ES2607489T3 - Composición farmacéutica líquida - Google Patents
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Abstract
Una composición farmacéutica líquida que comprende: - de 45 a 55 mg/mL de adalimumab; - sistema tampón citrato sódico/ácido cítrico de 5 a 14 mM; - trehalosa de 190 a 210 mM; - cloruro sódico de 40 a 60 mM ; - opcionalmente de 0,9 mg/mL a 1,1 mg/mL de polisorbato 80; y - agua (para inyección); - en donde la composición: o tiene un pH entre 5,7 y 5,9; o está libre de arginina o comprende arginina en una concentración de como máximo 0,001 mM; o está libre de aminoácidos o comprende uno o más aminoácidos (conjunto) en una concentración de como máximo 0,001 mM. o está libre de tensioactivos con la excepción opcional de polisorbato 80 o comprende uno o más de dichos tensioactivos (opcionalmente, excluyendo a polisorbato 80) en una (conjunto) concentración de como máximo 0,0001 mM; y o está libre de agentes tampón fosfato o comprende un sistema tampón fosfato en una concentración de como máximo 0,001 mM.
Description
DESCRIPCIÓN
Composición farmacéutica líquida
Introducción
La presente invención se refiere a una nueva formulación proteica. En particular, la invención se refiere a una
5 composición farmacéutica líquida de adalimumab, a un método de fabricación de la composición, a un kit que incluye la composición, a un envase que incluye la composición, a un método de fabricación del envase, y a los métodos de tratamiento que usan la composición y/o el envase.
Antecedentes
Se ha logrado el tratamiento de enfermedades autoinmunes relacionadas con el factor de necrosis tumoral-alfa
10 (TNF-α), tales como la artritis reumatoide, la psoriasis y otras enfermedades autoinmunes, a través del uso de fármacos aprobados por la FDA tales como Adalimumab (HUMIRA®, Corporación Abbot). Adalimumab es un anticuerpo monoclonal humano que inhibe la actividad del TNF-α humano para prevenir la activación de los receptores de TNF, regulando así por disminución las respuestas inflamatorias asociadas con las enfermedades autoinmunes. Las indicaciones médicas aprobadas para Adalimumab incluyen artritis reumatoide, artritis psoriásica,
15 espondilitis anquilosante, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, psoriasis crónica moderada a grave y artritis idiopática juvenil.
El Adalimumab generalmente se suministra al paciente a través de inyección subcutánea, y se proporciona por tanto en una forma líquida, normalmente en envases tales como viales, jeringas precargadas o “dispositivos en bolígrafo” precargados. Los dispositivos en bolígrafos comercialmente disponibles (Bolígrafo HUMIRA®) incluyen
20 generalmente una jeringa de vidrio con 1 mL pre-llenada, precargada con 0,8 mL de una formulación estéril de 40 mg de Adalimumab (véase abajo), con una aguja fijada (bien de caucho natural gris o bien una versión libre de látex) y un cubre aguja. Las formulaciones comerciales de Adalimumab (HUMIRA®) contienen los siguientes ingredientes:
- Ingrediente
- Cantidad por envase (mg) (volumen de llenado=0,8 mL) Cantidad (mg/mL)
- Adalimumab
- 40 50
- Ácido cítrico monohidratado
- 1,04 1,3
- Fosfato de sodio dibásico dihidratado
- 1,22 1,53
- Manitol
- 9,6 12
- Fosfato de sodio monobásico dihidratado
- 0,69 0,86
- Polisorbato 80
- 0,8 1
- Cloruro sódico
- 4,93 6,16
- Citrato sódico
- 0,24 0,3
- Agua para inyectables (WFI) e hidróxido sódico
- c.s. para ajustar el pH a 5,2 c.s. para ajustar el pH a 5,2
Adalimumab, y su método de fabricación, se describen en WO97/29131 (BASF) como D2E7, y en otros lugares de la 25 técnica.
Aunque la formulación de Adalimumab anteriormente mencionada es estable (al menos hasta cierto punto), el anticuerpo relevante puede ser inestable a la largo de períodos prolongados o bajo condiciones de estrés, impidiendo por tanto un almacenamiento prolongado de dichas formulaciones. Tal degradación de la formulación puede ser debida a una variedad de factores, incluyendo:
30 Efectos físicos, tales como:
- o Inadecuada inhibición de la agregación de las moléculas proteicas relevantes (una función atendida supuestamente por el Tween-80);
- o Inadecuada inhibición de la precipitación;
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El término “sustancialmente libre”, cuando se usa en relación a un componente de una composición dada (por ejemplo “una composición farmacéutica líquida sustancialmente libre de arginina”), se refiere a la composición a la esencialmente que no se ha añadido ninguno de dichos componentes. Como se explicó anteriormente, tales referencias no tienen en cuenta la presencia de restos de aminoácidos dentro de una estructura de la proteína. Cuando una composición es “sustancialmente libre” de un componente dado, dicha composición comprende adecuadamente no más de 0,001% peso de dicho componente, adecuadamente no más de 0,0001% peso de dicho componente, adecuadamente no más de 0,00001% peso, adecuadamente no más de 0,000001% peso, adecuadamente no más de 0,0000001% peso del mismo, el más adecuadamente no más de 0,0001 partes por billón (en peso).
El término “totalmente libre”; cuando se utiliza en relación a un componente de una composición dada (por ejemplo “una composición farmacéutica líquida sustancialmente libre de arginina”), se refiere a una composición que no contiene ninguno de dichos componentes. Como se explicó anteriormente, tales referencias no tienen en cuenta la presencia de restos de aminoácidos dentro de una estructura de la proteína.
En la presente memoria, en el contexto de la presente memoria, un “ácido fuerte” es adecuadamente uno que tiene un pka de -1,0 o menos, mientras que un “ácido débil” es adecuadamente uno que tiene un pka de 2,0 o más. En la presente memoria, en el contexto de la presente memoria, una “base fuerte” es adecuadamente una cuyo ácido conjugado tiene un pka de 12 o más (adecuadamente 14 o más), mientras que una “base débil” es adecuadamente una que cuyo ácido conjugado tiene un pka de 10 o menos.
En la presente memoria, un “estabilizador” se refiere a un componente que facilita el mantenimiento de la integridad estructural del fármaco biofarmacéutico, particularmente durante la congelación y/o liofilización y/o el almacenamiento (especialmente cuando se expone a estrés). Este efecto de estabilización puede surgir por una variedad de razones, aunque normalmente tales estabilizadores pueden actuar como osmolitos que mitigan la desnaturalización proteica. Estabilizadores típicos incluyen aminoácidos (por ejemplo aminoácidos libres que no son parte de un péptido o proteína-por ejemplo glicina, arginina, histidina, ácido aspártico, lisina) y azúcares estabilizadores, tales como poliol de azúcar (por ejemplo manitol, sorbitol), y/o un disacárido (por ejemplo, trehalosa, sacarosa, maltosa, lactosa), aunque las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención incluyen un estabilizador, al menos uno de ellos es un azúcar estabilizador (por ejemplo bien un poliol de azúcar o bien un disacárido). Más adecuadamente al menos un azúcar estabilizador es un azúcar no reductor (un poliol de azúcar o un disacárido).
En la presente memoria, un “azúcar no reductor” es generalmente un azúcar sin ninguna fracción de aldehído o sin la capacidad de formar una fracción de aldehído (por ejemplo a través de isomerismo).
En la presente memoria, un “modificador de la tonicidad” o “tonificante” se refiere a un reactivo cuya inclusión dentro de una composición contribuye adecuadamente a (o aumenta) la osmolalidad y la osmolaridad total de la composición. Adecuadamente, un tonificante, como se emplea en la presente memoria incluye un agente cuyas funciones llevan a cabo una disolución similar en características osmóticas a la de los fluidos fisiológicos.
En la presente memoria, referencias a las cantidades específicas de un componente de una composición dada, especialmente un agente tampón, estabilizador, aminoácido, tensioactivo, o tonificante adecuado, se refiere a las cantidades de la forma anhidra pura del componente relevante (o composiciones formadas mediante la utilización de dichas cantidades de la forma anhidra pura), incluso aunque tal componente se pueda usar en una forma no anhidra cuando forma la composición. Cantidades de cualquiera de las formas no-anhidras correspondientes (por ejemplo monohidratos, dihidratos, etc) se pueden calcular fácilmente utilizando simplemente los múltiplos adecuados. Por ejemplo, salvo que se indique lo contrario, (según los Ejemplos, cuando las cantidades se refieren a Trehalosa dihidratada), las cantidades estipuladas en relación a trehalosa se refieren a la forma anhidra de trehalosa (o composiciones formadas mediante la utilización de cantidades/concentraciones de trehalosa anhidra), que tiene un peso molecular de 342,296 g/mol, para calcular la cantidad correspondiente de Trehalosa dihidratada necesaria para formar la misma composición (debería añadirse menos agua) es necesario multiplicar la cantidad estipulada por 378, 33/342,296, ya que 378, 33 es el peso molecular de la trehalosa deshidratada. El experto en la técnica entenderá fácilmente cómo ajustar de manera sensata la cantidad del diluyente/agua dependiendo de la forma de los componentes usados, para obtener las concentraciones diana.
En la presente memoria, el término “composición farmacéutica” se refiere a una formulación de un activo farmacéutico que lleva acabo la actividad biológica del ingrediente activo eficaz terapéuticamente, pero que no incluye otros ingredientes que son obviamente tóxicos para un sujeto al que se le administra la formulación de forma intencionada.
En la presente memoria, el término “estable” generalmente se refiere a la estabilidad física y/o estabilidad química y/o estabilidad biológica de un componente, normalmente un activo o composición del mismo, durante la conservación/almacenamiento.
Se debe apreciar que referencias a “tratar” o “tratamiento” incluyen la profilaxis así como el alivio de síntomas establecidos de una afección. “Tratar” o “tratamiento” de un estado, trastorno o afección por lo tanto incluyen: (1)
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El agente tampón es un agente tampón citrato. El agente tampón citrato es una sal citrato, que es citrato sódico.
