ES2966711T3

ES2966711T3 - Hidrogel de matriz extracelular (ECM) como almohadilla líquida submucosa

Info

Publication number: ES2966711T3
Application number: ES19822808T
Authority: ES
Inventors: Stephen Francis Badylak; Lindsey Tamiko Saldin; Gutierrez Juan Diego Naranjo
Original assignee: University of Pittsburgh
Current assignee: University of Pittsburgh
Priority date: 2018-06-21
Filing date: 2019-06-20
Publication date: 2024-04-23
Anticipated expiration: 2039-06-20
Also published as: JP2025172112A; EP3810214A1; EP3810214B1; KR20210024061A; JP7742172B2; WO2019246444A1; US20210244396A1; AU2024219501A1; CN115487364B; CN112334169B; CN112334169A; JP2021527686A; CA3103093A1; JP2024023739A; US20220354473A1; AU2019288588B2; EP3810214A4; CN115487364A; US12383243B2; JP7412777B2

Abstract

Se describen métodos para diseccionar una mucosa y una submucosa de una muscularis propia de una región de un órgano de un sujeto, en donde el órgano no es el esófago. En algunas realizaciones, el órgano está en el tracto gastrointestinal. Estos métodos incluyen inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM) para formar un cojín entre la submucosa y la muscular propia subyacente en la región del órgano, en donde el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50% inferior a 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37°C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; yc) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Hidrogel de matriz extracelular (ECM) como almohadilla líquida submucosa

Referencia cruzada a la solicitud relacionada

Esta aplicación reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EE. UU. núm. 62/688.198, presentada el 21 de junio de 2018.

Campo de la descripción

Esto se refiere a la resección endoscópica, específicamente al uso de un hidrogel de matriz extracelular (ECM) como almohadilla submucosa para diseccionar una mucosa y una submucosa de una muscularis propria de una región de un órgano, en donde el órgano no es el esófago.

Antecedentes

La endoscopia es un procedimiento que permite el examen del interior de un órgano hueco o cavidad del cuerpo mediante un instrumento llamado endoscopio, sin emplear cirugía invasiva. La endoscopia se puede usar para procedimientos quirúrgicos como la cauterización de un vaso sangrante, la extirpación de pólipos, adenomas y tumores pequeños, la realización de biopsias o la extirpación de un objeto extraño. Los procedimientos endoscópicos se pueden realizar en el tracto gastrointestinal, el tracto respiratorio, el oído, el tracto urinario, el aparato reproductor femenino y, a través de pequeñas incisiones, en cavidades corporales normalmente cerradas como la cavidad abdominal o pélvica (laparoscopia), el interior de una articulación (artroscopia) y órganos del tórax (toracoscopia y mediastinoscopia). La endoscopia se puede realizar en el tracto gastrointestinal superior o en el tracto gastrointestinal inferior. El endoscopio es un instrumento tubular flexible o rígido, iluminado, generalmente de fibra óptica, para visualizar el interior de un órgano o parte hueco (como la vejiga, el esófago, el estómago o el intestino) con fines diagnósticos o terapéuticos, que normalmente tiene uno o más Canales funcionales para permitir el paso de instrumentos (como fórceps, bisturí electroquirúrgico, agujas de inyección endoscópica o tijeras) o para facilitar la extracción de muestras biópticas. Incluye una lámpara adecuada y un dispositivo de obtención de imágenes en su porción distal, y puede insertarse a través de aberturas que existen de forma natural en el cuerpo, tales como la boca, el ano, el oído, la nariz o a través de pequeñas incisiones quirúrgicas. Dada la gran variedad de órganos o cavidades del cuerpo que pueden examinarse mediante procedimientos endoscópicos, existen varios tipos de endoscopios especializados, como por ejemplo, laringoscopio, toracoscopio, angioscopio, colonoscopio, enteroscopio, sigmoidoscopio, rectoscopio, proctoscopio, anoscopio, artroscopio, rinoscopio, laparoscopio, histeroscopio, encefaloscopio, nefroscopio, esofagoscopio, broncoscopio, gastroscopio, amnioscopio, cistoscopio.

Los procedimientos endoscópicos se aplican ampliamente en el tracto gastrointestinal, incluidos el tracto gastrointestinal superior e inferior. Por ejemplo, se pueden usar procedimientos endoscópicos para examinar la mucosa que recubre las cavidades gastrointestinales, y para detectar lesiones patológicas pequeñas y grandes, tales como tejido inflamatorio, pólipos, pseudopólipos, lesiones serradas, adenomas, ulceraciones, displasias, formaciones preneoplásicas y neoplásicas y tumores. Los procedimientos endoscópicos se pueden usar para biopsias y extirpación de lesiones patológicas (pólipos, adenomas, displasias, formaciones preneoplásicas y neoplásicas, tumores). Las intervenciones quirúrgicas incluyen dos tipos de procedimientos de resección endoscópica comúnmente usados en endoscopia gastrointestinal para eliminar lesiones patológicas: resección endoscópica de la mucosa (EMR) y disección endoscópica submucosa (ESD). Estas dos técnicas permiten el tratamiento mínimamente invasivo de pólipos gastrointestinales, adenomas, displasias y cánceres en etapas tempranas que implican un riesgo mínimo de metástasis en los ganglios linfáticos. Sigue existiendo una necesidad de agentes de uso en estos procedimientos.

La patente internacional WO 2018161028 describe un hidrogel ECM que tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 10 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el esófago; y c) una rigidez de 10-300 Pascal (véase la reivindicación 20) para tratar la inflamación esofágica.

Uroaka et al., Drug design, development and therapy, Dove Medical Press LTD, Reino Unido, vol. 2, núm. 1077952576, 2008, páginas 131-138, describe una disolución de inyección submucosa para la resección endoscópica de la mucosa del tracto gastrointestinal y la disección endoscópica de la submucosa. Se puede usar una mezcla de fibrinógeno para proporcionar una almohadilla líquida submucosa.

Compendio de la descripción

El alcance de esta invención está definido por las reivindicaciones. Cualquier "realización" o "ejemplo" que se describa en la descripción pero que no esté cubierto por las reivindicaciones debe considerarse como presentado únicamente con fines ilustrativos. Las realizaciones en la descripción relacionadas con métodos de tratamiento no están cubiertas por las reivindicaciones.

La invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM), en donde el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa); para usar en la inhibición de la inflamación causada por la disección de una mucosa y una submucosa de una muscularis propria en la región de un órgano de un sujeto, en donde el órgano no es el esófago, y en donde la composición farmacéutica es para inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano. En la presente memoria se describen métodos (que no forman parte de la invención reivindicada) para diseccionar una mucosa y una submucosa de una muscularis propria de una región de un órgano de un sujeto, en donde el órgano no es el esófago. Estos métodos incluyen inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM) para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano, en donde el hidrogel de ECM tiene las siguientes características:

a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C;

b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y

c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa);

diseccionando así la mucosa y la submucosa de la muscularis propria subyacente e inhibiendo la inflamación en la región del órgano.

En otras realizaciones, estos métodos incluyen inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM) para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano, diseccionando así la mucosa y la submucosa de la muscularis propria subyacente e inhibiendo la inflamación en la región del órgano.

El órgano puede ser un órgano del tracto gastrointestinal, incluido el tracto gastrointestinal superior o inferior. Los órganos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, el estómago, el intestino delgado, el intestino grueso (colon que incluye el colon transverso, ascendente o descendente) o el recto.

En algunas realizaciones, el método de disección comprende resección endoscópica de la mucosa o disección endoscópica de la mucosa.

Las características y ventajas anteriores y otras de la invención resultarán más evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de varias realizaciones que continua con referencia a las figuras adjuntas.

Breve descripción de las figuras

Figs. 1A-1E. Propiedades viscoelásticas. El perfil de viscosidad de ELEVIEW™ y esofágico (eECM) 12 mg/ml se probó con una velocidad de corte creciente (0,1 - 1000 1/s) a 10 °C (A). La temperatura se elevó rápidamente a 37 °C para inducir la gelificación y medir el almacenamiento máximo (G') y el módulo de pérdida (G") (B). Se muestran gráficos representativos del barrido de tiempo para ELEVIEW™ (C) e hidrogel de eECM a 12 mg/ml (D). Se midió el tiempo hasta la gelificación del 50 % para eECM 12 mg/ml pero no se pudo medir para ELEVIEW™, porque ELEVIEW™ no gelificó (G">G' durante la prueba de barrido de tiempo) (E).

Figs. 2A-2B. Fuerza mucoadhesiva. La fuerza mucoadhesiva de ELEVIEW™ y eECM 12 mg/mL a muscularis porcina (A) o mucosa (B).

FIG. 3. Activación de macrófagos. Expresión de macrófagos de marcadores antiinflamatorios y proinflamatorios después de la exposición a eECM y ElEv IEW™.

Figs. 4A-4C. Almohadilla de fluido submucoso - Colon. Medidas de elevación de la almohadilla líquida submucosa a lo largo del tiempo con ECM (eECM) en comparación con ELEVIEW™ (A). Aspecto del tejido después de la inyección de 2 ml del agente de prueba después de la inyección y después de 75 minutos (B). Disección y exposición del agente de prueba después de 75 minutos (C).

Figs. 5A-5C. Almohadilla de fluido submucoso - Estómago. Medidas de elevación de la almohadilla de fluido submucoso a lo largo del tiempo con eECM o ELEVIEW™ (A). Aspecto del tejido después de la inyección de 2 ml del agente de prueba después de la inyección y después de 75 minutos (B). Disección y exposición del agente de prueba después de 75 minutos.

Descripción detallada de diversas realizaciones

En la presente memoria se describen métodos (que no forman parte de la invención reivindicada) para diseccionar una mucosa y una submucosa de una muscularis propria de una región de un órgano de un sujeto, en donde el órgano no es el esófago. En algunas realizaciones, el órgano está en el tracto gastrointestinal. Estos métodos incluyen inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM) para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano. El órgano puede ser, por ejemplo, el estómago, el intestino delgado, el intestino grueso (colon que incluye el colon transverso, ascendente o descendente) o el recto.

Términos

A menos que se indique lo contrario, los términos técnicos se usan según el uso convencional. Las definiciones de términos comunes en biología molecular se pueden encontrar en Benjamin Lewin, Genes V, publicado por Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicado por Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); y Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).

Para facilitar la revisión de las diversas realizaciones de esta descripción, se proporcionan las siguientes explicaciones de términos específicos:

Proteasa ácida: Una enzima que escinde enlaces peptídicos, en donde la enzima tiene una mayor actividad para escindir enlaces peptídicos en un pH ácido. Por ejemplo y sin limitación, las proteasas ácidas pueden incluir pepsina y tripsina.

Base: Un compuesto o una disolución de un compuesto con un pH superior a 7. Por ejemplo y sin limitación, la base es un hidróxido alcalino o una disolución acuosa de un hidróxido alcalino. En determinadas realizaciones, la base es NaOH o NaOH en PBS.

