ES2610821T3

ES2610821T3 - Formulaciones de anticuerpos anti-CD20

Info

Publication number: ES2610821T3
Application number: ES08781323.4T
Authority: ES
Inventors: Charlene E. Brisbane; Amol Sharad Ketkar; Ulla Tove Lashmar
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2007-07-06
Filing date: 2008-07-03
Publication date: 2017-05-03
Anticipated expiration: 2028-07-03
Also published as: CN101820912B; HK1141979A1; TR201802928T4; CY1118419T1; PL2889310T3; TW201623334A; NO2021036I1; PE20090738A1; SI2889310T1; EP2889310B1; EP2170388A1; US20150158951A1; LT2889310T; US20110020328A1; TWI515204B; JP2011526880A; BRPI0814003A2; CY1120047T1; EP2889310A1; CL2008001984A1

Abstract

Formulación de anticuerpo anti-CD20 que comprende ofatumumab 20-300 mg/ml, en la que la formulación comprende además acetato de sodio de 10 a 100 mM, cloruro de sodio de 25 a 100 mM, base libre de arginina a del 0,5 al 5%, EDTA de 0,02 a 0,2 mM, polisorbato 80 a del 0,01 al 0,2% y ajustada a pH 5,0 a 7,0.

Description

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DESCRIPCION

Formulaciones de anticuerpos anti-CD20 Campo de la invencion

Esta invencion se refiere a formulaciones de anticuerpos estables a la temperatura y la cizalladura.

Antecedentes de la invencion

Las protelnas son mas grandes y mas complejas que los farmacos organicos e inorganicos tradicionales (es decir, tienen multiples grupos funcionales ademas de estructuras tridimensionales complejas) y la formulacion de dichas protelnas tiene problemas especiales. Para que una protelna siga siendo biologicamente activa, una formulacion debe conservar la integridad conformacional intacta de al menos una secuencia central de los aminoacidos de la protelna, mientras que al mismo tiempo debe proteger los multiples grupos funcionales de la protelna frente a la degradation. Las rutas de degradation para las protelnas pueden implicar inestabilidad qulmica (es decir, cualquier proceso que implique la modification de la protelna por formation o escision de enlace, que da como resultado una nueva entidad qulmica) o inestabilidad flsica (es decir, cambios en la estructura de orden superior de la protelna). La inestabilidad qulmica puede resultar de la desamidacion, racemizacion, hidrolisis, oxidation, beta-elimination o intercambio de disulfuro. La inestabilidad flsica puede resultar de la desnaturalizacion, agregacion, precipitation o adsorcion, por ejemplo. Las tres rutas de degradacion de protelnas mas comunes son la agregacion de protelnas, desamidacion y oxidacion. Cleland et al. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377 (1993).

La molecula CD20 (tambien llamada antlgeno de diferenciacion restringido a los linfocitos B o Bp35) es una protelna transmembrana hidrofoba con un peso molecular de aproximadamente 35 kD localizada en prelinfocitos B y linfocitos B maduros (Valentine et al. (1989) J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287; y Einfield et al. (1988) EMBO J. 7(3):711-717). CD20 se encuentra en la superficie de mas de 90% de las celulas B de la sangre periferica u organos linfoides y se expresa durante el desarrollo temprano de las precelulas B y permanece hasta la diferenciacion de las celulas plasmaticas. CD20 esta presente tanto en celulas B normales como en celulas B malignas. En particular, CD20 se expresa en mas de 90% de los linfomas no Hodgkin de celulas B (LNH) (Anderson et al. (1984) Blood 63(6):1424-1433), pero no se encuentra en celulas madre hematopoyeticas, procelulas B, celulas plasmaticas normales, u otros tejidos normales (Tedder et al. (1985) J. Immunol. 135(2):973-979).

La region carboxilo terminal de 85 aminoacidos de la protelna CD20 esta situada dentro del citoplasma. La longitud de esta region contrasta con la de otras estructuras de superficie especlficas de celulas B tales como las cadenas pesadas de IgM, IgD e IgG o cadenas alfa o beta de los antlgenos de histocompatibilidad de clase II, que tienen regiones intracitoplasmaticas relativamente cortas de 3, 3, 28, 15 y 16 aminoacidos, respectivamente (Komaromy et al. (1983) NAR 11:6775-6785). De los ultimos 61 aminoacidos carboxilo terminales, 21 son restos acidos, mientras que solo 2 son basicos, lo que indica que esta region tiene una fuerte carga negativa neta. El n° de acceso a GenBank es NP.sub.--690605.

Se cree que CD20 puede estar implicada en la regulation de una(s) etapa(s) temprana(s) en el proceso de activation y diferenciacion de celulas B (Tedder et al. (1986) Eur. J. Immunol. 16:881-887) y podrla funcionar como un canal de iones calcio (Tedder et al. (1990) J. Cell. Biochem. 14D:195).

A pesar de la incertidumbre sobre la funcion real de CD20 en la promotion de la proliferation y/o diferenciacion de celulas B, proporciona un objetivo importante para la terapia mediada por anticuerpos para controlar o matar celulas B implicadas en canceres y trastornos autoinmunes. En particular, la expresion de CD20 en celulas tumorales, p. ej., LNH, hace que sea un objetivo importante para la terapia mediada por anticuerpos para dirigir especlficamente agentes terapeuticos contra las celulas neoplasicas positivas para CD20. El documento US 2006/0246004 A1 da a conocer una formulacion llquida de multiples dosis que comprende el anticuerpo hu2H7 a 40 mg/ml, un anticuerpo humanizado que se une a CD20 humana, acetato 2,5 mM, trehalosa 150 mM, alcohol bencllico al 0,9%, polisorbato 20 al 0,02% a pH de 5,0 que tiene una semivida minima de dos anos de almacenamiento a 2-8°C y que puede usarse en el tratamiento de tumores malignos de celulas B y enfermedades autoinmunes.

HuMax-CD20™ (ofatumumab), descrito como anticuerpo 2F2 en el documento WO2004/035607, es un anticuerpo de alta afinidad IgG1,K totalmente humano dirigido a la molecula CD20 en la membrana celular de celulas B. HuMax- CD20™ esta en desarrollo clinico para el tratamiento del linfoma no Hodgkin (LNH), leucemia linfocitica cronica (LLA) y artritis reumatoide (AR). Vease tambien, Teeling et al., Blood, 104, pag. 1793 (2004); y Teeling et al., J. Immunology, 177, pags. 362-371 (2007).