La composición farmacéutica líquida comprende un ácido/base conjugado del agente tampón, más adecuadamente ácido cítrico como el ácido conjugado de la sal citrato. La combinación del agente tampón y su ácido/base conjugado constituye un sistema tampón. Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el agente tampón y su correspondiente ácido/base conjugado, adecuadamente tal que el agente tampón junto a su ácido/base conjugado están presentes a un nivel (por ejemplo cantidad o concentración absoluta) y en una cantidad (o concentración) relativa suficiente para proporcionar el pH deseado para la composición. El sistema tampón se puede formar mezclando simplemente el agente tampón con su ácido/base conjugado o se puede formar alternativamente mezclando un ácido o base con cualquier agente tampón o su ácido/base conjugado para formar in situ la mezcla deseada de agente tampón y ácido/base conjugado. Por ejemplo, el sistema tampón se puede formar mezclando simplemente el agente tampón citrato (por ejemplo citrato sódico) con su ácido/base conjugado (por ejemplo ácido cítrico), adecuadamente en una razón apropiada para proporcionar el pH deseado. Alternativamente, el sistema tampón se puede formar por adición de una base (por ejemplo hidróxido sódico) al ácido/base conjugado (por ejemplo ácido cítrico) del agente tampón citrato, en una cantidad adecuadamente apropiada para proporcionar el pH deseado y la mezcla del agente tampón (por ejemplo citrato sódico) y el correspondiente ácido/base conjugado (por ejemplo ácido cítrico). Alternativamente, se puede emplear cualquier método para formar el sistema tampón, y se puede ajustar el pH de forma sensata bien añadiendo otro ácido (adecuadamente un ácido fuerte, tal como HCl) u otra base (adecuadamente una base fuerte, tal como hidróxido sódico).
El sistema tampón es un sistema tampón citrato que comprende una sal citrato y ácido cítrico.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende como máximo un agente tampón.
La composición farmacéutica líquida tiene un pH entre 5,7 y 5,9. En una realización particular, la composición farmacéutica líquida tiene un pH de aproximadamente 5,8.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende un sistema tampón citrato sódico/ácido cítrico a una concentración de 10 mM. Esto se incluye donde el “agente o agentes tampón” (por ejemplo citrato sódico) se forma por adición de una base fuerte (por ejemplo hidróxido sódico) al ácido conjugado del agente o agentes tampón (por ejemplo ácido cítrico).
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende las especies tampón (adecuadamente especies tampón citrato) a una concentración de aproximadamente 0,38 mg/mL a aproximadamente 9,6 mg/mL. En una realización, las especies tampón están presentes en una concentración de entre 0,96 mg/mL y 2,69 mg/mL, el más adecuadamente aproximadamente 1,9 mg/mL. Esto se incluye donde el “agente tampón” (por ejemplo citrato sódico) se forma por adición de una base fuerte (por ejemplo hidróxido sódico) al ácido conjugado del agente tampón (por ejemplo ácido cítrico).
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el sistema tampón (adecuadamente el sistema tampón citrato) en una razón molar del sistema tampón para adalimumab de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 145:1. En una realización, el sistema tampón está presente en una razón molar del sistema tampón para adalimumab de aproximadamente 14:1 a aproximadamente 40:1, más adecuadamente aproximadamente 29:1. En una realización, el sistema tampón está presente a una concentración de 29:1. Esto se incluye donde el “agente o agentes tampón” (por ejemplo citrato sódico) se forma por adición de una base fuerte (por ejemplo hidróxido sódico) al ácido conjugado del agente tampón (por ejemplo ácido cítrico).
Como se ilustra en la sección de Ejemplos, las composiciones farmacéuticas de la invención que incluyen un sistema tampón citrato funcionan particularmente bien en ensayos de estrés, especialmente en relación a la fragmentación y al desdoblamiento proteico, que pueden ser indicadores importantes de la estabilidad y viabilidad del producto farmacológico. Además, las composiciones farmacéuticas líquidas cuyo sistema tampón citrato mantiene un pH estable de 5,8 funcionan particularmente bien.
Azúcar Estabilizador
La composición farmacéutica líquida comprende un azúcar estabilizador. Adecuadamente, tal componente facilita el mantenimiento de la integridad estructural del fármaco biofarmacéutico, particularmente durante la congelación y/o liofilización y/o almacenamiento (especialmente cuando se expone al estrés).
La composición farmacéutica líquida puede comprender uno o más azúcares estabilizantes, aunque en realizaciones preferidas sólo está presente un único azúcar estabilizador.
El azúcar estabilizador es un poliol de azúcar (incluyendo alcoholes de azúcar) y/o un disacárido.
El azúcar estabilizador se selecciona adecuadamente del grupo que incluye trehalosa, manitol, sacarosa, sorbitol, maltosa, lactosa, xilitol, arabitol, eritritol, lactitol, maltitol, inositol.
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En una realización particular, el azúcar estabilizador es un azúcar no reductor, opcionalmente un azúcar no reductor citado en cualquier lugar de la presente memoria.
En una realización particular, el azúcar estabilizador se selecciona del grupo que incluye trehalosa y manitol.
La trehalosa es un azúcar reductor particularmente ventajoso para usar junto a un agente tampón/sistema tampón citrato en formulaciones líquidas de adalimumab.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende trehalosa como el único azúcar estabilizador.
Adecuadamente la trehalosa que se usa para formar la composición farmacéutica líquida es Trehalosa dihidratada aunque, adecuadamente cualquiera de las cantidades estipuladas en relación a trehalosa (salvo que se indique lo contrario – como se hace en los Ejemplos) se refieren a trehalosa anhidra, pura. Tales cantidades se pueden convertir en una cantidad de trehalosa pura aplicando un multiplicador apropiado. Por otra parte, para los objetivos del ensayo si una formulación dada está dentro del alcance de cualquiera de las definiciones de calidad de trehalosa proporcionadas en la presente memoria, se puede convertir fácilmente una cantidad de Trehalosa dihidratada en una cantidad pura correspondiente, trehalosa anhidra (con igual número de moles), a través de la aplicación de dicho multiplicador en sentido inverso. Este principio se puede adoptar para cualquier componente del azúcar estabilizador. Cuando se proporcionan concentraciones como una concentración molar, serán por supuesto las mismas independientemente del estado de hidratación del azúcar estabilizador.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el azúcar o azucares estabilizadores (más adecuadamente trehalosa) a una concentración de aproximadamente 50 a aproximadamente 400 mM, más adecuadamente de aproximadamente 100 a aproximadamente 300 mM, más adecuadamente de aproximadamente 150 a aproximadamente 250 mM. En una realización, el azúcar o azucares estabilizadores están presentes a una concentración de entre 190 y 210 mM, el más adecuadamente aproximadamente 200 mM. En una realización, la trehalosa está presente a una concentración de 200 mM.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el azúcar o azúcares estabilizadores (más adecuadamente trehalosa) a una concentración de aproximadamente 15 mg/mL a aproximadamente 140 mg/mL, más adecuadamente de aproximadamente 35 mg/mL a aproximadamente 100 mg/mL, más adecuadamente de aproximadamente 45 mg/mL a aproximadamente 80 mg/mL. En una realización, el azúcar o azúcares estabilizadores están presentes a una concentración de entre 65 mg/mL y 72 mg/mL, el más adecuadamente aproximadamente 68 mg/mL. En una realización particular, la trehalosa está presente a una concentración de aproximadamente 68 mg/mL (que equivale a aproximadamente 75,7 mg/mL de Trehalosa dihidratada).
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el azúcar o azúcares estabilizadores (más adecuadamente trehalosa) en una razón molar de azúcar o azúcares estabilizadores para adalimumab de aproximadamente 145:1 a aproximadamente 1.150:1, más adecuadamente de aproximadamente 290:1 a aproximadamente 860:1, más adecuadamente de aproximadamente 430:1 a aproximadamente 720:1. En una realización el azúcar o azúcares estabilizadores están presentes a una razón molar de azúcar o azúcares estabilizadores para adalimumab de aproximadamente 550:1 a aproximadamente 605:1, el más adecuadamente aproximadamente 576:1. En una realización, la trehalosa está presente a una razón molar de trehalosa para adalimumab de aproximadamente 576:1.
Como se ilustra en la sección de Ejemplos, las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención que incluyen un azúcar estabilizador como se define en la presente memoria funcionan particularmente bien en ensayos de estrés, especialmente en relación a la agregación, fragmentación y desdoblamiento proteico, que pueden ser indicadores importantes de estabilidad y viabilidad del producto farmacológico. Además, las composiciones farmacéuticas líquidas que comprenden trehalosa como el azúcar estabilizador funcionan particularmente bien.
Diluyente
Las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención incluyen uno o más diluyentes aceptables farmacéuticamente, o mezcla de los mismos. La composición farmacéutica líquida es una composición farmacéutica acuosa. El diluyente más adecuado es el agua, y adecuadamente sólo agua. El agua es adecuadamente agua para inyección (WFI).
Adecuadamente el diluyente puede constituir el balance de ingredientes en cualquier composición farmacéutica líquida, por ejemplo para que los porcentajes de peso total sean del 100%. Adecuadamente cualquiera de las concentraciones proporcionadas en la presente memoria en relación con cualquier componente de la composición farmacéutica líquida representa concentraciones de dicho componente en (y adecuadamente disuelto en él) el diluyente en adición con cualquiera de los otros componentes.
La composición farmacéutica líquida de la invención es adecuadamente una disolución, y está adecuadamente (sustancialmente o totalmente) libre de partículas o precipitados.
