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ES2966466T3 - Terapia del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP) con un conjugado anticuerpo-fármaco inhibidor de la topoisomerasa-I (ADC) dirigido a trop-2 - Google Patents

Terapia del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP) con un conjugado anticuerpo-fármaco inhibidor de la topoisomerasa-I (ADC) dirigido a trop-2 Download PDF

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ES2966466T3
ES2966466T3 ES18758120T ES18758120T ES2966466T3 ES 2966466 T3 ES2966466 T3 ES 2966466T3 ES 18758120 T ES18758120 T ES 18758120T ES 18758120 T ES18758120 T ES 18758120T ES 2966466 T3 ES2966466 T3 ES 2966466T3
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ES
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caf
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English (en)
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David M Goldenberg
Serengulam V Govindan
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Immunomedics Inc
Original Assignee
Immunomedics Inc
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Abstract

La presente invención se refiere al tratamiento de SCLC con ADC terapéuticos que comprenden un fármaco unido a un anticuerpo anti-Trop-2 o un fragmento de anticuerpo de unión a antígeno. Preferiblemente, el fármaco es SN-38. Más preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo hRS7 y el ADC es sacituzumab govitecan. El ADC se puede administrar en una dosis de entre 4 mg/kg y 16 mg/kg, preferiblemente 4, 6, 8, 9, 10, 12 o 16 mg/kg, lo más preferiblemente de 8 a 10 mg/kg. Cuando se administra en dosis y horarios específicos, el ADC puede reducir el tamaño de los tumores sólidos, reducir o eliminar las metástasis y es eficaz para tratar cánceres resistentes a las terapias estándar, como la radioterapia, la quimioterapia o la inmunoterapia. Sorprendentemente, el ADC es eficaz para tratar cánceres refractarios o que recaen tras el irinotecán o el topotecán. Preferiblemente, el ADC se administra como una terapia combinada con uno o más tratamientos anticancerígenos, tales como carboplatino o cisplatino. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Terapia del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP) con un conjugado anticuerpo-fármaco inhibidor de la topoisomerasa-I (ADC) dirigido a trop-2
Campo de la invención
[0001]La presente invención se relaciona con un conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 que comprende SN-38 conjugado con un anticuerpo anti-Trop-2, para uso en un método de tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP), y a cisplatino o carboplatino para su uso en un método de tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP). El anticuerpo puede unirse a 1-12, 1-6, 1-5, 6-8 o 7-8 copias de un resto farmacológico o un resto enlazador de fármaco por anticuerpo o fragmento. En formas de realización preferidas de la invención como se define en las reivindicaciones, la combinación de CAF y otra modalidad terapéutica exhibe un efecto sinérgico y es más eficaz para inducir la muerte de las células cancerosas que el CAF u otra modalidad terapéutica solos, o la suma de los efectos del CAF y otra modalidad terapéutica administrada individualmente. Sorprendentemente, la administración subcutánea del CAF anti-Trop-2 no da como resultado una toxicidad localizada inaceptable en el sitio de administración y en formas de realización alternativas de la invención como se define en las reivindicaciones, el CAF puede administrarse por vía intravenosa o subcutánea.
Técnica relacionada
[0002]El cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP), que se origina a partir de células progenitoras neuroendocrinas, comprende aproximadamente el 15 % de todos los cánceres de pulmón, pero tiene una de las tasas de supervivencia a 5 años más bajas, un 6 % (Alvarado-Luna et al., 2016, Transl Lung Cancer Res 5:26-38; Siegel et al., 2017, CA Cancer J Clin 67:7-30). Esto se debe a que es muy agresivo, y alrededor de dos tercios de los pacientes tienen enfermedad metastásica en el momento del diagnóstico (Fruh et al., 2013, Ann Oncol 24(6):vi99-105). Mientras que el tratamiento de primera línea del CPCP en estadio IV es paliativo pero tiene una alta tasa de respuesta inicial del 60-75%, el resultado suele ser malo, con una mediana de supervivencia libre de progresión (SSP) de sólo 5,5 meses y una mediana de supervivencia general (SG) de <10 meses (Foster et al., 2011, Cancer 117:1262-71; Wolfson et al., 2011, Int J Radiat Oncol Biol Phys 81:77-84) con quimioterapia basada en platino (Fruh et al, 2013, Ann Oncol 24(6):vi99-105).
[0003]Las respuestas al tratamiento de segunda línea han sido peores, por ejemplo <10%, y con una mediana de supervivencia de sólo 4 o 5 meses después de la quimioterapia de segunda o tercera línea (Hurwitz et al., 2009, Oncologist 14:986-94; Schneider, 2008, J Natl Compr Canc Netw 6:323-31), especialmente cuando hay resistencia al tratamiento de primera línea (es decir, duración de la respuesta <3 meses). El único fármaco aprobado en este contexto, desde 1998, es el topotecán, indicado para pacientes recurrentes que eran sensibles (duración de la respuesta superior a 3 meses) a una terapia basada en platino (O'Brien et al., 2006, J Clin Oncol 24: 5441-7; Perez-Soler et al., 1996, J Clin Oncol 14:2785-90). Sin embargo, también se administran con frecuencia irinotecán, taxanos, vinorelbina y gemcitabina a pacientes con enfermedad recurrente quimiosensible (Furuse et al., 1996, Oncology 53:169-72; Smit et al., 1998, Br J Cancer 77:347-51); Sandler, 2001, Oncology (Williston Park) 15:11-2; van der Lee et al., 2001, Ann Oncol 12:557-61).
[0004]Una revisión de ensayos clínicos aleatorizados recientes de fase II y III que incluyeron topotecán en un grupo de control mostró respuestas del 13 al 17 % en segunda línea (Inoue et al., 2008, J Clin Oncol 26:5401-6; Jotte et al., 2011, J Clin Oncol 29:287-93; Horita et al., 2015, Sci Rep 5:15437), pero con una tasa de respuesta de hasta el 20 % entre los pacientes con enfermedad quimiosensible, y solo el 4 % para aquellos que eran quimiorresistentes (von Pawel, 2003, Lung Cancer 41 (Suplemento 4): S3-8). Sin embargo, estas respuestas y/o la estabilización de la enfermedad en segunda línea no se traducen en una mejor supervivencia. Por ejemplo, Hagmann y colegas (Hagmann et al., 2015, J Cancer 6:1148-5418) informaron una respuesta del 22,5 % con topotecán y una mediana de SSP de 2,4 meses y una mediana de SG de 5 meses. En un entorno de tercera línea, no se lograron respuestas objetivas, mientras que se informó una mediana de SSP de 1,3 meses y una mediana de SG de 2,5 meses (Hagmann et al., 2015, J Cancer 6:1148-5418). Otras quimioterapias establecidas con un solo agente o el retratamiento con combinaciones de platino más etopósido también han sido decepcionantes y han producido resultados de supervivencia similares a los del topotecán solo (Hagmann et al., 2015, J Cancer 6:1148-5418). El irinotecán ha mostrado respuestas muy bajas o nulas y un tiempo medio de progresión (TTP) de 1,7 meses, mientras que también se ha informado una mediana de SG de 4,6 meses (Pallis et al., 2009, Lung Cancer 65:187-91). La gemcitabina no ha dado ninguna respuesta objetiva y dio como resultado una mediana de TTP de 6 semanas y una mediana de SG de 6,4 meses, mientras que pemetrexed logró 2 respuestas entre 43 pacientes (TRO, 4%) (Jalal et al., 2009, J Thorac Oncol 4:93-6). Por tanto, los avances en el tratamiento de los pacientes con CPCP, especialmente aquellos con enfermedad extensa, han sido decepcionantes en los últimos 20 años. Casi todos los pacientes recaen temprano y mueren dentro de un año.
[0005]El documento US 2016/0193357 A1 está relacionado con inmunoconjugados terapéuticos que comprenden SN-38 unido a un anticuerpo anti-Trop-2.
[0006]Starodub A et al. (Journal of Clinical Oncology, vol. 34, n° 15, supl., 20 de mayo de 2016, págs. 8559-8559) informe sobre Trop-2 como objetivo terapéutico para el conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) sacituzumab govitecan (IMMU-132) en pacientes con cáncer de pulmón de células pequeñas metastásico (CPCPm) previamente tratado.
[0007]El documento WO 2016/172427A1 está relacionado con composiciones y métodos de uso de anticuerpos anti-Trop-2 o un fragmento de unión a antígeno de los mismos para aislar, enriquecer, detectar, diagnosticar y/o caracterizar células tumorales circulantes (CTC) de pacientes con cáncer positivo por Trop-2.
[0008]Existe la necesidad de un tratamiento más eficaz para pacientes con CPCP de primera línea o en etapas posteriores. Existe la necesidad particular de mejores terapias para los pacientes que son resistentes a las quimioterapias estándar, como la quimioterapia que contiene platino, topotecán o irinotecán.
RESUMEN
[0009]El problema subyacente a la presente invención es el objeto de las reivindicaciones independientes adjuntas. Se pueden tomar formas de realización preferidas de las reivindicaciones dependientes adjuntas.
[0010]Más específicamente, el problema subyacente a la presente invención se resuelve en un primer aspecto mediante un conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 que comprende SN-38 conjugado con un anticuerpo anti-Trop-2, para uso en un método de tratamiento cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP), en el que el método comprende administrar a un paciente humano con CPCP (i) el conjugado anticuerpo-fármaco anti-Trop-2 (CAF) y (ii) cisplatino o carboplatino, en el que el CAF se administra como segunda línea o terapia posterior a pacientes que han recibido tratamiento oncológico previo para CPCP, en donde el anticuerpo anti-Trop-2 es un anticuerpo RS7 humanizado que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1);<c>D<r>2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6), y en donde hay un conector CL2A entre el SN-38 y el anticuerpo y la estructura del c Af es MAbCL2A-SN-38
[0011]El problema subyacente a la presente invención se resuelve en un segundo aspecto mediante cisplatino o carboplatino para su uso en un método para tratar el cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP), en donde el método comprende administrar a un paciente humano con CPCP (i) un anti-Trop-2 conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) que comprende SN-38 conjugado con un anticuerpo anti-Trop-2 y (ii) cisplatino o carboplatino, en el que el CAF se administra como terapia de segunda línea o posterior a pacientes que han recibido tratamiento previo contra el cáncer para CPCP, en el que el anticuerpo anti-Trop-2 es un anticuerpo RS7 humanizado que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); CDR2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6), y en donde hay un conector CL2A entre el SN-38 y el anticuerpo y la estructura del CAF es MAb-CL2A-SN-38
[0012]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el cáncer es metastásico (CPCPm).
[0013]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el CAF se administra como terapia de segunda línea o posterior a pacientes que han recaído previamente o han sido resistentes al tratamiento con un agente anticancerígeno estándar.
[0014]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el paciente ha recaído previamente o ha sido resistente al tratamiento con topotecán o irinotecán.
[0015]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el CPCP es resistente a la quimioterapia con agentes que contienen platino.
[0016]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el CPCP es sensible a quimioterapia con agentes que contienen platino.
[0017]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el CAF se administra en una dosis de entre 6 mg/kg y 12 mg/kg.
[0018]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, la dosis está entre 8 mg/kg y 10 mg/kg.
[0019]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el tratamiento da como resultado una reducción del tamaño del tumor de al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 30 % o al menos un 40 %.
[0020]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el método comprende además reducir el tamaño o eliminar las metástasis.
[0021]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, hay 7-8 moléculas de SN-38 unidas a cada molécula de anticuerpo.
[0022]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, la dosis de CAF se administra al sujeto humano una o dos veces por semana según un cronograma con un ciclo seleccionado del grupo que consiste en: (i) semanalmente; (ii) cada dos semanas; (iii) una semana de terapia seguida de dos, tres o cuatro semanas de descanso; (iv) dos semanas de terapia seguidas de una, dos, tres o cuatro semanas de descanso; (v) tres semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; (vi) cuatro semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; (vii) cinco semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; y (viii) mensual; preferiblemente el ciclo se repite 4, 6, 8, 10, 12, 16 o 20 veces.
[0023]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el CAF se administra en combinación con una o más modalidades terapéuticas seleccionadas del grupo que consiste en un anticuerpo no conjugado, un inmunoconjugado, terapia génica, quimioterapia, un péptido terapéutico, terapia con citocinas, radioterapia localizada, terapia con ARN de interferencia, un fármaco, una toxina y una citoquina, preferiblemente el fármaco, toxina o agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste en 5-fluorouracilo, afatinib, aplidina, azaribina, anastrozol, antraciclinas, axitinib, AVL-101, AVL-291, bendamustina, bleomicina, bortezomib, bosutinib, briostatina-1, busulfán, caliqueamicina, camptotecina, 10-hidroxicamptotecina, carmustina, celebrex, clorambucilo, inhibidores de la Cox-2, irinotecán (CPT-11), SN-38, cladribina, camptotecanos, ciclofosfamida, crizotinib, citarabina, dacarbazina, dasatinib, dinaciclib, docetaxel, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina (2P-DOX), cianomorfolino doxorrubicina, glucurónido de doxorrubicina, glucurónido de epirrubicina, erlotinib, estramustina, epidofilotoxina, erlotinib, entinostat, agentes fijadores de receptores de estrógeno, etopósido (VP 16), glucurónido de etopósido, fosfato de etopósido, exemestano, fingolimod, flavopiridol, floxuridina (FUdR), 3',5'-O-dioleoil-FudR (FUdR-dO), fludarabina, flutamida, inhibidores de la farnesilproteína transferasa, fostamatinib, ganetespib, GDC-0834, GS-1101, gefitinib, gemcitabina, hidroxiurea, ibrutinib, idarrubicina, idelalisib, ifosfamida, imatinib, L-asparaginasa, lapatinib, lenolidamida, leucovorina, LFM-A13, lomustina, mecloretamina, melfalán, mercaptopurina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, mitramicina, mitomicina, mitotano, navelbina, neratinib, nilotinib, nitrosurea, olaparib, plicomicina, procarbazina, paclitaxel, PCI-32765, pentostatina, PSI-341, raloxifeno, semustina, sorafenib, estreptozocina, SU11248, sunitinib, tamoxifeno, temazolomida (una forma acuosa de DTIC), transplatino, talidomida, tioguanina, tiotepa, tenipósido, topotecán, mostaza de uracilo, vatalanib, vinorelbina, vinblastina, vincristina, alcaloides de la vinca y ZD1839.
[0024]En una forma de realización del primer aspecto y en una forma de realización del segundo aspecto, el CAF se administra al paciente humano que se ha sometido a una cirugía o que está programado para una cirugía.
[0025]La invención, tal como se define en las reivindicaciones, proporciona un tratamiento sustancialmente mejorado con respecto al estándar de atención para CPCP, con mayor eficacia y toxicidades sólo manejables cuando se usa en las dosis preferidas que se analizan en detalle a continuación.
[0026]En diversas formas de realización de la invención como se define en las reivindicaciones, el CAF se usa solo o como una terapia combinada con una o más modalidades terapéuticas diferentes, tales como cirugía, radioterapia, quimioterapia, inmunomoduladores, citocinas, agentes quimioterapéuticos, agentes proapoptóticos, agentes antiangiogénicos, agentes citotóxicos, fármacos, toxinas, radionúclidos, ARNi, ARNip, un segundo anticuerpo o fragmento de anticuerpo, o un inmunoconjugado. En formas de realización adicionales de la invención como se define en las reivindicaciones, el CAF se administra al paciente humano que se ha sometido a una cirugía o que está programado para una cirugía. Preferiblemente, la combinación de CAF y otra modalidad terapéutica o cirugía es más eficaz que cualquiera de ellas sola o la suma de los efectos de tratamientos individuales.
[0027]Como se define en las reivindicaciones, el anticuerpo anti-Trop-2 es un anticuerpo RS7 humanizado (véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. n° 7.238.785), que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); CDR2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6). Sin embargo, como se analiza más adelante, se conocen otros anticuerpos anti-Trop-2. Según la invención, tal como se define en las reivindicaciones, el fármaco conjugado con el anticuerpo es SN-38 (véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. n° 9.028.833).
[0028]El resto de anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal, un fragmento de anticuerpo de unión a antígeno, un anticuerpo biespecífico u otro anticuerpo multivalente, u otra molécula basada en anticuerpo. El anticuerpo puede ser de diversos isotipos, preferiblemente IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 humana, más preferiblemente que comprende secuencias bisagra y región constante de IgG1 humana. El anticuerpo es un anticuerpo quimérico. Más preferiblemente, el anticuerpo puede diseñarse o seleccionarse para que comprenda secuencias de regiones constantes humanas que pertenecen a alotipos específicos, lo que puede dar como resultado una inmunogenicidad reducida cuando se administra el CAF a un sujeto humano. Los alotipos preferidos para la administración incluyen un alotipo distinto de G1m1 (nG1m1), tal como G1m3, G1m3,1, G1m3,2 o G 1m3, 1,2. Más preferiblemente, el alotipo se selecciona del grupo que consiste en los alotipos nG1m1, G1m3, nG1m1,2 y Km3 (Jefferies y Lefranc, 2009, mAbs 1(4): 1-7).
[0029]En una forma de realización de la presente invención como se define en las reivindicaciones, el fármaco que se va a conjugar con el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se puede seleccionar del grupo que consiste en una antraciclina, una camptotecina, un inhibidor de tubulina, un maitansinoide, una caliqueamicina, una auristatina, una mostaza nitrogenada, un derivado de etilenimina, un sulfonato de alquilo, una nitrosourea, un triazeno, un análogo del ácido fólico, un taxano, un inhibidor de la COX-2, un análogo de la pirimidina, un análogo de la purina, un antibiótico, un inhibidor de enzimas, una epipodofilotoxina, un complejo de coordinación de platino, un alcaloide de la vinca, una urea sustituida, un derivado de metilhidrazina, un supresor adrenocortical, un antagonista hormonal, un antimetabolito, un agente alquilante, un antimitótico, un agente antiangiogénico, un inhibidor de la tirosina quinasa, un inhibidor de mTOR, un inhibidor de la proteína de choque térmico (HSP90), un inhibidor de proteosoma, un inhibidor de HDAC, un agente proapoptótico y una combinación de los mismos.
[0030]Los fármacos de uso específicos pueden seleccionarse del grupo formado por 5-fluorouracilo, afatinib, aplidina, azaribina, anastrozol, antraciclinas, axitinib, AVL-101, AVL-291, bendamustina, bleomicina, bortezomib, bosutinib, briostatina-1, busulfano, caliqueamicina, camptotecina, carboplatino, 10-hidroxicamptotecina, carmustina, celecoxib, clorambucilo, cisplatino, inhibidores de la COX-2, irinotecán (CPT-11), SN-38, carboplatino, cladribina, camptotecanos, crizotinib, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dasatinib, dinaciclib, docetaxel, dactinomicina, daunorrubicina, DM1, DM3, DM4, doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina (2-PDox), una forma profármaco de 2-PDox (pro-2-PDox), cianomorfolino doxorrubicina, glucurónido de doxorrubicina, endostatina, glucurónido de epirrubicina, erlotinib, estramustina, epidofilotoxina, erlotinib, entinostat, agentes aglutinantes del receptor de estrógeno, etopósido (VP16), glucurónido de etopósido, fosfato de etopósido, exemestano, fingolimod, floxuridina (FUdR), 3',5'-O-dioleoil-FudR (FUdR-dO), fludarabina, flutamida, inhibidores de farnesil-proteína transferasa, flavopiridol, fostamatinib, ganetespib, GDC-0834, GS-1101, gefitinib, gemcitabina, hidroxiurea, ibrutinib, idarrubicina, idelalisib, ifosfamida, imatinib, lapatinib, lenolidamida, leucovorina, LFM-A13, lomustina, mecloretamina, melfalán, mercaptopurina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, mitramicina, mitomicina, mitotano, monometilauristatina F (MmAF), monometilauristatina D (MMAD), monometilauristatina E (MMAE), navelbina, neratinib, nilotinib, nitrosurea, olaparib, plicomicina, procarbazina, paclitaxel, PCI-32765, pentostatino, PSI-341, raloxifeno, semustina, SN-38, sorafenib, estreptozocina, SU11248, sunitinib, tamoxifen, temazolomida, transplatino, talidomida, tioguanina, tiotepa, teniposida, topotecán, mostaza de uracilo, vatalanib, vinorelbina, vinblastina, vincristina, alcaloides de la vinca y ZD1839. Preferiblemente, el fármaco es SN-38.
[0031]La dosificación óptima preferida de los CAF puede incluir una dosis de entre 4 mg/kg y 18 mg/kg, administrada preferiblemente semanalmente, dos veces por semana o cada dos semanas. El programa de dosificación óptimo puede incluir ciclos de tratamiento de dos semanas consecutivas de terapia seguidas de una, dos, tres o cuatro semanas de descanso, o semanas alternas de terapia y descanso, o una semana de terapia seguida de dos, tres o cuatro semanas de descanso, o tres semanas de terapia seguidas de una, dos, tres o cuatro semanas de descanso, o cuatro semanas de terapia seguidas de una, dos, tres o cuatro semanas de descanso, o cinco semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de reposo, o administración una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas o una vez al mes. El tratamiento puede extenderse durante cualquier número de ciclos, preferiblemente al menos 2, al menos 4, al menos 6, al menos 8, al menos 10, al menos 12, al menos 14 o al menos 16 ciclos. Las dosis de uso ejemplares pueden incluir 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 20 mg/kg, 22 mg/kg y 24 mg/kg. Las dosis preferidas son 4, 6, 8, 9, 10, 12, 14, 16 o 18 mg/kg. Las dosis más preferidas son 6-12, 6-8, 7-8, 8-10, 10-12 u 8 12 mg/kg. La persona con experiencia ordinaria se dará cuenta de que se pueden considerar una variedad de factores, como la edad, la salud general, la función de un órgano específico o el peso, así como los efectos de la terapia previa en sistemas de órganos específicos (p. ej., la médula ósea) al seleccionar una dosis óptima de CAF, y que la dosis y/o frecuencia de administración pueden aumentarse o disminuirse durante el curso de la terapia. La dosis puede repetirse según sea necesario, observándose evidencia de reducción del tumor después de tan solo 4 a 8 dosis. Las dosis y programas de administración optimizados aquí descritos muestran una eficacia superior inesperada y una toxicidad reducida en sujetos humanos, que no podrían haberse predicho a partir de estudios en modelos animales. Sorprendentemente, la eficacia superior permite el tratamiento de tumores que previamente se consideraban resistentes a una o más terapias anticancerígenas estándar. Más sorprendentemente, se ha descubierto que el tratamiento es eficaz en tumores que anteriormente eran resistentes a las camptotecinas, como el irinotecán, el compuesto original de SN-38.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
[0032]
FIG. 1.Terapia preclínicain vivode ratones desnudos atímicos, portadores de carcinoma de páncreas humano Capan 1, con conjugados SN-38 de hRS7 (anti-Trop-2), hPAM4 (anti-MUC5ac), hMN-14 (anti-CEACAM5) o control no específico hA20 (anti-CD20).
FIG. 2.Terapia preclínicain vivode ratones desnudos atímicos, portadores de carcinoma de páncreas humano BxPC3, con conjugados antiTROP2-CL2A-SN-38 en comparación con controles.
FIG. 3A.Estructuras de CL2-SN-38 y CL2A-SN-38.
FIG. 3B.Eficacia comparativa del c Af anti-Trop-2 vinculado a enlazadores CL2 frente a CL2A versus CAF hA20 y control de solución salina, utilizando adenocarcinoma de colon COLO 205. Los animales fueron tratados dos veces por semana durante 4 semanas como lo indican las flechas. Se trataron ratones COLO 205(N = 6)con 0,4 mg/kg de CAF y se midieron los tumores dos veces por semana.
FIG. 3C.Eficacia comparativa del CAF anti-Trop-2 vinculado a enlazadores CL2 frente a CL2A versus CAF hA20 y control salino, utilizando adenocarcinoma de páncreas Capan-1. Los animales fueron tratados dos veces por semana durante 4 semanas como lo indican las flechas. Se trataron ratones Capan-1 (N =10)con 0,2 mg/kg de CAF y se midieron los tumores semanalmente.
FIG. 4A.Eficacia terapéutica del CAF hRS7-SN-38 en varios modelos de enfermedad de xenoinjerto de tumores sólidos. La eficacia del tratamiento con CAF hRS7-CL2-SN-38 y hRS7-CL2A-SN-38 se estudió en ratones portadores de xenoinjertos de tumores de pulmón de células no pequeñas, colorrectales, pancreáticos o de células escamosas humanas. Todos los CAF y los controles se administraron en las cantidades indicadas (expresadas como cantidad de SN-38 por dosis; flechas largas = inyecciones de conjugado, flechas cortas = inyecciones de irinotecán). A los ratones con tumores Calu-3 (N = 5-7) se les inyectó hRS7-CL2-SN-38 cada 4 días para un total de 4 inyecciones (q4dx4).
FIG. 4B.Eficacia terapéutica del CAF hRS7-SN-38 en varios modelos de enfermedad de xenoinjerto de tumores sólidos. La eficacia del tratamiento con CAF hRS7-CL2-SN-38 y hRS7-CL2A-SN-38 se estudió en ratones portadores de xenoinjertos de tumores de pulmón de células no pequeñas, colorrectales, pancreáticos o de células escamosas humanas. Todos los CAF y los controles se administraron en las cantidades indicadas (expresadas como cantidad de SN-38 por dosis; flechas largas = inyecciones de conjugado, flechas cortas = inyecciones de irinotecán). A ratones portadores de tumores COLO 205(N =5) se les inyectó 8 veces (q4dx8) el<c>A<f>o cada 2 días para un total de 5 inyecciones (q2dx5) con el MTD de irinotecán.
FIG. 4C.Eficacia terapéutica del CAF hRS7-SN-38 en varios modelos de enfermedad de xenoinjerto de tumores sólidos. La eficacia del tratamiento con CAF hRS7-CL2-SN-38 y hRS7-CL2A-SN-38 se estudió en ratones portadores de xenoinjertos de tumores de pulmón de células no pequeñas, colorrectales, pancreáticos o de células escamosas humanas. Todos los CAF y los controles se administraron en las cantidades indicadas (expresadas como cantidad de SN-38 por dosis; flechas largas = inyecciones de conjugado, flechas cortas = inyecciones de irinotecán). Capan-1 (N = 10) fueron tratados dos veces por semana durante 4 semanas con los agentes indicados.
FIG. 4D.Eficacia terapéutica del CAF hRS7-SN-38 en varios modelos de enfermedad de xenoinjerto de tumores sólidos. La eficacia del tratamiento con CAF hRS7-CL2-SN-38 y hRS7-CL2A-SN-38 se estudió en ratones portadores de xenoinjertos de tumores de pulmón de células no pequeñas, colorrectales, pancreáticos o de células escamosas humanas. Todos los CAF y los controles se administraron en las cantidades indicadas (expresadas como cantidad de SN-38 por dosis; flechas largas = inyecciones de conjugado, flechas cortas = inyecciones de irinotecán). Se trataron ratones portadores de tumores BxPC-3 (N =10)dos veces por semana durante 4 semanas con los agentes indicados.
FIG. 4E.Eficacia terapéutica del CAF hRS7-SN-38 en varios modelos de enfermedad de xenoinjerto de tumores sólidos. La eficacia del tratamiento con CAF hRS7-CL2-SN-38 y hRS7-CL2A-SN-38 se estudió en ratones portadores de xenoinjertos de tumores de pulmón de células no pequeñas, colorrectales, pancreáticos o de células escamosas humanas. Todos los CAF y los controles se administraron en las cantidades indicadas (expresadas como cantidad de SN-38 por dosis; flechas largas = inyecciones de conjugado, flechas cortas = inyecciones de irinotecán). Además del CAF administrado dos veces por semana durante 4 semanas, los ratones con tumor SK-MES-1 (N = 8) recibieron el MTD de CPT-11 (q2dx5).
FIG. 5A.Tolerabilidad de hRS7-CL2A-SN-38 en ratones Swiss-Webster. A cincuenta y seis ratones Swiss-Webster se les administraron 2 dosis i.p. de tampón o hRS7-CL2A-SN-38 con 3 días de diferencia (4, 8 o 12 mg/kg de SN-38 por dosis; 250, 500 o 750 mg proteína conjugada/kg por dosis). Siete y 15 días después de la última inyección, se sacrificaron 7 ratones de cada grupo y se realizaron recuentos sanguíneos y química sérica. Los gráficos muestran el porcentaje de animales en cada grupo que tenían niveles elevados de AST.FIG. 5B.Tolerabilidad de hRS7-CL2A-SN-38 en ratones Swiss-Webster. A cincuenta y seis ratones SwissWebster se les administraron 2 dosis i.p. de tampón o hRS7-CL2A-SN-38 con 3 días de diferencia (4, 8 o 12 mg/kg de SN-38 por dosis; 250, 500 o 750 mg proteína conjugada/kg por dosis). Siete y 15 días después de la última inyección, se sacrificaron 7 ratones de cada grupo y se realizaron recuentos sanguíneos y química sérica. Los gráficos muestran el porcentaje de animales en cada grupo que tenían niveles elevados de ALT.FIG. 5C.Tolerabilidad de hRS7-CL2A-SN-38 en monos Cynomolgus. A seis monos por grupo se les inyectó dos veces con 3 días de diferencia tampón (control) o hRS7-CL2A-SN-38 a 0,96 mg/kg o 1,92 mg/kg de equivalentes de SN-38 por dosis (60 y 120 mg/kg de proteína conjugada). Todos los animales se sangraron los días -1, 3 y 6. Se sangraron cuatro monos el día 11 en el grupo de 0,96 mg/kg, 3 en el grupo de 1,92 mg/kg. Cambios en el recuento de neutrófilos en monos Cynomolgus.
FIG. 5D.Tolerabilidad de hRS7-CL2A-SN-38 en monos Cynomolgus. A seis monos por grupo se les inyectó dos veces con 3 días de diferencia tampón (control) o hRS7-CL2A-SN-38 a 0,96 mg/kg o 1,92 mg/kg de equivalentes de SN-38 por dosis (60 y 120 mg/kg de proteína conjugada). Todos los animales se sangraron los días -1, 3 y 6. Se sangraron cuatro monos el día 11 en el grupo de 0,96 mg/kg, 3 en el grupo de 1,92 mg/kg. Cambios en el recuento de plaquetas en monos Cynomolgus.
FIG. 6.Eficaciain vitrodel CAF anti-Trop-2-paclitaxel contra el adenocarcinoma de mama humano MDA-MB-468.
FIG. 7.Eficaciain vitrodel CAF anti-Trop-2-paclitaxel contra el adenocarcinoma de páncreas humano BxPC-3.
FIG. 8A.Comparación de la eficaciain vitrode los CAF anti-Trop-2 (hRS7-SN-38 versus MAB650-SN-38) en el adenocarcinoma de páncreas humano Capan-1.
FIG. 8B.Comparación de la eficaciain vitrode los CAF anti-Trop-2 (hRS7-SN-38 versus MAB650-SN-38) en el adenocarcinoma de páncreas humano BxPC-3.
FIG. 8C.Comparación de la eficaciain vitrode los CAF anti-Trop-2 (hRS7-SN-38 versus MAB650-SN-38) en el adenocarcinoma gástrico humano NCI-N87.
FIG. 9A.Comparación de la citotoxicidad de los anticuerpos hRS7 desnudos o conjugados con SN-38 frente a 162-46.2 en el adenocarcinoma de páncreas humano BxPC-3.
FIG. 9B.Comparación de la citotoxicidad de los anticuerpos hRS7 desnudos o conjugados con SN-38 versus 162-46.2 en el adenocarcinoma de mama humano MDA-M<b>-468.
FIG. 10.Datos de IMMU-132 fase I/II para la mejor respuesta según los criterios RECIST.
FIG. 11.Datos de fase I/II de IMMU-132 para el tiempo hasta la progresión y la mejor respuesta (RECIST).FIG. 12.Terapia combinada con IMMU-132 y carboplatino o cisplatino, en comparación con IMMU-132, carboplatino o cisplatino solos, un CAF no dirigido o un control de solución salina.
FIG. 13.Terapia combinada con IMMU-132 más carboplatino, en comparación con IMMU-132 o caboplatino solos o control con solución salina.
FIG. 14.Terapia combinada con IMMU-132 más cisplatino, en comparación con IMMU-132 o cisplatino solo o control con solución salina.
FIG. 15.Caquexia en ratones tratados con terapia combinada con IMMU-132 y carboplatino o cisplatino, en comparación con IMMU-132, carboplatino o cisplatino solos o control con solución salina.
FIG 16.Representación gráfica de la respuesta antitumoral y su duración en pacientes evaluables por respuesta.
(A)Mejor cambio porcentual en la suma de los diámetros de la lesión diana seleccionada y mejor descriptor de respuesta general según los criterios RECIST 1.1. Los pacientes se identifican con respecto a la dosis inicial de sacituzumab govitecan y si eran sensibles o resistentes a la terapia de primera línea previa. El paciente con respuestas parciales no confirmadas no logró mantener >30 % en su siguiente evaluación por TC 4 a 6 semanas después de la primera respuesta objetiva observada. La mejor respuesta general para estos pacientes según RECIST 1.0 es una enfermedad estable.(B)Duración de la respuesta desde el inicio del tratamiento para aquellos pacientes que alcanzaron una enfermedad estable o mejor. Se muestra el momento en que la reducción del tumor alcanzó >30 %, junto con la dosis inicial de sacituzumab govitecan y la sensibilidad al tratamiento de primera línea.(C)Dinámica de respuesta para pacientes que lograron una enfermedad estable o mejor. Con una línea discontinua se muestran dos pacientes con respuestas parciales confirmadas que continúan el tratamiento.
FIG. 17. (A)Curvas de supervivencia libre de progresión y(B)generales derivadas de Kaplan-Meier para los 53 pacientes con CPCP inscritos en el ensayo de sacituzumab govitecan.
FIG. 18.Este hombre de 64 años con diagnóstico de CPCP avanzado recibió carboplatino como tratamiento de primera línea desde julio de 2013 hasta noviembre de 2013, y se añadió etopósido en noviembre y diciembre de 2013. La enfermedad recayó en mayo de 2014. Antes de comenzar con sacituzumab govitecan, el tumor Las lesiones al inicio del estudio (mayo de 2014) incluyeron tumores de ganglio linfático subcarinal (20 mm) y de la glándula suprarrenal derecha(A)(masa suprarrenal de 43 x 34 mm de diámetro), así como múltiples lesiones no mensurables en los lóbulos derecho e izquierdo del hígado, engrosamiento. del hilio derecho, un nódulo pulmonar en el lóbulo superior izquierdo y engrosamiento esofágico. La evaluación de la respuesta después de 2 meses de terapia mostró una reducción del 50 % según RECIST 1.1(B)(la masa suprarrenal se reduce a 14 mm, el ganglio linfático subcarinal se reduce a 17 mm). En la segunda evaluación de respuesta, la masa suprarrenal ya no era visible, mientras que el ganglio subcarinal experimentó su contracción máxima ~11 meses desde el inicio del tratamiento (a 11 mm), lo que produjo una contracción máxima del 82%. El paciente experimentó una duración de respuesta de 21 meses (julio de 2014 a marzo de 2016).(C)Inmunohistología de una biopsia de la masa suprarrenal teñida para Trop-2 y puntuada como 2+, pero con escasa distribución entre las células tumorales.
