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ES2857251T3 - Compuestos polifluorados que actúan como inhibidores de la tirosina cinasa de bruton - Google Patents

Compuestos polifluorados que actúan como inhibidores de la tirosina cinasa de bruton Download PDF

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ES2857251T3
ES2857251T3 ES15785217T ES15785217T ES2857251T3 ES 2857251 T3 ES2857251 T3 ES 2857251T3 ES 15785217 T ES15785217 T ES 15785217T ES 15785217 T ES15785217 T ES 15785217T ES 2857251 T3 ES2857251 T3 ES 2857251T3
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Wei He
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ZHEJIANG DTRM BIOPHARMA CO Ltd
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I), un enantiómero del mismo, un diasterómero del mismo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: **(Ver fórmula)** en donde: Ar1 es **(Ver fórmula)** , en donde R1. R2, R4 y R5 cada uno es flúor y R3 es hidrógeno; Ar2 se selecciona de: **(Ver fórmula)** o Q es O; M1 es piperidinilo o pirrolidinilo; Y es C(=O), NHC(=O), NR11C(=O) o S(=O)2; y R10, R11, se pueden seleccionar, independientemente, de amino, cicloamino, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, oxo- heterociclilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroacetilo, grupo amida, acilo, guanidilo, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1-C6; en donde el amino, grupo amida, acilo, alquenilo de C2-C6, alquilo, alcoxilo o cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, hidroxialquilo, carbonilo, grupo éster, grupo amida, nitro, ciano, trifluoroacetilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos polifluorados que actúan como inhibidores de la tirosina cinasa de bruton
Campo de la invención
La presente invención se refiere a una serie de compuestos novedosos de pirazolopirimidina multi-sustituida con flúor, así como también composiciones farmacéuticas que comprenden como componente activo los compuestos aquí descritos y métodos para inhibir la actividad de BTK utilizando los mismos. También se describen en la presente métodos para preparar estos compuestos. Además, se describe en la presente una serie de benzofenonas multi-sustituidas con flúor novedosas y los boratos correspondientes, fenoxibencenos multi-sustituidos con flúor y los boratos correspondientes, y métodos para preparar los mismos.
Antecedentes
La tirosina-cinasa de Bruton (BTK) es un miembro de la familia Tec y consiste en dominios N-terminales únicos, esto es, el dominio de homología de pleckstrin (PH), dominio de homología Tec (TH), dominio de homología Src 3 (SH3), dominio de homología Src 2 (SH2), y dominio catalítico que también se denomina dominio de homología de Src 1/tirosina-cinasa (SH1/TK) o cinasa (Akinleye et al: “Ibrutinib and novel BTK inhibitors in clinical development”, Journal of Hematology & Oncology, 2013, 6:59). En el desarrollo normal de los linfocitos B, la expresión correcta de un gen BTK en diferentes regiones de proteína desempeña una función clave en la función de las células B y diversas rutas de transducción de señales.
Existe una pluralidad de receptores ruta abajo de las funciones de BTK, que incluyen factores de crecimiento, antígeno de células B, quimocina y receptores inmunes innatos, a fin de iniciar una gama diversa de procesos celulares tales como proliferación celular, supervivencia, diferenciación, motilidad, angiogénesis, producción de citocina y expresión de antígeno. Por lo tanto, BTK desempeña una función importante en muchas rutas de señalización de células hematopoyéticas, y también es crucial en la activación, desarrollo, supervivencia y señalización de células B (Kurosaki, “Molecular mechanisms in B cell antigen receptor signaling”, Curr Op Imm, 1997, 9(3):309-18).
Existen evidencias para probar que las células B tienen efectos reguladores inmunes en sus respuestas inmunes y respuestas inflamatorias. Por ejemplo, el anticuerpo de CD20 rituximab (rituxan) es un agente de tratamiento basado en proteína que consume células B y se usa para el tratamiento de enfermedades autoinmunes, tales como leucemia lifoncítica crónica y enfermedades inflamatorias causadas por auto-anticuerpos, tales como artritis reumatoide. Por lo tanto, la proteína cinasa, que desempeña una función clave en la activación de células B, puede ser útil para enfermedades relacionadas con células B.
Evidencias acerca de la función de BTK en las enfermedades autoinmunes han sido provistas por un modelo de ratón deficiente en BTK y un ratón suficiente en BTK (Kil LP, et al: “Bruton’s tyrosine kinase mediated signaling enhances leukemogenesis in a mouse model for chronic lymphocytic leukemia”, Am J Blood Res 2013, 3(1):71-83). En un modelo de ratón de leucemia linfocítica crónica (CLL), un ratón deficiente en BTK anula completamente la leucemia linfocítica crónica; la sobreexpresión de BTK acelera la leucemia y aumenta la mortalidad.
La selectividad de un inhibidor de BTK conocido no es ideal, debido a que no sólo inhibe BTK, sino también otras cinasas (tales como ETK, EGF, BLK, FGR, HCK, YES, BRK y JAK3, y similares), lo que puede causar más efectos secundarios. Un inhibidor con mejor selectividad puede producir menos efectos secundarios.
Los inhibidores de BTK conocidos producen una variedad de derivados in vivo que afectan la eficacia y producen efectos secundarios. La farmacocinética de los inhibidores de BTK conocidos también se puede mejorar.
El documento US 2016/0045503 A1 describe formulaciones framacéuticas orales que comprenden compuestos que tienen un resto aceptor de Michael, un procedimiento para su producción y el uso de estas formulaciones para el tratamiento de enfermedades tales como el cáncer y enfermedades autoinmunes.
El documento WO 2012/158764 A1 describe compuestos que son inhibidores de tirosina cinasa, entre otros, inhibidores de BTK, útiles para el tratamiento del cáncer y enfermedades inflamatorias, así como composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de este tipo.
El documento WO 2014/022569 A1 describe el uso de inhibidores de BTK en un método para tratar el ojo seco.
El documento US 8.673.925 B1 describe compuestos de pirazolpirimidina como, entre otros, inhibidores de BTK y su uso para el tratamiento del cáncer y enfermedades inflamatorias, así como composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos.
El documento WO 2011/046964 A2 y el documento WO 2013/010136 A2 describen compuestos inhibidores de cinasa, métodos para sintetizar inhibidores de este tipo y el uso de inhibidores de este tipo en el tratamiento de enfermedades.
SUMARIO
La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), a un enantiómero del mismo, a un diastereómero del mismo o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Figure imgf000003_0001
en donde:
Ari es
Figure imgf000003_0002
en donde R1, R2, R4 y R5 cada uno es flúor y R3 es hidrógeno;
A r2 se selecciona de:
Figure imgf000003_0003
Q es O;
Mi es piperidinilo o pirrolidinilo;
Y es C(=O), NHC(=O), NRn C(=O) o S(=O)2 ; y
R 10, R 11, se pueden seleccionar, independientemente, de amino, cicloamino, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, oxoheterociclilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroacetilo, grupo amida, acilo, guanidilo, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1-C6; en donde el amino, grupo amida, acilo, alquenilo de C2-C6, alquilo, alcoxilo o cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, hidroxialquilo, carbonilo, grupo éster, grupo amida, nitro, ciano, trifluoroacetilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1-C6 y cicloalquilo de C3-C10.
También se describe en la presente un compuesto representado por la fórmula (I) o (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Figure imgf000003_0004
en donde:
Ari y Ar2 se representan independientemente con la fórmula (III) o (IV):
Figure imgf000004_0001
( I I I ) ( I V )
en donde:
A 1, A2, A3, A4, A5, A6, A7, As , A9 y A10 son independientemente C o N y, cuando son N, no hay sustituyente conectado con el mismo;
R1, R2, R3 , R4, R5, R6, R7, R8, R9 son, independientemente, hidrógeno, deuterio, amino, halógeno, hidroxi, carbonilo, nitro, ciano, grupo amida, grupo alquilo inferior -sulfonamida, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, o alcoxilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C10; en donde opcionalmente el alquilo, alcoxilo o cicloalquilo pueden estar sustituidos con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, carbonilo, nitro, ciano, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, Rs y R9 son, preferiblemente, hidrógeno, deuterio o halógeno y, muy preferiblemente, hidrógeno o flúor;
en donde R6, R7, Rs , R9, junto con NH2 de un anillo de pirimidina, pueden formar un anillo heteroaromático o anillo heterocíclico de 6 a 8 miembros, saturado o insaturado;
Ar1 se selecciona independientemente de benzoarilo y benzo-heteroarilo, en donde el sustituyente se selecciona independientemente de deuterio, amino, halógeno, hidroxi, carbonilo, nitro, ciano, grupo amida, alquilo inferior de C1-C6, alcoxilo de C1-C6; cicloalquilo de C3-C10; en donde el alquilo, alcoxilo o cicloalquilo, cada uno, está sustituido opcionalmente con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, carbonilo, nitro, ciano, alquilo de C1-C6 o alcoxilo de C1-C6;
Q es O, S o C(=O);
M1 es una cadena de carbono de C1-C8 saturada o insaturada, arilo de C6-C10, arilo de C6-C10-alquilo de C1-C6, alquilarilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, alquilheteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilcicloalquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo o alquilheterocicloalquilo; en donde opcionalmente los átomos de hidrógeno de la cadena de carbono, arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo pueden ser reemplazados por alquilo, cicloalquilo, alcoxilo, cicloalcoxilo, amino, ciano, grupo amida o halógeno;
Y es C(=O), NRn C(=O) o S(=O)2;
R10, R11 pueden ser representados independientemente por amino, cicloamino, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, oxoheterociclilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroacetilo, grupo amida, acilo, guanidilo, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10, alcoxilo de C1-C6 u oxoalquilo de C1-C6; en donde además el amino, grupo amida, acilo, alquenilo de C2-C6, alquilo, alcoxilo o cicloalquilo puede estar sustituido opcionalmente con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, hidroxialquilo, carbonilo, grupo éster, grupo amida, nitro, ciano, trifluoroacetilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C10;
los átomos de hidrógeno conectados al carbono o nitrógeno del arilo o anillo heterocíclico pueden ser reemplazados opcionalmente por alquilo, cicloalquilo, alcoxilo, cicloalcoxilo, amino, ciano, grupo amida o halógeno.
Tal como se describe en la presente, Ari es preferiblemente la fórmula siguiente:
Figure imgf000005_0001
También se describe en la presente compuestos, en donde Q es O, para formar las fórmulas (X) y (XI):
Figure imgf000005_0002
en donde, Ar2 , M1, Y y R10 son como se define arriba.
en donde: Ar2 es preferiblemente fenilo o heteroarilo sustituido, preferiblemente fenilo sustituido y, muy preferiblemente:
Figure imgf000005_0003
más preferiblemente
Figure imgf000005_0004
por lo tanto, forman las fórmulas (XII) y (XIII):
Figure imgf000005_0005
(XII) (XIII)
en donde M1 es una cadena de carbono de C1-C8 saturada o insaturada, arilo, arilalquilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, alquilcicloalquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilalquilo o alquilheterocicloalquilo; en donde opcionalmente los átomos de hidrógeno conectados a los átomos de carbono o nitrógeno de la cadena de carbono, arilo, heteroarilo, cicloalquilo y heterocicloalquilo pueden ser reemplazados por alquilo, cicloalquilo, alcoxilo, amino, CN, grupo amida o halógeno;
en donde M1 es preferiblemente piperidinilo o pirrolidinilo;
Y es C(=O), NRnC(=O) o S(=O)2, preferiblemente C(=O) o NRnC(=O), muy preferiblemente C(=O);
R10 se selecciona de amino, cicloamino, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, oxo-heterociclilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroacetilo, grupo amida, acilo, guanidilo, alquenilo de C2-C6 , alquinilo de C2-C6 , alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10, alcoxilo de C1-C6 u oxoalquilo de C1-C6 ; en donde además el amino, grupo amida, acilo, alquenilo de C2-C6 , alquilo, alcoxilo o cicloalquilo pueden ser sustituidos opcionalmente con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, hidroxialquilo, carbonilo, grupo éster, grupo amida, nitro, ciano, trifluoroacetilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1-C6 o cicloalquilo de C3-C10;
R10 es muy preferiblemente vinilo.
De acuerdo con la invención, Q es O para formar la fórmula (X), en donde Ar2, M1, Y, R10 y R11 se definen como para el compuesto de fórmula (I) de la invención arriba, por lo tanto para formar la fórmula (XII), en donde M1 e Y se definen como para el compuesto de fórmula (I) de la invención arriba y R10 es vinilo.
A menos que se especifique de otra manera, como se usan en la presente, los términos “alquilo”, “alquenilo” y “alquinilo” se refieren a un alquilo recto o ramificado que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, o un alquenilo y alquinilo recto o ramificado que contiene de 2 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo; vinilo, propenilo, butenilo, pentenilo o hexenilo e isómeros de los mismos.
El término “hidroxilo” se refiere a un grupo con -OH.
El término “halógeno” o “halo” se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
El término “cicloalquilo” se refiere a un anillo de carbono monocíclico o policíclico en el que cada anillo tiene de 3 a 10 átomos de carbono y puede contener uno o más enlaces dobles o triples. Los ejemplos del cicloalquilo incluyen, sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. El término “cicloalquilo” también se refiere a un sistema de anillo espirocíclico en el que los anillos de cicloalquilo comparten un átomo de carbono común.
El término “heterocicloalquilo” se refiere a un anillo heterocíclico no aromático de 5 a 6 miembros que puede contener uno o más heteroátomos iguales o diferentes seleccionados de N, O y S (que pueden estar oxidados). El heterocicloalquilo puede ser insaturado o fusionado con un anillo de benceno, pero no incluye hidrocarburos cíclicos aza-puenteados. El heterocicloalquilo incluye, sin limitación, aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, homopiperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, piperazinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, dihidrooxazolilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, indolinilo, tetrahidroquinolilo, tetrahidroisoquinolilo y benzoxazinilo, preferiblemente dihidrooxazolilo, oxadiazolanilo y tetrahidrofuranilo.
El término “cicloamino” se refiere a una amina cíclica no aromática de 3 a 8 miembros de un grupo definido por “heterocicloalquilo”, que tiene por lo menos un átomo de nitrógeno y puede tener uno o más heteroátomos diferentes seleccionados de un átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno y átomo de azufre (que puede estar oxidado), en donde por lo menos un átomo de nitrógeno está enlazado. Aunque el “cicloamino” no incluye un grupo hidrocarburo cíclico azapuenteado, sí puede comprender, por ejemplo, aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, homopiperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, piperazinilo.
El término “arilo” se refiere a un grupo carbocíclico aromático, preferiblemente un arilo que tiene de 6 a 10 átomos de carbono, muy preferiblemente fenilo, naftilo e indenilo, muy preferiblemente fenilo.
El término “heteroarilo” se refiere a un grupo heterocíclico aromático monovalente de 5 o 6 miembros que tiene uno o más heteroátomos iguales o diferentes, seleccionados de un átomo de nitrógeno, átomo de oxígeno y átomo de azufre, y puede estar fusionado con un anillo de benceno. El “heteroarilo” puede comprender, por ejemplo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, tiazolilo, tienilo, furilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, indolilo, indazolilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, preferiblemente piridazinilo, piridilo, pirazinilo, tiazolilo, pirazolilo y tiooxazolilo.
El término “grupo de anillo puenteado” significa “grupo de hidrocarburo cíclico puenteado” y “grupo de hidrocarburo cíclico aza-puenteado”.
El término "grupo de hidrocarburo cíclico puenteado" es un grupo de hidrocarburo bicíclico o policíclico puenteado, saturado o insaturado, que tiene dos o tres anillos de cicloalquilo con 3 a 10 átomos de carbono. No se incluye aquí el cicloalquilo no puenteado. Los grupos particularmente preferidos de hidrocarburo bicíclico o policíclico puenteado son los grupos de hidrocarburo bicíclico o policíclico que tienen de 4 a 16 átomos de carbono. El grupo de hidrocarburo cíclico puenteado puede comprender, por ejemplo, biciclo[2.1.1]hexilo, biciclo[2.2.1]heptilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[4.3.1]decilo, biciclo[3.3.1]nonilo, bornilo, grupo norborneno, norbornilo, norbornenilo, 6,6-dimetilbiciclo[3.1.1 ]heptilo, triciclobutilo y adamantilo, preferiblemente adamantilo o biciclo [2.2.1 ]-heptilo.
El término “nitro” se refiere al grupo -NO2.
El término “amina” se refiere al grupo -NH2 , que puede tener uno, dos o tres grupos tales como alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, o similares.
El término “ciano” se refiere al grupo -CN.
El término “alcoxi” se refiere a un alquilo conectado con un átomo de oxígeno, por ejemplo metoxilo, en donde el átomo de oxígeno está unido a otra parte de la molécula. Los ejemplos del alcoxi comprenden metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo y ter-butoxilo.
El término “acilo” se refiere a -C(=O)-alquilo, -C(=O)-alquenilo, -C(=O)-alquinilo, -C(=O)-cicloalquilo, -C(=O)-heterocicloalquilo, -C(=O)-arilo, -C(=O)-heteroarilo, carbamoilo, -C(=O)-C(=O)-alquilo, -C(=O)-C(=O)-NH-alquilo. Los términos “alquilo”, “cicloalquilo”, “heterocicloalquilo”, “arilo” y “heteroarilo” tienen aquí los mismos significados arriba indicados.
El término “carboxilo” se refiere al grupo -CO2H o sales del mismo.
El término “triflorometilo” se refiere al grupo -CF3.
El término “trifluorometoxi” se refiere al grupo -OCF3.
El término “trifluoroacetilo” se refiere al grupo CF3C(=O)-.
El término “alquilsulfonamida” se refiere al grupo -NR’S(=O)2R, en donde R es alquilo, R’ es hidrógeno o alquilo de C1-C6 que se define como arriba.
El término “amida” se refiere al grupo -C(=O)NHR o -NHC(=O)R, en donde R es alquilo que se define como arriba. El término “éster” se refiere al grupo -C(=O)OR, en donde R es alquilo que se define como arriba.
Cuando dos o más términos se usan en combinación, por ejemplo “alquilarilo” o “arilalquilo”, cada término aquí tiene el mismo significado definido anteriormente.
El término “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a las sales formadas con ácido o base, cuyos ejemplos no limitativos comprenden (a) sales de adición de ácido: sales de ácido inorgánico (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y similares) y ácidos orgánicos (por ejemplo, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido pamoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácido oxibenzoico y similares); (b) sales de adición de base, la formación de cationes de metal tales como zinc, calcio, sodio, potasio y similares.
Esquemas de síntesis
La presente invención se ejemplifica por medio de modalidades y los compuestos de la invención divulgados en la presente. Los compuestos particulares de la presente invención se seleccionan de los compuestos de las modalidades divulgadas sus sales farmacéuticamente aceptables, y sus diasterómeros o sales individuales.
La presente invención ha investigado activamente los métodos de síntesis, excluyeron una variedad de esquemas de preparación (véanse los Esquemas 1 - 3), y desarrollaron exitosamente métodos novedosos para sintetizar compuestos de pirazolopirimidina (véanse los Esquemas 4 - 11 y los ejemplos de reacción específicos).
Los siguientes esquemas de reacción ilustran las rutas de preparación de los compuestos de acuerdo con la presente invención y los compuestos adicionales descritos en la presente.
A menos que se especifique de otra manera, en las reacciones químicas y exposición que siguen, Ai, A2, A3, A4, A5 , As, A7 , As, A9 , Ri, R2, R3 , R4, R5 , R6, R7 , R8, R9, R10 tienen los mismos significados arriba definidos.
Esquema 1
Figure imgf000008_0001
El Esquema 1 se diseñó basándose en los métodos reportados en la literatura: 3-fluoro-4-bromo-fenol (o 3-fluoro-4-clorofenol) y 3-yodo-fluorobenceno (o 3-fluoro-bromofenilo) bajo condiciones básicas fueron catalizados por un reactivo de cobre para formar 1 -bromo-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno (o 1 -cloro-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno), y después se hizo reaccionar con bis(pinacolato)borato en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, [1,1-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaladio) para dar un éster de borato correspondiente. El éster de borato resultante se hace reaccionar con una 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina sustituida en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd-118) por reacción de Suzuki, para producir el compuesto objetivo. En primer lugar, se sintetizó 1-bromo-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno (o 1-cloro-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno) de acuerdo con los métodos reportados en la literatura, intentando diferentes condiciones de reacción, incluso diferentes bases (por ejemplo, hidróxido de potasio, carbonato de cesio), diferentes catalizadores de cobre (por ejemplo, óxido de cobre, cloruro cuproso, yoduro cuproso) y también diferentes disolventes (por ejemplo, DMSO, N-metilpirrolidona, 1,4-dioxano). No se obtuvo el compuesto objetivo mediante los métodos arriba indicados.
Esquema 2
Figure imgf000009_0001
El Esquema 2 se diseñó basándose en métodos reportados en la literatura: 3-fluoro-4-bromo-fenol (o 3-fluoro-4-clorofenol) y ácido 3-fluorofenil borónico dio 1-bromo-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno (o 1-cloro-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno), que entonces fue convertido al éster de boronato correspondiente y luego se generó el compuesto objetivo. En primer lugar, se sintetizó 1-bromo-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno (o 1-cloro-2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)benceno) de acuerdo con los métodos reportados en la literatura, probando diferentes bases (por ejemplo, trietilamina), diferentes catalizadores (por ejemplo, acetato de cobre) y diferentes disolventes (por ejemplo, diclorometano). No se obtuvo el compuesto objetivo mediante los métodos arriba indicados.
Esquema 3
Figure imgf000009_0002
El Esquema 3 se diseñó basándose en los métodos reportados en la literatura: 3-fluoro-4-bromo-fenol se hace reaccionar con bis(pinacolato) diboro en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd2(dba)3) y un ligando adecuado (por ejemplo, X-phos), y esto dio el borato correspondiente. El borato resultante se hace reaccionar con una 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4-amina sustituida en presencia de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd-118) por reacción de Suzuki, para producir 3-fluorofenol sustituido, que se hace reaccionar con 3-fluoro-bromobenceno (o 2-fluorobromobenceno) bajo las condiciones adecuadas para generar el compuesto objetivo. Los datos de RMN, LCMS y actividad biológica demuestran que el compuesto resultante es el producto de amino-alquilación, en vez del producto oxi-alquilado objetivo.
Esquema 4
Figure imgf000010_0001
El material inicial fluoro-sustituido A ' se hace reaccionar con fenol sustituido BI para generar el intermediario C l en presencia de una base, por ejemplo, carbonato de potasio, en un disolvente adecuado, por ejemplo, DMF. El intermediario C l se hace reaccionar con bis(pinacolato)diboro para dar el intermediario D I, en presencia de una base adecuada, por ejemplo acetato de potasio, y un disolvente adecuado, por ejemplo 1,4-dioxano, bajo el efecto de un catalizador adecuado, por ejemplo [I,I'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio. La IH-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina se hace reaccionar con NIS para obtener el intermediario F l ; después de realizó una reacción de Mitsunobu entre el intermediario F l y el alcohol G l en condiciones adecuadas para formar el intermediario H l. El intermediario H l se hizo reaccionar con el borato DI para dar el intermediario II, en presencia de una base adecuada, por ejemplo fosfato de potasio, en un disolvente adecuado, por ejemplo ',4-dioxano, bajo el efecto de un catalizador adecuado, por ejemplo P d -I'8. En condiciones ácidas, el grupo Boc del intermediario II fue removido para dar la amina J l , que se hizo reaccionar con un reactivo electrofílico para formar el producto K l .
I0
Esquema 5
Figure imgf000011_0001
C2 D2 E2
El intermediario F1 y el compuesto de bromo Boc-protegido A2 (o mesilato) se hace reaccionar para dar el intermediario B2 en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de potasio o carbonato de cesio ) en un disolvente adecuado (por ejemplo, DMF). El intermediario B2 se hace reaccionar entonces con el borato heterocíclico D1 para dar el intermediario C2 vía reacción de acoplamiento cruzado de Suzuki, bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd(PPh3)4) en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de sodio), en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano y H2O). El grupo Boc puede ser removido del intermediario C2 para dar la amina D2 bajo condiciones ácidas, y la amina D2 se puede hacer reaccionar con un reactivo electrófilo para obtener el producto E2.
Esquema 6
Figure imgf000011_0002
C2 D2 E2
Se puede efectuar una reacción de acoplamiento cruzado de Suzuki entre el intermediario F1 y el borato heterocíclico D1 para dar el intermediario A3, bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd(PPh3)4) en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de sodio), en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano y H2O). El intermediario F1 se hace reaccionar con el compuesto de bromo Boc-protegido A2 (o mesilato) para dar el intermediario C2, en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de sodio o carbonato de cesio), en un disolvente adecuado (por ejemplo, DMF). El grupo Boc puede ser removido bajo condiciones ácidas del intermediario C2 para dar la amina D2, que se hace reaccionar con un reactivo electrófilo para obtener el producto E2.
Esquema 7
Figure imgf000012_0001
El intermediario F1 se hace reaccionar con el compuesto de bromo Boc-protegido B4 (o mesilato) para dar el intermediario A4 en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de potasio o carbonato de cesio), en un disolvente adecuado (por ejemplo, DMF). Se puede efectuar una reacción de acoplamiento cruzado de Suzuki entre el intermediario A4 y el borato heterocíclico D1 , en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano y H2O), en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de sodio), bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd(PPh3)4), para dar el producto E2 .
Esquema 8
Figure imgf000012_0002
E5 F5
El reactivo de Grignard A5 como material inicial se hizo reaccionar con bromo- (o cloro-) aril- aldehido para dar el intermediario C5 en un disolvente adecuado (por ejemplo, tetrahidrofurano), que entonces se oxidó a la cetona D5 bajo el efecto de reactivos de oxidación adecuados (por ejemplo, perrutenato de tetrapropilamonio y óxido de N-metil- morfolina) en un disolvente adecuado (por ejemplo, diclorometano). El intermediario D5 se hizo reaccionar entonces con bis(pinacolato)diboro para dar el intermediario E5 bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II)), en presencia de una base adecuada (por ejemplo, acetato de potasio), en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano). Se efectuó una reacción de acoplamiento cruzado de Suzuki entre el intermediario A4 y el borato heterocíclico E5 para dar el producto F5, bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd(PPh3)4), en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de sodio), en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano y H2O).
Esquema 9
Figure imgf000013_0001
El compuesto D2 se hizo reaccionar con anhídrido maleico en presencia de una base adecuada (por ejemplo, trietilamina), en un disolvente adecuado (por ejemplo, diclorometano), para dar el intermediario A6, que entonces se sometió a ciclización a una temperatura adecuada (por ejemplo, 100°C-110°C) para formar B6 con ácido polifosfórico.
Esquema 10
Figure imgf000013_0002
El material inicial Br-sustituido A7 se hace reaccionar con el fenol sustituido B1 para dar el intermediario B7, en presencia de una base, por ejemplo carbonato de potasio, en un disolvente adecuado, por ejemplo DMF. El compuesto nitro B7 se redujo a la amina C7 con reactivos reductores apropiados, por ejemplo polvo de hierro y cloruro de amonio en disolventes apropiados, por ejemplo etanol y agua, seguido por tratamiento con nitrito de sodio y fluoruro ácido de piridina, para generar el intermediario F-sustituido D7. El intermediario D7 se hace reaccionar entonces con bis(pinacolato) diboro para dar el intermediario E7, bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II)), en presencia de condiciones básicas adecuadas, por ejemplo acetato de potasio, en un disolvente adecuado, por ejemplo 1,4-dioxano. El intermediario G1 se hace reaccionar con el borato E7 bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo Pd-118) en presencia de una base adecuada, por ejemplo fosfato de potasio, en un disolvente adecuado, por ejemplo 1,4-dioxano, para dar el intermediario F7. El grupo Boc puede ser removido del intermediario F7 bajo condiciones ácidas para dar la amina G7, que se hace reaccionar con un reactivo electrófilo para obtener el producto H7.
Esquema 11
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Se efectuó una reacción de acoplamiento cruzado de Suzuki entre el intermediario A4 y el borato heterocíclico E7 bajo el efecto de un catalizador adecuado (por ejemplo, Pd(PPh3)4), en presencia de una base adecuada (por ejemplo, carbonato de sodio) en un disolvente adecuado (por ejemplo, 1,4-dioxano y H2O), para dar el producto A8.
Datos de la actividad de los compuestos de los ejemplos de la presente invención para inhibir BTK;
los compuestos comparativos están marcados con un asterisco (*)
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La presente invención provee compuestos de las fórmulas (I), (IX), (X) y (XII), un enantiómero de los mismos, un diasterómero de los mismos y una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Compuestos de las fórmulas (I), (IX), (X) y (XII) comprenden uno o más isótopos estables o radioisótopos, en donde los isótopos incluyen, sin limitación, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, y así sucesivamente.
La presente invención introduce por primera vez 2H, isótopo de 1H, en un inhibidor de BTK.
El 1H, que está en el extremo del enlace doble del grupo vinilo en un compuesto de las fórmulas (I), (IX), (X) y (XII), puede ser reemplazado por 2H para reducir la desactivación del fármaco causada por la oxidación/reducción del enlace doble. La presente invención provee métodos sintéticos para la síntesis de los compuestos de las fórmulas (I), (IX), (X) y (XII), enantiómeros de los mismos o diasterómeros de los mismos.
La presente invención provee compuestos o composiciones farmacéuticas para uso en métodos para regular la actividad de BTK y tratar o inhibir enfermedades asociadas con la actividad de BTK. Se confirmó que los compuestos de la presente invención inhiben la actividad de BTK. La presente invención provee un compuesto de las fórmulas (I), (IX), (X) y (XII) como un componente farmacéutico activo para uso en el tratamiento y/o la prevención de las siguientes enfermedades, en donde estas enfermedades causadas por señalización desfavorable de citocina incluyen:
(1) Enfermedades autoinmunes tales como tiroiditis linfocítica crónica, hipertiroidismo, diabetes mellitus dependiente de insulina, miastenia grave, colitis ulcerosa crónica, anemia perniciosa asociada con gastritis atrófica crónica, síndrome de Goodpasture, pénfigo vulgar, penfigoide, cirrosis biliar primaria, esclerosis cerebroespinal múltiple, neuritis idiopática aguda, lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, psoriasis, vasculitis sistémica, esclerodermia, pénfigo, enfermedad mixta del tejido conectivo, anemia hemolítica autoinmune, enfermedad autoinmune de la tiroides y colitis ulcerosa.
(2) Enfermedades de hipersensibilidad, tales como enfermedad del suero, asma, rinitis alérgica y alergia farmacológica. (3) Enfermedades inflamatorias, tales como queratitis, rinitis, estomatitis, paperas, faringitis, amigdalitis, traqueítis, bronquitis, neumonía, miocarditis, gastritis, gastroenteritis, colecistitis y apendicitis.
(4) Los cánceres incluyen, sin limitación, diversas neoplasias de células B (que incluyen linfoma linfocítico pequeño (SLL), leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), mieloma múltiple y linfoma de células del manto (MCL)). También se describen en la presente otras enfermedades que se benefician de la inhibición de la actividad de BTK.
Otras enfermedades que se benefician de la inhibición de la actividad de BTK incluyen, sin limitación: tumores del cerebro, cáncer de vejiga, cáncer de estómago, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de mama, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer cervical, cáncer endometrial, cáncer colorrectal, cáncer de riñón, cáncer esofágico, cáncer de próstata, cáncer de tiroides, cáncer óseo, cáncer de piel, cáncer de colon, tumores del tracto reproductor femenino, linfomas, mieloma múltiple (MM), cáncer testicular y similares.
De acuerdo con la práctica farmacéutica estándar, los compuestos (inhibidores de BTK) de la presente invención se pueden usar solos o en una combinación con uno o más fármacos adicionales, en donde la composición farmacéutica que comprende los inhibidores de BTK y los fármacos adicionales pueden tener vías de administración iguales o diferentes, y tiempo de administración igual o diferente. Los fármacos adicionales incluyen aquí (pero sin limitación) inhibidores de tirosina-cinasa (por ejemplo, axitinib, dasatinib, icotinib), inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, topotecan), inhibidores de proteína cinasa C (por ejemplo, AEB-071), agonistas del receptor de esfingosina-1-fosfato (por ejemplo, fingolimod, KRP-203 y similares), inmunoglobulina anti-células T (por ejemplo, AtGam), anticuerpo anti-receptor de IL-2 (por ejemplo, daclizumab), amidas (CTX), ifosfamida (IFO), adriamicina (a Dm ), daunorrubicina (DNR), vincristina (VCR), vinblastina (VBL), etopósido (VP16), vermeer (Vumon), carboplatino (CBP) y metotrexato (MTX), ciclosporina A, tacrolimo, sirolimo, everolimo, azatioprina, brequinar, leflunomida, LEA-29Y, anticuerpo anti-CD3 (por ejemplo, 0KT3), aspirina, moléculas bloqueadoras de B7-CD28 (por ejemplo, belatacept, abatacept y similares), moléculas bloqueadoras de CD40-CD154 (anticuerpos anti-CD40 y similares), paracetamol, ibuprofeno, naproxeno, piroxicam y esteroides antiinflamatorios (por ejemplo, prednisolona o dexametasona).