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Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el tonificante o tonificantes (el más adecuado cloruro sódico) a una concentración de aproximadamente 10 a aproximadamente 200 mM, más adecuadamente de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mM, más adecuadamente de aproximadamente 25 a aproximadamente 75 mM. En una realización, el tonificante o tonificantes están presentes a una concentración de entre 40 y 60 mM, el más adecuadamente aproximadamente 50 mM. En una realización, el cloruro sódico está presente a una concentración de 50 mM.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el tonificante o tonificantes (el más adecuado cloruro sódico) a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/mL a aproximadamente 12 mg/mL, más adecuadamente de aproximadamente 1,2 mg/mL a aproximadamente 5 mg/mL, más adecuadamente de aproximadamente 1,5 mg/mL a aproximadamente 4,4 mg/mL. En una realización, el tonificante o tonificantes están presentes a una concentración de entre 2,7 mg/mL y 3,1 mg/mL, el más adecuadamente aproximadamente 2,9 mg/mL. En una realización, el cloruro sódico está presente a una concentración de 2,9 mg/mL.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el tonificante o tonificantes (el más adecuado cloruro sódico) a una razón molar del tonificante para adalimumab de aproximadamente 30:1 a aproximadamente 580:1, más adecuadamente de aproximadamente 60:1 aproximadamente 290:1, más adecuadamente de aproximadamente 70:1 a aproximadamente 220:1. En una realización, el tonificante o tonificantes están presentes a una razón molar de tonificante para adalimumab de aproximadamente 115:1 a aproximadamente 175:1, el más adecuadamente aproximadamente 145:1. En una realización, el cloruro sódico está presente a una razón molar de cloruro sódico para adalimumab de 145:1.
Como se ilustra en la sección de Ejemplos, las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención incluyen un tonificante que como se define en la presente memoria funcionan particularmente bien en ensayos de estrés, especialmente en relación a la agregación, fragmentación y desdoblamiento proteico, que pueden ser indicadores importantes de estabilidad y viabilidad del producto farmacológico. Además, las composiciones farmacéuticas líquidas que comprenden cloruro sódico, particularmente en una cantidad de intervalo estipulado, funcionan particularmente bien.
Tensioactivo
La composición farmacéutica líquida de la invención puede comprender adecuadamente polisorbato 80.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende polisorbato 80 a una concentración de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 5 mM (por ejemplo 0,1 µM-5mM), más adecuadamente de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 2 mM, más adecuadamente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 1,0 mM. En una realización, el polisorbato 80 está presente a una concentración de entre 0,72 y 0,80 mM, el más adecuadamente aproximadamente 0,76 mM. En una realización, el polisorbato 80 está presente a una concentración de 0,76 mM.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende polisorbato 80 a una concentración de aproximadamente 0,001 mg/mL a aproximadamente 5 mg/mL, más adecuadamente de aproximadamente 0,01 mg/mL a aproximadamente 2 mg/mL, más adecuadamente de aproximadamente 0,05 mg/mL a aproximadamente 1,5 mg/mL. En una realización, el polisorbato 80 está presente a una concentración de entre 0,9 mg/mL y 1,1 mg/mL, el más adecuadamente aproximadamente 1,0 mg/mL. En una realización particular, el polisorbato 80 está presente a una concentración de aproximadamente 1,0 mg/mL.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida comprende el polisorbato 80 en una razón molar de tensioactivos para adalimumab de aproximadamente 1:3.500 a aproximadamente 15:1, más adecuadamente de aproximadamente 1:350 a aproximadamente 6:1, más adecuadamente de aproximadamente 1:35 a aproximadamente 3:1. En una realización, el polisorbato 80 está presente a una razón molar de tensioctivos para adalimumab de aproximadamente 2,1:1 a aproximadamente 2,3:1, el más adecuadamente aproximadamente 2,2:1. En una realización, el polisorbato 80 está presente a una razón molar de polisorbato 80 para adalimumab de aproximadamente 2,2:1.
Como se ilustra en la sección de Ejemplos, las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención que incluyen un tensioactivo como se define en la presente memoria funcionan particularmente bien en ensayos de estrés, especialmente en relación a la agregación, fragmentación y desdoblamiento proteico, que pueden ser indicadores importantes de estabilidad y viabilidad del producto farmacológico. Además, las composiciones farmacéuticas líquidas que comprenden polisorbato, particularmente en una cantidad con un intervalo como se estipula, funcionan particularmente bien.
Otros Parámetros relacionados con la invención
Osmolalidad
Adecuadamente la osmolalidad de la composición farmacéutica líquida está entre 200 y 405 mOsm/kg, más adecuadamente entre 220 y 390 mOsm/kg, más adecuadamente entre 230 y 350 mOsm/kg, más adecuadamente
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entre 240 y 340 mOsm/kg, más adecuadamente entre 260 y 320 mOsm/kg, el más adecuadamente entre 280 y 310 mOsm/kg. Adecuadamente las cantidades y concentraciones relativas de los distintos componentes de la composición se puede ajustar con sensatez para lograr la osmolalidad deseada, y la nueva combinación particular de componentes permite lograrlo en gran medida sin perjudicar a otros parámetros importantes. Sin embargo, adecuadamente las cantidades y concentraciones relativas de los distintos componentes de la composición se pueden seleccionar para optimizar otros parámetros – la presente divulgación, incluyendo los ejemplos y protocolos expuestos en ella, permite al experto lograr el final y realizar uno, algunos, o todos los beneficios de la presente invención.
Temperatura de desdoblamiento proteico
Adecuadamente, la temperatura de desdoblamiento proteico (adecuadamente medida a través de los protocolos DSF como que se definen en la presente memoria) de adalimumab en la composición líquida farmacéutica de la invención es mayor o igual a 65ºC, más adecuadamente mayor o igual a 70ºC. La nueva combinación de componentes presentes dentro la composición de la invención permite al experto lograr temperaturas de desdoblamiento mayores, que se pueden considerar deseables desde una perspectiva de estabilidad térmica.
Parámetros cuando se somete a estrés térmico
Adecuadamente la cantidad (o concentración) de agregados (adecuadamente derivados de adalimumab, y adecuadamente como se determinó mediante los protocolos SE-HPLC como se define en la presente memoria) presente dentro de la composición farmacéutica líquida aumenta en no más de un factor de 4 (por ejemplo 4 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa térmicamente a 40ºC (por ejemplo la composición se mantiene a una temperatura de 40ºC) durante un periodo de 28 días, adecuadamente no más de un factor de 3, adecuadamente no más de un factor de 2,5, adecuadamente no más de un factor de 2,2.
Adecuadamente la cantidad (o concentración) de fragmentos (adecuadamente derivados de adalimumab, y adecuadamente medidos a través de los protocolos del bioanalizador como se definen en la presente invención) presente dentro de la composición farmacéutica líquida aumenta en no más de un factor de 4 (por ejemplo 4 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa térmicamente a 40ºC (por ejemplo la composición se mantiene a una temperatura de 40ºC) durante un periodo de 28 días, adecuadamente no más de un factor de 3, adecuadamente no más de un factor de 2,5, adecuadamente no más de un factor de 2,2.
Adecuadamente la turbidez (adecuadamente como se midió a través de nefelometría de acuerdo con los protocolos establecidos en la presente memoria) de la composición farmacéutica líquida aumenta no más de un factor de 2 (por ejemplo 2 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa térmicamente a 40ºC (por ejemplo la composición se mantiene a una temperatura de 40ºC) durante 28 días, adecuadamente no más de un factor de 1,5, adecuadamente no más de un factor de 1,2, y adecuadamente la turbidez no aumenta nada.
Adecuadamente el pH de la composición farmacéutica líquida cambia (ya sea mediante aumento o disminución, aunque generalmente es por un descenso en el pH) no más de 0,5 unidades de pH cuando la composición se estresa térmicamente a 40ºC (por ejemplo la composición se mantiene a una temperatura de 40ºC) durante un periodo de 28 días, adecuadamente no más de 0,2 unidades de pH, adecuadamente no más de 0,1 unidades de pH, el más adecuadamente el pH no cambia nada (con un decimal).
Parámetros cuando se somete a estrés mecánico
Adecuadamente la cantidad (o concentración) de agregados (adecuadamente derivados de adalimumab, y adecuadamente como se determinó mediante los protocolos SE-HPLC como se definen en la presente memoria) presente dentro de la composición farmacéutica líquida aumenta en no más de un factor de 2 (por ejemplo 2 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa mecánicamente (por ejemplo agitar según los protocolos indicados en la presente memoria) durante un periodo de 48 horas, adecuadamente no más de un factor de 1,5, adecuadamente no más de un factor de 1,2, adecuadamente no más de un factor de 1,1.
Adecuadamente la cantidad (o concentración) de fragmentos (adecuadamente derivados de adalimumab, y adecuadamente medidos a través de los protocolos del bioanalizador como se definen en la presente memoria) presente dentro de la composición farmacéutica líquida aumenta en no más de un factor de 2 (por ejemplo 2 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa mecánicamente (por ejemplo agitar según los protocolos indicados en la presente memoria) durante un periodo de 48 horas, adecuadamente no más de un factor de 1,5, adecuadamente no más de un factor de 1,2, adecuadamente no más de un factor de 1,1.
Adecuadamente la turbidez (adecuadamente como se midió a través de nefelometría de acuerdo con los protocolos establecidos en la presente memoria) de la composición farmacéutica líquida aumenta no más de un factor de 2 (por ejemplo 2 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa mecánicamente (por ejemplo agitar según los protocolos indicados en la presente memoria) durante un periodo de
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Adecuadamente el pH de la composición farmacéutica líquida cambia (ya sea mediante aumento o disminución, aunque generalmente es por un descenso en el pH) no más de 0,5 unidades de pH cuando la composición se estresa mecánicamente (por ejemplo agitar según los protocolos indicados en la presente memoria) durante un periodo de 48 horas, adecuadamente no más de 0,2 unidades de pH, adecuadamente no más de 0,1 unidades de pH, el más adecuadamente el pH no cambia nada (con un decimal).
Parámetros cuando se somete a estrés lumínico
Adecuadamente la cantidad (o concentración) de agregados (adecuadamente derivados de adalimumab, y adecuadamente como se determinó mediante los protocolos SE-HPLC como se definen en la presente memoria) presente dentro de la composición farmacéutica líquida aumenta en no más de un factor de 50 (por ejemplo 50 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa lumínicamente (por ejemplo la composición se expone a la luz de acuerdo con los protocolos que se divulgan en la presente memoria, por ejemplo 7 horas a 765 W/m²), adecuadamente no más de un factor de 45, adecuadamente no más de un factor de 35, adecuadamente no más de un factor de 30.