Desmenuzar (desmenuzado y desmenuzar): El proceso de reducir partículas más grandes a partículas más pequeñas, incluyendo, sin estar limitado a, moler, mezclar, triturar, rebanar, moler, cortar o triturar. La ECM se puede desmenuzar en cualquier forma, que incluyen, sin estar limitadas a, formas hidratadas, congeladas, secadas al aire, liofilizadas, en polvo o en forma de lámina.

Cáncer de colon: Un cáncer del intestino grueso. El adenoma tubular es un tipo de pólipo colónico y precursor del cáncer colorrectal. El cáncer de colon puede ser, por ejemplo, un carcinoide de colon o un adenocarcinoma. El diagnóstico de cáncer colorrectal se realiza mediante muestreo de áreas del colon sospechosas de un posible desarrollo tumoral, generalmente durante una colonoscopia o sigmoidoscopia, dependiendo de la ubicación de la lesión.

Diagnóstico: El proceso de identificación de una enfermedad por sus signos, síntomas y resultados de diversas pruebas. La conclusión a la que se llega a través de ese proceso también se llama "un diagnóstico". Las formas de pruebas que se realizan comúnmente incluyen análisis de sangre, imágenes médicas y biopsias.

Disección: El proceso de separar o cortar tejidos, por ejemplo, durante un procedimiento quirúrgico.

Agujas de inyección endoscópica o catéteres de aguja de inyección endoscópica: Dispositivos que son generalmente largos (por ejemplo, hasta aproximadamente 230 cm) y que incluyen un catéter largo dentro del cual hay un tubo de inyección interno que tiene una aguja de inyección distal que está dispuesta de manera deslizable. Generalmente, un mango de accionamiento proximal está acoplado al catéter y al tubo de inyección para mover uno con respecto al otro. La aguja puede ser retráctil. El acceso de fluido al tubo de inyección normalmente se proporciona a través de un conector luer en el mango.

Las agujas de inyección endoscópicas normalmente se llevan al lugar de la inyección a través del catéter del endoscopio. Para proteger el lumen de daños, se manipula el mango del dispositivo de aguja de infusión para retirar la aguja de inyección distal dentro del lumen del catéter antes de insertar el dispositivo en el endoscopio. Cuando el extremo distal del dispositivo endoscópico de aguja de inyección está ubicado en el lugar de la inyección, se manipula su mango para mover la aguja de inyección distalmente fuera del lumen del catéter. En algunas realizaciones, cuando se avanza hasta la posición más distal, la porción expuesta de la aguja de inyección puede tener aproximadamente 4 6 mm de longitud.

Resección endoscópica de la mucosa (EMR): una técnica endoscópica desarrollada para la extirpación de neoplasias sésiles o planas confinadas a las capas superficiales (mucosa y submucosa) del tracto gastrointestinal (GI). La mucosa y la submucosa se extirpan de la muscularis propria subyacente. Una disección endoscópica de la mucosa (ESD) se refiere a una técnica endoscópica desarrollada específicamente para eliminar lesiones más grandes, como las del tracto gastrointestinal, en donde la mucosa y la submucosa se diseccionan de las demás capas del tracto gastrointestinal. Tanto la EMR como la EMD suelen implicar la inyección de una sustancia debajo de la lesión objetivo, entre la submucosa y la muscularis propria subyacente, para actuar como una almohadilla y elevar la submucosa y la mucosa suprayacente. Con la EMR, la lesión elevada se elimina entonces con un lazo y se moviliza hacia una pequeña copa mediante succión. Con la ESD, la submucosa debajo de la lesión se disecciona con un bisturí especializado, lo que provoca la separación de la submucosa y la mucosa suprayacente. La ESD permite la eliminación de lesiones más grandes y potencialmente más profundas que las posibles con EMR con intención curativa. Tanto la EMR como la ESD se facilitan mediante la inyección de una sustancia en el plano submucoso del órgano, que separa eficazmente la mucosa suprayacente de la muscularis propria subyacente y simultáneamente eleva la mucosa por encima de la mucosa esofágica adyacente. Esta separación de capas y elevación del tejido afectado ayuda al cirujano a aislar, agarrar y eliminar el tejido de interés.

Matriz extracelular (ECM): El componente no celular de los tejidos y órganos. La ECM natural (ECM que se encuentra en organismos multicelulares, como mamíferos y seres humanos) es una mezcla compleja de biomoléculas estructurales y no estructurales, que incluyen, pero no se limitan a, colágenos, elastinas, lamininas, glucosaminoglicanos, proteoglicanos, antimicrobianos, quimioatrayentes, citocinas, y factores de crecimiento, y normalmente difiere en la composición específica entre diferentes tejidos y órganos. En los mamíferos, la ECM a menudo comprende aproximadamente un 90 % de colágeno en masa de peso seco, en sus diversas formas. Se pueden crear estructuras biológicas compuestas de ECM eliminando las células de un tejido u órgano determinado dejando atrás la ECM. La composición y estructura de la ECM varía según la fuente anatómica del tejido. Por ejemplo, la ECM de la submucosa del intestino delgado (SIS), la matriz de la vejiga urinaria (UBM), el esófago (E) y el estroma hepático difieren en su estructura y composición general debido al nicho celular único necesario para cada tejido. Una "matriz extracelular" intacta y un bioestructura de "ECM intacta" consisten en una matriz extracelular que no ha sido solubilizada, conserva su ultraestructura tridimensional e idealmente conserva la actividad de sus biomoléculas estructurales y no estructurales, que incluyen, pero no se limitan a, colágenos, elastinas, lamininas, glucosaminoglicanos, proteoglicanos, antimicrobianos, quimioatrayentes, citocinas y factores de crecimiento, tales como, sin limitación, ECM desmenuzada como se describe en la presente memoria.

La actividad de las biomoléculas dentro de la ECM se puede alterar química o mecánicamente, por ejemplo, mediante reticulación química o enzimática y/o dializando la ECM. La e Cm intacta esencialmente no ha sido digerida enzimáticamente, reticulada y/o dializada, lo que significa que la ECM no ha sido sometida a un proceso de digestión, diálisis y/o reticulación, ni a condiciones distintas a los procesos que ocurren de manera natural durante el almacenamiento y manejo de ECM antes de la solubilización. Por lo tanto, la ECM que se dializa (de cualquier manera que no sea trivial y que no afecte sustancialmente a la gelificación y a las características funcionales de la ECM en sus usos descritos en la presente memoria) no se considera que esté "intacta".

Esofagogastroduodenoscopia (EGD) o endoscopia gastrointestinal superior: Un procedimiento endoscópico diagnóstico que visualiza cualquier parte superior del tracto gastrointestinal hasta el duodeno. A veces se puede realizar una endoscopia como parte de una EGD o una endoscopia gastrointestinal superior. Los términos no son mutuamente excluyentes a menos que así se indique expresamente.

Tracto gastrointestinal: El sistema de órganos de los mamíferos que ingiere los alimentos, los digiere y expulsa los desechos restantes. La cavidad bucal, la faringe, el esófago, el estómago y el duodeno forman el tracto gastrointestinal superior. El tracto gastrointestinal inferior incluye el intestino delgado, el intestino grueso (colon) y el recto.

Gelificación: La formación de un gel a partir de un sol.

Viscosidad de flujo: Medida de la resistencia de un fluido a la deformación gradual por tensión tangencial o tensión de tracción. La viscosidad es una propiedad de un fluido que se opone al movimiento relativo entre las dos superficies del fluido en un fluido que se mueven a diferentes velocidades. Cuando un fluido se fuerza a pasar a través de un tubo, las partículas que lo componen generalmente se mueven más rápidamente cerca del eje del tubo y más lentamente cerca de sus paredes. Se necesita tensión (como una diferencia de presión entre los dos extremos del tubo) para superar la fricción entre las capas de partículas y mantener el fluido en movimiento. Para un patrón de velocidad dado, la tensión requerida es proporcional a la viscosidad del fluido. La viscosidad se mide con viscosímetros y reómetros. La viscosidad se puede medir como pascal por segundo (Pa*s). El agua a 20 °C tiene una viscosidad de 1,002 mPa*s.

Hidrogel: Una red de cadenas poliméricas que son hidrófilas, que a veces se encuentran como un gel coloidal en donde el agua es el medio de dispersión. Los hidrogeles son redes poliméricas naturales o sintéticas altamente absorbentes. Los hidrogeles también poseen un grado de flexibilidad similar al tejido natural. El término "hidrogel ECM de vejiga urinaria" incluye hidrogeles UBM y UBS.

Inflamación: Una respuesta localizada provocada por una lesión en el tejido. La inflamación se caracteriza por la aparición o migración a cualquier espacio, unidad o región tisular de cualquier clase de leucocitos en cantidades que exceden la cantidad de dichas células que se encuentran dentro de dicha región del tejido en circunstancias normales (saludables). La inflamación está orquestada por una respuesta biológica compleja de los tejidos vasculares a estímulos dañinos, como patógenos, células dañadas o irritantes.

Disolución tamponada isotónica: Una disolución que está tamponada a un pH entre 7,2 y 7,8 y que tiene una concentración equilibrada de sales para promover un ambiente isotónico.

Displasia de bajo grado y displasia de alto grado y metaplasia: Las condiciones patológicas se caracterizan por una morfología celular anormal, pero el tipo de célula aún puede reconocerse como epitelio escamoso. Generalmente, en la displasia hay ausencia de mucina apical en las células del revestimiento interno de la porción del tracto gastrointestinal. A baja potencia, estas áreas pueden parecer más hipercromáticas en comparación con las áreas no implicadas.

En el caso de la displasia de alto grado, los cambios en la morfología celular se vuelven más pronunciados, pero las células siguen siendo técnicamente un tipo de epitelio escamoso.

Cuando las células cambian de células epiteliales escamosas a otro tipo de célula, como una célula glandular que a menudo tiene forma de cubo o columna, el proceso se denomina metaplasia. En la metaplasia, la distorsión de la arquitectura glandular del tejido suele estar presente y puede ser marcada; está compuesta por ramificaciones y gemación lateral de criptas, una configuración en forma de vellosidad de la superficie mucosa o formación de puentes intraglandulares de epitelio para formar un patrón cribiforme de glándulas "espaldas con espalda". Hay epitelio anormal en la superficie de la mucosa con pérdida de polaridad nuclear, caracterizado por "redondeo" de los núcleos y ausencia de una relación coherente entre los núcleos.

Prevenir o tratar: Inhibir una enfermedad se refiere a inhibir el desarrollo parcial o total de una enfermedad, por ejemplo en una persona que está en riesgo de padecer una enfermedad tal como una causada por inflamación. Inhibir el proceso de una enfermedad incluye prevenir el desarrollo de la enfermedad. "Tratamiento" se refiere a una intervención terapéutica que mejora un signo o síntoma de una enfermedad o condición patológica, tal como después de que haya comenzado a desarrollarse.

Tensión tangencial: El componente de la tensión coplanar con una sección transversal del material. La tensión tangencial surge del componente del vector de fuerza paralelo a la sección transversal. La fórmula para calcular la tensión tangencial media es fuerza por unidad de área.

T F<3 3 K — ,>

A

donde<t>= la tensión tangencial, F = la fuerza aplicada, A = el área de la sección transversal del material con un área paralela al vector de fuerza aplicada.