Existe la necesidad de formular una formulacion farmaceutica estable a la temperatura y la cizalladura que comprenda un anticuerpo que sea adecuado para uso terapeutico. En una realizacion, el anticuerpo puede ser un

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anticuerpo monoclonal. En otra realizacion el anticuerpo puede ser un anticuerpo anti-CD20, incluyendo pero no limitado a ofatumumab, rituximab, tositumomab, ocrelizumab (2H7.v16), 11B8 o 7D8 (descrito en el documento WO2004/035607), un anticuerpo anti-CD20 descrito en el documento WO 2005/103081 tal como C6, un anticuerpo anti-CD descrito en el documento WO2003/68821 tal como IMMU-106 (de Immunomedics), un anticuerpo anti-CD20 descrito en el documento WO2004/103404 tal como AME-133 (de Applied Molecular Evolution/Lilly) y un anticuerpo anti-CD20 descrito en el documento US 2003/0118592 tal como TRU-015 (de Trubion Pharmaceuticals Inc).

Breve descripcion de la invencion

La presente invencion se refiere a una formulacion acuosa de anticuerpo estable a la temperatura y la cizalladura.

En un aspecto, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de ofatumumab, en la que la formulacion comprende ademas acetato de sodio de 10 a 100 mM, cloruro de sodio de 25 a 100 mM, base libre de arginina a del 0,5 al 5%, EDTA de 0,02 a 0,2 mM, polisorbato 80 a del 0,01 al 0,2% y ajustada a pH de 5,0 a 7,0.

En una realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab que comprende un ofatumumab en el intervalo de concentracion de 20-300 mg/ml, en el que la formulacion comprende ademas acetato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 51 mM, base libre de arginina al 1%, EDTA 0,05 mM, polisorbato 80 al 0,02%, y ajustada a pH 5,5.

En otra realizacion mas, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20, en la que la formulacion es estable durante al menos 2 anos. En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti- CD20, en la que la formulacion es estable a temperaturas de hasta al menos 55°C. En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20, en la que la formulacion es estable a una temperatura de aproximadamente 5°C durante al menos 2 anos. En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20, en la que la formulacion es estable a una temperatura de aproximadamente 25°C durante al menos 3 meses. En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20, en la que la formulacion es estable a una temperatura de aproximadamente 40°C durante al menos 1 mes. En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20, en la que la formulacion es estable a una temperatura de aproximadamente 55°C durante al menos 1 dla. En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20 en la que la formulacion es estable en un intervalo de temperaturas de aproximadamente 5 a 25°C, 5 a 35°C, 5 a 45°C, 10 a 25°C, 10 a 35°C, 10 a 45°C, 10 a 55°C, 20 a 35°C, 20 a 45°C o 20 a 55°C durante al menos 1 dla, con agitacion.

En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab en la que el anticuerpo esta presente en una cantidad de aproximadamente 20-300 mg/ml, 50-300 mg/ml, 100-300 mg/ml, 150-300 mg/ml, 200-300 mg/ml o 250-300 mg/ml.

En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de anticuerpo anti-CD20 en la que el acetato de sodio esta presente en una cantidad de aproximadamente 50 mM, 40 mM, 45 mM, 55 mM o 60 mM. En otras realizaciones, el acetato de sodio puede estar presente en una cantidad de 10 a 100 mM, 20 a 100 mM, 30 a 100 mM, 40 a 100 mM, 50 a 100 mM, 60 a 100 mM, 70 a 100 mM, 25 a 80 mM o 30 a 70 mM.

En otra realizacion mas, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab en la que el acido acetico esta presente (acido acetico aproximadamente 100 mM) para ajustar la formulacion a pH aproximadamente 5,5. En otras realizaciones, el pH puede ajustarse a pH 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 o 7,0. En otras realizaciones mas de la invencion, se usa NaOH o HCl para ajustar el pH a 5,0, 5,5, 6,0, 6,5 o 7,0.

En otra realizacion mas, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab en la que el cloruro de sodio esta presente en una cantidad de aproximadamente 51 mM, 45 mM, 46 mM, 47 mM, 48 mM, 49 mM, 50 mM, 52 mM, 53 mM, 54 mM, 55 mM. En otras realizaciones, el cloruro de sodio puede estar presente en una cantidad de 25 a 100 mM, 35 a 90 mM, 45 a 80 mM, 25 a 70 mM o 45 a 70 mM.

En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab en la que la base libre de arginina esta presente en una cantidad de aproximadamente el 1%, el 0,7%, el 1,3% o el 2,0%. En otras realizaciones, la base libre de arginina puede estar entre el 0,5 y el 5,0%, del 0,5 al 2,0%, del 0,5 al 2,5%, del 0,5 al 3,0%, del 0,5 al 3,5%, del 0,5 al 4,0% o del 0,5 al 4,5%.

En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab en la que el EDTA esta presente en una cantidad de aproximadamente 0,05 mM, 0,03 mM, 0,04 mM o 0,06 mM. En otras realizaciones, el EDTA puede estar presente en una cantidad de 0,02 mM - 0,2 mM, 0,02 mM - 0,1 mM, 0,02 mM - 0,15 mM, 0,04 mM - 0,1 mM, 0,03 mM - 0,15 mM o 0,03 mM - 0,2 mM.

En otra realizacion, la invencion se refiere a una formulacion de ofatumumab en la que el polisorbato 80 esta

presente en una cantidad de aproximadamente el 0,02%, el 0,015% o el 0,025%. En otras realizaciones, el polisorbato 80 puede estar presente en una cantidad del 0,01 - 0,2%, 0,01 - 0,15%, 0,02 - 0,2%, 0,02 - 0,15%, 0,01 - 0,25% o 0,01 - 0,05%.

