ES2800073T3 - Uso del péptido qbp1 para la prevención o el tratamiento del trastorno del estrés postraumático, el síndrome de estrés agudo y/o el síndrome de adaptación general - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos con al menos un 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1, o que consiste en SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2, para su uso en la prevención o tratamiento del Trastorno de Estrés Postraumático, el Síndrome del Estrés Agudo y/o el Síndrome de Adaptación General.

Description

DESCRIPCIÓN

Uso del péptido QBP1 para la prevención o el tratamiento del trastorno del estrés postraumático, el síndrome de estrés agudo y/o el síndrome de adaptación general

La invención se refiere a una composición que comprende el péptido QBP1 para su uso en prevenir el Trastorno de Estrés Postraumático y trastornos relacionados (como el trastorno de estrés agudo y trastorno general de adaptación). La invención puede ser circunscrita al campo de la Medicina.

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA

El correcto desarrollo de un individuo depende de adquisición de memoria a largo plazo. Se ha propuesto que cambios estructurales en las proteínas individuales, y en los complejos supramoleculares de proteínas desempeñan un papel importante tanto en la memoria a largo plazo como en la de corto plazo.

Los "amiloides", cuyo plegamiento se ha postulado como el plegamiento ancestral de proteínas, se encontraron inicialmente asociados con trastornos neurodegenerativos fatales. Sin embargo, más de un siglo después de la identificación de estas "proteínas neurotóxicas", hay una lista creciente de proteínas que forman los llamados "amiloides funcionales", que desempeñan una amplia variedad de funciones fisiológicas (Fowler, D.M., et al., Functional amyloid-from bacteria to humans, Trends Biochem Sci (2007) 32 (5): 217-24). Entre los múltiples amiloides funcionales descritos, la formación de amiloide por la proteína de unión a elemento de poliadenilación citoplásmica neuronal (CPEB) es de gran interés debido a que el sistema nervioso es particularmente susceptible a las enfermedades amiloides, algunas de las cuales conducen a déficit cognitivo, tales como la enfermedad de Alzheimer, Parkinson y Hungtinton. La familia de proteínas CPEB regula la traducción de ARNm inactivos y algunos miembros de la familia están involucrados en la plasticidad sináptica y la memoria a largo plazo. Los CPEBs mejor caracterizados son los de Aplysia (ApCPEB) y Drosophila (Orb2). En los ratones una isoforma con una región terminal con alto contenido en glutamina-asparagina (Q / N) se ha relacionado con consolidación de la memoria (mCPEB3), mientras que en los seres humanos, aunque se han descrito isoformas de CPEB, la isoforma con un terminal rico en Q / N asociada a la memoria a largo plazo aún no ha sido identificada.

En Aplysia, las isoformas de CPEB comparten una región C-terminal catalítica común (dominio de unión a ARN), pero sólo la isoforma específica neuronal (ApCPEB) tiene un dominio N-terminal rico en Q / N (48,1% Q N, con una alta flexibilidad conformacional predicha mediante computación que se asemeja a los dominios de priones de levadura (PLD, del inglés, prion-like domain)). De hecho, ApCPEB sufre una transición a un estado conformacional con láminap, similar a los encontrados en otras proteínas priónicas similares. En las neuronas sensoriales, el neurotransmisor serotonina controla el interruptor de prión entre la forma monomérica inactiva y el estado oligomérico (prión autosostenible), importante para el aumento en la fuerza sináptica inducido por serotonina. Basándose en estos resultados se postuló que el interruptor a su forma oligomérica (el estado prión) contribuye al mantenimiento a largo plazo de los cambios sinápticos específicos, proporcionando un mecanismo molecular para la persistencia de la memoria (Si K, Lindquist S, Kandel eR. A neuronal isoform of the Aplysia CPEB has prion-like properties. Cell. 2003;115(7):879-91).

El ortólogo de CPEB en Drosophila, Orb2, tiene dos isoformas estructuralmente similares a la isoforma neuronal de ApCPEB: Orb2A y Orb2B. Ambas formas se expresan en el cerebro de la mosca y son necesarias para la consolidación de memoria a largo plazo. Una de las isoformas de Orb2, Orb2A, es poco abundante y su disponibilidad es controlada por fosforilación. Esta isoforma tiene un segmento de 8 residuos de aminoácidos anterior al N-terminal del PLD, que es crítico para la eficiencia, así como la naturaleza de los oligómeros de tipo amiloide formados (Tomita K, et al. Structure-activity relationship study on polyglutamine binding peptide QBP1. Bioorg Med Chem.

2009;17(3):1259-63.) Orb2B, la isoforma más larga (con una región de 162 residuos que preceden al PLD), parece actuar como un CPEB canónico que regula la traducción local de proteínas a través de su dominio de unión al ARN. El PLD de Orb2 (excluyendo los residuos iniciales en el N-terminal, 8 o 162 de Orb2A y Orb2B, respectivamente) tiene un bajo contenido de Q / N en comparación con el ApCPEB (23,5% frente a 48,1%), que funciona independientemente de su dominio de unión a ARN para la memoria a largo plazo, y sus mutaciones previenen la consolidación de la memoria (Keleman K, et al. Function of the Drosophila CPEB protein Orb2 in long-term courtship memory. Nat Neurosci. 2007;10(12):1587-93; Majumdar A et al. Critical role of amyloid-like oligomers of Drosophila Orb2 in the persistence of memory. Cell. 2012;148(3):515-29).

En ciertos casos podría ser útil evitar la consolidación de la memoria o incluso eliminarla una vez que se ha consolidado, por ejemplo, en caso de trastorno de estrés postraumático (TEPT). TEPT es reconocido como un trastorno de ansiedad que se desarrolla después de la exposición a un evento extremadamente traumático, se desarrolla después de una experiencia aterrorizante que involucra daño físico o la amenaza de daño físico. Las personas que tienen TEPT pueden sentirse estresadas o asustadas incluso cuando ya no están en presencia de peligros recurrentes. El diagnóstico del TEPT se hace cuando los siguientes síntomas centrales siguen la exposición al trauma: el evento traumático es re-experimentado persistentemente (a través de pensamientos intrusivos, sueños, flashbacks, o estímulos internos y externos); hay evitación persistente de evidencia asociada con el trauma psicológico 0 aislamiento; y hay excitación fisiológica generalizada que no estaba presente antes del trauma. Hoy en día no hay un método efectivo, ya sea para prevenir o eliminar los malos recuerdos asociados con el TEPT o con otras malas experiencias.

Se ha descrito un método para borrar la memoria utilizando inhibidores de la desacetilación de histonas (Graff, J. et al. 2014. Epigenetic priming of memory updating during reconsolidation to attenuate remote fear memories. Cell 156 (1-2):261-276), pero este enfoque no es útil en el bloqueo de consolidación de la memoria.