Rigidez: La rigidez de un objeto o fluido. La rigidez de la matriz extracelular es importante para guiar la migración de las células en durotaxis. La rigidez se puede medir en Pascales (Pa), que son un newton por metro cuadrado.

Agente terapéutico: Usado en sentido genérico, incluye agentes de tratamiento, agentes profilácticos y agentes de reemplazo. "Tratamiento" o "tratar" significa proporcionar una sustancia, tal como un hidrogel de ECM, a un paciente en una cantidad suficiente para reducir, inhibir o mitigar de manera mensurable cualquier síntoma de la enfermedad, ralentizar la progresión de la enfermedad o causar la regresión de la enfermedad. En determinadas realizaciones, el tratamiento de la enfermedad puede comenzar antes de que el paciente presente síntomas de la enfermedad. Los métodos descritos inhiben la inflamación esofágica y/o mitigan los efectos de la inflamación esofágica.

Cantidad terapéuticamente eficaz: Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de una composición, tal como un hidrogel de ECM, significa una cantidad eficaz, cuando se administra a un paciente, para proporcionar un beneficio terapéutico tal como una mejora de los síntomas, disminuir la progresión o causar una regresión de la enfermedad. Una cantidad de un hidrogel de ECM es terapéuticamente eficaz si es suficiente para lograr un efecto deseado en un sujeto que está siendo tratado, tal como formar un gel cuando se inyecta en el tejido submucoso de un órgano y diseccionar la mucosa suprayacente de la muscularis propria subyacente.

La cantidad eficaz para formar una almohadilla submucosa dependerá de la preparación aplicada, el sujeto que se está tratando, la gravedad y el tipo de la afección y la forma de administración. Los hidrogeles de ECM usados en los métodos descritos en la presente memoria tienen aplicaciones tanto en entornos médicos como veterinarios. Por lo tanto, se entiende que el término general "sujeto" o "paciente" incluye todos los animales, que incluyen, pero no se limitan a, seres humanos o sujetos veterinarios, tales como otros primates, perros, gatos, caballos y vacas.

ECM de vejiga urinaria: una matriz extracelular derivada de la vejiga urinaria de cualquier mamífero. Este término incluye la ECM de la matriz de la vejiga urinaria (UBM) y la ECM de la submucosa de la vejiga urinaria (UBS). La pared de la vejiga urinaria se compone de las siguientes capas: la túnica mucosa (que incluye una capa de epitelio de transición y la túnica propia), una capa submucosa, hasta tres capas de músculo y la adventicia (una capa de tejido conectivo laxo) enumeradas según la sección transversal en espesor desde el lado luminal al abluminal. La UBS se prepara a partir de una composición de tejido que comprende tejido submucoso de la vejiga deslaminado desde las capas musculares abluminales y al menos la porción luminal de la túnica mucosa de un segmento de la vejiga urinaria de vertebrados, véase la patente de EE.UU. núm. 5.554.389). La UBM ECM se prepara a partir de la membrana basal epitelial de la vejiga urinaria y la túnica propia que está inmediatamente subyacente a la membrana basal, véase la patente de EE.UU. núm. 6.576.265.

A menos que se explique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente memoria tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenece esta descripción. Los términos singulares "un", "una" y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. De manera similar, la palabra "o" pretende incluir "y" a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Debe entenderse además que todos los tamaños de bases o tamaños de aminoácidos, y todos los pesos moleculares o valores de masa molecular, dados para ácidos nucleicos o polipéptidos son aproximados y se proporcionan para descripción. Aunque se pueden usar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria en la práctica o prueba de esta descripción, a continuación se describen métodos y materiales adecuados. El término "comprende" significa "incluye". El término "aproximadamente" indica dentro del 5 por ciento. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias mencionadas en la presente memoria se incorporan por referencia en su totalidad. En caso de conflicto, prevalecerá la presente memoria, que incluye las explicaciones de los términos. Además, los materiales, métodos y ejemplos son únicamente ilustrativos y no pretenden ser limitantes.

Hidrogeles de matriz extracelular (ECM)

Los métodos para preparar hidrogeles de ECM se describen, por ejemplo, en la patente de EE.UU. núm. 8.361.503. Se puede usar cualquier tipo de tejido de matriz extracelular para producir un hidrogel que se puede usar en los métodos descritos en la presente memoria (véanse las patentes de EE.UU. núms. 4.902.508; 4.956.178; 5.281.422; 5.352.463; 5.372.821; 5.554.389; 5.573.784; 5.645.860; 5.771.969; 5.753.267; 5.762.966; 5.866.414; 6.099.567; 6.485.723; 6.576.265; 6.579.538; 6.696.270; 6.783.776; 6.793.939; 6.849.273; 6.852.339; 6.861.074; 6.887.495; 6.890.562; 6.890.563; 6.890.564; y 6.893.666 relacionados con ECM). En determinadas realizaciones, la ECM se aísla de un animal vertebrado, por ejemplo y sin limitación, de un animal vertebrado mamífero de sangre caliente que incluye, pero no se limita a, seres humanos, monos, caballos, cerdos, vacas y ovejas. En ejemplos específicos no limitantes, la ECM es porcina o humana.

La ECM puede derivarse de cualquier órgano o tejido, que incluyen, pero no se limitan a, vejiga urinaria, intestino, intestino grueso (colon), hígado, esófago y dermis. La ECM puede derivar de riñón, corazón, útero, cerebro, vaso sanguíneo, pulmón, hueso, músculo, páncreas, estómago, bazo o colon. En una realización, la ECM se aísla de una vejiga urinaria. En otra realización, la ECM es de un esófago. La ECM puede incluir o no la porción de membrana basal de la ECM. En determinadas realizaciones, la ECM incluye al menos una porción de la membrana basal. En otras realizaciones, la ECM se recolecta de un cultivo celular. El hidrogel de ECM se puede producir mediante una combinación de dos o más fuentes de tejido.

Como se describe en la patente de EE.UU. núm. 8.361.503, una ECM de vejiga urinaria, como la ECM de vejiga porcina, se prepara raspando el tejido de la vejiga para eliminar las capas externas (abluminales), incluidas tanto la túnica serosa, la túnica muscular externa y la túnica submucosa, usando un movimiento de limpieza longitudinal con un mango de bisturí y gasa humedecida. Después de la eversión del segmento de tejido, la porción luminal de la túnica mucosa se deslamina del tejido subyacente usando el mismo movimiento de limpieza. La túnica serosa, la túnica muscular externa, la túnica submucosa y la mayor parte de la muscularis mucosa se pueden eliminar mediante una combinación de tratamiento enzimático, hidratación y abrasión. En algunas realizaciones, la eliminación mecánica de estos tejidos se logra eliminando los tejidos mesentéricos con, por ejemplo, fórceps de Adson-Brown y tijeras Metzenbaum y limpiando la túnica muscular y la túnica submucosa usando un movimiento de limpieza longitudinal con un mango de bisturí u otro objeto rígido envuelto en una gasa humedecida. En otras realizaciones, las células epiteliales de la túnica mucosa también se pueden disociar empapando el tejido en una disolución desepitelizante, por ejemplo, y sin limitación, solución salina hipertónica. La UBM resultante comprende la membrana basal de la túnica mucosa y la túnica propia adyacente, que se trata además con ácido peracético, se liofiliza y se pulveriza, véase la patente de EE.UU. núm. 8.361.503.

En otra realización, la ECM deriva de la vejiga urinaria. Los métodos para producir una ECM de matriz de vejiga urinaria (UBM) se describen en la patente de EE.UU. núm. 6.576.265. Los métodos para producir una ECM de la submucosa de la vejiga urinaria (UBS) se describen en la patente de EE.UU. núm. 5.554.389. Estos tipos de ECM de vejiga urinaria son ambos útiles en los métodos descritos en la presente memoria. Se pueden utilizar preparaciones disponibles comercialmente de UBM (Acell Corporation; Jessup, Md.).

La patente de EE.UU. núm. 6.893.666 también describe la producción de ECM a partir de la vejiga urinaria, la piel, el esófago y el intestino delgado. La producción de hidrogeles a partir de ECM dérmica descelularizada se describe en Wolf et al., Biomaterials 33: 7028-7038, 2012. La producción de ECM a partir de tejido esofágico se describe, por ejemplo, en Badylak et al. J Pediatr Surg. 35(7):1097-103, 2000 y Badylak et al., J. Surg. Res. Septiembre de 2005; 128(1 ):87-97, 2005.

Las preparaciones de ECM disponibles comercialmente también se pueden usar en los métodos, dispositivos y composiciones descritos en la presente memoria. En una realización, la ECM se deriva de la submucosa del intestino delgado o SIS. Las preparaciones disponibles comercialmente incluyen, pero no se limitan a, SURGISIS™, SURGISIS-ES™, STRATASIS™, y STRATASIS-ES™ (Cook Urological Inc.; Indianápolis, Ind.) y GRAFTPATCH™ (Organogenesis Inc.; Cantón Mass.). En otra realización, la ECM deriva de la dermis. Las preparaciones disponibles comercialmente incluyen, pero no se limitan a, PELVICOL™ (vendido como PERMACOL™ en Europa; Bard, Covington, Ga.), REPLIFORM™ (Microvasive; Boston, Mass.) y ALLODERM™ (LifeCell; Branchburg, N.J.). Una UBM ECM disponible comercialmente es MATRISTEM UBM™ (Acell, Layfayette, IN).

El tejido fuente usado para la preparación de ECM se puede recolectar de una gran variedad de formas y, una vez recolectado, se pueden usar una variedad de porciones del tejido recolectado. También se ha preparado la ECM a partir del esófago y el intestino delgado, y se han preparado hidrogeles a partir de esta ECM, véase, por ejemplo, Keane et al., Tissue Eng. Parte A, 21(17-18): 2293-2300, 2015.

La ECM esofágica se puede preparar separando mecánicamente la mucosa y la submucosa de la muscularis externa y digiriendo las capas mucosas en un tampón que incluya tripsina, seguido de la exposición a sacarosa, TRITON-X100®, ácido desoxicólico, ácido peracético y ADNasa. La submucosa del intestino delgado (SIS) se puede preparar eliminando mecánicamente las capas superficiales de la túnica mucosa, la túnica serosa y la túnica muscular externa del intestino delgado intacto, dejando intactas la submucosa, la muscularis mucosa y el basilar stratum compactum. Luego el SIS se trata con ácido peracético. Se proporcionan protocolos ejemplares en Keane et al.

En algunas realizaciones, las células epiteliales pueden deslaminarse empapando primero el tejido en una disolución desepitelizante tal como solución salina hipertónica, por ejemplo y sin limitación, solución salina 1,0 N, durante períodos de tiempo que varían de 10 minutos a 4 horas. La exposición a una solución salina hipertónica elimina eficazmente las células epiteliales de la membrana basal subyacente. El tejido que queda después del procedimiento de deslaminación inicial incluye la membrana basal epitelial y las capas de tejido abluminales a la membrana basal epitelial. A continuación, este tejido se somete a un tratamiento adicional para eliminar la mayoría de los tejidos abluminales, pero no la membrana basal epitelial. Los tejidos serosos externos, adventiciales, de músculo liso, la túnica submucosa y la mayor parte de la muscularis mucosa se eliminan del tejido desepitelizado restante mediante abrasión mecánica o mediante una combinación de tratamiento enzimático, hidratación y abrasión.