Se pueden usar vehículos, excipientes y otros aditivos usados comúnmente para las preparaciones farmacéuticas para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden como componentes activos uno o dos o más compuestos de las fórmulas (I), (IX), (X) y (XII), o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Las formas de administración pueden ser formas farmacéuticas orales, tales como tabletas, píldoras, cápsulas, gránulos, polvos, emulsiones, jarabes, suspensiones, preparaciones líquidas, o formas farmacéuticas no orales, tales como inyección intravenosa o inyección intramuscular, supositorio, agente subcutáneo, agente transdérmico, agente nasal, inhalación. Los síntomas, edad, sexo y similares de cada paciente se deben considerar para determinar apropiadamente la dosis de un compuesto. En general, en el caso de administración oral, la dosis diaria para un paciente adulto del compuesto es de aproximadamente 0.001 mg/kg a 100 mg/kg, en una sola dosis o dividida en 2 a 4 veces al día. En el caso de administración intravenosa de acuerdo con los síntomas del paciente, generalmente la dosis diaria para un paciente adulto es de 0.0001 mg/kg a 10 mg/kg, una vez o más veces al día. Además, en el caso de usar la administración por inhalación, generalmente la dosis diaria para un paciente adulto es de 0.0001 mg/kg a 1 mg/kg, una vez o más veces al día.
En la presente invención, las composiciones sólidas para administración oral pueden ser tabletas, polvos, gránulos y similares. En estas composiciones sólidas se mezclan una o más sustancias activas y por lo menos un excipiente inerte (por ejemplo, lactosa, manitol, glucosa, hidroxipropilcelulosa, celulosa microcristalina, almidón, polivinil pirrolidona, silicato de aluminio y magnesio y similares). De acuerdo con un método convencional, la composición puede contener aditivos inertes tales como lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio), agentes desintegradores (por ejemplo, carboximetil almidón de sodio) y auxiliares de disolución. Si es necesario, las tabletas o píldoras se pueden recubrir con un recubrimiento de azúcar o un agente de recubrimiento gástrico o entérico.
Las composiciones líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes, elíxires farmacéuticamente aceptables y diluentes inertes usado comúnmente (por ejemplo, agua purificada, etanol). Además del diluente inerte, la composición también puede contener aditivos tales como agentes de solubilización, agentes de mojado, agentes de suspensión y agentes edulcorantes y saborizantes, agentes de fragancia y conservadores.
Las inyecciones para administración parenteral incluyen preparaciones líquidas, suspensiones y emulsiones acuosas o no acuosas, estériles. Los diluentes para solución acuosa pueden comprender (por ejemplo) agua destilada para inyección y solución salina fisiológica. Los diluentes para solución no acuosa pueden comprender (por ejemplo) propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales (tales como aceite de oliva), alcoholes (por ejemplo, etanol) y polisorbato 80. Estas composiciones pueden comprender, además, aditivos tales como agentes isotónicos, conservadores, agentes de mojado, agentes emulsionantes, agentes de dispersión, agentes estabilizadores, auxiliares de disolución y similares. Para esterilizar la composición se pueden utilizar métodos tales como filtración a través de un filtro de retención de bacterias, adición de bactericidas o irradiación con luz. Además, estas composiciones se pueden hacer composiciones sólidas estériles, que se pueden disolver o suspender en agua estéril o un disolvente estéril para inyección antes de usarse.
Los agentes transmucosales, como los productos inhalables y agentes nasales y similares, pueden estar en estado sólido, líquido o semisólido para usarse, y se pueden preparar de acuerdo con los métodos conocidos convencionalmente. Por ejemplo, se puede agregar un excipiente conforme sea necesario (por ejemplo, lactosa y almidón), agente ajustador de pH, un conservador IJ, agentes tensoactivos, lubricantes IJ, agentes estabilizadores y espesantes, y similares. Para la administración se puede usar un dispositivo adecuado de inhalación o insuflación. Por ejemplo, se pueden usar dispositivos conocidos tales como dispositivos de inhalación dosificadores y atomizadores, de al manera que se usa el compuesto solo o una mezcla de polvo formulado del compuesto para ser administrado. Además, el compuesto se puede combinar con un vehículo farmacéuticamente aceptable administrado como una solución o suspensión. El inhalador de polvo seco o similar se puede usar para una sola dosis o múltiples dosis, y se puede usar un polvo seco o una cápsula que contiene polvo. Además, también se puede usar un espray de aerosol presurizado para ser administrado utilizando un propulsor adecuado (por ejemplo, clorofluoroalcano, hidrofluoroalcano, o un gas adecuado tal como dióxido de carbono).
Compuestos inhibidores de BTK
En la siguiente Tabla y Ejemplos, los compuestos comparativos están marcados con un asterisco (*)
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Ejemplo 1(*)
Figure imgf000043_0001
1 -(3-(4-amino-3-(3-fluoro-4-(4-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000043_0002
Boc
3-(metilsulfoniloxi)piperidin-1 -formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Trietilamina (15 g, 150 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (6,3 g, 55 mmol, 1,1 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 3-hidroxipiperidin-1 -formiato de ter-butilo (10,0 g, 50 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (100 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC por 1 hora, se le agregó una solución saturada de NaHCO3 (100 mL), y después se extrajo con diclorometano (200 mL) 3 veces. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (13 g, rendimiento: 95%).
Paso B:
Figure imgf000044_0001
3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (20,2 g, 62 mmol, 2,0 eq.) y 3-(metilsulfoniloxi)piperidin-1-formiato de ter-butilo (13 g, 46,5 mmol, 1,5 eq.) a una solución de 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (8,1 g, 31 mmol, 1,0 eq.) en DMF (50 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante la noche, se filtró a través de celite, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo), para dar el compuesto objetivo (5 g, rendimiento: 25%).
Paso C:
Figure imgf000044_0002
3-yodo-1 -(piperidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl/EA (20 mL, 4 mol/L) a una solución de 3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-formiato de ter-butilo (5 g, 11,3 mmol ) en diclorometano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó por 1 hora a temperatura ambiente, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (4 g, rendimiento: 94%).
Paso D:
Figure imgf000044_0003
1 -(3-(4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1-il)prop-2-en-1 -ona Procedimiento:
Trietilamina (3,2 g, 31,5 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (950 mg, 10,5 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-yodo-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (4 g, 10,5 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (50 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC por 1 hora y se apagó con una solución saturada de bicarbonato de sodio (30 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (50 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (3,7 g, rendimiento: 90%).
Paso E:
Figure imgf000045_0001
(2-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanol
Procedim iento:
Una solución de bromuro de 4-fluorofenil magnesio en tetrahidrofurano (THF) (1 M, 6,0 mL, 6,0 mmol, 1,2 eq.) se agregó, gota a gota, a una solución de 2-fluoro-4-bromo-benzaldehído (1,0 g, 5,0 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (10 mL) a -78 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después se enfrió a 0 oC y se apagó con una solución saturada de cloruro de amonio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (420 mg, rendimiento: 30%).
Paso F:
Figure imgf000045_0002
(2-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se agregó perrutenato de tetrapropilamonio (80 mg, 0,22 mmol, 0,15 eq.), óxido de N-metil morfolina (346 mg, 2,96 mmol, 2,0 eq.) y tamices moleculares de 4A (300 mg) a una solución de (2-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanol (0,42 g, 1,48 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se concentró y se secó por centrifugación. El producto crudo obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (0,4 g, rendimiento: 99%).
Paso G:
Figure imgf000045_0003
(2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(4-fluorofenil)metanona Procedimiento:
Se disolvió (2-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanona (496 mg, 1,67 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (468 mg, 1,84 mmol, 1,1 eq.), acetato de potasio (490 mg, 5,02 mmol, 3,0 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno) dicloropaladio (71 mg, 0,1 mmol, 0,058 eq.) en 1,4-dioxano (3 mL), se calentó a 80 oC y luego se agitó bajo nitrógeno durante 4 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo (574 mg, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso H:
Figure imgf000046_0001
1 -(3-(4-amino-3-(3-fluoro-4-(4-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
Se disolvió (2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(4-fluorofenil)metanona (574 mg, 1,67 mmol, 1,0 eq.), 1-(3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (448 mg, 1,12 mmol, 1,0 eq.), carbonato de sodio (356 mg, 3,36 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (127 mg, 0,11 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano/agua (5 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 30 min bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (70 mg, rendimiento: 12%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,223 min; m/z = 489,2 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, DMSO-cfe) ó 8,30 (s, 1H), 8,00-7,97 (m, 2H), 7,73-7,55 (m, 3H), 7,46-7,41 (m, 2H), 6,91-6,70 (m, 1H), 6,16-6,05 (m, 1H), 5,73-5,58 (m, 1H), 4,80-4,73 (m, 1H), 4,56-4,54 (m, 0,5H), 4,22-4,06 (m, 1,5H), 3,81-3,75 (m, 0,5H), 3,30-3,12 (m, 1,5H), 2,35-2,15 (m, 2H), 1,97-1,94 (m, 1H), 1,66-1,60 (m, 1H).
Ejem plo 2(*)
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1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(4-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000047_0002
(3-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanol
Procedim iento:
Una solución de bromuro de 4-fluorofenil magnesio en THF (1 M, 24,0 mL, 24,0 mmol, 1,2 eq.) se agregó, gota a gota, a una solución de 3-fluoro-4-bromobenzaldehído (4,06 g, 20,0 mmol, 1,0 eq.) en THF (20 mL) a -78 oC. La mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente por 2 horas, después se enfrió a 0 oC y se apagó con una solución saturada de cloruro de amonio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (5,3 g, rendimiento: 89%).
Paso B:
Figure imgf000047_0003
(3-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se agregó perrutenato de tetrapropilamonio (580 mg, 1,66 mmol, 0,15 eq.), óxido de N-metil morfolina (2,6 g, 22,0 mmol, 2,0 eq.) y tamices moleculares de 4A (1,0 g) a una solución de (3-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanol (3,3 g, 11,0 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (3,0 g, rendimiento: 92%).
Paso C:
Figure imgf000048_0001
(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(4-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se disolvió (3-fluoro-4-bromo-fenil)(4-fluorofenil)metanona (1,0 g, 3,5 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (980 mg, 3,9 mmol, 1,1 eq.), acetato de potasio (1,2 g, 12,3 mmol, 3,5 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropaladio (149 mg, 0,2 mmol, 0,058 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL), se calentó a 80 oC y se agitó bajo nitrógeno durante 4 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo (1,2 g, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso D:
Figure imgf000048_0002
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(4-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)
piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
Se disolvió (3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(4-fluorofenil)metanona (306 mg, 0,89 mmol, 1,0 eq.), 1-(3-(4-amino-3-yodo-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (355 mg, 1,12 mmol, 1,0 eq.), carbonato de sodio (283 mg, 2,67 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (100 mg, 0,09 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano/agua (10 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se hizo reaccionar a 85 oC durante 30 min, bajo una atmósfera de nitrógeno, con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se separó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente 10% a 100% (proporción en volumen)) para dar el compuesto objetivo (42 mg, rendimiento: 10%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,740 min; m/z = 488,9 [M+H]+; Duración total: 2 min.
1H RMN (400MHz, DMSO-cfe) ó 8,25 (s, 1H), 7,97-7,93 (m, 2H), 7,75-7,63 (m, 3H), 7,45-7,41 (m, 2H), 6,88-6,71 (m, 1H), 6,14-6,02 (m, 1H), 5,74-5,56 (m, 1H), 4,73-4,54 (m, 1,5H), 4,19-4,04 (m, 1,5H), 3,71-3,65 (m, 0,5H), 3,23-3,15 (m, 1H), 3,02-2,97 (m, 0,5H), 2,31 -2,07 (m, 2H), 1,97-1,90 (m, 1H), 1,60-1,52 (m, 1H).
E jem plo 3(*)
Figure imgf000049_0001
1 -(3-(4-amino-3-(3-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Paso A:
Figure imgf000049_0002
(2-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanol
Procedim iento:
Una solución de bromuro de 3-fluorofenil magnesio en THF (1 M, 6,0 mL, 6,0 mmol, 1,2 eq.) se agregó, gota a gota, a una solución de 2-fluoro-4-bromobenzaldehído (1,0 g, 5,0 mmol, 1,0 eq.) en THF (10 mL) a -78 oC. La mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, después se enfrió a 0 oC y se apagó con una solución saturada de cloruro de amonio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (420 mg, rendimiento: 30%).
Paso B:
Figure imgf000050_0001
(2-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se agregó perrutenato de tetrapropilamonio (80 mg, 0,22 mmol, 0,15 eq.), óxido de N-metil morfolina (346 mg, 2,96 mmol, 2,0 eq.) y tamices moleculares de 4A (300 mg) a una solución de (2-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanol (0,42 g, 1,48 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL). La mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (0,4 g, rendimiento: 99%).
Paso C:
Figure imgf000050_0002
(2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(3-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se disolvió (2-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanona (200 mg, 0,67 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (188 mg, 0,73 mmol, 1,1 eq.), acetato de potasio (200 mg, 2,01 mmol, 3,0 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropaladio (28 mg, 0,039 mmol, 0,058 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL), se calentó a 80 oC y se agitó bajo nitrógeno durante 12 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo (240 mg, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso D:
Figure imgf000051_0001
1 -(3-(4-amino-3-(3-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil) -pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
Se disolvió (2-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(3-fluorofenil)metanona (192 mg, 0,48 mmol, 1,0 eq.), 1-(3-(4-amino-3-yodo-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (300 mg, 0,87 mmol, 1,8 eq.), carbonato de sodio (51 mg, 1,45 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (56 mg, 0,05 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano/agua (10 mL, 1 / 1 , v/v). La mezcla de reacción se hizo reaccionar a 85 oC durante 30 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0.5%, gradiente 10% a 100% (proporción en volumen)) para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (10 mg, rendimiento: 4%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,969 min; m/z = 489,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 4(*)
Figure imgf000051_0002
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000052_0001
(3-fluoro-4-clorofenil)(2-fluorofenil)metanol
Procedim iento:
Una solución de bromuro de 3-fluoro-4-clorofenil magnesio en THF (2 M, 19,3 mL, 38,6 mmol, 1,2 eq.) se agregó, gota a gota, a una solución de 2-fluorobenzaldehído (3,6 g, 32,0 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (10 mL) a -78 oC. La mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, después se enfrió a 0 oC y se apagó con una solución saturada de cloruro de amonio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (2,2 g, rendimiento: 25%).
Paso B:
Figure imgf000052_0002
(3-fluoro-4-clorofenil)(2-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se agregó perrutenato de tetrapropilamonio (455 mg, 1,3 mmol, 0,15 eq.), óxido de N-metil morfolina (2,0 g, 17,3 mmol, 2,0 eq.) y tamices moleculares de 4A (1,0 g) a una solución de (3-fluoro-4-clorofenil)(2-fluorofenil)metanol (2,2 g, 8,66 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (2,0 g, rendimiento: 92%). Paso C:
Figure imgf000052_0003
(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(2-fluorofenil)metanona Procedimiento:
Se disolvió (3-fluoro-4-clorofenil)(2-fluorofenil)metanona (1,5 g, 5,94 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (3,3 g, 13,08 mmol, 2,2 eq.), acetato de potasio (1,74 g, 17,8 mmol, 3,0 eq.), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (540 mg, 0,59 mmol, 0,1 eq.) y 2-diciclohexil fosfino-2',4',6'-triisopropil bifenilo (1,14 g, 2,37 mmol, 0,4 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL), y luego se agitó a 110 oC bajo irradiación de microondas por 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo (2,0 g, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso. Paso D:
Figure imgf000053_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona Procedim iento:
Se disolvió (3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(2-fluorofenil)metanona (2,0 g, 5,81 mmol, 2,3 eq.), 1-(3-(4-amino-3-yodo-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (1,0 g, 2,51 mmol, 1,0 eq.), carbonato de sodio (798 mg, 7,53 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (300 mg, 0,25 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano/agua (20 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 30 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La solución de reacción se diluyó con agua (20 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (20 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente 10% a 100% (proporción en volumen)) para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (70 mg, rendimiento: 6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,156 min; m/z = 489,2 [M+H]+; Duración total: 4 min.
E jem plo 5(*)
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Paso A:
Figure imgf000054_0001
(3-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanol
Procedim iento:
Una solución de bromuro de 3-fluorofenil magnesio en THF (1 M, 75 mL, 75 mmol, 1,5 eq.) se agregó, gota a gota, a una solución de 3-fluoro-4-bromobenzaldehído (10,0 g, 49,2 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (100 mL) a -78 oC. La mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 horas, después se enfrió a 0 oC y se apagó con una solución saturada de cloruro de amonio. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (2,0 g, rendimiento: 13%).
Paso B:
Figure imgf000054_0002
(3-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanona
Procedim iento:
Se agregó perrutenato de tetrapropilamonio (350 mg, 1,0 mmol, 0,15 eq.), óxido de N-metil morfolina (1,56 g, 13,4 mmol, 2,0 eq.) y tamices moleculares de 4A (1,0 g) a una solución de (3-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanol (2,0 g, 6,69 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (1,95 g, rendimiento: 98%). Paso C:
Figure imgf000054_0003
(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(3-fluorofenil)metanona
Procedimiento:
Se disolvió (3-fluoro-4-bromo-fenil)(3-fluorofenil)metanona (1,9 g, 6,4 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (2,1 g, 8,3 mmol, 1,2 eq.), acetato de potasio (1,9 g, 19,2 mmol, 3,0 eq.), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (585 mg, 0,64 mmol, 0,1 eq.) y 2-diciclohexil fosfino-2',4',6'-triisopropil bifenilo (1,21 g, 2,56 mmol, 0,4 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL), y luego se agitó a 110 oC bajo irradiación de microondas por 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo (2,2 g, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso. Paso D:
Figure imgf000055_0001
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)
piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Procedim iento:
Se disolvió (3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(3-fluorofenil)metanona (2,5 g, 7,3 mmol, 2,0 eq.), 1-(3-(4-amino-3-yodo-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (1,4 g, 3,6 mmol, 1,0 eq.), carbonato de sodio (1,14 g, 10,8 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (416 mg, 0,36 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano/agua (20 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 30 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (50 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente 10% a 100% (proporción en volumen)) para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (150 mg, rendimiento: 4%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,787 min; m/z = 489,1 [M+H]+; Duración total: 1,5 min.
1H RMN (400MHz, CDCla) ó 8,43 (s, 1H), 7,78-7,73 (m, 3H), 7,65-7,53 (m, 3H), 7,35-7,25 (m, 1H), 6,64-6,57 (m, 1H), 6,35­ 6,28 (m, 1H), 5,76-5,66 (m, 1H), 5,48 (br, 2H), 4,99-4,90 (m, 1,5H), 4,60-4,56 (m, 0,5H), 4,25-4,22 (m, 0,5H), 4,07-4,05 (m, 0,5H), 3,81-3,77 (m, 0,5H), 3,45-3,41 (m, 0,5H), 3,28-3,20 (m, 0,5H), 2,99-2,94 (m, 0,5H), 2,44-2,32 (m, 2H), 2,06-2,01 (m, 1H), 1,80-1,76 (m, 1H).
Ejem plo 6(*)
Figure imgf000056_0001
(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)(5-metilisoxazol-4-il)metanona
Paso A:
Boc
Figure imgf000056_0002
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo Procedim iento:
Se disolvió (3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)(3-fluorofenil)metanona (1,16 g, 3,38 mmol, 2,0 eq.), 3-(4-amino-3-yodo-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (0,75 g, 1,69 mmol, 1,0 eq.), carbonato de sodio (358 mg, 3,38 mmol, 2,0 eq.) y Pd(PPha^ (196 mg, 0,17 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 30 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (50 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (50 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo: éter de petróleo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (500 mg, rendimiento: 55%).
Paso B:
Figure imgf000056_0003
(4-(4-amino-1-(piperidin-3-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenil)(3-fluorofenil)metanona Procedimiento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (500 mg, 0,94 mol) en diclorometano (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (440 mg, rendimiento: 99%).
Paso C:
Figure imgf000057_0001
(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)(5-metilisoxazol-4-il) metanona Procedim iento:
Se agregó ácido 5-metilisoxazol-4-carboxílico (15 mg, 0,11 mmol, 1,1 eq.), HATU (60 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq.) y DIPEA (38 mg, 0,3 mmol, 3,0 eq.) a una solución de (4-(4-amino-1-(piperidin-3-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenil)(3-fluorofenil)metanona (45 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente del eluente 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el compuesto clorhidrato objetivo (44 mg, rendimiento: 81%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,976 min; m/z = 544,3 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 7(*)
Figure imgf000057_0002
(E)-2-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-carbonil)-2-hidroxi-but-2-enonitrilo
Procedimiento:
Se agregó trietilamina (17 mg, 0,16 mmol, 3,0 eq.) a una solución de (3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil) pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)(5-metilisoxazol-4-il)metanona (30 mg, 0,055 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (26 mg, rendimiento: 83%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 1,089 min; m/z = 544,3 [M+H]+; Duración total: 2 min.
Ejemplo 8(*)
Figure imgf000058_0001
(4-(4-amino-1-(1-(vinilsulfonil)piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenil)(3-fluorofenil)metanona Procedim iento:
Se agregó cloruro de 2-cloroetanosulfonilo (16 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) y trietilamina (50 mg, 0,5 mmol, 5,0 eq.) a una solución de (4-(4-amino-1-(piperidin-3-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenil)(3-fluorofenil)metanona (45 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente del eluente 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó presión reducida para eliminar los componentes volátiles, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (2 mg, rendimiento: 4%). Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,030 min; m/z = 525,1 [M+H]+; Duración total: 3 min.
Ejemplo 9(*)
(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorobenzoil)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)(oxiran-2-il)metanona Procedim iento:
Se agregó oxirano-2-formiato de potasio (19 mg, 0,15 mmol, 1,0 eq.), PyBrop (84 mg, 0,18 mmol, 1,2 eq.) y DIPEA (38 mg, 0,3 mmol, 2,0 eq.) a una solución de (4-(4-amino-1-(piperidin-3-il) pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenil)(3-fluorofenil)metanona (65 mg, 0,15 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La reacción se calentó a 90 oC y se agitó por 12 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con salmuera saturada (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente del eluente 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó bajo una presión reducida para eliminar los componentes volátiles y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (38 mg, rendimiento: 51%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,157 min; m/z = 505,2 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 10(*)
Figure imgf000059_0001
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2-nitrofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)
piperidin-1 -formiato de ter-butilo
Paso A:
Figure imgf000059_0002
3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol
Procedim iento:
Se disolvió 3-fluoro-4-bromofenol (0,5 g, 2,62 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (0,86 g, 3,41 mmol, 1,3 eq.), acetato de potasio (490 mg, 5,02 mmol, 3,0 eq.), X-phos (125 mg, 0,26 mmol, 0,1 eq.) y Pd2 (dba)3 (0,24 g, 0,26 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL). La mezcla resultante se calentó a 90 o C y se agitó bajo nitrógeno durante 1 hora. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo (0,62 g, rendimiento: 99%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso B:
Boc
Figure imgf000060_0001
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-hidroxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)
piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Se disolvió 3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (268 mg, 1,13 mmol, 2,0 eq.), 3-(4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (250 mg, 0,56 mmol, 1,0 eq.), fosfato de potasio (239 mg, 1,13 mmol, 2,0 eq.) y Pd-118 (18 mg, 0,028 mmol, 0,05 eq.) en 1,4-dioxano/agua (11 mL, 10/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 60 oC durante 14 min, bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con hielo-agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (150 mg, rendimiento: 62%).
Paso C:
Figure imgf000060_0002
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2-nitrofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)
piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó 2-fluoro-nitrobenceno (20 mg, 0,14 mmol, 1,2 eq.) y carbonato de potasio (32 mg, 0,233 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-formiato de ter-butilo (50 mg, 0,117 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 100 o C durante 14 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró y la torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se separó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua / NH4 HCO3 0,7%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó bajo una presión reducida para eliminar los componentes volátiles, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (8 mg, rendimiento: 12%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,320 min; m/z = 550,4 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejemplo 11
Figure imgf000061_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Paso A:
Figure imgf000061_0002
3-(3-fluoro-4-bromofenoxi)-1,2,4,5-tetrafluorobenceno
Procedim iento:
Se agregó carbonato de potasio (68,0 g, 492,1 mmol, 2,0 eq.) y 1,2,3,4,5-pentafluorofenilo (49,6 g, 295,3 mmol, 1,2 eq.) a una solución de 3-fluoro-4-bromofenol (47,0 g, 246,1 mmol, 1,0 eq.) en DMF (500 mL). La reacción se agitó por 12 horas a 100 oC y se evaporó bajo una presión reducida para eliminar el disolvente. El residuo se disolvió en acetato de etilo (300 mL), se lavó con agua (100 mL) 2 veces y salmuera saturada (100 mL) 1 vez. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (78 g, rendimiento: 93%). Paso B:
Figure imgf000061_0003
2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano Procedimiento:
Se disolvió 3-(3-fluoro-4-bromofenoxi)-1,2,4,5-tetrafluorobenceno (73 g, 215,3 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (65,6 g, 258,4 mmol, 1,2 eq.), acetato de potasio (31,6 g, 322,9 mmol, 1,5 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropaladio (9,4 g, 12,8 mmol, 0,06 eq.) en 1,4-dioxano (1 L). La mezcla resultante se agitó 80 oC bajo nitrógeno durante 14 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo) para dar el compuesto objetivo (60 g, rendimiento: 72%).
Paso C:
Figure imgf000062_0001
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo Procedim iento:
Se disolvió 3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-formiato de ter-butilo (7,6 g, 17,1 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (8,6 g, 22,3 mmol, 1,3 eq.), fosfato de potasio (7,3 g, 34,2 mmol, 2,0 eq.) y Pd-118 (0,56 g, 0,855 mmol, 0,05 eq.) en 1,4-dioxano/agua (240 mL, 5/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 60 oC durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se vació en hielo-agua (300 mL) después de enfriar a temperatura ambiente, y después se extrajo con acetato de etilo (100 mL) 4 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (6,8 g, rendimiento: 69%).
Paso D:
Figure imgf000062_0002
3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]
pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (20 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (6,8 g, 11,8 mmol) en acetato de etilo (50 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (5,2 g, rendimiento: 86%).
Paso E:
Figure imgf000063_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona Procedim iento:
A una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1,5 g, 2,9 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) se le agregó subsecuentemente trietilamina (887 mg, 8,7 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (0,26 g, 2,9 mmol, 1,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora y luego se apagó con agua (5 mL), se diluyó con diclorometano (50 mL), se lavó 2 veces con agua (30 mL) y 1 vez con salmuera saturada (30 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (0,94 g, rendimiento: 64%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,130 min; m/z = 531,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, DMSO-afe) ó 8,22 (s, 1H), 8,00-7,91 (m, 1H), 7,55-7,46 (m, 1H), 7,27 (dd, J = 2,4, 10,8 Hz, 1H), 7,12 (dd, J = 2,4, 8,8 Hz, 1H), 6,88-6,65 (m, 1H), 6,13-6,02 (m, 1H), 5,70-5,56 (m, 1H), 4,71-4,65 (m, 1H), 4,54-4,51 (m, 0,5H), 4,20-4,17 (m, 1H), 4,07-4,04 (m, 0,5H), 3,67-3,60 (m, 0,5H), 3,17-3,12 (m, 1H), 2,98-2,94 (m, 0,5H), 2,26-2,21 (m, 1H), 2,11-2,06 (m, 1H), 1,92-1,89 (m, 1H), 1,58-1,54 (m, 1H).
Ejemplo 12(*)
Figure imgf000063_0002
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluoro-2-nitrofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona Paso A:
Boc
Figure imgf000064_0001
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluoro-2-nitrofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo
Procedim iento:
A una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-formiato de ter-butilo (200 mg, 0,467 mmol, 1,0 eq.) en acetonitrilo (5 mL) se le agregó 1,3-difluoro-2-nitrobenceno (222,8 mg, 1,4 mmol, 3,0 eq.) y carbonato de potasio (96,8 mg, 0,7 mmol, 1,5 eq.). La mezcla de reacción se agitó a 60 oC durante 12 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vació en agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (90 mg, rendimiento: 34%).
Paso B:
Figure imgf000064_0002
3-(2-fluoro-4-(3-fluoro-2-nitrofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (1 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluoro-2-nitrofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (90 mg, 0,16 mmol) en diclorometano (5 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (75 mg, rendimiento: 94%).
Paso C:
Figure imgf000065_0001
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o - 2 - n i t r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o - 2 - n i t r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m id i n - 4 - a m in a ( 75 m g , 0 , 15 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 2 m L ) s e le a g r e g ó s u b s e c u e n t e m e n t e t r i e t i l a m in a ( 45 m g , 0 , 45 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e a c r i l o i l o ( 13 m g , 0 , 15 m m o l , 1 ,0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a y lu e g o s e a p a g ó c o n a g u a ( 5 m L ) , s e d i lu y ó c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) , s e la v ó c o n a g u a ( 5 m L ) 2 v e c e s y c o n s a lm u e r a s a t u r a d a ( 5 m L ) 1 v e z . L a f a s e o r g á n i c a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : d i c lo r o m e t a n o : m e t a n o l= 5 : 1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 19 m g , r e n d im ie n t o : 24 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 538 m in ; m /z = 522 , 3 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , D M S O - c fe ) 6 8 ,21 ( s , 1 H ) , 7 , 7 1 - 7 , 5 5 ( m , 2 H ) , 7 , 4 3 ( t, J = 9 , 2 H z , 1 H ) , 7 , 33 ( d , J = 8 , 8 H z , 1 H ) , 7 , 2 2 (d , J = 8 , 8 H z , 1 H ) , 7 , 1 4 ( d , J = 7 , 2 H z , 1 H ) , 6 , 8 8 - 6 , 6 7 ( m , 1 H ) , 6 , 1 3 - 6 , 0 2 ( m , 1 H ) , 5 , 7 0 - 5 , 5 6 ( m , 1 H ) , 4 , 6 9 - 4 , 5 3 ( m , 1 , 5 H ) , 4 , 21 - 4 , 05 ( m , 1 , 5 H ) , 3 , 68 - 3 , 61 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 21 - 3 , 18 ( m , 1 H ) , 3 , 05 - 2 , 99 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 24 - 2 , 13 ( m , 2 H ) , 1 , 92 - 1 , 89 ( m , 1 H ) , 1 , 59 - 1 , 54 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 13(*)
Figure imgf000065_0002
N-((1S,4S)-4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)acrilamida Paso A:
Figure imgf000066_0001
1 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) - 3 - n i t r o b e n c e n o
Procedim iento:
S e a g r e g ó c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 58 g , 420 m m o l , 2 , 0 e q . ) y 1 - f l u o r o - 3 - n i t r o b e n c e n o ( 29 , 6 g , 210 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - f l u o r o - 4 - b r o m o f e n o l ( 40 g , 210 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 400 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó p o r 12 h o r a s a 90 oC y s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a . E l r e s id u o s e d i lu y ó c o n a g u a ( 300 m L ) , s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 300 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 65 g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso B:
Figure imgf000066_0002
3 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) b e n c e n a m i n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó c lo r u r o d e a m o n io ( 28 g , 525 m m o l , 2 , 5 e q . ) y p o l v o d e f ie r r o ( 58 , 8 g , 1 , 05 m o l, 5 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 1 -( 3 -f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) - 3 - n i t r o b e n c e n o ( 65 g , 210 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n e t a n o l ( 300 m L ) y a g u a ( 60 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e p u s o a r e f l u jo b a jo n i t r ó g e n o d u r a n t e 12 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a , ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a /N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 19 g , r e n d im ie n t o : 23 % ) .
Paso C:
Figure imgf000066_0003
1 - b r o m o - 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) b e n c e n o
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e p i r i d in a - f lu o r u r o d e h id r ó g e n o ( 30 m L ) a - 10 oC s e le a g r e g ó e n p o r c io n e s 3 -( 3 - f lu o r o - 4 -b r o m o f e n o x i ) a n i l i n a (9 g , 32 m m o l , 1 ,0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n r e s u l t a n t e s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 30 m in y e n t o n c e s s e le a g r e g ó n i t r i t o d e s o d io ( 2 , 42 g , 35 m m o l , 1 ,1 e q . ) e n p o r c io n e s a - 10 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 30 m in y lu e g o a 60 oC d u r a n t e 14 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la s o lu c ió n d e r e a c c ió n s e v a c i ó e n h i e lo - e t a n o l ( 50 m L ) , a lo q u e s e a g r e g ó u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 50 m L ) , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 50 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 5 , 8 g , r e n d im ie n t o : 64 % ) .
Paso D:
Figure imgf000067_0001
2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o
Procedim iento:
S e d i s o lv i ó 1 - b r o m o - 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) b e n c e n o ( 5 ,8 g , 20 m m o l , 1 ,0 e q . ) , b i s ( p i n a c o l a t o ) d ib o r o (6 ,1 g , 24 m m o l , 1 , 2 e q . ) , a c e t a t o d e p o t a s io ( 3 ,9 g , 40 m m o l , 2 , 0 e q . ) y ( 1 , 1 ' - b i s ( d i f e n i l f o s f i n o ) f e r r o c e n o ) d i c lo r o p a l a d i o ( 0 ,89 g , 1 , 2 m m o l , 0 , 06 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o ( 100 m L ) . L a m e z c la r e s u l t a n t e s e a g i t ó a 85 oC b a jo n i t r ó g e n o d u r a n t e 14 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r i a r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o l u m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 6 , 5 g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso E:
Figure imgf000067_0002
M e t a n o s u l f o n a t o d e ( 1 R , 4 R ) - 4 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c lo h e x i l o
Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 7 g , 70 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e m e t a n o s u l f o n i lo ( 2 ,9 g , 25 , 5 m m o l , 1 ,1 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e a u n a s o lu c ió n d e (1 R , 4 R ) - 4 - h id r o x i c ic l o h e x i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 5 ,0 g , 23 , 2 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 100 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 100 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 200 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 6 ,0 g , r e n d im ie n t o : 88 % ) .