FIG. 19.La figura muestra los efectos de la terapia IMMU-132 en un hombre de 57 años, fumador de 1 paquete/día desde los 13 años, a quien se le diagnosticó carcinoma neuroendocrino de células pequeñas metastásico en 2012 y que recibió carboplatino y etopósido como terapia de primera línea desde octubre de 2012 a enero de 2013, y en caso de recurrencia, recibió topotecán de septiembre de 2013 a noviembre de 2013 sin respuesta. Debido a la progresión de la enfermedad, el paciente pasó a una combinación de carboplatino y etopósido desde noviembre de 2013 hasta abril de 2014 y luego pasó a paclitaxel desde mayo de 2014 a junio de 2014. En septiembre de 2014, comenzó a tomar sacituzumab govitecan logrando una respuesta duradera. Se muestran imágenes de TC de 4 de las 5 lesiones diana desde el inicio y después de 2 meses de tratamiento, cuando la suma se redujo de 230 mm a 138 mm (40 % de contracción). (A) Corte axial de la masa suprarrenal derecha que mide 79 x 65 mm al inicio; (B) que muestra una reducción a 48 x 26 mm en la primera evaluación. (C) masa suprarrenal izquierda que mide 52 x 38 mm al inicio; (D) 36 x 17 mm en la primera evaluación; (E) masa axilar izquierda al inicio del estudio mostrada en el plano coronal (60 x 55 mm) y después de 2 meses de tratamiento (F), se reduce a 30 x 24 mm; (G) masa pulmonar del lóbulo superior derecho que se muestra en el plano coronal (21 x 12 mm) y se reduce a 16 x 12 mm (H). (I) Inmunohistología de una biopsia de pulmón teñida para Trop-2 con un rango de tinción de células tumorales de negativo a 3+, pero con una puntuación general de 2+.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
Definiciones
[0033] A menos que se especifique lo contrario, “un” o “una” significa uno o más.
[0034] Tal como se utiliza en el presente documento, “aproximadamente” significa más o menos 10%. Por ejemplo, “alrededor de 100” incluiría cualquier número entre 90 y 110.
[0035] Un anticuerpo, como se describe en el presente documento, se refiere a una molécula de inmunoglobulina de longitud completa (es decir, de origen natural o formada mediante procesos recombinatorios de fragmentos de genes de inmunoglobulina normales) (p. ej., un anticuerpo IgG) o una parte inmunológicamente activa (es decir, que se une específicamente) de una molécula de inmunoglobulina, como un fragmento de anticuerpo.
[0036] Un fragmento de anticuerpo es una parte de un anticuerpo tal como F(ab')<2>, Fab', Fab, Fv, sFv y similares. Los fragmentos de anticuerpos también pueden incluir anticuerpos de dominio único y medias moléculas de IgG4, como se analiza más adelante. Independientemente de la estructura, un fragmento de anticuerpo se une al mismo antígeno que reconoce el anticuerpo de longitud completa. El término “fragmento de anticuerpo” también incluye fragmentos aislados que consisten en regiones variables de anticuerpos, tales como los fragmentos “Fv” que consisten en regiones variables de las cadenas pesada y ligera y moléculas polipeptídicas de cadena sencilla recombinantes en las que se encuentran regiones variables ligeras y pesadas conectadas por un conector peptídico (“proteínas scFv”).
[0037] Un anticuerpo quimérico es una proteína recombinante que contiene los dominios variables que incluyen las regiones determinantes de la complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) de un anticuerpo derivado de una especie, preferiblemente un anticuerpo de roedor, mientras que los dominios constantes de la molécula de anticuerpo se derivan de los de un anticuerpo humano. Para aplicaciones veterinarias, los dominios constantes del anticuerpo quimérico pueden derivarse de los de otras especies, como un gato o un perro.
[0038] Un anticuerpo humanizado es una proteína recombinante en la que las CDR de un anticuerpo de una especie; por ejemplo, un anticuerpo de roedor, se transfieren desde las cadenas variables pesada y ligera del anticuerpo de roedor a dominios variables pesados y ligeros humanos (p. ej., secuencias de regiones estructurales). Los dominios constantes de la molécula de anticuerpo se derivan de los de un anticuerpo humano. En determinadas formas de realización, se puede sustituir un número limitado de residuos de aminoácidos de la región estructural del anticuerpo original (de roedor) en las secuencias de la región estructural del anticuerpo humano.
[0039] Un anticuerpo humano es, por ejemplo, un anticuerpo obtenido de ratones transgénicos que han sido “diseñados” para producir anticuerpos humanos específicos en respuesta a una exposición antigénica. En esta técnica, se introducen elementos de los loci de las cadenas pesadas y ligeras humanas en cepas de ratones derivadas de líneas de células madre embrionarias que contienen alteraciones específicas de los loci de las cadenas pesadas y ligeras endógenas murinas. Los ratones transgénicos pueden sintetizar anticuerpos humanos específicos para antígenos particulares, y los ratones pueden usarse para producir hibridomas secretores de anticuerpos humanos. Green et al., Nature Genet, describen métodos para obtener anticuerpos humanos a partir de ratones transgénicos. 7:13 (1994), Lonberg et al., Nature 368:856 (1994), y Taylor et al., Int. Inmune. 6:579 (1994). También se puede construir un anticuerpo completamente humano mediante métodos de transfección genética o cromosómica, así como tecnología de presentación en fagos, todos los cuales son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990) para la producción de anticuerpos humanos y fragmentos de los mismosin vitro,a partir de repertorios de genes de dominio variable de inmunoglobulina de donantes no inmunizados. En esta técnica, los genes del dominio variable del anticuerpo se clonan en marco en un gen de la proteína de cubierta mayor o menor de un bacteriófago filamentoso y se muestran como fragmentos de anticuerpo funcionales en la superficie de la partícula del fago. Debido a que la partícula filamentosa contiene una copia de ADN monocatenario del genoma del fago, las selecciones basadas en las propiedades funcionales del anticuerpo también dan como resultado la selección del gen que codifica el anticuerpo que exhibe esas propiedades.
De esta forma, el fago imita algunas de las propiedades de la célula B. La presentación en fagos se puede realizar en una variedad de formatos; para su revisión, véase, por ejemplo, Johnson y Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571 (1993). Los anticuerpos humanos también pueden generarse mediante células B activadasin vitro.Véase la patente de EE. UU. Nos 5.567.610 y 5.229.275.
[0040]Un agente terapéutico es un compuesto, molécula o átomo que se administra por separado, concurrente o secuencialmente con un resto de anticuerpo o conjugado con un resto de anticuerpo, es decir, anticuerpo o fragmento de anticuerpo, o un subfragmento, y es útil en el tratamiento de una enfermedad. Ejemplos de agentes terapéuticos incluyen anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, fármacos, toxinas, nucleasas, hormonas, inmunomoduladores, agentes proapoptóticos, agentes antiangiogénicos, compuestos de boro, agentes fotoactivos o colorantes y radioisótopos. Los agentes terapéuticos de uso se describen con más detalle a continuación.
[0041]Un inmunoconjugado es un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o proteína de fusión conjugado con al menos un agente terapéutico y/o de diagnóstico.
[0042]Un anticuerpo multiespecífico es un anticuerpo que puede unirse simultáneamente a al menos dos dianas que tienen una estructura diferente, por ejemplo, dos antígenos diferentes, dos epítopos diferentes en el mismo antígeno o un hapteno y/o un antígeno o epítopo. Los anticuerpos multiespecíficos y multivalentes son construcciones que tienen más de un sitio de unión y los sitios de unión son de diferente especificidad.
[0043]Un anticuerpo biespecífico es un anticuerpo que puede unirse simultáneamente a dos objetivos diferentes. Los anticuerpos biespecíficos (bsAb) y los fragmentos de anticuerpos biespecíficos (bsFab) pueden tener al menos un brazo que se une específicamente a, por ejemplo, un antígeno asociado a tumor y al menos otro brazo que se une específicamente a un conjugado direccionable que porta una finalidad terapéutica o agente diagnóstico. Se puede producir una variedad de proteínas de fusión biespecíficas mediante ingeniería molecular.
Anticuerpos anti-T rop-2
[0044]Según la invención, tal como se define en las reivindicaciones, el anticuerpo anti-Trop-2 es un anticuerpo RS7 humanizado (véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. n° 7.238.785), que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); CDR2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6).
[0045]El anticuerpo RS7 era una IgG1 murina producida contra una preparación de membrana cruda de un carcinoma de pulmón de células escamosas primario humano. (Stein et al., Cancer Res. 50: 1330, 1990) El anticuerpo RS7 reconoce una glicoproteína de 46-48 kDa, caracterizada como grupo 13. (Stein et al., Int. J. Cancer Supp. 8:98-102, 1994) El antígeno fue designado como EGP-1 (glucoproteína epitelial-1), pero también se lo conoce como Trop-2.
[0046]Trop-2 es una proteína transmembrana de tipo I y ha sido clonada a partir de células humanas (Fornaro et al., Int J Cancer 1995; 62:610-8) y de ratón (Sewedy et al., Int J Cancer 1998; 75: 324-30). Además de su papel como transductor de señales de calcio asociado a tumores (Ripani et al., Int J Cancer 1998;76:671-6), se demostró que la expresión de Trop-2 humano es necesaria para la tumorigénesis y la invasividad de las células de cáncer de colon que podría reducirse eficazmente con un anticuerpo policlonal contra el dominio extracelular de Trop-2 (Wang et al., Mol Cancer Ther 2008;7:280-5).
[0047]El creciente interés en Trop-2 como diana terapéutica para cánceres sólidos (Cubas et al., Biochim Biophys Acta 2009;1796:309-14) está atestiguado por informes adicionales que documentaron la importancia clínica de Trop-2 sobreexpresado en mama (Huang et al., Clin Cancer Res 2005;11:4357-64), colorrectal (Ohmachi et al., Clin Cancer Res 2006;12:3057-63; Fang et al., Int J Colorectal Dis 2009;24:875-84) y carcinomas de células escamosas orales (Fong et al., Modern Pathol 2008;21:186-91). Es particularmente notable la evidencia más reciente de que las células basales de la próstata que expresan altos niveles de Trop-2 están enriquecidas para una actividad similar a un talloin vitroein vivo(Goldstein et al., Proc Natl Acad Sci EE. UU. 2008;105:20882-7).
[0048]Los estudios de citometría de flujo y tinción inmunohistoquímica han demostrado que el MAb RS7 detecta antígenos en una variedad de tipos de tumores, con unión limitada al tejido humano normal (Stein et al., 1990). Trop-2 se expresa principalmente en carcinomas como los de pulmón, estómago, vejiga urinaria, mama, ovario, útero y próstata. Los estudios de localización y terapia utilizando MAb RS7 murino radiomarcado en modelos animales han demostrado eficacia terapéutica y focalización de tumores (Stein et al., 1990; Stein et al., 1991).
[0049]Se ha demostrado una fuerte tinción de RS7 en tumores de pulmón, mama, vejiga, ovario, útero, estómago y próstata. (Stein et al., Int. J. Cancer 55:938, 1993) Los casos de cáncer de pulmón comprendían tanto carcinomas de células escamosas como adenocarcinomas. (Stein et al., Int. J. Cancer 55:938, 1993) Ambos tipos de células se tiñeron fuertemente, lo que indica que el anticuerpo RS7 no distingue entre clases histológicas de carcinoma de pulmón de células no pequeñas.
[0050]El MAb RS7 se internaliza rápidamente en las células diana (Stein et al., 1993). La constante de tasa de intemalización para RS7 MAb es intermedia entre las constantes de tasa de intemalización de otros dos MAb de intemalización rápida, que han demostrado ser útiles para la producción de inmunotoxinas.(Id).Está bien documentado que la internalización de conjugados de inmunotoxina es un requisito para la actividad antitumoral. (Pastan et al., Cell 47:641, 1986) La internalización de inmunoconjugados de fármacos se ha descrito como un factor importante en la eficacia antitumoral. (Yang et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. EE. UU. 85: 1189, 1988). Por tanto, el anticuerpo RS7 exhibe varias propiedades importantes para aplicaciones terapéuticas.
[0051]Si bien el anticuerpo hRS7 es el anticuerpo para uso según la presente invención como se define en las reivindicaciones, se conocen y/o están públicamente disponibles otros anticuerpos anti-Trop-2. Si bien se prefieren los anticuerpos humanizados o humanos por su inmunogenicidad reducida, en formas de realización alternativas puede ser útil un anticuerpo quimérico. Como se analiza más adelante, los métodos de humanización de anticuerpos son bien conocidos en la técnica y pueden utilizarse para convertir un anticuerpo murino o quimérico disponible en una forma humanizada.
[0052]Los anticuerpos anti-Trop-2 están disponibles comercialmente de varias fuentes e incluyen LS-C126418, LSC178765, LS-C126416, LS-C126417 (LifeSpan BioSciences, Inc., Seattle, WA); 10428-MM01, 10428-MM02, 10428-R001, 10428-R030 (Sino Biological Inc., Beijing, China); MR54 (eBioscience, San Diego, CA); s.c.-376181, s.c.-376746, Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, c A); MM0588-49D6, (Novus Biologicals, Littleton, CO); ab79976 y ab89928 (ABCAM®, Cambridge, MA).
[0053]En la literatura de patentes se han descrito otros anticuerpos anti-Trop-2. Por ejemplo, la publicación de EE. UU. n° 2013/0089872 divulga anticuerpos anti-Trop-2 K5-70 (n° de registro FERM BP-11251), K5-107 (n° de registro FERM BP-11252), K5-116-2-1 (n° de registro FERM BP-11253), T6-16 (n° de registro FERM BP-11346) y T5-86 (n° de registro FERM BP-11254), depositados en el Organismo Depositario Internacional de Patentes, Tsukuba, Japón. La patente de EE. UU. n° 5.840.854 desvela el anticuerpo monoclonal anti-Trop-2 BR110 (ATCC n° HB11698). La patente de EE. UU. n° 7.420.040 desvela un anticuerpo anti-Trop-2 producido por la línea celular de hibridoma AR47A6.4.2, depositado en el IDAC (Autoridad Internacional de Depósito de Canadá, Winnipeg, Canadá) con el número de acceso 141205-05. La patente de EE. UU. n° 7.420.041 desvela un anticuerpo anti-Trop-2 producido por la línea celular de hibridoma AR52A301.5, depositada en el IDAC con el número de acceso 141205-03. Publicación de EE. UU. N° 2013/0122020 divulga anticuerpos anti-Trop-23E9, 6G11, 7E6, 15E2, 18B1. Los hibridomas que codifican un anticuerpo representativo se depositaron en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC), números de acceso PTA-12871 y PTA-12872. La patente de EE. UU. n° 8.715.662 describe anticuerpos anti-Trop-2 producidos por hibridomas depositados en AID-ICLC (Génova, Italia) con números de depósito EP 08019, EP 08020 y EP 08021. Publ. de Solicitud de Patente de EE. UU. n° 20120237518 describe los anticuerpos anti-Trop-2 77220, KM4097 y KM4590. La patente de EE. UU. n° 8.309.094 (Wyeth) describe los anticuerpos A1 y A3, identificados mediante listado de secuencias. La publicación no de patente Lipinski et al. (1981, Proc Natl. Acad Sci EE. UU., 78:5147-50) describieron los anticuerpos anti-Trop-2 162-25.3 y 162 46.2.
[0054]Se conocen en la técnica y/o están disponibles públicamente numerosos anticuerpos anti-Trop-2. Como se analiza más adelante, los métodos para preparar anticuerpos contra antígenos conocidos eran rutinarios en la técnica. La secuencia de la proteína Trop-2 humana también se conocía en la técnica (véase, por ejemplo, el número de acceso de GenBank CAA54801.1). También se conocían métodos para producir anticuerpos humanizados, humanos o quiméricos. Una persona con experiencia ordinaria, leyendo la presente divulgación a la luz del conocimiento general en la técnica, habría podido producir y utilizar el género de anticuerpos anti-Trop-2 en los CAF.
[0055]Se ha descrito el uso de anticuerpos anti-Trop-2 para inmunoterapéuticos distintos de los CAF. El anticuerpo murino IgG2a edrecolomab (PANOREX®) se ha utilizado para el tratamiento del cáncer colorrectal, aunque el anticuerpo murino no es muy adecuado para uso clínico en humanos (Baeuerle & Gires, 2007, Br. J Cancer 96:417-423). Se informó que la administración subcutánea de dosis bajas de ecrecolomab induce respuestas inmunes humorales contra el antígeno de la vacuna (Baeuerle & Gires, 2007). Adecatumumab (MT201), un anticuerpo anti-Trop-2 completamente humano, se ha utilizado en el cáncer de mama metastásico y en el cáncer de próstata en etapa temprana y se informa que actúa a través de la actividad ADCC y CDC (Baeuerle & Gires, 2007). MT110, una construcción de anticuerpo biespecífico monocatenario anti-Trop-2/anti-CD3, ha demostrado eficacia contra el cáncer de ovario (Baeuerle & Gires, 2007). Se informó que el catumaxomab, un anticuerpo híbrido de ratón/rata con afinidad de unión por los receptores Trop-2, CD3 y Fc, es activo contra el cáncer de ovario (Baeuerle y Gires, 2007). El proxinio, una inmunotoxina que comprende un anticuerpo monocatenario anti-Trop-2 fusionado con la exotoxina de Pseudomonas, se ha probado en el cáncer de cabeza y cuello y de vejiga (Baeuerle & Gires, 2007). Ninguno de estos estudios contenía ninguna divulgación sobre el uso de conjugados de fármaco y anticuerpo anti-Trop-2.
Conjugados de camptotecina
[0056]A continuación se describen métodos y composiciones no limitantes para preparar inmunoconjugados que comprenden un agente terapéutico de camptotecina unido a un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de unión a antígeno. La solubilidad del fármaco se mejora colocando un resto definido de polietilenglicol (PEG) (es decir, un PEG que contiene un número definido de unidades monoméricas) entre el fármaco y el anticuerpo, en el que el PEG definido es un PEG de bajo peso molecular, que contiene preferiblemente 1-30 unidades monoméricas, que contiene más preferiblemente de 1 a 12 unidades monoméricas, lo más preferiblemente que contiene de 6 a 8 unidades monoméricas.
[0057]Un primer conector puede conectar el fármaco en un extremo y puede terminar con un grupo acetileno o azida en el otro extremo. Este primer conector puede comprender un resto PEG definido con un grupo azida o acetileno en un extremo y un grupo reactivo diferente, tal como ácido carboxílico o grupo hidroxilo, en el otro extremo. Dicho PEG definido bifuncional puede estar unido al grupo amino de un aminoalcohol, y el grupo hidroxilo de este último puede estar unido al grupo hidroxilo del fármaco en forma de carbonato. Alternativamente, el resto no azida (o acetileno) de dicho PEG bifuncional definido está opcionalmente unido al extremo N de un L-aminoácido o un polipéptido, con el extremo C unido al grupo amino de aminoalcohol, y el grupo hidroxi de este último está unido al grupo hidroxilo del fármaco en forma de carbonato o carbamato, respectivamente.
[0058]Un segundo conector, que comprende un grupo de acoplamiento de anticuerpo y un grupo reactivo complementario al grupo azida (o acetileno) del primer conector, concretamente acetileno (o azida), puede reaccionar con el conjugado fármaco-(primer conector) mediante reacción de cicloadición acetileno-azida para proporcionar un producto farmacológico bifuncional final que es útil para conjugar con anticuerpos dirigidos a enfermedades. El grupo de acoplamiento del anticuerpo es preferiblemente un tiol o un grupo reactivo con tiol.
[0059]A continuación se proporcionan métodos para la regeneración selectiva del grupo 10-hidroxilo en presencia del carbonato C-20 en preparaciones de precursores de fármaco-enlazador que implican análogos de CPT tales como SN-38. También se pueden usar otros grupos protectores para grupos hidroxilo reactivos en fármacos tales como el hidroxilo fenólico en SN-38, por ejemplo t-butildimetilsililo o t-butildifenilsililo, y estos se desprotegen mediante fluoruro de tetrabutilamonio antes de unir el fármaco derivatizado a un resto de acoplamiento de anticuerpos. El grupo 10-hidroxilo de los análogos de CPT se protege alternativamente como un éster o carbonato, distinto de 'BOC', de modo que la CPT bifuncional se conjuga con un anticuerpo sin desprotección previa de este grupo protector. El grupo protector se desprotege fácilmente en condiciones de pH fisiológico después de administrar el bioconjugado.
[0060]En el acoplamiento acetileno-azida, denominado “química de clic”, la parte de azida puede estar en L2 con la parte de acetileno en L3. Alternativamente, L2 puede contener acetileno, mientras que L3 contiene azida. La 'química de clic' se refiere a una reacción de cicloadición catalizada por cobre (+1) entre un resto de acetileno y un resto de azida (Kolb HC y Sharpless KB, Drug Discov Today 2003; 8: 1128-37), aunque se conocen formas alternativas de química de clic y pueden ser utilizadas. La química click tiene lugar en una solución acuosa en condiciones de pH casi neutrales y, por lo tanto, es adecuada para la conjugación de fármacos. La ventaja de la química click es que es quimioselectiva y complementa otras químicas de conjugación bien conocidas, como la reacción tiol-maleimida.
[0061]A continuación se muestra un ejemplo de un conjugado de un derivado de fármaco y un anticuerpo de fórmula general (1).
MAb-[L2]-[L1]-[AA]m-[A']-Fármaco (1)
donde MAb es un anticuerpo dirigido a una enfermedad; L2 es un componente del reticulante que comprende un resto de acoplamiento de anticuerpo y uno o más grupos acetileno (o azida); L1 comprende un PEG definido con azida (o acetileno) en un extremo, complementario al resto acetileno (o azida) en L2, y un grupo reactivo tal como ácido carboxílico o grupo hidroxilo en el otro extremo;AAes un L-aminoácido; m es un número entero con valores de 0, 1, 2, 3 o 4; y A' es un espaciador adicional, seleccionado del grupo de etanolamina, alcohol 4-hidroxibencílico, alcohol 4-aminobencílico o etilendiamina sustituida o no sustituida. Los aminoácidos L de 'AA' se seleccionan entre alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina. y valina. Si el grupo A' contiene hidroxilo, está unido al grupo hidroxilo o al grupo amino del fármaco en forma de carbonato o carbamato, respectivamente.
[0062]En un ejemplo de fórmula 1, A' es una etanolamina sustituida derivada de un L-aminoácido, en la que el grupo ácido carboxílico del aminoácido se reemplaza por un resto hidroximetilo. A' puede derivarse de cualquiera de los siguientes laminoácidos: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina.
[0063]En un ejemplo del conjugado de la forma de realización preferida de fórmula 1, m es 0, A' es L-valinol y el fármaco se ejemplifica mediante SN-38. En otro ejemplo de fórmula 1, m es 1 y está representado por una L-lisina derivatizada, A' es L-valinol y el fármaco está ejemplificado por SN-38. En esta forma de realización, primero se forma un enlace amida entre el ácido carboxílico de un aminoácido tal como lisina y el grupo amino de valinol, usando grupos protectores ortogonales para los grupos amino de lisina. El grupo protector en el extremo N de la lisina se elimina, manteniendo intacto el grupo protector en la cadena lateral de la lisina, y el extremo N se acopla al grupo carboxilo en el PEG definido con azida (o acetileno) en el otro extremo. A continuación, el grupo hidroxilo del valinol se une al derivado 20-cloroformiato del SN-38 protegido con 10-hidroxi, y este intermedio se acopla a un componente L2 que porta el resto de unión al anticuerpo, así como el grupo acetileno (o azida) complementario involucrado en la química de la cicloadición click. Finalmente, la eliminación de los grupos protectores tanto en la cadena lateral de lisina como en SN-38 da el producto de este ejemplo.
[0064]Si bien no deseamos estar ligados a ninguna teoría, el producto SN-38 de PM pequeño, a saber, carbonato de valinol-SN-38, generado después de la proteólisis intracelular, tiene la vía adicional de liberación de SN-38 intacto a través de la ciclación intramolecular que involucra al grupo amino de valinol y el carbonilo del carbonato.
[0065]En otro ejemplo, A' de fórmula general 1 es A-OH, donde A-OH es un resto colapsable tal como alcohol 4-aminobencílico o un alcohol 4-aminobencílico sustituido con un grupo alquilo C<1>-C<10>en la posición bencílico, y este último, a través de su grupo amino, está unido a un L-aminoácido o un polipéptido que comprende hasta cuatro restos de L-aminoácido; en el que el extremo N está unido a un reticulante que termina en el grupo de unión al anticuerpo.
[0066]En otro ejemplo, el A-OH de A' de fórmula general 1 se deriva de un alcohol 4-aminobencílico sustituido, y 'AA' está compuesto por un único L-aminoácido con m = 1 en la fórmula general 1, y el fármaco se ejemplifica con SN-38. Un solo aminoácido de AA se puede seleccionar de cualquiera de los siguientes L-aminoácidos: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina. El sustituyente R en el resto de alcohol 4-aminobencílico (forma de realización A-OH de A') es hidrógeno o un grupo alquilo seleccionado entre grupos alquilo C<1>-C<10>. Un ejemplo de esta fórmula, en la que el único aminoácido AA es L-lisina y R = H, y el fármaco está ejemplificado por SN-38, se denomina MAb-CL2A-SN-38 (que se muestra a continuación) realizado en la presente invención, tal como se define en las reivindicaciones. La estructura difiere del conector MAbCL2-SN-38 en la sustitución de un único residuo de lisina por un dipéptido Phe-Lys que se encuentra en el conector CL2. El dipéptido Phe-Lys fue diseñado como un sitio de escisión de catepsina B para la enzima lisosomal, que se consideraba importante para la liberación intracelular del fármaco unido. Sorprendentemente, a pesar de la eliminación del sitio de escisión de catepsina, los inmunoconjugados que comprenden un conector CL2A son aparentemente más eficacesin vivoque aquellos que comprenden un conector CL2.
[0067]En un ejemplo, AA comprende un resto polipeptídico, preferiblemente un di, tri o tetrapéptido, que se puede escindir mediante peptidasa intracelular. Ejemplos son: Ala-Leu, Leu-Ala-Leu y Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID NO: 9) (Trouet et al., 1982).
[0068]En otro ejemplo, el componente L1 del conjugado contiene un espaciador de polietilenglicol (PEG) definido con 1-30 unidades monoméricas repetidas. En una forma de realización preferida adicional, PEG es un PEG definido con 1 12 repeticiones. unidades monoméricas. La introducción de PEG puede implicar el uso de derivados de PEG heterobifuncionalizados que están disponibles comercialmente. El PEG heterobifuncional puede contener un grupo azida o acetileno.
[0069]En un ejemplo, L2 tiene una pluralidad de grupos acetileno (o azida), que varían de 2 a 40, pero preferiblemente de 2 a 20, y más preferiblemente de 2 a 5, y un único resto de unión a anticuerpo. En un ejemplo representativo, el componente 'L2' está unido a 2 grupos acetilénicos, lo que da como resultado la unión de dos moléculas de SN-38 unidas a azida. La unión al MAb puede implicar una succinimida.
[0070]Cuando el fármaco bifuncional contiene un resto reactivo con tiol como grupo de unión al anticuerpo, los tioles del anticuerpo se generan en los grupos lisina del anticuerpo utilizando un reactivo tiolante. Los métodos para introducir grupos tiol en anticuerpos mediante modificaciones de los grupos lisina de MAb son bien conocidos en la técnica (Wong en Chemistry of protein conjugation and cross-linking,<c>R<c>Press, Inc., Boca Raton, FL (1991), págs. 20-22). Alternativamente, la reducción suave de los enlaces disulfuro entre cadenas en el anticuerpo (Willner et al., Bioconjugate Chem. 4:521-527 (1993)) usando agentes reductores tales como ditiotreitol (DTT) puede generar de 7 a 10 tioles en el anticuerpo; que tiene la ventaja de incorporar múltiples restos de fármaco en la región entre cadenas del MAb alejada de la región de unión al antígeno. La unión de SN-38 a grupos disulfuro sulfhidrilo reducidos da como resultado la formación de un inmunoconjugado anticuerpo-SN-38 con 6 a 8 restos SN-38 unidos covalentemente por molécula de anticuerpo. Se conocen otros métodos para proporcionar residuos de cisteína para la unión de fármacos u otros agentes terapéuticos, como el uso de anticuerpos diseñados con cisteína (ver la patente de EE. UU. n° 7.521.541).
[0071]Según la presente descripción que no forma parte de la presente invención como se define en las reivindicaciones, el resto quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste en doxorrubicina (DOX), epirrubicina, morfolinodoxorrubicina (morfolino-DOx), cianomorfolino-doxorrubicina (cianomorfolino-DOX), 2-pirrolino-doxorrubicina (2-PDOX), Pro-2PDOX, CPT, 10-hidroxicamptotecina, topotecán, lurtotecán, 9-aminocamptotecina, 9-nitrocamptotecina, taxanos, geldanamicina, ansamicinas y epotilonas. Preferiblemente, en los conjugados de las formas de realización preferidas, el anticuerpo se une a al menos una fracción quimioterapéutica; preferiblemente de 1 a aproximadamente 12 restos quimioterapéuticos; lo más preferiblemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 8 restos quimioterapéuticos.
[0072]Además, el componente conector 'L2' puede comprender un grupo tiol que reacciona con un residuo reactivo con tiol introducido en uno o más grupos amino de la cadena lateral de lisina de dicho anticuerpo. En tales casos, el anticuerpo se deriva previamente con un grupo tiol reactivo tal como maleimida, vinilsulfona, bromoacetamida o yodoacetamida mediante procedimientos bien descritos en la técnica.
[0073]En el marco de este trabajo se descubrió sorprendentemente un procedimiento mediante el cual se pueden preparar enlazadores de fármacos CPT, en los que CPT presenta además un grupo 10-hidroxilo. Este proceso implica, entre otros, la protección del grupo 10-hidroxilo como un derivadode t-butiloxicarbonilo (BOC), seguido de la preparación del penúltimo intermedio del conjugado fármaco-enlazador. Por lo general, la eliminación del grupo b Oc requiere tratamiento con un ácido fuerte como el ácido trifluoroacético (TFA). En estas condiciones, el carbonato del conector CPT 20-O, que contiene grupos protectores a eliminar, también es susceptible de escisión, dando lugar así a CPT no modificado. De hecho, la razón para usar un grupo protector metoxitritilo (MMT) ligeramente eliminable para la cadena lateral de lisina de la molécula conectora, como se enuncia en la técnica, fue precisamente evitar esta posibilidad (Walkeret al.,2002). Se descubrió que la eliminación selectiva del grupo protector fenólico BOC es posible llevando a cabo reacciones de corta duración, óptimamente de 3 a 5 minutos. En estas condiciones, el producto predominante fue aquel en el que se eliminó el 'BOC' en la posición 10-hidroxilo, mientras que el carbonato en la posición '20' estaba intacto.
[0074]Un enfoque alternativo implica proteger la posición 10-hidroxi del análogo de CPT con un grupo distinto de 'BOC', de modo que el producto final esté listo para la conjugación con anticuerpos sin necesidad de desproteger el grupo protector 10-OH. El grupo protector 10-hidroxi, que convierte el 10-OH en un carbonato fenólico o un éster fenólico, se desprotege fácilmente mediante condiciones de pH fisiológico o mediante esterasas después de la administraciónin vivodel conjugado. He et al. han descrito la eliminación más rápida de un carbonato fenólico en la posición 10 frente a un carbonato terciario en la posición 20 de 10-hidroxicamptotecina en condiciones fisiológicas. (He et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry 12: 4003-4008 (2004)). Un grupo protector 10-hidroxi en SN-38 puede ser 'Co r ' donde R puede ser un alquilo sustituido tal como “N(CH<3>)<2>-(CH<2>)n-” donde n es 1-10 y donde el grupo amino terminal es opcionalmente en forma de una sal cuaternaria para una solubilidad acuosa mejorada, o un residuo alquilo simple tal como “CH<3>-(CH<2>)n-” donde n es 0-10, o puede ser un resto alcoxi tal como “CH<3>-(CH<2>)nO-” donde n es 0-10, o “N(CH<3>)<2>-(CH<2>)nO-” donde n es 2-10, o “R-iO-(CH<2>-CH<2>-O)n-CH<2>-CH<2>-O -” donde R<1>es etilo o metilo y n es un número entero con valores de 0-10. Estos derivados 10-hidroxi se preparan fácilmente mediante tratamiento con el cloroformiato del reactivo elegido, si el derivado final va a ser un carbonato. Normalmente, la camptotecina que contiene 10-hidroxi, tal como SN-38, se trata con un equivalente molar del cloroformiato en dimetilformamida usando trietilamina como base. En estas condiciones, la posición 20-OH no se ve afectada. Para formar 10-O-ésteres se utiliza el cloruro de ácido del reactivo elegido.
[0075]En un proceso ejemplar de preparación de un conjugado de un derivado de fármaco y un anticuerpo de fórmula general 1, en el que los descriptores L2, L1, AA y A-X son como se describe en secciones anteriores, el resto de fármaco bifuncional, [L2]-[L1]-[AA]m-[A-X]-Fármaco se prepara primero, seguido de la conjugación del resto del fármaco bifuncional con el anticuerpo (indicado en el presente documento como “MAb”).
[0076]En un proceso ejemplar adicional de la preparación de un conjugado de un derivado de fármaco y un anticuerpo del fórmula general 1, en la que los descriptores L2, L1, AA y A-OH son como se describe en secciones anteriores, el resto del fármaco bifuncional se prepara uniendo primero A-OH al extremo C de AA mediante un enlace amida, seguido del acoplamiento el extremo amina de AA a un grupo ácido carboxílico de L1. Si AA está ausente (es decir, m = 0), A-OH se une directamente a L1 mediante un enlace amida. El reticulante, [L1]-[AA]m-[A-OH], se une al grupo hidroxilo o amino del fármaco, y a esto le sigue la unión al resto L1, recurriendo a la reacción entre azida (o acetileno) y grupos acetileno (o azida) en L1 y L2 mediante química de clic.
[0077]En una forma de realización de la presente invención como se define en las reivindicaciones, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal (MAb). En otras formas de realización, el anticuerpo puede ser un MAb multivalente y/o multiespecífico. El anticuerpo puede estar en forma intacta, de fragmento (Fab, Fab', F(ab)<2>, F(ab')<2>) o de subfragmento (construcciones de cadena única), o de un isotipo IgG1, IgG2a, IgG3, IgG4, IgA o submoléculas del mismo.
Preparación de anticuerpos
[0078]Las técnicas para preparar anticuerpos monoclonales contra prácticamente cualquier antígeno diana, tal como Trop-2, son bien conocidas en la técnica.Véase,por ejemplo, Kohler y Milstein, Nature 256: 495 (1975), y Coligan et al. (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, páginas 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991). Brevemente, los anticuerpos monoclonales se pueden obtener inyectando a ratones una composición que comprende un antígeno, extirpando el bazo para obtener linfocitos B, fusionando los linfocitos B con células de mieloma para producir hibridomas, clonando los hibridomas, seleccionando clones positivos que produzcan anticuerpos contra el antígeno, cultivando los clones que producen anticuerpos contra el antígeno y aislando los anticuerpos de los cultivos de hibridoma.
