ES2951061T3

ES2951061T3 - Composiciones para el tratamiento de enfermedades que implican mucina

Info

Publication number: ES2951061T3
Application number: ES16854627T
Authority: ES
Inventors: David L Morris; Roger Aston; Javed Akhter; Krishna Pillai
Original assignee: NewSouth Innovations Pty Ltd
Current assignee: NewSouth Innovations Pty Ltd
Priority date: 2015-10-14
Filing date: 2016-10-14
Publication date: 2023-10-17
Anticipated expiration: 2036-10-14
Also published as: WO2017063023A1; US20180303916A1; EP3362085C0; AU2016340017A1; US11364286B2; AU2016340017B2; EP3362085B1; EP3362085A1; EP3362085A4

Abstract

La presente invención se refiere a composiciones sinérgicas que comprenden bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de la misma. La invención también se refiere a métodos y usos de dichas composiciones para el tratamiento de enfermedades que implican mucina. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones para el tratamiento de enfermedades que implican mucina

Campo

En general, la presente invención se refiere a composiciones mucolíticas sinérgicas para el tratamiento de enfermedades que implican la sobreexpresión, sobreproducción o acumulación aberrante de mucina y, específicamente, para el tratamiento de cánceres secretores de mucina.

Antecedentes

Las mucinas son una familia de proteínas altamente glicosiladas de alto peso molecular producidas por tejidos epiteliales, incluido tracto gastrointestinal, pulmones, riñones, ovarios, mama y páncreas. En condiciones fisiológicas normales, la mucina desempeña un papel protector para los tejidos epiteliales. Sin embargo, las mucinas también pueden estar implicadas en estados patológicos (como la fibrosis quística) y la acumulación aberrante de material mucinoso y la imposibilidad de eliminarlo pueden causar morbilidad y mortalidad significativas. Por ejemplo, la falta de expectoración de moco puede provocar enfermedades respiratorias.

Un alto nivel de expresión de mucina se asocia con metástasis y malos resultados clínicos en pacientes diagnosticados con cáncer. La síntesis de mucina en la superficie de las células epiteliales normalmente está altamente regulada, pero en los tumores existe una mayor producción de mucina en parte debido a una mayor expresión de mucina humana (MUC1). La expresión y composición del moco se altera en los cánceres de origen epitelial, y se sabe que la producción de moco es un factor de pronóstico negativo. Se considera que las mucinas secretadas y transmembrana que constituyen la barrera mucosa promueven la progresión tumoral.

El pseudomixoma peritoneal (PMP) es una forma de cáncer que se caracteriza por una acumulación excesiva de mucina, secretada por las células tumorales, en la cavidad peritoneal. Las células tumorales son principalmente de origen apendicular, aunque los cánceres diseminados de colon, recto, estómago, vesícula biliar, intestinos delgados, vejiga urinaria, pulmones, mama, páncreas y ovario también pueden contribuir a la enfermedad. La masa mucinosa que se secreta se acumula en la cavidad abdominal provoca un aumento de la presión interna sobre el tubo digestivo que se asocia a una importante morbimortalidad por compromiso nutricional.

Tradicionalmente, la laparotomía, la eliminación de la masa mucinosa y la citorreducción seguida de quimioterapia intraperitoneal hipertérmica (HIPEC) ha sido el tratamiento preferido para los pacientes con PMP. Dado que la enfermedad es progresiva, los pacientes pueden requerir varios tratamientos durante el curso de la enfermedad, lo que tiene como consecuencia un aumento de la morbilidad e incluso la muerte. Adicionalmente, se ha demostrado previamente que existe una variabilidad significativa en la textura y dureza de la mucina PMP.

En consecuencia, existe la necesidad de composiciones y métodos más efectivos para la desintegración y/o solubilización de material mucinoso blando, semiduro o duro, para facilitar la eliminación de los mismos de un sujeto de una manera que sea más eficaz y menos invasiva que los métodos utilizados actualmente.

De forma similar, en otros casos en los que la mucina y su acumulación afectan negativamente a la salud, como el otitis serosa, fibrosis quística, retención de esputo, infección torácica, obstrucciones en endoprótesis biliares/pancreáticas, se requieren terapias mejoradas para la eliminación de material mucinoso.

La bromelina ("Br") es un extracto de la planta de piña (Ananas comosus) compuesta por diferentes tiol endopeptidasas y otros componentes tales como fosfatasas, glucosidasas, peroxidasas, celulasas, glucoproteínas, carbohidratos y varios inhibidores de la proteasa, y se sabe que tiene actividad proteolítica in vitro y en vivo, y actividades antiedematosas, antiinflamatorias, antitrombóticas y fibrinolíticas. Los factores activos en Br se caracterizan bioquímicamente solo en parte. No obstante, debido a su eficacia después de la administración oral, su seguridad y ausencia de efectos secundarios no deseados, La Br tiene un buen cumplimiento entre los pacientes como fármaco terapéutico.

Los inventores ahora han descubierto sorprendentemente que las composiciones que comprenden bromelina, o una fracción proteolítica de la misma y cisteamina, muestran efectos mucolíticos y anticancerosos sinérgicos. En consecuencia, la combinación sinérgica de bromelina y cisteamina proporciona una o más desintegración mejorada y/o solubilización de material mucinoso, mayor eficacia en la reducción de la producción de mucina, facilitación de la eliminación de material mucinoso del cuerpo, un efecto inhibidor directo sobre el crecimiento de células tumorales y una mayor eficacia de un agente anticanceroso.

El documento WO2014/094091 divulga composiciones que incluyen bromelina y un agente mucolítico, preferentemente en forma de N-acetilcisteína (NAC), se utiliza para tratar enfermedades relacionadas con la mucina.

Sumario de la invención

Las referencias a métodos de tratamiento en el resumen y la descripción detallada de la invención en esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.

En un primer aspecto, la invención proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables y al menos otro compuesto biológicamente activo o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, en donde el compuesto biológicamente activo se selecciona entre uno cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio.

En un segundo aspecto, la invención proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables para su uso en el tratamiento de una enfermedad que implica la sobreexpresión, sobreproducción o acumulación aberrante de mucina.

En un tercer aspecto, la invención proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, para su uso en un método terapéutico para desintegrar y/o solubilizar mucina en un sujeto.

En un cuarto aspecto, la invención proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, para su uso en la mejora de la eficacia terapéutica de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello en un sujeto, en la reducción de la dosis de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello en un sujeto, o para reducir los efectos secundarios de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello en un sujeto.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. La composición puede comprender adicionalmente al menos otro compuesto biológicamente activo, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. El compuesto biológicamente activo se puede seleccionar entre cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. El compuesto biológicamente activo puede ser un agente anticanceroso. El agente anticanceroso puede ser cisplatino.

La composición puede ser para su uso en el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina. La enfermedad puede ser cáncer o pseudomixoma peritoneal. El cáncer se puede seleccionar entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello. La mucina se puede caracterizar por tener una consistencia semidura o dura.

El tratamiento puede comprender una etapa de eliminación de material mucinoso de un sujeto después de un período de tiempo posterior a la administración de dicha composición. El período de tiempo puede seleccionarse entre aproximadamente 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 o 60 minutos. El período de tiempo se puede seleccionar entre aproximadamente 1 hora, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5 o 4 horas.

La composición puede usarse en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina. El material mucinoso se puede adaptar para retirarlo de un sujeto después de un período de tiempo después de la administración de dicho medicamento. El período de tiempo puede seleccionarse entre aproximadamente 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 o 60 minutos. El período de tiempo se puede seleccionar entre aproximadamente 1 hora, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5 o 4 horas. En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga un método para desintegrar y/o solubilizar material mucinoso en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. La mucina o material mucinoso se puede caracterizar por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo, para su uso en la desintegración y/o solubilización de material mucinoso en un sujeto. La mucina o material mucinoso se puede caracterizar por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos en la fabricación de un medicamento para desintegrar y/o solubilizar material mucinoso en un sujeto. La mucina o material mucinoso se puede caracterizar por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga un kit que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos y, opcionalmente, al menos un compuesto biológicamente activo, para su uso simultáneo, uso separado o secuencial en el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga un kit cuando se usa para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos y, opcionalmente, al menos un compuesto biológicamente activo.

También se describe en el presente documento una composición para su uso en la mejora de la eficacia terapéutica de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal en un sujeto. El régimen anticanceroso puede ser para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

La composición puede usarse para reducir la dosis de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal en un sujeto. El régimen anticanceroso puede ser para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello. La composición puede usarse para reducir los efectos secundarios de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal en un sujeto. El régimen anticanceroso puede ser para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

También se describe en el presente documento un método para mejorar la eficacia terapéutica de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición mucolítica sinérgica. El régimen anticanceroso puede ser para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

También se describe en el presente documento un método para reducir la dosis de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición mucolítica sinérgica. El régimen anticanceroso puede ser para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

También se describe en el presente documento un método para reducir los efectos secundarios de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición mucolítica sinérgica. El régimen anticanceroso puede ser para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la fabricación de un medicamento para potenciar la eficacia terapéutica de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal en un sujeto. El medicamento puede comprender además al menos otro compuesto o metabolito biológicamente activo, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. El compuesto biológicamente activo se puede seleccionar entre cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. El compuesto biológicamente activo puede ser un agente anticanceroso. El agente anticanceroso puede ser cisplatino. El cáncer se puede seleccionar entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la fabricación de un medicamento para reducir la dosis de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal en un sujeto. El medicamento puede comprender además al menos otro compuesto o metabolito biológicamente activo, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. El compuesto biológicamente activo se puede seleccionar entre cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. El compuesto biológicamente activo puede ser un agente anticanceroso. El agente anticanceroso puede ser cisplatino. El cáncer se puede seleccionar entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo, en la fabricación de un medicamento para reducir los efectos secundarios de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal en un sujeto. El medicamento puede comprender además al menos otro compuesto o metabolito biológicamente activo, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. El compuesto biológicamente activo se puede seleccionar entre cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. El compuesto biológicamente activo puede ser un agente anticanceroso. El agente anticanceroso puede ser cisplatino. El cáncer se puede seleccionar entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. El cáncer puede ser un carcinoma de células en anillo de sello.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 muestra la desintegración (con valores positivos) o la hidratación (con valores negativos) de material mucinoso tratado con cisteamina (CIS), bromelina (Br) o una combinación de los dos.

La figura 2 muestra que la combinación de 200 μg/ml de bromelina y cisteamina 200 mM desintegra completamente la mucina. Br= bromelina; CIS= cisteamina; TRIS = tampón Tris.

La figura 3 muestra las seis muestras de mucina blanda (1 g cada una) de seis pacientes diferentes con PMP.

La figura 4 muestra las seis formas solubilizadas de la mucina blanda que se puede succionar fácilmente con un catéter.

La figura 5 muestra una comparación del tiempo necesario para la desintegración de la mucina secretada por Pseudomixoma peritoneal tratado con 200 mM de cisteamina (CIS) y 200 μg/ml de bromelina (Br) o 250 mM de bromelina N-acetilcisteína (NAC) 300 μg/ml.

La figura 6 muestra el porcentaje de desintegración de los tres grados de, mucina (blanda, semidura y dura) cuando se trata con cisteamina 200 mM, 200 μg/ml de bromelina (A) o NAC 250 mM, 300 μg/ml de bromelina (B) durante 2 horas, o cisteamina 200 mM, 200 μg/ml de bromelina o 250 bromelina mM NAC 300 μg/ml durante 3 horas (C y D, respectivamente).

La figura 7 muestra el porcentaje de desintegración de los tres grados de mucina clasificados según el índice de dureza (HI), mucina blanda, HI = 0,6, mucina semidura, HI = 1,2 y mucina dura, HI = 1,8., con dos tiempos de incubación diferentes (2 frente a 3 h). C+B = cisteamina 200 mM 200 μg/ml de bromelina; N B = N-acetilcisteína 250 mM 300 μg/ml de bromelina.

La figura 8 muestra el tiempo (horas) necesario para que los tres grados de mucina tengan una desintegración del 50 % y del 100 % cuando se tratan con cisteamina 200 mM 200 μg de bromelina o N-acetilcisteína 250 mM 300 μg/ml de bromelina. SM= mucina blanda; SHM= mucina semidura; HM= mucina dura.

La figura 9 muestra la variación en el tiempo para una desintegración del 50 % en los tres grados de mucina PMP cuando se someten a cisteamina 200 mM 200 μg/ml de bromelina (C B) o NAC 250 mM, 300 μg/ml de bromelina. (N B)

La figura 10 muestra la desintegración de la mucina cuando se trata con bromelina, cisteamina o una combinación de las mismas durante 3 horas a 37 °C. (A) Comparación de varias combinaciones de bromelina y cisteamina en la desintegración de la mucina blanda. (B) Desintegración de mucina blanda cuando se somete a cisteamina 50 mM 50 μg/ml de bromelina; (C) Desintegración de mucina semidura cuando se somete a cisteamina 50 mM 50 μg/ml de bromelina. (D) Desintegración de mucina dura cuando se somete a cisteamina 50 mM 50 μg/ml de bromelina.

La figura 11 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de CIS y Br en el crecimiento in vitro de células de cáncer colorrectal HT29.

La figura 12 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de CIS y Br en el crecimiento in vitro de células de cáncer gástrico MKN45.

La figura 13 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de bromelina (Br) o cisteamina (CIS) en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU (A) y (B), respectivamente, y el efecto de Br y Cis en las células de mesotelioma PET (C) y (D), respectivamente.

La figura 14 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto del cisplatino en el crecimiento in vitro de las células de mesotelioma YOU y PET (A) y (B) respectivamente y los efectos combinados de la combinación de cisteamina (CIS) en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU y PET, (C) y (D), respectivamente.

La figura 15 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto combinado de la combinación de cisplatino y cisteamina en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU y PET (A) y (B), respectivamente, y los efectos combinados de la combinación de cisplatino y bromelina en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU y PET, (C) y (D), respectivamente.

La figura 16 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto combinado de la combinación de cisplatino, bromelina y cisteamina (5,65 mg/ml) en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU y PET (A) y (B), respectivamente.

