ES2824679T3 - Mezclas de HMO - Google Patents
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Abstract
Una mezcla de HMO que consiste esencialmente en: - un componente A que es 3-FL o DFL, - un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, - un componente C, que es: LNFP-II cuando el componente B es LNT, o LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o DFL cuando el componente B es 2'-FL, y - un componente D, que es: lactosa cuando el componente A es 3-FL, o 2'-FL cuando el componente A es DFL, con la condición de que si el componente B es 2'-FL, entonces el componente A es 3-FL.
Description
DESCRIPCIÓN
Mezclas de HMO
Campo de la invención
La presente invención se refiere a mezclas de oligosacáridos de la leche materna ("HMO"), un proceso para preparar las mezclas, y composiciones antiinfecciosas que comprenden las mezclas para su uso en el tratamiento de infecciones bacterianas.
Antecedentes de la invención
Los HMO se han convertido en un tema de gran interés en los últimos años debido a su papel en numerosos procesos biológicos que ocurren en el organismo humano. La leche de mamíferos contiene al menos 130 de estos oligosacáridos complejos (Urashima y otros, Milk Oligosaccharides, Nova Biomedical Books, Nueva York, 2011, ISBN: 978-1-61122 831-1).
Anteriormente, la única fuente de HMO era la leche de mamíferos que contiene principalmente agua, junto con 55-70 g/l de lactosa, 24-59 g/l de lípidos, aproximadamente 13 g/l de proteínas, 5-15 g/l de HMO y aproximadamente 1,5 g/l de minerales.
Sin embargo, los esfuerzos para desarrollar procesos para la síntesis de estos oligosacáridos se han incrementado significativamente en los últimos diez años debido a su papel en numerosos procesos biológicos humanos. Con respecto a esto, se han desarrollado procesos para la producción de HMO mediante fermentaciones microbianas, procesos enzimáticos, síntesis químicas o combinaciones de estas tecnologías. Por ejemplo, mediante procesos químicos, LNnT se puede preparar como se describió en WO 2011/100980 y WO 2013/044928, LNT se puede sintetizar como se describió en WO 2012/155916 y WO 2013/044928, se puede preparar una mezcla de LNT y LNnT como se describió en WO 2013/091660, 2'-FL se puede preparar como se describió en WO 2010/115934 y WO 2010/115935, 3-FL se puede preparar como se describió en WO 2013/139344, y 6'-SL y las sales del mismo se pueden preparar como se describió en WO 2010/100979. Como ejemplos de procesos biotecnológicos, los documentos WO 01/04341 y WO 2007/101862 describen cómo fabricar oligosacáridos base de la leche materna opcionalmente sustituidos por fucosa o ácido siálico mediante el uso de E. coli genéticamente modificada. Los documentos WO 2012/158517 y WO 2013/154725 describen composiciones prebióticas que contienen 3-FL, 2'-FL y DFL, y el documento WO 2012/112777 describe una mezcla de 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa producida en una E. coli genéticamente modificada. Como ejemplo de procesos enzimáticos, se pueden preparar oligosacáridos sialilados como se describió en el documento EP-A-577580.
También se han realizado esfuerzos para desarrollar procesos para sintetizar enzimáticamente mezclas de oligosacáridos HMO, sin tener que sintetizar todos los oligosacáridos componentes de la mezcla como se describió en los documentos WO 2012/156897 y WO 2012/156898. Tales procesos han proporcionado mezclas de reacción que contienen una pluralidad de diferentes oligosacáridos.
Sin embargo, se han buscado mejores procesos para la síntesis de mezclas de HMO.
Se acumula evidencia de que la comunidad residente de microbios, denominada microbioma, en el tracto digestivo humano juega un papel importante en la salud y la enfermedad. Cuando la composición normal del microbioma se desequilibra, el hospedero humano puede sufrir consecuencias. Investigaciones recientes implican a los desequilibrios del microbioma en trastornos tan diversos como el cáncer, la obesidad, la enfermedad inflamatoria intestinal, la psoriasis, el asma y posiblemente incluso el autismo. Se cree que los HMO modulan positivamente el microbioma, y son de creciente interés para este propósito. Sin embargo, la notable diversidad de HMO, junto con su falta de disponibilidad, ha obstaculizado los estudios de las funciones específicas de los HMO de forma individual. Existe una clara necesidad de HMO específicos o combinaciones de HMO para modular el microbioma de la manera deseada, a fin de abordar problemas específicos de la salud humana.
Resumen de la invención
Un primer aspecto de esta invención se refiere a una mezcla de HMO que consiste esencialmente en
- un componente A que es 3-FL o DFL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL,
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL, y
- un componente D, que es:
lactosa cuando el componente A es 3-FL, o
2'-FL cuando el componente A es DFL,
con la condición de que si el componente B es 2'-FL, entonces el componente A es 3-FL. Preferentemente, en la mezcla de HMO del primer aspecto, el componente A es DFL.
Un segundo aspecto de esta invención se refiere a una mezcla de HMO que consiste esencialmente en
- 3-FL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I, y
- un componente F, que es:
LNFP-II cuando el componente E es LNT, o
LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I.
Un tercer aspecto de esta invención se refiere a un proceso para preparar una mezcla de HMO de acuerdo con el primer aspecto, haciendo reaccionar un componente A y un componente B en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción que contiene los componentes A, B, C y D, y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción.
Un cuarto aspecto de esta invención se refiere a un proceso para la obtención de una mezcla de HMO que consiste esencialmente en:
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es
LNFP-II cuando el componente C es LNT, o
LNFP-III cuando el componente C es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente C es LNFP-I, o
DFL cuando el componente C es 2'-FL,
preferentemente una mezcla del segundo aspecto, que comprende las etapas de hacer reaccionar 3-FL y un componente B en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción que contiene 3-FL, lactosa y los componentes B y C, y luego retirar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. Un quinto aspecto de esta invención se refiere a una composición antiinfecciosa para el tratamiento de infecciones bacterianas. La composición comprende, preferentemente consiste esencialmente en:
- DFL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I,
- un componente F, que es:
LNFP-II cuando el componente E es LNT, o
LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I, y
- 2'-FL,
o
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL;
o la composición consiste esencialmente en:
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL,
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL, y
- lactosa.
Cada una de estas composiciones antiinfecciosas contiene una pluralidad de HMO diferentes con nuevas combinaciones de propiedades y actividades biológicas. Específicamente, cada composición puede aumentar la abundancia de Bifidobacteria y Barnesiella en el microbioma de un ser humano. Preferentemente, cada composición puede reducir la abundancia de Firmicutes en el microbioma humano, especialmente Clostridia. Cada composición también puede usarse para tratar y/o reducir el riesgo de una amplia gama de infecciones bacterianas de un ser humano.
Descripción detallada de la invención
De acuerdo con esta invención, se descubrió sorprendentemente que la mezcla de HMO puede proporcionar una composición antiinfecciosa para tratar infecciones bacterianas mediante la modulación específica del microbioma. La mezcla aumenta la abundancia de Bifidobacteria y Barnesiella en el microbioma. La mezcla también reduce la abundancia de Firmicutes en el microbioma; especialmente Clostridia. Los seres humanos con un aumento de la abundancia de Bifidobacteria y Barnesiella en su microbioma son más resistentes a una amplia gama de infecciones y se recuperan más rápidamente de estas infecciones, incluyendo las infecciones resistentes a los antibióticos. Se cree que esta resistencia mejorada es atribuible a los cambios en el microbioma. La reducción en Firmicutes en el microbioma especialmente Clostridia, atribuible a esta mezcla, imparte beneficios adicionales para la salud.
El primer aspecto de la invención
El primer aspecto es una mezcla de HMO que consiste esencialmente en
- un componente A que es 3-FL o DFL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL,
- un componente C, que es
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL, y
- un componente D, que es
lactosa cuando el componente A es 3-FL, o
2'-FL cuando el componente A es DFL,
con la condición de que si el componente B es 2'-FL, entonces el componente A es 3-FL.