Paso F:
Figure imgf000068_0001
( 1 S , 4 S ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l )
c ic l o h e x i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o
Procedim iento:
S e a g r e g ó c a r b o n a t o d e c e s io ( 8 ,8 g , 27 , 6 m m o l , 2 , 0 e q . ) y m e t a n o s u l f o n a t o d e (1 R , 4 R ) - 4 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c l o h e x i lo ( 6 ,0 g , 20 , 5 m m o l , 1 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a ( 3 , 6 g , 13 , 6 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 50 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 80 oC d u r a n t e la n o c h e , s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 4 g , r e n d im ie n t o : 64 % ) .
Paso G:
NH2
Figure imgf000068_0002
1 -( ( 1 S , 4 S ) - 4 - a m in o c i c lo h e x i l ) - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m in a
Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E ( 20 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 1 S , 4 S ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 -i l ) c i c lo h e x i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 4 g , 8 , 73 m m o l ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 20 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c lo r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 2 ,5 g , r e n d im ie n t o : 73 % ) .
Paso H:
Figure imgf000069_0001
N -( ( 1 S , 4 S ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) c i c lo h e x i l ) a c r i l a m id a Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 1 ,9 g , 19 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e a c r i l o i l o ( 570 m g , 6 , 3 m m o l , 1 ,0 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia l m e n t e a u n a s o lu c ió n d e 1 -( ( 1 S , 4 S ) - 4 - a m in o c i c lo h e x i l ) - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m id i n - 4 - a m in a ( 2 , 5 g , 6 , 3 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 50 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a y lu e g o s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 30 m L ) . L a f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 50 m L ) 2 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 2 ,0 g , r e n d im ie n t o : 77 % ) .
Paso I:
Figure imgf000069_0002
N -( ( 1 S , 4 S ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo h e x i l ) a c r i la m id a Procedim iento:
E l c o m p u e s t o N -( ( 1 S , 4 S ) - 4 -( 4 - a m i n o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo h e x i l ) a c r i la m id a ( 250 m g , 0 , 6 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o ( 400 m g , 1 ,2 m m o l , 2. e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 200 m g , 1 ,8 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P d (P P h 3 ) 4 ( 70 m g , 0 , 06 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 10 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 80 oC d u r a n t e 40 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e l g a d a ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 75 m g , r e n d im ie n t o : 23 % ) .
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,856 min; m/z =491,3 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, DMSO-cfe) ó 8,22 (s, 1H), 8,14 (d, 1H), 7,58-7,44 (m, 2H), 7,14-6,96 (m, 6H), 6,42-6,35 (m, 1H), 6,09­ 6,04 (m, 1H), 5,56-5,52 (m, 1H), 4,77-4,73 (m, 1H), 3,99-3,95 (m, 1H), 2,25-2,15 (m, 2H), 1,88-1,72 (m, 6H).
E jem plo 14(*)
Figure imgf000070_0001
N-((1 R,4R)-4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)acrilamida Paso A:
Figure imgf000070_0002
4-nitrobenzoato de (1S,4S)-4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo
Procedim iento:
Se disolvió (1 R,4R)-4-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo (4,4 g, 20,4 mmol, 1,0 eq.), ácido 4-nitrobenzoico (8,4 g, 50,3 mmol, 2,5 eq.) y trifenilfosfina (8,0 g, 30,5 mmol, 1,5 eq.) en tolueno (240 mL) y tetrahidrofurano (20 mL). A la mezcla resultante se le agregó azodiformiato de dietilo (7,1 g, 40,8 mmol, 2,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno, se evaporó para eliminar el disolvente bajo presión reducida, a lo que se agregó diclorometano (500 mL), se agitó por 30 min y después se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (4,0 g, rendimiento: 54%).
Paso B:
Figure imgf000070_0003
(1S,4S)-4-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo
Procedimiento:
S e d i s o lv i ó 4 - n i t r o b e n z o a t o d e ( 1 S , 4 S ) - 4 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c lo h e x i l o ( 4 ,0 g , 11 , 0 m m o l ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o ( 50 m L ) y s o lu c ió n d e N a O H ( 2 N , 100 m L ) , y e n t o n c e s s e p u s o a r e f lu jo p o r 12 h o r a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 50 m L ) y s e e x t r a jo c o n é t e r m e t i l - t e r - b u t í l i c o ( 50 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 1 ,0 g , r e n d im ie n t o : 40 % ) .
Paso C:
Figure imgf000071_0001
M e t a n o s u l f o n a t o d e ( 1 S , 4 S ) - 4 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c lo h e x i l o
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e (1 S , 4 S ) - 4 - h id r o x i c ic lo h e x i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 1 ,0 g , 4 , 6 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 30 m L ) a 0 oC s e le a g r e g ó s e c u e n c ia l m e n t e t r i e t i l a m in a ( 1 , 4 g , 14 , 0 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e m e t a n o s u l f o n i lo ( 0 ,8 g , 7 , 0 m m o l , 1 , 5 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 ° C d u r a n t e 1 h o r a , s e a p a g ó c o n a g u a ( 5 m L ) , s e la v ó c o n a g u a ( 30 m L ) 2 v e c e s y c o n s a lm u e r a ( 30 m L ) 1 v e z . L a f a s e o r g á n i c a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 860 m g , r e n d im ie n t o : 64 % ) .
Paso D:
Figure imgf000071_0002
3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a
Procedim iento:
S e d i s o lv i ó 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a ( 2 ,3 g , 8 , 8 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) -4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o ( 5 , 8 g , 17 , 6 m m o l , 2 , 0 e q . ) , f o s f a t o d e p o t a s io ( 3 , 7 g , 17 , 6 m m o l , 2 , 0 e q . ) y P d - 118 ( 5 70 m g , 0 , 88 m m o l , 0 ,1 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / H 2O ( 40 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 8 0 oC d u r a n t e 40 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 50 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 700 m g , r e n d im ie n t o : 23 % ) .
Paso E:
Figure imgf000071_0003
(1 R , 4 R ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 3 - f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo h e x i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o Procedimiento:
S e a g r e g ó c a r b o n a t o d e c e s io ( 385 m g , 1 , 18 m m o l , 2 , 0 e q . ) y m e t a n o s u l f o n a t o d e ( 1 S , 4 S ) - 4 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c lo h e x i l o ( 346 m g , 1 , 18 m m o l , 2 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 200 m g , 0 , 59 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 10 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 80 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e e n f r ió a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e y s e f i l t r ó . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e lg a d a ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 70 m g , r e n d im ie n t o : 23 % ) .
Paso F:
Figure imgf000072_0001
1 -( (1 R , 4 R ) - 4 - a m i n o c i c lo h e x i l ) - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r im i d in - 4 - a m in a
Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E ( 1.0 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 1 R , 4 R ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) c i c lo h e x i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 70 m g , 0 , 13 m m o l ) e n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b j e t i v o (61 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso G:
Figure imgf000072_0002
N -( (1 R , 4 R ) - 4 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 3 - f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo h e x i l ) a c r i la m id a
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e 1 -( ( 1 R , 4 R ) - 4 - a m in o c ic lo h e x i l ) - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 61 , 5 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 5 m L ) a 0 oC s e le a g r e g ó s u b s e c u e n t e m e n t e t r i e t i l a m in a ( 40 m g , 0 , 39 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e a c r i l o i l o ( 23 m g , 0 , 26 m m o l , 2 , 0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a y lu e g o s e a p a g ó c o n a g u a ( 5 m L ) , s e d i lu y ó c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) , s e la v ó c o n a g u a ( 5 m L ) 2 v e c e s y c o n s a lm u e r a ( 5 m L ) 1 v e z . L a f a s e o r g á n i c a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) p a r a d a r e l c lo r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 6 ,3 m g , r e n d im ie n t o : 10 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 0 ,811 m in ; m / z = 491 ,1 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 1 , 5 m in .
Ejem plo 15(*)
Figure imgf000073_0001
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Paso A:
Figure imgf000073_0002
3 -( m e t i l s u l f o n i lo x i ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e 3 - h id r o x ip i r r o l i d in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 30 , 0 g , 163 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 200 m L ) a 0 oC s e le a g r e g ó s u b s e c u e n t e m e n t e t r i e t i l a m in a ( 35 g , 346 m m o l , 2 ,1 e q . ) y c lo r u r o d e m e t a n o s u l f o n i lo ( 36 , 6 g , 321 m m o l , 1 ,9 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 3 h o r a s , s e a p a g ó c o n a g u a ( 20 m L ) , s e la v ó c o n a g u a ( 100 m L ) 2 v e c e s y c o n s a lm u e r a ( 100 m L ) 1 v e z . L a f a s e o r g á n i c a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 45 , 6 g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso B:
Figure imgf000073_0003
3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r im i d in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m i a t o d e t e r - b u t i l o Procedimiento:
Se agregó carbonato de cesio (37 g, 115 mmol, 3,0 eq.) y 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-4-amina (10 g, 38 mmol, 1,0 eq.) a una solución de 3-(metilsulfoniloxi)pirrolidin-1 -formiato (35 g, 134 mmol, 3,5 eq.) en DMF (300 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (7,0 g, rendimiento: 44%).
Paso C:
Figure imgf000074_0001
3-yodo-1-(pirrolidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (10,0 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (7,0 g, 16 mmol) en diclorometano (100 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (5,3 g, rendimiento: 100%).
Paso D:
Figure imgf000074_0002
1-(3-(4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Procedim iento:
A una solución de 3-yodo-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (5,3 g, 16 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (50 mL) a 0 oC se le agregó secuencialmente trietilamina (4,8 g, 48 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (750 mg, 8,0 mmol, 0,5 eq.). La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora y luego se apagó con una solución saturada de NaHCÜ3 (10 mL), se lavó con agua (30 mL) 2 veces y con salmuera (30 mL) 1 vez. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (1,5 g, rendimiento: 50%).
Paso E:
Figure imgf000075_0001
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
Se disolvió 1-(3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (250 mg, 0,65 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (420 mg, 1,25 mmol, 2.eq.), carbonato de sodio (200 mg, 1,88 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (72 mg, 0,06 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano/agua (10 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85oC durante 40 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (65 mg, rendimiento: 24%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,754 min; m/z = 463,3 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, DMSO-cfe) 68,25 (s, 1H), 7,56-7,43 (m, 2H), 7,13-6,98 (m, 6H), 6,68-6,52 (m, 1H), 6,16-6,08 (m, 1H), 5,68-5,64 (m, 1H), 5,55-5,43 (m, 1H), 4,14-4,09 (m, 0.5H), 3,97-3,56 (m, 4.5H), 2,55-2,34 (m, 2H).
E jem plos 16(*) y 17(*)
Figure imgf000075_0002
N-((1 R,3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]
pirimidin-1 -il)ciclopentil)acrilamida
Figure imgf000076_0001
N -( ( 1 S , 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ]
p i r im id in - 1 - i l ) c i c lo p e n t i l ) a c r i la m id a
Paso A:
Figure imgf000076_0002
M e t a n o s u l f o n a t o d e (1 R , 3 S ) - 3 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c lo p e n t i l o
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e ( 1 S , 3 R ) - 3 - h id r o x ic i c lo p e n t i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 2 ,5 g , 12 , 42 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 25 m L ) a 0 oC s e le a g r e g ó s e c u e n c ia l m e n t e t r i e t i l a m in a ( 3 , 14 g , 31 , 05 m m o l , 2 , 5 e q . ) y c lo r u r o d e m e t a n o s u l f o n i lo ( 3 , 5 g , 24 , 84 m m o l , 1 , 2 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 14 h o r a s , s e a p a g ó c o n a g u a ( 20 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 25 m L ) 2 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 2 , 5 g , r e n d im ie n t o : 72 % ) .
Paso B:
Figure imgf000076_0003
(1 S , 3 S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) c i c lo p e n t i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o
Procedim iento:
S e a g r e g ó c a r b o n a t o d e c e s io ( 8 , 75 g , 26 , 85 m m o l , 3 , 0 e q . ) y 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a ( 1 , 87 g , 7 , 16 m m o l , 0 , 8 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e m e t a n o s u l f o n a t o d e (1 R , 3 S ) - 3 -( t e r - b u t o x i c a r b o n i l ) c i c lo p e n t i l o ( 2 , 5 g , 8 , 95 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 30 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 85 oC d u r a n t e 12 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la s e f i l t r ó . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n y e l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a c e t a t o d e e t i l o ( 100 m L ) , s e la v ó c o n a g u a ( 50 m L ) 2 v e c e s y c o n s a lm u e r a ( 50 m L ) 1 v e z . L a f a s e o r g á n i c a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o l u m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 500 m g , r e n d im ie n t o : 13 % ) .
Paso C:
Figure imgf000077_0001
1 -((1 S , 3 S ) - 3 - a m in o c i c lo p e n t i l ) - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m in a
Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E ( 10 , 0 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 1 S , 3 S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 -i l ) c i c lo p e n t i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 500 m g , 1 , 13 m m o l ) e n a c e t a t o d e e t i l o ( 20 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c lo r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 500 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso D:
Figure imgf000077_0002
N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo p e n t i l ) a c r i la m id a
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e 1 -( ( 1 S , 3 S ) - 3 - a m in o c i c lo p e n t i l ) - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 215 m g , 0 , 56 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 15 m L ) a 0 oC s e le a g r e g ó s u b s e c u e n t e m e n t e t r i e t i l a m in a ( 170 m g , 1 , 7 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e a c r i l o i l o (51 m g , 0 , 56 m m o l , 1 ,1 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a y lu e g o s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C Ü 3 ( 10 m L ) . L a f a s e o r g á n i c a s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 5 m L ) 2 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o l u m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b j e t i v o ( 100 m g , r e n d im ie n t o : 45 % ) .
Paso E:
Figure imgf000078_0001
N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ]
p i r im id in - 1 - i l ) c i c lo p e n t i l ) a c r i la m id a
Figure imgf000078_0002
N -( ( 1 S , 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo p e n t i l ) a c r i la m id a
Procedim iento:
S e d i s o lv i ó N -( ( 1 S , 3 S ) - 3 -( 4 - a m i n o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) c i c lo p e n t i l ) a c r i l a m id a ( 70 m g , 0 , 175 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o ( 116 , 8 m g , 0 , 35 m m o l , 1 ,1 e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 93 m g , 0 , 875 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 20 m g , 0 , 017 m m o l , 0 ,1 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 10 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 85 oC d u r a n t e 40 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) p a r a d a r e l c lo r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o d e l e j e m p lo 16 (11 m g , r e n d im ie n t o : 5 % ) y e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o d e l e j e m p lo 17 ( 3 , 8 m g , r e n d im ie n t o : 2 % ) .
Datos de espectroscopia:
E jem plo 16
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,693 min; m/z = 477,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 17
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,766 min; m/z = 477,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejemplo 18(*)
Figure imgf000079_0001
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona Procedim iento:
Se disolvió 1-(3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (250 mg, 0,63 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (417 mg, 1,26 mmol, 2,0 eq.), carbonato de sodio (200 mg, 1,88 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (37 mg, 0,032 mmol, 0,05 eq.) en 1,4-dioxano/agua (3 mL, 5:1, v/v). La mezcla de reacción se hizo reaccionar a 85oC durante 40 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (25 mg, rendimiento: 4,3%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,693 min; m/z = 477,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, DMSO-cfe) ó 8,23 (s, 1H), 7,55-7,45 (m, 2H), 7,14-7,00 (m, 5H), 6,85-6,69 (m, 2H), 6,09-6,02 (m, 1H), 6,13-6,02 (m, 1H), 5,70-5,56 (m, 1H), 4,69-4,53 (m, 1,5H), 4,21-4,04 (m, 1,5H), 3,69-3,66 (m, 0,5H), 3,20-3,14 (m, 1H), 2,99-2,94 (m, 0,5H), 2,27-2,12 (m, 2H), 1,92-1,89 (m, 1H), 1,59-1,53 (M,1H).
E jem plo 19(*)
Figure imgf000079_0002
N-(2-(4-(1-(1-acriloilpiperidin-3-il)-4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)fenil)metanosulfonamida Paso A:
Figure imgf000080_0001
1 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) - 2 - n i t r o b e n c e n o
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 - f l u o r o n i t r o b e n c e n o ( 44 , 33 g , 314 , 14 m m o l , 1 , 2 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 72 , 36 g , 523 , 57 m m o l , 2 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - f l u o r o - 4 - b r o m o f e n o l ( 50 g , 261 , 78 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 500 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 110 oC d u r a n t e 14 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la s e f i l t r ó . L a t o r t a d e l f i l t r o s e la v ó s u f i c i e n t e m e n t e c o n a c e t a t o d e e t i l o . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 81 , 7 g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso B:
Figure imgf000080_0002
2 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) b e n c e n a m i n a
Procedim iento:
E l 1 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) - 2 - n i t r o b e n c e n o ( 40 g , 128 , 17 m m o l , 1 ,0 e q . ) s e d i s o lv i ó e n e t a n o l ( 500 m L ) . L a m e z c la r e s u l t a n t e s e d e s g a s i f i c ó c o n n i t r ó g e n o t r e s v e c e s . A la s o lu c ió n a n t e r io r s e le a g r e g ó P d 5 % / C ( 4 g , 10 % , p / p ) y lu e g o s e d e s g a s i f i c ó c o n h id r ó g e n o t r e s v e c e s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó b a jo h id r ó g e n o ( 344 , 74 k P a ) a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , lu e g o s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 36 g , r e n d im ie n t o : 99 % ) .
Paso C:
Figure imgf000080_0003
N -( 2 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) f e n i l ) m e t a n o s u l f o n a m i d a
Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 1 , 35 g , 13 , 29 m m o l , 2 , 5 e q . ) y c lo r u r o d e m e t i l s u l f o n i l o ( 1 , 22 g , 10 , 65 m m o l , 1 ,0 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e a u n a s o lu c ió n d e 2 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) a n i l i n a ( 1 , 5 g , 5 , 32 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 25 m L ) a 0 oC . L a r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 14 h o r a s , s e a p a g ó c o n a g u a ( 20 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 25 m L ) 2 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 3 : 1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 1 ,0 g , r e n d im ie n t o : 52 % ) .
Paso D:
Figure imgf000081_0001
N -( 2 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n - 2 - i l ) f e n o x i ) f e n i l ) m e t a n o s u l f o n a m i d a Procedim iento:
S e d i s o lv i ó N -( 2 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) m e t a n o s u l f o n a m i d a ( 1 ,0 g , 2 , 78 m m o l , 1 ,0 e q . ) , b i s ( p i n a c o l a t o ) d ib o r o ( 0 ,85 g , 3 , 33 m m o l , 1 ,2 e q . ) , a c e t a t o d e p o t a s io ( 0 , 95 g , 9 , 72 m m o l , 3 , 5 e q . ) y ( 1 , 1 ' - b i s ( d i f e n i l f o s f i n o ) f e r r o c e n o ) d i c lo r o p a l a d i o ( 121 m g , 0 , 16 m m o l , 0 , 06 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o ( 10 m L ) . L a m e z c la r e s u l t a n t e s e c a l e n t ó a 80 oC y s e a g i t ó p o r 12 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o ( 1 ,13 g , r e n d im ie n t o : 100 % ) , q u e s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n e l s ig u ie n t e p a s o . Paso E:
Figure imgf000081_0002
N -( 2 -( 4 -( 1 -( 1 - a c r i l o i l p ip e r i d in - 3 - i l ) - 4 - a m in o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) m e t a n o s u l f o n a m id a
Procedim iento:
S e d i s o lv i ó 1 -( 3 -( 4 - a m i n o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m id i n - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 100 m g , 0 ,251 m m o l , 1 ,0 e q . ) , N -( 2 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n - 2 - i l ) f e n o x i ) f e n i l ) m e t a n o s u l f o n a m i d a ( 205 m g , 0 , 502 m m o l , 2 , 0 e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 2 N , 0 , 2 5 m L , 0 , 5 02 m m o l , 2 , 0 e q . ) y P d ( P P h 3)4 ( 29 m g , 0 , 02 5 m m o l , 0 ,1 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o ( 2 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 8 5 oC d u r a n t e 40 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a /N H 4 H C O 3 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 5 m g , r e n d im ie n t o : 4 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 4 5 2 m in ; m / z = 5 52 , 4 [ M H ]+; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 20(*)
Figure imgf000082_0001
N-(3-(4-(1-(1-acriloilpiperidin-3-il)-4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)fenil)metanosulfonamida Paso A:
Figure imgf000082_0002
N-(3-(3-fluoro-4-bromofenoxi)fenil)metanosulfonamida
Procedim iento:
Trietilamina (2,02 g, 20 mmol, 6,0 eq.) y cloruro de metilsulfonilo (1,2 g, 10,6 mmol, 3,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-(3-fluoro-4-bromofenoxi)anilina (1,0 g, 3,54 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (25 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (20 mL) y después se extrajo con diclorometano (25 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1) para dar el compuesto objetivo (1,0 g, rendimiento: 78%).
Paso B:
Figure imgf000082_0003
N-(3-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)fenil)metanosulfonamida
Procedim iento:
Se disolvió N-(3-(3-fluoro-4-bromofenoxi)fenil)metanosulfonamida (640 mg, 1,78 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (496 mg, 1,95 mmol, 1,1 eq.), acetato de potasio (523 mg, 5,33 mmol, 3,0 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropaladio (126 mg, 0,178 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano (10 mL). La mezcla resultante se calentó a 80 oC y se agitó por 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo (0,8 g, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso C:
Figure imgf000083_0001
N-(3-(4-(1-(1-acriloilpiperidin-3-il)-4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)fenil)metanosulfonamida Procedim iento:
Se disolvió 1-(3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (60 mg, 0,150 mmol, 1,0 eq.), N-(3-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)fenil)metanosulfonamida (122 mg, 0,30 mmol, 2,0 eq.), carbonato de sodio (64 mg, 0,6 mmol, 4,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (17 mg, 0,015 mmol, 0,1 eq.) en 1,4-dioxano (6 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se hizo reaccionar a 85oC durante 40 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa, (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (16 mg, rendimiento: 22%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,775 min; m/z = 552,1 [M+H]+; Duración total: 1,5 min.
E jem plo 21(*)
Figure imgf000083_0002
1 -(3-(4-amino-3-(2-1luoro-4-(2.3.6-tr¡fluorofenox¡)fen¡l)-1 H-p¡razoloí3.4-dlp¡r¡m¡d¡n-1 -¡l)p¡peri'di'n-1 -¡l)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
Se agregó 1,2,3,4-fluorobenceno (20 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.) y carbonato de potasio (35 mg, 0,26 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona (50 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.) en DMF (5 mL). La mezcla de reacción se calentó a 100 oC y se agitó durante 4 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo/agua, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (10 mg, rendimiento: 15%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,993 min; m/z = 513,2 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 22(*)
Figure imgf000084_0001
N-((1 S,4S)-4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)acrilamida
Paso A:
SEM
N 'N
i fNN}
H2N
3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se agregó NaH (13,8 g, 345 mmol, 1,5 eq.) a una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 g, 230 mmol, 1,0 eq.) en DMF (1,24 L) y (180 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 min, luego se le agregó SEMCl (42 g, 253 mmol, 1,1 eq.). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, se vació en agua con hielo (500 mL) y se extrajo con acetato de etilo (500 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 10: 1 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (10 g, rendimiento: 44%).
Paso B:
Figure imgf000085_0001
3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se disolvió 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 g, 102 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (50 g, 129 mmol, 1,3 eq.), fosfato de potasio (40 g, 189 mmol, 1,8 eq.) y Pd-118 (3,0 g, 5,0 mmol, 0,05 eq.) en 1,4-dioxano/agua (1400 mL, 5/1, v/v). La solución de reacción se agitó a 60oC durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se extrajo con acetato de etilo (500 mL) 4 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo= 10:1 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (25 g, rendimiento: 46%).
Paso C:
Figure imgf000085_0002
3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento
Se agregó HCl 4M /EtOAc (200 mL) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi) metil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 g, 48 mmol, 1,0 eq.) en acetato de etilo (50 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 14 horas y después se evaporó para eliminar el disolvente bajo presión reducida. Al residuo se le agregó agua (100 mL) y solución saturada de NaHCO3 (100 mL), y luego la mezcla se extrajo con acetato de etilo (300 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (13 g, rendimiento: 69 %).
Paso D:
Figure imgf000085_0003
Metanosulfonato de (1 R,4R)-4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo
Procedimiento:
Trietilamina (7,16 g, 70,7 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (5,4 g, 45 mmol, 2,05 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de (1R,4R)-4-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo (5,08 g, 23,6 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (50 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (60 mL) y después se extrajo con diclorometano (50 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (6,0 g, rendimiento: 87%). Paso E:
Figure imgf000086_0001
Metanosulfonato de (1 R,4R)-4-aminociclohexilo
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M/EtOAc (10 mL) a una solución de metanosulfonato de (1R,4R)-4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo (4 g, 13,63 mmol) en acetato de etilo (40 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se evaporó para eliminar el disolvente para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (3,2 g, rendimiento: 100%).
Paso F:
Figure imgf000086_0002
Metanosulfonato de (1 R,4R)-4-acrilamidociclohexilo
Procedim iento:
Trietilamina (1,03 g, 10,19 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (307 mg, 3,4 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de (1R,4R)-4-aminociclohexilo (780 mg, 3,4 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (15 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (5 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (780 mg, rendimiento: 93%).
Figure imgf000086_0003
N-((1 S,4S)-4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)acrilamida Procedimiento:
Se agregó metanosulfonato de (1R,4R)-4-acrilamidociclohexilo (49 mg, 0,198 mmol, 1,3 eq.) y carbonato de cesio (130,5 mg, 0,305 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,152 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La reacción se agitó a 90 oC durante 4 horas, se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (2 mg, rendimiento: 2%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,816 min; m/z = 544,9 [M+H]+; Duración total: 1,5 min.
Ejem plos 23 y 24
Figure imgf000087_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Figure imgf000087_0002
Paso A:
Figure imgf000087_0003
3-(metilsulfoniloxi)pirrolidin-1-formiato de ter-butilo
Procedimiento:
Trietilamina (4,8 g, 48 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (3,7 g, 32 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-hidroxipirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (3,0 g, 16 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (50 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se apagó con agua (60 mL) y después se extrajo con diclorometano (50 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (4,0 g, rendimiento: 95%).
Paso B:
Figure imgf000088_0001
Metanosulfonato de pirrolidin-3-ilo
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M/EtOAc (10 mL) a una solución de 3-(metilsulfoniloxi)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (4,0 g, 15 mmol) en acetato de etilo (40 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se evaporó para eliminar el disolvente bajo presión reducida, para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (2,5 g, rendimiento: 100%). Paso C:
Figure imgf000088_0002
Metanosulfonato de 1-acriloilpirrolidin-3-ilo
Procedim iento:
Trietilamina (4,5 g, 45 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (1,01 g, 12 mmol, 0,8 eq.) se agregaron subsecuentemente a una solución de metanosulfonato de pirrolidin-3-ilo (2,5 g, 15 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (30 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (5 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,5 g, rendimiento: 83%).
Paso D:
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Figure imgf000089_0001
Procedim iento:
Se agregó metanosulfonato de 1 -acriloilpirrolidin-3-ilo (62 mg, 0,306 mmol, 2,0 eq.) y carbonato de cesio (149 mg, 0,459 mmol, 3,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-fluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,152 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 90 oC durante 4 horas, se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto del ejemplo 23 (18 mg, rendimiento: 11%) y el compuesto del ejemplo 24 (3,5 mg, rendimiento: 2%).
Datos de espectroscopia:
E jem plo 23
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,780 min; m/z = 517,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, CDCh) 68,35 (s, 1H), 7,55-7,48 (m, 1H), 7,10-7,03 (m, 1H), 6,93-6,88 (m, 2H), 6,43-6,39 (m, 1H), 5,73-5,57 (m, 2H), 5,47-5,43 (m, 1H), 4,15-3,96 (m, 3H), 3,82-3,73 (m, 1H), 2,70-2,42 (m, 2H).
E jem plo 24
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,813 min; m/z = 497,0 [M+H]+; Duración total: 1,5 min.
E jem plo 25
Figure imgf000089_0002
N-((1 R,3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)acrilamida Procedimiento:
Se disolvió N-((1R,3R)-3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)acrilamida (70 mg, 0,17 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (135 mg, 0,35 mmol, 2,0 eq.), carbonato de sodio (56 mg, 0,52 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (20 mg, 0,0175 mmol, 0,1 eq) en 1,4-dioxano (10 mL, 1 / 1 , v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 40 min con irradiación de microondas y bajo una atmósfera de nitrógeno, se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (4 mg, rendimiento: 4%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,935 min; m/z = 531,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ate) ó 8,33 (s, 1H), 8,30 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,99-7,90 (m, 1H), 7,60 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,30 (dd, J = 2,4, 10,8 Hz, 1H), 7,14 (dd, J = 2,8, 8,4 Hz, 1H), 6,21-6,17 (m, 1H), 6,08-6,04 (m, 1H), 5,58-5,55 (m, 1H), 5,49-5,41 (m, 1 H), 4,47-4,42 (m, 1H), 2,34-2,25 (m, 3,5H), 2,04-1,96 (m, 1,5H), 1,62-1,59 (m, 1H).
E jem plo 26
Figure imgf000090_0001
N-((1S,3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)acrilamida
Paso A:
Figure imgf000090_0002
4-nitrobenzoato de (1S,3S)-3-(ter-butoxicarbonil)ciclopentilo
Procedimiento:
Se disolvió (1S,3R)-3-hidroxiciclopentilcarbamato (2,25 g, 11,2 mmol, 1,0 eq.), ácido 4-nitrobenzoico (4,67 g, 28,0 mmol, 2,5 eq.) y trifenilfosfina (4,4 g, 16,8 mmol, 1,5 eq.) en tolueno (50 mL) y tetrahidrofurano (12 mL). A la mezcla resultante se le agregó azodiformiato de dietilo (3,0 g, 16,8 mmol, 1,5 eq.). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno y se evaporó para eliminar el disolvente bajo presión reducida. Al residuo se le agregó diclorometano (500 mL) y se agitó por 30 min, después de filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo= 10:1 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (0,6 g, rendimiento: 15%).
Paso B:
Figure imgf000091_0001
(1S,3S)-3-hidroxiciclopentilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó carbonato de potasio (177 mg, 1,28 mmol, 1,5 eq.) a una solución de (1S,3S)-3-(ter-butoxicarbonil)ciclopentil-4-nitrobenzoato (300 mg, 0,86 mmol) en metanol (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (180 mg, rendimiento: 90%).
Paso C:
Figure imgf000091_0002
Metanosulfonato de (1S,3S)-3-(ter-butoxicarbonil)ciclopentilo
Procedim iento:
Trietilamina (180 mg, 1,79 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (204 mg, 1,79 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de (1S,3S)-3-hidroxiciclopentilcarbamato de ter-butilo (180 mg, 0,895 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora, se apagó con agua (5 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (5 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (200 mg, rendimiento: 80%).
Paso D:
Figure imgf000092_0001
(1S,3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (66 mg, 0,202 mmol, 2,0 eq.) y 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0,101 mmol, 1,0 eq.) a una solución de metanosulfonato de (1S,3S)-3-(terbutoxicarbonil)ciclopentilo (56 mg, 0,202 mmol, 2,0 eq.) en DMF (1 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo= 1:1) para dar el compuesto objetivo (9 mg, rendimiento: 15%).
Paso E:
Figure imgf000092_0002
1-((1 R,3S)-3-aminociclopentil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (1,0 mL) a una solución de (1S,3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo (9 mg, 0,015 mmol) en acetato de etilo (1 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (8 mg, rendimiento: 100%).
Paso F:
Figure imgf000093_0001
N-((1S,3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)acrilamida
Procedim iento:
Se agregó gota a gota trietilamina (3,0 mg, 0,03 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de acriloilo (1,5 mg, 0,017 mmol, 1,1 eq.) a una solución de 1 -((1 R,3S)-3-aminociclopentil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (8 mg, 0,015 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (1 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora, se apagó con agua (5 mL) y después se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (1,0 mg, rendimiento: 12%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,424 min; m/z = 531,2 [M+H]+; Duración total: 3 min.
E jem plo 27
Figure imgf000093_0002
1-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona Procedimiento:
Se agregó carbonato de potasio (42 mg, 0,304 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 1 -acriloilpiperidin-4-ilo (71 mg, 0,304 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,152 mmol, 1,0 eq.) en DMF (1 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)) para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (1,1 mg, rendimiento: 1,3%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,834 min; m/z = 531,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 28(*)
Figure imgf000094_0001
N-((3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)metil)acrilamida
Paso A:
Figure imgf000094_0002
3-(nitrometil)ciclopentanol
Procedim iento:
Se agregó NaBHU (1,06 g, 27,94 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(nitrometil)ciclopentanona (2,0 g, 14,0 mmol, 1,0 eq.) en metanol (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas, se apagó con agua (2 mL), se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,0 g, rendimiento: 98%).
