) se obtiene oxidando el compuesto (VIII) con de 1 a 50 equivalentes, de preferencia de 2 a 20 equivalentes de un agente oxidante, y un agente oxidante metálico como óxido crómico (VI) y dióxido de manganeso etc. o un agente oxidante de yodo hipervalente como Peryodinano de Dess-Martin, etc.

Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usan acetona, DCM y 1,2-dicloroetano. La temperatura de reacción normalmente es de -20 °C a 100 °C, de preferencia de 0 °C a 80 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 24 horas, y de preferencia se ejemplifican de 1 a 12 horas.

El compuesto (III-c) se obtiene haciendo reaccionar 1-10 equivalentes, de preferencia 1-5 equivalentes de monohidrato de hidrazina con el compuesto (IX) en un solvente y si es necesario, bajo la presencia de un catalizador de base. Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usa 1,4-dioxano o THF. La temperatura de reacción normalmente es de 0 °C a 100 °C, de preferencia de temperatura ambiente a 60 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 48 horas, y de preferencia se ejemplifican de 0,5 a 24 horas.

El 2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-carbaldehído, que es un material de partida en la reacción química 4, está disponible comercialmente, y R2MgX también está disponible comercialmente o se prepara por un procedimiento bien conocido o el procedimiento acorde al mismo.

El compuesto (III-a') en el que Q es una estructura (a) y R2 es un átomo de hidrógeno es uno del compuesto (III) utilizado como material de partida en la reacción química 1, y se puede preparar de acuerdo con la reacción química 5 por ejemplo;

en donde PG es un grupo protector, Y es un átomo de bromo, un átomo de yodo o un grupo trifluorometanosulfonilo y R3 es igual al anterior.

El compuesto (III-a') se obtiene por medio de una reacción de ciclación del compuesto (XII), que se obtiene por medio de una reacción de acoplamiento de Sonogashira entre diaminopirimidina (X) y el compuesto (XI). Específicamente, el compuesto (XII) se obtiene con la reacción de 1-10 equivalentes, de preferencia de 2-5 equivalentes del compuesto (XI) con diaminopirimidina (X) en un solvente polar bajo la presencia de yoduro de cobre, un catalizador de paladio y una base, y un tratamiento posterior con una solución acuosa de hidróxido de sodio y fluoruro de tetrabutilamonio.

Una cantidad de yoduro de cobre agregado en la reacción es de 0,01-2 equivalentes, de preferencia 0,05-0,5 equivalentes, con base en la diaminopirimidina (X), y un catalizador de paladio(0) como Pd(PPh3)4 y PDCl2(PPh3)2, etc. se usa como el catalizador de paladio. Una cantidad del catalizador de paladio agregado en la reacción es de 0,01-2 equivalentes, de preferencia de 0,05-0,5 equivalentes con base en la diaminopirimidina (X). Una base orgánica como DIEA y tr ieti lamina, se usa normalmente en la reacción como la base, y de 1-10 equivalentes, de preferencia de 1-5 equivalentes de la base se agregan en la reacción basada en la diaminopirimidina (X). Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usa 1,4-dioxano o DMF. La temperatura de reacción normalmente es de 0 °C a 200 °C, de preferencia de temperatura ambiente a 80 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 5 horas, y de preferencia se ejemplifican de 0,5 a 2 horas.

El compuesto (III-a') se obtiene añadiendo 1-50 equivalentes, de preferencia 2-20 equivalentes de la base al compuesto (XII) y realizando una reacción de ciclación. Se puede usar terc-butóxido de potasio o carbonato de cesio como la base. Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usa N-metilpirrolidona, 1,4-dioxano y DMF. La temperatura de reacción normalmente es de -20 °C a 100 °C, de preferencia de 0 °C a 80 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 10 horas, y de preferencia se ejemplifican de 0,5 a 2 horas.

También el compuesto (XII) de la reacción química 5 puede ser sintetizado introduciendo la porción R3 por medio de acoplamiento de Sonogashira con el compuesto (XIV) al compuesto (XIII), que se obtiene por el acoplamiento de Sonogashira entre diaminopiridina (X) y acetileno terminal-protegido, y una posterior desprotección. Es decir, el compuesto (XIII) se obtiene por la reacción de 1-10 equivalentes, de preferencia 2-5 equivalentes del acetileno terminal-protegido como trimeti lsil i laceti leno con diaminopirimidina (X) en un solvente polar bajo la presencia de yoduro de cobre, un catalizador de paladio y una base, y posteriormente tratarlo con una solución acuosa de hidróxido de sodio y fluoruro de tetra-n-buti lamonio.

Una cantidad de yoduro de cobre agregado en la reacción es de 0,01-2 equivalentes, de preferencia 0,05-0,5 equivalentes, con base en la diaminopirimidina (X), y un catalizador de paladio(0) como Pd(PPh3)4 y PDCl2(PPha)2, etc. se usa como el catalizador de paladio. Una cantidad del catalizador de paladio agregado en la reacción es de 0,01-2 equivalentes, de preferencia de 0,05-0,5 equivalentes con base en la diaminopirimidina (X). Una base orgánica como DIEA y tr ieti lamina, se usa normalmente en la reacción como la base, y de 1-10 equivalentes, de preferencia de 1-5 equivalentes de la base se agregan en la reacción basada en la diaminopirimidina (X). Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usa 1,4-dioxano o DMF. La temperatura de reacción normalmente es de 0 °C a 200 °C, de preferencia de temperatura ambiente a 80 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 5 horas, y de preferencia se ejemplifican de 0,5 a 2 horas.