En una modalidad preferida de la mezcla de este primer aspecto, el componente A es 3-FL. Con mayor preferencia, la relación molar de (3-FL componente B) con relación al componente C es 0,8-9,50, y la relación molar de lactosa con respecto al componente C es aproximadamente 1. Aún con mayor preferencia, la relación molar de 3-FL con respecto al componente B es 0,07-7,7. Particularmente en una mezcla que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, la relación molar de 3-FL a 2'-FL es de 0,05-7,7.
En una modalidad preferida adicional de la mezcla de este primer aspecto, el componente A es 3-FL y el componente B es LNT o LNnT. Preferentemente, una de las relaciones molares de 3-FL con respecto al componente C y del componente B con respecto al componente C no es mayor que 2.
De acuerdo con este primer aspecto, se prefieren especialmente:
i) una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa y en la que:
o la relación molar de (3-FL LNT) con relación a LNFP-II es 0,8-9,5, y
o la relación molar de lactosa con relación a LNFP-II es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-II y LNT a LNFP-II no sea mayor que 2; y
ii) una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, y en la que:
o la relación molar de (3-FL LNnT) con relación a LNFP-III es 0,8-9,5, y
o la relación molar de lactosa con relación a LNFP-III es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-III y LNnT a LNFP-III no sea mayor que 2.
En una modalidad preferida adicional de la mezcla del primer aspecto, el componente A es 3-FL y el componente B es LNFP-I o 2'-FL. Preferentemente, una de las relaciones molares de 3-FL con respecto al componente C y del componente B con respecto al componente C no es mayor que 2, y/o la relación molar de 3-FL con respecto al componente B es de 0,07-7,7.
Se prefiere especialmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa. Preferentemente, en esta mezcla de HMO:
- la relación molar de (3-FL LNFP-I) con relación a LNDFH-I es 0,8-9,5, y
- la relación molar de lactosa con relación a LNDFH-I es aproximadamente 1; y con mayor preferencia en esta mezcla:
- una de las relaciones molares de 3-FL a LNDFH-I y LNFP-I a LNDFH-I no es mayor que 2.
También de acuerdo con este primer aspecto, se prefiere especialmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa. Preferentemente, en esta mezcla:
- la relación molar de (3-FL 2'-FL) con relación a DFL es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a DFL es aproximadamente 1.
Con mayor preferencia, esta mezcla tiene una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,05-7,7 o 0,07-7,7. También con mayor preferencia, la relación molar de 3-FL a DFL o de 2'-FL a DFL no es mayor que 2.
En otra modalidad preferida más de la mezcla del primer aspecto, el componente A es DFL. Preferentemente, la relación molar del componente C con relación a (DFL componente B) es al menos 1:10, preferentemente al menos 1:7, con mayor preferencia al menos 1:5, aún con mayor preferencia al menos 1:3. También preferentemente, la relación molar de DFL con relación al componente B es 0,17-6, preferentemente 0,25-4, con mayor preferencia aproximadamente 1.
La mezcla de este primer aspecto puede consistir esencialmente en 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II. Esta mezcla de HMO tiene preferentemente una relación molar de LNFP-II con relación a (DFL LNT) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también tiene preferentemente una relación molar de DFL con relación a LNT de 0,17-6, preferentemente 0,25-4, con mayor preferencia aproximadamente 1. También preferentemente, esta mezcla tiene una relación molar de 2'-FL con relación a LNFP-II de aproximadamente 1.
La mezcla del primer aspecto también puede consistir esencialmente en 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III. Esta mezcla de HMO tiene preferentemente una relación molar de LNFP-III con relación a (DFL LNnT) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también tiene preferentemente una relación molar de DFL con relación a LNnT de 0,17-6, preferentemente 0,25-4, con mayor preferencia aproximadamente 1. También preferentemente, esta mezcla tiene una relación molar de 2'-FL con relación a LNFP-III de aproximadamente 1.
La mezcla del primer aspecto también puede consistir esencialmente en 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I. Esta mezcla de HMO tiene preferentemente una relación molar de LNDFH-I con relación a (DFL LNFP-I) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también tiene preferentemente una relación molar de DFL con relación a LNFP-I de 0,17-6, preferentemente 0,25-4, con mayor preferencia aproximadamente 1. También preferentemente, esta mezcla tiene una relación molar de 2'-FL con relación a LNDFH-I de aproximadamente 1.
El segundo aspecto de la invención
El segundo aspecto es una mezcla de HMO que consiste esencialmente en
- 3-FL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I, y
- un componente F que es
LNFP-II cuando el componente E es LNT, o
LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I.
Preferentemente, la relación molar del componente F con relación a (3-FL componente E) es al menos 1:10, preferentemente al menos 1:7, con mayor preferencia al menos 1:5, aún con mayor preferencia al menos 1:3, y/o la relación molar de 3-FL con relación al componente E es 0,05-21, preferentemente 0,13-7,7, con mayor preferencia aproximadamente 1.
La mezcla del segundo aspecto puede consistir esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II. Esta mezcla de HMO tiene preferentemente una relación molar de LNFP-II con relación a (3-FL LNT) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también tiene preferentemente una relación molar de 3-FL con relación a LNT de 0,05-21, preferentemente de 0,13-7,7, con mayor preferencia de aproximadamente 1.
La mezcla del segundo aspecto también puede consistir esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III. Esta mezcla de HMO preferentemente tiene una relación molar de LNFP-III con relación a (3-FL LNnT) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también
tiene preferentemente una relación molar de 3-FL con relación a LNnT de 0,05-21, preferentemente 0,13-7,7, con mayor preferencia aproximadamente 1.
La mezcla del segundo aspecto también puede consistir esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I. Esta mezcla de HMO preferentemente tiene una relación molar de LNDFH-I con relación a (3-FL LNFP-I) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también tiene preferentemente una relación molar de 3-FL con relación a LNFP-I de 0,05-21, preferentemente 0,13 7,7, con mayor preferencia aproximadamente 1.
El tercer aspecto de la invención
El tercer aspecto es un proceso para la obtención de una mezcla del primer aspecto de la invención, incluyendo sus modalidades preferidas y las más preferidas, que comprende las etapas de hacer reaccionar un componente A y un componente B en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción que contiene los componentes A, B, C y D, y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. La a1-3/4 transfucosidasa se puede eliminar de una manera convencional, por ejemplo, desnaturalizando la mezcla de reacción seguido de su centrifugación o ultrafiltración.
Al llevar a cabo un proceso del tercer aspecto de esta invención, las concentraciones relativas particulares del donante del componente A, el aceptor del componente B, la a1-3/4 transfucosidasa, el solvente acuoso y el tampón de incubación (por ejemplo, 50 mM Na3PO4 o 100 mM KHPO4) no son críticas. Con respecto a esto, el proceso se puede llevar a cabo adecuadamente a temperatura ambiente (por ejemplo, 15-50, preferentemente 20-37 °C) a un pH de 6 8, preferentemente 6,5-7 durante 15 minutos a 24 horas.
El proceso del tercer aspecto, realizado con DFL como componente A
Este proceso implica hacer reaccionar DFL como donante y un componente B como aceptor en una relación molar de 1:5 a 5:1, preferentemente de 1:3 a 3:1, con mayor preferencia de 1:2 a 2:1, aún con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 60 %, preferentemente al menos 20 %, con mayor preferencia al menos 30 %, para la reacción de DFL y el componente B.
Una mezcla de HMO de esta invención puede obtenerse fácilmente mediante este proceso tratando DFL y LNT con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto DFL y LNT en una relación molar preferentemente de 1:5 a 5:1, con mayor preferencia de 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia de 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 60 %, preferentemente al menos 15 %, con mayor preferencia al menos 20 %, aún con mayor preferencia al menos 25 %, pero aún con mayor preferencia al menos 30 %, para la reacción de DFL con LNT. La mezcla de reacción, producida de esta manera, que contiene LNFP-II, 2'-FL, DFL sin reaccionar, LNT y a1-3/4 transfucosidasa, se somete luego a etapas de purificación convencionales para eliminar la a1-3/4 transfucosidasa. La a1-3/4 transfucosidasa se puede eliminar, por ejemplo, desnaturalizándola seguido de centrifugación o ultrafiltración para producir una mezcla que consiste esencialmente en DFL, LNT, LNFP-II y 2'-FL.
