ES2614755T3 - Medición acumulativa de un analito - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para monitorizar el nivel de un analito en un sujeto, que comprende las etapas de: (a) medir la concentración del analito en una muestra; (b) introducir en la muestra una cantidad del analito que es representativa del nivel de analito en el sujeto; (c) volver a medir la concentración del analito en la muestra; (d) determinar el nivel del analito en el sujeto en función de la diferencia entre la medición de la concentración en la etapa (c) y la anterior medición de la concentración; y (e) repetir las etapas (b) a (d) a intervalos para generar una secuencia de determinaciones en el tiempo.

Description

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Medicion acumulativa de un analito Campo tecnico

La invencion versa acerca de procedimientos y dispositivos para monitorizar el nivel de un analito en un sujeto, por ejemplo para medir cambios en el nivel de glucosa en la sangre o lfquido intersticial de un paciente durante un periodo de tiempo. Tiene una utilidad particular cuando las concentraciones del analito que pueden extraerse del sujeto son bajas, cosa que sucede normalmente cuando se utiliza iontoforesis inversa como procedimiento de extraccion.

Antecedentes de la invencion

Los dispositivos de monitorizacion continua de glucosa utilizan la tecnica de iontoforesis inversa para extraer el analito de glucosa del lfquido intersticial de un paciente con el fin de medir cambios en los niveles de glucosa. Tales dispositivos adoptan la forma de un parche mantenido en contacto fntimo con la piel de un paciente y comprenden una camara de deteccion que contiene sensores electroqufmicos que estan dispuestos para formar parte de un circuito electrico. La camara esta llena de un medio fluido o un gel a traves del cual el analito puede difundirse o ser transportado desde la piel hasta los sensores. Bien el medio o bien una superficie de los sensores esta impregnado con una enzima que reacciona con el analito para convertirlo en una forma distinta (acido gluconico en el caso de un analito de glucosa) y para producir electrones en el proceso. Los electrones pueden fluir en torno al circuito para crear una corriente, cuya magnitud se corresponde con la concentracion del analito en el medio que rodea el sensor. Sin embargo, normalmente, la magnitud de la corriente es solo decenas o cientos de nanoamperios, por lo que es un reto medirla con precision y distinguir la senal de corriente del ruido electrico de fondo. Ademas, los sensores pueden no funcionar de forma lineal y fiable a bajas concentraciones del analito en la muestra.

Se hacen funcionar dispositivos conocidos para llevar a cabo un periodo inicial de iontoforesis inversa para una extraccion del analito, seguido de un periodo de deteccion, que a menudo es 2 a 3 veces mayor que el periodo de extraccion, de forma que se garantice que todo el analito que se ha extrafdo del sujeto durante el periodo precedente tiene tiempo para reaccionar con los sensores. Un dispositivo de monitorizacion de glucosa que estuvo disponible comercialmente con la marca registrada Glucowatch operaba con un periodo de iontoforesis de 3 minutos seguido de un periodo de deteccion de 4 a 5 minutos. Se repite el ciclo a intervalos, cada vez que se requiere una nueva lectura del nivel de glucosa del sujeto, y en cada ocasion el periodo de deteccion es suficientemente largo como para consumir sustancialmente toda la glucosa extrafda en la muestra. En el documento US 2001 / 0016682 se describe tal dispositivo de monitorizacion de glucosa.

Sumario de la invencion

La invencion proporciona un procedimiento de monitorizacion del nivel de un analito en un sujeto, que comprende las etapas de:

(a) medir la concentracion del analito en una muestra;

(b) introducir en la muestra una cantidad del analito que es representativa del nivel de analito en el sujeto;

(c) volver a medir la concentracion del analito en la muestra;

(d) determinar el nivel del analito en el sujeto en funcion de la diferencia entre la medicion de la concentracion en la etapa (c) y la anterior medicion de la concentracion; y

(e) repetir las etapas (b) a (d) a intervalos para generar una secuencia de determinaciones en el tiempo.

La presente invencion difiere de la tecnica anterior porque el procedimiento no depende de la medicion del valor absoluto de la concentracion del analito en la muestra sino de la diferencia entre las concentraciones tras intervalos sucesivos de extraccion del sujeto. Por lo tanto, se puede permitir que se acumule la concentracion del analito en la muestra en intervalos sucesivos y la magnitud de la senal procedente de los sensores aumenta en consecuencia, lo que permite una medicion mas precisa y exacta.

