ES2613378T3

ES2613378T3 - Composiciones y métodos mínimamente invasivos para tratar la reparación incompleta de tejidos

Info

Publication number: ES2613378T3
Application number: ES03718407.4T
Authority: ES
Inventors: Allan Mishra
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-04-13
Filing date: 2003-04-14
Publication date: 2017-05-24
Anticipated expiration: 2023-04-14
Also published as: JP2005528401A; US8163277B2; WO2003088905A3; AU2003221946B2; EP2258379B1; EP2258379A1; US20080248081A1; US8617539B2; US20060263407A1; US20070264245A1; US20050100536A1; JP2010100648A; US20030194397A1; EP1494535A2; KR20050029118A; AU2003221946A1; EP1494535B1; US20120183520A1; US7314617B2; US8088371B2

Abstract

Uso de una composición de plasma rico en plaquetas en la preparación de un medicamento para tratar una lesión tisular en un individuo introduciendo dicha composición de plasma rico en plaquetas en y al rededor del sitio de lesión tisular, en donde el medicamento no comprende un activador exógeno.

Description

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Composiciones y metodos mfnimamente invasivos para tratar la reparacion incompleta de tejidos Antecedentes de la invencion Campo de la invencion

En una realizacion, la presente invencion se refiere a una composicion para uso en el tratamiento de tejido danado, en donde la composicion incluye plasma rico en plaquetas. El tejido tratado puede ser tejido conectivo, musculo cardfaco, musculo esqueletico, material de disco, cuerpos vertebrales, pancreas y otros organos internos, tejido cerebral o tejido de la medula espinal, o tejido vascular. En una realizacion preferida, el tejido es tejido conectivo. Las composiciones descritas tambien son utiles en la cicatrizacion de heridas e infecciones.

Descripcion de la tecnica relacionada

Existe una necesidad de protocolos de tratamiento para lesiones de tejido conectivo que sean refractarias a tratamientos estandar tales como medicacion antiinflamatoria, soporte, reposo y terapia ffsica. Se sabe que las lesiones u otros danos a los tejidos conectivos relativamente flexibles y relativamente avasculares (en adelante "tejido conectivo" o "tejidos conectivos") tardan mucho tiempo en sanar (meses o incluso anos). En muchos casos, las lesiones de los tejidos conectivos nunca pueden sanar adecuadamente, lo que requiere intervencion quirurgica. Las lesiones y trastornos de los tejidos conectivos tienen un impacto significativo en la sociedad. La prevalencia general de estos problemas es de aproximadamente 140 por 1000 personas en los Estados Unidos, de acuerdo con una encuesta realizada en 1995 por el Centro Nacional de Estadfsticas de Salud. La misma encuesta estimo que los costos directos serfan de 88.700 millones de dolares y que los costos indirectos se estimarfan en hasta 111.900 millones de dolares para la perdida de productividad.

Un ejemplo de trastorno del tejido conectivo es la epicondilitis lateral. La epicondilitis lateral o "codo de tenista" es un trastorno ortopedico y de medicina deportiva bien conocido. La patologfa subyacente al trastorno esta relacionada con la lesion por sobreuso y el microdesgaste del tendon del musculo extensor radial del carpo en el codo. El cuerpo intenta reparar estos microdesgarros, pero el proceso curativo es incompleto en muchos casos. Los especfmenes patologicos de pacientes sometidos a cirugfa de epicondilitis lateral cronica revelan una displasia angiofibroblastica desorganizada. Este intento incompleto de reparacion produce tejido degenerativo, inmaduro y avascular. El tejido reparado incompletamente es mas debil que el tendon normal y carece de la fuerza necesaria para funcionar normalmente. Este tejido tambien limita al paciente causando dolor e impactando negativamente en la calidad de vida del paciente.

La reparacion incompleta similar puede estar presente en otros tipos de lesiones o danos en el tejido conjuntivo, tales como tendinitis rotuliana (rodilla de Jumper), tendinitis de Aquiles (comun en corredores) y tendinitis del manguito rotador (comunmente visto en atletas "aereos" como lanzadores de beisbol), lesiones cronicas de los ligamentos del tobillo ("esguinces de tobillo"), o rasgones del ligamento.

Se ha estudiado la fisiopatologfa de las condiciones antes mencionadas. Actualmente existen muchos tratamientos no operativos y operativos diferentes. Las medidas no operativas incluyen el reposo, la modificacion de la actividad, la medicacion antiinflamatoria oral y las inyecciones de cortisona. La modificacion de la actividad y el descanso pueden ayudar a los pacientes con algunas de estas afecciones, pero sigue habiendo una poblacion clfnica significativa que no es accesible con estas terapias. A pesar del uso generalizado, los medicamentos anti-inflamatorios orales no han demostrado ser utiles en estudios controlados. Algunos estudios sugieren ademas que la medicacion no esteroidea puede tener un efecto adverso en el proceso de curacion de las lesiones del ligamento. Tambien, no se han encontrado celulas inflamatorias agudas en muestras patologicas de casos de epicondilitis lateral. Las inyecciones de cortisona son francamente controvertidas en el tratamiento de los tendinosis y estan contraindicadas en lesiones de ligamentos agudos. Varios estudios senalan una mejora en los pacientes tratados con cortisona en el seguimiento a corto plazo. Resultados mas alla de un ano, sin embargo, revelan una alta tasa de recurrencia de los sfntomas y solo una tasa de eficacia equfvoca. Estas inyecciones tambien conllevan el riesgo de ruptura tendinosa, infeccion, despigmentacion cutanea, atrofia subdermica e hiperglucemia en pacientes diabeticos. Las medidas operativas incluyen desbridamiento y reparacion de los tendones patologicos asociados. Sin embargo, la cirugfa abierta o artroscopica tiene muchas complicaciones potenciales tales como infeccion profunda, dano a estructuras neurovasculares y formacion de cicatrices. La cirugfa tambien es costosa y conlleva los riesgos adicionales asociados con la anestesia regional o general.

Lo que se necesita son composiciones para resolver los problemas mencionados anteriormente. El plasma rico en plaquetas (PRP) es una mezcla enriquecida que contiene plaquetas, aislada de sangre entera, que se vuelve a suspender en un pequeno volumen de plasma. Mientras que la sangre entera puede contener aproximadamente 95% de globulos rojos, aproximadamente 5% de plaquetas y menos del 1% de globulos blancos, el PRp puede contener 95% de plaquetas con 4% de globulos rojos y 1% de globulos blancos. PRP se puede combinar con agentes activadores tales como trombina o calcio que activan las plaquetas para liberar su contenido tal como citoquininas y otros factores de crecimiento. PRP se ha utilizado en medicina, principalmente en injertos oseos y aplicaciones de implantes dentales

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y como parte de una composicion para usar como adhesivo quirurgico. Por ejemplo, Landesberg et al. (US 6,322,785) describen un gel plaquetario autologo que incluye PRP para injertos oseos e implantes dentales. El PRP es activado por colageno y se aplica por via topica para promover la cicatrizacion de heridas.

