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ES2691673T3 - Inhibidores de Fak - Google Patents

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ES2691673T3
ES2691673T3 ES12705383.3T ES12705383T ES2691673T3 ES 2691673 T3 ES2691673 T3 ES 2691673T3 ES 12705383 T ES12705383 T ES 12705383T ES 2691673 T3 ES2691673 T3 ES 2691673T3
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ES
Spain
Prior art keywords
mmol
phenyl
trifluoromethyl
give
amino
Prior art date
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Active
Application number
ES12705383.3T
Other languages
English (en)
Inventor
Ian Peter Holmes
Ylva BERGMAN
Gillian Elizabeth LUNNISS
Marica NIKAC
Neil Choi
Catherine Fae HEMLEY
Scott Raymond WALKER
Richard Charles FOITZIK
Danny GANAME
Romina LESSENE
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Cancer Therapeutics CRC Pty Ltd
Original Assignee
Cancer Therapeutics CRC Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cancer Therapeutics CRC Pty Ltd filed Critical Cancer Therapeutics CRC Pty Ltd
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Active legal-status Critical Current
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Abstract

Un compuesto de la fórmula (I):**Fórmula** o una forma iónica, salina o de solvato del mismo, en la que: R1 se selecciona de: H y**Fórmula** en las que: RN1 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; RN2 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; RN3 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; RN4 se selecciona de H y CH3; RN7 y RN8 se seleccionan independientemente de H y CH3; RN9 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; RN10 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; RN11 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; R2 se selecciona de H y**Fórmula** en las que: RN5 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; RN6 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; y en donde solamente uno de R1 y R2 es H; o R1 y R2 juntos forman el grupo -CH2-N(RN12)-C2H4-, donde RN12 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(>=O)Me; R4 se selecciona de CF3, halo, CF2H y CN; y R5 se selecciona de grupos de las siguientes fórmulas:**Fórmula** en las que: R6 se selecciona de H, (CHRC1)n1C(O)N(RN13)Z1 y (CH2)n2C(O)OZ2; en donde: n1 es 1; RC1 es H o Me; RN13 es H o CH3; Z1 es H, CH3 u OCH3; n2 es 1; y Z2 es CH3; y donde solamente uno de RN13 y Z1 puede ser CH3, R7, si está presente, se selecciona de H, y (CH2)m1C(O)N(RM1)Y1, en donde: m1 es 0 o 1; RM1 es H; y Y1 es H, Me u OCH3; y uno de R6 y R7 no es H; y R8, si está presente, es H o, cuando R7 es C(>=O)NH2, R8 se selecciona de H y alquilo C1-2.

Description

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DESCRIPCION
Inhibidores de Fak
Esta invención se refiere a pirimidinas 2,4,5-sustituidas que inhiben la cinasa de adhesión focal (FAK), también conocida como proteína tirosina cinasa 2 (PTK2), y VEGFR3, y a composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. Esta descripción también se refiere a un método para usar dichos compuestos para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades proliferativas, tal como cáncer.
Antecedentes
La migración celular direccional es importante en muchos procesos fisiológicos y patológicos incluyendo el desarrollo embrionario, cicatrización de heridas, angiogénesis, invasión tumoral y metástasis. La transducción de señales extracelulares, que estimulan a las células para que se muevan en dirección, puede inducirse por una serie de procesos que incluyen la unión de integrinas transmembrana a proteínas de la matriz extracelular y la acción de los factores de crecimiento (por ejemplo, EGF, IGF y VEGF) en los dominios extracelulares de su receptores afines.
La FAK es una tirosina cinasa no receptora que media señales tanto de integrinas transmembrana como de receptores de factor de crecimiento. Se ha informado que FAK desempeña un papel central en la coordinación de estas diversas señales extracelulares, integrándolas de una manera que da como resultado un movimiento direccional de las células a través de su entorno externo (Tomar y Schlaepfer. Current Opinion in Cell Biology: 2009, 21,676-683).
La agrupación de integrinas o la activación de un receptor del factor de crecimiento (por ejemplo, EGFR, IGF-1R, Her2 y VEGFR) promueve la autofosforilación de FAK en Y397.
Y397 FAK fosforilada se une entonces a c-Src (denominado Src en el presente documento) y la fosforilación de FAK mediada por Src en Y576 e Y577 se produce para dar lugar a un complejo FAK-Src activo. FAK-Src activo facilita la señalización a través de una serie de vías bioquímicas que influyen en procesos como la adhesión celular, migración, invasión, supervivencia celular, proliferación, adquisición de resistencia a la quimioterapia y la metástasis (Brunton y Frame. Current Opinion in Pharmacology: 2008, 8, 437-432 y Chatzizacharias et at. Expert Opinion in Therapeutic Targets: 2007, 11(10), 1315-1328).
Adhesión celular
Los estudios funcionales que abordan el papel de FAK en la adhesión celular sugieren que contribuye tanto al ensamblaje de adhesión focal (Richardson y Parsons. Nature: 1996, 380, 538-540) como al cambio de adhesión focal (Fincham et al. Oncogene: 1995, 10(11), 2247-2252). Se ha demostrado que la inhibición de la FAK por ARNi en líneas celulares tanto humanas como de ratón, lo que da como resultado una disminución de los niveles de proteína FAK, reduce la adhesión celular a una placa recubierta de fibronectina/laminina in vitro (Tsutsumi et al. International Journal of Oncology: 2008, 33(1), 215-224).
Migración celular
Hay pruebas sólidas de que FAK es un regulador clave de la migración celular (Angelucci y Bologna. Current Pharmaceutical Design: 2007, 13, 2129-2145 y Mitra et al. Nature Reviews Molecular Cell Biology: 2005, 6, 56-68). Las células derivadas de embriones de ratón FAK -/- presentan una migración reducida como resultado de un cambio en la capacidad de adhesión (Ilic et al. Nature: 1995, 377, 539-544). Además, el desplazamiento de FAK de las adhesiones focales reduce la migración celular (Gilmore y Romer. Molecular Biology of the Cell: 1996, 7(8), 12091224), mientras que la sobreexpresión en células CHO estimula la migración (Cary et al. Journal of Cell Science: 1996, 7, 1787-1794). Además, se ha demostrado que la inhibición de la FAK por ARNi en líneas celulares tanto humanas como de ratón, lo que da como resultado una disminución de los niveles de proteína FAK, reduce la migración celular en un ensayo de migración haptotáctica in vitro (Tsutsumi et al. International Journal of Oncology: 2008, 33(1), 215-224).
Invasión celular
Se ha demostrado que la activación de FAK mejora el comportamiento invasivo degradante de la matriz. La señalización de FAK-Src a través de la proteína de susceptibilidad a la apoptosis celular (CAS) (Liao et al. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research: 2008, 27:15) conduce a la expresión de metaloproteasas de matriz (MMP), incluyendo MMP2 y MMP9. La activación de FAK-Src también promueve la expresión de la superficie celular de MMP14 a través de la fosforilación de la endofilina A2. La MMP14 activa entonces la MMP2 por escisión de pro- MMP2 a su forma activa (Siesser y Hanks. Clinical Cancer Research: 2006, 12(11), 3233-3237).
Las células cancerosas altamente invasivas forman protrusiones de membrana degradantes de la matriz extracelular especializadas ricas en actina conocidas como invadopodios que son ricas en proteasas que degradan la matriz,
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tales como las MMP. Tanto FAK como Src han demostrado ser instrumentales en la formación de invadopodios (Chan et al. Journal of Chemical Biology: 2009, 185(2), 357-370).
Supervivencia celular
Se ha demostrado que FAK desempeña un papel importante en la supervivencia celular. Se ha demostrado que la activación de FAK da como resultado la supresión de anoikis (apoptosis en respuesta a un entorno de matriz extracelular inapropiado) (Frisch et al Journal of Cell Biology. 1996, 134(3), 793-799 y Xu et al Cell Growth and Differentiation. 1996, 7(4), 413-418). Los estudios han demostrado que la FAK activa múltiples vías descendentes para suprimir el anoikis tanto en los fibroblastos como en las células epiteliales (Zouq et al. Journal of Cell Science: 2008, 122, 357-367). En las células de la cripta intestinal humana, la señalización a través de la asociación de FAK con la integrina p1 y la posterior unión con Src regula positivamente la expresión de las proteínas anti-apoptóticas BcI-Xl y Mcl-1 a través de la señalización de PI3-K/Akt-1. La señalización de PI3-K/Akt-1 también regula negativamente la expresión de los activadores pro-apoptóticos Bax y Bak, causa la fosforilación del sensibilizador pro-apoptótico Bad y antagoniza la activación de p38p. La disociación de FAK/Src da como resultado una activación sostenida/mejorada de p38p que es un impulsor de apoptosis/anoikis (Bouchard et al. Apoptosis: 2008, 13, 531542).
Proliferación celular
La reducción en la expresión de la integrina FAK o p1 y, por lo tanto, la interrupción del eje de señalización p1-FAK da como resultado una disminución de la proliferación inicial de células micro-metastásicas distribuidas en el pulmón. Al usar células D2 cultivadas en 3D, se observó una fuerte correlación entre la fosforilación y la capacidad proliferativa de FAK Y397 y Y861 (Shibue y Weinberg. PNAS 2009, 106(25), 10290-10295). Se ha demostrado que las células HL-60, transfectadas para sobreexpresar FAK, se duplican a una velocidad 1,5 veces más rápida que las células HL-60 de control. Los estudios revelaron una marcada inducción de la expresión de ciclina D3 y la actividad de CDK en las células que sobreexpresaban FAK. La activación de la señalización de PI3-K/Akt-1, un proceso asociado con la activación de FAK en varios estudios, se identificó como una causa probable de la expresión/activación de ciclina (Yamamoto et al. Cellular Signaling: 2003, 15. 575-583).
Adquisición de la resistencia a la quimioterapia
La exposición de la línea celular OAW42 de cáncer de ovario sensible al cisplatino a ciclos repetidos de tratamiento con cisplatino y la recuperación posterior dio como resultado la formación de células OAW42-R resistentes a la quimioterapia. Los estudios dirigidos a identificar la causa de esta resistencia a la quimioterapia revelaron que la FAK era constitutivamente activa tanto en las células sensibles como en las resistentes a la quimioterapia. Sin embargo, la inhibición de la fosforilación de Y397 FAK se indujo por tratamiento con cisplatino en las células OAW42 pero no en las células OAW42-R (Poulain y colaboradores. Gynaecologic oncology: 2006, 101, 507-519). Los efectos de la inhibición de la FAK en la resistencia a la quimioterapia también se han estudiado in vitro e in vivo usando el inhibidor de FAK TAE226, en solitario y junto con docetaxel, en las líneas celulares de cáncer de ovario sensibles a taxano (SKOV3ip1 y HeyA8) y resistentes a taxano (HeyA8-MDR). TAE226 tiene la estructura:
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y se describe en los documentos WO 2004/080980 y WO 2005/016894. In vitro, TAE226 inhibió la fosforilación de FAK en los sitios Y397 e Y861, inhibió el crecimiento celular de manera dependiente del tiempo y la dosis, y mejoró la inhibición del crecimiento mediada por docetaxel 10 y 20 veces en las líneas celulares sensibles a taxano y resistentes a taxano, respectivamente. In vivo, la inhibición de FAK por TAE226 redujo significativamente la carga tumoral en los modelos HeyA8, SKOV3ip1 y HeyA8-MDR (46-64 %) en comparación con los controles tratados con vehículo. Sin embargo, la mayor eficacia se observó con la administración concomitante de TAE226 y docetaxel en los tres modelos (reducción del 85-97 %). Además, TAE226 junto con docetaxel prolongó significativamente la supervivencia en ratones portadores de tumores (Halder et al. Cancer Res: 2007, 67(22), 10976-10983).
Potencial metastásico
Varios estudios han examinado el papel de los niveles de proteína FAK y su relación con la progresión tumoral en modelos animales. En un modelo de carcinogénesis de piel de ratón utilizando ratones FAK +/-, la expresión
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reducida de la proteína FAK se correlacionó con una menor formación de papiloma (46 %), en comparación con los ratones de control de tipo salvaje FAK +/+ (McLean et al. Cancer Research: 2001, 61, 8385-8389). Usando células de carcinoma de mama humano, los investigadores demostraron que las células tratadas con ARNsi de FAK fueron inhibidas de metástasis al pulmón después de la implantación ortotópica en ratones desnudos (Benlimame et al. Journal of Cell Biology: 2005,171, 505-516). Experimentos similares con ARN de horquilla corta (ARNsh) contra FAK en células de carcinoma de mama de ratón 4T1 dieron como resultado una inhibición de la metástasis en los pulmones después de la implantación ortotópica en las almohadillas mamarias (Mitra et al. Oncogene: 2006, 25, 4429-4440). La inhibición de FAK por expresión negativa dominante en células de carcinoma de mama de ratón 4T1 redujo el crecimiento del tumor y la angiogénesis en ratones (Mitra et al. Oncogene: 2006, 25, 5969-5984). El uso de un sistema de recombinación Cre/loxP para interrumpir la función de FAK en el epitelio mamario de un modelo transgénico de cáncer de mama ha demostrado que la expresión de FAK es necesaria para la transición de las hiperplasias preneoplásicas a carcinomas y sus metástasis posteriores. La disminución observada en la progresión tumoral se correlacionó adicionalmente con la proliferación epitelial mamaria alterada, lo que sugiere que la FAK desempeña un papel crítico en la progresión tumoral mamaria (Lahlou et al. PNAS USA: 2007, 104(51), 2030220307).
De acuerdo con las observaciones anteriores, la sobreexpresión del ARNm y/o la proteína de FAK se ha informado en numerosos cánceres humanos, incluido el cáncer colorrectal (de Heer. European Journal of Surgical Oncology: 2008, 34(11), 1253-1261), cáncer de próstata (Tremblay, L., W. Hauck, et al. International Journal of Cancer: 1996, 68(2), 164-171), cáncer de mama (Watermann et al. British Journal of Cancer 2005, 93(6), 694-698) y melanomas (Hess et al. Cancer Research: 2005, 65(21), 9851-60). Además, la sobreexpresión de FAK se correlaciona frecuentemente con fenotipos más agresivos de estos cánceres.
Por lo tanto, hay pruebas sólidas que sugieren que un inhibidor de FAK tendría una aplicación para la reducción de la adhesión celular, migración celular, invasión celular, proliferación celular y resistencia a la quimioterapia. Además, un inhibidor de FAK tendría aplicabilidad para inducir la apoptosis de las células en entornos de matriz extracelular inadecuados y reducir la angiogénesis.
Se apreciará que la actividad en otras tirosina cinasas y serina/treonina cinasa en combinación con la actividad de FAK puede ser beneficiosa para el tratamiento de enfermedades proliferativas, tal como cáncer.
Por ejemplo, el receptor del factor de crecimiento endotelial vascular VEGFR3 (Flt4) se sobreexpresa en pacientes con melanoma con metástasis en ganglios linfáticos regionales (Mouawad et al. European Journal of Cancer: 2009, 45, 1407-1414). En muchos cánceres humanos también se observan niveles anormales de expresión de los ligandos de la tirosina cinasa del receptor endógeno. Por ejemplo, los niveles de expresión de los factores de crecimiento endotelial vascular C y D (VEGF-C y VEGF-D), ligandos de VEGFR3, se correlacionan significativamente con la metástasis linfática y la invasión de los vasos linfáticos en el carcinoma cervical invasivo en etapa temprana (Journal of Experimental y Clinical Cancer Research 2009, 28).
Por consiguiente, los compuestos que inhiben selectivamente FAK y VEGFR3 serían útiles para el tratamiento de enfermedades proliferativas, tal como cáncer.
Los dos compuestos que se informa que inhiben FAK son PF-562.271 y PF-573.228.
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PF-562,271 se describe en los documentos WO2004/056786, WO2004/056807, WO2005/023780, WO2007/063384 y Roberts et al. Cancer Res 2008, 68(6), 1935-1944.
PF-573.228 se describe en Slack-Davis et al. J. Biol. Chem. 2007, 282(20), 14845-14852.
Además de estos compuestos descritos específicamente, se describen otras clases de inhibidores de FAK en los documentos WO2008/129380, WO2008/115369, WO2009/105498, US2010/113475, WO2009/143389,
WO2009/071535, WO2010/055117, WO2010/058030, WO2010/058032, WO2007/140222 y WO2009/024332.
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Sumario de la invención
Los presentes inventores han descubierto una clase particular de compuestos que son eficaces como inhibidores de FAK, y también inhiben VEGFR3. Estos compuestos pueden presentar selectividad para FAK sobre las cinasas tales como VEGFR1, IGF-1R (receptor del factor de crecimiento tipo insulina 1), IR (receptor de insulina) y CDK (cinasas dependientes de ciclina). Adicionalmente, los compuestos de la invención pueden tener una selectividad mejorada para la inhibición de las enzimas del citocromo p450, específicamente las isoformas 2C9 y 3A4. Además, los compuestos de la invención pueden ser menos propensos a la formación de aductos con glutatión.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona compuestos de la siguiente fórmula (I):
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en la que:
R1 se selecciona de: H y
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en la que:
RN1 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN2 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN3 se selecciona de H, alquilo C1-3 y c(=o)Me;
RN4 se selecciona de H y CH3;
rN7 y rN8 se seleccionan independientemente de H y CH3; RN9 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN10 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN11 se selecciona de H, alquilo y C(=O)Me;
R2 se selecciona de H y
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en la que:
RN5 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN6 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me; y en la que solamente uno de R1 y R2 es H;
o R1 y R2 juntos forman el grupo -CH2-N(RN12)-C2H4-, donde RN12 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
R4 se selecciona de CF3, halo, CF2H y CN; y
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R5 se selecciona de grupos de las siguientes fórmulas:
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en las que:
R6 se selecciona de H, (CHRc1)n1C(O)N(RN13)Z1 y (CH2)n2C(O)OZ2; en la que: n1 es 1;
RC1 es H o Me;
RN13 es H o CH3;
Z1 es H, CH3 u OCH3; n2 es 1; y Z2 es CH3;
y donde solamente uno de RN13 y Z1 puede ser CH3,
7 M1 1
R , si están presentes, se selecciona de H, y (CH2)m1C(O)N(R )Y , en la que: m1 es 0 o 1;
RM1 es H; y
Y1 es H, Me u OCH3; y uno de R6 y R7 no es H; y
R8, si están presentes, es H o, cuando R7 es C(=O)NH2, R8 se selecciona de H y alquilo C1-2.
Un segundo aspecto de la presente invención proporciona una composición que comprende un compuesto del primer aspecto y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Un tercer aspecto de la invención proporciona un compuesto del primer aspecto para su uso en un método de terapia.
Un aspecto adicional de la invención proporciona un compuesto del primer aspecto para su uso en el método de tratamiento del cáncer.
Los grupos R1 a R8 se analizarán en más detalle a continuación.
R1
R1 puede tener una de las siguientes estructuras:
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Cuando R1 es H, R2 (analizado a continuación) no es H.
Cada uno de RN1, RN2 y RN3 se selecciona independientemente de H, alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo) y C(=O)Me y RN4 se selecciona de H o metilo. RN7 es H o metilo. Rn7 y RN8 se seleccionan independientemente de H y CH3. Cada uno de RN9, RN10 y RN11 se selecciona también independientemente de H, alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo) y C(=O)Me.
R2
R2 puede tener una de las siguientes estructuras:
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Cuando R2 es H, R1 (analizado anteriormente) no es H.
RN5 y RN6 se seleccionan independientemente de H, alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo) y C(=O)Me.
R1 y R2
Cuando R1 y R2 juntos forman el grupo -CH2-N(RN12)-C2H4-,
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RN12 se selecciona de H, alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo) y C(=O)Me. R4
R4 se selecciona de CF3, halo (es decir, F, CI, Br, I), CF2H y CN En algunas realizaciones, el grupo halo es CI o Br.
R6
R6 se selecciona de H, (CHRc1)n1C(O)N(RN13)Z1 y (CH2)n2C(O)OZ2; en la que:
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ni es 1;
RC1 es H o Me;
RN13 es H o CH3;
Z1 es H, CH3 u OCH3; n2 es 1; y Z2 es CH3;
en la que solamente uno de RN13 y Z1 puede ser CH3.
Cuando R6 es H, R7 (analizado a continuación) no es H.
Si R6 es (CHRc1 )n1C(O)N(RN6)Z1, puede seleccionarse de: CH2C(O)NH2, CH2C(O)NHCH3, CH2C(O)NHOCH3, CH2C(O)NCH3OCH3, CHCH3C(O)NH2, CHCH3C(O)NHCH3, CHCH3C(O)NHOCH3, y CHCH3C(O)NCH3OCH3.
Si R6 es (CH2)n2C(O)OZ2, es CH2C(O)OCH3.
R7
R7 se selecciona de H, y (CH2)m1C(O)N(RM1)Y1, en la que: m1 es 0 o 1;
RM1 es H; y
Y1 es H, Me u OCH3;
Cuando R7 es H, R6 (analizado anteriormente) no es H. Además, cuando R7 no está presente, R6 (analizado anteriormente) no es H.
Cuando R7 es (CH2)m1C(O)N(RM1)Y1, puede seleccionarse de C(O)NH2, C(O)NHCH3, C(O)NHOCH3, CH2C(O)NH2, CH2C(O)NHCH3 y CH2C(O)NHOCH3.
R8
R8 es H, excepto cuando R7 es C(=O)NH2, puede ser, como alternativa, alquilo C1-2, es decir metilo o etilo.
Otras formas incluidas
Se incluyen en lo anterior las formas iónicas, salinas y de solvato de estos sustituyentes. Por ejemplo, una referencia al ácido carboxílico (-COOH) también incluye la forma aniónica (carboxilato) (-COo-), así como una sal o solvato de los mismos. De manera similar, una referencia a un grupo amino incluye la forma protonada (-N+HR1R2), así como una sal o un solvato del grupo amino, por ejemplo, una sal de clorhidrato. De manera similar, una referencia a un grupo hidroxilo también incluye la forma aniónica (-O-), así como una sal o solvato de los mismos.