La figura 17 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto combinado de la combinación de cisplatino, bromelina y cisteamina (2,82 mg/ml) en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU y PET (A) y (B), respectivamente.

La figura 18 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto combinado de la combinación de cisplatino, bromelina y cisteamina (1,42 mg/ml) en el crecimiento in vitro de células de mesotelioma YOU y PET (A) y (B), respectivamente.

La figura 19 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de cisteamina, bromelina y cisplatino en el crecimiento in vitro de la línea celular de cáncer colorrectal humano HT295M12. Se muestran datos de dos experimentos independientes (A) y (B), respectivamente.

La figura 20 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de cisteamina bromelina cisplatino en el crecimiento in vitro de la línea celular de cáncer gástrico humano KATO-III.

La figura 21 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de cisteamina bromelina cisplatino en el crecimiento in vitro de la línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano LS174T.

La figura 22 muestra una comparación de los efectos de concentraciones iguales de: NAC, cisteamina y diclorhidrato de cisteamina (A); NAC, cisteamina y L-cisteína (B) y NAC, cisteamina y L-glutatión redujeron (C) en la viabilidad de la línea celular de cáncer de ovario humano A2780.

La figura 23 muestra el efecto de la combinación de diferentes concentraciones de cisteamina y 5 μg/ml de bromelina (A) y 10 μg/ml de bromelina (B) sobre la viabilidad de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

La figura 24 muestra el efecto de la combinación de diferentes concentraciones de cisteamina y 5 μg/ml de bromelina (A) y 10 μg/ml de bromelina (B) sobre la viabilidad de la línea celular pancreática humana CFPAC.

La figura 25 muestra el efecto de bromelina (A), cisteamina (B) o cisplatino (C) sobre la viabilidad de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

La figura 26 muestra el efecto de la combinación de diferentes concentraciones de cisteamina y cisplatino sobre la viabilidad de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

La figura 27 muestra el efecto de la combinación de diferentes concentraciones de cisteamina y bromelina sobre la viabilidad de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

La figura 28 muestra el efecto de la combinación de diferentes concentraciones de cisplatino y bromelina sobre la viabilidad de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

La figura 29 los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de diferentes concentraciones de cisteamina bromelina cisplatino en combinación sobre el crecimiento in vitro de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

Descripción detallada

Definiciones

Tal como se usa en el presente documento, el término "cisteamina" se refiere a un compuesto de fórmula (I):

Tal como se usa en el presente documento, la referencia a "cisteamina" incluye, las diversas sales de cisteamina, que incluyen sales farmacéuticamente aceptables de un producto de cisteamina. En aspectos no reivindicados, "cisteamina" incluye profármacos de cisteamina que pueden, por ejemplo, ser fácilmente metabolizado en el cuerpo para producir cisteamina. También se incluyen en aspectos no reivindicados ésteres, amidas, compuestos alquilados, compuestos fosforilados, compuestos sulfatados, análogos, derivados, conjugados y metabolitos de cisteamina, que en combinación con bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, tienen la capacidad, como se describe en el presente documento, de desintegrar y/o solubilizar material mucinoso y/o potenciar la eficacia de un agente anticanceroso. En otros aspectos no reivindicados, "cisteamina" incluye formas de cisteamina modificadas químicamente mediante técnicas tales como marcaje (por ejemplo, con radionúclidos o varias enzimas), o unión de polímero covalente tal como pegilación (derivatización con polietilenglicol) o mezclas de los mismos. Varios análogos, derivados, conjugados y metabolitos de cisteamina son bien conocidos y los expertos en la técnica pueden prepararlos y usarlos fácilmente.

Las sales de cisteamina farmacéuticamente aceptables pueden comprender aniones y/o cationes farmacéuticamente aceptables. Los cationes farmacéuticamente aceptables incluyen, entre otros, cationes de metales alcalinos (por ejemplo, Li+, Na+, K+), cationes de metales alcalinotérreos (por ejemplo, Ca2+, Mg2+), cationes de metales pesados no tóxicos y amonio (NH4+) y amonio sustituido (N(R')4+, en donde R' es hidrógeno, alquilo o alquilo sustituido, es decir, incluyendo, metilo, etilo o hidroxietilo, específicamente, cationes de trimetilamonio, trietilamonio y trietanolamonio). Los aniones farmacéuticamente aceptables incluyen, entre otros haluros (por ejemplo, Cl-, Br-), sulfato, acetatos (por ejemplo, acetato, trifluoroacetato), ascorbatos, aspartatos, benzoatos, citratos y lactato.

En aspectos no reivindicados, la divulgación no está limitada con respecto a una sal o éster o derivado de cisteamina específico; las composiciones de la divulgación pueden contener cualquier cisteamina o derivado de cisteamina. Se pueden preparar otros derivados y análogos de los agentes activos utilizando técnicas estándar conocidas por los expertos en la técnica de la química orgánica sintética, o se pueden deducir por referencia a la bibliografía pertinente. El término "bromelina" ("Br") se refiere a un extracto de la planta de piña (Ananas comosus) y puede incorporar cualquiera de una serie de preparaciones de bromelina actualmente disponibles comercialmente. La bromelina comprende diferentes tiol endopeptidasas, fosfatasas, glucosidasas, peroxidasas, celulasas, glucoproteínas, carbohidratos e inhibidores de la proteasa. En consecuencia, se entiende que la referencia a la bromelina abarca una combinación de una fracción enzimática y/o proteolítica de bromelina que escinde los enlaces glucosídicos en la mucina y un compuesto no enzimático en la bromelina. La referencia a una "fracción proteolítica" de bromelina se refiere a un subcomponente de bromelina que posee actividad proteolítica y que escinde los enlaces glucosídicos en la mucina.

"Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición de ácido o sales de adición de base convencionales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de las composiciones descritas en el presente documento y se forman a partir de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos adecuados o bases orgánicas o inorgánicas. Las sales de adición de ácido de las muestras incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido sulfámico, ácido fosfórico y ácido nítrico, y los derivados de ácidos orgánicos como ácido p-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido metanosulfónico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico, ácido fumárico y similares. Las sales de adición de base de muestra incluyen aquellas derivadas de amonio, potasio, sodio e, hidróxidos de amonio cuaternario, tal como, por ejemplo, hidróxido de tetrametilamonio. La modificación química de un compuesto farmacéutico (es decir, un fármaco) en una sal es una técnica bien conocida por los químicos farmacéuticos para obtener una estabilidad física y química mejorada, higroscopicidad, fluidez y solubilidad de los compuestos. Véase, por ejemplo, H. Ansel et. al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6a Ed. 1995) en las pág. 196 y 1456-1457.

"Farmacéuticamente aceptable", tal como vehículos, excipientes farmacéuticamente aceptables, etc., significa farmacológicamente aceptables y sustancialmente no tóxicos para el sujeto al que se administra el compuesto particular.

En el presente documento también se contemplan "profármacos" y "solvatos" de los compuestos descritos en el presente documento. Se proporciona un análisis de los profármacos en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 de la serie del Simposio A.C.S. Symposium Series, and in Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association y Pergamon Press. El término "profármaco" significa un compuesto (por ejemplo, un precursor de un fármaco) que se transforma in vivo para producir un compuesto de fórmula (I) o un metabolito, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del compuesto. La transformación puede tener lugar por varios mecanismos (por ejemplo, por procesos metabólicos o químicos). Se proporciona un análisis del uso de profármacos en T. Higuchi y W. Stella, "Prodrugs as Novel Delivery Systems," vol.

14 de la A.C.S. Symposium Series, and in Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987.

Los "metabolitos" de los compuestos descritos en el presente documento se refieren a los productos intermedios y productos del metabolismo.

El término "mucina", como se usa en el presente documento, se refiere a cualquiera de una clase de glicoproteínas de alto peso molecular con un alto contenido de oligosacáridos agrupados O-glicosídicamente unidos a secuencias peptídicas repetidas en tándem que son ricas en treonina, serina y prolina e incluye cualquier miembro de la familia de la mucina humana (MUC) que consiste en miembros designados MUC1 a MUC21 que se han subclasificado en formas secretadas y transmembrana.

Como se usa en el presente documento, la expresión "material mucinoso" se refiere a una composición que comprende mucinas o glicoproteínas de mucina y abarca moco y las secreciones mucinosas de las células, incluyendo células cancerosas, y puede comprender adicionalmente células y otros componentes derivados de células.

Como se usa en el presente documento, el término "blando" aplicado a la consistencia de mucina o material mucinoso los términos "mucina blanda" o "material mucinoso blando" se refiere a mucina o material mucinoso de una textura gelatinosa, viscosa, de tipo gel y/o con un índice de dureza (descrito en el presente documento) determinado por la fórmula: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en una superficie (mm2) de ≤ 0,6.

Tal como se usa en el presente documento, los términos "semidura/o" aplicados a la consistencia de la mucina o material mucinoso, los términos "mucina semidura" o "material mucinoso semiduro" se refieren a mucina o material mucinoso que tiene una textura semisólida, que es más compacto que el material mucinoso blando, que es semiopaco a la inspección visual y/o tiene un índice de dureza determinado por la fórmula: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en una superficie (mm2) de > 0,6 -1,2.

Tal como se usa en el presente documento, los términos "duro" aplicados a la consistencia de mucina o material mucinoso, los términos "mucina dura" o "material mucinoso duro" se refieren a mucina o material mucinoso de textura sólida, que es más compacto que el material mucinoso semisólido, que es opaco a la inspección visual y/o tiene un índice de dureza determinado por la fórmula: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en una superficie (mm2) de > 1,2.

Tal como se usa en el presente documento, la referencia a una "enfermedad relacionada con la mucina" se refiere a una enfermedad en la que la sobreexpresión de mucina, sobreproducción de mucina o acumulación aberrante de mucina o material mucinoso está asociada con la patología o secuelas de una enfermedad o trastorno.

Tal como se usa en el presente documento, los términos "tratamiento" o "tratar" significan: (1) mejorar o estabilizar la afección o enfermedad del sujeto o (2) prevenir o aliviar el desarrollo o empeoramiento de los síntomas asociados con la afección o enfermedad del sujeto.

Tal como se usa en el presente documento, los términos "administración" o "administrar" significan una vía de administración para un compuesto descrito en el presente documento. Las vías de administración de ejemplo incluyen, aunque sin limitación, oral, intravenosa, intraperitoneal, intraarterial e intramuscular. La vía de administración preferida puede variar dependiendo de diversos factores, por ejemplo, los componentes de la composición farmacéutica que comprende un agente como se describe en el presente documento, el sitio de la enfermedad potencial o real y la gravedad de la enfermedad.

Tal como se usa en el presente documento, la expresión "cantidad eficaz" significan la cantidad de una composición descrita en el presente documento que cuando se administra a un sujeto para tratar una enfermedad, es suficiente para realizar dicho tratamiento de la enfermedad. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", como se usa en el presente documento, incluye dentro de su significado una cantidad no tóxica pero suficiente de un agente o composición para su uso en la presente divulgación para proporcionar el efecto terapéutico deseado. La cantidad exacta necesaria variará de un sujeto a otro dependiendo de factores tales como la especie que se esté tratando, la edad y el estado general del sujeto, la gravedad de la afección que se está tratando, el agente particular que se esté administrando, el modo de administración y similares. Así pues, no es posible especificar una "cantidad eficaz" exacta aplicable a todas las realizaciones. Sin embargo, en cualquier caso, puede determinarse una "cantidad eficaz" adecuada por un experto habitual en la materia usando únicamente experimentación rutinaria. Una cantidad eficaz de una composición desvelada en el presente documento, utilizada para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina puede variar dependiendo de la forma de administración, la edad, el peso corporal y el estado de salud general del paciente. En definitiva, los prescriptores o investigadores decidirán la dosis adecuada y el régimen de dosificación.

Los términos "sinergia", "sinérgico/a", "efecto sinérgico" y "combinación sinérgica" tal como se usan en el presente documento se refieren a una mezcla de dos o más agentes discretos que, cuando se combinan, muestran un grado de actividad, tal como actividad mucolítica, actividad anticancerosa, actividad antiproliferativa o citotoxicidad, etc., que es mayor que el efecto aditivo esperado de dichos agentes. Los términos también se refieren al efecto combinado de administrar una cantidad de un agente terapéutico que, cuando se administra solo, no produce una respuesta significativa pero, cuando se administra junto con uno o más compuestos terapéuticos adicionales, produce una respuesta general que es significativamente mayor que la producida por uno o más compuestos solos.

El término "anticanceroso", tal como se usa en el presente documento, tiene la intención de referirse a la actividad de suprimir la formación o el crecimiento de células cancerosas, matar células cancerosas o inhibir o bloquear la metástasis de células cancerosas, que abarca el significado de la inhibición de la metástasis de células cancerosas así como la profilaxis y el tratamiento del cáncer.

Tal como se usa en el presente documento, el término "régimen anticanceroso" se refiere a un plan o un curso regulado destinado a suprimir la formación o el crecimiento de células cancerosas, matar las células cancerosas o inhibir o bloquear la metástasis de las células cancerosas, definir los fármacos a utilizar, su dosis, la frecuencia de administración y la duración de los tratamientos.

Tal como se usa en el presente documento, los términos "sujeto" y "paciente" se usan indistintamente en el presente documento. Se refieren a un ser humano u otro mamífero (por ejemplo, ratón, rata, conejo, perro, gato, ganado, cerdos, oveja, caballo o primate) que puede estar afectado o es susceptible a una enfermedad o trastorno, pero puede o no tener la enfermedad o el trastorno. En ciertas realizaciones, el sujeto es un ser humano.

Tal como se usa en el presente documento, el término "agente" significa cualquier compuesto químico de molécula pequeña, anticuerpo, molécula de ácido nucleico o polipéptido o fragmento del mismo.

Cuando los términos "comprenden", "comprende", "comprendido" o "que comprende" se utilizan en esta memoria descriptiva (incluidas las reivindicaciones), deben interpretarse como que especifican la presencia de las características indicadas, integrantes, etapas o componentes, pero no excluyen la presencia de una o más de otras características, integrantes, etapas o componentes, o grupos de los mismos.