[0079]Los MAbs se pueden aislar y purificar a partir de cultivos de hibridomas mediante una variedad de técnicas bien establecidas. Dichas técnicas de aislamiento incluyen cromatografía de afinidad con Sefarosa de Proteína A o Proteína G, cromatografía de exclusión por tamaño y cromatografía de intercambio iónico. Véase, por ejemplo, Coligan en las páginas 2.7.1-2.7.12 y 2.9.1-2.9.3. Véase también Baines et al., “Purification of Immunoglobulin G (IgG)”, en METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, VOL. 10, páginas 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992).
[0080]Diversas técnicas, como la producción de anticuerpos quiméricos o humanizados, pueden implicar procedimientos de clonación y construcción de anticuerpos. Las secuencias V<k>(cadena ligera variable) y V<h>(cadena pesada variable) de unión al antígeno para un anticuerpo de interés se pueden obtener mediante una variedad de procedimientos de clonación molecular, como RT-PCR, 5'-RACE y detección de bibliotecas de ADNc. Los genes V de un MAb de una célula que expresa un MAb murino pueden clonarse mediante amplificación por PCR y secuenciarse. Para confirmar su autenticidad, los genes V<l>y V<h>clonados pueden expresarse en cultivo celular como un Ab quimérico como describen Orlandi et al., (Proc. Natl. Acad. Sci, EE. UU., 86: 3833 (1989)). A partir de las secuencias del gen V, se puede diseñar y construir un MAb humanizado como describen Leung et al. (Mol. Immunol., 32: 1413 (1995)).
[0081]El ADNc se puede preparar a partir de cualquier línea de hibridoma conocida o línea celular transfectada que produzca un MAb murino mediante técnicas generales de clonación molecular (Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a edición (1989)). La secuencia Vk del MAb puede amplificarse usando los cebadores VK1BACK y VK1FOR (Orlandiet al.,1989) o el conjunto de cebadores extendido descrito por Leung et al. (BioTechniques, 15: 286 (1993)). Las secuencias Vh se pueden amplificar usando el par de cebadores VH1BACK/VH1FOR (Orlandiet al.,1989) o los cebadores que se hibridan con la región constante de IgG murina descrita por Leung et al. (Hybridoma, 13:469 (1994)). Los genes V humanizados pueden construirse mediante una combinación de síntesis de moldes de oligonucleótidos largos y amplificación por PCR como lo describen Leung et al. (Mol. Immunol., 32: 1413 (1995)).
[0082]Los productos de PCR para Vk se pueden subclonar en un vector de estadificación, como un vector de estadificación basado en pBR327, VKpBR, que contiene un promotor de Ig, una secuencia de péptido señal y sitios de restricción convenientes. Los productos de<p>C<r>para V<h>se pueden subclonar en un vector de estadificación similar, como el VHpBS basado en pBluescript. Los casetes de expresión que contienen las secuencias VKy Vh junto con las secuencias del promotor y del péptido señal pueden escindirse de VKpBR y VHpBS y ligarse en vectores de expresión apropiados, tales como pKh y pG1g, respectivamente (Leung et al., Hybridoma, 13:469 (1994)). Los vectores de expresión pueden cotransfectarse en una célula apropiada y los fluidos sobrenadantes pueden controlarse para determinar la producción de un MAb quimérico, humanizado o humano. Alternativamente, los casetes de expresión V<k>y V<h>pueden escindirse y subclonarse en un único vector de expresión, tal como pdHL2, como describen Gillies et al. (J. Immunol. Methods 125:191 (1989) y también se muestra en Losman et al., Cancer, 80:2660 (1997)).
[0083]Alternativamente, los vectores de expresión pueden transfectarse en células huésped que han sido preadaptadas para la transfección, el crecimiento y la expresión en medio libre de suero. Las líneas celulares ejemplares que pueden usarse incluyen las líneas celulares Sp/EEE, Sp/ESF y Sp/ESF-X (véanse, por ejemplo, las patentes de EE. U<u>. Nos 7.531.327; 7.537.930 y 7.608.425). Estas líneas celulares ejemplares se basan en la línea celular de mieloma Sp2/0, transfectadas con un gen Bcl-EEE mutante, expuestas a metotrexato para amplificar secuencias genéticas transfectadas y preadaptadas a una línea celular libre de suero para la expresión de proteínas.
Anticuerpos quiméricos
[0084]Un anticuerpo quimérico es una proteína recombinante en la que las regiones variables de un anticuerpo humano han sido reemplazadas por las regiones variables de, por ejemplo, un anticuerpo de ratón, incluidas las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo de ratón. Los anticuerpos quiméricos exhiben una inmunogenicidad disminuida y una mayor estabilidad cuando se administran a un sujeto. Las técnicas generales para clonar dominios variables de inmunoglobulina murina se describen, por ejemplo, en Orlandi et al., Proc. Nat l Acad. Sci. EE. UU. 6: 3833 (1989). Las técnicas para construir anticuerpos quiméricos son bien conocidas por los expertos en la técnica. Como ejemplo, Leung et al., Hybridoma 13:469 (1994), produjeron una quimera LL2 combinando secuencias de ADN que codifican los dominios Vk y Vh de LL2 murino, un anticuerpo monoclonal anti-CD22, con dominios de la región constantes k e IgG<1>humanas respectivas.
Anticuerpos humanizados
[0085]Los CAF pueden incluir un anticuerpo o fragmento del mismo que se une a Trop-2. Según la presente invención, como se define en las reivindicaciones, el anticuerpo anti-Trop-2 puede ser un anticuerpo RS7 humanizado (ver, por ejemplo, la Patente de EE. UU. N° 7.238.785), que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); CDR2 (SASYRYT, SEQ ID NO: 2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6).
[0086]Las técnicas para producir MAb humanizados son bien conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Jones et al., Nature 321: 522 (1986), Riechmann et al., Nature 332: 323 (1988), Verhoeyen et al., Science 239: 1534 (1988), Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. EE. UU. 89: 4285 (1992), Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12: 437 (1992), y Singer et al., J. Immun.
150: 2844 (1993)). Se puede humanizar un anticuerpo monoclonal quimérico o murino transfiriendo las CDR de ratón de cadenas variables pesadas y ligeras de la inmunoglobulina de ratón en los dominios variables correspondientes de un anticuerpo humano. Las regiones estructurales (FR) de ratón en el anticuerpo monoclonal quimérico también se reemplazan con secuencias de FR humanas. Dado que la simple transferencia de CDR de ratón a FR humanas a menudo da como resultado una reducción o incluso una pérdida de la afinidad de los anticuerpos, se requieren medidas adicionales. Podría ser necesaria una modificación para restaurar la afinidad original del anticuerpo murino. Esto se puede lograr mediante la sustitución de uno o más residuos humanos en las regiones FR con sus homólogos murinos para obtener un anticuerpo que posee buena afinidad de unión con su epítopo. Véase, por ejemplo, Tempest et al., Biotechnology 9:266 (1991) y Verhoeyen y col., Science 239: 1534 (1988). Los residuos preferidos para la sustitución incluyen residuos FR que están ubicados dentro de 1, 2 o 3 Angstroms de una cadena lateral de residuo de CDR, que están ubicados adyacentes a una secuencia de CDR, o que están se predice que interactuará con un residuo de CDR.
Anticuerpos humanos
[0087]Se conocen en la técnica métodos para producir anticuerpos completamente humanos utilizando enfoques combinatorios o animales transgénicos transformados con loci de inmunoglobulina humana(p. ej.,Mancini et al., 2004, New Microbiol. 27:315-28; Conrad y Scheller, 2005, Comb. Chem. High Throughput Screen. 8:117-26; Brekke y Loset, 2003, Curr. Opin. Pharmacol. 3:544-50). También se puede construir un anticuerpo completamente humano mediante métodos de transfección genética o cromosómica, así como tecnología de presentación en fagos, todos los cuales son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990). Se espera que tales anticuerpos completamente humanos presenten incluso menos efectos secundarios que los anticuerpos quiméricos o humanizados y funcionenin vivocomo anticuerpos humanos esencialmente endógenos.
[0088]En una alternativa, se puede usar la técnica de presentación en fagos para generar anticuerpos humanos (p. ej., Dantas-Barbosa et al., 2005, Genet. Mol. Res. 4:126-40). Los anticuerpos humanos pueden generarse a partir de humanos normales o de humanos que presentan un estado patológico particular, como el cáncer (Dantas-Barbosa et al., 2005). La ventaja de construir anticuerpos humanos a partir de un individuo enfermo es que el repertorio de anticuerpos circulantes puede estar sesgado hacia anticuerpos contra antígenos asociados a enfermedades.
[0089]En un ejemplo no limitante de esta metodología, Dantas-Barbosa et al. (2005) construyeron una biblioteca de presentación en fagos de fragmentos de anticuerpos Fab humanos de pacientes con osteosarcoma. Generalmente, el ARN total se obtuvo de linfocitos sanguíneos circulantes(Id.).Se clonaron Fab recombinantes a partir de los repertorios de anticuerpos de cadena m,<y>y<k>y se insertaron en una biblioteca de presentación en fagos (Id.). Los ARN se convirtieron en ADNc y se usaron para preparar bibliotecas de ADNc de Fab usando cebadores específicos contra las secuencias de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera (Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-97). La construcción de la biblioteca se realizó según Andris-Widhopf et al. (2000, en: Phage Display Laboratory Manual, Barbas et al. (eds), 1.a edición, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, págs. 9.1 a 9.22). Los fragmentos Fab finales se digirieron con endonucleasas de restricción y se insertaron en el genoma del bacteriófago para crear la biblioteca de presentación en fagos. Dichas bibliotecas pueden seleccionarse mediante métodos estándar de presentación en fagos, como se conoce en la técnica. La presentación en fagos se puede realizar en una variedad de formatos; para su revisión, véase, por ejemplo, Johnson y Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571 (1993).
[0090]Los anticuerpos humanos también pueden generarse mediante células B activadasin vitro.Véanse las patentes de EE. UU. nos 5.567.610 y 5.229.275. El experto en la técnica se dará cuenta de que estas técnicas son ejemplares y que se puede utilizar cualquier método conocido para preparar y seleccionar anticuerpos o fragmentos de anticuerpos humanos.
[0091]En otra alternativa, se pueden usar animales transgénicos que han sido modificados genéticamente para producir anticuerpos humanos para generar anticuerpos contra esencialmente cualquier objetivo inmunogénico, usando protocolos de inmunización estándar. Green et al., Nature Genet, describen métodos para obtener anticuerpos humanos a partir de ratones transgénicos. 7:13 (1994), Lonberg et al., Nature 368:856 (1994), y Taylor et al., Int. Inmune. 6:579 (1994). Un ejemplo no limitante de dicho sistema es el XENOMOUSE® (p. ej., Green et al., 1999, J. Immunol. Methods 231:11-23) de Abgenix (Fremont, CA). En XENOMOUSE® y animales similares, los genes de anticuerpos de ratón han sido inactivados y reemplazados por genes de anticuerpos humanos funcionales, mientras que el resto del sistema inmunológico del ratón permanece intacto.
[0092]El XENOMOUSE® se transformó con YAC (cromosomas artificiales de levadura) configurados en línea germinal que contenían porciones de los loci IgH e Igkappa humanos, incluida la mayoría de las secuencias de la región variable, junto con genes accesorios y secuencias reguladoras. El repertorio de regiones variables humanas puede usarse para generar células B productoras de anticuerpos, que pueden procesarse para dar hibridomas mediante técnicas conocidas. Un XENOMOUSE® inmunizado con un antígeno diana producirá anticuerpos humanos mediante la respuesta inmune normal, que pueden recolectarse y/o producirse mediante técnicas estándar analizadas anteriormente. Hay disponibles una variedad de cepas de XENOMOUSE®, cada una de las cuales es capaz de producir una clase diferente de anticuerpo. Se ha demostrado que los anticuerpos humanos producidos transgénicamente tienen potencial terapéutico, al tiempo que conservan las propiedades farmacocinéticas de los anticuerpos humanos normales (Green et al., 1999). El experto se dará cuenta de que las composiciones y métodos reivindicados no se limitan al uso del sistema XENOMOUSE® sino que pueden utilizar cualquier animal transgénico que haya sido modificado genéticamente para producir anticuerpos humanos.
Anticuerpos conocidos y antígenos diana
[0093]En ciertas formas de realización de la presente invención como se define en las reivindicaciones, el cáncer diana puede expresar uno o más antígenos asociados a tumores (TAA) diana. Los anticuerpos particulares que pueden ser útiles para la terapia del cáncer incluyen, entre otros, LL1 (anti-CD74), LL2 o RFB4 (anti-CD22), veltuzumab (hA20, anti-CD20), rituxumab (anti-CD20), obinutuzumab (GA101, anti-CD20), lambrolizumab (receptor anti-EP-1), nivolumab (receptor anti-EP-1), ipilimumab (anti-CTLA-4), RS7 (glucoproteína-1 anti-epitelial (EGP-1, también conocido como Trop-2)), PAM4 o KC4 (ambos antimucina), MN-14 (antígeno anticancerígenoembrionario (CEA, también conocido como CD66e o CEACAM5), MN-15 o MN-3 (anti-CEACAM6), Mu-9 (antígeno p específico del colon), Immu 31 (una anti-alfafetoproteína), R1 (anti-IGF-1R), A19 (anti-CD19), TAG-72 (p. ej., CC49), Tn, J591 o HuJ591 (anti-PSMA (antígeno de membrana prostático específico)), AB-PG1-XG1-026 (dímero anti-PSMA), D2/B (anti-PSMA), G250 (un dímero anti carbónico anhidrasa IX MAb), L243 (anti-HLA-DR), alemtuzumab (anti-CD52), bevacizumab (anti-VEGF), cetuximab (anti-EGFR), gemtuzumab (anti-CD33), ibritumomab tiuxetan (anti-CD20); panitumumab (anti-EGFR); tositumomab (anti-CD20); PAM4 (también conocido como clivatuzumab, antimucina) y trastuzumab (anti-ErbB2).
[0094]Dichos anticuerpos anti-TAA son conocidos en la técnica (p. ej., Patentes de EE. UU. Nos 5.686.072; 5.874.540; 6.107.090; 6.183.744; 6.306.393; 6.653.104; 6.730.300; 6.899.864; 6.926.893; 6.962.702; 7.074.403; 7.230.084; 7.238.785; 7.238.786; 7.256.004; 7.282.567; 7.300.655; 7.312.318; 7.585.491; 7.612.180; 7.642.239; y publicación de solicitud de patente de EE. UU. n.° 20050271671; 20060193865; 20060210475; 20070087001). Los anticuerpos de uso específicos conocidos incluyen hPAM4 (Patente de EE. UU. n° 7.282.567), hA20 (Patente de EE. UU. n° 7.151.164), hA19 (Patente de EE. UU. n° 7.109.304), hIMMU-31 (Patente de EE. UU. n° 7,300,655), hLL1 (Patente de EE. UU. n° 7,312,318), hLL2 (Patente de EE. UU. n° 5.789.554), hMu-9 (Patente de EE. UU. n° 7,387,772), hL243 (Patente de EE. UU. n° 7.612.180), hMN-14 (Patente de EE. UU. n° 6.676.924), hMN-15 (Patente de EE. UU. n° 8.287.865), hR1 (Patente de EE. UU. n° 9.441.043), hRS7 (Patente de EE. UU. n° 7.238.785), hMN-3 (Patente de EE. UU. n° 7.541.440), AB-PG1-XG1-026 (Solicitud de patente de EE. UU. 11/983.372, depositada como ATCC PTA-4405 y PTA-4406) y D2/B (WO 2009/130575).
[0095]Otros antígenos útiles asociados a tumores a los que se pueden dirigir incluyen anhidrasa carbónica IX, B7, CCL19, CCL21, CSAp, HER-2/neu, BrE3, CD1, CD1a, CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD11A, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20 (p. ej., MAb C2B8, hA20, 1F5), CD21, CD22, CD23, CD25, CD29, CD30, CD32b, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD46, CD47, CD52, CD54, CD55, CD59, CD64, CD67, CD70, CD74, CD79a, CD80, CD83, CD95, CD126, CD133, CD138, CD147, CD154, CEACAM5, CEACAM6, CTLA-4, alfa-fetoproteína (AFP), VEGF (p. ej., AVASTIN®, variante de empalme de fibronectina), fibronectina ED-B (p. ej., L19), EGP-1 (Trop-2), EGP-2 (p. ej., 17-1A), receptor de EGF (ErbB1) (p. ej., ERBITUX®), ErbB2, ErbB3, Factor H, FHL-1, Flt-3, receptor de folato, Ga 733,GRO-p, Hm Gb-1, factor inducible por hipoxia (HIF), HM1.24, HER-2/neu, histona H2B, histona H3, histona H4, factor de crecimiento similar a la insulina (ILGF), IFN-y, IFN-a, IFN-p, IFN-A, IL-2R, IL-4R, IL-6R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-2, IL-6, IL-8, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-25, IP-10, IGF-1R, Ia, HM1.24, gangliósidos, HCG, el antígeno HLA-DR al que se une L243, antígenos CD66, es decir, CD66a-d o una combinación de los mismos, MAGE, mCRP, MCP-1, MIP-1a , MIP-1B, factor inhibidor de la migración de macrófagos (MIF), MUC1, MUC2, MUC3, MUC4, MUC5ac, factor de crecimiento placentario (PIGF), PSA (antígeno prostático específico), PSMA, antígeno PAM4, receptor EP-1, EP-L1, NCA-95, NCA-90, A3, A33, Ep-cAM, KS-1, Le(y), mesotelina, S100, tenascina, TAC, antígeno Tn, antígenos de Thomas-Friedenreich, antígenos de necrosis tumoral, antígenos de angiogénesis tumoral, TNF-a, receptor TRAIL (R1 y R2), Trop-2, VEGFR, RANTES, T101, así como antígenos de células madre cancerosas, factores del complemento C3, C3a, C3b, C5a, C5 y un producto oncogén.
[0096]Las células madre cancerosas, a las que se atribuye ser poblaciones de células malignas precursoras más resistentes a la terapia (Hill y Perris, J. Natl. Cancer Inst. 2007; 99:1435-40), tienen antígenos que pueden ser atacados en ciertos tipos de cáncer, como como CD133 en cáncer de próstata (Maitland et al., Ernst Schering Found. Sympos. Proc. 2006; 5:155-79), cáncer de pulmón de células no pequeñas (Donnenberg et al., J. Control Release 2007; 122(3):385-91), y glioblastoma (Beier et al., Cancer Res. 2007; 67(9):4010-5), y CD44 en cáncer colorrectal (Dalerba et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU. 2007; 104(24)10158-63), cáncer de páncreas (Li et al., Cancer Res. 2007; 67(3): 1030-7), y en carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (Prince et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU. 2007; 104(3)973-8). Otro objetivo útil para la terapia del cáncer de mama es el antígeno LIV-1 descrito por Taylor et al. (Biochem. J. 2003; 375:51-9).
[0097]Los anticuerpos inhibidores de puntos de control se han utilizado en la terapia del cáncer. Los puntos de control inmunológico se refieren a vías inhibidoras en el sistema inmunológico que son responsables de mantener la autotolerancia y modular el grado de respuesta del sistema inmunológico para minimizar el daño al tejido periférico. Sin embargo, las células tumorales también pueden activar puntos de control del sistema inmunológico para disminuir la eficacia de la respuesta inmune contra los tejidos tumorales. Anticuerpos inhibidores de puntos de control ejemplares contra el antígeno 4 de linfocitos T citotóxicos (CTLA4, también conocido como CD152), la proteína de muerte celular programada 1 (PD1, también conocida como CD279) y el ligando 1 de muerte celular programada 1 (EP-L1, también conocido como CD274), puede usarse en combinación con uno o más agentes para mejorar la eficacia de la respuesta inmune contra células, tejidos o patógenos patógenos. Los anticuerpos anti-PD1 ejemplares incluyen lambrolizumab (MK-3475, MERCK), nivolumab (BMS-936558, BRISTOL-MYERS SQUIBB), AMP-224 (MERCK) y pidilizumab (CT-011, CURETECH lTd .). Los anticuerpos anti-PD1 están disponibles comercialmente, por ejemplo, de ABCAM® (AB137132), BIOLEGEND® (EH12.2H7, RMP1-14) y AFFYMETRIX EBIOSCIENCE (J105, J116, MIH4). Los anticuerpos anti-EP-LI ejemplares incluyen MDX-1105 (MEDAREX), MEDI4736 (MEDIMMUNE) MPDL3280A (GENENTECH) y BMS-936559 (BRISTOL-MYERS SQUIBB). Los anticuerpos anti-EP-L1 también están disponibles comercialmente, por ejemplo de AFFYMETRIX EBIOSCIENCE (MIH1). Los anticuerpos anti-CTLA4 ejemplares incluyen ipilimumab (Bristol-Myers Squibb) y tremelimumab (PFIZER). Los anticuerpos anti-PD1 están disponibles comercialmente, por ejemplo, de ABCAM® (AB 134090), SINO BIOLOGICAL INC. (11159-H03H, 11159-H08H) y THERMO SCIENTIFIC PIERCE (PA5-29572, PA5-23967, PA5-26465, MA1-12205, MA1-35914). Ipilimumab recibió recientemente la aprobación de la FDA para el tratamiento del melanoma metastásico (Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89).
[0098]El factor inhibidor de la migración de macrófagos (MIF) es un importante regulador de la inmunidad innata y adaptativa y de la apoptosis. Se ha informado que CD74 es el receptor endógeno de MIF (Leng et al., 2003, J Exp Med 197:1467-76). El efecto terapéutico de los anticuerpos anti-CD74 antagonistas sobre las vías intracelulares mediadas por MIF puede ser útil para el tratamiento de una amplia gama de enfermedades, tales como cánceres de vejiga, próstata, mama, pulmón y colon (p. ej., Meyer-Siegler et al., 2004, BMC Cancer 12:34; Shachar & Haran, 2011, Leuk Lymphoma 52:1446-54). Milatuzumab (hLL1) es un anticuerpo anti-CD74 ejemplar de uso terapéutico para el tratamiento de enfermedades mediadas por MIF.
[0099]Se conocen en la técnica varios otros anticuerpos de uso (p. ej., Patentes de EE. UU. Nos 5.686.072; 5.874.540; 6.107.090; 6.183.744; 6.306.393; 6.653.104; 6.730.300; 6.899.864; 6.926.893; 6.962.702; 7.074.403; 7.230.084; 7.238.785; 7.238.786; 7.256.004; 7.282.567; 7.300.655; 7.312.318; 7.585.491; 7.612.180; 7.642.239 y publicación de solicitud de patente de EE. UU. n° 20060193865).
[0100]Los anticuerpos de uso pueden obtenerse comercialmente de una amplia variedad de fuentes conocidas. Por ejemplo, una variedad de líneas de hibridoma secretoras de anticuerpos están disponibles en la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). Se ha depositado en la ATCC una gran cantidad de anticuerpos contra diversos objetivos de enfermedades, incluidos antígenos asociados a tumores, y/o se han publicado secuencias de regiones variables y están disponibles para su uso en los métodos y composiciones reivindicados. Véanse, por ejemplo, las Patentes de EE. UU. Nos 7.312.318; 7.282.567; 7.151.164; 7.074.403; 7.060.802; 7.056.509; 7.049.060; 7.045.132; 7.041.803 7.041.802 7.041.293 7.038.018 7.037.498 7.012.133 7.001.598 6.998.468 6.994.976 6.994.852 6.989.241 6.974.863 6.965.018 6.964.854 6.962.981 6.962.813 6.956.107 6.951.924 6.949.244 6.946.129 6.943.020 6.939.547 6.921.645 6.921.645 6.921.533 6.919.433 6.919.078 6.916.475 6.905.681 6.899.879 6.893.625 6.887.468 6.887.466 6.884.594 6.881.405 6.878.812 6.875.580 6.872.568 6.867.006 6.864.062 6.861.511 6.861.227 6.861.226 6.838.282 6.835.549 6.835.370 6.824.780 6.824.778 6.812.206 6.793.924 6.783.758 6.770.450 6.767.711 6.764.688 6.764.681 6.764.679 6.743.898 6.733.981 6.730.307 6.720.155 6.716.966 6.709.653 6.693.176 6.692.908 6.689.607 6.689.362 6.689.355 6.682.737 6.682.736 6.682.734 6.673.344 6.653.104 6.652.852 6.635.482 6.630.144 6.610.833 6.610.294 6.605.441 6.605.279 6.596.852 6.592.868 6.576.745 6.572;856 6.566.076 6.562.618 6.545.130 6.544.749 6.534.058 6.528.625 6.528.269 6.521.227 6.518.404 6.511.665 6.491.915 6.488.930 6.482.598 6.482.408 6.479.247 6.468.531 6.468.529 6.465.173 6.461.823 6.458.356 6.455.044 6.455.040 6.451.310 6.444.206 6.441.143 6.432.404 6.432.402 6.419.928 6.413.726 6.406.694 6.403.770 6.403.091 6.395.276 6.395.274 6.387.350 6.383.759 6.383.484 6.376.654 6.372.215 6.359.126 6.355.481 6.355.444 6.355.245 6.355.244 6.346.246 6.344.198 6.340.571 6.340.459 6.331.175 6.306.393 6.254.868 6.187.287 6.183.744 6.129.914 6.120.767 6.096.289 6.077.499 5.922.302 5.874.540 5.814.440 5.798.229 5.789.554 5.776.456 5.736.119 5.716.595 5.677.136 5.587.459 5.443.953. 5.525.338. Estos son sólo ejemplos y en la técnica se conoce una amplia variedad de otros anticuerpos y sus hibridomas. El experto en la técnica se dará cuenta de que las secuencias de anticuerpos o los hibridomas secretores de anticuerpos contra casi cualquier antígeno asociado a una enfermedad se puede obtener mediante una simple búsqueda en las bases de datos de ATCc , NCBI y/o USPTO de anticuerpos contra una diana de interés asociada a una enfermedad seleccionada. Los dominios de unión a antígeno de los anticuerpos clonados pueden amplificarse, escindirse, ligarse en un vector de expresión, transfectarse en una célula huésped adaptada y usarse para la producción de proteínas, usando técnicas estándar bien conocidas en la técnica.
Alotipos de anticuerpos
[0101]La inmunogenicidad de los anticuerpos terapéuticos se asocia con un mayor riesgo de reacciones a la infusión y una disminución de la duración de la respuesta terapéutica (Baert et al., 2003, N Engl J Med 348:602-08). El grado en que los anticuerpos terapéuticos inducen una respuesta inmune en el huésped puede estar determinado en parte por el alotipo del anticuerpo (Stickler et al., 2011, Genes and Immunity 12:213-21). El alotipo del anticuerpo está relacionado con variaciones en la secuencia de aminoácidos en ubicaciones específicas en las secuencias de la región constante del anticuerpo. Los alotipos de anticuerpos IgG que contienen una región constante de tipo<y>de cadena pesada se denominan alotipos Gm (1976, J Immunol 117:1056-59).
[0102]Para los anticuerpos humanos IgG1 comunes, el alotipo más prevalente es G1m1 (Stickler et al., 2011, Genes and Immunity 12:213-21). Sin embargo, el alotipo G1m3 también ocurre con frecuencia en caucásicos (Stickler et al., 2011). Se ha informado que los anticuerpos G1m1 contienen secuencias alotípicas que tienden a inducir una respuesta inmune cuando se administran a receptores que no son G1m1 (nG1m1), como los pacientes con G1m3 (Stickler et al., 2011). Los anticuerpos que no son del alotipo G1m1 no son tan inmunogénicos cuando se administran a pacientes con G1m1 (Stickler et al., 2011).
[0103]El alotipo humano G 1m 1 comprende los aminoácidos ácido aspártico en la posición 356 de Kabat y leucina en la posición 358 de Kabat en la secuencia CH3 de la cadena pesada IgG1. El alotipo nG1m1 comprende los aminoácidos ácido glutámico en la posición 356 de Kabat y metionina en la posición 358 de Kabat. Tanto el alotipo G1m1 como el nG1ml comprenden un residuo de ácido glutámico en la posición 357 de Kabat y los alotipos a veces se denominan alotipos DEL y EEM. A continuación se muestra un ejemplo no limitante de las secuencias de la región constante de la cadena pesada para los anticuerpos alotipos G1m1 y nG 1m 1 para los anticuerpos ejemplares rituximab (SEQ ID NO:7) y veltuzumab (SEQ ID NO:8).
Secuencia de la región variable de la cadena pesada de rituximab (SEQ ID NO: 7)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCP
PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGV
EVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI
SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN
YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS
PGK
Región variable de la cadena pesada de veltuzumab (SEQ ID NO:8)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCP
PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGV
EVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI
SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN
YKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS
PGK
[0104]Jefferis y Lefranc (2009, mAbs 1:1-7) revisaron las variaciones de secuencia características de los alotipos de IgG y su efecto sobre la inmunogenicidad. Informaron que el alotipo G1m3 se caracteriza por un residuo de arginina en la posición 214 de Kabat, en comparación con un residuo de lisina en Kabat 214 en el alotipo G1m17. El alotipo nG1m1,2 se caracterizó por ácido glutámico en la posición 356 de Kabat, metionina en la posición 358 de Kabat y alanina en la posición 431 de Kabat. El alotipo G1m1,2 se caracterizó por ácido aspártico en la posición 356 de Kabat, leucina en la posición 358 de Kabat y glicina en la posición 431 de Kabat. variantes de secuencia de la región constante de la cadena, Jefferis y Lefranc (2009) informaron variantes alotípicas en la región constante de la cadena ligera kappa, con el alotipo Km1 caracterizado por valina en la posición 153 de Kabat y leucina en la posición 191 de Kabat, el alotipo Km1,2 por alanina en Kabat posición 153 y leucina en la posición 191 de Kabat, y el alotipo Km3 caracterizado por alanina en la posición 153 de Kabat y valina en la posición 191 de Kabat.
[0105]Con respecto a los anticuerpos terapéuticos, veltuzumab y rituximab son, respectivamente, anticuerpos IgG1 humanizados y quiméricos contra CD20, de uso para la terapia de una amplia variedad de neoplasias malignas hematológicas y/o enfermedades autoinmunes. LaTabla 1compara las secuencias de alotipos de rituximab frente a veltuzumab. Como se muestra en laTabla 1,rituximab (G1m17,1) es un alotipo DEL IgG1, con una variación de secuencia adicional en la posición 214 de Kabat (CH1 de cadena pesada) de lisina en rituximab frente a arginina en veltuzumab. Se ha informado que veltuzumab es menos inmunogénico en sujetos que rituximab (ver, por ejemplo, Morchhauser et al., 2009, J Clin Oncol 27:3346-53; Goldenberg et al., 2009, Blood 113:1062-70; Robak & Robak, 2011, BioDrugs 25:13-25), efecto que se ha atribuido a la diferencia entre anticuerpos humanizados y quiméricos. Sin embargo, la diferencia en los alotipos entre los alotipos EEM y DEL probablemente también explica la menor inmunogenicidad de veltuzumab.
Tabla 1. Alotipos de Rituximab versus Veltuzumab
[0106]Para reducir la inmunogenicidad de los anticuerpos terapéuticos en individuos con el genotipo nG1m1, es deseable seleccionar el alotipo del anticuerpo que corresponda al alotipo G1m3, caracterizado por arginina en Kabat 214, y al alotipo nulo nG1m1,2, caracterizado por ácido glutámico en la posición 356 de Kabat, metionina en la posición 358 de Kabat y alanina en la posición 431 de Kabat. Sorprendentemente, se encontró que la administración subcutánea repetida de anticuerpos G1m3 durante un largo período de tiempo no dio como resultado una respuesta inmune significativa. En formas de realización alternativas, la cadena pesada de IgG4 humana en común con el alotipo G1m3 tiene arginina en Kabat 214, ácido glutámico en Kabat 356, metionina en Kabat 359 y alanina en Kabat 431. Dado que la inmunogenicidad parece relacionarse al menos en parte con los residuos en esas ubicaciones, el uso de la secuencia de la región constante de la cadena pesada de IgG4 humana para anticuerpos terapéuticos también es una forma de realización preferida. Las combinaciones de anticuerpos IgG1 G1m3 con anticuerpos IgG4 también pueden ser útiles para la administración terapéutica.
Nanocuerpos
[0107]Los nanocuerpos son anticuerpos de dominio único de aproximadamente 12-15 kDa de tamaño (aproximadamente 110 aminoácidos de longitud). Los nanocuerpos pueden unirse selectivamente a antígenos diana, como anticuerpos de tamaño completo, y tienen afinidades similares por los antígenos. Sin embargo, debido a su tamaño mucho más pequeño, es posible que puedan penetrar mejor en tumores sólidos. El tamaño más pequeño también contribuye a la estabilidad del nanocuerpo, que es más resistente al pH y a temperaturas extremas que los anticuerpos de tamaño completo (Van Der Linden et al., 1999, Biochim Biophys Act 1431:37-46). Los anticuerpos de dominio único se desarrollaron originalmente tras el descubrimiento de que los camélidos (camellos, alpacas, llamas) poseen anticuerpos completamente funcionales sin cadenas ligeras (p. ej., Hamsen et al., 2007, Appl Microbiol Biotechnol 77:13-22). Los anticuerpos de cadena pesada constan de un único dominio variable (VHH) y dos dominios constantes (Ch2 y Ch3). Al igual que los anticuerpos, los nanocuerpos pueden desarrollarse y usarse como construcciones multivalentes y/o biespecíficas. Se están desarrollando formas humanizadas de nanocuerpos que están dirigidos a una variedad de antígenos diana, como IL-6R, vWF, TNF, RSV, RANKL, IL-17A y F e IgE (p. ej., a BlYNX®, Gante, Bélgica) con uso clínico potencial en cáncer y otros trastornos (p. ej., Saerens et al., 2008, Curr Opin Pharmacol 8:600-8; Muyldermans, 2013, Ann Rev Biochem 82:775-97; Ibanez et al., 2011, J Infect Dis 203:1063-72).
[0108]La vida media plasmática de los nanocuerpos es más corta que la de los anticuerpos de tamaño completo, y su eliminación se realiza principalmente por vía renal. Debido a que carecen de una región Fc, no presentan citotoxicidad dependiente del complemento.
[0109]Los nanocuerpos pueden producirse mediante la inmunización de camellos, llamas, alpacas o tiburones con un antígeno diana, seguido del aislamiento del ARNm, la clonación en bibliotecas y la detección de la unión al antígeno. Las secuencias de nanocuerpos pueden humanizarse mediante técnicas estándar (p. ej., Jones et al., 1986, Nature 321: 522, Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323, Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534, Carter et al., 1992, Proc. Nat'l Acad. Sci. EE. UU. 89: 4285, Sandhu, 1992, Crit. Rev. Biotech. 12: 437, Singer et al., 1993, J. Immun. 150: 2844). La humanización es relativamente sencilla debido a la alta homología entre las secuencias de FR de camélidos y humanos.
[0110]Los CAF descritos en este documento pueden comprender nanocuerpos para la administración dirigida de fármaco conjugado a células cancerosas específicas. Los nanocuerpos de uso se describen, por ejemplo, en las Patentes de EE. UU. Nos 7.807.162; 7.939.277; 8.188.223; 8.217.140; 8.372.398; 8.557.965; 8.623.361 y 8.629.244).
