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ES2622504T3 - Nuevos enfoques terapéuticos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y trastornos relacionados a través de una modulación de la angiogénesis - Google Patents

Nuevos enfoques terapéuticos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y trastornos relacionados a través de una modulación de la angiogénesis Download PDF

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ES2622504T3
ES2622504T3 ES09738185.9T ES09738185T ES2622504T3 ES 2622504 T3 ES2622504 T3 ES 2622504T3 ES 09738185 T ES09738185 T ES 09738185T ES 2622504 T3 ES2622504 T3 ES 2622504T3
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Spain
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terbinafine
disease
alzheimer
composition
baclofen
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Ilya Chumakov
Serguei Nabirochkin
Oxana Guerassimenko
Esther Graudens
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Pharnext SA
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Abstract

Una composición que comprende baclofen o terbinafina, o una sal o formulación de liberación sostenida de la misma, para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

Description

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DESCRIPCION
Nuevos enfoques terapeuticos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y trastornos relacionados a traves de una modulacion de la angiogenesis
Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a composiciones y metodos para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer (EA) y trastornos relacionados.
La EA es una demencia cortical prototfpica caracterizada por un deficit de la memoria junto con disfasia (trastorno del lenguaje en el que hay un deterioro del habla y de la comprension del habla), dispraxia (incapacidad para coordinar y realizar ciertos movimientos y gestos intencionales en ausencia de impedimentos motores o sensoriales) y agnosia (capacidad de reconocer objetos, personas, sonidos, formas u olores) atribuibles a la participacion de las areas de asociacion corticales. Tambien pueden estar implicados smtomas especiales tales como la paraparesia espastica (debilidad que afecta a las extremidades inferiores) (1-4).
La incidencia de la enfermedad de Alzheimer aumenta drasticamente con la edad. La EA es actualmente la causa mas comun de demencia. Se caracteriza clmicamente por una disminucion global de la funcion cognitiva que progresa lentamente y deja a los pacientes en su etapa final pegados a la cama, incontinentes y dependientes de la atencion de su custodia. La muerte ocurre, en promedio, 9 anos despues del diagnostico (5).
La tasa de incidencia de la EA aumenta drasticamente con la edad. Las proyecciones en la poblacion de las Naciones Unidas estiman que el numero de personas mayores de 80 anos se acercara a los 370 millones para el ano 2050. Actualmente, se estima que el 50% de las personas mayores de 85 anos estan afectadas por la enfermedad de Alzheimer. Por lo tanto, mas de 100 millones de personas en todo el mundo sufriran de demencia en 50 anos. El gran numero de personas que requieren atencion constante y otros servicios afectara gravemente a los recursos medicos, monetarios y humanos (6).
El deterioro de la memoria es la caractenstica temprana de la enfermedad e implica la memoria episodica (memoria para los acontecimientos del dfa actual). La memoria semantica (memoria para el significado verbal y visual) esta implicada mas adelante en la enfermedad. Por el contrario, la memoria de trabajo (memoria a corto plazo que involucra estructuras y procesos utilizados para almacenar y manipular informacion temporalmente) y la memoria procedimental (memoria inconsciente que es una memoria a largo plazo de habilidades y procedimientos) se conservan hasta tarde. A medida que avanza la enfermedad, surgen las caractensticas adicionales del deterioro del lenguaje, las deficiencias visuales perceptivas y espaciales, las agnosias y las apraxias.
El cuadro clasico de la enfermedad de Alzheimer es suficientemente caractenstico para permitir la identificacion en aproximadamente el 80% de los casos (7). Sin embargo, la heterogeneidad clmica se produce y no solo es importante para el manejo clmico, sino que proporciona una mayor implicacion de los tratamientos de medicamentos espedficos para las formas funcionalmente diferentes. (8).
El signo patologico de la EA incluye placas amiloides que contienen beta-amiloide (Abeta), enredos neurofibrilares (NFT) que contienen Tau y disfuncion y perdida neuronal y sinaptica (9-11). Durante la ultima decada, se han propuesto dos hipotesis principales sobre la causa de la EA: la "hipotesis de la cascada amiloide", que establece que el proceso neurodegenerativo es una serie de eventos desencadenados por el procesamiento anormal de la protema precursora amiloide (APP) (12), y la "hipotesis de la degeneracion del citoesqueleto neuronal" (13), que propone que los cambios citoesqueleticos son los eventos desencadenantes. La teona mas ampliamente aceptada que explica la progresion de la eA sigue siendo la hipotesis de la cascada amiloide (14-16) y los investigadores de la EA se han centrado principalmente en la determinacion de los mecanismos subyacentes a la toxicidad asociada con las protemas Abeta. Por el contrario, la protema Tau ha recibido mucha menos atencion de la industria farmaceutica que la amiloide, debido a preocupaciones tanto fundamentales como practicas. Ademas, el cambio de densidad sinaptica es la lesion patologica que mejor se correlaciona con el deterioro cognitivo que los otros dos. Los estudios han revelado que la patologfa amiloide parece progresar en una forma espedfica de los neurotransmisores donde los terminales colinergicos aparecen mas vulnerables, seguido por los terminales glutamatergicos y finalmente por los terminales GABAergicos (11).
Sumario de la invencion
El proposito de la presente invencion es proporcionar nuevos enfoques terapeuticos para tratar la EA y los trastornos relacionados.
Los inventores han identificado una via molecular que esta implicada en la genesis de la EA y ofrece nuevos objetivos para el desarrollo de nuevos tratamientos para mejorar la EA y los trastornos relacionados, particularmente para el desarrollo de terapias de combinacion usando moleculas nuevas o existentes previamente utilizadas en otras indicaciones. Mas particularmente, los inventores han identificado varios farmacos que, solos o en combinacion(s), pueden afectar efectivamente a dicha via y representar una terapia nueva y eficaz para el tratamiento de la EA y trastornos relacionados.
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Por lo tanto, la invencion proporciona nuevas composiciones y metodos para tratar la enfermedad EA y los trastornos relacionados.
Mas particularmente, la invencion es como se define en las reivindicaciones. La invencion tambien describe composiciones adecuadas para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado en un sujeto que lo necesite, en el que dichas composiciones comprenden un farmaco que aumenta la angiogenesis.
Otra descripcion de esta invencion se refiere a composiciones adecuadas para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado en un sujeto que lo necesite, en el que dichas composiciones comprenden una combinacion de al menos dos farmacos que aumentan la angiogenesis, para su administracion combinada, separada o secuencial.
Mas preferiblemente, el farmaco o los farmacos que aumentan la angiogenesis se unen o modulan la actividad de una protema codificada por un gen seleccionado de ABCA1, ACAT, ACC2, ADAMTS12, ADCY2, ADIPOQ, ADIPOR1, ADIP0R2, ADRB2, AGPAT5, AIP4, AKAP2 , AKR1C2, AMPK, ANG2, ANK1, ANXA1, APOA1, ARHGAP17, ATP1OA, AUH, AUTOTAXINA, BAI3, BCAR1, BIN1, BMP3A, CA1O, CAMK1D, CAMKK2, CD36, CD44, CDC42, CDH13, CHAT, CNTFR, COL4A2, CPT , CSH1, CTNN, CUBN, CYP7B1, CYSLTR1, CYSLTR2, DGKB, DGKH, DGKZ, DHCR7, DHFR, DRD2, DRD5, EDG1, EDG2, EDG3, EDG4, EDG5, EDG6, EDG7, EDG8, EDNRA, EHHADH, ENPP6, ERBB4 , ERK1, ERK2, ESRRG, ETFA, F2, FDPS, FGF2, FLNA, FLT4, FOXO1, FOXO3A, FTO, GABBR2, GATA3, GH1, GNA12, GNA13, GRK2, GRK5, GRM5, HAPLN1, HAS1, HAS2, HAS3, HCRTR2, HIF1A, HSD11B1, HYAL1, HYAL2, HYAL3, IL20RA, IL20RB, IL6ST, IL8, ITGA6, ITGB1, KDR, LAMA1, LDLR, LEPR, LEPTIN, LIFR, LIPL2, LKB1, LRP, LTBP2, MAT2B, ME1, MEGALIN, MERLIN, MET, MGST2, MMP2, MMP9, MTOR, MTR, NCK2, NEDD9, NFKB1, NFKBIB, NOS2A, NOS3, NR1I2, NR3C2, NRG1, NRP1, NRP2, OPRS1, OSBPL1O, OSBPL3, OSTEOPONTINA, P2RY1, P2RY12, PAI1, PAI2, PAK1, PAK6, PALLD, PAP1, PAR1, PAXILLINA, PC, PCTP, PDE11A, PDElA, PDE3A, PDE4D, PDE5, PDGFA, PDGFB , PDGFRA, PDGFRB, PI3K, PITPNC1, PKA, PKCD, PLA1A, PLA2, PLAT, PLAU, PLCB1, PLD1, PLD2, PLG, PLXDC2, PPARA, PPARG, PPARGC1B, PRKG1, PRL, PTGS2, PTN, PTPN11, PYK2, RAC1, RAS, RHEB, RHOA, ROCK1, ROCK2, RPS6KA1, RPS6KB2, SCARB1, SCHIP1, SGPP2, SLC25A21, SMAD3, SMAD4, SNCA, SORBS2, SPLA2, SPOCK1, SRD5A1, SREBF1, SREBF2, STAT3, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, THBS1, THBS2, THEM2, THRB, TIAM1, TIMP2, TLL2, TSC1, TSC2, TSPO, VEGFA, VEGFR1 y YES1.
La invencion tambien describe ejemplos de tales farmacos que incluyen compuestos seleccionados de acamprosato, albuterol, alendronato, ambrisentan, acido aminocaproico, argatroban, baclofeno, balsalazida, becaplermina, cabergolina, cilostazol, clopidogrel, desirudina, dihidroergotamina, eplerenona, fenoldopam, fludrocortisona, flunitrazepam, gemfibrozil, hesperetina, imatinib, cetotifeno, leflunomida, L-histidina, lioteronina, marimastat, meloxicam, mepacrina, metacolamida, metimazol, milrinona, montelukast, netilmicina, nitroglicerina, nitroprusiato, pegaptanib, pentazocina, fenformina, fenilbutirato de sodio, pirimetamina, sulfisoxazol, sunitinib, tadalafil, temazepam, terbinafina, titilperazina, tirofiban, topiramato, topotecan, vidarabina y warfarina, o una combinacion de los mismos.
La invencion tambien describe composiciones que comprenden ademas al menos un farmaco que modula la funcion de sinapsis, para su uso combinado, separado o secuencial.
Esta invencion tambien describe composiciones que comprenden ademas al menos un farmaco que modula la respuesta de estres celular, para su uso combinado, separado o secuencial.
Las composiciones de esta invencion tfpicamente comprenden ademas un vehfculo o excipiente farmaceuticamente aceptable.
Tambien se describe en esta invencion un metodo para producir un farmaco para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, comprendiendo el metodo una etapa de probar un farmaco candidato para la actividad sobre la angiogenesis y seleccionar farmacos candidatos que aumenten la angiogenesis.
La invencion tambien describe un metodo para producir una composicion para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, comprendiendo el metodo la preparacion de una combinacion de un farmaco que aumenta la angiogenesis y un farmaco que modula la funcion de sinapsis o la respuesta de estres celular y la formulacion de dicha combinacion de farmacos para su administracion simultanea, separada o secuencial a un sujeto que lo necesite.
La invencion describe ademas un metodo para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, comprendiendo el metodo administrar simultaneamente, por separado o secuencialmente a un sujeto que lo necesite un farmaco o una combinacion de farmacos que aumenten la angiogenesis.
La invencion describe ademas un metodo para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, comprendiendo el metodo administrar simultaneamente, de forma separada o secuencial, a un sujeto que lo necesite un farmaco que incremente la angiogenesis y un farmaco que module la funcion sinapsis y/o un farmaco que module la respuesta al estres celular.
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La invencion describe ademas el uso de un farmaco que aumenta la angiogenesis para la fabricacion de un medicamento para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado.
La invencion describe ademas el uso de una combinacion de al menos dos farmacos que aumentan la angiogenesis para la fabricacion de un medicamento para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado, en el que dichos al menos dos farmacos se administran juntos, por separado o secuencialmente.