Una referencia en el presente documento a un documento de patente u otro asunto que se da como estado de la técnica no se debe tomar como una admisión de que ese documento o asunto era conocido o que la información que contiene era parte del conocimiento general común en la fecha de prioridad de cualquiera de las reivindicaciones.

Mucina

mucinas, los componentes formadores de gel de las secreciones mucinosas, son grandes macromoléculas polidispersas (1.000 kDa) que comprenden una serie de monómeros de glicoproteínas (100-10.000 kDa). La polimerización de unidades de glicoproteína individuales tiene lugar mediante la formación de enlaces glucosídicos. La mucina se reticula aún más entre sí mediante la formación de enlaces disulfuro por oxidación que tiene lugar ya sea enzimáticamente o mediante la variación del pH.

La familia de las mucinas incluye proteínas que contienen estructuras repetidas en tándem con una alta proporción de prolinas, treoninas y serinas (que constituyen el dominio PTS). Las mucinas se definen además por la glicosilación extensa del dominio PTS a través de enlaces O de GalNAC en los restos de treonina y serina, así como otros enlaces. La familia de la mucina humana (MUC) consta de miembros designados MUC1 a MUC21 que se han subclasificado en formas secretadas y transmembrana.

Las mucinas secretadas (por ejemplo, MUC2, MUC5AC, MUC5B y MUC6) pueden formar una barrera física, que como gel mucoso brinda protección a las células epiteliales que recubren los tractos respiratorio y gastrointestinal y forman las superficies ductales de órganos tales como el hígado, mama, el páncreas y el riñón.

Las mucinas transmembrana (por ejemplo, MUC1, MUC4, MUC13 y MUC16) tienen una sola región que atraviesa la membrana y contribuyen al gel mucoso protector a través de sus ectodominios de repeticiones en tándem O-glucosiladas que forman estructuras similares a varillas que se extienden más de 100 nm desde la superficie celular y más allá del glucocáliz de ~10 nm.

MUC1 se expresa de manera aberrante en una alta proporción de carcinomas y ciertas neoplasias malignas hematológicas, lo que hace que la sobreexpresión de MUC1 sea una de las alteraciones más comunes en los cánceres humanos.

Se ha descubierto que los clones de cáncer de colon HT29 con diferentes tipos de secreción de mucina tienen una resistencia variable a los medicamentos de quimioterapia comunes 5FU y metotrexato. La mucina de inmunorreactividad colónica que confiere resistencia al 5FU (principalmente MUC 2) y la de reactividad gástrica que confiere resistencia al metotrexato en pacientes con histología mucinosa de carcinoma colorrectal se asocia con una tasa de respuesta deficiente a la quimioterapia y supervivencia. Se sabe que la mucina impide el efecto citotóxico del 5FU contra el crecimiento de células de cáncer de páncreas humano. Así pues, la mucina puede actuar como una barrera celular limitando la acción quimioterapéutica. Esto se evidencia adicionalmente por el hecho de que la inhibición de la O-glicosilación de mucina aumenta los efectos citotóxicos de 5FU contra líneas celulares de cáncer de páncreas pero no contra una línea celular deficiente en mucina.

El aislamiento de material mucinoso de sujetos que padecen enfermedades relacionadas con la mucina ha revelado que existe una variación interindividual en la textura, la elasticidad, la compacidad y la hidratación de la mucina. Por ejemplo, las secreciones mucinosas en pacientes con PMP varían en cuanto a su compacidad, desde baja (blanda), media a alta (muy compacta) y puede comprender material cartilaginoso que puede ser de origen celular.

En consecuencia, es posible caracterizar el material mucinoso según su apariencia y dureza. Por ejemplo, una muestra de mucina puede caracterizarse mediante inspección visual y cálculo de un índice de dureza, en donde una muestra de mucina se evalúa primero visualmente como transparente, semiopaca u opaca, y luego se pesa y se hidrata durante un período definido. Después de la hidratación, se mide el área ocupada por la mucina colocada sobre una superficie plana y se calcula el índice de dureza de acuerdo con la siguiente fórmula: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en una superficie (mm2). Tras dicha evaluación, el material mucinoso se puede caracterizar como blando, semiduro o duro o que tiene una consistencia blanda, semidura o dura, donde la mucina es transparente, semiopaca u opaca, respectivamente, y/o en donde se determina que la mucina tiene un índice de dureza de ≤ 0,6, > 0,6-1,2 o > 1,2, respectivamente (Akhter, J. et al. 2014 Am J Cancer Res, 4(5):495-507).

Bromelina

Como se ha esbozado anteriormente, un extracto de la planta de piña (Ananas comosus), comprende diferentes tiol endopeptidasas y otros componentes como fosfatasas, glucosidasas, peroxidasas, celulasas, glucoproteínas, carbohidratos y varios inhibidores de la proteasa. Varias preparaciones de bromelina están disponibles comercialmente y los métodos para la extracción y purificación de bromelina del tallo de la planta de piña son conocidos en la técnica, así como también se han descrito métodos para la extracción de componentes proteolíticamente activos de bromelina (Patente de Estados Unidos 3.002.891; patente de Estados Unidos 3.442.764; patente de Estados Unidos 3.455.787; Harrach et al. 1995. J Protein Chem, 14(1):41-52; Harrach et al. 1998. J Protein Chem, 17(4):351-61).

Desintegración de mucina

Se apreciará que el material mucinoso caracterizado como blando es más fácil de desintegrar y/o solubilizar que el material mucinoso semiduro, y que el material mucinoso semiduro es más fácil de desintegrar y/o solubilizar que el material mucinoso duro.

Los inventores han demostrado que la combinación de un agente mucolítico con bromelina puede usarse para la desintegración de mucina. En el presente documento, los inventores también han descubierto sorprendentemente que una nueva combinación de cisteamina y bromelina tiene una mayor eficacia en la desintegración y/o solubilización de mucina, que cualquier agente solo u otras combinaciones que impliquen bromelina.

En consecuencia, en una realización, la presente invención proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables y al menos otro compuesto biológicamente activo o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, en donde el compuesto biológicamente activo se selecciona entre uno cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio.

En una realización adicional, el compuesto biológicamente activo es un agente anticanceroso, opcionalmente seleccionado entre cisplatino, doxorrubicina, 5-fluorouracilo o gemcitabina.

Además, los inventores han descubierto sorprendentemente que la desintegración y/o la solubilización del material mucinoso que se caracteriza por tener una consistencia semidura o dura mejora drásticamente cuando se expone a una combinación de cisteamina y bromelina, en comparación con el agente solo u otras combinaciones que implican bromelina.

Como se ha esbozado anteriormente, el material mucinoso en un sujeto se puede caracterizar por ser de una consistencia blanda, semidura o dura. Como se describen en el presente documento, los presentes inventores han demostrado que el tiempo necesario para desintegrar y/o solubilizar el material mucinoso puede reducirse sustancialmente. En particular, la velocidad y eficiencia para la desintegración y/o solubilización de material mucinoso semiduro o duro puede reducirse drásticamente cuando dicha mucina se expone a una combinación de cisteamina y bromelina, o una fracción proteolítica de las mismas, en comparación con otras combinaciones. En consecuencia, tales composiciones de la presente descripción pueden usarse para reducir sustancialmente la cantidad de tiempo necesario para desintegrar y/o solubilizar el material mucinoso en el sujeto y, por lo tanto, facilitar su eliminación o extracción del sujeto.

Por lo tanto, se apreciará que el uso de las composiciones descritas en el presente documento puede proporcionar varias ventajas que incluyen, pero sin limitación, una eliminación más completa y eficaz de material mucinoso de un sujeto que la que se puede obtener usando las terapias actuales.

En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables para usar en el tratamiento de una enfermedad que implica la sobreexpresión, sobreproducción o acumulación aberrante de mucina. En otra realización, al sujeto se le diagnostica una acumulación de mucina. En una realización preferida, la mucina incluye mucina caracterizada por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina. En otro aspecto se diagnostica al sujeto una acumulación de material mucinoso. En un aspecto preferido, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga un método para tratar a un sujeto con una enfermedad relacionada con la mucina que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. En otro aspecto se diagnostica al sujeto una acumulación de material mucinoso. En un aspecto preferido, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En una realización adicional, la composición administrada comprende adicionalmente al menos otro compuesto biológicamente activo, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. En una realización adicional, el compuesto biológicamente activo se selecciona entre una cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. En una realización preferida, el compuesto biológicamente activo es un agente anticanceroso.

En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables para la desintegración y/o solubilización de la mucina en un sujeto. En otra realización, al sujeto se le diagnostica una acumulación de mucina. En una realización preferida, la mucina incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo en la fabricación de un medicamento para la desintegración y/o solubilización de material mucinoso en un sujeto. En otro aspecto, al sujeto se le diagnostica una acumulación de material mucinoso. En un aspecto preferido, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga un método de desintegración y/o solubilización de material mucinoso en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. En otro aspecto se diagnostica al sujeto una acumulación de material mucinoso. En un aspecto preferido, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En otra realización, la presente divulgación proporciona una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal. En otra realización, el cáncer se selecciona entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. En otra realización, el cáncer es un adenocarcinoma. En una realización adicional, el adenocarcinoma es un carcinoma de células en anillo de sello. En otra realización, al sujeto se le diagnostica una acumulación de material mucinoso. En una realización preferida, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga el uso de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal. En otro aspecto, el cáncer se selecciona entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. En otro aspecto, el cáncer es un adenocarcinoma. En un aspecto adicional, el adenocarcinoma es un carcinoma de células en anillo de sello. En otro aspecto se diagnostica al sujeto una acumulación de material mucinoso. En un aspecto preferido, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente descripción divulga un método para el tratamiento del cáncer o pseudomixoma peritoneal que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. En otro aspecto, el cáncer se selecciona entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario. En otro aspecto, el cáncer es un adenocarcinoma. En un aspecto adicional, el adenocarcinoma es un carcinoma de células en anillo de sello. En otro aspecto se diagnostica al sujeto una acumulación de material mucinoso. En un aspecto preferido, el material mucinoso incluye material mucinoso caracterizado por tener una consistencia semidura o dura.

En una realización adicional, la composición comprende adicionalmente al menos otro compuesto biológicamente activo, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. En una realización adicional, el compuesto biológicamente activo se selecciona entre una cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. En una realización preferida, el compuesto biológicamente activo es un agente anticanceroso.

Composiciones, medicamentos y kits

En el presente documento se divulgan composiciones farmacéuticas, medicamentos y kits de la presente divulgación y al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. Para preparar las composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos descritos en el presente documento, los vehículos inertes farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones en forma sólida incluyen polvos, comprimidos, gránulos dispersables, cápsulas, obleas y supositorios. Los polvos y comprimidos pueden comprender de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 95 por ciento de principio activo. Se conocen en la técnica vehículos sólidos adecuados, por ejemplo, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar o lactosa. Pueden usarse comprimidos, polvos, obleas y cápsulas como formas de dosificación sólidas adecuadas para administración oral. Algunos ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables y métodos de fabricación para diversas composiciones pueden encontrarse en A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pensilvania.

Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones, por ejemplo agua o soluciones de agua-propilenglicol para inyección parenteral o administración o inyección intraperitoneal, o adición de edulcorantes y opacificantes para soluciones orales, suspensiones y emulsiones. Las preparaciones en forma líquida también pueden incluir soluciones para administración intranasal.

Las preparaciones en aerosol adecuadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvo, que pueden combinarse con un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un gas inerte comprimido, por ejemplo, nitrógeno. También se incluyen preparaciones en forma sólida que se pretende que se conviertan, poco antes de su uso, en preparaciones en forma líquida para la administración oral o parenteral. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones.

Los compuestos de la divulgación también pueden ser administrados por vía transdérmica. Las composiciones transdérmicas pueden estar en forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden incluirse en un parche transdérmico del tipo matriz o depósito como son convencionales en la técnica para este fin.

Los compuestos de la presente divulgación también pueden administrarse por vía subcutánea.

Las composiciones y medicamentos de la presente divulgación pueden comprender un vehículo, adyuvante, excipiente y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los vehículos, diluyentes, excipientes y adyuvantes deben ser "aceptables" en términos de ser compatibles con los otros ingredientes de la composición o medicamento, y generalmente no son perjudiciales para el receptor de los mismos. Los ejemplos no limitantes de vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables son agua desmineralizada o destilada; solución salina; aceites vegetales, tales como aceite de cacahuete, aceite de cártamo, aceite de oliva, aceite de algodón, aceite de maíz; aceites de sésamo, tales como aceite de cacahuete, aceite de cártamo, aceite de oliva, aceite de algodón, aceite de maíz, aceite de sésamo, aceite de cacahuete o aceite de coco; aceites de silicona, incluyendo polisiloxanos, tales como metil polisiloxano, fenil polisiloxano y metilfenil polisiloxano; siliconas volátiles; aceites minerales, tales como parafina líquida, parafina blanda o escualano; derivados de celulosa, tales como metilcelulosa, etilcelulosa, carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio o hidroxil-propil-metil-celulosa; alcanoles inferiores, por ejemplo etanol o isopropanol; aralcanoles inferiores; polialquilenglicoles inferiores o alquilenglicoles inferiores, por ejemplo, polietilenglicol, polipropilenglicol, etilenglicol, propilenglicol, 1,3-butilenglicol o glicerina; ésteres de ácidos grasos, tales como palmitato de isopropilo, miristato de isopropilo u oleato de etilo; polivinilpirrolidona; agar; goma tragacanto o goma arábiga, y vaselina. Normalmente, el vehículo o vehículos formarán de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 99,9 % en peso de la composición o medicamento.

Las composiciones y medicamentos de la presente descripción pueden estar en una forma adecuada para la administración por inyección (por ejemplo, para la administración parenteral, incluida inyección intraperitoneal, subcutáneas, inyección intramuscular o intravenosa), por administración oral (tales como cápsulas, comprimidos, cápsulas y elixires, por ejemplo), por administración tópica (por ejemplo, en forma de ungüento, crema o loción, o una forma adecuada para administrarse como un colirio), o por inhalación intranasal (por ejemplo, en forma de aerosoles).