Adecuadamente la cantidad (o concentración) de fragmentos (adecuadamente derivados de adalimumab, y adecuadamente medidos a través de los protocolos del bioanalizador como se definen en la presente memoria) presente dentro de la composición farmacéutica líquida aumenta en no más de un factor de 4 (por ejemplo 4 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa lumínicamente (por ejemplo la composición se expone a la luz de acuerdo con los protocolos que se divulgan en la presente memoria, por ejemplo 7 horas a 765 W/m²), adecuadamente no más de un factor de 3, adecuadamente no más de un factor de 2,5, adecuadamente no más de un factor de 2.
Adecuadamente la turbidez (adecuadamente como se midió a través de nefelometría de acuerdo con los protocolos establecidos en la presente memoria) de la composición farmacéutica líquida aumenta no más de un factor de 2 (por ejemplo 2 veces la cantidad relativa a un tiempo de comienzo arbitrario) cuando la composición se estresa lumínicamente (por ejemplo la composición se expone a la luz de acuerdo con los protocolos que se divulgan en la presente memoria, por ejemplo 7 horas a 765 W/m²), adecuadamente no más de un factor de 1,5, adecuadamente no más de un factor de 1,2, y adecuadamente la turbidez no aumenta nada.
Adecuadamente el pH de la composición farmacéutica líquida cambia (ya sea mediante aumento o disminución, aunque generalmente es por un descenso en el pH) no más de 0,5 unidades de pH cuando la composición se estresa lumínicamente (por ejemplo la composición se expone a la luz de acuerdo con los protocolos que se divulgan en la presente memoria, por ejemplo 7 horas a 765 W/m²), adecuadamente no más de 0,2 unidades de pH, adecuadamente no más de 0,1 unidades de pH, el más adecuadamente el pH no cambia nada (con un decimal).
Adecuadamente el perfil de isoformas de adalimumab, particularmente el área integrada del pico principal, en la composición farmacéutica líquida (adecuadamente medida a través focalización isoeléctrica, adecuadamente cIEF, adecuadamente utilizando un iC280, adecuadamente empleando un protocolo como se establece en la presente memoria) es razonablemente estable cuando la composición se estresa lumínicamente (por ejemplo la composición se expone a la luz de acuerdo con los protocolos que se divulgan en la presente memoria, por ejemplo 7 horas a 765 W/m²). Adecuadamente, el estrés lumínico se realiza de acuerdo con las pautas de la Agencia Europea de Medicamentos ICH Q1B vigente (en relación al ensayo de fotoestabilidad de nuevas sustancias activas y productos médicos), adecuadamente como se ilustra mediante el documento CPMP/ICH/279/95. Adecuadamente el perfil de isoformas de adalimumab dentro de la composición, como se midió por referencia al área integrada del “pico principal” relativo a adalimumab en un electroferograma producido por focalización isoeléctrica (adecuadamente focalización isoeléctrica capilar como se describe en la presente memoria, u opcionalmente otros protocolos de focalización isoeléctrica bien conocidos en la técnica), cambia no más del 20% cuando se someten a estrés lumínico (adecuadamente 7 horas de exposición lumínica a 765 W/m², adecuadamente de acuerdo con las pautas de la Agencia Europea de Medicamentos ICH Q1B vigente, adecuadamente el documento CPMP/ICH/279/95). Adecuadamente el perfil de isoformas de adalimumab dentro de la composición (medido adecuadamente por referencia al área integrada del “pico principal” relativo a adalimumab) no cambia más del 15% (ya sea un incremento o reducción en el área del pico) cuando se estresa lumínicamente en esta manera, adecuadamente no más del 10%, adecuadamente no más del 5%, adecuadamente no más del 4%. Composiciones de adalimumab de la técnica anterior muestran una estabilidad del perfil de isoformas inferior debido al fenómeno de foto-oxidación que es debidamente inhibido a través del uso de un tampón citrato dentro de las composiciones farmacéuticas líquidas particulares de la invención. Como tal, en las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención adalimumab muestra una fotoestabilidad superior. En una realización particular, adalimumab tiene una fotoestabilidad en la composición farmacéutica líquida de la invención mayor que formulaciones comerciales de HUMIRA® como se define en la presente memoria (adecuadamente como se indica mediante los perfiles de isoformas relativas, particularmente en relación al pico principal de adalimumab). Se entenderá que el “pico principal” correspondiente a adalimumab se refiere al pico principal de adalimumab de un electroferograma (por ejemplo con el mayor área de pico integrado) resultante de las mediciones de focalización isoeléctrica, adecuadamente realizadas como se define
en la presente memoria. Adecuadamente el electroferograma se adquiere a 280 nm, adecuadamente durante tiempos de pre-focalización y focalización de 1 y 6 minutos respectivamente, adecuadamente a un voltaje de 1.500 V (pre-focalización) y 3.000 V (focalización). Adecuadamente los picos son picos de absorbancia, adecuadamente a 280 nm. La separación de las diversas isoformas se logra adecuadamente usando hidróxido sódico 100 mM (en 5 0,1% de metil celulosa) como una disolución catódica y adecuadamente 80 mM de ácido o-fosfórico (en 0,1% de metil celulosa) como una disolución anódica. Se preparan adecuadamente muestras para mediciones de focalización isoeléctrica según un protocolo que se define en la presente memoria o en otro sitio en la técnica, pero en particular puede implicar adecuadamente uno o más o todos de: i) purificación; ii) eliminación de sales (por ejemplo con centrifugación adecuadamente con un punto de corte de 10 kDa); iii) pre dilución para proporcionar un 10 contenido proteico de aproximadamente 5,0 mg/mL, adecuadamente aproximadamente 1,0 mg/mL, en donde el diluyente puede incluir opcionalmente metil celulosa, Pharmalyte 5-8 (GE Healthcare), Pharmalyte 8-10,5 (GE Healthcare), bajo marcador pI 7,05 (Proteína Simple), alto marcador pI 9,50 (Proteína Simple) y agua purificada; iv) uno o más etapas de centrifugación adicionales (por ejemplo 3 minutos a 10.000 rpm seguido adecuadamente por 2 minutos a 7.000 rpm, adecuadamente sobre una muestra de 150 microlitros). La focalización isoeléctrica es
15 adecuadamente la focalización isoeléctrica capilar (cIEF), y se realiza adecuadamente utilizando un sistema iCE280 mediante Proteína Simple.
Métodos de estabilización del anticuerpo
En vista de los puntos anteriormente mencionados en esta sub-sección, y los datos presentados en los ejemplos, la presente invención proporciona también un método de estabilización de composiciones de adalimumab líquidas 20 (químicamente y/o físicamente opcionalmente en relación a uno o más de los parámetros/propiedades anteriormente mencionados), que comprende mezclar adalimumab con cualquiera de los componentes relevantes requeridos para formar una composición farmacéutica como se define en la presente memoria. Diferentes realizaciones requerirán mezclar adecuadamente diferentes combinaciones de componentes, potencialmente en cantidades diferentes, y el experto puede deducir fácilmente tales combinaciones y cantidades por referencia a la divulgación anterior relativa a
25 la composición farmacéutica líquida. Tales combinaciones de diferentes componentes pueden estabilizar composiciones de adalimumab líquidas en diferentes aspectos. Por ejemplo, mezclando adalimumab con los componentes anteriormente mencionados para formar una composición farmacéutica liquida como se define en la presente memoria se puede estabilizar adalimumab:
i) Incrementando la temperatura de desdoblamiento proteico de adalimumab;
30 ii) Inhibiendo la formación de agregados;
iii) Inhibiendo la formación de fragmentos;
iv) Inhibiendo la formación de partículas sub-visibles (o ≤25 micras o ≤10micras);
v) Inhibiendo la turbidez;
vi) Inhibiendo cambios de pH;
35 vii) Inhibiendo la foto-oxidación; y/o
viii) Reduciendo la inestabilidad en los ciclos de congelación/descongelación.
Como tal, la presente invención proporciona un método para lograr uno, alguno o todos los beneficios siguientes:
i) Incremento de las temperaturas de desdoblamiento proteico para adalimumab;
ii) Inhibición de la formación de agregados;
40 iii) Inhibición de la formación de fragmentos;
iv) Inhibición de la formación de partículas sub-visibles (o ≤25 micras≤10 micras);
v) Inhibición de la turbidez;
vi) Inhibición de cambios de pH;
vii) Inhibición de la foto-oxidación;
45 viii) Reducción de la inestabilidad en los ciclos de congelación/descongelación; y/o
ix) Estabilización del perfil de isoformas (especialmente con respecto al “pico principal” como se define en la presente memoria);
el método que comprende la fabricación de una composición farmacéutica líquida de adalimumab como se define en la presente memoria.
En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende adalimumab, especies tampón citrato y trehalosa en una razón de peso de 45-55:0,96-2,69:65-72 respectivamente. En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende adalimumab, especies tampón citrato, trehalosa y cloruro sódico en una razón de peso de 45-55:0,96-2,69:65-72:2,7-3,1 respectivamente. En una realización, la composición farmacéutica
5 líquida comprende adalimumab, especies tampón citrato, trehalosa, cloruro sódico y polisorbato 80 en una razón de peso de 45-55:0,96-2,69:65-72:2,7-3,1:0,9-1,1 respectivamente.
En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende adalimumab, especies tampón citrato y trehalosa en una razón de peso de 50:1,9:68 respectivamente. En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende adalimumab, especies tampón citrato, trehalosa y cloruro sódico en una razón de peso de
10 50:1,9:68:2,9 respectivamente. En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende adalimumab, especies tampón citrato, trehalosa, cloruro sódico y polisorbato 80 en una razón de peso de 50:1,9:68:2,9:1 respectivamente.
Cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente se refieren a razones molares y/o de peso de los diversos componentes que pueden estar adicionalmente definidos en referencia a la ausencia (sustancial o
15 total) o a bajos niveles del componente o componentes tales como arginina, aminoácidos, tensioactivos (opcionalmente con excepción del polisorbato 80), y/o sistemas/agentes tampón, como se define en cualquier lugar de la presente memoria.