Se describe un metodo de tratamiento de una enfermedad que implica celulas que expresan CD20 por 5 administracion a un mamlfero de una formulacion de ofatumumab de la presente invencion que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de ofatumumab, en la que la formulacion comprende ademas acetato de sodio de 10 a 100 mM, cloruro de sodio de 25 a 100 mM, base libre de arginina a del 0,5 al 5%, EDTA de 0,02 a 0,2 mM, polisorbato 80 a del 0,01 al 0,2% y ajustada a pH de 5,0 a 7,0. Las “enfermedades que implican celulas que expresan CD20” a modo de ejemplo que pueden tratarse (p.ej., mejorarse) o prevenirse incluyen, pero no se limitan 10 a enfermedades tumorigenicas y enfermedades inmunes, p. ej., enfermedades autoinmunes. Los ejemplos de enfermedades tumorigenicas que pueden tratarse y/o prevenirse incluyen linfoma de celulas B, p. ej. LNH, leucemia/linfoma linfoblastico de celulas B precursoras y neoplasmas de celulas B maduras, tal como leucemia linfocltica cronica de celulas B (LLC)/linfoma linfocltico pequeno (LLP), leucemia prolinfocltica de celulas B, linfoma linfoplasmacltico, linfoma de celulas del manto (LCM), linfoma folicular (LF), incluyendo LF de grado bajo, grado 15 intermedio y grado alto, linfoma del centro del follculo cutaneo, linfoma de celulas B de zona marginal (tipo MALT, tipo nodal y esplenico), tricoleucemia, linfoma de celulas B grandes y difusas, linfoma de Burkitt, plasmacitoma, mieloma de celulas plasmaticas, trastorno linfoproliferativo postrasplante, macroglobulinemia de Waldenstrom y linfoma anaplasico de celulas grandes (LACG). Los ejemplos de trastornos inmunes en los que estan implicados celulas B que expresan CD20 que pueden tratarse y/o prevenirse incluyen psoriasis, artritis psoriasica, dermatitis, 20 esclerodermia sistemica y esclerosis, enfermedad inflamatoria del intestino (EII), enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, slndrome de dificultad respiratoria, meningitis, encefalitis, uveitis, glomerulonefritis, eccema, asma, aterosclerosis, deficiencia de adhesion leucocitaria, esclerosis multiple, slndrome de Raynaud, slndrome de Sjogren, diabetes de inicio juvenil, enfermedad de Reiter, enfermedad de Behcet, nefritis por inmunocomplejo, nefropatia IgA, polineuropatias IgM, trombocitopenias inmunomediadas, tales como purpura trombocitopenica idiopatica aguda y 25 purpura trombocitopenica idiopatica cronica, anemia hemolitica, miastenia grave, nefritis por lupus, lupus eritematoso sistemico, artritis reumatoide (AR), dermatitis atopica, penfigo, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, granulomatosis de Wegener, sindrome de Omenn, insuficiencia renal cronica, mononucleosis infecciosa aguda, VIH y enfermedades asociadas con el virus del herpes. Otros ejemplos son sindrome de dificultad respiratoria grave y coriorretinitis. Otros ejemplos mas son enfermedades y trastornos causados por infeccion de 30 celulas B con virus, tales como el virus de Epstein-Barr (VEB). Otro ejemplo mas es la EPOC.

Se describe un metodo de tratamiento de una enfermedad que implica celulas que expresan CD20 por

administracion a un mamifero de una formulacion de ofatumumab de la presente invencion que comprende una

cantidad terapeuticamente eficaz de ofatumumab, en la que la formulacion comprende ademas acetato de sodio de 10 a 100 mM, cloruro de sodio de 25 a 100 mM, base libre de arginina a del 0,5 al 5%, EDTA de 0,02 a 0,2 mM, 35 polisorbato 80 a del 0,01 al 0,2% y ajustada a pH de 5,0 a 7,0, y en la que la formulacion de anticuerpo estable se administra por via oral, parenteral, intranasal, vaginal, rectal, lingual, sublingual, bucal, transdermica, intravenosa o subcutanea a un mamlfero.

administracion a un mamlfero de una formulacion de ofatumumab de la presente invencion que comprende

40 ofatumumab en el intervalo de concentration de 20-300 mg/ml, en la que la formulacion comprende ademas acetato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 51 mM, base libre de arginina al 1%, EDTA 0,05 mM, polisorbato 80 al 0,02%, y ajustada a pH 5,5.

Debe entenderse que tanto la description del sumario anterior como la siguiente description detallada son ilustrativas y explicativas, y no se pretende que proporcionen mas explication de la invencion tal como se reivindica.

45 Los dibujos que acompanan se incluyen para proporcionar una mejor comprension de la invencion, y se incorporan en y constituyen una parte de el presente documento descriptiva, ilustran varias realizaciones de la invencion, y junto con la descripcion sirven para explicar los principios de la invencion.

Breve descripcion de las figuras

La figura 1 ilustra la formulacion convencional (RefMat) de anticuerpo anti-CD20 a 20 mg/ml (citrato 30 mM, NaCl 50 100 mM, pH 6,5) por duplicado.

La figura 2 ilustra una realization de la formulacion de la invencion (de plataforma) del anticuerpo anti-CD20 a 20 mg/ml (acetato de sodio 50 mM, cloruro de sodio (51 mM), base libre de arginina al 1%, EDTA 0,05 mM, polisorbato 80 al 0,02% y ajustada a pH 5,5 con HCl) por duplicado.

La figura 3 ilustra graficamente una comparacion de la estabilidad termica del anticuerpo anti-CD20 en una 55 realizacion de formulacion de la invencion (PlatForm) y tampones de formulacion convencionales (RefMat) por DSC.

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Termodinamicamente, las dos formulaciones son similares tal como puede observarse por sus perfiles de DSC, puesto que el cambio en la Tm aparente es menor de 0,5°C entre las formulaciones.

Descripcion detallada de la invencion

Una realization de la presente invencion se refiere a formulaciones de anticuerpo estables a la temperatura y la cizalladura.

En una realizacion, la invencion proporciona una estabilidad inesperada observada para una formulation en condiciones simultaneas de estres de temperatura elevada y agitation a 55°C.

Otra realizacion de la invencion es una formulacion mas estable en comparacion con una formulacion convencional (tal como citrato 30 mM, NaCl 100 mM, pH 6,5). La formulacion de la presente invencion mostraba menor precipitation (permanecla transparente) cuando se sometla a condiciones de estres, mientras que la formulacion convencional se agregaba. Este resultado era impredecible porque termodinamicamente las dos formulaciones son similares tal como se observa por sus perfiles de DSC (calorimetrla diferencial de barrido).

En la descripcion de la presente invencion, algunos terminos se usan tal como se definen a continuation.