Para administración como solución o suspensión inyectable, los diluyentes o vehículos aceptables por vía parenteral no tóxicos pueden incluir, solución de Ringer, solución salina isotónica, solución salina tamponada con fosfato, etanol y 1,2 propilenglicol. Los métodos para preparar composiciones y medicamentos administrables por vía parenteral son evidentes para los expertos en la técnica y se describen con más detalle en, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Science, 15a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa.

Para administración oral, algunos ejemplos de vehículos, diluyentes, excipientes y adyuvantes adecuados incluyen aceite de maní, parafina líquida, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, alginato de sodio, goma arábiga, goma de tragacanto, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, gelatina y lecitina. Además, estas formulaciones orales pueden contener agentes aromatizantes y colorantes adecuados. Cuando se usan en forma de cápsula, las cápsulas pueden recubrirse con compuestos tales como monoestearato de glicerilo o estearato de glicerilo que retrasan la desintegración. Los adyuvantes típicamente incluyen emolientes, emulsionantes, agentes espesantes, conservantes, bactericidas y agentes amortiguadores.

Las formas sólidas para administración oral pueden contener aglutinantes aceptables en la práctica farmacéutica humana y veterinaria, edulcorantes, desintegrantes, diluyentes, aromatizantes, agentes de recubrimiento, conservantes, lubricantes y/o agentes retardadores de tiempo. Los aglutinantes adecuados incluyen goma arábiga, gelatina, almidón de maíz, goma de tragacanto, alginato de sodio, carboximetilcelulosa o polietilenglicol. Los edulcorantes adecuados incluyen sacarosa, lactosa, glucosa, aspartamo o sacarina. Los agentes desintegrantes adecuados incluyen almidón de maíz, metilcelulosa, polivinilpirrolidona, goma guar, goma xantana, bentonita, ácido algínico o agar. Los diluyentes adecuados incluyen lactosa, sorbitol, manitol, dextrosa, caolín, celulosa, carbonato cálcico, silicato de calcio o fosfato dicálcico. Los agentes aromatizantes adecuados incluyen aceite de menta, aceite de gaulteria, cereza, aroma de naranja o frambuesa. Los agentes de recubrimiento adecuados incluyen polímeros o copolímeros de ácido acrílico y/o ácido metacrílico y/o sus ésteres, ceras, alcoholes grasos, zeína, goma laca o gluten. Los conservantes adecuados incluyen benzoato de sodio, vitamina E, alfa-tocoferol, ácido ascórbico, metilparabeno, propilparabeno o bisulfito de sodio. Entre los lubricantes adecuados se incluyen estearato de magnesio, ácido esteárico, oleato de sodio, cloruro de sodio o talco. Los agentes retardadores de tiempo adecuados incluyen monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.

Las formas líquidas para administración oral pueden contener, además de los agentes anteriores, un vehículo líquido. Los vehículos líquidos adecuados incluyen agua, aceites tales como aceite de oliva, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, aceite de girasol, aceite de cártamo, aceite de cacahuete, aceite de coco, parafina líquida, etilenglicol, propilenglicol, polietilenglicol, etanol, propanol, isopropanol, glicerol, alcoholes grasos, triglicéridos o mezclas de los mismos.

Las suspensiones para administración oral pueden comprender además agentes dispersantes y/o agentes de suspensión. Los agentes de suspensión adecuados incluyen carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, polivinilpirrolidina, alginato de sodio o alcohol acetílico. Los agentes dispersantes adecuados incluyen lecitina, ésteres de polioxietileno de ácidos grasos tales como ácido esteárico, mono- o dioleato de polioxietilen sorbitol, -estearato o -laurato, monooleato o dioleato de polioxietilensorbitán, -estearato o -laurato y similares.

Las formulaciones para administración oral pueden comprender uno o más agentes emulsionantes. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen agentes dispersantes como los ejemplificados anteriormente o gomas naturales como la goma guar, goma arábiga o goma de tragacanto.

Las formulaciones tópicas de la presente descripción pueden comprender un principio activo junto con uno o más vehículos aceptables y, opcionalmente, cualquier otro ingrediente terapéutico. Las formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen preparaciones líquidas o semilíquidas adecuadas para la penetración a través de la piel hasta el sitio donde se requiere el tratamiento, tales como linimentos, lociones, cremas, ungüentos o pastas y gotas adecuadas para su administración en los ojos, oídos o nariz.

Las gotas de acuerdo con la presente descripción pueden comprender soluciones o suspensiones acuosas u oleosas estériles. Estos pueden prepararse disolviendo el principio activo en una solución acuosa de un agente bactericida y/o fungicida y/o cualquier otro conservante adecuado, y opcionalmente incluyendo un agente tensioactivo. La solución resultante puede entonces ser clarificada por filtración, transferida a un recipiente adecuado y esterilizada. La esterilización puede lograrse en autoclave o manteniendo a 90 °C-100 °C durante media hora, o por filtración, seguido de transferencia a un recipiente mediante una técnica aséptica. Ejemplos de agentes bactericidas y fungicidas adecuados para su inclusión en las gotas son nitrato o acetato fenilmercúrico (0,002 %), cloruro de benzalconio (0,01 %) y acetato de clorhexidina (0,01 %). Los disolventes adecuados para la preparación de una solución oleosa incluyen glicerol, alcohol diluido y propilenglicol.

Las lociones de acuerdo con la presente descripción incluyen las adecuadas para su aplicación en la piel o los ojos. Una loción para los ojos puede comprender una solución acuosa estéril que contiene opcionalmente un bactericida y puede prepararse mediante métodos similares a los descritos anteriormente en relación con la preparación de gotas. Las lociones o linimentos para aplicar sobre la piel también pueden incluir un agente para acelerar el secado y enfriar la piel, tal como un alcohol o acetona, y/o un humectante como glicerol, o un aceite como aceite de ricino o aceite de cacahuete.

Las cremas, pomadas o pastas de acuerdo con la presente divulgación son formulaciones semisólidas del principio activo para aplicación externa. Pueden prepararse mezclando el principio activo en forma finamente dividida o en polvo, solo o en solución o suspensión en un fluido acuoso o no acuoso, con base grasa o no grasa. La base puede comprender hidrocarburos tal como parafina dura, blanda o líquida, glicerol, cera de abeja, un jabón metálico; un mucílago; un aceite de origen natural tal como aceite de almendra, maíz, cacahuete, ricino u oliva, grasa de lana o sus derivados, o un ácido graso como el ácido esteárico u oleico junto con un alcohol tal como propilenglicol o macrogoles.

Las composiciones y medicamentos de la presente divulgación pueden incorporar cualquier tensioactivo adecuado, tal como un tensioactivo aniónico, catiónico o no iónico, tales como ésteres de sorbitán o derivados de polioxietileno de los mismos. También se pueden incluir agentes de suspensión, tales como gomas naturales, derivados de celulosa o materiales inorgánicos tales como sílices silíceos, y otros ingredientes tales como lanolina.

Las composiciones de la presente divulgación pueden formularse para administración dirigida o administración sostenida. Por ejemplo, las composiciones se pueden recubrir entéricamente para promover el suministro al intestino delgado o al pH deseado del tracto gastrointestinal inferior. Un fármaco o comprimido con cubierta entérica se refiere, en general, a un fármaco o comprimido que está recubierto con una sustancia (un "recubrimiento entérico") que permanece intacto o sustancialmente intacto de manera que el fármaco o comprimido pasa a través del estómago pero se disuelve y libera el fármaco en el intestino delgado.

Cualquiera de las formulaciones de la divulgación puede administrarse en una forma de liberación sostenida. La formulación de liberación sostenida tiene la ventaja de administrar durante un período prolongado de tiempo sin necesidad de administraciones repetidas de la formulación.

Se puede lograr una liberación sostenida, por ejemplo, con un material de liberación sostenida tal como una oblea, una inmunoesfera, una microbomba u otro material que proporcione una liberación lenta controlada de la composición. Dichos materiales de liberación controlada son bien conocidos en la técnica y están disponibles de fuentes comerciales. Además, se puede formular un material bioerosionable o biodegradable con los agentes activos de la divulgación, tal como ácido poliláctico, ácido poligaláctico, colágeno regenerado, liposomas multilaminares u otras formulaciones de depósito convencionales, pueden implantarse para liberar lentamente las composiciones. El uso de bombas de infusión, sistemas de atrapamiento de matriz y dispositivos de suministro transdérmico también se contemplan en la divulgación.

Los agentes activos/formulaciones también pueden incluirse ventajosamente en micelas o liposomas. La tecnología de encapsulación de liposomas es bien conocida. Los liposomas se pueden dirigir a un tejido específico, tal como tejido neural, mediante el uso de receptores, ligandos o anticuerpos capaces de unirse a un antígeno o diana en el tejido deseado. La preparación de estas formulaciones es bien conocida en la técnica (véase, por ejemplo, Pardridge, citado anteriormente (1991), y Radin y Metz, Meth Enzymol. 98:613-618 (1983)).

Las composiciones de la presente divulgación también pueden incluir excipientes o vehículos farmacéuticamente aceptables adicionales. Un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable se refiere, en general, a materiales que son adecuados para la administración a un sujeto en el que el excipiente o vehículo no es biológicamente dañino, o de otro modo, causa efectos indeseables. Dichos excipientes o vehículos son típicamente ingredientes inertes de un medicamento. Normalmente, un excipiente o vehículo se administra a un sujeto junto con un principio activo sin causar efectos biológicos indeseables o interactuar de manera perjudicial con cualquiera de los otros componentes de una composición farmacéutica en la que está contenido.

Un principio activo, composición farmacéutica u otra de la divulgación puede comprender un agente estabilizante. También pueden añadirse agentes estabilizantes, en general, se refieren a compuestos que reducen la velocidad a la que se degrada un producto farmacéutico, particularmente una formulación farmacéutica oral en condiciones ambientales de almacenamiento. Ciertos estabilizadores son adecuados para la administración intravascular. Por ejemplo, se pueden usar uno o más de los siguientes estabilizantes para formular un producto de cisteamina para administración intravascular: a-tocoferol, 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (BHAT), acetato de tocoferol, 2-terc-butil-4-hidroxianisol y/o 3-terc-butil-4-hidroxianisol (BHA), galato de dodecilo, acetato y ácido ascórbico.

Los principios activos complementarios tales como adyuvantes o modificadores de la respuesta biológica también pueden incorporarse en las composiciones y medicamentos de la presente divulgación.

Preferentemente, la composición de la presente divulgación se administra por vía oral, intravenosa o intraperitoneal en el tratamiento de cánceres secretores de mucina.

Preferentemente, la composición de la presente divulgación se administra mediante inyección intraperitoneal cuando se trata la PMP.

Otro aspecto de la presente divulgación es un kit que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de cada uno de cisteamina, bromelina o una fracción proteolítica de las mismas, opcionalmente uno o más de compuestos biológicamente activos y un vehículo farmacéuticamente aceptable, vehículo o diluyente.

Otro aspecto de la presente divulgación es un kit que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de cada uno de cisteamina, bromelina o una fracción proteolítica de las mismas, opcionalmente uno o más compuestos biológicamente activos y al menos un agente quimioterapéutico, en donde la cantidad de los dos o más ingredientes da como resultado un efecto terapéutico deseado.

Los kits de la presente divulgación pueden comprender componentes para ayudar a realizar los métodos de la presente divulgación tales como, por ejemplo, dispositivo(s) de administración, tampón(es) y/o diluyente(s). Los kits pueden incluir recipientes para albergar los diversos componentes e instrucciones para usar los componentes del kit en los métodos de la presente divulgación.

En ciertas realizaciones, los kits pueden ser kits combinados.

En otras realizaciones, los kits pueden ser kits fragmentados.

Dosis y vías de administración

Los agentes, composiciones y medicamentos pueden administrarse a un receptor por vías estándar, incluyendo, pero sin limitación, las vías parenteral (por ejemplo, intraperitoneal, intravenosa, intrarraquídea, subcutánea o intramuscular), oral, tópica o mucosa (por ejemplo, intranasal). En algunas realizaciones, pueden administrarse a un receptor de forma aislada o en combinación con otro(s) agente(s) terapéutico(s) adicional(es). En tales realizaciones, la administración puede ser simultánea o secuencial.

En general, los agentes, composiciones y medicamentos pueden administrarse de manera compatible con la vía de administración y las características físicas del receptor (incluido el estado de salud) y de tal manera que se induzcan los efectos deseados (es decir, terapéuticamente eficaces, inmunogénicos y/o protectores). Por ejemplo, la dosis apropiada puede depender de diversos factores que incluyen, pero sin limitación, las características físicas de un sujeto (por ejemplo, edad, peso, sexo), si el agente, composición o medicamento se utiliza como agente único o terapia adyuvante, la progresión (es decir, el estado patológico) de una enfermedad o afección que se está tratando, y otros factores fácilmente evidentes para los expertos en la técnica.

Se describen varias consideraciones generales a la hora de determinar una dosis apropiada de los agentes, composiciones y medicamentos, por ejemplo, en Gennaro et al. (Eds), (1990), "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pensilvania, EE. UU.; y Gilman et al., (Eds), (1990), "Goodman And Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics", Pergamon Press.

En general, un agente, la composición o medicamento de la presente divulgación se puede administrar a un paciente en una cantidad de aproximadamente 50 microgramos a aproximadamente 500 mg de componente(s) activo(s). En general, se espera que una dosificación eficaz esté en el intervalo de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 1000 mg de componente(s) activo(s) por kg de peso corporal por 24 horas; normalmente, de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 750 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 500 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 500 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 250 mg por kg de peso corporal en 24 horas; o de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 250 mg por kg de peso corporal en 24 horas. Más normalmente, se espera que un intervalo de dosis efectivo esté en el intervalo de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 200 mg por kg de peso corporal por 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 1,0 mg a aproximadamente 25 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 5,0 mg a aproximadamente 50 mg por kg de peso corporal en 24 horas; de aproximadamente 5,0 mg a aproximadamente 20 mg por kg de peso corporal en 24 horas; o de aproximadamente 5,0 mg a aproximadamente 15 mg por kg de peso corporal en 24 horas.