Como se discute en la presente solicitud, las terapias anteriores y terapias de combinacion proporcionan enfoques novedosos y eficaces para tratar la EA en sujetos humanos.
Breve descripcion de las figuras
Fig. 1: Efecto protector de farmacos seleccionados contra la toxicidad del peptido beta-amiloide sobre la liberacion
de LDH de celulas cerebrales endoteliales de rata. ^ : p <0,05: significativamente diferente del vehiculo **: p <0,01; ***: p <0,0001; ****: p <0,00001: significativamente diferente de A (3 25-35. Prueba Bilateral Student t. A (3 25-35 30 pM produce una intoxicacion moderada pero significativa (Fig. 1-A a D, en rojo). Esta intoxicacion es significativamente prevenida por Leflunomida (Fig 1 A), Terbinafina (Fig 1B), Sulfisoxazol (Fig 1C) o Baclofen (-) (Fig1 D). Ademas, Leflunomide y Terbinafina no solo previenen el efecto deletereo amiloide, sino que tambien disminuyen la muerte celular espontanea en el medio de cultivo.
Descripcion detallada de la invencion
La presente invencion proporciona nuevos enfoques terapeuticos para tratar la EA o trastornos relacionados. La invencion describe un uso novedoso de farmacos o combinaciones de farmacos que permiten una correccion eficaz de tales enfermedades y pueden utilizarse para el tratamiento del paciente.
La expresion “trastorno relacionado con la EA” designa a la enfermedad de Alzheimer (EA), la demencia senil del tipo EA (SDAT), la enfermedad de Parkinson, la demencia del cuerpo de Lewis, la demencia vascular, el deterioro cognitivo leve (MCI), deterioro de la memoria asociado a la edad (AAMI) y el problema asociado con el envejecimiento, Parkinsonismo post-encefalftico, ALS y Smdrome de Down.
Como se usa en el presente documento, el "tratamiento" de un trastorno incluye la terapia, prevencion, profilaxis, retraso o reduccion de los smtomas provocados por el trastorno. El termino tratamiento incluye en particular el control de la progresion de la enfermedad y los smtomas asociados.
El termino "aumento", cuando se refiere a la angiogenesis, incluye cualquier aumento en la angiogenesis en comparacion con el nivel existente en el sujeto. Tal mejona puede incluir una restauracion, es decir, a niveles normales, o un aumento menor, que son todavfa suficientes para mejorar la condicion del paciente. Tal incremento puede ser evaluado o verificado usando ensayos biologicos conocidos, tal como se describe en la seccion experimental.
El termino "combinacion" designa un tratamiento en el que al menos dos o mas farmacos son coadministrados a un sujeto para provocar un efecto biologico. En una terapia combinada de acuerdo con esta invencion, los al menos dos farmacos se pueden administrar juntos o por separado, al mismo tiempo o secuencialmente. Ademas, los al menos dos farmacos pueden administrarse a traves de diferentes rutas y protocolos. Como resultado, aunque puedan formularse conjuntamente, los farmacos de una combinacion tambien pueden formularse por separado.
Como se discutio anteriormente, la invencion describe composiciones y metodos para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado en un sujeto que lo necesite, usando un farmaco o una combinacion de farmacos que aumenta la angiogenesis.
Mediante una amplia integracion de datos experimentales que cubren resultados de estudios de biologfa celular, experimentos de perfil de expresion y estudios de asociacion genetica, describiendo diferentes aspectos de la enfermedad de Alzheimer y enlaces existentes en la senalizacion celular y vfas funcionales, los inventores han descubierto que la angiogenesis representa un mecanismo importante que es alterado en sujetos con EA. Los genes situados en dicha red funcional e implicados en la enfermedad de Alzheimer se seleccionaron por los siguientes criterios:
(1) - interaccion directa con los genes causantes responsables de casos familiares de la enfermedad de Alzheimer (APP, ApoE, presenilinas, protema tau),
(2) - parejas funcionales de los genes seleccionados por el criterio (1),
(3) - parejas funcionales mas cercanas de los genes seleccionados por el criterio (2).
A traves de este proceso, los inventores pudieron establecer que la red responsable de la angiogenesis es una red funcional importante afectada en la enfermedad de Alzheimer.
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La angiogenesis juega un papel fundamental en asegurar una homeostasis tisular y en respuestas adaptativas a desaffos ambientales y fisiologicos tales como hipoxia o cicatrizacion de heridas; su disfuncion contribuye a la patogenesis de numerosas y heterogeneas patolog^as que van desde las complicaciones cardiovasculares hasta el crecimiento del tumor y las metastasis.
Aunque la enfermedad de Alzheimer es tradicionalmente considerada como una afeccion neurodegenerativa acompanada de patolog^a vascular colateral, el analisis de los inventores permite la reevaluacion del impacto patogenico de la desregulacion vascular y atribuye un papel importante y probablemente causal a las vfas angiogenicas en la etiologfa de esta enfermedad. Los inventores han encontrado que los genes que regulan la angiogenesis estan extremadamente enriquecidos en las redes de senalizacion implicadas en la enfermedad de Alzheimer. Esta conclusion tiene profundas consecuencias para la prevencion y curacion de la enfermedad de Alzheimer y proporciona nuevas directrices para el tratamiento combinatorio de este complejo trastorno neurodegenerativo. Tambien se encontro que esta red podna formalmente subdividirse en las familias de los factores angiogenicos y de las protemas de las dos vfas (via AMPK y la via metabolica LPA) estrechamente involucradas en la regulacion de la angiogenesis.
La protema amiloide Abeta afecta fuertemente no solo a la biologfa de las neuronas, sino que posee tambien una fuerte actividad anti-angiogenica (17). Otro gen, causalmente asociado con casos familiares de enfermedad de Alzheimer - la presinilina es capaz de modular - mediante la regulacion de la proteolisis intramembrana - la angiogenesis a traves de varias vfas de senalizacion independientes mediadas por sus sustratos funcionales VEGFRl, ErbB4, Notch, DCC, CD44, receptores ephrin y cadherinas (18 - 20).
El gen CD44 codifica un receptor para el acido hialuronico (HA), cuyos productos de degradacion promueven la angiogenesis (21). Este receptor estaba implicado en la organizacion y/o estabilizacion de los endotelios de vasos en formacion o recien formados (22). Tambien puede unirse y regular la actividad de protemas tales como osteopontina, colagenos y metaloproteinasas de matriz (MMP) implicadas en la dinamica de la matriz extracelular, que acompana a la formacion de nuevos vasos sangumeos (23).
Otros receptores de membrana identificados por la recopilacion de datos de los inventores incluyen IL20Ra, LEPTR, NRP1 y NRP2, y el receptor endotelina EDNRA. El gen IL20Ra codifica un receptor para IL20, una citocina pleiotropica implicada en la formacion de un tubo vascular (24). La leptina, una hormona endocrina y ligando para LEPTR, estimula la angiogenesis sinergicamente con el factor de crecimiento de fibroblastos FGF-2 y el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), los dos factores angiogenicos mas potentes y ubicuos expresados. Ademas, participa en el aumento de la permeabilidad vascular (25). NRP1 y NRP2 son co-receptores transmembrana que modulan la activacion de la senalizacion de VEGFR-2, lo que asegura la angiogenesis de desarrollo (26).
Finalmente, se selecciono un grupo de genes implicados en la organizacion y remodelacion de la matriz extracelular (THBS2, LAMA1, COL4A2, AdAmTS12 y AdAm10) o en el procesamiento funcional (TLL2) de moduladores angiogenicos bien conocidos tales como prolactina, hormona del crecimiento y lactogen de placenta (27).
La familia de la protema quinasa activada por AMP (AMPK) se reconoce como un sensor intracelular de la relacion AMP:ATP y desempena un papel importante en el mantenimiento de la homeostasis energetica mediante la regulacion de los procesos metabolicos, tales como el metabolismo de la glucosa o de los acidos grasos. Esta familia de serina/treonina quinasas se activa por estres metabolico que inhibe la produccion de ATP o estimula el consumo de ATP (28).
Ademas de su papel bien establecido en el control del balance energetico celular, la senalizacion de AMPK es tambien un regulador de la angiogenesis necesario para la migracion y diferenciacion de las celulas endoteliales en condiciones de hipoxia (29). Esta quinasa es uno de los efectores aguas abajo responsable de los efectos pro- angiogenicos de VEGF (30), adiponectina (31), IGF-1 y, probablemente, el receptor PPARy. Se ha descubierto que la AMPK esta activada anormalmente en ratones APP/PS2 doblemente transgenicos, un modelo in vivo de la enfermedad de Alzheimer (32).
Los inventores han identificado varios genes asociados con la enfermedad de Alzheimer y que representan tanto a moduladores aguas arriba como efectores aguas abajo de las quinasas activadas por AMP. Entre los moduladores aguas arriba de las protemas AMPK, los receptores de leptina y CNTF, se pueden mencionar CDH13 (33), un coreceptor putativo para adiponectina Acrp30 y vfas de senalizacion de trombina, asf como la quinasa CAMKK2p que, junto con la quinasa LKB1, se reconoce como un principal modulador directo de la actividad de AMPK (28).
En cuanto a los efectores aguas abajo de la AMPK, los genes implicados en los acidos grasos y el metabolismo del colesterol representan un interes particular. En particular, el gen ACC2, objetivo bien establecido de la senalizacion de AMPK, codifica la acetil-CoA carboxilasa (ACC) que cataliza la carboxilacion dependiente de ATP de acetil-CoA frente a malonil-CoA y, por tanto, controla la etapa de limitacion de velocidad en la smtesis de acidos grasos. La AMPK activada fosforila la protema ACC2, disminuye su actividad enzimatica y por lo tanto mejora la oxidacion de acidos grasos. Varios otros genes, principalmente mitocondriales, implicados en el metabolismo de los acidos grasos, tales como la EFTA, AUH, SLC25A21, PC, ME1 y EHHAdH, tambien podnan participar en el control mediado por AMPK del balance de energfa celular en el contexto de la enfermedad de Alzheimer. Entre ellos, el gen
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PC codifica la piruvato carboxilasa y esta implicado en multiples vfas metabolicas, tales como gluconeogenesis, lipogenesis y smtesis del neurotransmisor glutamato. Se ha demostrado que el deterioro en la actividad de PC podna estar relacionado con la disfuncion cerebral (34-35). Curiosamente, el receptor GABA(B) tambien fue identificado como un objetivo funcional para la quinasa activada por AMP. Un estudio reciente demostro que la activacion de AMPK podna ser neuroprotectora, a traves de la fosforilacion del receptor GABA(B) (36), y asf podna participar en la progresion de la patolog^a amiloide dirigida a terminales GABAergicos (11).
Ademas, la v^a de senalizacion de AMPK podna modificar la evolucion de las lesiones asociadas a la enfermedad de Alzheimer al influir en el metabolismo del colesterol. AMPK puede influir en el metabolismo del colesterol mediante la reduccion de la actividad de factores de transcripcion SREBP (37]. Las protemas SREBP son los principales sensores y reguladores de los niveles de colesterol intracelular; siendo activadas por clivaje proteolftico cuando el nivel de colesterol disminuye, las SREBP se unen a un elemento regulador de esterol espedfico (SRE) en regiones promotoras de genes que codifican enzimas, implicadas en la biosmtesis de colesterol y mejoran su transcripcion.
El colesterol no solo sirve como precursor de la biosmtesis de esteroides neuroprotectores, sino que tambien se reconoce como un importante regulador de la fluidez de la membrana y desempena un papel fundamental en la dinamica de las balsas lipfdicas, concentrando plataformas para una variedad de moleculas involucradas en la clasificacion de membranas, trafico y transduccion de la senal. Los productos intermedios en la biosmtesis del colesterol generados por farnesil-PP y geranieranil-PP sintasas desempenan un papel fundamental en la actividad moduladora de pequenas GTPasas, incluyendo RhoA y Rac, que son los principales reguladores de la angiogenesis y el crecimiento del axon.
Varios otros genes implicados en el metabolismo del colesterol y el transporte tambien podnan influir en el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer. Las protemas DHCR7, SRD5A1 y CYP7B1 estan implicadas en la produccion de esteroides que podnan proteger las celulas neuronales contra los insultos toxicos asociados con la enfermedad de Alzheimer (38). El gen ABCA1 que codifica un miembro de la familia de transportadores de casetes de union a ATP (ABC) tambien representa un interes particular, ya que controla la secrecion de la lipoprotema ApoE, el principal factor de riesgo de predisposicion para el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer (39).