Isómeros, sales y solvatos
Determinados compuestos pueden existir en una o más formas geométricas especiales, propiedades ópticas, formas enantioméricas, diastereoméricas, epiméricas, estereoisoméricas, tautoméricas, conformacionales o anoméricas, incluyendo, pero sin limitación, formas cis y trans; formas E y Z; formas c, t, y r; formas endo y exo; formas R, S y meso; formas D y L; formas d y I; formas (+) y (-); formas ceto, enol y enolato; formas sin y anti; formas sinclinal y anticlinal; formas a y p; formas axiales y ecuatoriales; formas barco, silla, torsión, sobre, y media silla; y combinaciones de las mismas, en lo sucesivo en el presente documento denominadas de forma colectiva como “isómeros” (o “formas isoméricas”).
Cabe destacar que, excepto como se analiza a continuación para formas tautómeras, específicamente excluidas del término "isómeros", como se usa en el presente documento, son isómeros estructurales (o constitucionales) (es decir, isómeros que difieren en las conexiones entre átomos en lugar de simplemente por la posición de los átomos en el espacio). Por ejemplo, una referencia a un grupo metoxi, -OCH3, no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, un grupo hidroximetilo, -CH2OH. De manera similar, una referencia al orto-clorofenilo no debe interpretarse como una referencia a su isómero estructural, el metaclorofenilo. Sin embargo, una referencia a una clase de estructuras bien puede incluir formas estructuralmente isoméricas que pertenecen a esa clase (por ejemplo, alquilo C1-7 incluye n-propilo e iso-propilo; butilo incluye n-, iso-, sec-, y terc-butilo; metoxifenilo incluye orto-, meta- y para-metoxifenilo).
La exclusión anterior no se refiere a formas tautoméricas, por ejemplo, formas ceto, enol y enolato, como en, por ejemplo, los siguientes pares tautoméricos: ceto/enol (ilustrado a continuación), imina/enamina, amida/imino alcohol, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol, N-nitroso/hiroxiazo y nitro/aci-nitro.
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Cabe destacar que en el término "isómero" están incluidos de forma específica los compuestos con una o más sustituciones isotópicas. Por ejemplo, H puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 1H, 2H (D) y 3H (T); C puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 12C, 13C y 14C; O puede estar en cualquier forma isotópica, incluyendo 16O y 18O; y similares.
Salvo que se especifique otra cosa, una referencia a un compuesto particular incluye todas las formas isoméricas, incluyendo (total o parcialmente) mezclas racémicas y otras mezclas de las mismas. Los métodos de preparación (p. ej., síntesis asimétrica) y separación (p. ej., cristalización fraccionada y medios cromatográficos) de dichas formas isoméricas se conocen en la técnica o se obtienen fácilmente adaptando los métodos enseñados en el presente documento o métodos conocidos, de una manera conocida.
Salvo que se especifique otra cosa, una referencia a un compuesto particular también incluye formas iónicas, salinas y de solvato del mismo, por ejemplo, como se analiza a continuación.
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manipular una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se analizan en Berge et al. J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Por ejemplo, si el compuesto es aniónico, o tiene un grupo funcional que puede ser aniónico (por ejemplo, -COOH puede ser -COO"), entonces puede formarse una sal con un catión adecuado. Los ejemplos de cationes inorgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, iones de metal alcalino, tales como Na+ y K+, cationes de metal alcalinotérreo, tales como Ca2+ y Mg2+, y otros cationes tales como Al3+. Los ejemplos de cationes orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, ión de amonio (es decir, NH4+) e iones de amonio sustituido (por ejemplo, NH3R+, NH2R2+, NHR3+, NR4+). Los ejemplos de algunos iones amonio sustituido adecuados son los procedentes de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, bencilamina, fenilbencilamina, colina, meglumina y trometamina, así como aminoácidos, tales como lisina y arginina. Un ejemplo de un ion de amonio cuaternario común es N(CH3)4+.
Si el compuesto es catiónico, o tiene un grupo funcional que puede ser catiónico (por ejemplo, - NH2 puede ser - NH3+), entonces puede formarse una sal con un anión adecuado. Los ejemplos de aniones inorgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los ácidos inorgánicos siguientes: clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico y fosforoso. Los ejemplos de aniones orgánicos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los ácidos orgánicos siguientes: acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, palmítico, láctico, málico, pamoico, tartárico, cítrico, glucónico, ascórbico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, aspártico, benzoico, cinámico, pirúvico, salicílico, sulfanílico, 2- acetioxibenzoico, fumárico, fenilsulfónico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etanosulfónico, etano disulfónico, oxálico, pantoténico, isetiónico, valérico, lactobiónico, y glucónico. Los ejemplos de aniones poliméricos adecuados incluyen, pero sin limitación, los obtenidos a partir de los ácidos poliméricos siguientes: ácido tánico, carboximetilcelulosa.
Puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar un solvato correspondiente del compuesto activo. En el presente documento el término “solvato” se usa en el sentido convencional para referirse a un complejo de soluto (por ejemplo compuesto activo, sal del compuesto activo) y disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato se puede definir oportunamente como un hidrato, por ejemplo, un mono-hidrato, un di-hidrato, un tri-hidrato, etc.
Selectividad
La selectividad de los compuestos para inhibir FAK y VEGFR3 sobre otras cinasas, tales como IGF-1R, IR y CDK puede demostrarse mediante resultados de ensayos bioquímicos (véase, por ejemplo, el ensayo de cinasas FAK y los ensayos de VEGFR3 descritos a continuación).
Los compuestos de la invención también pueden ser selectivos sobre VEGFR1 y/o VEGFR2.
La selectividad de los compuestos para FAK sobre la inhibición de las enzimas del citocromo p450, específicamente las isoformas 2C9 y 3A4, se puede determinar usando ensayos de inhibición estándar.
La tendencia de los compuestos de la invención a la formación de aductos con glutatión se puede determinar
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mediante el protocolo descrito en Walker, et al. Biorg. Med. Chem. Letts. 2008, 18, 6071-6077. Realizaciones adicionales
Las siguientes realizaciones y preferencias pueden combinarse entre sí según sea apropiado. En algunas realizaciones, R2 es H y R1 es:
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en la que RN1 se selecciona de H, alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo) y C(=O)Me. En algunas de estas realizaciones, puede preferirse que RN1 sea C(=O)Me. En otras de estas realizaciones, puede preferirse que RN1 sea H, metilo o etilo.
En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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en la que RN2 se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN2 se seleccione de H y metilo. En otras de estas realizaciones, puede preferirse que RN2 sea etilo.
En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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en la que RN3 se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN3 se seleccione de H y metilo. En otras de estas realizaciones, puede preferirse que RN3 sea etilo.
En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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en la que RN4 se selecciona de H y metilo. En estas realizaciones, puede preferirse que RN4 sea H.
En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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, en donde RN7 y RN8 son ambos H o son ambos metilo. En algunas de estas realizaciones, puede preferirse que RN7y RN8 sean ambos H.
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En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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, en la que R se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN9 sea H.
En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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en la que R se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN10 se seleccione de H y metilo.
En otras realizaciones, R2 es H y R1 es:
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en la que RN11 se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN11 sea H.
En algunas realizaciones, R1 es H y R2 es:
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donde RN5 se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN5 se seleccione de H y metilo.
En algunas realizaciones, R1 es H y R2 es:
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donde RN6 se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir, metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN6 se seleccione de H y metilo.
Puede preferirse además que R1 sea H y R2 sea:
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En algunas realizaciones, cuando R1 y R2 juntos forman el grupo -CH2-N(Rn12)-C2H4, Rn12 se selecciona de H y alquilo C1-3 (es decir metilo, etilo, prop-1-ilo y prop-2-ilo). En estas realizaciones, puede preferirse que RN12 se seleccione de H y metilo, y puede ser más preferido que RN12 sea metilo.
En algunas realizaciones, R4 se selecciona de CF3, CI, Br, CF2H, y CN.
En otras realizaciones, R4 se selecciona de CF3, CI y CF2H. En otras realizaciones, R4 se selecciona de CF3 y CI. Puede preferirse que R4 sea CF3.
En algunas realizaciones, puede preferirse que R5 sea un grupo de las siguientes fórmulas:
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En algunas realizaciones, R5 es un grupo seleccionado de:
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En estas realizaciones, R puede seleccionarse preferiblemente de R y R , y puede ser más preferiblemente R . En algunas realizaciones, R7 es H y R6 es (CHRC1)n1C(O)N(RN6)Z1.
En otras realizaciones, R7 es H y R6 se selecciona de CH2C(O)NH2, CH2C(O)NHCH3, CHCH3C(O)NH2 y CHCH3C(O)NHCH3.
Puede preferirse que R7 es H y R6 se seleccione de CH2C(O)NH2, CHCH3C(O)NH2 y CH2C(O)NHCH3, y más preferiblemente de CH2C(O)NH2, y CHCH3C(O)NH2.
En algunas realizaciones, R6 es H y R7 es (CH2)m1C(O)N(RM1)Y1.
En otras realizaciones, R6 es H y R7 se selecciona de C(O)NH2, C(O)NHCH3, CH2C(O)NH2 y CH2C(O)NHCH3.
Puede preferirse que R6 sea H y R7 sea C(O)NH2.
En algunas realizaciones, cuando R6 es H y R7 es C(O)NH2, R8 es metilo.
En algunas realizaciones, puede preferirse que R5 sea un grupo de la siguiente fórmula:
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En realizaciones seleccionadas de la invención, los compuestos pueden ser de fórmula la:
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en la que:
RN2 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me; RN3 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me; y RN4 se selecciona de H y CH3.
Las preferencias expresadas anteriormente para RN2
rN3 y rN4 también se aplican aquí.
En realizaciones seleccionadas de la invención, los compuestos puede ser de fórmula lb:
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en la que R1b se selecciona de:
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en las que:
RN1 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN2 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN3 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN4 se selecciona de H y CH3;
rN7 y rN8 se seleccionan independientemente de H y CH3;
RN9 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
RN10 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me; y RN11 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me.
Las preferencias expresadas anteriormente para RN1, RN2, RN3, RN4, RN7, RN8, RN9, RN10 y RN11 también se aplican
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aquí.
En particular, los compuestos de fórmula Ib, en la que R1b se seleccionan de:
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y en las que:
RN2b
RN3b
RN4b
RN9b
rN10
se selecciona de H, metilo y etilo; se selecciona de H y metilo; es H; es H; y
se selecciona de H y metilo.
Las realizaciones de la invención son compuestos de los ejemplos, que incluyen los compuestos 1 a 40. Las realizaciones de particular interés incluyen los compuestos 4, 5, 8, 11 y 16. Otras realizaciones de particular interés incluyen los compuestos 21, 22, 25, 31 y 36.
Métodos de síntesis general
Los compuestos de la invención pueden prepararse empleando los siguientes métodos generales y utilizando procedimientos descritos en detalle en la sección experimental. Las condiciones de reacción a las que se hace referencia son ilustrativas y no limitativas.
Los compuestos de fórmula I, tal como se han descrito anteriormente, pueden prepararse mediante estrategias sintéticas que se resumen a continuación, en las que se aplican las definiciones anteriores:
Esquema A
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Los compuestos de fórmula F1 pueden hacerse reaccionar con anilinas comerciales o sintéticas sustituidas de fórmula F2 (según se preparan en el esquema C, D, E, F, G, H, I, J, K y L) para formar compuestos intermedios de fórmula F3 donde L1 y L2 puede ser igual o diferente e incluir Cl, Br, I, SMe, SO2Me y R4=CF3, halógeno, CF2H o CN.
Un ejemplo de una anilina comercial es:
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Los compuestos de la fórmula F1 pueden prepararse cuando L y L sean diferentes (véase el esquema B) para permitir una sustitución regioselectiva, cuando L1=L2 se pueden emplear condiciones de reacción adecuadas (elección de disolvente, temperatura de reacción, adición de un ácido de Lewis, por ejemplo, ZnCh en éter dietílico) para permitir que L1 se desplace selectivamente sobre L2 Cuando se obtienen mezclas regioquímicas y disustitución, los regioisómeros pueden separarse por cromatografía.
Los compuestos de la fórmula F1, donde L =L están disponibles en el mercado, por ejemplo, 2,4-dicloro-5- (trifluorometil)pirimidina, 2,4-dicloro-5-fluoropirimidina, 2,4,5-tricloropirimidina, 2,4-dicloro-5-bromopirimidina, 2,4- dicloro-5-yodopirimidina, 2,4-dicloro-5-cianopirimidina, o se pueden preparar fácilmente a partir de materiales de partida comerciales. Cuando R4 = CF3 y es deseable la diferenciación de L1 y L2, se puede emplear el método descrito en el esquema B.
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La 2,4-dicloro-5-(trifluorometil) pirimidina (G1) disponible en el mercado puede hacerse reaccionar selectivamente con tiometóxido de sodio en presencia de cloruro de cinc (II) para dar 2-tiometil-4-cloro-5- (trifluorometil) pirimidina (G2). La 2-tiometil-4-cloro-5- (trifluorometil) pirimidina (G2) se puede hacer reaccionar además, por ejemplo, mediante la conversión en 2-tiometil-4-yodo-5- (trifluorometil) pirimidina (G3) en condiciones de Finkelstein y/o por oxidación con mCPBA para dar la correspondiente sulfona si se requiere una mayor diferenciación de las posiciones 2 y 4 o si es deseable una activación adicional.
Esquema C
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La 1 -(4-nitrofenil) piperazina (G4) disponible en el mercado, o sal de la misma, se puede hacer reaccionar con anhídrido Boc para dar 4-(4-nitrofenil)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (G5). La reducción posterior a través de la hidrogenación en presencia de un catalizador, por ejemplo paladio sobre carbón, da la correspondiente anilina, 4-(4- aminofenil)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (G6).
Esquema D
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Puede prepararse 4-(3-aminofenil)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (G9) por acoplamiento de piperazin-1- carboxilato de ferc-butilo (G7) disponible en el mercado y compuestos de la fórmula F4, donde L3=l o Br, en una reacción de tipo Buchwald para dar 4-(3-nitrofenil)piperazin-1-carboxilato de ferc-butilo (G8). La reducción con hidrógeno en presencia de un catalizador, por ejemplo paladio sobre carbón, da 4-(3-aminofenil)piperazin-1- 5 carboxilato de ferc-butilo (G9).
Esquema E
imagen37
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Los análogos de 4-piperidina correspondientes de G6 pueden prepararse por una secuencia de reacciones partiendo de la conversión del 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (G10) disponible en el mercado en triflato de vinilo G11. El acoplamiento de G11 en una reacción de tipo Suzuki con ácido (4-nitrofenil)borónico (G12) da la tetrahidropiridina (G13). La reducción posterior a través de la hidrogenación en presencia de un catalizador, por 15 ejemplo paladio sobre carbón, da 4-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (G14).
Esquema F
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El análogo de 4-(3-aminofenil)piperidina correspondiente de G9 puede prepararse mediante una secuencia de reacciones partiendo de la conversión de 4-oxopiperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (G10) disponible en el mercado en triflato de vinilo G11. El acoplamiento de G11 en una reacción de tipo Suzuki con ácido (3-nitrofenil) borónico
(G15) da tetrahidropiridina (G16). La reducción posterior a través de la hidrogenación en presencia de un catalizador, por ejemplo paladio sobre carbón, da 4-(3-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (G17).
Esquema G
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Los regioisómeros de 3-(4-aminofenil)piperidina de G14 pueden prepararse por reacción de compuestos disponibles en el mercado de la fórmula F5, donde L3=l o Br, con ácido piridin-3-ilborónico (G18) en una reacción de tipo Suzuki 10 para formar 3-(4-nitrofenil)piridina (G19). La reducción de G19 con hidrógeno en presencia de un catalizador, por ejemplo, óxido de platino, da 4-(piperidin-3-il)anilina (G20), que puede protegerse usando anhídrido Boc para dar 3- (4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (G21).
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Esquema H
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El regioisómero de 2-(4-aminofenil)piperidina de G14 puede prepararse por reacción de compuestos disponibles en el mercado de la fórmula F5, donde L3=l o Br, con ácido piridin-2-ilborónico (C22) en una reacción de tipo Suzuki 20 para formar 2-(4-nitrofenil)piridina(G23). La reducción G23 con hidrógeno en presencia de un catalizador, por ejemplo, óxido de platino, da 4-(piperidin-2-il)anilina (G24) que puede estar protegida usando anhídrido Boc para dar 2-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (G25).
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Puede prepararse (1-(4-aminofenil)piperidin-4-il)carbamato de tere-butilo (G29) por sustitución aromática nucleófila de piperidin-4-ilcarbamato de tere-butilo (G26) disponible en el mercado y 1-fluoro-4-nitrobenceno (G27) en condiciones térmicas para dar (1-(4-nitrofenil)piperidin-4-il)carbamato de tere-butilo (G28). La reducción de G28 con hidrógeno en presencia de un catalizador, por ejemplo, paladio al 10 % sobre carbón, da (1-(4-aminofenil)piperidin-4- il)carbamato de tere-butilo (G29).
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Puede prepararse 4-(4-aminobencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (G32) por el desplazamiento nucleófilo de 1-(bromometil)-4-nitrobenceno (G30) disponible en el mercado con piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (G7) para dar 4-(4-nitrobencil)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (G31). La reducción posterior con hidrógeno en presencia de un catalizador, por ejemplo, paladio al 10 % sobre carbón, da 4-(4-aminobencil)piperazin-1-carboxilato de tere- butilo (G32).
Esquema K
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Puede convertirse 3-oxopirrolidina-1-carboxilato de tere-butilo (G33) disponible en el mercado en una mezcla de triflatos de vinilo (G34) y (G35) en presencia de una triflamida y una base adecuada, por ejemplo, NaHMDS. El acoplamiento de la mezcla con ácido (4-nitrofenil)borónico (G12) en condiciones de Suzuki da dihidropirroles (G36) y
(G37). La reducción de esta mezcla usando hidrógeno en presencia de un catalizador, por ejemplo, paladio al 10 % sobre carbón, da 3-(4-aminofenil)pirrolidina-1-carboxilato de ferc-butilo (G38).
Esquema L 5
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Puede reducirse 2-bromo-1-(4-nitrofenil)etanona (G39) disponible en el mercado y ciclarse para dar epóxido (G40). La apertura del epóxido con tosilamida seguido de ciclación con trifluorometanosulfonato de (210 bromoetil)difenilsulfonio da la morfolina (G42). La escisión de la sulfonamida y la posterior re-protección con anhídrido Boc da carbamato (G44). La reducción usando hidrazina en presencia de cloruro de hierro (lll) da 2-(4- aminofenil)morfolina-4-carboxiiato de ferc-butilo (G45).
Esquema M 15
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Los compuestos de la fórmula F6 pueden hacerse reaccionar para formar ásteres de la fórmula F7, donde X=Br o I, R8=H o Me e Y se selecciona de un enlace sencillo, -CH2- y -CHCH3-. Cuando RO1= f-Bu, puede emplearse 20 anhídrido Boc, o cuando RO1=Me, puede usarse metanol en presencia de un ácido, por ejemplo, ácido sulfúrico, para formar el áster deseado. Los ásteres de la fórmula F7 pueden hacerse reaccionar con acetilenos terminales de la fórmula F8 en un acoplamiento de tipo Sonagashira para dar acetilenos de la fórmula F9, donde R9=TMS, TES o (CH3)2COH. Después, R9 puede eliminarse para generar los compuestos de la fórmula F10. Cuando R9=TMS o TES, puede emplearse carbonato potásico o fluoruro de tetra-n-butil amonio para inducir esta transformación, Cuando 25 R9=(CH3)2C*OH, puede usarse hidruro sódico en tolueno a reflujo.
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5 Las pirimidinas de la fórmula F3 pueden hacerse reaccionar con acetilenos terminales de la fórmula F10 para dar acetilenos de la fórmula F11 en un acoplamiento de tipo Sonagashira. El acetileno en compuestos de la fórmula F11 puede reducirse a un alcano de la fórmula F26 usando gas hidrógeno en presencia de un catalizador de metal de transición. La elección exacta del catalizador y las condiciones empleadas depende de la naturaleza de R4 Por ejemplo, cuando R4=CF3, puede usarse Pd al 10 %/C, cuando R4=CI, se emplea óxido de platino. Los ésteres de la 10 fórmula F12 pueden desprotegerse para dar ácidos carboxílicos de la fórmula F13. Cuando RO1=Me, pueden emplearse soluciones de hidróxido de litio. Cuando RO1=f-Bu, pueden usarse soluciones ácidas, por ejemplo, ácido trifluoroacético en diclorometano. Se apreciará que en condiciones ácidas los grupos protectores Boc en R1 y R2 también se escindirán.
15 Esquema O
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Los ácidos carboxílicos de la fórmula F13 se pueden convertir en amidas de la fórmula F14 usando una sal de amina 20 o amoniaco adecuada en presencia de un agente de acoplamiento peptídico, por ejemplo, HATU.
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fórmula F14 por reacción con una amina a temperaturas elevadas.
Esquema Q
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Cuando se requieren moléculas con lactamas fusionadas en el anillo aromático del lado derecho, los compuestos de fórmula F15 pueden reaccionar con acetilenos terminales de fórmula F8 en un acoplamiento de tipo Sonagashira para obtener acetilenos de fórmula F16 donde R9 = TMS, TES o (CH3)2C*OH. R9 se puede eliminar para generar compuestos de la fórmula F17. Cuando R9=TMS o TES, se puede emplear carbonato de potasio o fluoruro de tetra- n-butil amonio para inducir esta transformación. Cuando R9=(CH3)2C*OH, se puede usar hidruro de sodio en tolueno a reflujo.
Los compuestos de la fórmula F17 se pueden acoplar luego a los compuestos de la fórmula F3 (como en el Esquema N) y se pueden elaborar más detalladamente como se ha descrito anteriormente.