El compuesto (XII) se obtiene con la reacción de 1-10 equivalentes, de preferencia de 1-5 equivalentes del compuesto (XIV) con el compuesto (XIII) en un solvente polar bajo la presencia de yoduro de cobre, un catalizador de paladio y una base. Una cantidad de yoduro de cobre agregado en la reacción es de 0,01-2 equivalentes, de preferencia 0,05-0,5 equivalentes, con base en el compuesto (XIII), y un catalizador de paladio(0) como Pd(PPh3)4 y PdCl2(PPh3)2, etc. se usa como el catalizador de paladio. Una cantidad del catalizador de paladio agregado en la reacción es de 0,01-2 equivalentes, de preferencia de 0,05-0,5 equivalentes con base en la diaminopirimidina (XIII). Una base orgánica como DIEA y tr ietilamina, se usa normalmente en la reacción como la base, y de 1-10 equivalentes, de preferencia de 1-5 equivalentes de la base se agregan en la reacción basada en el compuesto (XIII). Se puede usar cualquier solvente sin limitación si la reacción no se ve afectada, pero de preferencia se usa 1,4-dioxano o DMF. La temperatura de reacción normalmente es de 0 °C a 200 °C, de preferencia de temperatura ambiente a 120 °C. El tiempo de reacción no está limitado, pero normalmente se ejemplifican de 0,2 a 5 horas, y de preferencia se ejemplifican de 0,5 a 2 horas.

La diaminopirimidina (X) del material de partida en la reacción química 5, el acetileno terminal-protegido (XI) y el compuesto (XIV) también están disponibles comercialmente o se preparan por un procedimiento bien conocido o el procedimiento acorde al mismo.

En la reacción química anterior, W es un grupo boronilo y se puede usar una sal de metal alcalino o metal alcalinotérreo. Ejemplos de un grupo éster boronato incluyen un grupo dimetil éster boronato, un grupo dietil éster boronato, un grupo dibutil éster boronato, un grupo diciclohexil boronato, un grupo etilenglicol éster boronato, un grupo propilenglicol éster boronato (un grupo 1,2-propanodiol éster boronato, un grupo 1,3-propaedioléster boronato), un grupo neopentil glicol éster boronato, un grupo catecol éster boronato, un grupo glicerin éster boronato, un grupo trimetirol etano éster boronato, un grupo dietanolamina éster boronato, un tr ietanolamina éster boronato, etc., y un anhídrido de ácido borónico.

Es posible obtener el compuesto (I) que tiene el grupo funcional deseado en la posición deseada de la presente invención mediante el uso de forma apropiada de los métodos anteriores en combinación, y a continuación la realización de un método utilizado usualmente en química de síntesis orgánica (por ejemplo, una reacción de alquilación de un grupo amino, una reacción de oxidación de un grupo alquiltio en un grupo sulfóxido o un grupo sulfona, una reacción de conversión de un grupo alcoxi en un grupo hidroxilo, o una reacción de conversión inversa del grupo).

El compuesto (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención se pueden formular en una formulación farmacéutica convencional (composición farmacéutica), que es adecuada para administración oral, administración parenteral o administración local.

Las formulaciones para administración oral incluyen formulaciones sólidas tales como comprimidos, gránulos, polvos, y cápsulas; y formulaciones líquidas tales como jarabes. Estas formulaciones se pueden preparar mediante un método convencional. Las formulaciones sólidas se pueden preparar mediante el uso de portadores farmacéuticos convencionales, por ejemplo, lactosa, almidones tales como almidón de maíz; celulosas cristalinas tales como celulosa microcristalina; e hidroxipropilcelulosa, calcio carboximeti lcelulosa, talco, y estearato de magnesio. Las cápsulas se pueden preparar mediante el encapsulamiento de gránulos o polvos preparados de este modo. Los jarabes se pueden preparar al disolver o suspender el compuesto (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención en una solución acuosa que contiene sacarosa y carboximetilcelulosa.

Las formulaciones para administración parenteral incluyen inyecciones tales como instilación. Formulaciones de inyección también se pueden preparar mediante un método convencional, y se pueden incorporar de forma apropiada en agentes isotónicos (por ejemplo, manitol, cloruro de sodio, glucosa, sorbitol, glicerol, xilitol, fructosa, maltosa, manosa), estabilizadores (por ejemplo, sulfito de sodio, albúmina), y antisépticos (por ejemplo, alcohol bencílico, p-oxibenzoato de metilo).

La dosis del compuesto (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención puede variar dependiendo de la gravedad de la enfermedad, la edad y el peso corporal del paciente, y la forma de dosificación, y está usualmente dentro de un intervalo de 1 mg a 1.000 mg por día para adultos. El compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se pueden administrar una vez al día, o administrar de forma dividida dos veces o tres veces al día de acuerdo con una vía oral o parenteral.

El compuesto (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención también se pueden utilizar, como un inhibidor de BTK, para reactivos que serán utilizados en pruebas experimentales y/o investigaciones.

Ejemplos

La presente invención será descrita más específicamente a continuación por medio de Ejemplos y Ejemplos de prueba.

La identificación del compuesto se llevó a cabo mediante espectroscopía de resonancia magnética nuclear de hidrógeno (1H-RMN) y espectroscopía de masas (MS). La 1H-RMN se mide a 400 MHz o 500 MHz, a menos que se especifique lo contrario, y a veces no se puede observar claramente hidrógeno intercambiable, dependiendo del compuesto y de las condiciones de medición. Además, br. significa una señal ancha (ancha).

Se realizó una cromatografía preparativa HPLC mediante una columna ODS disponible en el mercado en un modo de gradiente utilizando agua/metanol (que contiene ácido fórmico) o agua/acetonitrilo (que contiene carbonato de amonio hidrogenado) como eluyentes, a menos que se especifique lo contrario.

Ejemplo 1

2-[3-(2-amino-6-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona

(el primer paso)

Se añadió un acetato de sodio (0,65 g, 7,93 mmol) a una solución acuosa (20 ml) de 2,4-diamino-6-hidroxipirimidina (1,0 g, 7,93 mmol), y la mezcla fue agitada a 100 °C durante una hora. Se agregó 2-bromo-acetofenon (1,89 g, 9,51 mmol) y la mezcla fue agitada a 100 °C durante 8 horas. El precipitado sólido fue recogido para dar 2-amino-6-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]-pirimidin-4-ol (1,5 g) como un producto crudo.

LCMS (m/z): 227,11 [M H]+.

(el segundo paso)

Una mezcla de 2-amino-6-fenil-7H-pirro[2,3-d]-pir imidin-4-ol (1,5 g, 6,64 mmol) y anhídrido de ácido piválico (5 ml) fue agitada a 190 °C durante 5 horas. Se añadió n-pentano a la mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante media hora. El precipitado sólido fue recogido por fi ltración para dar N-(4-hidroxi-6-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-2-il)pivalamida (1,4 g).