Paso B:
Figure imgf000095_0001
3-(aminometil)ciclopentanol
Procedim iento:
Se agregó níquel de Raney (200 mg, 10%) a una solución de 3-(nitrometil)ciclopentanol (2,0 g, 13,8 mmol, 1,0 eq.) en etanol (30 mL) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se desgasificó con hidrógeno tres veces y luego se agitó a 50 oC bajo hidrógeno (344,74 kPa) durante 12 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (1,5 g, rendimiento: 94%).
Paso C:
Figure imgf000095_0002
(3-hidroxiciclopentil)metilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó (Boc)2O (3,1 g, 14,33 mmol, 1,1 eq.) y trietilamina (3,95 g, 39,07 mmol, 3,0 eq.) a una solución de 3-(aminometil)ciclopentanol (1,5 g, 13,0 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se agitó durante 12 horas a 20 oC, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:07:3) para dar el compuesto objetivo (0,7 g, rendimiento: 25%).
Paso D:
Figure imgf000095_0003
Metanosulfonato de 3-((ter-butoxicarbonil)metil)ciclopentilo
Procedim iento:
Trietilamina (0,98 g, 9,75 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (0,74 g, 6,5 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de (3-hidroxiciclopentil)metilcarbamato de ter-butilo (0,7 g, 3,25 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (25 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (20 mL), después se extrajo con diclorometano (20 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (0,76 g, rendimiento: 80%).
Paso E:
Figure imgf000096_0001
Metanosulfonato de 3-(aminometil)ciclopentilo
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (10 mL) a una solución de metanosulfonato de 3-((ter-butoxicarbonil)metil)ciclopentilo (760 mg, 2,59 mmol) en diclorometano (20 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (590 mg, rendimiento: 100%). Paso F:
Figure imgf000096_0002
Metanosulfonato de 3-(acrilamidometil)ciclopentilo
Procedim iento:
Trietilamina (530 mg, 5,3 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de acriloilo (280 mg, 3,2 mmol, 1,2 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de 3-(aminometil)ciclopentilo (590 mg, 2,6 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (15 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (400 mg, rendimiento: 60%).
Paso G:
Figure imgf000096_0003
N-((3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)metil)acrilamida Procedimiento:
Se agregó carbonato de potasio (98 mg, 0,712 mmol, 4,0 eq.) y metanosulfonato de 3-(acrilamidometil)ciclopentilo (131 mg, 0,534 mmol, 3,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0,178 mmol, 1,0 eq.) en DMF (1 mL). La mezcla de reacción se agitó a 90oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)) para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (1,6 mg, rendimiento: 0,6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,920 min; m/z = 545,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 29(*)
Figure imgf000097_0001
1 -(3-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)metil)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000097_0002
Boc
3-(hidroximetil)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó, gota a gota, BH3 (1 M, 90 mL, 90 mmol, 3,0 eq.) a una solución de ácido 1-(ter-butoxicarbonil)pirrolidin-3-carboxílico (6,45 g, 30 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (30 mL) a 0 oC. Después de terminar con la adición, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se calentó a 45 oC y se agitó por 2 horas. La mezcla de reacción se apagó con HCl (3N, 5 mL) a 0 oC, se diluyó con agua (100 mL), y después se extrajo con acetato de etilo (200 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se lavó con una solución saturada de NaHCÜ3 (100 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (4,0 g, rendimiento: 67%).
Paso B:
/ Boc
Figure imgf000097_0003
3-((metilsulfoniloxi)metil)pirrolidin-1-formiato de ter-butilo
Procedimiento:
Trietilamina (3,02 g, 30,0 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (2,28 g, 20 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-(hidroximetil)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (0,7 g, 3,25 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora, se apagó con agua (20 mL) y se separó, en donde la fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,5 g, rendimiento: 90%).
Paso C:
Figure imgf000098_0001
Metanosulfonato de pirrolidin-3-ilmetilo
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (10 mL) a una solución de 3-((metilsulfoniloxi)metil)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (2,5 g, 8,9 mmol) en acetato de etilo (40 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (1,9 g, rendimiento: 100%).
Paso D:
Figure imgf000098_0002
Metanosulfonato de (1-acriloilpirrolidin-3-il)metilo
Procedim iento:
Trietilamina (2,7 g, 26,7 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (0,97 g, 10,7 mmol, 1,1 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de pirrolidin-3-ilmetilo (1,9 g, 8,9 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (30 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL) y se separó, en donde la fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (1,5 g, rendimiento: 65%).
Paso E:
Figure imgf000098_0003
1-(3-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona Procedimiento:
Se agregó carbonato de potasio (42 mg, 0,305 mmol, 2,0 eq.) y 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,152 mmol, 1,0 eq.) a una solución de DEV-007-032-I5 (46 mg, 0,198 mmol, 1,3 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 90 oC durante 4 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (6 mg, rendimiento: 7%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,891 min; m/z = 531,2 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 30(*)
Figure imgf000099_0001
1-(4-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Paso A:
Figure imgf000099_0002
Boc
4-(hidroximetil)piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Una solución de LiAlH4 (520 mg, 0,013 mmol, 0,7 eq.) en tetrahidrofurano (15 mL) se agregó, gota a gota, a una solución de 4-etil piperidin-1,4-diformiato de ter-butilo (5,0 g, 19,0 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (15 mL) a 0 oC. Después de terminar con la adición, la mezcla de reacción se agitó a 0oC durante 2 horas. La mezcla de reacción se apagó con agua (1 mL) y después se le agregó NaOH a 15% (1 mL). Después de agitar durante 10 min se agregó agua (1 mL) a la mezcla resultante, y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro por 30 min. La mezcla se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (4,0 g, rendimiento: 96%).
Paso B:
Figure imgf000100_0001
4-((metilsulfoniloxi)metil)piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Trietilamina (3,76 g, 37,2 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (3,19 g, 27,9 mmol, 1,5 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 4-(hidroximetil)piperidin-1-formiato de ter-butilo (4,0 g, 18,6 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (25 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 14 horas, se apagó con agua (20 mL), después se extrajo con diclorometano (50 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (4,5 g, rendimiento: 83%).
Paso C:
Figure imgf000100_0002
Metanosulfonato de piperidin-4-ilmetilo
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (20 mL) a una solución de 4-((metilsulfoniloxi)metil)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (4,5 g, 13,5 mmol) en diclorometano (20 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (3,5 g, rendimiento: 95%).
Paso D:
Figure imgf000100_0003
Metanosulfonato de (1-acriloilpiperidin-4-il)metilo
Procedimiento:
Trietilamina (4,63 g, 45,7 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (1,38 g, 15,2 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de piperidin-4-ilmetilo (3,5 g, 15,2 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (15 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas y luego se apagó con agua (60 mL). La capa acuosa se extrajo con diclorometano (100 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,5 g, rendimiento: 66%).
Paso E:
Figure imgf000101_0001
1 -(4-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)metil)piperidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
Se agregó carbonato de potasio (42 mg, 0,304 mmol, 2,0 eq.) y 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,152 mmol, 1,0 eq.) a una solución de metanosulfonato de (1 -acriloilpiperidin-4-il)metilo (75 mg, 0,304 mmol, 2,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (5 mg, rendimiento: 6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,820 min; m/z = 545,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 31(*)
Figure imgf000102_0001
1-(3-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona
Paso A:
/ Boc
Figure imgf000102_0002
3-(hidroximetil)piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó LiAlH4 (580 mg, 15,3 mmol, 0,7 eq.) a una solución de ácido 1-(ter-butoxicarbonil)piperidin-3-carboxílico (5,0 g, 21,8 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (30 mL) a 0 oC. Después de terminar con la adición, la mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 12 horas. La reacción se apagó con agua (1 mL) y después se le agregó NaOH a 15% (1 mL). Después de agitar la mezcla resultante por 10 min a temperatura ambiente, le agregó agua (1 mL) y la mezcla resultante se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró a través de celite, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (3,9 g, rendimiento: 93%).
Paso B:
Boc
Figure imgf000102_0003
3-((metilsulfoniloxi)metil)piperidin-1-formiato de ter-butilo
Procedimiento:
Trietilamina (1,9 g, 18,6 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (2,12 g, 18,6 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-(hidroximetil)piperidin-1-formiato de ter-butilo (2,0 g, 18,6 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora, se apagó con agua (20 mL), se separó, y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,5 g, rendimiento: 92%).
Paso C:
Figure imgf000103_0001
Metanosulfonato de piperidin-3-ilmetilo
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (10 mL) a una solución de 3-((metilsulfoniloxi)metil)piperidin-1 -formiato de ter-butilo (2,5 g, 8,5 mmol) en acetato de etilo (40 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (1,93 g, rendimiento: 98%).
Paso D:
Figure imgf000103_0002
Metanosulfonato de (1-acriloilpiperidin-3-il)metilo
Procedim iento:
Trietilamina (1,67 g, 16,6 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de acriloilo (0,82 g, 9,1 mmol, 1,1 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de piperidin-3-ilmetilo (1,93 g, 8,3 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (30 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (1,5 g, rendimiento: 71%).
Paso E:
Figure imgf000103_0003
1-(3-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-ona Procedimiento:
Se agregó carbonato de cesio (99 mg, 0,304 mmol, 2,0 eq.) y 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,152 mmol, 1,0 eq.) a una solución de metanosulfonato de (1 -acriloilpiperidin-3-il)metilo (75 mg, 0,304 mmol, 2,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (2 mg, rendimiento: 2%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,947 min; m/z = 545,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 32(*)
Figure imgf000104_0001
N-(3-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)ciclopentil)acrilamida
Paso A:
Figure imgf000104_0002
Cloruro de 3-oxociclopentanocarbonilo
Procedim iento:
Se agregó DMF (3 gotas) y cloruro de oxalilo (3,8 g, 30 mmol, 3,0 eq.), gota a gota, a ácido 3-oxo-1-ciclopentanocarboxílico (1,28 g, 10 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (30 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (1,2 g, rendimiento: 82%).
Paso B:
Figure imgf000105_0001
3-oxociclopentanoformiato de etilo
Procedim iento:
Trietilamina (3,8 g, 30 mmol, 2,0 eq.) y etanol (754 mg, 16,37 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de cloruro de 3-oxociclopentanocarbonilo (1,28 g, 8,2 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se apagó con agua (20 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (0,6 g, rendimiento: 47%).
Paso C:
Figure imgf000105_0002
3-(2,4-dimetoxibencilamino)ciclopentanoformiato de etilo
Procedim iento:
Se agregó 2,4-dimetoxibencil amina (556 mg, 4,66 mmol, 1,0 eq.), triacetoxiborohidruro de sodio (446 mg, 3,32 mmol, 1,4 eq.) y ácido acético (200 mg, 3,32 mmol, 1,0 eq.) a una solución de 3-oxociclopentanoformiato de etilo (520 mg, 3,32 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (5 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (250 mg, rendimiento: 44 %).
Paso D:
Figure imgf000105_0003
(3-(2,4-dimetoxibencilamino)ciclopentil)metanol
Procedimiento:
Se agregó L iA lH (17 mg, 0,445 mmol, 0,7 eq.) a una solución de 3-(2,4-dimetoxibencilamino)ciclopentanoformiato de etilo (200 mg, 0,65 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (5 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas, se apagó con agua (0.2 mL), y después se le agregó NaOH a 15% (0,2 mL). Después de agitar la mezcla resultante por 10 min a temperatura ambiente, se le agregó agua (0,6 mL). La mezcla resultante se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, después se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (150 mg, rendimiento: 87%).
Paso E:
Figure imgf000106_0001
Metanosulfonato de (3-(2,4-dimetoxibencilamino)ciclopentil)metilo
Procedim iento:
Trietilamina (171 mg, 1,7 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (129 mg, 1,13 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de (3-(2,4-dimetoxibencilamino)-ciclopentil)metanol (150 mg, 0,566 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (10 mL) y después se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (194 mg, rendimiento: 100%).
Paso F:
Figure imgf000106_0002
Metanosulfonato de (3-(N-(2,4-dimetoxibencil)acrilamido)ciclopentil)metilo
Procedimiento:
Trietilamina (220 mg, 2,18 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (79 mg, 0,873 mmol, 1,2 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de (3-(2,4-dimetoxibencilamino)ciclopentil)metilo (250 mg, 0,727 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora, y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (200 mg, rendimiento: 69%).
Paso G:
Figure imgf000107_0001
N-(2,4-dimetoxibencil)-N-(3-((4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)ciclopentil)acrilamida Procedim iento:
Se agregó carbonato de potasio (79 mg, 0,57 mmol, 2,5 eq.) y 3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,23 mmol, 1,0 eq.) a una solución de metanosulfonato de (3-(N-(2,4-dimetoxibencil)acrilamido)ciclopentil)metilo (137 mg, 0,34 mmol, 1,5 eq.) en DMF (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 90 oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:3) para dar el compuesto objetivo (60 mg, rendimiento: 62%).
Paso H:
Figure imgf000107_0002
N-(3-((4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)ciclopentil)acrilamida Procedim iento:
Se agregó Et3SiH (0,5 mL) a una solución de N-(2,4-dimetoxibencil)-N-(3-((4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)ciclopentil)acrilamida (60 mg, 0,14 mmol, 1,0 eq.) en ácido trifluoroacético (3 mL). La mezcla de reacción se puso a reflujo y se agitó por 3 horas, y después se evaporó para eliminar el disolvente bajo presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (10 mL), se lavó una vez respectivamente con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL) y con salmuera (10 mL), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:3) para dar el compuesto objetivo (15 mg, rendimiento: 35%).
Paso I:
Figure imgf000108_0001
N-(3-((4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]
pirimidin-1 -il)metil)ciclopentil)acrilamida
Procedim iento:
La N-(3-((4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)ciclopentil)acrilamida (15 mg, 0,036 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (21 mg, 0,054 mmol, 1,5 eq.), carbonato de potasio (17 mg, 0,127 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (4 mg, 0,0036 mmol, 0,1 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano (8 mL, 3/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 30 min con irradiación de microondas, bajo una atmósfera de nitrógeno; se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó con sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el producto crudo que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:3) para dar el compuesto objetivo (5 mg, rendimiento: 40%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,810 min; m/z = 545,0 [M+H]+; Duración total: 1,5 min.
Ejemplos 33 y 34
Figure imgf000108_0002
1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)prop-2-en-1-ona
Figure imgf000109_0001
1 -( ( S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 -o n a
Procedim iento:
L a 1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 -o n a ( 750 m g ) s e s e p a r ó q u i r a lm e n t e p o r S F C ( C h i r a l c e l O J , 20 p m ; C O 2 s u p e r c r í t ic o : C 2 H 5 O H ( 0 , 2 % D E A ) , v / v , 200 m l / m in ) , p a r a d a r 1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) p r o p -2 - e n - 1 - o n a ( 280 m g , e e : 100 % ) y 1 -( ( S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 330 m g , e e : 98 % ) .
Datos de espectroscopia:
E jem plo 33
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 002 m in ; m / z = 531 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C h ) 6 8 , 3 6 ( s , 1 H ) , 7 , 5 8 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 0 9 - 7 , 0 4 ( m , 1 H ) , 6 , 9 4 - 6 , 8 8 ( m , 2 H ) , 6 , 6 2 - 6 , 5 4 ( m , 1 H ) , 6 , 32 - 6 , 25 ( m , 1 H ) , 5 , 73 - 5 , 63 ( m , 1 H ) , 5 , 56 - 5 ,51 ( m , 1 H ) , 4 , 90 - 4 , 85 ( m , 1 , 5 H ) , 4 , 59 - 4 , 56 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 21 - 4 , 17 ( m , 0 , 5 H ) , 4.04 - 4 ,01 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 76 - 3 ,71 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 40 - 3 , 35 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 22 - 3 , 15 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 93 - 2 , 87 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 39 - 2 , 27 ( m , 2 H ) , 2 .04 - 1 , 68 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 34
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 006 m in ; m / z = 531 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 24 ( s , 1 H ) , 7 , 62 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 50 - 7 , 45 ( m , 1 H ) , 7 ,09 - 7 ,01 ( m , 2 H ) , 6 , 85 - 6 , 63 ( m , 1 H ) , 6 , 21 - 6 , 09 ( m , 1 H ) , 5 , 77 - 5 ,61 ( m , 1 H ) , 4 , 63 - 4 , 59 ( m , 1 H ) , 4 , 23 - 4 , 07 ( m , 1 ,5 H ) , 3 , 90 - 3 , 85 ( m , 0 , 5 H ) , 3 ,51 - 3 , 45 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 34 - 3 , 17 ( m , 1 , 5 H ) , 2 , 40 - 2 , 23 ( m , 2 H ) , 2 , 08 - 2 , 05 ( m , 1 H ) , 1 ,75 - 1 ,71 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 35(*)
Figure imgf000110_0001
1-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-1 H-pirrol-2,5-diona Paso A:
Figure imgf000110_0002
Metanosulfonato de 4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo
Procedim iento:
T rietilamina (9,4 g, 92 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (10,5 g, 92 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 4-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo (10 g, 46 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (100 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (50 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (30 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (11 g, rendimiento: 80%).
Paso B:
B o c
N H
Figure imgf000110_0003
4-(4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo Procedimiento:
Se agregó carbonato de cesio (5,0 g, 15,3 mmol, 2,0 eq) y metanosulfonato de 4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo (4,5 g, 15,3 mmol, 2,0 eq) a una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (2,0 g, 7,66 mmol, 1,0 eq.) en DMF (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 12 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró, y la torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (1.1 g, rendimiento: 31%).
Paso C:
Figure imgf000111_0001
4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se disolvió 4-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo (0,82 g, 1,79 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,0 g, 2,69 mmol, 1,5 eq.), fosfato de potasio (0,76 g, 3,68 mmol, 2,0 eq.) y Pd-118 (58 mg, 0,089 mmol, 0,05 eq.) en 1,4-dioxano/agua (10 mL, 5/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La solución de reacción se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:3) para dar el compuesto objetivo (800 mg, rendimiento: 80%).
Paso D:
Figure imgf000111_0002
1-(4-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedimiento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo (800 mg, 1,35 mmol) en acetato de etilo (10 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (600 mg, rendimiento: 90%).
Paso E:
Figure imgf000112_0001
Ácido 4-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilamino)-4-oxobut-2-enoico
Procedim iento:
Una mezcla de trietilamina (41 mg, 0,408 mmol, 2,0 eq.) y anhídrido maleico (20 mg, 204 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (0,2 mL) se agregó, gota a gota, a una solución de 1-(4-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,204 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (1 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (10 mL) y después se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (100 mg, rendimiento: 83%).
Paso F:
Figure imgf000112_0002
1-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-1 H-pirrol-2,5-diona Procedimiento:
El ácido 4-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilamino)-4-oxobut-2-enoico (50 mg, 0,085 mmol, 1,0 eq.) se disolvió en PPA (0,5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 110 oC durante 4 horas y después se vació en agua con hielo (5 mL) para apagar la reacción. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente de elución 10% a 100% (proporción en volumen)); se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida para dar el compuesto objetivo (1,5 mg, rendimiento: 3%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,399 min; m/z = 571,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 36(*)
Figure imgf000113_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-1 H-pirrol-2,5-diona
Paso A:
Figure imgf000113_0002
3-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó borohidruro de sodio (710 mg, 18,8 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-oxociclohexilcarbamato de ter-butilo (2,0 g, 9,38 mmol, 1,0 eq.) en metanol (20 mL) a 0 oC. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró para dar el compuesto objetivo (2,0 g, rendimiento: 100%).
Paso B:
Figure imgf000114_0001
Metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo
Procedim iento:
Trietilamina (1,41 g, 13,9 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (798 mg, 6,97 mmol, 1,5 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo (1,0 g, 4,64 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL), después se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (1,36 g, rendimiento: 100%).
Paso C:
Boc
Figure imgf000114_0002
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (116 mg, 0,356 mmol, 2,0 eq) y metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo (105 mg, 0,356 mmol, 2,0 eq) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0,178 mmol, 1,0 eq.) en DMF (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (35 mg, rendimiento: 33%).
Paso D:
Figure imgf000115_0001
1-(3-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (2 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo (34 mg, 0,058 mmol, 1,0 eq.) en acetato de etilo (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (30 mg, rendimiento: 100%).
Paso E:
Figure imgf000115_0002
Ácido 4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilamino)-4-oxobut-2-enoico
Procedim iento:
Una mezcla de trietilamina (29,3 mg, 0,29 mmol, 5,0 eq.) y anhídrido maleico (5,69 mg, 0,058 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (0,2 mL) se agregó, gota a gota, a una solución de 1-(3-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0,058 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (10 mL) y después se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (16 mg, rendimiento: 47%).
Paso F:
Figure imgf000116_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-1 H-pirrole-2,5-diona
Procedim iento:
El ácido 4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilamino)-4-oxobut-2-enoico (16 mg, 0,028 mmol, 1,0 eq.) se disolvió en PPA (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 110 oC durante 16 horas y después se vació en agua con hielo (10 mL) para apagar la reacción. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente de elución 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el compuesto objetivo (0,8 mg, rendimiento: 5%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,429 min; m/z = 571,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 37(*)
Figure imgf000116_0002
1 -((1 S,3S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentil)-1 H-pirrol-2,5-diona
Paso A:
Figure imgf000117_0001
(1S,4R)-4-hidroxiciclopent-2-enilcarbam ato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó Mo(Co)6 (1,6 g, 6,08 mmol, 1,0 eq.) a una solución de 3-oxa-2-aza-biciclo[2.2.1]hept-5-eno-2-formiato de terbutilo (6,0 g, 30,4 mmol, 5,0 eq.) en acetonitrilo /agua (10 mL, 20/1, v/v). A la solución anterior se le agregó borohidruro de sodio (2,3 g, 60,8 mmol, 10,0 eq.) en una porción a 30 oC. La mezcla de reacción se agitó a 60 oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:01:1) para dar el compuesto objetivo (2,0 g, rendimiento: 33%).
Paso B:
Figure imgf000117_0002
(1R,3S)-3-hidroxiciclopentilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
El (1S,4R)-4-hidroxiciclopent-2-enilcarbamato de ter-butilo (2,0 g, 10 mmol) se disolvió en metanol (20 mL); el matraz de reacción se desgasificó con nitrógeno tres veces. A la mezcla anterior se le agregó Pd 10% /C (0,2 g, 10%, p/p) y luego se desgasificó con hidrógeno tres veces. La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno (1 atm) por 14 horas, y se filtró a través de celite. El filtrado se concentró para dar el compuesto objetivo (1,9 g, rendimiento: 95%).
Paso C:
Figure imgf000117_0003
Metanosulfonato de (1S,3R)-3-(ter-butoxicarbonil)ciclopentilo
Procedimiento:
Trietilamina (350 mg, 3,48 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (397 mg, 3,48 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de (1R,3S)-3-hidroxiciclopentilcarbamato de ter-butilo (350 mg, 1,74 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (400 mg, rendimiento: 83%).
Paso D:
Figure imgf000118_0001
(1 S,3S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (160 mg, 0,508 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de (1 S,3R)-3-(terbutoxicarbonil)ciclopentilo (150 mg, 0,508 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,254 mmol, 1,0 eq.) en DMF (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 12 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (60 mg, rendimiento: 41%).
Paso E:
Figure imgf000118_0002
1-((1S,3S)-3-aminociclopentil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedimiento:
Se agregó HCl 4M /AE (2 mL) a una solución de (1S,3S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclopentilcarbamato de ter-butilo (60 mg, 0,104 mmol) en acetato de etilo (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (41 mg, rendimiento: 82%).
Paso F:
Figure imgf000119_0001
Ácido 4-((1 S,3S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)ciclopentilamino)-4-oxo-but-2-enoico
Procedim iento:
Una mezcla de trietilamina (16 mg, 0,16 mmol, 2,0 eq.) y anhídrido maleico (8 mg, 0,08 mmol, 1,1 eq.) en diclorometano (0,2 mL) se agregó, gota a gota, a una solución de 1-((1S,3S)-3-aminociclopentil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (41 mg, 0,08 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (0,5 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14 horas, se apagó con agua (10 mL) y después se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (40 mg, rendimiento: 87%).
Paso G:
Figure imgf000119_0002
1 -((1 S,3S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)ciclopentil)-1 H-pirrole-2,5-diona
Procedimiento:
Ácido 4-((1 S,3S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)ciclopentilamino)-4-oxo-but-2-enoico (40 mg, 0,069 mmol, 1,0 eq.) se disolvió en PPA (0,5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 110 oC durante 4 horas y luego se vació en agua con hielo (10 mL) para apagar la reacción. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente de elución 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (0,7 mg, rendimiento: 2%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,370 min; m/z = 557,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 38(*)
Figure imgf000120_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil)-1 H-pirrol-2,5-diona
Paso A:
M sO ^^\_„NHBoc
Metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)propilo
Procedim iento:
Trietilamina (4,5 g, 44,6 mol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (3,37 g, 29,6 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)propilo (2,6 g, 14,8 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (30 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (50 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (50 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,7 g, rendimiento: 100%).
Paso B:
Figure imgf000121_0001
3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p r o p i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o Procedim iento:
S e a g r e g ó c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 60 m g , 0 , 44 m m o l , 3 , 0 e q . ) y m e t a n o s u l f o n a t o d e 3 -( t e r - b u t o x ic a r b o n i l ) p r o p i l o ( 140 m g , 0 , 553 m m o l , 3 , 6 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a ( 60 m g , 0 , 153 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D M F (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 90 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e e n f r ió a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e y s e f i l t r ó . L a t o r t a d e l f i l t r o s e la v ó c o n a c e t a t o d e e t i l o . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e l g a d a ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 50 m g , r e n d im ie n t o : 61 % ) .
Paso C:
Figure imgf000121_0002
1 -( 3 - a m in o p r o p i l ) - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m in a Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E (2 m L ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p r o p i l c a r b a m a t o d e t e r - b u t i l o ( 50 m g , 0 , 09 m m o l) e n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 0 , 5 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n , p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 42 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso D:
Figure imgf000122_0001
Ácido 4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propilamino)-4-oxo-but-2-enoico
Procedim iento:
Una mezcla de trietilamina (33 mg, 0,33 mmol, 3,0 eq.) y anhídrido maleico (11 mg, 0,11 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (0,2 mL) se agregó, gota a gota, a una solución de 1-(3-aminopropil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,11 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (5 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, se apagó con agua (10 mL) y después se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (60 mg, rendimiento: 100%).
Paso E:
Figure imgf000122_0002
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil)-1 H-pirrol-2,5-diona
Procedim iento:
Ácido 4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propilamino)-4-oxo-but-2-enoico (450 mg, 1,28 mmol, 1,0 eq.) se disolvió en PPA (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a 120 oC durante 4 horas bajo nitrógeno y después se vació en agua con hielo (10 mL) para apagar la reacción. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente de elución 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida para dar el compuesto objetivo (3,5 mg, rendimiento: 6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,902 min; m/z = 531,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 39(*)
Figure imgf000123_0001
Paso A:
Figure imgf000123_0002
Metanosulfonato de 4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo
Procedim iento:
T rietilamina (9,3 g, 92 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (10,5 g, 92 mmol, 2,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 4-hidroxiciclohexilcarbamato de ter-butilo (10,0 g, 46 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (100 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 14 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (10 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (200 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (11 g, rendimiento: 81 %).
Paso B:
Figure imgf000123_0003
4-(4-amino-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo Procedimiento:
Se agregó carbonato de cesio (4,9 g, 15,3 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 4-(ter-butoxicarbonil)ciclohexilo (4,5 g, 15,3 mmol, 2,0 eq) a una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (2,0 g, 7,66 mmol, 1,0 eq.) en DMF (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 12 horas, se filtró a través de celite, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 4:1), para dar el compuesto objetivo (1,1 g, rendimiento: 31%).
Paso C:
Figure imgf000124_0001
4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se disolvió 4-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo (0,82 g, 1,79 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,0 g, 2,69 mmol, 1,5 eq.), fosfato de potasio (0,76 g, 3,68 mmol, 2,0 eq.) y Pd-118 (58 mg, 0,089 mmol, 0,05 eq.) en 1,4-dioxano/agua (9 mL, 5/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vació en hielo-agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 4 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (0,8 g, rendimiento: 80%).
Paso D:
Figure imgf000124_0002
1-(4-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexilcarbamato de ter-butilo (800 mg, 1,35 mmol) en acetato de etilo (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (600 mg, rendimiento: 90%).
Paso E:
Figure imgf000125_0001
Ácido 2-(tritiltio)acético
Procedim iento:
A una solución de ácido tioglicólico (0,92 g, 10 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (30 mL) y ácido acético (6 mL) se le agregó, gota a gota, cloruro de trifenilmetilo (2,79 g, 10 mol, 1,0 eq.) y BF3. Et2Ü (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se evaporó para eliminar el disolvente bajo presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (30 mL), se lavó 1 vez respectivamente con agua (20 mL) y con salmuera (20 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,8 g, rendimiento: 84%).
Paso F:
Figure imgf000125_0002
N-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-2-(tritiltio)acetamida Procedim iento:
Ácido 2-(tritiltio)acético (65 mg, 0,195 mmol, 1,2 eq.), DIPEA (42 mg, 0,326 mmol, 2,0 eq.) y HATU (139 mg, 0,244 mmol, 1,5 eq.) se agregaron a una solución de 1 -(4-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (80 mg, 0,163 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se diluyó con diclorometano (30 mL), se lavó 1 vez respectivamente con agua (20 mL) y con salmuera (20 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (80 mg, rendimiento: 62%).
Paso G:
Figure imgf000126_0001
Procedim iento:
Se agregó Et3SiH (2 gotas) a una solución de N-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-2-(tritiltio)acetamida (80 mg, 0,1 mmol) en TFA (0,5 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se apagó con agua (10 mL), se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), para dar el compuesto objetivo (5 mg, rendimiento: 4%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,442 min; m/z = 564,5 [M/2]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 40(*)
Figure imgf000126_0002
3-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)tiazolidin-2,4-diona Paso A:
Figure imgf000127_0001
1-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-3-feniltiourea
Procedim iento:
Se agregó isotiocianato de fenilo (24,8 mg, 0,184 mmol, 0,9 eq.) a una solución de 1-(4-aminociclohexil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,204 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (100 mg, rendimiento: 79%).
Paso B:
Figure imgf000127_0002
3-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-2-(fenilimino)tiazolidin-4-ona
Procedim iento:
Se agregó ácido cloroacético (17,4 mg, 0,184 mmol, 2,3 eq. ) y acetato de sodio (3,94 mg, 0,048 mmol, 0,6 eq.) a una solución de 1 -(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)-3-feniltiourea (50 mg, 0,08 mmol, 1,0 eq.) en etanol (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a 110 oC por 6 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1), para dar el compuesto objetivo (20 mg, rendimiento: 38%).
Paso C:
Figure imgf000128_0001
3-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)ciclohexil)tiazolidin-2,4-diona
Procedim iento:
Una solución de 3-(4-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)ciclohexil)-2-(fenilimino)tiazolidin-4-ona (20 mg, 0,03 mmol) en HCl concentrado (5 mL) se agitó a 110 oC durante 6 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (2 mg, rendimiento: 12%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,794 min; m/z = 591,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 41
Figure imgf000128_0002
(E)-4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)-4-oxo-but-2-enamida
Procedimiento:
La 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (48 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.), DIPEA (26 mg, 0,2 mmol, 2,0 eq.) y HATU (50 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq.) se agregaron a una solución de ácido (E)-4-amino-4-oxo-but-2-enoico (15 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, se diluyó con diclorometano (30 mL), se lavó 1 vez respectivamente con una solución saturada de NaHCO3 (20 mL) y con salmuera (20 mL). La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (5 mg, rendimiento: 10%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,791 min; m/z = 574,0 [M+H]+ ; Duración total: 1,5 min.
E jem plo 42
Figure imgf000129_0001
(E)-4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1 -il)-N-metil-4-oxobut-2-enamida
Paso A:
Figure imgf000129_0002
Ácido (E)-4-(metilamino)-4-oxo-but-2-enoico
Procedim iento:
Una solución de anhídrido maleico (500 mg, 5,1 mmol, 1,0 eq.) en metilamina (solución 2M en tetrahidrofurano, 10 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (658 mg, rendimiento: 100%).
Paso B:
Figure imgf000130_0001
( E ) - 4 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - N - m e t i l - 4 - o x o -b u t - 2 - e n a m id a
Procedim iento:
Figure imgf000130_0002
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 723 m in ; m /z = 588 , 2 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , D M S O - a fe ) 6 8 , 59 - 8 , 53 ( m , 1 H ) , 8 , 25 - 8 , 20 ( m , 1 H ) , 7 , 97 - 7 , 92 ( m , 1 H ) , 7 , 65 - 7 , 57 ( m , 1 H ) , 7 , 34 - 7 ,31 ( m , 1 H ) , 7 ,1 6 - 7 , 12 ( m , 1 H ) , 6 , 41 - 6 , 28 ( m , 1 H ) , 6 , 06 - 5 , 95 ( m , 1 H ) , 5 , 00 - 4 , 80 ( m , 1 .5 H ) , 4 , 61 - 4 , 58 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 35 - 4 , 32 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 90 - 3 , 87 ( m , 1 H ) , 3 , 69 - 3 , 66 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 52 - 3 , 49 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 15 - 3 , 09 ( m , 1 H ) , 2 , 66 - 2 , 64 ( m , 3 H ) , 2 , 53 - 2 , 47 ( m , 2 H ) , 2 , 16 ­ 2 , 12 ( m , 1 H ) , 1 ,75 - 1 ,71 ( m , 1 H ) .