La ECM se puede desinfectar o esterilizar mediante diversas técnicas estándar, que incluyen, pero no se limitan a, la exposición al ácido peracético, la radiación gamma en dosis bajas, la esterilización con plasma gaseoso, el tratamiento con óxido de etileno, CO2 supercrítico, o tratamiento con haz de electrones. Más típicamente, la desinfección de la ECM se obtiene sumergiéndola en ácido peracético al 0,1 % (v/v), etanol al 4 % (v/v) y agua estéril al 95,9 % (v/v) durante dos horas. El residuo de ácido peracético se elimina lavando dos veces durante 15 minutos con PBS (pH=7,4) y dos veces durante 15 minutos con agua estéril. El material de ECM se puede esterilizar mediante tratamiento con óxido de propileno u óxido de etileno, tratamiento con radiación gamma (0,05 a 4 mRad), esterilización con plasma gaseoso, CO2 supercrítico, o tratamiento con haz de electrones. La ECM también puede esterilizarse mediante tratamiento con glutaraldehído, que provoca la reticulación del material proteico, pero este tratamiento altera sustancialmente el material de modo que se reabsorbe lentamente o no se reabsorbe en absoluto e incita a un tipo diferente de remodelación del huésped que se parece más a formación o encapsulación de tejido cicatricial en lugar de remodelación constructiva. La reticulación del material proteico también puede inducirse con carbodiimida o métodos deshidrotérmicos o de fotooxidación. Como se describe en la patente de EE.UU. núm. 8.361.503, la ECM se desinfecta mediante inmersión en ácido peracético (a) al 0,1 % (v/v), etanol al 4 % (v/v) y agua estéril al 96 % (v/v) durante 2 h. Luego, el material de ECM se lava dos veces durante 15 min con PBS (pH = 7,4) y dos veces durante 15 min con agua desionizada.

Tras el aislamiento del tejido de interés, la descelularización se realiza mediante diversos métodos, por ejemplo, y sin limitación, exposición a solución salina hipertónica, ácido peracético, TRITON-X® u otros detergentes. La desinfección y la descelularización pueden ser simultáneas. Por ejemplo, y sin limitación, la desinfección con ácido peracético, descrita anteriormente, también puede servir para descelularizar la ECM. Luego, la ECM descelularizada se puede secar, ya sea liofilizarse (secarse por congelación) o secarse al aire. La ECM seca se puede desmenuzar mediante métodos que incluyen, pero no se limitan a, desgarro, molido, corte, trituración y cizallamiento. La ECM desmenuzada también se puede procesar adicionalmente hasta obtener una forma en polvo mediante métodos, por ejemplo y sin limitación, tales como trituración o molienda en estado congelado o liofilizado.

Para preparar tejido de ECM solubilizado para su uso en la preparación de un hidrogel de ECM, se digiere la ECM desmenuzada con una proteasa ácida en una disolución ácida para formar una disolución de digestión. La disolución de digestión de ECM normalmente se mantiene en agitación constante durante un cierto período de tiempo a temperatura ambiente. El producto de la digestión de la ECM puede usarse inmediatamente o almacenarse a -20 °C o congelarse a, por ejemplo y sin limitación, -20 °C o -80 °C.

Una vez que la ECM se solubiliza (normalmente sustancialmente por completo), el pH de la disolución se eleva a entre 7,2 y 7,8 y, según una realización, a pH 7,4. Se pueden usar bases, como bases que contienen iones hidroxilo, incluido NaOH, para elevar el pH de la disolución. Asimismo, se pueden usar tampones, tales como un tampón isotónico, que incluye, sin limitación, solución salina tamponada con fosfato (PBS), para llevar a la disolución a un pH objetivo, o para ayudar a mantener el pH y la fuerza iónica del gel en los niveles objetivo, como el pH fisiológico y las condiciones iónicas. Esto forma una disolución "pregel". El pregel está en forma líquida como una disolución viscosa a temperatura ambiente. La disolución de digestión neutralizada (pregel) se puede gelificar a temperaturas cercanas a 37 °C, en donde la temperatura se aproxima a la temperatura fisiológica. El método normalmente no incluye un paso de diálisis antes de la gelificación, lo que produce una matriz similar a ECM más completa que normalmente gelifica a 37 °C a velocidades específicas (véase más abajo).

Por tanto, la ECM normalmente puede derivar de tejido de mamífero, tal como, sin limitación, de uno de vejiga urinaria, dermis, esófago, intestino delgado, riñón, hígado, corazón, útero, cerebro, vaso sanguíneo, pulmón, hueso, músculo, páncreas, estómago, bazo o colon. El hidrogel de ECM se puede producir a partir de dos o más fuentes de tejido, tales como 2, 3 o 4 fuentes de tejido. En una realización no limitante, la ECM se liofiliza y se desmenuza. Luego, la ECM se solubiliza con una proteasa ácida en una disolución ácida para producir ECM digerida, tal como ECM esofágica. La proteasa ácida puede ser, sin limitación, pepsina o tripsina, o una combinación de las mismas. Luego, la ECM puede solubilizarse a un pH ácido adecuado u óptimo para la proteasa, tal como mayor que aproximadamente pH 2, o entre pH y 4, por ejemplo, en una disolución de HCl 0,01 M. La disolución normalmente se solubiliza durante aproximadamente 12 a aproximadamente 48 horas, dependiendo del tipo de tejido (p. ej., véanse los ejemplos a continuación), con mezcla (removiendo, agitación, mezcla, combinación, rotación, inclinación, etc.). El hidrogel de ECM se prepara (i) desmenuzando una matriz extracelular, (ii) solubilizando la matriz extracelular intacta, no dializada o no reticulada mediante digestión con una proteasa ácida en una disolución ácida para producir una disolución de digestión, (iii) elevando el pH de la disolución de digestión a un pH entre 7,2 y 7,8 para producir una disolución de digestión neutralizada (disolución pregel), y (iv) gelificando la disolución a una temperatura de aproximadamente 37 °C dentro del órgano de un sujeto de interés. Cuando se usa una proteasa ácida para digerir la e Cm , la disolución de pregel y el hidrogel resultante pueden contener proteasa inactivada.

El hidrogel de ECM, cuando se expone a temperaturas de aproximadamente 37 °C, forma el gel. El hidrogel de ECM en forma de "pregel" se puede congelar y almacenar, por ejemplo y sin limitación, -20 °C o -80 °C. El hidrogel de ECM en forma de "pregel" se puede almacenar a temperatura ambiente, como a aproximadamente 25 °C. Por lo tanto, el hidrogel de<e>C<m>está en forma de pregel a menos de 37 °C, tal como a 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 °C. El hidrogel de ECM se puede congelar para su almacenamiento y, por tanto, se puede almacenar por debajo de 0 °C. Como se usa en la presente memoria, el término "forma de pregel" o "pregel" se refiere al hidrogel de e Cm en donde el pH aumenta, pero no se ha gelificado. Por ejemplo, y sin limitación, un hidrogel de ECM en forma de pregel tiene un pH entre 7,2 y 7,8. El hidrogel de ECM se puede administrar en forma de pregel a un sujeto utilizando un endoscopio.

El hidrogel de ECM en forma de pregel se puede introducir en el órgano de un paciente, tal como un órgano del tracto gastrointestinal que no sea el esófago. Una vez introducido por vía submucosa en el órgano, que está a aproximadamente 37 °C, el hidrogel de ECM se gelifica y crea una almohadilla de hidrogel de ECM entre la muscularis propria y la submucosa del órgano, levantando la submucosa para la resección quirúrgica. Sin limitarse a ninguna teoría, el hidrogel de ECM incluye muchos factores solubles nativos, tales como, pero no se limitan a, citocinas. En la presente memoria se describen las características específicas de las preparaciones no dializadas (ECM completa) preparadas a partir de una variedad de tejidos.

El hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta el 50% de gelificación de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de i) aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa).

En realizaciones, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 300 Pascal (Pa).

En más realizaciones, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de 10-70 Pascal (Pa). El órgano puede ser cualquier órgano del tracto gastrointestinal, a excepción del esófago.

En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de i) aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa), ii) aproximadamente 10 a aproximadamente 450 Pa; iii) aproximadamente 10 a aproximadamente 600 Pa, iv) aproximadamente 5 a aproximadamente 1000 Pa, v) aproximadamente 10 a 1000 Pa, o vi) aproximadamente 10 a aproximadamente 70 Pa.

En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 20 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de i) aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa), o ii) aproximadamente 10 a aproximadamente 70 Pa.

En realizaciones, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 20 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 300 Pascal (Pa).

En más realizaciones, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de 20 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de 10-70 Pascal (Pa).

En otra realización, el hidrogel de ECM tiene las siguientes características a) un tiempo hasta una gelificación del 50 % de menos de diez minutos a aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo suficiente para inyección en el órgano; c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 300 Pascal (Pa); y d) el hidrogel es un hidrogel esofágico.

En ejemplos específicos no limitantes, el hidrogel de ECM es un hidrogel esofágico. En otros ejemplos específicos no limitantes, el hidrogel de ECM se puede producir a partir de dos o más fuentes de tejido. En otros ejemplos no limitantes, el hidrogel de ECM se puede producir a partir de la vejiga urinaria o el intestino delgado. El hidrogel de ECM puede ser un ECM UBM o un ECM UBS.

En ejemplos no limitantes específicos adicionales, el hidrogel de ECM se produce (a) solubilizando la matriz extracelular acelular (ECM) mediante digestión de tejido con una proteasa ácida en una disolución ácida para producir ECM esofágica digerida; (b) elevando el pH de la ECM digerida a un pH entre 7,2 y 7,8 para producir una disolución de digestión neutralizada; (c) dilución de la ECM digerida a una concentración de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 16 mg/ml, tal como aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 12 mg/ml del hidrogel de ECM. A continuación, este hidrogel se introduce en el órgano del sujeto, donde gelifica. La ECM puede ser ECM esofágica.

Los hidrogeles de ECM de uso en los métodos descritos en la presente memoria tienen un tiempo hasta la gelificación del 50 % de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C, tal como menos de 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 1, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 minutos. En algunas realizaciones, los hidrogeles de ECM tienen un tiempo hasta la gelificación del 50 % de menos de 10 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C. En algunas realizaciones, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 2 a aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 37 °C. En realizaciones adicionales, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 37 °C. En más realizaciones, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 minutos. En otras realizaciones, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 3 a aproximadamente 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C. En realizaciones adicionales, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 4 a aproximadamente 10 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C. En otras realizaciones más, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 minutos o de aproximadamente 10 a aproximadamente 20 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C.

Los hidrogeles de ECM descritos pueden tener una viscosidad de flujo adecuada para la infusión en el órgano. En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 Pa*s a una velocidad de corte de 0,2/s, tal como aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 o 90 Pa*s a una velocidad de corte de 0,2/s. En realizaciones adicionales, la viscosidad del flujo es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 0,1/s y es de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,2 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s. En más realizaciones, la viscosidad del flujo es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 30 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s, y es de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,8 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 100/s.