El acido fosfatfdico (PA), el acido lisofosfatfdico (LPA) y la esfingosina 1-fosfato (SlP) son fosfolfpidos naturales que poseen potentes propiedades de senalizacion. En particular, estos factores de crecimiento de fosfolfpidos muestran efectos divergentes sobre el potencial angiogenico de las celulas endoteliales y podnan, de manera complementaria combinada, inducir eficazmente la neovascularizacion. S1P participa principalmente en la promocion de la migracion quimiotactica de las celulas endoteliales, mientras que LPA esta mas implicado en la estabilizacion de la funcion de barrera de monocapa endotelial en las ultimas etapas en la angiogenesis (40).
El LPA afecta la angiogenesis ya sea modulando la actividad de la RhoA GTPasa o mediante la potenciacion de la expresion de varios factores angiogenicos - VEGF, PDGFB e IL-8 (41-45). Ademas de su estrecha participacion en la angiogenesis, el LPA tambien se reconoce como una senal de lfpidos extracelulares que provoca el colapso del cono de crecimiento de las neuritas e influye en la migracion de las neuronas posmitoticas tempranas durante el desarrollo (46).
El LPA puede ser sintetizado por una lisofosfolipasa D secretada (autotaxina) y actua a traves de receptores EDG2, EDG4 y EDG7 acoplados a protemas G espedficos que afectan a la proliferacion celular, la supervivencia y la motilidad (47). Lo mas probable es que la capacidad del LPA para controlar la morfologfa celular y la motilidad esta mediada por la activacion del modulo de senalizacion RhoA-ROCK a traves de la protema G12/13 (48).
Algunos datos experimentales indican un papel importante para la senalizacion mediadora de LPA en la patogenesis de la enfermedad de Alzheimer. Se ha demostrado que la expresion de la autotaxina se incrementa en la corteza frontal de los pacientes con demencia de tipo Alzheimer (49) y la retraccion de las neuritas inducida por LPA in vitro se acompana de un patron de fosforilacion de la protema tau similar a la enfermedad de Alzheimer en celulas de neuroblastoma humano diferenciadas (50). Ademas, las manipulaciones geneticas con APP o las protemas de presenilina afectan la expresion de la enzima autotoxina en los cerebros de los ratones transgenicos (51-52).
Usando el enfoque de recoleccion de datos de los inventores, se han identificado un gran numero de genes, implicados en el metabolismo de LPA o modulados por la senalizacion de LPA y potencialmente vinculados a la progresion de la enfermedad de Alzheimer (MTR, MAT2B, CUBN, ATP10A, THEM2, PITPNC1, ENPPG, SGPP2 AGPAT, DGKH, DGKB, MGST2, PLD2 y DRD2). Entre ellos, el gen CUBN codifica un receptor de factor intnnseco de vitamina B12, mientras que la deficiencia de biodisponibilidad de folato y cobalamina (vitamina B9 y B12) se asocio previamente con la patogenesis de la enfermedad de Alzheimer (53).
En la presente invencion, los inventores describen composiciones novedosas, que pueden usarse para aumentar la angiogenesis alterada en la enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurogenerativos.
En una realizacion particular, las composiciones y metodos de tratamiento de EA descritas en esta invencion usan farmacos que aumentan la angiogenesis a traves de su interaccion con o la modulacion de un gen o protema como se ha mencionado anteriormente.
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Mas espedficamente, dichas composiciones comprenden un farmaco o farmacos que aumentan la angiogenesis a traves de la union o modulacion de la actividad de una protema codificada por un gen seleccionado de ABCA1, ACAT, ACC2, ADAMTS12, ADCY2, ADIPOQ, ADIPOR1, ADIPOR2 , ADRB2, AGPAT5, AIP4, AKAP2, AKR1C2, AMPK, ANG2, ANK1, ANXA1, APOA1, ARHGAP17, ATP1OA, AUH, AUTOTAXINA, BA13, BCAR1, BIN1, BMP3A, CA10, CAMK1D, CAMKK2, CD36, CD44, CDC42, CDH13 CHAT, CNTFR, COL4A2, CPT, CSH1, CTNN, CUBN, CYP7B1, CYSLTR1, CYSLTR2, DGKB, DGKH, DGKZ, DHCR7, DHFR, DRD2, DRD5, EDG1, EDG2, EDG3, EDG4, EDG5, EDG6, EDG7, EDG8 , EDNRA, EHHADH, ENPP6, ERBB4, ERK1, ERK2, ESRRG, ETFA, F2, FDPS, FGF2, FLNA, FLT4, FOXO1, FOXO3A, FTO, GABBR2, GATA3, GH1, GNA12, GNA13, GRK2, GRK5, GRM5 , HAPLN1, HAS1, HAS2, HAS3, HCRTR2, HIF1A, HSD11B1, HYAL1, HYAL2, HYAL3, IL20RA, IL20RB, IL6ST, IL8, ITGA6, ITGB1, KDR, LAMA1, LDLR, LEPR, LEPTIN, LIFR, LIPL2, LKB1, LRP, LTBP2, MAT2B, ME1, MEGALIN, MERLIN, MET, MGST2, MMP2, MMP9, MTOR, MTR, NCK2, NEDD9, NFKB1, NFKB1B, NOS2A, NOS3, NR1I2, NR3C2, NRG1, NRP1, NRP2, OPRS1, OSBPL10, OSBPL3, OSTEOPONTINA, P2RY1, P2RY12, PAI1, PAI2, PAK1, PAK6, PALLD, PAP1, PAR1, PAXILLINA, PC, PCTP, PDE11A, PDE1A, PDE3A, PDE4D, PDE5, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PI3K, PITPNC1, PKA, PKCD, PLA1A, PLA2, PLAT, PLAU, PLCB1, PLD1, PLD2, PLG, PLXDC2, PPARA , PPARG, PPARGC1B, PRKG1, PRL, PTGS2, PTN, PTPN11, PYK2, RAC1, RAS, RHEB, RHOA, ROCK1, ROCK2, RPS6KA1, RPS6KB2, SCARB1, SCHIP1, SGPP2, SLC25A21, SMAD3, SMAD4, SNCA, SORBS2, SPLA2, SPOCK1, SRD5A1, SREBF1, SREBF2, STAT3, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, THBS1, THBS2, THEM2, THRB, TIAM1, TIMP2, TLL2, TSC1, TSC2, TSPO, VEGFA, VEGFR1, y YES1.
Las secuencias de todos los genes y protemas enumerados anteriormente estan disponibles en bibliotecas de genes y pueden aislarse mediante tecnicas conocidas en la tecnica. Ademas, la actividad de estos genes y protemas puede evaluarse mediante tecnicas conocidas per se en la tecnica, como se discute en la seccion experimental.
La invencion describe ademas farmacos que pueden usarse para modular estos genes y protemas diana. La invencion describe la identificacion y la actividad de farmacos particulares que, bien solos pero preferentemente en combinacion(s), modulan la via anterior y pueden usarse para tratar dichas enfermedades. En particular, se han identificado pequenas moleculas que ya existen en la literatura, pero que se utilizan para tratar enfermedades distintas en sujetos humanos.
A este respecto, las composiciones descritas en esta invencion comprenden al menos un inhibidor de ACAT (preferiblemente, hesperetina), un modulador de ADCY2 (preferiblemente, vidarabina), un modulador de AMPK (preferiblemente seleccionado entre fenformina y vidarabina), un modulador de AMPK de AUTOTAXINA (preferiblemente, L-histidina), un inhibidor of CA10 (preferiblemente, metazolamida), un antagonista de CYSLTR1 y CYSLTR2 (preferiblemente montelukast), un inhibidor de DHFR (preferiblemente, pirimetamina), un modulador de DRD2 (preferiblemente seleccionado de dihidroergotamina y cabergolina), un agonista del receptor de dopamina DRD5 (preferiblemente, fenoldopam), un antagonista de EDNRA (preferiblemente, sulfisoxazol), un modulador de F2 (preferiblemente, warfarina), un inhibidor de FDPS (preferiblemente alendronato), un modulador de GABBR2 (preferiblemente seleccionado de baclofeno y acamprosato), un modulador de HAS1-3 de hialuronan sintasas (preferiblemente, leflunomida), un modulador de HIF1A (preferiblemente seleccionado entre topotecan y meloxicam), un modulador de MGST2 (preferiblemente, balsalazida), un modulador de MMP2 y mMP9 (preferiblemente, marimastat), un modulador de NOS2A (preferiblemente seleccionado entre gemfibrozilo, albuterol y titilperazina), un modulador de NOS3 (preferiblemente, cetotifeno), un agonista de NR1I2 (preferiblemente, topiramato), un
modulador de NR3C2 (preferiblemente seleccionado entre eplerenona y fludrocortisona), un agonista de OPRS1
(preferiblemente pentazocina), un modulador de P2RY1 y P2RY12 (preferiblemente seleccionado entre clopidogrel y tirofiban), un inhibidor del receptor de trombina PAR1 (preferiblemente, argatroban), un inhibidor de PDEIlA (preferiblemente, tadalafil), un inhibidor de PDE3A (preferiblemente, cilostazol), un inhibidor de PDE4D (preferiblemente, milrinona), un modulador de PDGFRA y PDGFRB (preferiblemente seleccionado de becaplermina e imatinib), un inhibidor de fosfo lipasas PLA1A y PLA2 (preferiblemente seleccionadas entre netilmicina y mepacrina), un modulador de PLAT (preferiblemente fenilbutirato), un modulador de PLD2 (preferiblemente seleccionado entre ambrisentano y fenoldopam), un modulador de PLG (preferiblemente, acido aminocaproico), un agonista de PPARA (preferiblemente, gemfibrozilo), un agonista de PPARG (preferiblemente fenilbutirato sodico), un activador de PRKG1 (preferiblemente seleccionado entre nitroprusiato, nitroglicerina, tadalafil y cilostazol), un
modulador de RHOA (preferiblemente seleccionado entre alendronato y terbinafina), un modulador de THRB
(preferiblemente seleccionado entre liotironina y metimazol), un inhibidor de TROMBIN (preferiblemente, desirudin), un modulador de TSPO (preferiblemente seleccionado de flunitrazepam y temazepam) , y/o un antagonista de VEGFR1 (preferiblemente seleccionado entre sunitinib y pegaptanib).
Como se ha expuesto anteriormente, la invencion describe en particular el diseno de terapias de combinacion para abordar los mecanismos de la EA y los trastornos relacionados. A este respecto, se describen a continuacion ejemplos de combinaciones de diana y farmacos mas preferidos.
Mas preferiblemente, la composicion descrita en esta invencion comprende al menos una de las siguientes combinaciones de farmacos, para administracion combinada, separada o secuencial:
- un modulador del receptor GABBR2 (preferiblemente baclofeno) y un modulador de RHOA
(preferiblemente terbinafina),
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- un modulador del receptor GABBR2 (preferiblemente, baclofeno) y un antagonista del receptor de endotelina EDNRA (preferiblemente sulfoxazol),
- un modulador del receptor GABBR2 (preferiblemente, baclofeno) y un modulador de HAS1-3 hialuronan sintasas (preferiblemente, leflunomida)
- un modulador de RHOA (preferiblemente, terbinafina) y un antagonista del receptor de endotelina EDNRA (preferiblemente, sulfisoxazol),
- un modulador de RHOA (preferiblemente terbinafina) y un modulador de HAS1-3 hialuronan sintasa (preferiblemente, leflunomida),
- un modulador de RHOA (preferiblemente terbinafina) y un agonista del receptor de dopamina DRD5 (preferiblemente, fenoldopam),
- un modulador de RHOA (preferiblemente terbinafina) y un inhibidor de fosfolipasas PLA1A y PLA2 (preferiblemente, mepacrina),
- un modulador de RHOA (preferiblemente terbinafina) y un modulador de AMPK (preferiblemente fenformina),
- un modulador de RHOA (preferiblemente terbinafina) y un modulador de receptores purinergicos P2RY1 y P2RY12 (preferiblemente clopidogrel),
- un modulador del receptor GABBR2 (preferiblemente, baclofeno) y un modulador de AMPK (preferiblemente fenformina),
- un modulador del receptor GABBR2 (preferiblemente, baclofeno) y un modulador de receptores purinergicos P2RY1 y P2RY12 (preferiblemente, clopidogrel),
- un modulador de RHOA (preferiblemente, terbinafina) y un modulador de receptores purinergicos
- un antagonista del receptor de endotelina EDNRA (preferiblemente sulfoxazol) y un modulador de AMPK (preferiblemente, fenformina),
- un modulador de HAS1-3 de hialuronan sintasas (preferiblemente, leflunomida) y un agonista del receptor de dopamina DRD5 (preferiblemente fenoldopam), o
- un modulador de HAS1-3 de hialuronan sintasas (preferiblemente, leflunomida) y un inhibidor de fosfolipasas PLA1A y PLA2 (preferiblemente, mepacrina).