Hay una necesidad urgente de encontrar un método eficaz para ayudar a las personas con TEPT o trastornos relacionados bloqueando la consolidación de memoria después de un estrés traumático y no borrar la memoria de eventos que son anteriores dicho estrés y que constituyen la base de la identidad de las personas.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención describe el uso del núcleo mínimo activo del péptido QBP1 ("fragmento QBP1, QBP1-f" para abreviar a partir de ahora, SEQ ID NO: 1) o variantes del mismo, para la prevención o tratamiento del Trastorno de Estrés Postraumático, el Síndrome del Estrés Agudo y/o el Síndrome de Adaptación General. Los resultados obtenidos pueden ser extrapolados al QBP1 completo (SEQ ID NO: 2).En esta invención una amplia gama de técnicas in vitro (de poblaciones y de molécula individual) e in vivo (cultivos celulares y modelos animales) se han empleado para caracterizar Orb2 tanto estructural como funcionalmente demostrando sus propiedades como priones y amiloides, y para analizar el comportamiento fisiológico asociado a la inhibición de la formación de oligómeros-amiloides de Orb2 por el péptido descrito de la presente invención. Como el experto en la materia sabe, Drosophila es un modelo robusto usado para analizar los procesos de memoria y los resultados obtenidos en la presente invención por lo tanto se puede extrapolar fácilmente a otros animales, en particular a los seres humanos.

Un primer aspecto de la invención se refiere a una composición que comprende una secuencia de amino ácidos que consiste en un péptido con al menos un 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1 (WKWWPGIF), o que consiste en SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, para su uso en la prevención o tratamiento del Trastorno de Estrés Postraumático (TEPT), el Síndrome del Estrés Agudo (SEA) y/o el Síndrome de Adaptación General (GAS)

Por lo tanto, la presente invención también se refiere al uso de un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos con al menos un 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1 (WkWWp G iF), o que consiste en SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, para la fabricación de un medicamento para la prevención o tratamiento de TEPT, SEA y/o GAS.

La secuencia de aminoácidos se describe en el primer aspecto de la presente invención y puede ser de cualquier longitud, preferiblemente entre 2 y 50 amino ácidos, más preferiblemente entre 2 y 30 aminoácidos, más preferiblemente entre 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 aminoácidos. El término "identidad", como se usa aquí, se refiere al porcentaje de residuos de aminoácidos idénticos entre dos péptidos cuando se comparan. Los métodos de comparación de secuencias son conocidos en la técnica, e incluyen, pero no se limitan a, el BLASTP o BLASTN, y el programa FASTA ClustalW. Podemos considerar que los porcentajes de identidad de péptidos de al menos 70% mantienen las mismas propiedades de dicho polipéptido.

El porcentaje de identidad en la presente invención es de al menos 70%; por lo tanto, puede ser 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100%.

De ahora en adelante en la presente descripción el péptido con al menos un 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1 se denominará como "péptido de la invención", preferiblemente SEQ ID NO: 1.

En general, los expertos en la técnica apreciarán que las deleciones menores o sustituciones pueden ser hechas a las secuencias de aminoácidos de los péptidos de la presente invención sin afectar indebidamente de manera adversa la actividad de los mismos. Por lo tanto, los péptidos que contienen tales deleciones o sustituciones son un aspecto adicional de la presente invención. En péptidos que contienen sustituciones o reemplazos de aminoácidos, uno o más aminoácidos de una secuencia peptídica pueden sustituirse por uno o más de otros aminoácidos en la que tal sustitución no afecta a la función de esa secuencia. Tales cambios pueden guiarse por similitudes conocidas entre aminoácidos en las características físicas tales como densidad de carga, hidrofobicidad / hidrofilicidad, tamaño y configuración, por lo que los aminoácidos están sustituidos con otros aminoácidos que tengan esencialmente las mismas propiedades funcionales.

Todas las secuencias de péptidos mencionados en este documento se escriben de acuerdo con la convención habitual por el que el aminoácido N-terminal está a la izquierda y el aminoácido C-terminal está a la derecha. Una vez hechos, los cambios pueden ser examinados rutinariamente para determinar sus efectos sobre la función del péptido correspondiente mediante el cribado de procedimientos conocidos por el experto en la materia.

El péptido de la invención puede ser modificado con grupos químicos, por ejemplo, grupos acetilos o amino en cualquiera de sus extremos.

Los péptidos de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica. Utilizando técnicas aceptadas de la síntesis química, el péptido puede ser construido ya sea desde el N-terminal o, más típicamente, el C-terminal utilizando ya sea aminoácidos individuales o péptidos preformados que contienen dos o más residuos de aminoácidos.

Técnicas particulares para la síntesis de péptidos incluyen métodos clásicos en el que los péptidos de tamaño creciente se aíslan antes de cada adición de un aminoácido o de péptidos preformados; síntesis química clásica de aminoácido por aminoácido; y la síntesis de péptidos en fase sólida en la que el péptido se construye unido a una resina tal como una resina Merrifield. En estos procedimientos sintéticos, grupos en los aminoácidos estarán generalmente en una forma protegida usando grupos protectores estándar tales como t-butoxicarbonilo. Si es necesario, estos grupos protectores se escinden una vez que la síntesis se completa. Métodos de síntesis química, por ejemplo, mediante síntesis de péptidos en fase sólida, síntesis en solución, una combinación de métodos de síntesis en fase sólida y en solución o la síntesis enzimática, son conocidos por el experto en el campo. Los péptidos de la presente invención también se pueden producir mediante procedimientos de ADN recombinante como se conoce en la técnica. Las modificaciones pueden introducirse durante o después de la síntesis del péptido, por ejemplo, una etiqueta usada para la purificación del péptido, una etiqueta de purificación.

El término "etiqueta de purificación" o "etiqueta de afinidad" tal como se utiliza aquí, se refiere a una secuencia de aminoácidos que se ha incorporado (generalmente, mediante ingeniería genética) a una proteína o péptido para facilitar la purificación (por ejemplo, en cromatografía de afinidad). Etiquetas de purificación conocidos en la técnica anterior son, por ejemplo, pero no limitado a, el péptido de unión a calmodulina (CBP), la enzima glutatión-S-transferasa (GST) o residuos de histidina (HIS-tag).

En la presente memoria los términos "secuencia de aminoácidos", "polipéptido", "péptido" y "oligopéptido" se utilizan indistintamente.

En la presente descripción "inhibición de la consolidación de memoria" es el bloqueo de la creación a largo plazo de recuerdos. La inhibición se realiza preferiblemente antes de la consolidación de memoria, aunque podría hacerse en un momento posterior (usando un protocolo de reconsolidación de memoria). Esos términos ("consolidación de memoria" y "establecimiento a largo plazo de recuerdos") son bien conocidos por el experto en la materia (véase, por ejemplo, Bailey CH, et al. The persistence of long-term memory: a molecular approach to self-sustaining changes in learning-induced synaptic growth. Neuron. 2004 Sep 30;44(1):49-57).

Una realización preferida de la descripción se refiere a la composición para su uso en la inhibición de la consolidación de memoria, más preferiblemente cuando la inhibición de la consolidación de la memoria se realiza después de un evento traumático e incluso más preferentemente, antes de la consolidación de memoria. Por lo tanto, el péptido de la invención es útil para prevenir o tratar el Trastorno de Estrés Postraumático.