LCMS (m/z): 311,33 [M H]+.

(el tercer paso)

Una mezcla de N-(4-hidroxi-6-fenil-7H-pirro[2,3-d]pir imidin-2-il)pivalamida (1,4 g, 4,52 mmol) y oxicloruro de fósforo (5 ml) fue agitada a 100 °C durante 10 horas. El exceso de oxicloruro de fósforo fue evaporado bajo una presión reducida, se agregó una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio al residuo, y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente fue evaporado bajo una presión reducida y el residuo obtenido fue purificado con una cromatografía de columna (gel de sílice, petróleo éter/acetato de etilo) para dar N-(4-cloro-6-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-2-il)pivalamida (0,4 g).

1H RMN (500 MHz, DMSO-da) 8 = 12,93 (s, 1H), 10,06 (s, 1H), 7,99 - 7,97 (m, 2H), 7,53 - 7,47 (m, 2H), 7,41 - 7,38 (m, 1H), 7,04 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 1,25 (s, 9H) ;

LCMS (m/z): 329,26 [M H]+.

(el cuarto paso)

Un solvente mixto de DME-agua (5:1, 12 ml) fue agregado a acetato de 2-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboran-2-il)bencilo (0,392 g, 0,82 mmol), N-(4-cloro-6-fenil-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-2-il)pivalamida (0,27 g, 0,82 mmol) y carbonato de potasio (0,227 g, 1,65 mmol), y la mezcla fue desgasificada durante 30 minutos bajo una atmósfera de gas argón. Se añadió a la misma Pd(PPh3)4 (95 mg, 0,08 mmol) y se hizo reaccionar en un aparato de reacción de microondas a 100 °C durante 10 minutos. La mezcla de reacción se filtró a través de celite, al fi ltrado se le añadió agua y el producto fue extraído con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente fue evaporado bajo presión reducida para dar acetato de 2-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-6-(6-fenil-2-pivalamida-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)bencilo como un producto crudo. El producto crudo obtenido fue disuelto en metanol (2 ml), se añadió una solución acuosa de hidróxido de sodio al 5 % y la mezcla fue agitada a 70 °C durante 30 minutos. El solvente fue evaporado bajo presión reducida y el residuo obtenido fue purificado con HPLC preparativa para dar el compuesto del título (35 mg).

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 11,89 (s, 1H), 7,91 - 7,83 (m, 2H), 7,80 (dd, J = 7,7, 1,3 Hz, 1H), 7,62 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,52 - 7,33 (m, 4H), 7,34 - 7,25 (m, 2H), 7,00 (dd, J = 13,3, 1,7 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,63 (dd, J = 7,5, 2,1 Hz, 1H), 6,42 (s, 2H), 5,18 (s, 1H), 4,33 - 4,25 (m, 1H), 4,12 - 4,04 (m, 1H), 2,14 -2,02 (m, 1H), 1,15 - 1,01 (m, 2H), 0,96 - 0,81 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 518,42 [M H]+.

Ejemplo de referencia 2 (no entra dentro del alcance de las reivindicaciones)

2-[3-(2-amino-8-fenil-9H-purin-6-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona

(el primer paso)

Se añadieron 2,5,6-triaminopirimidin-4(3H)-ona (1 g, 7,092 mmol) y cloruro de benzoílo (1,63 ml, 14,18 mmol) a una solución acuosa 2 N de hidróxido de sodio (25 ml) bajo enfriamiento con hielo, y la mezcla fue agitada durante una hora. Se añadió ácido acético a la mezcla de reacción para ajustar su acidez a pH 5, y se recogió el precipitado sólido por fi ltración para dar N-(2,4-diamino-6-hidroxipirimidin-5-il)benzamida (1,7 g).1

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 10,07 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,96 - 7,92 (m, 2H), 7,53 - 7,43 (m, 3H), 6,18 (br. s, 2H), 5,79 (br. s, 2H) ;

LCMS (m/z): 246,08 [M H]+.

(el segundo paso)

Una mezcla de N-(2,4-diamino-6-hidroxipirimidin-5-il)benzamida (2,5 g, 10,2 mmol) y oxicloruro de fósforo (50 ml) fue agitada bajo reflujo durante 24 horas. La cantidad en exceso de oxicloruro de fósforo fue evaporada bajo una presión reducida, el residuo obtenido se volvió alcalino con la adición de amoniaco acuoso y el producto fue extraído con MeOH al 10 %-DCM. La capa orgánica obtenida se lavó con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente fue evaporado bajo una presión reducida, y el residuo fue purificado con una cromatografía de columna (gel de sílice, DCM/Metanol) para dar 6-cloro-8-fenil-9H-purin-2-amina (0,25 g)

LCMS (m/z): 245,87 [M H]+.

(el tercer paso)

Un solvente mixto de DME-agua (3:1, 13 ml) fue añadido a acetato de 2-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboran-2-il)bencilo (0,25 g, 0,52 mmol), 6-cloro-8-fenil-9H-purin-2-amina (0,128 g, 0,524 mmol) y carbonato de potasio (0,216 g, 1,57 mmol) y la mezcla fue desgasificada bajo una atmósfera de argón durante 30 minutos. Se añadió Pd(PPh3)4 (60 mg, 0,05 mmol) y se hizo reaccionar en un aparato de microondas a 110 °C durante 30 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente fue evaporado bajo presión reducida y el residuo obtenido fue purificado con HPLC preparativa para dar el compuesto del título (12 mg).

1H RMN (500 MHz, DMSO-da) 8 13,30 (s, 1H), 8,07 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,91 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,63 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,54 - 7,48 (m, 4H), 7,41 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 6,68 (br. s, 2H), 6,63 (dd, J = 1,5, 7,3 Hz, 1H), 5,49 (br. s, 1H), 4,36 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,13 - 4,09 (m, 1H), 2,10 - 2,05 (m, 1H), 1 ,12 -1 ,08 (m, 2H), 0,89 - 0,86 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 519,39 [M H]+.