Fragmentos de anticuerpos
[0111]Los fragmentos de anticuerpo son porciones de un anticuerpo que se unen a antígeno, tales como F(ab')<2>, Fab', F(ab)<2>, Fab, Fv, sFv, scFv y similares. Mediante técnicas conocidas se pueden generar fragmentos de anticuerpos que reconocen epítopos específicos. Los fragmentos F(ab')<2>, por ejemplo, pueden producirse mediante digestión con pepsina de la molécula de anticuerpo. Estos y otros métodos se describen, por ejemplo, en Goldenberg, patente de EE.<u>U. Nos 4.036.945 y 4.331.647 y referencias contenidas en las mismas. Véase también Nisonoff et al., Arch Biochem. Biophys.
89: 230 (1960); Porter, Biochem. J. 73: 119 (1959), Edelman et al., en METHODS IN ENZYMOLOGY VOL. 1, página 422 (Academic Press 1967), y Coligan en las páginas 2.8.1-2.8.10 y 2.10.- 2.10.4. Alternativamente, se pueden construir bibliotecas de expresión Fab' (Huse et al., 1989, Science, 246:1274-1281) para permitir una identificación rápida y sencilla de fragmentos Fab' monoclonales con la especificidad deseada.
[0112]Una molécula Fv de cadena sencilla (scFv) comprende un dominio VL y un dominio VH. Los dominios VL y VH se asocian para formar un sitio de unión objetivo. Estos dos dominios están además unidos covalentemente mediante un conector peptídico (L). Una molécula scFv se indica como VL-L-VH si el dominio VL es la parte N-terminal de la molécula scFv, o como VH-L-VL si el dominio VH es la parte N-terminal de la molécula scFv. Los métodos para preparar moléculas scFv y diseñar conectores peptídicos adecuados se describen en las patentes de EE. UU. n° 4.704.692, patente de EE. UU. N° 4.946.778, R. Raag y M. Whitlow, “Single Chain Fvs”. FASEB Vol 9:73-80 (1995) y R. E. Bird y B. W. Walker, Single Chain Antibody Variable Regions, TIBTECH, Vol 9: 132-137 (1991).
[0113]Otros fragmentos de anticuerpos, por ejemplo fragmentos de anticuerpos de dominio único, se conocen en la técnica y pueden usarse en las construcciones reivindicadas. Los anticuerpos de dominio único (VHH) pueden obtenerse, por ejemplo, de camellos, alpacas o llamas mediante técnicas de inmunización estándar. (Ver, por ejemplo, Muyldermans et al., TIBS 26:230-235, 2001; Yau et al., J Immunol Methods 281:161-75, 2003; Maass et al., J Immunol Methods 324:13-25, 2007). El VHH puede tener una potente capacidad de unión a antígeno y puede interactuar con nuevos epítopos que son inaccesibles a los pares VH-VL convencionales. (Muyldermans et al., 2001). La IgG sérica de alpaca contiene aproximadamente un 50% de anticuerpos IgG (HCAb) de cadena pesada de camélido únicamente (Maass et al., 2007). Las alpacas se pueden inmunizar con antígenos conocidos, como el TNF-a, y se pueden aislar VHH que se unen al antígeno objetivo y lo neutralizan (Maass et al., 2007). Se han identificado cebadores de PCR que amplifican prácticamente todas las secuencias codificantes de VHH de alpaca y pueden usarse para construir bibliotecas de presentación en fagos de VHH de alpaca, que pueden usarse para el aislamiento de fragmentos de anticuerpos mediante técnicas de biopanning estándar bien conocidas en la técnica (Maass et al., 2007).
[0114]También se puede preparar un fragmento de anticuerpo mediante hidrólisis proteolítica de un anticuerpo de longitud completa o mediante expresión en E. coli u otro huésped del ADN que codifica el fragmento. Se puede obtener un fragmento de anticuerpo mediante digestión con pepsina o papaína de anticuerpos de longitud completa mediante métodos convencionales. Por ejemplo, se puede producir un fragmento de anticuerpo mediante escisión enzimática de anticuerpos con pepsina para proporcionar un fragmento de aproximadamente 100 kD denominado F(ab')<2>. Este fragmento puede escindirse adicionalmente usando un agente reductor de tiol y, opcionalmente, un grupo bloqueante para los grupos sulfhidrilo resultantes de la escisión de enlaces disulfuro, para producir un fragmento monovalente Fab' de aproximadamente 50 Kd. Alternativamente, una escisión enzimática usando papaína produce directamente dos fragmentos Fab monovalentes y un fragmento Fc.
[0115]También se pueden usar otros métodos de escisión de anticuerpos, tales como separación de cadenas pesadas para formar fragmentos de cadenas ligeras-pesadas monovalentes, escisión adicional de fragmentos u otras técnicas enzimáticas, químicas o genéticas, siempre que los fragmentos se unan al antígeno que se reconocido por el anticuerpo intacto.
Anticuerpos biespecíficos y multiespecíficos
[0116]Los anticuerpos biespecíficos son útiles en diversas aplicaciones biomédicas. Por ejemplo, un anticuerpo biespecífico con sitios de unión para un antígeno de superficie de células tumorales y para un receptor de superficie de células T puede dirigir la lisis de células tumorales específicas por parte de células T. Los anticuerpos biespecíficos que reconocen gliomas y el epítopo CD3 en las células T se han utilizado con éxito en el tratamiento de tumores cerebrales en pacientes humanos (Nitta, et al. Lancet. 1990; 355:368-371). Un ejemplo particular es un anticuerpo anti-CD3 X anti-Trop-2. Alternativamente, un anticuerpo anti-CD3 o fragmento del mismo puede unirse a un anticuerpo o fragmento contra un antígeno asociado a células B, tal como anti-CD3 X anti-CD19, anti-cD3 X anti-CD20, anti-CD3 X anti-CD22, anti-CD3 X anti-HLA-DR o anti-CD3 X anti-CD74. Las técnicas y composiciones para la conjugación de agentes terapéuticos descritas en el presente documento se pueden usar con anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos como restos de dirección.
[0117]Se conocen numerosos métodos para producir anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos, como se describe, por ejemplo, en la patente estadounidense número 7.405.320. Los anticuerpos biespecíficos pueden producirse mediante el método del cuadroma, que implica la fusión de dos hibridomas diferentes, cada uno de los cuales produce un anticuerpo monoclonal que reconoce un sitio antigénico diferente (Milstein y Cuello, Nature, 1983; 305:537-540).
[0118]Otro método para producir anticuerpos biespecíficos utiliza entrecruzadores heterobifuncionales para unir químicamente dos anticuerpos monoclonales diferentes (Staerz, et al. Nature, 1985; 314:628-631; Perez, et al. Nature, 1985; 316:354-356). También se pueden producir anticuerpos biespecíficos mediante la reducción de cada uno de los dos anticuerpos monoclonales parentales a las respectivas medias moléculas, que luego se mezclan y se dejan reoxidar para obtener la estructura híbrida (Staerz y Bevan. Proc Natl Acad Sci EE. UU. 1986; 83:1453-1457). Otra alternativa implica reticular químicamente dos o tres fragmentos Fab' purificados por separado usando enlazadores apropiados. (Ver, por ejemplo, la solicitud de patente europea 0453082).
[0119]Otros métodos incluyen mejorar la eficiencia de generar hibridomas híbridos mediante la transferencia de genes de distintos marcadores seleccionables a través de vectores lanzadera derivados de retrovirus en hibridomas parentales respectivos, que se fusionan posteriormente (DeMonte, et al. Proc Natl Acad Sci EE. UU. 1990, 87:2941-2945); o transfección de una línea celular de hibridoma con plásmidos de expresión que contienen los genes de cadena pesada y ligera de un anticuerpo diferente.
[0120]Los dominios Vh y Vl afines se pueden unir con un conector peptídico de composición y longitud apropiadas (que normalmente consta de más de 12 residuos de aminoácidos) para formar un Fv monocatenario (scFv) con actividad de unión. Los métodos de fabricación de scFv se describen en las patentes de EE. UU. 4.946.778 y la patente de EE. UU. n° 5.132.405. La reducción de la longitud del conector peptídico a menos de 12 residuos de aminoácidos evita el emparejamiento de los dominios V<h>y V<l>en la misma cadena y fuerza el emparejamiento de los dominios V<h>y V<l>con dominios complementarios en otras cadenas, lo que da como resultado la formación de multímeros funcionales. Las cadenas polipeptídicas de los dominios V<h>y V<l>que están unidas con conectores entre 3 y 12 residuos de aminoácidos forman predominantemente dímeros (denominados diacuerpos). Con conectores entre 0 y 2 residuos de aminoácidos, se prefieren los trímeros (denominados triacuerpos) y los tetrámeros (denominados tetracuerpos), pero los patrones exactos de oligomerización parecen depender de la composición y de la orientación de los dominios V (VH-enlazador-VL o V<l>-enlazador-VH), además de la longitud del enlazador.
[0121]Estas técnicas para producir anticuerpos multiespecíficos o biespecíficos presentan diversas dificultades en términos de bajo rendimiento, necesidad de purificación, baja estabilidad o complejidad de la técnica. Más recientemente, se ha utilizado una técnica conocida como “dock and lock” (DNL) para producir combinaciones de prácticamente cualquier anticuerpo, fragmento de anticuerpo y otras moléculas efectoras deseadas (véanse, por ejemplo, las Patentes de EE. UU. Nos 7.521.056; 7.527.787; 7.534.866; 7.550.143; 7.666.400; 7.858.070; 7.871.622; 7.906.121; 7.906.118; 8.163.291; 7.901.680; 7.981.398; 8.003.111 y 8.034.352). La técnica utiliza dominios de unión a proteínas complementarias, denominados dominios de anclaje (AD) y dominios de dimerización y acoplamiento (DDD), que se unen entre sí y permiten el ensamblaje de estructuras complejas, que van desde dímeros, trímeros, tetrámeros, quintameros y hexámeros. Estos forman complejos estables con alto rendimiento sin necesidad de una purificación extensa. La técnica DNL permite el ensamblaje de anticuerpos monoespecíficos, biespecíficos o multiespecíficos. Cualquiera de las técnicas conocidas en la técnica para preparar anticuerpos biespecíficos o multiespecíficos se puede utilizar en la práctica de los métodos actualmente reivindicados.
Protocolos de conjugación
[0122]Los anticuerpos o fragmentos de los mismos pueden conjugarse con uno o más agentes terapéuticos o de diagnóstico. No es necesario que los agentes terapéuticos sean los mismos, sino que pueden ser diferentes, por ejemplo, un fármaco y un radioisótopo. Por ejemplo, se puede incorporar 131I en una tirosina de un anticuerpo o proteína de fusión y un fármaco unido a un grupo amino épsilon de un residuo de lisina. También se pueden unir agentes terapéuticos y de diagnóstico, por ejemplo, a grupos SH reducidos y/o a cadenas laterales de carbohidratos. En la técnica se conocen muchos métodos para preparar conjugados covalentes o no covalentes de agentes terapéuticos o de diagnóstico con anticuerpos o proteínas de fusión y se puede utilizar cualquier método conocido.
[0123]Se puede unir un agente terapéutico o de diagnóstico a la región bisagra de un componente de anticuerpo reducido mediante la formación de enlaces disulfuro. Alternativamente, tales agentes se pueden unir usando un reticulante heterobifuncional, tal como 3-(2-piridilditio)propionato de W-succinilo (SPDP). Yu y col., Int. J. Cancer 56: 244 (1994). Las técnicas generales para dicha conjugación son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Wong, CHEMISTRY OF PROTEIN CONJUGATION AND CROSS-LINKING (CRC Press 1991); Upeslaciset al.,“Modification of Antibodies by Chemical Methods”, en ANTIBODIES MONOCLONAL: PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch et al. (eds.), páginas 187-230 (Wiley-Liss, Inc. 1995); Price, “Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies," en MONOCLONAL ANTIBODIES: PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al. (eds.), páginas 60-84 (Cambridge University Press 1995). Alternativamente, el agente terapéutico o de diagnóstico se puede conjugar mediante un resto carbohidrato en la región Fc del anticuerpo. El grupo carbohidrato puede usarse para aumentar la carga del mismo agente que está unido a un grupo tiol, o el resto carbohidrato puede usarse para unirse a un agente terapéutico o de diagnóstico diferente.
[0124]Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para conjugar péptidos con componentes de anticuerpos a través de una fracción carbohidrato de anticuerpo. Véase, por ejemplo, Shih et al., Int. J. Cancer 41: 832 (1988); Shih et al., Int. J. Cancer 46: 1101 (1990); y Shih et al., patente de Ee . UU. n° 5.057.313. El método general implica hacer reaccionar un componente de anticuerpo que tiene una parte de carbohidrato oxidada con un polímero portador que tiene al menos una función amina libre. Esta reacción da como resultado un enlace inicial de base de Schiff (imina), que puede estabilizarse mediante reducción a una amina secundaria para formar el conjugado final.
[0125]La región Fc puede estar ausente si el anticuerpo usado como componente de anticuerpo del inmunoconjugado es un fragmento de anticuerpo. Sin embargo, es posible introducir un resto de carbohidrato en la región variable de cadena ligera de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de longitud completa. Véase, por ejemplo, Leung et al., J. Immunol.
154: 5919 (1995); Hansen et al., Patente de EE. UU. n° 5.443.953 (1995), Leung et al., Patente de EE. UU. n° 6.254.868. El resto de carbohidrato modificado se utiliza para unir el agente terapéutico o de diagnóstico.
[0126]Un método alternativo para unir restos portadores a una molécula objetivo implica el uso de reacciones químicas de clic. El enfoque de la química del clic se concibió originalmente como un método para generar rápidamente sustancias complejas uniendo pequeñas subunidades de forma modular. (Ver, por ejemplo, Kolb et al., 2004, Angew Chem Int Ed 40:3004-31; Evans, 2007, Aust J Chem 60:384-95). Se conocen en la técnica varias formas de reacción química de clic, tales como la reacción catalizada por cobre de cicloadición 1,3-dipolar de Huisgen (Tomoe et al., 2002, J Organic Chem 67:3057-64), que a menudo se denomina “reacción de clic”. Otras alternativas incluyen reacciones de cicloadición como las de Diels-Alder, reacciones de sustitución nucleofílica (especialmente en pequeños anillos tensos como compuestos de epoxi y aziridina), formación química de carbonilo de compuestos de urea y reacciones que involucran dobles enlaces carbono-carbono, como los alquinos en reacciones de tiolino.
[0127]La reacción de cicloadición de azida alquino Huisgen utiliza un catalizador de cobre en presencia de un agente reductor para catalizar la reacción de un grupo alquino terminal unido a una primera molécula. En presencia de una segunda molécula que comprende un resto azida, la azida reacciona con el alquino activado para formar un 1,2,3-triazol 1,4-disustituido. La reacción catalizada por cobre ocurre a temperatura ambiente y es suficientemente específica como para que a menudo no sea necesaria la purificación del producto de reacción. (Rostovstev et al., 2002, Angew Chem Int Ed 41:2596; Tomoe et al., 2002, J Org Chem 67:3057). Los grupos funcionales azida y alquino son en gran medida inertes frente a biomoléculas en medio acuoso, lo que permite la reacción a ocurren en soluciones complejas. El triazol formado es químicamente estable y no está sujeto a escisión enzimática, lo que hace que el producto de química clic sea altamente estable en sistemas biológicos. Aunque el catalizador de cobre es tóxico para las células vivas, la reacción química de clic a base de cobre se puede utilizarin vitropara la formación de inmunoconjugados.
[0128]Se ha propuesto una reacción de clic sin cobre para la modificación covalente de biomoléculas. (Ver, por ejemplo, Agard et al., 2004, J Am Chem Soc 126:15046-47). La reacción sin cobre utiliza tensión de anillo en lugar del catalizador de cobre para promover una reacción de cicloadición de [3 2] azida-alquino.(Id).Por ejemplo, el ciclooctino es una estructura de anillo de 8 carbonos que comprende un enlace alquino interno. La estructura de anillo cerrado induce una deformación sustancial del ángulo de enlace del acetileno, que es altamente reactivo con los grupos azida para formar un triazol. Por tanto, se pueden utilizar derivados de ciclooctina para reacciones de clic sin cobre(id.)
[0129]Ning et al. informaron otro tipo de reacción de clic sin cobre. (2010, Angew Chem Int Ed 49:3065-68), que implica cicloadición de alquino-nitrona promovida por cepa. Para abordar la lenta velocidad de la reacción del ciclooctino original, se unen grupos aceptores de electrones adyacentes al triple enlace(Id.).Ejemplos de tales ciclooctinos sustituidos incluyen ciclooctinos difluorados, 4-dibenzociclooctinol y azaciclooctino (Id.). Una reacción alternativa sin cobre implicó cicloadición de alquino-nitrona promovida por cepa para dar isoxazolinas N-alquiladas (Id.). Se informó que la reacción tenía una cinética de reacción excepcionalmente rápida y se usó en un protocolo de tres pasos en un solo recipiente para la modificación específica del sitio de péptidos y proteínas(Id).Las nitronas se prepararon mediante la condensación de aldehídos apropiados con A/-metilhidroxilamina y la reacción de cicloadición tuvo lugar en una mezcla de acetonitrilo y agua (Id.). Estas y otras reacciones químicas de clic conocidas pueden usarse para unir restos portadores a anticuerposin vitro.
[0130]Agard et al. (2004, J Am Chem Soc 126:15046-47) demostraron que una glicoproteína recombinante expresada en células CHO en presencia de W-azidoacetilmanosamina peracetilada dio como resultado la bioincorporación del correspondiente ácido W-azidoacetil siálico en los carbohidratos de la glicoproteína. La glicoproteína derivatizada con azido reaccionó específicamente con una ciclooctina biotinilada para formar una glicoproteína biotinilada, mientras que la glicoproteína de control sin el resto azido permaneció sin marcar(Id).Laughlin et al. (2008, Science 320:664-667) utilizaron una técnica similar para marcar metabólicamente glicanos de la superficie celular en embriones de pez cebra incubados con W-azidoacetilgalactosamina peracetilada. Los glicanos azidoderivatizados reaccionaron con reactivos de ciclooctina difluorada (DIFO) para permitir la visualización de glicanosin vivo.
[0131]La reacción de Diels-Alder también se ha utilizado para el marcaje de moléculasin vivo.Rossin et al. (2010, Angew Chem Int Ed 49:3375-78) informaron un rendimiento del 52 %in vivoentre un anticuerpo anti-TAG72 (CC49) localizado en un tumor que porta un resto reactivo trans-cicloocteno (TCO) y un derivado DOTA de tetrazina marcado con 111In. El anticuerpo CC49 marcado con TCO se administró a ratones portadores de xenoinjertos de cáncer de colon, seguido 1 día después por una inyección de sonda de tetrazina marcada con 111In (Id.). La reacción de la sonda radiomarcada con el anticuerpo localizado en el tumor dio como resultado una localización de radioactividad pronunciada en el tumor, como demostrado mediante imágenes SPECT de ratones vivos tres horas después de la inyección de la sonda radiomarcada, con una relación tumor-músculo de 13:1(Id.).Los resultados confirmaron la reacción químicain vivode las moléculas marcadas con TCO y tetrazina.
[0132]Los métodos alternativos de conjugación química de dichos restos con biomoléculas son bien conocidos en la técnica y se puede utilizar cualquier método conocido. Los métodos generales de formación de inmunoconjugados se describen, por ejemplo, en las Patentes de EE. UU. Nos 4.699.784; 4.824.659; 5.525.338; 5.677.427; 5.697.902; 5.716.595; 6.071.490; 6.187.284; 6.306.393; 6.548.275; 6.653.104; 6.962.702; 7.033.572; 7.147.856; y 7.259.240.
[0133]El protocolo de conjugación preferido se basa en una reacción de tiol-maleimida, tiol-vinilsulfona, tiolbromoacetamida o tiol-yodoacetamida que es fácil a pH neutro o ácido. Esto evita la necesidad de condiciones de pH más altas para las conjugaciones como, por ejemplo, serían necesarias cuando se usan ésteres activos. Más detalles de protocolos de conjugación ejemplares se describen a continuación en la sección Ejemplos.
Tratamiento terapéutico
[0134]La presente divulgación se refiere a un método para tratar a un sujeto, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) como se describe en el presente documento. Las enfermedades que pueden tratarse con los CAF descritos en el presente documento incluyen, entre otras, neoplasias malignas de células B (p. ej., linfoma no Hodgkin, linfoma de células del manto, mieloma múltiple, linfoma de Hodgkin, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de Burkitt, linfoma folicular), leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas) usando, por ejemplo, un anticuerpo anti-CD22 tal como el MAb hLL2 (epratuzumab,véasela patente de EE. UU. n° 6.183.744), contra otro epítopo de CD22 (hRFB4) o anticuerpos contra otros antígenos de células B, tales como CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD37, CD40, CD40L, CD52, CD74, CD80 o HLA-DR. Otras enfermedades incluyen, entre otras, adenocarcinomas de epitelios del sistema digestivo derivados del endodermo, cánceres tales como cáncer de mama y cáncer de pulmón de células no pequeñas, y otros carcinomas, sarcomas, tumores gliales, leucemias mieloides, etc. antígeno, por ejemplo, un antígeno oncofetal, producido por o asociado con un tumor sólido maligno o una neoplasia hematopoyética, por ejemplo, un antígeno gastrointestinal, de estómago, de colon, de esófago, de hígado, de mama, de páncreas, de hígado, de próstata, de ovario, de testículo, de cerebro, de hueso, se utilizan ventajosamente un tumor urotelial o linfático, un sarcoma o un melanoma. Dichas terapias se pueden administrar una o varias veces, dependiendo del estado de la enfermedad y la tolerabilidad del conjugado, y también se pueden usar opcionalmente en combinación con otras modalidades terapéuticas, radiación externa, radioinmunoterapia, inmunoterapia, quimioterapia, terapia antisentido, terapia de ARN de interferencia, terapia genética. terapia y similares. Cada combinación se adaptará al tipo de tumor, estadio, condición del paciente y terapia previa, y otros factores considerados por el médico tratante.
[0135]Tal como se utiliza en el presente documento, el término “sujeto” se refiere a cualquier animal (es decir, vertebrados e invertebrados), incluidos, entre otros, mamíferos, incluidos los humanos. No se pretende que el término se limite a una edad o sexo en particular. Así, el término engloba a sujetos adultos y recién nacidos, así como a fetos, ya sean masculinos o femeninos. Las dosis indicadas en este documento son para humanos, pero pueden ajustarse al tamaño de otros mamíferos, así como de niños, de acuerdo con el peso o el tamaño del metro cuadrado.
[0136]Los conjugados terapéuticos que comprenden un anticuerpo anti-Trop-2 como el MAb hRS7 se pueden usar para tratar carcinomas tales como carcinomas de esófago, páncreas, pulmón, estómago, colon y recto, vejiga urinaria, mama, ovario, útero, riñón y próstata, como se describe en la patente estadounidense n° 7.238.785; 7.517.964 y 8.084.583. Un anticuerpo hRS7 es un anticuerpo humanizado que comprende secuencias de la región determinante de la complementariedad (CDR) de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); CDR2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6)
[0137]Los anticuerpos que pueden usarse en el tratamiento de enfermedades humanas son versiones de anticuerpos humanos o humanizados (injertados con CDR); aunque se pueden utilizar versiones murinas y quiméricas de anticuerpos. Se prefieren principalmente moléculas de IgG de la misma especie como agentes de administración para minimizar las respuestas inmunitarias. Esto es particularmente importante cuando se considera repetir tratamientos. Para los humanos, es menos probable que un anticuerpo IgG humano o humanizado genere una respuesta inmune anti-IgG en los pacientes. Los anticuerpos como hLL1 y hLL2 se internalizan rápidamente después de unirse al antígeno de internalización en las células diana, lo que significa que el fármaco quimioterapéutico que se transporta también se internaliza rápidamente en las células. Sin embargo, también se pueden utilizar anticuerpos que tienen tasas de internalización más lentas para efectuar una terapia selectiva.
[0138]En otra forma de realización preferida de la presente invención como se define en las reivindicaciones, un agente terapéutico usado en combinación con el CAF puede comprender uno o más isótopos. Los isótopos radiactivos útiles para tratar tejido enfermo incluyen, entre otros: 111In, 177Lu, 212Bi, 213Bi, 211At, 62Cu, 67Cu, 90Y, 125I, 131I, 32P, 33P, 47Sc, 111Ag, 67Ga, 142Pr, 153Sm, 161Tb, 166Dy, 166Ho, 186Re, 188Re, 189Re, 212Pb, 223Ra, 225Ac, 59Fe, 75Se, 77As, 89Sr, 99Mo, 105Rh, 109Pd, 143Pr, 149Pm, 169Er, 194Ir, 198Au, 199Au, 227Th y 211Pb. El radionucleido terapéutico tiene preferentemente una energía de desintegración en el intervalo de 20 a 6.000 keV, preferentemente en el intervalo de 60 a 200 keV para un emisor Auger, de 100 a 2.500 keV para un emisor beta y de 4.000 a 6.000 keV para un emisor alfa. Las energías máximas de desintegración de los nucleidos emisores de partículas beta útiles son preferentemente de 20 a 5.000 keV, más preferentemente de 100 a 4.000 keV y lo más preferentemente de 500 a 2.500 keV. También se prefieren los radionucleidos que se desintegran sustancialmente con partículas emisoras de Auger. Por ejemplo, Co-58, Ga-67, Br-80m, Tc-99m, Rh-103m, Pt-109, In-111, Sb-119, I-125, Ho-161, Os-189m e Ir-192. Las energías de desintegración de los nucleidos emisores de partículas beta útiles son preferentemente <1.000 keV, más preferentemente <100 keV y lo más preferentemente <70 keV. También se prefieren radionucleidos que se desintegran sustancialmente con la generación de partículas alfa. Dichos radionucleidos incluyen, entre otros: Dy-152, At-211, Bi-212, Ra-223, Rn-219, Po-215, Bi-211, Ac-225, Fr-221, At-217, Bi-213, Th-227 y Fm-255. Las energías de desintegración de los radionucleidos emisores de partículas alfa útiles son preferentemente de 2.000 a 10.000 keV, más preferentemente de 3.000 a 8.000 keV y lo más preferentemente de 4.000 a 7.000 keV. Otros posibles radioisótopos de uso incluyen 11C, 13N, 15O, 75Br, 198Au, 224Ac, 126I, 133I, 77Br, 113mIn, 95Ru, 97Ru, 103Ru, 105Ru, 107Hg, 203Hg, 121mTe, 122mTe, 125mTe, 165Tm, 167Tm, 168Tm, 197Pt, 109Pd, 105Rh, 142Pr, 143Pr, 161Tb, 166Ho, 199Au, 57Co, 58Co, 51Cr, 59Fe, 75Se, 201Tl, 225Ac, 76Br, 169Yb y similares.
[0139]Se pueden administrar radionucleidos y otros metales, por ejemplo, utilizando grupos quelantes unidos a un anticuerpo o conjugado. Los quelatos macrocíclicos como NOTA, DOTA y TETA son útiles con una variedad de metales y radiometales, más particularmente con radionúclidos de galio, itrio y cobre, respectivamente. Tales complejos de quelato de metal pueden hacerse muy estables adaptando el tamaño del anillo al metal de interés. Se pueden usar otros quelatos de tipo anillo, tales como poliéteres macrocíclicos para formar complejos con 223Ra.
[0140]Los agentes terapéuticos de uso en la presente invención como se define en las reivindicaciones también incluyen, por ejemplo, fármacos quimioterapéuticos tales como alcaloides de la vinca, antraciclinas, epidofilotoxinas, taxanos, antimetabolitos, inhibidores de tirosina quinasa, agentes alquilantes, antibióticos, inhibidores de Cox-2, agentes antimitóticos, antiangiogénicos y proapoptóticos, particularmente doxorrubicina, metotrexato, taxol, otras camptotecinas y otros de estas y otras clases de agentes anticancerígenos y similares. Otros fármacos quimioterapéuticos contra el cáncer incluyen mostazas nitrogenadas, alquilsulfonatos, nitrosoureas, triazenos, análogos del ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina, complejos de coordinación de platino, hormonas y similares. Los agentes quimioterapéuticos adecuados se describen en REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19a Ed. (Mack Publishing Co. 1995), y en GOODMAN AND GII,MAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTIC, 7a Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985), así como ediciones revisadas de estas publicaciones. Los expertos en la técnica conocen otros agentes quimioterapéuticos adecuados, tales como fármacos experimentales.
[0141]Los fármacos de uso ejemplares incluyen, entre otros, 5-fluorouracilo, afatinib, aplidina, azaribina, anastrozol, antraciclinas, axitinib, AVL-101, AVL-291, bendamustina, bleomicina, bortezomib, bosutinib, briostatina-1, busulfán, caliqueamicina, camptotecina, carboplatino, 10-hidroxicamptotecina, carmustina, celecoxib, clorambucilo, cisplatino (CDDP), inhibidores de la Cox-2, irinotecán (CPT-11), SN-38, carboplatino, cladribina, camptotecanos, crizotinib, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dasatinib, dinaciclib, docetaxel, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina (2P-DOX), cianomorfolino doxorrubicina, glucurónido de doxorrubicina, glucurónido de epirrubicina, erlotinib, estramustina, epidofilotoxina, erlotinib, entinostat, agentes de unión al receptor de estrógeno, etopósido (VP16), glucurónido de etopósido, fosfato de etopósido, exemestano, fingolimod, floxuridina (FUdR), 3',5'-O-dioleoil-FudR (FUdR-dO), fludarabina, flutamida, inhibidores de farnesil-proteína transferasa, flavopiridol, fostamatinib, ganetespib, GDC-0834, GS-1101, gefitinib, gemcitabina, hidroxiurea, ibrutinib, idarrubicina, idelalisib, ifosfamida, imatinib, L-asparaginasa, lapatinib, lenolidamida, leucovorina, LFM-A13, lomustina, mecloretamina, melfalán, mercaptopurina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, mitramicina, mitomicina, mitotano, navelbina, neratinib, nilotinib, nitrosurea, olaparib, plicomicina, procarbazina, paclitaxel, PCI-32765, pentostatina, PSI-341, raloxifeno, semustina, sorafenib, estreptozocina, SU11248, sunitinib, tamoxi pantano, temazolomida (una forma acuosa de DTIC), transplatino, talidomida, tioguanina, tiotepa, tenipósido, topotecán, mostaza de uracilo, vatalanib, vinorelbina, vinblastina, vincristina, alcaloides de vinca y ZD1839. Dichos agentes pueden ser parte de los conjugados descritos en el presente documento o, alternativamente, pueden administrarse en combinación con los conjugados descritos, ya sea antes, simultáneamente o después del conjugado. Alternativamente, se pueden usar uno o más anticuerpos terapéuticos desnudos conocidos en la técnica en combinación con los conjugados descritos. Los anticuerpos desnudos terapéuticos ejemplares se describen anteriormente.
[0142]En formas de realización preferidas de la invención como se define en las reivindicaciones, un agente terapéutico para usar en combinación con el CAF que es un conjugado de anticuerpo que rompe el ADN es un inhibidor de microtúbulos, tal como un alcaloide de la vinca, un taxano, un maitansinoide o una auristatina. Los inhibidores de microtúbulos conocidos a modo de ejemplo incluyen paclitaxel, vincristina, vinblastina, mertansina, epotilona, docetaxel, discodermolida, combrestatina, podofilotoxina, CI-980, fenilahistinas, esteganacinas, curacinas, 2-metoxiestradiol, E7010, metoxibencenosuflonamidas, vinorelbina, vinflunina, vindesina, dolastatinas, espongistatina, rizoxina, tasidotina, halicondrinas, hemiasterlinas, criptoficina 52, MMAE y mesilato de eribulina.
[0143]En una forma de realización alternativa preferida de la invención como se define en las reivindicaciones, un agente terapéutico para usar en combinación con el CAF que es un CAF que rompe el ADN, es un inhibidor de PARP, tal como olaparib, talazoparib (BMN-673), rucaparib, veliparib, CEP 9722, MK 4827, BGB-290, ABT-888, AG014699, BSI-201, CEP-8983 o 3-aminobenzamida.
[0144]En otra alternativa de la invención como se define en las reivindicaciones, un agente terapéutico usado en combinación con el CAF es un inhibidor de tirosina quinasa, tal como ibrutinib (PCI-32765), PCI-45292, CC-292 (AVL-292), ONO-4059, GDC-0834, LFM-A13 o RN486.
[0145]En otra alternativa más de la invención como se define en las reivindicaciones, un agente terapéutico usado en combinación con el CAF es un inhibidor de PI3K, tal como idelalisib, Wortmanina, demetoxiviridina, perifosina, PX-866, IPI-145 (duvelisib), BAY 80-6946, BEZ235, RP6530, TGR1202, SF1126, INK1117, GDC-0941, BKM120, XL147, XI,765, Palomid 529, GSK1059615, ZSTK474, PWT33597, IC87114, TG100-115, CAL263, PI -103, GNE477, CUDC-907, AEZS-136 o LY294002.
[0146]Los agentes terapéuticos que pueden usarse junto con conjugados de camptotecina también pueden comprender toxinas conjugadas con restos diana. Las toxinas que pueden usarse a este respecto incluyen ricina, abrina, ribonucleasa (RNasa), DNasa I, ranpirnasa, enterotoxina estafilocócica A, proteína antiviral de hierba carmín, gelonina, toxina diftérica, exotoxina dePseudomonasy endotoxina dePseudomonas.(Véase, por ejemplo, Pastan. et al., Cell (1986), 47:641, y Sharkey y Goldenberg, CA Cancer J Clin. 2006 julio-agosto;56(4):226-43). Toxinas adicionales adecuadas para su uso aquí son conocidas por los expertos en la técnica y se describen en el documento US 6.077.499.
[0147]Aún otra clase de agente terapéutico puede comprender uno o más inmunomoduladores. Los inmunomoduladores de uso pueden seleccionarse entre una citoquina, un factor de crecimiento de células madre, una linfotoxina, un factor hematopoyético, un factor estimulante de colonias (CSF), un interferón (IFN), eritropoyetina, trombopoyetina y una combinación de los mismos. Específicamente útiles son linfotoxinas tales como factor de necrosis tumoral (TNF), factores hematopoyéticos, tales como interleucina (IL), factor estimulante de colonias, tal como factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF) o factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF), interferón, tal como interferones a, p, y o A, y factor de crecimiento de células madre, tal como el denominado “factor S1”. Entre las citoquinas se incluyen hormonas del crecimiento tales como la hormona del crecimiento humana, la hormona del crecimiento humana N-metionil y la hormona del crecimiento bovino; hormona paratiroidea; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorelaxina; hormonas glicoproteicas tales como hormona estimulante del folículo (FSH), hormona estimulante de la tiroides (TSH) y hormona luteinizante (LH); factor de crecimiento hepático; prostaglandina, factor de crecimiento de fibroblastos; prolactina; lactógeno placentario, proteína OB; factor de necrosis tumoral a y p; sustancia inhibidora de Muller; péptido asociado a gonadotropina de ratón; inhibina; activina; factor de crecimiento vascular endotelial; integrina; trombopoyetina (TPO); factores de crecimiento nervioso tales como NGF-p; factor de crecimiento plaquetario; factores de crecimiento transformantes (TGF) tales como TGF-a y TGF-p; factores de crecimiento similares a la insulina I y II; eritropoyetina (EPO); factores osteoinductivos; interferones tales como interferón a, p,<y>y A; factores estimulantes de colonias (CSF) tales como macrófagos-CSF (MCSF); interleucinas (IL) como IL-1, IL-1 a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-21, IL-25, LIF, ligando kit o FLT-3, angiostatina, trombospondina, endostatina, necrosis tumoral factor y linfotoxina (LT). Tal como se utiliza en el presente documento, el término citocina incluye proteínas de fuentes naturales o de cultivos celulares recombinantes y equivalentes biológicamente activos de las citocinas de secuencia nativa.