En el caso en el que el procedimiento utilizado para medir la concentracion de analito en la muestra consuma el analito en la muestra, se puede controlar la medicion en la etapa (c), de forma que cada medicion unicamente consuma una pequena proporcion del analito, para garantizar que la concentracion del analito en la muestra aumente en intervalos sucesivos. Si es necesario, la determinacion del nivel de analito en la etapa (d) puede emplear un algoritmo que tiene en cuenta el consumo del analito debido al procedimiento de medicion. La etapa de determinacion tambien puede tener en cuenta el consumo del analito durante los intervalos entre mediciones sucesivas. De forma alternativa, si hay un periodo de descanso entre cada etapa (c) de medicion y la etapa sucesiva (b) de introduccion, entonces el procedimiento puede comprender una etapa adicional de realizacion de una

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medicion provisional de la concentracion del analito en la muestra tras el periodo de descanso, inmediatamente antes de cada etapa (b) de introduccion, habiendo de usarse esa medicion provisional como la anterior medicion de la concentracion en la etapa (d) de determinacion.

Una variante preferente del procedimiento segun la invencion incluye una etapa inicial de introduccion en la muestra de una cantidad del analito antes de la primera etapa (a) de medicion, preferentemente de una fuente distinta del sujeto. La cantidad inicial del analito garantiza que incluso en la primera etapa de medicion, la concentracion del analito es suficiente para que se realice una medicion precisa.

La iontoforesis inversa es una tecnica preferida para la etapa (b) de introduccion en la muestra de una cantidad del analito que es representativa del nivel de analito en el sujeto. Sin embargo, se podrfan utilizar otras tecnicas, por ejemplo anadiendo simplemente una gota de sangre u otro fluido en la muestra (teniendo en cuenta debidamente cualquier cambio resultante en el volumen de la muestra cuando se mide la concentracion del analito).

Preferentemente, el analito es glucosa, pero son posibles dianas otras moleculas, iones o partfculas, por ejemplo lactato, urea, potasio, fenilalanina, prostaglandina, E2 y farmacos que incluyen, sin limitacion, fenitofna, cafefna, teofilina y litio.

Si el nivel determinado del analito se desvfa de un intervalo predeterminado de valores aceptables, se puede generar una senal de aviso.

Dibujos

La Figura 1 es una seccion transversal esquematica a traves de un parche de iontoforesis inversa en el que se puede llevar a cabo la presente invencion.

La Figura 2 es un grafico de mediciones de corriente en funcion del tiempo de un sensor de glucosa puesto en contacto con (a) glucosa extrafda acumulativamente de piel porcina y (b) una disolucion tampon.

La Figura 3 es un grafico de las diferencias entre mediciones sucesivas de corriente del grafico (a) de la Figura 2.

Descripcion detallada de la invencion

La Figura 1 (no a escala) muestra, de forma esquematica, parte de un parche 2 de iontoforesis inversa, que se aplica a la superficie de la piel 4 de un sujeto. Se puede mantener el parche 2 contra la piel 4 mediante cualquier medio, por ejemplo por medio de una capa adhesiva (no mostrada) que forma parte del parche 2 o sujetandolo por medio de una banda elastica o algun otro medio mecanico adecuado de restriccion. El parche incluye una camara anodica 6 y una camara catodica 7, conteniendo cada una un lfquido conductor u otro medio 8 que se encuentra en contacto con la superficie de la piel 4, bien directamente o bien a traves de una membrana permeable (no mostrada). En el caso en el que se almacena el medio conductor como un lfquido antes de su uso, se puede dotar a las camaras 6, 7 de orificios 10 de entrada, a traves de los cuales se puede suministrar el lfquido 8 desde una fuente exterior al parche 2. Una vez ha entrado el lfquido en la camara puede permanecer como un medio conductor lfquido o puede reaccionar para formar un medio viscoso similar a un gel, haciendo que reaccione cuando sea necesario con un agente adecuado, en forma seca o semisolida, tal como un agente de aumento de la viscosidad o un agente reticulante que se almacena de antemano en el interior de la camara anodica y/o catodica; este procedimiento mejorarfa la estabilidad de los sensores evitando el contacto del lfquido con la superficie del sensor en almacenamiento. En el caso de sensores a base de enzimas, por ejemplo, la enzima es susceptible de ser degradada cuando hace contacto con lfquidos durante periodos prolongados.