EJEMPLO de referencia 3 (no entra dentro del alcance de las reivindicaciones)

2-[3-(6-amino-3-fenil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-2-(hidroximetil)fenil]-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona

(el primer paso)

Se añadió lentamente bromuro de fenil magnesio (1 M solución en THF, 26 ml, 26 mmol) a una solución en THF (100 ml) de 2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-carbaldehído (1,0 g, 5,2 mmol) a -78 °C, y se agitó durante 2 horas. Una solución acuosa saturada de cloruro de amonio fue agregada a la mezcla de reacción, se filtró a través de celite, y el filtrado fue extraído con MeOH al 10 %-DCM. La capa orgánica obtenida se lavó con agua y salmuera saturada y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente fue evaporado bajo una presión reducida y el residuo obtenido fue purificado con una cromatografía de columna (gel de sílice, petróleo éter/acetato de etilo) para dar (2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-il)(fenil)metanol (0,6 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 = 7,52 (br. s, 2H), 7,33 - 7,30 (m, 4H), 7,26 - 7,18 (m, 1H), 6,20 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 4,9 Hz, 1H) ;

LCMS (m/z): 270,05 [M H]+.

(el segundo paso)

Se añadió óxido de manganeso (3,88 g, 44,6 mmol) a una solución en 1,2-dicloroetano (15 ml) de (2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-il)(fenil)metanol (0,6 g, 2,2 mmol) bajo enfriamiento con hielo, y se agitó a 80 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción fue fi ltrada a través de celite y el solvente fue evaporado bajo una presión reducida para dar (2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-il)(fenil)metanona (0,5 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 7,97 - 7,92 (m, 4H), 7,75 - 7,72 (m, 1H), 7,60 - 7,56 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 267,94 [M H]+.

(el tercer paso)

Se agregó monohidrato de hidrazina (0,1 ml, 1,87 mmol) a una solución en THF (15 ml) de (2-amino-4,6-dicloropirimidin-5-il)(fenil)metanona (0,5 g, 1,87 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Un solvente de la mezcla de reacción fue evaporado bajo presión reducida, se agregó agua al residuo obtenido y se recogió el sólido precipitado por medio de fi ltración para dar 4-cloro-3-fenil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-amina (0,35 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 13,38 (s a, 1H), 7,70 - 7,68 (m, 2H), 7,50 - 7,44 (m, 3H), 7,18 (s a, 2H)

LCMS (m/z): 246,1 [M H]+.

(el cuarto paso)

Se añadió un solvente mixto de DME-agua (4:1, 10 ml) a acetato de 2-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboran-2-il)bencilo (0,193 g, 0,4 mmol), 4-cloro-3-fenil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-amina (0,1 g, 0,4 mmol) y carbonato de potasio (0,11 g, 0,8 mmol) y la mezcla fue desgasificada bajo una atmósfera de argón durante 30 minutos. Se añadió Pd(PPh3)4 (23 mg, 0,02 mmol) y se hizo reaccionar en un aparato de microondas a 110 °C durante 15 minutos. Se añadió agua a la mezcla de reacción, el sólido precipitado fue recogido por filtración para dar acetato de 2-(6-amino-3-fenil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-il)-6-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)bencilo (0,3 g) como un producto crudo. El producto en bruto fue disuelto en metanol (20 ml), se agregó carbonato de potasio (0,4 g) y se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Un solvente fue evaporado bajo presión reducida, se agregó agua al residuo obtenido, el sólido precipitado fue recogido por fi ltración y fue purificado con HPLC preparativa para dar el compuesto del título (45 mg).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 13,18 (br. s, 1H), 7,28 - 6,94 (m, 13H), 6,61 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,69 (br. s, 1H), 4,49 - 4,12 (m, 2H), 2,11 - 2,04 (m, 1H), 1,12 - 1,07 (m, 2H), 0,89 - 0,85 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 519,39 [M H]+.

Ejemplos de referencia 4-5, 10, 12, 18, 20-22, 24-25 y 31 (sin entrar ninguno dentro del alcance de las reivindicaciones) y ejemplos 6-9, 11, 13-17, 19, 23, 26-30 y 32-93

Cada uno de los compuestos ejemplares de referencia que no entran dentro del alcance de la invención y cada uno de los compuestos ejemplares en los siguientes [Cuadro 1-1] y [Cuadro 1-2] fueron preparados de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo anterior, o dicho procedimiento combinado con un método común bien conocido en la técnica de la química orgánica, si es necesario, usando un material de partida apropiado (se obtiene de una fuente comercial, o se prepara por los procedimientos de la literatura o modificaciones a los procedimientos de la literatura conocidos para los expertos en la técnica).

Los datos fisicoquímicos de cada compuesto se muestran en los siguientes [Cuadro 2-1] y [Cuadro 2-2].

CUADRO 1-1

continuación

EJEMPLO 23

2-(3-{2-amino-6-[1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-2-(hidroximetil)fenil)-6-ciclopropil-8-fluoroisoquinolin-1(2H)-ona

(el primer paso)

Se añadieron yoduro de cobre (0,25 g, 1,31 mmol), PdCl2(PPh3)2 (0,92 g, 1,31 mmol), trimeti lsil i laceti leno (3,87 g, 39,4 mmol) y trieti lamina (7,32 ml, 52,5 mmol) a una solución en DMF (52,5 ml) de 6-cloro-5-yodo-pirimidin-2,4-diamina (7,1 g, 26,3 mmol), y se agitó a 45 °C durante 30 minutos. También se añadió trimeti lsil i laceti leno (3,87 g, 39,4 mmol) a la solución de reacción y la mezcla fue agitada a 45 °C durante 30 minutos. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado bajo una presión reducida y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea para dar 6-cloro-5-((trimetilsili l)etinil)pirimidin-2,4-diamina (6,3 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 6,78 (s, 2H), 0,21 (s, 9H);

LCMS (m/z): 241,14 [M H]+.

(el segundo paso)

Una solución acuosa 0,1 M de hidróxido de sodio (58,1 ml, 5,81 mmol) fue agregada a una solución en THF (291 ml) de 6-cloro-5-((trimetilsilil)etin il)pir imidin-2,4-diamina (7,0 g, 29,1 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente se evaporó bajo presión reducida para dar 6-cloro-5-etinilpir imidin-2,4-diamina (4,85 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 6,75 (s, 2H), 4,50 (s, 1H) ;

LCMS (m/z): 169,01 [M H]+.