Ejemplo 43
N -[ 3 -[ 4 - a m in o - 3 -[ 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t r i f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ] - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ] p ip e r id in - 1 - c a r b o n i l ] f o r m a m id in a Procedim iento:
Figure imgf000131_0001
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) b u t a n o - 1 , 3 - d io n a
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m in a ( 48 m g , 0 ,1 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t o lu e n o (3 m L ) s e le a g r e g ó a c e t o a c e t a t o d e t e r - b u t i l o ( 24 m g , 0 , 15 m m o l , 1 , 5 e q . ) y t r i e t i l a m in a ( 30 m g , 0 , 3 m m o l , 3 , 0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 90 ° C d u r a n t e 16 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d i e n t e 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 15 m g , r e n d im ie n t o : 27 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 778 m in ; m /z = 561 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 45
Figure imgf000132_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 -o n a
Método 1:
Paso A:
Figure imgf000132_0002
3 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) - 1 , 2 , 4 , 5 - t e t r a f l u o r o b e n c e n o
Procedim iento:
S e a g r e g ó c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 34 , 0 g , 246 m m o l , 2 , 0 e q . ) y 1 , 2 , 3 , 4 , 5 - p e n t a f l u o r o f e n i l o ( 24 , 8 g , 147 m m o l , 1 , 2 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o l ( 23 , 5 g , 123 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D M F ( 250 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 100 oC d u r a n t e la n o c h e y s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a . E l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a c e t a t o d e e t i lo y a g u a y s e s e p a r ó . L a f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 200 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 39 g , r e n d im ie n t o : 93 % ) .
Paso B:
Figure imgf000132_0003
2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o Procedimiento:
E l 3 -( 3 - f lu o r o - 4 - b r o m o f e n o x i ) - 1 , 2 , 4 , 5 - t e t r a f l u o r o b e n c e n o ( 36 , 5 g , 107 , 6 m m o l , 1 ,0 e q . ) , b i s ( p in a c o la t o ) d ib o r o ( 32 , 8 g , 129 ,2 m m o l , 1 , 2 e q . ) , a c e t a t o d e p o t a s io ( 37 g , 377 m m o l , 3 , 5 e q . ) y ( 1 , 1 ' - b is ( d i f e n i l f o s f i n o ) f e r r o c e n o ) d i c lo r o p a l a d i o ( 4 ,7 g , 6 , 45 m m o l , 0 , 06 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o ( 500 m L ) , y lu e g o s e a g i t a r o n a 80 oC b a jo n i t r ó g e n o d u r a n t e 4 h o r a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 30 g , r e n d im ie n t o : 72 % ) .
Paso C:
Figure imgf000133_0001
3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m in a
Procedim iento:
Figure imgf000133_0002
( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o
Procedim iento:
Figure imgf000133_0003
Paso E:
Figure imgf000134_0001
(3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -formiato de terbutilo
Procedim iento:
El (R)-3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-formiato de ter-butilo (25 g, 58 mmol, 1,0 eq.), 2-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (30 g, 75,4 mmol, 1,3 eq.), fosfato de potasio (25 g, 116 mmol, 2,0 eq.) y Pd-118 (750 mg, 1,16 mmol, 0,02 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano/agua (600 mL, 5 /1 , v/v). La mezcla de reacción se agitó a 60oC durante la noche bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación; al residuo se le agregó agua (300 mL) y después se extrajo con acetato de etilo (300 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (60 g, crudo).
Paso F:
Figure imgf000134_0002
3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-((R)-pirrolidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (100 mL) a una solución de (3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (60 g, crudo) en acetato de etilo (100 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo. Al producto obtenido se le agregó agua (500 mL) y se extrajo con acetato de etilo (300 mL) 3 veces. La fase acuosa se ajustó a pH=9 y se extrajo con acetato de etilo (300 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (24 g, rendimiento de 2 pasos: 90%).
Paso G:
Figure imgf000135_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 -o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó N a O H ( 10 % , 94 m L ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 23 , 5 g , 50 , 75 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o ( 470 m L ) a - 5 oC , s e g u id o p o r la a d ic ió n , g o t a a g o t a , d e c lo r u r o d e a c r i l o i l o ( 5 , 97 g , 66 m m o l , 1 , 3 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a - 5 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e a p a g ó c o n s a lm u e r a s a t u r a d a ( 100 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 200 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :3 a 1 : 1 ) p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e d i s o lv i ó e n m e t a n o l ( 500 m L ) y s e f i l t r ó . A l f i l t r a d o e n a g i t a c ió n s e le a g r e g ó a g u a ( 1500 m L ) , s e g u id o p o r a g i t a c ió n d u r a n t e 2 h o r a s y s e f i l t r ó . L a t o r t a d e l f i l t r o s e s e c ó b a jo p r e s ió n r e d u c id a p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 16 , 5 g , r e n d im ie n t o : 63 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 764 m in ; m /z = 517 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 45 ( s , 1 H ) , 7 , 7 0 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 55 - 7 , 4 6 ( m , 1 H ) , 7 , 1 2 - 7 , 0 5 ( m , 2 H ) , 6 , 7 0 - 6 , 5 5 ( m , 1 H ) , 6 , 33 - 6 , 26 ( m , 1 H ) , 5 , 81 - 5 , 75 ( m , 1 H ) , 4 , 23 - 3 , 83 ( m , 5 H ) , 2 , 68 - 2 , 55 ( m , 2 H ) .
Método 2:
Procedim iento:
S e a g r e g ó N a O H ( 216 m g , 5 , 40 m m o l , 2 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) -p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 1 ,0 g , 2 , 16 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o ( 50 m L ) y a g u a ( 10 m L ) a 0 oC , s e g u id o p o r la a d i c ió n , g o t a a g o t a , d e u n a s o lu c ió n d e c lo r u r o d e c lo r o p r o p io n i lo ( 288 m g , 2 , 27 m m o l , 1 , 05 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o ( 10 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a , y lu e g o s e a g i t ó a 60 oC d u r a n t e 12 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r la m e z c la d e r e a c c ió n a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e s e le a g r e g ó s a lm u e r a s a t u r a d a ( 100 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 50 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 : 3 a 1 : 1 ) , p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o d e l e j e m p lo 45 ( 0 ,8 g , r e n d im ie n t o : 71 % ) .
Método 3:
Procedim iento:
S e d i s o lv i ó ( R ) - 1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 100 g , 0 , 26 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o ( 120 m g , 0 ,31 m m o l , 1 , 2 e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 55 m g , 0 , 52 m m o l , 2 , 0 e q . ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 30 m g , 0 , 026 m m o l , 0 ,01 e q ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a (5 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 80 oC d u r a n t e 30 m in b a jo i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (38 mg, rendimiento: 28%).
Método 4:
E jem plo 45 y Ejemplo 46
Figure imgf000136_0001
1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1-ona
Figure imgf000136_0002
1 -((S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1-ona
Paso A:
Figure imgf000136_0003
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo Procedimiento:
S e d i s o lv i ó 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r im i d in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m i a t o d e t e r - b u t i l o (8 g , 18 m m o l , 1 , 0 e q . ) , 2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n o ( 10 , 7 g , 27 m m o l , 1 , 5 e q . ) , f o s f a t o d e p o t a s io ( 7 ,6 g , 36 m m o l , 2 , 0 e q . ) y P d - 118 ( 1 ,2 g , 1 , 8 m m o l , 0 ,1 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 180 m L , 5 / 1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 60 oC d u r a n t e 14 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e v a c ió e n a g u a c o n h ie lo ( 50 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 100 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o l u m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o : é t e r d e p e t r ó le o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 2 ,5 g , r e n d im ie n t o : 25 % ) .
Paso B:
Figure imgf000137_0001
3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m in a Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E ( 20 m L ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 2 ,5 g , 4 , 4 m m o l) e n d i c lo r o m e t a n o ( 20 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 2 ,2 g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso C:
Figure imgf000137_0002
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 1 , 4 g , 12 , 8 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e a c r i lo i lo ( 0 ,38 g , 4 , 2 m m o l , 0 , 95 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 -a m in a ( 2 ,2 g , 4 , 4 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 50 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a , y lu e g o s e a p a g ó c o n a g u a ( 30 m L ) y s e s e p a r ó . L a f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 30 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (1,0 g, rendimiento: 45%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,810 min; m/z = 517,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Paso D:
Figure imgf000138_0001
1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1-ona
Figure imgf000138_0002
1 -((S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona
Procedim iento:
La 1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona se separó quiralmente por SFC para dar el compuesto del ejemplo 45 (270 mg) y el compuesto del ejemplo 46 (320 mg).
E jem plo 46:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,808 min; m/z = 517,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 47
Figure imgf000139_0001
4 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - 4 - o x o - b u t - 2 -e n o i l c a r b a m a t o d e m e t i lo
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 , 5 - d io x o - 2 H - p i r r o l - 1 ( 5 H ) - c a r b o x i l a t o d e m e t i lo ( 17 m g , 0 ,11 m m o l , 1 ,1 e q . ) y b i c a r b o n a t o d e s o d io ( 17 m g , 0 , 2 m m o l , 2 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in -4 - a m in a ( 48 m g , 0 ,1 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a (3 m L /1 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 2 h o r a s , s e d i lu y ó c o n a g u a (5 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e lg a d a ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :3 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 40 m g , r e n d im ie n t o : 67 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 0 , 775 m in ; m /z = 632 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 1 , 5 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D C h ) 5 8 , 36 ( s , 1 H ) , 7 , 58 - 7 , 54 ( m , 1 H ) , 7 , 15 - 7 , 06 ( m , 1 H ) , 6 , 96 - 6 , 90 ( m , 2 H ) , 6 , 77 - 6 , 73 ( m , 1 H ) , 6 , 65 ­ 6 , 55 ( m , 1 H ) , 4 , 63 - 4 , 59 ( m , 1 H ) , 4 , 99 - 4 , 94 ( m , 1 H ) , 4 , 85 - 4 , 80 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 57 - 4 , 54 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 04 - 4 , 00 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 88 ­ 3 , 77 ( m , 4 H ) , 3 , 50 - 3 , 44 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 26 - 3 , 22 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 98 - 2 , 95 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 34 - 2 , 26 ( m , 1 H ) , 2 , 03 - 1 , 96 ( m , 2 H ) , 1 , 85 ­ 1 ,81 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 48
2 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - c a r b o n i l ) b u t - 2 -e n o a t o d e m e t i lo
Paso A:
Figure imgf000140_0001
Á c id o ( Z ) - 2 -( m e t o x i c a r b o n i l ) b u t - 2 - e n o i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó h id r ó x id o d e l i t io m o n o h id r a t o ( 0 , 265 g , 6 , 32 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 2 - e t i l i d e n m a l o n a t o d e d im e t i l o ( 1 ,0 g , 6 , 32 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o / a g u a ( 20 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 14 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n . E l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a g u a ( 10 m L ) , s u p H s e a ju s t ó c o n H C l 2 N a p H = 1 , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 20 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 0 ,6 g , r e n d im ie n t o : 63 % ) .
Paso B:
Figure imgf000140_0002
2 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - c a r b o n i l ) b u t - 2 -e n o a t o d e m e t i lo
Procedim iento:
Figure imgf000140_0003
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 540 m in ; m /z = 603 , 2 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 49
Figure imgf000141_0001
2 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - c a r b o n i l ) a c r i l o n i t r i l o Paso A:
Figure imgf000141_0002
3 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - 3 -o x o p r o p a n o n i t r i l o
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o 2 - c ia n o a c é t i c o ( 27 m g , 0 ,31 m m o l , 1 , 5 e q . ) , D I P E A ( 108 m g , 0 , 84 m m o l , 4 , 0 e q . ) y H A T U ( 120 m g , 0 ,31 m m o l , 1 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id i n - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in -4 - a m in a ( 100 m g , 0 ,21 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 16 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o l u m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) , p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 100 m g , r e n d im ie n t o : 88 % ) .
Paso B:
Figure imgf000142_0001
2-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1-carbonil)acrilonitrilo Procedim iento:
Una mezcla de paraformaldehído (6 mg, 0,2 mmol, 2,0 eq.) y piperidina (0,2 mg, 0,002 mmol, 0,02 eq.) en metanol (10 mL) se puso a reflujo durante 1.5 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se le agregó 3-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)-3-oxopropanonitrilo (54 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.); después se puso a reflujo durante 16 horas. Después de eliminar el disolvente bajo presión reducida, al residuo se le agregó tolueno (10 mL) y ácido p-toluenosulfónico monohidrato (0,2 mg, 0,001 mmol, 0,01 eq.). La mezcla resultante se puso a reflujo durante 3 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (0,7 mg, rendimiento: 1%).
E jem plo 50
Figure imgf000142_0002
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)-2-(hidroximetil)prop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000143_0001
Á c id o 2 -( h id r o x im e t i l ) a c r í l i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó h id r ó x id o d e l i t io m o n o h id r a t o ( 145 m g , 3 , 46 m m o l , 5 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 2 -( h id r o x im e t i l ) a c r i la t o d e e t i l o ( 90 m g , 0 , 69 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o / m e t a n o l / a g u a (3 m L , 1 / 1 /1 , v / v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 14 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n . E l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a g u a ( 10 m L ) , s u p H s e a ju s t ó c o n H C l 2 N a p H = 5 , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 20 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 70 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso B:
Figure imgf000143_0002
1 -( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - i l ) - 2 -( h id r o x im e t i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
Figure imgf000143_0003
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 799 m in ; m /z = 561 , 2 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , D M S O - a fe ) 6 9 ,51 ( b r , 1 H ) , 8 , 62 ( b r , 2 H ) , 7 , 9 8 - 7 , 9 5 ( m , 1 H ) , 7 , 6 2 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 3 3 - 7 , 3 0 ( m , 1 H ) , 7 , 17 - 7 , 15 ( m , 1 H ) , 5 , 33 - 5 , 27 (m , 1 H ) , 5 , 11 - 5 , 05 ( m , 1 H ) , 4 , 87 - 4 , 82 ( m , 1 H ) , 4 , 46 - 3 , 94 ( m , 2 H ) , 3 , 60 - 3 , 07 ( m , 2 H ) , 2 , 22 ­ 2 , 16 ( m , 2 H ) , 1 , 90 - 1 , 87 ( m , 1 H ) , 1 , 65 - 1 , 60 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 51(*)
Figure imgf000144_0001
1 -(2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)etil)-1 H-pirrol-2,5-diona Procedim iento:
El compuesto se preparó por medio del método antes mencionado.
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,774 min; m/z = 517,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 52
Figure imgf000144_0002
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)-N-metilpiperidin-1 -carboxamida Procedim iento:
Se agregó N,N'-carbonildiimidazol (109 mg, 0,63 mmol, 2,0 eq.) a metilamina (0,16 mL, 0,31 mmol, 1,0 eq, solución 2,0 M en tetrahidrofurano) en tetrahidrofurano (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, seguido por la adición de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 -(pipe ridin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (150 mg, 0,31 mmol, 1,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó por 16 horas a temperatura ambiente, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /NH4 HCO3 7%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (92 mg, rendimiento: 55%). Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,724 min; m/z = 534,0 [M+H]+ ; Duración total: 7 min.
1H R M N ( 40 0 M H z , D M S O - c fe ) 6 8 ,21 ( s , 1 H ) , 7 , 5 5 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 2 7 ( d d , J = 2 , 4 , 8 , 8 H z , 1 H ) , 7 ,11 ( d d , J = 2 , 4 , 8 , 8 H z , 1 H ) , 6 , 5 0 (d , J = 4 , 4 H z , 1 H ) , 4 , 6 4 - 4 , 5 8 ( m , 1 H ) , 4 , 1 4 - 4 , 1 0 ( m , 1 H ) , 3 , 9 5 - 3 , 9 2 ( m , 1 H ) , 3 , 17 - 3 ,1 1 ( m , 1 H ) , 2 , 7 5 - 2 , 6 5 ( m , 1 H ) , 2 , 55 - 2 , 54 ( m , 3 H ) , 2 , 08 - 2 , 05 ( m , 2 H ) , 1 , 79 - 1 , 76 ( m , 1 H ) , 1 , 55 - 1 , 50 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 53(*)
Figure imgf000145_0001
3 -[ 4 - a m in o - 3 -[ 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ] - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ] p ip e r id in - 1 - f o r m a m id in a
Procedim iento:
U n a m e z c la d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 ,1 m m o l , 1 ,0 e q . ) , N - m e t i l - 1 - p i r a z o l f o r m a m id i n a ( 25 m g , 0 , 2 m m o l , 2 , 0 e q . ) y D I P E A ( 77 m g , 0 , 6 m m o l , 6 , 0 e q . ) e n D M F ( 2 m L ) s e a g i t ó a 150 oC d u r a n t e 20 m in b a jo i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , s e d i lu y ó c o n a g u a (5 m L ) , s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o (5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( e n p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o (6 m g , r e n d im ie n t o : 13 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 0 ,781 m in ; m /z = 533 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 1 , 5 m in .
Ejem plo 54(*)
Figure imgf000145_0002
3 -[ 4 - a m in o - 3 -[ 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ] - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ] - N ' - c ia n o - N - m e t i l - p i p e r id in - 1 -f o r m a m id in a
Procedimiento:
Se agregó DIPEA (40 mg, 0,315 mmol, 3,0 eq.) y N-cianocarbonimidato de difenilo (25 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) a metilamina (solución 2 M en tetrahidrofurano, 0,05 mL, 0,1 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 1 hora y después se le agregó 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50,0 mg, 0,105 mmol, 1,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó a 120 oC durante 1 hora bajo irradiación de microondas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (4,5 mg, rendimiento: 8%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,689 min; m/z = 558,0 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 55(*)
Figure imgf000146_0001
1 -[3-[4-amino-3-[2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetra-fluorofenoxi)fenil]-1 H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1 -il]-1 -piperidinil]-1 -(metilamino)-2-nitro etileno
Paso A:
Figure imgf000146_0002
N-metil-1 -metiltio-2-nitroetilenamina
Procedim iento:
Se agregó metilamina (31 mg, 2,0 mmol, 1,0 eq.) a una solución de 1,1-bis(metiltio)-2-nitroeteno (330 mg, 2,0 mmol, 1,0 eq.) en etanol (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 14 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (10 mL) y después se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el compuesto objetivo (200 mg, rendimiento: 68%).
Paso B:
Figure imgf000147_0001
1 -[3-[4-amino-3-[2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetra-fluorofenoxi)fenil]-1 H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-1 -il]-1 -piperidinil]-1 -(metilamino)-2-nitro etileno
Procedim iento:
Una mezcla de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.) y N-metil-1 -metiltio-2-nitroetilenamina (22 mg, 0,15 mmol, 1,2 eq.) en etanol (10 mL) se puso a reflujo durante 14 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL), después se extrajo con diclorometano (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (en proporción en volumen)), para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (9,3 mg, rendimiento: 13%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,343 min; m/z = 577,0 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 56(*)
Figure imgf000147_0002
2-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)-N-metilacetamida Procedimiento:
Se agregó 2-bromo-N-metil-acetamida (32 mg, 0,21 mmol, 2,0 eq.), carbonato de potasio (29 mg, 0,21 mmol, 2,0 eq.) y yoduro de sodio (2 mg, 0,01 mmol, 0,1 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) en etanol (2 mL). La mezcla de reacción se puso a reflujo por 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /NH4 HCO3 0,6%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (4,5 mg, rendimiento: 20%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,302 min; m/z = 548,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 57
Figure imgf000148_0001
2-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1 -il)-N-metil-2-oxoacetamida
Procedim iento:
Trietilamina (38 mg, 0,38 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de oxalilo (20 mg, 0,16 mmol, 1,25 eq.) se agregaron a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (2 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 10 min y después se le agregó metil amina (6 mg, 0,19 mmol, 1,5 eq). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se concentró y se secó por centrifugación, para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (en proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (9,0 mg, rendimiento: 6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,748 min; m/z = 562,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 58
Figure imgf000149_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) - 3 -c lo r o p r o p a n - 1 - o n a
Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 66 m g , 0 , 649 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e c lo r o p r o p io n i lo ( 33 m g , 0 , 26 m m o l , 1 ,2 e q . ) s e a g r e g a r o n , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m in a ( 100 m g , 0 , 22 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) a - 5 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 0 oC d u r a n t e 2 h o r a s , s e a p a g ó c o n a g u a ( 10 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 20 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( e n p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 4 ,0 m g , r e n d im ie n t o : 3 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 929 m in ; m /z = 553 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 4 4 ( s , 1 H ) , 7 , 0 2 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 5 1 - 7 , 4 8 ( m , 1 H ) , 7 , 1 0 - 7 , 0 3 ( m , 2 H ) , 5 , 7 4 - 5 , 6 7 ( m , 1 H ) , 4 , 13 - 4 ,11 ( m , 1 H ) , 4 , 00 - 3 , 97 ( m , 2 H ) , 3 , 82 - 3 , 78 ( m , 3 H ) , 2 , 90 - 2 , 84 ( m , 2 H ) , 2 , 62 - 2 , 53 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 59
Figure imgf000149_0002
( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) ( 1 H - im id a z o l - 4 -i l ) m e t a n o n a
Procedimiento:
S e a g r e g ó á c id o im id a z o l - 4 - c a r b o x í l i c o ( 17 m g , 0 , 15 m m o l , 1 , 2 e q . ) , D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 53 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 30 m in , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 25 , 0 m g , r e n d im ie n t o : 35 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 368 m in ; m /z = 571 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 60
Figure imgf000150_0001
( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) ( p i r id in - 3 -i l ) m e t a n o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o n i c o t í n i c o ( 19 m g , 0 , 15 m m o l , 1 , 2 e q . ) , D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 53 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 -a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 30 m in , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 20 m g , r e n d im ie n t o : 27 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 672 m in ; m /z = 582 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) ó 9 , 06 - 8 , 93 ( m , 2 H ) , 8 , 69 ( b r , 1 H ) , 8 , 50 ( b r , 1 H ) , 8 , 18 - 8 , 10 ( m , 1 H ) , 7 , 77 - 7 ,71 ( m , 1 H ) , 7 , 53 ­ 7 , 48 ( m , 1 H ) , 7 , 15 - 7 , 08 ( m , 2 H ) , 5 , 34 - 5 , 23 ( m , 1 H ) , 4 ,61 - 4 , 58 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 43 - 4 , 40 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 99 - 3 , 68 ( m , 2 H ) , 3 , 48 - 3 , 46 ( m , 1 H ) , 2 , 42 - 2 , 37 ( m , 2 H ) , 2 , 15 - 2 , 09 ( m , 1 H ) , 1 , 95 - 1 , 87 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 61
Figure imgf000151_0001
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - 2 - c lo r o e t a n o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o 2 - c lo r o a c é t i c o ( 14 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) , t r i e t i l a m in a ( 19 m g , 0 , 19 m m o l , 1 , 5 e q . ) y H A T U ( 53 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n -4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 30 m in , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 16 m g , r e n d im ie n t o : 31 % ) . Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 046 m in ; m / z = 553 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 3 5 ( s , 1 H ) , 7 , 9 8 - 7 , 9 3 ( m , 1 H ) , 7 , 5 8 - 7 , 5 4 ( m , 1 H ) , 7 ,31 ( d d , J = 2 , 4 , 11 ,2 H z , 1 H ) , 7 , 15 ( d d , J = 2 , 4 , 8 , 8 H z , 1 H ) , 4 , 9 0 - 4 , 8 6 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 7 3 - 4 , 7 0 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 4 8 - 4 , 3 9 ( m , 2 H ) , 4 , 2 7 - 4 , 0 4 ( m , 1 , 5 H ) , 3 , 8 2 - 3 , 6 6 ( m , 1 H ) , 3 , 23 - 3 , 17 ( m , 1 H ) , 2 , 95 - 2 , 90 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 27 - 2 , 13 ( m , 2 H ) , 1 , 94 - 1 , 75 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 62
Figure imgf000151_0002
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - 2 -( d im e t i la m in o ) e t a n o n a
Procedimiento:
S e a g r e g ó N , N - d im e t i l g l i c in a ( 16 m g , 0 , 15 m m o l , 1 ,2 e q . ) , D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 53 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 -a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 30 m in , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 6 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 30 m g , r e n d im ie n t o : 42 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 ,301 m in ; m / z = 562 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , D M S O - a fe ) ó 8 , 24 - 8 ,21 ( m , 1 H ) , 7 , 98 - 7 , 90 ( m , 1 H ) , 7 , 56 - 7 , 50 ( m , 1 H ) , 7 , 27 - 7 , 24 ( m , 1 H ) , 7 , 11 - 7 , 09 ( m , 1 H ) , 4 , 83 - 4 , 75 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 66 - 4 , 57 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 44 - 4 , 41 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 20 - 4 , 00 ( m , 1 , 5 H ) , 3 , 59 - 3 , 56 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 45 - 3 , 40 ( m , 1 H ) , 3 , 16 - 3 , 10 ( m , 2 H ) , 2 , 90 - 2 , 83 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 16 - 2 , 08 ( m , 8 H ) , 1 , 89 - 1 , 85 ( m , 1 H ) , 1 , 67 - 1 , 45 ( m , 1 H ) .
Ejem plo 63
Figure imgf000152_0001
5 -( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m id i n - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - c a r b o n i l ) t i a z o l id i n - 2 -n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o 2 - o x o t ia z o l id in - 5 - c a r b o x í l i c o ( 26 m g , 0 , 19 m m o l , 1 , 5 e q . ) , D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 72 m g , 0 , 19 m m o l , 1 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 6 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 4 m g , r e n d im ie n t o : 6 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 805 m in ; m / z = 606 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 64
Figure imgf000153_0001
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - i l ) - 2 -( t r i f lu o r o m e t i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o 2 -( t r i f l u o r o m e t i l ) a c r í l i c o ( 26 m g , 0 , 19 m m o l , 1 , 5 e q . ) , D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 72 m g , 0 , 19 m m o l , 1 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 6 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 2 ,9 m g , r e n d im ie n t o : 4 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 310 m in ; m / z = 599 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plos 65 y 66(*)
Figure imgf000153_0002
1 -( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 4 , 4 , 4 -t r i f l u o r o b u t a n o - 1 , 3 - d io n a
Figure imgf000154_0001
4 , 4 , 4 - t r i f l u o r o - N -( 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - i l ) - 3 - o x o -b u t a n a m id a
Procedim iento:
S e a g r e g ó 4 , 4 , 4 - t r i f l u o r o a c e t o a c e t a t o d e e t i l o ( 24 m g , 0 , 15 m m o l , 1 , 2 e q . ) y D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t o lu e n o (2 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 0.5 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r lo s c o m p u e s t o s d e s e a d o s , c o m p u e s t o 65 (5 m g , r e n d im ie n t o : 6 % ) y c o m p u e s t o 66 ( 4 m g , r e n d im ie n t o : 5 % ) .
Datos de espectroscopia:
E jem plo 65
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 1 , 095 m in ; m / z = 615 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 2 m in .
Ejem plo 66
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 1 , 079 m in ; m / z = 615 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 2 m in .
Ejem plo 67
Figure imgf000154_0002
1 -( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - i l ) - 3 -c ic l o p r o p i lp r o p a n o - 1 , 3 - d i o n a
Paso A:
Figure imgf000155_0001
Á c id o 3 - c i c l o p r o p i l - 3 - o x o p r o p a n o i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó h id r ó x id o d e l i t io m o n o h id r a t o ( 0 ,59 g , 14 , 7 m m o l , 2 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - c ic l o p r o p i l - 3 - o x o p r o p a n o a t o d e m e t i lo ( 1 ,0 g , 7 , 03 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o / a g u a / m e t a n o l ( 15 m L , 1 / 1 /1 , v / v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 20 ° C d u r a n t e 14 h o r a s y e n t o n c e s s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a . E l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a g u a ( 10 m L ) , s u p H s e a ju s t ó c o n H C l 2 N a p H = 2 , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 20 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 0 ,4 g , r e n d im ie n t o : 44 % ) .
Paso B:
Figure imgf000155_0002
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - i l ) - 3 -c ic l o p r o p i lp r o p a n o - 1 , 3 - d i o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o 3 - c ic l o p r o p i l - 3 - o x o p r o p a n o i c o ( 19 m g , 0 , 15 m m o l , 1 ,2 e q . ) , D I P E A ( 49 m g , 0 , 38 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 72 m g , 0 , 19 m m o l , 1 ,5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 o C d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 6 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 25 m g , r e n d im ie n t o : 34 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 003 m in ; m / z = 587 , 2 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , D M S O - a fe ) ó 8 , 24 - 8 , 23 ( m , 1 H ) , 7 , 99 - 7 , 93 ( m , 1 H ) , 7 , 59 - 7 , 54 ( m , 1 H ) , 7 , 29 - 7 , 26 ( m , 1 H ) , 7 , 13 - 7 ,11 ( m , 1 H ) , 4 , 79 - 4 , 63 ( m , 1 H ) , 4 , 53 - 4 , 50 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 28 - 4 , 25 ( m , 0 , 5 H ) , 3 , 86 - 3 , 70 ( m , 3 H ) , 3 , 15 - 3 , 08 ( m , 1 , 5 H ) , 2 , 85 - 2 , 79 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 24 - 1 , 96 ( m , 2 H ) , 1 , 90 - 1 , 85 ( m , 1 H ) , 1 , 65 - 1 , 53 ( m , 1 H ) , 0 , 93 - 0 , 84 ( m , 4 H ) .
Ejem plo 68(*)
Figure imgf000156_0001
2 -( ( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) m e t i l ) a c r i la t o d e e t i lo
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 -( b r o m o m e t i l ) - a c r i la t o d e e t i l o ( 53 m g , 0 , 28 m m o l , 1 , 2 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 63 m g , 0 , 46 m m o l , 2 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m in a ( 110 m g , 0 , 23 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F (2 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 85 oC d u r a n t e 3 h o r a s y s e f i l t r ó . L a t o r t a d e l f i l t r o s e la v ó c o n a c e t a t o d e e t i l o . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 38 m g , r e n d im ie n t o : 28 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 654 m in ; m / z = 589 , 2 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 69(*)
Figure imgf000156_0002
2 -( ( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) m e t i l ) - N -m e t i la c r i l a m id a
Paso A:
Figure imgf000157_0001
Á c id o 2 -( ( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 -i l ) m e t i l ) a c r í l i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó h id r ó x id o d e l i t io m o n o h id r a t o (3 m g , 0 , 076 m m o l , 1 ,5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 2 -( ( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - i l ) m e t i l ) a c r i la t o d e e t i l o ( 30 m g , 0 ,051 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o / a g u a / m e t a n o l ( 1 ,5 m L , 1 / 1 /1 , v / v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 ° C d u r a n t e 14 h o r a s y e n t o n c e s s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a . E l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a g u a (5 m L ) , s u p H s e a ju s t ó c o n H C l 2 N a p H = 2 , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o (5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n , p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 20 m g , r e n d im ie n t o : 86 % ) .
Paso B:
Figure imgf000157_0002
2 -( ( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) m e t i l ) - N -m e t i la c r i l a m id a
Procedimiento:
M e t i la m in a ( 1 M e n T H F , 0 , 072 m L , 0 , 072 m m o l , 2 , 0 e q . ) , D I P E A ( 14 m g , 0 , 107 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 20 m g , 0 , 054 m m o l , 1 , 5 e q . ) s e a g r e g a r o n a u n a s o lu c ió n d e á c id o 2 -( ( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) m e t i l ) a c r í l i c o ( 20 m g , 0 , 036 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D M F (1 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o (9 m g , r e n d im ie n t o : 40 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 262 m in ; m / z = 574 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 70(*)
Figure imgf000158_0001
2 -( ( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) m e t i l ) a c r i lo n i t r i l o Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o c ia n o a c é t i c o ( 10 m g , 0 , 12 m m o l , 1 , 0 e q . ) y f o r m a ld e h í d o ( 8 ,5 m g , 0 , 28 m m o l , 2 , 4 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 - a m in a ( 56 m g , 0 , 12 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n t o lu e n o (3 m L ) . L a m e z c la r e s u l t a n t e s e p u s o a r e f lu jo d u r a n t e 12 h o r a s y s e c o n c e n t r ó p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 6 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o c lo r h id r a t o o b je t iv o ( 3 , 7 m g , r e n d im ie n t o : 6 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 458 m in ; m / z = 542 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 71(*)
Figure imgf000159_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 4 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Paso A:
Figure imgf000159_0002
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 4 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o Procedim iento:
E l ( R ) - 3 -( 4 - a m i n o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 100 m g , 0 , 232 m m o l , 1 ,0 e q . ) , ( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n - 2 - i l ) f e n i l ) ( 4 - f l u o r o f e n i l ) m e t a n o n a ( 80 m g , 0 , 232 m m o l , 1 , 0 e q . ) , c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 96 m g , 0 , 696 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 26 m g , 0 , 023 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 2 ,4 m L , 5 / 1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 90 oC d u r a n t e 30 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e lg a d a ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 : 1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 20 m g , r e n d im ie n t o : 17 % ) .