En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 30 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s. En realizaciones adicionales, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 0,1/s. En ejemplos no limitantes específicos, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de 0,5 a aproximadamente 50 Pa*s, o el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 1 a aproximadamente 40 Pa*s a una velocidad de corte de 0,1/s. Viscosidades de flujo ejemplares son aproximadamente 0,1, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 Pa*s a una velocidad de corte de 0,1/s.

En otras realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,20 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s, o de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,10 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s, tal como aproximadamente 0,01, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,10, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,19 o 0,2 a una velocidad de corte de 1000/s.

En más realizaciones, el hidrogel de ECM tiene aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,8 Pa*s a una velocidad de corte de 100/s, o de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 0,8 Pa*s a una velocidad de corte de 100/s, tal como aproximadamente 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 o 0,08 Pa*s.

En otras realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 30 Pa*s, tal como aproximadamente 1 a aproximadamente 20 Pa*s, o 1 a aproximadamente 10 Pa*s, o 0,5 a 25 Pa*s, a una velocidad de corte de 1/s, tal como aproximadamente 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 o 30 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s. La velocidad de corte puede ser, por ejemplo, 5, 10, 20 o 30 Pa*s con una velocidad de corte de 1/s. En otras realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,8 a una velocidad de corte de 100/s, tal como aproximadamente 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,1,0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 o 0,8 a una velocidad de corte de 100/s. La viscosidad del flujo puede ser de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 30 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s, y es de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,8 Pa*s a una velocidad de corte de 100/s. En realizaciones adicionales, la viscosidad del flujo es de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s, y es de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,5 a una velocidad de corte de 100/s.

En realizaciones adicionales, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 Pa*s a una velocidad de corte de 0,1/s. En otras realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,2 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s. En otras realizaciones, el hidrogel de ECM tiene una viscosidad de flujo de aproximadamente 1 a aproximadamente 40 Pa*s a una velocidad de corte de 0,1/s y es de 0,01 a 0,2 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s.

Los hidrogeles de ECM descritos tienen una rigidez i) de aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal o ii) de aproximadamente 10 a aproximadamente 70 Pa. El hidrogel de ECM puede tener una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 300 Pascal (Pa), tal como de aproximadamente 10 a aproximadamente 70 Pa, aproximadamente 10 a aproximadamente 100 Pascal (Pa), o aproximadamente 10 a aproximadamente 150 Pa, aproximadamente 10 a aproximadamente 200 Pa, o aproximadamente 10 a aproximadamente 300 Pa. En algunas realizaciones, los hidrogeles de ECM descritos tienen una rigidez de aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 o 70 Pa. En otras realizaciones, los hidrogeles de ECM descritos tienen una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390 o 400 Pa. En realizaciones adicionales, el hidrogel de ECM descrito puede tener una rigidez de aproximadamente 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 o 300 Pa.

En algunas realizaciones, la concentración de ECM en el hidrogel es de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml, tal como de aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 12 mg/ml o de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 16 mg/ml. En otras realizaciones, la concentración de ECM en el hidrogel es aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 mg/ml. Las concentraciones de uso ejemplares incluyen, pero no se limitan a, aproximadamente 9 mg/ml a aproximadamente 11 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml a aproximadamente 12 mg/ml. Concentraciones ejemplares adicionales incluyen aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 10 mg/ml, aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 11 mg/ml, aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 13 mg/ml, aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 14 mg/ml, de aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 15 mg/ml, y de aproximadamente 8 mg/ml a aproximadamente 16 mg/ml. Otras concentraciones de uso ejemplares también incluyen aproximadamente 6 mg/ml a aproximadamente 12 mg/ml, aproximadamente 13 mg/ml, aproximadamente 14 mg/ml, aproximadamente 15 mg/ml o aproximadamente 16 mg/ml.

Los hidrogeles de ECM descritos se pueden proporcionar como componentes de un kit (que no forma parte de la invención reivindicada). El hidrogel de ECM se puede proporcionar en forma congelada o liofilizada. En algunas realizaciones, el kit puede incluir los componentes necesarios para formar el hidrogel, tal como un recipiente que incluye el hidrogel, tal como en forma liofilizada, un recipiente que incluye una disolución para solubilizar el hidrogel liofilizado y, opcionalmente, un recipiente que comprende una disolución de neutralización para neutralizar la forma solubilizada. En otras realizaciones, el kit puede incluir un recipiente que incluye el hidrogel solubilizado y un segundo recipiente que incluye un agente de neutralización.

Opcionalmente, dicho kit incluye componentes adicionales que incluyen embalaje, instrucciones y otros reactivos diversos, tales como tampones, sustratos u otros ingredientes terapéuticos. El kit puede incluir un recipiente y una etiqueta o prospecto en o asociado con el recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringas, etc. Los recipientes pueden formarse a partir de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente normalmente contiene una composición que incluye el hidrogel de ECM, tal como en forma congelada o liofilizada, que es eficaz para inhibir la inflamación esofágica y/o mitigar los efectos de la inflamación esofágica en un sujeto. En varias realizaciones, el recipiente puede tener un puerto de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de disolución intravenosa o un vial que tiene un tapón perforable con una aguja de inyección hipodérmica). La etiqueta o el prospecto indican que la composición se usa para procedimientos endoscópicos para la condición particular, como el cáncer colorrectal.

La etiqueta o el prospecto normalmente incluirán además instrucciones de uso. El prospecto normalmente incluye instrucciones habitualmente incluidas en paquetes comerciales de productos terapéuticos que contienen información sobre las indicaciones, uso, dosificación, administración, contraindicaciones y/o advertencias relativas al uso de dichos productos terapéuticos. Los materiales de instrucción pueden estar escritos, en formato electrónico (como un disquete de ordenador o un disco compacto) o pueden ser visuales (como archivos de video). Los kits también pueden incluir componentes adicionales para facilitar la aplicación particular para la que está diseñado el kit, como agujas o catéteres. Los kits pueden incluir adicionalmente tampones y otros reactivos usados habitualmente para la práctica de un método particular. Los kits y los contenidos apropiados son bien conocidos por los expertos en la técnica.

Métodos de tratamiento

Métodos (que no forman parte de la invención reivindicada) descritos en la presente memoria para diseccionar una mucosa y una submucosa de una muscularis propria de una región de un órgano de un sujeto, en donde el órgano no es el esófago. El órgano puede estar en el tracto gastrointestinal, por ejemplo, el duodeno, el estómago, el intestino delgado, el intestino grueso (colon) o el recto. El órgano puede ser la vejiga, órganos del sistema buco-respiratorio (pulmones, garganta (faringe), lengua, fosas nasales, senos nasales), la piel o el útero y el tracto vaginal. Ejemplos de tejidos específicos son el epitelio respiratorio, el epitelio nasal, el tejido dérmico o epidérmico y el epitelio uterino. Los métodos son útiles en cualquier órgano que tenga una mucosa y una submucosa, en donde se pueda formar una lesión superficial, tal como una lesión maligna o premaligna. El órgano no es el esófago.

Estos métodos incluyen inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM) para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano, en donde el órgano no es el esófago. El método puede ser una resección endoscópica de la mucosa (EMR) o una disección endoscópica de la submucosa (ESD).

La EMR es una técnica endoscópica desarrollada para la extirpación de neoplasias sésiles o planas confinadas a las capas superficiales (mucosa y submucosa) del tracto gastrointestinal (GI). La EMR se usa normalmente para la extirpación de lesiones de menos de 2 cm o para la extirpación gradual de lesiones más grandes. La EMR también desempeña un papel importante en la evaluación de muestras extirpadas para una estadificación patológica precisa. A diferencia de la polipectomía, la EMR implica el levantamiento de una lesión desde la capa muscular mediante la inyección de un agente fluido, comúnmente solución salina normal (NS), en la capa submucosa. La EMR también es útil para obtener muestras para una estadificación histopatológica precisa para determinar el riesgo de metástasis en los ganglios linfáticos. La EMR facilita la eliminación completa de la mucosa afectada mediante la escisión de la porción media o más profunda de la submucosa de la pared intestinal. Se han descrito varias técnicas de EMR y comúnmente se usan cuatro métodos que implican resección con lazo: (1) el método de inyección y corte; (2) el método de inyección, elevación y corte; (3) EMR asistido por capuchón (EMRC); y (4) EMR con ligadura (EMRL). En la técnica de inyección y corte, la mucosa enferma se levanta de la capa muscular creando una almohadilla de fluido submucoso, se captura, se estrangula con un lazo electroquirúrgico y luego se extirpa. Sin embargo, la inyección en la fina capa submucosa es un proceso delicado, la disolución inyectada tiende a disiparse rápidamente, las lesiones planas y deprimidas son difíciles de capturar con el lazo en comparación con las lesiones que sobresalen, y las lesiones grandes o mal ubicadas pueden ser difíciles de eliminar (Uraoka et al., Drug Design, Development and Therapy 2008:2 131-138). La EMR asistida por inyección se usa con frecuencia para los pólipos grandes y planos del colon.

La disección submucosa endoscópica (ESD) se desarrolló específicamente para eliminar lesiones más grandes. Las lesiones se extirpan directamente a lo largo de la capa submucosa utilizando un bisturí electroquirúrgico, lo que da como resultado una resección en bloque incluso de lesiones grandes. Se ha predicho que la ESD reemplazará a la cirugía convencional en el tratamiento de ciertas etapas cancerosas, pero dado que tiene una tasa más alta de perforación y complicaciones hemorrágicas que la e Mr convencional, se requiere un mayor grado de habilidad y experiencia endoscópica que para la EMR. eSd puede usar numerosos bisturíes electroquirúrgicos, como un bisturí diatérmico con punta aislante, un bisturí de aguja, un bisturí de gancho, un bisturí flexible, un bisturí de punta triangular, un bisturí de descarga, una aguja contra salpicaduras y una capucha transparente con punta de pequeño calibre. Estos cuchillos se pueden utilizar con un generador de corriente electroquirúrgica de alta frecuencia (HFEC). La ESD se caracteriza por tres etapas: (1) inyectar un fluido para formar una almohadilla submucosa para elevar la lesión de la capa muscular; (2) corte en circunferencia de la mucosa circundante de la lesión; y (3) disección del tejido conectivo de la submucosa debajo de la lesión (ver Kakushima et al., Wold J. Gastroenterol. 14(9): 2962-2967, 2008, incorporado en la presente memoria como referencia. Anteriormente se habían desarrollado varias disoluciones de inyección submucosa y demostraron ser satisfactorias para su uso durante la EMR, pero la introducción del procedimiento ESD más prolongado requirió una disolución más duradera para ayudar a identificar la línea de corte durante la disección de la capa submucosa (Uraoka et al., Drug Design, Development and Therapy 2008:2 131-138). Los métodos actualmente descritos satisfacen esta necesidad.