Las camaras respectivas 6, 7 contienen un par de electrodos de trabajo, en concreto un anodo 14 y un catodo 15, cada uno de los cuales esta sumergido en el lfquido 8. Durante la operacion del dispositivo para llevar a cabo una iontoforesis inversa, se controlan los electrodos 14, 15 de trabajo por medio de circuiterfa microelectronica 16 dentro del parche 2 para inducir un flujo de iones 18 desde la piel 4 del sujeto hacia el catodo 15 y un flujo de equilibrio de iones 19 al interior de la piel 4 desde el anodo 14. El flujo de iones 18 que sale de la piel 4 transporta analitos desde el lfquido intersticial del sujeto al interior del lfquido 8 en la camara catodica 7, en la que se dispersan y quedan disponibles para su deteccion por medio de los sensores 22, 24. El sensor 22 puede ser un electrodo de deteccion que esta dotado de un recubrimiento que reacciona electroqufmicamente con un analito diana en el lfquido 8, por ejemplo glucosa, para generar una corriente mensurable desde el electrodo 22 que indica la tasa de reaccion y, por lo tanto, la concentracion del analito diana en el lfquido 8. Se puede utilizar un electrodo similar 24 de deteccion para medir la concentracion de un analito distinto de una forma similar. Cada uno de los electrodos 22, 24 de deteccion puede requerir un contraelectrodo correspondiente (no mostrado) en contacto con el lfquido 8 para completar un circuito electrico. El contraelectrodo puede ser un electrodo dedicado o puede ser uno de los electrodos 14, 15 de trabajo, segun se conoce en la tecnica. Se puede sustituir el sensor para detectar y medir las especies de prueba y el analito con alternativas adecuadas establecidas de forma generalizada como el estado actual de la tecnica, incluyendo sensores fluorescentes, sensores de tipo electrodo selectivos a iones, sensores basados en ADN/ARN y sensores basados en anticuerpos.

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El fin del parche 2 es proporcionar una medicion de la concentracion del analito diana en el ifquido intersticial del sujeto. Se hace funcionar el parche 2 para llevar a cabo una iontoforesis inversa durante un periodo dado de tiempo. Durante la iontoforesis inversa, se dicta la tasa de extraccion de analitos de la piel 4 principalmente por la intensidad de la corriente que fluye a traves de la piel y por la concentracion de los analitos en la piel. Para un diseno dado de parche, la intensidad de la corriente deberfa ser sustancialmente constante de modo que, al final del periodo operativo, la cantidad de analito que se ha acumulado en la camara deberfa ser un reflejo verdadero de la concentracion del analito en el lfquido intersticial del sujeto.

Se describira ahora un procedimiento preferente de funcionamiento del dispositivo segun la presente invencion para monitorizar los niveles sangufneo de glucosa en un sujeto. Uno de los electrodos 22 de deteccion tiene inmovilizada en su superficie la enzima glucosa oxidasa, que es capaz de oxidar la glucosa presente en la camara 7 de muestras, dando lugar a la produccion de electrones en presencia de un mediador adecuado. Se recogen los electrones por medio del electrodo 22 de deteccion para generar una corriente pequena, que puede ser detectada por medio de la circuiterfa 16 para medir la concentracion de moleculas de glucosa en la camara 7.

En una etapa inicial, se ceba la muestra de fluido en la camara 7 con una cantidad de glucosa suficiente para que se mida de forma fiable la concentracion en la muestra. A bajas concentraciones, puede ser diffcil distinguir la corriente generada del ruido electrico de fondo en el circuito. Ademas, aunque se puede producir un sensor con una sensibilidad muy elevada, es decir una resolucion elevada de solo nanoamperios o concentraciones submicromolares de glucosa, se hallo que el lfmite de cuantificacion (el punto desde el que el sensor se comporta de forma lineal) es mucho mayor, en concreto aproximadamente 5-10 micromoles. Se deberfa escoger la cantidad inicial de glucosa utilizada para cebar la camara para crear al menos una concentracion umbral en la camara que es suficiente para superar estos problemas. Se podrfa proporcionar la cantidad inicial de glucosa procedente del sujeto haciendo funcionar el procedimiento de iontoforesis inversa durante un periodo suficientemente prolongado, pero se prefiere que sea introducida en la camara desde una fuente independiente, opcionalmente en el momento de la fabricacion. Dado tambien que la glucosa actua como combustible para los microbios, puede ser preferible arrastrar a la glucosa al interior de la camara de deteccion en una forma que no afecte a la estabilidad del sensor, tal como una pelfcula seca, polvo, material particulado o en forma semisolida, en vez de incorporarla en el electrolito. Esta se disolverfa y dispersarfa en el electrolito lfquido que es transportado a la camara de deteccion inmediatamente antes del uso del parche y del dispositivo. Entonces, se realiza una medicion inicial de la concentracion de glucosa en la camara 7.