Ejemplos de las composiciones descritos en esta invencion comprenden un compuesto seleccionado entre acamprosato, albuterol, alendronato, ambrisentan, acido aminocaproico, argatroban, baclofeno, balsalazida, becaplermina, cabergolina, cilostazol, clopidogrel, desirudina, dihidroergotamina, eplerenona, fenoldopam, fludrocortisona, flunitrazepam, gemfibrozil, hesperetina, imatinib, cetotifeno, leflunomida, L-histidina, liotironina, marimastat, meloxicam, mepacrina, metazolamida, metimazol, milrinona, montelukast, netilmicina, nitroglicerina, nitroprusiato, pegaptanib, pentazocina, fenformina, fenilbutirato de sodio, pirimetamina, sulfisoxazol, sunitinib, tadalafil, temazepam, terbinafina, titilperazina, tirofiban, topiramato, topotecan, vidarabina y warfarina, o una combinacion de los mismos.
En una realizacion preferida, la invencion se refiere a composiciones para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer que comprenden al menos un compuesto elegido de terbinafina o baclofeno, o sales o formulaciones de liberacion sostenida de los mismos, para la administracion simultanea, separada o secuencial.
En otra realizacion preferida, las composiciones para uso de acuerdo con la invencion comprenden ademas al menos un compuesto adicional distinto elegido del grupo que consiste en leflunomida, sulfisoxazol, terbinafina, baclofeno, clopidogrel, fenoldopam, mepacrina y fenformina, o sales o formulaciones de liberacion sostenida de los mismos, para la administracion simultanea, separada o secuencial.
La presente invencion tambien describe composiciones que comprenden una combinacion de al menos dos compuestos elegidos del grupo que consiste en leflunomida, sulfisoxazol, terbinafina, baclofeno, clopidogrel, fenoldopam, mepacrina y fenformina, o sales o profarmacos o derivados o formulaciones de liberacion sostenida de los mismos, en los que dicha composicion aumenta la angiogenesis alterada en trastornos neurodegenerativos seleccionados del grupo que consiste en la enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson (EP), esclerosis lateral amiotrofica (ELA) y esclerosis multiple (EM).
La presente invencion tambien describe composiciones que comprenden una combinacion de al menos dos compuestos elegidos del grupo que consiste en leflunomida, sulfisoxazol, terbinafina, baclofeno, clopidogrel,
fenoldopam, mepacrina y fenformina, o sales o profarmacos o derivados o formulaciones de liberacion sostenida para tratar la enfermedad de Alzheimer (EA).
Preferiblemente, la composicion para tratar la enfermedad de Alzheimer en un sujeto que lo necesite comprende al menos una de las siguientes combinaciones de farmacos para administracion combinada, separada o secuencial:
5 - baclofeno y terbinafina,
- baclofeno y sulfisoxazol,
- baclofeno y leflunomida,
- terbinafina y sulfisoxazol,
- terbinafina y leflunomida,
10 - terbinafina y fenoldopam,
- terbinafina y mepacrina,
- terbinafina y fenformina,
- terbinafina y clopidogrel,
- baclofeno y fenformina,o 15 -baclofeno y clopidogrel.
En una realizacion preferida, la composicion de la invencion comprende una combinacion de terbinafina y baclofeno o sales o formulaciones de liberacion sostenida de los mismos, para administracion simultanea, separada o secuencial.
Otra composicion descrita en la invencion comprende uno o mas compuestos seleccionados entre leflunomida, 20 terbinafina, sulfisoxazol y baclofeno, o sales o profarmacos o derivados o formulaciones de liberacion sostenida de los mismos, para tratar la enfermedad de Alzheimer o un trastorno relacionado.
Otra composicion descrita en la invencion comprende ademas al menos un farmaco que aumenta la angiogenesis, para uso combinado, separado o secuencial.
Preferiblemente, dicho farmaco adicional que aumenta la angiogenesis se selecciona de un inhibidor de ACAT 25 (preferiblemente, hesperetina), un modulador de ADCY2 (preferiblemente, vidarabina), un modulador de AMPK (preferiblemente, vidarabina), un modulador de AUTOTAXINA (preferiblemente L-histidina), un inhibidor de CA10 (preferiblemente, metazolamida), un antagonista de CYSLTR1 y CYSLTR2 (preferiblemente montelukast), un inhibidor de DHFR (preferiblemente, pirimetamina), un modulador de DRD2 (preferiblemente seleccionado entre dihidroergotamina y cabergolina), un modulador de F2 (preferiblemente, warfarin) un inhibidor de FDPS 30 (preferiblemente, alendronato), un modulador de GABBR2 (preferiblemente acamprosato), un modulador de HIF1A (preferiblemente seleccionado entre topotecan y meloxicam), un modulador de MGST2 (preferiblemente, balsalazida), un modulador de MMP2 y MMP9 (preferiblemente, marimastat), un modulador de NOS2A (preferiblemente seleccionado entre gemfibrozilo, albuterol y titilperazina), un modulador de NOS3 (preferiblemente, cetotifeno), un agonista de NR1I2 (preferiblemente topiramato), un modulador de NR3C2 (preferiblemente 35 seleccionado entre eplerenona y fludrocortisona), un agonista de OPRS1 (preferiblemente, pentazocina), un modulador de P2RY1 y P2RY12 (preferiblemente tirofiban), un inhibidor del receptor de trombina PAR1 (preferiblemente, argatroban), un inhibidor de PDE11A (preferiblemente, tadalafil), un inhibidor de PDE3A (preferiblemente, cilostazol), un inhibidor de PDE4D (preferiblemente, milrinona), un modulador de PDGFRA y PDGFRB (preferiblemente seleccionado de becaplermina e imatinib), un inhibidor de PLA1A y PLA2 40 (preferiblemente, netilmicina), un modulador de PLAT (preferiblemente, fenilbutirato de sodio), un modulador de PLD2 (preferiblemente, ambrisentan), un modulador de PLG (preferiblemente acido aminocaproico), un agonista de PPARA (preferiblemente gemfibrozilo), un agonista de PPARG (preferiblemente, fenilbutirato), un activador de PRKGl (preferiblemente seleccionado entre nitroprusiato, nitroglicerina, tadalafil y cilostazol), un modulador de RHOA (preferiblemente alendronato), un modulador de THRB (preferiblemente seleccionado entre liotironina y 45 metimazol), un inhibidor de TROMBIN (preferiblemente, desirudina), un modulador de TSPO (preferiblemente seleccionado entre flunitrazepam y temazepam), y/o un antagonista de VEGFR1 (preferiblemente seleccionado de sunitinib y pegaptanib).
En otras realizaciones, dicho farmaco adicional que aumenta la angiogenesis se selecciona del farmaco o farmacos que se unen o modulan la actividad de una protema codificada por un gen seleccionado de ABCA1, ACAT, ACC2, 50 ADAMTS12, ADCY2, ADIPOQ, ADIPOR1, ADIPOR2, ADRB2, AGPAT5, AIP4, AKAP2, AKR1C2, AMPK, ANG2, ANK1, ANXA1, APOA1, ARHGAP17, ATP1OA, AUH, AUTOTAXINA, BAI3, BCAR1, BIN1, BMP3A, CA1O, CAMK1D, CAMKK2, CD36, CD44, CDC42, CDH13, CHAT, CNTFR, COL4A2, CPT, CSH1, CTNN, CUBN, CYP7B1, CYSLTR1,
CYSLTR2, DGKB, DGKH, DGKZ, DHCR7, DHFR, DRD2, DRD5, EDG1, EDG2, EDG3, EDG4, EDG5, EDG6, EDG7, EDG8, EDNRA, EHHADH, ENPP6, ERBB4, ERK1, ERK2, ESRRG, ETFA, F2, FDPS, FGF2, FLNA, FLT4, FOXO1, FOXO3A, FTO, GABBR2, GATA3, GH1, GNA12, GNA13, GRK2, GRK5, GRM5, HAPLN1, HAS1, HAS2, HAS3, HCRTR2, HIF1A, HSD11B1, HYAL1, HYAL2, HYAL3, IL20RA, IL20RB, IL6ST, IL8, ITGA6, ITGB1, KDR, LAMA1, 5 LDLR, LEPR, LEPTIN, LIFR, LIPL2, LKB1, LRP, LTBP2 , MAT2B, ME1, MEGALIN, MERLIN, MET, MGST2, MMP2, MMP9, MTOR, MTR, NCK2, NEDD9, NFKB1, NFKBIB, NOS2A, NOS3, NR1I2, NR3C2, NRG1, NRP1, NRP2, OPRS1, OSBPL1O, OSBPL3, OSTEOPONTINA, P2RY1, P2RY12, PAI1, PAI2, PAK1, PAK6, PALLD, PAP1, PAR1, PAXILLINA, PC, PCTP, PDE11A, PDE1A, PDE3A, PDE4D, PDE5, PDGFA, PDGFB, PDGFRA, PDGFRB, PI3K, PITPNC1, PKA, PKCD, PLA1A, PLA2, PLAT, PLAU, PLCB1, PLD1, PLD2, PLG, PLXDC2, PPARA, PPARG, 10 PPARGC1B , PRKG1, PRL, PTGS2, PTN, PTPN11, PYK2, RAC1, RAS, RHEB, RHOA, ROCK1, ROCK2, RPS6KA1, RPS6KB2, SCARBl, SCHIP1, SGPP2, SLC25A21, SMAD3, SMAD4, SNCA, SORBS2, SPLA2, SPOCK1, SRD5A1, SREBF1, SREBF2, STAT3, TGFBR1, TGFBR2, TGFBR3, THBS1, THBS2, THEM2, THRB, TIAM1, TIMP2, TLL2, TSC1, TSC2, TSPO, VEGFA, VEGFR1 y YES1.
Los inventores han establecido que los farmacos y las combinaciones de farmacos anteriores proporcionan un 15 efecto biologico mejorado y sinergico que conduce a una correccion o normalizacion efectiva o a una desregulacion funcional que conduce a la EA y a trastornos relacionados.
Los compuestos mencionados anteriormente se enumeran en la siguiente tabla 1, junto con su Numero CAS. Como se ha discutido anteriormente, debe entenderse que la invencion abarca el uso de los compuestos anteriores asf como cualquier sal, hidrato, ester, eter, isomeros, racematos, conjugados o pro-farmacos farmaceuticamente 20 aceptables de los mismos. Los profarmacos pueden prepararse (por ejemplo, acoplando el farmaco a un vehfculo adecuado) para ofrecer un mejor control sobre los parametros farmacocineticos del tratamiento.