Se apreciará que el agente tampón (por ejemplo citrato sódico) o sistema tampón (citrato/ácido cítrico) de cualquiera de las realizaciones anteriormente mencionadas se pueden incorporar directamente en las 20 composiciones o se pueden producir in situ, por ejemplo, a través de una reacción ácido base, haciendo reaccionar adecuadamente un ácido conjugado del agente tampón (por ejemplo ácido cítrico) con una base (por ejemplo hidróxido sódico). Independientemente del método utilizado para proporcionar o producir el agente tampón o sistema tampón, adecuadamente la composición resultante comprende al final un equilibrio apropiado del agente tampón y de cualquier ácido/base conjugado para proporcionar el pH deseado. El experto en la 25 técnica será capaz de calcular o determinar experimentalmente de una forma fácil, sin excesivo esfuerzo, el equilibrio apropiado del agente tampón y del ácido/base conjugado, y/o la cantidad de base que se necesita añadir al ácido conjugado para producir la cantidad apropiada del agente tampón y proporcionar el pH deseado.
En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende:
- de 45 a aproximadamente 55 mg/mL de adalimumab;
30 -de 5 a 14 mM de sistema tampón citrato sódico/ácido cítrico;
- de 190 a 210 mM de trehalosa;
- de 40 a 60 mM de cloruro sódico;
- opcionalmente 0,9 mg/mL y 1,1 mg/mL de polisorbato 80; y
- agua (para inyección);
35 -en donde la composición:
- o tiene un pH de entre 5,7 y 5,9;
- o está (sustancialmente o totalmente) libre de arginina (adecuadamente L-arginina) o comprende arginina a una concentración de como máximo 0,001 mM;
o está (sustancialmente o totalmente) libre de aminoácidos o comprende uno o más aminoácidos (en 40 conjunto) en una concentración de como máximo 0,001 mM.
- o está (sustancialmente o totalmente) libre de tensioactivos con la excepción opcional del polisorbato 80 o comprende uno o más de dichos tensioactivos (opcionalmente excluyendo al polisorbato 80) en una (conjunto) concentración de como máximo 0,0001 mM; y
- o está (sustancialmente o totalmente) libre de agentes tampón fosfato (por ejemplo fosfato
45 dihidrógeno sódico, fosfato dihidrógeno disódico) o comprende un sistema tampón fosfato en una concentración de como máximo 0,001 mM.
En una realización, la composición farmacéutica líquida comprende:
- 50 mg/mL de adalimumab;
- 10 mM de sistema tampón citrato/ácido cítrico;
50 -200 mM de trehalosa;
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-50 mM de cloruro sódico;
-opcionalmente 1,0 mg/mL de polisorbato 80; y
-agua (para inyección);
-en donde la composición:
- o tiene un pH de 5,8;
- o está libre de arginina;
- o está libre de aminoácidos;
- o está libre de tensioactivos con la excepción opcional del polisorbato 80; y
- o está libre de sistemas tampón fosfato.
Preferiblemente, la composición farmacéutica líquida consiste esencialmente en:
-50 mg/mL de adalimumabb;
-10 mM de sistema tampón citrato sódico/ácido cítrico;
-200 mM de trehalosa;
-50 mM de cloruro sódico;
-agua (para inyección);
o en donde la composición tiene un pH de 5,8.
Adecuadamente, la composición farmacéutica líquida se puede establecer según cualquiera de las realizaciones precedentes, excepto que la ausencia o niveles bajos del componente o componentes tales como arginina, aminoácidos, tensioactivos (opcionalmente con la excepción de polisorbato 80), y sistemas/agentes tampón fosfato, en lugar de estar definidos en referencia a la concentración o concentraciones (por ejemplo molaridad), se les pueden definir en cambio en referencia a las razones molares correspondientes del componente para el sistema tampón; o las razones molares correspondientes del componente para adalimumab. El experto en la técnica deducirá fácilmente para cada componente, a partir de las secciones relevantes de esta memoria relacionadas con ese componente específico, qué razones molares y de peso corresponden para cada concentración, ya que en la presente memoria se enumeran las razones molares y de peso relevantes que corresponden respectivamente a las concentraciones proporcionadas. Por ejemplo, en el caso de arginina las concentraciones opcionales de “como máximo 0,1 mM, más adecuadamente como máximo 0,01 mM, el más adecuadamente como máximo 0,001 mM” corresponden respectivamente con una razón molar de arginina para el sistema tampón de arginina de “como máximo 1:150…más adecuadamente como máximo 1:1.500, el más adecuadamente como máximo 1:15.000”, con una “razón de peso de arginina para adalimumab de como máximo 1:3.000…más adecuadamente como máximo
1:30.000 y el más adecuadamente 1:300.000”; y con una razón molar de arginina para adalimumab de como máximo 1:3,75…más adecuadamente como máximo 1:37,5, el más adecuadamente como máximo 1:375”. Se aplican las mismas correspondencias para los aminoácidos, tensioactivos y sistemas /agentes tampón.
Método de fabricación de una composición farmacéutica líquida
La presente divulgación proporciona un método de fabricación de una composición farmacéutica líquida, como se define adecuadamente en la presente memoria. El método comprende mezclar juntos adecuadamente, en cualquier orden particular considerado apropiado, cualquiera de los componentes relevantes requeridos para formar una composición farmacéutica líquida como se define en la presente invención. El experto en la técnica se puede referir a los Ejemplos o a las técnicas bien conocidos en la técnica para formar composiciones farmacéuticas líquidas (especialmente aquellas para inyección a través de una jeringa). Las diferentes realizaciones requerirán mezclar diferentes combinaciones de componentes, en cantidades potencialmente diferentes. El experto en la técnica puede deducir fácilmente tales combinaciones y cantidades por referencia a la divulgación anterior relativa a la composición farmacéutica líquida.
El método implica mezclar juntos adecuadamente los componentes relevantes adecuados, en un diluyente (por ejemplo agua), para que todos los componentes se disuelvan adecuadamente (sustancialmente o totalmente) en el diluyente.
El método puede implicar primero preparar una pre-mezcla (o pre-disolución) de algunos o todos los componentes (opcionalmente con algo o todo el diluyente) excluyendo a adalimumab, y puede mezclarse luego adalimumab por sí mismo (opcionalmente o pre-disolverse en algo de diluyente) o con la pre-mezcla (o pre-disolución) para proporcionar la composición farmacéutica líquida, o una composición a la que se añaden luego los componentes
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como se describe en la presente memoria, adecuadamente una pluralidad de dispositivos de suministros del fármaco. El envase puede comprender cualquier recipiente adecuado para contener uno o más dispositivos de suministro del fármaco.
La presente divulgación proporciona un método para fabricar un envase, el método que comprende incorporar una composición farmacéutica líquida como se define en la presente memoria dentro de un envase. Esto se logra adecuadamente incorporando dicha composición farmacéutica líquida en uno o más dispositivos de suministro del fármaco e incorporando después el único o más dispositivos de suministro del fármaco pre-llenado en un recipiente presente en el envase.
La presente divulgación proporciona un envase obtenible por, obtenido por, o directamente obtenido por un método de fabricación que se define en la presente memoria.
Piezas del Kit
La presente divulgación proporciona un dispositivo de suministro del fármaco que comprende unas piezas del kit (sin la composición farmacéutica líquida incorporada en ella), una composición farmacéutica líquida como se define en la presente memoria (contenida opcionalmente en un envase o recipiente separado), y opcionalmente un conjunto de instrucciones con directrices referentes a la administración (por ejemplo sub-cutánea) de la composición farmacéutica líquida. El usuario puede llenar luego el dispositivo de suministro del fármaco con la composición farmacéutica líquida (que se puede proporcionar en un vial o ampolla o similar) antes de la administración.
Usos de la Composición Farmacéutica Líquida y Métodos de Tratamiento
La presente divulgación proporciona un método para tratar una enfermedad o trastorno médico; una composición farmacéutica líquida para usar en terapia; un uso de la composición farmacéutica líquida en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno; un método para tratar una enfermedad autoinmune relacionada con el factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α); una composición farmacéutica líquida para el uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmune relacionada con el factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α); un uso de una composición farmacéutica líquida en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmune relacionada con el factor de factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α); un método para tratar la artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, psoriasis crónica moderada a grave y/o artritis idiopática juvenil; y un uso de una composición farmacéutica líquida en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, psoriasis crónica moderada a grave y/o artritis idiopática juvenil; como se define en la presente memoria.
Las composiciones farmacéuticas líquidas que se definen en la presente memoria se pueden usar para tratar una o más de las enfermedades o trastornos médicos anteriormente mencionados. En una realización particular, las composiciones farmacéuticas líquidas se utilizan para tratar la artritis reumatoide, la enfermedad de Crohn y la psoriasis.
Adecuadamente las composiciones farmacéuticas líquidas se administran parenteralmente, adecuadamente a través de inyección sub-cutánea.
Ejemplos
Materiales y Equipamiento
Los siguientes materiales se usaron en la preparación de las formulaciones descritas en los Ejemplos (y Ejemplos Comparativos) que siguen:
- Ingrediente
- Adalimumab DS
- Monohidrocloruro de arginina
- Ácido aspártico
- Ácido cítrico monohidratado
- Fosfato de sodio dibásico dihidratado
- Hidrocloruro de lisina
- Manitol
- Fosfato de sodio monobásico dihidratado
- Poloxámero 188
- Polisorbato 80
- Cloruro sódico
- Citrato sódico
- Disolución de hidróxido sódico 30%
- Trehalosa dihidratada
- WFI
Se usaron el equipamiento y materiales desechables siguientes en los Ejemplos (y Ejemplos Comparativos) y Experimentos de Cribado que siguen:
- Objeto
- Código Proveedor
- Tubos Eppendorf (0,5 mL, 1,5 mL, 2,0 mL)
- NA Eppendorf
- Falcon
- 352096 (15 mL), 352070 (50 mL) tubos de polipropileno Becton Dickinson
- Membrana PES (0,22 µm) unidad de filtro
- Membrana MillexGP Express PES REF SLGP033RS Millipore
- Frascos PETG
- 3420-1000, 3420-0500, 2019-0250, 3420-0125, 3420-0060, 2019-0030 Nalgene
Se usó el siguiente envase en los Ejemplos (y Ejemplos Comparativos) y Experimentos de Cribado que siguen.