A continuacion, se operan los electrodos 14, 15 de trabajo del dispositivo para llevar a cabo una iontoforesis inversa durante un periodo de tiempo necesario para extraer una cantidad mensurable de glucosa procedente del sujeto y suministrarla a la camara 7 de muestras. Este puede ser un periodo mas breve que en la tecnica anterior debido a que la cantidad de glucosa extrafda no tiene que alcanzar un nivel umbral para una medicion fiable, que ya se ha conseguido mediante el cebado inicial de la muestra. La cantidad extrafda solo tiene que ser suficiente para permitir una diferencia en concentracion en la muestra que ha de ser detectada, segun se describe a continuacion. El periodo de extraccion puede variar desde 2 hasta 15 minutos.

Inmediatamente tras el periodo de extraccion, se hace funcionar el electrodo 22 de deteccion para realizar una medicion “puntual” de la concentracion de glucosa en la camara 7 de muestras. La operacion del electrodo implica la oxidacion de glucosa convirtiendose en acido gluconico, consumiendo, de esta manera, la concentracion de glucosa mensurable en la camara. Mientras que en la tecnica anterior el objetivo fue medir y, por lo tanto, consumir toda la glucosa en la camara, segun la presente invencion se desea minimizar tal consumo, para que la concentracion de glucosa se acumule en intervalos sucesivos de operacion. Por lo tanto, la etapa de medicion deberfa llevarse a cabo durante un tiempo tan breve como sea posible, suficiente para determinar un valor apropiado de concentracion, por ejemplo 1 o 2 minutos. En un ejemplo, se realizan 10 lecturas durante 120 segundos, y se promedia la corriente de pico en una region estable para proporcionar la lectura de corriente para este punto temporal particular.

Normalmente, entonces sigue un retraso antes de un ciclo adicional de extraccion y luego se lleva a cabo una medicion, dependiendo de la frecuencia de mediciones que se requiere para el sujeto en cuestion.

El procedimiento de funcionamiento del dispositivo segun la invencion no consume toda la concentracion de glucosa en la camara de muestras; por lo tanto, el nivel de glucosa se acumula en el tiempo y se registra un perfil acumulativo de glucosa segun se muestra en la Figura 2. El grafico marcado Dev001 muestra las senales de corriente medidas desde la extraccion acumulativa de glucosa durante un periodo de 5 horas utilizando piel porcina banada en una disolucion 10 mM de glucosa. La piel fue sometida a una iontoforesis inversa con una densidad de corriente de 0,3 mA cm-2 durante 5 minutos, entonces se activo el sensor durante 2 minutos y se tomaron lecturas periodicamente durante ese tiempo. Se promedian las lecturas del sensor de una region estable de meseta para derivar el valor trazado. Esto fue seguido de un periodo de descanso de 8 minutos antes de que se repitiese el ciclo, durante un periodo total de 5 horas en este caso. El grafico marcado Dev004 representa una muestra de control de piel porcina banada solo en tampon, que fue sometido a una iontoforesis de forma similar.

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El declive inicial observado en la corriente que aparece en los graficos en la Figura 2 esta relacionado con la humectacion del sensor; el ahusamiento observado en el grafico de glucosa es debido al consumo del electrodo de trabajo utilizado para la iontoforesis inversa en este conjunto de experimentos.

La lectura de glucosa en cualquier punto de medicion se deriva de la diferencia entre dos lecturas puntuales sucesivas, segun se muestra en la Figura 3. El grafico muestra la diferencia entre cada lectura de glucosa en la Figura 2 y la anterior, trazada en funcion del tiempo durante las primeras 4 horas. Se hallo que la acumulacion acumulativa de la concentracion de glucosa no afecta a la capacidad de los sensores para distinguir entre lecturas, de forma que los distintos niveles de glucosa de la piel, haya una diferencia discernible entre mediciones sucesivas de concentracion. Los sensores retienen una resolucion hasta niveles de solo nanoamperios (o incluso picoamperios) aunque miden corrientes de cientos de nanoamperios.