Tabla 1
NOMBRE DEL FARMACO
NUMERO CAS
Acamprosato
77337-76-9
Albuterol
18559-94-9
Alendronato
66376-36-1
Ambrisentan
177036-94-1
Acido aminocaproico
60-32-2
Argatroban
74863-84-6
Baclofen
1134-47-0
Balsalazida
80573-04-2
Becaplermin
165101-51-9
Cabergolina
81409-90-7
Cilostazol
73963-72-1
Clopidogrel
113665-84-2
Desirudin
120993-53-5
Dihidroergotamina
6190-39-2
Eplerenona
107724-20-9
Fenoldopam
67227-57-0
Fludrocortisona
127-31-1
Flunitrazepam
1622-62-4
Gemfibrozil
25812-30-0
Hesperetin
520-33-2
Imatinib
152459-95-5
NOMBRE DEL FARMACO
NUMERO CAS
Ketotifen
34580-14-8
Leflunomida
75706-12-6
L-histidina
71-00-1
Liotironina -
6893-02-3
Marimastat
154039-60-8
Meloxicam
71125-38-7
Mepacrina
83-89-6
Metazolamida
554-57-4
Metimazol
60-56-0
Milrinona
78415-72-2
Montelukast
158966-92-8
Netilmicin
56391-56-1
Nitroglicerina
55-63-0
Nitroprusida
15078-28-1
Pegaptanib
222716-86-1
Pentazocina
359-83-1
Fenformin
114-86-3
Fenilbutirato de sodio
1716-12-7
Pirimetamina
58-14-0
Sulfisoxazol
127-69-5
Sunitinib
557795-19-4
Tadalafil
171596-29-5
Temazepam
846-50-4
Terbinafina
91161-71-6
Tietilperazina
1420-55-9
Tirofiban
144494-65-5
Topiramato
97240-79-4
Topotecan
119413-54-6
Vidarabina
24356-66-9
Warfarin
81-81-2
Ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables incluyen sales de adicion de acido farmaceuticamente aceptables, sales de adicion de bases farmaceuticamente aceptables, sales de metales farmaceuticamente aceptables, sales de amonio y amonio alquilado. Las sales de adicion de acido incluyen sales de acidos inorganicos asf como acidos 5 organicos. Ejemplos representativos de acidos inorganicos adecuados incluyen acidos clorhndrico, bromhidrico, yodhndrico, fosforico, sulfurico, mtrico y similares. Ejemplos representativos de acidos organicos adecuados incluyen los acidos formico, acetico, tricloroacetico, trifluoroacetico, propionico, benzoico, cinamico, dtrico, fumarico, glicolico,
lactico, maleico, malico, malonico, mandelico, oxalico, picarico, piruvico, salidlico, succmico, metanosulfonico, etanosulfonico, tartarico, ascorbico, pamoico, bismetileno salidlico, etanodisulfonico, gluconico, citraconico, aspartico, estearico, palmftico, EDTA, glicolico, p-aminobenzoico, glutamico, bencenosulfonico, p-toluenosulfonico, sulfatos, nitratos, fosfatos, percloratos, boratos, acetatos, benzoatos, hidroxinaftoatos, glicerofosfatos, 5 cetoglutaratos. Ejemplos adicionales de sales de adicion de acidos inorganicos u organicos farmaceuticamente aceptables se enumeran, por ejemplo, en J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2. Ejemplos de sales metalicas incluyen sales de litio, sodio, potasio, magnesio y similares. Ejemplos de sales de amonio y amonio alquilado incluyen sales de amonio, metilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, hidroxietilamonio, dietilamonio, butilamonio, tetrametilamonio y similares. Ejemplos de bases organicas incluyen lisina, arginina, guanidina, dietanolamina, colina 10 y similares.
La terapia de acuerdo con la invencion puede realizarse sola o como combinacion de farmacos, y/o en combinacion con cualquier otra terapia, dirigiendose a la misma via o teniendo distintos modos de accion. Se puede proporcionar en el hogar, en el consultorio del medico, en una clmica, en un departamento ambulatorio del hospital o en un hospital, para que el medico pueda observar los efectos de la terapia de cerca y hacer los ajustes necesarios.
15 En una realizacion particular, las composiciones descritas en esta invencion comprenden ademas al menos un farmaco que modula la funcion de sinapsis, preferiblemente que mejora la funcion de sinapsis, para uso combinado, separado o secuencial. Mas preferiblemente, dicho al menos un farmaco que modula la funcion de sinapsis se selecciona entre alfentanilo, amilorida, amlodipina, aztreonam, buclizina, bumetanida, buprenorfina, lidocama, clorzoxazona, cinacalcet, dasatinib, dhipifilina, eletriptano, ergotamina, fosfenitoma, fenobarbital, pregabalina, 20 propiltiouracil, tiagabina, triamtereno, vigabatrina y zonisamida (vease la tabla 2 a continuacion).
Tabla 2
Nombre del farmaco
Numero CAS
Alfentanil
71195-58-9
Amilorida
2016-88-8
Amlodipina
88150-42-9
Aztreonam
78110-38-0
Buclizina
82-95-1
Bumetanida
28395-03-1
Buprenorfina
52485-79-7
Lidocaina
137-58-6
Clorzoxazona
95-25-0
Cinacalcet
226256-56-0
Dasatinib
302962-49-8
Difillina
479-18-5
Eletriptan
143322-58-1
Ergotamina
113-15-5
Fosfenitoin
93390-81-9
Fenobarbital
50-06-6
Pregabalin
148553-50-8
Propiltiouracil
51-52-5
Tiagabina
115103-54-3
Triamterena
396-01-0
Vigabatrin
60643-86-9
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Nombre del farmaco
Numero CAS
Zonisamida
68291-97-4
Alternativamente, o ademas de la realizacion anterior, las composiciones descritas en esta invencion pueden comprender ademas al menos un farmaco que modula la respuesta al estres celular, preferiblemente que inhibe la respuesta al estres celular, para uso combinado, separado o secuencial. Los farmacos mas preferidos que modulan la respuesta al estres celular se seleccionan de arabitol, manitol, metaraminol, omeprazol, prilocama, rapamicina, rifabutina, tioguanina, trehalosa y vidarabina (vease la tabla 3 a continuacion).
Tabla 3
Nombre del farmaco
Numero CAS
Arabitol
488-82-4, 7643-75-6, 6018-27-5
Manitol
69-65-8
Metaraminol
54-49-9
Omeprazol
73590-58-6
Prilocaina
721-50-6
Rapamicina
53123-88-9
Rifabutin
72559-06-9
Tioguanina
154-42-7
Trehalosa
99-20-7
Vidarabina
24356-66-9
En una realizacion particular, la invencion se refiere a una composicion que comprende un farmaco que aumenta la angiogenesis, un farmaco que mejora la funcion de la sinapsis y un farmaco que inhibe la respuesta al estres celular, para administracion simultanea, separada o secuencial.
Las composiciones de la invencion tfpicamente comprenden uno o varios vetuculos o excipientes farmaceuticamente aceptables. La duracion de la terapia depende de la etapa de la enfermedad que se este tratando, de la combinacion utilizada, de la edad y condicion del paciente y de como responde el paciente al tratamiento.
La dosificacion, la frecuencia y el modo de administracion de cada componente de la combinacion pueden controlarse independientemente. Por ejemplo, se puede administrar un farmaco por via oral mientras que el segundo farmaco se puede administrar por via intramuscular. La terapia combinada puede administrarse en ciclos de encendido y apagado que incluyen penodos de descanso para que el cuerpo del paciente tenga la oportunidad de recuperarse de cualquier efecto secundario aun imprevisto. Los farmacos tambien se pueden formular juntos de manera que una administracion administre todos los farmacos.
La administracion de cada farmaco de la combinacion puede ser por cualquier medio adecuado que de como resultado una concentracion del farmaco que, combinado con el otro componente, sea capaz de corregir el funcionamiento de las vfas implicadas en la EA.
Aunque es posible administrar los ingredientes activos de la combinacion como producto qrnmico puro, es preferible presentarlos como una composicion farmaceutica, a la que tambien se hace referencia en este contexto como formulacion farmaceutica. Las composiciones posibles incluyen aquellas adecuadas para administracion oral, rectal, topica (incluyendo transdermica, bucal y sublingual) o parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intravenosa e intradermica).
Mas comunmente, estas formulaciones farmaceuticas se prescriben al paciente en "paquetes de paciente" que contienen un numero de unidades de dosificacion u otros medios para la administracion de dosis unitarias medidas para su uso durante un penodo de tratamiento distinto en un solo envase, habitualmente un envase blister. Los paquetes de paciente tienen una ventaja sobre las prescripciones tradicionales, cuando un farmaceutico divide un suministro de un paciente de un producto farmaceutico de un suministro a granel, en que el paciente siempre tiene acceso al prospecto incluido en el paquete de paciente, que normalmente carece de las recetas tradicionales. Se ha
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demostrado que la inclusion de un prospecto de paquete mejora la conformidad del paciente con las instrucciones del medico. Por lo tanto, la invencion incluye ademas una formulacion farmaceutica, como se ha descrito anteriormente, en combinacion con material de envasado adecuado para dichas formulaciones. En tal paquete de pacientes, el uso pretendido de una formulacion para el tratamiento combinado puede deducirse mediante instrucciones, medios, disposiciones, adaptaciones y/u otros medios para ayudar a usar la formulacion mas adecuadamente para el tratamiento. Tales medidas hacen que un paquete de paciente sea espedficamente adecuado y adaptado para su uso para el tratamiento con la combinacion de la presente invencion.
El farmaco puede estar contenido en cualquier cantidad apropiada en cualquier sustancia veldculo adecuado, y puede estar presente en una cantidad de 1-99% en peso del peso total de la composicion. La composicion puede proporcionarse en una forma de dosificacion que sea adecuada para la via oral, parenteral (por ejemplo, intravenosa, intramuscular), rectal, cutanea, nasal, vaginal, inhalante, por la piel (parche) u ocular. Por lo tanto, la composicion puede estar en forma, por ejemplo, de comprimidos, capsulas, pfldoras, polvos, granulados, suspensiones, emulsiones, soluciones, geles que incluyen hidrogeles, pastas, unguentos, cremas, emplastos, empapados, dispositivos de liberacion osmotica, supositorios, enemas, inyectables, implantes, pulverizaciones o aerosoles.
Las composiciones farmaceuticas pueden formularse de acuerdo con la practica farmaceutica convencional (vease, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a ed.), Ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000 y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick y J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, Nueva York).
Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la invencion pueden formularse para liberar el farmaco activo sustancialmente inmediatamente despues de la administracion o en cualquier periodo de tiempo o tiempo predeterminado despues de la administracion.
Las formulaciones de liberacion controlada incluyen (i) formulaciones que crean una concentracion sustancialmente constante del farmaco dentro del cuerpo durante un periodo de tiempo prolongado; (ii) formulaciones que despues de un tiempo de retardo predeterminado crean una concentracion sustancialmente constante del farmaco dentro del cuerpo durante un periodo de tiempo prolongado; (iii) formulaciones que sostienen la accion del farmaco durante un periodo de tiempo predeterminado manteniendo un nivel de farmaco relativamente constante y eficaz en el cuerpo con minimizacion concomitante de efectos secundarios indeseables asociados con fluctuaciones en el nivel de plasma de la sustancia farmacologica activa; (iv) formulaciones que localizan la accion del farmaco, por ejemplo, colocacion espacial de una composicion de liberacion controlada adyacente al tejido u organo enfermo; y (v) formulaciones que se dirigen a la accion del farmaco utilizando vehfculos o derivados qrnmicos para administrar el farmaco a un tipo de celula objetivo particular.
La administracion de farmacos en forma de una formulacion de liberacion controlada es especialmente preferida en los casos en los que el farmaco, solo o en combinacion, tiene (i) un mdice terapeutico estrecho (es decir, la diferencia entre la concentracion en plasma que produce efectos secundarios daninos o reacciones toxicas y la concentracion plasmatica que conduce a un efecto terapeutico es pequena; en general, el mdice terapeutico, IT, se define como la relacion de la dosis letal media (LD50) respecto a la dosis media efectiva (ED50)); (ii) una ventana de absorcion estrecha en el tracto gastrointestinal; o (iii) una semivida biologica muy corta, de modo que se requiere una dosificacion frecuente durante un dfa para mantener el nivel de plasma a un nivel terapeutico.
Cualquiera de una serie de estrategias puede ser perseguida con el fin de obtener una liberacion controlada en la que la tasa de liberacion supere la tasa de metabolismo de la droga en cuestion. La liberacion controlada puede obtenerse mediante la seleccion apropiada de diversos parametros e ingredientes de la formulacion, incluyendo, por ejemplo, diversos tipos de composiciones y revestimientos de liberacion controlada. De este modo, el farmaco se formula con excipientes apropiados en una composicion farmaceutica que, despues de su administracion, libera el farmaco de una manera controlada (comprimidos o composiciones de capsulas individuales o multiples, soluciones oleosas, suspensiones, emulsiones, microcapsulas, microesferas, nanopartmulas, y liposomas).