Esquema R
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Los compuestos de la fórmula F14, o análogos que contienen lactamas, con grupos protectores Boc presentes en R1 o R2 (en lugar de RN1 a RN12) pueden desprotegerse entonces en condiciones ácidas, por ejemplo, usando ácido trifluoroacético en soluciones de diclorometano, para dar los compuestos precursores correspondientes de la fórmula F18.
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Los compuestos de la fórmula F18 pueden modificarse adicionalmente por derivación de la funcionalidad de la amina. Por ejemplo, los compuestos de la fórmula F19 donde RN1, RN2, RN3, RN4, RN5, RN6, RN7, RN8, RN9, RN10, RN11 o RN12. Me pueden prepararse por alquilación reductora con formaldehído en presencia de triacetoxihidruro de sodio. Los derivados fueron RN1, R, RN3, RN5, RN6, RN7, RN8, RN9, RN10, RN11 o RN1 = Et pueden prepararse por alquilación reductora con acetaldehído en presencia de triacetoxiborohidruro de sodio. Los compuestos de la fórmula F19 donde
rN1 rN2 rN3
RN5, RN6, RN7, RN8, RN9, RN10, RN10, RN11 o RN12 = acetilo pueden prepararse por reacción de
compuestos de la fórmula F18 con un agente de acilación adecuado, por ejemplo, anhídrido acético.
Como alternativa, cuando los compuestos en los que R5=heteroarilo son análogos de heteroarilo deseados de F10, pueden prepararse como se describe en los Esquemas T, U y V. Estos heteroaril acetilenos se pueden acoplar a los compuestos de la fórmula F3, y luego se pueden elaborar de manera análoga a los descrito anteriormente en los esquemas N, O, P, R y S.
Esquema T
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Para los análogos que contienen pirazina, se puede hacer reaccionar 2,3-di-cloropirazina (G46) con acetato de etilo en presencia de LiHMDS para dar éster g47. El acoplamiento de G47 con TMS acetileno en condiciones de Sonagashira da acetileno G48. La eliminación del grupo trimetilsililo usando TBAF da 2-(3-etinilpirazin-2-il)acetato de etilo (G49).
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Para los análogos de pirimidina, el succinato de dietilo (G50) y el formiato de etilo (G51) se pueden condensar para dar el aldehido G52 en presencia de sodio metálico. La ciclación usando tiourea da 4-oxo-2-tioxo-1,2,3,4- tetrahidropirimidina (G53). La desulfuración con níquel Raney produce pirimidona G54, que se puede convertir en 4- cloro pirimidina G55 usando oxicloruro de fósforo. El acoplamiento de TES-acetileno en condiciones de Sonagashira, seguido de la eliminación del grupo trietilsililo utilizando TBAF, proporciona 2-(4-etinilpirimidin-5-il) acetato de etilo (G57).
Esquema V
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Para los acetatos de 3-piridilo, 2-(piridin-3-il)acetonitrilo (G58) puede oxidarse para dar N-óxido G59. La cloración con oxicloruro de fósforo proporciona 2-cloropiridina G60, que puede hidrolizarse con hidróxido de sodio para dar ácido acético G61. La formación de ésteres usando metanol da el éster 2-cloropiridina G62. El acoplamiento de TES- acetileno en condiciones de Sonagashira, seguido de la eliminación del grupo trietilsililo utilizando TBAF, proporciona 2-(2-etinilpiridin-3-il) acetato de metilo (G64).
Como alternativa, los heteroaril acetilenos análogos a F10 se pueden hidroborilar para dar vinil boranos como en el esquema W. Estos se pueden acoplar usando la química de Suzuki a los compuestos de la fórmula F3, y luego se pueden elaborar de manera análoga a la descrita anteriormente en los esquemas N, O, P, R y S.
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El 2-bromoisonicotinato de metilo (G65) se puede acoplar utilizando las condiciones de Sonagashira para dar acetileno G66. La eliminación del grupo trimetilsililo con TBAF proporciona acetileno G67 terminal que se puede hidroborilar para dar 2-(2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)vinil)isonicotinato de (E)-metilo (G68).
Una estrategia alternativa para la formación de compuestos de fórmula F12, donde R4=CF3 y R8=H, es prepare compuestos de la fórmula F22, como se describe en el esquema X.
Esquema X
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El acoplamiento de ésteres de la fórmula F10, donde R8=H, con 4-yodo-2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidina (G3) en condiciones de Sonagashira da acetilenos de la fórmula F20. La oxidación, usando MCPBA, da sulfonas de la fórmula F21. La reducción del acetileno utilizando hidrógeno, en presencia de un catalizador, por ejemplo, paladio al 10 % sobre carbón, da los compuestos de la fórmula F22.
Los compuestos de la forma F22 se pueden hacer reaccionar con anilinas de la fórmula F2 en condiciones ácidas, por ejemplo, en presencia de ácido trifluoroacético para dar los compuestos de la fórmula F12 que luego pueden elaborarse como se describe anteriormente.
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Uso de compuestos de la invención
La presente invención proporciona compuestos activos, específicamente, pirimidinas 2,4,5-sustituidas activas.
El término "activo", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos que son capaces de inhibir la actividad de FAK, así como a la actividad de VEGFR3, e incluye específicamente tanto compuestos con actividad intrínseca (fármacos), así como profármacos de tales compuestos, cuyos profármacos pueden presentar por sí mismo poca o ninguna actividad intrínseca.
Los ensayos que pueden usarse para evaluar la inhibición de FAK y VEGFR3 ofrecida por un compuesto particular se describen en los ejemplos a continuación.
Los compuestos activos también pueden usarse como parte de un ensayo in vitro, por ejemplo, para determinar si un huésped candidato es probable que se beneficie del tratamiento con el compuesto en cuestión.
En el presente documento también se describen compuestos activos para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano o animal. Un método de este tipo puede comprender administrar a tal sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto activo, preferiblemente en forma de una composición farmacéutica.
El término "tratamiento", cuando se usan en el contexto del tratamiento de una afección, se refiere generalmente al tratamiento y terapia, ya sea de un ser humano o un animal (p. ej., en aplicaciones veterinarias), en el que se consigue algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo, la inhibición del progreso de la afección, e incluye una reducción en la velocidad de progreso, un alto en la velocidad de progreso, la mejora de la afección y la cura de la afección. También se incluye el tratamiento como medida profiláctica (es decir, profilaxis).
El término "cantidad terapéuticamente eficaz”, como se usa en el presente documento, se refiere a la cantidad de un compuesto activo, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto activo, que es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado, proporcionado con una relación beneficio/riesgo razonable.
Cáncer
La presente invención proporciona compuestos activos que son agentes anticancerosos. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente si un compuesto candidato trata o no una afección cancerosa para cualquier tipo de célula particular, en solitario o en combinación.
Los ejemplos de cánceres incluyen, pero sin limitación, cáncer de hueso, glioma del tronco encefálico, cáncer de mama, cáncer de la glándula suprarrenal, cáncer de la región anal, cáncer de la vejiga, cáncer del sistema endocrino, cáncer del esófago, cáncer de cabeza o cuello, cáncer del riñón o del uréter, cáncer del hígado, cáncer de la glándula paratiroidea, cáncer del pene, cáncer del intestino delgado, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la uretra, carcinoma del cuello uterino, carcinoma del endometrio, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de la pelvis renal, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, leucemia crónica o aguda, cáncer de colon, melanoma cutáneo o intraocular, neoplasias hematológicas, enfermedad de Hodgkin, cáncer de pulmón, linfomas linfocíticos, neoplasias del sistema nervioso central (SNC), cáncer de ovario, cáncer pancreático, adenoma hipofisario, linfoma primario del SNC, cáncer de próstata, cáncer rectal, carcinoma de células renales, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de piel, tumores del eje espinal, cáncer de estómago y cáncer de útero.
Cualquier tipo de célula puede tratarse, incluyendo, pero sin limitación, pulmón, gastrointestinal (incluyendo, por ejemplo, intestino, colon), mama (mamaria), ovárico, próstata, hígado (hepática), riñón (renal), vejiga, páncreas, cerebro y piel.
El tratamiento anticanceroso definido anteriormente en el presente documento puede aplicarse como monoterapia o puede implicar, además del compuesto de la invención, cirugía convencional o radioterapia o quimioterapia. Dicha quimioterapia puede incluir una o más de las siguientes categorías de agentes antitumorales:
(i) otros fármacos antiproliferativos/antineoplásicos y combinaciones de los mismos, como se usa en oncología médica, tales como agentes alquilantes (por ejemplo, cisplatino, oxaliplatino, carboplatino, ciclofosfamida, mostaza de nitrógeno, melfalán, clorambucilo, busulfán, temozolamida y nitrosoureas); antimetabolitos (por ejemplo, gemcitabina y antifolatos tales como fluoropirimidinas como 5 fluorouracilo y tegafur, raltitrexed, metotrexato, arabinósido de citosina e hidroxiurea); antibióticos antitumorales (por ejemplo, antraciclinas como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina y mitramicina); agentes antimitóticos (por ejemplo, alcaloides de la vinca como vincristina, vinblastina, vindesina y vinorelbina y taxoides como el taxol y el docetaxel (Taxotere) e inhibidores de la polocinasa); e inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, epipodofilotoxinas como etopósido y tenipósido, amsacrina, topotecán y camptotecina);
(ii) agentes citostáticos, tales como antioestrógenos (por ejemplo, tamoxifeno, fulvestrant, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno y yodoxifeno), antiandrógenos (por ejemplo, bicalutamida, flutamida, nilutamida y acetato de
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ciproterona), antagonistas de LHRH o agonistas de LHRH (por ejemplo, goserelina, leuprorelina y buserelina), progestágenos (por ejemplo, acetato de megestrol), inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, como anastrozol, letrozol, letrozol, vorazol y exemestano) e inhibidores de 5*-reductasa, tal como finasterida;
(iii) agentes anti-invasión (por ejemplo, inhibidores de la familia c-Src cinasas como 4-(6-cloro-2,3- metilenodioxianilino)-7-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etoxi]-5-tetrahidropiran-4-iloxiquinazolina (AZD0530; Solicitud de Patente Internacional WO 01/94341), N-(2-cloro-6-metilfenil)-2-(6-[4-(2-hidroxietil)piperazin-1 -il]-2-metilpi rimidin- 4-ilamino)tiazol-5-carboxamida (dasatinib, BMS-354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661 y 4-((2,4-dicloro-5- metoxifenil)amino)-6-metoxi-7-(3-(4-metilpiperazin-1-il)propoxi)quinolina-3-carbonitrilo (bosutinib, SKI-606; Cancer research (2003), 63(2), 375-81), e inhibidores de metaloproteinasa como marimastat, inhibidores de la función del receptor del activador del plasminógeno de urocinasa o anticuerpos contra heparanasa);
(iv) inhibidores de la función del factor de crecimiento: por ejemplo, dichos inhibidores incluyen anticuerpos del factor de crecimiento y anticuerpos del receptor del factor de crecimiento (por ejemplo, el anticuerpo anti erbB2 trastuzumab [HerceptinT], el anticuerpo anti-EGFR panitumumab, el anticuerpo anti erbB1 cetuximab [Erbitux, C225 ] y cualquier anticuerpo del factor de crecimiento o receptor del factor de crecimiento descrito por Stern et al. Critical reviews in oncology/hematology, 2005, Vol. 54, págs. 11-29); dichos inhibidores también incluyen inhibidores de la tirosina cinasa, por ejemplo, inhibidores de la familia del factor de crecimiento epidérmico (por ejemplo, inhibidores de la tirosina cinasa de la familia EGFR tales como N-(3-cloro-4-fluorofanil)-7-metoxi-6-(3- morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, ZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina (erlotinib, oSi 774) y 6-acrilamido-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropoxi)-quinazolin-4-amina (CI 1033), inhibidores de erbB2 tirosina cinasa tales como lapatinib, inhibidores de la familia del factor de crecimiento de hepatocitos, inhibidores de la familia del factor de crecimiento derivado de las plaquetas tales como imatinib, inhibidores de serina/treonina cinasas (por ejemplo, inhibidores de señalización de Ras/Raf, tales como inhibidores de farnesil transferasa, por ejemplo, sorafenib (BAY 43-9006)), inhibidores de la señalización celular a través de MEK y/o cinasas AKT, inhibidores de la familia del factor de crecimiento de hepatocitos, inhibidores de c-kit, inhibidores de cinasa abl, inhibidores de cinasa del receptor de IGF (factor de crecimiento de tipo insulina); inhibidores de la aurora cinasa (por ejemplo, AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX-528 y AX39459) e inhibidores de la cinasa dependientes de ciclina, tales como inhibidores de CDK2 y/o CDK4;
(v) agentes antiangiogénicos, tales como los que inhiben los efectos del factor de crecimiento endotelial vascular, [por ejemplo, el anticuerpo contra el factor de crecimiento celular endotelial vascular bevacizumab (AvastinT) y los inhibidores de tirosina cinasa del receptor de VEGF, tal como 4-(4-bromo-2-fluoroanilino)-6-metoxi-7-(1- metilpiperidin-4-ilmetoxi) quinazolina (ZD6474; Ejemplo 2 en el documento WO 01/32651), 4-(4-fluoro-2- metilindol-5-iloxi)-6-metoxi-7-(3-pirrolidin-1 -ilpropoxi)quinazolina (AZD2171; Ejemplo 240 en el documento WO 00/47212), vatalanib (PTK787; documento WO 98/35985) y SU11248 (sunitinib; documento WO 01/60814), compuestos tales como los descritos en las solicitudes de patente internacional WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 y WO 98/13354 y compuestos que funcionan mediante otros mecanismos (por ejemplo, linomida, inhibidores de la función de Integrina avb3 y angiostatina)];
(vi) agentes dañinos vasculares tales como Combretastatina A4 y compuestos descritos en las solicitudes de patente internacional WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 y WO 02/08213;
(vii) terapias antisentido, por ejemplo, las que se dirigen a las dianas enumeradas anteriormente, tal como ISIS 2503, un antisentido anti-ras;
(viii) enfoques de terapia génica, incluyendo, por ejemplo, enfoques para reemplazar genes aberrantes tales como p53 aberrante o BRCA1 o BRCA2 aberrantes, enfoques GDEPT (terapia de profármaco de enzimas dirigida al gen) tales como los que utilizan citosina desaminasa, timidina quinasa o una enzima nitrorreductasa bacteriana y enfoques para aumentar la tolerancia del paciente a la quimioterapia o radioterapia, tal como la terapia génica de resistencia a múltiples fármacos; y
(ix) enfoques de inmunoterapia, incluyendo, por ejemplo, los enfoques ex vivo e in vivo para aumentar la inmunogenicidad de las células tumorales del paciente, tales como la transfección con citocinas tales como interleucina 2, interleucina 4 o factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, las estrategias para disminuir la anergia de los linfocitos T, las estrategias que utilizan células inmunitarias transfectadas, tales como células dendríticas transfectadas con citocinas, las estrategias que utilizan líneas celulares tumorales transfectadas con citocinas y las estrategias que utilizan anticuerpos antidiotí picos.
Una combinación de interés particular es con docetaxel. Otras posibles combinaciones de interés incluyen la gemcitabina, el cisplatino y el profármaco de camptotecina irinotecán.
Administración
El compuesto activo o la composición farmacéutica que comprende el compuesto activo puede administrarse a un sujeto por cualquier vía conveniente de administración, ya sea sistémicamente/periféricamente o en el lugar de la acción deseada, incluyendo, pero sin limitación, oral (por ejemplo, por ingestión); tópica (incluyendo, por ejemplo, transdérmico, intranasal, ocular, bucal y sublingual); pulmonar (por ejemplo, mediante terapia de inhalación o insuflación usando, por ejemplo, un aerosol, por ejemplo, a través de la boca o la nariz); rectal; vaginal; administración parenteral, por ejemplo, por inyección, incluyendo vía subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnoidea e intraesternal; por implante de un depósito, por ejemplo, por
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vía subcutánea o intramuscular. El sujeto puede ser un eucariota, un animal, un animal vertebrado, un mamífero, un roedor (por ejemplo, una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (por ejemplo, un ratón), canino (por ejemplo, un perro), felino (por ejemplo, un gato), equino (por ejemplo, un caballo), un primate, simio (por ejemplo, un mono o simio), un mono (por ejemplo, tití, babuino), un simio (por ejemplo, gorila, chimpancé, orangután, gibón), o un ser humano.
Formulaciones
Aunque es posible que el compuesto activo se administre solo, es preferible presentarlo como una composición farmacéutica (por ejemplo, una formulación) que comprende al menos un compuesto activo, como se ha definido anteriormente, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, adyuvantes, excipientes, diluyentes, cargas, tampones, estabilizantes, conservantes, lubricantes u otros materiales bien conocidos por los expertos en la técnica y, opcionalmente, otros agentes terapéuticos o profilácticos.
Por lo tanto, la presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas, como se ha definido anteriormente, y métodos para elaborar una composición farmacéutica que comprende mezclar al menos un compuesto activo, como se ha definido anteriormente, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, excipientes, tampones, adyuvantes, estabilizantes u otros materiales, como se describe en el presente documento.
El término "farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, dentro del alcance del buen criterio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de un sujeto (por ejemplo, un ser humano) sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcionado con una relación beneficio/riesgo razonable. Cada vehículo, excipiente, etc. también debe ser «aceptable» en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación.
Los vehículos, excipientes, etc. adecuados se pueden encontrar en textos farmacéuticos convencionales, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990.
Las formulaciones pueden estar presentes convenientemente en forma monodosis y pueden prepararse por cualquier método bien conocido en la técnica de farmacia. Dichos métodos incluyen la etapa de poner en asociación el principio activo con un vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo en asociación uniforme e íntimamente los compuestos activos con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después, si fuera necesario, moldeando el producto.
Las formulaciones pueden estar en forma de líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, elixires, jarabes, comprimidos, pastillas, gránulos, polvos, cápsulas, sellos, píldoras, ampollas, supositorios, pesarios, ungüentos, geles, pastas, cremas, pulverizaciones, brumas, espumas, lociones, aceites, bolos, electuarios o aerosoles.
Las formulaciones adecuadas para administración oral (por ejemplo, por ingestión) pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, sellos o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del compuesto activo; como polvo o gránulos; como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite; como un bolo; como un electuario; o como una pasta.
Un comprimido puede fabricarse por medios convencionales, por ejemplo, compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos de compresión pueden prepararse prensando en una máquina adecuada el compuesto activo en forma fluida como polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con uno o más aglutinantes (por ejemplo, povidona, gelatina, goma arábiga, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetilcelulosa); cargas o diluyentes (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina, fosfato de hidrógeno y calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco, sílice); desintegrantes (por ejemplo, glicolato de almidón sódico, povidona reticulada, carboximetilcelulosa sódica reticulada); agentes de superficie activa o dispersantes o humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio); y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, ácido sórbico). Los comprimidos creados por moldeo pueden prepararse moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos opcionalmente pueden recubrirse o ranurarse y pueden formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del compuesto activo de los mismos usando, por ejemplo, hidroxipropilmetil celulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado. Los comprimidos pueden proporcionarse opcionalmente con un recubrimiento entérico, para proporcionar liberación en partes del intestino distintas del estómago.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica (por ejemplo, transdérmica, intranasal, ocular, bucal y sublingual) pueden formularse como un ungüento, crema, suspensión, loción, polvo, solución, pasta, gel, pulverización, aerosol, o aceite. Como alternativa, una formulación puede comprender un parche o un apósito tal como un vendaje o emplasto adhesivo impregnado con compuestos activos y opcionalmente uno o más excipientes o diluyentes.
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Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen los lentes que comprenden el compuesto activo en una base con sabor, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el compuesto activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga; y enjuagues bucales que comprenden el compuesto activo en un vehículo líquido adecuado.
Las formulaciones adecuadas para administración tópica también incluyen gotas oculares, en las que el compuesto activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, en especial un disolvente acuoso para el compuesto activo.
Las formulaciones adecuadas para la administración nasal, en las que el vehículo es un sólido, incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 20 a aproximadamente 500 micrómetros que se toma de la manera en que se administra el rapé, es decir, por inhalación rápida a través de las fosas nasales a partir de un envase con el polvo sujetado cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas en donde el vehículo es un líquido para administración como, por ejemplo, aerosol nasal, gotas nasales, o mediante la administración de aerosol por nebulizador, incluyen soluciones acuosas o aceitosas del compuesto activo.
Las formulaciones adecuadas para administración por inhalación incluyen aquellas presentadas como una pulverización en aerosol de un paquete presurizado, con el uso de un propulsor adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, dicloro-tetrafluoroetano, dióxido de carbono u otros gases adecuados.
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica a través de la piel incluyen ungüentos, cremas y emulsiones. Cuando se formula en un ungüento, el compuesto activo puede emplearse opcionalmente con una base de pomada parafínica o miscible en agua. Como alternativa, los compuestos activos pueden formularse en una crema con una base de crema de aceite en agua. Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos aproximadamente el 30 % p/p de un alcohol polihídrico, es decir, un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxilo tal como propilenglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol, y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas pueden incluir, a ser posible, un compuesto que potencie la absorción o la penetración del compuesto activo a través de la piel u otras zonas afectadas. Los ejemplos de dichos potenciadores de la penetración dérmica incluyen dimetilsulfóxido y análogos relacionados.
Cuando se formula como una emulsión tópica, la fase oleosa puede comprender opcionalmente simplemente un emulsionante (también conocido como un agente emulsionante), o puede comprender una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con una grasa y un aceite. Preferiblemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizante. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa.
Conjuntamente, el emulsionante (o emulsionantes) con o sin el estabilizador (o estabilizadores) constituyen la denominada cera emulsionante y la cera junto con el aceite y/o la grasa constituyen la denominada base de pomada emulsionante que forma la fase oleosa dispersa de las formulaciones de crema.