El Trastorno de Estrés Postraumático (TEPT) es una enfermedad desarrollada después de una experiencia aterrorizante que involucra daño físico o la amenaza de daño físico. El término trastorno de estrés traumático es un término bien conocido para el experto en la materia (véase, por ejemplo, Vieweg WV, et al. Posttraumatic stress disorder: clinical features, pathophysiology, and treatment. Am J Med. 2006 May;119(5):383-90). Trastornos relacionados con el TEPT son el trastorno de estrés agudo y el síndrome de adaptación general, también conocidos por el experto en la materia.

Los ejemplos no limitantes de eventos traumáticos (o trauma) incluyen el combate militar, los incidentes terroristas, asalto físico, asalto sexual, los accidentes de vehículos de motor, y los desastres naturales.

Los síntomas del TEPT pueden referirse, por ejemplo, pero no limitado a, recuerdos recurrentes y traumas intrusivos, sueños recurrentes y angustiantes del evento traumático que aportan la sensación de que el acontecimiento traumático está ocurriendo, angustia cuando se expone a los recuerdos del trauma, reactividad fisiológica cuando expuestos a los recuerdos del trauma, esfuerzos para evitar pensamientos o sentimientos asociados con el trauma, esfuerzos para evitar actividades o situaciones, incapacidad para recordar el trauma o aspectos del trauma, sensación de desapego o distanciamiento de los demás, rango afectivo restringido, sentido de un futuro limitado, ansiedad social, ansiedad con un ambiente desconocido, dificultad para conciliar o mantener el sueño, irritabilidad o ataques de ira, dificultad para concentrarse, hiper-vigilancia, problemas con la percepción del dolor, tolerancia al dolor y respuesta de sobresalto exagerada. En ciertas realizaciones, estímulos potencialmente amenazantes pueden causar hiper-excitación o ansiedad. En ciertas realizaciones, la reactividad fisiológica se manifiesta en al menos; respiración anormal, frecuencia cardiaca de ritmo anormal, presión arterial anormal, función anormal de un sentido especial, y la función anormal del órgano sensorial. En ciertas realizaciones, un rango de efectos restringidos se caracteriza por intensidad de los sentimientos o exhibición de sentimientos disminuida o restringido y el sentido de un futuro limitado puede manifestarse en pensar que uno no va a tener una carrera, matrimonio, hijos o una vida normal. En ciertas realizaciones, los niños y adolescentes pueden tener síntomas de TEPT, como, por ejemplo y sin limitación, comportamiento desorganizado o agitado, juegos repetitivos que expresa aspectos del trauma, sueños terroríficos que carecen de contenido irreconocible, y el trauma específico de recreación. En ciertas realizaciones, un síntoma puede ser el estrés asociado con la recuperación de la memoria.

En ciertas realizaciones, el TEPT se caracteriza por tres grupos de síntomas: re- experimentación / intrusión, evitación / entumecimiento, y la hiper-excitación. Tal como se utiliza aquí, el término "grupo de síntomas" se refiere a un conjunto de signos, síntomas, o un conjunto de signos y síntomas que se agrupan juntos debido a su relación entre sí o su ocurrencia simultánea.

Tal como se utiliza aquí, el término "re-experimentar / intrusión" se refiere a al menos uno de los recuerdos recurrentes e intrusivos del trauma, sueños recurrentes y angustiantes del evento traumático, actuar o sentir como si el evento traumático estuviese ocurriendo, angustia cuando se expone a un recordatorio del trauma y reactividad fisiológica cuando estamos expuestos a los recuerdos del trauma. En ciertas realizaciones, la reactividad fisiológica se manifiesta en al menos una de las siguientes características; respiración anormal, frecuencia cardiaca de ritmo anormal, presión arterial anormal, función anormal de un sentido especial, y la función anormal de un órgano sensorial.

Tal como se utiliza aquí, el término "evitación / adormecer" se refiere al menos a uno de los esfuerzos para evitar pensamientos o sentimientos asociados con el trauma, incapacidad para recordar aspectos del trauma, notablemente disminuido el interés en actividades significativas, sentimientos de desapego o enajenación de los demás, rango afectivo restringido, y sentido de un futuro limitado. El rango de efectos restringidos caracterizados por la intensidad de los sentimientos o de visualización de sentimientos puede estar disminuido o restringido. Una sensación de un futuro limitado puede manifestarse al pensar que uno no va a tener una carrera, matrimonio, hijos, o una esperanza de vida normal. La evitación / embotamiento también puede manifestarse en la ansiedad social y la ansiedad con un ambiente desconocido. Tal como se utiliza aquí, el término "hiper-excitación" se refiere al menos a uno de los siguientes efectos; la dificultad para conciliar o mantener el sueño, irritabilidad o ataques de ira, dificultad para concentrarse, hiper vigilancia, y respuesta de sobresalto exagerada. Estímulos potencialmente amenazantes pueden causar hiper-excitación o ansiedad.

Los pacientes diagnosticados con TEPT pueden sentirse "en guardia", inquieta e intensamente ansiosos. Depresión, ansiedad, ataques de pánico, y trastorno bipolar a menudo se asocian con el TEPT. El alcohol y el abuso de drogas también son comunes. En ciertas realizaciones, los trastornos co-mórbidos con TEPT pueden incluir, por ejemplo, pero sin limitación, depresión, abuso de alcohol y drogas.

En una realización particular la composición previene al menos un signo o síntoma del TEPT en el paciente, en el que el signo o síntoma se selecciona del comportamiento desorganizado o agitado, problemas con la percepción del dolor y la tolerancia al dolor, dolor de cabeza, difícil conciliar el sueño o mantenerse dormido, juego repetitivo que expresa los aspectos del trauma, sueños terroríficos que carecen de contenido irreconocible, y el trauma específico de recreación.

El término "prevención", tal como se entiende en la presente invención, es evitar o reducir la consolidación de memoria, preferiblemente de recuerdos asociados con un evento traumático, TEPT o más preferiblemente al menos uno de los síntomas de TEPT. El término "tratamiento" implica borrar memorias asociadas a un evento traumático, TEPT o preferiblemente con al menos un síntoma de TEPT, mediante el uso de un protocolo de reconsolidación de memoria. (Véase, por ejemplo, Graff, J. et al. 2014. Epigenetic priming of memory updating during reconsolidation to attenuate remote fear memories. Cell 156 (1-2):261-276). Por ejemplo, un protocolo de re-consolidación de memoria incluye psicoterapia.

El término "tratamiento" tal como se entiende en la presente invención, es curar, aliviar, mitigar, remediar o reducir el TEPT o por lo menos un síntoma de TEPT.

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a la composición que consiste en la secuencia de nucleótidos que codifica para la secuencia de aminoácidos descrita en el primer aspecto de la presente invención para su uso en la prevención o tratamiento del TEPT, SEA y/o GAS. Por lo tanto, la secuencia de nucleótidos que codifica para el péptido de la invención es útil para prevenir o tratar el TEPT o los trastornos relacionados (por ejemplo, trastorno de estrés agudo o el trastorno de adaptación general). De ahora en adelante la secuencia de nucleótidos descrita en el segundo aspecto de la presente invención será nombrado como "la secuencia de nucleótidos de la invención".