Formas de dosis solidas para uso oral
Las formulaciones para uso oral incluyen comprimidos que contienen el ingrediente(s) activo(s) en una mezcla con excipientes no toxicos farmaceuticamente aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes o cargas (por ejemplo, sacarosa, celulosa microcristalina, almidones incluyendo almidon de patata, carbonato de calcio, cloruro de sodio, fosfato de calcio, sulfato de calcio o fosfato de sodio); agentes de granulacion y de desintegracion (por ejemplo, derivados de celulosa que incluyen celulosa microcristalina, almidones que incluyen almidon de patata, croscarmelosa sodica, alginatos o acido algmico); agentes de union (por ejemplo, acacia, acido algmico, alginato sodico, gelatina, almidon, almidon pregelatinizado, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa sodica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, etilcelulosa, polivinilpirrolidona o polietilenglicol); y agentes lubricantes, deslizantes y antiadhesivos (por ejemplo, acido estearico, sflices o talco). Otros excipientes farmaceuticamente aceptables pueden ser colorantes, agentes aromatizantes, plastificantes, humectantes, agentes tamponantes.
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Los comprimidos pueden estar sin recubrimiento o pueden recubrirse por tecnicas conocidas, opcionalmente para retrasar la desintegracion y absorcion en el tracto gastrointestinal y, de este modo, proporcionar una accion sostenida durante un penodo mas largo. El recubrimiento puede estar adaptado para liberar la sustancia farmacologica activa en un patron predeterminado (por ejemplo, para conseguir una formulacion de liberacion controlada) o puede adaptarse para no liberar la sustancia farmacologica activa hasta despues del paso del estomago (recubrimiento enterico). El recubrimiento puede ser un recubrimiento de azucar, un recubrimiento de pelfcula (por ejemplo, a base de hidroxipropilmetilcelulosa, metilcelulosa, metil hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, carboximetilcelulosa, copoKmeros de acrilato, polietilenglicoles y/o polivinilpirrolidona), o un revestimiento enterico (por ejemplo, a base de copolfmero de acido metacnlico, acetato ftalato de celulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, succinato de acetato de hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de acetato de polivinilo, goma laca y/o etilcelulosa). Se puede emplear un material de retardo de tiempo tal como, por ejemplo, monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.
Las composiciones de comprimidos solidos pueden incluir un recubrimiento adaptado para proteger la composicion de cambios qmmicos no deseados (por ejemplo, degradacion qmmica antes de la liberacion de la sustancia farmacologica activa). El recubrimiento puede aplicarse sobre la forma de dosificacion solida de una manera similar a la descrita en Encyclopedia of Pharmaceutical Technology.
Pueden mezclarse varios farmacos en el comprimido o pueden dividirse. Por ejemplo, el primer farmaco esta contenido en el interior del comprimido, y el segundo farmaco esta en el exterior, de manera que una porcion sustancial del segundo farmaco se libera antes de la liberacion del primer farmaco.
Las formulaciones para uso oral tambien pueden presentarse como tabletas masticables o como capsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente solido inerte (por ejemplo, almidon de patata, celulosa microcristalina, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolm) o como capsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, parafina lfquida o aceite de oliva. Los polvos y granulados se pueden preparar usando los ingredientes mencionados anteriormente en tabletas y capsulas de una manera convencional.
Las composiciones de liberacion controlada para uso oral pueden, por ejemplo, estar construidas para liberar el farmaco activo controlando la disolucion y/o la difusion de la sustancia farmacologica activa.
La disolucion o liberacion controlada por difusion puede conseguirse mediante un recubrimiento apropiado de una formulacion de comprimidos, capsulas, granulos o granulados de farmacos, o incorporando el farmaco en una matriz apropiada. Un revestimiento de liberacion controlada puede incluir una o mas de las sustancias de recubrimiento mencionadas anteriormente y/o, por ejemplo, goma laca, cera de abejas, glicol, cera de ricino, cera de carnauba, alcohol esteanlico, monoestearato de glicerilo, diestearato de glicerilo, palmitoestearato de glicerol, etilcelulosa, resinas acnlicas, acido dl-polilactico, butirato de acetato de celulosa, cloruro de polivinilo, acetato de polivinilo, vinilpirrolidona, polietileno, polimetacrilato, metilmetacrilato, 2-hidroximetacrilato, hidrogeles de metacrilato, 1,3 butilenglicol, metacrilato de etilenglicol y/o polietilenglicoles. En una formulacion de matriz de liberacion controlada, el material de matriz tambien puede incluir, por ejemplo, metilcelulosa hidratada, cera de carnauba y alcohol esteanlico, carbopol 934, silicona, triestearato de glicerilo, acrilato de metilo-metacrilato de metilo, cloruro de polivinilo, polietileno y/o fluorocarbono halogenado.
Una composicion de liberacion controlada que contiene uno o mas de los farmacos de las combinaciones reivindicadas tambien puede estar en forma de una tableta o capsula flotante (es decir, una tableta o capsula que, tras la administracion oral, flote sobre el contenido gastrico durante cierto tiempo penodo de tiempo). Se puede preparar una formulacion en tableta flotante del(de los) farmaco(s) por granulacion de una mezcla del(de los) farmaco(s) con excipientes y 20-75% p/p de hidrocoloides, tales como hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa o hidroxipropilmetilcelulosa. Los granulos obtenidos se pueden comprimir a continuacion en comprimidos. En contacto con el jugo gastrico, el comprimido forma una barrera de gel sustancialmente impermeable al agua alrededor de su superficie. Esta barrera de gel toma parte en el mantenimiento de una densidad de menos de uno, permitiendo de este modo que el comprimido permanezca flotante en el jugo gastrico.
Lfquidos para administracion oral
Los polvos, polvos dispersables o granulos adecuados para la preparacion de una suspension acuosa por adicion de agua son formas de dosificacion convenientes para la administracion oral. La formulacion como suspension proporciona el ingrediente activo en una mezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspension y uno o mas conservantes. Agentes de suspension adecuados son, por ejemplo, carboximetilcelulosa sodica, metilcelulosa, alginato sodico y similares.
Composiciones parenterales
La composicion farmaceutica tambien puede administrarse parenteralmente mediante inyeccion, infusion o implantacion (intravenosa, intramuscular, subcutanea o similar) en formas de dosificacion, formulaciones o mediante dispositivos o implantes de liberacion adecuados que contengan vehfculos convencionales no toxicos
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farmaceuticamente aceptables y adyuvantes. La formulacion y preparacion de tales composiciones son bien conocidas por los expertos en la tecnica de la formulacion farmaceutica.
Las composiciones para uso parenteral pueden proporcionarse en formas de dosificacion unitaria (por ejemplo, en ampollas de dosis unica) o en viales que contienen varias dosis y en las que se puede anadir un conservante adecuado (vease mas adelante). La composicion puede estar en forma de una solucion, una suspension, una emulsion, un dispositivo de infusion o un dispositivo de administracion para su implantacion o puede presentarse como un polvo seco a reconstituir con agua u otro vehfculo adecuado antes de su uso. Aparte de los farmacos activos, la composicion puede incluir vehfculos y/o excipientes adecuados parenteralmente aceptables. El(los) farmaco(s) activo(s) se pueden incorporar en microesferas, microcapsulas, nanopartfculas, liposomas o similares para liberacion controlada. La composicion puede incluir agentes de suspension, solubilizacion, estabilizacion, ajuste del pH y/o agentes dispersantes.
Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la invencion pueden estar en la forma adecuada para la inyeccion esteril. Para preparar dicha composicion, el farmaco o farmacos activos adecuados se disuelven o suspenden en un vefnculo lfquido parenteralmente aceptable. Entre los vefnculos y disolventes aceptables que se pueden emplear se encuentran agua, agua ajustada a un pH adecuado por adicion de una cantidad apropiada de acido clorfndrico, hidroxido de sodio o un tampon adecuado, 1,3-butanodiol, solucion de Ringer y solucion isotonica de cloruro de sodio. La formulacion acuosa puede contener tambien uno o mas conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo, etilo o n-propilo). En los casos en que uno de los farmacos es solo escasamente o ligeramente soluble en agua, se puede anadir un agente potenciador o solubilizante de la disolucion, o el disolvente puede incluir 10-60% p/p de propilenglicol o similar.
Las composiciones parenterales de liberacion controlada pueden estar en forma de suspensiones acuosas, microesferas, microcapsulas, microesferas magneticas, soluciones de aceite, suspensiones oleosas o emulsiones. Alternativamente, el(los) farmaco(s) activo(s) se pueden incorporar en vefnculos biocompatibles, liposomas, nanopartfculas, implantes o dispositivos de infusion. Los materiales para uso en la preparacion de microesferas y/o microcapsulas son, por ejemplo, polfmeros biodegradables/bioerosionables tales como poligalactina, poli (cianoacrilato de isobutilo), poli(2-hidroxietil-L-glutamina). Los vefnculos biocompatibles que pueden usarse cuando se formula una formulacion parenteral de liberacion controlada son carbohidratos (por ejemplo, dextranos), protemas (por ejemplo, albumina), lipoprotemas o anticuerpos. Los materiales para uso en implantes pueden ser no biodegradables (por ejemplo, polidimetilsiloxano) o biodegradables (por ejemplo, poli(caprolactona), poli(acido glicolico) o poli(ortoesteres)).
Composiciones rectales
Para la aplicacion rectal, las formas de dosificacion adecuadas para una composicion incluyen supositorios (tipo emulsion o suspension) y capsulas de gelatina rectal (soluciones o suspensiones). En una formulacion de supositorio tfpica, el farmaco o farmacos activos se combinan con una base de supositorio farmaceuticamente aceptable apropiada, tal como manteca de cacao, acidos grasos esterificados, gelatina glicerinada y diversas bases solubles en agua o dispersables como polietilenglicoles. Pueden incorporarse diversos aditivos, potenciadores o tensioactivos.
Composiciones percutaneas y topicas
Las composiciones farmaceuticas tambien pueden administrarse topicamente sobre la piel para absorcion percutanea en formas de dosificacion o formulaciones que contienen vefnculos y excipientes farmaceuticamente aceptables no toxicos convencionales que incluyen microesferas y liposomas. Las formulaciones incluyen cremas, unguentos, lociones, linimentos, geles, hidrogeles, soluciones, suspensiones, varillas, aerosoles, pastas, yesos y otros tipos de sistemas de administracion transdermica de farmacos. Los vefnculos o excipientes farmaceuticamente aceptables pueden incluir agentes emulsionantes, antioxidantes, agentes tamponantes, conservantes, humectantes, potenciadores de penetracion, agentes quelantes, agentes formadores de gel, bases para unguentos, perfumes y agentes protectores de la piel.
Los agentes emulsionantes pueden ser gomas naturales (por ejemplo, goma arabiga o goma tragacanto)
Los conservantes, humectantes, potenciadores de penetracion pueden ser parabenos, tales como p-hidroxibenzoato de metilo o propilo, y cloruro de benzalconio, glicerina, propilenglicol, urea, etc.
Las composiciones farmaceuticas descritas anteriormente para la administracion topica sobre la piel tambien pueden usarse en relacion con la administracion topica sobre o cerca de la parte del cuerpo que se va a tratar. Las composiciones pueden adaptarse para aplicacion directa o para aplicacion por medio de dispositivos especiales de suministro de farmacos tales como apositos o alternativamente yesos, almohadillas, esponjas, tiras u otras formas de material flexible adecuado.
Dosis y duracion del tratamiento
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Se apreciara que los farmacos de la combinacion pueden administrarse concomitantemente, ya sea en la misma o en una formulacion farmaceutica diferente o secuencialmente. Si hay administracion secuencial, el retraso en la administracion del segundo ingrediente activo (o adicional) no debe ser tal que pierda el beneficio del efecto eficaz de la combinacion de los ingredientes activos. Un requisito mmimo para una combinacion segun esta descripcion es que la combinacion debe estar destinada al uso combinado con el beneficio del efecto eficaz de la combinacion de los ingredientes activos. El uso pretendido de una combinacion puede deducirse por medios, disposiciones, adaptaciones y/u otros medios para ayudar a usar la combinacion segun la invencion.
Aunque los farmacos activos de la presente invencion puedan administrarse en dosis divididas, por ejemplo dos o tres veces al dfa, se prefiere una unica dosis diaria de cada farmaco en la combinacion, siendo la mas preferida una unica dosis diaria de todos los farmacos en una unica composicion farmaceutica (forma de dosificacion unitaria).