Antanavich et al. (Patente de los Estados Unidos No. 5,585,007) describen la preparacion de PRP y su uso como un sellador de tejidos. Cochrum (Patente de los Estados Unidos No. 5,614,214) describe un biopolfmero que opcionalmente incluye PRP y su uso para bloquear temporalmente arterias y venas. Gordinier et al. (Patente de los Estados Unidos No. 5,599,558) describen un producto de liberacion de plaquetas, que incluye plaquetas estandarizadas a aproximadamente pH 6.5, para su uso en una aplicacion topica a heridas.

EP-A-0 417 818 (Curative Technologies, Inc) describe un producto de liberacion de plaquetas para el tratamiento de tejido que comprende un liberador de plaquetas y un diluyente o portador para la liberacion.

US-B1-6 322 785 (Landesberg Regina et al.) describe una composicion de gel PRP autologa para la reparacion osea que comprende colageno y cloruro de calcio.

EP-A-0 142 339 (Thomas Jefferson University) describe un medio para almacenar plaquetas sangufneas que comprenden sodio, potasio, calcio, cloruro, citrato y una solucion reguladora.

Coller B. S. et al. "The pH dependence of quantitative ristocetin-induced platelet aggregation: theoretical and practical implications - a new device for maintenance of platelet-rich plasma pH" describen un dispositivo para mantener el pH del PRP por control del PCO2 ambiental.

US-A-5 124 316 (Antoniades et al) describe el uso del factor de crecimiento de polipeptido para promover el crecimiento oseo.

US-A-5 510 102 (Cochrum) describe composiciones de PRP autologas para tratar heridas quirurgicas.

Korner F. & Garweg J. "Advances in the management of vitreomacular traction syndrome and macular hole" describen la aplicacion de adyuvante de sangre autologa, suero, factor de crecimiento transformante o concentrado de plaquetas en un agujero macular.

Gaudric A. et al. "Use of autologous platelet concentrate in macular hole surgery" revelan el uso de APC como adyuvante en la cirugfa de agujero macular.

Ninguna de las tecnicas anteriores ensena el tratamiento del tejido conectivo con PRP para promover la reparacion tisular. Ademas, el solicitante ha descubierto que el PRP tiene incluso una aplicacion mas amplia en el tratamiento de una amplia gama de lesiones y/o danos en los tejidos.

Resumen de la invencion

En una realizacion, la presente invencion se refiere al uso de una composicion de plasma rico en plaquetas en la preparacion de un medicamento para tratar un tejido lesionado en un individuo. En realizaciones preferidas, el tejido se selecciona del grupo que consiste en tejido conectivo, musculo cardfaco, musculo esqueletico, material de disco, un cuerpo vertebral, cerebro, medula espinal y tejido vascular. En una realizacion preferida, el tejido es una parte de un organo interno. En una realizacion mas preferida, el organo interno es el pancreas. En una realizacion particularmente preferida, el tejido es un tejido conectivo.

En realizaciones preferidas, el plasma rico en plaquetas se titula para obtener un pH de 7.3 a 7.5. En una realizacion mas preferida, la titulacion se realiza utilizando una solucion reguladora de bicarbonato.

En realizaciones preferidas, la composicion de plasma rico en plaquetas incluye plaquetas obtenidas del individuo que ha de ser tratado con la composicion de plasma rico en plaquetas. En una realizacion preferida, no se anade ningun activador exogeno a la composicion antes de su introduccion en y alrededor del sitio de la lesion.

Un metodo de tratamiento, que no constituye una realizacion de la invencion, puede incluir la etapa de mezclar en la composicion de plaquetas sustancialmente de forma simultanea con la introduccion dentro y alrededor del sitio de lesion tisular, uno o mas ingredientes que incluyen trombina, epinefrina, colageno, sales de calcio y agentes de ajuste del pH.

En una realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion de plasma rico en plaquetas para el tratamiento de un tejido lesionado que incluye plasma rico en plaquetas; y un agente de ajuste del pH que proporciona un pH de 7.3 a 7.5, en donde la composicion no contiene un activador del plasma rico en plaquetas. En una realizacion preferida, el agente de ajuste del pH es una solucion reguladora de bicarbonato. Preferiblemente, el plasma utilizado para el plasma rico en plaquetas procede de una fuente autologa.

En una realizacion, la presente invencion se dirige a un metodo para fabricar una composicion de plasma rico en plaquetas que incluye las etapas de extraccion de sangre de un individuo; obtener una fraccion de plasma de la sangre; aislar plaquetas de la fraccion de plasma; volver a suspender las plaquetas en una cantidad reducida de plasma; y ajustar el pH para proporcionar un pH de 7.3 a 7.5 para las plaquetas resuspendidas para proporcionar una composicion 5 de plasma rico en plaquetas, en donde el plasma rico en plaquetas no contiene un activador de la composicion de plasma rico en plaquetas.

Breve descripcion de los dibujos

Estas y otras caracterfsticas de esta invencion se describiran ahora con referencia a los dibujos de realizaciones preferidas:

10 La figura 1 muestra las puntuaciones promedio de dolor analogico visual en la fase preoperatoria y 6 meses postoperatorios.

La figura 2 muestra las puntuaciones promedio de los puntajes de codo Mayo en el preoperatorio y 6 meses postoperatorios.

Descripcion detallada de la realizacion preferida

15 El inventor ha descubierto sorprendentemente que ciertas composiciones de plaquetas de la invencion son utiles para el tratamiento de varios tipos de dano o lesion tisular. Como se utiliza en este documento, el termino "lesion" es un termino amplio y se utiliza en el sentido corriente para referirse a cualquier dano tisular incluyendo una herida, trauma o lesion o cualquier degeneracion tisular. En particular, las composiciones de plaquetas de la invencion se pueden utilizar para tratar la reparacion incompleta de diversos tejidos conectivos.