En otras realizaciones, se prevé que puedan utilizarse dosis más altas. En determinadas realizaciones, se prevé que la dosificación pueda variar entre aproximadamente 1 mg de componente/kg de peso corporal y aproximadamente 5000 mg de componente/kg de peso corporal; o de aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 4000 mg/kg de peso corporal o de aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 3000 mg/kg de peso corporal; o de aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 2000 mg/kg de peso corporal; o de aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 1000 mg/kg de peso corporal; o de aproximadamente 150 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal. En otras realizaciones, esta dosis puede ser de aproximadamente 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500 y 5000 mg/kg de peso corporal.

Normalmente, en aplicaciones de tratamiento, el tratamiento puede ser por la duración del estado de enfermedad o afección. Asimismo, será evidente para un experto en la materia que la cantidad y el espaciamiento óptimos de las dosis individuales pueden determinarse por la naturaleza y el alcance del estado de enfermedad o afección que se está tratando, la forma, la vía y el sitio de administración, y la naturaleza del tema particular que se está tratando. Las dosis óptimas se pueden determinar usando técnicas convencionales.

En muchos casos (por ejemplo, aplicaciones preventivas), puede ser deseable tener varias o múltiples administraciones de un agente, composición o medicamento de la presente divulgación que puede, por ejemplo, administrarse 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más veces. Las administraciones pueden ser de intervalos de aproximadamente una a aproximadamente doce semanas, y en ciertas realizaciones de intervalos de aproximadamente una a aproximadamente cuatro semanas. También se contempla la readministración periódica.

También será evidente para un experto en la técnica que el curso óptimo de administración se puede determinar utilizando ensayos convencionales de determinación del curso del tratamiento.

Cuando dos o más entidades (por ejemplo, agentes o medicamentos) se administran a un sujeto "en conjunto", pueden administrarse en una sola composición al mismo tiempo, o en composiciones separadas al mismo tiempo, o en composiciones separadas distanciadas en el tiempo.

Ciertas realizaciones de la presente descripción implican la administración de los agentes, composiciones o medicamentos en múltiples dosis separadas. En consecuencia, los métodos para el tratamiento profiláctico y terapéutico descritos en el presente documento abarcan la administración de múltiples dosis separadas a un sujeto, por ejemplo, durante un periodo de tiempo definido. En consecuencia, en algunas realizaciones, los métodos incluyen administrar una dosis de cebado, que puede ser seguida por una dosis de refuerzo. En diversas realizaciones, el agente, la composición o el medicamento se administra al menos una vez, dos veces, tres veces o más.

Los agentes, las composiciones y los medicamentos generalmente se pueden administrar en una cantidad efectiva para lograr un propósito previsto. De manera más específica, pueden administrarse en una cantidad terapéuticamente eficaz, lo que significa una cantidad eficaz para prevenir el desarrollo de, o para aliviar los síntomas existentes de, una enfermedad o afección objetivo. La determinación de cantidades eficaces se encuentra dentro de la capacidad del experto en la técnica. Por ejemplo, una dosis terapéuticamente eficaz de los agentes, composiciones y medicamentos pueden estimarse inicialmente a partir de ensayos de cultivos celulares. Por ejemplo, puede formularse una dosis en modelos animales para lograr un intervalo de concentración circulante que incluya la CI50 determinada en cultivo celular. Dicha información se puede utilizar para determinar con mayor precisión las dosis útiles en seres humanos y otros mamíferos.

Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere a la cantidad del agente, composición o medicamento para prevenir el desarrollo de síntomas, mejorar los síntomas y/o prolongar la supervivencia del sujeto en tratamiento. La toxicidad y eficacia terapéutica de los agentes, composiciones y medicamentos pueden determinarse mediante ensayos farmacéuticos estándar en cultivos celulares y/o animales de experimentación (por ejemplo, mediante la determinación de la DL50 (la dosis letal para el 50 % de la población) y la ^dE50 (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50 % de la población). La relación de la dosis entre efectos tóxicos y terapéuticos es el índice terapéutico que puede expresarse como la relación DL50/DE50. Se prefieren agentes, composiciones y medicamentos que muestran altos índices terapéuticos. Los datos obtenidos de tales ensayos de cultivos celulares y/o estudios en animales pueden usarse para formular un intervalo de dosificación para uso en humanos u otros mamíferos. La dosificación de dichos compuestos se encuentra preferentemente dentro del intervalo de concentraciones circulantes que incluyen la DE50 con poca o ninguna toxicidad. La dosis puede variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma farmacéutica empleada y la vía de administración utilizada. La formulación exacta, la ruta de administración y la dosificación pueden ser seleccionadas sin dificultad por un médico individual en vista de la condición del sujeto (véase, por ejemplo, Fingl et al., (1975), en "The Pharmacological Basis of Therapeutics", C. 1 pág. 1). La cantidad de dosificación y el intervalo pueden ajustarse individualmente para proporcionar niveles plasmáticos del agente activo suficientes para lograr y mantener el/los efecto/s terapéutico/s deseado/s y/o una concentración eficaz mínima (CEM). Las dosis necesarias para lograr la CEM dependerán de la vía de administración y otras características individuales. Pueden usarse bioensayos y/o ensayos de HPLC para determinar las concentraciones en plasma.

Los intervalos de dosificación también pueden determinarse utilizando el valor de la CME. En general, los agentes, las composiciones y los medicamentos pueden administrarse utilizando un régimen que mantiene los niveles plasmáticos por encima de la CEM entre aproximadamente el 10 % y el 90 % del tiempo, preferentemente entre 30 %-90 % y, más preferentemente, entre aproximadamente 50 %-90 %. En realizaciones donde se utiliza administración local o captación selectiva, la concentración local eficaz del fármaco puede no estar relacionada con la concentración en plasma.

En una realización, la dosificación es de aproximadamente 500-50.000 mg/kg de peso corporal/día de cisteamina, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. En otra realización, la dosis cuando se administra en la cavidad intraperitoneal o en el propio tumor es de aproximadamente 2000 mg/kg de peso corporal/día, o aproximadamente 2500 mg/kg de peso corporal/día de una cisteamina, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. En otra realización, la dosificación cuando se administra por vía oral es de aproximadamente 10.000 mg/kg de peso corporal/día de cisteamina, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables.

En una realización, la dosificación cuando se administra en la cavidad intraperitoneal o en el propio tumor es de aproximadamente 10-50 mg/kg de peso corporal/día de uno o más compuestos en Br, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto. En otra realización, la dosificación cuando se administra por vía oral es de aproximadamente 50-1000 mg/kg de peso corporal/día de uno o más compuestos en Br, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto.

En una realización, la dosificación de cisplatino está en el intervalo de 20 mg/m2 a aproximadamente 120 mg/m2.

Una dosificación preferida del compuesto biológicamente activo, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto está de acuerdo con el intervalo de dosificación recomendado como se indica en MIMS (la publicación "The Monthly Index of Medical Specialities").

Combinaciones

Como se describen en el presente documento, las composiciones de la presente divulgación comprenden bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato de la misma y pueden incluir además uno o más compuestos biológicamente activos. Dichos agentes pueden incluir un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio.

En consecuencia, las composiciones de la presente descripción pueden comprender o usarse en combinación (administradas juntas o secuencialmente) con uno o más tratamientos contra el cáncer, tales como radioterapia, y/o uno o más agentes quimioterapéuticos, tales como agentes citostáticos, agentes citotóxicos (tales como, por ejemplo, pero sin limitaciones, agentes interactivos con el ADN (tales como cisplatino o doxorrubicina)); taxanos (por ejemplo, taxotere, taxol); inhibidores de la topoisomerasa II (tal como etopósido); inhibidores de la topoisomerasa I (tales como irinotecán (o CPT-11), camptostar o topotecán); agentes que interactúan con la tubulina (tales como paclitaxel, docetaxel o las epotilonas); agentes hormonales (tal como tamoxifeno); inhibidores de timidilato sintasa (tal como 5-fluorouracilo); antimetabolitos (tales como metotrexato); agentes alquilantes (tal como temozolomida (TEMODAR(TM) de Schering-Plough Corporation, Kenilworth, New Jersey), ciclofosfamida); inhibidores de la farnesil proteína transferasa (como SARASAR(TM)(4- [2-[4-[(11 R)-3,10-dibromo-8-cloro-6,11-dihidro-5H-benzo[5,6 ]ciclohepta[1,2-b]piridin-11-il-]-1-piperidinil]-2-oxoetil]-1-piperidinacarboxamida, o SCH 66336 de Schering-Plough Corporation, Kenilworth, New Jersey), tipifamib (Zamestra® o R115777 de Janssen Pharmaceuticals), L778.123 (un inhibidor de farnesil proteína transferasa de Merck & Company, Whitehouse Station, New Jersey), BMS 214662 (un inhibidor de la farnesil proteína transferasa de Bristol-Myers Squibb Pharmaceuticals, Princeton, New Jersey); inhibidores de la transducción de señal (tal como Iressa (de Astra Zeneca Pharmaceuticals, Inglaterra), Tarceva (inhibidores de la quinasa EGFR), anticuerpos contra EGFR (por ejemplo, C225), GLEEVEC(TM) (inhibidor de la quinasa C-abl de Novartis Pharmaceuticals, East Hanover, New Jersey); interferones, tales como, por ejemplo, intrón (de Schering-Plough Corporation), Peg-lntrón (de Schering-Plough Corporation); combinaciones de terapia hormonal; combinaciones de aromatasa; ara-C, adriamicina, citoxano y gemcitabina.

En otra realización, las composiciones de la divulgación pueden comprender o usarse en combinación (administradas juntas o secuencialmente) con uno o más inhibidores de la N-glicosilación, inhibidores de la sialiltransferasa, inhibidores del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibióticos y agentes antiinflamatorios.

En una realización preferida, la presente divulgación proporciona una combinación mucolítica y/o anticancerosa sinérgica de bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma y cisplatino.

Métodos terapéuticos

En un aspecto no reivindicado, la presente divulgación proporciona métodos para la desintegración y/o solubilización de material mucinoso y métodos para tratar una enfermedad relacionada con la mucina, en donde se desea la desintegración y/o solubilización del material mucinoso para facilitar su eliminación de un sujeto que lo necesite.

Los métodos comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina, o un metabolito, una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, descritos en el presente documento, a un sujeto (por ejemplo, un mamífero como un ser humano). En un aspecto no reivindicado, el método incluye el paso de administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición según la divulgación en una cantidad suficiente para tratar, evitar, retrasar, mejorar, estabilizar, una enfermedad relacionada con la mucina o uno o más efectos secundarios de la misma. Así pues, en una realización de la presente divulgación se proporciona un método para tratar un cáncer en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de acuerdo con la presente divulgación.

En otra realización, la presente divulgación proporciona un método para tratar el pseudomixoma peritoneal en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de acuerdo con la presente divulgación.

Como se describen en el presente documento, las composiciones de la divulgación también tienen un efecto anticanceroso directo sobre las células tumorales y por lo tanto poseen actividades anticancerosas y mucolíticas.

Las composiciones de la divulgación pueden usarse en, o en la fabricación de un medicamento para, el tratamiento del cáncer ya sea solo o en combinación con uno o más tratamientos contra el cáncer.

Debido a las actividades mucolíticas mejoradas observadas para las composiciones de la presente divulgación, la desintegración y/o solubilización de material mucinoso facilita no solo la eliminación de dicho material de un sujeto sino que también mejora la eficacia de los agentes terapéuticos, aumenta la captación celular de agentes terapéuticos; mejora el acceso a la superficie de una célula, mejora la eficacia de la quimioterapia y/o proporciona un medio para reducir la dosis de un agente terapéutico requerido para tratar a un sujeto con una enfermedad relacionada con la mucina.

Adicionalmente, mediante los métodos de la divulgación, los agentes terapéuticos se pueden administrar en dosis más bajas al sujeto, disminuyendo así cualquier efecto secundario asociado con dosis aumentadas del agente terapéutico mientras se mantiene su eficacia.

En un aspecto no reivindicado, la presente divulgación proporciona un método de tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina que comprende analizar la consistencia de una acumulación de material mucinoso dentro de un sujeto u obtenido de un sujeto, seguido de la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco de los mismos. La cantidad de composición a administrar o el período de tiempo durante el cual el material mucinoso se expone a la composición puede ajustarse apropiadamente cuando el material mucinoso se caracteriza por tener una consistencia semidura o dura. Por ejemplo, cuando se determina que el material mucinoso es de una consistencia semidura o dura, se pueden aumentar las concentraciones de los respectivos componentes de la composición, y/o se puede aumentar el período de tiempo durante el cual el material mucinoso se expone a la composición.

En un aspecto no reivindicado, la presente divulgación proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina que comprende las etapas de i) analizar la consistencia del material mucinoso en un sujeto; y ii) administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde dicha cantidad terapéuticamente eficaz se determina sobre la base del análisis realizado en la etapa i). En un aspecto preferido, la consistencia se analiza utilizando el cálculo de un índice de dureza del material mucinoso. En un aspecto preferido, el índice de dureza se calcula mediante el uso de imágenes no invasivas.

En otro aspecto, el índice de dureza se calcula utilizando una muestra de mucina obtenida del sujeto. En un aspecto preferido, se determina que el material mucinoso tiene una consistencia semidura o dura.

Por ejemplo, una muestra de mucina puede analizarse mediante inspección visual y/o cálculo de un índice de dureza, en donde una muestra de mucina obtenida de un sujeto se evalúa primero visualmente como transparente, semiopaca u opaca, y luego se pesa y se hidrata durante un período definido. Después de la hidratación, se mide el área ocupada por la mucina colocada sobre una superficie plana y se calcula el índice de dureza de acuerdo con la siguiente fórmula: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en una superficie (mm2). Después de dicho análisis, el material mucinoso se puede caracterizar por tener una consistencia blanda, semidura o dura donde la mucina es transparente, semiopaca u opaca, respectivamente, y/o en donde se determina que la mucina tiene un índice de dureza de ≤ 0,6, > 0,6-1,2 o > 1,2, respectivamente (Akhter, J. et al. 2014 Am J Cancer Res, 4(5):495-507).