En los siguientes enunciados que comienzan por "Cuando el proceso [...] se realiza...", la expresión "se puede hacer" equivale a la expresión "se obtiene".
Cuando el proceso de esta invención se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL l Nt ) a LNFP-II de 2-13 y una relación molar de DFL a LNT de 0,33-6.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 20-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 2-8 y una relación molar de DFL a LNT de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 30 50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 2-12 y una relación molar de DFL a LNT de 0,2-5.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 30 50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 2-8 y una relación molar de DFL a LNT de 0,33-3.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede preparar una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 2-4,67 y una relación molar de DFL a LNT de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 20 40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 3-18 y una relación molar de DFL a LNT de 0,23-4,33.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20 40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 3-13 y una relación molar de DFL a LNT de 0,38-2,67.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 3-8 y una relación molar de DFL a LNT de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión de 30 50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 4-11,3 y una relación molar de DFL a LNT de 2,5-5.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 20 40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 3-13 y una relación molar de DFL a LNT de 1-2,67.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20 40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 3-13 y una relación molar de DFL a LNT de 0,38-1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNT de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión de 30 50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNT) a LNFP-II de 4-11,3 y una relación molar de DFL a LNT de 0,2-0,41.
Una mezcla de HMO de esta invención también puede obtenerse fácilmente mediante este proceso tratando al donante DFL y LNnT con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto DFL y LNnT en una relación molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 60 %, preferentemente al menos 15 %, con mayor preferencia al menos 20 %, aún con mayor preferencia al menos 25 %, pero aún con mayor preferencia al menos 30 %, para la reacción de DFL con LNnT. La mezcla de reacción, producida de esta manera, que contiene LNFP-III, 2'-FL, DFL sin reaccionar, LNnT y a1-3/4 transfucosidasa, se somete luego a etapas de purificación convencionales para eliminar la a1-3/4 transfucosidasa. La a1-3/4 transfucosidasa se puede eliminar, por ejemplo, desnaturalizándola seguido de centrifugación o ultrafiltración para producir una mezcla que consiste esencialmente en DFL, LNnT, LNFP-III y 2'-FL.
En los siguientes enunciados que comienzan por "Cuando el proceso [...] se realiza...", la expresión "se puede hacer" equivale a la expresión "se obtiene".
Cuando el proceso de esta invención se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 2-13 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,33-6.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 20-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 2-8 y una relación molar de DFL a LNnT de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 2-12 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,2-5.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 2-8 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,33-3.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 2-4,67 y una relación molar de DFL a LNnT de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 3-18 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,23-4,33.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 3-13 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,38-2,67.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 3-8 y una relación molar de DFL a LNnT de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 4-11,3 y una relación molar de DFL a LNnT de 2,5-5.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 3-13 y una relación molar de DFL a LNnT de 1-2,67.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 3-13 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,38-1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNnT de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNnT) a LNFP-III de 4-11,3 y una relación molar de DFL a LNnT de 0,2-0,41.
Una mezcla de HMO de esta invención también puede obtenerse fácilmente mediante este proceso tratando DFL y LNFP-I con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto DFL y LNFP-I en una proporción molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 60 %, preferentemente al menos 15 %, con mayor preferencia al menos 20 %, aún con mayor preferencia al menos 25 %, pero aún con mayor preferencia 30 %, para la reacción de DFL con LNFP-I. La mezcla de reacción, producida de esta manera, que contiene LNDFH-I, 2'-FL, DFL sin reaccionar, LNFP-I y a1-3/4 transfucosidasa, se somete luego a etapas de purificación convencionales para eliminar la a1-3/4 transfucosidasa. La a1-3/4 transfucosidasa puede eliminarse, por ejemplo, desnaturalizándola seguido de centrifugación o ultrafiltración para producir una mezcla que consiste esencialmente en DFL, LNFP-I, LNDFH-I y 2'-FL.
En los siguientes enunciados que comienzan por "Cuando el proceso [...] se realiza...", la expresión "se puede hacer" equivale a la expresión "se obtiene".
Cuando el proceso de esta invención se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP- I) a LNDFH-I de 2-13 y se puede hacer una relación molar de DFL a l N f P - I de 0,33-6.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión de 20-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 2-8 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 2-12 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 0,2-5.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 2-8 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 0,33-3.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL l N f P - I ) a LNDFH-I de 2-4,67 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-18 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 0,23-4,33.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-13 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 0,38-2,67.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-8 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 4-11,3 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 2,5-5.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-13 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 1-2,67.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 20-40 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-13 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 0,38-1.
Cuando el proceso se lleva a cabo con una relación molar de DFL a LNFP-I de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión de 30-50 %, se puede hacer una mezcla de HMO que tiene una relación molar de (DFL LNFP-I) a LNDFH-I de 4-11,3 y una relación molar de DFL a LNFP-I de 0,2-0,41.
El proceso del tercer aspecto, realizado con 3-FL como componente A
Alternativamente, el proceso del tercer aspecto se puede llevar a cabo con 3-FL como donante y un componente B como aceptor en una relación molar de 1:5 a 5:1, preferentemente 1:3 a 3:1, con mayor preferencia 1:2 a 2:1, aún con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 80 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos el 50 %, para la reacción de 3-FL y el componente B. La mezcla de reacción, producida de esta manera, se puede someter luego a etapas de purificación convencionales para eliminar la a1-3/4 transfucosidasa. La a1-3/4 transfucosidasa puede eliminarse, por ejemplo, a través de su desnaturalización y posterior centrifugación o ultrafiltración.
En una modalidad preferida del proceso alternativo del tercer aspecto, una mezcla de HMO de esta invención se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y LNFP-I o 2'-FL con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto 3-FL y LNFP-I o 2'-FL en una relación molar de 1:3 a 3:1, preferentemente 1:2 a 2:1, con mayor preferencia 1:1, en la presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL con LNFP-I o 2'-FL.
En una modalidad más preferida, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y LNFP-I en una proporción molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente el 70 %, preferentemente al menos el 40 %, con mayor preferencia al menos el 50 %, para la reacción de 3-FL con LNFP-I.
En otra modalidad más preferida, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y 2'-FL en una proporción molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1 con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 20 %, con mayor preferencia al menos 35 %, aún con mayor preferencia al menos 40 %,pero aún con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL con 2'-FL.
En otra modalidad preferida del proceso alternativo del tercer aspecto, una mezcla de HMO de esta invención se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y LNT o LNnT con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego la a1-3/4 transfucosidasa se elimina de la de la mezcla de reacción. Este proceso preferentemente implica hacer reaccionar 3-FL y LNT o LNnT en una relación molar de 1:3 a 3:1, preferentemente 1:2 a 2:1, con mayor preferencia 1:1, en presencia de un a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL con LNT o LNnT.
En una modalidad más preferida, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, y en la que:
- la relación molar de (3-FL LNT) con relación a LNFP-II es 0,8-9,5, y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-II es aproximadamente 1,
siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-II y LNT a LNFP-II no sea mayor que 2, se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y LNT en una relación molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, y con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente el 70 %, preferentemente al menos el 40 %, con mayor preferencia al menos el 50 % para la reacción de 3-FL con LNT.
En otra modalidad más preferida, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, y en la que:
- la relación molar de (3-FL LNnT) con relación a LNFP-III es 0,8-9,5, y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-III es aproximadamente 1,
siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-III y LNnT a LNFP-III no sea mayor que 2, se puede obtener tratando 3-FL y LNnT en una relación molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 % para la reacción de 3-FL con LNnT.
El cuarto aspecto de la invención
El cuarto aspecto es un proceso para la obtención de una mezcla de HMO que consiste esencialmente en
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL,
preferentemente una mezcla del segundo aspecto, incluidas sus modalidades preferidas y las más preferidas, comprendiendo las etapas de hacer reaccionar 3-FL como donante y un componente B como aceptor en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego eliminar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción. La a1-3/4 transfucosidasa puede eliminarse, por ejemplo, a través de su desnaturalización y posterior centrifugación o ultrafiltración. La lactosa se puede separar del 3 - F l , el componente B y el componente C, por ejemplo, mediante ultra y/o nanofiltración en cascada, o la lactosa se puede tratar primero con lactasa para degradarla a glucosa y galactosa que luego se puede separar de la 3-FL, el componente B y el componente C por ultra y/o nanofiltración.