(el tercer paso)

Se agregaron yoduro de cobre (0,215 g, 1,13 mmol), PdCl2(PPh3)2 (1,58 g, 2,25 mmol), 4-{[(trif luorometil)sulfonil]oxi}-5,6-dihidropiridin-1(2H)-caxrboxilato deterebutilo (7,47 g, 22,5 mmol) y tr ieti lamina (6,28 ml, 45,1 mmol) a una solución en DMF (225 ml) de 6-cloro-5-etinilpir imidin-2,4-diamina (3,8 g, 22,5 mmol), y se agitó a 90 °C durante 30 minutos. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado bajo presión reducida y el residuo fue purificado con una cromatografía instantánea para dar 4-[(2,4-diamino-6-cloropiridin-5-il)etin il]-5,6-dihidropirid in-1(2H)-carboxilato de tere-butilo (4,92 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 6,73 (s, 2H), 6,14 (s, 1H), 3,97 - 3,90 (m, 2H), 3,44 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,28 - 2,24 (m, 2H), 1,41 (s, 9H);

LCMS (m/z): 350,13 [M H]+.

Se añadió ferc-butóxido de potasio (4,72 g, 42 mmol) a una solución en N-metilpirrolidona (140 ml) de 4-[(2,4-diamino-6-cloropirimidin-5-il)etinil]-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (4,9 g, 14 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado bajo una presión reducida y el residuo fue purificado con una cromatografía instantánea para dar 4-(2-amino-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (2,93 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 11,73 - 11,55 (m, 1H), 6,57 (s, 2H), 6,32 (s, 1H), 6,29 - 6,16 (m, 1H), 4,14 - 3,90 (m, 2H), 3,61 - 3,43 (m, 2H), 2,49 - 2,35 (m, 2H), 1,42 (s, 9H);

LCMS (m/z): 350,18 [M H]+.

(el quinto paso)

Se agregó un solvente mixto de DMF-agua (5:1, 165 ml) a acetato de 2-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboran-2-il)bencilo (3,96 g, 8,29 mmol), 4-(2-amino-4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin--6-il)-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (2,9 g, 8,29 mmol) y fosfato tr ipotásico (3,52 g, 16,6 mmol) y la mezcla fue desgasificada bajo una atmósfera de argón durante 30 minutos. Se agregó Pd(PPh3)4 (0,96 g, 0,829 mmol) y se agitó a 110 °C durante 20 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo, se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado bajo presión reducida para dar 4-{4-[2-(acetoximetil)-3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)fenil]-2-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il}-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (5,43 g).

LCMS (m/z): 665,37 [M H]+.

(el sexto paso)

Se añadieron tr ieti lamina (4,45 ml, 32 mmol) y cloruro de acetilo (1,89 ml, 26,6 mmol) a una solución de THF (53 ml) de 4-{4-[2-(acetoximetil)-3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)fenil]-2-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il}-5,6-dihidropiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (3,54 g, 5,33 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua, una solución 1 M de hidróxido de sodio y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado para dar 4-{2-acetamida-4-[2-(acetximetil)-3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il}-5,6-dihidopiridin-1(2H)-carboxilato de fercbutilo (5,44 g) como un producto en bruto.

LCMS (m/z): 707,43 [M H]+.

[el séptimo paso]

Se añadió cloruro de hidrógeno 4 M en una solución en 1,4-dioxano (50 ml) a una solución en DCM (150 ml) de 4-{2-acetamida-4-[2-(acetoximetil)-3-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)fenil]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-il}-5,6-dihidopiridin-1(2H)-carboxilato de ferc-butilo (6,66 g, 9,42 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Se agregó una solución acuosa 4 M de hidróxido de sodio (50 ml) a la mezcla de reacción, se agregó agua a la misma y se extrajo con cloroformo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado bajo presión reducida y el residuo obtenido fue purificado con cromatografía instantánea para dar acetato de 2-[2-acetamida-6-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-6-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)bencilo (2,66 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 12,47 (s, 1H), 10,53 (s, 1H), 7,77 - 7,66 (m, 2H), 7,54 (dd, J = 6,8, 2,4 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 13,3, 1,7 Hz, 1H), 6,64 (dd, J = 7,5, 2,1 Hz, 1H), 6,57 - 6,50 (m, 1H), 6,41 (s, 1H), 5,21 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 3,71 - 3,66 (m, 2H), 3,18 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,62 - 2,57 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,13 - 2,02 (m, 1H), 1,51 (s, 3H), 1,15 - 1,05 (m, 2H), 0,94 - 0,86 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 607,31 [M H]+.

(el octavo paso)

Oxetan-3-ona (1,25 g, 17,3 mmol) y tr iacetoxiborohidruro de sodio (3,67 g, 17,3 mmol) fueron añadidos a una solución en DCM (69 mmol) de acetato de 2-[2-acetamida-6-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il]-6-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)bencilo (2,1 g, 3,46 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante una hora. Oxetan-3-ona (1,25 g, 17,3 mmol) y tr iacetoxiborohidruro de sodio (3,67 g, 17,3 mmol) fueron agregados otra vez a la mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante una hora adicional. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua, una solución acuosa 1 M de hidróxido de sodio y salmuera saturada, y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. Un solvente fue evaporado bajo presión reducida para dar acetato de 2-{2-acetamida-6-[1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropirid in-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il}-6-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)bencilo (2,29 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 12,48 (s, 1H), 10,52 (s, 1H), 7,77 - 7,66 (m, 2H), 7,53 (dd, J = 7,0, 2.2 Hz, 1H), 7,44 - 7,35 (m, 1H), 7,28 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 13,3, 1,7 Hz, 1H), 6,63 (dd, J = 7,6, 2,1 Hz, 1H), 6,59 - 6,52 (m, 1H), 6,31 (s, 1H), 5,22 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,67 - 4,46 (m, 4H), 3,61 - 3,50 (m, 1H), 3,06 - 3,01 (m, 2H), 2,51 - 2,43 (m, 4H), 2,16 (s, 3H), 2,12 -2.02 (m, 1H), 1,51 (s, 3H), 1 ,15 -1 ,01 (m, 2H), 0,94 - 0,80 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 663,37 [M H]+.