20 Una composicion de acuerdo con la invencion se puede utilizar en un metodo para tratar una reparacion incompleta en el tejido conectivo de un paciente, que comprende: obtener una composicion de plaquetas; determinar una lesion que comprende la reparacion incompleta en el tejido conectivo del paciente; y la introduccion mfnimamente invasiva de la composicion de plaquetas en y alrededor de la lesion. En un aspecto, la composicion de plaquetas esta a o por encima del pH fisiologico. En un aspecto, la composicion de plaquetas incluye opcionalmente liberacion de plaquetas. En un 25 aspecto, el metodo comprende, ademas: mezclar en la composicion de plaquetas uno o mas de los ingredientes seleccionados de trombina, epinefrina, colageno, sales de calcio y agentes de ajuste del pH. Tambien son utiles los materiales para promover la desgranulacion o preservar plaquetas, factores de crecimiento adicionales o inhibidores del factor de crecimiento, farmacos de molecula pequena tales como NSAIDS, esteroides y agentes antiinfecciosos. En un aspecto, el tejido conjuntivo del paciente se selecciona de: tendones, ligamentos, capsulas articulares y tejidos faciales. 30 En un aspecto, la obtencion de la composicion de plaquetas comprende: extraccion de sangre de un ser humano; y centrifugar la sangre para obtener una fraccion rica en plasma. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plasma rico en plaquetas. En un aspecto, la composicion de plaquetas esta exenta de activadores exogenos antes de su introduccion en y alrededor de la region de la reparacion incompleta en el tejido conectivo del paciente. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plaquetas obtenidas del paciente.

35 Una composicion de acuerdo con la invencion se puede utilizar ademas en un metodo para tratar la reparacion incompleta en el tejido conectivo de un paciente, que comprende: obtener una composicion de plaquetas; determinar una lesion que comprende la reparacion incompleta en el tejido conectivo del paciente; y la introduccion de la composicion de plaquetas en y alrededor de la lesion, con la condicion de que no se anade ningun activador a la composicion de plaquetas antes de su introduccion en y alrededor de la lesion. En un aspecto, la composicion de 40 plaquetas se introduce mfnimamente invasiva en y alrededor de la lesion. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plasma rico en plaquetas. En un aspecto, el metodo comprende, ademas: mezclar en la composicion de plaquetas sustancialmente de forma simultanea con su introduccion mfnimamente invasiva en y alrededor de la lesion de uno o mas de los ingredientes seleccionados de trombina, epinefrina, colageno, sales de calcio y agentes de ajuste del pH. Tambien son utiles los materiales para promover la desgranulacion o preservar plaquetas, factores de 45 crecimiento adicionales o inhibidores del factor de crecimiento, farmacos de molecula pequena tales como NSAIDS, esteroides y agentes antiinfecciosos. En un aspecto, el tejido conjuntivo del paciente se selecciona de: tendones, ligamentos, capsulas articulares y tejidos faciales. En un aspecto, la introduccion de la composicion de plaquetas en y alrededor de la lesion comprende activar plaquetas en la composicion de plaquetas a traves de la accion del colageno presente en el tejido conectivo del paciente. En un aspecto, la composicion de plaquetas esta a o por encima del pH 50 fisiologico. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plaquetas obtenidas del paciente.

En incluso otro aspecto, la invencion se refiere a una composicion que comprende: liberacion de plaquetas en donde la composicion esta a un pH mayor o igual que el pH fisiologico, y en donde la composicion comprende sustancialmente plaquetas no inactivadas.

Una composicion de acuerdo con la invencion se puede utilizar en un metodo de tratamiento de lesiones resultantes de 55 una lesion aguda o trastornos cronicos del Ligamento Colateral Medial de la rodilla o el codo, tendon del musculo extensor radial del carpo, ligamento talofibular anterior en el tobillo, tendon de Aquiles, tendon tibial posterior, tendon

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rotuliano, tendon del cuadriceps, ligamento cruzado anterior, ligamento cruzado posterior, ligamentos espinales, materiales discales, tendon del manguito rotador o tendones biceps que comprende: obtener una composicion de plaquetas; determinar una localizacion de la lesion; y la introduccion de la composicion de plaquetas en y alrededor de la lesion, con la condicion de que no se anade ningun activador a la composicion de plaquetas antes de su introduccion en y alrededor de la lesion. En un aspecto, la composicion de plaquetas se introduce minimamente invasiva en y alrededor de la lesion. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plasma rico en plaquetas. En un aspecto, el metodo comprende, ademas: mezclar en la composicion de plaquetas sustancialmente de forma simultanea con su introduccion minimamente invasiva en y alrededor de la lesion de uno o mas de los ingredientes seleccionados de trombina, epinefrina, colageno, sales de calcio, agentes de ajuste de pH. Tambien son utiles los materiales para promover la desgranulacion o preservar plaquetas, factores de crecimiento adicionales o inhibidores del factor de crecimiento, farmacos de molecula pequena tales como NSAIDS, esteroides y agentes antiinfecciosos. En un aspecto, la obtencion de la composicion de plaquetas comprende: extraccion de sangre de un ser humano; y centrifugar la sangre para obtener una fraccion rica en plasma. En un aspecto, la composicion de plaquetas esta a o por encima del pH fisiologico. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plaquetas obtenidas del paciente.

Una composicion de acuerdo con la invencion se puede utilizar en un metodo de tratamiento de lesiones resultantes de lesiones o trastornos cronicos del musculo cardfaco, musculo esqueletico, sistemas de organos, tejido vascular, material de disco, cuerpos espinales, medula espinal y tejido cerebral, que comprende: obtencion de una composicion de plaquetas; determinar una lesion que necesita tratamiento; y la introduccion minimamente invasiva de la composicion de plaquetas en y alrededor de la lesion. En un aspecto, la composicion de plaquetas incluye opcionalmente la liberacion de plaquetas. En un aspecto, el metodo comprende, ademas: mezclar en la composicion de plaquetas uno o mas de los ingredientes seleccionados de trombina, epinefrina, colageno, sales de calcio y agentes de ajuste del pH. Tambien son utiles los materiales para promover la desgranulacion o preservar plaquetas, factores de crecimiento adicionales o inhibidores del factor de crecimiento, farmacos de molecula pequena tales como NSAIDS, esteroides y agentes antiinfecciosos. En un aspecto, la obtencion de la composicion de plaquetas comprende: extraccion de sangre de un ser humano; y centrifugar la sangre para obtener una fraccion rica en plasma. En un aspecto, la composicion de plaquetas esta a o por encima del pH fisiologico. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plaquetas obtenidas del paciente.

En un aspecto, el tejido conjuntivo del paciente se selecciona de: tendones, ligamentos, capsulas articulares y tejidos faciales. En un aspecto, la obtencion de la composicion de plaquetas comprende: extraccion de sangre de un ser humano; y centrifugar la sangre para obtener una fraccion rica en plasma. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plasma rico en plaquetas. En un aspecto, la composicion de plaquetas esta exenta de activadores exogenos antes de su introduccion en y alrededor de la region de la reparacion incompleta en el tejido danado o lesionado del paciente. En un aspecto, la composicion de plaquetas comprende plaquetas obtenidas del paciente.