Al llevar a cabo un proceso del cuarto aspecto de esta invención, las concentraciones relativas particulares del donante 3-FL, el aceptor componente B, la a1-3/4 transfucosidasa, el solvente acuoso y el tampón de incubación (por ejemplo, 50mM Na3PO4 o 100 mM KHPO4) no son críticas. Con respecto a esto, el proceso se puede llevar a cabo adecuadamente a temperatura ambiente (por ejemplo, 15-50, preferentemente 20-37 °C) a un pH de 6-8, preferentemente 6,5-7 durante 15 minutos a 24 horas.
El proceso comprende preferentemente la etapa de hacer reaccionar 3-FL y el componente B en una relación molar de 1:5 a 5:1, preferentemente 1:3 a 3:1, con mayor preferencia 1:2 a 2:1, aún con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 80 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3- FL y un componente B.
En una modalidad preferida del proceso del cuarto aspecto, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y LNT con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción como se describió anteriormente. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto 3-FL y LNT en una relación molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1,aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 20 %,con mayor preferencia al menos 35 %, aún con mayor
preferencia al menos 40 %, pero aún con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL y LNT. A partir de la mezcla de reacción producida de esta manera, que contiene LNFP-II, lactosa, 3-FL sin reaccionar, LNT y la a1-3/4 transfucosidasa, la a1-3/4 transfucosidasa y la lactosa se pueden eliminar como se describió anteriormente.
En otra modalidad preferida del proceso del cuarto aspecto, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y LNnT con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción como se describió anteriormente. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto 3-FL y LNnT en una relación molar de 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 20 %, con mayor preferencia al menos 35 %, aún con mayor preferencia al menos 40 %, pero aún con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL y LNnT. A partir de la mezcla de reacción producida de esta manera, que contiene LNFP-III, lactosa, 3-FL sin reaccionar, LNnT y la a1-3/4 transfucosidasa, la a1-3/4 transfucosidasa y la lactosa se pueden eliminar como se describió anteriormente.
En aún otra modalidad preferida del proceso del cuarto aspecto, se puede obtener fácilmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, tratando 3-FL y LNFP-I con un a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción y luego retirar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción como se describió anteriormente. Este proceso comprende preferentemente la etapa de poner en contacto 3-FL y LNFP-I en una relación molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 20 %, con mayor preferencia al menos 35 %, aún con mayor preferencia al menos 40 %, pero aún con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL y LNFP-I. A partir de la mezcla de reacción producida de esta manera, que contiene LNDFH-I, lactosa, 3-FL sin reaccionar, LNFP-I y a1-3/4 transfucosidasa, la a1-3/4 transfucosidasa y la lactosa se pueden eliminar como se describió anteriormente.
En una modalidad preferida adicional del proceso del cuarto aspecto, una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL se puede obtener fácilmente tratando 3-FL y el aceptor 2'-FL con una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción que contiene DFL, lactosa, 3-FL sin reaccionar, 2'-FL y a1-3/4 transfucosidasa. A continuación, la mezcla se somete a etapas de purificación convencionales para eliminar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa como se describió anteriormente. Esta mezcla de HMO obtenida de esta manera tiene preferentemente una relación molar de DFL con relación a (3-FL 2'-FL) de al menos 1:10, con mayor preferencia al menos 1:7, aún con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3. Esta mezcla de HMO también tiene una relación molar de 3-FL con relación a 2'-FL de preferentemente 0,05-21, con mayor preferencia 0,13-7,7, aún con mayor preferencia aproximadamente 1.
Tercer y cuarto aspectos particularmente preferidos de la invención.
En los siguientes enunciados que comienzan por "Cuando el proceso [...] se realiza...", la expresión "se puede hacer" equivale a la expresión "se obtiene".
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-3,8 y una relación molar de 3-FL a LNT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-8 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-5,5 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-3 y una relación molar de 3-FL a LNT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-6 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión del 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-4 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 0,8-2 y una relación molar de 3-FL a LNT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 1,3-8 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,17-6.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 2-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,25-3,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:1 y una tasa de conversión de 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 1,3-3 y una relación molar de 3-FL a LNT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 5:1 a 3:1 y una tasa de conversión del 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 3-10 y una relación molar de 3-FL a LNT de 5-21.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 2-8 y una relación molar de 3-FL a LNT de 2,5-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNT de 1-3,3.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,3-1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 2-8 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,13-0,4.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNT de 1:3 a 1:5 y una tasa de conversión del 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNT) a LNFP-II de 3-10 y una relación molar de 3-FL a LNT de 0,05-0,2.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-3,8 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-8 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-5,5 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-3 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0.8-6 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-4 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 0,8-2 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 1,3-8 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,17-6.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 2-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,25-3,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:1 y una tasa de conversión de 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 1,3-3 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 5:1 a 3:1 y una tasa de conversión del 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 3-10 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 5-21.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 2-8 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 2,5-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 1-3,3.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,3-1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 2-8 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,13-0,4.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNnT de 1:3 a 1:5 y una tasa de conversión del 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNnT) a LNFP-III de 3-10 y una relación molar de 3-FL a LNnT de 0,05-0,2.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-3,8 y una relación molar de 3-FL a l N f P - I de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-8 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-5,5 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión del 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-3 y una relación molar de 3-FL a L n F p - I de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-6 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión del 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-4 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión del 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 0,8-2 y una relación molar de 3-FL a L n F p - I de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 1,3-8 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,17-6.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 2-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,25-3,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:1 y una tasa de conversión del 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 1,3-3 y una relación molar de 3-FL a Ln Fp -I de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 5:1 a 3:1 y una tasa de conversión del 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-10 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 5-21.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 2-8 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 2,5-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1-3,3.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,3-1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 2-8 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,13-0,4.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 1:3 a 1:5 y una tasa de conversión de 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL LNFP-I) a LNDFH-I de 3-10 y una relación molar de 3-FL a LNFP-I de 0,05-0,2.
Una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa o que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL se puede obtener llevando a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto, respectivamente, teniendo 3-FL y 2'-FL en una relación molar de preferentemente 1:5 a 5:1, con mayor preferencia 1:3 a 3:1, aún con mayor preferencia 1:2 a 2:1, pero aún con mayor preferencia 1:1, y con una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 0,8-6,6 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:1 y una tasa de conversión del 35-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a Df L de 0,8-3,8 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL,
DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 0,8-8 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 0,8-5,5 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:1 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 0,8-3 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 0,8-6 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,13-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 0,8-4 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,2-4,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:1 y una tasa de conversión de 50-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a D f L de 0,8-2 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 3:1 a 1:3 y una tasa de conversión de 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 1,3-8 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,17-6.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 2:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 2-6,6 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,25-3,5.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:1 y una tasa de conversión de 40-60 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a D f L de 1.3-3 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 5:1 a 3:1 y una tasa de conversión del 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 3-10 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 5-21.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 3:1 a 2:1 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 2-8 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 2,5-7,7.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 2:1 a 1:1 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1-3,3.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:1 a 1:2 y una tasa de conversión de 35-55 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 1,6-6,6 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,3-1.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:2 a 1:3 y una tasa de conversión de 40-70 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL,
DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 2-8 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,13-0,4.
Cuando se lleva a cabo un proceso del tercer o cuarto aspecto con una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 1:3 a 1:5 y una tasa de conversión de 50-80 %, se puede hacer una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, o una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, respectivamente, teniendo una relación molar de (3-FL 2'-FL) a DFL de 3-10 y una relación molar de 3-FL a 2'-FL de 0,05-0,2.
La a1-3/4 transfucosidasa adecuada para llevar a cabo el tercer y cuarto aspecto de la invención.