(el noveno paso)

Una solución acuosa 2 M de hidróxido de sodio (50 ml) fue agregada a una solución en metanol (100 ml) de acetato de 2-{2-acetamida-6-[1-(oxetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il]-7H-pirrolo[2,3-d]pir imidin-4-il}-6-(6-ciclopropil-8-fluoro-1-oxoisoquinolin-2(1H)-il)bencilo (2,3 g, 3,47 mmol), y se agitó a 70 °C durante 2 horas. Se agregó agua a la mezcla de reacción y se realizó la extracción con acetato de etilo. La capa orgánica obtenida se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente se evaporó a presión reducida para dar el producto del título (1,4 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,52 (s, 1H), 7,72 (dd, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 7,64 - 7,53 (m, 1H), 7,46 (dd, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 13,2, 1,7 Hz, 1H), 6,62 (dd, J = 7,4, 2,1 Hz, 1H), 6,41 (s, 2H), 6,38 - 6,32 (m, 1H), 6,27 - 6,18 (m, 1H), 5,20 (dd, J = 8,8, 4,5 Hz, 1H), 4,61 - 4,46 (m, 4H), 4,25 (dd, J = 12,0, 4,2 Hz, 1H), 4,06 (dd, J = 12,0, 8,8 Hz, 1H), 3,60 - 3,48 (m, 1H), 3,04 - 2,98 (m, 2H), 2,48 - 2,43 (m, 4H), 2,14 - 2,00 (m, 1H), 1,15 - 1,01 (m, 2H), 0,92 - 0,82 (m, 2H) ;

LCMS (m/z): 579,60 [M H]+.

continuación

in-

continuación

idin-

continuación

Cuadro 2-1

(continuación)

[C r 2-2

(continuación)

Ejemplo de prueba 1

Prueba de inhibición de la actividad de la BTK

(Preparación de la BTK desfosforilada)

Se obtuvo BTK desfosforilada añadiendo proteína fosfatasa A (fabricada por New England BioLabs Inc., código n.° P0753S) y MnCh a 10 U/pg y 2 mM, respectivamente, a una solución enzimática de proteína BTK biotinilada BTN-BTK (fabricada por Carna Biosciences, Inc.), haciendo reaccionar la mezcla a 4 °C durante una noche, y removiendo la proteína fosfatasa A por medio de cromatografía en gel de agarosa del anticuerpo DYKDDDDK-marcado, seguido por un intercambio de tampón usando una columna de desalación 10DG.

(Método de medición de la actividad de la Quinasa)

La actividad de la quinasa se midió utilizando QuickScout Screening Assist (marca registrada) MSA (kit disponible en el mercado fabricado por Carna Biosciences, Inc.) mediante el método de ensayo de cambio de movilidad (MSA). El sustrato de la reacción de la quinasa fue un péptido SRCtide marcado con FITC incluido en el kit. Se utilizó un tampón de ensayo [HEPES 20 mM, Triton X-100 al 0,01 % (marca comercial), ditiotreitol 2 mM, pH 7,5] y se ajustó a un sustrato 4 jM , MgCl220 mM y ATP 200 jm para obtener una solución de la mezcla de sustrato. La solución enzimática también se preparó mediante la dilución de la BTK desfosforilada a 0,46 nM utilizando el tampón de ensayo. La solución 10 mM del compuesto de prueba en DMSO fue diluida adicionalmente con DMSO a 10 niveles de la concentración (0,00003 mM, 0,0001 mM, 0,0003 mM, 0,001 mM, 0,003 mM, 0,01 mM, 0,03 mM, 0,1 mM, 0,3 mM, 1 mM), cada uno de los cuales fue sometido a una dilución de 25 veces con el tampón de ensayo para obtener las soluciones de fármaco (soluciones en DMSO al 4 %). 5 j l de la solución de fármaco o una solución de control (DMSO al 4 %-tampón de ensayo), 5 j l de la solución de mezcla de sustrato, y 10 j l de la solución enzimática se mezclaron en los pozos de una placa de 384 pocillos de polipropileno y se dejaron reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, y después la reacción fue extinguida añadiendo 60 j del tampón de terminación incluido en el kit. Posteriormente, las cantidades de los sustratos (S) y el sustrato fosforilado (P) en la solución de reacción se midieron utilizando el sistema lector LabChip EZ II (fabricado por Caliper Life Sciences) de acuerdo con el protocolo del kit de ensayo.

(Método de evaluación de la actividad inhibitoria de la BTK)

Las alturas de los picos del sustrato aislado y el sustrato fosforilado se representaron como S y P, respectivamente, y también se midió un blanco que contenía el tampón de ensayo en lugar de la solución enzimática.

El grado de inhibición (%) del compuesto de prueba se calculó de conformidad con la siguiente ecuación;

Grado de inhibición (%) = (1-(C-A)/(B-A)) * 100

donde A, B y C representan P/(P+S) del pocillo blanco, P/(P+S) del pocillo de control y P/(P+S), del pocillo que contiene el compuesto, respectivamente.

El valor de IC50 se calculó por medio de un análisis de regresión del grado de inhibición (%) y la concentración del compuesto de prueba (valor logarítmico).

(Resultados de evaluación)

Como el grupo de los compuestos de los Ejemplos presentaron los valores de IC50 de 10 nM o menos a 100 nM o menos contra la BTK desfosforilada, se reveló que el Compuesto (I) de la invención tenía un potente efecto inhibidor de BTK. En el cuadro 3 se muestra la actividad inhibidora contra la BTK desfosforilada de los compuestos representativos en la presente invención. La actividad inhibidora está indicada con la marca "***" cuando el valor de IC50 es menor que 0,01 jM , con la marca "**" cuando el valor de IC50 es de 0,01 jM a menos de 0,1 jM , y con la marca "*" cuando el valor de IC50 es de 0,1 jM a menos de 1,0 jM .

CUADRO 3

(continuación)

EJEMPLO DE PRUEBA 2

Prueba de inhibición de la actividad de auto-fosforilación de la BTK intracelular

(Cultivo de células que será utilizado)

Células de Ramos (2G6,4C10, ATCC n.° CRL-1923) fueron cultivadas en un matraz T75 conteniendo el medio RPMI-1640 (GIBCO, #A10491-01) complementado con FBS al 10% (AusGene) y penicilina al 1 %-estreptomicina (Nacalai Tesque, Inc.) (en adelante será referido como medio de crecimiento) en una incubadora de CO2 al 5 %.