La expresion "forma de dosificacion unitaria" se refiere a unidades ffsicamente discretas (tales como capsulas, comprimidos o cilindros de jeringa cargados) adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo o materiales calculados para producir el efecto terapeutico deseado, en asociacion con el soporte farmaceutico requerido.
La administracion puede ser de una a varias veces al dfa durante varios dfas a varios anos, e incluso puede ser para toda la vida del paciente. En la mayona de los casos se indicara la administracion cronica o por lo menos periodicamente repetida a largo plazo.
Adicionalmente, la informacion farmacogenomica (el efecto del genotipo sobre el perfil farmacocinetico, farmacodinamico o de eficacia de una terapeutica) sobre un paciente en particular puede afectar la dosis utilizada.
Excepto cuando se responde a casos especialmente daninos de la enfermedad EA cuando pueden requerirse dosificaciones mas altas, la dosificacion preferida de cada farmaco en la combinacion estara por lo general dentro del intervalo de dosis no superior a la habitualmente prescrita para el tratamiento de mantenimiento a largo plazo o probada segura en grandes estudios clmicos de fase 3.
La dosis mas preferida corresponded a cantidades del 1% hasta el 10% de las habitualmente prescritas para el tratamiento de mantenimiento a largo plazo.
Por ejemplo, las dosis posibles para las terapias de combinacion en la presente descripcion pueden ser:
- eplerenona oralmente de aproximadamente 0,25 a 5 mg una o dos veces al dfa y marimastat oralmente de aproximadamente 0,1 a 1 mg por dfa,
- gemfibrozil oralmente de aproximadamente 12 a 120 mg administrado en dos tomas divididas 30 minutos antes de la comida de la manana y de la tarde y marimastat oralmente de aproximadamente 0,1 a 1 mg por dfa,
- marimastat oralmente de aproximadamente 0,1 a 1 mg por dfa y terbinafina oralmente de aproximadamente 2,5 a 25 mg una vez o dos veces al dfa
- topotecan oralmente de aproximadamente 0,025 a 0,25 mg por dfa y metazolamida por via oral de aproximadamente 1 a 10 mg 2-3 veces por dfa,
- eplerenona por via oral de aproximadamente 0,25 a 5 mg una o dos veces al dfa y tadalafil por via oral de aproximadamente 0,05 a 0,5 mg por dfa,
- eplerenona oralmente de aproximadamente 0,25 a 5 mg una o dos veces al dfa y cilostazol por via oral de aproximadamente 1 a 10 mg por dfa,
- sunitinib por via oral de aproximadamente 0,5 a 5 mg por dfa y terbinafina por via oral desde aproximadamente 2,5 a 25 mg una o dos veces al dfa,
- fenformina por via oral de aproximadamente 0,5 a 5 mg por dfa y baclofeno por via oral de aproximadamente 0,4 a 8 mg por dfa administrado en dos o tres dosis divididas,
- fenformina por via oral de aproximadamente 0,5 a 5 mg por dfa y terbinafina por via oral de aproximadamente 2,5 a 25 mg una o dos veces al dfa,
- tadalafil por via oral de aproximadamente 0,05 a 0,5 mg por dfa y alendronato por via oral de aproximadamente 0,7 a 7 mg una vez por semana o de 0,7 a 7 mg una vez al dfa,
- cilostazol oralmente de aproximadamente 1 a 10 mg al dfa y alendronato por via oral de aproximadamente 0,7 a 7 mg una vez por semana o de 0,7 a 7 mg una vez al dfa,
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- mepacrina por via oral de aproximadamente 3 a 30 mg al dfa y terbinafina por via oral de 2,5 a 25 mg una o dos veces al dfa,
- mepacrina por via oral de aproximadamente 3 a 30 mg por dfa y balsalazida por via oral de aproximadamente 7 a 75 mg a tomar 3 veces al dfa,
- terbinafina por via oral de aproximadamente 2,5 a 25 mg una o dos veces al dfa e imatinib oralmente de aproximadamente 4 a 60 mg por dfa
Se entendera que la cantidad de farmaco realmente administrado sera determinado por un medico a la luz de las circunstancias relevantes que incluyen la condicion que se trate, la composicion exacta que se administre, la edad, el peso y la respuesta de cada paciente, la gravedad de los smtomas del paciente y la ruta de administracion elegida. Por lo tanto, los intervalos de dosificacion anteriores estan destinados a proporcionar orientacion general y soporte para las ensenanzas de la presente memoria, pero no pretenden limitar el alcance de la invencion.
Los siguientes ejemplos se dan a tttulo ilustrativo y no limitativo.
EJEMPLOS
Validacion de farmacos utilizando ensayos in vitro
Los ensayos in vitro son una poderosa herramienta para mejorar los farmacos y sus combinaciones actuando sobre las rutas implicadas en la EA. Los farmacos de la presente invencion y sus combinaciones se optimizan mediante la accion sobre ensayos in vitro espedficos adaptados de acuerdo con la red EA identificada en esta invencion. Posteriormente, estas moleculas o sus combinaciones podnan ensayarse en un modelo in vivo de EA.
Estas pruebas in vitro comienzan con el estudio del potencial protector de los farmacos sobre las celulas endoteliales expuestas al efecto toxico de la protema Abeta. Los farmacos en la via implicada podnan ser analizados individualmente, seguido de ensayos de su accion combinatoria. En la etapa posterior, las combinaciones mas eficaces que actuan sobre las dianas en las vfas individuales se combinan y se prueban de nuevo en ensayos para el estres celular, la proliferacion de axones y la toxicidad vascular.
Cultivo de celulas:
El cultivo Primo de celulas cerebrales endoteliales de rata (Vect-Horus SAS, Marsella) se cultiva en el paso 0. En la confluencia, las celulas endoteliales se disocian con tripsina EDTA (Pan Biotech Ref: P 10-023100). Las celulas se sembraron a una densidad de 25 000 celulas/pocillo en placas de 96 pocillos (los pocillos se recubren con 30 |il de colageno de rata tipo I a 1,5 mg/ml, Vect - Horus SAS, Marsella) y se cultivan en medio MCBD 131 (M-131-500, Invitrogen) suplementado con 1% de suplemento de crecimiento microvascular (MVGS, S-005-25, Invitrogen). Las celulas se cultivan a 37°C en una atmosfera de aire humidificado (95%)/CO2 (5%). La mitad del medio se cambia cada dos dfas con medio fresco.
Despues de 4 dfas, los farmacos se anaden al medio de cultivo celular, a diferentes concentraciones, se resuelven en DMSO 0,1% o agua. Se lleva a cabo una preincubacion de 1 hora en un medio de cultivo que contiene medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, Pan Biotech Ref: P04-03600), suplementado con 2% de suero bovino fetal (FBS, Invitrogen ref: 16000-036), 1% de L-glutamina (Pan Biotech ref: P04-80100), 1% de Penicilina-Estreptomicina (PS, Pan Biotech ref: P06-07100), 0,1 mg/ml de Heparina (Sigma), 10 ng/ml de Factor de crecimiento de epidermis (EGF, Invitrogen) y 10 ng/ml de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF, PHG0146, Invitrogen).
Las celulas son entonces intoxicadas con 30 pM de p-amiloide (25-35; Sigma) junto con farmacos en el mismo medio de cultivo. Las celulas son entonces intoxicadas durante 3 dfas.
Ensayo de actividad de lactato deshidrogenasa (LDH).
Para cada cultivo, despues de 3 dfas de intoxicacion, se recoge el sobrenadante y se analiza con Kit de deteccion de citotoxicidad (LDH, Roche Applied Sciences). Este ensayo colorimetrico para la cuantificacion de la muerte celular se basa en la medicion de la actividad de lactato deshidrogenasa (LDH) liberada del citosol de celulas danadas en el sobrenadante. La densidad optica (OD) se evalua por espectrofotometro a una longitud de onda de 492 nm mediante un aparato multiscan (Thermo, Ref Ascent).
Resultados
Los resultados presentados en la Figura 1 se extraen de dos cultivos independientes, 6 pozos por condicion. Todos los valores se expresan como media ± s.e.m. Se realiza un analisis t de Student bilateral sobre los datos brutos. Los resultados se expresan en porcentaje de viabilidad celular, en comparacion con el control (vehfculo).
Los farmacos se incuban con celulas endoteliales cerebrales primarias de rata una hora antes de la intoxicacion con Ap25_35 30 pM que dura 3 dfas.
Tres dfas despues de esta incubacion, la liberacion de LDH en el medio de cultivo se cuantifica, reflejando el nivel de muerte celular. Los inventores han observado que 4 farmacos ejercen claramente un efecto protector contra esta intoxicacion por AP25-35 (Fig. 1).
Ensayos in vivo
5 Los compuestos y sus combinaciones activas en ensayos in vitro se han ensayado en el modelo in vivo de la enfermedad de Alzheimer. La sobreexpresion de los transgenes del precursor de la protema beta amiloide humana mutante ligada a la enfermedad de Alzheimer (APP) ha sido el medio mas fiable de promover la deposicion de Abeta en los cerebros de ratones transgenicos que sirvieron como modelos de la enfermedad EA en numerosos estudios. A medida que envejecen, estos ratones mutantes de APP desarrollan una patologfa amiloide robusta y otras 10 caractensticas de tipo EA, incluyendo la disminucion de la densidad sinaptica, gliosis reactiva y algunos deficits cognitivos. Muchos modelos de raton de APP mutantes muestran poca evidencia de perdida neuronal manifiesta y patologfa de enredo neurofibrilar (NFT). Los ratones hemicigotos para este transgen BRI-Abeta42 son viables y fertiles con una vida normal. El ARNm de BRI-Abeta42 transgenico se expresa en un patron caractenstico del promotor de la protema de prion de raton; los niveles mas altos de expresion transgenica se detectan en las celulas 15 granulares cerebelares y el hipocampo, seguido por la corteza, pons, talamo y mesencefalo. En la protema de fusion transgenica, Abeta1-42 se fusiona con el extremo C de la protema BRI en el sitio de escision tipo furina de tal manera que la escision da como resultado una secrecion eficaz de Abetal-42 en el lumen o el espacio extracelular. Por lo tanto, estos ratones expresan espedficamente la isoforma Abetal-42. Los ratones BRI-Abeta42 hemicigotos acumulan amiloide beta insoluble en detergente con la edad y desarrollan placas de nucleo en el cerebelo a los 3 20 meses de edad. El desarrollo de la patologfa del prosencefalo ocurre mas tarde, las placas extracelulares de Abeta no estan presentes consistentemente en el hipocampo y las cortezas entorrinal/piriforme hasta los 12 meses de edad. Los depositos de beta amiloide (placas con nucleos) se pueden observar tan pronto como a los 3 meses en la capa molecular de cerebelo de ratones transgenicos y se hacen mas pronunciados con la edad; se observan placas extracelulares ocasionales en las cortezas entorrinal/piriforme y el hipocampo a los 6 meses de edad, pero no se 25 encuentran de forma consistente hasta los 12 meses de edad. Los ratones mas antiguos muestran una patologfa generalizada con placas en nucleo y difusas en cerebelo, corteza, hipocampo y bulbo olfatorio. Las placas amiloides extracelulares muestran nucleos amiloides densos con fibrillas radiantes; se observan muchos haces de neuritas distroficas en la periferia de estas placas. La gliosis reactiva se asocia con las placas.
Tratamientos farmacologicos
30 Los ratones (57) transgenicos Tg A12E mc (Prnp-ITM2B/APP695*42) se han obtenido de Jackson Laboratory (
http://jaxmice.jax.org/strain/007002.html). Los ratones fundadores con los niveles plasmaticos mas altos de Abeta42, lmea BRI-Abeta42A (12e), se han mantenido sobre un fondo mixto de B6C3. Los ratones transgenicos machos adultos tienen acceso libre a alimentos y agua. De acuerdo con un protocolo aprobado del Comite Institucional de Cuidado y Uso de Animales, los ratones han sido pesados e inyectados i.p. o alimentados a la fuerza 35 una vez al dfa durante 10 a 20 semanas consecutivas con una solucion de control (placebo) o farmacos PXT, preparados a diferentes dosis.
Analisis de supervivencia
Las tasas de supervivencia se han analizado utilizando los metodos de Kaplan-Meier. Los metodos Holm-Sidak (post hoc) se han utilizado para todas las pruebas de comparacion multiple por pares. Las muertes externas son 40 censuradas. Todas las comparaciones se han hecho entre los companeros de camada para limitar cualquier efecto potencialmente confuso de las diferencias de la cepa de fondo.