Paso B:
Figure imgf000159_0003
( 4 -( 4 - a m in o - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n i l ) ( 4 - f lu o r o f e n i l ) m e t a n o n a Procedimiento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E (5 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 4 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 20 m g , 0 , 038 m m o l) e n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 18 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso C:
Figure imgf000160_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 4 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 12 m g , 0 , 115 m m o l , 3 , 0 e q . ) y á c id o a c r í l i c o ( 3 , 4 m g , 0 , 038 m m o l , 1 , 0 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e ( 4 -( 4 - a m in o - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n i l ) ( 4 -f l u o r o f e n i l ) m e t a n o n a ( 18 m g , 0 , 038 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e a p a g ó c o n a g u a (5 m L ) y s e s e p a r ó ; la f a s e a c u o s a s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 6 ,9 m g , r e n d im ie n t o : 38 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 424 m in ; m / z = 475 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 72(*)
Figure imgf000160_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Paso
( 3
Figure imgf000161_0001
Procedim iento:
S e d i s o lv i ó ( R ) - 3 -( 4 - a m i n o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 100 m g , 0 , 232 m m o l , 1 , 0 e q . ) , ( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n - 2 - i l ) f e n i l ) ( 2 - f l u o r o f e n i l ) m e t a n o n a ( 144 m g , 0 , 418 m m o l , 1 ,8 e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 74 m g , 0 , 696 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 26 m g , 0 , 023 m m o l , 0 ,1 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 2 , 4 m L , 5 / 1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 90 oC d u r a n t e 30 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e lg a d a ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 40 m g , r e n d im ie n t o : 33 % ) .
Paso B:
Figure imgf000161_0002
( 4 -( 4 - a m in o - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n i l ) ( 2 - f lu o r o f e n i l ) m e t a n o n a Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E (5 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 40 m g , 0 , 077 m m o l) e n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 30 m g , r e n d im ie n t o : 93 % ) .
Paso C:
Figure imgf000161_0003
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 14 m g , 0 , 14 m m o l , 2 , 0 e q . ) y á c id o a c r í l i c o ( 7 ,0 m g , 0 , 078 m m o l , 1 ,1 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e ( 4 -( 4 - a m in o - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n i l ) ( 2 -f l u o r o f e n i l ) m e t a n o n a ( 30 m g , 0 ,071 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e a p a g ó c o n a g u a (5 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó c o n s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 6 % , g r a d ie n t e 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 4 m g , r e n d im ie n t o : 15 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 359 m in ; m / z = 475 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 2 9 ( s , 1 H ) , 7 , 7 6 - 7 , 6 4 ( m , 5 H ) , 7 ,41 ( t , J = 7 , 2 H z , 1 H ) , 7 , 33 ( t , J = 8 , 8 H z , 1 H ) , 6 , 7 0 - 6 , 5 5 ( m , 1 H ) , 6 , 32 - 6 , 28 ( m , 1 H ) , 5 , 79 - 5 , 76 ( m , 1 H ) , 5 , 65 - 5 , 56 ( m , 1 H ) , 4 , 20 - 4 , 04 ( m , 2 , 5 H ) , 3 , 93 - 3 , 85 ( m , 1 H ) , 3 , 76 - 3 , 73 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 64 - 2 , 49 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 73(*)
Figure imgf000162_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Paso A:
Boc
Figure imgf000162_0002
O
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o Procedimiento:
S e d i s o lv i ó ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 140 m g , 0 , 32 m m o l , 1 ,0 e q . ) , ( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n - 2 - i l ) f e n i l ) ( 3 - f l u o r o f e n i l ) m e t a n o n a ( 224 m g , 0 , 64 m m o l , 2 , 0 e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io (101 m g , 0 , 96 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P d (P P h i3 )4 ( 34 m g , 0 , 03 m m o l , 0 ,1 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a (6 m L , 5 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 90 oC d u r a n t e 30 m in b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e lg a d a ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 50 m g , r e n d im ie n t o : 23 % ) .
Paso B:
Figure imgf000163_0001
( 4 -( 4 - a m in o - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n i l ) ( 3 - f lu o r o f e n i l ) m e t a n o n a Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E (5 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 50 m g , 0 , 096 m m o l) e n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 40 m g , r e n d im ie n t o : 99 % ) .
Paso C:
Figure imgf000163_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o b e n z o i l ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 19 m g , 0 , 19 m m o l , 2 , 0 e q . ) y á c id o a c r í l i c o ( 9 ,5 m g , 0 , 105 m m o l , 1 ,1 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e ( 4 -( 4 - a m in o - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 3 - i l ) - 3 - f lu o r o f e n i l ) ( 3 -f lu o r o f e n i l ) m e t a n o n a ( 40 m g , 0 , 096 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e a p a g ó c o n a g u a (5 m L ) , s e s e p a r ó y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o (5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e 10 % a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (0,5 mg, rendimiento: 1%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,522 min; m/z = 475,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 74
Figure imgf000164_0001
4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-carboxamido)but-2-enoato de etilo
Paso A:
Figure imgf000164_0002
4-aminobut-2-enoato de etilo
Procedim iento:
A una solución de 4-bromobut-2-enoato de etilo (1,0 g, 5,18 mmol, 1,0 eq.) en agua (10 mL) se le agregó una solución acuosa de amoniaco (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (0,7 g, rendimiento: 100%).
Paso B:
4-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-carboxamido)but-2-enoato de etilo
Procedim iento:
Se agregó N,N'-carbonildiimidazol (109 mg, 0,63 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (48 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq.) en DMF (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a 90 oC durante 1 hora, seguido por la adición de 4-aminobut-2-enoato de etilo (26 mg, 0,2 mmol, 2,0 eq.). La mezcla de reacción se agitó por 6 horas a 90 oC, se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua (10 mL), y después se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (15 mg, rendimiento: 24 %).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,821 min; m/z = 632,1 [M+H]+; Duración total: 1,5 min.
E jem plo 75
Figure imgf000165_0001
1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)-2-cloroetanona
Procedim iento:
Trietilamina (44 mg, 0,43 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de cloroacetilo (24 mg, 0,22 mmol, 1,0 eq.) se agregaron, gota a gota, a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-((R)-pirrolidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,22 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 1 hora, se apagó con agua (5 mL) y se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua / NH4 HCO3 7%, gradiente: 10% a 100% (en proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (17 mg, rendimiento: 14%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,734 min; m/z = 539,0 [M+H]+ ; Duración total: 7 min.
Ejemplo 76
Figure imgf000166_0001
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) - N -( 4 -( m e t i l a m i n o ) - 4 - o x o - b u t -2 - e n i l ) p i r r o l i d in - 1 - c a r b o x a m id a
Paso A:
Figure imgf000166_0002
( E ) - 4 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 -c a r b o x a m id o ) b u t - 2 - e n o a t o d e e t i lo
Procedim iento:
S e a g r e g ó N , N '- c a r b o n i ld i im id a z o l (21 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 -t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l id i n - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D M F (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 90 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e g u id o p o r la a d i c ió n d e 4 - a m in o b u t - 2 - e n o a t o d e e t i l o ( 34 m g , 0 , 26 m m o l , 2 , 0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó d u r a n t e 6 h o r a s a 90 oC , s e e n f r ió a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c a p a d e lg a d a ( e lu e n t e : é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 :1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 30 m g , r e n d im ie n t o : 37 % ) .
Paso B:
Figure imgf000167_0001
Á c id o 4 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 -c a r b o x a m id o ) b u t - 2 - e n o i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó h id r ó x id o d e l i t io m o n o h id r a t o (6 m g , 0 , 15 m m o l , 3 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 4 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - c a r b o x a m i d o ) b u t - 2 - e n o a t o d e e t i l o ( 30 m g , 0 , 05 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o / a g u a / m e t a n o l (3 m L , 1 / 1 /1 , v / v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 ° C d u r a n t e 2 h o r a s y d e s p u é s s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a . E l r e s id u o s e d i s o lv i ó e n a g u a ( 10 m L ) , s u p H s e a ju s t ó c o n H C l 2 N a p H = 2 , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 20 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 30 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) .
Paso C:
Figure imgf000167_0002
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) - N -( 4 -( m e t i l a m i n o ) - 4 - o x o - b u t -2 - e n i l ) p i r r o l id in - 1 - c a r b o x a m id a
Procedim iento:
M e t i la m in a (5 m g , 0 , 15 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 29 m g , 0 , 075 m m o l , 1 ,5 e q . ) s e a g r e g a r o n a u n a s o lu c ió n d e á c id o 4 -( ( R ) -3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - c a r b o x a m id o ) b u t - 2 -e n o ic o ( 30 m g , 0 , 05 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 3 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o (5 m g , r e n d im ie n t o : 16 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 0 , 854 m in ; m / z = 603 ,1 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 1.5 m in .
Ejem plo 77
Figure imgf000168_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) - 3 , 3 , 3 -t r i f l u o r o p r o p a n o - 1 , 2 - d io n a
Procedim iento:
Figure imgf000168_0002
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 127 m in ; m / z = 588 , 9 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 78
Figure imgf000168_0003
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) - 2 -c ic l o p r o p i le t a n o - 1 , 2 - d io n a
Paso A:
Figure imgf000169_0001
2 - c ic l o p r o p i l - 2 - o x o a c e t a t o d e p o t a s io
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e 2 - c ic l o p r o p i l - 2 - o x o a c e t a t o d e e t i l o ( 100 m g , 0 , 70 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t e t r a h i d r o f u r a n o / a g u a (2 m L , 1 /1 , v / v ) s e le a g r e g ó h id r ó x id o d e p o t a s io 1 N ( 0 , 7 m L , 0 , 70 m m o l , 1 , 0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 20 ° C d u r a n t e 2 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 85 m g , r e n d im ie n t o : 79 % ) .
Paso B:
Figure imgf000169_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) - 2 -c ic l o p r o p i le t a n o - 1 , 2 - d io n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 - c ic l o p r o p i l - 2 - o x o a c e t a t o d e p o t a s io ( 66 m g , 0 , 43 m m o l , 2 , 0 e q . ) , D I P E A ( 84 m g , 0 , 65 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P y B r o p ( 12 m g , 0 , 24 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 100 m g , 0 , 22 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D M F (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 o C d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 53 m g , r e n d im ie n t o : 44 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 943 m in ; m / z = 559 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C h ) 6 8 , 3 7 - 8 , 3 5 ( m , 1 H ) , 7 , 5 7 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 10 - 7 , 0 5 ( m , 1 H ) , 6 , 9 5 - 6 , 8 9 ( m , 2 H ) , 5 , 6 0 - 5 , 5 4 ( m , 1 H ) , 4 , 21 - 3 , 88 ( m , 3.5 H ) , 3 , 80 - 3 , 72 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 73 - 2 , 48 ( m , 3 H ) , 1 , 25 - 1 , 05 ( m , 4 H ) .
Ejem plo 79
Figure imgf000170_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) - 3 -m e t i lb u t a n o - 1 , 2 - d io n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó 3 - m e t i l - 2 - o x o - b u t a n o a t o d e s o d io ( 45 m g , 0 , 32 m m o l , 1 , 5 e q . ) , D I P E A ( 84 m g , 0 , 65 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P y B r o p ( 100 m g , 0 , 22 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 100 m g , 0 , 22 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o (51 m g , r e n d im ie n t o : 42 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 275 m in ; m / z = 561 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D C h ) 6 8 , 37 - 8 , 36 ( m , 1 H ) , 7 , 55 - 7 , 50 ( m , 1 H ) , 7 , 10 - 7 , 05 ( m , 1 H ) , 6 , 95 - 6 , 88 ( m , 2 H ) , 5 , 60 - 5 , 55 ( m , 1 H ) , 4 , 15 - 3 , 4 ( m , 4 H ) , 3 , 42 - 3 , 37 (m , 1 H ) , 2 , 58 - 2 , 48 ( m , 2 H ) , 1 , 14 - 1 ,01 ( m , 6 H ) .
Ejem plo 80
Figure imgf000170_0001
1-((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)-4-hidroxi-3,3-dimetilbutano-1,2-diona
Procedim iento:
Se agregó 4,4-dimetil-dihidrofurano-2,3-diona (15 mg, 0,12 mmol, 2,0 eq.) y DMAP (1,3 mg, 0,01 mmol, 0,1 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-((R)-pirrolidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,11 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (3 mL). La mezcla de reacción se agitó a 70 oC durante 3 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (0,8 mg, rendimiento: 1.3%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,564 min; m/z = 591,2 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 81
Figure imgf000171_0001
1-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)-2-ciclopropiletano-1,2-diona
Procedim iento:
Se agregó 2-ciclopropil-2-oxo-acetato de potasio (20 mg, 0,13 mmol, 1,1 eq.), DIPEA (51 mg, 0,39 mmol, 3,0 eq.) y PyBrop (56 mg, 0,12 mmol, 1,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(piperidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (60 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq.) en DMF (5 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 12 horas, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /NH 4 HCO3 0,6%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (17 mg, rendimiento: 6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,938 min; m/z = 573,5 [M+H]+ ; Duración total: 7 min.
Ejem plo 82(*)
Figure imgf000172_0001
: N-(2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)acrilamida Paso A:
Figure imgf000172_0002
2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etilcarbamato de ter-butilo Procedim iento:
Se agregó 2-bromoetilcarbamato de ter-butilo (114 mg, 0,51 mmol, 2,0 eq.), carbonato de potasio (70 mg, 0,51 mmol, 2,0 eq.) y yoduro de sodio (3,8 mg, 0,025 mmol, 0,1 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,25 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 14 horas y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo), para dar el compuesto objetivo (50 mg, rendimiento: 37%).
Paso B:
Figure imgf000172_0003
1-(2-aminoetil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (2 mL) a una solución de 2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etilcarbamato de ter-butilo (50 mg, 0,093 mmol) en diclorometano (2 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (44 mg, rendimiento: 100%).
Paso C:
Figure imgf000173_0001
N-(2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)acrilamida Procedim iento:
Trietilamina (28 mg, 0,28 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (8,4 mg, 0,093 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 1-(2-aminoetil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (44 mg, 0,093 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a -15oC. La mezcla de reacción se agitó a -15 oC durante 1 hora, y luego se apagó con agua (5 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (5 mg, rendimiento: 11%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,552 min; m/z = 491,0 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 83(*)
N-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butan-2-il)acrilamida Paso A:
Figure imgf000174_0001
3-aminobutan-2-ol
Procedim iento:
Se agregó formiato de amonio (10,8 g, 171,1 mmol, 6,8 eq.) y Pd/C (300 mg) a una solución de 3-nitrobutan-2-ol (3,0 g, 25,2 mmol, 1,0 eq.) en metanol (30 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,0 g, rendimiento: 88%).
Paso B:
Figure imgf000174_0002
3-hidroxibutan-2-ilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó Boc2O (4,9 g, 22,5 mmol, 1,1 eq.) y trietilamina (4,54 g, 45,0 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-aminobutan-2-ol (2,0 g, 22,5 mol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 16 horas y se lavó con agua (20 mL) 2 veces y con salmuera (20 mL) 1 vez. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (600 mg, rendimiento: 14%).
Paso C:
Figure imgf000174_0003
Metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)butan-2-ilo
Procedim iento:
Trietilamina (640 mg, 6,34 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (540 mg, 4,76 mmol, 1,5 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-hidroxibutan-2-ilcarbamato de ter-butilo (600 mg, 3,17 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (5 mL) a 0 oC. La reacción se agitó a 20 oC durante 3 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (20 mL), y después se extrajo con diclorometano (20 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (500 mg, rendimiento: 59%).
Paso D:
Figure imgf000175_0001
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butan-2-ilcarbamato de ter-butilo Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (165 mg, 0,51 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)butan-2-ilo (136 mg, 0,51 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,25 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (45 mg, rendimiento: 31%).
Paso E:
Figure imgf000175_0002
1-(3-aminobutan-2-il)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butan-2-ilcarbamato de ter-butilo (45 mg, 0,082 mmol) en diclorometano (5 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (35 mg, rendimiento: 85%).
Paso F:
N-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)butan-2-il)acrilamida Procedim iento:
Trietilamina (15 mg, 0,15 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de acriloilo (7 mg, 0,083 mmol, 1,1 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 1-(3-aminobutan-2-il)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (35 mg, 0,075 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas y luego se apagó con agua (5 mL). La fase acuosa se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (3.0 mg, rendimiento: 8%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,038 min; m/z = 519,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 84(*)
Figure imgf000176_0001
N-(2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil)acrilamida Paso A:
Figure imgf000176_0002
2-hidroxipropilcarbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó Boc2Ü (29 g, 0,13 mol, 1,0 eq.) y trietilamina (37 mL, 0,27 mol, 2,0 eq.) a una solución de 1-amino-propan-2-ol (10 g, 0,13 mol, 1,0 eq.) en diclorometano (200 mL). La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 16 horas y se lavó con agua (100 mL) 2 veces y con salmuera (100 mL) 1 vez. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (20 g, rendimiento: 87%).
Paso B:
Figure imgf000176_0003
Metanosulfonato de 1-(ter-butoxicarbonil)propan-2-ilo
Procedimiento:
Trietilamina (1,15 g, 11,4 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (0,98 g, 8,6 mmol, 1,5 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 2-hidroxipropilcarbamato de ter-butilo (1,0 g, 5,7 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 3 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (20 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (10 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (0,8 g, rendimiento: 69%).
Paso C:
Figure imgf000177_0001
2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propilcarbamato de ter-butilo Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (165 mg, 0,51 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 1-(ter-butoxicarbonil)propan-2-ilo (128 mg, 0,51 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,25 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (30 mg, rendimiento: 21%).
Paso D:
Figure imgf000177_0002
1-(1-aminopropan-2-il)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propilcarbamato de ter-butilo (30 mg, 0,054 mmol) en acetato de etilo (5 mL) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (20 mg, rendimiento: 77%).
Paso E:
Figure imgf000178_0001
N -( 2 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p r o p i l ) a c r i la m i d a
Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 8 , 4 m g , 0 , 084 m m o l , 2 , 0 e q . ) y a n h í d r id o a c r í l i c o ( 6 ,3 m g , 0 , 05 m m o l , 1 ,2 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e 1 -( 1 - a m in o p r o p a n - 2 - i l ) - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 4 - a m in a ( 20 m g , 0 , 042 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (2 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 2 h o r a s y lu e g o s e a p a g ó c o n a g u a ( 5 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 5 ,0 m g , r e n d im ie n t o : 24 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 912 m in ; m / z = 505 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 3 4 ( s , 1 H ) , 7 , 74 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 5 5 - 7 , 4 8 ( m , 1 H ) , 7 , 13 - 7 , 0 6 ( m , 2 H ) , 6 , 1 0 - 6 , 0 8 ( m , 2 H ) , 5 , 60 - 5 , 57 ( m , 1 H ) , 5 , 27 - 5 , 24 ( m , 1 H ) , 3 , 82 - 3 , 73 ( m , 2 H ) , 1 , 66 - 1 , 64 ( m , 3 H ) .
Ejem plo 85(*)
Figure imgf000178_0002
N-(2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2.3.5.6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3.4-d]pirimidin-1-il)etil)-N-metilacrilamida Paso A:
Figure imgf000179_0001
Boc
2-hidroxietil(metil)carbamato de ter-butilo
Procedim iento:
Se agregó Boc20 (8,0 g, 36,6 mmol, 1,1 eq.) y trietilamina (6,75 g, 66,5 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 2-(metilamino)etanol (2,5 g, 33,3 mol, 1,0 eq.) en diclorometano (50 mL). La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 16 horas y se lavó con agua (30 mL) 2 veces y con salmuera (30 mL) 1 vez. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (5,8 g, rendimiento: 100%).
Paso B:
Figure imgf000179_0002
Boc
Metanosulfonato de 2-(ter-butoxicarbonil)etilo
Procedimiento:
Trietilamina (2,31 g, 22,8 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (1,96 g, 17,7 mmol, 1,5 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 2-hidroxietil(metil)carbamato de ter-butilo (2,0 g, 11,4 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 3 horas, se apagó con una solución saturada de NaHC03 (20 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (20 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (2,8 g, rendimiento: 100%).
Paso C:
Boc
Figure imgf000179_0003
2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil(metil)carbamato de ter-butilo Procedimiento:
Se agregó carbonato de cesio (116 mg, 0,36 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 2-(ter-butoxicarbonil)etilo (90 mg, 0,36 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0,18 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (50 mg, rendimiento: 52%).
Paso D:
Figure imgf000180_0001
3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(2-(metilamino)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil(metil)carbamato de ter-butilo (50 mg, 0,092 mmol) en diclorometano (5 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (44 mg, rendimiento: 100%).
Paso E:
Figure imgf000180_0002
N-(2-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)etil)-N-metilacrilamida
Procedim iento:
Trietilamina (28 mg, 0,28 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (17 mg, 0,092 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(2-(metilamino)etil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0,092 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas, y luego se apagó con agua (5 mL), se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (7,7 mg, rendimiento: 16%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,872 min; m/z = 505,0 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 86(*)
Figure imgf000181_0001
N-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil)-N-metilacrilamida Paso A:
Figure imgf000181_0002
Boc
Metanosulfonato de 3-((ter-butoxicarbonil)(metil)amino)propilo
Procedim iento:
Trietilamina (2,88 g, 28,5 mmol, 2,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (1,64 g, 14,3 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 3-hidroxipropil(metil)carbamato de ter-butilo (1,8 g, 14,3 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 3 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCÜ3 (20 mL) y se separó. La fase acuosa se extrajo con diclorometano (20 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (3,8 g, rendimiento: 100%).
Paso B:
Figure imgf000181_0003
3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil(metil)carbamato de terbutilo
Procedim iento:
Se agregó carbonato de cesio (331 mg, 1,02 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 3-(ter-butoxicarbonil)propilo (272 mg, 1,02 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (200 mg, 0,51 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en capa delgada (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) para dar el compuesto objetivo (58 mg, rendimiento: 20%).
Paso C:
Figure imgf000182_0001
3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(3-(metilamino)propil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil(metil)carbamato de ter-butilo (50 mg, 0,089 mmol) en diclorometano (5 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (45 mg, rendimiento: 100%).
Paso D:
Figure imgf000182_0002
N-(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)propil)-N-metilacrilamida Procedim iento:
Trietilamina (27 mg, 0,27 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (8 mg, 0,089 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1-(3-(metilamino)propil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (45 mg, 0,089 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas y luego se apagó con agua (5 mL) y se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto clorhidrato objetivo (2,3 mg, rendimiento: 5%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 4,010 min; m/z = 519,2 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 87(*)
Figure imgf000183_0001
N-(1-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)-2-metilpropan-2-il)acrilamida Paso A:
Figure imgf000183_0002
Metanosulfonato de 2-(ter-butoxicarbonil)-2-metilpropilo
Procedim iento:
Trietilamina (1,60 g, 15,9 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de metanosulfonilo (908 mg, 7,93 mmol, 1,5 eq.) se agregaron secuencialmente a una solución de 1-hidroxi-2-metilpropan-2-il-carbamato de ter-butilo (1,0 g, 5,28 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 20 oC durante 16 horas, se apagó con una solución saturada de NaHCÜ3 (20 mL), se separó y después se extrajo con diclorometano (20 mL) 2 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el compuesto objetivo (0,4 g, rendimiento: 28%).
Paso B:
Figure imgf000183_0003
1-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)-2-metilpropan-2-ilcarbamato de ter-butilo
Procedimiento:
Se agregó carbonato de cesio (249 mg, 0,76 mmol, 2,0 eq.) y metanosulfonato de 2-(ter-butoxicarbonil)-2-metilpropilo (272 mg, 1,02 mmol, 2,0 eq.) a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (150 mg, 0,38 mmol, 1,0 eq.) en DMF (2 mL). La mezcla de reacción se agitó a 85oC durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (50 mg, rendimiento: 23%).
Paso C:
Figure imgf000184_0001
1-(2-amino-2-metilpropil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de 1-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)-2-metilpropan-2-ilcarbamato de ter-butilo (20 mg, 0,035 mmol) en diclorometano (5 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (18 mg, rendimiento: 100%).
Paso D
Figure imgf000184_0002
N-(1-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)-2-metilpropan-2-il)acrilamida
Procedim iento:
Trietilamina (12 mg, 0,12 mmol, 3,0 eq.) y cloruro de acriloilo (3,6 mg, 0,043 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 1-(2-amino-2-metilpropil)-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0,043 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (3 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas, y luego se apagó con agua (5 mL) y se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto clorhidrato objetivo (0,8 mg, rendimiento: 3.6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 0,492 min; m/z = 519,1 [M+H]+; Duración total: 1.5 min.
E jem plo 88(*)
Figure imgf000185_0001
4-(4-(1-((R)-1-acriloilpirrolidin-3-il)-4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)-N-metilpicolinamida
Paso A:
Figure imgf000185_0002
4-(3-fluoro-4-bromofenoxi)-N-metilpicolinamida
Procedim iento:
Se agregó ter-butóxido de potasio (177 mg, 1,58 mmol, 1,0 eq.) a una solución de 4-bromo-3-fluorofenol (300 mg, 1,58 mmol, 1,0 eq.) en DMF (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, seguido por la adición de 4-cloro-N-metilpicolinamida (282 mg, 1,66 mmol, 1,05 eq.) y carbonato de potasio (229 mg, 1,66 mmol, 1,05 eq.). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 14 horas bajo una atmósfera de nitrógeno, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta del filtro se lavó con acetato de etilo. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (95 mg, rendimiento: 19%).
Paso B:
Figure imgf000185_0003
4-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)-N-metilpicolinamida Procedimiento:
La 4-(4-bromo-3-fluorofenoxi)-N-metilpiridin amida (95 mg, 0,29 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (88 mg, 0,35 mmol, 1,2 eq.), acetato de potasio (86 mg, 0,87 mmol, 3,0 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropaladio (13 mg, 0,017 mmol, 0,06 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano (10 mL) y se agitaron por 12 horas a 80 oC bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo (100 mg, rendimiento: 93%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso C:
Figure imgf000186_0001
(3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2-(metilcarbamoil)piridin-4-iloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo
Procedim iento:
El (R)-3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-formiato de ter-butilo (52 mg, 0,12 mmol, 1,0 eq. ), 4-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)-N-metilpicolinamida (45 mg, 0,12 mmol, 1,0 eq.), fosfato de potasio (51 mg, 0,24 mmol, 2,0 eq.) y Pd-118 (8 mg, 0,012 mmol, 0,1 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano/agua (4 mL, 3/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 80 oC durante 40 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: acetato de etilo) para dar el compuesto objetivo (15 mg, rendimiento: 24%).
Paso D:
Figure imgf000186_0002
4-(4-(4-amino-1-((R)-pirrolidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)-N-metilpicolinamida
Procedim iento:
Se agregó HCl 4M /AE (5 mL) a una solución de (3R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2-(metilcarbamoil)piridin-4-iloxi)fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -formiato de ter-butilo (15 mg, 0,028 mmol) en diclorometano (5 mL) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró y se secó por centrifugación para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (10 mg, rendimiento: 81%).
Paso E:
Figure imgf000187_0001
4-(4-(1-((R)-1-acriloilpirrolidin-3-il)-4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)-N-metilpicolinamida Procedim iento:
Una solución de NaOH (2N, 0,4 mL) y cloruro de acriloilo (1,9 mg, 0,021 mmol, 1,0 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 4-(4-(4-amino-1-((R)-pirrolidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-fluorofenoxi)-N-metilpicolinamida (10 mg, 0,021 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (1 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a 0 oC durante 2 horas y luego se apagó con agua (5 mL) y se extrajo con diclorometano (5 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (6 mg, rendimiento: 60%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,445 min; m/z = 489,1 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 89(*)
Figure imgf000187_0002
1 -((R)-3-(4-amino-3-(4-(6,7-dimetoxiquinolin-4-iloxi)-2-fluorofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona Paso A:
Figure imgf000187_0003
4-(4-bromo-3-fluorofenoxi)-6,7-dimetoxiquinolina
Procedimiento:
U n a s o lu c ió n d e t e r - b u t ó x id o d e p o t a s io e n T H F ( IN , 1 , 24 m L , 1 , 24 m m o l , 1 , 05 e q . ) s e a g r e g ó a u n a s o lu c ió n d e 3 - f l u o r o -4 - b r o m o f e n o l ( 225 m g , 1 , 18 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F (2 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 0 oC d u r a n t e 2 h o r a s , s e g u id o p o r la a d i c ió n d e 4 - c lo r o - 6 , 7 - d im e t o x iq u i n o l in a ( 264 m g , 1 , 18 m m o l , 1 ,0 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io (81 m g , 0 , 59 m m o l , 0 , 5 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 80 oC d u r a n t e 14 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o , s e e n f r ió a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e y s e f i l t r ó . L a t o r t a d e l f i l t r o s e la v ó c o n a c e t a t o d e e t i l o . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 100 m g , r e n d im ie n t o : 24 % ) .
Paso B:
Figure imgf000188_0001
4 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n - 2 - i l ) f e n o x i ) - 6 , 7 - d i m e t o x i q u in o l i n a
Procedim iento:
L a 4 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) - 6 , 7 - d i m e t o x i q u in o l i n a ( 100 m g , 0 , 26 m m o l , 1 ,0 e q . ) , b i s ( p in a c o la t o ) d ib o r o (101 m g , 0 , 39 m m o l , 1 ,5 e q . ) , a c e t a t o d e p o t a s io ( 78 m g , 0 , 79 m m o l , 3 , 0 e q . ) y ( 1 , 1 ' - b i s ( d i f e n i l f o s f i n o ) f e r r o c e n o ) d i c lo r o p a l a d i o ( 25 m g , 0 , 026 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o ( 2 m L ) y s e a g i t a r o n a 85 oC d u r a n t e 12 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o ( 110 m g , r e n d im ie n t o : 100 % ) , q u e s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n e l s ig u ie n t e p a s o .
Paso C:
Figure imgf000188_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 4 -( 6 , 7 - d im e t o x iq u in o l in - 4 - i l o x i ) - 2 - f lu o r o f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n -1 - o n a
Procedim iento :
L a ( R ) -1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 100 m g , 0 , 26 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 4 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n - 2 - i l ) f e n o x i ) - 6 , 7 - d i m e t o x i q u i n o l i n a ( 145 m g , 0 , 39 m m o l , 1 ,5 e q ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 83 m g , 0 , 78 m m o l , 3 , 0 e q ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 30 m g , 0 , 026 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 10 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 85 oC d u r a n t e 30 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C e n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a c o n f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 20 m g , r e n d im ie n t o : 12 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 717 m in ; m / z = 556 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) ó 8 , 79 ( b r , 1 H ) , 8 ,51 ( s , 1 H ) , 7 , 92 - 7 , 86 ( m , 2 H ) , 7 , 57 - 7 , 47 ( m , 3 H ) , 7 , 29 ( b r , 1 H ) , 6 , 74 - 6 , 60 (m , 1 H ) , 6 , 34 - 6 , 29 ( m , 1 H ) , 5 , 82 - 5 , 76 ( m , 2 H ) , 4 , 27 - 4 , 23 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 15 - 4 , 10 ( m , 8 H ) , 3 , 97 - 3 , 82 ( m , 1 , 5 H ) , 2 , 67 - 2 , 59 ( m , 2 H ) . Ejem plo 90(*)
Figure imgf000189_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( q u in o l i n - 4 - i lo x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Paso A:
Figure imgf000189_0002
4 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) q u i n o l i n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó 4 - c lo r o - q u i n o l i n a ( 440 m g , 2 , 7 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - f l u o r o - 4 - b r o m o f e n o l ( 2 , 04 g , 10 , 8 m m o l , 4 , 0 e q . ) e n c lo r o b e n c e n o ( 5 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 100 oC d u r a n t e 12 h o r a s y d e s p u é s s e le a g r e g ó s o lu c ió n d e h id r ó x id o d e s o d io (1 N , 10 m L ) . L a m e z c la r e s u l t a n t e s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , e l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o ( 800 m g , r e n d im ie n t o : 93 % ) , q u e s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n e l s ig u ie n t e p a s o .
Paso B:
Figure imgf000189_0003
Procedimiento:
L a 4 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) q u i n o l i n a ( 400 m g , 1 , 26 m m o l , 1 ,0 e q . ) , b i s ( p in a c o la t o ) d ib o r o ( 480 m g , 1 , 89 m m o l , 1 , 5 e q . ) , a c e t a t o d e p o t a s io ( 370 m g , 3 , 78 m m o l , 3 , 0 e q . ) y ( 1 , 1 ' - b i s ( d i f e n i l f o s f i n o ) f e r r o c e n o ) d i c lo r o p a l a d i o ( 117 m g , 0 , 126 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o ( 4 m L ) y s e a g i t a r o n a 85 oC d u r a n t e 12 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o ( 450 m g , r e n d im ie n t o : 98 % ) , q u e s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n e l s ig u ie n t e p a s o .