Con referencia a la Figura 3, se observa una fase inicial de latencia mientras se equilibra la piel, denominada, si no, fase de calentamiento. Tras esto, los resultados muestran claramente una estabilizacion de los niveles de glucosa extrafdos durante intervalos sucesivos, y la concentracion en puntos sucesivos es sustancialmente constante para la corriente constante dada aplicada a la piel durante el procedimiento de iontoforesis inversa. Se llevo a cabo el experimento con piel porcina de grosor total (2-3 mm), en un entorno de laboratorio sin ningun flujo sangufneo capilar; por lo tanto, la glucosa fue extrafda del deposito a traves de todo el grosor de la piel, deposito con el que se puso en contacto el lado inferior de la piel. En un sujeto humano vivo habrfa presente lfquido intersticial en los primeros 0,5-1 mm de la piel, por lo que cabrfa esperar que la fase de calentamiento sea sustancialmente mas breve.

En un parche fabricado segun la invencion, se podrfa aumentar la frecuencia o duracion de las etapas de iontoforesis durante la fase de calentamiento para acortar adicionalmente esa fase. Se podrfa programar el algoritmo de deteccion para reconocer el final de la fase de calentamiento en funcion de la estabilizacion sustancial de los niveles detectados de analito. De forma similar, temprano en la operacion del parche, se podrfa repetir la etapa de medicion de la concentracion de analito en la muestra un numero de veces en sucesion rapida (por ejemplo, 15 veces) para garantizar una humectacion adecuada del sensor para proporcionar lecturas estables.

Se utiliza un algoritmo para determinar el nivel de glucosa en sangre del sujeto a partir de la diferencia entre mediciones sucesivas de concentracion en la muestra en cada intervalo. Se debe calibrar el algoritmo no solo en cuanto a la duracion del procedimiento de iontoforesis inversa sino en cuanto a la eficacia preestablecida del procedimiento en la extraccion de glucosa de sujetos humanos en general o, preferentemente, del sujeto particular en cuestion. Por ejemplo, se puede calibrar el algoritmo comparando la diferencia entre dos mediciones sucesivas de concentraciones de glucosa en la muestra con una medicion independiente de la concentracion de glucosa en una muestra sangufnea de puncion digital del sujeto (o con la concentracion media de dos muestras de puncion digital de ese tipo tomadas en los mismos momentos que las mediciones por medio del parche).

La sudoracion del sujeto puede provocar un aumento rapido en la tasa de extraccion que no es caracterfstico del nivel real de azucar en sangre; por lo tanto, se puede hacer que el algoritmo sea capaz de detectar y eliminar tales datos erroneos. Esto implicarfa que el soporte logico eliminase lecturas en las que el aumento del nivel de azucar fue mas rapido que una tasa umbral “B”, siendo B la tasa maxima de aumento del nivel de azucar en sangre cuando es tomada en una poblacion sana y/o diabetica media tras ingerir una cantidad definida de azucar en una bebida lfquida (para imitar la ingesta de alimentos).

El algoritmo tambien puede incluir cierta compensacion por una pequena cantidad de glucosa que se consumira durante la operacion del sensor, aunque, preferentemente segun la invencion, esta cantidad es muy pequena. En algunas circunstancias, el consumo del analito tambien puede continuar entre etapas de medicion dado que las enzimas presentes en la muestra continuan reaccionando con el mismo. Si los periodos entre lecturas son prolongados, entonces esto se vuelve mas significativo. Una solucion es que el algoritmo incluya un factor adicional de “correccion” que permita que se deduzca un valor de la diferencia en las lecturas, en funcion de una constante que se determinarfa (durante la experimentacion/estudios clfnicos) que se corresponde con cierto consumo adicional del analito presente en la region de deteccion entre dos lecturas. Esto depende mucho del intervalo de tiempo entre dos lecturas, y cuando el intervalo de tiempo es unicamente de unos minutos no se observa un consumo significativo del analito que demandase el uso del factor/constante de correccion, mientras que, si el intervalo de tiempo es, digamos, mayor de 5 minutos, entonces el grado en el que se consume el analito es proporcionalmente mayor. Otra forma de explicar periodos prolongados de latencia entre lecturas, es realizar una lectura “base” en un punto temporal dado al final del retraso, seguido de una iontoforesis, y luego basar la determinacion del nivel de analito en la diferencia entre las dos lecturas realizadas inmediatamente antes y despues de la etapa de iontoforesis.