Pruebas conductuales
Las pruebas conductuales fueron disenadas y conducidas de acuerdo con los metodos publicados por varios autores (58-61).
45 Aprendizaje espacial y memoria en el laberinto de agua de Morris (MWM)
Este experimento se realiza en una piscina circular de 90 cm de diametro, hecha de plastico blanco y rellena de agua de color lechoso. Una plataforma de escape de 8 cm de diametro, hecha de plastico transparente, se sumergio 0,5 cm bajo el nivel del agua. Las pistas visuales son proporcionadas por diferentes formas geometricas impresas en letras de tamano A4 y colocadas en las cuatro paredes circundantes (la distancia desde la piscina era de 50 a 70 50 cm). Cada raton ha recibido cuatro ensayos diarios (intervalo de 5 a 7 minutos entre ensayos, un total de 16 ensayos) durante 4 dfas. Cada ensayo se ha realizado a partir de uno de cuatro puntos de partida diferentes. El movimiento de los ratones se controla mediante el Software Videotrack (View Point). Se ha determinado el tiempo necesario para localizar la plataforma de escape (latencia de escape, hasta 60 segundos). Despues de localizar la plataforma al raton se le ha permitido sentarse en el durante 15 segundos. Los ratones que no pudieron encontrar la 55 plataforma en 60 segundos han sido guiados hacia ella y se les permitio permanecer en ella durante 15 segundos. Se ingresa una latencia de 60 segundos en el registro para tal ocurrencia. Los cuatro ensayos al dfa se han promediado para el analisis estadfstico, excepto para el primer ensayo en el dfa 1. El dfa 9 (5 dfas despues del ultimo entrenamiento) los ratones han sido sometidos a un ensayo de sonda de 60 segundos en el que se elimina la
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plataforma y se permite a los ratones buscarla. El tiempo que cada animal gasto en cada cuadrante ha sido registrado (tiempo de busqueda de cuadrante). Se han utilizado varios grupos de ratones machos a los 3, 7, 10 y 12 meses.
Pocos ratones han mostrado un comportamiento de congelacion (por ejemplo, estando inmoviles en el agua y negandose a nadar) que interfiere fuertemente con la prueba; estos animales han sido excluidos del analisis de los datos.
Todas las pruebas de comportamiento se llevan a cabo en un ambiente tranquilo y con poca luz.
Prueba de memoria de trabajo en el laberinto de agua del brazo radial
Esta medida sensible cognitiva de la memoria de trabajo se ha obtenido con la ayuda del aparato que consistfa en una piscina de 100 cm de diametro rellena de agua (tambien utilizada para el laberinto de agua Morris y tareas de reconocimiento de plataforma) equipada con un inserto de aluminio para crear seis brazos de nadada distribuidos radialmente. Las pruebas consisten en cinco ensayos de 1 minuto por sesion diaria durante 9-12 dfas consecutivos. Al comienzo de cada sesion, una plataforma sumergida clara se coloca al final de uno de los seis brazos de nadada (seleccionado al azar, cambiado diariamente). Para cada uno de los cuatro primeros ensayos de adquisicion, el animal se coloca en uno de los brazos que no contiene la plataforma (secuencia aleatoria) y se le permite buscar la plataforma. Durante el ensayo de 60 s, cada vez que el animal entra en otro brazo que no contiene plataforma, es devuelto suavemente a su lugar de partida y se registra un error. Despues del cuarto ensayo, el animal se deja reposar durante 30 minutos, seguido de un quinto ensayo (de retencion), que se origina en el brazo de nadada final que no contiene plataforma. El numero de errores (seleccion de brazos incorrectos) y la latencia de escape (tiempo para alcanzar la plataforma, maximo 60 s) se registran para cada ensayo.
Aprendizaje de referencia espacial y memoria en la prueba de la plataforma circular
Esta prueba de tarea basada en la cognicion se realiza con la ayuda del aparato que consta de una plataforma circular de 69 cm de diametro que tiene 16 orificios de "escape" espaciados equidistantes alrededor de la circunferencia. Un refugio de escape esta instalado debajo de uno de los agujeros, y una cortina negra, en la que se colocan varias senales visuales, rodea la plataforma. El animal se coloca en el centro de la plataforma al inicio de una sola prueba de 5 minutos y se presentan estfmulos aversivos (luces brillantes, viento de ventilador). El numero total de errores (picos de cabeza en agujeros sin escape) y la latencia de escape (tiempo para alcanzar el agujero de escape) se registran.
Capacidad de reconocimiento en la prueba de reconocimiento de la plataforma
Esta tarea de busqueda cognitiva evalua la identificacion de objetos y la capacidad de reconocimiento. El objeto objetivo consiste en una plataforma circular de 9 cm de diametro provista de un estandarte negro de 10 cm x 40 cm, que se coloca a 0,8 cm por encima de la superficie del agua en una piscina circular de 100 cm de diametro. Las pruebas consisten en cuatro ensayos de 60 s por dfa en cada uno de los cuatro dfas consecutivos. Cada dfa, el objeto objetivo se coloca en un cuadrante diferente de la piscina para cada prueba, y el animal es liberado en la misma ubicacion a lo largo de la circunferencia de la piscina para los cuatro ensayos. Se registra la latencia total (maximo 60 s) para cada ensayo.
Examen de Irwin modificado
Una pantalla completa, modificada de Irwin se utiliza para determinar si alguno de los ratones presentaba impedimentos fisiologicos, conductuales o sensorimotores relacionados con su genotipo. Para explorar las habilidades motoras, la coordinacion y la fuerza muscular, los ratones se colocan en un alambre que fue apretado entre dos columnas de 30 cm de altura y su capacidad de equilibrio en el cable se evaluo. Ademas, se determino su capacidad para agarrarse y colgarse en el cable con las cuatro patas durante al menos 5 segundos y para subir de nuevo al cable.
Cuantificacion del deposito de amiloide vascular
Para la cuantificacion de la angiopatfa amiloide cerebral (CAA), se inmunotineron secciones de 5 pm embebidas en parafina a intervalos de 30 pm a traves de las leptomeninges de la corteza parietal o cerebelar con anticuerpo Ab9 biotinilado (anti-Ap1-16, 1: 500) durante la noche a 4°C (n = 5-7 ratones por genotipo en cada grupo de edad, n = 6 secciones por raton). Los vasos sangumeos tenidos positivamente se evaluan visualmente utilizando el sistema de puntuacion de Vonsattel modificado. (62) El puntaje de gravedad CAA se calcula multiplicando el numero de vasos CAA por el grado de gravedad CAA.
Histologfa: inmunohistoqmmica e inmunofluorescencia
Los ratones Tg y WT de 3 a 12 meses son anestesiados y perfundidos transcardialmente secuencialmente con NaCl al 0,9% y paraformaldetudo al 4% en solucion salina tamponada con fosfato (PBS) 0,1 mol/L (pH 7,4) o formalina al 10% y paraformaldetudo al 4% en 0,1 mol/L PBS (pH 7,4). Los cerebros y las medulas espinales se eliminan y se
almacenan en paraformaldetudo al 4%. Algunas muestras se incrustan en parafina y se cortan en un microtomo deslizante con un espesor de 10 pm. Las criosecciones (14 pm) se cortan en un criostato y se montan sobre laminas revestidas de alumbre de cromo. La peroxidasa endogena se inactiva tratando la seccion con metanol que contiene 0,3% de H2O2 durante 30 minutos. Las secciones se bloquean en suero de caballo al 10%. Se usan anticuerpos 5 primarios y se incuban durante la noche a 4°C en presencia de suero de caballo al 1%. Todos los anticuerpos secundarios biotinilados o marcados con fluorescema, Texas Red y AMCA, fluorocromos, ABC-kit y 3,3'- diaminobenzidina como cromogeno para la actividad peroxidasa son de Vector Laboratories. La incubacion con el anticuerpo secundario se mantiene a temperatura ambiente durante 1 hora.
Todas las etapas de lavado (3 - 10 minutos) y la dilucion de anticuerpo se realizan usando solucion salina 10 tamponada con fosfato (PBS 0,1 mol/L, pH 7,4) o solucion salina tamponada con Tris (Tris 0,01 mol/L, NaCl 0,15 mol/L, pH 7,4). La incubacion con el complejo ABC y la deteccion con 3,3'-diaminobencidina se realiza de acuerdo con el manual del fabricante. La contratincion de hematoxilina se realiza segun procedimientos estandares. Para cada determinacion se utiliza un mmimo de tres ratones por genotipo, edad y sexo (63).
Analisis estadfstico de datos in vivo.
15 Los resultados de todos los experimentos se analizan con STATISTICA 8.0 (Statsoft).
La gravedad de CAA se analiza usando ANOVA con la prueba de comparacion multiple Holm-Sidak post hoc o la prueba t de Student de dos colas. Si el conjunto de datos no cumple con los supuestos de la prueba parametrica, se lleva a cabo la prueba de Kruskal-Wallis seguida por la comparacion multiple de Dunn post hoc o la prueba de suma de rango de Mann-Whitney. Todas las comparaciones se hacen entre los companeros de camada.
20 El modelo de respuesta a farmacos se realiza excluyendo las muestras de control (0 mg/kg). ED50 corresponde a la dosis (mg/kg) requerida para inducir un 50% de la respuesta maxima inducida por farmaco en los experimentos. Se calcula usando el modelo de la ecuacion de Hill para el log de ED50.
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Claims (10)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    1. Una composicion que comprende baclofen o terbinafina, o una sal o formulacion de liberacion sostenida de la misma, para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
  2. 2. La composicion para uso de la reivindicacion 1, que ademas comprende al menos un compuesto distinto adicional seleccionado del grupo de leflunomida, sulfisoxazol, terbinafina, baclofen, clopidogrel, fenoldopam, mepacrina y fenformin, o sales o formulaciones de liberacion sostenida de la misma, para administracion combinada, separada o secuencial con baclofen o terbinafina.
  3. 3. La composicion para uso de la reivindicacion 2, en donde dicha composicion comprende al menos una de las siguientes combinaciones de farmacos, siendo dichos farmacos en cada una de dichas combinaciones para la administracion combinada, separada o secuencial:
    - baclofen y sulfisoxazol,
    - baclofen y leflunomida,
    - terbinafina y sulfisoxazol,
    - terbinafina y leflunomida,
    - terbinafina y fenoldopam,
    - terbinafina y mepacrina,
    - terbinafina y fenformin,
    - terbinafina y clopidogrel,
    - baclofen y fenformin, o
    - baclofen y clopidogrel.
  4. 4. La composicion para uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha comprende ademas al menos un farmaco que aumenta la angiogenesis, para uso combinado, secuencial.
  5. 5. La composicion para uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha comprende ademas un vehfculo o excipiente farmaceuticamente aceptable.
  6. 6. La composicion para uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha composicion se administra repetidamente al sujeto.
  7. 7. La composicion para uso de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho sujeto es un ser humano.
  8. 8. Una composicion que comprende terbinafina y sulfisoxazol, o sales o formulaciones de liberacion sostenida de la misma, para administracion simultanea, separada o secuencial.
  9. 9. Baclofen, o una sal o formulacion de liberacion sostenida del mismo, para uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano.
  10. 10. Baclofen, o una sal o formulacion de liberacion sostenida del mismo, para uso en la proteccion de celulas frente a la toxicidad del peptido amiloide-beta en un sujeto humano que tiene la enfermedad de Alzheimer.
    composicion separado o
    composicion
    imagen1
    ****-

    f----------------------1
    imagen2
    imagen3
    Ab 25-35 Leflunomida

    30 10
    imagen4
    * *
    r—
    imagen5
    Ab 25-35 Terbinafina

    30 ^M 6 ^M
    W-1.DH
    110
    IDO
    90
    SO
    70
    SO
    so
    imagen6
    * * Id
    1----------------------1
    imagen7
    Vehicuio Ab 25-35 Sulfisoxazol
    30 ^M 85 pM
    %LDH
    i no
    Vehicuio
    * * * I-------------
    0
    Ab 25-35
    Baclofen (-)
    30 ^M
    10 ^M
    FIGURA 1
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