La composicion de plaquetas de la invencion puede ser una composicion biocompatible que comprende plaquetas no activadas, plaquetas activadas, liberacion(es) de plaquetas o similares. En una realizacion, la composicion de plaquetas de la invencion comprende plasma rico en plaquetas (PRP).

El termino "PRP" como se utiliza en este documento es un termino amplio que se utiliza en su sentido corriente y re es una concentracion de plaquetas mayor que la concentracion de sangre periferica suspendida en una solucion de plasma, con recuentos plaquetarios tfpicos que van desde 500,000 hasta 1,200,000 por milfmetro cubico, o incluso mas. El PRP se forma a partir de la concentracion de plaquetas a partir de sangre entera, y puede obtenerse utilizando fuentes autologas, alogenicas o combinadas de plaquetas y/o plasma. El PRP se puede formar a partir de una variedad de fuentes animales, incluyendo fuentes humanas.

Las plaquetas son porciones citoplasmaticas de megacariocitos de la medula. No tienen nucleo para replicacion; la vida util esperada de una plaqueta es de unos cinco a nueve dfas. Las plaquetas estan implicadas en el proceso hemostatico y liberan varios iniciadores de la cascada de la coagulacion. Las plaquetas tambien liberan citoquinas implicadas en el inicio de la cicatrizacion de heridas. Las citoquinas se almacenan en granulos alfa en plaquetas. En respuesta a las plaquetas o agregacion de plaquetas o plaquetas al contacto de tejido conectivo, como se esperarfa en lesion o cirugfa, la membrana celular de la plaqueta se "activa" para secretar el contenido de los granulos alfa. Los granulos alfa liberan citocinas a traves de la secrecion activa a traves de la membrana celular de plaquetas a medida que se anaden histonas y cadenas laterales de carbohidratos al esqueleto proteico para formar la citocina completa. Por lo tanto, la ruptura o fragmentacion de plaquetas no da lugar a la liberacion de la citocina completa.

Una amplia variedad de citocinas son liberadas por plaquetas activadas. El factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), el factor de crecimiento transformante beta (TGF-b), el factor de angiogenesis derivado de plaquetas (PDAF) y el factor de crecimiento de celulas endoteliales derivadas de plaquetas (PD-ECGF) y el factor de crecimiento similar a insulina (IGF) estan entre las citoquinas liberadas por la desgranulacion de las plaquetas. Estas citocinas sirven a una serie de funciones diferentes en el proceso de curacion, incluyendo ayudar a estimular la division celular en un sitio de lesion, tambien funcionan como factores quimiotacticos de gran alcance para las celulas mesenquimales, monocitos y fibroblastos, entre otros. Para los fines de esta patente, el termino "liberar" se refiere al contenido interno de la plaqueta, incluidas las citoquinas, que tienen el potencial de afectar a la funcion de otras celulas.

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Historicamente, el PRP se ha utilizado para formar un adhesivo de tejido de fibrina a traves de la activacion del PRP utilizando trombina y calcio, como se describe en las Patentes de los Estados Unidos 5,165,938 de Knighton y 5,599,558 de Gordinier et al. La activacion da como resultado la liberacion de las diversas citoquinas y tambien crea una reaccion de coagulacion dentro de diversos constituyentes de la fraccion de plasma. La reaccion de coagulacion forma rapidamente un gel plaquetario (PG) que se puede aplicar a diversas superficies de la herida con fines de hemostasia, sellado y adhesion.

Por ejemplo, PG se ha empleado para ayudar con la hemostasia en la cirugfa de columna vertebral y en un modelo de laceracion de hfgado de rata. Una investigacion reciente mostro que el uso de PG produjo una reduccion significativa en el uso de narcoticos postoperatorios, una reduccion en la cafda de la hemoglobina postoperatorio y un retorno mas rapido del rango funcional de movimiento despues del reemplazo total de la rodilla. PG tambien se ha utilizado en el sellado de heridas. Un estudio utilizo PG autologa como sellante para procedimientos de craneotomfa y senalo el exito en 39 de 40 pacientes. Tambien se ha observado PG para aumentar la cicatrizacion del hueso. Un ensayo prospectivo aleatorizado controlado de 88 pacientes revelo un aumento de 2 veces en la maduracion osea radiografica y una mejora del 50% en la densidad osea histologica cuando se uso PG (Marx, et al., Oral Surg. Oral Med. Oral Path. 1998, vol. 85(6): 638-646). En la cirugfa cardiaca y vascular se esta empleando PG para reducir la incidencia de dehiscencia e infeccion de la herida post-operatoria (Kjaergard, et al., Eur J Cardio-Thoracic Surg. 1996, vol 10: 727-733; Slater, et al., J Ortho Res. 1995, vol 13: 655-663; Sumner et al. J. Bone Joint Surg. (Am) 1995, vol 77:1135-1147; Sethi, et al. Presented at International Society for the Study of Lumbar Spine, June 2001).

Sin embargo, en ninguna de las solicitudes y documentos publicados anteriormente se ha descrito que el PRP podrfa usarse quirurgicamente fuera del contexto de PG para cualquier proposito que no sea la transfusion de plaquetas a un paciente. Es una caracterfstica unica de esta invencion que las plaquetas no necesitan ser activadas antes de su introduccion en un paciente durante la practica de la presente invencion.

En otra realizacion, la composicion de plaquetas de la invencion puede comprender la liberacion de plaquetas, ademas de las propias plaquetas. La liberacion comprende las diversas citoquinas liberadas mediante la desgranulacion de las plaquetas tras la activacion. Existen muchos activadores de plaquetas; estos incluyen iones de calcio, trombina, colageno, epinefrina y difosfato de adenosina. Las liberaciones de acuerdo con la invencion se pueden preparar de acuerdo con metodos convencionales, incluyendo los metodos descritos en las Patentes de los Estados Unidos 5,165,938 de Knighton y 5,599,558 de Gordinier et al.