La expresion “formulacion de protelna” o “formulacion de anticuerpo” se refiere a preparaciones que estan en una forma tal que permite que la actividad biologica de los principios activos sea inequlvocamente eficaz, y que no contienen componentes adicionales que sean toxicos para los sujetos a los que se administrarla la formulacion.

Excipientes “farmaceuticamente aceptables” (vehlculos, aditivos) son los que pueden administrarse razonablemente a un sujeto mamlfero para proporcionar una dosis eficaz del principio activo empleado. Por ejemplo, la concentration del excipiente tambien es relevante para la aceptabilidad para inyeccion.

Una formulacion “estable” es una en la que la protelna en la misma retiene esencialmente su estabilidad flsica y/o qulmica y/o actividad biologica tras el almacenamiento. En la tecnica estan disponibles diversas tecnicas anallticas para medir la estabilidad de la protelna y se revisan en Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N.Y., Pubs (1991) y Jones, A., Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993), por ejemplo. La estabilidad puede medirse a una temperatura seleccionada durante un periodo de tiempo seleccionado. Preferiblemente, la formulacion es estable a temperatura ambiental o a 40°C durante al menos 1 mes y/o estable a 2-8°C durante al menos 1 a 2 anos. Ademas, es deseable que la formulacion sea estable despues de congelation (p. ej. a -70°C) y descongelacion del producto.

Una protelna “retiene su estabilidad flsica” en una formulacion biofarmaceutica si muestra pocos o ningun cambio en la agregacion, precipitacion y/o desnaturalizacion cuando se observa por examen visual del color y/o la transparencia, o cuando se mide por difraccion de luz UV (mide agregados visibles) o por cromatografla de exclusion molecular (SEC). SEC mide agregados solubles que no son necesariamente un precursor para agregados visibles.

Una protelna “retiene su estabilidad qulmica” en una formulacion biofarmaceutica, si la estabilidad qulmica en un momento dado es tal que se considera que la protelna retiene su actividad biologica tal como se define a continuacion. Las especies qulmicamente degradadas pueden ser biologicamente activas y qulmicamente inestables. La estabilidad qulmica puede evaluarse detectando y cuantificando formas de la protelna qulmicamente alteradas. La alteration qulmica puede implicar modification de tamano (p. ej., corte) que puede evaluarse usando SEC, SDS-PAGE y/o espectrometrla de masas con ionization por desorcion laser asistida por matriz/tiempo de vuelo (MALDI/TOF EM), por ejemplo. Otros tipos de alteracion qulmica incluyen alteracion de carga (p. ej., que se produce como resultado de desamidacion) que puede evaluarse por cromatografla de intercambio ionico, por ejemplo.

Un anticuerpo “retiene su actividad biologica” en una formulacion farmaceutica, si el cambio en la actividad biologica del anticuerpo en un momento dado esta dentro de aproximadamente el 10% (dentro del error del ensayo) de la actividad biologica que presentaba en el momento en que se preparo la formulacion farmaceutica, tal como se determina en un ensayo de union a antlgeno, por ejemplo. A continuacion se elaboran otros ensayos de “actividad biologica” para anticuerpos en el presente documento.

El termino “isotonico” significa que la formulacion de interes tiene esencialmente la misma presion osmotica que la sangre humana. En una realizacion, las formulaciones isotonicas de la invencion en general tendran una presion osmotica en el intervalo de 250 a 350 mOsm. En otras realizaciones, las formulaciones isotonicas de la invencion tendran una presion osmotica de desde aproximadamente 350 hasta 450 mOsm. En otra realizacion mas, las formulaciones isotonicas de la invencion tendran una presion osmotica por encima de 450 mOsm. La isotonicidad puede medirse usando un osmometro de tipo congelacion o presion de vapor, por ejemplo.

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Tal como se usa en el presente documento, “tampon” se refiere a una disolucion tamponada que resiste cambios en el pH por accion de sus componentes de conjugado de acido-base. En una realization, el tampon de esta invention tiene un pH en el intervalo de desde aproximadamente 4,5 hasta aproximadamente 6,0; en otra realizacion, desde aproximadamente 4,8 hasta aproximadamente 5,8; y en una realizacion mas, un pH de aproximadamente 5,5. Los ejemplos de tampones que controlaran el pH en este intervalo incluyen acetato (p. ej. acetato de sodio), succinato (tal como succinato de sodio), gluconato, histidina, citrato y otros tampones de acidos organicos. Cuando se desea una formation estable a la congelacion-descongelacion, preferiblemente el tampon no es fosfato.

En un sentido farmacologico, en el contexto de la presente invencion, una “cantidad terapeuticamente eficaz” de un anticuerpo se refiere a una cantidad eficaz en la prevention o el tratamiento de un trastorno para el tratamiento del cual el anticuerpo es eficaz. Un “trastorno” es cualquier estado que se beneficiarla del tratamiento con el anticuerpo. Esto incluye trastornos o enfermedades cronicas y agudas que incluyen las estados patologicos que predisponen al mamlfero al trastorno en cuestion. En una realizacion preferida “trastorno” es una enfermedad que implica celulas que expresan CD20.

Un “conservante” es un compuesto que puede incluirse en la formulation para reducir esencialmente la accion bacteriana en la misma, facilitando as! la production de una formulacion de multiples usos, por ejemplo. Los ejemplos de posibles conservantes incluyen cloruro de octadecildimetilbencilamonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio (una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio en los que los grupos alquilo son compuestos de cadena larga) y cloruro de bencetonio. Otros tipos de conservantes incluyen alcoholes aromaticos tales como fenol, alcohol butllico y bencllico, alquilparabenos tales como metil o propilparabeno, catecol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol y m-cresol. El conservante mas preferido en el presente documento es alcohol bencllico.

El termino “anticuerpo” se usa en el sentido mas amplio y cubre especlficamente anticuerpos monoclonales (incluyendo anticuerpos monoclonales de longitud completa), anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespeclficos (p. ej., anticuerpos biespeclficos), y fragmentos de anticuerpos siempre que presenten la actividad biologica deseada.