En la EMR se usa una inyección submucosa, ya que la inyección de fluido en las almohadillas de la submucosa facilita el aislamiento del tejido que se va a extraer justo antes de capturar la lesión objetivo, como con un lazo, reduciendo así la lesión térmica y el riesgo de perforación y hemorragia. al mismo tiempo que facilita la resección. La inyección submucosa juega un papel importante en el procedimiento EMR, ya que la disolución debe retenerse en su lugar durante el tiempo suficiente y debe adoptar una forma hemisférica para facilitar el atrapamiento. Además, proporcionar una elevación submucosa suficientemente alta da como resultado un corte submucoso seguro durante el procedimiento ESD (Uraoka et al., Drug Design, Development and Therapy 2008:2 131-138). Además, como la inflamación resulta del procedimiento, cualquier almohadilla retenida en el lugar del procedimiento debe tener propiedades antiinflamatorias. El hidrogel de ECM mitigará la estenosis y promoverá la reepitelización. Los métodos actualmente descritos también satisfacen esta necesidad.

En algunas realizaciones, los métodos descritos utilizan un hidrogel de ECM que tiene propiedades antiinflamatorias y es económico, no tóxico, fácil de inyectar y proporciona una almohadilla submucosa alta y duradera. El hidrogel de ECM se administra en forma de pregel y luego gelifica en el lugar de la inyección para formar una almohadilla. La almohadilla se puede diseccionar durante el procedimiento de manera que quede algo de hidrogel en la muscularis propria subyacente, ayudando así a la curación. Los hidrogeles de ECM descritos facilitan el cierre de la herida creada mediante la eliminación de la mucosa/submucosa extirpada. En algunas realizaciones, el procedimiento es una ESD. En otras realizaciones, el procedimiento es una EMR.

Solución salina normal (NS) y disoluciones más diluidas (p. ej., ELEVIEW™, véase la patente de EE.UU. núm.

9.226.996) se han usado como almohadillas submucosas para la resección endoscópica, pero las características inherentes de estas disoluciones dificultan producir la almohadilla de fluido submucoso adecuado, mantener la altura deseada y retener la almohadilla en la ubicación deseada, debido a la rápida dispersión de la disolución. Además, en la ESD, una vez que se elimina la mucosa/ submucosa, estos agentes no quedarán retenidos en la muscularis propria subyacente. Además, estos agentes no ayudan al proceso de curación, por ejemplo, reduciendo la inflamación. El uso de un hidrogel de ECM satisface estas necesidades.

Los hidrogeles de ECM descritos en la presente memoria se pueden usar como en cualquier ESD o ESR. Como se describe en la patente de EE.UU. núm. 9.364.580, las agujas de inyección endoscópica son dispositivos que pueden ser largos (hasta aproximadamente 230) cm y que incluyen un catéter relativamente largo dentro del cual está dispuesto de manera deslizable un tubo de inyección interior que tiene una aguja de inyección distal. Un mango de accionamiento proximal está acoplado al catéter y al tubo de inyección para mover uno con respecto al otro cuando sea necesario. El acceso de fluido al tubo de inyección normalmente se proporciona a través de un conector de lectura en el mango. Los dispositivos endoscópicos con agujas de inyección normalmente se entregan en el lugar de la inyección a través del canal de trabajo del endoscopio. Para proteger contra daños el lumen del canal de trabajo del endoscopio, se manipula el mango del dispositivo de aguja de infusión para retirar la aguja de inyección al lumen del catéter antes de insertar el dispositivo en el endoscopio. Esto evita la exposición de la punta afilada de la aguja de inyección cuando el dispositivo se mueve a través del lumen del endoscopio. Cuando el extremo distal del dispositivo endoscópico de aguja de inyección está ubicado en el sitio de inyección, su mango se manipula nuevamente para mover la aguja de inyección distalmente fuera del lumen del catéter. Cuando se avanza hasta la posición más distal, la porción expuesta de la aguja de inyección tiene aproximadamente 4-6 mm de longitud.

Después de perforar el lugar de la inyección, la ECM en forma de pregel, generalmente contenida en una jeringa de 5 ml a 10 ml provista de un accesorio luer-lock conectado al mango de la aguja de inyección, se puede administrar a través del tubo de inyección y la aguja en el lugar de la inyección, como entre la submucosa y la muscularis propria subyacente.

La aguja de inyección y otros accesorios comúnmente utilizados durante los procedimientos endoscópicos, como lazos para polipectomía, dispositivos de cortado, fórceps para biopsia y similares, se hacen pasar a través de uno o más canales específicos del endoscopio, habitualmente denominados canales de trabajo o canales de operación. Dependiendo del tipo de endoscopio usado en la endoscopia GI (p. ej., gastroscopio, enteroscopio, colonoscopio, duodenoscopio, sigmoidoscopio y similares), el diámetro interno de los canales de trabajo puede variar considerablemente. Sin embargo, los endoscopios más comunes usados en endoscopia GI tienen canales de trabajo con un diámetro interno en el intervalo de aproximadamente 2 mm a aproximadamente 5 mm. Generalmente, los fabricantes de accesorios endoscópicos producen accesorios que tienen diámetros exteriores que les permiten adaptarse a todos los canales de trabajo. En algunas realizaciones, en las agujas de inyección endoscópicas, el diámetro exterior del catéter varía de 1,9 mm a 2,3 mm, tal como aproximadamente 1,9, 2,0, 2,1, 2,2 o 2,3 cm. Así, considerando que el tubo de inyección interior está contenido en el catéter exterior, su diámetro interno suele ser de 1 mm o menos. Los hidrogeles de ECM descritos, en forma de pregel, pueden pasar fácilmente a través de estos catéteres.

El hidrogel de ECM, en forma de pregel, se puede usar en un procedimiento de resección endoscópica succionando un volumen de emulsión de su recipiente primario mediante una jeringa, inyectando un volumen adecuado de dicha emulsión mediante una aguja de inyección endoscópica insertada en el canal de trabajo del endoscopio inmediatamente debajo de la capa mucosa superficial, para depositar un volumen líquido en la capa submucosa que se convierte en una almohadilla cuando está en su lugar: la elevación de la superficie mucosa permite al endoscopista realizar una fácil resección de la lesión mucosa encontrada durante la ejecución del procedimiento endoscópico incluso si la lesión es plana y por lo tanto no sobresale en el lumen, como un lumen intestinal o gástrico.

La presencia de al menos un tinte en la almohadilla puede ayudar al endoscopista a visualizar las estructuras debajo de la mucosa (p. ej., la capa submucosa y la pared muscular externa), reduciendo así el riesgo de que el endoscopista, al realizar el procedimiento de resección, pueda causar daños a dichas estructuras. El uso del tinte puede permitir la visualización de la cavidad de la almohadilla y de la base mucosa. La eliminación de la lesión de la superficie mucosa genera una herida en la mucosa. La persistencia de la almohadilla generada por el volumen inyectado de la composición farmacéutica permite realizar el procedimiento de resección endoscópica sin necesidad de volver a inyectar. El hidrogel de ECM en forma de pregel se inyecta por vía submucosa en una región de interés en el órgano del sujeto, tal como en la región de una lesión o tumor, para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano. La almohadilla se puede diseccionar, de modo que una porción del hidrogel de ECM se mantenga en la muscularis propria subyacente y ayude en el proceso de curación.

El órgano puede ser cualquier órgano de interés, tal como un órgano del tracto gastrointestinal. El órgano no es el esófago. El órgano puede estar en el tracto gastrointestinal superior, como la faringe, la lengua o la boca. El órgano puede ser la vejiga, el tracto vaginal o el útero. En algunas realizaciones, el órgano es el colon, el duodeno, el estómago, el ciego, el colon, el colon sigmoide, el recto, el intestino delgado o el intestino grueso. En un ejemplo no limitante, el órgano es el estómago, el intestino delgado o el intestino grueso, y el método comprende un método para diseccionar un carcinoma o adenocarcinoma del estómago. En otro ejemplo no limitante, el órgano es el colon, y en donde el método comprende diseccionar un pólipo o un carcinoma del colon.

Un hidrogel de ECM, como se describe en la presente memoria, se mantiene a una temperatura igual o inferior a la cual gelifica, tal como a temperatura ambiente o inferior (p. ej., aproximadamente 25 °C). El hidrogel de ECM se puede mantener, por ejemplo, a 25 °C o 4 °C antes de la administración. Luego se utiliza una cantidad eficaz del hidrogel de ECM, en forma de pregel. El hidrogel de ECM se gelifica en el tejido del sujeto, que está a una temperatura de aproximadamente 37 °C. El hidrogel de ECM puede proporcionarse en forma liofilizada o congelada y reconstituirse justo antes de la administración a la región del órgano del sujeto.

Los métodos descritos son útiles en cualquier sujeto, incluidos sujetos humanos y veterinarios. El sujeto puede ser de cualquier edad. El sujeto puede ser un adulto o un menor. En una realización, se inyecta una composición que incluye un hidrogel de ECM, en forma de pregel, en un tejido objetivo en un órgano para formar una almohadilla que luego se somete opcionalmente a un procedimiento quirúrgico endoscópico, tal como un procedimiento de resección. La ECM puede ser de la misma especie que el sujeto que se está tratando o puede ser de una especie diferente. En algunas realizaciones, el sujeto es humano y el hidrogel de ECM deriva de<e>C<m>humana o porcina. En otras realizaciones, el hidrogel de ECM se deriva de primates no humanos, perro, gato, caballo o vaca. La ECM también puede ser de una fuente comercial. El hidrogel de ECM puede, en algunas realizaciones, derivarse de cualquier tejido de mamífero, tal como, pero no se limita a, tejido porcino o humano, y ser, en algunos ejemplos no limitantes, vejiga urinaria, intestino delgado o el esófago. Cualquiera de los hidrogeles de ECM descritos anteriormente se puede usar como almohadilla submucosa y/o en cualquiera de los métodos descritos. El hidrogel puede ser un hidrogel de ECM esofágico o un hidrogel de vejiga urinaria.

Los métodos descritos son invasivos, ya que requieren una inyección que diseccione una mucosa y una submucosa de la muscularis propria de una región de un órgano de un tracto intestinal de un sujeto. Por tanto, la ECM no se aplica a una superficie de un órgano, tal como un órgano del tracto gastrointestinal. Los métodos descritos no se practican en el esófago.

Cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria puede incluir inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto una composición farmacéutica que incluye un hidrogel de matriz extracelular (ECM) para formar una almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano. El hidrogel de ECM tiene las siguientes características: a) un tiempo hasta el 50% de gelificación de menos de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C; b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa). El método puede utilizar cualquiera de los hidrogeles descritos anteriormente. El hidrogel de ECM gelifica y disecciona la mucosa y la submucosa de la muscularis propria subyacente e inhibe la inflamación en la región del órgano en el sujeto. El hidrogel de ECM, en forma de pregel, se puede administrar por vía endoscópica o mediante un catéter. En algunas realizaciones, el órgano es el colon, el estómago, el ciego, el colon, el colon sigmoide, el recto, el intestino delgado o el intestino grueso.