Una desventaja de estrategias de liberacion convencionales asociadas con el uso de PRP como PG es el uso de trombina como activador preferido. En particular, gran parte de la trombina utilizada en la PG es la trombina bovina, lo que puede crear problemas debido a problemas de contaminacion relacionados con la enfermedad de Creutzfeldt- Jakob. Muchos materiales bovinos son sospechosos debido a la posible contaminacion por priones, y por lo tanto el uso de trombina bovina es desfavorable en cirugfa. La trombina agrupada humana es igualmente desfavorecida debido al potencial de contaminacion con diversos materiales tales como virus, priones o bacterias. Tambien se puede utilizar trombina humana recombinante, pero es bastante costosa

Es una ventaja particular de la presente invencion que los activadores exogenos o adicionales no necesitan administrarse a un paciente. El colageno, un componente importante de los tejidos conectivos, es un fuerte activador de las plaquetas. Por lo tanto, cuando la composicion de plaquetas de la invencion se introduce en y/o alrededor de tejido conectivo, las plaquetas en la composicion de plaquetas se pueden unir al colageno y luego activarse. Esto reduce o elimina la necesidad de administrar un activador exogeno tal como trombina. Las desventajas del uso de trombina se han observado anteriormente. Otros activadores fuertes, tales como los iones de calcio, pueden causar dolor intenso, coagulacion no intencional y otros efectos secundarios indeseables. Por lo tanto, en una realizacion de la invencion, ninguno, o sustancialmente, ningun activador exogeno presente o anadido como parte de la composicion de plaquetas de la invencion, o se utiliza en la preparacion de la composicion de plaquetas de la invencion. Por supuesto, los activadores exogenos pueden todavfa ser empleados si un medico determina que son medicamente necesarios o deseables.

La composicion de plaquetas se puede preparar utilizando cualquier metodo convencional de aislamiento de plaquetas de sangre entera o fracciones de sangre que contienen plaquetas. Estos incluyen metodos de centrifugacion, filtracion o columnas de afinidad. Si la composicion de plaquetas comprende PRP, entonces se pueden utilizar metodos convencionales para obtener PRP, tales como los descritos en las Patentes de los Estados Unidos 5,585,007 y 5,788,662 ambos de Antanavich et al..

La composicion de plasma rico en plaquetas se puede suministrar a un individuo que lo necesite por medios convencionales que incluyen inyeccion utilizando una jeringa, cateter. La composicion de plasma rico en plaquetas tambien se puede administrar mediante un parche dermico, un dispositivo de pulverizacion o en combinacion con un unguento, injerto oseo o farmaco. Adicionalmente se puede utilizar como revestimiento sobre sutura, stents, tornillos, placas o algun otro dispositivo medico implantable. Por ultimo, se puede utilizar junto con un farmaco o dispositivo bioreabsorbible.

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El sitio de administracion de la composicion de plasma rico en plaquetas esta en o al rededor del sitio de lesion tisular y/o dano. El sitio de lesion o dano tisular se determina por metodos bien establecidos, incluyendo estudios de imagen y retroalimentacion del paciente o una combinacion de los mismos. El estudio de imagen preferido utilizado esta determinado por el tipo de tejido. Los metodos de imagen utilizados comunmente incluyen MRI, rayos X, barrido CT, la tomograffa por emision de positrones (PET), la tomograffa computarizada de emision de fotones individuales (SPECT), la tomograffa de impedancia electrica (EIT), la imagenologfa de fuente electrica (ESI), la imagenologfa optica con laser (MSI) y tecnicas de ultrasonido. El paciente tambien puede ayudar a localizar el sitio de lesion o dano en el tejido senalando areas de dolor y/o incomodidad en particular.

El ajuste del pH de las composiciones de plaquetas se ha utilizado para prolongar el tiempo de almacenamiento de plaquetas inactivadas, como se describe en las Patentes de los Estados Unidos 5,147,776 de Koerner Jr. y 5,474,891 de Murphy. El pH se puede ajustar utilizando una variedad de agentes de ajuste del pH, que son preferiblemente soluciones reguladoras fisiologicamente toleradas, pero tambien pueden incluir otros agentes que modifican el pH, incluyendo agentes que modifican la produccion de acido lactico mediante plaquetas almacenadas. Especialmente utiles son aquellos agentes de ajuste del pH que dan como resultado que el pH de la composicion de plaquetas sea mayor o igual que el pH fisiologico. En una realizacion, el agente de ajuste de pH comprende bicarbonato de sodio. El pH fisiologico, para los propositos de esta invencion, se puede definir como un pH que van desde aproximadamente 7.35 a aproximadamente 7.45. Los agentes de ajuste del pH utiles en la practica de esta invencion incluyen soluciones reguladoras de bicarbonato (tales como bicarbonato sodico), gluconato de calcio, cloruro de colina, dextrosa (d- glucosa), acido etilenbis(oxietilenitrilo) tetraacetico (EGTA), acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfonico (HEPES), acido maleico, acido 4-morfolinopropanosulfonico (MOPS), acido 1,4-piperazinabis (acido etanosulfonico) (PIPES), sacarosa, acido N-tris(hidroximetil)metil-2-aminoetanosulfonico (TES), tris(hidroximetil)aminometano (BASE TRIS), tris(hidroximetil) aminometano clorhidrato (TRIS.HCl), y urea. En una realizacion preferida, el agente de ajuste del pH es una solucion reguladora de bicarbonato, mas preferiblemente, bicarbonato de sodio.

Para los propositos de esta patente, el termino "tejidos" incluye musculo cardfaco y esqueletico, material de disco, cuerpos vertebrales, organos internos, tejido cerebral y de medula espinal, tejido vascular tal como arterias y venas y tejido no diferenciado.

Para los fines de esta patente, los tejidos conectivos comprenden tendones, ligamentos, tejidos faciales y capsulas articulares. En una realizacion preferida, los tejidos conectivos comprenden el ligamento colateral medial de la rodilla o el codo, el tendon del musculo extensor radial del carpo (codo de tenista), el ligamento talofibular anterior en el tobillo, el tendon de Aquiles, el ligamento cruzado anterior, el ligamento cruzado posterior, el tendon tibial posterior, el tendon del patelar, el tendon del cuadriceps, el tendon del manguito rotador y los tendones del biceps.

La reparacion incompleta, como se utiliza en el contexto de esta solicitud de patente, se puede definir como una reparacion es decir desorganizada, sustancialmente inexistente (tal como en el caso de un desgarro no cicatrizado), o patologica de otro modo. La reparacion desorganizada se caracteriza por una displasia angiofibroblastica desorganizada, con tejido degenerativo, inmaduro y avascular. Este tejido es mas debil que el tejido conjuntivo normal y carece de la fuerza necesaria para funcionar normalmente. Este tejido tambien limita al paciente causando dolor e impactando negativamente en la calidad de vida del paciente. Reparacion sustancialmente inexistente puede ocurrir en una situacion donde un tejido conectivo se desgarra y no se cura correctamente despues del desgarro. De otra manera, la reparacion patologica puede ser cualquier otro tipo de reparacion en la cual el tejido no se repara para ser sustancialmente el mismo que el tejido antes de que fuera necesaria la reparacion del tejido.