Los emulgentes y estabilizantes de emulsión adecuados incluyen Tween 60, Span 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y laurilsulfato de sodio. La elección de los aceites o grasas adecuados para la formulación es a base de lograr las propiedades cosméticas deseadas, ya que la solubilidad del compuesto activo en la mayoría de los aceites que probablemente se usarán en formulaciones de emulsión farmacéutica puede ser muy baja. Por lo tanto, la crema debería ser preferiblemente un producto no graso, que no manche y lavable, con la consistencia adecuada para evitar la filtración desde tubos u otros contenedores. Pueden usarse ésteres de alquilo de cadena lineal o ramificada, mono o dibásicos como di-isoadipato, estearato de isocetilo, propilenglicol diéster de ácidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de ésteres de cadena ramificada conocida como Crodamol CAP, siendo los tres últimos los ésteres preferentes. Estos pueden usarse solos o en combinación, dependiendo de las propiedades requeridas.
Como alternativa, pueden usarse lípidos de elevado punto de fusión tales como parafina blanca blanda y/o parafina líquida, u otros aceites minerales.
Las formulaciones adecuadas para administración rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.
Las formulaciones adecuadas para administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol que contienen además del compuesto activo, los vehículos que se conocen en la técnica como apropiados.
Las formulaciones adecuadas para administración parenteral (p. ej., por inyección), incluyendo cutánea, subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), incluyen soluciones de inyección estériles isotónicas, libres de pirógenos, acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizantes, bacteriostáticos y solutos que hagan que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes, y liposomas u otros
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sistemas de micropartículas que están diseñados para dirigir el compuesto a componentes sanguíneos o uno o más órganos. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para su uso en dichas formulaciones incluyen inyección de cloruro de sodio, solución de Ringer o inyección de Ringer lactato. Normalmente, la concentración del compuesto activo en la solución es de aproximadamente 1 ng/ml a aproximadamente 10 pg/ml, por ejemplo de aproximadamente 10 ng/ml a aproximadamente 1 pg/ml. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes sellados de dosis unitarias o de dosis múltiples, por ejemplo, ampollas y viales, y se pueden almacenar en un estado deshidratado por congelación (liofilizado) que requiere solo la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones para inyección extemporáneas a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles. Las formulaciones pueden estar en forma de liposomas u otros sistemas microparticulados que están diseñados para dirigir el compuesto activo a los componentes de la sangre o a uno o más órganos.
Dosificaciones
Se apreciará que las dosificaciones apropiadas de los compuestos activos, y las composiciones que comprenden los compuestos activos, pueden variar de paciente a paciente. La determinación de la dosis óptima generalmente implicará el equilibrio del nivel de beneficio terapéutico frente a cualquier riesgo o efectos secundarios perjudiciales de los tratamientos de la presente invención. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de diversos factores que incluyen, pero sin limitación, la actividad del compuesto especial, de la vía de administración, del tiempo de administración, la velocidad de excreción del compuesto, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usadosen combinación, y la edad, sexo, peso, condición, la salud en general y el historial médico previo del paciente. La cantidad de compuesto y la vía de administración será en última instancia a discreción del médico, aunque será generalmente la dosificación para conseguir concentraciones locales en el sitio de acción que consiguen el efecto deseado sin causar efectos secundarios dañinos o perjudiciales considerables.
La administración in vivo puede efectuarse en una dosis, de forma continua o intermitentemente (p. ej., en dosis divididas a intervalos adecuados) durante el transcurso del tratamiento. Los métodos para determinar los medios y dosificaciones de administración más eficaces son bien conocidos para los expertos en la técnica y variarán con la formulación usada para la terapia, la finalidad de la terapia, la célula diana a tratar y el sujeto que se va a tratar. Las administraciones únicas o múltiples pueden llevarse a cabo con el nivel de dosis y el patrón a seleccionar por el tratamiento médico.
En general, una dosis adecuada del compuesto activo está en el intervalo de aproximadamente 100 pg a aproximadamente 250 mg por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. Cuando el compuesto activo es una sal, un éster, un profármaco o similar, la cantidad administrada se calcula sobre la base del compuesto precursor y, por lo tanto, el peso real a usar se aumenta proporcionalmente.
Ejemplos
Los siguientes son ejemplos que se proporcionan únicamente para ilustrar la presente invención y no pretenden limitar el alcance de la invención, como se describe en el presente documento.
Acrónimos
Por comodidad, muchos restos químicos se representan usando abreviaturas ya conocidas, incluyendo, pero sin limitación, metilo (Me), etilo (Et), n-propilo (nPr), isopropilo (iPr), n-butilo (nBu), ferc-butilo (tBu), n-hexilo (nHex), ciclohexilo (cHex), fenilo (Ph), bifenilo (biPh), bencilo (Bn), naftilo (naph), metoxi (MeO), etoxi (EtO), benzoílo (Bz), y acetilo (Ac).
Por comodidad, muchos compuestos químicos se representan usando abreviaturas ya conocidas, incluyendo, pero sin limitación, metanol (MeOH), etanol (EtOH), isopropanol (i-PrOH), metil etil cetona (MEK), éter o éter dietílico (Et2O), ácido acético (AcOH), diclorometano (cloruro de metileno, DCM), ácido trifluoroacético (TFA), dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF), dimetilsulfóxido (DMSO), ácido meta-cloroperoxibenzoico (mCPBA), ferc-butiloxicarbonilo (Boc), trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES), hexafluorofosfato de 2-(1H-7- azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HATU), difenilfosforil azida (dPpA), 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDCI), 4-dimetilaminopiridina (DMAP), fluoruro de tetra-n- butilamonio (TbAf), W,W-Diisopropiletilamina (DIPEA), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), y 1,2-dicloroeteno (DCE).
Detalles experimentales generales
A menos que se indique otra cosa, se aplican las siguientes generalizaciones.
Los espectros de 1RMN se registraron en un espectrómetro Bruker Avance DRX300 (300 MHz), un Bruker Ultrasheild plus (400 MHz) o un Varian Unity Inova 600 (600 MHz). La multiplicidad de una señal se designa por las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; c, cuadruplete; br, ancho; m, multiplete. Todas las constantes de acoplamiento observadas, J, se indican en Hertzios. Los espectros de 13C RMN se registraron en un
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espectrómetro Bruker Avance DRX300 (75 MHz), un Bruker Ultrasheild plus (100 MHz) o un Varian Unity Inova 600 (150 MHz) en un modo desacoplado de banda ancha.
Los datos LC/MS se generaron usando un sistema Finnigan LCQ Advantage Max (LCMS-A), un Waters ZQ 3100 (LCMS-B) o un Agilent 6100 Series Single Quad LC/MS (LCMS-C).
Método de LCMS A (LCMS-A)
Instrumento: Finnigan LCQ Advantage Max Bomba: Bomba de LC Finnigan Surveyor Automuestreador Finnigan Surveyor Detector PDA Finnigan Surveyor
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa Columna: Gemini 3 p C18 20 x 4,0 mm 110A Volumen de inyección 10 pl Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1 % Disolvente B: Acetonitrilo-Ácido fórmico al 0,1 % Gradiente: 10-100 % de B durante 10 min Detección: 100-600 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Trampa de iones Modo de iones: ES positiva Temp.: 300 °C Capilaridad V-25 Detección: Recuento de iones Intervalo de exploración: 80-100QA mu Tiempo de exploración: 0,2 s Tiempo de adquisición: 10 min
Método de LCMS B (LCMS-B)
Instrumento: Detector de masas Waters ZQ 3100 Bomba Waters 2545
Organizador de fluidos sistema Waters SFO Detector de matriz de diodos Waters 2996 Gestor de muestras Waters 2767
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa Columna: XBridge TM C18 5 pm 4,6 x 100 mm Volumen de inyección 10 pl Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1 % Disolvente B: Acetonitrilo-Ácido fórmico al 0,1 % Gradiente: 10-100 % de B durante 10 min Caudal: 1,5 ml/min Detección: 100-600 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Cuadrupolo individual
Modo de iones: ES positiva
Temp. de fuente: 150 °C
Temp. de desolvatación: 350 °C
Detección: Recuento de iones
Capilaridad (KV)-3,00
Cono (V): 30
Extractor (V):3 RF
Lente (V): 0,1
Intervalo de exploración: 100-1000 Tiempo de exploración Amu: 0,5 s
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Tiempo de adquisición: 10 min Flujo de gas Desolvatación l/h-650
Método de LCMS C (LCMS-C)
Instrumento: Agilent 6100 Series Single Quad LC/MS
Agilent 1200 Series HPLC
Bomba: Bomba cuaternaria 1200 Series G1311A
Automuestreador: Automuestreador con termostato 1200 Series G1329A Detector: Detector de longitud de onda variable 1200 Series G1314B
Condiciones de LC:
Análisis por HPLC de fase inversa Columna: Luna C8(2) 5 p 50 x 4,6 mm 100 A Temperatura de la columna: 30 °C Volumen de inyección: 5 pl Disolvente A: Agua-ácido fórmico al 0,1 % Disolvente B: Acetonitrilo-Ácido fórmico al 0,1 % Gradiente: 5-100 % de B durante 10 min Detección: 254 nm o 214 nm
Condiciones de MS:
Fuente de iones: Cuadrupolo Modo de iones: Multimodo-ES Temp. de gas de secado: 300 °C Temperatura de vaporizador: 200 °C Tensión de capilaridad (V): 2000 (positiva)
Tensión de capilaridad (V): 4000 (negativa)
Intervalo de exploración: 100-1000 Tamaño de etapa: 0,1 s Tiempo de adquisición: 10 min
La cromatografía analítica de capa fina se llevó a cabo en gel de sílice 60F254 de Merck, placas con respaldo de aluminio que se visualizaron mediante la inactivación con fluorescencia bajo luz UV o ácido anisaldehído, o una inmersión básica de permanganato de potasio. La cromatografía ultrarrápida se realizó usando un sistema de purificación Teledyne Isco CombiFlash Rf usando cartuchos estándar RediSep® o un sistema de purificación Biotage Isolera usando cartuchos de sílice Grace o Biotage.
Cuando fue necesario, se prepararon disolventes anhidros utilizando un sistema de purificación Braun o adquiridos en Sigma-Aldrich.
Ejemplo 1: 2-(2-(2-(2-((4-(Piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (1)
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(a) 4-(4-nitrofenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (11)
Se disolvió clorhidrato de 4-(4-nitrofenil)piperazina (5,00 g, 20,5 mmol) en DCM (100 ml) y se trató con trietilamina (7,15 ml, 51,3 mmol) seguido de anhídrido Boc (4,93 g, 22,6 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. A la mezcla se le añadieron agua (100 ml) y DCM (70 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con DCM (100 ml), los productos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo-naranja. El producto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 120 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I1) (4,895 g, rendimiento del 78 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 8,10-8,04 (m, 2H), 7,04 - 6,97 (m, 2H), 3,48 (m, 8H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,13 min; m/z 208,2 [M-Boc+2H]+.
(b) 4-(4-aminofenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (l2)
Se disolvió 4-(4-nitrofenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I1) (3,24 g, 10,5 mmol) en EtOAc (90 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se añadió una suspensión de Pd al 10 %/C (0,500 g) en EtOAc (10 ml). Después, la suspensión resultante se agitó vigorosamente en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 42 horas. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (7 x 10 ml) y el disolvente se eliminó al vacío para dar el compuesto del título (I2) (2,92 g, rendimiento del 99 %) en forma de un sólido de color rosa pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 6,72 - 6,66 (m, 2H), 6,52 - 6,45 (m, 2H), 4,60 (s, 2H), 3,44 - 3,39 (m, 4H), 2,87 - 2,79 (m, 4H), 1,41 (s, 9H), Métodos de LCMS C: tr 4,40 min; m/z 278,2 [M+H]+.
(c) 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I3)
Se agitó 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (2,39 g, 11,0 mmol) en una mezcla 1:1 de t-BuOH:1,2-dicloroetano (80 ml) a 0 °C y se añadió cuidadosamente una solución 1,0 M de ZnCI2 en éter dietílico (12,6 ml, 12,6 mmol) durante 20
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(d) 4-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirímidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere- butilo (I5)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4: preparado de acuerdo con el procedimiento de Peng, C. et al; Adv. Synth. Catal. 2008, 350, 2359 - 2364 o como se detalla a continuación) (0,114 g, 0,653 mmol) en DMF seca (6 ml) se le añadieron trietilamina (0,280 ml, 2,01 mmol) seguido de 4-(4-((4- cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (I3) (0,230 g, 0,502 mmol), trifenilfosfina (0,020 g, 0,075 mmol), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,035 g, 0,050 mmol) y CuI (0,014 g, 0,075 mmol). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos, después se concentró a sequedad al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-80 % en ciclohexano) para dar el compuesto del título (I5) (0,267 g, rendimiento del 89 %) en forma de un sólido vítreo de color naranja; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,27 (s a, 1H), 8,76 (s, 1H), 7,65-7,49 (m, 4H), 7,49-7,38 (m, 2H), 6,95 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,94 (s, 2H), 3,61 (s, 3H), 3,51 - 3,42 (m, 4H), 3,09 - 3,00 (m, 4H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,67 min; m/z 596,3 [M+H]+.
(e) 4-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere- butilo (I6)
Se disolvió 4-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (I5) (0,250 g, 0,420 mmol) en EtOAc (8 ml) y etanol absoluto (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió Pd al 10 %/C (0,200 g) en EtOAc (4 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (7 x 10 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar el compuesto del título (I6) (0,211 g, rendimiento del 84 %) en forma de un sólido de color amarillo. Métodos de LCMS C: tr 6,78 min; m/z 600,3 [M+H]+.
(f) 2-(2-(2-(2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio (I7)
Se añadió UOH.H2O (0,044 g, 1,06 mmol) a 4-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I6) (0,211 g, 0,352 mmol) en THF (10 ml), agua (2,5 ml) y metanol (1 ml). La mezcla resultante se dejó en agitación durante 3 horas a 40 °C. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (100 ml) y NaOH ac. 2 M (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I7) (0,195 g, rendimiento del 96 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,02 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,647,55 (m, 2H), 7,26-7,14 (m, 4H), 6,97-6,91 (m, 2H), 3,65 (s, 2H), 3,50 - 3,41 (m, 4H), 3,10 - 2,93 (m, 8H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,32 min; m/z 586,3 [M+H]+.
(g) 4-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc- butilo (I8)
Se disolvió 2-(2-(2-(2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetato de litio (I7) (0,195 g, 0,333 mmol) en ThF seco (10 ml) y DMF seca (2 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1-hidroxibenzotriazol (0,049 g, 0,37 mmol) y EDCI (0,070 g, 0,37 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,232 ml, 1,33 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (0,128 g, 1,332 mmol), y la reacción se agitó temperatura ambiente durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (70 ml) y NaHCO3 ac. sat. (70 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (70 ml) y salmuera (70 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se concentró al vacío para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-10 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I8) (0,133 g, rendimiento del 68 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,01 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,65 - 7,56 (m, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,26 - 7,13 (m, 4H), 6,98 - 6,89 (m, 3H), 3,52 - 3,41 (m, 6H), 3,13 - 2,95 (m, 8H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,18 min; m/z 585,3 [M+H]+.
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(h) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperazin-1-il)fenH)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil) acetamida (1)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino) fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I8) (0,131 g, 0,224 mmol) en DCM (7 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (0,857 ml, 11,2 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (70 ml) y NaOH ac. 2 M (70 ml) al aceite y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío. El sólido resultante se recogió en DCM (~ 5 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió con solamente DCM dos veces para dar el compuesto del título (1) (0,104 g, rendimiento del 96 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) ó 9,96 (s, 1 H), 8,60 (s, 1H), 7,61 - 7,53 (m, 2H), 7,43 (s a, 1H), 7,25 - 7,13 (m, 4H), 6,98-6,86 (m, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,12 - 3,05 (m, 2H), 3,04 - 2,94 (m, 6H), 2,86 - 2,78 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,774 min; m/z 485,2 [M+H]+.
Síntesis del intermedio I4: 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4)
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(a) 2-(2-yodofenil)acetato de metilo (I9)
Se puso ácido 2-(2-yodofenil)acético (5,00 g, 19,1 mmol) en un matraz de reacción y se disolvió en MeOH (150 ml). Se añadió ácido sulfúrico (250 pl) y la mezcla de reacción se agitó y se calentó a 80 °C en una atmósfera de nitrógeno durante 16 horas. La mezcla resultante se enfrió a temperatura ambiente y los volátiles se eliminaron por evaporación a presión reducida. El residuo se recogió en acetato de etilo (100 ml), se lavó con NaHCO3 al 10 % (100 ml), se secó (MgSO4) y se evaporó a presión reducida para dar el compuesto del título (I9) (5,20 g, 99 %) en forma de un líquido transparente; 1H RMN (400 MHz, CDCh) ó 7,85 (dd, J= 7,9, 1,0 Hz, 1H), 7,35-7,27 (m, 2H), 6,97 (ddd, J = 7,9, 7,0, 2,1 Hz, 1H), 3,81 (s, 2H), 3,72 (s, 3H).
(b) 2-(2-((trimetilsilil)etinil)fenil)acetato de metilo (I10)
Se pusieron 2-(2-yodofenil)acetato de metilo (I9) (4,65 g, 16,8 mmol), PdCÍ2(PPh3)2 (295 mg, 421 pmol) y Cu(l)l (80,0 mg, 421 pmol) en un matraz de reacción secado a la estufa en una atmósfera de nitrógeno. Se añadieron (trimetilsilil)acetileno (2,80 ml, 20,2 mmol), THF desgasificado seco (20 ml) y trietilamina (20 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Los volátiles se eliminaron a presión reducida para dar un residuo de color negro que se adsorbió sobre sílice y después se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo al 0-5 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I10) (4,63 g, 99 %) en forma de un líquido de color pardo claro; 1H RMN (400 MHz, CDCh) ó 7,48 (dd, J = 7,5, 0,8 Hz, 1H), 7,32 - 7,14 (m, 3H), 3,84 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 0,26 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,64 min.
(c) 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4)
Se disolvió 2-(2-((trimetilsilil)etinil)fenil)acetato de metilo (I10) (4,63 g, 19,0 mmol) en DCM (200 ml) y se añadió TBAF (1,0 M en THF) (28,5 ml, 28,5 mmol, 1,5 equiv.) a 0 °C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora antes del lavado con NaHCO3 al 10 % (100 ml). La capa orgánica se secó (MgSO4) y después se evaporó a presión reducida para dar un residuo de color pardo oscuro/negro. El residuo se adsorbió sobre sílice y después se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo al 0-10 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I4) (2,76 g, 83 %) en forma de un líquido de color rojo; 1H RMN (400 MHz, CDC^) Ó 7,52 (dd, J = 7,6, 1,1 Hz, 1H), 7,43 - 7,16 (m, 3H), 3,88 (d, J = 9,6 Hz, 2H), 3,77 - 3,52 (m, 3H), 3,28 (s, 1H).
Ejemplo 2: 3-(2-(2-((4-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)benzamida (2)
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A clorhidrato de 4-(4-nitrofenil)piperazina (1,00 g, 4,10 mmol) se le añadieron ácido fórmico (1,55 ml, 41,0 mmol) y formaldehído ac. al 37 % (3,06 ml, 41,0 mmol) en un recipiente para microondas y la reacción se calentó a 120 °C durante 3 minutos. A la mezcla de reacción enfriada se le añadieron EtOAc (100 ml) y NaOH ac. 2 M (70 ml). Las 10 capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera (50 ml), las capas se separaron y la capa de salmuera
acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml), las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el producto en bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, metanol al 0-60 % (que contenía una solución al 1 % de amoniaco) en EtOAc) para dar el compuesto del título (I11) (0,636 g, rendimiento del 70 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN 15 (400 MHz, de-DMSO) 5 8,07 - 8,01 (m, 2H), 7,05 - 6,99 (m, 2H), 3,48 - 3,40 (m, 4H), 2,46 - 2,39 (m, 4H), 2,21 (s, 3H).
Métodos de LCMS C: tr 1,45 min; m/z 222,2 [M+H]+.
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(b) 1-4-(4-Metilpiperazin-1-il)anilina (I12)
Se disolvió 1-Metil-4-(4-nitrofenil)piperazina (I11) (0,632 g, 2,86 mmol) en EtOAc (45 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se añadió una suspensión de Pd al 10 %/C (0,200 g) en EtOAc (5 ml). Después, la suspensión resultante se agitó vigorosamente en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 18 horas. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (7 x 10 ml) y el disolvente se eliminó al vacío para dar el compuesto del título (I12) (0,537 g, rendimiento del 98 %) en forma de un sólido de color rosa; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 6,70 - 6,64 (m, 2H), 6,51 - 6,45 (m, 2H), 4,54 (s, 2H), 2,94 - 2,84 (m, 4H), 2,46 - 2,36 (m, 4H), 2,19 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 0,98 min; m/z 192,3 [M+H]+.
(c) 4-Cloro-2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidina (I13)
A una solución de la 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (2,50 g, 11,5 mmol) en THF (50 ml) en un baño de hielo en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota cloruro de cinc (ll) (1,0 M en éter, 13,8 ml, 13,8 mmol). La mezcla se agitó en el baño de hielo durante dos horas, después se añadió metanotiolato de sódico (0,888 g,
12,7 mmol). La mezcla se agitó durante una noche, lo que permitió que la reacción se pusiera lentamente a temperatura ambiente. Después de 18 horas, la reacción se interrumpió con HCI 2 M (15 ml), y los productos orgánicos se eliminaron por evaporación a presión reducida. El residuo acuoso se diluyó con salmuera (15 ml), y se extrajo con DCM (3 x 30 ml). Las fases orgánicas combinadas se secaron (separador de fases) y se evaporó cuidadosamente para dar un aceite de color amarillo pálido. El análisis por cromatografía (Biotage Isolera, cartucho de 2 x 40 g de sílice, DCM al 0-20 %/n-hexano) seguido de la evaporación cuidadosamente del disolvente (40 °C a 400 mmHg y después a temperatura ambiente a 200 mmHg) dio el compuesto del título (I13) (2,149 g, rendimiento del 82 %) en forma de un aceite incoloro; 1H RMN (600 MHz, CDCla) 5 8,66 (s, 1H), 2,61 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 7,95 min, m/z 229,1 [M+H]+. Nota; I13 es volátil.