Como alternativa, se pueden usar técnicas de imagen no invasivas, tales como resonancia magnética nuclear (RMN), ultrasonografía o tomografía computarizada (TC) para evaluar la consistencia del material mucinoso acumulado en un sujeto.

En un aspecto, la resonancia magnética de restricción de difusión se realiza para determinar la naturaleza del material mucinoso y calcular un índice de dureza. El experto en la técnica puede determinar fácilmente un coeficiente de correlación entre la caracterización del material mucinoso a través de una técnica de formación de imágenes no invasiva y el índice de dureza determinado para una muestra del material mucinoso tomada de un paciente utilizando los métodos descritos anteriormente.

En un aspecto no reivindicado, la presente divulgación proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina que comprende los pasos de i) calcular un índice de dureza del material mucinoso en u obtenido de un sujeto; y ii) administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde la cantidad y/o la duración del tratamiento con la composición se determina sobre la base del índice de dureza calculado en le etapa i). En un aspecto preferido, el cálculo del índice de dureza se realiza usando MRI de difusión restringida. En un aspecto preferido, se determina que el material mucinoso tiene una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente divulgación proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina que comprende los pasos de i) obtener una muestra de material mucinoso de un sujeto; ii) calcular un índice de dureza del material mucinoso en un sujeto; y iii) administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal, solvato o profármaco farmacéuticamente aceptable de los mismos, en donde la cantidad y/o la duración del tratamiento con la composición se determina sobre la base del índice de dureza calculado en la etapa ii). En un aspecto preferido, se determina que el material mucinoso tiene una consistencia semidura o dura.

En un aspecto no reivindicado, la presente divulgación proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad relacionada con la mucina que comprende los pasos de i) obtener una muestra de material mucinoso de un sujeto; ii) calcular un índice de dureza del material mucinoso en un sujeto según la fórmula: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en una superficie (mm2); y iii) administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o un metabolito, una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o profármaco del mismo, en donde la cantidad y/o la duración del tratamiento con la composición se determina sobre la base del índice de dureza calculado en la etapa ii). En otro aspecto de los métodos descritos en el presente documento, el material mucinoso solubilizado o desintegrado se elimina del sujeto después de un período de tiempo después de la administración de la composición. La eliminación del material mucinoso se puede realizar de acuerdo con cualquier medio conocido por el experto en la materia que sea adecuado para la eliminación de dicho material de un sujeto. En un aspecto, el material mucinoso se extrae del sujeto mediante una jeringa o un catéter.

En otro aspecto, el período de tiempo que transcurre entre la administración de las composiciones descritas en el presente documento y la eliminación del material mucinoso de, el sujeto puede determinarse sobre la base del análisis del índice de consistencia o dureza que se calcula para el material mucinoso. En todo caso, el período de tiempo durante el cual el material mucinoso se expone a la composición de la presente divulgación puede determinarse sobre la base de la consistencia o dureza del material mucinoso. Por ejemplo, donde el análisis revela que el material mucinoso tiene una consistencia semidura o un índice de dureza superior a aproximadamente 0,6 a aproximadamente 1,2, dicho material puede requerir una exposición más prolongada a las composiciones descritas en el presente documento que el material mucinoso que se determina que es blando o que tiene un índice de dureza inferior a 0,6, para lograr un grado similar de desintegración o solubilización. Cuando el análisis revela que el material mucinoso tiene una consistencia dura o tiene un índice de dureza superior a aproximadamente 1,2, dicho material puede requerir una exposición más prolongada a las composiciones descritas en el presente documento que el material mucinoso que se determina que tiene una consistencia semidura o un índice de dureza superior a aproximadamente 0,6 a aproximadamente 1,2, para lograr un grado similar de desintegración o solubilización.

En un aspecto, el material mucinoso se elimina después de un período de tiempo que oscila entre aproximadamente 5 minutos y aproximadamente 4 horas. En un aspecto, el material mucinoso se elimina después de un período de aproximadamente 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 o 60 minutos después de la administración de la composición. En otro aspecto, el material mucinoso se elimina después de un período de aproximadamente 1 hora, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5 o 4 horas después de la administración de la composición.

En una realización adicional de los métodos anteriores de la presente, la composición comprende al menos un compuesto biológicamente activo adicional, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables. En otra realización, el compuesto biológicamente activo se selecciona entre una cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio. En una realización adicional, el compuesto biológicamente activo es un agente anticanceroso. En una realización preferida, el agente anticanceroso es cisplatino.

Normalmente, en aplicaciones de tratamiento contra el cáncer, el tratamiento puede ser durante el tiempo que dura el cáncer. Asimismo, será evidente para un experto en la materia que la cantidad y el espaciamiento óptimos de las dosis individuales pueden determinarse por la naturaleza y el alcance del estado de enfermedad o afección que se está tratando, la forma, la vía y el sitio de administración, y la naturaleza del tema particular que se está tratando. Las dosis óptimas se pueden determinar usando técnicas convencionales.

Se pretende que los compuestos anticancerosos se utilicen para tratar los tipos de cáncer para los que normalmente se utilizan, por ejemplo, fármacos estándar de atención de primera y segunda línea. En una realización, el(los) compuesto(s) anticanceroso(s) se proporcionan o administran en sus dosis normales, en cuyo caso la provisión o administración de la composición mucolítica sinérgica descrita en el presente documento aumenta principalmente la eficacia terapéutica del agente.

En una realización, la eficacia terapéutica de un compuesto anticanceroso puede mejorarse de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 2000 %. En una realización, el efecto terapéutico puede mejorarse en aproximadamente un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 150 %, 200 %, 250 %, 300 %, 350 %, 400 %, 450 %, 500 %, 550 %, 600 %, 650 %, 700 %, 750 %, 800 %, 850 %, 900 %, 950 %, 1000 %, 1050 %, 1100 %, 1150 %, 1200 %, 1250 %, 1300 %, 1350 %, 1400 %, 1450 %, 1500%, 1550 %, 1600 %, 1650 %, 1700 %, 1750 %, 1800 %, 1850 %, 1900 %, 1950 % o aproximadamente 2000 %.

En otra realización, la dosis de un compuesto anticanceroso se puede proporcionar o administrar a una dosis reducida cuando se combina con una composición sinérgica de la presente descripción. Tal reducción de dosis o aumento de la eficacia terapéutica del compuesto anticanceroso puede permitir el uso de un compuesto anticanceroso particular para tratar un cáncer para el cual el agente no es actualmente una terapia estándar. La reducción de la dosis de un compuesto anticanceroso en un régimen terapéutico anticanceroso en combinación con una composición sinérgica de la presente divulgación también puede reducir los efectos secundarios del compuesto anticanceroso.

En una realización, la dosis de un compuesto anticanceroso presente en una combinación sinérgica de la divulgación o utilizada en un régimen anticanceroso puede reducirse aproximadamente 2 veces, a aproximadamente 100 veces. En una realización, la reducción de la dosis es de aproximadamente 2-, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o aproximadamente 100 veces.

Sujetos

Los métodos profilácticos y terapéuticos de la presente divulgación se pueden aplicar a cualquier sujeto adecuado. Los métodos del presente documento incluyen administrar al sujeto (incluido un sujeto identificado como que necesita dicho tratamiento) una cantidad eficaz de una composición como se describe en el presente documento para producir dicho efecto.

La identificación de un sujeto que necesite dicho tratamiento puede quedar a juicio de un sujeto o de un profesional sanitario y puede ser subjetiva (por ejemplo, una opinión) u objetiva (por ejemplo, medible mediante una prueba o un procedimiento diagnóstico). En algunas realizaciones, el sujeto es un sujeto mamífero. Por ejemplo, el sujeto puede ser un ratón, rata, perro, gato, vaca, oveja, caballo o cualquier otro mamífero de importancia social, económica o de investigación. Por tanto, el sujeto puede ser un mamífero tal como, por ejemplo, un ser humano o un mamífero no humano.

Como se ha esbozado anteriormente, los sujetos adecuados a tratar de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento pueden ser fácilmente identificados por el destinatario experto. Dichos sujetos pueden incluir aquellos que han sido identificados como portadores de una enfermedad relacionada con la mucina, que tienen una acumulación aberrante de material mucinoso, y/o que han sido diagnosticados con un cáncer secretor de mucina. Asimismo, los sujetos pueden caracterizarse adicionalmente usando métodos conocidos por el experto en la materia y como se describe en el presente documento por tener una acumulación de material mucinoso que tiene una consistencia semidura o dura.

Ejemplos

Las "combinaciones que no entran dentro del alcance de las reivindicaciones, tales como combinaciones que comprenden bromelina y cisteamina para las que no se logra ningún efecto sinérgico, son ejemplos de referencia".

Ejemplo 1. Efecto de combinaciones de varias concentraciones de bromelina con cisteamina en muestras mucinosas obtenidas de pacientes con pseudomixoma peritoneal (PMP).

Se recolectaron muestras de mucina de pacientes con PMP y se almacenaron en condiciones estériles a -80 °C. Para los experimentos, la mucina se descongeló a temperatura ambiente antes de su uso. Se transfirió un gramo de mucina blanda a un tubo de centrífuga de 50 ml que contenía 10 ml de tampón TRIS 0,1 M (pH 7,0), controles o disposición similar que contenía varias concentraciones de cisteamina, bromelina o una mezcla de estos dos últimos reactivos. Las concentraciones de bromelina investigadas oscilaron entre 100 y 300 μg/ml mientras que para la cisteamina fue de 12,5, 25, 50, 100 y 200 mM. Las soluciones madre se prepararon en condiciones estériles en tampón TRIS pH ajustado a 7,0 usando hidróxido de sodio 0,1 M o ácido clorhídrico 0,1 M y se agregaron las cantidades requeridas a los respectivos tubos de centrífuga que contenían la mucina. A continuación, los tubos se transfirieron a un baño de agua con agitación a 37 °C durante 2 horas.

Al final de la incubación, la mucina remanente se recuperó y pesó. El experimento se llevó a cabo utilizando tubos por triplicado y se promediaron las lecturas. Todos los experimentos se realizaron por triplicado.

La bromelina (100, 200, 300 μg/ml) o la cisteamina (12,5 - 200 mM), como agentes únicos, solo mostraron que la mucina aumentaba de peso, indicando hidratación. Por otro lado, la adición de los dos agentes mostró un porcentaje variable de disolución y cisteamina 50 mM, la adición de 100 o 200 μg/ml de bromelina mostró una desintegración del 100 %. La adición de 300 μg/ml de bromelina sola mostró una reducción en la hidratación en comparación con los otros controles, lo que indica que pueden estar teniendo lugar tanto la hidratación como la disolución. Con la adición de cisteamina (12,5 -25 mM) se observó una desintegración moderada (41-78 %). Sin embargo, con cisteamina 50 -200 mM, todas las adiciones de bromelina (100, 200, 300 μg/ml) mostraron una desintegración del 100 %. (Tabla 1, Figura 1).

Tabla 1. Porcentae de desinte ración de las muestras de mucina

La tabla 1 muestra la ganancia de peso (-) desintegración negativa o la pérdida de peso (+) desintegración (valores expresados como porcentaje de desintegración). CIS = cisteamina; BR= bromelina.

La adición de cisteamina o bromelina solo muestra hidratación mientras que la combinación de ambos agentes muestra una desintegración variable. La desintegración completa se logra a las 2 horas/37 °C para 100 y 200 μg/ml de bromelina con la adición de cisteamina 50, 100, 200 mM. En el caso de 300 μg/ml de bromelina, la desintegración completa sólo se observa a 100, 200 mM de cisteamina.

Asimismo, la concentración (mM) de cisteamina necesaria para lograr una desintegración del 50 % de la mucina blanda disminuye a medida que aumenta la concentración de bromelina, lo que muestra que la mucólisis inicial avanza rápidamente a 300 μg/ml (Tabla 2, Figura 1).

Tabla 2. Concentraciones de cisteamina y bromelina necesarias para lograr una desintegración del 50 % y el 100 % de las muestras de mucina.

Similar es el caso con la adición de 100 o 200 μg/ml de bromelina. Tanto para 100 como para 200 y 300 μg/ml de bromelina, la adición de cisteamina 50 mM produce una disolución del 100 % de la mucina. Las muestras de mucina blanda de seis pacientes, como se muestra en la Figura 3, se transformaron completamente en un líquido de flujo libre, como se muestra en la Figura 4. Por tanto, se eligió 200 μg/ml de bromelina 200 mM de cisteamina para investigaciones adicionales, ya que la mucina de PMP muestra una amplia variabilidad en la textura.

Ejemplo 2. Efecto mucolítico de una combinación de bromelina (200 μg/ml) cisteamina 200 mM en seis muestras de mucina de PMP

La combinación de bromelina 200 μg/ml y cisteamina 200 mM se evaluó en muestras de material mucinoso blando obtenido de 6 pacientes diferentes con p Mp .

A un tubo de centrífuga de 50 ml que contenía 1 g de mucina se añadieron 10 ml de TRIS pH 7,0 que contenía 300 μg/ml de bromelina 250 mM de NAC. De forma similar, a 1 g de mucina se añadieron l0 ml de tampón TRIS que contenía 200 μg/ml de bromelina 200 mM de cisteamina. Para cada intervalo de tiempo (0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5 y 3,0 h), se prepararon un total de 6 tubos por triplicado. Los controles contenían TRIS, bromelina (300 μg/ml y 200 μg/ml), ⁿA^c(250 mM) y cisteamina (200 mM) con mucina (también preparados para cada intervalo de tiempo, por triplicado).

Los tubos se incubaron a 37 °C, en un baño de agua con agitador, los tubos de muestra se recuperaron en un intervalo de tiempo de 0,5 horas y la mucina remanente se recuperó y pesó cuidadosamente. El porcentaje de pérdida de peso se calculó de la siguiente manera:

Porcentaje de pérdida de peso (desintegración) = [peso de mucina (a las 0 h) - peso de mucina (2 o 3 h)]/peso de mucina (a las 0 h). La combinación de 300 μg/ml de bromelina con 250 mM de N-acetilcisteína o 200 μg/ml de bromelina y 200 mM de cisteamina mostró desintegración (Figura 5), sin embargo, la cisteamina con bromelina mostró una desintegración acelerada (100 % de desintegración en 1,5 horas) en comparación con NAC con bromelina que tomó 3 horas (el doble de tiempo).