En los siguientes párrafos, la expresión "puede llevar" es equivalente a la expresión "opcionalmente lleva", y la expresión "puede ser sustituido" es equivalente a la expresión "es sustituido opcionalmente".
De acuerdo con esta invención, el término "a1-3/4 transfucosidasa" significa preferentemente cualquier fucosidasa de tipo silvestre o manipulada que sea capaz de transferir un residuo de fucosa a la posición 3 de la glucosa en un aceptor de fórmula 2, a la posición 3 de la N-acetil-glucosamina en un grupo N-acetil-lactosaminilo preferentemente terminal, en un aceptor de fórmula 1, 1a o 1b, o en la posición 4 de la N-acetil-glucosamina en un grupo lacto-N-biosilo preferentemente terminal, en un aceptor de fórmula 1, 1a o 1b, donde los compuestos de fórmulas 1 y 2 son los siguientes:
en donde R1 es fucosilo o H,
R2 se selecciona de grupos N-acetil-lactosaminilo y lacto-N-biosilo, en donde el grupo N-acetil-lactosaminilo puede llevar un residuo glicosilo que comprende uno o más grupos N-acetil-lactosaminilo y/o uno o más grupos lacto-N-biosilo; cualquier grupo N-acetil-lactosaminilo y lacto-N-biosilo puede estar sustituido con uno o más residuos de sialilo y/o fucosilo,
R3 es un grupo H o N-acetil-lactosaminilo opcionalmente sustituido con un residuo glicosilo que comprende uno o más grupos N-acetil-lactosaminilo y/o uno o más grupos lacto-N-biosilo; cualquier grupo N-acetil-lactosaminilo y lacto-N-biosilo puede estar sustituido con uno o más residuos de sialilo y/o fucosilo, y
cada R4 independientemente es sialilo o H,
con la condición de que al menos uno de R1 o R4 no es H; y los compuestos de las fórmulas 1a y 1b son como sigue:
en donde R1 es como se definió anteriormente,
R2a es un grupo N-acetil-lactosaminilo opcionalmente sustituido con un residuo glicosilo que comprende un grupo N-acetil-lactosaminilo y/o un lacto-N-biosilo; cualquier grupo N-acetil-lactosaminilo y lacto-N-biosilo puede estar sustituido con uno o más residuos de sialilo y/o fucosilo, pero preferentemente sin un residuo de sialilo y/o fucosilo, R3a es H o un grupo N-acetil-lactosaminilo opcionalmente sustituido con un grupo lacto-N-biosilo; cualquier grupo N-acetil-lactosaminilo y lacto-N-biosilo puede estar sustituido con uno o más residuos de sialilo y/o fucosilo, pero preferentemente sin un residuo de sialilo y/o fucosilo,
R2b es un grupo lacto-N-biosilo opcionalmente sustituido con un residuo sialilo y/o fucosilo, pero preferentemente sin un residuo sialilo y/o fucosilo, y
R3b es H o un grupo N-acetil-lactosaminilo opcionalmente sustituido con uno o dos grupos N-acetil-lactosaminilo y/o un grupo lacto-N-biosilo; cualquier grupo N-acetil-lactosaminilo y lacto-N-biosilo puede estar sustituido con uno o más residuos de sialilo y/o fucosilo, pero preferentemente sin un residuo de sialilo y/o fucosilo.
Preferentemente, los compuestos de las fórmulas 1a y 1b tienen uno o más de los siguientes enlaces y modificaciones: - el grupo N-acetil-lactosaminilo en el residuo glicosilo de R2a en la fórmula 1a está unido al otro grupo N-acetillactosaminilo mediante un enlace interglucosídico 1-3,
- el grupo lacto-N-biosilo en el residuo glicosilo de R2a en la fórmula 1a está unido al grupo N-acetil-lactosaminilo mediante un enlace interglucosídico 1-3,
- el grupo lacto-N-biosilo en el residuo glicosilo de R3a en la fórmula 1a está unido al grupo N-acetil-lactosaminilo mediante un enlace interglucosídico 1-3,
- el grupo N-acetil-lactosaminilo en el residuo glicosilo de R3b en la fórmula 1b está unido a otro grupo N-acetillactosaminilo mediante un enlace interglucosídico 1-3 o 1-6, y
- el grupo lacto-N-biosilo en el residuo glicosilo de R3b en fórmula 1b está unido al grupo N-acetil-lactosaminilo mediante un enlace interglucosídico 1-3.
La a1-3/4 transfucosidasa se selecciona preferentemente de a-L-fucosidasas clasificadas de acuerdo con EC 3.2.1.111, que tienen actividad transfucosidasa, tal como la a1-3/4 fucosidasa de Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 15697 como se establece en la patente de Estados Unidos 8361756 como proteína de la SEQ ID NO 18 (SEQ ID NO 1 de la presente solicitud) y otras fucosidasas que tienen al menos 60 %, preferentemente al menos 70 %, con mayor preferencia al menos 80 %, particularmente al menos 90 %, de identidad con las posiciones de aminoácidos 56 a 345 de la fucosidasa a1-3/4 de Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 15697. Ejemplos de tales otras fucosidasas se enumeran más abajo en la Tabla 1.
Tabla 1.
Es importante que la actividad transfucosidasa de la a1-3/4 transfucosidasa sea mayor que su actividad hidrolítica. En el curso de la reacción 3-FL componente B ^ componente C Lac o DFL componente E ^ componente F 2'-FL, la hidrólisis del componente C o del componente F puede llegar a ser significativa en un determinado momento debido al aumento de la concentración del componente C o del componente F, que luego se degradan en el componente B o el componente E, respectivamente, y fucosa. Para preparar las mezclas de HMO de la invención, la reacción debe detenerse antes de que se produzca una hidrólisis significativa del producto. Este punto de tiempo se puede determinar fácilmente mediante las mediciones cinéticas de enzimas que se realizan comúnmente.
Las a1-3/4 transfucosidasas especialmente preferidas para preparar las mezclas de HMO de esta invención son las a1-3/4 transfucosidasas que carecen de actividad hidrolítica, o que al menos tienen una actividad hidrolítica significativamente reducida. Tales enzimas se pueden preparar alterando la secuencia de aminoácidos de una fucosidasa a1-3/4 de tipo principalmente silvestre en una o más posiciones de aminoácidos, de modo que la secuencia de aminoácidos mutada dé como resultado una actividad transfucosidasa mejorada y/o una actividad hidrolítica reducida. De acuerdo con esta invención, la a1-3/4 transfucosidasa preferentemente:
i) se mutó al menos en una o más de las siguientes posiciones de aminoácidos de SEQ ID NO 18 de US 8361756: 134, 135, 168, 170, 174, 216, 221, 236, 237, 244, 245, 282 y 413, preferentemente al menos en una o más de las siguientes posiciones de aminoácidos: 134, 135, 174, 216, 221, 282 y 413; y de esta manera
ii) proporciona una tasa de conversión de al menos 10 % hasta 70 %, preferentemente al menos 20 %, con mayor preferencia al menos 35 %, aún con mayor preferencia 40-50 %, para la reacción de
- el donante 3-FL con el aceptor LNT, o
- el donante 3-FL con el aceptor LNnT, o
- el donante 3-FL con el aceptor LNFP-I, o
- el donante 3-FL con el aceptor 2'-FL, o
- el donante de DFL con el aceptor de LNT, o
- el donante de DFL con el aceptor de LNnT, o
- el donante DFL con el aceptor LNFP-I.
El quinto aspecto de la invención
El quinto aspecto de esta invención es una composición antiinfecciosa para tratar infecciones bacterianas. La composición comprende, preferentemente consiste esencialmente en:
- DFL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I,
- un componente F, que es:
LNFP-II cuando el componente E es LNT, o
LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I, y
- 2'-FL,
o comprende, preferentemente consiste esencialmente en:
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL;
o la composición consiste esencialmente en
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL,
- un componente C, que es
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL, y
- lactosa;
- preferentemente la composición antiinfecciosa consiste esencialmente en - 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL,
o la composición antiinfecciosa consiste esencialmente en
- DFL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I,
- un componente F, que es
LNFP-II cuando el componente E es LNT, o
LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I, y
- 2'-FL.