(d) 4-Yodo-2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidina (I14)
Se puso 4-cloro-2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidina (I13) (5,00 g, 21,9 mmol) en un matraz de reacción y después se añadieron yoduro sódico (9,80 g, 65,6 mmol) y ácido yodhídrico (58 %; 70 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 48 horas en la oscuridad y después se diluyó con agua (200 ml) después de lo cual precipitó un sólido incoloro. El precipitado se recogió por filtración y se lavó con una solución al 10 % de NaHCO3 hasta que se hizo neutra. El sólido resultante se lavó con agua (100 ml) después se secó por succión durante 2 horas para dar el compuesto del título (I14) (3,956 g, 57 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,42 (s, 1H), 2,58 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,30 min, m/z 321,0 [M+H]+.
(e) 3-Yodobenzoato de terc-butilo (I15)
A una solución de ácido 3-yodobenzoico (5,06 g, 20,4 mmol) en DCM (25 ml) se le añadió una solución de Boc2O (4,90 g, 22,5 mmol) en diclorometano (10 ml) y 4-DMAP (0,624 g, 5,11 mmol) en diclorometano (5 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente en una atmósfera de nitrógeno durante 64 horas. La mezcla resultante se repartió entre agua (100 ml) y diclorometano (50 ml) y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con agua (2 x 100 ml) antes de concentrarse a presión reducida. El residuo resultante se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano al 0-50 %/petróleo benceno a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I15) (65 % 4,02 g) en forma de un aceite incoloro; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,30 (dd, J= 1,6, 1,6 Hz, 1H), 7,95
(ddd, J = 7,8, 1,5, 1,1 Hz, 1H), 7,85 (ddd, J = 7,9, 1,8, 1,1 Hz, 1H), 7,16 (ddd, J = 7,8, 7,8, 0,2 Hz, 1H), 1,59 (s, 9H).
Métodos de LCMS C: tr 6,88 min.
(f) 3-((trimetilsilil)etinil)benzoato de terc-butilo (I16)
Una mezcla de 3-yodoberizoato de terc-butilo (I15) (4,02 g, 13,2 mmol), Pd(PPh3)4 (0,38 g, 0,33 mmol) y yoduro de cobre (l) (0,13 g, 0,68 mmol) se disolvió en THF anhidro (50 ml) en una atmósfera de nitrógeno y la solución resultante se desgasificó por burbujeo de nitrógeno a través de ésta. Se añadió trietilamina (9,2 ml, 66 mmol) y después la mezcla se agitó durante 10 minutos antes de la adición de TMS-acetileno (3,8 ml, 27 mmol). Después, la mezcla resultante se agitó durante 18 horas. La mezcla se concentró a presión reducida y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (acetato de etilo al 0-10 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I16) (3,57 g, 99 %) en forma de un sólido cristalino de color crema; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,06 (ddd, J = 1,7, 1,7, 0,5 Hz, 1H), 7,92 (ddd, J = 7,9, 1,3, 1,3 Hz, 1H), 7,60 (ddd, J = 7,7, 1,4, 1,4 Hz, 1H), 7,35
(ddd, J = 7,8, 7,8, 0,5 Hz, 1H), 1,59 (s, 9H), 0,26 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 7,46 min.
(g) 3-etinilbenzoato de terc-butilo (I17)
A una solución de 3-((trimetilsilil)etinil)benzoato de terc-butilo (I16) (4,40 g, 16,0 mmol) en THF (100 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno se le añadió TBAF 1,0 M en THF (20,0 ml, 20,0 mmol). Después, la mezcla se agitó a 0 °C durante 1 hora y después durante 16 horas a temperatura ambiente. Después, la mezcla se concentró a presión reducida, se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con agua (3 x 100 ml). Después, el extracto orgánico se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-5 %/benzina de petróleo a 40-
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60 °C) para dar el compuesto del título (I17) (2,72 g, 84 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,09 (dd, J = 1,5, 1,5 Hz, 1H), 7,97 (ddd, J = 7,9, 1,5, 1,5 Hz, 1H), 7,63 (ddd, J = 7,7, 1,4, 1,4 Hz, 1H), 7,38 (ddd, J = 7,8, 7,8, 0,5 Hz, 1H), 3,11 (s, 1H), 1,59 (s, 9H).
(h) 3-((2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etinil)benzoato de terc-butilo (I18)
Se combinaron 3-etinilbenzoato de t-butilo (I17) (1,603 g, 7,93 mmol), 4-yodo-2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidina (I14) (1,647 g, 5,15 mmol), PdCI2(PPha)2 (0,316 g, 0,45 mmol), PPh3 (0,355 g, 1,35 mmol), Cu(l)l (0,232 g, 1,22 mmol) y trietilamina (4,00 ml, 28,7 mmol) en DMF (20 ml) y la mezcla resultante calentó a 120 °C por irradiación de microondas durante 25 minutos. Después, la mezcla se concentró a presión reducida y se purificó dos veces usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 10-20 %/benzina de petróleo a 40-60 °C después DCM al 50-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I18) (0,624 g, 31 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,73 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 8,25 (m, 1H), 8,08 (m, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 1,61 (s, 9H).
(i) 3-(2-(2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de terc-butilo (I19) Se recogió 3-((2-(metiltio)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etinil)benzoato de terc-butilo (I18)
(0,624 g, 1,58 mmol) y Pd al 10 %/C (0,206 g) en THF (20 ml) y se burbujeó H2 a través de la mezcla durante 5 minutos antes de agitarse a temperatura ambiente durante 20 horas en una atmósfera de hidrógeno. La mezcla se filtró a través de celite y se concentró a presión reducida. Este procedimiento se repitió dos veces con Pd al 10 %/C (0,212 g) y catalizador de Pearlman al 20 % (0,316 g) respectivamente para dar el compuesto del título (I19) en forma de un aceite de color amarillo que se hizo reaccionar sin purificación adicional. Métodos de LCMS C: tr 7,14 min.
(j) 3-(2-(2-(metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de terc-butilo (I20)
Una mezcla de 3-(2-(2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de terc-butilo (I19) (0,630 g, 1,58 mmol) y MCPBA (0,975 g, 3,96 mmol) se disolvieron en DCM (20 ml) a 0 °C. La solución resultante se dejó calentar to temperatura ambiente, en la que la agitación se continuó durante 16 horas. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se trituró con DCM. La suspensión resultante se filtró, y el filtrado se evaporó a sequedad. El residuo se trituró una segunda vez con DCM y el precipitado se eliminó por filtración. El filtrado se evaporó a sequedad y el residuo se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM al 20-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C, EtOAc al 0-50 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I20) (0,360 g, 53 %) en forma de un semi-solido de color amarillo con una pureza del 70 % por RMN; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 9,06 (s, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 3,42 (m, 2H), 3,36 (s, 3H), 3,24 (m, 2H), 1,60 (s, 10H). Métodos de LCMS C: tr 6,40 min; m/z 357,1 [M-t-BuO]+, 453,1 [M+Na]+.
(k) 3-(2-(2-((4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de terc-butilo (I21)
Se combinaron 1-4-(4-metilpiperazin-1-il)anilina (I12) (0,071 g, 0,372 mmol), 3-(2-(2-(metilsulfonil)-5-
(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de terc-butilo (I20) (0,100 g, 0,232 mmol) y ácido tósico monohidrato (0,088 g, 0,465 mmol) en un recipiente para microondas y se añadió dioxano seco (3 ml). La reacción se calentó en irradiación de microondas a 150 °C durante 30 minutos, después se concentró al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después MeOH al 0-100 % en EtOAc) para dar un sólido de color amarillo pálido. El sólido se disolvió en EtOAc (20 ml) y NaHCO3 ac. sat. (10 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (20 ml), los productos orgánicos se combinaron, se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (I21) (0,025 g, rendimiento del 20 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 9,98 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,76 - 7,69 (m, 2H), 7,57 - 7,37 (m, 4H), 6,90 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,19 - 3,00 (m, 8H), 2,48 - 2,40 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,52 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,41 min; m/z 542,3 [M+H]+.
(l) 3-(2-(2-((4-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)benzamida (2)
Se disolvió 3-(2-(2-((4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de terc-butilo (I21) (0,025 g, 0,046 mmol) en DCM seco (3 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (0,177 ml, 2,31 mmol) a la solución y la reacción se agitó a 35 °C durante 2 horas. La mezcla se concentró a sequedad, se añadió tolueno (~2 ml) al residuo y el disolvente se eliminó al vacío para dar un sólido de color amarillo. Este material se disolvió en THF seco (3 ml) y DMF seca (0,2 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1-hidroxibenzotriazol (0,009 g, 0,064 mmol) y EDCI (0,012 g, 0,064 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,048 ml, 0,276 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (0,018 g, 0,18 mmol), y la reacción se agitó temperatura ambiente durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (20 ml) y NaHCO3 ac. saturado (10 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo pálido. El producto se disolvió en
DCM (~ 4 ml) y MeOH (~1 ml) y los disolventes se eliminaron al vacío. El proceso se repitió 3 veces con DCM solamente para dar el compuesto del título (2) (0,017 g, rendimiento del 76 % en 2 etapas) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, cfó-DMSO) 5 9,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,95 (s a, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,75 - 7,66 (m, 1H), 7,57 - 7,47 (m, 2H), 7,40 - 7,30 (m, 3H), 6,94 - 6,86 (m, 2H), 3,14 - 3,01 (m, 8H), 2,47 - 2,42 (m, 4H), 5 2,21 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,75 min; m/z 485,3 [M+H]+.
Ejemplo 3: 2-(2-(2-(2-((4-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (3)
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A una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (1) (0,015 g, 0,031 mmol) en metanol anhidro (1,5 ml) se le añadieron una solución ac. al 37 % de formaldehído (0,005 ml, 0,062 mmol) seguido de triacetoxiborohidruro sódico (0,033 g, 0,155 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. La 15 reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (15 ml) y NaHCO3 ac. sat. (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (3) (14,5 mg, rendimiento del 97 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 9,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,57 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 20 7,43 (s, 1H), 7,26 - 7,13 (m, 4H), 6,96 - 6,87 (m, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,12 - 3,03 (m, 6H), 3,03 - 2,94 (m, 2H), 2,47 -
2,42 (m, 4H), 2,22 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,74 min; m/z 499,3 [M+H]+.
Ejemplo 4: 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (4)
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(a) 3-(4-Nitrofenil)piridina (I22)
A una solución de 1-yodo-4-nitrobenceno (1,00 g, 4,02 mmol) en DMF seca desgasificada con nitrógeno (20 ml) se le añadieron ácido 3-piridinaborónico (0,592 g, 4,82 mmol), Cs2CO3 (5,23 g, 16,1 mmol), trifenilfosfina (0,158 g, 0,602 mmol) y Pd(OAc)2 (0,090 g, 0,40 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 18 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a sequedad al vacío. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 20-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I22) (0,590 g, rendimiento del 73 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) ó 8,90 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,70 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 1 H), 8,39-8,32 (m, 2H), 7,93 (ddd, J = 7,9, 2,4,
1,7 Hz, 1H), 7,78-7,72 (m, 2H), 7,44 (ddd, J = 7,9, 4,8, 0,8 Hz, 1H). Métodos de LCMS C: tr 4,62 min; m/z 201,1 [M+H]+.
(b) 3-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I23)
A una solución de 3-(4-nitrofenil)piridina (I22) (0,590 g, 2,947 mmol) en HCl 1 M (3 ml) y metanol (30 ml) se le añadió PtO2 (0,059 g) en una atmósfera de nitrógeno. Después, la reacción se sometió a una atmósfera de hidrógeno a 40 psi (275,79 kPa) en un hidrogeador Parr durante 24 horas, el catalizador se retiró por filtración, y los disolventes se eliminaron al vacío. El sólido de color amarillo resultante se desgasificó de nuevo en HCI 1 M (3 ml) y metanol (30 ml) y se añadió PtO2 (0,059 g) en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se sometió a una atmósfera de hidrógeno a 40 psi (275,79 kPa) en un hidrogenador Parr durante 24 horas, la mezcla de reacción se filtró a través de celite que se lavó con EtOAc (3 x 10 ml) y agua (3 x 10 ml) y el filtrado se concentró al vacío para dar el material en bruto (0,720 g) en forma de un sólido vítreo de color pardo pálido. Este material se disolvió en DCM (25 ml), DMF (5 ml) y metanol (20 ml) y se trató con trietilamina (1,438 ml, 10,315 mmol) seguido de anhídrido Boc (0,675 g, 3,094 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas, después se concentró al vacío, se añadieron EtOAc (100 ml) y NaHCO3 ac. sat. (50 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), los productos orgánicos se combinaron y se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar una espuma de color rosa. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-55 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I23) (0,435 g, rendimiento del 53 % en 2
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etapas) en forma de un sólido de color rosa; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 6,91 - 6,86 (m, 2H), 6,52 - 6,47 (m, 2H), 4,88 (s, 2H), 3,99 - 3,80 (m, 2H), 2,80 - 2,54 (m, 2H), 2,37 (tt, J = 11,6, 3,7 Hz, 1H), 1,85-1,75 (m, 1H), 1,70-1,62 (m, 1H), 1,53 (ddd, J = 24,4, 12,4, 3,3 Hz, 1H), 1,46-1,33 (m, 10H). Métodos de LCMS C: tr 4,86 min; m/z 177,2 [M- Boc+2H]+.
(c) 3-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I24)
Se agitó 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,355 g, 1,64 mmol) en una mezcla 1:1 de t-BuOH,1,2-dicloroetano (30 ml) a 0 °C y se añadió cuidadosamente una solución 1,0 M de ZnCh en éter dietílico (1,87 ml, 1,87 mmol) durante 20 minutos y la reacción se dejó en agitación a 0 °C durante 30 minutos. Una solución de 3-(4- aminofenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I23) (0,431 g, 1,56 mmol) en 1:1 de t-BuOH:1,2-dicloroetano (10 ml) se añadió gota a gota durante 15 minutos a 0 °C seguido de una solución de trietilamina (0,261 pl, 1,871 mmol) en 1:1 de t-BuOH:1,2-dicloroetano (10 ml). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 60 horas. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo oleoso resultante se suspendió en agua (200 ml), la suspensión se sometió a sonicación durante 30 minutos y el producto se recogió por filtración, el sólido se lavó con agua (5 x 10 ml) y se secó a alto vacío para dar el compuesto del título (I24) (0,638 g, rendimiento del 90 %) en forma de un sólido de color rosa pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,62 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 7,61 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,05 - 3,87 (m, 2H), 2,94 - 2,63 (m, 2H), 2,57 (ddd, J = 11,2, 7,7, 3,7 Hz, 1H), 1,87 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 1,75-1,54 (m, 2H), 1,51 - 1,35 (m, 10H). Métodos de LCMS C: tr 6,89 min; m/z 455,3 M-H]-.
(d) 3-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo (I25)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4) (0,137 g, 0,788 mmol) en DMF seca (7 ml) se le añadieron trietilamina (0,366 ml, 2,63 mmol) seguido de 3-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I24) (0,300 g, 0,657 mmol), trifenilfosfina (0,026 g, 0,098 mmol), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (lI) (0,046 g, 0,066 mmol) y Cul (0,019 g, 0,098 mmol). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró a sequedad al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-70 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I25) (0,310 g, rendimiento del 79 %) en forma de un aceite pegajoso de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,44 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 7,73 - 7,60 (m, 3H), 7,54 (td, J = 7,6, 1,3 Hz, 1H), 7,50 - 7,34 (m, 2H), 7,24 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,02 - 3,87 (m, 4H), 3,61 (s, 3H), 2,90 - 2,51 (m, 4H), 1,88 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 1,76-1,55 (m, 2H), 1,51-1,34 (m, 10H). Métodos de LCMS C: tr 6,98 min; m/z 539,2 [M-C4Hg(t-Bu)+H]+.
(e) 3-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo (I26)
Se disolvió 3-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I25) (0,302 g, 0,508 mmol) en EtOAc (12 ml) y etanol absoluto (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió Pd al 10 %/C (0,250 g) en EtOAc (4 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, después de lo cual el catalizador se eliminó por filtración a través de Celite y el disolvente se eliminó al vacío. El sólido resultante se disolvió de nuevo en EtOAc (12 ml) y etanol absoluto (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se añadió Pd al 10 %/C (0,250 g) en EtOAc (4 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (7 x 10 ml) y el disolvente se eliminó al vacío para dar un aceite viscoso de color amarillo pálido. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I26) (0,249 g, rendimiento del 82 %) en forma de un aceite viscoso amarillo pálido; 1H RMN (400 mHz, d6-DMSO) 5 10,18 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,72 - 7,64 (m, 2H), 7,26 - 7,16 (m, 6H), 4,02 - 3,89 (m, 2H), 3,76 (s, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,10 - 2,95 (m, 4H), 2,91 - 2,66 (m, 2H), 2,61 -2,51 (m, 1H), 1,88 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 1,75-1,54 (m, 2H), 1,43 (m, 10H). Métodos de LCMS C: tr 7,11 min; m/z 599,3 [M+H]+.
(f) 2-(2-(2-(2-((4-( 1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio (I27)
Se añadió LiOH.H2O (0,052 g, 1,25 mmol) a 3-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I26) (0,249 g, 0,416 mmol) en ThF (10 ml), agua (2,5 ml) y metanol (1 ml). La mezcla resultante se dejó en agitación durante 2 horas a 40 °C y después durante 20 horas a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (70 ml) y NaOH ac. 2 M (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (70 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I27) (0,250 g, rendimiento del 100 %) en forma de un sólido oleoso de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,23 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,72-7,60 (m, 2H), 7,25-7,00 (m, 6H), 4,01 -3,88 (m, 2H), 3,48 (s, 2H), 3,13-2,92 (m, 4H), 2,86-2,63 (m, 2H), 1,91 - 1,81 (m, 1H), 1,72-1,54 (m, 2H), 1,48 - 1,34 (m, 10H).
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Métodos de LCMS C: tr 6,71 min; m/z 585,3 [M+H]+.
(g) 3-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I28)
Se disolvió 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidi n-4-
il)etil)fenil)acetato de litio (I27) (0,246 g, 0,416 mmol) en ThF seco (10 ml) y DMF seca (2 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1-hidroxi benzotriazol (0,067 g, 0,50 mmol) y EDCI (0,096 g, 0,50 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,290 ml, 1,66 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (0,160 g, 1,66 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 45 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (70 ml) y NaHCO3 ac. sat. (70 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (70 ml), salmuera (70 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color blanquecino. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-10 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I28) (0,186 g, rendimiento del 77 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,17 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,44 (s a, 1H), 7,28 - 7,11 (m, 6H), 6,93 (s a, 1H), 4,02 - 3,89 (m, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,15 - 3,07 (m, 2H), 3,06 - 2,98 (m, 2H), 2,89 - 2,67 (m, 2H), 2,61 - 2,51 (m, 1H), 1,88 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 1,74-1,55 (m, 2H), 1,50-1,35 (m, 10H). Métodos de LCMS C: tr 6,57 min; m/z 584,3 [M+H]+.
(h) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil) acetamida (4)
Se disolvió 3-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I28) (0,184 g, 0,315 mmol) en DCM (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (1,21 ml, 15,8 mmol) a la solución y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (100 ml) y NaOH ac. 2 M (70 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color blanco. El sólido se recogió en DCM (~ 7 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces para dar el compuesto del título (4) (0,110 g, rendimiento del 72 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,13 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,69-7,62 (m, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,26-7,12 (m, 6H), 6,93 (s, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,15 - 3,06 (m, 2H), 3,06 - 2,90 (m, 4H), 2,60 - 2,43 (m, 3H), 1,85 (d, J= 11,1 Hz, 1H), 1,69-1,61 (m, 1H), 1,61 - 1,41 (m, 2H). 3 Protones alifáticos ocultos por DMSO residual. Métodos de LCMS C: tr 4,81 min; m/z 484,3 [M+H]+.
Ejemplo 5: 2-(2-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (5)
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A una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil) acetamida (4) (0,021 g, 0,043 mmol) en metanol anhidro (2 ml) se le añadieron una solución ac. al 37 % de formaldehído (0,006 g, 0,195 mmol) seguido de triacetoxiborohidruro sódico (0,046 g, 0,217 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (15 ml) y NaHCO3 ac. sat. (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (15 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (5) (20 mg, rendimiento del 93 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d4-MeOD) 5 8,54 (s, 1H), 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,30 -7,15 (m, 6H), 3,67 (s, 2H), 3,19-3,12 (m, 2H), 3,12 - 3,02 (m, 2H), 2,96 (d, J = 11,1 Hz, 2H), 2,85 -2,74 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,13-2,03 (m, 2H), 1,96-1,67 (m, 3H), 1,49 (ddd, J = 24,8, 12,5, 3,9 Hz, 1H). Métodos de LCMS C: tr 4,86 min; m/z 498,3 [M+H]+.
Ejemplo 6: 3-(2-(2-((3-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzamida (6)
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(a) 3-(2-(2-((3-(4-metHpiperazin-1-H)fenH)amino)-5-(trifluorometH)pirimidin-4-H)etH)benzoato de tero-butilo (¡29)
Una mezcla de 3-(2-(2-(metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de tero-butilo (¡20) (0,072 g, 0,17 mmol), ácido tósico monohidrato (0,044 g, 0,231 mmol) y 3-(4-metilpiperazinil-1-il)anilina (0,055 g, 0,29 mmol) en dioxano (3,0 ml) se calentó a 140-150 °C por irradiación de microondas durante 30 minutos. Después, la mezcla se concentró a presión reducida y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH al 0-10 %/EtOAc con NH3 ac. al 1 %) para dar el compuesto del título (¡29) (0,048 g, 52 %); 1H RMN (400 MHz, CDCls) 6 8,54 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,84 (ddd, J = 7,4, 1,6, 1,6 Hz, 1H), 7,37 (m, 4H), 7,23 (m, 1 H), 7,04 (dd, J = 7,9, 1,4 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 8,2, 1,8 Hz, 1H), 3,27 (m, 4H), 3,14 (m, 4H), 2,58 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 1,59 (s, 9H). Método LCMS C. tr 5,45 min; m/z 542,3 [M+H]+.