- Objeto
- Código Proveedor
- Vial de vidrio Tipo I DIN2R
- 0212060.6112 11200000A Nuova Ompi
- Tapa de 1 mL
- S2-F451 RSV; D 21-7S RB2-40 Daikyo Seiko, LTD
- Tapón a presión de 13mm
- 12000350 MS-A
Se usó el siguiente equipamiento en los Ejemplos (y Ejemplos Comparativos) y Experimentos de Cribado que siguen.
- Objeto
- Modelo Fabricante
- Balanzas analíticas
- AX205, PG2002-S Mettler Toledo
- Instrumento de xenón de sobremesa
- Suntest CPS+ Atlas
- Pipetas calibradas
- P20, P100, P200, P1000 Gilson
- HPLC
- Alliance Waters
- iCE280
- Fast IEF Analyzer Convergent Bioscience
- Osmómetro
- Osmomat 030/D Gonotec
- PCR
- 7500 Fast Real-Time AB Applied Biosystem
- pHmetro
- Seven Multi Mettler Toledo
- Refrigeradores
- +2-8°C Angelantoni
- Software Design Expert
- ver. 7.1.5 Stat-Ease, Inc.
- Cabinas termostáticas
- +25°C,+40°C Angelantoni
- Turbidímetro
- 2100AN IS Hach Lange
- Espectrofotómetro de UV
- Lambda 35 Perkin Elmer
Técnicas Analíticas y Protocolos
Se emplearon los siguientes métodos analíticos y protocolos, en los Ejemplos (y Ejemplos Comparativos) y Experimentos de Cribado que siguen, para las razones indicadas en la tabla de abajo:
- Nº de Método
- Método Analítico Alcance de ensayo
- 1
- Bioanalizador Pureza
- 2
- DSF Temperatura de desdoblamiento
- 3
- iCE280 Perfil de isoformas
- 4
- OD Contenido Proteico
- 5
- SE-HPLC Determinación de agregados
- 6
- Nefelometría Turbidez
- 7
- Osmolalidad Disolución de osmolalidad
- 8
- pH Determinación del pH
- 9
- Partículas sub-visibles Recuento de partícula
5
Se describen abajo los protocolos individuales para cada uno de los métodos analíticos anteriores y a su vez, referencias en los Ejemplos (y Ejemplos Comparativos) y Experimentos de Cribado para cualquiera de tales métodos analíticos que usan estos protocolos.
1. Pureza-Bioanalizador
10 Se usó un Bioanalizador A2100. Los protocolos se encontraron en el manual de instrucciones relevante. Sin embargo, los protocolos se han perfeccionado como sigue. Disoluciones: Mezcla del Gel-Tinte (Disolución de tinción): Añadir 25 μL del tinte concentrado 230plus al tubo de gel matriz 230plus proteico. Agitar bien, y centrifugar el
15 tubo durante 15 segundos. Transferir a un filtro de centrifugación y centrifugar a 2.500 rpm durante al menos 20 minutos. La disolución está lista para usar. Almacenar la disolución a +5 ±3ºC durante no más de 4 semanas.
Disolución de Tinción: Pipeta de 650μL de gel matriz en un filtro de centrifugación. Centrifugar a 2.500 rpm durante al menos 25 minutos. Almacenar la disolución a +5 ±3ºC durante no más de 4 semanas.
20 Muestra Tampón: Se recomienda dividir la muestra tampón de 200 μL en alícuotas de 25 μL y descongelar la alícuota para cada chip. Almacenar la disolución de reserva de la muestra tampón y las alícuotas a -20ºC, no más de la fecha de caducidad proporcionada por el proveedor.
Disolución de Reserva de Maleimida: Disolver 23,4 mg de Maleimida en 1 mL de agua MiliQ (0,24 M). Agitar bien la disolución. Posteriormente diluir la disolución 1:4 con agua MiliQ (por ejemplo 50 μL de Disolución Reserva + 150 μL MiliQ). La concentración final de la disolución de Maleimida diluida es 60 mM. (Ya que no hay datos disponibles aún sobre la estabilidad
5 de esta disolución, se debe preparar nuevamente antes del comienzo de cada sesión analítica). Disolución-OTf Para el análisis de las muestras de Adalimumab las disoluciones reductoras se deben preparar con DTT 1 M,
por lo tanto disolver 154,0 mg de DTT en 1 mL agua MiliQ. Disolución No-reductora:
10 Añadir 1 μL de Agua MiliQ a la muestra alícuota tampón (25 μL) y agitar durante 5 segundos. Usar la disolución no-reductora en su día de preparación. Disolución Reductora: Añadir 1 μL de la correspondiente Disolución-Dtf a la alícuota de la muestra tampón (25 μL) y agitar durante 5
segundos. Usar la disolución reductora en su día de preparación.
15 Preparación de la Muestra: Se analizan las muestras a la concentración de un intervalo entre 2,4-3 mg/mL. Si es necesario se pueden diluir las muestras a la concentración diana utilizando agua MiliQ.
Las muestras se preparan según la Guía de Kit de Reactivos utilizando las muestras tampón reductoras y no reductoras según las instrucciones de la Guía de Kit de Reactivos también mencionada anteriormente. Está 20 claramente recomendado usar, de manera distinta a la guía, mayores volúmenes para lograr resultados reproducibles y precisos. Se presenta abajo un ejemplo de cómo preparar la escalera y las muestras:
Preparación de la muestra de la disolución en condición Reductora y No-Reductora
- Reactivo
- Volumen µl Volumen Total µL
- Muestra diluída a 3mg/mL
- 3 µL 6 µL
- Muestra tampón (reductora o no reductora)
- 2 µL
- Disolución Maleimida
- 1 µL
- Las muestras se tienen que mezclar bien (mediante agitación) y centrifugar Todas las Muestras y Escaleras se calientan 5 minutos a 70°C
- agua MilliQ
- 84 µL 90 µL
- Agitar bien y centrifugar Cargar 6 µL de Todas las Muestras y Escaleras
Nota 1: para los IPCs de aquellas concentraciones entre 2,4 mg/mL y 3 mg/mL, la preparación de la muestra sigue la 25 tabla anterior pero el volumen de agua MiliQ añadida después de calentar la muestra se calcula para lograr una concentración proteica final de 0,1 mg/mL.
Se presenta aquí abajo un ejemplo de preparación de una muestra para una muestra que tiene una concentración entre 2,4 y 3,0 mg/mL:
Preparación de la disolución de la muestra en condición Reductora y No-Reductora
- Reactivo
- Volumen µl Volumen Total µL
- Muestra (2,6 mg/mL)
- 3 µL 6 µL
- Muestra tampón (reductora o no reductora)
- 2 µL
- Disolución Maleimida
- 1 µL
- Las muestras se tienen que mezclar bien (mediante agitación) y centrifugar Todas las Muestras y las Escaleras se calientan 5 minutos a 70°C
- agua MilliQ
- 72 µL 78 µL
- Agitar bien y centrifugar Cargar 6 µL de Todas las Muestras y Escaleras
Nota 2: Se tiene que cargar todos los pocillos. Si el número de muestras es menor que los pocillos disponibles, los pocillos vacíos se pueden usar para duplicados adicionales o muestras en vacío. Preparación del Sistema y el Chip:
5 -Limpiar el sistema antes así como también después de completar un análisis del “Electrodo Limpiador” con 600 llL de Agua MiliQ y colocarlo en el Bioanalizador Agilent 2100, cerrar la cubierta y dejar al sistema terminar. No se requiere otra acción.
-Ajustar el plato-base de la estación de preparación del chip a la posición “A” y la pinza de la jeringa en su posición media.
10 Preparación del chip
- Sistema de preparación
- Insertar un Nuevo Chip Proteico en la estación de preparación
- Pipeta de 12µL de Mezcla Gel-Tinción en el pocillo marcado G (Arriba a la derecha)
- Fijar el émbolo a 1 mL y cerrar la estación de preparación del chip
- Presionar el émbolo hasta que se ocupe por la pinza
- Esperar 60 segundos y soltar entonces la pinza
- Esperar 5 segundos y presionar lentamente de nuevo el émbolo a la marca de 1 mL
- Abrir la pinza de la estación de preparación
- Eliminar la disolución en este pocillo
- Pipeta de 12µL de Mezcla de Gel-Tinción en el pocillo marcado G (Arriba a la derecha) y en todos los pocillos remanentes marcados con G
- Pipeta de 12µL de Disolución de Tinción en el pocillo marcado con DS
Carga de la Escalera y la Muestra: -Transferir 6 μL de cada muestra en un pocillo de muestra así como 6 μL de la escalera en el pocillo indicado, que está claramente indicado con un símbolo escalera. 15 Colocar el chip en el Bioanalizador Agilent 2100 y comenzar el análisis en 5 minutos.