Paso C:
Figure imgf000190_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( q u in o l i n - 4 - i lo x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Procedim iento:
L a ( R ) - 1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 100 m g , 0 , 26 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 4 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n - 2 - i l ) f e n o x i ) q u i n o l in a ( 142 m g , 0 , 39 m m o l , 1 , 5 e q ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 83 m g , 0 , 78 m m o l , 3 , 0 e q ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 30 m g , 0 , 026 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 10 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 85 oC d u r a n t e 40 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 15 m g , r e n d im ie n t o : 10 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 586 m in ; m / z = 496 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3 O D ) 6 9 , 08 (d , J = 6 , 8 H z , 1 H ) , 8 , 72 ( d , J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 8 , 49 ( s , 1 H ) , 8 , 2 6 - 8 , 2 0 ( m , 2 H ) , 8 , 0 6 ( b r , 1 H ) , 7 ,91 (d , J = 6 , 8 H z , 1 H ) , 7 , 5 6 - 7 , 4 4 ( m , 3 H ) , 6 , 7 1 - 6 , 5 7 ( m , 1 H ) , 6 , 3 1 - 6 , 2 7 ( m , 1 H ) , 5 , 8 0 - 5 , 7 4 ( m , 2 H ) , 4 , 2 7 - 3 , 9 2 ( m , 4 H ) , 2 , 70 - 2 , 55 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 91
Figure imgf000190_0002
( E ) - 1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r im i d in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) - 4 -( d im e t i la m in o ) b u t - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó c lo r h i d r a t o d e l á c id o ( E ) - 4 -( d im e t i l a m in o ) b u t - 2 - e n o ic o ( 23 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) , D I P E A ( 50 m g , 0 , 39 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 54 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in -3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] - p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0.5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 29 m g , r e n d im ie n t o : 40 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 625 m in ; m / z = 574 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , D M S O - c fe ) 6 11 , 24 ( b r , 1 H ) , 8 , 5 7 ( s , 1 H ) , 8 , 0 2 - 7 , 9 5 ( m , 1 H ) , 8 , 62 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 3 3 ( d d , J = 2 ,0 , 10 , 8 H z , 1 H ) , 7 , 33 ( d d , J = 2 , 0 , 8 , 4 H z , 1 H ) , 6 , 76 - 6 , 6 8 ( m , 2 H ) , 5 , 6 5 - 5 , 5 6 ( m , 1 H ) , 4 , 2 2 - 4 , 1 6 (m , 0 , 5 H ) , 4 , 0 4 - 3 , 8 7 ( m , 4 , 5 H ) , 3 , 69 - 3 , 58 ( m , 1 H ) , 2 , 71 - 2 , 68 ( m , 6 H ) , 2 , 54 - 2 , 37 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 92(*)
Figure imgf000191_0001
( E ) - 1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n -1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) - 3 -f e n i l p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó c lo r u r o d e ( E ) - 3 - f e n i l - 2 - a c r i lo i lo ( 19 , 7 m g , 0 , 12 m m o l , 1 ,1 e q . ) y t r i e t i l a m in a ( 22 m g , 0 , 22 m m o l , 2 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 ,11 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 2 h o r a s , s e a p a g ó c o n a g u a ( 5 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 5 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 16 m g , r e n d im ie n t o : 25 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 371 m in ; m /z = 593 ,1 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) ó 8 , 46 ( s , 1 H ) , 7 , 68 - 7 , 60 ( m , 4 H ) , 7 , 55 - 7 , 37 ( m , 4 H ) , 7 , 09 - 6 , 92 ( m , 3 H ) , 5 , 81 - 5 ,71 ( m , 1 H ) , 4 , 33 - 4 ,31 ( m , 0 , 8 H ) , 4 , 19 - 3 , 82 ( m , 3 , 2 H ) , 2 , 73 - 2 , 56 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 93(*)
Figure imgf000192_0001
(E ) -1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) - 3 -( 2 -f lu o r o f e n i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó á c id o ( E ) - 3 -( 2 - f l u o r o f e n i l ) a c r í l i c o ( 24 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) , D I P E A ( 50 m g , 0 , 39 m m o l , 3 , 0 e q . ) y H A T U ( 54 m g , 0 , 14 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 60 m g , 0 , 13 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 2 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c i ó n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 25 m g , r e n d im ie n t o : 31 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 5 , 220 m in ; m /z = 611 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , D M S O - c fe ) ó 8 , 04 ( s , 1 H ) , 7 , 95 - 7 , 87 ( m , 2 H ) , 7 , 60 - 7 , 55 ( m , 2 H ) , 7 , 48 - 7 , 42 ( m , 1 H ) , 7 , 28 - 7 , 23 ( m , 3 H ) , 7 , 12 - 7 , 06 ( m , 2 H ) , 5 , 64 - 5 , 50 ( m , 1 H ) , 4 , 23 - 4 , 20 ( m , 0 , 5 H ) , 4 , 05 - 3 , 75 ( m , 3 , 5 H ) , 2 , 56 - 2 , 39 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 94(*)
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Paso A:
Boc
Figure imgf000193_0001
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o Procedim iento:
S e d i s o lv i ó 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r im i d in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - f o r m i a t o d e t e r - b u t i l o ( 6.5 g , 15 , 0 m m o l , 1 ,0 e q . ) , 2 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d i o x a b o r o l a n o ( 6 ,5 g , 19 , 6 m m o l , 1 ,3 e q . ) , f o s f a t o d e p o t a s io ( 6 ,4 g , 30 ,1 m m o l , 2 , 0 e q . ) y P d - 118 ( 0 ,25 g , 0 , 39 m m o l , 0 ,01 e q . ) e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a ( 16 m L , 1 /1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a 85 oC d u r a n t e 12 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , la m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 50 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 100 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( e lu e n t e : a c e t a t o d e e t i l o ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 4 ,2 g , r e n d im ie n t o : 55 % ) .
Paso B:
Figure imgf000193_0002
3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m in a
Procedim iento:
S e a g r e g ó H C l 4 M / A E ( 10 m L ) a u n a s o lu c ió n d e ( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 3 - f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - f o r m ia t o d e t e r - b u t i l o ( 4 ,2 g , 8 , 27 m m o l) e n d i c lo r o m e t a n o ( 15 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 1 h o r a , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 3 , 7 g , r e n d im ie n t o : 92 % ) .
Paso C:
Figure imgf000194_0001
1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1-ona
Procedim iento:
Una solución de NaOH (10%, 15,3 mL) y cloruro de acriloilo (0,67 g, 7,44 mmol, 0,9 eq.) se agregaron secuencialmente, gota a gota, a una solución de 3-(2-fluoro-4-(3-fluorofenoxi)fenil)-1-((R)-pirrolidin-3-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (3,7 g, 8,27 mmol, 1,0 eq.) en tetrahidrofurano (20 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (20 mL) y se extrajo con diclorometano (30 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluente: éter de petróleo: acetato de etilo = 1:0 a 1:1) para dar el compuesto objetivo (2,5 g, rendimiento: 65%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,178 min; m/z = 463,0 [M+H]+ ; Duración total: 7 min.
1H RMN (400MHz, CDCF) 58,36 (s, 1H), 7,53-7,49 (m, 1H), 7,40-7,35 (m, 1H), 6,95-6,81 (m, 4H), 6,41-6,39 (m, 2H), 5,69­ 5,55 (m, 3H), 4,14-3,98 (m, 3H), 3,78-3,72 (m, 1H), 2,71-2,54 (m, 2H).
Ejem plo 95(*)
Figure imgf000194_0002
1-((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(pirimidin-2-iloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1-ona Paso A:
Figure imgf000195_0001
2 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) p i r im i d in a
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 - c lo r o p i r i m id i n a ( 1 , 98 g , 17 , 3 m m o l , 1 ,1 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 2 ,6 g , 18 , 8 m m o l , 1 ,2 e q ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - f l u o r o - 4 - b r o m o f e n o l ( 3 ,0 g , 15 ,7 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n a c e t o n a ( 30 m L ) y s u l f ó x id o d e d im e t i l o ( 10 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 110 oC d u r a n t e 16 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e s e le a g r e g ó a g u a ( 100 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 100 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 5 : 1 ) p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 930 m g , r e n d im ie n t o : 22 % ) .
Paso B:
Figure imgf000195_0002
2 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n - 2 - i l ) f e n o x i ) p i r im i d in a
Procedim iento:
L a 4 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) p i r im i d in a ( 300 m g , 1 ,11 m m o l , 1 ,0 e q . ) , b i s ( p in a c o la t o ) d ib o r o ( 425 m g , 1 , 67 m m o l , 1 ,5 e q . ) , a c e t a t o d e p o t a s io ( 328 m g , 3 , 34 m m o l , 3 , 0 e q . ) y ( 1 , 1 ' - b i s ( d i f e n i l f o s f i n o ) f e r r o c e n o ) d i c lo r o p a l a d i o ( 89 m g , 0 ,11 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o ( 3 m L ) . L a m e z c la r e s u l t a n t e s e c a l e n t ó a 85 oC y s e a g i t ó d u r a n t e 12 h o r a s b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e f i l t r ó a t r a v é s d e c e l i t e . E l f i l t r a d o s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o ( 207 m g , r e n d im ie n t o : 59 % ) , q u e s e u s ó d i r e c t a m e n t e e n e l s ig u ie n t e p a s o .
Paso C:
Figure imgf000195_0003
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( p i r im id in - 2 - i lo x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3.4 - d 1 p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a Procedimiento:
La (R)-1-(3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (80 mg, 0,21 mmol, 1,0 eq.), 2-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)pirimidina (132 mg, 0,42 mmol, 2,0 eq.), carbonato de sodio (66 mg, 0,63 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (24 mg, 0,021 mmol, 0,1 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano/agua (2,4 mL, 5/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 30 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0,5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (3,5 mg, rendimiento: 3.7%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,115 min; m/z = 447,0 [M+H]+; Duración total: 7 min.
Ejem plo 96(*)
Figure imgf000196_0001
1 -((R)-3-(4-amino-3-(4-(4-cloropirimidin-2-iloxi)-2-fluorofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000196_0002
3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol
Procedim iento:
El 3-fluoro-4-bromofenol (3,0 g, 15,7 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (5,98 g, 23,6 mmol, 1,5 eq.), acetato de potasio (4,62 g, 47,1 mmol, 3,0 eq.), Pd2(dba)3 (1,44 g, 1,57 mmol, 0,1 eq.) y X-phos (749 mg, 1,57 mmol, 0,1 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano (30 mL), la mezcla se calentó a 85 oC y se agitó por 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo (3,1 g, rendimiento: 83%), que se usó directamente en el siguiente paso.
Paso B:
Figure imgf000197_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 - h id r o x i f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
L a ( R ) - 1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 - y o d o - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 500 m g , 1 , 3 m m o l , 1 , 0 e q . ) , 3 -f l u o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n - 2 - i l ) f e n o l (621 m g , 2 , 6 m m o l , 2 , 0 e q . ) , c a r b o n a t o d e s o d io ( 415 m g , 3 , 9 m m o l , 3 , 0 e q . ) y P d ( P P h 3 ) 4 ( 150 m g , 0 , 13 m m o l , 0 ,1 e q . ) s e d i s o lv i e r o n e n 1 , 4 - d io x a n o / a g u a (6 m L , 5 / 1 , v / v ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 85 oC d u r a n t e 30 m in , b a jo u n a a t m ó s f e r a d e n i t r ó g e n o y c o n i r r a d ia c ió n d e m ic r o o n d a s . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r c r o m a t o g r a f í a e n c o lu m n a d e g e l d e s í l i c e ( é t e r d e p e t r ó le o : a c e t a t o d e e t i l o = 1 : 1 ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 12 m g , r e n d im ie n t o : 2 , 5 % ) .
Paso C:
Figure imgf000197_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 4 -( 4 - c lo r o p i r im id in - 2 - i lo x i ) - 2 - f l u o r o f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó N a H ( 1 ,3 m g , 0 , 033 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 - h id r o x i f e n i l ) - 1 H -p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) p r o p - 2 - e n - 1 - o n a ( 12 m g , 0 , 033 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n t e t r a h id r o f u r a n o ( 2 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 30 m in , s e g u id o p o r la a d ic ió n d e 4 - c lo r o - 2 -( m e t i l s u l f o n i l ) p i r im id in a ( 6 ,3 m g , 0 , 033 m m o l , 1 , 0 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó d u r a n t e la n o c h e a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n c o lu m n a d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o (4.1 m g , r e n d im ie n t o : 26 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 554 m in ; m /z = 481 , 0 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 97(*)
Figure imgf000198_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 4 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r im id in - 2 - i l o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) p r o p - 2 -e n - 1 - o n a
Paso A:
Figure imgf000198_0002
2 -( 4 - b r o m o - 3 - f lu o r o f e n o x i ) - 4 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r im id i n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 - c lo r o - 4 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r i m i d in a ( 4 ,2 g , 23 , 0 m m o l , 1 ,1 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 3 ,5 g , 25 ,1 m m o l , 1 , 2 e q ) a u n a s o lu c ió n d e 3 - f l u o r o - 4 - b r o m o f e n o l ( 4 ,0 g , 20 , 9 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n b u t a n o n a ( 15 m L ) y s u l f ó x id o d e d im e t i l o (5 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 100 oC d u r a n t e 12 h o r a s . D e s p u é s d e e n f r ia r a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e s e le a g r e g ó a g u a ( 20 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n a c e t a t o d e e t i l o ( 20 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , e l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e a is ló p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 500 m g , r e n d im ie n t o : 7 % ) .
Paso B:
Figure imgf000198_0003
2 -( 3 - f lu o r o - 4 -( 4 , 4 , 5 , 5 - t e t r a m e t i l - 1 , 3 , 2 - d io x a b o r o la n - 2 - i l ) f e n o x i ) - 4 -( t r i f l u o r o m e t i l ) p i r im id i n a Procedimiento:
La 2-(4-bromo-3-fluorofenoxi)-4-(trifluorometil)pirimidina (300 mg, 0,89 mmol, 1,0 eq.), bis(pinacolato)diboro (452 mg, 1,78 mmol, 2,0 eq.), acetato de potasio (272 mg, 2,78 mmol, 3,0 eq.) y (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)dicloropaladio (40 mg, 0,05 mmol, 0,06 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano (2 mL); la mezcla se calentó a 85 oC y se agitó por 12 horas bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se filtró a través de celite. El filtrado se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo (340 mg, rendimiento: 100%), que se usó directamente en el siguiente paso. Paso C:
Figure imgf000199_0001
1-((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(4-(trifluorometil)pirimidin-2-iloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1-ona
Procedim iento:
La (R)-1-(3-(4-amino-3-yodo-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (80 mg, 0,21 mmol, 1,0 eq.), 2-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)-4-(trifluorometil)pirimidina (160 mg, 0,42 mmol, 2,0 eq.), carbonato de potasio (86 mg, 0,63 mmol, 3,0 eq.) y Pd(PPh3)4 (24 mg, 0,021 mmol, 0,1 eq.) se disolvieron en 1,4-dioxano/agua (10 mL, 1/1, v/v). La mezcla de reacción se agitó a 85 oC durante 40 min, bajo una atmósfera de nitrógeno y con irradiación de microondas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /HCl 0.5%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el clorhidrato del compuesto objetivo (14 mg, rendimiento: 6%).
Datos de espectroscopia:
LC/MS (Método: UFLC): RT = 2,800 min; m/z = 515,0 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 98
( Z ) - 4 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) - 4 - o x o - b u t -2 - e n o n i t r i l o
Procedim iento:
S e a g r e g ó ( Z ) - 3 - c ia n o a c r i l a t o d e p o t a s io ( 29 m g , 0 , 216 m m o l , 2 , 0 e q . ) , P y B r o p ( 60 m g , 0 , 130 m m o l , 1 ,2 e q . ) , N ,N -d i i s o p r o p i le t i l a m in a ( 42 m g , 0 , 324 m m o l , 3 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) -p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D M F ( 3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 0 oC d u r a n t e 5 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( e n p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 14 m g , r e n d im ie n t o : 24 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 545 m in ; m /z = 542 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) 6 8 , 24 ( s , 1 H ) , 7 , 61 - 7 , 58 ( m , 1 H ) , 7 , 48 - 7 , 43 ( m , 1 H ) , 7 , 19 - 7 ,01 ( m , 3 H ) , 6 , 08 - 6 ,01 ( m , 1 H ) , 5 , 62 - 5 , 56 ( m , 1 H ) , 4 , 16 - 4 , 14 ( m , 1 H ) , 4 , 05 - 3 , 98 ( m , 1 , 5 H ) , 3 , 88 - 3 , 83 ( m , 1 H ) , 3 , 75 - 3 , 70 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 61 - 2 ,51 ( m , 2 H ) .
Ejem plos 99 y 100
Figure imgf000200_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 -c lo r o e t a n o n a
Figure imgf000200_0002
1 -( ( S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 -c lo r o e t a n o n a
Paso A:
Figure imgf000201_0001
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - 2 - c lo r o e t a n o n a Procedim iento:
U n a s o lu c ió n d e t r i e t i l a m in a (2 m L ) y c lo r u r o d e c lo r o a c e t i lo (21 m g , 0 , 19 m m o l , 0 , 9 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (1 m L ) s e a g r e g ó , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d i n - 4 -a m in a ( 100 m g , 0 ,21 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 2 h o r a s , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 20 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 30 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( e n p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 80 m g , r e n d im ie n t o : 69 % ) .
Paso B:
Figure imgf000201_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 -c lo r o e t a n o n a
1 -((S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)-2-cloroetanona
Procedim iento:
La 1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)piperidin-1 -il)-2-cloroetanona se separó quiralmente por SFC para dar el compuesto 99 (20 mg, rendimiento: 25%) y el compuesto del ejemplo 100 (35 mg, rendimiento: 44%).
Datos de espectroscopia:
E jem plo 99
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,566 min; m/z = 552,9 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plo 100
LC/MS (Método: UFLC): RT = 3,572 min; m/z = 552,9 [M+H]+; Duración total: 7 min.
E jem plos 101 y 102
Figure imgf000202_0001
1-((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)-2,2-dicloroetanona
Figure imgf000202_0002
1 -((S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1-il)-2,2-dicloroetanona
Paso A:
Figure imgf000203_0001
Procedim iento:
U n a s o lu c ió n d e t r i e t i l a m in a (2 m L ) y c lo r u r o d e 2 , 2 - d ic l o r o a c e t i lo ( 28 m g , 0 , 19 m m o l , 0 , 9 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (1 m L ) s e a g r e g ó , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( p ip e r id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 -d ] p i r im id in - 4 - a m in a ( 100 m g , 0 ,21 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 2 h o r a s , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 20 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 30 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f i c ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 80 m g , r e n d im ie n t o : 65 % ) . Paso B:
Figure imgf000203_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 , 2 -d i c lo r o e t a n o n a
Figure imgf000203_0003
1 -( ( S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i p e r id i n - 1 - i l ) - 2 , 2 -d i c lo r o e t a n o n a
Procedimiento:
1 -( 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 , 2 -d i c lo r o e t a n o n a s e s e p a r ó q u i r a lm e n t e p o r S F C p a r a d a r e l c o m p u e s t o d e l e j e m p lo 101 ( 18 m g , r e n d im ie n t o : 23 % ) y e l c o m p u e s t o d e l e j e m p lo 102 ( 30 m g , r e n d im ie n t o : 38 % ) .
Datos de espectroscopia:
E jem plo 101
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 788 m in ; m /z = 586 , 9 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 102
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 793 m in ; m /z = 586 , 9 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 103
Figure imgf000204_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) - 2 , 2 -d i c lo r o e t a n o n a
Procedim iento:
Figure imgf000204_0002
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 760 m in ; m /z = 572 , 9 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 104
Figure imgf000205_0001
(E )-1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ]p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) b u t - 2 - e n - 1 - o n a Procedim iento:
T r ie t i l a m in a ( 30 m g , 0 , 3 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c lo r u r o d e ( E ) - b u t - 2 - e n o i lo ( 10 m g , 0 ,1 m m o l , 1 , 0 e q . ) s e a g r e g a r o n , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 ,1 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e la n o c h e , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 19 m g , r e n d im ie n t o : 36 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 854 m in ; m /z = 553 , 0 [M N a ] ; D u r a c ió n t o ta l : 7 m in .
Ejem plo 105
Figure imgf000205_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) - 2 - m e t i l p r o p - 2 -e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó s e c u e n c ia lm e n t e á c id o 2 - m e t a c r í l i c o (11 m g , 0 , 134 m m o l , 1 ,2 e q . ) , H A T U ( 53 m g , 0 , 140 m m o l , 1 ,3 e q . ) y N , N -d i i s o p r o p i le t i l a m in a ( 42 m g , 0 , 324 m m o l , 1 ,0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) -p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 5 h o r a s , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e a is ló p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 18 m g , r e n d im ie n t o : 32 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 557 m in ; m /z = 532 ,1 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) ó 8 , 44 - 8 , 43 ( m , 1 H ) , 7 , 71 - 7 , 65 ( m , 1 H ) , 7 , 53 - 7 , 47 ( m , 1 H ) , 7 , 13 - 7 , 06 ( m , 2 H ) , 5 , 76 - 5 , 65 ( m , 1 H ) , 5 , 36 - 5 , 32 ( m , 1 H ) , 5 , 24 - 5 ,21 ( m , 1 H ) , 4 ,21 - 3 , 99 ( m , 2 , 5 H ) , 3 , 88 - 3 , 80 ( m , 1 H ) , 3 , 70 - 3 , 65 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 59 - 2 , 52 ( m , 2 H ) , 1 , 94 - 1 , 89 ( m , 3 H ) .
Ejem plo 106
Figure imgf000206_0001
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - i l ) - 2 - f l u o r o p r o p -2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó s e c u e n c ia lm e n t e á c id o 2 - f l u o r o a c r í l i c o (11 m g , 0 , 134 m m o l , 1 , 2 e q . ) , H A T U ( 53 m g , 0 , 140 m m o l , 1 , 3 e q . ) y N ,N -d i i s o p r o p i le t i l a m in a ( 42 m g , 0 , 324 m m o l , 1 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) -p i r r o l id in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 5 h o r a s , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e a is ló p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 10 m g , r e n d im ie n t o : 18 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 624 m in ; m /z = 535 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3 O D ) ó 8 , 43 - 8 , 42 ( m , 1 H ) , 7 , 77 - 7 , 66 ( m , 1 H ) , 7 , 55 - 7 , 47 ( m , 1 H ) , 7 , 12 - 7 , 06 ( m , 2 H ) , 5 , 71 - 5 , 68 ( m , 1 H ) , 5 , 54 - 5 , 52 ( m , 0 , 5 H ) , 5 , 42 - 5 , 41 ( m , 0 , 5 H ) , 5 , 31 - 5 , 26 ( m , 1 H ) , 4 , 28 - 4 , 26 ( m , 1 H ) , 4 , 13 - 4 , 08 ( m , 1 , 5 H ) , 3 , 95 - 3 , 76 ( m , 1 , 5 H ) , 2 , 76 - 2 , 52 ( m , 2 H ) .
Ejem plos 107 y 108
Figure imgf000207_0001
1 - ( ( R ) - 3 - ( 4 - a m in o - 3 - ( 2 - f lu o r o - 4 - ( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 -f lu o r o e t a n o n a
Figure imgf000207_0002
1 -( ( S ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p ip e r id in - 1 - i l ) - 2 -f lu o r o e t a n o n a
Paso A:
Figure imgf000207_0003
1 -( 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p ip e r i d in - 1 - i l ) - 2 - f l u o r o e t a n o n a Procedimiento:
Trietilamina (2 mL) y cloruro de 2-fluoroacetilo (18 mg, 0,19 mmol, 0,9 eq.) se agregaron, gota a gota, a una solución de 3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 -((R)-piperidin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,21 mmol, 1,0 eq.) en diclorometano (10 mL) a 0 oC. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, y luego se apagó con una solución saturada de NaHCO3 (20 mL) y se extrajo con diclorometano (30 mL) 3 veces. La fase orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se concentró y se secó por centrifugación para dar el producto crudo, que se purificó por HPLC con una columna C18 de fase inversa (fase móvil: acetonitrilo /agua /NH4 HCO3 0,7%, gradiente: 10% a 100% (proporción en volumen)), se evaporó para eliminar los componentes volátiles bajo presión reducida, y se liofilizó para dar el compuesto objetivo (30 mg, rendimiento: 29%).
Paso B:
Figure imgf000208_0001
1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)-2-fluoroetanona
Figure imgf000208_0002
1 -((S)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)-2-fluoroetanona
Procedim iento:
1 -(3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)piperidin-1 -il)-2-fluoroetanona se separó quiralmente por SFC para dar el compuesto del ejemplo 107 (13 mg, rendimiento: 43%) y el compuesto del ejemplo 108 (14 mg, rendimiento: 47%).
Datos de espectroscopia:
E jem plo 107
L C /M S (M é to d o : U F L C ) : R T = 3 , 362 m in; m /z = 537 ,1 [M H ]+; D u r a c ió n total: 7 m in.
Ejem plo 108
L C /M S (M é to d o : U F L C ) : R T = 3 , 359 m in; m /z = 537 ,1 [M H ]+; D u r a c ió n total: 7 m in.
Ejem plo 109
Figure imgf000209_0001
( (R )-3 -(4 -a m in o -3 -(2 -f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 -t e t r a f lu o ro f e n o x i)fe n il)-1 H -p ira z o lo [3 ,4 -d ]p ir im id in -1 - il)p irro lid in -1 - il)(o x a z o l-2 -il)m e ta n o n a
Procedim iento:
S e a g r e g ó s e c u e n c ia lm e n t e á c id o o x a z o l- 2 - c a r b o x ílic o (16 m g, 0 ,143 m m o l, 1 ,1 e q .), H A T U (54 m g, 0 , 143 m m o l, 1 ,1 e q .) y N ,N -d iis o p ro p ile t ila m in a (50 m g, 0 ,389 m m o l, 3 ,0 e q .) a u n a s o lu c ió n d e 3 - (2 - f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 - t e t r a f lu o r o fe n o x i)fe n il)-1 -( (R )-p ir r o lid in -3 - il) - 1 H - p ir a z o lo [3 ,4 -d ]p ir im id in - 4 - a m in a (60 m g, 0 ,130 m m o l, 1 ,0 e q .) e n d ic lo ro m e t a n o (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g itó a te m p e r a tu r a a m b ie n te d u ra n te 5 h o r a s , s e d ilu y ó c o n a g u a (10 m L ) y d e s p u é s s e e x tra jo c o n d ic lo ro m e t a n o (10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n ic a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u lfa to d e s o d io a n h id ro , s e c o n c e n tr ó y s e s e c ó p o r c e n tr ifu g a c ió n p a r a d a r el p ro d u c to c ru d o , q u e s e p u rific ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a (fa s e m ó vil: a c e to n itrilo / a g u a /H C l 0.5 % , g r a d ie n te : 10 % a 100 % (p ro p o rc ió n e n v o lu m e n )), s e e v a p o r ó p a r a e lim in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t ile s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e lio filizó p a r a d a r el c lo rh id ra to d e l c o m p u e s t o o b je t iv o (24 m g, re n d im ie n to : 33 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C /M S (M é to d o : U F L C ) : R T = 4 , 417 m in; m /z = 558 ,1 [M H ]+; D u r a c ió n total: 7 m in.
Ejem plo 110
Figure imgf000209_0002
( (R )-3 -(4 -a m in o -3 -(2 -f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 -t e t r a f lu o ro f e n o x i)fe n il)-1 H -p ira z o lo [3 ,4 -d ]p ir im id in -1 - il)p irro lid in -1 - il) (b e n z o [d ]o x a z o l-2 - il)m e ta n o n a
Procedimiento:
S e a g r e g ó s e c u e n c ia lm e n t e á c id o b e n z o [c /]o x a z o l-2 -c a r b o x ílic o (26 m g, 0 ,163 m m o l, 1,5 e q .), H A T U (45 m g, 0 ,119 m m ol, 1,1 e q .) y N ,N -d iis o p ro p ile t ila m in a (42 m g, 0 ,324 m m o l, 3 ,0 e q .) a u n a s o lu c ió n d e 3 -(2 - f lu o r o - 4 -(2 ,3 ,5 ,6 -t e t r a f lu o r o fe n o x i)fe n il)-1 -((R )- p irr o lid in - 3 - il) -1 H - p ir a z o lo [3 ,4 - d ]p ir im id in -4 -a m in a (50 m g, 0 ,108 m m o l, 1,0 e q .) e n D M F (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g itó a t e m p e ra tu ra a m b ie n te d u r a n te 5 h o r a s , s e d ilu y ó c o n a g u a (10 m L ) y d e s p u é s s e e x tra jo c o n d ic lo ro m e t a n o (10 m L) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n ic a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u lfa to d e s o d io a n h id ro , s e c o n c e n tr ó y s e s e c ó p o r c e n tr ifu g a c ió n p a r a d a r e l p ro d u c to c ru d o , q u e s e p u rif ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a (fa s e m ó vil: a c e to n itrilo /a g u a /H C l 0 ,5 % , g ra d ie n te : 10 % a 100 % (p ro p o rc ió n e n v o lu m e n )), s e e v a p o r ó p a ra e lim in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t ile s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e lio filizó p a r a d a r el c lo rh id ra to d e l c o m p u e s t o o b je tiv o (8 ,7 m g, re n d im ie n to : 13 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C /M S (M é to d o : U F L C ) : R T = 5 , 007 m in; m /z = 608 ,1 [M H ]+; D u r a c ió n total: 7 m in.
Ejem plo 111
Figure imgf000210_0001
1 -( (R )- 3 -(4 - a m in o - 3 -(2 - f lu o r o - 4 -(2 ,3 ,5 ,6 - t e t ra f lu o r o fe n o x i)f e n il)- 1 H -p ira z o lo [3 ,4 -d ]p irim id in -1 - il)p irro lid in -1 -il)-2 -f lu o r o e t a n o n a
Procedim iento:
T rie t ila m in a (30 m g, 0 ,6 m m o l, 3 ,0 e q .) y c lo ru ro d e 2 -f lu o ro a c e tilo (18 m g, 0 ,2 m m o l, 2 ,0 e q .) s e a g r e g a r o n , g o ta a g o ta , a u n a s o lu c ió n d e c lo rh id ra to d e 3 -(2 - f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 - t e t r a f lu o r o fe n o x i)fe n il)-1 -((R )- p irr o lid in - 3 - il) -1 H - p ir a z o lo [3 ,4 -d ]p ir im id in -4 -a m in a (100 m g, 0 ,10 m m o l, 1,0 e q .) e n d ic lo ro m e t a n o (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g itó a te m p e r a tu r a a m b ie n te d u r a n te 16 h o r a s , s e d ilu y ó c o n a g u a (10 m L ) y d e s p u é s s e e x tra jo c o n d ic lo ro m e t a n o (10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n ic a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u lfa to d e s o d io a n h id ro , s e c o n c e n tr ó y s e s e c ó p o r c e n tr ifu g a c ió n p a ra d a r el p ro d u c to c ru d o , q u e s e p u rif ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a (fa s e m ó vil: a c e to n itrilo / a g u a /H C l 0 ,5 % , g ra d ie n te : 10 % a 100 % (p ro p o rc ió n e n v o lu m e n )), s e e v a p o r ó p a r a e lim in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t ile s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e lio filizó p a r a d a r el c o m p u e s t o c lo rh id ra to o b je tiv o (9 ,5 m g, re n d im ie n to : 9 % ).
Datos de espectroscopia:
L C /M S (M é to d o : U F L C ) : R T = 3 , 516 m in; m /z = 523 , 3 [M H ]+; D u r a c ió n total: 7 m in.
Ejem plo 112(*)
Figure imgf000211_0001
2 -( (R )-3 -(4 -a m in o -3 -(2 -f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 -t e t r a f lu o ro f e n o x i)fe n il)-1 H -p ira z o lo [3 ,4 -d ]p irim id in -1 - il)p irro lid in -1 - il)-2 -o x o a c e to n itr ilo
Paso A:
Figure imgf000211_0002
C ia n o fo rm ia t o d e p o ta s io
Procedim iento:
S e a g re g ó h id ró xid o d e p o ta s io ( 267 m g, 0 , 157 m m ol, 1,0 e q .) a u n a s o lu c ió n d e cia n o fo rm ia to d e etilo (300 m g, 0 , 157 m m ol, 1,0 e q .) e n te tra h id ro fu ra n o /a g u a (10 m L /10 m L) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e agitó a te m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 12 h o ra s , s e c o n c e n tró y s e s e c ó p o r c e n trifu g a c ió n p a r a d a r el c o m p u e s to o b je tiv o ( 570 m g, re n d im ie n to : 100 % ).