En algunas realizaciones, el procedimiento de resección es una resección endoscópica de la mucosa o una disección endoscópica de la submucosa. En realizaciones adicionales, el órgano es el estómago, el intestino delgado o el intestino grueso, y el método comprende un método para diseccionar un pólipo, un carcinoma o un adenocarcinoma del colon. En más realizaciones, el método incluye diseccionar la mucosa y la submucosa de un órgano de un paciente que tiene displasia. En ejemplos específicos no limitantes, el método comprende diseccionar un pólipo o un carcinoma del colon. Generalmente el órgano no es el esófago.

Los métodos también pueden incluir realizar un procedimiento de resección endoscópica en la almohadilla. En algunas realizaciones, los métodos incluyen dividir la almohadilla de manera que el hidrogel quede retenido en la muscularis propria subyacente del órgano y la mucosa y la submucosa se eliminen de la región del órgano.

En algunas realizaciones, el tiempo hasta la gelificación del 50 % del hidrogel es de 30 minutos a una temperatura de aproximadamente 37 °C. En algún ejemplo específico no limitante, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 2 a aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 37 °C. En otros ejemplos específicos no limitantes, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 37 °C. En otros ejemplos no limitantes, el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 minutos.

En realizaciones adicionales, la viscosidad del flujo en forma de pregel es suficiente para la inyección en un órgano de interés. En algunas realizaciones, la viscosidad de flujo del hidrogel de ECM es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 0,1/s y es de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,2 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s. En algunos ejemplos no limitantes, la viscosidad de flujo es aproximadamente 30 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s, y es de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,8 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 100/s.

En realizaciones adicionales, el hidrogel de ECM tiene una rigidez cuando se introduce en el tejido de aproximadamente 10 a aproximadamente 300 Pascal (Pa); en donde el hidrogel de ECM tiene una rigidez de 10-70 Pa. En realizaciones adicionales, la concentración de ECM en el hidrogel es de 2 mg/ml a aproximadamente 16 mg/ml.

El hidrogel de ECM se puede producir mediante cualquier método descrito en la presente memoria. En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM se produce (a) solubilizando la matriz extracelular descelularizada (ECM) mediante digestión de tejido con una proteasa ácida en una disolución ácida para producir ECM digerida; y (b) elevando el pH de la ECM digerida a un pH entre 7,2 y 7,8 para producir una solución de digestión neutralizada. En realizaciones adicionales, la etapa (b) aumentar el pH de la ECM digerida incluye añadir una base o un tampón isotónico para elevar el pH de la ECM digerida. En realizaciones adicionales, se usa una proteasa ácida, tal como pepsina, tripsina o una combinación de las mismas. El hidrogel de ECM puede ser un hidrogel de ECM esofágico. El hidrogel de ECM puede ser un hidrogel de ECM de vejiga urinaria.

En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM se mantiene a 25 °C o menos antes de la administración al sujeto. En algunas realizaciones, el hidrogel de ECM se mantiene de aproximadamente 4 °C a aproximadamente 28 °C, tal como aproximadamente 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17., 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 o 28 °C. El hidrogel de ECM puede mantenerse a aproximadamente 4 °C y usarse de aproximadamente 4 °C a aproximadamente 25 °C, o calentarse hasta aproximadamente 25 °C, justo antes de su uso. En algunas realizaciones, controlar la temperatura garantiza que el hidrogel de ECM se mantenga en su forma de pregel y, por lo tanto, sea adecuado para inyección entre la submucosa y la muscularis propria subyacente. En realizaciones adicionales, el hidrogel gelifica tras la administración al sujeto, como cuando alcanza una temperatura de, por ejemplo, 37 °C.

Ejemplos

ELEVIEW™ y los hidrogeles de ECM son biomateriales diferentes. ELEVIEW™ (Aries Pharmaceuticals, Inc, Dublín, Irlanda) es una emulsión de baja viscosidad de Poloxamer 188 disponible comercialmente que se usa clínicamente para proporcionar elevación submucosa para procedimientos EMR y ESD. Se describe en preséntela presente memoria que ELEVIEW™ no forma un hidrogel formado de manera estable a 37 °C, sino que permanece líquido durante una hora a 37 °C. Por el contrario, 12 mg/ml de un hidrogel de ECM esofágico (eECM) (preparado según el método descrito en la presente memoria, es decir, mediante digestión con proteasa de ECM) forma un hidrogel que se forma de manera estable a 37 °C (temperatura corporal). ELEVIEW™ y la eECM se puede inyectar debajo de la mucosa. Un biomaterial ideal se adheriría a ambas capas. No hubo diferencias en la fuerza mucoadhesiva entre ELEVIEW™ y eECM 12 mg/mL al músculo. Sorprendentemente, eECM tuvo una mucoadhesión más fuerte que ELEVIEW™ a la mucosa. Además, eECM demostró actividad biológica por polarización de macrófagos hacia un fenotipo de remodelación. Esto demuestra que un hidrogel de matriz extracelular se puede usar eficazmente como una almohadilla submucosa y, por tanto, se puede usar para diseccionar la submucosa de la muscularis propria subyacente.

Ejemplo 1

Materiales y métodos

Reología

Las propiedades viscoelásticas de ELEVIEW™ y eECM 12 mg/ml se determinaron con un reómetro de placa paralela de 40 mm con temperatura controlada (AR2000). Las muestras se mantuvieron a 4 °C y se cargaron en el reómetro con una geometría de placa paralela preenfriado a 10 °C. Se usó aceite mineral para sellar la interfase muestra-placa y minimizar la evaporación durante la prueba. Se realizaron secuencialmente una serie de pruebas reológicas para cada muestra. Se realizó una curva de flujo en estado estacionario a 10 °C para determinar el perfil de viscosidad de las muestras en un intervalo de velocidades de corte (0,1-1000 s-1). La temperatura de la placa se elevó rápidamente de 10 °C a 37 °C, y se realizó un barrido de tiempo oscilatorio a 37 °C, aplicando una pequeña tensión oscilatoria del 0,5 % a una frecuencia de 1 rad/s para medir el módulo de almacenamiento máximo (G'), módulo de pérdida máxima (G") y cinética de gelificación. Los datos se extrajeron y analizaron en Prism (Versión 6, GraphPad) para análisis estadístico (n=3).

Mucoadhesión a muscularis

La mucosa y la muscularis porcina se aislaron mecánicamente quitando la mucosa y la submucosa de la capa muscularis subyacente. ELEVIEW™ y eECM (12 mg/ml) se pipetearon en una placa de 6 pocillos. La mucosa o muscularis se pegó a la superficie inferior de una media esfera (40 mm de diámetro) que descansa sobre ELEVIEW™ o eECM, de modo que el área superficial de la mucosa o muscularis en contacto con ELEVIEW™ o eECM permanece constante para todas las pruebas. La construcción se incubó durante 1 hora a 37 °C para su adherencia a la mucosa o muscularis. Después de 1 hora, la construcción se colocó en la máquina MTS Insight Tensile con una celda de carga de 10 N y un accesorio de explosión de bola, configurada a una frecuencia de medición de 10 Hz. El accesorio de explosión de bola se fijó firmemente a la media esfera y la media esfera se elevó hasta 5 mm/min. El valor máximo de la fuerza se consideró la fuerza de adhesión, restada por la fuerza de la construcción que colgaba libremente. Sólo se aceptaron mediciones si el desprendimiento se produjo entre la mucosa o muscularis y el hidrogel (n=3).

Rendimiento de la almohadilla de fluido submucoso exvivo

El colon y el estómago porcino se colocaron en una incubadora a 37 °C y su temperatura se monitorizó con un termómetro hasta que los tejidos alcanzaron los 37 °C. Después de alcanzar la temperatura objetivo, se usó una aguja de 23G para inyectar 2 ml de ELEVIEW™ o eECM neutralizada a 12 mg/ml en la submucosa. El eECM se mantuvo en hielo durante el procedimiento. Los tejidos se evaluaron y fotografiaron junto con un testigo métrico a intervalos de 15 minutos durante un máximo de 75 minutos. Los tejidos se mantuvieron incubados a 37 °C durante todo el procedimiento. Después de 75 minutos, se diseccionó y evaluó el área inyectada con los agentes de prueba. Se usó ImageJ para cuantificar la elevación de la mucosa después de la inyección del agente durante todo el experimento.

Aislamiento y activación de macrófagos

La médula ósea de ratón se recogió como se describió anteriormente [1, 2]. Brevemente, se sacrificaron ratones C57bl/6 hembras de 6 a 8 semanas de edad (Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME) mediante inhalación de CO2 y dislocación cervical. Asépticamente, se eliminó la piel desde la extremidad posterior proximal hasta el pie, se desarticularon el tarso y la babilla y se aisló la tibia. Se desarticuló la articulación coxafemoral para aislar el fémur. Después de eliminar el exceso de tejido, los huesos se mantuvieron en hielo y se enjuagaron en un plato estéril que contenía medio completo de macrófagos que consistía en DMEM (Gibco, Grand Island, NY), suero bovino fetal (<f>B<s>) al 10 % (Invitrogen, Carlsbad, CA), 10 % de sobrenadante L929 [2], beta-mercaptoetanol 50 uM (Gibco), penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100 ug/ml, aminoácidos no esenciales 10 mM (Gibco) y tampón hepes 10 mM. Se seccionaron los extremos de los huesos y se lavó la cavidad de la médula con medio completo para recolectar médula ósea. Las células se lavaron, se sembraron en placas a 2 x 106 células/ml y se dejaron diferenciar en macrófagos durante 7 días a 37 °C, 5 % de CO2 con cambios completos de medio cada 48 horas como se describió anteriormente [3]. Después de 7 días, los macrófagos vírgenes resultantes se trataron con medio basal que consistía en FBS al 10 %, 100 ug/ml de estreptomicina, 100 U/ml de penicilina en DMEM y una de las siguientes condiciones como se describió anteriormente: (1) 20 ng/ml de IFNy y 100 ng/ml de LPS para promover un fenotipo similar a M1, (2) 20 ng/ml de IL-4 para promover un fenotipo similar a M2, (3) 250 ug/ml de tampón de control de pepsina, (4) 250 ug/ml de ECM esofágica, o (5) el mismo volumen de ELEVIEW™ durante 24 horas a 37 °C, 5 % de CO2 [4].

Inmunomarcaje de macrófagos

Después de 24 horas, los macrófagos se lavaron y fijaron con paraformaldehído al 2 %. Después de los lavados con PBS, las células se incubaron en una disolución de bloqueo que consistía en Triton-X 100 al 0,1 %, Tween 20 al 0,1 %, suero de cabra normal al 4 % y albúmina sérica bovina (BSA) al 2 % durante 1 hora a temperatura ambiente para evitar la unión no específica de anticuerpos. Los siguientes anticuerpos primarios se diluyeron en una disolución de bloqueo: (1) anti-F4/80 monoclonal (Abcam, Cambridge, MA) a una dilución de 1:100 para un marcador panmacrófago, (2) anti-iNOS policlonal (Abcam, Cambridge, MA) a una dilución de 1:100 para un marcador M2, (3) anti-Fizz1 policlonal (Peprotech, Rocky Hill, NJ) a una dilución de 1:100 para un marcador M2, (4) arginasa policlonal para hígado (Abcam, Cambridge, MA) a una dilución de 1:100 para un marcador tipo M2 [5-7]. Las células se incubaron en anticuerpos primarios durante 16 h a 4 °C. Después de los lavados con PBS, las células se incubaron en anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforo (Alexa Fluor de cabra anti-rata 488 o de cabra anti-conejo 488, Invitrogen) durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de los lavados con PBS, los núcleos se contratiñeron con 4'6'-diamidino-2-fenilindol (DAPI) antes de obtener imágenes de tres campos de 200X utilizando un microscopio de células vivas. Los tiempos de exposición a la luz se estandarizaron para un control de isotipo negativo y se mantuvieron constantes en todas las imágenes. Las imágenes se cuantificaron utilizando el software CellProfiler Image Analysis para obtener porcentajes positivos de F4/80, iNOS, Fizz1 y Arginasa1.