[0148]Las quimiocinas de uso incluyen RANTES, MCAF, MIP1-alfa, MIP1-Beta e IP-10.
[0149]El experto habitual se dará cuenta de que, de acuerdo con la invención, tal como se define en las reivindicaciones, el CAF puede usarse en combinación con uno o más agentes terapéuticos diferentes, tales como un segundo anticuerpo, un segundo fragmento de anticuerpo, un segundo inmunoconjugado, un radionucleido, una toxina, fármaco, agente quimioterapéutico, radioterapia, quimiocina, citocina, inmunomodulador, enzima, hormona, oligonucleótido, ARNi o ARNip. Dichos agentes terapéuticos adicionales pueden administrarse por separado, en combinación o unidos a los inmunoconjugados anticuerpo-fármaco en cuestión.
Formulación y Administración
[0150]Las vías de administración adecuadas de los conjugados para su uso de acuerdo con la presente invención como se define en las reivindicaciones incluyen, sin limitación, administración oral, parenteral, subcutánea, rectal, transmucosa, intestinal, intramuscular, intramedular, intratecal, intraventricular directa, intravenosa, intravítrea, inyecciones intraperitoneales, intranasales o intraoculares. Las vías de administración preferidas son parenterales. Alternativamente, se puede administrar el compuesto de manera local en lugar de sistémica, por ejemplo, mediante inyección del compuesto directamente en un tumor sólido.
[0151]Los inmunoconjugados se pueden formular según métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, mediante las cuales el inmunoconjugado se combina en una mezcla con un excipiente farmacéuticamente adecuado. La solución salina tamponada con fosfato estéril es un ejemplo de excipiente farmacéuticamente adecuado. Otros excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Ansel et al., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 5.a edición (Lea & Febiger 1990), y Gennaro (ed.), REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18.a edición (Mack Publishing Company 1990), y ediciones revisadas del mismo.
[0152]En una forma de realización preferida de la invención como se define en las reivindicaciones, el inmunoconjugado se formula en tampón biológico de Good (pH 6-7), usando un tampón seleccionado del grupo que consiste en ácido N-(2-acetamido)-2-aminoetanosulfónico (ACES); ácido N-(2-acetamido)iminodiacético (ADA); ácido N,N-bis(2-hidroxietil)-2-aminoetanosulfónico (BES); ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanosulfónico (HEPES); ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES); ácido 3-(Nmorfolino)propanosulfónico (MOPS); ácido 3-(N-morfolinil)-2-hidroxipropanosulfónico (MOPSO); y piperazina N,N'-bis(ácido 2-etanosulfónico) [Tuberías]. Los tampones más preferidos son MES o MOPS, preferentemente en el intervalo de concentración de 20 a 100 mM, más preferentemente aproximadamente 25 mM. El más preferido es MES 25 mM, pH 6,5. La formulación puede comprender además trehalosa 25 mM y polisorbato 80 al 0,01 % v/v como excipientes, modificándose la concentración final del tampón a 22,25 mM como resultado de la adición de excipientes. El método de almacenamiento preferido es una formulación liofilizada de los conjugados, almacenada en un rango de temperatura de -20 °C a 2 °C, siendo el almacenamiento más preferido entre 2 °C y 8 °C.
[0153]El inmunoconjugado puede formularse para administración intravenosa mediante, por ejemplo, inyección en bolo, infusión lenta o infusión continua. Preferiblemente, el anticuerpo de la presente invención se infunde durante un período de menos de aproximadamente 4 horas, y más preferiblemente, durante un período de menos de aproximadamente 3 horas. Por ejemplo, los primeros 25 a 50 mg se podrían infundir en 30 minutos, preferiblemente incluso 15 minutos, y el resto se podría infundir durante las siguientes 2 a 3 horas. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes multidosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes de su uso.
[0154]Se pueden emplear métodos farmacéuticos adicionales para controlar la duración de la acción del conjugado terapéutico. Se pueden preparar preparaciones de liberación controlada mediante el uso de polímeros para complejar o adsorber el inmunoconjugado. Por ejemplo, los polímeros biocompatibles incluyen matrices de poli(etileno-co-acetato de vinilo) y matrices de un copolímero de polianhídrido de un dímero de ácido esteárico y ácido sebácico. Sherwood y col., Bio/Technology 10: 1446 (1992). La velocidad de liberación de un inmunoconjugado de dicha matriz depende del peso molecular del inmunoconjugado, la cantidad de inmunoconjugado dentro de la matriz y el tamaño de las partículas dispersas. Saltzman y col., Biophys. J. 55: 163 (1989); Sherwood y otros,supra.Otras formas de dosificación sólidas se describen en Ansel et al., PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, 5a edición (Lea & Febiger 1990), y Gennaro (ed.), REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18a edición (Mack Publishing Company 1990), y ediciones revisadas de los mismos.
[0155]Generalmente, la dosis de un inmunoconjugado administrado para humanos variará dependiendo de factores tales como la edad, el peso, la altura, el sexo, el estado médico general y el historial médico previo del paciente. Puede ser deseable proporcionar al receptor una dosis de inmunoconjugado que esté en el intervalo de aproximadamente 1 mg/kg a 24 mg/kg como una única infusión intravenosa, aunque también se puede administrar una dosis más baja o más alta según lo dicten las circunstancias. Una dosis de 1 a 20 mg/kg para un paciente de 70 kg, por ejemplo, es de 70 a 1.400 mg, o de 41 a 824 mg/m2 para un paciente de 1,7 m. La dosis se puede repetir según sea necesario, por ejemplo, una vez por semana durante 4 a 10 semanas, una vez por semana durante 8 semanas o una vez por semana durante 4 semanas. También se puede administrar con menos frecuencia, como cada dos semanas durante varios meses, o mensualmente o trimestralmente durante muchos meses, según sea necesario en una terapia de mantenimiento. Las dosis preferidas pueden incluir, entre otras, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 20 mg/kg, 22 mg/kg y 24 mg/kg. Puede usarse cualquier cantidad en el intervalo de 1 a 24 mg/kg. Sin embargo, en formas de realización preferidas, el rango de dosificación puede ser de 4 a 16 mg/kg, de 6 a 12 mg/kg o de 8 a 10 mg/kg.
[0156]La dosis se administra preferiblemente varias veces, una o dos veces por semana. Puede usarse un programa de dosificación mínimo de 4 semanas, más preferiblemente 8 semanas, más preferiblemente 16 semanas o más. El programa de administración puede comprender la administración una o dos veces por semana, en un ciclo seleccionado del grupo que consiste en: (i) semanalmente; (ii) cada dos semanas; (iii) una semana de terapia seguida de dos, tres o cuatro semanas de descanso; (iv) dos semanas de terapia seguidas de una, dos, tres o cuatro semanas de descanso; (v) tres semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; (vi) cuatro semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; (vii) cinco semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; y (viii) mensualmente. El ciclo puede repetirse 4, 6, 8, 10, 12, 16 o 20 veces o más.
[0157]Alternativamente, se puede administrar un inmunoconjugado en una dosis cada 2 o 3 semanas, repetida hasta un total de al menos 3 dosis. O dos veces por semana durante 4 a 6 semanas. Si la dosis se reduce a aproximadamente 200-300 mg/m2 (340 mg por dosis para un paciente de 1,7 m, o 4,9 mg/kg para un paciente de 70 kg), se puede administrar una o incluso dos veces por semana durante 4 a 10 semanas. Alternativamente, se puede reducir la pauta posológica, es decir, cada 2 o 3 semanas durante 2 o 3 meses. Sin embargo, se ha determinado que se pueden administrar dosis incluso más altas, como 12 mg/kg una vez a la semana o una vez cada 2-3 semanas mediante infusión intravenosa lenta, para ciclos de dosificación repetidos. Opcionalmente, el programa de dosificación se puede repetir en otros intervalos y la dosis se puede administrar a través de varias vías parenterales, con el ajuste apropiado de la dosis y el programa.
[0158]Los inmunoconjugados descritos en el presente documento pero no sujetos a la invención tal como se definen en las reivindicaciones son útiles para la terapia del cáncer. Los ejemplos de cánceres incluyen, entre otros, carcinoma, linfoma, glioblastoma, melanoma, sarcoma y leucemia, mieloma o neoplasias malignas linfoides. A continuación se indican ejemplos más particulares de tales cánceres e incluyen: cáncer de células escamosas (p. ej., cáncer de células escamosas epiteliales), sarcoma de Ewing, tumor de Wilms, astrocitomas, cáncer de pulmón que incluye cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, adenocarcinoma del pulmón y el carcinoma escamoso de pulmón, el cáncer de peritoneo, el cáncer gástrico o de estómago, incluido el cáncer gastrointestinal, el cáncer de páncreas, el glioblastoma multiforme, el cáncer de cuello uterino, el cáncer de ovario, el cáncer de hígado, el cáncer de vejiga, el hepatoma, el carcinoma hepatocelular, los tumores neuroendocrinos, la tiroides medular cáncer, carcinoma diferenciado de tiroides, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de colon, cáncer de recto, cáncer de endometrio o carcinoma uterino, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de riñón o renal, cáncer de próstata, cáncer de vulva, carcinoma anal, carcinoma de pene, así como cáncer de cabeza. y cáncer de cuello. El término “cáncer” incluye células o tumores malignos primarios (p. ej., aquellos cuyas células no han migrado a sitios en el cuerpo del sujeto distintos del sitio de la malignidad o tumor original) y células o tumores malignos secundarios (p. ej., aquellos que surgen de metástasis, la migración de células malignas o tumorales a sitios secundarios que son diferentes del sitio del tumor original).
[0159]Otros ejemplos de cánceres o neoplasias malignas incluyen, entre otros: leucemia linfoblástica aguda infantil, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide aguda, carcinoma suprarrenocortical, cáncer hepatocelular (primario) en adultos, cáncer de hígado (primario) en adultos, leucemia linfocítica aguda en adultos, leucemia mieloide aguda en adultos, linfoma de Hodgkin en adultos, leucemia linfocítica en adultos, linfoma no Hodgkin en adultos, cáncer primario de hígado en adultos, sarcoma de tejido blando en adultos, linfoma relacionado con el SIDA, neoplasias malignas relacionadas con el SIDA, cáncer anal, astrocitoma, cáncer de vías biliares, cáncer de vejiga, cáncer de huesos, glioma del tronco encefálico, tumores cerebrales, cáncer de mama, cáncer de pelvis renal y uréter, linfoma del sistema nervioso central (primario), linfoma del sistema nervioso central, astrocitoma cerebeloso, astrocitoma cerebral, cáncer de cuello uterino, cáncer hepatocelular infantil (primario), cáncer de hígado infantil (primario), leucemia linfoblástica aguda infantil, leucemia mieloide aguda infantil, glioma del tronco encefálico infantil, astrocitoma cerebeloso infantil, astrocitoma cerebral infantil, tumores extracraneales de células germinales infantiles, enfermedad de Hodgkin infantil, linfoma de Hodgkin infantil, glioma hipotalámico y de las vías visuales infantil, leucemia linfoblástica infantil, meduloblastoma infantil, linfoma no Hodgkin infantil, tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriales y pineales infantiles, cáncer de hígado primario infantil, rabdomiosarcoma infantil, sarcoma de tejido blando infantil, glioma hipotalámico y de las vías visuales infantil, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielógena crónica, cáncer de colon, linfoma cutáneo de células T, carcinoma endocrino de células de los islotes de páncreas, cáncer de endometrio, ependimoma, cáncer epitelial, cáncer de esófago, enfermedad de Ewing Sarcoma y tumores relacionados, cáncer de páncreas exocrino, tumor extracraneal de células germinales, tumor extragonadal de células germinales, cáncer de vías biliares extrahepáticas, cáncer ocular, cáncer de mama femenino, enfermedad de Gaucher, cáncer de vesícula biliar, cáncer gástrico, tumor carcinoide gastrointestinal, tumores gastrointestinales, tumores de células germinales, tumor trofoblástico gestacional, leucemia de células pilosas, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, linfoma de Hodgkin, hipergammaglobulinemia, cáncer de hipofaringe, cánceres intestinales, melanoma intraocular, carcinoma de células de los islotes, cáncer de páncreas de células de los islotes, sarcoma de Kaposi, cáncer de riñón, cáncer de laringe, labio y cáncer de cavidad oral, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, trastornos linfoproliferativos, macroglobulinemia, cáncer de mama masculino, mesotelioma maligno, timoma maligno, meduloblastoma, melanoma, mesotelioma, cáncer escamoso primario oculto metastásico de cuello, cáncer escamoso primario metastásico de cuello, cáncer escamoso primario metastásico de cuello, mieloma múltiple, mieloma múltiple/neoplasia de células plasmáticas, síndrome mielodisplásico, leucemia mielógena, leucemia mieloide, trastornos mieloproliferativos, cáncer de cavidad nasal y de senos paranasales, cáncer nasofaríngeo, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, cáncer de piel no melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer escamoso de cuello metastásico primario oculto, cáncer de orofaringe, osteosarcoma fibroso/maligno, osteosarcoma/histiocitoma fibroso maligno, osteosarcoma/histiocitoma fibroso maligno de hueso, cáncer epitelial de ovario, tumor de células germinales de ovario, tumor de ovario de bajo potencial maligno, cáncer de páncreas, paraproteinemias, policitemia vera, cáncer de paratiroides, cáncer de pene, feocromocitoma, tumor hipofisario, linfoma primario del sistema nervioso central, cáncer primario de hígado, cáncer de próstata, cáncer de recto, cáncer de células renales, cáncer de pelvis renal y de uréter, retinoblastoma, rabdomiosarcoma, cáncer de glándulas salivales, sarcomas de sarcoidosis, síndrome de Sézary, cáncer de piel, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de intestino delgado, sarcoma de tejido blando, cáncer de cuello escamoso, cáncer de estómago, tumores neuroectodérmicos y pineales primitivos supratentoriales, linfoma de células T, cáncer testicular, timoma, cáncer de tiroides, cáncer de células transicionales de pelvis renal y de uréter, cáncer de pelvis renal y de uréter de transición, tumores trofoblásticos, cáncer de células de uréter y de pelvis renal, cáncer de uretra, cáncer de útero, sarcoma uterino, cáncer de vagina, glioma de las vías visuales y hipotalámico, cáncer de vulva, macroglobulinemia de Waldenstrom, tumor de Wilms, y cualquier otra enfermedad hiperproliferativa, además de la neoplasia, localizada en un sistema de órganos enumerado anteriormente.
[0160]Los métodos y composiciones divulgados en el presente documento, pero no sujetos a la invención, tal como se define en las reivindicaciones, pueden usarse para tratar afecciones malignas o premalignas y para prevenir la progresión a un estado neoplásico o maligno, incluidos, entre otros, los trastornos descritos anteriormente. Dichos usos están indicados en condiciones conocidas o sospechadas de progresión previa a neoplasia o cáncer, en particular, donde se ha producido un crecimiento de células no neoplásicas que consiste en hiperplasia, metaplasia o, más particularmente, displasia (para una revisión de dichas condiciones de crecimiento anormal, ver Robbins y Angell, Basic Pathology, 2a ed., W. B. Saunders Co., Filadelfia, págs. 68-79 (1976)).
[0161]La displasia es frecuentemente un precursor del cáncer y se encuentra principalmente en los epitelios. Es la forma más desordenada de crecimiento celular no neoplásico, que implica una pérdida en la uniformidad celular individual y en la orientación arquitectónica de las células. La displasia ocurre característicamente cuando existe irritación o inflamación crónica. Los trastornos displásicos que pueden tratarse incluyen, entre otros, displasia ectodérmica anhidrótica, displasia anterofacial, displasia torácica asfixiante, displasia auriculodigital, displasia broncopulmonar, displasia cerebral, displasia cervical, displasia condroectodérmica, displasia cleidocraneal, displasia ectodérmica congénita, displasia craneodiafisaria, displasia craneocarpotarsiana, displasia craneometafisaria, displasia dentinaria, displasia diafisaria, displasia ectodérmica, displasia del esmalte, displasia encefalo-oftálmica, displasia epifisaria hemimelia, displasia epifisaria múltiple, displasia epifisaria punctata, displasia epitelial, displasia faciodigitogenital, displasia fibrosa familiar de las mandíbulas, displasia familiar de pliegue blanco, displasia fibromuscular, displasia fibrosa del hueso, displasia ósea florida, displasia renal-retiniana hereditaria, displasia ectodérmica hidrótica, displasia ectodérmica hipohidrótica, displasia tímica linfopénica, displasia mamaria, displasia mandibulofacial, displasia metafisaria, displasia de Mondini, displasia fibrosa monostótica, displasia mucoepitelial, displasia epifisaria múltiple, displasia oculoauriculovertebral, displasia oculodentodigital, displasia oculovertebral, displasia odontogénica, displasia oftalmomandibulomelica, displasia cementaria periapical, displasia fibrosa poliostótica, displasia espondiloepifisaria pseudoacondroplásica, displasia retiniana, displasia septoóptica, displasia espondiloepifisaria y displasia ventriculoradial.
[0162]Los trastornos preneoplásicos adicionales que pueden tratarse incluyen, entre otros, trastornos disproliferativos benignos (p. ej., tumores benignos, afecciones fibroquísticas, hipertrofia tisular, pólipos o adenomas intestinales y displasia esofágica), leucoplasia, queratosis, enfermedad de Bowen, piel de granjero, queilitis solar y queratosis solar. En formas de realización preferidas, el método de la invención se usa para inhibir el crecimiento, la progresión y/o la metástasis de cánceres, en particular los enumerados anteriormente.
[0163]Enfermedades, trastornos y/o afecciones hiperproliferativas adicionales incluyen, entre otras, progresión y/o metástasis de neoplasias malignas y trastornos relacionados tales como leucemia (incluidas leucemias agudas; por ejemplo, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda [incluidas leucemia mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica y eritroleucemia]) y leucemias crónicas (p. ej., leucemia mielocítica crónica [granulocítica] y leucemia linfocítica crónica leucemia), policitemia vera, linfomas (p. ej., enfermedad de Hodgkin y enfermedad no Hodgkin), mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de cadenas pesadas y tumores sólidos que incluyen, entre otros, sarcomas y carcinomas tales como fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, cordrosarcoma, sarcoma osteogénico, acordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, cáncer de páncreas, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de próstata, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma de vías biliares, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilm, cáncer de cuello uterino, tumor testicular, pulmón carcinoma, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, emangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma.
[0164]Las enfermedades autoinmunes que pueden tratarse con inmunoconjugados pueden incluir trombocitopenias inmunitarias agudas y crónicas, dermatomiositis, corea de Sydenham, miastenia gravis, lupus eritematoso sistémico, nefritis lúpica, fiebre reumática, síndromes poliglandulares, penfigoide ampolloso, diabetes mellitus, púrpura de Henoch-Schonlein, nefritis estreptocócica, eritema nudoso, arteritis de Takayasu, vasculitis asociada a ANCA, enfermedad de Addison, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, sarcoidosis, colitis ulcerosa, eritema multiforme, nefropatía por IgA, poliarteritis nudosa, espondilitis anquilosante, síndrome de Goodpasture, tromboangitis obliterante, síndrome de Sjogren, primario cirrosis biliar, tiroiditis de Hashimoto, tirotoxicosis, esclerodermia, hepatitis crónica activa, polimiositis/dermatomiositis, policondritis, penfigoide ampolloso, pénfigo vulgar, granulomatosis de Wegener, nefropatía membranosa, esclerosis lateral amiotrófica, tabes dorsal, arteritis/polimialgia de células gigantes, anemia perniciosa, rápidamente progresiva glomerulonefritis, psoriasis o alveolitis fibrosante.
Kits
[0165]También se describen en el presente documento, pero no están sujetos a la invención como se define en las reivindicaciones, kits que contienen componentes adecuados para tratar el cáncer en un paciente. Los kits ejemplares pueden contener al menos un anticuerpo conjugado con fármaco como se describe en el presente documento. Si la composición que contiene componentes para administración no está formulada para administración a través del tubo digestivo, tal como administración oral, se puede incluir un dispositivo capaz de administrar los componentes del kit a través de alguna otra ruta. Un tipo de dispositivo, para aplicaciones tales como administración parenteral, es una jeringa que se usa para inyectar la composición en el cuerpo de un sujeto. También se pueden utilizar dispositivos de inhalación.
[0166]Los componentes del kit pueden empaquetarse juntos o separarse en dos o más contenedores. En algunas formas de realización, los recipientes pueden ser viales que contienen formulaciones liofilizadas estériles de una composición que son adecuadas para la reconstitución. Un kit también puede contener uno o más tampones adecuados para la reconstitución y/o dilución de otros reactivos. Otros recipientes que pueden usarse incluyen, entre otros, una bolsa, bandeja, caja, tubo o similares. Los componentes del kit se pueden empaquetar y mantener de forma estéril dentro de los contenedores. Otro componente que se puede incluir son instrucciones para una persona que utilice un kit para su uso.
EJEMPLOS
Ejemplo 1. Terapia dirigida de cánceres gastrointestinales con IMMU-132 (Sacituzumab Govitecan), un conjugado de fármaco-anticuerpo anti-Trop-2-SN-38 (CAF)
[0167]Trop-2 es una glicoproteína asociada a tumores muy prevalente en muchos cánceres epiteliales. Su elevada expresión se ha relacionado con una enfermedad más agresiva y un mal pronóstico. Un mAb humanizado que se une al dominio extracelular de Trop-2 se conjugó con SN-38 (IMMU-132; relación promedio fármaco:mAb = 7,6), el principio activo de CPT-11. Después de una potente actividad en xenoinjertos de tumores humanos, se inició un ensayo de fase I/II en pacientes con diversos tumores sólidos, incluidos cánceres gastrointestinales.
[0168] Métodos: Se inscribieron pacientes con cánceres metastásicos después del fracaso de la terapia estándar, comenzando con una dosis de 8,0 mg/kg administrada los días 1 y 8 de un ciclo de 3 semanas. Se determinó que la MTD era 12 mg/kg; se eligieron niveles de dosis de 8 y 10 mg/kg para las pruebas de Fase II.
[0169] Resultados: Se inscribieron sesenta pacientes con cánceres gastrointestinales avanzados en un ensayo de fase I/II. En 29 pacientes con CCR (9 tratados con 10 mg/kg, 20 con 8 mg/kg), 1 tuvo una RP (respuesta parcial) y 14 tuvieron EE (enfermedad estable) como la mejor respuesta según RECIST, con un tiempo hasta la progresión (Tt P) de 50+ semanas para los pacientes RP (-65%) y una mediana de 21+ semanas para los pacientes EE (5 continuando). Trece pacientes con CCR tenían mutaciones enKRAS,7 mostraron EE con una mediana de TTP de 19,1+ semanas (rango, 12,0-34,0; 3 continuaron). De 15 pacientes con cáncer de páncreas que fueron tratados (5 con 8, 7 con 10 y 3 con 12 mg/kg), 7 tuvieron EE como mejor respuesta para una mediana de TTP de 15,0 semanas. Entre 11 pacientes con cáncer de esófago (9 comenzaron a las 8, 1 a las 10 y 1 a 18 mg/kg), 8 tuvieron una evaluación por TC, mostrando 1 RP con un TTP de 30+ semanas y 4 con una EE de 17,4+, 21,9, 26,3 y 29,9 semanas. De 5 pacientes con cáncer gástrico (2 a 8 y 3 a 10 mg/kg), sólo a 3 se les ha realizado valoración por T<c>, todos con EE (1 con una reducción del 19% de la lesión diana y un TTP continuo de más de 29 semanas).
[0170] La neutropenia fue la principal toxicidad limitante de la dosis, junto con fatiga, diarrea, náuseas y vómitos como otras toxicidades comúnmente reportadas. Sin embargo, el perfil de toxicidad de 75 pacientes en el ensayo completo mostró sólo un 17,3% y un 2,7% de neutropenia de grado 3 y 4, respectivamente, y sólo un 6,7% de diarrea de grado 3.
[0171] Conclusiones: IMMU-132 mostró un alto índice terapéutico en pacientes con diversos cánceres gastrointestinales metastásicos recidivantes. Tiene un fármaco moderadamente tóxico conjugado con un mAb internalizante y selectivo para el cáncer, que puede administrarse repetidamente durante muchos meses una vez a la semana x 2 en un ciclo de 21 días.
Ejemplo 2. Producción y uso de conjugado anticuerpo-fármaco anti-Trop-2-SN-38
[0172] El anticuerpo anti-Trop-2 RS7 humanizado (hRS7) se produjo como se describe en la patente de EE. UU. n° 7.238.785. Se produjo SN-38 unido a un conector CL2A y se conjugó con anticuerpos hRS7 (anti-Trop-2), hPAM4 (anti-MLTCSac), hA20 (anti-CD20) o hMN-14 (anti-CEACAM5) según la patente estadounidense 7.999.083. El protocolo de conjugación dio como resultado una proporción de aproximadamente 6 moléculas de SN-38 unidas por molécula de anticuerpo.
[0173] Se trataron ratones desnudos atímicos (hembras) inmunocomprometidos, portadores de xenoinjertos de tumores de colon o páncreas humanos subcutáneos, con conjugado CL2A-SN-38 específico o con conjugado de control, o se dejaron sin tratar. Se observaron las eficacias terapéuticas de los conjugados específicos. FIG. 1 muestra un modelo de tumor pancreático Capan 1, en el que los conjugados CL2A-SN-38 específicos de anticuerpos hRS7 (anti-Trop-2), hPAM4 (anti-MUC-5ac) y hMN-14 (anti-cEACAM5) mostraron mejores eficacias que el conjugado de control hA20-CL2A-SN-38 (anti-CD20) y control sin tratar. De manera similar, en un modelo BXPC3 de cáncer de páncreas humano, el hRS7-CL2A-SN-38 específico mostró una mejor eficacia terapéutica que los tratamientos de control (FIG. 2).
Ejemplo 3. Eficacia del CAF anti-Trop-2-SN-38 contra diversos cánceres epitelialesin vivo
Resumen
[0174] El propósito de este estudio fue evaluar la eficacia de un CAF SN-38-anti-Trop-2 (hRS7) contra varios tipos de tumores sólidos humanos, y evaluar su tolerabilidad en ratones y monos, estos últimos con reactividad cruzada tisular a hRS7 similar a los humanos. Se conjugaron dos derivados de SN-38, CL2-SN-38 y CL2A-SN-38, con el anticuerpo humanizado anti-Trop-2, hRS7. Los inmunoconjugados se caracterizaronin vitropor su estabilidad, unión y citotoxicidad. La eficacia se ensayó en cinco modelos diferentes de xenoinjertos de tumores sólidos humanos que expresaban el antígeno Trop-2. La toxicidad se evaluó en ratones y monos Cynomolgus.
[0175] Los conjugados hRS7 de los dos derivados de SN-38 fueron equivalentes en sustitución de fármacos (~6), unión celular(Kd ~1,2 nmol/L), citotoxicidad (CI<50>~ 2,2 nmol/L) y estabilidad séricain vitro(t/A~20 horas). La exposición de las células al CAF demostró vías de señalización que conducen a la escisión de PARP, pero se observaron diferencias frente al SN-38 libre en la regulación positiva de p53 y p21. hRS7-SN-38 produjo efectos antitumorales significativos en dosis no tóxicas en ratones con tumores Calu-3(P< 0,05), Capan-1 (P <0,018), BxPC-3 (P <0,005) y COLO 205 (P < 0,033) en comparación con los CAF de control no dirigidos. Los ratones toleraron una dosis de 2 * 12 mg/kg (equivalentes de SN-38) con elevaciones de corta duración en los niveles de enzimas hepáticas ALT y AST. Los monos Cynomolgus a los que se les administró 2 x 30,96 mg/kg mostraron sólo disminuciones transitorias en los recuentos sanguíneos, aunque, lo que es más importante, los valores no cayeron por debajo de los rangos normales.
[0176] En resumen, el CAF anti-Trop-2 hRS7-CL2A-SN-38 proporcionó efectos antitumorales significativos y específicos contra una variedad de tipos de tumores sólidos humanos. Fue bien tolerado en monos, con una expresión tisular de Trop-2 similar a la de los humanos, en dosis clínicamente relevantes.
Introducción
[0177] El tratamiento exitoso con irinotecán de pacientes con tumores sólidos ha sido limitado, debido en gran parte a la baja tasa de conversión del profármaco CPT-11 en el metabolito activo SN-38. Otros han examinado formas no dirigidas de SN-38 como un medio para evitar la necesidad de esta conversión y administrar SN-38 de forma pasiva a los tumores. Conjugamos SN-38 covalentemente a un anticuerpo anti-Trop-2 humanizado, hRS7. Este conjugado anticuerpo-fármaco tiene efectos antitumorales específicos en una variedad de modelos de xenoinjerto de cáncer humano s.c., incluidos el carcinoma de pulmón de células no pequeñas, el carcinoma de pulmón de células no pequeñas, el páncreas, el colorrectal y el carcinoma de pulmón de células escamosas, todos en dosis no tóxicas (p. ej., <3,2 mg/kg de dosis equivalente de SN-38 acumulativo). Trop-2 se expresa ampliamente en muchos cánceres epiteliales, pero también en algunos tejidos normales y, por lo tanto, se realizó un estudio de aumento de dosis en monos Cynomolgus para evaluar la seguridad clínica de este conjugado. Los monos toleraron 24 mg de equivalentes de SN-38/kg con sólo toxicidades menores y reversibles. Dado su perfil de seguridad y de focalización en tumores, hRS7-SN-38 proporciona una mejora significativa en el tratamiento de tumores sólidos que responden al irinotecán.
Material y métodos
[0178] Líneas celulares, anticuerpos y quimioterapéuticos: todas las líneas celulares de cáncer humano utilizadas en este estudio se adquirieron de la Colección Estadounidense de Cultivos Tipo. Estos incluyen Calu-3 (carcinoma de pulmón de células no pequeñas), SK-MES-1 (carcinoma de pulmón de células escamosas), COLO 205 (adenocarcinoma de colon), Capan-1 y BxPC-3 (adenocarcinomas de páncreas) y PC-3 (adenocarcinomas de próstata). La IgG RS7 humanizada y los anticuerpos anti-CD20 (IgG hA20, veltuzumab) y anti-CD22 (IgG hLL2, epratuzumab) humanizados de control se prepararon en Immunomedics, Inc. El irinotecán (20 mg/ml) se obtuvo de Hospira, Inc.
[0179] Inmunoconjugados SN-38 y aspectosin vitro: la síntesis de CL2-SN-38 se ha descrito previamente (Moon et al., 2008, J Med Chem 51:6916-26). Su conjugación con hRS7 IgG y la estabilidad sérica se realizaron como se describe (Moon et al., 2008, J Med Chem 51:6916-26; Govindan et al., 2009, Clin Chem Res 15:6052-61). Se realizaron preparaciones de CL2ASN-38 (PM 1480) y su conjugado hRS7, y estudios de estabilidad, unión y citotoxicidad como se describe en los ejemplos anteriores.
[0180] Estudios terapéuticosin vivo:para todos los estudios en animales, las dosis de inmunoconjugados SN-38 e irinotecán se muestran en equivalentes de SN-38. Basado en una relación media de sustitución SN-38/IgG de 6, una dosis de 500 |jg de CAF para un ratón de 20 g (25 mg/kg) contiene 0,4 mg/kg de SN-38. Las dosis de irinotecán también se muestran como equivalentes de SN-38 (es decir, 40 mg de irinotecán/kg equivalen a 24 mg/kg de SN-38).
[0181] Se compraron ratones NCr hembra atímicos desnudos(nu/nu),de 4 a 8 semanas de edad, y ratones macho Swiss-Webster, de 10 semanas de edad, de Taconic Farms. SNBL USA, Ltd realizó estudios de tolerabilidad en monos Cynomolgus(Macaca fascicularis;2,5-4 kg, macho y hembra).
[0182] A los animales se les implantaron por vía subcutánea diferentes líneas celulares de cáncer humano. El volumen del tumor (TV) se determinó mediante mediciones en 2 dimensiones utilizando calibradores, con volúmenes definidos como:Lxw2/2, dondeLes la dimensión más larga del tumor y w es la más corta. Los tumores oscilaban en tamaño entre 0,10 y 0,47 cm3 cuando comenzó la terapia. Los regímenes de tratamiento, las dosis y el número de animales en cada experimento se describen en los Resultados. El hRS7-CL2A-SN-38 liofilizado y el CAF de control se reconstituyeron y diluyeron según fue necesario en solución salina estéril. Todos los reactivos se administraron por vía intraperitoneal (0,1 ml), excepto el irinotecán, que se administró por vía intravenosa. El régimen de dosificación estuvo influenciado por nuestras investigaciones previas, donde el CAF se administró cada 4 días o dos veces por semana durante períodos de tiempo variables (Moon et al., 2008, J Med Chem 51:6916-26; Govindan et al., 2009, Clin Chem Res 15:6052-61). Esta frecuencia de dosificación reflejó una consideración de la vida media sérica del conjugadoin vitro,para permitir una exposición más continua al CAF.
[0183] Estadísticas: las curvas de crecimiento se muestran como cambio porcentual en el TV inicial a lo largo del tiempo. El análisis estadístico del crecimiento tumoral se basó en el área bajo la curva (AUC). Los perfiles de crecimiento de tumores individuales se obtuvieron mediante modelado de curvas lineales. Se empleó una pruebafpara determinar la igualdad de la varianza entre los grupos antes del análisis estadístico de las curvas de crecimiento. Se utilizó una pruebatde dos colas para evaluar la significación estadística entre los diversos grupos de tratamiento y controles, excepto para el control de solución salina, donde se utilizó una pruebatde una cola (significancia enP< 0,05). Las comparaciones estadísticas del AUC se realizaron solo hasta el momento en que el primer animal dentro de un grupo fue sacrificado debido a la progresión.
[0184] Farmacocinética y biodistribución: se inyectaron hRS7-CL2A-SN-38 y hRS7 IgG radiomarcadas con 111In en ratones desnudos que portaban tumores s.c. SK-MES-1 (~ 0,3 cm3). A un grupo se le inyectaron por vía intravenosa 20 jC i (250 jg de proteína) de 111In-hRS7-CL2A-SN-38, mientras que otro grupo recibió 20 jC i (250 jg de proteína) de 111InhRS7 IgG. En varios momentos, los ratones (5 por momento) fueron anestesiados, sangrados mediante punción intracardíaca y luego sacrificados. Se extirparon, pesaron y contaron tumores y diversos tejidos mediante centelleo y para determinar el porcentaje de dosis inyectada por gramo de tejido (% ID/g). A un tercer grupo se le inyectaron 250 jg de hRS7-CL2A-SN-38 sin marcar 3 días antes de la administración de 111In-hRS7-CL2A-SN-38 y también se le realizó la necropsia. Se utilizó una prueba t de dos colas para comparar la captación de hRS7-CL2A-SN-38 y hRS7 IgG después de determinar la igualdad de varianza utilizando la pruebaf.El análisis farmacocinético del aclaramiento de la sangre se realizó utilizando el software WinNonLin (Parsight Corp.).