Los “fragmentos de anticuerpos” comprenden una parte de un anticuerpo de longitud completa, en general la region de union a antlgeno o variable. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; moleculas de anticuerpo de cadena sencilla; y anticuerpos multiespeclficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

El termino “anticuerpo monoclonal” tal como se usa en el presente documento se refiere a un anticuerpo obtenido de una poblacion de anticuerpos sustancialmente homogenea, es decir, los anticuerpos individuales que comprende la poblacion son identicos salvo por las posibles mutaciones que se producen de manera natural que pueden estar presentes en cantidades minoritarias. Los anticuerpos monoclonales son altamente especlficos, estando dirigidos contra un unico sitio antigenico. Ademas, a diferencia de las preparaciones de anticuerpo (policlonal) convencionales que incluyen normalmente diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epltopos), cada anticuerpo monoclonal esta dirigido contra un unico determinante en el antlgeno. El modificador “monoclonal” indica el caracter del anticuerpo tal como se obtiene de una poblacion de anticuerpos sustancialmente homogenea, y no debe considerarse que requiere la produccion del anticuerpo por ningun metodo particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que van a usarse de acuerdo con la presente invencion pueden prepararse por el metodo del hibridoma descrito por primera vez por Kohler et al., Nature 256:495 (1975), o pueden prepararse por metodos de ADN recombinante (vease, p. ej., la patente estadounidense n° 4.816.567). Los “anticuerpos monoclonales” tambien pueden aislarse de bibliotecas de anticuerpos en fagos usando la tecnica descrita en Clackson et al., Nature 352:624-626 (1991) y Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), por ejemplo.

Las formas “humanizadas” de anticuerpos no humanos (p. ej. murinos) son anticuerpos quimericos que contienen una secuencia minima derivada de inmunoglobulina no humana. Para la mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las que los residuos de una region hipervariable del receptor se sustituyen por residuos de una region hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donador) tal como raton, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunos casos, los residuos de la FR de la inmunoglobulina humana se sustituyen por los correspondientes residuos no humanos. Ademas, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no se encuentran en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donador. Estas modificaciones se hacen para refinar mas el rendimiento del anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprendera sustancialmente todos de al menos uno y normalmente dos dominios variables, en los que todas o sustancialmente todas las regiones hipervariables corresponden a las de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado opcionalmente tambien comprendera al menos una parte de una region constante de inmunoglobulina (Fc), normalmente la de una inmunoglobulina humana. Para mas detalles, vease Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); y Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992).

Los fragmentos de anticuerpo “Fv de cadena sencilla” o “sFv” comprenden el dominio Vh y Vl del anticuerpo, en los

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que estos dominios estan presentes en una unica cadena de polipeptido. En general, el polipeptido Fv comprende ademas un ligador polipeptldico entre los dominios Vh y Vl que permite que el SFv forme la estructura deseada para la union al antlgeno. Para una revision de sFv vease Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, N.Y., pags. 269-315 (1994).

El termino “diacuerpos” se refiere a fragmentos pequenos de anticuerpo con dos sitios de union a antlgeno, cuyos fragmentos comprenden un dominio variable de la cadena pesada (Vh) conectado a un dominio variable de la cadena ligera (Vl) en la misma cadena de polipeptido (Vh y Vl). Usando un ligador que es demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios se fuerzan a emparejarse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de union a antlgeno. Los diacuerpos se describen con mas detalle, por ejemplo en el documento EP 404.097; WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993).

La expresion “anticuerpos lineales” cuando se usa a lo largo de esta solicitud se refiere a los anticuerpos descritos en Zapata et al. Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995). Brevemente, estos anticuerpos comprenden un par de segmentos Fd en tandem (Vh --Ch --Vh1 --Ch1) que forman un par de regiones de union a antlgeno. Los anticuerpos lineales pueden ser biespeclficos o monoespeclficos.

El anticuerpo que se formula preferiblemente es esencialmente puro y de manera deseable esencialmente homogeneo (es decir, libre de protelnas contaminantes, etc.). Anticuerpo “esencialmente puro” significa una composicion que comprende al menos aproximadamente el 90% en peso del anticuerpo, basado en el peso total de la composicion, preferiblemente al menos aproximadamente el 95% en peso. Anticuerpo “esencialmente homogeneo” significa una composicion que comprende al menos aproximadamente el 99% en peso del anticuerpo, basado en el peso total de la composicion.

“Tratamiento” se refiere tanto al tratamiento terapeutico como profilactico o medidas preventivas. Los que necesitan tratamiento incluyen aquellos que ya tienen el trastorno as! como aquellos en los que va a prevenirse el trastorno.

“Mamlfero” para los fines del tratamiento se refiere a cualquier animal clasificado como mamlfero, incluyendo, pero no limitado a seres humanos, animales domesticos y de granja, y animales de zoologico, deportes o mascotas, tales como perros, caballos, gatos y vacas.

“Condicion de estres” se refiere a un entorno que es qulmica y flsicamente desfavorable para una protelna y puede hacer inaceptable la estabilidad de la protelna (p. ej., estres termico, de cizalladura, qulmico).

La cromatografla de exclusion molecular es un metodo cromatografico en el que las partlculas se separan basandose en su tamano o volumen hidrodinamico.

La dispersion de luz dinamica es un metodo que mide la dependencia con el tiempo de la luz dispersada por la protelna. Normalmente, esta dependencia del tiempo se procesa para dar el radio hidrodinamico de una molecula.

“DSC” se refiere a calorlmetro diferencial de barrido: Parametros de adquisicion de DSC: pueden ser, pero no se limitan a protelna 1 mg/ml, barrido de 5 a 80°C con una velocidad de barrido de 70°C por hora y 15 minutos de espera entre barridos. Se puede adquirirse en primer lugar un barrido de tampon-tampon y despues restarlo de los datos sin procesar. Los datos pueden corregirse para el tampon y normalizarse para la concentracion de protelna y despues representarse graficamente. La agregacion puede prevenir la correccion inicial.

Los siguientes ejemplos son una ilustracion adicional de la invencion. No se pretende que los ejemplos limiten el alcance de la presente invencion, y proporcionan una mayor comprension de la invencion.

Ejemplos

La invencion se ilustra con mas detalle mediante los siguientes ejemplos que son para dilucidar la invencion. No se pretende, y no debe considerarse, que estos ejemplos limiten el alcance de la invencion. Los siguientes ejemplos se llevan a cabo usando tecnicas convencionales y tales tecnicas convencionales las conocen bien y son rutinarias para los expertos en la tecnica, excepto cuando se describa otra cosa en detalle.