Usoin vivode ECM como almohadilla de fluido submucoso para EMR

La anestesia se indujo con acepromazina (0,01 mg/kg, SC) y ketamina (5-11 mg/kg), y la anestesia del plano quirúrgico se mantiene con isofluorano al 1-5 % a través de un tubo endotraqueal. Durante todo el procedimiento y postoperatorio inmediato, a los animales se les administra 2 ml/kg/h de disolución de Ringer lactato I.V. La temperatura se controla mediante almohadillas térmicas de recirculación de agua tibia colocadas debajo del animal. Durante el procedimiento se monitorizan parámetros fisiológicos como el corazón, la frecuencia respiratoria, la temperatura corporal y la capacidad de respuesta. Se administra profilaxis antibiótica con 25 mg/kg de cefazolina antes de iniciar el procedimiento.

El animal se coloca en posición supina y se usa un endoscopio Pentax EG3430K para evaluar el órgano. Después de identificar los puntos de referencia en el órgano, la mucosa y la submucosa en el sitio de la escisión se separaron mediante una inyección de hidrogel de matriz de vejiga urinaria teñida de azul a 8 mg/ml usando una aguja Olympus Injectorforce de 4 mm 23 G a 4 °C. Esta temperatura se mantiene en todo momento para evitar la gelificación y la posible obstrucción de la aguja. Se inyectan aproximadamente 2-5 ml de gel azul por sitio. Se elimina toda la circunferencia de la mucosa (100 %) en una longitud de 5 cm mediante la técnica de EMR de ligadura con banda. Para EMR se usa un kit Cook Duette con una banda de ligadura. Luego se extirpa la mucosa con el uso de un lazo.

Estadísticas

Se usó un ANOVA de 2 vías para comparar el efecto de las variables independientes velocidad de corte y muestra sobre la variable dependiente viscosidad; y también para comparar el efecto de las variables independientes muestra y tipo de módulo sobre la variable dependiente módulo. Se usó una prueba de comparaciones múltiples post-hoc de Sidak y se determinó la significancia usando el intervalo de confianza del 95 % y los valores de p se ajustaron para comparaciones múltiples. Se realizó una prueba t para la fuerza mucoadhesiva comparando ELEVIEW™ y eECM 12 mg/ml.

Ejemplo 2

Propiedades viscoelásticas

ELEVIEW™ fue significativamente menos viscoso que eECM 12 mg/mL a una velocidad de corte de 0,1 1/s (p<0,0001), y tendió a ser menos significativo a 11/s (p=0,054) (FIG. 1A). ELEVIEW™ no formó un hidrogel formado de manera estable porque la media del módulo de pérdida (G") (0,09 ± 0,04 Pa) es mayor que la media del módulo de almacenamiento (G') (0,05 ± 0,01 Pa), mientras que eECM 12 mg/mL tiene un módulo de almacenamiento (G') (56,95±66,72 Pa) que es ~ orden de magnitud mayor que el módulo de pérdida (G") (7,62±6,30 Pa) siguiendo la definición de un hidrogel de ECM formado de forma estable (Freytes et al., Biomaterials, 2008. 29(11): pág. 1630-7) (FIG. 1B). Los gráficos representativos del barrido de tiempo de ELEVIEW™ demuestra además que ELEVIEW™ no forma un hidrogel (FIG. 1C), mientras que el módulo de almacenamiento de eECM de 12 mg/ml aumenta de forma sigmoidea y se estabiliza con el tiempo (FIG. 1D). Por lo tanto, el tiempo de gelificación hasta una gelificación del 50 % podría calcularse para eECM 12 mg/ml (4,5 ± 3,5 min), pero no para ELEVIEW™ (FIG. 1E).

Ejemplo 3

Fuerza mucoadhesiva a la muscularis

ELEVIEW™ (0,16 ± 0,05 N) y eECM (0,21 ± 0,08 N) no mostraron mucoadhesión significativamente diferente a la muscularis (FiG. 2A). eECM tuvo una mayor fuerza mucoadhesiva a la mucosa (0,37 ± 0,02 N) que ELEVIEW™ (0,15 ± 0,06 N) (p=0,0053) (FIG. 2B).

Ejemplo 4

Activación de macrófagos

Los macrófagos expuestos a eECM mostraron activación de FIZZ1, un marcador antiinflamatorio con expresión mínima de iNOS (un marcador proinflamatorio). La expresión de iNOS fue comparable entre ELEVIEW™, eECM y control de transporte (pepsina) (FiG. 3). ELEVIEW™ no mostró ninguna bioactividad.

Ejemplo 5

Rendimiento de la almohadilla de fluido submucoso exvivo

ELEVIEW™ y eECM creó con éxito una almohadilla de fluido con la inyección de 2 ml de agente de prueba en el colon (FIG. 4) o el estómago (FIG. 5). Los dos agentes de prueba eran fácilmente inyectables con una aguja de 23G. ELEVIEW™ pareció difundirse desde el momento de la inyección. Las medidas y el aspecto macroscópico de la altura de la almohadilla confirmaron esta observación (FIGS. 4A, 4B, 5A, 5B) para los dos tejidos analizados. El colon y el estómago tuvieron la mayor pérdida de altura de la almohadilla de 0 a 15 minutos (FIGS. 4A, 5A). La pérdida de altura de la almohadilla fue mayor para ELEVIEW™ que para eECM. La disminución en la altura de la almohadilla continuó para ambos agentes de prueba, sin embargo, quedó claro que la pérdida fue mayor para ELEVIEW™ en el colon. Sin embargo, el estómago tuvo una pérdida similar de altura de la almohadilla para ambos agentes de prueba (FIG. 5A).

La disección después de 75 minutos mostró diferencias entre ELEVIEW™ y eECM en todos los tejidos. Las áreas inyectadas con ELEVIEW™ mostraron un líquido viscoso sin una adhesión clara a la mucosa o la capa muscular subyacente. Las áreas previamente inyectadas con eECM mostraron una masa clara y definida de gel que permaneció y se adhirió a la mucosa y al músculo subyacente. (FIGS. 4C, 5C). Esto se alinea con los resultados anteriores (véase el ejemplo 2) que demostraron que ELEVIEW™ no es capaz de formar un gel (FIG. 1D).

Ejemplo 6

Usoin vivode ECM como almohadilla de fluido submucoso para EMR

El hidrogel de ECM se administra a través de una aguja endoscópica larga sin ninguna resistencia. La elevación de la mucosa se logra y mantiene con éxito para facilitar el procedimiento de EMR y el tinte azul era visible indicando los lugares donde se había creado la disección para su eliminación. El tejido se elimina con el uso del lazo. Tras la observación macroscópica, el tejido mucoso eliminado incluye parte del gel. El tinte azul en el hidrogel parece difundirse a lo largo de la circunferencia del órgano después de eliminar la mucosa y se logra una circunferencia completa con el uso del hidrogel.

En vista de las muchas realizaciones posibles a las que se pueden aplicar los principios de nuestra invención, se debe reconocer que las realizaciones ilustradas son sólo ejemplos de la invención y no deben considerarse una limitación del alcance de la invención. Más bien, el alcance de la invención está definido por las siguientes reivindicaciones. Por lo tanto, reivindicamos como invención nuestra todo lo que entra dentro del alcance de estas reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende un hidrogel de matriz extracelular (ECM), en donde el hidrogel de ECM tiene las siguientes características:

b) una viscosidad de flujo adecuada para infusión en el órgano; y

c) una rigidez de aproximadamente 10 a aproximadamente 400 Pascal (Pa);

para usar en la inhibición de la inflamación causada por la disección de una mucosa y una submucosa de una muscularis propria en la región de un órgano de un sujeto, en donde el órgano no es el esófago, y en donde la composición farmacéutica es para inyectar por vía submucosa en el órgano del sujeto para formar un almohadilla entre la submucosa y la muscularis propria subyacente en la región del órgano.

2. La composición farmacéutica para el uso según la reivindicación 1, en donde:

(1) el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 2 a aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 37 °C;

(2) el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 37 °C; o

(3) el tiempo hasta una gelificación del 50 % es de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 37 °C.

3. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde:

(1) la viscosidad del flujo es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 0,1/s y es de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,2 Pa*s a una velocidad de corte de 1000/s; o

(2) la viscosidad del flujo es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 30 Pa*s a una velocidad de corte de 1/s, y es de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 0,8 Pa*s a una velocidad de corte de aproximadamente 100/s.

4. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde:

(1) el hidrogel de ECM tiene una rigidez de 10-300 Pa;

(2) el hidrogel de ECM es un hidrogel de ECM esofágico; y/o

(3) la concentración de ECM en el hidrogel es de 2 mg/ml a aproximadamente 16 mg/ml.

5. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el hidrogel de ECM se inyecta por vía endoscópica o mediante un catéter.

6. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el hidrogel de ECM se produce mediante

(a) solubilización de la matriz extracelular (ECM) descelularizada mediante digestión de tejido con una proteasa ácida en una disolución ácida para producir ECM esofágica digerida; y

(b) elevación del pH de la ECM digerida a un pH entre 7,2 y 7,8 para producir una disolución de digestión neutralizada.

7. La composición farmacéutica para el uso según la reivindicación 6, en donde:

(1) elevar el pH de la ECM digerida comprende añadir una base o un tampón isotónico para elevar el pH de la ECM digerida; y/o

(2) la proteasa ácida es pepsina, tripsina o una combinación de las mismas.

8. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el hidrogel de ECM se mantiene a 25 °C o menos antes de su administración al sujeto.

9. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el órgano es el colon, el estómago, el ciego, el colon, el colon sigmoide, el recto, el intestino delgado o el intestino grueso.

10. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde el órgano es el estómago, el intestino delgado o el intestino grueso, y en donde la inflamación se produce mediante la disección de un adenocarcinoma o carcinoma del órgano.

11. La composición farmacéutica para el uso según la reivindicación 10, en donde la inflamación se produce además mediante la disección de la mucosa y la submucosa del colon.

12. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde el órgano es el colon y en donde la inflamación se produce mediante la disección de un pólipo o un carcinoma del colon.

13. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde el sujeto es un ser humano.

14. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde:

(1) el órgano está en el tracto gastrointestinal; y/o

(2) el órgano se selecciona entre duodeno, estómago, intestino delgado, colon o recto.

15. La composición farmacéutica para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde la disección comprende resección endoscópica de la mucosa o disección endoscópica de la mucosa.