La composición antiinfecciosa especialmente preferida se selecciona del grupo que consiste en:
- una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II o de 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, preferentemente en la que:
o la relación molar de (3-FL LNT) con relación a LNFP-II es 0,8-9,5, y
o la relación molar de lactosa con relación a LNFP-II es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-II y LNT a LNFP-II no sea mayor que 2, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II; o
- una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III o por 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, preferentemente en la que:
- la relación molar de (3-FL LNnT) con relación a LNFP-III es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-III es aproximadamente 1,
- siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-III y LNnT a LNFP-III no sea mayor que 2, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III; o
- una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I o de 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, preferentemente en la que:
- la relación molar de (3-FL LNFP-I) con relación a LNDFH-I es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a LNDFH-I es aproximadamente 1,
- particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I; o
- una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL o de 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, preferentemente en la que:
- la relación molar de (3-FL 2'-FL) con relación a DFL es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a DFL es aproximadamente 1; o
- una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL, preferentemente en la que:
- la relación molar de DFL con relación a (3-FL 2'-FL) es al menos 1:10, preferentemente al menos 1:7, con mayor preferencia al menos 1:5, especialmente 1:3; y/o
- la relación molar de 3-FL con relación a 2'-FL es de 0,05-21, preferentemente de 0,13-7,7, con mayor preferencia de aproximadamente 1; o
- una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II; o
- una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III-II, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III; o
- una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I.
La composición antiinfecciosa de esta invención puede ser una composición farmacéutica. La composición farmacéutica puede contener un portador farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, solución salina tamponada con
fosfato, mezclas de etanol en agua, agua y emulsiones tales como una emulsión de aceite/agua o agua/aceite, así como también varios agentes humectantes o excipientes. La composición farmacéutica también puede contener otros materiales que no produzcan una reacción adversa, alérgica o de cualquier otra manera no deseada cuando se administran a un paciente. Los portadores y otros materiales pueden incluir disolventes, dispersantes, revestimientos, agentes promotores de la absorción, agentes de liberación controlada y uno o más excipientes inertes, tales como almidones, polioles, agentes granuladores, celulosa microcristalina, diluyentes, lubricantes, aglutinantes y agentes desintegrantes. Si se desea, las dosis en tabletas de las composiciones antiinfecciosas se pueden recubrir mediante técnicas acuosas o no acuosas estándar.
Las composiciones antiinfecciosas de esta invención se pueden administrar por vía oral, por ejemplo, como una tableta, cápsula o gránulo que contiene una cantidad predeterminada de la primera mezcla, o como un polvo o gránulos que contienen una concentración predeterminada de la primera mezcla o un gel, pasta, solución, suspensión, emulsión, jarabe, bolo, electuario o suspensión, en un líquido acuoso o no acuoso, que contiene una concentración predeterminada de la primera mezcla. Las composiciones administradas por vía oral pueden incluir aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, agentes saborizantes y humectantes. Las composiciones administradas por vía oral, tales como comprimidos, se pueden recubrir opcionalmente y se pueden formular para proporcionar una liberación sostenida, retardada o controlada de la primera mezcla que contienen.
Las composiciones antiinfecciosas de esta invención también se pueden administrar mediante supositorio rectal, tubo de aerosol, tubo nasogástrico o infusión directa en el tracto gastrointestinal o el estómago.
Las composiciones farmacéuticas antiinfecciosas de esta invención también pueden incluir agentes terapéuticos tales como agentes antivirales, antibióticos, probióticos, analgésicos y agentes antiinflamatorios. La dosis adecuada de estas composiciones para un paciente puede determinarse de manera convencional, basándose en factores tales como el estado inmunológico del paciente, el peso corporal y la edad. En algunos casos, la dosis estará en una concentración similar a la encontrada para los HMO en la composición de la leche materna humana. La cantidad requerida estaría generalmente en el intervalo de aproximadamente 200 mg a aproximadamente 20 g por día, en ciertas modalidades es de aproximadamente 300 mg a aproximadamente 15 g por día, de aproximadamente 400 mg a aproximadamente 10 g por día, en ciertas modalidades de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 10 g por día, en ciertas modalidades de aproximadamente 1 g a aproximadamente 10 g por día. Los regímenes de dosis apropiados se pueden determinar mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica.
Las composiciones antiinfecciosas de esta invención también se pueden añadir a composiciones nutricionales. Por ejemplo, pueden añadirse a una fórmula infantil, una composición nutricional, una solución de rehidratación o un mantenimiento o suplemento dietético para personas de edad avanzada o personas inmunocomprometidas. En tales composiciones antiinfecciosas también se pueden incluir macronutrientes tales como grasas comestibles, carbohidratos y proteínas. Las grasas comestibles incluyen, por ejemplo, aceite de coco, aceite de soja y monoglicéridos y diglicéridos. Los carbohidratos incluyen, por ejemplo, glucosa, lactosa comestible y almidón de maíz hidrolizado. Las proteínas incluyen, por ejemplo, proteína de soja, suero de leche y leche desnatada. Las vitaminas y minerales (por ejemplo, calcio, fósforo, potasio, sodio, cloruro, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, selenio, yodo y vitaminas A, E, D, C y complejo B) también se pueden incluir en dichas composiciones antiinfecciosas.
Las composiciones descritas en el quinto aspecto de la invención son útiles para modular el microbioma de un ser humano para aumentar la abundancia de Bifidobacterium y Barnesiella, y preferentemente para reducir la abundancia de Firmicutes, especialmente Clostridia. Las composiciones descritas en el quinto aspecto de la invención se administran al ser humano para lograr este efecto.
Las composiciones especialmente preferidas para modular el microbioma de un ser humano son:
- 3-FL, LNT y LNFP-II, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II o de 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, con mayor preferencia en la que:
- la relación molar de (3-FL LNT) con relación a LNFP-II es 0,8-9,5, y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-II es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-II y LNT a LNFP-II no sea mayor que 2, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II; o
- 3-FL, LNnT y LNFP-III, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III o de 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, con mayor preferencia en la que:
- la relación molar de (3-FL LNnT) con relación a LNFP-III es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-III es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-III y LNnT a LNFP-III no sea mayor que 2, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III; o
- 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I o de 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, con mayor preferencia en cual:
- la relación molar de (3-FL LNFP-I) con relación a LNDFH-I es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a LNDFH-I es aproximadamente 1, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I; o
- 3-FL, 2'-FL y DFL, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL o de 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, con mayor preferencia en la que:
- la relación molar de (3-FL 2'-FL) con relación a DFL es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a DFL es aproximadamente 1, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL;
o
- 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II, preferentemente una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II, con mayor preferencia una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II; o
- 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III, preferentemente una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III-II, con mayor preferencia una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III; o - 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I, preferentemente una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I, con mayor preferencia una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I. Las composiciones descritas en el quinto aspecto de la invención son útiles para prevenir o tratar infecciones bacterianas en un ser humano, especialmente infecciones bacterianas resistentes a antibióticos. Las composiciones descritas en el quinto aspecto de la invención se administran al ser humano para lograr este efecto.
Las composiciones especialmente preferidas para prevenir o tratar infecciones bacterianas en humanos son:
- 3-FL, LNT y LNFP-II, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II o de 3-FL, LNT, LNFP-II y lactosa, con mayor preferencia en la que:
- la relación molar de (3-FL LNT) con relación a LNFP-II es 0,8-9,5, y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-II es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-II y LNT a LNFP-II no sea mayor que 2, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNT y LNFP-II; o
- 3-FL, LNnT y LNFP-III, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III o de 3-FL, LNnT, LNFP-III y lactosa, con mayor preferencia en la que:
- la relación molar de (3-FL LNnT) con relación a LNFP-III es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a LNFP-III es aproximadamente 1, siempre y cuando una de las relaciones molares 3-FL a LNFP-III y LNnT a LNFP-III no sea mayor que 2, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNnT y LNFP-III; o
- 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I o de 3-FL, LNFP-I, LNDFH-I y lactosa, con mayor preferencia en cual:
- la relación molar de (3-FL LNFP-I) con relación a LNDFH-I es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a LNDFH-I es aproximadamente 1, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, LNFP-I y LNDFH-I; o
- 3-FL, 2'-FL y DFL, preferentemente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL o de 3-FL, 2'-FL, DFL y lactosa, con mayor preferencia en la que:
- la relación molar de (3-FL 2'-FL) con relación a DFL es 0,8-9,5 y
- la relación molar de lactosa con relación a DFL es aproximadamente 1, particularmente una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 3-FL, 2'-FL y DFL; o
- 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II, preferentemente una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II, con mayor preferencia una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II; o
- 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III, preferentemente una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III-II, con mayor preferencia una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNnT y LNFP-III; o
- 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I, preferentemente una mezcla de HMO que comprende 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I, con mayor preferencia una mezcla de HMO que consiste esencialmente en 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I.