(b) Ácido 3-(2-(2-((3-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoioo (¡30)
A una solución de 3-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de tero- butilo (¡29) (0,048 g, 0,088 mmol) en DCM (3 ml) se le añadió TFA (0,5 ml); después, la reacción se agitó durante 35 minutos a temperatura ambiente antes de concentrarse a presión reducida. El residuo se recogió en tolueno (2 x 10 ml) y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se recogió en DCM (3 ml) y se añadió TFA (0,5 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora después los volátiles se eliminaron por evaporación a presión reducida. El residuo se recogió en tolueno (2 x 20 ml) y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (¡30) con un rendimiento cuantitativo; 1H RMN (400 MHz, d6-Acetona) 6 9,14 (s, 1 H), 8,62 (s, 1 H), 7,96 (s, 1H), 7,89 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,74 (s a, 1H), 7,54 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 7,6, 7,6 Hz, 1H), 7,34 (d a, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,25 (dd, J = 8,1, 8,1 Hz, 1H), 6,77 (dd, J = 8,1, 1,8 Hz, 1 H), 3,60 (m, 4H), 3,47 (m, 4H), 3,20 (m, 4H), 2,94 (s, 3H). Método LCMS C; tr 4,93 min; m/z 486,2 [M+H]+.
(o) 3-(2-(2-((3-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzamida (6)
A una solución de ácido 3-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoico (¡30) (0,048 g, 0,10 mmol) y HATU (0,051 g, 0,13 mmol) en DmF (2 ml) se le añadió DiPEA (0,068 ml, 0,39 mmol), después, la solución resultante se agitó durante 10 minutos antes de la adición de NH4OH (0,2 ml). Después, la mezcla resultante se agitó durante una noche (16 horas) a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron usando un cartucho de separación de fases antes de concentrarse a presión reducida. Después, los residuos orgánicos se purificaron usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH al 0-30 %/EtOAc con NH4OH al 1 % en MeOH) para dar el compuesto del título (6)(0,028 mg, 58 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 6
10,07 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,72 (m, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,38 (m, 2H), 7,34 (m, 1H), 7,14 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 6,64 (m, 1H), 3,10 (m, 8H), 2,42 (m, 4H), 2,19 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,80 min; m/z 485,3 [M+H]+.
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(a) 3-etinilbenzoato de metilo (I31)
Se disolvió 3-etinilbenzoato de tere-butilo (I17) (1,50 g, 9,37 mmol) en DCM seco (70 ml) y se añadió cuidadosamente TFA (35,9 ml, 468 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, se concentró al vacío y se añadió tolueno y después se eliminó al vacío para dar un sólido de color amarillo pálido. Este material se disolvió en metanol (50 ml) y se añadió H2SO4 conc. (~1 ml) y la solución resultante se agitó a 65 °C durante 20 horas. Después de la refrigeración a temperatura ambiente, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (200 ml) y se añadió lentamente NaHCO3 ac. sat. (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (200 ml), las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (I31) (1,136 g, rendimiento del 96 % en 2 etapas) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCb) 5 8,17 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 8,03-8,00 (m, 1H), 7,66 (dt, J= 7,7, 1,4 Hz, 1H), 7,41 (td, J = 7,8, 0,4 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,12 (s, 1H). Métodos de LCMS C: tr 5,84 min.
(b) 4-(4-((4-((3-(metoxiearbonil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-earboxilato de tere- butilo (I32)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 3-etinilbenzoato de metilo (I31) (0,105 g, 0,655 mmol) en DMF seca (6 ml) se le añadieron trietilamina (0,308 ml, 2,18 mmol) seguido de 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (I3) (0,250 g, 0,546 mmol), trifenilfosfina (0,021 g, 0,082 mmol), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,038 g, 0,055 mmol) y Cu(l)l (0,016 g, 0,082 mmol). La mezcla de reacción
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se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos, se concentró a sequedad al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I32) (0,182 g, rendimiento del 57 %) en forma de un sólido de color naranja; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,28 (s a, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,16 - 8,03 (m, 2H), 7,90 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,69 (t, J= 7,9 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,50 - 3,41 (m, 4H), 3,11 - 2,99 (m, 4H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,82 min; m/z 582,2 [M+H]+.
(c) 4-(4-((4-(3-(metoxicarbonil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
(133)
Se disolvió 4-(4-((4-((3-(metoxicarbonil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I32) (0,180 g, 0,309 mmol) en DMF seca (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió Pd al 10 %/C (0,100 g) en EtOAc (10 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas después de lo cual la reacción se lavó abundantemente con gas nitrógeno y se añadió catalizador de Pearlman (0,150 g) en EtOAc (5 ml). La atmósfera se cambió de nuevo a gas hidrógeno (globo) y la reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (5 x 10 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-40 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I33) (0,120 g, rendimiento del 66 %) en forma de una espuma de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,01 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,88 - 7,77 (m, 2H), 7,61 - 7,39 (m, 4H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,52 - 3,42 (m, 4H), 3,21 - 2,99 (m, 8H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,86 min; m/z 586,3 [M+H]+.
(d) 3-(2-(2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzoato de litio
(134)
Se añadió UOH.H2O (0,025 g, 0,60 mmol) a 4-(4-((4-(3-(metoxicarbonil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I33) (0,117 g, 0,200 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y metanol (1 ml). La mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 17 horas, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (100 ml) y NaHCO3 ac. sat. (80 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 80 ml), las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (70 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I34) (0,105 g, rendimiento del 91 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,00 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,85 - 7,74 (m, 2H), 7,56 - 7,48 (m, 2H), 7,47 - 7,35 (m, 2H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,50 - 3,41 (m, 4H), 3,17 - 2,98 (m, 8H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,30 min; m/z 572,3 [M+H]+.
(e) 4-(4-((4-(3-carbamoilfenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I35)
Se disolvió 3-(2-(2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)benzoato de litio (I34) (0,100 g, 0,173 mmol) en THF seco (7 ml) y DMF seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1-hidroxibenzotriazol (0,028 g, 0,21 mmol) y EDCI (0,040 g, 0,21 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,121 ml, 0,693mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (0,067 g, 0,69 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 60 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (70 ml) y NaHCO3 ac. sat. (70 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (70 ml) y salmuera (70 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color blanquecino. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I35) (0,073 g, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,00 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,75 - 7,68 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,40 - 7,29 (m, 3H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,50 - 3,41 (m, 4H), 3,14 - 3,00 (m, 8H), 1,42 (s, 9H).
(f) 2-(2-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (7)
Se disolvió 4-(4-((4-(3-carbamoilfenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil) piperazin-1-carboxilato de terc- butilo (I35) (0,070 g, 0,12 mmol) en DCM (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (0,282 ml, 3,68 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (50 ml) y NaOH ac. 2 M (50 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo pálido. El sólido se recogió en DCM (~ 10 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces para dar el compuesto del título (7) (0,043 g, rendimiento del 75 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 9,96 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,74-7,66 (m, 1H), 7,56 - 7,47 (m, 2H), 7,40 - 7,29 (m, 3H), 6,94 - 6,82 (m, 2H), 3,15 - 2,96 (m, 8H), 2,86 - 2,79 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,71 min; m/z 471,2 [M+H]+.
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(a) 2-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I36)
A una solución de 2-cloropiridina (0,816 g, 7,19 mmol) en DMF seca desgasificada con nitrógeno (20 ml) se le añadió ácido 4-nitrofenilborónico (1,00 g, 5,99 mmol), Cs2CO3 (7,19 g, 24,0 mmol), trifenilfosfina (0,236 g, 0,899 mmol) y Pd(OAc)2(0,134 g, 0,599 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 80 °C durante 24 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró a sequedad al vacío. El material en bruto se absorbió sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar un sólido de color amarillo pálido. Este material (0,365 g) se disolvió en 1 M HCI (1,5 ml) y se añadió metanol (15 ml) y PtO2 (0,036 g) en una atmósfera de nitrógeno. Después, la reacción se sometió a una atmósfera de hidrógeno a 40 psi (275,76 kPa) en un hidrogenador Parr durante 24 horas, y después se filtró a través de celite que se lavó con EtOAc (3 x 10 ml) y agua (3 x 10 ml). El filtrado combinado se concentró al vacío para dar el material en bruto (0,460 g) en forma de un sólido oleoso de color pardo oscuro-rosa. Este material se disolvió en metanol anhidro (20 ml) y se trató con trietilamina (0,889 ml, 6,38 mmol) seguido de anhídrido Boc (0,418 g, 1,91 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas, se concentró al vacío y se añadieron EtOAc (100 ml) y NaHCO3 ac. sat. (50 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), los productos orgánicos se combinaron y se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C), para dar el compuesto del título (I36) (0,122 g, rendimiento del 8 % en 3 etapas) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 6,85 - 6,78 (m, 2H), 6,57 - 6,51 (m, 2H), 5,14 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,98-4,89 (m, 2H), 3,85 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 2,70 - 2,57 (m, 1H), 2,19 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 1,73-1,61 (m, 1H), 1,57-1,44 (m, 2H), 1,44 - 1,27 (m, 11H). Métodos de LCMS C: tr 4,94 min; m/z 177,3 [M- Boc+2H]+.
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(b) 2-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-
1-carboxilato de terc-butilo (I37) Se agitó 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,101 g, 0,464 mmol) en una mezcla 1:1 de t-BuOH:1,2-dicloroetano (10 ml) a 0 °C y se añadió cuidadosamente una solución 1,0 M de ZnCl2 en éter dietílico (0,530 ml, 0,530 mmol) durante 20 minutos. Después de la adición, la reacción se dejó en agitación a 0 °C durante 30 minutos y se añadió gota a gota una solución de 2-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo
(136) (0,122 g, 0,441 mmol) en 1:1 t-BuOH:1,2-dicloroetano (4 ml) durante 15 minutos a 0 °C seguido de una solución de trietilamina (0,074 pl, 0,530 mmol) en 1:1 de t-BuOH:1,2-dicloroetano (4 ml) y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 60 horas. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo resultante se suspendió en agua (40 ml), la suspensión se sometió a sonicación durante 40 minutos y el producto se recogió por filtración, el sólido se lavó con agua (5 x 10 ml) y se secó a alto vacío para dar el compuesto del título
(137) (0,135 g, rendimiento del 67 %) en forma de un sólido de color rosa pálido. Métodos de LCMS C: tr 6,96 min; m/z 455,2, 457,2 M-H]-.
(c) 2-(2-Yodofenil)acetamida (I38)
Se disolvió ácido 2-yodofenilacético (2,00 g, 7,63 mmol) en THF seco (70 ml) y DMF seca (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1-hidroxibenzotriazol (1,134 g, 8,396 mmol) y EDCI (1,609 g, 8,396 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (5,318 ml, 30,53 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (2,933 g, 30,53 mmol), y la reacción se agitó temperatura ambiente durante 17 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (150 ml) y NaHCO3 ac. sat. (100 ml). Las capas se separaron y la capa orgánica se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título
(138) (1,755 g, rendimiento del 88 %) en forma de un sólido de color beige; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 7,82 (dd, J = 7,9, 0,9 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,36 - 7,28 (m, 2H), 7,02 - 6,94 (m, 2H), 3,55 (s, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,77 min; m/z 262,0 [M+H]+.
(d) 2-(2-Etinilfenil)acetamida (I39)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 2-(2-yodofenil)acetamida (I38) (1,75 g, 6,70 mmol) en THF seco (50 ml) y DMF seca (10 ml) se le añadieron Pd(PPh3)4 (0,194 g 0,168 mmol) y Cu(l)l (0,064 g, 0,34 mmol), trietilamina (3,27 ml, 23,5 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos y se añadió TMS-acetileno (1,52 ml, 10,7 mmol). Después, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar un sólido de color beige. Este material se disolvió en THF seco (25 ml) en una atmósfera de nitrógeno y se añadió gota a gota TBAF (1,0 M en THF, 2,805 ml, 2,805 mmol) a 0 °C. La solución se agitó a esta temperatura durante 1 hora y 15 minutos después de lo cual se añadió agua (5 ml). La mezcla de reacción se concentró al vacío y se diluyó con EtOAc (100 ml) y NaHCO3 ac. sat. (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (100 ml), las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el producto en bruto. El material se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-20 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I39) (0,239 g, rendimiento del 22 % en 2 etapas) en forma de un sólido de color beige; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 7,21 (dd, J = 7,6, 1,1 Hz, 1H), 7,18 - 7,05 (m, 3H), 7,04 - 6,98 (m, 1H), 6,70 (s, 1H), 4,08 (s, 1H), 3,36 (s, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,71 min; m/z 160,2 [M+H]+.
(e) 2-(4-((4-((2-(2-amino-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo (I40)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 2-(2-etinilfenil)acetamida (I39) (0,054 g, 0,788 mmol) y 2-(4-((4-cloro-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I37) en DMF seca (4 ml) se le añadieron trietilamina (0,159 ml, 1,138 mmol), trifenilfosfina (0,011 g, 0,043 mmol), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,020 g, 0,028 mmol) y Cul (0,008 g, 0,04 mmol). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos. La reacción se concentró a sequedad al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-5 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I40) (0,122 g, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido vítreo de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,48 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 7,73 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,65-7,55 (m, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 1H), 7,47 - 7,33 (m, 3H), 7,16 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,01 (s, 1H), 5,29 -5,22 (m, 1H), 3,92 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,70 (s, 2H), 2,71 (t, J= 13,3 Hz, 1H), 2,34 -2,24 (m, 1H), 1,82-1,68 (m, 1H), 1,54 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 1,45-1,22 (m, 11H). Métodos de LCMS C: tr 6,52 min; m/z 578,3 [M-H]-.
(f) 2-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I41)
Se disolvió 2-(4-((4-((2-(2-amino-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pi peridin-1-carboxilato de terc-butilo (I40) (0,120 g, 0,207 mmol) en DMF seca (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió catalizador
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de Pearlman al 20 % (0,060 g) en EtOAc (5 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas a temperatura ambiente. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (5 x 10 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar una goma de color amarillo pálido que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage, Isolera, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I41) (0,090 g, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,20 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,73 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,26 - 7,21 (m, 1H), 7,20 - 7,09 (m, 5H), 6,89 (s, 1H), 5,31-5,19 (m, 1H), 3,92 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,49 (s, 2H), 3,16-2,98 (m, 4H), 2,71 (t, J = 11,8 Hz, 1H), 2,29 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 1,75 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 1,58-1,50 (m, 2H), 1,46-1,23 (m, 11H). Método LCMS C. tr 6,59 min; m/z 584,3 [M+H]+.
(g) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorametil)pirimidin-4-il)etil)fenil) acetamida (8)
Se disolvió 2-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino) fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I41) (0,087 g, 0,15 mmol) en DCM seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (0,351 ml, 4,58 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (20 ml) y NaHCO3 ac. sat. (15 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (15 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo pálido que se recogió en DCM (~ 10 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces para dar el compuesto del título (8) (0,064 g, rendimiento del 89 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,15 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,70 - 7,62 (m, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,30 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,26 - 7,12 (m, 4H), 6,92 (s, 1H), 3,54 - 3,47 (m, 3H), 3,15-2,97 (m, 5H), 2,71 -2,59 (m, 1H), 1,84-1,76 (m, 1H), 1,67 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 1,61 - 1,50 (m, 1H), 1,46 - 1,27 (m, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,84 min; m/z 484,3 [M+H]+.
Ejemplo 9: 2-(2-(2-(2-((4-(1-metilpiperidin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (9)
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A una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-piperidin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil) acetamida (8) (0,023 g, 0,048 mmol) en metanol anhidro (1,5 ml) se le añadieron una solución ac. al 37 % de formaldehído (0,014 ml, 0,19 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (0,050 g, 0,24 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (15 ml) y NaHCO3 ac. sat. (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido que se recogió en DCM (~ 10 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces después de lo cual la muestra se secó adicionalmente a alto vacío para dar el compuesto del título (9) (0,022 g, rendimiento del 91 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,17 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,68 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,27 - 7,13 (m, 6H), 6,92 (s, 1H), 3,49 (s, 2H), 3,15 - 2,98 (m, 4H), 2,97-2,90 (m, 1H), 2,75 - 2,69 (m, 1H), 2,07 - 1,97 (m, 1H), 1,90 (s, 3H), 1,73 (d, J = 12,8 Hz, 1H), 1,66-1,54 (m, 3H), 1,50-1,38 (m, 1H), 1,36 - 1,27 (m, 1H). Métodos de LCMS C: tr 4,88 min; m/z 498,3 [M+H]+.
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A una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (1) (0,020 g, 0,041 mmol) en metanol anhidro (1,5 ml) se le añadieron acetaldehído (0,0090 ml, 0,17 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (0,044 g, 0,21 mmol) en una atmósfera de nitrógeno La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (15 ml) y NaHCO3 ac. sat. (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido que se recogió en DCM (~ 10 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces después de lo cual la muestra se secó adicionalmente a alto vacío para dar el compuesto del título (10) (0,016 g, rendimiento del 76 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 9,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,26 -7,13 (m, 4H), 6,97 - 6,87 (m, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,13 - 2,94 (m, 8H), 2,36 (c, J= 7,2 Hz, 2H), 1,03 (t, J = 7,2 Hz, 3H). 4 Protones alifáticos ocultos por el DmSo residual. Métodos de lCmS C: tr 4,82 min; m/z 513,3 [M+H]+.
Ejemplo 11: 2-(2-(2-(2-((4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (11)
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(a) 4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butilo (I42)
Se añadió gota a gota diisopropilamida de litio (2 M en heptano/THF/etilbenceno; 15,1 ml, 30,1 mmol) a una solución de 4-oxopiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (3,00 g, 15,1 mmol) en THF (50 ml) a -78 °C y la mezcla se dejó agitar durante 30 minutos. Después, se añadió gota a gota una solución de N-fenil-bis(trifluorometanosulfonimida) (6,46 g, 18,1 mmol) en THF (60 ml) durante 30 minutos a la reacción, y la mezcla se dejó agitar durante 30 minutos -78 °C. Después, la mezcla resultante se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 24 horas. El disolvente se eliminó parcialmente (aprox. 80 ml) y la mezcla de reacción se inactivó con una solución saturada de NaHCO3 (50 ml). Se añadió DCM (50 ml) a la solución y las capas se separaron. Después, la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con una solución 0,2 M de ácido cítrico (50 ml), NaOH 1 M (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para dar un aceite de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter dietílico al 0-10 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I42) (2,48 g, 50 %) en forma de un aceite de color naranja que cristalizó después de la refrigeración a -18 °C; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 5,76 (s, 1H), 4,05 - 4,04 (m, 2H), 3,63 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,46 - 2,43 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
(b) 4-(4-nitrofenil)-5,6-dihidropiridina-1 (2H)-carboxilato de terc-butilo (I43)
Se añadió una solución de Na2CO3 2 M (5,66 ml, 11,3 mmol) a una mezcla de ácido 4-nitrofenilborónico (0,831 g, 4,98 mmol), 4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-5,6-dihidropiridina-1(2H)-carboxilato de terc-butilo (I42) (1,50 g,
4.53 mmol), LiCI (0,384 g, 9,06 mmol) y Pd(PPh3)4 (1,308 g, 1,132 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml). La mezcla de reacción se agitó a 85 - 90 °C durante 4 horas. La mezcla resultante se disolvió en EtOAc (100 ml) y la capa orgánica se lavó con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secó sobre Na2SO4 para producir un aceite de color rojo oscuro. El aceite se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir el compuesto del título (I43) (0,683 g, 50 %) en forma de un sólido de color pardo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,24 - 8,16 (m, 2H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 6,23 (s, 1H), 4,14-4,12 (m, 2H), 3,66 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,55 (s a, 2H), 1,50 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,39 min; m/z 249 [M-Boc+2H]+. 205 [M- tButil+2H]+.
(c) 4-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I44)
Una solución de 4-(4-nitrofenil)-5,6-dihidropiridina-1 (2H)-carboxilato de terc-butilo (I43) (0,570 g, 1,87 mmol) en EtOH (5 ml) y DMF (5 ml) se añadió a una solución de Pd al 10 %/C (200 mg) en DMF (10 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una capa de celite y se lavó a través de con EtOAc (130 ml). El disolvente se eliminó al vacío para producir un aceite de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I44) (0,46 g, 89 %) en forma de un sólido cristalino; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 7,02 - 6,96 (m, 2H), 6,67 - 6,61 (m, 2H), 4,21 (s a, 2H), 3,57 (s, 2H), 2,77 (t, J = 12,2 Hz, 2H),
2.53 (tt, J = 12,1, 3,5 Hz, 1H), 1,77 (d, J = 13,3 Hz, 2H), 1,64 - 1,50 (m, pico oscurecido por disolvente), 1,48 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 4,77 min; m/z 221 [M-tButil+2H]+, 177 [M-BOC+2H]+.
(d) 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I45)
Se añadió cloruro de cinc (1,0 M en Et2O) (1,97 ml, 1,97 mmol) a una solución de 2,4-dicloro-5- (trifluorometil)pirimidina (0,384 g, 1,77 mmol) en 1:1 de DCE/t-BuOH (10 ml) a 0 °C en una corriente de gas N2. La mezcla se agitó durante 1 hora a 0 °C y después se añadió 4-(4-aminofenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I44) (0,453 g, 1,64 mmol) en 1:1 de DCE/tBuOH (7 ml). A continuación, se añadió gota a gota una solución de NEt3 (0,251 ml, 1,80 mmol) en 1:1 de DCE/t-BuOH (8 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó vigorosamente durante 30 minutos más a 0 °C después de la adición final y después a temperatura ambiente durante 24 horas. El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un residuo oleoso de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir un sólido de color amarillo pálido. El sólido se suspendió en MeOH (10 ml) y agua (10 ml). El precipitado resultante se filtró para proporcionar el compuesto del título (I45) (0,658 g, 88 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,60 (s, 1H), 8,77 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,13 - 3,98 (m, 2H), 2,80 (s a, 2H), 2,69 - 2,61 (m, 1H), 1,74 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 1,53-1,39 (m, 11H). Métodos de LCMS C: tr 6,81 min; m/z 401 [M-tButil+2H]+, 357 [M-Boc+2H]+.