Ejemplos

Ejemplo 1

El PRP se preparo utilizando una unidad centrffuga fabricada por Harvest (Plymouth, MA). (Unidades similares estan disponibles como el sistema GPS Biomet, la maquina Depuy Symphony y la maquina Medtronic Magellan). Se extrajeron aproximadamente 55 cc de sangre del paciente utilizando una jeringa esteril estandar, junto con 5 cc de una solucion de citrato de dextrosa para la anticoagulacion, y luego se centrifugo para aislar las plaquetas de acuerdo con el protocolo del fabricante. Estas plaquetas se volvieron a suspender luego en aproximadamente 3 cc de plasma. La solucion de plasma rico en plaquetas resultante (PRP) fue bastante acida y se neutralizo utilizando aproximadamente 0.05 cc de una solucion reguladora de bicarbonato sodico al 8.4% por cc de PRP en condiciones esteriles hasta aproximadamente pH fisiologico de 7.4. El PRP no se activo mediante la adicion de activadores exogenos. Esta composicion de PRP se denomina en este documento como extracto plaquetario autologo (APEX).

Ejemplo 2

Se extraen cincuenta cc de sangre entera de un paciente, y luego se prepara de acuerdo con el metodo de la Patente de los Estados Unidos, Knighton 5,165,938, columna 3. El PRP se activa de acuerdo con Knighton utilizando trombina humana recombinante. Las plaquetas desgranuladas se centrifugan y se recupera el sobrenadante que contiene el liberador. El liberador puede estar opcionalmente ajustado en pH a un pH de 7.4, utilizando solucion reguladora de bicarbonato de sodio.

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Se extrajeron treinta mL de sangre entera de un paciente. Se preparo una composicion de plaquetas de acuerdo con el Ejemplo 1 de la Patente de los Estados Unidos 5,510,102 de Cochrum, excepto que no se anadio alginato a la composicion de plaquetas.

Ejemplo 4

Un estudio de los efectos de las composiciones de PRP descritas en este documento se realizo utilizando pacientes que presentaban epicondilitis lateral (codo de tenista) que habfan fracasado en el tratamiento no quirurgico (medicacion antiinflamatoria, descanso de apoyo y terapia ffsica). La duracion media de los sfntomas de estos pacientes fue de 16.6 meses. Despues de obtener el consentimiento informado, los pacientes fueron inscritos formalmente en el estudio y asignados al azar al grupo de tratamiento APEX o control.

Se evaluaron los pacientes para obtener una puntuacion de dolor visual, una puntuacion de codo Mayo y fuerza de agarre. Para la puntuacion analogica visual de dolor, cero es igual a "sin dolor" y 100 es igual a "el peor dolor posible". La puntuacion del codo Mayo es una puntuacion global de la funcion con una puntuacion mas alta que indica una mejor funcion general. Los valores de las dos puntuaciones se evaluaron estadfsticamente utilizando una prueba T de muestras pareadas con una significacion establecida en p <0.05.

A cada paciente se le administraron entonces 5 mg de Valium p.o. 30 minutos antes del procedimiento del tendon de la invencion. A continuacion, los pacientes se prepararon y se cubrieron de una manera esteril. Un anestesico local de bupivicafna al 0.5% con epinefrina se infiltro en la piel, en estructuras subcutaneas y en el tendon del musculo extensor radial del carpo. Se tomo precaucion para mantener la anestesia local fuera de la articulacion del codo.

Dos o tres minutos despues de la administracion del anestesico local, se introdujeron aproximadamente 3-5 cc de la composicion de APEX del Ejemplo 1 en el tendon del musculo extensor radial del carpo en el codo a traves de una aguja de calibre 22. El grupo de control recibio un disparo anestesico (Bupivicaina). Se realizaron multiples punciones en el tendon a aproximadamente 0.5-1 cm desde su origen. Inmediatamente despues de la introduccion mfnimamente invasiva de ya sea la composicion de APEX del Ejemplo 1 o de la inyeccion anestesica, el brazo del paciente se inmovilizo a aproximadamente 90% de flexion sin elevacion del brazo o de la mano. la zona quirurgica fue luego vestida esterilmente y se le pidio al paciente no mover su brazo durante 30 minutos. El estado neurovascular, doloroso y funcional de cada paciente se evaluo poco despues de la inyeccion y 30 minutos despues del final del procedimiento. A cada paciente se le administro analgesicos narcoticos orales como se necesitaba durante las primeras 24-48 horas despues del procedimiento. Un programa formal de estiramiento y fortalecimiento postoperatorio puede iniciarse a los 23 dfas despues del procedimiento. La puntuacion de dolor visual, puntuacion de codo Mayo y fuerza de agarre fueron monitoreados despues del procedimiento.

Las Tablas 1 y 2 comparan los pacientes tratados y control preoperatoriamente y a las 8 semanas. 5 pacientes han sido tratados con las composiciones de PRP de un aspecto de la presente invencion (APEX), mientras que 3 pacientes recibieron una inyeccion anestesica y proporcionaron un control. Las puntuaciones de dolor analogico visual (Tabla 1) mejoraron un promedio de 66% para el grupo tratado con PRP frente a una mejora media de 20.4% en el grupo de control. La puntuacion del codo MAYO (Tabla 2) que prueba la funcion del codo mejoro en un promedio del 44% en el grupo tratado con PRP comparado con el 30.5% en el grupo de control.

Tabla 1

Estudio del codo de tenista. Puntuaciones de dolor analogico visual promedio (0-100) para 5 pacientes tratados con APEX y 3 pacientes de control preoperatorio y a las 8 semanas de seguimiento.

: APEX Control (Bupivicafna)

Preoperatorio: 77 90

Postoperatorio-8 semanas: 26 72

% de mejora: 66% 20.4%

n: 5 3

Tabla 2

Estudio del codo de tenista. Puntuaciones de codo Mayo promedio para 5 pacientes tratados con APEX y 3 pacientes de control preoperatorio y a las 8 semanas de seguimiento.

: APEX Control de (Bupivicafna)

Preoperatorio: 57.5 49

Postoperatorio de 8 semanas: 83 64

% de mejora: 44% 30.5%

n: 5 3

La mejora observada en el control se puede atribuir al fenomeno observado de que la insercion de una aguja en una zona dolorosa sin suministro de farmaco (puncion seca), dara como resultado cierto alivio de los sfntomas del dolor. Sin 5 embargo, las mejoras significativamente mayores en la funcion del codo (Tabla 2) y el nivel de dolor (Tabla 1) demuestran claramente la eficacia de los tratamientos con PRP, que son un aspecto de la presente invencion.

Ejemplo 5

La muestra del paciente del Ejemplo 4 se evaluo nuevamente al momento determinado de 6 meses. Hasta la fecha, se han evaluado cinco pacientes que estan al menos seis meses despues del tratamiento con la composicion de APEX 10 utilizando el metodo inventivo descrito en este documento. Los resultados se resumen a continuacion en las Tablas 3 y 4. Se muestran los valores medios para 5 pacientes ensayados hasta ahora.