Ejemplo del conjunto de la muestra
- Pocillo
- Muestra Cantidad µL
- 1
- Vacío 6
- 2
- Vacío 6
- 3
- Muestra 1 desconocida rep1 6
- 4
- Muestra 1 desconocida rep2 6
- 5
- Muestra 2 desconocida rep1 6
- 6
- Muestra 2 desconocida rep2
- 6
- 7
- Muestra 3 desconocida rep1 6
- 8
- Muestra 3 desconocida rep2 6
- 9
- Material de Referencia Vigente rep1 6
- 10
- Material de Referencia Vigente rep2 6
- Escalera
- Escalera
- 6
Datos de los Análisis y evaluación de los resultados: Para obtener resultados se tienen que ejecutar como mínimo las siguientes operaciones
5 Colocar el chip en el lugar específico y cerrar la cubierta. En el instrumento de Ensayo de contexto seleccionado – Electroforesis-Proteína-Proteína 230 Plus. Apretar START para comenzar el análisis, que se completa en 30 minutos. Los datos en bruto se muestran apretando “Datos de Análisis” donde se enumeran todos los experimentos,
llevados a cabo hasta el momento. Apretar en el experimento de interés y seleccionarlo. 10 El gel que se genera a partir del experimento elegido se abre automáticamente. Los datos se pueden mostrar como un electroferograma o una imagen tipo gel. En el manual del programa informático se incluye información detallada sobre la integración de los picos en el electroferograma (para obtener los datos puros). La pureza de una muestra se proporciona automáticamente por el sistema mediante integración automática, pero si es necesario, se puede aplicar el manual de integración. 15 Resultados:
En condición no reductora los resultados se indican como %Pureza, y %LMW (suma de los picos antes del monómero). En condición reductora los resultados indican como %Pureza, como suma de la cadena pesada (HC) y la cadena
ligera (LC). 20 Los valores indicativos del peso molecular se presentan en la tabla de abajo:
Peso molecular indicativo de Adalimumab
- Condición
- Resultados KDa
- No reductora
- Monomero 151
- Reductora
- LC 27
- HC
- 58
2. Temperatura de Desdoblamiento-DSF
La DSF (fluorometría de barrido diferencial) se realizó como sigue:
5 2 microlitros de Naranja Sypro (tinte gel proteína Naranja), cod. S6650, Life Technologies) previamente diluídos 500 veces en agua para inyección, se añadieron a 20 μL de la disolución del producto farmacológico. En la adición de Naranja Sypro, se llenaron las disoluciones DP (preparación por triplicado) en placas de 96 pocillos (MicroAmp Fast 96-W Reaction Plate 0,1 mL, cod. 4346907). Las placas se sellaron luego con una cubierta transparente, protectora (Película
10 Adhesiva MicroAmp Optical, cod. 4311971) y se sometieron a centrifugación para eliminar las burbujas de aire. Las placas se insertaron luego en el sistema PCR Applied Biosystem 7500 Fast Real-Time AB y se escanearon para la emisión de los perfiles a temperaturas desde temperatura ambiente hasta 90-100ºC. La dependencia de la intensidad de emisión de la fluorescencia sobre la temperatura es una curva que muestra normalmente un punto de inversión/discontinuación a la
15 temperatura de desnaturalización, parámetro que se utiliza para comparar las diferentes composiciones
3. Perfil de isoformas-iCE280
cIEF mediante iCE280 (perfil de isoformas): Después de la purificación y eliminación de sales con centrifugación en dispositivos centrífugos Amicon Ultra-4 (punto de corte de 10 kDa), las muestras se pre-diluyeron con agua 20 purificada a la concentración de 5,0 mg/mL. Luego se preparó una segunda dilución a 1,0 mg/mL con una disolución compuesta de: metil celulosa, Pharmalyte 5-8 (GE Healthcare), Pharmalite 8-10,5 (GE Healthcare), bajo marcador pI 7,05 (Proteína Simple), alto marcador pI 9,50 (Proteína Simple) y agua purificada. Las muestras en disolución se centrifugaron a 10.000 rpm durante 3 minutos. Luego se realizó una etapa de centrifugación adicional (2 minutos a 7.000 rpm) en 150 μL de cada muestra transferida en piezas de vidrio. El 25 cIEF (focalización isoeléctrica capilar) se llevó a cabo con el sistema iCE280 mediante Proteína Simple, utilizando cartuchos Fc con un recubrimiento ID de 100 micras y una longitud total de 50 nm (Cat. Nº. 101700/101701 mediante Proteína Simple). La separación de las distintas isoformas se realiza utilizando hidróxido sódico 100 mM (en 0,1% de metil celulosa) como una disolución catódica y ácido o-fosfórico 80 mM (en 0,1% de metil celulosa) como una disolución anódica. Se obtiene el electroferograma a 280 nm durante
30 tiempos de pre-focalización y focalización de 1 y 6 minutos respectivamente, a un voltaje de 1.500 V (prefocalización) y 3.000 V (focalización).
4. Contenido proteico-OD
Las mediciones OD (contenido proteico) se determinaron en muestras que se diluyeron inicialmente gravimétricamente (se realizaron diluciones triplicadas independientes) con tampón relevante o placebo a partir
35 de la concentración de comienzo hasta aproximadamente 10 mg/mL. Las disoluciones diluidas se ensayaron por absorbancia a 280 y 320 nm en cubetas de cuarzo de 0,1 cm de longitud, a temperatura ambiente, con un espectrofotómetro de doble haz (Lambda35 por Perkin Elmer). Se usó el valor de 1,35 como el coeficiente de extinción molar de Adalimumab.
5. Determinación de agregados-SE-HPLC
40 Las muestras se diluyeron con DPBS 1X a una concentración de 0,5 mL y se inyectaron (volumen de inyección de 20 μL) en una Columna TSK de gel Super SW3000 4,6 mm ID X30,0 cm cod. 18675 mediante condiciones isocráticas de mantenimiento Tosoh (fase móvil: Fosfato Sódico 50 mM + perclorato Sódico 0,4 M, pH 6,3 ± 0,1). La detección UV se realizó a 214 nm a un caudal de 0,35mL. La duración de cada serie analítica fue de 15 minutos. Antes del análisis las muestras se mantuvieron a 2-8ºC en el cargador de muestras automático del
45 sistema HPLC Alliance Waters utilizado para este ensayo.
6. Turbidez-Nefelometría
La turbidez se ensayó mediante nefelometría (efecto basado en el efecto de difusión de la luz causado por partículas con dimensiones normalmente < 1μ) se realizaron mediciones con un Turbidímetro 2100AN IS de Hach a temperatura ambiente. Se colocaron cantidades mínimas de 3 mL de la disolución en cubetas de vidrio
Tabla 6: Composición de Humira DP
- Ingrediente
- Cantidad por recipiente (mg) (volumen de llenado= 0.8 mL) Cantidad(mg/mL)
- Adalimumab
- 40 50
- Ácido Cítrico Monohidrato
- 1,04 1,3
- Fosfato de sodio dibásico dihidratado
- 1,22 1,53
- Manitol
- 9,6 12
- Fosfato de sodio monobásico dihidratado
- 0,69 0,86
- Polisorbato 80
- 0,8 1
- Cloruro sódico
- 4,93 6,16
- Citrato sódico
- 0,24 0,3
- WFI e hidróxido sódico
- c.p. para ajustar el pH hasta 5.2 c.p. para ajustar el pH hasta 5,2
Cribado
Un cribado de la primera formulación (DoE1) condujo a la identificación de varios factores (por ejemplo pH,
5 presencia de NaCl, tipo de excipiente) responsables de la estabilidad proteica, y finalmente a la selección de formulaciones para proseguir en un segundo cribado (DoE2), que pretendían ajustar y evaluar como los tensioactivos tales como el Polisorbato 80 podían impactar en la estabilidad de la proteína.
Cada uno de los dos cribados implicaron varios ensayos analíticos como se define antes en la presente invención y referido más adelante, en un intervalo de formulaciones diferentes que se expusieron a diferentes niveles de estrés
10 térmico, mecánico y lumínico durante periodos de tiempo prolongados (por ejemplo 1 mes). Estos cribados de formulación capacitaron la recopilación de una cantidad significante de datos, que proporcionaron valiosas y sorprendentes aportaciones permitiendo el desarrollo de nuevas formulaciones ventajosas.
Los resultados de los cribados de las dos formulaciones se presentan abajo.
Cribado del Experimento 1 – Análisis y Cribado de formulaciones del Ejemplo 1 frente a Formulaciones 15 Comparativas del Ejemplo 3
Antes del cribado DoE (Etapa 1) se evaluó el efecto que la fuerza iónica (proporcionada por NaCl), el pH y los diferentes estabilizadores ejercen sobre la proteína en el transcurso de los estudios de estabilidad a corto plazo.
Se aplicó el diseño estadístico Óptimo-respuesta de superficie D. Se consideraron tres factores:
-Longitud iónica (conducida por la concentración de NaCl, que varió en el intervalo 25 mM-100 mM y se 20 estableció como un factor numérico),
-pH (se investigó el intervalo 5,4-6,4 tamponado por citrato);
-Estabilizador/Excipiente (factor categórico que comprende varios niveles: Hidrocloruro de lisina + Ácido Aspártico, Manitol, Trehalosa dihidratada).
Estas formulaciones se prepararon, como se describe en el Ejemplo 1 anterior, comenzando a partir de DS sin 25 Polisorbato 80 y por lo tanto libre de tensioactivo.
La Tabla 7 de abajo resume las formulaciones ensayadas en este cribado. Además de las 7 formulaciones propuestas, se analizaron también dos controles como comparadoras:
Producto farmacológico comercial Humira DP (Formulado según el Ejemplo 3 anterior)
Sustancia farmacológica MS formulada como DP comercial Humira (Formulada según el Ejemplo 3 30 anterior)
Tabla 7: Lista de formulaciones cribadas DoE1 (Etapa 1) mediante condiciones de estrés térmico (estabilidad a 40ºC) y determinación del mayor rendimiento de la temperatura de desdoblamiento proteico (DSF).
- Formulación Nº
- Sal (NaCl) conc (mM) Tipo de tampón (10 mM) pH Estabilizador
- 11
- 25 Citrato 5,4 Trehalosa dihidratada (200mM)
- 12
- 25 Citrato 5,4 Monohidrocloruro de arginina +Ácido Aspártico (80 mM + 20 mM)
- 13
- 75 Citrato 5,6 Manitol (200 mM)
- 14
- 50 Citrato 5,6 Hidrocloruro de lisina (100 mM)
- 15
- 100 Citrato 5,6 Manitol (200 mM)
- 16
- 100 Citrato 5,8 Hidrocloruro de lisina (100 mM)
- 17
- 75 Citrato 5,8 Monohidrocloruro de arginina + Ácido Aspártico (80 mM + 20 mM)
- Ref-1 (MS)
- Composición Humira (formulación preparada con la Sustancia Farmacológica MS)-Ejemplo 3
- Ref-2 (RMP US)
- DP Humira comercial (USA)-Ejemplo 3
- Ref-3 (RMP EU)
- DP Humira comercial (EU) – Ejemplo 3
Las formulaciones se ensayaron según el plan presentado en la Tabla 8. Se consideró el estrés térmico hasta 1 mes a 40ºC. El ensayo de alto rendimiento hecho con la técnica DSF (destinada a un cribado rápido basado en la determinación de la temperatura de desdoblamiento proteico) se realizó a T0.