(e) 4-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo (I46)
Se añadió una solución de 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4) (0,069 g, 0,394 mmol) en dimetilformamida (2 ml) y trietilamina (0,183 ml, 1,31 mmol) a una mezcla de 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1- carboxilato de terc-butilo (I45) (0,150 g, 0,328 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (0,023 g, 0,033 mmol), Cu(l)l (0,0090 g, 0,049 mmol) y trifenilfosfina (0,013 g, 0,049 mmol) en dimetilformamida (2 ml). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 15 minutos. La reacción se enfrió y la mezcla se diluyó con EtOAc y se pasó a través de un lecho de celite y se lavó a través de acetato de etilo (50 ml). Se añadió agua (50 ml) y las capas
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se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un residuo de color pardo oscuro. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 % en ciclohexano) para producir el compuesto del título (146) (0,157 g, 80 %) en forma de un aceite de color pardo viscoso.
(f) 4-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
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Se añadió una solución de 4-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I46) (0,157 g, 0,264 mmol) en DMF (15 ml) a una solución de Pd al 10 %/C (95 mg) en DMF (5 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una capa de celite y se lavó a través de con EtOAc (100 ml). El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un aceite de color amarillo pálido que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir el compuesto del título (I47) (0,128 g, 81 %) en forma de un aceite viscoso amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,53 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 7,59 - 7,54 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,28 - 7,17 (m, picos ocultos por CDCla), 4,25 (s a, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,17 - 3,04 (m, 4H), 2,81 (t, J = 12,1 Hz, 2H), 2,64 (tt, J = 11,8, 3,4 Hz, 1H), 1,83 (d, J = 13,0 Hz, 2H),
I, 67-1,59 (m, 2H), 1,49 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 7,02 min; m/z 621 [M+Na]+, 599 [M+H]+, 543 [M-tButil+2H]+, 499 [M-Boc+2H]+.
(g) 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio
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Se añadió UOH.H2O (0,027 g, 0,647 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I47) (0,128 g, 0,214 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y metanol (1 ml). La mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml) y NaHCO3 ac. sat. (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml), las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I48) (0,130 g) en forma de un aceite viscoso amarillo pálido.
(h) 4-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo
(149)
Se añadieron 1-hidroxibenzotriazol (32,8 mg, 0,243 mmol), EDCI (46,6 mg, 0,243 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (84,6 pl, 0,486 mmol) a una solución de 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio (I48) (0,130 g, 0,221 mmol) en THF seco (6 ml) y DMF seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió en una porción carbonato de amonio (84,8 mg, 0,883 mmol) a la mezcla de reacción agitada después de 10 minutos. La reacción se dejó agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (50 ml), se transfirió a un embudo de decantación y se lavó con NaHCO3 saturado (50 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (2 x 50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un sólido de color amarillo pálido. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-80 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I49) (90,8 mg, 70 %) en forma de un sólido oleoso de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,53 (s, 1H), 7,53 (m, 3H), 7,31 - 7,23 (m, picos ocultos por CDCla), 7,20 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,37 (s, 1H), 5,29 (s, 1H), 4,25 (s a, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,15 - 3,03 (m, 4H), 2,80 (t, J = 12,4 Hz, 2H), 2,69 - 2,59 (m, 1H), 1,83 (d, J = 12,6 Hz, 2H), 1,68 - 1,55 (m, picos ocultos por pico de agua), 1,49 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,48 min; m/z 606 [M+Na]+, 584 [M+H]+, 528 [M-tButil+-2H]+, 484 [M-Boc+2H]+.
(i) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (11)
Se añadió ácido trifluoroacético (0,595 ml, 7,78 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I49) (90,8 mg, 0,156 mmol) en DCM seco (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre EtOAc (30 ml) y NaOH 2 M (30 ml). Las dos capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (30 ml) y salmuera (30 ml), se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un sólido de color blanco que se suspendió en DCM (2 ml) y ciclohexano (10 ml). El precipitado resultante se filtró para proporcionar el compuesto del título (11) (63 mg, 84 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,13 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,67-7,64 (m, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,27 - 7,12 (m, 6H), 6,93 (s, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,14 - 3,06 (m, 2H), 3,02 - 2,99 (m, 4H), 2,62 - 2,46 (m, picos ocultos por DMSO), 1,67 (d, J =
II, 4 Hz, 2H), 1,49 (cd, J = 12,5, 3,9 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,84 min; m/z 484 [M+H]+.
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(a) 2-(2-((trimetilsilil)etinil)fenil)propanoato de metilo (I50)
A una solución 2 M de LDA (1,24 ml, 2,48 mmol) se le añadió una solución de 2-(2-((tr¡met¡ls¡l¡l)et¡n¡l)fen¡l)acetato de metilo (I10) (0,306 g, 1,24 mmol) en THF (10 ml) a -78 °C y la mezcla se ag¡tó durante 30 m¡nutos. Después, se añad¡ó yoduro de metilo (0,155 ml, 2,48 mmol) y la mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después, la mezcla de reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante 18 horas antes de la inactivación con una solución saturada de NH4Cl (20 ml). Después, se añadió EtOAc (20 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con EtOAc (2 x 20 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar un aceite de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-5 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I50) (0,297 g, 92 %) en forma de un aceite de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 7,49 - 7,44 (m, 1H), 7,33 - 7,24 (m, picos ocultos por CDCl3), 7,21-7,17 (m, 1H), 4,25 (c, J= 7,2 Hz, 1H), 3,67 (s, 3H), 1,51 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,26 (s, 9H).
(b) 2-(2-etinilfenil)propanoato de metilo (I51)
Se añadió una solución de TBAF (solución 1 M en THF; 2,28 ml, 2,28 mmol) a una solución de 2-(2- ((trimetilsilil)etinil)fenil)propanoato de metilo (I50) (0,297 g, 1,14 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 50 minutos a 0 °C y después se concentró a presión reducida y el residuo se recogió en EtOAc (20 ml). La solución orgánica se lavó con NaHCO3 saturado (20 ml), agua (20 ml) y se secó sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó al vacío para producir un residuo oleoso de color pardo. El aceite se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-5 % en ciclohexano) para proporcionar el compuesto del título (I51) (0,192 g, 89 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 7,53 - 7,48 (m, 1H), 7,36 - 7,28 (m, 2H), 7,24-7,20 (m, 1H), 4,31 (c, J= 7,2 Hz, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,28 (s, 1H), 1,50 (d, J = 7,2 Hz, 3H). Métodos de
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LCMS C: tr 5,92 min; m/z 189 [M+H]+.
(c) 4-(4-((4-((2-( 1-metoxi-1-oxopropan-2-il)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I52)
Se añadió una solución de 2-(2-etinilfenil)propanoato de metilo (I51) (0,074 g, 0,39 mmol) en dimetilformamida (2 ml) y trietilamina (0,183 ml, 1,31 mmol) a una mezcla de 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin- 1-carboxilato de terc-butilo (I45) (0,150 g, 0,328 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (0,023 g, 0,033 mmol), CuI (0,0090 g, 0,049 mmol) y trifenilfosfina (0,013 g, 0,049 mmol) en dimetilformamida (2 ml). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 15 minutos. La reacción se enfrió y la mezcla se diluyó con EtOAc y se pasó a través de un lecho de Celite en lavado con acetato de etilo (50 ml). Se añadió agua (50 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un residuo de color pardo oscuro. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 % en ciclohexano) para producir el compuesto del título (I52) (0,108 g, 54 %) en forma de un aceite de color pardo viscoso.
(d) 4-(4-((4-(2-(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I53)
Se añadió una solución de 4-(4-((4-((2-(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I52) (0,108 g, 0,177 mmol) en EtOAc (5 ml) y DMF (10 ml) a una suspensión de Pd al 10 %/C (80 mg) en EtOAc (5 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró y el disolvente se eliminó al vacío para producir un residuo de color pardo. El residuo se disolvió de nuevo en DMF (15 ml) y se añadió a una suspensión de Pd al 10 %/C (55 mg) en DMF (5 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una capa de celite en lavado con EtOAc (100 ml). La eliminación del disolvente a presión reducida produjo un aceite viscoso de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-15 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I53) (84,3 mg, 77 %) en forma de un aceite viscoso amarillo pálido; 1H RMN (400 Mhz, CDCh) 5 8,54 (s, 1H), 7,59 - 7,54 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,33 - 7,30 (m, 1H), 7,25-7,17 (m, 5H), 4,25 (s, 2H), 4,11 (c, J = 7,1 Hz, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,23 -3,02 (m, 4H), 2,81 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,64 (tt, J = 12,0, 3,4 Hz, 1H), 1,83 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 1,67 - 1,59 (m, 2H), 1,50 -
1,48 (d, J = 7,0 Hz, 3H; s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 7,15 min; m/z 635 [M+Na]+, 613 [M+H]+, 557 [M-tButil+2H]+.
(e) 2-(2-(2-(2-((4-( 1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)propanoato de litio (I54)
Se añadió UOH.H2O (17,3 mg, 0,413 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(1-metoxi-1-oxopropan-2-il)fenetil)-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I53) (0,084 g, 0,137 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y metanol (1 ml). La mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml) y NaHCO3 ac. sat. (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (1 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I54) (86 mg) en forma de un aceite viscoso amarillo pálido.
(f) 4-(4-((4-(2-(1-amino-1-oxopropan-2-il)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I55)
Se añadieron 1-hidroxibenzotriazol (21,1 mg, 0,156 mmol), EDCl (30,0 mg, 0,156 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (54,5 pl, 0,313 mmol) a una solución de 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)propanoato de litio (I54) (0,086 g, 0,142 mmol) en ThF seco (6 ml) y dMf seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió en una porción carbonato de amonio (54,6 mg, 0,569 mmol) a la mezcla de reacción agitada después de 10 minutos. La reacción se dejó agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (50 ml) y después se lavó con NaHCO3 saturado (50 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un sólido de color amarillo pálido. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-85 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I55) (65,2 mg, 77 %) en forma de un sólido oleoso de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,54 (s, 1H), 7,51 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,47 (s, 1H), 7,40 -7,36 (m, 1H), 7,30-7,17 (m, picos ocultos por CDCla), 5,37 (s, 1H), 5,20 (s, 1H), 4,25 (s a, 2H), 4,01 (c, J = 7,1 Hz, 1H), 3,17 - 3,02 (m, 4H), 2,80 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 2,64 (tt, J = 12,3, 3,6 Hz, 1H), 1,83 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,67-1,59 (m, picos ocultos por pico de agua), 1,56 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,49 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,60 min; m/z 620 [M+Na]+, 598 [M+H]+, 542 [M- tButil+2H]+, 498 [M-Boc+2H]+.
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(g) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)propanamida (12)
Se añadió ácido trifluoroacético (0,417 ml, 5,46 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(1-amino-1-oxopropan-2- il)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I55) (65,2 mg, 0,109 mmol) en DCM seco (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre EtOAc (20 ml) y NaOH 2 M (20 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un sólido de color amarillo pálido que se disolvió en EtOAc (2 ml) al que se le añadió ciclohexano (10 ml). El precipitado resultante se recogió por filtración para proporcionar el compuesto del título (12) (25 mg, 47 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,14 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,68 - 7,65 (m, 2H), 7,42 - 7,34 (m, 1H), 7,26 - 7,12 (m, 6H), 6,87 (s, 1H), 3,86 (c, J = 7,0 Hz, 1H), 3,44 - 3,18 (m, picos ocultos por pico de agua), 3,14 - 2,95 (m, 5H), 2,64 - 2,46 (m, picos ocultos por DMSO), 1,68 (d, J = 13,0 Hz, 2H),
1,49 (cd, J = 12,1,2,4 Hz, 2H), 1,31 (d, J = 7,0 Hz, 3H). Método LCMS C; tr 4,91 min; m/z 498 [M+H]+.
Ejemplo 13: 2-(2-(2-(2-((4-(4-Acetilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida
(13)
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Se disolvió 2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil) acetamida (1) (0,020 g, 0,041 mmol) en DCM seco (2 ml), THF seco (1 ml) y DMF seca (1 ml) y después se añadió trietilamina (0,012 ml, 0,083 mmol) seguido de anhídrido acético (0,008 ml, 0,083 mmol). Después, la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas, los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (15 ml) y NaHCO3 ac. sat. (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (10 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml), agua (10 ml) y salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido que se recogió en DCM (~ 10 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces después de lo cual la muestra se secó adicionalmente a alto vacío para dar el compuesto del título (13) (0,019 g, rendimiento del 87 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,01 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,63-7,56 (m, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,26 - 7,13 (m, 4H), 6,98 - 6,90 (m, 3H), 3,61 - 3,54 (m, 4H), 3,50 (s, 2H), 3,13 - 2,95 (m, 8H), 2,04 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,62 min; m/z 527,2 [M+H]+.
Ejemplo 14: W-Metil-2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida
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(a) 4-(4-((4-(2-(2-(metilamino)-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I56)
Se disolvió 2-(2-(2-(2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetato de litio (I7) (0,130 g, 0,220 mmol) en THF seco (7 ml) y DMF seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1 -hidroxibenzotriazol (0,036 g, 0,26 mmol) y EDCI (0,051 g, 0,26 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,153 ml, 0,879 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción clorhidrato de metilamina (0,059 g, 0,88 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 60 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (100 ml) y NaHCO3 ac. sat. (80 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml), las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo pálido. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-60 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I56) (0,091 g, rendimiento del 69 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 mHz, d6-DMSO) 5 10,00 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,93 -
7,86 (m, 1H), 7,63 - 7,56 (m, 2H), 7,24 - 7,12 (m, 4H), 6,96 - 6,89 (m, 2H), 3,54 - 3,42 (m, 6H), 3,14-2,93 (m, 8H), 2,56 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,27 min; m/z 599,3 [M+H]+.
(b) N-Metil-2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (14)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(2-(metilamino)-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1- carboxilato de terc-butilo (I56) (0,087 g, 0,15 mmol) en DCM (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadió ácido trifluoroacético (0,222 ml, 2,906 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (70 ml) y NaOH ac. 2 M (70 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 70 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido que se recogió en DCM (~ 10 ml) y metanol (~ 1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces después de lo cual la muestra se secó adicionalmente a alto vacío para dar el compuesto del título (14) (0,068 g, rendimiento del 94 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, d6- DMSO) 5 9,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,93 - 7,85 (m, 1H), 7,60 - 7,53 (m, 2H), 7,23 - 7,12 (m, 4H), 6,91 - 6,86 (m, 2H),
3,50 (s, 2H), 3,14 - 3,06 (m, 2H), 3,02 - 2,93 (m, 6H), 2,87 - 2,80 (m, 4H), 2,56 (d, J = 4,6 Hz, 3H). Método de LCMS A: tr 4,37 min; m/z 499,6 [M+H]+.
Ejemplo 15: N-Metil-2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida
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(a) Ácido 2-yodo-6-metilbenzoico (I57)
A una solución de ácido o-toluico (2,00 g, 14,7 mmol) en DMF seca (60 ml) en una atmósfera de nitrógeno se le añadió W-yodosuccinimida (3,64 g, 16,2 mmol) seguido de Pd(OAc)2 (0,330 g, 1,47 mmol). La mezcla de reacción resultante se calentó a 100 °C y se agitó durante 17 horas. Después de la refrigeración a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con agua (100 ml) y EtOAc (150 ml), las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (57) (3,56 g, rendimiento del 92 %) en forma de un sólido oleoso de color pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 7,69 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,02 (t, J= 7,8 Hz, 1H), 2,44 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,36 min.
(b) 2-yodo-6-metilbenzoato de metilo (I58)
Una solución de ácido 2-yodo-6-metilbenzoico (I57) (2,50 g, 9,54 mmol) en DCM (30 ml) y metanol (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota trimetilsilildiazometano (2,0 M en éter dietílico, 9,54 ml, 19,1 mmol). La reacción se agitó a 0 °C durante 45 minutos y después se interrumpió con HCI ac. 2 M (50 ml). Se añadió DCM (150 ml) a la reacción interrumpida y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con DCM (100 ml), los productos orgánicos se combinaron y se lavaron con NaHCO3 ac. sat. (100 ml), agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un aceite de color amarillo. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage lsolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-20 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I58) (2,00 g, rendimiento del 76 %) en forma de un aceite incoloro; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 7,65 (ddd, J = 7,9, 1,0, 0,5 Hz, 1H), 7,19 - 7,15 (m, 1H), 6,99 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,08 min; m/z 277,0 [M+H]+.
(c) 7-Yodoisoindolin-1-ona (I59)
Se agitaron 2-yodo-6-metilbenzoato de metilo (I58) (2,00 g, 7,245 mmol) y NBS (1,418 g, 7,969 mmol) en clorobenceno (50 ml) y se añadió peróxido de benzoílo (75 % p/p, 0,234 g, 0,724 mmol). La reacción se agitó a 90 °C durante 18 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y el precipitado se lavó con ciclohexano (4 x 10 ml). Los filtrados combinados se evaporaron, y el aceite de color pardo resultante se diluyó con THF (50 ml). Se añadió una solución acuosa de amoniaco (20 ml), y la mezcla se agitó vigorosamente durante 17 horas. La mezcla
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se diluyó con agua (20 ml) y el THF se eliminó al vacío. Se añadió DCM (150 ml), las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4) y se filtraron. Se añadió gel de sílice y los volátiles se eliminaron al vacío para dar el material en bruto absorbido sobre gel de sílice. El material se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-20 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I59) (0,757 g, rendimiento del 40 %) en forma de un sólido de color beige; 1H RMN (400 MHz, CDClj) 5 7,93 (dd, J = 7,8, 0,7 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 7,5, 0,8 Hz, 1H), 7,26 - 7,21 (m, 1H), 7,10 (s a, 1H), 4,37 (d, J = 0,6 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 5,06 min; m/z 260,0 [M+H]+.
(d) 7-((Trimetilsilil)etinil)isoindolin-1-ona (I60)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 7-yodoisoindolin-1-ona (I59) (0,233 g, 0,899 mmol) en DMF seca (6 ml) se le añadieron trietilamina (0,501 ml, 3,598 mmol) seguido de trifenilfosfina (0,035 g, 0,14 mmol), trans- diclorobis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,063 g, 0,090 mmol), CuI (0,026 g, 0,14 mmol) y finalmente (trimetilsilil)acetileno (0,292 ml, 1,63 mmol). Después, la mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 100 °C durante 30 y después durante 10 minutos. La mezcla de reacción se concentró al vacío, después se absorbió sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-46 % en diclorometano) para dar el compuesto del título (I60) (0,120 g, rendimiento del 49 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 8,47 (s, 1H), 7,60 - 7,51 (m, 2H), 7,49 (dd, J = 6,7, 2,0 Hz, 1H), 4,32 (s, 2H), 1,03 (t, J = 7,9 Hz, 9H), 0,66 (c, J = 7,9 Hz, 6H). Métodos de LCMS C: tr 6,44 min; m/z 272,2 [M+H]+.
(e) 7-Etinilisoindolin-1-ona (I61)
A una solución de 7-((trimetilsilil)etinil)isoindolin-1-ona (I60) (0,172 g, 0,634 mmol) en THF seco (8 ml) en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota TBAF (1,0 M en THF, 0,697 ml, 0,697 mmol) a 0 °C. La solución se agitó a esta temperatura durante 1,5 horas y después se inactivó mediante la adición de agua (2 ml). La mezcla de reacción se concentró al vacío y se diluyó con DCM (100 ml) y NaHCO3 ac. sat. (70 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (70 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color beige. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-80 % en DCM) para dar el compuesto del título (I61) (0,076 g, rendimiento del 76 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 8,59 (s, 1H), 7,61 - 7,50 (m, 3H), 4,39 (s, 1H), 4,33 (s, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,56 min, m/z 158,1 [M+H]+
(f) 4-(4-((4-((3-oxoisoindolin-4-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
(162)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 7-etinilisoindolin-1-ona (I61) (0,074 g, 0,47 mmol) y 4-(4-((4-cloro-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I3) (0180 g, 0,393 mmol), en DMF seca (7 ml) se le añadieron trietilamina (0,219 ml, 1,57 mmol) seguido de trifenilfosfina (0,015 g, 0,059 mmol), trans- diclorobis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,028 g, 0,039 mmol) y CuI (0,011 g, 0,059 mmol). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró a sequedad al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-5 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I62) (0,151 g, rendimiento del 66 %) en forma de una goma de color naranja; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,32 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,75 - 7,67 (m, 2H), 7,67 - 7,64 (m, 1H), 7,60-7,56 (m, 2H).), 6,95 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 4,40 (s, 2H), 3,51 - 3,42 (m, 4H), 3,11 - 3,00 (m, 4H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,23 min, m/z 579,2 [M+H]+.
(g) 4-(4-((4-(2-(3-oxoisoindolin-4-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo
(163)
Se disolvió 4-(4-((4-((3-oxoisoindolin-4-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino) fenil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I62) (0,149 g, 0,258 mmol) en DMF seca (6 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió catalizador de Pearlman al 20 % (0,090 g) en EtOAc (6 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas a temperatura ambiente. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (5 x 10 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar un sólido de color amarillo que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-5 % en EtOAc) para dar el compuesto del título (I63) (0,084 g, rendimiento del 56 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 9,98 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 2H), 7,44 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,17 (d a, J = 6,0 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,31 (s, 2H), 3,56 (t, J =
7,6 Hz, 2H), 3,51 - 3,41 (m, 4H), 3,12 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 3,08 - 2,98 (m, 4H), 1,42 (s, 9H). Método de LCMS A: tr
5,86 min; m/z 583,5 [M+H]+.