[0185] Tolerabilidad en ratones Swiss-Webster y monos Cynomolgus: brevemente, los ratones se clasificaron en 4 grupos cada uno para recibir inyecciones i.p. de 2 ml de un control de tampón de acetato de sodio o 3 dosis diferentes de hRS7-CL2A-SN-38 (4, 8, o 12 mg/kg de SN-38) los días 0 y 3 seguido de recolección de sangre y suero, como se describe en Resultados. A monos Cynomolgus (3 machos y 3 hembras; 2,5-4,0 kg) se les administraron 2 dosis diferentes de hRS7-CL2A-SN-38. Las dosis, los tiempos y el número de monos sangrados para la evaluación de posibles toxicidades hematológicas y la química sérica se describen en los Resultados.
Resultados
[0186] Estabilidad y potencia de hRS7-CL2A-SN-38: se usaron dos enlaces diferentes para conjugar SN-38 con hRS7 IgG (FIG. 3A). El primero se denomina CL2-SN-38 y se ha descrito previamente (Moon et al., 2008, J Med Chem 51:6916-26; Govindan et al., 2009, Clin Chem Res 15:6052-61). Se utilizó un cambio en la síntesis de CL2 para eliminar el resto de fenilalanina dentro del conector para producir el conector CL2A. Este cambio simplificó la síntesis, pero no afectó el resultado de la conjugación (p. ej., tanto CL2-SN-38 como CL2A-SN-38 incorporaron ~6 SN-38 por molécula de IgG). Las comparaciones lado a lado no encontraron diferencias significativas en la estabilidad sérica, la unión al antígeno o la citotoxicidadin vitro.Este resultado fue sorprendente, ya que el residuo de fenilalanina en CL2 es parte de un sitio de escisión diseñado para la catepsina B, una proteasa lisosomal.
[0187] Para confirmar que el cambio en el conector SN-38 de CL2 a CL2A no afectó la potenciain vivo,se compararon hRS7-CL2A y hRS7-CL2-SN-38 en ratones que portaban tumores COLO 205 (FIG. 3B) o Capan-1. (FIG. 3C), usando 0,4 mg o 0,2 mg/kg de SN-38 dos veces por semana durante x 4 semanas, respectivamente, y con tumores iniciales de 0,25 cm3 de tamaño en ambos estudios. Tanto los conjugados hRS7-CL2A como CL2-SN-38 inhibieron significativamente el crecimiento tumoral en comparación con los no tratados (AUC-MdíasP<0,002 frente a solución salina en el modelo COLO 205; AUC<21>díasP<0,001 frente a solución salina en el modelo Capan-1), y un anti-CD20 no dirigido CAF de control, hA20-CL2A-SN-38 (AUC-MdíasP<0,003 en el modelo COLO-205; AUC<35>días:P<0,002 en el modelo Capan-1). Al final del estudio (día 140) en el modelo Capan-1, el 50% de los ratones tratados con hRS7-CL2A-SN-38 y el 40% de los ratones hRS7-CL2-SN-38 estaban libres de tumores, mientras que sólo el 20% de los animales tratados con hA20-CAF no tenían signos visibles de enfermedad. Como se demuestra en la FIG. 3, el conector CL2A resultó en una eficacia algo mayor en comparación con CL2.
[0188] Mecanismo de acción: los estudios de citotoxicidadin vitrodemostraron que hRS7-CL2A-SN-38 tenía valores de CI<50>en el rango de nmol/L frente a varias líneas de tumores sólidos diferentes (Tabla 2). La CI<50>con SN-38 libre fue menor que la del conjugado en todas las líneas celulares. Aunque no hubo una correlación aparente entre la expresión de Trop-2 y la sensibilidad a hRS7-CL2ASN-38, la relación CI<50>del CAF versus SN-38 libre fue menor en las células con mayor expresión de Trop-2, lo que probablemente refleja la mayor capacidad para internalizar el fármaco cuando hay más antígeno presente.
[0189] Se sabe que SN-38 activa varias vías de señalización en las células, lo que conduce a la apoptosis (p. ej., Cusack et al., 2001, Cancer Res 61:3535-40; Liu et al. 2009, Cancer Lett 274:47-53; Lagadec et al. al., 2008, Br J Cancer 98:335-44). Nuestros estudios iniciales examinaron la expresión de 2 proteínas involucradas en eventos de señalización temprana (p21Waf1/Cip1 y p53) y 1 evento apoptótico tardío [escisión de poli-ADP-ribosa polimerasa (PARP)]in vitro(no mostrado). En BxPC-3, SN-38 produjo un aumento de 20 veces en la expresión de p21Waf1/Cip1 (no mostrado), mientras que hRS7-CL2A-SN-38 resultó en solo un aumento de 10 veces (no mostrado), un hallazgo consistente con la mayor actividad con SN-38 libre en esta línea celular (Tabla 2). Sin embargo, hRS7-CL2ASN-38 aumentó la expresión de p21Waf1/Cip1 en Calu-3 más del doble que SN-38 libre (no se muestra).
[0190] Se observó una mayor disparidad entre los eventos de señalización mediados por hRS7-CL2A-SN-38 y SN-38 libre en la expresión de p53 (no se muestra). Tanto en BxPC-3 como en Calu-3, la regulación positiva de p53 con SN-38 libre no fue evidente hasta las 48 horas, mientras que hRS7-CL2A-SN-38 aumentó la regulación de p53 en 24 horas (no se muestra). Además, la expresión de p53 en células expuestas al CAF fue mayor en ambas líneas celulares en comparación con SN-38 (no mostrado). Curiosamente, aunque hRS7 IgG no tuvo un efecto apreciable sobre la expresión de p21Waf1/Cip1, sí indujo la regulación positiva de p53 tanto en BxPC-3 como en Calu-3, pero solo después de una exposición de 48 horas (no se muestra). En términos de eventos apoptóticos posteriores, la escisión de PARP fue evidente en ambas líneas celulares cuando se incubaron con SN-38 o el conjugado (no mostrado). La presencia de PARP escindida fue mayor a las 24 horas en BxPC-3 (no mostrado), lo que se correlaciona con una alta expresión de p21 y su CI<50>más baja. El mayor grado de escisión con SN-38 libre sobre el CAF fue consistente con los hallazgos de citotoxicidad.
[0191] Eficacia de hRS7-SN-38: debido a que Trop-2 se expresa ampliamente en varios carcinomas humanos, se realizaron estudios en varios modelos diferentes de cáncer humano, que comenzaron usando el enlace hRS7-CL2-SN-38, pero luego se utilizaron conjugados con enlaces CL2A. Los ratones desnudos portadores de Calu-3 que recibieron 0,04 mg de SN-38/kg de hRS7-CL2-SN-38 cada 4 días tuvieron una respuesta significativamente mejor en comparación con los animales a los que se les administró la cantidad equivalente de hLL2-CL2-SN-38 no dirigido (TV = 0,14 ± 0,22 cm3 frente a 0,80 ± 0,91 cm3, respectivamente; AUC<42>díasP <0,026;FIG. 4A). Se observó una dosis-respuesta cuando la dosis se aumentó a 0,4 mg/kg de SN-38 (FIG. 4A). Con este nivel de dosis más alto, todos los ratones que recibieron el conjugado hRS7 específico se “curaron” en 28 días y permanecieron libres de tumores hasta el final del estudio el día 147, mientras que los tumores volvieron a crecer en los animales tratados con el CAF irrelevante (específico vs. irrelevante AUCgedías:P= 0,05). En ratones que recibieron la mezcla de hRS7 IgG y SN-38, los tumores progresaron >4,5 veces en el día 56 (TV = 1,10 ± 0,88 cm3; AUCgedíasP< 0,006 frente a hRS7-CL2-SN-38) (FIG. 4A).
[0192]También se examinó la eficacia en xenoinjertos de tumores de colon humano (COLO 205) y páncreas (Capan-1). En animales portadores de tumores COLO 205,(FIG. 4Bhttp://clincancerres.aacriournals.org/content/17/10/3157.long - F3), hRS7-CL2-SN-38 (0,4 mg/kg, q4dx8) previno el crecimiento del tumor durante el período de tratamiento de 28 días con tumores significativamente más pequeños en comparación con el control CAF anti-CD20 (hA20-CL2-SN-38) o hRS7 IgG (TV = 0,16 ± 0,09 cm3, 1,19 ± 0,59 cm3 y 1,77 ± 0,93 cm3, respectivamente; AUC<28>díasP< 0,016).
Tabla 2. Expresión de la citotoxicidadin vitrode Trop-2 de SN-38 y hRS7-SN-38 en diversas líneas de tumores sólidos
Expresión de Trop-2 mediante FACS Resultados de citotoxicidad Línea Fluorescencia Porcentaje SN-38 IC 95% hRS7-SN- IC 95% Relación celular media (fondo) positivo 38 ADC/SN-38 libre CI<50>CI50 CI50 CI50
(nmol/L) (nmol/L) (nmol/L) (nmol/L)
Calu-3 282,2 (4,7) 99,6% 7,19 5,77-8,95 9,97 8,12-12,25 1,39
COLO 205 141,5 (4,5) 99,5% 1,02 0,66-1,57 1,95 1,26-3,01 1,91
Capan-1 100,0 (5,0) 94,2% 3,50 2,17-5,65 6,99 5,02-9,72 2,00
PC-3 46,2 (5,5) 73,6% 1,86 1,16-2,99 4,24 2,99-6,01 2,28
SK-MES-1 44,0 (3,5) 91,2% 8,61 6,30-11,76 23,14 17,98-29,78 2,69
BxPC-3 26,4 (3,1) 98,3% 1,44 1,04-2,00 4,03 3,25-4,98 2,80
[0193]La MTD de irinotecán (24 mg de SN-38/kg, cada 2 días x 5) fue tan efectiva como hRS7-CL2-SN-38 en células COLO 205, porque el suero de ratón puede convertir más eficientemente el irinotecán en SN-38 (Morton et al., 2000, Cancer Res 60:4206-10) que el suero humano, pero la dosis de SN-38 en irinotecán (2400 |jg acumulativos) fue 37,5 veces mayor que con el conjugado (64 jg en total).
[0194]Los animales que portaban Capan-1 (FIG. 4C)no mostraron una respuesta significativa al irinotecán solo cuando se les administró una dosis de SN-38 equivalente al conjugado hRS7-CL2-SN-38 (p. ej., el día 35, el tamaño promedio del tumor fue 0,04 ± 0,05 cm3 en animales que recibieron 0,4 mg de SN-38/kg hRS7-SN-38 frente a 1,78 ± 0,62 cm3 en animales tratados con irinotecán que recibieron 0,4 mg/kg de SN-38 (AUCdía<35>P< 0,001;FIG. 4C). Cuando la dosis de irinotecán se aumentó 10 veces a 4 mg/kg de SN-38, la respuesta mejoró, pero aún no fue tan significativa como la del conjugado al nivel de dosis de 0,4 mg/kg de SN-38 (TV = 0,17 ± 0,18 cm3 vs, 1,69 ± 0,47 cm3, AUCdía<49>P< 0,001) (FIG.
4C). Una dosis igual de hA20-CL2-SN-38 no dirigido también tuvo un efecto antitumoral significativo en comparación con los animales tratados con irinotecán, pero el conjugado específico de hRS7 fue significativamente mejor que el CAF irrelevante (TV = 0,17 ± 0,18 cm3 frente a 0,80 ± 0,68 cm3, AUCdía<49>P< 0,018) (FIG. 4C).
[0195]A continuación, los estudios con el CAF hRS7-CL2A-SN-38 se ampliaron a otros dos modelos de cánceres epiteliales humanos. En ratones que portaban tumores pancreáticos humanos BxPC-3 (FIG. 4D), hRS7-CL2A-SN-38 nuevamente inhibió significativamente el crecimiento tumoral en comparación con ratones de control tratados con solución salina o una cantidad equivalente de hA20-CL2A-SN-38 no dirigido (TV = 0,24 ± 0,11 cm3 frente a 1,17 ± 0,45 cm3 y 1,05 ± 0,73 cm3, respectivamente; AUC<21>díasP< 0,001), o irinotecán administrado a una dosis equivalente de SN-38 10 veces mayor (TV = 0,27 ± 0,18 cm3 frente a 0,90 ± 0,62 cm3, respectivamente; AUCdía<25>P< 0,004) (FIG.4D). Curiosamente, en ratones portadores de tumores de pulmón de células escamosas humanas SK-MES-1 tratados con 0,4 mg/kg de CAF (FIG. 4E), la inhibición del crecimiento tumoral fue superior a la IgG hRS7 salina o no conjugada (TV = 0,36 ± 0,25 cm3 vs. 1,02 ± 0,70 cm3 y 1,30 ± 1,08 cm3, respectivamente; AUC<28>días,P< 0,043), pero el hA20-CL2A-SN-38 no dirigido o la MTD del irinotecán proporcionaron los mismos efectos antitumorales que el conjugado específico hRS7-SN-38 (FIG. 5E).
[0196]En todos los estudios murinos, el CAF hRS7-SN-38 fue bien tolerado en términos de pérdida de peso corporal (no mostrado).
[0197]Biodistribución de hRS7-CL2A-SN-38: se compararon las biodistribuciones de hRS7-CL2A-SN-38 o hRS7 IgG no conjugada en ratones portadores de xenoinjertos de carcinoma de pulmón de células escamosas humanas SK-MES-1 (no mostrado), utilizando los respectivos sustratos etiquetados con 111In. Se realizó un análisis farmacocinético para determinar la eliminación de hRS7-CL2A-SN-38 en relación con hRS7 no conjugado (no mostrado). El CAF se eliminó más rápido que la cantidad equivalente de hRS7 no conjugado, y el CAF exhibió una vida media y un tiempo de residencia medio aproximadamente un 40 % más cortos. No obstante, esto tuvo un impacto mínimo en la captación del tumor (no se muestra). Aunque hubo diferencias significativas a las 24 y 48 horas, a las 72 horas (captación máxima) las cantidades de ambos agentes en el tumor eran similares. Entre los tejidos normales, las diferencias hepáticas y esplénicas fueron las más llamativas (no mostradas). A las 24 horas posteriores a la inyección, había >2 veces más hRS7-CL2ASN-38 en el hígado que hRS7 IgG (no se muestra). Por el contrario, en el bazo había 3 veces más IgG hRS7 parental presente en el pico de absorción (punto de tiempo de 48 horas) que hRS7-CL2A-SN-38 (no se muestra). La captación y eliminación en el resto de los tejidos generalmente reflejaron diferencias en la concentración sanguínea (no mostradas).
[0198] Debido a que se administraron dosis dos veces por semana para la terapia, se examinó la captación tumoral en un grupo de animales que recibieron por primera vez una predosis de 0,2 mg/kg (250 |jg de proteína) del CAF hRS7 3 días antes de la inyección del anticuerpo marcado con 111In. La absorción tumoral de 111In-hRS7-CL2A-SN-38 en ratones predosificados se redujo sustancialmente en cada momento en comparación con los animales que no recibieron la dosis previa (p. ej., a las 72 horas, la absorción tumoral predosificada fue del 12,5 % ± 3,8 % ID/g vs 25,4% 6 8,1% ID/g en animales a los que no se les administró la predosis;P= 0,0123; no se muestra http://clincancerres.aacNournals.org/content/17/10/3157.long - F4). La predosificación no tuvo un impacto apreciable en el aclaramiento de sangre o la absorción de tejido (no se muestra). Estos estudios sugieren que en algunos modelos tumorales, la acumulación tumoral del anticuerpo específico puede reducirse con las dosis anteriores, lo que probablemente explica por qué la especificidad de una respuesta terapéutica podría disminuir al aumentar las dosis de CAF y por qué no es indicado un mayor aumento de la dosis.
[0199] Tolerabilidad de hRS7-CL2A-SN-38 en ratones Swiss-Webster y monos Cynomolgus. Los ratones Swiss-Webster toleraron 2 dosis durante 3 días, cada una de 4, 8 y 12 mg de SN-38/kg de hRS7-CL2A-SN-38, con pérdida de peso transitoria mínima (no se muestra). No se produjo toxicidad hematopoyética y las químicas séricas solo revelaron niveles elevados de aspartato transaminasa (AST, FIG. 5A) y alanina transaminasa (ALT, FIG. 5B). Siete días después del tratamiento, la AST aumentó por encima de los niveles normales (>298 U/L) en los 3 grupos de tratamiento (FIG. 5A), estando la mayor proporción de ratones en el grupo de 2 x 8 mg/kg. Sin embargo, 15 días después del tratamiento, la mayoría de los animales estaban dentro del rango normal. Los niveles de ALT también estaban por encima del rango normal (>77 U/L) dentro de los 7 días de tratamiento (FIG. 5B) y con evidencia de normalización el día 15. Los hígados de todos estos ratones no mostraron evidencia histológica de daño tisular (no mostrado). En cuanto a la función renal, sólo los niveles de glucosa y cloro estaban algo elevados en los grupos tratados. Con 2 x 8 mg/kg, 5 de 7 ratones tenían niveles de glucosa ligeramente elevados (rango de 273-320 mg/dL, límite superior de lo normal 263 mg/dL) que volvieron a la normalidad 15 días después de la inyección. De manera similar, los niveles de cloruro estaban ligeramente elevados, oscilando entre 116 y 127 mmol/L (extremo superior del rango normal 115 mmol/L) en los 2 grupos de dosis más altas (57% en el grupo de 2,3,8 mg/kg y 100% del grupo de ratones en el grupo de 2 x 12 mg/kg), y permaneció elevado hasta 15 días después de la inyección. Esto también podría ser indicativo de toxicidad gastrointestinal, porque la mayor parte del cloruro se obtiene mediante absorción en el intestino; sin embargo, al finalizar, no hubo evidencia histológica de daño tisular en ningún sistema de órganos examinado (no se muestra).
[0200] Debido a que los ratones no expresan Trop-2 identificado por hRS7, se requirió un modelo más adecuado para determinar el potencial del conjugado de hRS7 para uso clínico. Los estudios de inmunohistología revelaron unión en múltiples tejidos tanto en humanos como en monos Cynomolgus (mama, ojo, tracto gastrointestinal, riñón, pulmón, ovario, trompas de Falopio, páncreas, paratiroides, próstata, glándula salival, piel, timo, tiroides, amígdala, uréter, sistema urinario, vejiga y útero; no se muestran). Sobre la base de esta reactividad cruzada, se realizó un estudio de tolerabilidad en monos.
[0201] El grupo que recibió 2 x 0,96 mg de SN-38/kg de hRS7-CL2A-SN-38 no tuvo eventos clínicos significativos después de la infusión ni hasta la finalización del estudio. La pérdida de peso no superó el 7,3 % y volvió a los pesos de aclimatación el día 15. Se observaron disminuciones transitorias en la mayoría de los datos del recuento sanguíneo (los datos de neutrófilos y plaquetas se muestran en la FIG. 5C y la FIG. 5D), pero los valores no cayeron por debajo de los rangos normales. No se encontraron valores anormales en la química del suero. La histopatología de los animales sometidos a necropsia el día 11 (8 días después de la última inyección) mostró cambios microscópicos en los órganos hematopoyéticos (timo, ganglios linfáticos mandibulares y mesentéricos, bazo y médula ósea), órganos gastrointestinales (estómago, duodeno, yeyuno, íleon, ciego, colon y recto), los órganos reproductores femeninos (ovario, útero y vagina) y en el lugar de la inyección. Estos cambios variaron de mínimos a moderados y se revirtieron completamente al final del período de recuperación (día 32) en todos los tejidos, excepto en el timo y el tracto gastrointestinal, que tendían a una recuperación completa en este último momento (no mostrado).
[0202] Con el nivel de dosis de 2 * 1,92 mg de SN-38/kg del conjugado, hubo 1 muerte derivada de complicaciones gastrointestinales y supresión de la médula ósea, y otros animales dentro de este grupo mostraron eventos adversos similares, pero más graves, que los de 2 * 30,96 mg/kg grupo (no mostrado). Estos datos indican que las toxicidades limitantes de la dosis fueron idénticas a las del irinotecán; a saber, intestinal y hematológico. Por lo tanto, la DMT para hRS7-CL2A-SN-38 se encuentra entre 2 x 0,96 y 1,92 mg de SN-38/kg, lo que representa una dosis humana equivalente de 2 x 0,3 a 0,6 mg/kg de SN-38.
Discusión
[0203] Trop-2 es una proteína expresada en muchos tumores epiteliales, incluidos los cánceres de pulmón, mama, colorrectal, páncreas, próstata y ovario, lo que la convierte en un objetivo potencialmente importante para la administración de agentes citotóxicos (Ohmachi et al., 2006, Clin Cancer Res 12: 3057-63; Fong et al., 2008, Br J Cancer 99:1290-95; Cubas et al., 2009, Biochim Biophys Acta 1796:309-14). El anticuerpo RS7 se internaliza cuando se une a Trop-2 (Shih et al., 1995, Cancer Res 55:5857s-63s), lo que permite la administración intracelular directa de citotóxicos.
[0204] SN-38 es un potente inhibidor de la topoisomerasa I, con valores de CI<50>en el rango nanomolar en varias líneas celulares. Es la forma activa del profármaco irinotecán, que se utiliza para el tratamiento del cáncer colorrectal y que también tiene actividad en los cánceres de pulmón, mama y cerebro. Razonamos que un SN-38 dirigido directamente, en forma de CAF, sería un tratamiento terapéutico significativamente mejorado con respecto al CPT-11, al superar la baja y variable bioconversión de este último a SN-38 activo (Mathijssen et al., 2001), Clin Cancer Res 7:2182-94).
[0205] El péptido Phe-Lys insertado en el derivado CL2 original permitió una posible escisión mediante catepsina B. Para simplificar el proceso sintético, en CL2A se eliminó la fenilalanina y, por lo tanto, se eliminó el sitio de escisión de la catepsina B. Curiosamente, este producto tenía un perfil cromatográfico mejor definido en comparación con el perfil amplio obtenido con CL2 (no mostrado), pero lo más importante es que este cambio no tuvo impacto en la unión, estabilidad o potencia del conjugado en las pruebas en paralelo. Estos datos sugieren que SN-38 en CL2 se liberó del conjugado principalmente por la escisión en el enlace de carbonato de bencilo sensible al pH al anillo de lactona de SN-38 y no por el sitio de escisión de la catepsina B.
[0206] Citotoxicidadin vitrode hRS7 CAF contra una variedad de líneas celulares de tumores sólidos tuvo consistentemente valores de CI<50>en el rango de nmol/l. Sin embargo, las células expuestas al SN-38 libre demostraron un valor de CI<50>más bajo en comparación con el CAF. Esta disparidad entre SN-38 libre y conjugado también se informó para ENZ-2208 (Sapra et al., 2008, Clin Cancer Res 14:1888-96, Zhao et al., 2008, Bioconjug Chem 19:849-59) y NK012 (Koizumi et al., 2006, Cancer Res 66:10048-56). ENZ-2208 utiliza un PEG ramificado para unir aproximadamente de 3,5 a 4 moléculas de SN-38 por PEG, mientras que NK012 es una nanopartícula micelar que contiene un 20 % de SN-38 en peso. Con nuestro CAF, esta disparidad (es decir, la relación de potencia con SN-38 libre versus conjugado) disminuyó a medida que aumentaron los niveles de expresión de Trop-2 en las células tumorales, lo que sugiere una ventaja para la administración dirigida del fármaco. En términos de estabilidad séricain vitro,las formas CL2- y CL2A-SN-38 de hRS7-SN-38 produjeron una t/A de aproximadamente 20 horas, en contraste con la t/A corta, de 12,3 minutos. reportado para ENZ-2208 (Zhao et al., 2008, Bioconjug Chem 19:849-59), pero similar a la liberación del 57 % de SN-38 de NK012 en condiciones fisiológicas después de 24 horas (Koizumi et al., 2006, Cancer Res 66:10048-56).
[0207] El tratamiento de ratones portadores de tumores con hRS7-SN-38 (ya sea con CL2-SN-38 o CL2A-SN-38) inhibió significativamente el crecimiento del tumor en 5 modelos de tumores diferentes. En 4 de ellos, se observaron regresiones tumorales y, en el caso de Calu-3, todos los ratones que recibieron la dosis más alta de hRS7-SN-38 estaban libres de tumores al finalizar el estudio. A diferencia de lo que ocurre en los seres humanos, el irinotecán se convierte de manera muy eficiente en SN-38 mediante una esterasa plasmática en ratones, con una tasa de conversión superior al 50 %, y produce una mayor eficacia en ratones que en humanos (Morton et al., 2000, Cancer Res 60: 4206-10; Furman et al., 1999, J Clin Oncol 17:1815-24). Cuando se administró irinotecán a niveles de SN-38 10 veces superiores o equivalentes, hRS7-SN-38 fue significativamente mejor en el control del crecimiento tumoral. Sólo cuando se administró irinotecán a su DMT de 24 mg/kg cada 2 días x 5 (37,5 veces más SN-38) igualó la eficacia de hRS7-SN-38. En los pacientes, esperaríamos que esta ventaja favoreciera aún más a hRS7-CL2A-SN-38, porque la bioconversión de irinotecán sería sustancialmente menor.
[0208] También demostramos en algunas líneas celulares que expresan antígenos, como SK-MES-1, que el uso de un CAF que se une a antígenos no garantiza mejores respuestas terapéuticas que un conjugado irrelevante y que no se une. Este no es un hallazgo inusual o inesperado. De hecho, los conjugados SN-38 no vinculantes mencionados anteriormente mejoran la actividad terapéutica en comparación con el irinotecán, por lo que se espera que un conjugado IgG-SN-38 irrelevante tenga cierta actividad. Esto está relacionado con el hecho de que los tumores tienen vasos inmaduros y con fugas que permiten el paso de macromoléculas mejor que los tejidos normales (Jain, 1994, Sci Am 271:58-61). Con nuestro conjugado, el 50% del SN-38 se liberará en aproximadamente 13 horas cuando el pH se reduce a un nivel que imita los niveles lisosomales (p. ej., pH 5,3 a 37 °C; datos no mostrados), mientras que al pH neutro de suero, la tasa de liberación se reduce casi 2 veces. Si un conjugado irrelevante ingresa a un microambiente tumoral ácido, se espera que libere algo de SN-38 localmente. Otros factores, como la fisiología del tumor y las sensibilidades innatas al fármaco, también desempeñarán un papel en la definición de esta actividad “base”. Sin embargo, un conjugado específico con un tiempo de residencia más largo debería tener una potencia mejorada con respecto a esta respuesta inicial siempre que haya suficiente antígeno para capturar el anticuerpo específico. Los estudios de biodistribución en el modelo SK-MES-1 también mostraron que si el antígeno tumoral se satura como consecuencia de dosis sucesivas, la absorción tumoral del conjugado específico se reduce, lo que produce resultados terapéuticos similares a los encontrados con un conjugado irrelevante.
[0209] Aunque es un desafío hacer comparaciones directas entre nuestro CAF y los informes publicados de otros agentes dispensadores de SN-38, se pueden hacer algunas observaciones generales. En nuestros estudios de terapia, la dosis individual más alta fue de 0,4 mg/kg de SN-38. En el modelo Calu-3, solo se administraron 4 inyecciones para una dosis acumulativa total de 1,6 mg/kg de SN-38 o 32 mg de SN-38 en un ratón de 20 g. Se realizaron múltiples estudios con ENZ-2208 utilizando su MTD de 10 mg/kg x 5 (Sapra et al., 2008, Clin Cancer Res 14:1888-96; Pastorini et al., 2010, Clin Cancer Res 16:4809-21), y los estudios preclínicos con NK012 involucraron su DMT de 30 mg/kg x 3 (Koizumi et al., 2006, Cancer Res 66:10048-56). Por lo tanto, se obtuvieron efectos antitumorales significativos con hRS7-SN-38 a 30 veces y 55 veces menos equivalentes de SN-38 que las dosis informadas en ENZ-2208 y NK012, respectivamente. Incluso con 10 veces menos CAF de hRS7 (0,04 mg/kg), se observaron efectos antitumorales significativos, mientras que no se presentaron dosis más bajas de ENZ-2208, y cuando la dosis de NK012 se redujo 4 veces a 7,5 mg/kg, la eficacia fue menor. perdido (Koizumi et al., 2006, Cancer Res 66:10048-56). Los ratones normales no mostraron toxicidad aguda con una dosis acumulada durante 1 semana de 24 mg/kg de SN-38 (1500 mg/kg del conjugado), lo que indica que la MTD era mayor. Por lo tanto, los animales con tumores fueron tratados eficazmente con cantidades de 7,5 a 15 veces menores de equivalentes de SN-38.
[0210] Los estudios de biodistribución revelaron que hRS7-CL2A-SN-38 tuvo una absorción tumoral similar a la hRS7 IgG parental, pero se eliminó sustancialmente más rápido con una absorción hepática 2 veces mayor, lo que puede deberse a la hidrofobicidad de SN-38. Dado que el CAF se elimina a través del hígado, se esperaba que las toxicidades hepáticas y gastrointestinales limitaran la dosis. Aunque los ratones tenían evidencia de aumento de las transaminasas hepáticas, la toxicidad gastrointestinal fue, en el mejor de los casos, leve, con solo una pérdida transitoria de peso y no se observaron anomalías en el examen histopatológico. Curiosamente, no se observó toxicidad hematológica. Sin embargo, los monos mostraron un perfil de toxicidad idéntico al esperado para el irinotecán, siendo la toxicidad gastrointestinal y hematológica la dosis limitante.
[0211] Debido a que Trop-2 reconocido por hRS7 no se expresa en ratones, era importante realizar estudios de toxicidad en monos que tienen una expresión tisular de Trop-2 similar a la de los humanos. Los monos toleraron 0,96 mg/kg/dosis (~ 12 mg/m2) con una toxicidad leve y reversible, que se extrapola a una dosis humana de ~0,3 mg/kg/dosis (~11 mg/m2). En un ensayo clínico de Fase I de NK012, los pacientes con tumores sólidos toleraron 28 mg/m2 de SN-38 cada 3 semanas con neutropenia de Grado 4 como toxicidad limitante de la dosis (DLT; Hamaguchi et al., 2010, Clin Cancer Res 16:5058 -66). De manera similar, los ensayos clínicos de Fase I con ENZ-2208 revelaron neutropenia febril limitante de dosis, con una recomendación de administrar 10 mg/m2 cada 3 semanas o 16 mg/m2 si a los pacientes se les administró G-CSF (Kurzrock et al., AACR-NCI-EORTC International Conference on Molecular Targets and Cancer Therapeutics; 15-19 de noviembre de 2009; Boston, MA; Poster No C216; Patnaik et al, Conferencia internacional AACR-NCIEORTC sobre objetivos moleculares y terapias contra el cáncer; 15-19 de noviembre de 2009; Boston, MA; póster n.° C221). Debido a que los monos toleraron una dosis equivalente humana acumulada de 22 mg/m2, parece que aunque hRS7 se une a varios tejidos normales, la DMT para un único tratamiento del CAF de hRS7 podría ser similar a la de otros agentes SN-38 no dirigidos. De hecho, la especificidad del anticuerpo anti-Trop-2 no pareció desempeñar un papel en la definición de la DLT, porque el perfil de toxicidad era similar al del irinotecán. Más importante aún, si se puede lograr actividad antitumoral en humanos como en ratones que respondieron con una dosis equivalente humana de solo 0,03 mg de equivalentes de SN-38/kg/dosis, entonces se pueden obtener respuestas antitumorales significativas desde el punto de vista clínico.
[0212] En conclusión, los estudios de toxicología en monos, combinados con modelos de xenoinjertos de cáncer humanoin vivoen ratones, han indicado que este CAF dirigido a Trop-2 es una terapéutica eficaz en varios tumores de diferente origen epitelial.
Ejemplo 4. CAF anti-Trop-2 que comprende hRS7 y paclitaxel
[0213] Se preparó un nuevo conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) conjugando paclitaxel (TAXOL®) con el anticuerpo hRS7 anti-Trop-2 humano (hRS7-paclitaxel). El producto final tenía una relación media de sustitución de fármaco a anticuerpo de 2,2. Este CAF se ensayóin vitroutilizando dos líneas celulares positivas para Trop-2 diferentes como objetivos: BxPC-3 (adenocarcinoma de páncreas humano) y MDA-MB-468 (carcinoma de mama humano triple negativo). Un día antes de agregar el CAF, se recogieron células del cultivo de tejidos y se sembraron en placas de 96 pocillos a razón de 2000 células por pocillo. Al día siguiente, las células se expusieron a paclitaxel libre (6,1 x 3 x 10'11 a 4 x 3 x 10' 6 M) o al fármaco equivalente de hRS7-paclitaxel. A modo de comparación, también se probaron hRS7-SN-38 y SN-38 libre en un rango de 3,84 x 10‘12 a 2,5 x 3 x 10‘7 M. Las placas se incubaron a 37°C durante 96 h. Después de este período de incubación, se añadió un sustrato MTS a todas las placas y se leyó el desarrollo del color a intervalos de media hora hasta que los pocillos de control no tratados tuvieron una lectura de Do a 492 nm de aproximadamente 1,0. La inhibición del crecimiento se midió como un porcentaje del crecimiento en relación con las células no tratadas utilizando el software Microsoft Excel y Prism (regresión no lineal para generar curvas sigmoidales de respuesta a la dosis que producen valores de CI<50>).
[0214] El CAF hRS7-paclitaxel exhibió actividad citotóxica en la línea celular de mama MDA-MB-468 (FIG. 6), con un valor de CI<50>aproximadamente 4,5 veces mayor que hRS7-SN-38. El paclitaxel libre era mucho más potente que el SN-38 libre (FIG. 6). Mientras que la CI<50>para SN-38 libre fue 1,54 x 10‘9 M, la CI<50>para paclitaxel libre fue inferior a 6,1 x 10‘ 11 M. Se obtuvieron resultados similares para la línea celular pancreática BxPC-3 (FIG. 7) en la que el hRS7-paclitaxel CAF tenía un valor de CI<50>aproximadamente 2,8 veces mayor que el CAF hRS7-SN-38. Estos resultados muestran la eficacia del paclitaxel conjugado con anti-Trop-2in vitro,con valores de CI<50>en el rango nanomolar, similar al CAF hRS7-SN-38.
Ejemplo 5. Ensayo de unión celular de anticuerpos anti-Trop-2
[0215] Se obtuvieron dos anticuerpos monoclonales murinos diferentes contra Trop-2 humano para la conjugación con CAF. El primero, 162-46.2, se purificó a partir de un hibridoma (ATCC, HB-187) cultivado en botellas giratorias. Se adquirió un segundo anticuerpo, MAB650, de R&D Systems (Minneapolis, MN). Para comparar la unión, se utilizó como diana el carcinoma gástrico humano Trop-2 positivo, NCI-N87. Las células (1,5 x 105/pocillo) se sembraron en placas de 96 pocillos el día antes del ensayo de unión. A la mañana siguiente, se generó una curva dosis/respuesta con 162-46,2, MAB650 y RS7 murino (0,03 a 66 nM). Estos anticuerpos primarios se incubaron con las células durante 1,5 h a 4°C. Se lavaron los pocillos y se añadió un anticuerpo secundario anti-HRP de ratón a todos los pocillos durante 1 hora a 4°C. Los pocillos se lavan nuevamente y luego se agrega un sustrato luminiscente. Las placas se leyeron utilizando el lector de placas Envision y los valores se informan como unidades luminiscentes relativas.