Tabla 8: Tabla de los ensayos analíticos preliminares llevados a cabo en formulaciones DoE (Etapa 1): condiciones de estrés térmico de 1 mes a 40ºC.
- Acelerados (40°C)
- Tiempo de estabilidad (semanas)
- Métodos
- Ensayo 0 2s 4s
- OD
- Contenido x - x
- SE-HPLC
- Agregados x x x
- Bionalizador
- Pureza x x x
- pH
- pH
- x x x
- Osmolalidad
- Osmolalidad
- x - -
- DSF
- T de Desdoblamiento x - -
10 1.1 Cribado de Osmolalidad
La osmolalidad de las formulaciones DoE1 compuestas en un inicio a partir de materiales DS de intercambio tampón (par. 5.1.1) se indican en la Tabla 9. Muchas formulaciones se encontraban en el intervalo de osmolalidad de 250-400 mOsm/kg, mientras se observaron
valores ligeramente mayores en las concentraciones de cloruro sódico más altas. 15
5
10
15
20
25
30
Tabla 9: Osmolalidad (mOsm/kg) registrada a tiempo 0 para el cribado de formulaciones DoE1
- Formulación Nº
- Sal (NaCl) conc (mM) Tipo de tampón (10mM) pH Estabilizador Tiempo 0
- 11
- 25 Citrato 5,4 Trehalosa dihidratada (200mM) 0,340
- 12
- 25 Citrato 5,4 Monohidrocloruro de arginina +Ácido Aspártico (80 mM + 20 mM) 0,276
- 13
- 75 Citrato 5,6 Manitol (200 mM) 0,422
- 14
- 50 Citrato 5,6 Hidrocloruro de lisina (100 mM) 0,331
- 15
- 100 Citrato 5,6 Manitol (200 mM) 0,473
- 16
- 100 Citrato 5,8 Hidrocloruro de lisina (100 mM) 0,432
- 17
- 75 Citrato 5,8 Monohidrocloruro de arginina + Ácido Aspártico (80 mM + 20 mM) 0,372
- Referencia propia (composición Humira, Merck Serono DS)
- 0,374
- Humira RMP (USA)
- NA
- Humira RMP (EU)
- 0,310
1.2 Contenido Proteico
El contenido proteico de las formulaciones DoE1 se determinó a tiempo 0 y después de 1 mes a 40ºC.
La FIG. 1 es un gráfico de barras que muestra el contenido proteico (mg/mL) de las formulaciones DoE1 (de Ejemplo 1), junto con estándares de referencia (que representan formulaciones HUMIRA® comparadoras), a un punto de comienzo arbitrario (barras azules, tiempo=0) y después de 4 semanas (barras rojas) de haber calentado las formulaciones a 40ºC.
Los resultados presentados en la FIG. 1, indicaron que no se producían cambios significativos a lo largo del tiempo. Todas las concentraciones estaban en consonancia con la concentración diana de 50 mg/mL.
1.3 Agregación (SE-HPLC)
La FIG. 2 es un gráfico de barras que muestra el % de agregación, como se determinó mediante SE-HPLC, de las formulaciones DoE1 (del Ejemplo 1), junto con estándares de referencia (que reprensentan formulaciones HUMIRA® comparadoras), a un punto de comienzo arbitrario (barras azules, tiempo=0) y después de 2 semanas (barras verdes) y 4 semanas (barras naranjas) de haber calentado las formulaciones a 40ºC. En la FIG. 2 se representa gráficamente el total de agregados observados mediante SE-HPLC sobre la estabilidad a 40ºC. Se observaron en todas las formulaciones un aumento mínimo en la agregación. Sin embargo, incluso después de 1 mes, todos los niveles de agregación ascendieron menos de 1%.
1.4 Fragmentación (Bioanalizador)
La FIG. 3 es un gráfico de barras que muestra el % de fragmentación, como se determinó mediante un Bionalizador, de las formulaciones DoE1 (del Ejemplo 1), junto con estándares de referencia (que reprensentan formulaciones HUMIRA® comparadoras), a un punto de comienzo arbitrario (barras azul oscuro, tiempo=0) y después de 2 semanas (barras rosas) y 4 semanas (barras azul claro) de haber calentado las formulaciones a 40ºC.
En la FIG. 3, se presenta la variación de fragmentos a lo largo del tiempo como se determinó mediante un Bioanalizador. Las formulaciones a pH más ácido tienden a sufrir tasas de fragmentación más rápidas. Por otra parte, la presencia de aminoácidos a este intervalo de pH puede empeorar considerablemente el perfil de estabilidad. El efecto negativo de las especies aminoacídicas también se confirma a pH 5,4 (Formulación 12).
A pH > 5,0 y en presencia de azúcar/polioles, todas las fórmulas, incluyendo las de referencia, son comparables (fragmentación menor de 1% después de 1 mes a 40ºC).
Los datos se analizaron por medio de ANOVA que confirmó la significancia estadística del factor de pH (valor-p < 0,001), indicaban también que valores de pH > 5,0 podrían destinarse para minimizar la fragmentación.
El cloruro sódico no se encontró ser un factor crítico para la estabilidad en el intervalo de 25-100 mM.
1.5 Cribado de pH
La Tabla 10 muestra el pH de las formulaciones DoE1 (del Ejemplo 1), junto con estándares de referencia (que reprensentan formulaciones HUMIRA® comparadoras), a un punto de comienzo arbitrario (tiempo=0) y después de 2 semanas y 4 semanas de haber calentado las formulaciones a 40ºC.
Como se puede ver en la Tabla 10, no se observaron desviaciones desde el pH diana.
Tabla 10: pH de las formulaciones de cribado DoE1 determinado durante la estabilidad a 40ºC
- Tiempo de estabilidad
- Formulación Nº
- Sal (NaCl) conc (mM) Tipo de tampón (10 mM) pH Estabilizador Tiempo 0 2 semanas 40ºC 4 semanas 40ºC
- 11
- 25 Citrato 5,4 Trehalosa dihidratada (200mM) 5,5 5,5 5,3
- 12
- 25 Citrato 5,4 Monohidrocloruro de arginina +Ácido Aspártico (80 mM + 20 mM) 5,4 5,5 5,3
- 13
- 75 Citrato 5,6 Manitol (200 mM) 5,6 5,6 5,5
- 14
- 50 Citrato 5,6 Hidrocloruro de lisina (100 mM) 5,6 5,6 5,5
- 15
- 100 Citrato 5,6 Manitol (200 mM) 5,6 5,6 5,5
- 16
- 100 Citrato 5,8 Hidrocloruro de lisina (100 mM) 5,8 5,8 5,7
- 17
- 75 Citrato 5,8 Monohidrocloruro de arginina + Ácido Aspártico (80 mM + 20 mM) 5,8 5,8 5,7
- Referencia propia (composición Humira, Merck Serono DS)
- 5,2 5,2 5,2
- Humira RMP (USA)
- 5,3 5,3 5,3
- Humira RMP (EU)
- 5,3 5,3 5,3
1.6 Temperatura de Desdoblamiento (DSF)
10 DSF es un método de alto rendimiento que se dirige a la determinación de la temperatura de desdoblamiento de proteínas mediante la cualidad del incremento de las interacciones con sondas fluorescentes cuando se aplican rampas de temperatura a las muestras. Cuando las proteínas comienzan a desdoblarse trozos hidrofóbicos se expondrán progresivamente al disolvente atrayendo a las sondas fluorescentes que pasarán de un estado libre en disolución (no fluorescente) al estado unido (a través de interacciones hidrofóbicas) con la proteína, incrementando
15 por tanto el grado de la señal fluorescente.
A partir de la evalución de la señal fluorescente, fue posible determinar el punto medio de las curvas sigmoidales, que indican el punto de transición de cada formulación. Se asume que el mayor punto de transición, es el mayor punto de resistencia de la fórmula al estrés térmico.
En la FIG.4 se presentan los resultados del ensayo que se realizó sobre las formulaciones de cribado DoE1. La FIG.
20 4 es un gráfico de barras que muestra la temperatura de desdoblamiento (ºC), como se determinó mediante DSF, de las formulaciones DoE1 (del Ejemplo 1), junto con estándares de referencia (que representan formulaciones HUMIRA® comparadoras).
Tabla 13: Tabla de los ensayos analíticos llevados a cabo en las formulaciones DoE2 (Etapa 2): condiciones de estrés térmico de 1 mes a 40ºC (A), estrés de agitación a 200 rpm (B) y exposición a la luz según ICH Q1B (C).
- A. Estrés térmico a 40ºC
- Acelerados (40ºC)
- Tiempo de estabilidad (semanas)
- Métodos
- Ensayo 0 2s 4s
- OD
- Contenido x - x
- iCE280
- Isoformas x x x
- SE-HPLC
- Agregados x x x
- Bioanalizador
- Pureza x x x
- pH
- pH
- x x x
- Osmolalidad
- Osmolalidad
- x - -
- Nefelometría
- Turbidez x x x
- DSF
- T de desdoblamiento x - -
- B. Condiciones de estrés por agitación
- Estrés por agitación (200 rpm)
- Tiempo de estabilidad (horas)
- Métodos
- Ensayo 0 24 h 48 h
- OD
- Contenido x - -
- SE-HPLC
- Agregados x x x
- Bioanalizador
- Pureza x x x
- pH
- pH
- x x x
- Nefelometría
- Turbidez x x x
- C. Exposición lumínica de 7 horas de exposición a 765W/m2 (ICH Q1 B).
- Exposición lumínica
- Muestra
- Métodos
- Tiempo de Ensayo Time 0 Expuesta
- OD
- Contenido x -
- iCE280
- Isoformas x x
- SE-HPLC
- Agregados x x
- Bioanalizador
- Pureza x x
- pH
- pH
- x x
- Nefelometría
- Turbidez x x
Los ensayos de estrés térmico se realizaron por simple calentamiento de una muestra de las formulaciones relevantes a la temperatura estipulada durante la cantidad de tiempo estipulada (normalmente 2 semanas o 4 semanas/1 mes).
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-
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