En la presente memoria los términos "secuencia de nucleótidos", "polinucleótido", "secuencia de nucleótidos", "ácido nucleico" y "oligonucleótido" se utilizan indistintamente.

Los polinucleótidos de la presente invención pueden tener sustituciones conservadoras, conocidos por el experto en la materia. Las sustituciones conservadoras conducen a los polinucleótidos que codifica el mismo péptido.

El término polinucleótido incluye ADN genómico o ADN de cadena doble o de cadena sencilla, ácido ribonucleico (ARN), cualquier polinucleótido sintético y manipulado genéticamente, y ambas hebras; sentido y antisentido. Esto incluye moléculas de cadena simple y de cadena doble, como los híbridos ADN-ADN, ADN-ARN y ARN-ARN.

La secuencia de nucleótidos de la invención puede obtenerse artificialmente por la selección métodos de clonación convencional y ampliamente conocido en la técnica anterior.

La secuencia de nucleótidos de la invención, además de la secuencia de codificación, puede tener otros elementos, tales como, pero no limitado, intrones, secuencias no codificantes en los extremos 5 'o 3', sitios de unión a ribosomas, secuencias de estabilización, la detección de células, etc. Estos polinucleótidos también pueden incluir además secuencias de codificación para los aminoácidos adicionales que pueden ser útiles, por ejemplo, pero no limitado, para mejorar la estabilidad del péptido generado a partir de ella o para permitir una mejor purificación del mismo.

El ácido nucleico puede formar parte de un casete de expresión, que comprende el ácido nucleico de la invención unido operativamente a los elementos de control de transcripción y / o traducción.

Las secuencias de polinucleótidos descritos en el segundo aspecto de la presente invención pueden encontrarse formando parte de los vectores que permiten la propagación o la clonación y expresión. Dicho vector puede ser, por ejemplo, un vector de clonación o un vector de expresión o vector recombinante. La clonación de la secuencia de nucleótidos de la invención puede llevarse a cabo utilizando un vector de expresión recombinante o plásmido. Estos vectores comprenden la secuencia de nucleótidos de la invención (o el casete de expresión) y también pueden comprender una serie de secuencias de aminoácidos y dianas para la escisión del péptido de interés por una proteasa. La ventaja de esta estructura es que, una vez producida la proteína de fusión o péptido, y purificada, por ejemplo, pero no limitado a, cromatografía de afinidad, puede ser escindido el péptido de la proteína transportadora de la invención por digestión con una proteasa y re-purificación el péptido de la invención usando el mismo sistema cromatográfico.

El término "vector", como se usa aquí, se refiere a una molécula de ácido nucleico que es capaz de transferir secuencias de ácidos nucleicos contenidas en el mismo a una célula. Ejemplos de vectores recombinantes son de ADN lineal, ADN de plásmido, virus modificados, adenovirus / virus adeno-asociados, vectores virales y retrovirales, etc; todos ampliamente descritos en la literatura y que pueden ser utilizados siguiendo las técnicas estándar de biología molecular o comprados a proveedores. Entre los vectores virales más comúnmente utilizados para la introducción de genes en células de mamíferos se encuntran vectores tales como vectores de poxvirus, herpes simplex, adenovirus, vectores adeno-asociados, etc.

Los vectores pueden ser introducidos por cualquier método conocido por el experto en la materia, por ejemplo, pero sin limitar, por transfección, transformación o infección de las células huésped, tales como, pero no limitadas a células de plantas, mamíferos, bacterias, levaduras o células de insecto.

El término "vector de clonación" tal como se utiliza aquí, se refiere a una molécula de ADN en el que se puede integrar un fragmento de ADN, sin pérdida de capacidad de replicación. Ejemplos de vectores de expresión son, sin limitación, plásmidos, cósmidos, ADN de fago o cromosomas artificiales o de levadura.

El término "vector de expresión", como se usa aquí, se refiere a un vector de clonación adecuado para expresar un ácido nucleico que ha sido clonado en él después de haber sido introducido en una célula, llamada célula huésped. Dicho ácido nucleico está generalmente unido operativamente a secuencias de control.

El término "expresión" se refiere al proceso por el cual un polipéptido se sintetiza a partir de un polinucleótido. Incluye la transcripción del polinucleótido en un a Rn mensajero (ARNm) y la traducción de los ARNm en una proteína o polipéptido. La expresión puede tener lugar en una célula huésped.

El término "vector recombinante", como se usa en la presente descripción se refiere a un vector adecuado para la expresión de un ácido nucleico que ha sido clonado en el mismo, de modo que la expresión del péptido está directamente en las células de tejido o de destino. Generalmente dicho vector es un virus, y es producido por la unión de diferentes fragmentos de ácidos nucleicos a partir de diferentes fuentes y cuya expresión da como resultado una partícula viral infecciosa compuesta típicamente de proteína de la cubierta, genoma viral y proteínas asociadas con genoma viral. La expresión en un tejido o célula de interés se logra uniendo operativamente el polinucleótido a secuencias de control específicas preferiblemente dirigidas hacia el tejido o célula donde está destinado; Preferiblemente, tales secuencias de control son potenciadores o promotores. Un vector recombinante típico se selecciona del grupo que consiste de un vector lentiviral, un vector adenoviral y / o un vector de virus adeno-asociado.

Una realización preferida del segundo aspecto de la invención se refiere a la composición para su uso en el que la secuencia de nucleótidos está comprendida en un vector seleccionado de la lista que consiste en: plásmido, bácmido, cromosoma artificial de levadura, cromosoma artificial de bacterias, bacteriófago, cósmido, adenovirus, retrovirus, lentivirus o cualquiera de sus combinaciones.

En la presente invención, los términos "composición", "composición farmacéutica", "fármaco" y "medicamento" se utilizan indistintamente.

El término "composición farmacéutica" aquí se refiere a cualquier sustancia que se usa para la prevención, diagnóstico, alivio, tratamiento o cura de enfermedades en seres humanos o animales. La composición farmacéutica de la invención puede ser utilizado solo o en combinación con otras composiciones farmacéuticas. El término composición farmacéutica y el fármaco se usan de manera intercambiable en esta invención. En el contexto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica o medicamento caracterizado por que comprende el péptido de la invención o el polinucleótido que codifica lo que permite su expresión en el organismo a ser tratado en una cantidad terapéuticamente efectiva, tal que el péptido de la invención realiza su función en el tejido o célula diana.

En una forma de realización preferida del primer y segundo aspecto, la composición para su uso también comprende un excipiente y / o un vehículo farmacéutico aceptable.

El término "excipiente" se refiere a una sustancia que ayuda a la absorción de los elementos de la composición de la invención y activamente estabiliza o ayuda a la preparación de la composición en el sentido de dar consistencia o sabor. Por lo tanto, los portadores pueden tener la función de mantener los ingredientes juntos, como en el caso de almidones, azúcares o celulosas, función de edulcorantes, función como un colorante, función protectora de la composición, tales como para aislar el aire y / o humedad, llenando el papel de un comprimido, cápsula u otra forma de presentación, como es el caso del fosfato de calcio di-básico, función de desintegración para facilitar la disolución de los componentes y su absorción en el intestino, sin excluir otros excipientes que no se mencionan en este párrafo.