En esta descripción, a menos que se indique expresamente de cualquier otra manera, la palabra "o" se usa en el sentido de un operador que devuelve un valor verdadero cuando una o ambas de las condiciones indicadas se cumplen, a diferencia del operador "exclusivo o" que requiere que solo una de las condiciones se cumpla. La palabra "que comprende" se usa en el sentido de "que incluye" y no en el sentido de "que consiste en". El no reconocimiento de cualquier documento que se publicó antes en la presente descripción debe tomarse como una admisión o una representación de que la enseñanza de la misma era de conocimiento general común en Australia o en cualquier otro lugar en la fecha de la presente descripción.
EJEMPLOS
En los ejemplos más abajo, se usaron mutantes de Bifidobacterium longum subsp. infantis ATCC 15697 para preparar mezclas de esta invención; las posiciones de las mutaciones son con referencia a la SEQ ID NO 1 de esta solicitud, que es idéntica a la SEQ ID NO 18 de US 8361756.
Ejemplo 1
3-FL LNT ^ LNFP-II Lac
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH = 6,5, 37 °C, 200 |jl), [3-FL] = 200 mM, [LNT] = 200 mM, extracto enzimático= 0,5 mg/ml. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3 jm , 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 56 % y agua al 44 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm.
La tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas. La lactosa es equimolar a LN FP-II.
Ejemplo 2
Se realizó el mismo ensayo, usando la mutante W135F-A174N-N274A-E413, como en el Ejemplo 1 con la diferencia que en el 3-FL: La relación de LNT varió de 3:1 a 1:3 y el extracto enzimático fue de 0,05 mg/ml). La tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas. La lactosa es equimolar a LNFP-II. No se detectó fucosa.
Ejemplo 3
3-FL LNnT ^ LNFP-III Lac
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH = 6,5, 37 °C, 200 pl), [3-FL] = 200 mM, [LNnT] = 200 mM. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3 pm, 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 56 % y agua al 44 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm.
La tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas para un extracto enzimático de 2 mg/ml. La lactosa es equimolar a LNFP-III.
La tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas para un extracto enzimático de 0,5 mg/ml. La lactosa es equimolar a LNFP-III.
Ejemplo 4
Se llevó a cabo la misma prueba que en el Ejemplo 3 mediante el uso de mutantes en varias posiciones. La tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas para un extracto enzimático de 0,5 mg/ml. La lactosa es equimolar a LNFP-III.
Ejemplo 5
3-FL LNFP-I ^ LNDFH-I Lac
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH = 6,5, 37 °C, 200 |jl), [3-FL] = 200 mM, [LNFP-I]= 200 mM, extracto enzimático= 0,5 mg/ml. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3 jm , 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 56 % y agua al 44 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm.
La siguiente tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas. La lactosa es equimolar a LNDFH-I.
Se realizó otra prueba en tampón fosfato de sodio (50 mM, pH= 6,5, 30 °C, 140 jl), [3-FL]= 50 mM, [LNFP-I]= 50 mM, extracto enzimático= 10 jl.
La siguiente tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas. La lactosa es equimolar a LNDFH-I.
Ejemplo 6
Se llevó a cabo la misma prueba que en el Ejemplo 5 en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH= 6,5, 37 °C 150 ql), [3-FL]= 100 mM, [LNFP-I]= 50 mM, extracto enzimático= 10 ql de extracto crudo. La HPLC se realizó como en el Ejemplo 5.
La siguiente tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas después de 220 minutos. La lactosa es equimolar a LNDFH-I.
Ejemplo 7
3-FL 2'-FL ^ DFL Lac
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH= 6,5, 37 °C, 200 ql), [3-FL]= 200 mM, [2'-FL]= 200 mM, extracto enzimático= 0,5 mg/ml. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3 qm, 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 56 % y agua al 44 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm.
La tabla más abajo muestra la composición de las mezclas obtenidas. La lactosa es equimolar a DFL.
Ejemplo 8
DFL LNT ^ LNFP-II 2'-FL
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH= 6,5, 37 °C, 200 |jl), mediante el uso de la cepa mutante W135F-A174N-N274A-E413R, [DFL]= 200 mM, [LNT]= 200 mM, extracto enzimático= 0,1 o 0,25 mg/ml. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3jm , 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1,1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 66 % y agua al 34 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm.
Las tablas más abajo muestran la composición de las mezclas obtenidas.
extracto enzimático: 0,1 mg/ml
extracto enzimático: 0,25 mg/ml
Ejemplo 9
DFL LNnT ^ LNFP-III 2'-FL
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH= 6,5, 37 °C, 200 jl), utilizando la cepa mutante W135F-A174N-N274A-E413R, [DFL]= 200 mM, [LNnT]= 200 mM, extracto enzimático= 0,1 o 0,25 mg/ml. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3 jm , 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1,1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 66 % y agua al 34 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm. Las tablas más abajo muestran la composición de las mezclas obtenidas.
extracto enzimático: 0,1 mg/ml
extracto enzimático: 0,25 mg/ml
Ejemplo 10
DFL LNFP-I ^ LNDFH-I 2'-FL
La prueba se realizó en tampón de fosfato de sodio (50 mM, pH= 6,5, 37 °C, 200 pl), mediante el uso de la cepa mutante W135F-A174N-N274A-E413R, [DFL]= 200 mM, [LNFP-I]= 200 mM, extracto enzimático= 0,1 o 0,25 mg/ml. Condiciones de HPLC: Se usó TSK Gel amida 80 (Tosoh, 3pm, 150 x 4,6 mm) con un flujo de 1,1 ml/min mediante el uso de acetonitrilo al 66 % y agua al 34 %. La elución de sustratos y productos se detectó mediante CAD y/o detección UV a 195 nm.
Las tablas más abajo muestran la composición de las mezclas obtenidas.
extracto enzimático: 0,1 mg/ml
extracto enzimático: 0,25 mg/ml
Ejemplo 11
Se reclutan un total de 80 pacientes hombres y mujeres para participar en el estudio. Después de una visita de selección y un período de preinclusión de 1-2 semanas, los pacientes se seleccionan y aleatorizan en ocho grupos, cada uno de 10 pacientes. A cada uno de siete grupos se les administra un producto de tratamiento que contiene 5 gramos de una de las siguientes composiciones:
i) LNT, 3-FLy LNFP-II,
ii) LNnT, 3-FL y LNFP-III,
iii) LNFP-I, 3-FL y LNDFH-I,
iv) 3-FL, 2'-FL y DFL,
v) 2'-FL, DFL, LNT y LNFP-II,
vi) 2'-FL, DFL, LNnTy LNFP-III, o
vii) 2'-FL, DFL, LNFP-I y LNDFH-I,
y un grupo el producto placebo (2 gramos de glucosa) durante 8 semanas. Los productos de tratamiento y el placebo están en forma de polvo en un contenedor de dosis unitaria.