Aunque se ha descrito un procedimiento preferente de extraccion de analito como una iontoforesis inversa, en una realizacion adicional de la invencion se puede llevar a cabo el procedimiento de extraccion utilizando microagujas para extraer bien muestras de sangre o bien lfquido intersticial, con o sin mejoras en la extraccion al integrarlo con la iontoforesis inversa. Las microagujas pueden ser huecas, porosas o macizas. En tal caso, la cantidad de analito extrafda serfa sustancialmente mayor que la extrafda utilizando la iontoforesis inversa por sf sola y, por ende, la invencion descrita en la presente memoria tendrfa, por lo tanto, beneficios practicos significativos, principalmente

porque para consumir completamente tales cantidades grandes de analito entre cada lectura puede requerirse una cantidad prohibitiva de material de deteccion, tal como enzimas, haciendo que el sensor sea poco practico. En el caso de otros tipos de sensores, se conseguina una mayor resolucion cuando se tomara la diferencia en mediciones entre cada fase de extraccion.

Claims (15)

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   1. Un procedimiento para monitorizar el nivel de un analito en un sujeto, que comprende las etapas de:

   (a) medir la concentracion del analito en una muestra;

   (b) introducir en la muestra una cantidad del analito que es representativa del nivel de analito en el sujeto;

   (c) volver a medir la concentracion del analito en la muestra;

   (d) determinar el nivel del analito en el sujeto en funcion de la diferencia entre la medicion de la concentracion en la etapa (c) y la anterior medicion de la concentracion; y

   (e) repetir las etapas (b) a (d) a intervalos para generar una secuencia de determinaciones en el tiempo.
2. 2. Un procedimiento segun la reivindicacion 1, en el que:

   el procedimiento utilizado para medir la concentracion de analito en la muestra consume parcialmente el analito en la muestra.
3. 3. Un procedimiento segun la reivindicacion 2, en el que se controla la medicion en la etapa (c) de forma que cada medicion solo consume una pequena proporcion del analito, por lo que la concentracion de analito en la muestra aumenta en intervalos sucesivos.
4. 4. Un procedimiento segun la reivindicacion 2 o 3, en el que:

   la determinacion del nivel de analito en la etapa (d) emplea un algoritmo que tiene en cuenta el consumo del analito en la muestra debido al procedimiento de medicion.
5. 5. Un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que:

   la determinacion del nivel de analito en la etapa (d) emplea un algoritmo que tiene en cuenta el consumo del analito en la muestra durante los intervalos entre mediciones sucesivas.
6. 6. Un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en el que hay un periodo de descanso entre cada etapa (c) de medicion y la etapa sucesiva (b) de introduccion;

   comprendiendo el procedimiento, ademas, una etapa de realizacion de una medicion provisional de la concentracion del analito en la muestra inmediatamente antes de cada etapa (b) de introduccion, para ser utilizada esa medicion provisional como la anterior medicion de concentracion en la etapa (d) de determinacion.
7. 7. Un procedimiento segun cualquier reivindicacion precedente, que comprende, ademas, una etapa inicial de introduccion en la muestra de una cantidad del analito antes de la primera etapa (a) de medicion.
8. 8. Un procedimiento segun la reivindicacion 7, en el que la cantidad del analito introducida en la muestra en la etapa inicial es de una fuente distinta del sujeto.
9. 9. Un procedimiento segun la reivindicacion 7 u 8, en el que la etapa inicial comprende, ademas, llevar a cabo un conjunto de mediciones reiteradas de la concentracion del analito en la muestra para conseguir una operacion estable del sensor.
10. 10. Un procedimiento segun cualquier reivindicacion precedente, en el que la etapa (c) de medicion comprende la realizacion de una serie de mediciones y calcular una media de las mediciones seleccionadas en la serie.
11. 11. Un procedimiento segun cualquier reivindicacion precedente, en el que la etapa (d) de determinacion comprende rechazar cualquier medicion que de lugar a un cambio en el nivel determinado de analito que supera un valor umbral.
12. 12. Un procedimiento segun cualquier reivindicacion precedente, en el que la etapa (d) de determinacion comprende rechazar cualquier medicion antes de que se haya estabilizado sustancialmente el nivel determinado de analito.
13. 13. Un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la etapa (b) de introduccion en la muestra de una cantidad del analito que es representativa del nivel de analito en el sujeto comprende llevar a cabo una iontoforesis inversa para extraer la cantidad del analito del lfquido intersticial del sujeto.
14. 14. Un procedimiento segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la etapa (b) de introduccion en la muestra de una cantidad del analito que es representativa del nivel de analito en el sujeto comprende utilizar microagujas para extraer del sujeto un lfquido corporal que contiene la cantidad del analito.
15. 15. Un procedimiento segun cualquier reivindicacion precedente, en el que el analito es glucosa.