Paso B:
Figure imgf000211_0003
2 -((R )-3 -(4 -a m in o -3 -(2 -f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 -t e t r a f lu o ro f e n o x i)fe n il)-1 H - p ir a z o lo [3 ,4 - d ]p ir im id in -1 - il)p ir r o lid in -1 - il)-2 -o x o a c e to n itr ilo
Procedim iento:
S e a g r e g ó g o ta a g o ta c ia n o fo rm ia to d e p o ta s io (28 m g, 0 ,26 m m o l, 2 ,0 e q .), P y B r o p ( 132 m g, 0 ,26 m m o l, 2 ,0 e q .) y trie tila m in a (39 m g, 0 ,39 m m o l, 3 ,0 e q .) a u n a s o lu c ió n d e 3 -(2 - f lu o r o -4 -(2 ,3 ,5 ,6 - t e t r a f lu o r o fe n o x i)fe n il)-1 -((R )- p irr o lid in - 3 -il)-1 H - p ir a z o lo [3 ,4 - d ]p ir im id in -4 -a m in a (60 m g, 0 , 13 m m o l, 1,0 e q .) e n D M F (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e agitó a t e m p e ra tu ra a m b ie n te d u ra n te 12 h o r a s , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 (10 m L ), y d e s p u é s s e e x tra jo c o n d ic lo ro m e t a n o (10 m L) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n ic a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u lfa to d e s o d io a n h id ro , s e c o n c e n tr ó y s e s e c ó p o r c e n tr ifu g a c ió n p a r a d a r el p ro d u c to c r u d o , q u e s e p u rific ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a /N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 10 m g , r e n d im ie n t o : 15 % ) . Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 2 5 8 m in ; m / z = 5 15 , 5 [ M H ]+; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 113(*
2 -( ( R ) - 3 -( 4 - a
Figure imgf000212_0001
Procedim iento:
S e a g r e g ó 2 - y o d o a c e t o n i t r i l o ( 36 m g , 0 , 216 m m o l , 2 , 0 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 74 m g , 0 , 54 m m o l , 5 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 0 , 5 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 5 h o r a s , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a /N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 12 m g , r e n d im ie n t o : 22 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 3 5 0 m in ; m / z = 50 2 , 0 [ M H ]+; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C ls) ó 8 , 3 7 ( s , 1 H ) , 7 , 6 0 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 0 9 - 7 , 0 2 ( m , 1 H ) , 6 , 9 4 - 6 , 8 8 ( m , 2 H ) , 5 , 6 3 - 5 , 5 6 ( m , 1 H ) , 3 , 74 ( s , 2 H ) , 3 , 30 - 3 , 25 ( m , 1 H ) , 3 , 19 - 3 , 12 ( m , 2 H ) , 2 , 97 - 2 , 90 ( m , 1 H ) , 2 , 56 - 2 , 52 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 114(*)
Figure imgf000212_0002
3 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) p r o p a n o n i t r i l o Procedimiento:
S e a g r e g ó 3 - b r o m o - p r o p io n i t r i l o ( 28 m g , 0 , 216 m m o l , 2 , 0 e q . ) y c a r b o n a t o d e p o t a s io ( 74 m g , 0 , 54 m m o l , 5 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F ( 0 , 5 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 80 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 6 m g , r e n d im ie n t o : 11 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 ,671 m in ; m / z = 516 , 0 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C la ) ó 8 , 3 6 ( s , 1 H ) , 7 , 5 9 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 1 0 - 7 , 0 4 ( m , 1 H ) , 6 , 9 4 - 6 , 8 8 ( m , 2 H ) , 5 , 6 5 - 5 , 5 2 ( m , 1 H ) , 3 , 35 - 3 , 31 ( m , 1 H ) , 3 , 05 - 2 , 91 ( m , 5 H ) , 2 , 58 - 2 , 44 ( m , 4 H ) .
Ejem plo 115
Figure imgf000213_0001
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) - N - h i d r o x ip i r r o l id i n - 1 -c a r b o x a m id a
Paso A:
Figure imgf000213_0002
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - f o r m ia t o d e 4 -n i t r o f e n i l o
Procedimiento:
S e a g r e g ó t r i e t i l a m in a (2 m L ) y c a r b o n o c lo r id a t o d e 4 - n i t r o f e n i l o ( 52 m g , 0 , 23 m m o l , 1 ,1 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o -4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a ( 100 m g , 0 ,21 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (9 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 80 m g , r e n d im ie n t o : 69 % ) .
Paso B:
Figure imgf000214_0001
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) - N - h i d r o x ip i r r o l id i n - 1 -c a r b o x a m id a
Procedim iento:
A u n a s o lu c ió n d e ( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 -c a r b o x i la t o d e 4 - n i t r o f e n i l o ( 80 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n D M F (3 m L ) s e le a g r e g ó u n a s o lu c ió n a c u o s a d e h id r o x i la m in a ( 50 % , 0 , 5 m L , 0 , 254 m m o l , 2 e q . ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 120 ° C d u r a n t e 30 m in , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C Ü 3 ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a , f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 5 m g , r e n d im ie n t o : 9 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 8 0 3 m in ; m / z = 522 ,1 [ M H ] + ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 116
Figure imgf000214_0002
3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - 1 -( v i n i l s u l f o n i l ) p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r im id i n - 4 - a m i n a Procedim iento:
S e a g r e g ó N , N - d i i s o p r o p i le t i l a m in a (31 m g , 0 , 238 m m o l , 2 , 2 e q . ) , D M A P ( 1 ,32 m g , 0 ,011 m m o l , 0 ,1 e q . ) y c lo r u r o d e 2 -c lo r o e t i l s u l f o n i lo (21 m g , 0 , 130 m m o l , 1 ,2 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) -p i r r o l i d i n - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r im id in - 4 - a m i n a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o ( 5 m L ) a 0 ° C . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 ° C d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a , f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d i e n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o lá t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 6 m g , r e n d im ie n t o : 11 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 543 m in ; m / z = 552 , 9 [M H ]+ ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 117
Figure imgf000215_0001
Á c id o 2 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 1 - i l ) p i r r o l i d in - 1 - i l ) - 2 -o x o a c é t i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó N , N - d i i s o p r o p i le t i l a m in a (41 m g , 0 , 33 m m o l , 3 , 0 e q . ) y c ia n o f o r m ia t o d e e t i l o ( 13 m g , 0 , 13 m m o l , 1 ,2 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 ,11 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n t o lu e n o (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , s e d i lu y ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C Ü 3 ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4 H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 5 m g , r e n d im ie n t o : 9 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 1 , 8 84 m in ; m / z = 535 ,1 [ M H ] + ; D u r a c ió n t o t a l : 3 m in .
Ejem plo 118(*)
Figure imgf000216_0001
( 3 R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r r o lo [ 2 , 3 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id in - 1 - c a r b o n i t r i l o Procedim iento:
S e a g r e g ó c ia n u r o d e b r o m o ( 23 m g , 0 , 216 m m o l , 2 , 0 e q . ) y b i c a r b o n a t o d e s o d io ( 27 m g , 0 , 324 m m o l , 3 , 0 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l i d in - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o lo [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n a c e t o n i t r i l o (2 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a 20 oC d u r a n t e 12 h o r a s , s e d i lu y ó c o n a g u a ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o l u m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / N H 4H C O 3 0 , 7 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 26 m g , r e n d im ie n t o : 49 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 3 , 338 m in ; m / z = 488 ,1 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3O D ) 6 8 , 25 ( s , 1 H ) , 7 , 68 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 52 - 7 , 45 ( m , 1 H ) , 7 , 10 - 7 , 02 ( m , 2 H ) , 5 , 57 - 5 , 52 ( m , 1 H ) , 4 , 01 - 3 , 96 ( m , 1 H ) , 3 , 86 - 3 , 80 ( m , 2 H ) , 3 , 69 - 3 , 65 ( m , 1 H ) , 2 , 52 - 2 , 46 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 119
Figure imgf000216_0002
1-((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)-2-cloro-3-hidroxipropan-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000217_0001
Á c id o 2 - c lo r o - 2 - h id r o x ia c é t i c o
Procedim iento:
S e a g r e g ó n i t r a t o d e p la t a ( 620 m g , 3 , 669 m m o l , 1 , 04 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e c a r b o n a t o d e s o d io ( 530 m g , 6 , 386 m m o l , 1 , 42 e q . ) e n a g u a (3 m L ) . L a s u s p e n s ió n r e s u l t a n t e s e a g r e g ó , g o t a a g o t a , a u n a s o lu c ió n d e á c id o 2 , 2 - d ic l o r o a c é t i c o ( 500 m g , 3 ,521 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n a g u a (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e p u s o a r e f lu jo p o r 2 h o r a s y s e f i l t r ó . E l f i l t r a d o s e p u s o a r e f lu jo p o r 2 h o r a s y s e f i l t r ó . E l f i l t r a d o s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 326 m g , r e n d im ie n t o : 84 % ) .
Paso B:
Figure imgf000217_0002
1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r r o lo [ 2 , 3 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) - 2 - c lo r o - 3 -h id r o x ip r o p a n - 1 - o n a
Procedim iento:
E l á c id o 2 - c lo r o - 2 - h id r o x ia c é t i c o ( 15 m g , 0 , 163 m m o l , 1 , 5 e q . ) , H A T U ( 45 m g , 0 , 119 m m o l , 1 ,1 e q . ) y N , N -d i i s o p r o p i le t i l a m in a ( 42 m g , 0 , 324 m m o l , 3 , 0 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia lm e n t e a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 -t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l id i n - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 50 m g , 0 , 108 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , s e a p a g ó c o n u n a s o lu c ió n s a t u r a d a d e N a H C O 3 ( 10 m L ) y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n d i c lo r o m e t a n o ( 10 m L ) 3 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( f a s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 10 % a 100 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c lo r h id r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 3 , 4 m g , r e n d im ie n t o : 6 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 4 , 221 m in ; m / z = 569 , 0 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
Ejem plo 120
Figure imgf000218_0001
( E ) - 1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m i n o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r r o lo [ 2 , 3 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) - 3 - d e u t e r i o -p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Paso A:
Figure imgf000218_0002
Á c id o ( E ) - 3 - b r o m o a c r í l i c o
Procedim iento:
U n a m e z c la d e á c id o p r o p ió n ic o (1 g , 14 , 28 m m o l , 1 , 0 e q . ) y H B r ( s o lu c ió n a c u o s a a 40 % , 1 , 7 m L , 0 , 88 e q . ) s e a g i tó d u r a n t e la n o c h e a 140 oC y s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a ; e l p r o d u c t o c r u d o o b t e n id o s e c r i s t a l i z ó d e a g u a ( 4 m L ) t r e s v e c e s p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 0 ,76 g , r e n d im ie n t o : 35 % ) .
Datos de espectroscopía:
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C l3 ) 6 7 , 7 6 ( d , J = 14 H z , 1 H ) , 6 , 5 5 (d , J = 14 H z , 1 H ) .
Paso B:
Figure imgf000218_0003
A c r i l a t o d e ( E ) - 3 - d e u t e r io
Procedim iento:
S e a g r e g ó N a - H g (6 g , 49 , 67 m m o l , 2 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e á c id o ( E ) - 3 - b r o m o a c r í l i c o (3 g , 19 , 87 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D 2O ( 30 m L ) a 0 - 5 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 36 h o r a s y s e s e p a r ó . E l p H d e la f a s e a c u o s a s e a ju s t ó a p H = 5 c o n á c id o c lo r h í d r i c o 1 M , y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n é t e r d ie t í l i c o ( 20 m L ) 5 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o y s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a , a f in d e d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 0 ,52 g , r e n d im ie n t o : 36 % ) .
Datos de espectroscopia:
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C I 3 ) 6 7 , 7 6 ( d , J = 1 7 , 2 H z , 1 H ) , 6 , 55 (d , J = 17 , 2 H z , 1 H ) .
Paso C:
Figure imgf000219_0001
( E ) - 1 -( ( R ) - 3 -( 4 - a m in o - 3 -( 2 - f l u o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 - t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 H - p i r r o lo [ 2 , 3 - d ] p i r im id in - 1 - i l ) p i r r o l id i n - 1 - i l ) - 3 - d e u t e r o -p r o p - 2 - e n - 1 - o n a
Procedim iento:
E l a c r i l a t o d e ( E ) - 3 - d e u t e r io ( 76 m g , 1 , 08 m m o l , 1 , 0 e q . ) , H A T U ( 530 m g , 1.40 m m o l , 1 ,3 e q . ) y N , N - d i i s o p r o p i le t i l a m in a ( 419 m g , 3 , 24 m m o l , 3 , 0 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia l m e n t e a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 -t e t r a f lu o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l id i n - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 500 m g , 1 , 08 m m o l , 1 ,0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) a 0 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d i e n t e : 36 % a 37 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 76 m g , r e n d im ie n t o : 13 % ) .
Datos de espectroscopia:
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 765 m in ; m / z = 518 ,1 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 400 M H z , C D 3O D ) 6 8 ,41 ( s , 1 H ) , 7 , 66 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 51 - 7 , 44 ( m , 1 H ) , 7 ,09 - 7 ,01 ( m , 2 H ) , 6 , 66 - 6 , 56 ( m , 1 H ) , 6 , 28 - 6 , 23 ( m , 1 H ) , 5 , 75 - 5 , 66 ( m , 1 H ) , 4 , 19 - 4 ,1 6 ( m , 1 H ) , 4 , 06 - 4 , 02 ( m , 1 , 5 H ) , 3 , 89 - 3 , 85 ( m , 1 H ) , 3 , 78 - 3 , 72 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 63 - 2 , 49 ( m , 2 H ) .
Ejem plo 121
Figure imgf000219_0002
(Z)-1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)-3-deuteroprop-2-en-1 -ona
Paso A:
Figure imgf000220_0001
Á c id o ( Z ) - 3 - b r o m o a c r í l i c o
Procedim iento:
U n a m e z c la d e á c id o p r o p ió n ic o (1 g , 14 , 28 m m o l , 1 , 0 e q . ) y H B r ( s o lu c ió n a c u o s a a 40 % , 1 , 7 m L , 0 , 88 e q . ) s e a g i tó d u r a n t e la n o c h e a t 55 oC y s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a ; e l p r o d u c t o c r u d o o b t e n id o s e c r is t a l i z ó d e a g u a (4 m L ) t r e s v e c e s p a r a d a r e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 0 ,3 g , r e n d im ie n t o : 14 % ) .
Datos de espectroscopia:
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C l3) 6 7 , 16 ( d , J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 6 , 67 (d , J = 8 , 4 H z , 1 H ) .
Paso B:
Figure imgf000220_0002
A c r i l a t o d e ( Z ) - 3 - d e u t e r io
Procedim iento:
S e a g r e g ó N a - H g ( 6 g , 49 , 67 m m o l , 2 , 5 e q . ) a u n a s o lu c ió n d e á c id o ( Z ) - 3 - b r o m o a c r í l i c o (3 g , 19 , 87 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n D 2O ( 30 m L ) a 0 - 5 oC . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 36 h o r a s y s e s e p a r ó . E l p H d e la f a s e a c u o s a s e a ju s t ó a p H = 5 c o n á c id o c lo r h í d r i c o 1 M y d e s p u é s s e e x t r a jo c o n é t e r d ie t í l i c o ( 20 m L ) 5 v e c e s . L a f a s e o r g á n i c a c o m b in a d a s e s e c ó s o b r e s u l f a t o d e s o d io a n h id r o y s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r e l d i s o lv e n t e b a jo p r e s ió n r e d u c id a , a f in d e d a r e l c o m p u e s t o o b je t i v o ( 0 ,34 g , r e n d im ie n t o : 23 % ) .
Datos de espectroscopia:
1H R M N ( 40 0 M H z , C D C l3) 6 6 , 14 ( d , J = 1 0 , 4 H z , 1 H ) , 5 , 9 6 (d , J = 1 0 , 4 H z , 1 H ) .
Paso C:
Figure imgf000220_0003
(Z)-1 -((R)-3-(4-amino-3-(2-fluoro-4-(2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)fenil)-1 H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-1-il)pirrolidin-1-il)-3-deuteroprop-2-en-1-ona
Procedim iento:
E l a c r i l a t o d e ( Z ) - 3 - d e u t e r io (151 m g , 2 , 16 m m o l , 1 ,0 e q . ) , H A T U ( 1 ,06 g , 2 , 80 m m o l , 1 , 3 e q . ) y N , N - d i i s o p r o p i le t i l a m in a ( 838 m g , 6 , 48 m m o l , 3 , 0 e q . ) s e a g r e g a r o n s e c u e n c ia l m e n t e a u n a s o lu c ió n d e 3 -( 2 - f lu o r o - 4 -( 2 , 3 , 5 , 6 -t e t r a f l u o r o f e n o x i ) f e n i l ) - 1 -( ( R ) - p i r r o l id i n - 3 - i l ) - 1 H - p i r a z o l o [ 3 , 4 - d ] p i r i m i d in - 4 - a m in a ( 1 ,0 g , 2 , 16 m m o l , 1 , 0 e q . ) e n d i c lo r o m e t a n o (3 m L ) . L a m e z c la d e r e a c c ió n s e a g i tó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e d u r a n t e 12 h o r a s , s e c o n c e n t r ó y s e s e c ó p o r c e n t r i f u g a c ió n p a r a d a r e l p r o d u c t o c r u d o , q u e s e p u r i f ic ó p o r H P L C c o n u n a c o lu m n a C 18 d e f a s e in v e r s a ( fa s e m ó v i l : a c e t o n i t r i l o / a g u a / H C l 0 , 5 % , g r a d ie n t e : 36 % - 37 % ( p r o p o r c ió n e n v o lu m e n ) ) , s e e v a p o r ó p a r a e l im in a r lo s c o m p o n e n t e s v o l á t i l e s b a jo p r e s ió n r e d u c id a , y s e l i o f i l i z ó p a r a d a r e l c l o r h i d r a t o d e l c o m p u e s t o o b je t iv o ( 228 m g , r e n d im ie n t o : 20 % ) .
L C / M S ( M é t o d o : U F L C ) : R T = 2 , 775 m in ; m / z = 518 ,1 [ M H ] ; D u r a c ió n t o t a l : 7 m in .
1H R M N ( 40 0 M H z , C D 3O D ) 6 8 , 45 ( s , 1 H ) , 7 , 7 0 ( t, J = 8 , 4 H z , 1 H ) , 7 , 5 2 - 7 , 4 6 ( m , 1 H ) , 7 , 1 3 - 7 , 0 5 ( m , 2 H ) , 6 , 71 - 6 ,61 ( m , 1 H ) , 5 , 80 - 5 , 73 ( m , 2 H ) , 4 , 23 - 4 , 20 ( m , 1 H ) , 4 , 09 - 4 , 04 ( m , 1 ,5 H ) , 3 , 93 - 3 , 90 ( m , 1 H ) , 3 , 80 - 3 , 75 ( m , 0 , 5 H ) , 2 , 67 - 2 , 56 ( m , 2 H ) .
Ensayo in vitro
Ensayo de inh ib ic ión de la activ idad de cinasa BTK: E l c o m p u e s t o d e e n s a y o , e l c o m p u e s t o d e c o n t r a s t e o a g u a ( c o n t r o l ) s e a g r e g a r o n a u n a m o r t i g u a d o r H E P E S 50 m M ( p H = 7 , 5 ) q u e c o n t e n í a B T K d e t ip o s i l v e s t r e 1 n M , b io t in a -p é p t i d o T K 1 1 p M y A T P 30 p M e n u n a m o r t i g u a d o r . L a m e z c la s e in c u b ó a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e p o r 60 m in u t o s y s e a p a g ó a g r e g a n d o E D T A . E n t o n c e s s e a g r e g ó a lo s in h ib id o r e s a n t i c u e r p o a 2 n M y X L 665 a 62 , 5 n M (5 p l ) . L a s p la c a s s e in c u b a r o n a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e p o r 60 m in u t o s y d e s p u é s s e u s ó la le c t o r a d e p la c a ( E n v i s io n , P e r k in E lm e r ) p a r a m e d i r la in t e n s id a d d e f lu o r e s c e n c ia y lu e g o la s le c t u r a s s e t r a n s f o r m a r o n e n p o r c e n t a je , % , d e in h ib i c ió n d e la a c t iv i d a d d e c in a s a .
Ensayo in vivo
E s t u d io f a r m a c o c in é t i c o e n r a t a s S D m a c h o s : R a t a s S D m a c h o s p a r a u n e s t u d io f a r m a c o c i n é t i c o d e 24 h o r a s s e d i v id ie r o n e n d o s g r u p o s : a d m in is t r a c ió n i n t r a v e n o s a y a d m in is t r a c ió n o r a l . C a d a g r u p o t e n í a t r e s r a ta s . D e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n i n t r a v e n o s a s e t o m a r o n m u e s t r a s d e s a n g r e a la s 0 , 0833 , 0 , 167 , 0 , 5 , 1 , 2 , 4 , 8 , 24 h o r a s a n t e s d e a d m in is t r a r la d o s i s y d e s p u é s d e a d m in is t r a r la d o s is ; d e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n o r a l s e t o m a r o n m u e s t r a s d e s a n g r e a 0 , 167 , 0 , 5 , 1 , 2 , 4 , 8 , 24 h o r a s a n t e s d e a d m in is t r a r la d o s i s y d e s p u é s d e a d m in is t r a r la d o s is . D e s p u é s d e la r e c o le c c ió n d e s a n g r e s e a p l ic ó H P L C - M S / M S p a r a d e t e r m i n a r la s c o n c e n t r a c i o n e s p la s m á t i c a s d e l c o m p u e s t o . L o s p a r á m e t r o s f a r m a c o c in é t i c o s c a l c u la d o s p a r a e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n in t r a v e n o s a in c lu y e r o n a c la r a m ie n t o p la s m á t i c o p r o m e d io ( C L p ) , v o lu m e n d e d i s t r ib u c ió n a p a r e n t e p r o m e d io e n e s t a d o e s t a b le ( V d s s ) , á r e a b a jo la c u r v a ( A U C ) d e 0 - 24 h o r a s , t i e m p o d e r e s id e n c ia p r o m e d io d e 0 - 24 h o r a s ( M R T ) , la v id a m e d ia ( T 1 / 2 ) . L o s p a r á m e t r o s f a r m a c o c i n é t i c o s c a l c u la d o s p a r a e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n o r a l in c lu y e r o n c o n c e n t r a c ió n p r o m e d io p i c o ( C m a x ) , á r e a b a jo la c u r v a ( A U C ) d e 0 - 24 h o r a s , t i e m p o d e r e s id e n c ia p r o m e d io d e 0 - 24 h o r a s ( M R T ) ; b i o d is p o n ib i l i d a d r e la t iv a p r o m e d io p a r a e l e s t u d io .
E s t u d io f a r m a c o c i n é t i c o e n p e r r o s B e a g le : P e r r o s B e a g le p a r a u n e s t u d i o f a r m a c o c i n é t i c o d e 24 h o r a s s e d i v id ie r o n e n d o s g r u p o s : a d m in is t r a c ió n i n t r a v e n o s a (1 m g p o r k i l o g r a m o ) y a d m in is t r a c ió n o r a l (3 m g p o r k i l o g r a m o ) . C a d a g r u p o t e n í a t r e s p e r r o s . D e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n in t r a v e n o s a s e t o m a r o n m u e s t r a s d e s a n g r e a la s 0.033 , 0.083 , 0.25 , 0.5 , 1 , 3 , 6 , 9 , 24 h o r a s a n t e s d e a d m in is t r a r la d o s i s y d e s p u é s d e a d m in is t r a r la d o s i s ; d e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n o r a l s e t o m a r o n m u e s t r a s d e s a n g r e a 0 , 083 , 0 , 25 , 0 , 5 , 1 , 3 , 6 , 9 , 24 h o r a s a n t e s d e a d m in is t r a r la d o s i s y d e s p u é s d e a d m in is t r a r la d o s is . D e s p u é s d e la r e c o le c c ió n d e s a n g r e s e a p l ic ó H P L C - M S / M S p a r a d e t e r m i n a r la s c o n c e n t r a c i o n e s p la s m á t i c a s d e l c o m p u e s t o . L o s p a r á m e t r o s f a r m a c o c i n é t i c o s c a l c u la d o s p a r a e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n i n t r a v e n o s a in c lu y e r o n a c la r a m ie n t o p la s m á t i c o p r o m e d io ( C L p ) , v o lu m e n d e d i s t r ib u c ió n a p a r e n t e p r o m e d io e n e s t a d o e s t a b le ( V d s s ) , á r e a b a jo la c u r v a ( A U C ) d e 0 - 24 h o r a s , t i e m p o d e r e s id e n c ia p r o m e d io d e 0 - 24 h o r a s ( M R T ) , la v id a m e d ia ( T 1 / 2 ) . L o s p a r á m e t r o s f a r m a c o c i n é t i c o s c a l c u la d o s p a r a e l g r u p o d e a d m in is t r a c ió n o r a l in c lu y e r o n c o n c e n t r a c ió n p r o m e d io p ic o ( C m a x ) , á r e a b a jo la c u r v a ( A U C ) d e 0 - 24 h o r a s , t i e m p o d e r e s id e n c ia p r o m e d io d e 0 - 24 h o r a s ( M R T ) ; b io d is p o n ib i l i d a d r e la t iv a p r o m e d io p a r a e l e s t u d io .
E s t u d io d e in h ib i c ió n d e c r e c im ie n t o d e t u m o r in vivo: R a t o n e s S C I D o r a t o n e s s in p e lo ( q u e p e s a b a n a l r e d e d o r d e 18 g a l c o m ie n z o d e l e x p e r im e n t o ) s e d i v id i e r o n a l a z a r e n g r u p o s p o r m e d io d e l s o f t w a r e p a r a o b t e n e r p e s o s p r o m e d io s c e r c a n o s e n t r e lo s g r u p o s y c o n t r o la r la s d e s v i a c io n e s d e n t r o d e u n a e s c a la a d m is ib le . S e in y e c t ó a lo s r a t o n e s l í n e a s c e l u la r e s d e B T K p a r a la f o r m a c ió n d e t u m o r . L o s in h ib id o r e s s e a d m in is t r a r o n p o r v í a o r a l u n a v e z o d o s v e c e s a l d í a , p o r u n t o t a l d e 7 d í a s o 14 d í a s . S e r e g is t r a r o n lo s p e s o s c o r p o r a le s y e l v o l u m e n d e t u m o r .

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1.- Un compuesto de fórmula (I), un enantiómero del mismo, un diasterómero del mismo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:
    Figure imgf000222_0001
    en donde:
    A ri es
    Figure imgf000222_0002
    en donde R1. R2 , R4 y R5 cada uno es flúor y R3 es hidrógeno;
    A r2 se selecciona de:
    Figure imgf000222_0003
    Q es O;
    Mi es piperidinilo o pirrolidinilo;
    Y es C(=O), NHC(=O), NRn C(=O) o S(=O)2 ; y
    R10, R11, se pueden seleccionar, independientemente, de amino, cicloamino, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, oxoheterociclilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroacetilo, grupo amida, acilo, guanidilo, alquenilo de C2-C6, alquinilo de C2-C6, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10, alcoxilo de C1-C6 , oxoalquilo de C1-C6 ; en donde el amino, grupo amida, acilo, alquenilo de C2-C6 , alquilo, alcoxilo o cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con deuterio, halógeno, amino, hidroxi, hidroxialquilo, carbonilo, grupo éster, grupo amida, nitro, ciano, trifluoroacetilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6, oxoalquilo de C1 -C6, cicloalquilo de C3-C10.
    2.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto está representado por la fórmula (IX)
    Figure imgf000222_0004
    en donde Ri, R2 , R3, R4, R5 , R10 y Mi son como se definen en la reivindicación 1 de arriba.
    3.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en donde Río es alquenilo de C2-C6, en donde un hidrógeno en el alquenilo puede estar sustituido independientemente con deuterio, halógeno, amino, cicloamino, hidroxi, hidroxialquilo, carbonilo, grupo éster, grupo amida, nitro, ciano, trifluoroacetilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, alquilo de C1-C6, alcoxilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C10.
    4.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde Ar2 es
    Figure imgf000223_0001
    5. - Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, en donde Mí es pirrolidinilo.
    6. - Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 o 4 a 5, en donde Y es C(=O) o NHC(=O), preferiblemente C(=O).
    7. - Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto está representado por la fórmula (XII),
    Figure imgf000223_0002
    en donde Mí e Y son como se definen en la reivindicación 1 de arriba y en donde Río es vinilo.
    8.- Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en:
    Figure imgf000224_0001
    y e n a n t i ó m e r o s , d ia s t e r e ó m e r o s y s a le s f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b le s d e lo s m is m o s .
    9 . - U n c o m p u e s t o d e a c u e r d o c o n la r e iv i n d ic a c ió n 1 , q u e e s u n c o m p u e s t o r e p r e s e n t a d o p o r la f ó r m u l a 23
    Figure imgf000224_0002
    o u n e n a n t i ó m e r o , d ia s t e r e ó m e r o o s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b le d e l m is m o .
    10 . - U n c o m p u e s t o d e a c u e r d o c o n la r e iv i n d ic a c ió n 1 , q u e e s u n c o m p u e s t o r e p r e s e n t a d o p o r la f ó r m u l a 45
    Figure imgf000224_0003
    o u n e n a n t i ó m e r o , d ia s t e r e ó m e r o o s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b le d e l m is m o .
    11. U n a c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a q u e c o m p r e n d e u n c o m p u e s t o d e u n a c u a lq u ie r a d e la s r e iv i n d ic a c io n e s 1 a 10 y u n v e h í c u l o in e r t e .
    12. - U n c o m p u e s t o d e u n a c u a lq u ie r a d e la s r e iv i n d ic a c io n e s 1 a 10 o la c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a d e a c u e r d o c o n la r e iv i n d ic a c ió n 11 p a r a u s o c o m o u n m e d ic a m e n t o .
    13. - U n c o m p u e s t o d e u n a c u a lq u ie r a d e la s r e iv i n d ic a c io n e s 1 a 10 o la c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a d e a c u e r d o c o n la r e iv i n d ic a c ió n 11 p a r a u s o e n u n m é t o d o p a r a in h ib i r la a c t iv i d a d d e B T K e n e l c u e r p o d e u n p a c ie n t e , q u e c o m p r e n d e a d m in is t r a r a l p a c ie n t e u n a c a n t id a d e f i c a z d e l c o m p u e s t o o la c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a .
    14. - U n c o m p u e s t o d e u n a c u a lq u ie r a d e la s r e iv i n d ic a c io n e s 1 a 10 o la c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a d e a c u e r d o c o n la r e iv i n d ic a c ió n 11 p a r a u s o e n u n m é t o d o p a r a t r a t a r o in h ib i r u n a d e la s s ig u ie n t e s e n f e r m e d a d e s o t r a s t o r n o s , e n d o n d e e n d o n d e e l m é t o d o c o m p r e n d e a d m in is t r a r a u n p a c ie n t e u n a c a n t id a d e f i c a z d e l c o m p u e s t o o la c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a :
    a ) u n a e n f e r m e d a d o u n t r a s t o r n o , e n d o n d e la e n f e r m e d a d a u t o in m u n e e s p r e f e r i b le m e n t e u n a e n f e r m e d a d a u t o in m u n e e s p e c í f i c a p a r a e l ó r g a n o , t a l c o m o t i r o id i t i s l i n f o c í t i c a c r ó n ic a , h ip e r t i r o i d is m o , d i a b e t e s m e l l i t u s d e p e n d ie n t e d e in s u l in a , m ia s t e n ia g r a v e , c o l i t i s u l c e r o s a c r ó n ic a , a n e m ia p e r n i c io s a a s o c ia d a c o n g a s t r i t i s a t r ó f i c a c r ó n ic a , s í n d r o m e d e G o o d p a s t u r e , p é n f i g o v u lg a r , p e n f i g o id e , c i r r o s is b i l ia r p r im a r ia , e s c l e r o s is c e r e b r o e s p in a l m ú l t ip le , n e u r i t i s id io p á t i c a a g u d a , o u n a e n f e r m e d a d a u t o in m u n e s is t é m ic a , t a l c o m o lu p u s e r i t e m a t o s o s is t é m ic o , a r t r i t i s r e u m a t o id e , v a s c u l i t i s s is t é m ic a , e s c le r o d e r m ia , p é n f ig o , e n f e r m e d a d m ix t a d e l t e j i d o c o n e c t i v o , a n e m ia h e m o l í t i c a a u t o in m u n e , e n f e r m e d a d a u t o in m u n e d e la t i r o id e s o c o l i t i s u l c e r o s a ;
    b ) u n a e n f e r m e d a d o u n t r a s t o r n o d e h i p e r s e n s ib i l i d a d , e n d o n d e la e n f e r m e d a d d e h i p e r s e n s ib i l i d a d e s p r e f e r i b le m e n t e e n f e r m e d a d d e l s u e r o , a s m a , r in i t i s a lé r g ic a o a le r g ia f a r m a c o l ó g i c a ;
    c ) u n a e n f e r m e d a d o u n t r a s t o r n o in f l a m a t o r io , e n d o n d e la e n f e r m e d a d i n f l a m a t o r ia e s p r e f e r i b le m e n t e q u e r a t i t i s , r in i t i s , e s t o m a t i t i s , p a p e r a s , f a r i n g i t i s , a m ig d a l i t i s , t r a q u e í t i s , b r o n q u i t is , n e u m o n í a , m io c a r d i t i s , g a s t r i t i s , g a s t r o e n t e r i t i s , c o le c is t i t i s o a p e n d ic i t i s ;
    d ) c á n c e r , e n d o n d e e l c á n c e r e s p r e f e r i b le m e n t e u n a n e o p la s ia d e c é lu la s B .
    15. - E l c o m p u e s t o o la c o m p o s i c ió n f a r m a c é u t i c a p a r a u s o d e a c u e r d o c o n la r e iv i n d ic a c ió n 14 , e n d o n d e la n e o p la s ia d e c é l u la s B s e s e le c c io n a d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n l i n f o m a l i n f o c í t ic o p e q u e ñ o ( S L L ) , le u c e m ia l i n f o c í t i c a c r ó n ic a ( C L L ) , l i n f o m a d i f u s o d e c é lu la s B g r a n d e s ( D L B C L ) , m a c r o g lo b u l i n e m ia d e W a ld e n s t r o m ( W M ) , l i n f o m a f o l i c u la r ( F L ) y l i n f o m a d e c é lu la s d e l m a n t o ( M C L ) .
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