Ejemplo 1.1: Preparacion del tampon de la formulacion de plataforma

En una realizacion de la invencion, se prepararon 4 litros de tampon acetato. En esta realizacion, el tampon final comprendla acetato de sodio 50 mM, EDTA 0,05 mM, NaCl 51 mM, arginina al 1,0%, polisorbato 80 al 0,02%, pH 5,5. El tampon se preparo disolviendo acetato de sodio trihidratado, edetato de sodio (EDTA), polisorbato 80 y base libre de L-arginina en 3,5 litros de agua desionizada. Una vez ajustado el pH a 5,5 usando HCl 3 N, se llevo el

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volumen a 4,0 litros y el tampon se filtro usando una unidad de filtro de 0,45 pm. Entonces el tampon puede almacenarse a 2-8°C hasta su uso. El “%” de la formulacion descrito en la presente solicitud se refiere a “% en volumen”.

Ejemplo 2.1: Preparacion de ofatumumab en un tampon de la formulacion de plataforma

En una realizacion de la invencion, se sometio a diafiltracion el ofatumumab en una formulacion de plataforma (acetato de sodio 50 mM, NaCl 51 mM, EDTA 0,05 mM, polisorbato 80 al 0,02%, arginina al 1,0% (base libre)), y se concentro para la estabilidad. Se sometio a diafiltracion el ofatumumab en la formulacion de plataforma usando un sistema de flujo tangencial a escala de laboratorio con tres membranas. Despues de la diafiltracion en el tampon de plataforma, se concentro el ofatumumab hasta una concentracion maxima de 179 mg/ml. El procedimiento completo tardaba aproximadamente tres dlas de trabajo en completarse y el rendimiento era del 96,1%. Parte de los 179 mg/ml se diluyeron con el tampon de la formulacion de plataforma de modo que podia estudiarse un intervalo de concentraciones de ~20 - 179 mg/ml.

Ejemplo 3.1: Preparacion de ofatumumab en formulacion convencional y de plataforma para la comparacion directa del aspecto general (AG)

Se preparo un anticuerpo anti-CD20 (ofatumumab) en la formulacion convencional y la formulacion de plataforma (una realizacion de la presente invencion) a una concentracion de 20 mg/ml para la comparacion directa del aspecto general a lo largo de un periodo de tiempo de 12 semanas y para los experimentos de agitacion. El anticuerpo anti- CD20 en las formulaciones convencional y de plataforma se filtro usando un filtro de membrana de 0,2 pm de baja union de protelna. Despues de la filtracion, se cargo cada formulacion a 3 ml en viales de 5 cc, se taparon y doblaron hacia dentro, usando una tecnica esteril en la campana limpia. Se pusieron dos viales de cada formulacion en un agitador con control de temperatura. Se agitaron los viales a 325 rpm a una temperatura de 55°C. Durante la agitacion con calentamiento, se observo el aspecto general, tal como se describe en el ejemplo 3.2, de manera periodica a lo largo de un periodo de tiempo de 42 horas. Las figuras 1 y 2 muestran las formulaciones convencional y de plataforma, respectivamente, despues de 18,5 horas de agitacion con calor. Los resultados del aspecto general del estudio de agitacion indicaban que la formulacion convencional generara partlculas a lo largo del tiempo cuando se somete a agitacion a temperaturas de 55°C mas rapidamente que la formulacion de plataforma.

Ejemplo 3.2: AG, Estudio de agitacion de 18,5 h - Aspecto general de ofatumumab, 20 y 100 mg/ml

En la tabla a continuation se presenta el aspecto general (AG) de las muestras en un estudio de agitacion del AcM anti-CD20. El AG se completo usando un metodo general que puede usarse para una disolucion de anticuerpo IgG que describe el color, la transparencia y la materia particulada visible.

Punto de tiempo de la agitacion Aspecto

Inicial

Convencional Transparente, incoloro, 1-2 partlculas presentes Plataforma

_________________________________Transparente, incoloro, sin partlculas_______________________

18,5 horas

Convencional Transparente, incoloro, varias partlculas grandes presentes

______________________plataforma Transparente, incoloro, sin partlculas_______________________

42 horas

Convencional Turbio, incoloro, varias partlculas grandes presentes Plataforma

_________________________________Ligeramente turbio, incoloro, sin partlculas__________________

Ejemplo 4: Para determinar la estabilidad termica de la disolucion de ofatumumab en el tampon convencional y de plataforma por calorimetria diferencia de barrido (DSC).

Con el fin de completar apropiadamente las pruebas por DSC, se adquirieron los barridos de los tampones solos y con proteina. La proteina en las formulaciones convencional y de plataforma se diluyo a 1 mg/ml tal como se presenta en el ejemplo 4.1. Los datos se adquirieron ajustando el dSc a barrido de 5 - 80oC a una velocidad de barrido de 70oC por hora con un equilibrado de 15 minutos antes de cada barrido. El volumen de la celda de muestra de DSC es de ~ 0,5 ml. Despues de adquirir los barridos del tampon y la proteina, podian restarse entonces los

barridos del tampon del barrido de la protelna. Se obtuvo una concentracion de la protelna en las muestras para corregir la concentracion en cada barrido (vease, ejemplo 4.2). Se obtuvieron los valores de Tun, °C, inicio del desplegamiento, Tm, °C, temperatura de desnaturalizacion (al maximo de transicion) y T1/2, °C, la anchura del pico a la mitad de la altura (refleja los cambios en la estructura terciaria y cooperatividad de las transiciones) para el 5 ofatumumab para cada formulacion (vease, ejemplo 4.3). Los barridos de DSC reales pueden observarse en la figura 3. Basandose en los resultados de DSC, el ofatumumab tanto en la formulacion convencional como en la formulacion de plataforma tenia perfiles de DSC similares y por tanto se esperarla que tuviera estabilidad termica similar.