El término "portador farmacéutico", se refiere a una sustancia utilizada en la composición farmacéutica o medicamento para diluir cualquier componente de la presente invención incluido en el mismo a un volumen o peso dado. La función de vehículo es facilitar la incorporación de otros elementos, lo que permitirá una mejor dosificación y administración o dar cuerpo y forma a la composición. Cuando la presentación es líquida, el portador farmacológicamente aceptable es el diluyente.

En otra forma de realización preferida de la primera y segundo aspecto, la medicamento para uso comprende también un adyuvante.

Aquí, el término "adyuvante" se refiere a un agente que aumenta el efecto del péptido de la invención cuando se administra conjuntamente a la misma o formando parte de la misma protocolo de tratamiento. Los adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden utilizarse en la composición farmacéutica de la presente invención son los vehículos conocidos por los expertos en la técnica.

En otra forma de realización preferida del primer y segundo aspecto el que el medicamento comprende también otro principio activo, al igual que los medicamentos existentes para el tratamiento de TEPT (medicamentos ansiolíticos, antidepresivos, prazosin, etc.).

Tal como se utiliza aquí, el término "principio activo" ("sustancia activa", "sustancia farmacéuticamente activa", "ingrediente activo" o "ingrediente farmacéuticamente activo") significa cualquier componente que proporciona actividad farmacológica potencial o un efecto diferente en el diagnóstico, cura, mitigación, tratamiento o prevención de enfermedades, o para afectar la estructura o función del cuerpo del hombre o de otros animales.

Los antidepresivos son medicamentos que pueden ayudar a los síntomas de depresión y ansiedad. También pueden ayudar a mejorar los problemas de sueño y la concentración. Por ejemplo, el inhibidor de la recaptación de serotonina (ISRS), medicamentos sertralina (Zoloft) y paroxetina (Paxil ®) están aprobados por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) para el tratamiento del TEPT.

En el caso de los medicamentos contra la ansiedad, estos fármacos también pueden mejorar los sentimientos de ansiedad y el estrés por un corto tiempo para aliviar la ansiedad severa y problemas relacionados. Debido a que estos medicamentos tienen el potencial para el abuso, no son por lo general se toman a largo plazo.

Si los síntomas son el insomnio o pesadillas recurrentes, una droga llamada prazosina (Minipress®) puede ayudar. Aunque no está específicamente aprobada por la FDA para el tratamiento del TEPT, la prazosina puede reducir o suprimir las pesadillas en muchas personas con trastorno de estrés postraumático.

En una realización más preferida del primer y segundo aspecto, la composición para su uso comprende adicionalmente un agente de internalización seleccionado de entre la lista que consiste en: ciclodextrina, poloxámeros, péptidos de unión a receptores de acetilcolina, virus, VLPs (Virus Like Partióles), Cereport® (RMP-7), micelas, liposomas, polietilenglicoladas, PEG-PLA, PEG-PCL, PEG-PHDCA, TAT 47-57 (SEQ ID NO: 3), TAT 48-60 (SEQ ID NO: 4), Antp (penetratina, SEQ ID NO: 5) o Pep-1 (SEQ ID NO: 6).

El término "agente de internalización" se refiere a una molécula capaz de facilitar el paso de un péptido dado a través de la barrera hematoencefálica (BBB) y la membrana plasmática para permitir el acceso al interior de neuronas y / o células gliales. Esta molécula puede estar unida covalentemente o no al péptido de la presente invención. Algunos ejemplos, no limitantes, de agente de internalización pueden ser: ciclodextrina, poloxámeros, los péptidos de unión al receptor de la acetilcolina, VLPs (partículas similares a virus) Cereport® (RMP-7), micelas, liposomas, nanovehículos (incluyendo polietilenglicolades, Pe G-PLA PEG -PCL, PEG-PHd Ca , etc) o péptidos penetrantes de células (CPP) como TAT (por ejemplo TAT 47-57, SEC ID N°: 3, o TAT 48-60, SEQ ID NO: 4), Antp (penetratina, SEQ ID NO: 5) o Pep-1 (SEQ ID NO: 6).

En la presente memoria, "CPP" o "péptido de penetración celular" se refiere a un grupo de péptidos cortos, de menos de 30 aminoácidos, que son capaces de penetrar en la membrana junto con el transporte de carga en el interior de la célula sin producir efectos citolíticos; que son péptidos con carga positiva, características anfipáticas, hidrofobicas, momento helicoidal, o capaz de interactuar con las membranas lipídicas y adoptar una estructura secundaria distinta después de su asociación con lípidos. CPP entra en la célula principalmente por endocitosis o macropinnocitosis mediada por balsas de lípidos. CPP se utilizan como moléculas bioactivas de transporte introducidos en las células; típicamente por un enlace covalente, aunque no covalentes son también posibles.

En otra realización particular, dicha composición farmacéutica para su uso se prepara en forma sólida o suspensión acuosa, en un diluyente farmacéuticamente aceptable.

La composición terapéutica para uso proporcionado por esta invención puede ser administrada por cualquier vía de administración adecuada, por la que dicha composición se formula en la adecuada a la vía elegida de forma de administración farmacéutica.

En una realización más preferida del primer y segundo aspecto, el medicamento para su uso se presenta en una forma adaptada para administración oral, parenteral, intramuscular, intra-arterial, intravenosa, subcutánea, epidural, intradérmica, intra-peritoneal o administración intra-vesicular.

Ya se ha demostrado que la QBP1 puede inhibir la amiloidogénesis de otras proteínas amiloidógenas (pistas de poliQ) en Drosophila cuando se administra por vía oral (Nagai, Y., y otros, Prevention of polyglutamine oligomerization and neurodegeneration by the peptide inhibitor QBP1 in Drosophila, Hum Mol Genet (2003) 12 (11): 1253-9).

En una realización más preferida del primer y segundo aspecto se administra el medicamento para su uso durante 1 a 7 días después del trauma, preferiblemente entre 1 o 2 días, después del trauma.

En una realización más preferida del primer y segundo aspecto, el medicamento para su uso se administra en una dosis terapéuticamente eficaz.

En la presente invención el término "dosis terapéuticamente eficaz" (o cantidad terapéuticamente eficaz") se refiere a la cantidad del agente o compuesto capaz de producir un efecto deseado (en la presente invención la prevención o tratamiento del TEPT, SEA y/o GAS) y generalmente se determina por características de los compuestos, la vía y frecuencia de administración de la misma forma y de otros factores, incluyendo la edad, estado del paciente y de la gravedad de la alteración o trastorno.

En una realización más preferida del primer y segundo aspecto, la prevención o tratamiento se realiza en un ser humano, hombre o mujer de cualquier edad.