Agentes individuales, tales como bromelina, NAC y cisteamina, solo mostraron hidratación inicialmente, con una ligera desintegración e hidratación posteriores. A las tres horas, ningún agente individual, excepto TRIS, mostró aumento de peso.

El tiempo necesario para la desintegración del 50 % de la cisteamina bromelina fue de 25 minutos, mientras que para ⁿA^c+ bromelina, fue 60 minutos.

Ejemplo 3. Comparación de la desintegración de diferentes grados de mucina de PMP (blanda, semidura y dura) tratada con 200 μg/ml de bromelina cisteamina 200 mM o 300 μg/ml de bromelina N-acetilcisteína 250 mM durante tres horas.

Se colocó aproximadamente 1 g de muestra de mucina en una placa de Petri y se inspeccionó su firmeza y transparencia. Para clasificar definitivamente la mucina en grados de dureza, se pesó cuidadosamente 1 g de mucina y luego se remojó en 10 ml de agua destilada a temperatura ambiente (21 °C) durante 30 minutos. La mucina hidratada se retiró y se colocó en reposo sobre una losa de vidrio cuadriculada (rejilla de mm cuadrados). La losa de vidrio cuadriculada se preparó colocando un vidrio transparente cuadrado (1,0 mm de espesor) en la parte superior de un papel cuadriculado de 1,0 mm2. Se trazó el área que ocupó la mucina después de 1 minuto en el vidrio cuadriculado y usando la fórmula estándar, se calculó el área.

Se calculó un índice de dureza (HI) como: Peso de mucina (g)/Área que ocupa la mucina en la losa de rejilla de vidrio (mm2). Las muestras de mucina se caracterizaron como blandas, semiduras o duras donde la muestra era transparente, semiopaca u opaca, respectivamente, y/o en donde se determinó que la mucina tenía un índice de dureza de ≤ 0,6, > 0,6-1,2 o > 1,2, respectivamente.

El diseño experimental fue similar al descrito en el Ejemplo 2; sin embargo, el tiempo de desintegración se prolongó 3 horas. Al cabo de 2 horas se recuperaron y pesaron las muestras, de manera similar, al final de las tres horas se recuperaron las muestras y se pesaron de nuevo.

La mucina blanda tratada con 200 μg/ml de bromelina cisteamina 200 mM produjo una disolución del 100 % en 2 horas, sin embargo, solo se observó un 89 y un 72,6 % tanto para la mucina semiblanda como para la dura, respectivamente, durante las 2 horas (Tabla 3, Figura 6). A las 3 horas la disolución aumentó a 94 y 86 % tanto para la mucina semidura como para la dura, respectivamente (P > 0,05 frente a mucina blanda). Esta es una observación importante, ya que la mucina semidura se desintegró casi por completo quedando solo el 14 % de la mucina dura original. Por otro lado, 300 μg/ml de bromelina NAC 250 mM solo fue capaz de lograr una disolución del 84 % de mucina blanda en 2 horas con una eficacia mucolítica muy reducida para mucina semidura (46 %) y mucina dura (26 %). Mientras que en el punto de tiempo de 3 horas se observó la disolución completa de la mucina blanda, solo se observó un 64 % de desintegración de mucina semidura y solo un 40 % de desintegración de mucina dura. Estos resultados demuestran que, en comparación con la combinación de NAC y bromelina, la adición de cisteamina 200 mM a 200 μg/ml de bromelina es un mucolítico mucho más eficaz.

Tabla 3. Porcentaje de desintegración de mucina de PMP a intervalos de tiempo (2 y 3 horas) de los tres grados de mucina.

Como se demuestra en la Figura 7, existe una relación inversa entre el índice de dureza de la mucina y el porcentaje de desintegración. La Tabla 4 muestra el análisis de los datos representados en la Figura 7:

T l 4. An li i ^ r l Fi r 7.

Comparación del grupo de cisteína 200 mM 200 μg/ml de bromelina (2 horas) con el de un grupo tratado similar durante 3 horas, es evidente que la desintegración es más eficaz para la mucina semidura y dura, como se representa mediante la comparación de la pendiente del gráfico (22,83/11,67 = 1,95). Por otro lado, para el tratamiento con bromelina NAC, una comparación muestra de nuevo que durante dos horas la desintegración fue menor en comparación con 3 horas (48,33/50 = 0,967). Esto muestra además que la variabilidad de la desintegración usando cisteamina bromelina durante 2 horas en comparación con 3 horas fue mayor para la mucina semidura y dura, mientras que en el caso de bromelina NAC, la variabilidad de la desintegración dependiente del tiempo existió para los tres grados de mucina, teniendo 3 horas una mejor desintegración.

Tabla 5. Tiempo que tarda cada tipo de mucina en alcanzar el 50 % de desintegración y la tasa de desintegración en minutos.

Tabla 6. Tiempo que tarda cada tipo de mucina en alcanzar el 50 % de desintegración y la tasa de desintegración en minutos.

Un análisis más detallado del tiempo necesario y la tasa de desintegración de los diferentes tipos de mucina clasificados según su índice de dureza indica que la cisteamina 200 mM 300 μg/ml de bromelina desintegran los tres tipos de mucina más fácilmente (según la tasa de desintegración y el tiempo de desintegración) (Tabla 5) en comparación con el uso de NAC 250 mM 300 μg/ml de bromelina. Más notablemente, la desintegración del 50 % restante de mucina para la mucina blanda procede al mismo ritmo que para el primer 50 % de desintegración, cuando se usa cisteamina y bromelina Tabla 6). Para la mucina semidura y dura, la tasa de desintegración es la mitad de la del primer 50 % de desintegración.

En el caso de bromelina NAC, la tasa de desintegración de este último 50 % de mucina blanda se redujo en un 37 % y en un 28 % para la semidura mientras que para la mucina dura fue muy lenta durante las 3 horas de estudio y no se alcanzó ni el 50 % de desintegración.

El tiempo de desintegración del 50 % tanto para la NAC como para cisteamina en la mucina de PMP varía linealmente a medida que aumenta la dureza (Figura 9), sin embargo, para el grupo de cisteamina bromelina, la variación es pequeña en comparación con el grupo de bromelina NAC. Esto indica que la cisteamina bromelina es un mucolítico más eficiente ya que es capaz de actuar de manera bastante equitativa en todos los tipos de mucina. Sin embargo, este no es el caso con NAC bromelina, lo que indica que la dureza de la mucina afecta dramáticamente la desintegración de la mucina.

Tabla 7. Análisis de la Fi ura 9.

En términos comparativos, el efecto de la dureza es casi aproximadamente 6,5 veces (125/19,17) mayor en NAC 250 mM 300 μg/ml de bromelina en comparación con cisteamina 200 mM 200 μg/ml de bromelina.

Ejemplo 4. Optimización adicional de la cisteamina bromelina para reducir la concentración de ambos agentes utilizados para desintegrar la mucina blanda.

El experimento se configuró como se ha descrito anteriormente en los Ejemplos 1 y 2 anteriores, sin embargo, utilizando 10, 20, 40, 60, 80 y 100 μg/ml de bromelina con concentraciones variables de cisteamina (10, 20, 30, 40 y 50 mM) y la incubación se llevó a cabo a 37 °C en un agitador durante 3 horas. Los controles contenían tampón TRIS, 10, 20, 40, 60, 80 y 100 μg/ml de bromelina y 10, 20, 30, 40 y 50 mM de cisteamina. Cada tubo se preparó por triplicado y se promediaron las lecturas.

Cuando la mucina blanda se trató a una concentración baja de bromelina (10-100 μg/ml) con cisteamina (20-50 mM), la cisteamina a 20 mM solo es capaz de desintegrar el 100 % de la mucina a 100 mM de bromelina. De manera similar, la adición de cisteamina 30 o 40 mM, se observó una desintegración del 100 % de la mucina con solo 60 μg/ml de bromelina. Sin embargo, con adición de cisteamina 50 mM a 40 μg/ml de bromelina, se observó la desintegración completa de la mucina (Tabla 5, Figura 10 A).

Tabla 8. Diversas combinaciones de bromelina con cisteamina en las que se observa una desintegración del 100 % de la mucina.

Ejemplo 5. Comparación de la eficacia mucolítica de cisteamina 50 mM 50 μg/ml de bromelina en mucina de PMP.

Los experimentos se establecieron como antes utilizando 1 g de mucina en un tubo de centrífuga de 50 ml que contenía tampón TRIS (pH 7,0), 50 μg/ml de bromelina, cisteamina 50 mM o una combinación de los dos últimos agentes. Se eligieron seis muestras de cada grado de mucina (blanda, semidura y dura) para el experimento y los tubos se incubaron en un baño de agua con agitación a 37 °C durante 3 horas. La mucina remanente se recuperó y pesó cuidadosamente.

El tratamiento con una concentración baja de cisteamina (50 mM) bromelina (50 μg/ml) a 37 °C durante 3 horas indicó que se desintegró el 100 % de toda la mucina blanda, sin embargo, los agentes individuales solo mostraron un grado variable de hidratación, como lo indica un aumento de peso (Figura 10 B). TRIS mostró un mayor grado de hidratación en comparación con la bromelina o la cisteamina. El menor aumento de peso en comparación con TRIS puede indicar que además de la hidratación, se produce cierta desintegración.

Un tratamiento similar sobre la mucina semidura indicó que la hidratación fue menor en los grupos de tratamiento de TRIS, bromelina y cisteamina, en comparación con la mucina blanda. Esto puede deberse a la composición de la mucina que causó cierta desintegración así como también hidratación con agentes individuales como la bromelina o la cisteamina, mientras que mostró una menor hidratación con la combinación de los dos agentes debido a la pérdida de mucina a través de la desintegración (Figura 10 C).

En el caso de la mucina dura, se produjo un porcentaje espectacular de hidratación, especialmente con tampón TRIS y cisteamina, mientras que una combinación de bromelina y cisteamina produjo una hidratación ligeramente superior al 100 % (Figura 10 D).

Ejemplo 6. Simulación in vitro de lavado peritoneal con tiempo necesario para desintegrar la mucina.

Optimización adicional de las concentraciones mínimas de bromelina y cisteamina que se usarán en combinación para la desintegración de mucina blanda, semidura o dura se puede realizar utilizando una simulación in vitro de un lavado peritoneal. De acuerdo con tal simulación, una masa de mucina (5 g) se deposita cuidadosamente en un vaso de precipitados de 100 ml o 250 ml que tiene un tubo de entrada y salida que está conectado a un depósito que contiene 100 ml de mucolítico (50 μg/ml de bromelina cisteamina 50 mM en tampón TRIS, pH.7.0). Usando una bomba, el mucolítico se hace circular de modo que la mucina se empape completamente en el mucolítico con circulación a 37 °C. Se registra el tiempo para desintegrar completamente seis muestras diferentes de cada uno de los tres grados de mucina. Los controles se realizarán mediante tampón TRIS, 50 μg/ml de bromelina y cisteamina 50 mM.

Ejemplo 7. Efecto de combinaciones de varias concentraciones de bromelina con cisteamina en células cancerosas secretoras de mucina.

Ensayo de proliferación

Se sembraron 5000 células de cada línea celular en placas de 96 pocillos y se cultivaron durante 48 horas a 37 °C en incubadora de CO²humidificado. A continuación, el medio se reemplazó con fármacos, bromelina, cisteamina y cisplatino solos o en varias combinaciones. Los pocillos de control solo tenían medio. Las placas se incubaron adicionalmente durante 72 horas. Al final de la incubación, se determinó la proliferación mediante ensayo SRB. Ensayo SRB

Materiales y método:

• 0,4 % (p/v) de SRB: 1,0 g de sal sódica de sulforrodamina B SRB (# S1402, SIGMA) en 250 ml de ácido acético al 1 % (almacenado a temperatura ambiente)

• TCA al 10 % (p/v): 50 g de ácido tricloroacético (n.° T9159, SIGMA) en 500 ml de agua Milli-Q (almacenada a 4 °C) • Base Tris 10 mM: 0,6055 g de Tris (Trizma^®base, N.° T6066, SIGMA) en 500 ml de agua Milli-Q (almacenada a 4 °C)

• Ácido acético al 1 %: 10 ml de ácido acético en 1000 ml de agua Milli-Q.

1. Después de un período de incubación de 72 horas, el medio antiguo se descartó y las células se fijaron con 200 μl de TCA (ácido tricloroacético) enfriado con hielo al 10 % (p/v) durante 30 minutos a 4 °C.

2. La placa se lavó en agua destilada 5 veces.

3. Se añadieron 100 μl de solución de sulforhodamina (SRB) al 0,4 % (p/v) a cada pocillo de las placas secas de 96 pocillos y se dejaron teñir a temperatura ambiente durante 10 min.

4. La solución de sulforrodamina (SRB) se eliminó lavando la placa repetidamente (5 veces) con ácido acético al 1 % (v/v), para eliminar el colorante no unido y luego se dejó secar la placa de 96 pocillos al aire (durante la noche).

5. El colorante unido a proteínas (SRB) se disolvió en solución de base Tris 10 mM (100 μl/pocillo) después de agitar durante 20 minutos en una plataforma de agitación.

6. La placa se leyó en un lector de microplacas (PowerWaveX, instrumentos BIO-TEK, Inc, EE. UU.) con una longitud de onda de trabajo de 570 nm.

HT29 es una línea celular de cáncer colorrectal, que secreta mucina de tipo gástrico. Se estudió el efecto de CIS, Br y la combinación en el crecimiento in vitro (ensayo SRB, cultivo de 72 horas). La figura 11 muestra estos resultados expresados como % del control. CIS y Br individualmente tuvieron poco o ningún efecto, mientras que las combinaciones de concentraciones de CIS y Br que fueron ineficaces produjeron hasta un 90 % de inhibición del crecimiento.