Ejemplo 4.1: Preparacion de la muestra para la caracterizacion biofisica del estudio de pH de ofatumumab 10 1. Diluciones

pH: Tampon Con. inicial mg/ml Dilucion a 1 mg/ml para DSC



: ml de muestra ml de tampon

6,5 Formulacion convencional: citrato 30 mM, NaCl 100 mM 17 0,1 1,6

5,5 Formulacion de plataforma: acetato 50 mM, NaCl 51 mM, EDTA 0,05 mM, Arg al 1%, Tween-80 al 0,02% 20 0,075 1,43

Ejemplo .4.2: Mediciones de A280

pH: Tampon Con. inicial mg/ml Conc. medida de dilucion de 0,5 mg/ml



: mg/ml mM*

6,5 Formulacion convencional: citrato 30 mM, NaCl 100 mM 17 0,517 0,00345

5,5 Formulacion de plataforma: acetato 50 mM, NaCl 51 mM, EDTA 0,05 mM, Arg al 1%, Tween-80 al 0,02% 20 0,444 0,00296

Preparar una muestra, blanco con el correspondiente tampon, leer 3 veces. Usar una cubeta de 1 cm. Restar la absorbancia a A320 antes de dividir entre el coeficiente de extincion (1,49).

Ejemplo 4.3: Resultados de DSC

Muestra: pH Tampon J 0 1— O Jo 1— O T1/2, °C Notas

Formulacion convencional: 6,5 citrato 30 mM, NaCl 100 mM 62 68,8 2,9*

Formulacion de plataforma: 5,5 acetato 50 mM, NaCl 51 mM, EDTA 0,05 mM, Arg al 1%, Tween-80 al 0,02% 60 68,4 3,2* Similar a la formulacion convencional

* Los valores de T1/2 se determinaron manualmente. La contribucion exotermica de la nivel inicial, por tanto estos valores pueden ser artificialmente pequenos.: agregacion distorsiona el

15 La formulacion de anticuerpo anti-CD20 de la presente invencion puede usarse para tratar a un sujeto con un trastorno tumorigenico, p. ej., un trastorno caracterizado por la presencia de celulas tumorales que expresan CD20 incluyendo, por ejemplo, linfoma de celulas B. p. ej., LNH. Los ejemplos de enfermedades tumorigenicas que pueden tratarse y/o prevenirse incluyen linfoma de celulas B, p. ej. LNH, incluyendo leucemia/linfoma linfoblastico de celulas B precursoras y neoplasmas de celulas B maduras, tal como leucemia linfocltica cronica de celulas B (LLC)/linfoma 20 linfocltico pequeno (LLP), leucemia prolinfocltica de celulas B, linfoma linfoplasmacltico, linfoma de celulas del manto (LCM), linfoma folicular (LF), incluyendo LF de grado bajo, grado intermedio y grado alto, linfoma del centro del follculo cutaneo, linfoma de celulas B de zona marginal (tipo MALT, tipo nodal y esplenico), tricoleucemia, linfoma de celulas B grandes y difusas, linfoma de Burkitt, plasmacitoma, mieloma de celulas plasmaticas, trastorno linfoproliferativo postrasplante, macroglobulinemia de Waldenstrom y linfoma anaplasico de celulas grandes (LACG).

25 Otros ejemplos de linfomas no Hodgkin de celulas B son granulomatosis linfomatoide, linfoma de efusion primaria, linfoma de celulas B grandes intravascular, linfoma de celulas B grandes en mediastino, enfermedades de la cadena pesada (incluyendo enfermedades de gamma, mu y alfa), linfomas inducidos por terapia con agentes inmunosupresores, tales como linfoma inducido por ciclosporina y linfoma inducido por metotrexato.

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Puede usarse una formulacion de anticuerpo anti-CD20 de la presente invencion para tratar el linfoma no Hodgkin.

Los ejemplos de trastornos (enfermedades) inmunes en los que las celulas expresan CD20 que pueden tratarse y/o prevenirse por una formulacion de anticuerpo anti-CD20 de la presente invencion incluyen enfermedades autoinmunes, tales como psoriasis, artritis psoriasica, dermatitis, esclerodermia sistemica y esclerosis, enfermedad inflamatoria del intestino (EII), enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, slndrome de dificultad respiratoria, meningitis, encefalitis, uveitis, glomerulonefritis, eccema, asma, aterosclerosis, deficiencia de adhesion leucocitaria, esclerosis multiple, slndrome de Raynaud, slndrome de Sjogren, diabetes de inicio juvenil, enfermedad de Reiter, enfermedad de Behcet, nefritis por inmunocomplejo, nefropatia IgA, polineuropatias IgM, trombocitopenias inmunomediadas, tales como purpura trombocitopenica idiopatica aguda y purpura trombocitopenica idiopatica cronica, anemia hemolitica, miastenia grave, nefritis por lupus, lupus eritematoso sistemico, artritis reumatoide (AR), dermatitis atopica, penfigo, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, granulomatosis de Wegener, sindrome de Omenn, insuficiencia renal cronica, mononucleosis infecciosa aguda, VIH y enfermedades asociadas con el virus del herpes. Otros ejemplos son sindrome de dificultad respiratoria grave y coriorretinitis. Ademas, otras enfermedades y trastornos incluyen los causados por o mediados por infeccion de celulas B con virus, tales como el virus de Epstein- Barr (VEB).