Animales vertebrados no humanos (uso veterinario) también pueden ser objeto de la inhibición de la consolidación de memoria. Por ejemplo, los caballos y los perros se utilizan a menudo en operaciones militares o policiales, así como en otros casos en los que pueden quedar expuestos a condiciones traumáticas. La terapia de la invención, por tanto, puede ser de utilidad para restaurar el rendimiento en dichos animales.

En una realización más preferida del primer y segundo aspecto, la composición se usa no como profiláctico, sino como un agente terapéutico para borrar selectivamente recuerdos después del desarrollo del TEPT (después del trauma), aprovechando el fenómeno de la re-consolidación de memoria en un ser humano (usando psicoterapia como coadyuvante). "Reconsolidación de memoria", un término conocido por el experto en el campo, es un fenómeno de recuperación y edición de memorias. En los seres humanos, el protocolo de re-consolidación de memoria se puede hacer con la psicoterapia como un co-adyuvante.

El bloqueo de consolidación de memoria por QBP1 podría ser una estrategia terapéutica potencial para prevenir o tratar el TEPT u otras enfermedades relacionadas con la memoria (trastorno de estrés agudo, síndrome de adaptación general)

La presente descripción también se refiere a un método para la inhibición de consolidación de memoria, por lo tanto, para la prevención o el tratamiento de TEPT u otras enfermedades relacionadas con la memoria (trastorno de estrés agudo o el síndrome de adaptación general), que comprende la administración de una dosis terapéuticamente de una composición que comprende una secuencia de aminoácidos que comprende un péptido con al menos un 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1, o su análogo estructural, preferiblemente en un ser humano. Preferiblemente, la secuencia comprende el péptido de acuerdo con la SEQ ID NO: 1, más preferiblemente la secuencia consiste en el péptido de acuerdo con la SEQ ID NO: 1. En otra realización preferida, la composición comprende una secuencia de aminoácidos que comprende el péptido de al menos 70% de identidad con la SEQ ID NO: 2; más preferiblemente, comprende la SEQ péptido ID NO: 2; y en una realización preferida, el aminoácido es la SEQ ID NO: 2. Este método también puede comprender la administración de otro principio activo, al igual que los medicamentos existentes para el tratamiento de TEPT (medicamentos anti-ansiedad, tales como Zoloft® y paroxetina (Paxil®); antidepresivos, por ejemplo medicamentos como el inhibidor de la recaptación de serotonina (ISRS) sertralina (Zoloft) y paroxetina (Paxil ®), o prazosina, (Minipress®)). En este método también se puede utilizar la secuencia de nucleótidos que codifica para la secuencia de aminoácidos del péptido de la invención. En este método también se puede utilizar un agente de internalización para la entrega del péptido o de nucleótidos de la invención. En este método, el péptido de la invención se puede administrar por vía oral, parental, intra-muscular, intra-peritoneal, intra-arterial, intra-venosa, subcutánea, epidural, intra-dérmica, intra-peritoneal o intra-vesicular. La composición se puede administrar durante 1-7 días, preferiblemente entre 1-2 días después del trauma. Este método también puede comprender la administración de un protocolo de reconsolidación de memoria, por ejemplo, utilizando la psicoterapia. El tratamiento puede retrasar la progresión, prevenir, evitar la recaída o mejorar el TEPT, o uno o más síntomas del trastorno.

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por uno de los expertos ordinarios en el arte al que pertenece esta invención. A lo largo de la descripción y afirma la palabra "comprenden" y sus variaciones no tienen por objeto excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. El Los siguientes ejemplos, dibujos y lista de secuencias se proporcionan a título ilustrativo y no pretenden ser limitativos de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Fig. 1. El fragmento de QBP1 (QBP1-f) interfiere con la formación del amiloide Orb2 in vitro . (A) Trazas calorimétricas representativas para la interacción de Orb2A con los péptidos QBP1-f y SCR. Las curvas 1 y 2 corresponden al calor liberado después de la inyección de Orb2A en la célula de ITC cargada con un exceso de QBP1 -f o SCR, respectivamente, mientras que las trazas 3, 4 y 5 corresponden a las diluciones Orb2A, QBP1 y SCR, respectivamente. (B) QBP1-f, pero no SCR, reduce drásticamente la turbidez a 405 nm de Orb2A PLD en el tiempo. (C) QBP1-f reduce la cantidad de amiloide formado como se muestra mediante la medición de rojo Congo unido a Orb2A PLD. Los datos se representan como la media ± SEM: * p <0,05 y *** p <0,001 (One-way ANOVA y post test de Tukey). (D) Espectroscopia en el ultravioleta lejano de CD en ausencia o presencia de QBP1 o SCR indica que QBP1 bloquea precipitación de Orb2A PLD con el tiempo, pero SCR no lo hace. (E) Micrografías electrónicas representativas muestran que los oligómeros (asteriscos) y las fibras amiloides (flechas) de Orb2A PLD se redujeron drásticamente cuando se incubaron con QBP1 (izquierda), pero no con SCR (derecha). Las barras de escala: 1 pm. (F) El polimorfismo conformacional de Orb2A PLD está fuertemente disminuido en presencia de un exceso molar 1:10 de QBP1-f, lo que disminuye la frecuencia de confórmeros M con respecto a los NM (QBP1-f, n = 112 y SCR, n = 101). ALc: incremento de la longitud de contorno. M: evento mecanoestable, NM: evento no mecanostable.

Fig. 2. Análisis adicional de AFM-SMFS de Orb2A PLD en presencia de QBP1-f (A) El péptido QBP1-f reduce el número de picos de fuerza por molécula, lo que sugiere que disminuye la propensión de Orb2A PLD para adoptar estructuras ¡ (los números en la inserción son el número promedio de picos de fuerza por molécula de Orb2A). (B) Registros incompletos de eventos putativos M disminuyen en presencia del péptido inhibidor QBP1, lo que sugiere la formación de menos, y más débiles, confórmeros M. (C y D) No se detectaron estructuras preferenciales al estirar pFS-2 Orb2A PLD en presencia de QBP1-f ((C) o SCR (D). (QBP1: QBP1-f).

Fig.3. Expresión de QBP1-f interfiere con supresión de memoria de cortejo de los machos a largo plazo. El índice de cortejo de moscas macho que fueron expuestos a una hembra receptiva se comparó con el de machos inexpertos (A, B). Expresión pan-neuronal de QBP1-f usando el controlador Elav-Gal4 interfiere con la memoria a largo plazo, pero no con la memoria a corto plazo (C), mientras que el péptido control SCR no tiene ningún efecto (D). Los controles genéticos para cada grupo se ensayaron simultáneamente y se indica el número de moscas utilizadas en cada grupo. QBP1 / : QBP1 heterocigóticos QBP1; SCR / : heterocigotos SCR (desordenada, del término en inglés scrambled). UAS-QBP1: módulo que lleva QBP1; UAS-SCR: módulo que lleva sCr .