MKN 45 es una línea celular cancerosa secretora de mucina gástrica humana. Se estudió el efecto de CIS, Br y la combinación en el crecimiento in vitro (ensayo SRB, cultivo de 72 horas). La figura 12 muestra estos resultados expresados como % del control. Nuevamente, CIS y Br individualmente tuvieron poco o ningún efecto, mientras que la combinación de CIS y Br en las concentraciones más altas probadas mostró un efecto sinérgico.

AsPC-1 es una línea celular que produce abundante mucina. La línea celular se derivó de la ascitis de un paciente con cáncer de páncreas. Se estudió el efecto de CIS, Br y la combinación en el crecimiento in vitro (ensayo SRB, cultivo de 72 horas). La figura 23 muestra estos resultados expresados como % del control para dos concentraciones diferentes de Br. Los datos se representan como media ± SD (6 repeticiones para cada grupo de tratamiento). El análisis estadísti

columnas de izquierda a derecha corresponden a las columnas A - J. (por ejemplo, en la Figura 23A, Columna A = control, Columna B = Bromelina 5 μg/ml, etc.).

T l A: An li i í i r AP -1 i min 1 - 2 mM ml Br m lin :

T l B: An li i í i r AP -1 i min 1 - 2 mM 1 ml Br m lin :

(continuación)

(continuación)

CFPAC es una línea celular de cáncer de páncreas derivada de un paciente con fibrosis quística que también secreta abundante mucina. Se estudió el efecto de CIS Br y la combinación en el crecimiento in vitro (ensayo SRB, cultivo de 72 horas). La figura 24 muestra estos resultados expresados como % del control para dos concentraciones diferentes de Br. Los datos se representan como media ± SD (6 repeticiones para cada grupo de tratamiento).

El análisis estadísti

columnas de izquierda a derecha corresponden a A-J. (por ejemplo, en la Figura 24 A Columna A = control, Columna B = Bromelina 5 μg/ml, etc.).

T l 1 A: An li i í i r FPA i min 1 - 2 mM ml r m lin :

continuación

T l 1 B: An li i í i r FPA i min 1 - 2 mM 1 m l r m lin :

Estos hallazgos muestran que la combinación de Br y CIS tiene efectos de inhibición altamente significativos en el crecimiento de diferentes líneas celulares de cáncer, cuando tenían poco o ningún efecto por sí mismos.

Ejemplo 7. Efecto de bromelina, cisteamina y cisplatino, sobre la viabilidad de las células cancerosas.

Se cultivaron líneas celulares de mesotelioma (YOU y PET), gástrico (KATO-III), colorrectal (LS174T y HT295m21), pancreática (ASPC-1 y CFPAC) y ováricas (A2780) en RPMI complementado con 10 % de FBS, 100 U/ml de penicilina y 100 |jg/ml de estreptomicina. Todas las células se mantuvieron a 37 °C.

Se evaluaron los efectos citotóxicos de cisteamina, bromelina y el agente quimioterapéutico cisplatino. Cada agente se administró a las células solo o en combinación con uno o ambos de los otros agentes. Todas las células se trataron durante 72 horas con los reactivos y las poblaciones celulares se evaluaron usando el ensayo SRB. Cuando fue posible, se calcularon la CI⁵⁰y la CI^{m á x}.

Estos estudios demuestran un efecto anticanceroso sinérgico para las composiciones que comprenden una combinación de cisteamina y bromelina y, opcionalmente, cisplatino.

Los datos generados para los estudios realizados en células YOU y PET se resumen en la Tabla 11.

Tabla 11. Efecto de bromelina cisteamina cis latino sobre la viabilidad de las células cancerosas

continuación

Las Figuras 13, 14 (A y B) muestran los resultados que cada agente evaluó de forma aislada. A bajas concentraciones de bromelina, el tratamiento conjunto con cisteamina mostró una citotoxicidad mejorada demostrada por una disminución significativa en la viabilidad celular tanto en las células YOU como en las p Et (Figura 14 (B) y (C)).

Por el contrario, no se observaron efectos sinérgicos para la combinación de cisteamina y cisplatino (Figura 15 A y B), o bromelina (Figura 15 C y D). De hecho, a dosis más bajas de cisteamina, los efectos del cisplatino se vieron algo inhibidos. Sin embargo, la adición de bromelina mejoró los efectos del cisplatino, especialmente para dosis más bajas de cisplatino (Figura 15 C y D).

Mientras que las células tratadas con una combinación de bromelina (100 μg/ml) y las dos dosis más altas de cisplatino (0,3 y 0,15 μg/ml) demostraron una viabilidad reducida a niveles del 10 % y el 12 %, respectivamente, en las células YOU y 12% y 28%, respectivamente, en las células PET (Figura 15C y D, Tabla 1), la adición de cisteamina a concentraciones de 5,65 mg/ml y 2,82 mg/ml, mataron por completo tanto a las células YOU (Figura 16 A y Figura 17 A, respectivamente) como a las células PET (Figura 16 B y 17 B, respectivamente). De hecho, las células y Ou tratadas con 0,3 μg/ml de cisplatino y 5,65 mg/ml de cisteamina tuvieron viabilidad cero cuando la dosis de bromelina se redujo a 80 μg/ml (Figura (16 A). El aumento de la citotoxicidad fue menos pronunciado cuando las células se trataron con una dosis más baja de cisteamina (1,42 mg/ml) (Figura 18).

Utilizando el Método Chou y Tallarida (Tallarida RJ. The interaction index: a measure of drug synergism. Pain 2002; 98: 163-168), se evaluó el índice de Interacción (y) para una combinación de 2 y 3 fármacos (y = 1 (aditivo) (ADD); y = <1 (sinérgico) (SIN) y y = >1 (subaditivo) (SUB)).

Ta l 12: Ín i in r i n r r m lin i min i l in n lín l l r Y PET.

La figura 19 muestra el efecto de cisteamina bromelina cisplatino, ya sea solo o en combinación sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer colorrectal humano HT295M12. Las células se sometieron a varios regímenes de tratamiento como se indica durante 3 días antes de realizar los ensayos de SRB. Los datos de dos experimentos independientes se representan como media ± SD (6 repeticiones para cada grupo de tratamiento).

El análisis estadísti

corresponden a las columnas A - H (por ejemplo, Columna A = control, Columna B = Cisteamina 1 mg/ml, etc.).

T l 1 : An li i í i r l l HT2 M12 r n r m lin i min i l in :

continuación

La figura 20 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de cisteamina bromelina cisplatino en el crecimiento in vitro de la línea celular de cáncer gástrico humano KATO-III. Las células se sometieron a varios regímenes de tratamiento como se indica durante 3 días antes de realizar los ensayos de SRB. Los datos se representan como media ± SD (6 repeticiones para cada grupo de tratamiento).

El análisis estadísti

las columnas de izquierda a derecha corresponden a A - H. (por ejemplo, Columna A = control Columna B = solo cisteamina, etc.).

T l 14A: An li i í i r KAT -III i min m ml Br m lin 1 ml i l in 2 ml:

T l 14 B: An li i í i r KAT -III i min m ml Br m lin 1 ml i l in 12 ml:

continuación

T l 14 : An li i í i r KAT -III i min m ml Br m lin 1 ml i l in 12 ml:

La figura 21 muestra los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la combinación de cisteamina bromelina cisplatino en el crecimiento in vitro de la línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano LS174T. Las células se sometieron a varios regímenes de tratamiento como se indica durante 3 días antes de realizar los ensayos de SRB. Los datos se representan como media ± SD (6 repeticiones para cada grupo de tratamiento). El análisis estadísti

las columnas de izquierda a derecha corresponden a A - H. (por ejemplo, Columna A = control, Columna B = Bromelina 5 |jg/ml, etc.).

Tabla 15 A: Análisis estadístico para células LS174T (Cisteamina 0,6 mg/ml Bromelina 10 jg/m l Cisplatino

5 /ml :

Tabla 15 B: Análisis estadístico para células LS174T (Cisteamina 0,6 mg/ml Bromelina 10 jg/m l Cisplatino 25 /ml):

f. de Valor de p _edio¿Significativo? Sumario ajustado ,039 No ns 0,1995 ,423 No ns 0,9479 1,01 Sí ^****< 0,0001 ,189 No ns 0,6348 1,38 Sí ^*0,0499 ,260 No ns 0,4456 5,96 Sí ^****< 0,0001 ,616 No ns 0,4036 1,97 Sí ^*0,0341 ,851 No ns 0,9433 ,343 No ns 0,9479 ,780 No ns 0,9479 6,92 Sí ^****< 0,0001 9,59 Sí ^****< 0,0001 ,766 No ns 0,7837 ,959 No ns 0,1271 ,837 No ns 0,6688 4,54 Sí ^****< 0,0001 4,82 Sí ^**0,0039 ,629 No ns 0,1478 3,75 Sí ^**0,0089 4,95 Sí ^****< 0,0001 ,193 No ns 0,7523 ,071 No ns 0,9479 9,77 Sí ^****< 0,0001

,122 No ns 0,8393 continuación

Tabla 15C: Análisis estadístico para células LS174T (Cisteamina 0,6 mg/ml Bromelina 10 μg/ml Cisplatino

12 ml :

Las figuras 25 a 29 muestran los resultados de un ensayo de viabilidad que demuestra el efecto de la cisteamina bromelina cisplatino, ya sea solos o en varias combinaciones, sobre el crecimiento in vitro de la línea celular pancreática humana ASPC-1.

Se sembraron células de cáncer de páncreas ASPC1 (5000 células/pocillo) en una placa de 96 pocillos y se trataron con concentraciones variables de bromelina, cisteamina, cisplatino y en combinaciones que se disolvió en medios de cultivo (RPMI). Después de 72 horas, las células se fijaron siguiendo procedimientos estándar y se tiñeron usando colorante de sulforhodamina y se leyeron a 570 nm.

Como se ha esbozado anteriormente, la interacción farmacológica se llevó a cabo mediante el método de Chou y Tallarida, se evaluó el índice de Interacción (^y) para una combinación de 2 y 3 fármacos.

Tabla 16: muestra la concentración CI50 de bromelina a varias dosis de cisteamina.

Tabla 17: muestra la concentración DL50 de bromelina en varias dosis de cisplatino.

continuaión

Tabla 18: muestra una determinación del índice de interacción de combinaciones de cisteamina, bromelina y cis latino en células ASPC-1.

Ejemplo 8. Comparación del efecto antiproliferativo de los agentes mucolíticos N-acetilcisteína (NAC), cisteamina, diclorhidrato de cisteamina, L-cisteína y L-glutatión reducidos en la línea celular de cáncer de ovario A2780.

La figura 22 muestra la comparación del efecto de NAC, cisteamina y diclorhidrato de cisteamina (A), L-cisteína (B) y L-glutatión reducidos (C) en la viabilidad de la línea celular de cáncer de ovario humano A2780. Las células se sometieron a varios regímenes de tratamiento como se indica durante 3 días antes de realizar los ensayos de SRB. Los datos se representan como media ± SD (6 repeticiones para cada grupo de tratamiento).

El análisis estadísti

las columnas de izquierda a derecha corresponden a A - J. (por ejemplo, Columna A = control, Columna B = NAC 0,25 mg/ml, etc.).

Tabla 19A: Análisis estadístico para células A2780 tratadas con N-acetilcisteína (NAC), cisteamina o diclorhidrato de cisteamina 025 -1 m /ml . _____ r de p stado ,0001 ,0002 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,6837 ,6294 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,5038 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0001 ,0010 ,0001

,0001 (continuación)

Tabla 19B: Análisis estadístico para células A2780 tratadas con N-acetilcisteína (NAC), Cisteamina o L-Cisteína (0,25 - 1 mg/ml).

continuación

Tabla 19C: Análisis estadístico para células A2780 tratadas con N-acetilcisteína (NAC), Cisteamina o L-Glutatión 025 - 1 m /ml .

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables y en donde la composición comprende además al menos otro compuesto biológicamente activo, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, seleccionado entre cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio.

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto biológicamente activo es un agente anticanceroso, opcionalmente seleccionado entre cisplatino, doxorrubicina, 5-fluorouracilo o gemcitabina.

3. Una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables para usar en el tratamiento de una enfermedad que implica sobreexpresión, sobreproducción o acumulación aberrante de mucina.

4. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende adicionalmente al menos otro compuesto biológicamente activo, o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables.

5. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el compuesto biológicamente activo se selecciona entre uno cualquiera de un agente mucolítico, inhibidor de la N-glicosilación, inhibidor de sialiltransferasa, inhibidor del transporte de múltiples fármacos, AINE, antibiótico, agente anticanceroso y agente antiinflamatorio.

6. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en donde el compuesto biológicamente activo es un agente anticanceroso.

7. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el agente anticanceroso es cisplatino, doxorrubicina, 5-fluorouracilo o gemcitabina.

8. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-7, en donde la enfermedad es cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello.

9. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el cáncer se selecciona entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario.

10. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-9, en donde la mucina se caracteriza por tener una consistencia semidura o dura.

11. La composición para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-10, en donde el tratamiento comprende una etapa de eliminación de material mucinoso de un sujeto después de un período de tiempo posterior a la administración de dicha composición.

12. Una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, para su uso en un método terapéutico para desintegrar y/o solubilizar mucina en un sujeto.

13. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la mucina se caracteriza por tener una consistencia semidura o dura.

14. Una composición mucolítica sinérgica que comprende bromelina, o una fracción proteolítica de la misma, y cisteamina o una de sus sales o solvatos farmacéuticamente aceptables, para su uso en la mejora de la eficacia terapéutica de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello en un sujeto, en la reducción de la dosis de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello en un sujeto, o para reducir los efectos secundarios de un compuesto anticanceroso en un régimen anticanceroso para el tratamiento del cáncer, pseudomixoma peritoneal o carcinoma de células en anillo de sello en un sujeto.

15. La composición para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, en donde el régimen anticanceroso es para el tratamiento del pseudomixoma peritoneal o un cáncer seleccionado entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer del apéndice y cáncer de ovario.