Tabla 3

Puntuacion visual del dolor analogico

Puntuacion promedio de dolor analogico visual preoperatorio:: 77

Puntuacion promedio de dolor analogico visual postoperatorio de seis meses:: 16

Mejora: 79%

Tabla 4

Puntuacion del codo Mayo modificada (Una medida de la funcion general)

Puntuacion promedio de dolor analogico visual preoperatorio:: 57.5

Puntuacion promedio del codo Mayo postoperatorio de seis meses:: 88

Mejora: 53%

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La puntuacion de dolor analogico visual (Tabla 3) representa un promedio de 79% de mejorfa en las puntuaciones de dolor a los seis meses. La Tabla 4 representa un promedio de 53% de mejorfa en la puntuacion de codo Mayo a los seis meses. Los datos se representan graficamente en la Figura 1 (puntuaciones analogicas visuales de dolor) y en la Figura 2 (Mejora de la puntuacion del codo Mayo). Es importante destacar que 4 de cada 5 pacientes son excelentes (> 90 por 20 la puntuacion del codo Mayo) y un paciente esta en la categorfa buena. Todos los pacientes eran justos o pobres antes del tratamiento. Incluso con esta pequena muestra, la mejora fue estadfsticamente significativa (valores p = < 0.05).

Ejemplo 6

Un paciente que se presenta con tendinosis de Aquiles recibe 5 mg de Valium p.o. 30 minutos antes del procedimiento del tendon de la invencion. A continuacion, el paciente se prepara y se cubre de una manera esteril. Un anestesico local

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de bupivicafna al 0.5% con epinefrina se infiltra en la piel, estructuras subcutaneas y tendon de Aquiles. Se toma cuidado para mantener la anestesia local fuera de la articulacion del tobillo.

Dos o tres minutos despues de la administracion del anestesico local, aproximadamente 3-5 cc de la composicion de APEX del Ejemplo 1 se introduce en el tendon de Aquiles justo por encima del tobillo a traves de una aguja de calibre 22. Se realizan punciones multiples en el tendon a aproximadamente 0.5-1 cm de su insercion. Inmediatamente despues de la introduccion mfnimamente invasiva de la composicion de plaquetas del Ejemplo 1, la pierna y el pie inferiores del paciente se inmovilizan sin elevacion de la pierna. A continuacion, la zona quirurgica se esteriliza y se le pide al paciente que no mueva la pierna durante 30 minutos. El estado neurovascular, el dolor y el estado de la funcion del paciente se evaluan poco despues de la inyeccion y 30 minutos despues del final del procedimiento. El paciente recibe medicacion para el dolor narcoticos orales segun sea necesario durante las primeras 24-48 horas despues del procedimiento. El tendon de Aquiles permanece inmovilizado durante una semana despues del procedimiento, seguido de un programa formal de estiramiento y fortalecimiento postoperatorio iniciado 8-10 dfas despues del procedimiento.

Ejemplo 7

Un paciente que se presenta con una rotura del ligamento colateral mediano del codo recibe 5 mg de Valium p.o. 30 minutos antes del procedimiento del tendon de la invencion. A continuacion, el paciente se prepara y se cubre de una manera esteril. Un anestesico local de bupivicafna al 0.5% con epinefrina se infiltra en la piel, estructuras subcutaneas y ligamento colateral medial en el codo. Se toma cuidado para mantener la anestesia local fuera de la articulacion del codo.

Dos o tres minutos despues de la administracion del anestesico local, se introducen aproximadamente 3-5 cc de la composicion APEX del Ejemplo 1 en el ligamento colateral mediano en el codo a traves de una aguja de calibre 22. Se realizan multiples punciones en el ligamento a aproximadamente 0.5-1 cm de su origen. Inmediatamente despues de la introduccion mfnimamente invasiva de la composicion de plaquetas del Ejemplo 1, el codo y el brazo del paciente se inmovilizan a aproximadamente 90% de flexion sin elevacion del brazo o de la mano. A continuacion, la zona quirurgica se esteriliza y se pide al paciente que no mueva el brazo durante 30 minutos. El estado neurovascular, el dolor y el estado de la funcion del paciente se evaluan poco despues de la inyeccion y 30 minutos despues del final del procedimiento. El paciente recibe analgesicos narcoticos orales segun sea necesario durante las primeras 24-48 horas despues del procedimiento. Se puede iniciar un programa opcional de estiramiento y fortalecimiento post-operatorio formal a los 2-3 dfas despues del procedimiento.

Ejemplo 8: Musculo cardfaco

Un paciente presenta una disfuncion aguda (esto es, ataque cardfaco) o cronica (esto es, insuficiencia cardfaca congestiva) del musculo cardfaco. Se prepara una composicion de APEX como se describe en el Ejemplo 1. Aproximadamente 0.05 cc de una solucion reguladora de bicarbonato de sodio al 8.4% por cc de extracto se utiliza para elevar el pH a o ligeramente por encima de 7.4. El extracto no se activa mediante la adicion de agente(s) exogeno(s).

A continuacion, el APEX se introduce en la zona de musculo cardfaco disfuncional a traves de un cateter. El APEX tambien se puede combinar con un dispositivo implantable tal como un stent.

Ejemplo 9: Musculo esqueletico

Un paciente presenta debilidad o atrofia del musculo esqueletico. Esto podrfa ser el resultado de una lesion o despues de un procedimiento quirurgico. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

Se identifica la zona de debilidad o atrofia y luego despues de usar bupivicafna al 0.5% con epinefrina como anestesico local, el APEX se introduce en el musculo a traves de una aguja de 22 g. Esto se puede hacer una sola vez o puede requerir inyecciones multiples. Postoperatoriamente, se inicia el paciente en un protocolo de estiramiento y fortalecimiento especffico del sitio.

Ejemplo 10: Material del disco/cuerpos vertebrales

Un paciente presenta dolor de espalda baja y discos abultados o negros en un barrido de MRI. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta el pH fisiologico.

El disco en cuestion se identifica por gufa de rayos X y despues el APEX se introduce en el espacio discal a traves de un cateter de pequeno calibre. Este procedimiento se podrfa realizar solo o en combinacion con un procedimiento de ablacion termica/radiofrecuencia. El APEX tambien se podrfa inyectar en un cuerpo vertebral que ha sufrido una fractura por compresion con o sin el uso de un globo antes de la inyeccion.

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Un paciente presenta diabetes y pobre produccion de insulina. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

Bajo gufa de CT y sedacion consciente, el APEX se introduce a traves de un cateter de pequeno calibre en el pancreas. El APEX se inyecta entonces en las celulas de los islotes para estimular la reparacion de estas celulas y asf restaurar la produccion de insulina.