Fig.4. QBP1-f interfiere con la consolidación de la memoria mediada por Orb2 in vivo. Expresión pan-neuronal de QBP1-f altera la supresión de memoria de cortejo de los machos a largo plazo, mientras que no interfiere con la memoria a corto plazo. Los datos se representan como la media ± SEM. Asumimos significación estadística a * p <0,05 (One-way ANOVA). n = 16, 15, 25, 22, 14, 15, 28, 27 de izquierda a derecha. (QBP1: QBP1-f).

EJEMPLOS

Ejemplo 1. QBP1 bloquea la amiloidogénesis y consolidación de memoria

La similitud conformacional pero el distinto comportamiento celular incitó a los inventores a examinar más a fondo el paisaje conformacional de Orb2 con herramientas adicionales. Dado que en un trabajo anterior (Hervas R, et al. Common features at the start of the neurodegeneration cascade. PLoS Biol. 2012;10(5):e1001335) encontramos que el péptido QBP1 (un conocido inhibidor de amiloides inducidos por expansiones de HttQ) era eficaz también para bloquear la amiloidogénesis de otras proteínas amiloidogénicas, incluyendo a-sinucleína (proteína causal de Parkinson) y Sup35NM (modelo de prión de levadura), pero no otros (por ejemplo, p-amiloide) nos preguntamos a qué clase pertenecería Orb2 / CPEB. Además de estas incertidumbres, no era en absoluto evidente que un agente antiamiloidogénico debiese inhibir la amiloidogénesis de Orb2 y, a su vez, la consolidación de memoria ya que los anteriores intentos de hacerlo con otros agentes anti-amiloidogénicos han fracasado (Kausik Si, conocido experto en el presente campo, comunicación personal). De hecho, se pensaba que este péptido debía ser bastante específico para tractos de polyglutaminas expandidos (como su propio nombre indica). Por lo tanto, se analizó su posible efecto anti-amiloidogénico de QBP1 frente al amilode Orb2.

QBP1 es un péptido hidrófobo, identificado por su capacidad para unirse a proteínas que contienen poliglutaminas expandidas en estado monomérico, bloqueando la transición conformacional crítica de esta especie a un confórmero p, suprimiendo la oligomerización, fibrilogénesis, así como la citotoxicidad y la neurodegeneración asociada (Nagai, Y., et al., A toxic monomeric conformer of the polyglutamine protein, Nature structural & molecular biology (2007) 14 (4): 332-40, Popiel, H.A., et al., Protein transduction domain-mediated delivery of QBP1 suppresses polyglutamineinduced neurodegeneration in vivo, Mol Ther (2007) 15 (2): 303-9, ). QBP1 también inhibe la amiloidogénesis (polimorfismo conformacional, oligomerización, y fibrilogénesis) en a-sinucleína y Sup35 pero no en p-amiloide (Hervas, R., et al., Common features at the start of the neurodegeneration cascade, PLoS biology (2012) 10 (5): e1001335) o Tau (Fernández-Ramírez MC y Carrión-Vázquez M, comunicación personal). Por lo tanto, QBP1 actúa como un agente anti-amiloidogénico polivalente en varios amiloides (pero no todos ellos, y no hay manera en el estado de la técnica para predecir este comportamiento para una nuevo amiloide) y por lo tanto, el potencial efecto inhibidor del núcleo activo mínimo de QBP1 (o fragmento QBP1, o QBP1-f), Ac-WKWWPGIF-NH2 (SEQ ID NO: 1) (Tomita, K., et al., Structure-activity relationship study on polyglutamine binding peptide QBP1, Bioorg Med Chem (2009) 17 (3): 1259-63), se examinó en la formación de amiloide de Orb2. Los resultados obtenidos aquí con el QBP1-f se pueden extrapolar a QBP1 y CPEBs (ortólogos de Orb2) de mamíferos, como los humanos. Además, aportan pruebas directas sobre la relación mecanística entre la amiloidogénesis de Orb2 y la consolidación de memoria.

Calorimetría de titulación isotérmica (ITC) reveló que QBP1-f interacciona físicamente con Orb2A, y la formación del complejo, un evento lento, fue de naturaleza exotérmica (Fig. 1a). En condiciones similares, una versión con misma composición de aminoácidos, pero distinta secuencia de QBP1-f, Se Q ID NO: 7 (SCR, AC-WPIWKGWF-NH2,), mostró una interacción marginal, sirviendo así como un control negativo en experimentos posteriores (Fig. 1a).

La incubación con QBP1-f inhibió la amiloidogénesis de Orb2A PLD mientras que el SCR no lo hizo, tal como se comprueba por turbidimetría y el ensayo de unión de rojo Congo (Fig. 1b, c). Análisis mediante epectroscopía en el ultravioleta lejano de CD reveló que QBP1-f, pero no SCR, suprime los procesos de oligomerización y la disminución de la pérdida de señal debido a la agregación y precipitación de Orb2 (Fig. 1d). Además, mediante TEM (Microscopía Electrónica de Transmisión) se mostró una reducción dramática en la formación de oligómeros y fibras en presencia de QBP1-f, pero no SCR (Fig. 1e). Finalmente, el análisis de doble ciego de experimentos de molécula individual, SMFS, mostró una reducción drástica en la formación de confórmeros M (desde 37,7% a 16,1%), desplazando el equilibrio NM / M por QBP1-f hacia confórmeros NM, mientras que el péptido control SCR no tuvo ningún efecto en esta transición conformacional (Fig. 1f). Curiosamente, con QBP1-f hubo menos estructuras formadas por molécula (Fig. 2a) y menos eventos putativos M (Fig. 2b), este último muestra una disminución en proporción similar al caso de eventos M genuinos (identificados). La falta de asociación entre ALc y F también se encontró en presencia de QBP1-f (Fig. 2c), lo que indica que no hay formación de estructuras preferenciales. Tomados en conjunto, estos resultados indican que QBP1-f interfiere in vitro con la formación de amiloide de Orb2 y sugiere que Orb2 y amiloides patológicos adoptan también confórmeros similares al principio de la amiloidogénesis que son reconocidos y bloqueados por QBP1-f.

Dado que QBP1-f inhibe la transición de Orb2A monomérico para alcanzar las conformaciones que conducen a la formación de amiloide, se estudió las consecuencias fisiológicas de QBP1 en la formación de la memoria en Drosophila melanogaster. Para este fin, se utilizó el paradigma de supresión de memoria de cortejo de machos como ensayo funcional. Un varón virgen expuesto repetidamente a una hembra poco receptiva aprende a suprimir el cortejo hacia las hembras no receptivas. Expresión de QBP1-f o el control SCR en el sistema nervioso no afectó desarrollo de la mosca aunque el comportamiento normal de cortejo disminuyó ligeramente (Fig. 3). Después del entrenamiento, las moscas que expresan el péptido (Elav-Gal4: UAS-QBP1 o s Cr ) y los controles genéticos (Elav-Gal4 y UAS-QBP1 o UAS-SCR) (Brand AH, Perrimon N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 1993;118(2):401-15) presentaban una supresión de cortejo similares inmediatamente después del entrenamiento, lo que sugiere que la expresión de los péptidos no interfiere con la memoria a corto plazo. Sin embargo, cuando se mide después de 24 horas, machos Elav-Gal4: UAS-QBP1 muestran un índice de cortejo elevado, lo que indica una pérdida de memoria a largo plazo, en comparación con el control (moscas Elav-Gal4: UAS-SCR) (Fig. 4).