[0216] Los tres anticuerpos tenían valores deKdsimilares de 0,57 nM para RS7, 0,52 nM para 162-46,2 y 0,49 nM para MAB650. Sin embargo, al comparar la unión máxima (Bmax) de 162-46,2 y MAB650 con RS7, se redujeron en un 25% y un 50%, respectivamente (BMax 11.250 para RS7, 8.471 para 162-46.2 y 6.018 para MAB650), lo que indica diferentes propiedades de unión en comparación con RS7.
Ejemplo 6. C itotoxicidad del CAF Anti-Trop-2 (MAB650-SN-38)
[0217] Se preparó un nuevo CAF anti-Trop-2 con SN-38 y MAB650, lo que produjo una relación media de sustitución de fármaco por anticuerpo de 6,89. Se realizaron ensayos de citotoxicidad para comparar los CAF MAB650-SN-38 y hRS7-SN-38 utilizando dos líneas celulares de adenocarcinoma de páncreas humano diferentes (BxPC-3 y Capan-1) y una línea celular de carcinoma de mama triple negativo humano (MDA-MB-468) como objetivos.
[0218] Un día antes de agregar los CAF, se recogieron células del cultivo de tejidos y se sembraron en placas de 96 pocillos. Al día siguiente, las células se expusieron a hRS7-SN-38, MAB650-SN-38 y SN-38 libre en un rango de fármaco de 3,84 x 10'12 a 2,5 x 10'7 M. Se usó MAB650 no conjugado como control en dosis equivalentes de proteína como el MAB650-SN-38. Las placas se incubaron a 37°C durante 96 h. Después de este período de incubación, se añadió un sustrato MTS a todas las placas y se leyó para desarrollo del color a intervalos de media hora hasta que se alcanzó una DO<492>nm de aproximadamente 1,0 para las células no tratadas. La inhibición del crecimiento se midió como un porcentaje del crecimiento en relación con las células no tratadas utilizando el software Microsoft Excel y Prism (regresión no lineal para generar curvas sigmoideas de respuesta a la dosis que producen valores de CI<50>).
[0219] Como se muestra en la FIG. 8, hRS7-SN-38 y MAB650-SN-38 tuvieron efectos inhibidores del crecimiento similares con valores de CI<50>en el rango bajo de nM, que es típico de los SN-38-CAF en estas líneas celulares. En la línea celular de adenocarcinoma de páncreas humano Capan-1 (FIG. 8A), el CAF hRS7-SN-38 mostró una CI<50>de 3,5 nM, en comparación con 4,1 nM para el CAF MAB650-SN-38 y 1,0 nM para SN-38 libre. En la línea celular de adenocarcinoma de páncreas humano BxPC-3 (FIG.8B), el CAF hRS7-SN-38 mostró una CI<50>de 2,6 nM, en comparación con 3,0 nM para el Ca F MAB650-SN-38 y 1,0 nM para SN-38 libre. En la línea celular de adenocarcinoma gástrico NCI-N87 humano (FIG. 8C), el CAF hRS7-SN-38 mostró una CI<50>de 3,6 nM, en comparación con 4,1 nM para el CAF MAB650-SN-38 y 4,3 nM para S<n>-38 libre.
[0220] En resumen, en estos ensayosin vitro,los conjugados SN-38 de dos anticuerpos anti-Trop-2, hRS7 y MAB650, mostraron eficacias iguales contra varias líneas de células tumorales, que fue similar a la del SN-38 libre. Debido a que la función de direccionamiento de los anticuerpos anti-Trop-2 sería un factor mucho más significativoin vivoquein vitro,los datos respaldan que los CAF anti-Trop-2-SN-38 como clase serían muy eficacesin vivo,como se ha demostrado en los ejemplos anteriores para hRS7-SN-38.
Ejemplo 7. C itotoxicidad del CAF Anti-Trop-2 (162-46.2-SN-38)
[0221] Se preparó un nuevo CAF anti-Trop-2 con SN-38 y 162-46,2, lo que produjo una relación de sustitución de fármaco por anticuerpo de 6,14. Se realizaron ensayos de citotoxicidad para comparar los CAF 162-46.2-SN-38 y hRS7-SN-38 utilizando dos líneas celulares positivas para Trop-2 diferentes como objetivos, el adenocarcinoma de páncreas humano BxPC-3 y el carcinoma de mama negativo triple humano MDA-MB-468.
[0222] Un día antes de agregar el CAF, se recogieron células del cultivo de tejidos y se sembraron en placas de 96 pocillos a razón de 2000 células por pocillo. Al día siguiente, las células se expusieron a hRS7-SN-38, 162-46.2-SN-38 o SN-38 libre en un rango de fármaco de 3,84 x 10'12 a 2,5 x 10'7 M. 162-46.2 y hRS7 no conjugados. se utilizaron como controles con las mismas dosis equivalentes de proteína que 162-46.2-SN-38 y hRS7-SN-38, respectivamente. Las placas se incubaron a 37°C durante 96 h. Después de este período de incubación, se añadió un sustrato MTS a todas las placas y se leyó el desarrollo del color a intervalos de media hora hasta que los pocillos de control no tratados tuvieron una lectura de DO492 nm de aproximadamente 1,0. La inhibición del crecimiento se midió como un porcentaje del crecimiento en relación con las células no tratadas utilizando el software Microsoft Excel y Prism (regresión no lineal para generar curvas sigmoidales de respuesta a la dosis que producen valores de CI<50>).
[0223] Como se muestra en la FIG. 9A y FIG.9B, el CAF 162-46.2-SN-38 tenía valores de CI<50>similares en comparación con hRS7-SN-38. Cuando se ensayó contra la línea celular de adenocarcinoma de páncreas humano BxPC-3 (FIG. 9A), hRS7-SN-38 tenía una CI<50>de 5,8 nM, en comparación con 10,6 nM para 162-46.2-SN-38 y 1,6 nM para<s>N-38 libre.
Cuando se ensayó contra la línea celular de adenocarcinoma de mama humano MDAMB-468 (FIG. 9B), hRS7-SN-38 tuvo una CI<50>de 3,9 nM, en comparación con 6,1 nM para 162-46.2-SN-38 y 0,8 nM para SN-38 libre. Los anticuerpos libres por sí solos mostraron poca citotoxicidad para cualquiera de las líneas celulares cancerosas positivas para Trop-2.
[0224] En resumen, al comparar las eficaciasin vitrode tres anticuerpos anti-Trop-2 diferentes conjugados con el mismo fármaco citotóxico, los tres CAF exhibieron efectos citotóxicos equivalentes contra una variedad de líneas celulares cancerosas positivas para Trop-2. Estos datos respaldan que la clase de anticuerpos anti-Trop-2, incorporados en CAF conjugados con fármacos, son agentes terapéuticos anticancerígenos eficaces para tumores sólidos que expresan Trop-2.
Ejemplo 8. Ensayos clínicos con CAF IMMU-132 Anti-Trop-2 que comprende anticuerpo hRS7 conjugado con SN-38
Resumen
[0225] El presente ejemplo informa los resultados de un ensayo clínico de fase I y la extensión en curso de fase II con IMMU-132, un CAF del anticuerpo anti-Trop-2 hRS7 humanizado internalizante conjugado mediante un conector sensible al pH a SN-38 (relación media de fármacos-anticuerpos = 7,6). Trop-2 es una proteína transmembrana de tipo I, transductora de calcio, expresada con alta densidad (~1 x 105), frecuencia y especificidad por muchos carcinomas humanos, con expresión limitada en el tejido normal. Los estudios preclínicos en ratones desnudos portadores de xenoinjertos de tumor pancreático humano Capan-1 han revelado que IMMU-132 es capaz de administrar hasta 120 veces más SN-38 al tumor que el derivado de una terapia con irinotecán máximamente tolerada.
[0226] El presente Ejemplo informa el ensayo inicial de Fase I de 25 pacientes que habían fracasado en múltiples terapias previas (algunos incluían fármacos inhibidores de la topoisomerasa I/II), y la extensión en curso de Fase II que ahora informa sobre 69 pacientes, incluidos pacientes colorrectales (CCR), cánceres de pulmón de células pequeñas y de células no pequeñas (CPCP, CPCNP, respectivamente), de mama triple negativo (TNBC), de páncreas (PDC), de esófago y otros.
[0227] Como se analiza en detalle a continuación, Trop-2 no se detectó en suero, pero se expresó fuertemente (>2+) en la mayoría de los tumores archivados. En un diseño de ensayo 3+3, IMMU-132 se administró los días 1 y 8 en ciclos repetidos de 21 días, comenzando con 8 mg/kg/dosis, luego 12 y 18 mg/kg antes de la neutropenia limitante de la dosis. Para optimizar el tratamiento acumulativo con un mínimo retrasos, la fase II se centra en 8 y 10 mg/kg (n=30 y 14, respectivamente). En 49 pacientes que informaron EA relacionados en este momento, se produjo neutropenia >G3 en el 28% (4% G4). Las toxicidades no hematológicas más comunes inicialmente en estos pacientes han sido fatiga (55%;>G3 = 9%), náuseas (53%;>G3=0%), diarrea (47%;>G3 = 9%), alopecia (40%), y vómitos (32%;>G3 = 2%). Se encontró UGT1A1 *28/*28 homocigótico en 6 pacientes, 2 de los cuales tenían toxicidades hematológicas y gastrointestinales más graves. En la Fase I y las fases de expansión, ahora hay 48 pacientes (excluyendo PDC) que son evaluables mediante RECIST/CT para obtener la mejor respuesta. Siete (15%) de los pacientes tuvieron una respuesta parcial (RP), incluidos pacientes con CCR (N = 1), t Nb C (N = 2), CPCP (N = 2), CPCNP (N = 1) y cánceres de esófago. (N = 1), y otros 27 pacientes (56%) tuvieron enfermedad estable (EE), para un total de 38 pacientes (79%) con respuesta a la enfermedad; 8 de 13 pacientes con PDC evaluables por TC (62%) tuvieron EE, con una mediana de tiempo hasta la progresión (TTP) de 12,7 semanas en comparación con 8,0 semanas en su último tratamiento previo. El TTP para los 48 pacientes restantes es de 12,6+ semanas(rango de 6,0 a 51,4 semanas).
[0228] CEA y CA19-9 en plasma se correlacionaron con las respuestas. No se detectaron anticuerpos anti-hRS7 o anti-SN-38 a pesar de la dosificación durante meses. El conjugado se eliminó del suero en 3 días, lo que coincide con estudiosin vivoen animales donde el 50% del SN-38 se liberó diariamente, con >95% del SN-38 en el suero unido a la IgG en una forma no glucoronizada y en concentraciones hasta 100 veces superiores a las del SN-38 informadas en pacientes que recibieron irinotecán. Estos resultados muestran que el CAF que contiene hRS7-SN-38 es terapéuticamente activo en cánceres sólidos metastásicos, con diarrea y neutropenia manejables.
Farmacocinética
[0229] Se utilizaron dos métodos ELISA para medir el aclaramiento de la IgG (captura con anticuerpo idiotipo anti-hRS7) y el conjugado intacto (captura con IgG anti-SN-38/sonda con anticuerpo idiotipo anti-hRS7). SN-38 se midió mediante HPLC. La fracción IMMU-132 total (conjugado intacto) se eliminó más rápidamente que la IgG (no se muestra), lo que refleja la liberación gradual conocida de SN-38 del conjugado. La determinación por HPLC de SN-38 (sin unir y TOTAL) mostró que >95 % del SN-38 en el suero estaba unido a la IgG. Las concentraciones bajas de SN-38G sugieren que el SN-38 unido a la IgG está protegido de la glucuronidación. La comparación de ELISA para conjugado y HPLC SN-38 reveló que ambos se superponen, lo que sugiere que ELISA es un sustituto para monitorear la autorización del SN-38.
[0230] En la Tabla 3 se proporciona un resumen del régimen de dosificación y la encuesta de pacientes.
Tabla 3. Parámetros del ensayo clínico
Estado del ensayo clínico
[0231] Se informó sobre un total de 69 pacientes (incluidos 25 pacientes en la Fase I) con diversos cánceres metastásicos que tenían una mediana de 3 terapias previas. Ocho pacientes tuvieron progresión clínica y se retiraron antes de la evaluación por TC. Se informaron por separado trece pacientes con cáncer de páncreas evaluables por TC. La mediana de TTP (tiempo hasta la progresión) en pacientes con PDC fue de 11,9 semanas (rango de 2 a 21,4 semanas) en comparación con la mediana de TTP de 8 semanas para la última terapia anterior.
[0232] Un total de 48 pacientes con diversos cánceres tuvieron al menos una evaluación por TC a partir de la cual se determinó la mejor respuesta (FIG. 10) y el tiempo hasta la progresión (TTP; FIG. 11). Para resumir los datos de Mejor Respuesta, de 8 pacientes evaluables con TNBC (cáncer de mama triple negativo), hubo 2 RP (respuesta parcial), 4 EE (enfermedad estable) y 2 EP (enfermedad progresiva) para una respuesta total [RP EE] de 6/8 (75%). Para CPCP (cáncer de pulmón de células pequeñas), de 4 pacientes evaluables hubo 2 RP, 0 EE y 2 EP para una respuesta total de 2/4 (50%). Para CCR (cáncer colorrectal), de<18>pacientes evaluables hubo 1 RP, 11 Ee y 6 Ep para una respuesta total de 12/18 (67%). Para el cáncer de esófago, de 4 pacientes evaluables hubo 1 RP, 2 EE y 1 EP para una respuesta total de 3/4 (75%). Para CPCNP (cáncer de pulmón de células no pequeñas), de 5 pacientes evaluables hubo 1 RP, 3 EE y 1 EP para una respuesta total de 4/5 (80%). Sobre todos los pacientes tratados, de 48 pacientes evaluables hubo 7 RP, 27 EE y 14 EP para una respuesta total de 34/48 (71%). Estos resultados demuestran que el CAF anti-Trop-2 (hRS7-SN-38) mostró una eficacia clínica significativa contra una amplia gama de tumores sólidos en pacientes humanos.
[0233] Los efectos secundarios informados de la terapia (eventos adversos) se resumen en la Tabla 4. Como se desprende de los datos de la Tabla 4, la eficacia terapéutica de hRS7-SN-38 se logró con dosis de CAF que mostraban un nivel aceptablemente bajo de efectos secundarios adversos.
Tabla 4.
[0234] Las respuestas parciales ejemplares al CAF anti-Trop-2 se confirmaron mediante datos de TC (no mostrados). Como RP ejemplar en CCR, una mujer de 62 años diagnosticada por primera vez con CCR se sometió a una hemicolectomía primaria. Cuatro meses después, se le realizó una resección hepática por metástasis hepáticas y recibió 7 meses de tratamiento con FOLFOX y 1 mes de 5FU. Presentó múltiples lesiones principalmente en el hígado (3+ Trop-2 según inmunohistología), por lo que ingresó al ensayo hRS7-SN-38 con una dosis inicial de 8 mg/kg aproximadamente 1 año después del diagnóstico inicial. En su primera evaluación por TC, se logró una RP, con una reducción del 37 % en las lesiones diana (no se muestra). El paciente continuó el tratamiento, logrando una reducción máxima del 65 % después de 10 meses de tratamiento (no mostrado) con una disminución del CEA de 781 ng/ml a 26,5 ng/ml), antes de progresar 3 meses después.
[0235] Como RP ejemplar en CPCNP, a un hombre de 65 años se le diagnosticó CPCNP en estadio IIIB (células cuadradas). El tratamiento inicial con carboplatino/etopósido (3 meses) junto con XRT de 7000 cGy dio como resultado una respuesta que duró 10 meses. Luego comenzó la terapia de mantenimiento con Tarceva, que continuó hasta que fue considerado para el ensayo IMMU-132, además de someterse a una laminectomía lumbar. Recibió primera dosis de IMMU-132 después de 5 meses de Tarceva, presentando en ese momento una lesión de 5,6 cm en pulmón derecho con abundante derrame pleural. Acababa de completar su sexta dosis dos meses después cuando la primera tomografía computarizada mostró que la lesión diana primaria se redujo a 3,2 cm (no se muestra).
[0236] Como RP ejemplar en CPCP, a una mujer de 65 años se le diagnosticó CPCP pobremente diferenciado. Después de recibir carboplatino/etopósido (inhibidor de Topo-II) que terminó después de 2 meses sin respuesta, seguido de topotecán (inhibidor de Topo-I) que terminó después de 2 meses, también sin respuesta, recibió<x>R<t>local (3000 cGy) que terminó 1 mes después. Sin embargo, al mes siguiente la progresión había continuado. El paciente comenzó con IMMU-132 el mes siguiente (12 mg/kg; reducido a 6,8 mg/kg; expresión de Trop-23+), y después de dos meses de IMMU-132, se observó una reducción del 38% en las lesiones diana, incluida una reducción sustancial en la lesión pulmonar principal (no se muestra). El paciente evolucionó 3 meses después de recibir 12 dosis.
[0237] Estos resultados son significativos porque demuestran que el CAF anti-Trop-2 fue eficaz, incluso en pacientes que habían fracasado o progresado después de múltiples terapias previas.
[0238] En conclusión, en las dosis utilizadas, la toxicidad primaria fue una neutropenia manejable, con pocas toxicidades de Grado 3. IMMU-132 mostró evidencia de actividad (RP y EE duradera) en pacientes en recaída/refractarios con cáncer de mama triple negativo, cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer colorrectal y cáncer de esófago, incluidos pacientes con antecedentes de recaer en la terapia con inhibidores de la topoisomerasa-I. Estos resultados muestran la eficacia del CAF anti-Trop-2 en una amplia gama de cánceres que son resistentes a las terapias existentes.
Ejemplo 9. Conjugación de productos SN-38 bifuncionales con anticuerpos ligeramente reducidos
[0239] El MAb humanizado anti-CEACAM5, hMN-14 (también conocido como labetuzumab), el MAb humanizado anti-CD22, hLL2 (también conocido como epratuzumab), el MAb humanizado anti-CD20, hA20 (también conocido como veltuzumab), el MAb humanizado anti-CD20, hA20 (también conocido como veltuzumab), Se conjugaron MAb humanizado EGP-1, hRS7 y MAb humanizado antimucina, hPAM4 (también conocido como clivatuzumab), con SN-38 utilizando un conector CL2A. Cada anticuerpo se redujo con ditiotreitol (DTT), utilizado en un exceso molar de 50 a 70 veces, en PBS 40 mM, pH 7,4, que contenía EDTA 5,4 mM, a 37 °C (baño) durante 45 min. El producto reducido se purificó mediante cromatografía de exclusión por tamaño y/o diafiltración, y se intercambió el tampón por un tampón adecuado a pH 6,5. El contenido de tiol se determinó mediante el ensayo de Ellman y estuvo en el rango de 6,5 a 8,5 SH/IgG. Alternativamente, los anticuerpos se redujeron con Tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP) en tampón fosfato a un pH en el rango de 5-7, seguido de conjugaciónin situ.El MAb reducido se hizo reaccionar con un exceso molar de aproximadamente 10 a 15 veces de CL2A-SN-38 usando DMSO al 7-15 % v/v como codisolvente y se incubó durante 20 minutos a temperatura ambiente. El conjugado se purificó mediante SEC centrifugada, paso a través de una columna hidrófoba y finalmente mediante ultrafiltración-diafiltración. Se analizó el producto para determinar SN-38 mediante absorbancia a 366 nm y correlacionándolo con valores estándar, mientras que la concentración de proteína se dedujo de la absorbancia a 280 nm, corregida por el desbordamiento de absorbancia de SN-38 a esta longitud de onda. De esta forma se determinaron las relaciones de sustitución SN-38/MAb. Los conjugados purificados se almacenaron como formulaciones liofilizadas en viales de vidrio, se taparon al vacío y se almacenaron en un congelador a -20 °C. Las relaciones de sustitución molar (MSR) de SN-38 obtenidas para estos conjugados estuvieron típicamente en el rango de 5 a 7.
Ejemplo 10. Terapia combinada con CAF anti-Trop-2 en CPCP
[0240] Dado que el cisplatino es uno de los principales quimioterapéuticos utilizados en combinación con irinotecán en el cáncer de pulmón de células pequeñas (CpCP) avanzado, se realizó un experimento para probar la combinación de cisplatino con IMMU-132 en ratones con tumores de CPCP humano (DMS 53). Además, se ensayó el carboplatino en este modelo de tumor, ya que también se utiliza clínicamente en CPCP.
[0241] A ratones hembra CB-17 SCID se les inyectó s.c. con una suspensión tumoral hecha de tumores madre DMS 53 (20% p/v) más células recolectadas de cultivo de tejidos (5x106 células por ratón) mezcladas 1:1 con matrigel. Una vez que los tumores alcanzaron un volumen tumoral medio de 0,270 ± 0,048 cm3, los animales se dividieron en nueve grupos de tratamiento diferentes de 9 ratones cada uno. Tres grupos de ratones recibieron IMMU-132 (500, 250 o 100 |jg i.p). mientras que un grupo de control recibió un conjugado anticuerpo-fármaco no dirigido a tumores elaborado con h679, un antihistamínico-succinil-glicina IgG humanizado (h679-SN-38; 500 jg i.p.). Todos fueron administrados dos veces por semana durante 4 semanas. Dos grupos recibieron sólo quimioterapia con cisplatino (5 mg/kg i.p). o carboplatino (50 mg/kg i.p). semanalmente durante 4 semanas. Dos grupos recibieron una combinación de IMMU-132 (250 jg i.v. semanamentex 4 semanas) más cisplatino o carboplatino. Un grupo de control final de ratones no tratados recibió solución salina (100 ml i.p. dos veces por semana durante 3,4 semanas). Se midieron los tumores y se pesaron los ratones dos veces por semana.
RESULTADOS
[0242] Los volúmenes tumorales medios para los diversos grupos se muestran en la FIG. 12. Las tres dosis de IMMU-132 proporcionaron un efecto antitumoral significativo en comparación con los animales de control con solución salina(P<0,0161; pruebatde una cola de AUC). La terapia con la dosis más alta de IMMU-132 (500 jg ) produjo regresiones tumorales significativamente mayores en ratones con tumores en comparación con todos los grupos de monoterapia, incluido el control h679-SN-38 (P <0,0032; pruebatde dos colas de A<u>C).
[0243] Para los grupos de combinación, IMMU-132 (250 jg ) más carboplatino (FIG. 13) se acercaba a la importancia. (P = 0,0983; prueba t de dos colas de AUC) en el momento en que el primer ratón del grupo de control en monoterapia con carboplatino alcanzó su punto final de volumen tumoral >1,0 cm3 el día 41 (día 14 de la terapia). Sin embargo, en términos de volúmenes tumorales medios absolutos, en este día la combinación de IMMU-132 (250 jg ) más carboplatino tuvo tumores significativamente más pequeños en comparación con la monoterapia con carboplatino (0,166 ± 0,019 cm3 frente a 0,602 ± 0,224 cm3, respectivamente;P= 0,0004, prueba t de dos colas). En comparación con los ratones tratados solo con IMMU-132 (250 jg dos veces por semana), los animales tratados con IMMU-132 (semanalmente) más carboplatino tuvieron tumores significativamente más pequeños a partir del día 73 (último día de comparación debido a que varios ratones alcanzaron el punto final; 0,745 ± 0,162 cm3 frente a 0,282 ± 0,153 cm3, respectivamente (P =0,0003,pruebatde dos colas AUC).
[0244] Los ratones tratados con la combinación de IMMU-132 (250 jg ) más cisplatino (FIG. 14) exhibieron una inhibición significativa del crecimiento tumoral en comparación con la monoterapia con cisplatino (P = 0,0002, pruebatde dos colas de AUC). Cuando se compararon los volúmenes tumorales el día 73 (último día de comparación debido a que varios ratones del grupo de monoterapia con cisplatino alcanzaron el punto final), el grupo de combinación tenía tumores que eran aproximadamente 6,2 veces más pequeños que los del grupo de monoterapia con cisplatino (0,123 ± 0,040 cm3 vs.
0,758 ± 0,240 cm3, respectivamente (P <0,0001, pruebatde dos colas). Asimismo, los ratones tratados con el esquema semanal de IMMU-132 (250 jg ) combinado con cisplatino tuvieron tumores significativamente más pequeños que los animales tratados solo con IMMU-132 (250 jg), aunque en el grupo de monoterapia IMMU-132 se administró dos veces por semana (P <0,0001, pruebatde dos colas AUC). Finalmente, la combinación de IMMU-132 más cisplatino demostró ser superior a todos los demás grupos, incluidos los grupos de tratamiento en monoterapia con dosis altas de IMMU-132 más carboplatino y dosis altas de IMMU-132 (500 jg ) (P <0,0066, pruebatde dos colas AUC).
[0245] Tanto el tratamiento con IMMU-132 más carboplatino como el tratamiento con IMMU-132 más cisplatino fueron bien tolerados por los ratones. Un aspecto inusual de este modelo de tumor fue la observación de que los ratones que portaban tumores DMS 53 presentaban caquexia (FIG. 15) con una caída de peso en promedio superior al 15 % desde el principio. Por ejemplo, en los ratones de control con solución salina, a medida que la carga tumoral aumentó de 0,270 ± 0,053 cm3 el día 27 a 0,683 ± 0,185 cm3 el día 41, el peso corporal del animal disminuyó un 16,9% ± 3,4%. Sin embargo, a medida que los efectos antitumorales de la monoterapia IMMU-132 (500 |jg) o las combinaciones de IMMU-132 más carboplatino o cisplatino se hicieron evidentes, los ratones comenzaron a ganar peso nuevamente. Por ejemplo, en el grupo de IMMU-132 más carboplatino, los ratones perdieron su mayor peso hacia el día 38 (15,3% ± 5,6%), después de lo cual comenzaron a recuperar este peso perdido a medida que los tumores retrocedieron y los ratones regresaron al 100% de su peso. peso inicial el día 58. Durante ese tiempo, los tumores retrocedieron a 0,128 ± 0,0,018 cm3 desde un tamaño inicial de 0,270 ± 0,050 cm3 el día 27. Sin embargo, los animales comenzaron a perder peso nuevamente a medida que los tumores volvieron a crecer a un tamaño mayor que cuando comenzó la terapia (0,282 ± 0,153 cm3 el día 73). En resumen, a medida que estas terapias redujeron la carga tumoral, los efectos debilitantes de la caquexia se revirtieron en estos ratones, lo que indica aún más el beneficio de estas combinaciones en este modelo de enfermedad humana de CPCP.
Ejemplo 11. Terapia de pacientes con CPCPm humano con CAF Anti-Trop-2-SN-38
Resumen
[0246] El topotecán, un inhibidor de la topoisomerasa I, está aprobado como terapia de segunda línea en pacientes sensibles a regímenes de primera línea que contienen platino, pero en veinte años no se ha aprobado ninguna nueva terapia para el tratamiento del cáncer de pulmón de células pequeñas metastásico (CPCPm). En este ejemplo, se estudió un nuevo conjugado anticuerpo-fármaco (CAF), sacituzumab govitecan, compuesto por un anticuerpo dirigido a Trop-2 y que contiene el metabolito activo del irinotecan, SN-38 (también un inhibidor de la topoisomerasa I). Los pacientes con una mediana de 2 terapias previas (rango 1-7) recibieron el CAF los días 1 y 8 de ciclos de 21 días, con una mediana de diez dosis (rango, 1 a 63). Las principales toxicidades de grado >3 fueron neutropenia, fatiga y diarrea manejables. A pesar de recibir hasta 63 dosis repetidas, el CAF no fue inmunogénico.
[0247] El cuarenta y nueve por ciento de los 43 pacientes evaluables tuvieron una reducción del tamaño del tumor con respecto al valor inicial; la tasa de respuesta objetiva (respuestas parciales) fue del 16 % y se logró una enfermedad estable en el 49 % de los pacientes. La mediana de la supervivencia libre de progresión y la mediana de la supervivencia general fueron de 3,6 y 7,0 meses, respectivamente, según un análisis por intención de tratar (N = 53). Este CAF fue activo en pacientes quimiosensibles o quimiorresistentes a la quimioterapia de primera línea, y también en pacientes en los que fracasó la terapia de segunda línea con topotecán. Estos datos respaldan el uso de sacituzumab govitecan como un nuevo tratamiento para el CPCPm avanzado.
Métodos
[0248] Se inscribieron pacientes >18 años de edad con CPCPm que habían recaído o eran refractarios a al menos una línea de tratamiento estándar previa para la enfermedad metastásica en estadio IV y con tumores medibles mediante TC. Se les exigía que tuvieran un estado funcional de 0 o 1 del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG), función adecuada de médula ósea, función hepática y renal, y otros requisitos de elegibilidad como se describe en el ensayo de fase I (Starodub et al., 2015, Clin Cancer Res 21:3870-8). La terapia previa debía completarse al menos 4 semanas antes de la inscripción.
[0249] El objetivo general de esta parte del ensayo colectivo que se lleva a cabo para diversos cánceres (ClinicalTrials.gov, NCT01631552) fue evaluar la seguridad y la actividad antitumoral de sacituzumab govitecan en pacientes con CPCPm. Sacituzumab govitecan se administró por vía intravenosa a una velocidad de infusión inicial de 50 mg/h, que se completó en 3 h (las infusiones posteriores se completaron en 60-90 min). Opcionalmente se prescribieron premedicaciones (p. ej., difenhidramina, paracetamol y dexametasona) para reducir el riesgo de reacciones a la infusión. Se administraron dosis de 8 o 10 mg/kg los días 1 y 8 de un ciclo de 21 días, con contingencias de retraso (máximo de 2 semanas). Las toxicidades se controlaron mediante terapia de apoyo con factor de crecimiento hematopoyético para la reducción de células sanguíneas, retrasos y/o modificaciones de la dosis según lo especificado en el protocolo (p. ej., 25 % de la dosis anterior) o mediante la práctica médica estándar. El tratamiento continuó hasta la progresión de la enfermedad, el inicio de una terapia anticancerígena alternativa, la toxicidad inaceptable o la retirada del consentimiento.
[0250] Se inscribieron cincuenta y tres pacientes con CPCPm (30 mujeres, 23 hombres, con una mediana de edad de 63 años (rango, 44-82). La mediana de tiempo desde el diagnóstico inicial hasta el tratamiento con sacituzumab govitecan fue de 9,5 meses (rango, 3 a 53). La mayoría de los pacientes recibieron un tratamiento previo intensivo, con una mediana de 2 líneas de tratamiento previas (rango, 1 a 7). Todos recibieron cisplatino o carboplatino más etopósido. Veintidós (41%) pacientes tenían 1 línea de tratamiento previa, mientras que 14 (26%) y 17 (32%) recibieron 2 y >3 regímenes de quimioterapia previos, respectivamente. Además, 18 (33%) recibieron topotecán y/o irinotecán, 9 (16%) recibieron un taxano y 5 (9%) recibieron un tratamiento con inhibidores de puntos de control inmunitarios, que incluía nivolumab (N=4) o atezolizumab (N=1).
[0251] Según la duración de la respuesta a una terapia de primera línea que contiene platino mayor o menor de 3 meses, hubo 27 (51%) y 26 (49%) pacientes quimiosensibles y quimiorresistentes, respectivamente. La mayoría de los pacientes tenían enfermedad extensa, con metástasis a múltiples órganos, incluidos pulmones (66%), hígado (59%), ganglios linfáticos (76%), tórax (34%), glándulas suprarrenales (25%), huesos (23%), y pleura (6%). Otros sitios de enfermedad incluyeron páncreas (N = 4), cerebro (N = 2), piel (N = 2) y pared esofágica, ovario y seno (1 cada uno).
[0252] El criterio de valoración principal fue la proporción de pacientes con una respuesta objetiva confirmada, evaluados aproximadamente cada 8 semanas hasta la progresión de la enfermedad, por el grupo de radiología de cada institución o un servicio de radiología local contratado. Las respuestas objetivas se evaluaron mediante los criterios de evaluación de respuesta en tumores sólidos, versión 1.1 (RECIST 1.1) (Eisenhauer et al., 2009, Eur J Cancer 45:228-47). Las respuestas parciales (RP) o completas (RC) requirieron confirmación dentro de 4 a 6 semanas después de la respuesta inicial. La tasa de beneficio clínico (TBC) se define como aquellos pacientes con una respuesta objetiva más enfermedad estable (EE) >4 meses. La supervivencia se controló cada 3 meses hasta la muerte o la retirada del consentimiento.
[0253] Se realizaron evaluaciones de seguridad durante las visitas programadas o con mayor frecuencia si se justificaba. El recuento sanguíneo y la química sérica se comprobaron de forma rutinaria antes de la administración de sacituzumab govitecan y cuando estuviera clínicamente indicado.
[0254] Análisis estadísticos: los datos incluidos en los análisis se derivaron de pacientes inscritos desde noviembre de 2013 hasta junio de 2016, con seguimiento hasta el 31 de enero de 2017. La frecuencia y gravedad de los eventos adversos (EA) se definieron según el término preferido de MedDRA y la clasificación de órganos del sistema (SOC) versión 10, con gravedad evaluada por NCI-CTCA<e>v4.03. Se evaluó la toxicidad de todos los pacientes que recibieron sacituzumab govitecan.
[0255] El protocolo disponía que se determinaran las tasas de respuesta objetiva (TRO) para los pacientes que recibieron >2 dosis (1 ciclo) y tuvieron su evaluación CT inicial de 8 semanas. La duración de la respuesta se define de acuerdo con los criterios RECIST 1.1, y aquellos que tienen una respuesta objetiva se marcan desde el momento de la primera evidencia de respuesta hasta la progresión, mientras que la duración estable de la enfermedad se marca desde el inicio del tratamiento hasta la progresión. La SSP y la SG se definen desde el inicio del tratamiento hasta que se determina una evaluación objetiva de la progresión (SSP) o la muerte (SG). La duración de la respuesta, la SSP y la SG se estimaron mediante métodos de Kaplan-Meier, con intervalos de confianza (IC) del 95 %, utilizando el software estadístico MedCalc, versión 16.4.3 (Ostende, Bélgica).
[0256] Inmunohistoquímica del tumor Trop-2 e inmunogenicidad de Sacituzumab Govitecan y sus componentes: las muestras tumorales de archivo para Trop-2 se tiñeron mediante IHC y se interpretaron como se informó anteriormente (Starodub et al., 2015, Clin Cancer Res 21:3870-8). La positividad requirió teñir al menos el 10% de las células tumorales, con una intensidad calificada como 1+ (débil), 2+ (moderada) y 3+ (fuerte). Las respuestas de los anticuerpos al sacituzumab govitecan, el anticuerpo IgG y el SN-38 se controlaron en muestras de suero tomadas al inicio del estudio y luego antes de cada ciclo par mediante ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas realizados por el patrocinador (Starodub et al., 2015, Clin Cancer Res 21:3870-8). La sensibilidad del ensayo es de 50 ng/ml para el CAF y la IgG, y de 170 ng/ml para el anticuerpo anti-SN-38.