Ejemplo 12: Cerebro/medula espinal

Un paciente presenta un deficit neurologico agudo tal como una lesion de la medula espinal o un accidente cerebrovascular. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

Bajo gufa de MRI y sedacion consciente, el APEX se introduce en la zona de lesion o deficit. El APEX inicia o asiste con la reparacion de las celulas danadas localmente.

Ejemplo 13: Tejido vascular

Un paciente presenta una zona de hipovascularidad en sus extremidades inferiores. El paciente tiene un diagnostico de enfermedad vascular oclusiva periferica. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

La zona de hipovascularidad se bloquea con bupivicafna y despues se introduce el APEX en ya sea el musculo o tejido blando. El APEX induce la angiogenesis y la formacion de nuevos vasos sangufneos.

Ejemplo 14: Cicatrizacion de heridas

Un paciente presenta una herida cronica que no se cura adecuadamente. Esto podrfa ser una ulcera de pie diabetico. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

La herida se limpia cuidadosamente y se desbrida segun sea necesario. A continuacion, el APEX se inyecta cuidadosamente en y alrededor de la herida cronica y sus bordes. Se mantiene en su lugar con un vendaje oclusivo o combinado con un unguento. Este proceso se puede repetir segun sea necesario hasta que la herida haya cicatrizado.

Ejemplo 15: Tejido neoplasico

Un paciente presenta ya sea un tumor o proceso benigno o maligno. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico. El APEX se puede utilizar in vivo o in vitro para iniciar o inducir la muerte de las celulas tumorales.

Especfficamente, el APEX se inyecta en un tumor solido con gufa CT o MRI a traves de un pequeno cateter. Alternativamente, las celulas cancerosas despues de ser cultivadas en un medio de APEX podrfan ser reintroducidas de nuevo en el cuerpo para atacar y matar el tumor restante. Sin la intencion de ser limitado por la teorfa, se plantea la hipotesis de que los medios de APEX tiene ya sea la capacidad de causar apoptosis de celulas tumorales (muerte celular) in vivo o puede tener la capacidad de transformar las celulas cancerosas en celulas normales.

Ejemplo 16: Infecciones

Un paciente presenta una infeccion superficial o profunda. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

La zona de la infeccion se identifica y a continuacion, el APEX se aplica directamente o se introduce percutaneamente. Esto podrfa hacerse bajo anestesia local o general y con o sin gufa de imagen. El APEX por lo general tiene un numero concentrado de globulos blancos junto con plaquetas. Esta combinacion de globulos blancos y plaquetas ya sea controla o elimina una infeccion.

Ejemplo 17: Cultivos celulares de cualquier tejido

Un investigador o clfnico desea cultivar un cultivo celular de ya sea fibroblastos o celulas de cartflago osteoartrftico. Utilizando la tecnica del Ejemplo 1, se obtiene un extracto autologo de plaquetas (APEX) y se estandarizo hasta pH fisiologico.

A continuacion, las celulas se afslan y crecen en un medio rico en el APEX en diversas condiciones y diluciones. El APEX promueve la diferenciacion celular y la produccion de protefnas tales como colageno. El APEX puede aumentar o promover la capacidad de las celulas para transformarse en celulas normales. Sin pretender ser limitado por la teorfa, se supone que el APEX puede convertir las celulas del cartflago osteoartrftico a una lfnea celular mas funcional que se 5 reinyecta en una articulacion enferma o lesionada. Alternativamente, el APEX se introduce directamente en una articulacion osteoartrftica para invertir el curso de la enfermedad. Esto se hace bajo anestesia local de una manera esteril.

Por ultimo, el APEX se puede utilizar para ayudar a cultivar y diferenciar cualquier tejido o lfnea celular in vivo o in vitro.

Claims

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1. Uso de una composicion de plasma rico en plaquetas en la preparacion de un medicamento para tratar una lesion tisular en un individuo introduciendo dicha composicion de plasma rico en plaquetas en y al rededor del sitio de lesion tisular, en donde el medicamento no comprende un activador exogeno.
2. El uso de la reivindicacion 1, en donde el tejido se selecciona del grupo que consiste en tejido conectivo, musculo cardfaco, musculo esqueletico, material de disco, un cuerpo vertebral, cerebro, medula espinal y tejido vascular.
3. El uso de la reivindicacion 1, en donde el tejido es una parte de un organo interno.
4. El uso de la reivindicacion 2, en donde el tejido es un tejido conectivo.
5. El uso de la reivindicacion 3, en donde el organo interno es el pancreas.
6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el plasma rico en plaquetas tiene un pH de 7.3 a 7.5.
7. El uso de la reivindicacion 6, en donde el pH del plasma rico en plaquetas se ajusta utilizando una solucion reguladora de bicarbonato.
8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la composicion de plasma rico en plaquetas comprende plaquetas obtenidas a partir del individuo.
9. Una composicion de plasma rico en plaquetas para uso en el tratamiento de un tejido lesionado que consiste en: plasma rico en plaquetas; y

un agente de ajuste del pH que proporciona un pH de 7.3 a 7.5,

en donde la composicion de plasma rico en plaquetas no contiene un activador del plasma rico en plaquetas.
10. La composicion de plasma rico en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en donde el agente de ajuste de pH es una solucion reguladora de bicarbonato.
11. La composicion de plasma rico en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 9 o 10, en donde un plasma utilizado para el plasma rico en plaquetas procede de una fuente autologa.
12. Una composicion de plasma rico en plaquetas para uso en el tratamiento de un tejido lesionado mediante la introduccion de dicha composicion de plasma rico en plaquetas dentro y al rededor del sitio de lesion tisular, en donde la composicion no contiene un activador exogeno.
13. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 9 o 12, en donde el tejido lesionado se selecciona del grupo que consiste en tejido conectivo, musculo cardfaco, musculo esqueletico, material de disco, un cuerpo vertebral, cerebro, medula espinal y tejido vascular.
14. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 9 o 12, en donde el tejido lesionado es una parte de un organo interno.
15. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 13, en donde el tejido lesionado es un tejido conectivo.
16. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 14, en donde el organo interno es el pancreas.
17. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 12, en donde la composicion se titula para obtener un pH de 7.3 a 7.5.
18. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 17, en donde la titulacion se realiza utilizando solucion reguladora de bicarbonato.
19. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 12, en donde la composicion rica en plaquetas comprende plaquetas obtenidas a partir de una fuente autologa.
20. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 9 o 12, para uso como una composicion inyectable.
21. La composicion rica en plaquetas para uso de acuerdo con la reivindicacion 20, en donde la composicion inyectable esta en una jeringa.