Este conjunto de resultados sugiere que la formación de amiloide de Orb2A sigue una ruta similar a la de los amiloides patológicos, y que los reactivos anti-amiloidogénicos, tales como péptido QBP1, pueden interferir con los procesos de consolidación de memoria.

Igualmente, experimentos in vitro con QBP1 se han hecho para la isoforma neuronal de CPEB de Aplysia (ApCPEB) con resultados similares (Hervás y Carrión-Vázquez, comunicación personal). Esto hace que nuestras conclusiones sean más generales para la familia CPEB / Orb2, apoyando aún más nuestra hipótesis de que QBP1 también inhibe la consolidación de memoria en mamíferos (ratones y seres humanos), sobre todo teniendo en cuenta la alta divergencia existente entre Orb2 y ApCPEB, que es comparable a la que existe entre ellas y los de los mamíferos.

Teniendo en cuenta de que el porcentaje de identidad entre las especies de CPEB / Orb2 son las siguientes: ApCPEB y Orb2A: 28,73%; Orb2A y el ratón CPEB3 58.92%; y CPEB3 de ratón y CPEB 97,84% humano; los resultados obtenidos en la presente invención se pueden extrapolar a los humanos.

MÉTODOS

Información detallada acerca de los experimentos de AFM-SMFS, CD, turbidimetría, ensayo de unión de rojo Congo y TEM se puede encontrar en (Hervas, R., et al., Common features at the start of the neurodegeneration cascade, PLoS biology (2012) 10 (5): e1001335). Los detalles sobre la preparación de las muestras de poliproteína, utilizando un nuevo vector descrito recientemente por nuestro grupo (pFS-2), se pueden encontrar en (Hervas, R., et al., Common features at the start of the neurodegeneration cascade, PLoS biology (2012) 10 (5): e1001335, Oroz, J., et al., Unequivocal single-molecule force spectroscopy of proteins by AFM using pFS vectors, Biophys J (2012) 102 (3): 682­ 90).

Tampones, condiciones de tiempo y de almacenamiento, y las concentraciones de proteínas / péptidos utilizados en las técnicas antes mencionadas fueron las siguientes:

-AFM-SMFS: Los experimentos se realizaron a concentraciones de poliproteína de 2-3 pM en Tris-HCl 10 mM pH 7,5 a temperatura ambiente. Las proteínas se incubaron a 4 ° C entre diferentes sesiones y se usaron cubreobjetos funcionalizados con NTA-Ni2+. Para los experimentos en presencia de los péptidos QBP1 y SCR, se usó una concentración de 20 pM de péptido disuelto en DMSO. Las muestras se incubaron durante la noche con el péptido a 4°C antes de la medición.

-CD: Para los espectros de CD en el UV lejano se usó una concentración de proteína de 2-5 pM en 5 mM NaH2PO4, con 0,02% NaN3, pH 6,0. El QBP1 o SCR (cuando se usaron) estaban cinco veces en exceso molar con respecto a las proteínas (a unas concentraciones finales de 10 a 25 pM, con una concentración final (v / v) de DMSO por debajo del 0,01%). Después de registrar el primer espectro (hora 0), la proteína se incubó a 37 ° C sin agitación y espectros adicionales se registraron a los tiempos indicados.

-Turbidimetría: Las muestras de proteína fueron utilizadas a 10 pM en PBS 0,02% NaN3, pH 7,0 para todos los experimentos cinéticos. Las muestras se incubaron a 37°C sin agitación. Los péptidos SCR y QBP1 se usaron a 50 pM.

-Ensayo de unión a rojo Congo: Las muestras se incubaron durante 7 días a 37°C con 0,02% de NaN3 y sin agitación antes de realizar las mediciones. Las muestras de proteína (10 pM) se dializaron en PBS pH 7,0 para los experimentos. Los péptidos SCR y QBP1 se usaron a 50 pM.

-TEM: Las muestras de proteína (10 pM) se dializaron en PBS pH 7,0 para todas las medidas de TEM. Las imágenes fueron tomadas después de 7 días de incubación a 37°C en presencia de 0,02% NaN3 sin agitación. Los péptidos SCR y QBP1 se usaron a 50 pM.

-ITC: Los experimentos de interacción de Orb2A con el núcleo mínimo activo de los péptidos QBP1 y SCR (Tomita, K., et al., Structure-activity relationship study on polyglutamine binding peptide QBP1, Bioorg Med Chem (2009) 17 (3): 1259-63) se llevaron a cabo en un microcalorímetro VP-ITC a 25°C. Las proteínas se equilibraron en PBS, pH 7,4, mediante cromatografía de filtración en gel y el tampón de equilibrio se usó para preparar las soluciones de péptidos. La unión o interacción de proteína / péptido se ensayó por inyecciones sucesivas de muestra de proteína (10 a 25 pl cada uno) en la célula de reacción cargada con péptido a una alta relación molar [péptido] / [proteína]. El calor de reacción aparente para cada inyección se obtuvo por integración del área del pico. Los calores desarrollados por diluciones de proteína o péptidos se determinaron en ensayos separados, en las condiciones utilizadas para los

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos con al menos un 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1, o que consiste en SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2, para su uso en la prevención o tratamiento del Trastorno de Estrés Postraumático, el Síndrome del Estrés Agudo y/o el Síndrome de Adaptación General.

2. Una composición que comprende la secuencia de nucleótidos que codifica para la secuencia de aminoácidos descrita en la reivindicación 1 para uso en la prevención o tratamiento del Trastorno de Estrés Postraumático, el Síndrome del Estrés Agudo y/o el Síndrome de Adaptación General.

3. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 2 que comprende adicionalmente un excipiente y/o un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o un adyuvante, o cualquiera de sus combinaciones.

4. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende adicionalmente un agente de internalización seleccionado de entre la lista que consiste en: ciclodextrina, poloxámeros, péptidos de unión a receptores de acetilcolina, virus, VLPs (Virus Like Partióles), Cereport® (RMP-7), micelas, liposomas, polietilenglicoladas, PEG-PLA, PEG-PCL, PEG-PHDCA, TAT 47-57 (SEQ ID NO: 3), TAT 48-60 (SEQ ID NO: 4), Antp (penetratina, SEQ ID NO: 5) o Pep-1 (SEQ ID NO: 6).

5. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que se presenta en una forma adaptada para administración oral, parenteral, intra-muscular, intra-peritoneal, intra-arterial, intra-venosa, subcutánea, epidural, intra-peritoneal, intra-dérmica o administración intravesicular.

6. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la composición se administra preferiblemente durante 1 a 7 días después del trauma, preferiblemente entre 1 a 2 días después del trauma.

7. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la prevención o tratamiento se realiza en un ser humano.

8. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la prevención se realiza antes de la consolidación de la memoria.

9. La composición para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 en el que el tratamiento se realiza después de la consolidación de la memoria usando un protocolo de re-consolidación de memoria.