Tabla 5. Datos demográficos iniciales y características de la enfermedad de todos los pacientes (N = 53)
Edad Años (mediana; rango) 63 (44 - 82) Sexo, N (%) Mujer 30 (56)
Hombre 23 (44) Raza, N (%) Blanco 47(88)
Negro 3 (6)
Otro 3 (6) ECOG, N (%) 0 6 (11)
1 47(89) Sitios de metástasis, N (%) Pulmón 35 (66)
Hígado 18 (59) Ganglios linfáticos 40 (76) Pecho 18 (34) Suprarrenales 13 (25) Hueso 12 (23) Derrame pleural 3 (5) Páncreas 4 (7) Pelvis 2 (3) Cerebro 2 (3)
Piel 2 (3) Otros 3 (5) Líneas anteriores de 1 22(41) Terapia 2 14 (26) N (%) >3 17 (32) Sensibilidad a la quimioterapia de primera línea, N (%) Sensible 27(51)
Resistente 26 (49) Terapia previa, N (%) Platino y etopósido 53 (100)
Topotecán y/o irinotecán 18 (33) Taxanos 9 (16) Inhibidores de puntos de control (IPC) 5 (9)______
Resultados
[0257] Pacientes: desde noviembre de 2013 hasta junio de 2016, se inscribieron 53 pacientes con CPCPm (30 mujeres, 23 hombres, con una mediana de edad de 63 años (rango, 44-82) (Tabla 5). La mediana de tiempo desde el diagnóstico inicial hasta el tratamiento con sacituzumab govitecan fue de 9,5 meses (rango, 3 a 53). La mayoría de los pacientes recibieron un tratamiento previo intenso, con una mediana de 2 líneas de tratamiento previas (rango, 1 a 7). Todos recibieron cisplatino o carboplatino más etopósido. Veintidós (41%) pacientes tenían 1 línea de terapia previa, mientras que 14 (26%) y 17 (32%) recibieron 2 y >3 regímenes de quimioterapia previos, respectivamente. Además, 18 (33%) recibieron topotecán y/o irinotecán, 9 (16 %) tenían un taxano y 5 (9 %) tenían una terapia con inhibidores de puntos de control inmunológico, que comprende nivolumab (N = 4) o atezolizumab (N = 1). Según una duración de la respuesta a una terapia de primera línea que contiene platino mayor o menor Durante más de 3 meses, hubo 27 (51%) y 26 (49%) pacientes quimiosensibles y quimiorresistentes, respectivamente. La mayoría de los pacientes tenían enfermedad extensa, con metástasis en múltiples órganos, incluidos pulmones (66%), hígado (59%), linfa ganglios (76%), tórax (34%), suprarrenales (25%), huesos (23%) y pleura (6%) (Tabla 5). Otros sitios de enfermedad incluyeron páncreas (N = 4), cerebro (N = 2), piel (N = 2) y pared esofágica, ovario y seno (1 cada uno).
[0258] Exposición, seguridad y tolerabilidad del tratamiento: de los 53 pacientes inscritos, dos tratados por primera vez en mayo de 2016 continuaban el tratamiento con sacituzumab govitecan en la fecha límite del 31 de enero de 2017. Todos los demás pacientes habían interrumpido el tratamiento y, por lo demás, estaban siendo monitoreados para determinar su supervivencia. Se han administrado más de 590 dosis (en 295 ciclos), con una mediana de 10 dosis (intervalo, 1-63) por paciente. No se informaron reacciones relacionadas con la perfusión.
[0259] Las dosis iniciales en 15 pacientes se administraron a una dosis inicial de 8 mg/kg; 10 mg/kg fue la dosis inicial para los siguientes 38 pacientes. Entre los 2 grupos de dosis, 25 pacientes recibieron > 10 dosis (> 5 ciclos) y 2 recibieron 62 y 63 dosis (>30 ciclos). La mediana de duración del tratamiento fue de 2,5 meses (rango, 1 a 23). La neutropenia (grado > 2) fue la única indicación para la reducción de la dosis y se registró en el 29 % (11/38) de los pacientes con el nivel de dosis de 10 mg/kg después de una mediana de 2,5 dosis (rango, 1 a 9). Dos de los quince pacientes (13%) tratados con 8 mg/kg tuvieron reducciones, uno después de 2 dosis y otro después de 41 dosis (20 ciclos). Una vez reducidos, las reducciones adicionales fueron poco frecuentes. No se observaron muertes relacionadas con el tratamiento.
[0260] En este ensayo, diez pacientes abandonaron antes de la primera evaluación de respuesta; cuatro recibieron 1 dosis, cinco recibieron 2 dosis y otro después de 4 dosis. Tres no fueron elegibles para la evaluación de respuesta después de recibir 1 o 2 dosis, porque uno tenía una histología mixta de CPCP y CPCNP, y los otros 2 fueron diagnosticados con metástasis cerebrales o de médula espinal antes del ensayo después de recibir la primera dosis de sacituzumab govitecan.
Dos pacientes que informaron eventos adversos de grado 3 CTCAE (neutropenia y fatiga) después de una dosis que no se recuperaron a tiempo para la segunda dosis fueron suspendidos según las pautas del protocolo. Cuatro pacientes se retiraron del estudio después de 2 dosis, 2 retiraron su consentimiento y 2 se retiraron debido a fatiga de grado 2. Un paciente adicional abandonó el estudio después de 4 tratamientos debido a múltiples comorbilidades concurrentes y murió repentinamente antes de la primera evaluación de respuesta.
[0261] Los EA notificados con más frecuencia en los 53 pacientes que recibieron al menos una dosis de sacituzumab govitecan fueron náuseas, diarrea, fatiga, alopecia, neutropenia, vómitos y anemia (Tabla<6>). Se produjo neutropenia de grado 3 o 4 en el 34 % (18/53) de los pacientes, y solo un paciente tuvo neutropenia febril. Otros eventos adversos de grado 3 o 4 fueron pocos e incluyeron fatiga (13%), diarrea (9%), anemia (8%), aumento de la fosfatasa alcalina (8%) e hiponatremia (8%). Si bien hubo menos pacientes que requirieron una reducción de la dosis en el grupo de dosis de 8 mg/kg (13% frente a 28% en el grupo de 10 mg/kg), el nivel de dosis de 10 mg/kg fue igualmente bien tolerado, con modificación de la dosis y/o apoyo del factor de crecimiento en unos pocos pacientes.
Tabla<6>. Frecuencia de eventos adversos (N = 53), independientemente de la causalidad, que ocurren en >15 % (todos los grados) o >2 % (grado >3) de los pacientes (clasificados según todos los grados).
Todos los grados Grados 3 y 4
Eventos adversos (N = 53)_________ N_______________ %___________________N___________________% Diarrea 28 52,8 5 9,4 Náuseas 27 50,9 7 -Fatiga 25 47,2 18 13, 2 Neutropenia 23 43,4 - 34, 0 Vómitos 18 34,0 - -Dolor abdominal 16 30,2 - -Anorexia 15 28,3 3 -Anemia 14 26,4 - 5,7 Alopecia 12 22,6 - -Estreñimiento 11 20,8 - -Hipomagnesemia 10 18,9 - -Deshidratación 9 17,0 - -Disnea 9 17,0 - -Tos 8 15,1 2 -Hipoxia 3 5,7 1 3,8 Neutropenia febril 1 1,9 1,9
[0262] Eficacia: como se describe, de los 53 pacientes con CPCNPm inscritos, diez interrumpieron el tratamiento antes de su primera evaluación de respuesta mediante TC, lo que dejó a 43 pacientes con la evaluación objetiva de respuesta requerida por el protocolo después de recibir al menos dos dosis de sacituzumab govitecan y al menos una exploración de seguimiento. FIG. 16 proporciona una serie de representaciones gráficas de las respuestas, incluyendo un diagrama en cascada del mejor cambio porcentual en la suma del diámetro de las lesiones diana para los 43 pacientes (FIG. 16A), un gráfico que muestra la duración de las respuestas para aquellos que lograron RP o estado de EE (FIG. 16B), y un gráfico que rastrea los cambios de respuesta de los pacientes con RP y EE a lo largo del tiempo (FIG.<1 6>C).
[0263] Veintiuno de los 43 pacientes evaluables por TC (49%) experimentaron una reducción del tamaño del tumor desde el inicio (FIG. 16A). Se produjeron respuestas parciales confirmadas (reducción >30 %) en siete pacientes, lo que produjo una TRO del 16 % (Tabla 7). La mediana del tiempo de respuesta en estos pacientes fue de 2,0 meses (rango, 1,8 a 3,6 meses), con una mediana de duración de la respuesta estimada por Kaplan-Meier de 5,7 meses (IC del 95 %: 3,6, 19,9). Dos de los siete respondedores tuvieron respuestas continuas en el último seguimiento (es decir, los pacientes estaban vivos, sin progresión de la enfermedad y no habían iniciado tratamientos anticancerígenos alternativos), uno a los 7,2+ meses y el otro a los 8,7+ meses desde el inicio del tratamiento. (FIG. 1B, FIG. 1C).
Tabla 7. Resumen de respuesta de sacituzumab govitecan (IMMU-132) en pacientes con CPCP
Mejor respuesta general, N (%)
Total con evaluación de respuesta 43
RP (confirmado) 7 (16%)
PRu (sin confirmar; EE con >30 % de contracción como mejor respuesta 6 (14%)
EE 15 (35%)
EP 15 (35%) Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%) 17/43 (40%) Duración de la respuesta objetiva confirmada, meses mediana (IC del 95 %) 5,7 (3,6,
19,9) Supervivencia libre de progresión, meses (N = 53), mediana (IC del 95%) 3,6 (2,0, 4,3) Supervivencia general, meses (N = 53), mediana (IC del 95 %) 7,0 (5,5; 8,3) Evaluación de la respuesta de IMMU-132 en pacientes sensibles (N = 24) a la 1.a línea.
PFS (mediana de meses; IC del 95 %)
SG (mediana de meses; IC del 95 %) 3,8 (2,8; 6,0) Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%) 8,3 (7,0,
13,2) Evaluación de la respuesta de IMMU-132 en pacientes resistentes (N = 19) a ia línea. 12/24 (50%)
SSP (mediana de meses; IC del 95 %) 3.6 (1,8; 3,8) SG (mediana de meses; IC del 95 %) 6,2 (4,0;
10.5)
Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%) 5/19 (26%) Pacientes que reciben IMMU-132 como segunda línea (N = 19)
SSP, mediana de meses (IC del 95%) 3.6 (2,0, 5,3) SG (mediana de meses; IC del 95 %) 8,1 (7,5;
10.5)
Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%) 7/19 (37%) Pacientes que reciben IMMU-132 como línea >3 (N = 24)
SLP, mediana de meses (IC del 95 %) 3,7 (1,8; 5,5) SG (mediana de meses; IC del 95 %) 7,0 (6,2;
20,9)
Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%) 9/24 (38%) IMMU-132 administrado como >3 líneas y
Topotecán/irinotecán previo (N = 15)
SSP, mediana de meses (IC del 95 %) 3.6 (3,3; 5,5) SG (mediana de meses; IC del 95 %) 8,8 (6,2;
20,9)
Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%) 6/15 (40%) Sin topotecán/irinotecán previo (N = 9)
SSP, mediana de meses (IC del 95 %) 3.7 (1,7; 4,3) SG (mediana de meses; IC del 95 %) 5,5 (3,2; 8,3) _______________ Tasa de beneficio clínico (RP+EE >4 meses) N (%)__________________ 3/9 (33%)
[0264] La enfermedad estable (EE) se determinó en 21 pacientes (49%), e incluyó a seis (14%) que inicialmente tenían una reducción tumoral >30% que no se mantuvo en la TC de confirmación posterior (RP o PRu no confirmada), y tres pacientes que tenían una reducción tumoral >20%. Es importante señalar que diez pacientes tuvieron EE durante >4 meses (mediana derivada de Kaplan-Meier = 5,6 meses, IC del 95 %: 5,2, 9,7), lo que no fue significativamente diferente de la mediana de SLP para el grupo de RP confirmada (7,9 meses, IC del 95%: 7,6, 21,9;P= 0,1620), y una tasa de beneficio clínico (TBC: Rp EE>4 meses) del 40% (17/43). De hecho, incluso la SG para estos diez pacientes con EE no fue significativamente diferente de la de los siete pacientes con RP confirmada (8,3 meses, IC del 95 %: 7,5, 22,4 meses frente a 9,2 meses, IC del 95 %: 6,2, 20,9, respectivamente;P= 0,5599). Esto sugiere que mantener la EE durante un período adecuado (>4 meses) debería ser un criterio de valoración de interés. Según la intención de tratar (ITT) (N = 53), la mediana de SSp fue de 3,6 meses (IC del 95 %: 2,0, 4,3) (FIG. 17 (A)), mientras que la mediana de S<g>fue de 7,0 meses (95 % IC: 5,5, 8,3), con 17 pacientes vivos y 5 perdidos durante el seguimiento (uno después de 1,8 meses, uno después de 5 meses y tres después de 11,4-12,8 meses) (FIG. 17 (B)).
[0265] Trece de los 43 pacientes con una evaluación de respuesta objetiva fueron tratados con 8 mg/kg, uno confirmado (8%), uno RP no confirmado y tres EE. En el grupo de 10 mg/kg (N = 30), seis pacientes tuvieron RP confirmada (20%) y doce tuvieron EE, incluidos cinco con una TC que mostró una reducción >30% (PRu). La TBC fue del 47 % (14/30), lo que sugiere que la dosis inicial de 10 mg/kg proporcionó una mejor respuesta general.
[0266] Veinticuatro pacientes con una evaluación de respuesta fueron clasificados como sensibles a la primera línea de quimioterapia basada en platino (Tabla 7). Cuatro (17%) lograron una RP confirmada y nueve tuvieron EE, incluidos cuatro con una única exploración que mostró una reducción del tumor (PRu) >30%. Diecinueve pacientes fueron resistentes, tres (16%) tenían RP confirmada y seis EE, incluidos dos con PRu. La mediana de SSP para los grupos quimiosensibles y quimiorresistentes fue de 3,8 meses (IC del 95 %: 2,8, 6,0) y 3,6 meses (IC del 95 %: 1,8, 3,8), respectivamente, mientras que la mediana de SG fue de 8,3 meses (IC del 95 %: 7,0, 13,2) y 6,2 meses (IC del 95%: 4,0, 10,5), respectivamente (Tabla 7). No se encontraron diferencias significativas en la SLP o la SG entre los grupos quimiosensibles y quimiorresistentes (P = 0,3981 y P = 0,3100, respectivamente).
[0267] Diecinueve de los 43 pacientes recibieron sacituzumab govitecan en segunda línea, y 3/19 (16%) tuvieron una RP y siete EE como mejor respuesta (dos de estos últimos tuvieron una reducción del tumor >30%). La respuesta observada en estos pacientes fue la misma que la encontrada en los pacientes que recibieron sacituzumab govitecan como tercera o superior línea de tratamiento (N = 24), con cuatro RP confirmadas (16%) y 8 EE, incluidos cuatro pacientes con EE. con >30% de reducción del tumor en una TC. No se encontraron diferencias significativas en la duración de la SSP o la SG(P= 0,9538 yP= 0,6853, respectivamente). Los análisis de respuesta se resumen en la Tabla 7.
[0268] Entre los cinco pacientes que recibieron tratamiento previo con un inhibidor de puntos de control inmunológico (IPC), uno experimentó una RP no confirmada (reducción del 54 % en la primera evaluación, retiró el consentimiento sin tratamiento o evaluaciones adicionales), dos lograron EE y uno tuvo una reducción del tumor del 17 % que duraba 8,7 meses y el otro sin cambios en el tamaño del tumor durante 3,7 meses, uno tenía enfermedad progresiva, mientras que el quinto paciente retiró su consentimiento después de un ciclo de sacituzumab govitecan. Todos los pacientes tratados con IPC no respondieron al IPC o progresaron antes de recibir sacituzumab govitecan, lo que indica que los pacientes pueden responder a IMMU-132 después de recibir el tratamiento con IPC.
[0269] De los 24 pacientes que recibieron sacituzumab govitecan como terapia de tercera o última línea, quince habían recibido previamente topotecán y/o irinotecán, mientras que nueve nunca recibieron estos agentes. Las respuestas objetivas en estos dos grupos fueron similares, sin diferencias significativas en la SSP (3,8 frente a 3,7 meses;P= 0,7341). Sin embargo, aquellos tratados con sacituzumab govitecán que recibieron tratamiento previo con topotecán tuvieron una SG significativamente más larga que aquellos que no lo recibieron (8,8 meses, IC del 95 %: 6,2, 20,9 frente a 5,5 meses, IC del 95 %: 3,2, 8,3;P= 0,0357). La SG más prolongada en este grupo puede reflejar la actividad conocida del topotecán en pacientes sensibles al platino y, por lo tanto, puede tener un mejor resultado a largo plazo.
[0270] Se presenta en la FIG. 18 un paciente que recibió sacituzumab govitecan después de una recaída al tratamiento de primera línea con carboplatino más etopósido. Otro ejemplo con una reducción considerable del tumor se muestra en la FIG. 19.
[0271] Tinción inmunohistoquímica (IHC, por sus siglas en inglés) de muestras de tumores: se obtuvieron muestras de tumores de archivo de 29 pacientes, pero cuatro fueron inadecuadas para su revisión, lo que dejó 25 tumores evaluables, de los cuales el 92 % fueron positivos, y dos (8 %) tuvieron fuertes (3+) y trece (52%) tinción moderada (2+). Veintitrés de estos pacientes tuvieron una evaluación de respuesta objetiva. Hubo cinco con RP confirmada y dos RP no confirmadas en este grupo; cinco tenían tinción 2+, mientras que los otros dos tenían 1+ (no se muestra), lo que sugiere que una mayor expresión proporcionó mejores respuestas. Sin embargo, una evaluación de los valores de SSP y SG frente a la puntuación IHC no mostró una tendencia clara (no se muestra), y las estimaciones de Kaplan-Meier para SSP y SG para pacientes con puntuaciones IHC de 0 y 1+ combinadas (N = 10) frente a 2+ y 3+ combinadas (N = 13) no indicaron diferencias significativas (SSP,P= 0,2661; SG,P= 0,7186) según la puntuación IHC (no se muestra).
[0272] Inmunogenicidad del anticuerpo CAF, SN-38 o hRS7: no se detectaron anticuerpos neutralizantes contra sacituzumab govitecan, el anticuerpo o SN-38 en pacientes que mantuvieron el tratamiento incluso durante hasta 22 meses.
Discusión
[0273] La recaída del CPCP a la quimioterapia de primera línea continúa dividiéndose en dos categorías: recaída resistente, que ocurre dentro de los tres meses posteriores a la primera terapia basada en platino, y recaída sensible, que ocurre después de al menos 3 meses después del tratamiento (O'Brien et al, 2006, J Clin Oncol 24:5441-7; Pérez-Soler et al., 1996, J Clin Oncol 14:2785-90). Aunque todavía existe cierta ambigüedad con respecto al mejor manejo del CPCP recurrente, el topotecán, un inhibidor de la topoisomerasa I similar al SN-38 utilizado en el CAF estudiado en este documento, es el único producto aprobado para la recaída quimiosensible, como lo respaldan numerosos ensayos (O'Brien et al., 2006, J Clin Oncol 24:5441-7; Horita et al., 2015, Sci Rep 5:15437). Sin embargo, la eficacia y los eventos adversos del topotecán han variado considerablemente en estudios anteriores, como lo demuestra un metanálisis de más de mil pacientes reportado en 14 artículos que el topotecán tuvo una tasa de respuesta objetiva del 5% en pacientes quimiorresistentes de primera línea y del 17% en pacientes quimiosensibles (Horita et al., 2015, Sci Rep 5: 15437). Hubo neutropenia, trombocitopenia y anemia de grado >3 en el 69 %, 1 % y 24 % de los pacientes, respectivamente, y aproximadamente el 2 % de los pacientes murieron a causa de esta quimioterapia (Horita et al., 2015, Sci Rep 5:15437). Por lo tanto, el topotecán se muestra prometedor en este contexto de segunda línea en pacientes que recayeron después de mostrar sensibilidad a una quimioterapia basada en platino, pero con una toxicidad hematológica considerable. Sin embargo, incluso esta conclusión fue cuestionada recientemente por Lara et al. (2015, J Thorac Oncol 10:110-5), quienes afirmaron que la sensibilidad al platino no está fuertemente asociada con una mejor SSP y SG después del tratamiento con topotecán, que es su indicación actualmente aprobada.
[0274] Es en este contexto donde se presentan los resultados aquí presentados con sacituzumab govitecan en pacientes con enfermedad prolongada y avanzada. Los pacientes (estadio IV) que siguen una mediana de 2 (rango, 1 a 7) terapias previas son prometedores. Cuarenta y nueve por ciento de los pacientes mostró una reducción de las mediciones del tumor desde el inicio, según RECIST 1.1, con una TRO del 16% y una mediana duración de la respuesta de 5,7 meses (IC del 95%: 3,6, 19,9). Se encontró enfermedad estable en el 35% de los pacientes, donde el 14% de los estos pacientes con EE tuvieron una reducción del tumor >30% como mejor respuesta, aunque no se mantuvieron en la segunda exploración. La tasa de beneficio clínico a >4 meses fue del 40%. La mediana de SSP y SG fue de 3,6 y 7,0 meses, respectivamente. Es interesante que la mediana de SG para los diez pacientes con EE fue de 8,3 meses (IC del 95 %: 7,5, 22,4), lo que no es estadísticamente diferente a partir de la mediana de SG de 9,2 meses (IC del 95 %: 6,2, 20,9) para pacientes con RP(P= 0,5599). En el grupo que recibe 10 mg/kg como dosis inicial (N = 30), hubo una respuesta objetiva confirmada en seis (20%), y cinco pacientes adicionales tuvieron una única TC que mostró una reducción del tumor (PRu) >30%. Además, la tasa de beneficio clínico para este grupo con la dosis de 10 mg/kg fue del 47%. Esto respalda la dosis preferida de 10 mg/kg. También es digna de mención la falta de selección de pacientes requerida en función de la tinción inmunohistoquímica del tumor Trop-2, aunque hubo una sugerencia de que una tinción más fuerte se correlacionaba con una mejor respuesta, pero no se encontraron diferencias significativas en la SSP o la SG con respecto a la puntuación IHC.
[0275] Como se mencionó, la SSP y la SG no difirieron sustancialmente entre pacientes con EE >4 meses o RP. Los pacientes con RP no confirmada (es decir, >30% de reducción del tumor en una TC) o con EE generalmente no se consideran en la mayoría de las evaluaciones de TRO. Sin embargo, los resultados aquí no indican diferencias en la duración de la respuesta entre pacientes con RP o EE confirmada que dura más de 4 meses (FIG. 16B). De hecho, el seguimiento dinámico de las respuestas individuales de los pacientes para RP o EE (especialmente cuando la EE dura > 4 meses, que es un marco de tiempo similar para confirmar la RP) sugiere un beneficio clínico para ambos grupos al permanecer por debajo del tamaño inicial del tumor durante varios meses (FIG. 16C). Aunque hubo una tendencia a que la SSP de los pacientes con RP confirmada fuera más larga que la del grupo de pacientes con EE que duró >4 meses (P = 0,1620), la SG para estos 2 grupos no fue significativamente diferente (P = 0,5599). Por lo tanto, si bien el número de pacientes en este análisis inicial es relativamente pequeño, los datos sugieren que se debe dar más consideración a la estabilización de la enfermedad como un indicador importante de la actividad clínica cuando se logra una duración adecuada, similar al seguimiento de los pacientes que reciben tratamiento inmunológico. inhibidores de puntos de control.
[0276] La evaluación de los pacientes según la quimiosensibilidad previa (N = 24) o la quimiorresistencia (N = 19) no muestra diferencias en la respuesta con el tratamiento con sacituzumab govitecan (Tabla 7). Los resultados de SSP y SG fueron de 3,8 y 8,3 meses para los pacientes quimiosensibles en primera línea, en comparación con una SSP y SG de 3,6 meses y 6,2 meses, respectivamente, para el grupo quimiorresistente. Sin diferencia estadística, parece que sacituzumab govitecan se puede administrar a pacientes en terapias de segunda o última línea, independientemente de que los pacientes sean quimiosensibles o quimiorresistentes a la quimioterapia de primera línea. Esto difiere del topotecán, que está indicado sólo en aquellos pacientes con CPCP que mostraron una respuesta de >3 meses a la quimioterapia de primera línea con cisplatino y etopósido ((O'Brien et al., 2006, J Clin Oncol 24:5441-7; Pérez-Soler et al., 1996, J Clin Oncol 14:2785-90). De 28 pacientes estudiados por Pérez-Solar et al. (1996, J Clin Oncol 14:2785-90), el 11% tuvo una RP, con una mediana de supervivencia de 5 meses y una supervivencia a un año del 3,5%.
[0277] Aunque tanto el topotecán como el SN-38 son inhibidores de la enzima ADN topoisomerasa I, que es responsable de relajar una hélice de ADN superenrollada cuando el ADN se sintetiza mediante la estabilización del complejo de ADN, provocando la acumulación de roturas de ADN de una sola cadena (Takimoto & Arbuck, 1966, Camptothecins (En: Chabner & Long (Eds.), Cancer Chemotherapy and Biotherapy. Segunda ed. Filadelfia: Lippincott-Raven; p. 463-84), sacituzumab govitecan mostró actividad en pacientes que recayeron después de la terapia con topotecán. Por lo tanto, la resistencia o recaída al topotecán puede no ser una contraindicación para la administración de sacituzumab govitecan y, debido a que es igualmente activo en pacientes que eran quimiorresistentes al cisplatino y al etopósido, puede ser de particular valor como tratamiento de segunda línea en pacientes con CPCP metastásico independientemente de estado de quimiosensibilidad.
[0278] En los veinte años transcurridos desde la aprobación del topotecán en segunda línea, no se ha autorizado ningún agente nuevo para el tratamiento del CPCP metastásico en segunda línea o en tratamientos posteriores. Sin embargo, más recientemente ha habido avances con inhibidores de la proteína de muerte celular programada (EP-1) de los receptores de puntos de control de células T y la proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos (CTLA-4) (Antonia et al.,<2 0 1 6>, Lancet Oncol 17:883-95). Estos autores realizaron un ensayo de fase I-II de nivolumab con o sin ipilimumab del anticuerpo CTLA-4 en pacientes con CPCP recurrente. Nivolumab solo logró una tasa de respuesta del 10 %, mientras que la combinación tuvo tasas de respuesta del 19 al 23 % y una tasa de control de la enfermedad del 32 % (Antonia et al., 2016, Lancet Oncol 17:883-95). Sin embargo, un estudio reciente de ipilimumab con o sin quimioterapia en CPCP no pudo confirmar estos resultados (Reck et al., 2016, J Clin Oncol 34:3740-48). Dado que observamos que sacituzumab govitecan puede tener actividad en pacientes que fracasan en la terapia con inhibidores de puntos de control inmunológico, estamos estudiando esto más a fondo, especialmente debido a la evidencia que muestra tales respuestas después de la terapia con un inhibidor de puntos de control inmunológico en pacientes con otros tipos de cáncer (Bardia et al., 2017, J Clin Oncol 35:2141-48; Faltas et al., 2016, Clin Genitourin Cancer 14:e75-9; Heist et al., 2017, J Clin Oncol 35:2790-97; Tagawa et al., 2017, J Clin Oncol 35: resumen 327).
[0279] A pesar de los recientes avances en inmunoterapia y la identificación de otros objetivos novedosos para el CPCP (Rudin et al., 2017, Lancet Oncol 18:42-51), esta sigue siendo una enfermedad letal, especialmente en la población quimiorresistente a la terapia de primera línea. Los resultados actuales de sacituzumab govitecan en pacientes muy pretratados con CPCP en estadio IV avanzado y recidivante sugieren que este CAF es útil en el tratamiento de pacientes con CPCP quimiosensible y quimiorresistente, tanto antes como después de topotecan.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un conjugado de fármaco-anticuerpo anti-Trop-2 (CAF) que comprende SN-38 conjugado con un anticuerpo anti-Trop-2, para usar en un método para tratar el cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP), en donde el método comprende administrar a un paciente humano con CPCP (i) el conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 y (ii) cisplatino o carboplatino, en el que el CAF se administra como terapia de segunda línea o posterior a pacientes que han recibido tratamiento previo contra el cáncer para el CPCP, en el que el anticuerpo anti-Trop-2 es un anticuerpo RS7 humanizado que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); Cd R2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO:5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO:6), y en donde hay un conector CL2A entre el SN-38 y el anticuerpo y la estructura del CAF es MAb-CL2A-SN-38.
  2. 2. Cisplatino o carboplatino para usar en un método para tratar el cáncer de pulmón de células pequeñas (CPCP), en donde el método comprende administrar a un paciente humano con CPCP (i) un conjugado de anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 que comprende SN-38 conjugado con un anticuerpo anti-Trop-2 y (ii) cisplatino o carboplatino, en donde el CAF se administra como terapia de segunda línea o posterior a pacientes que han recibido tratamiento oncológico previo para el CPCP, en donde el anticuerpo anti-Trop-2 es un anticuerpo RS7 humanizado que comprende las secuencias CDR de cadena ligera CDR1 (KASQDVSIAVA, SEQ ID NO:1); CDR2 (SASYRYT, SEQ ID NO:2); y CDR3 (QQHYITPLT, SEQ ID NO:3) y las secuencias de CDR de cadena pesada CDR1 (NYGMN, SEQ ID NO:4); CDR2 (WINTYTGEPTYTDDFKG, SEQ ID NO: 5) y CDR3 (GGFGSSYWYFDV, SEQ ID NO: 6), y en donde hay un conector CL2A entre el SN-38 y el anticuerpo y la estructura del CAF es MAb-CL2A-SN-38.
  3. 3. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 2, en el que el cáncer es metastásico (CPCPm).
  4. 4. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 2, en el que el CAF se administra como terapia de segunda línea o posterior a pacientes que han recaído previamente. o han sido resistentes al tratamiento con un agente anticancerígeno estándar.
  5. 5. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 2, en el que el paciente ha recaído previamente o ha sido resistente al tratamiento con topotecán o irinotecán.
  6. 6. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 5, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 5, en el que el CPCP es resistente a la quimioterapia con agentes que contienen platino.
  7. 7. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 5, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 5, en el que el CPCP es sensible a la quimioterapia con agentes que contienen platino.
  8. 8. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 2, en el que el CAF se administra en una dosis de entre 6 mg/kg y 12 mg/kg.
  9. 9. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para uso de la reivindicación 8, o cisplatino o carboplatino para uso de la reivindicación 8, en el que la dosis está entre 8 mg/kg y 10 mg/kg.
  10. 10. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 2, en el que el tratamiento da como resultado una reducción del tamaño del tumor de al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos el 30% o al menos el 40%.
  11. 11. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para uso de la reivindicación 3, o cisplatino o carboplatino para uso de la reivindicación 3, en el que el método comprende además reducir el tamaño o eliminar las metástasis.
  12. 12. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para uso de la reivindicación 2, en el que hay 7-8 moléculas de SN-38 unidas a cada molécula de anticuerpo.
  13. 13. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para uso de la reivindicación 2, en el que la dosis de CAF se administra al sujeto humano una o dos veces por semana según un horario con un ciclo seleccionado del grupo compuesto por: (i) semanalmente; (ii) cada dos semanas; (iii) una semana de terapia seguida de dos, tres o cuatro semanas de descanso; (iv) dos semanas de terapia seguidas de una, dos, tres o cuatro semanas de descanso; (v) tres semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; (vi) cuatro semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; (vii) cinco semanas de terapia seguidas de una, dos, tres, cuatro o cinco semanas de descanso; y (viii) mensualmente; preferiblemente el ciclo se repite 4, 6, 8, 10, 12, 16 o 20 veces.
  14. 14. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para uso de la reivindicación 2, en el que el CAF se administra en combinación con una o más modalidades terapéuticas seleccionadas del grupo que consiste en un anticuerpo no conjugado, un inmunoconjugado, terapia génica, quimioterapia, un péptido terapéutico, terapia con citocinas, radioterapia localizada, terapia con ARN de interferencia, un fármaco, una toxina y una citocina, preferiblemente el fármaco, toxina o agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de 5-fluorouracilo, afatinib, aplidina, azaribina, anastrozol, antraciclinas, axitinib, AVL-101, AVL-291, bendamustina, bleomicina, bortezomib, bosutinib, briostatina-1, busulfán, caliqueamicina, camptotecina, 10-hidroxicamptotecina, carmustina, celebrex, clorambucilo, inhibidores de la Cox-2, irinotecán (CPT-11), SN-38, cladribina, camptotecanos, ciclofosfamida, crizotinib, citarabina, dacarbazina, dasatinib, dinaciclib, docetaxel, dactinomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, 2-pirrolinodoxorrubicina (2P-DOX), cianomorfolino doxorrubicina, glucurónido de doxorrubicina, glucurónido de epirrubicina, erlotinib, estramustina, epidofilotoxina, erlotinib, entinostat, agentes fijadores de receptores de estrógeno, etopósido (VP16), glucurónido de etopósido, fosfato de etopósido, exemestano, fingolimod, flavopiridol, floxuridina (FUdR), 3',5'-O-dioleoil-FudR (FUdR-dO), fludarabina, flutamida, inhibidores de farnesil-proteína transferasa, fostamatinib, ganetespib, GDC-0834, GS-1101, gefitinib, gemcitabina, hidroxiurea, ibrutinib, idarrubicina, idelalisib, ifosfamida, imatinib, L-asparaginasa, lapatinib, lenolidamida, leucovorina, LFM-A13, lomustina, mecloretamina, melfalán, mercaptopurina, 6-mercaptopurina, metotrexato, mitoxantrona, mitramicina, mitomicina, mitotano, navelbina, neratinib, nilotinib, nitrosurea, olaparib, plicomicina, procarbazina, paclitaxel, PCI-32765, pentostatina, PSI-341, raloxifeno, semustina, sorafenib, estreptozocina, SU11248, sunitinib, tamoxifeno, temazolomida (una forma acuosa de DTIC), transplatino, talidomida, tioguanina, tiotepa, teniposida, topotecán, mostaza de uracilo, vatalanib, vinorelbina, vinblastina, vincristina, alcaloides de la vinca y ZD1839.
  15. 15. El conjugado anticuerpo-fármaco (CAF) anti-Trop-2 para el uso de la reivindicación 1, o cisplatino o carboplatino para el uso de la reivindicación 2, en el que el CAF se administra al paciente humano que se ha sometido a una cirugía o que está programado para una cirugía.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021143741A1 (zh) * 2020-01-15 2021-07-22 北京海步医药科技有限公司 靶向多肽-药物缀合物及其用途
WO2022261310A1 (en) * 2021-06-11 2022-12-15 Gilead Sciences, Inc. Combination mcl-1 inhibitors with anti-body drug conjugates
CA3172480A1 (en) 2022-04-27 2023-10-27 Susanne KOSSATZ Combination treatment of small-cell lung cancer
CA3221834A1 (en) * 2023-06-30 2025-06-17 Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co Ltd Combination therapies for the treatment of non-small cell lung cancer
WO2025199464A1 (en) * 2024-03-22 2025-09-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-trop2 antibody-drug conjugates and methods of use

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9770517B2 (en) * 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US20130029909A1 (en) * 2009-09-15 2013-01-31 John Ryan Treatment of cancer
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US9492566B2 (en) * 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2016172427A1 (en) * 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
ES2953441T3 (es) 2015-06-25 2023-11-13 Immunomedics Inc Combinación de anticuerpos anti-hla-dr o anti-Trop-2 con inhibidores de microtúbulos, inhibidores de parp, inhibidores de la cinasa de bruton o inhibidores de la fosfoinositida 3-cinasa mejora significativamente el resultado terapéutico en el cáncer

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