Otros ejemplos de trastornos inflamatorios, inmunes y/o autoinmunes en los que los autoanticuerpos y/o la actividad excesiva de linfocitos B son prominentes y que pueden tratarse y/o prevenirse por la formulacion de anticuerpo anti- CD20 de la presente invencion, incluyen los siguientes: vasculitis y otras enfermedades de los vasos, tales como poliangeitis microscopica, sindrome de Churg-Strauss y otras vasculitis asociadas con ANCA, poliarteritis nudosa, vasculitis crioglobulinemica esencial, angiitis leucocitoclastica cutanea, enfermedad de Kawasaki, arteritis de Takayasu, artritis de celulas gigantes, purpura de Henoch-Schonlein, angiitis cerebral primaria o aislada, eritema nudoso, tromboangitis obliterante, purpura trombocitopenica trombotica (incluyendo slndrome uremico hemolltico), y vasculitis secundaria, incluyendo vasculitis leucocitoclastica cutanea (p. ej., secundaria a hepatitis B, hepatitis C, macroglobulinemia de Waldenstrom, neoplasias de celulas B, artritis reumatoide, slndrome de Sjogren o lupus eritematoso sistemico); otros ejemplos son eritema nudoso, vasculitis alergica, paniculitis, enfermedad de Weber- Christian, purpura hiperglobulinemica y enfermedad de Buerger; trastornos de la piel, tales como dermatitis de contacto, dermatosis de IgA lineal, vitiligo, pioderma gangrenosa, epidermolisis bullosa adquirida, penfigo vulgar (incluyendo penfigoide cicatrizal y penfigoide bulloso), alopecia areata (incluyendo alopecia universal y alopecia total), dermatitis herpetiforme, eritema multiforme y urticaria autoinmune cronica (incluyendo edema angioneurotico y vasculitis urticarial); citopenias inmunomediadas, tales como neutropenia autoimmune y aplasia pura de globulos rojos; trastornos del tejido conjuntivo, tales como lupus del SNC, lupus eritematoso discoide, sindrome de CREST, enfermedad mixta del tejido conjuntivo, polimiositis/dermatomiositis, miositis por cuerpos de inclusion, amiloidosis secundaria, crioglobulinemia de tipo I y tipo II, fibromialgia, slndrome de anticuerpos contra fosfollpidos, hemofilia secundaria, policondritis recidivante, sarcoidosis, slndrome de la persona rigida y fiebre reumatica; un ejemplo adicional es la fascitis eosinofila; artritis tales como espondilitis anquilosante, artritis cronica juvenil, enfermedad de Still del adulto y sindrome de SAPHO; otros ejemplos son sacroileitis, artritis reactiva, enfermedad de Still y gota; trastornos hematologicos tales como anemia aplasica, anemia hemolitica primaria (incluyendo slndrome de aglutininas frlas), anemia hemolitica secundaria a LlC o lupus eritematoso sistemico; slndrome de POEMS, anemia perniciosa y purpura hiperglobulinemica de Waldemstrom; otros ejemplos son agranulocitosis, neutropenia autoimmune, enfermedad de Franklin, enfermedad de Seligmann, enfermedad de la cadena mu, slndrome paraneoplasico secundario a timomas y linfomas, y formacion de inhibidor del factor VIII; endocrinopatlas, tales como poliendocrinopatla y enfermedad de Addison; otros ejemplos son hipoglucemia autoinmune, hipotiroidismo autoinmune, slndrome de insulina autoinmune, tiroiditis de Quervain y resistencia a insulina mediada por anticuerpo frente a receptor de insulina; trastornos hepato-gastrointestinales, tales como enfermedad celiaca, enfermedad de Whipple, cirrosis biliar primaria, hepatitis activa cronica y colangitis esclerosante primaria; otro ejemplo es gastritis autoinmune; nefropatias, tales como glomerulonefritis progresiva rapida, nefritis postestreptococica, sindrome de Goodpasture, glomerulonefritis membranosa y nefritis crioglobulinemica; otro ejemplo es la enfermedad de cambio minimo; enfermedades neurologicas, tales como neuropatias autoinmunes, mononeuritis multiple, sindrome miastenico de Lambert-Eaton, corea de Sydenham, tabes dorsal y slndrome de Guillain-Barr; otros ejemplos son mielopatla/paraparesis espastica tropical, miastenia grave, polineuropatla desmielinizante inflamatoria aguda y polineuropatla desmielinizante inflamatoria cronica; trastornos cardiacos y pulmonares, tales como enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC), alveolitis fibrosante, bronquiolitis obliterante, aspergilosis alergica, fibrosis qulstica, slndrome de Loffler, miocarditis y pericarditis; otros ejemplos son neumonitis por hipersensibilidad y sindrome paraneoplasico secundario a cancer de pulmon; trastornos alergicos, tales como asma bronquial y sindrome de hiper-IgE; otro ejemplo es amaurosis fugax; trastornos oftalmologicos, tales como coriorretinitis idiopatica; enfermedades infecciosas, tales como infeccion por parvovirus B (incluyendo el slndrome de guantes y medias); y trastornos ginecologico-obstetricos, tales como aborto recurrente, perdida fetal recurrente y retraso del crecimiento intrauterino; un ejemplo mas es el slndrome paraneoplasico secundario a neoplasmas ginecologicos; trastornos reproductivos masculinos, tales como sindrome paraneoplasico secundario a neoplasmas testiculares; y trastornos derivados de transplante, tales como rechazo de aloinjerto y xenoinjerto, y enfermedades de injerto contra huesped.

La enfermedad que implica celulas que expresan CD20 es un trastorno inflamatorio, inmune y/o autoinmune

seleccionado de colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, diabetes de inicio juvenil, esclerosis multiple, trombocitopenias inmunomediadas, tales como purpura trombocitopenica idiopatica aguda y purpura trombocitopenica idiopatica cronica, anemia hemolltica (incluyendo anemia hemolltica autoinmune), miastenia grave, esclerosis sistemica y penfigo vulgar.

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REIVINDICACIONES

1. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 que comprende ofatumumab 20-300 mg/ml, en la que la formulacion comprende ademas acetato de sodio de 10 a 100 mM, cloruro de sodio de 25 a 100 mM, base libre de arginina a del 0,5 al 5%, EDTA de 0,02 a 0,2 mM, polisorbato 80 a del 0,01 al 0,2% y ajustada a pH 5,0 a 7,0.
2. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1 temperatura de 5°C durante al menos 2 anos.

en la que la formulacion es

estable a una
3. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1 temperatura de 25°C durante al menos 3 meses.

en la que la formulacion

es estable a una
4. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1 temperatura de 40°C durante al menos 1 mes.

en la que la formulacion

es estable a una
5. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1 temperatura de 55°C durante al menos 1 dla.

en la que la formulacion

es estable a

una
6. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que la formulacion es estable en un intervalo de temperatura de 5 a 55°C durante al menos 1 dla con agitacion.
7. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que el acetato de sodio esta presente en una cantidad de 50 mM.
8. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que la formulacion de anticuerpo anti-CD20 tiene un pH de 5,5.
9. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que el cloruro de sodio esta presente en una cantidad de 51 mM.
10. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que la base libre de arginina esta presente en una cantidad del 1%.
11. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que el EDTA esta presente en una cantidad de 0,05 mM.
12. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 segun la reivindicacion 1, en la que el polisorbato 80 esta presente en una cantidad del 0,02%.
13. Formulacion de anticuerpo anti-CD20 que comprende ofatumumab en el intervalo de concentracion de 20300 mg/ml, en la que la formulacion comprende ademas acetato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 51 mM, base libre de arginina al 1%, EDTA 0,05 mM, polisorbato 80 al 0,02%, y ajustada a pH 5,5.