Los pacientes son elegibles para participar si tienen al menos 18 años de edad. Todos los pacientes reclutados pueden y están dispuestos a comprender y cumplir los procedimientos del estudio. Se excluye a los pacientes si: han participado en un estudio clínico un mes antes de la visita de selección; tienen resultados anormales en las pruebas de selección que son clínicamente relevantes para la participación en el estudio; padecen una enfermedad grave como malignidad, diabetes, enfermedad coronaria grave, enfermedad renal, enfermedad neurológica o enfermedad psiquiátrica grave o cualquier afección que pueda confundir los resultados del estudio; usó suplementos probióticos en dosis elevadas (se permite el yogur) durante los 3 meses anteriores al estudio; consumió antibióticos 3 meses antes del estudio; consumió regularmente cualquier medicamento que pudiera interferir con la evaluación de los síntomas 2 semanas antes del estudio; y en embarazo o lactancia.
En la visita de selección, se registra el historial médico y la medicación concomitante, y se toma una muestra de sangre para análisis de seguridad. Se distribuye un kit de toma de muestras fecales. Se indica a los pacientes que guarden sus muestras en el congelador hasta la próxima visita.
En la segunda visita, se verifican los criterios de elegibilidad y los sujetos elegibles se asignan al azar a los tres brazos del ensayo. Se recolectan las muestras fecales y se distribuye el equipo para nuevas muestras. Los pacientes están familiarizados con un sistema interactivo habilitado para Internet que registra datos a diario y se les proporciona tratamiento o productos de control. Se recuerda a los sujetos que no cambien su dieta habitual durante el estudio. Se recolectan muestras de sangre para estudios de biomarcadores. Las muestras fecales se almacenan a -80 °C hasta su análisis. Las muestras fecales se someten a análisis de secuenciación de ARN 16 S.
El estudio tiene una duración de 8 semanas y los pacientes consumen diariamente un placebo o un producto de tratamiento. Se indica a los pacientes que consuman los productos por la mañana con el desayuno. El cumplimiento se supervisa a través del sistema interactivo habilitado para Internet. Los pacientes también usan el sistema para registrar:
- Información de la Escala Bristol Stool Form (BSF),
- información de síntomas como dolor abdominal, incomodidad abdominal, calambres abdominales, distensión abdominal y plenitud abdominal,
- información adicional sobre la Escala de calificación de síntomas gastrointestinales (GSRS).
Este cuestionario incluye 15 parámetros que abarcan cinco dimensiones (dolor abdominal, indigestión, reflujo, diarrea, estreñimiento) y utiliza una escala Likert de siete grados.
Al final del estudio, cada paciente tiene una visita de salida con el equipo médico. Las muestras fecales y de sangre se recogen y analizan como antes.
El análisis fecal indica que los pacientes tratados tienen una mayor abundancia de Bifidobacteria y Barnesiella, y una abundancia reducida de Firmicutes; especialmente Clostridia.
Claims (16)
1. Una mezcla de HMO que consiste esencialmente en:
- un componente A que es 3-FL o DFL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL,
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL, y
- un componente D, que es:
lactosa cuando el componente A es 3-FL, o
2'-FL cuando el componente A es DFL,
con la condición de que si el componente B es 2'-FL, entonces el componente A es 3-FL.
2. La mezcla, de acuerdo con la reivindicación 1, en la cual:
- el componente A es 3-FL,
- la relación molar de (3-FL componente B) con relación al componente C es 0,8-9,50, y
- la relación molar de lactosa con respecto al componente C es aproximadamente 1.
3. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 2, en la que el componente B es LNT o LNnT y una de las relaciones molares de 3-FL con respecto al componente D y el componente B con respecto al componente C no es mayor que 2.
4. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, en la que la relación molar de 3-FL con respecto al componente B es de 0,07-7,7.
5. La mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 4, en la que el componente A es 3-FL y el componente B es LNFP-I o 2'-FL, y la relación molar de 3-FL con respecto al componente C, o del componente B con respecto al componente C no es mayor que 2.
6. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el componente A es DFL, y preferentemente en la que la relación molar del componente C con relación a (DFL componente B) es al menos 1:10, preferentemente al menos 1:7, con mayor preferencia al menos 1:5, aún con mayor preferencia al menos 1:3.
7. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 6, en la que la relación molar de DFL con relación al componente B es 0,17-6, preferentemente 0,25-4, con mayor preferencia aproximadamente 1.
8. Una mezcla de HMO que consiste esencialmente en
- 3-FL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I, y
- un componente F que es
LNFP-II cuando el componente E es LNT, o
LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I.
9. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 8, en la que la relación molar del componente F con relación a (3-FL componente E) es al menos 1:10, preferentemente al menos 1:7, con mayor preferencia al menos 1:5, aún con mayor preferencia al menos 1:3, y/o en la que la relación molar de 3-FL con respecto al componente E es 0,05-21, preferentemente 0,13-7,7, con mayor preferencia aproximadamente 1.
10. Un proceso para la obtención de una mezcla de HMO de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende las etapas de: hacer reaccionar un componente A y un componente B en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción, y luego retirar la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción.
11. El proceso de acuerdo con la reivindicación 10 para la obtención de una mezcla de HMO, preferentemente una mezcla de HMO de la reivindicación 6, que comprende la etapa de: hacer reaccionar el DFL y el componente B en una relación molar de 1:5 a 5:1, preferentemente 1:3 a 3:1, con mayor preferencia 1:2 a 2:1, aún con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 10 %, hasta aproximadamente 60 %, preferentemente al menos 20 %, con mayor preferencia al menos 30 %, para la reacción de DFL y el componente B.
12. El proceso de acuerdo con la reivindicación 11 para la obtención de una mezcla de HMO en la que el compuesto A es 3-FL, preferentemente una mezcla de HMO de las reivindicaciones 2 a 5, con mayor preferencia una mezcla de HMO de la reivindicación 3, que comprende la etapa de hacer reaccionar 3-FL y el componente B en una relación molar de 1:5 a 5:1, preferentemente 1:3 a 3:1, con mayor preferencia 1:2 a 2:1, aún con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 80 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL y el componente B.
13. El proceso de acuerdo con la reivindicación 12, que comprende la etapa de hacer reaccionar 3-FL y el componente B en una relación molar de 1:3 a 3:1, preferentemente 1:2 a 2:1, con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 70 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %, para la reacción de 3-FL y el componente B.
14. Un proceso para la obtención de una mezcla de HMO que consiste esencialmente en:
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL,
preferentemente una mezcla de HMO de acuerdo con la reivindicación 8 o la reivindicación 9,
que comprende las etapas de hacer reaccionar 3-FL y un componente B en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa para producir una mezcla de reacción, y luego retirar la lactosa y la a1-3/4 transfucosidasa de la mezcla de reacción.
15. El proceso de acuerdo con la reivindicación 14, que comprende la etapa de hacer reaccionar 3-FL y el componente B en una relación molar de 1:5 a 5:1, preferentemente de 1:3 a 3:1, con mayor preferencia de 1:2 a 2:1, aún con mayor preferencia 1:1, en presencia de una a1-3/4 transfucosidasa que tiene una tasa de conversión de al menos 35 %, hasta aproximadamente 80 %, preferentemente al menos 40 %, con mayor preferencia al menos 50 %, para el reacción de 3-FL y el componente B.
16. Una composición antiinfecciosa para su uso en el tratamiento de infecciones bacterianas de acuerdo con la opción A, B o C a más abajo:
A. una composición antiinfecciosa para su uso en el tratamiento de infecciones bacterianas que comprende, preferentemente que consiste esencialmente en:
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL, y
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL;
B. una composición antiinfecciosa para su uso en el tratamiento de infecciones bacterianas que consiste esencialmente en:
- 3-FL,
- un componente B que es LNT, LNnT, LNFP-I o 2'-FL,
- un componente C, que es:
LNFP-II cuando el componente B es LNT, o
LNFP-III cuando el componente B es LNnT, o
LNDFH-I cuando el componente B es LNFP-I, o
DFL cuando el componente B es 2'-FL, y
- lactosa;
C. una composición antiinfecciosa para su uso en el tratamiento de infecciones bacterianas que comprende, preferentemente que consiste esencialmente en:
- DFL,
- un componente E que es LNT, LNnT o LNFP-I,
- un componente F, que es LNFP-II cuando el componente E es LNT, o LNFP-III cuando el componente E es LNnT, o LNDFH-I cuando el componente E es LNFP-I, y
- 2'-FL.
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