Las células de Ramos cultivadas fueron diluidas a una densidad de células de 7,5 * 106 células/ml con un RPMI-1640 libre de suero (en adelante referido como medio) y se mantuvo a 37 °C durante 45 minutos. La suspensión celular se dispensó en alícuotas de 1 ml en tubos de 2,0 ml. Una solución 0,03 mM de la sustancia de prueba en DMSO fue diluida con el medio para hacer una solución del compuesto de prueba 0,09 pM, 500 pl de la cual fueron añadidos después a los tubos y la incubación se realizó a 37 °C durante 1 hora en la presencia del compuesto de prueba a una concentración final de 0,03 pM. Después de eso, el anticuerpo anti-IgM (Invitrogen, H15100), que se había diluido con el medio, se agregó a una concentración final de 10 pg/ml, y la incubación se realizó a 37 °C durante 10 minutos.

(Extracción de proteínas)

A las pellas obtenidas por la recuperación de células por centrifugado, se les agregó 100 pl de un tampón de lisis [Tampón RIPA (*1) (Cell Signaling Technology, Inc.) complementado con inhibidor de fosfatasa al 1 % Cacktail 3 (Sigma Corporation, n.° P0044), inhibidor de fosfatasa al 1 % Cacktail (Nacalai Tesque, Inc., n.° 07575) y fluoruro de fenilmeti lsulfonilo 1 mM de (PMSF)] y se agitaron suavemente y después se dejaron reposar durante 10 minutos. El sobrenadante se recuperó mediante centrifugado (15.000 rpm, 15 minutos) y se cuantificó el nivel de proteína. La porción fue mezclada con el tampón de SDS-muestra, se dejó reaccionar durante 5 minutos a 95 °C para desnaturalizar la proteína, obteniendo así una solución muestra. Cada 5 pl de las soluciones muestra fue aplicado a cada pocillo conteniendo un intervalo del 5 al 20 % de gel de acrilamida (Nacalai Tesque, Inc., n.° 13064-04) y se realizó electroforesis. Posteriormente, el sistema de transferencia de gel iBlot (Life Technologies Corporation) se utilizó para transferir las proteínas en el gel sobre una membrana de PVDF.

(Detección de BTK o BTK fosforilada)

La membrana de PVDF después de la transferencia fue bloqueada con el reactivo de bloqueo iniciador ECL al 2 % (GE Healthcare) y después se realizó la reacción durante una noche a 4 °C usando anticuerpo de ratón anti-BTK (laboratorio de transducción BD, n.° 611116) o anticuerpo de conejo anti-BTK fosforilada (pY223, EPITOMICS, n.° 2207-1) como anticuerpo primario. El anticuerpo primario sin reaccionar fue lavado con un tampón TBST (Tris-HCl 10 mM (pH 7,5), NaCl 150 mM, Tween 20 al 0,1 %) y después se realizó la reacción durante 1 hora a temperatura ambiente en un tampón de TBST complementado con el reactivo de bloqueo iniciador de ECL al 2 % usando un anticuerpo de caballo de IgG anti-ratón HRP-marcado (Cell Signaling Technology, n.° 7076) o el anticuerpo de cabra de IgG anti conejo (Cell Signaling Technology, n.° 7074) como un anticuerpo secundario. Después de lavar el anticuerpo secundario sin reaccionar con el tampón de TBST, se utilizó Chemi-Lumi One Super (Nacalai Tesque, Inc.) para llevar a cabo una reacción de acuerdo con el protocolo anexo, y después se detectaron las respectivas bandas como quimioluminiscencias con una cámara CCD (G<e>Healthcare ImageQuant LAS 500). Las bandas detectadas se sometieron a densitometría (software de análisis ImageQuant TL v8,1) para representarse como valores numéricos, y el grado de inhibición (%) se calculó en base a la intensidad de la banda en cada grupo, mientras que se toma la luminiscencia de la banda de BTK fosforilada en el grupo sin compuesto agregado con estimulación IgM como 100 % y la luminiscencia de la banda de BTK fosforilada en el grupo sin compuesto agregado sin estimulación IgM como 0 %. Cada banda de BTK fosforilada se corrigió en base a la BTK total.

Las combinaciones de los anticuerpos primarios y los anticuerpos secundarios empleados en esta prueba y las magnitudes de dilución de las mismas se muestran a continuación.

CUADRO 4

Los resultados obtenidos a una concentración del compuesto de prueba de 0,03 pM se muestran en el Cuadro 5. La actividad inhibidora de autofosforilación de BTK intracelular fue indicada con la marca "***" cuando fue de 90 % o más, con la marca "**" cuando fue de 70 % o más y menos de 90 %, y con la marca "*" cuando fue de 50 % o más y menos de 70 %.

En el cuadro 5 se muestran los efectos inhibidores de los compuestos representativos en la autofosforización intracelular. Como se muestra en el cuadro, la actividad de autofosforización intracelular fue potentemente inhibida por los compuestos (I) de la presente invención a una concentración de 0,03 pM.

CUADRO 5

Los resultados del Ejemplo de prueba 2 indican que los compuestos de la presente invención tienen potentes efectos inhibidores también sobre "la actividad de la autofosforilación de la BTK intracelular".

EJEMPLO DE PRUEBA 3

Prueba de actividad inhibidora de la BTK mutante C481S

(Método para medir la actividad de quinasa)

La actividad de la quinasa se midió utilizando QuickScout Screening Assist (marca registrada) MSA (kit disponible en el mercado fabricado por Carna Biosciences, Inc.) mediante el método de ensayo de cambio de movilidad (MSA). El sustrato de la reacción de la quinasa fue un péptido SRCtide marcado con FITC incluido en el kit. Se utilizó un tampón de ensayo [HEPES 20 mM, Triton X-100 0,01 % (marca registrada), ditiotreitol 2 mM, pH 7,5] y se ajustó a un sustrato 4 jM , MgCl2 20 mM y ATP 120 jm y 100 jm , que son concentraciones de ATP cercanas al valor de Km de la BTK de tipo silvestre y mutante C481S respectivamente, para obtener una solución de mezcla de sustrato. La solución enzimática también se preparó mediante la dilución de la BTK de tipo silvestre o mutante C481S a 0,28 nM utilizando el tampón de ensayo. La solución 10 mM del compuesto de prueba en DMSO fue diluida adicionalmente con DMSO a 10 niveles de la concentración (0,00003 mM, 0,0001 mM, 0,0003 mM, 0,001 mM, 0,003 mM, 0,01 mM, 0,03 mM, 0,1 mM, 0,3 mM, 1 mM), cada uno de los cuales fue sometido a una dilución de 25 veces con el tampón de ensayo para obtener las soluciones de fármaco (soluciones de DMSO al 4 %).

5 j l de la solución de fármaco o una solución de control (DMSO al 4 % -tampón de ensayo), 5 j l de la solución de mezcla de sustrato, y 10 j l de la solución enzimática se mezclaron en los pocillos de una placa de 384 pocillos de polipropileno y se dejaron reaccionar a temperatura ambiente durante 1 hora, y después la reacción fue extinguida añadiendo 60 j l del tampón de terminación incluido en el kit. Posteriormente, las cantidades de los sustratos (S) y el sustrato fosforilado (P) en la solución de reacción se midieron utilizando el sistema lector LabChip EZ II (fabricado por Caliper Life Sciences) de acuerdo con el protocolo del kit de ensayo.

(Método de evaluación de la actividad inhibitoria de la BTK)

El grado de inhibición (%) del compuesto de prueba se calculó de acuerdo con la siguiente ecuación; Grado de inhibición (%) = (1-(C-A)/(B-A)) * 100

donde A, B y C representan P/(P+S) del pocilio blanco, P/(P+S) del pocilio de control y P/(P+S), del pocilio que contiene el compuesto, respectivamente.

En el cuadro 6 se muestra la actividad inhibidora contra la BTK de tipo silvestre [BTK(WT)] y BTK mutante C481S [BTK(C481S)] de los compuestos representativos de la presente invención y del ejemplo de referencia 2, que no entra dentro del alcance de las reivindicaciones. Los valores de lC50[BTK(C481S)]/IC50[BTK(WT)] también están enlistados en el cuadro como una indicación aproximada para la resistencia a la mutación de C481S

CUADRO 6

Como se muestra en el Ejemplo de prueba 3, los compuestos (I) de la presente invención tienen una potente actividad inhibidora también contra la BTK mutante C481S.

EJEMPLO DE PRUEBA 4

Prueba de inhibición de proliferación contra la cepa OCI-Ly10 de linfoma de células B de célula grande difusa

Las células OCI-Ly10 fueron cultivadas en un medio IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium, fabricado por Thermo Fisher Scientific Inc., en adelante "medio") que contenía suero fetal bovino al 20 % y penicilina al 1 %-estreptomicina (Nacalai Tesque, Inc.) en una incubadora de CO2 al 5< %. Las células OCI-Ly10 fueron sembradas en una placa de 96 pozos (20000 células/pocillo), los compuestos diluidos con el medio fueron adicionados con concentraciones finales de 0,9 nM a 30000 nM (concentración final de DMSO, 0,3 %), incubados durante 96 horas y se añadió el reactivo alamorBlue (Thermo Fisher Scientific Inc.). Se midió la absorbancia a 570-600 nm después de 3 horas, y se calculó el valor IC50 de la actividad inhibidora bajo condiciones en las que la absorbancia del pocilio que no contenía compuesto ni célula era del 100 %, y la absorbancia del pocillo que contenía la célula pero no compuesto era de 0 %.

En el cuadro 7 se muestra la actividad inhibidora de proliferación de los compuestos representativos de la presente invención contra la cepa OCI-Ly10.

CUADRO 7

continuación

Como lo demuestran los resultados del Ejemplo de prueba 4, los compuestos (I) de la presente invención tienen una actividad inhibidora de proliferación contra la cepa OCI-Ly10.

Aplicabil idad Industrial

La presente invención proporciona un compuesto útil para prevenir o tratar enfermedades de las cuales se sabe que están relacionadas con una respuesta celular anormal a través de la BTK, por ejemplo, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades de los huesos, y cánceres, como linfoma. El compuesto también es útil, como un inhibidor de BTK, para reactivos que serán utilizados en pruebas e investigaciones.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (I):

en donde R1 es un alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, Q es una estructura (a):

en donde R2 y R3 son independientemente un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, un grupo cicloalquilo opcionalmente sustituido, un grupo arilo opcionalmente sustituido, un grupo heteroarilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El derivado de oxoisoquinolina de conformidad con la reivindicación 1: en donde R1 es un grupo hidroximetilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. El derivado de oxoisoquinolina de la fórmula (Ia) de conformidad con la reivindicación 1:

en donde R3a es un grupo tetrahidropiridilo opcionalmente sustituido, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. El derivado de oxoisoquinolina de conformidad con la reivindicación 3, en donde el sustituyente del grupo tetrahidropiridina se selecciona del grupo que consiste en un grupo oxetanilo, un grupo acetilo, un grupo propionilo, un grupo morfolinacetilo, un grupo dimetilcarbamoílo, un grupo pirrolidincarbonilo, un grupo metilsulfonilo y un grupo isopropilsulfonilo, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
5. El derivado de oxoisoquinolina de conformidad con la reivindicación 3, en donde el sustituyente del grupo tetrahidropiridina es un grupo oxetanilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. Una composición farmacéutica que comprende el derivado de oxoisoquinolina de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. El derivado de oxoisoquinolina de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como un medicamento.
8. El derivado de oxoisoquinolina de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso para prevenir o tratar una enfermedad implicada en la respuesta celular anómala a través de la tirosina quinasa de Bruton.
9. El derivado de oxoisoquinolina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso de conformidad con la reivindicación 8, en donde la enfermedad es una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad de los huesos o cáncer.
10. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6 para su uso como un medicamento.
11. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6 para su uso para prevenir o tratar una enfermedad implicada en la respuesta celular anómala a través de la tirosina quinasa de Bruton.
12. La composición farmacéutica para su uso de conformidad con la reivindicación 11, en donde la enfermedad es una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad de los huesos o cáncer.