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(h) 7-(2-(2-((4-(Piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)isoindolin-1-ona (15)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(3-oxoisoindolin-4-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino) fenil) piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (I63) (0,080 g, 0,137 mmol) en DCM (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (0,210 ml, 2,75 mmol) a la solución y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y después a 35 °C durante 30 minutos más. Se añadió más cantidad de ácido trifluoroacético (0,100 ml) y la reacción se agitó adicionalmente a 35 °C durante 30 minutos más. Los volátiles se eliminaron al vacío y después se añadieron EtOAc (70 ml) y NaOH ac. 2 M (70 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2x70 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido oleoso que se recogió en DCM (~10 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió dos veces después de lo cual la muestra se secó adicionalmente a alto vacío para dar el compuesto del título (I5) (0,050 g, rendimiento del 75 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 9,94 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,59-7,52 (m, 2H), 7,47-7,36 (m, 2H), 7,23 - 7,11 (m, 1H),
6,87 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,31 (s, 2H), 3,56 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 3,11 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,01 -2,95 (m, 4H), 2,86 - 2,79 (m, 4H). Método de LCMS A; tr 4,40 min; m/z 483,8 [M+H]+.
Ejemplo 16: 2-(2-(2-(2-((4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida
(16)
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Se añadió formaldehído (37 % en H2O; 15,6 pl, 0,210 mmol) a una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(piperidin-4- il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (11) (25 mg, 0,053 mmol) en metanol anhidro (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Después, se añadió en una porción triacetoxiborohidruro sódico (0,111 g, 0,525 mmol) a la mezcla de reacción. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (25 ml) y NaHCO3 ac. saturado (25 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 25 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (25 ml) y salmuera (25 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para producir un sólido de color blanco. El sólido se suspendió en DCM (2 ml) y ciclohexano (10 ml) después se filtró para proporcionar el compuesto del título (16) (19 mg, 73 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,14 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,70 - 7,61 (m, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,27 - 7,12 (m, 6H), 6,93 (s, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,14 - 2,97 (m, 4H), 2,88 (d, J = 10,6 Hz, 2H), 2,46 - 2,36 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 2,07 - 1,93 (m, 2H), 1,78 - 1,58 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,86 min; m/z 498 [M+H]+.
Ejemplo 17: 2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida
(17)
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(a) 2-(2-((2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etinil)fenil)acetato de metilo (I64)
Se pusieron 4-yodo-2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidina (I14) (2,00 g, 6,24 mmol), PdCl2(PPh3)2 (438 mg, 625 pmol), CuI (1l9 mg, 625 pmol) y trifenilfosfina (164 mg, 625 pmol) en un vial de reacción para microondas secado a la estufa en una atmósfera de nitrógeno. Se añadieron 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4) (1,31 g, 7,49 mmol), THF (20 ml) y TEA (10 ml) y la mezcla resultante se agitó a 100 °C por irradiación de microondas durante 10 minutos. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y después el residuo se adsorbió sobre sílice de DCM. El material pre-adsorbido se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo al 0-25 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I64) (1,571 g, 69 %) en forma de un sólido de color naranja; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,71 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 7,7, 1,1 Hz, 1H), 7,50 - 7,29 (m, 3H), 3,93 (s, 2H), 3,71 (d, J = 3,4 Hz, 3H), 2,62 (d, J = 3,4 Hz, 3H).
(b) 2-(2-((2-(metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etinil)fenil)acetato de metilo (I65)
Se disolvió 2-(2-((2-(metiltio)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etinil)fenil)acetato de metilo (I64) (3,14 g, 6,57 mmol) en DCM (150 ml) y la solución resultante se enfrió a 0 °C. Se añadió mCPBA (70 %; 4,65 g, 18,9 mmol) y después la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, en la que, la agitación continuó durante una noche. La mezcla en bruto se lavó con NaHCÜ3 al 10 % (200 ml) y las capas se separaron. Los extractos orgánicos se secaron (MgSO4) después se evaporaron a presión reducida para dar un sólido de color amarillo claro. El sólido se adsorbió sobre sílice y después se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (acetato de etilo al 0-50 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I65) (2,876 g, 84 %) en forma de un sólido de color amarillo; H RMN (400 MHz, CDCb) 5 9,13 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,73 (dd, J= 7,6, 0,9 Hz, 1H), 7,54-7,46 (m, 1H), 7,44 - 7,32 (m, 2H), 3,94 (s, 2H), 3,77 - 3,67 (m, 3H), 3,43 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,90 min; m/z 421,0 [M+Na), 399,1 (M+1),
367,0 (M-OMe), 339,1 (M-COOMe).
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(c) 2-(2-(2-(2-(metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (I66)
Se recogió 2-(2-((2-(metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etinil)fenil)acetato de metilo (I65) (1,50 g, 3,76 mmol) en DMF (30 ml) y después se añadió Pd al 10 %/C (750 mg). La suspensión resultante se agitó en una atmósfera de H2 (1 atm) durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción en bruto se filtró a través de Celite, en lavado con MeOH. El filtrado se evaporó a presión reducida para dar un líquido de color amarillo que se adsorbió sobre sílice. El material de sílice adsorbido se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (0-100 % acetato de etilo/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I66) (1,38 g, 91 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 9,07 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,30 - 7,12 (m, 4H), 3,72 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,41 - 3,35 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,20 (dd, J = 9,6, 6,3 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 5,92 min; m/z 425,1 (M+Na),
403,1 (M+1), 401,1 (M-1), 371,1 (M-OMe), 343,1 (M-COOMe).
(d) 2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (I67)
Se disolvió 3-(4-Metilpiperizin-1-nil)anilina (36,0 mg, 186 pmol) en trifluoroetanol (1 ml), después se añadió 2-(2-(2- (2-(metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (I66) (50 mg, 124 pmol) seguido de ácido trifluoroacético (48 pl). La mezcla resultante se agitó a 100 °C por irradiación de microondas durante 10 minutos. La mezcla resultante se adsorbió sobre sílice y después se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (MeOH al 0-10 %/DCM) para dar el compuesto del título (I67) en forma de un líquido de color amarillo (69 mg). Métodos de LCMS C: tr 5,10 min; m/z 514,3 (M+1). Este procedimiento se repitió y los productos de reacción se combinaron para determinar la progresión en la siguiente etapa sintética.
(e) Ácido 2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acético (I68)
Se disolvió 2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-y|)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (I67) (150 mg, 292 pmol) en THF (10 ml), y después se añadió UOH.H2O (36,7 mg, 876 pmol). Se añadió agua (2 ml) y después MeOH (1 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y después los volátiles se eliminaron por evaporación a presión reducida. El residuo se disolvió en MeOH (3 ml) y después se acidificó con HCI concentrado a pH 2-3. Los volátiles se evaporaron a presión reducida para dar un residuo de color naranja. El residuo se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (MeOH al 0-20 %/DCM) para dar el compuesto del título (I68) (120 mg, 82 %) en forma de un sólido cristalino de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 11,04 (s a, 1H), 10,12 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,24-7,18 (m, 5H), 6,72 (m, 1H), 3,77-3,74 (m, parcialmente oculto por la señal de agua residual), 3,44 (m, 3H), 3,17-3,03 (m, 8H), 2,78 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,92 min; m/z 500,3 (M+1), 498,2 (M-1), 454,3 (M-COOH).
(f) 2-(2-(2-(2-((3-(4-Metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (17)
Se disolvió ácido 2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acético (I68) (75,0 mg, 169 pmol) en dMf (1 ml) y después se añadieron HATU (129 mg, 339 pmol), DIpEa (57 ul, 339 pmol) y cloruro de amonio (181 mg, 3,39 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo y se lavó con NaHCO3 al 10 %, las capas se separaron y la capa orgánica se secó (MgSO4) y después se evaporó a presión reducida para dar un sólido de color crema. El sólido de color crema se adsorbió sobre sílice y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (MeOH al 0-10 %/DCM) para dar el compuesto del título (17) (23,3 mg, 28 %) en forma de un sólido de color crema; 1H RMN (400 MHz, CD3CN) 5 8,57 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,30-7,16 (m, 5H), 7,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,71 (dd, J = 8,2, 1,9 Hz, 1H), 3,61 (s, 2H), 3,27 (t, J = 4,9 Hz, 4H), 3,19 - 3,03 (m, 4H), 2,92 (s a, 4H), 2,91 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,43 min; m/z 499,7.
Ejemplo 18: N-Metil-2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetamida (18)
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Se disolvió ácido 2-(2-(2-(2-((3-(4-metilpiperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acético (I68) (75,0 mg, 169 pmol) en dMf (1 ml) después se añadieron HATU (129 mg, 339 pmol), DIPEA (57 pl, 339 pmol) y metilamina (8,0 M en etanol; 200 pl). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche y después los volátiles se evaporaron a presión reducida. El residuo se diluyó con acetato de etilo y se lavó con
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NaHCÜ3 al 10 %, las capas se separaron y la capa orgánica se secó (MgSÜ4) y después se evaporó a presión reducida para dar un sólido de color crema. El sólido de color crema se adsorbió sobre sílice y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (MeÜH al 0-10 %/DCM) para dar el compuesto del título (18) (9,0 mg, 10 %) en forma de un sólido; 1H RMN (400 MHz, CD3CN) 5 8,56 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 8,36 - 8,28 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,20 (ddd, J = 5,6, 4,4, 1,9 Hz, 6H), 6,71 - 6,65 (m, 1H), 6,33 - 6,23 (m, 1H), 3,56 (s, 2H), 3,22 - 3,15 (m, 4H), 3,10 (s, 2H),
3,07 (s, 2H), 2,60 (d, J = 4,7 Hz, 3H), 2,49 - 2,43 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,86 min; m/z 513,3.
Ejemplo 19: 2-Metil-5-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzamida (19)
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(a) 5-Bromo-2-metilbenzamida (I69)
A una mezcla de ácido 5-bromo-2-metilbenzoico (0,538 g, 2,50 mmol) y HATU (1,289 g, 3,390 mmol) en DMF (8 ml) se le añadió DIPEA (0,800 ml, 4,59 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos antes de la adición de NH4OH (0,50 ml) y después se dejó en agitación durante 16 horas a temperatura ambiente. La mezcla se vertió en agua y se enfrió a 0 °C durante 20 minutos antes de recoger el precipitado resultante a través de filtración al vacío para dar el compuesto del título (I69) (0,292 g, 55 %); 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 7,58 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,45 (dd, J = 8,2,
2,1 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,68 (s a, 2H), 2,44 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,89 min; m/z 214, 216 [M+H]+.
(b) 2-Metil-5-((trimetilsilil)etinil)benzamida (I70)
A una mezcla de 5-bromo-2-metilbenzamida (I69) (0,292 g, 1,36 mmol), PdCh(PPh3)2 (0,049 g, 0,070 mmol), trifenilfosfina (0,054 g, 0,21 mmol) y yoduro de cobre (0,036 g, 0,19 mmol) en DMF (3 ml) se le añadieron trietilamina (0,570 ml, 4,09 mmol) y trimetilsililacetileno (0,210 ml, 1,49 mmol) y la mezcla resultante se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el
compuesto del título (I70) (0,190 g, 60 %); 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 7,80 (s, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,24 (d, J =
7,9 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 0,22 (s, 9H).
(c) 5-Etinil-2-metilbenzamida (I71)
A una solución de 2-metil-5-((trimetilsilil)etinil)benzamida (I70) (0,190 g, 0,819 mmol) en THF (4 ml) a 0 °C se le añadió una solución 1,0 M de TBAF en THF (0,5 ml). Después, la mezcla se agitó en atmósfera de N2 a 0 °C durante 10 minutos y después a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y después se diluyó con agua. El precipitado resultante se recogió por filtración al vacío para dar el
compuesto del título (I71) (0,087 g, 67 %); 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 7,80 (s, 1H), 7,41 (m, 3H), 7,25 (d, J =
7,7 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 2,36 (s, 3H).
(d) 4-(4-((4-((3-carbamoil-4-metilfenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de terc-
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butilo (I72)
A una mezcla de 5-etinil-2-metilbenzamida (I71) (0,041 g, 0,25 mmol), 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2- il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (I3) (0,105 g, 0,230 mmol), PdCI2(PPh3)2 (0,011 g, 0,016 mmol), trifenilfosfina (0,010 g, 0,038 mmol) y yoduro de cobre (l) (0,010 g, 0,53 mmol) en dMf (2 ml) se le añadió trietilamina (0,091 ml, 0,65 mmol). Después, la mezcla se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 30 minutos. La mezcla resultante se concentró a presión reducida y después se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I72) (0,092 g, 69 %); 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,24 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,58 (m,4H), 7,39 (m, 1H), 6,96 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,46 (dd, J = 6,3, 3,3 Hz, 4H), 3,06 (m, 4H), 2,42 (s, 3H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,22 min; m/z 581,2 [M+H]+.
(e) 4-(4-((4-(3-earbamoil-4-metilfenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-earboxilato de tere-butilo (I73)
Una mezcla de 4-(4-((4-((3-carbamoil-4-metilfenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1- carboxilato de tere-butilo (I72) (0,092 g, 0,16 mmol) y Pd al 10 %/C (0,116 g) en DMF (5 ml) se agitó durante una noche en una atmósfera de H2. La mezcla se filtró a través de Celite y después se concentró a presión reducida. Después, el residuo se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) y el producto se trituró con metanol. El precipitado resultante se recogió por filtración al vacío para dar el compuesto del título (I73) (29,5 mg, 32 %); 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,00 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,55 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,16 (m, 2H), 6,94 (d, J - 9,1 Hz, 2H), 3,46 (m, 4H), 3,04 (m, 8H), 2,32 (s, 3H), 1,42 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,18 min; m/z 585,3 [M+H]+.
(f) 2-Metil-5-(2-(2-((4-(piperazin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzamida (19)
A 4-(4-((4-(3-carbamoil-4-metilfenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperazin-1-carboxilato de tere-butilo (I73) (0,029 g, 0,054 mmol) en DCM (2 ml) se le añadió TFA (0,100 ml, 1,36 mmol) y la mezcla se agitó durante una noche (16 horas) a temperatura ambiente. Después, la mezcla resultante se concentró a presión reducida y el residuo se recogió en EtOAc (10 ml). La suspensión orgánica resultante se lavó con NaOH acuoso al 10 % (10 ml) y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (15 ml) y después se concentraron a presión reducida. El residuo se recogió en DCM (4 ml) y TFA (0,200 ml) y se agitó durante una noche (16 horas). La mezcla resultante se concentró a presión reducida y después se diluyó con EtOAc (15 ml). La solución resultante se lavó con NaOH acuoso al 10 % (15 ml) y después la capa acuosa se extrajo con EtOAc (15 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (20 ml), después se secaron usando un cartucho de separación de fases antes de la concentración a presión reducida para dar el compuesto del título (19) (5,1 mg, 21 %); 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 9,96 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,53 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,16 (m, 2H), 6,90 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,01 (m, 8H), 2,83 (m, 4H), 2,32 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,76 min; m/z 485,1 [M+H]+.
Ejemplo 20: 2-(2-(2-(2-((4-(4-Aminopiperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (20)
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(a) (1-(4-nitrofenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (I74)
Se pusieron piperidin-4-ilcarbamato de terc-butilo (1,200 g, 5,992 mmol) y 4-fluoronitrobenceno (0,705 g, 4,99 mmol) en un vial para microondas de 30 ml y después se añadieron acetonitrilo (20 ml) seguido de diisopropiletilamina (1,778 ml, 9,986 mmol). La reacción se calentó en irradiación de microondas a 150 °C durante 15 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (200 ml) y HCI ac. 2 M (150 ml), las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml), los productos orgánicos se combinaron y se lavaron con salmuera (150 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (I74) (1,040 g, 65 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 8,06 - 7,99 (m, 2H), 7,03 - 6,97 (m, 2H), 6,88 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,01 - 3,93 (m, 2H), 3,62 - 3,47 (m, 1H), 3,13 - 3,02 (m, 2H), 1,85-1,74 (m, 2H), 1,44-1,30 (m, 11H).
(b) (1-(4-aminofenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (I75)
Se disolvió (1-(4-nitrofenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (I74) (1,038 g, 3,230 mmol) en DMF seca (15 ml), EtOAc (15 ml) y EtOH absoluto (15 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió Pd al 10 %/C (0,200 g) en EtOAc (5 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. El catalizador se retiró por filtración a través de celite, que se lavó con EtOAc (5 x10 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar un sólido de color rosa que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo al 0-80 % en benzina de petróleo a 4060 °C para dar el compuesto del título (I75) (0,730 g, 78 %) en forma de un sólido de color púrpura-pardo;
1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 6,81 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,64 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 4,55 - 4,41 (m, 1H), 3,64-3,32 (m, 5H), 2,72 (t,J = 11,0 Hz, 2H), 2,08-1,98 (m, 2H), 1,56 (ddd, J - 23,7, 11,3, 3,9 Hz, 2H), 1,45 (s, 9H). Métodos de LCMS C:
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tr 0,38 min; m/z 292,0 [M+H]+.
(c) (1-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (I76)
Se agitó 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,551 g, 2,54 mmol) en una mezcla 1:1 de t-BuOH:1,2-dicloroetano (30 ml) a 0 °C. Se añadió cuidadosamente una solución 1,0 M de ZnCh en éter dietílico (2,903 ml, 2,903 mmol) durante 10 minutos, después de la reacción se dejó en agitación a 0 °C durante 30 minutos. Se añadió gota a gota una solución de (1-(4-aminofenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (I75) (0,705 g, 2,42 mmol) en 1:1 l-BuOH:1,2- dicloroetano (15 ml) durante 15 minutos a 0 °C, se añadió gota a gota una solución de NEt3 (0,405 ml, 2,903 mmol) en 1:1 t-BuOH:1,2-dicloroetano (15 ml) durante 15 minutos y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Los disolventes orgánicos se evaporaron al vacío y el sólido oleoso en bruto se suspendió en agua (200 ml), la suspensión se sometió a sonicación durante 30 minutos y el producto se separó por filtración, el sólido se lavó con agua (10 x 20 ml) y se secó a alto vacío. El material se purificó adicionalmente por cromatografía sobre gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C para dar el compuesto del título (I76) (0,730 g, 64 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,41 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,46 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 6,92 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,84 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 3,60 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 2,69 (t, J = 10,9 Hz, 2H), 1,78 (d, J = 10,9 Hz, 2H), 1,54-1,34 (m, 11H). Métodos de LCMS C: tr 6,36 min; m/z 474,1 [M+H]+.
(d) 2-(2-((2-((4-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4- il)etinil)fenil)acetato de metilo (I77)
Una suspensión de (1-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (I76) (550 mg, 1,17 mmol), Cul (15 mg, 0,12 mmol), trifenilfosfina (31 mg, 0,117 mmol) y trietilamina (487 pl, 3,50 mmol) en DMF (6 ml) se sometió a sonicación durante 5 minutos en un vial para microondas de 10 ml, a éste se le añadieron PdCI2(PPh3)2 (54,0 mg, 0,077 mmol) y 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4) (305 mg, 1,75 mmol) y la reacción se calentó a 120 °C durante 20 minutos por irradiación de microondas. Después de la refrigeración, la mezcla de reacción se sometió a cromatografía sobre gel de sílice usando elución en gradiente (acetato de etilo al 0100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir una mezcla del compuesto del título (I77) y se homo-acopló acetileno que se usó sin purificación adicional.
(e) 2-(2-(2-(2-((4-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4- il)etil)fenil)acetato de metilo (I78)
A una solución de 2-(2-((2-((4-(4-((terc-butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4- il)etinil)fenil)acetato de metilo en bruto (I77) en DMF (10 ml) y trietilamina (1 ml) se le añadió Pd(OH)2 al 20 % (0,92 g) y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche en una atmósfera de hidrógeno. La mezcla de reacción se filtró a través de celite y la torta de filtro se lavó con EtOAc (3 x 75 ml). Los filtrados combinados se evaporaron a sequedad para dar un sólido de color pardo, que se suspendió en MeOH (25 ml) y después se sometió a sonicación. La suspensión resultante se filtró para dar el compuesto del título (I78) (211 mg, 29 %) en forma de un sólido de color castaño; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 9,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,55 (d, J =
9,0 Hz, 2H), 7,29 - 7,15 (m, 4H), 6,96 - 6,78 (m, 3H), 3,76 (s, 2H), 3,64 - 3,49 (m, 5H), 3,38 (s, 2H), 3,11 - 3,00 (m, 2H), 3,00 - 2,91 (m, 2H), 2,68 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 1,80 (d, J = 10,7 Hz, 2H), 1,48 (ddd, J = 15,0, 12,2, 3,5 Hz, 2H), 1,39 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,87 min; m/z 614 [M+H]+.
(f) (1-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-4-il)carbamato de terc- butilo (I79)
Se añadió hidróxido de litio mono hidrato (43,0 mg, 1,03 mmol) a una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(4-((terc- butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (I78) (211 mg, 0,344 mmol) en THF (10 ml), MeOH (1,0 ml) y agua (1,5 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Los extractos orgánicos se eliminaron al vacío y después se añadió una solución acuosa 2 M de NaOH (100 ml). La solución resultante se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml), después los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4) y el disolvente se eliminó al vacío para producir un sólido de color blanco. El sólido se disolvió en THF seco (10 ml) y DMF seca (2 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A esta solución se le añadieron 1-hidroxibenzotriazol (72 mg, 0,53 mmol), EDCl (101 g, 0,529 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (246 pl, 1,41 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (203 mg, 2,12 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se recogió en EtOAc (100 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (70 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (2 x 100 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4) y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo que se disolvió en una pequeña cantidad de acetona y precipitó con benzina de petróleo a 40-60 °C para producir el compuesto del título (79) (138 mg, 65 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 mHz, d6-DMSO) 5 9,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,27 - 7,12 (m, 4H), 6,96 - 6,81 (m, 4H), 3,58 (d, J =
12,7 Hz, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,15-2,93 (m, J = 15,2, 6,3 Hz, 4H), 2,67 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 1,79 (d, J = 11,4 Hz, 2H), 1,55-1,42 (m, 2H), 1,39 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,30 min; m/z 599 [M+H]+.
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(g) 2-(2-(2-(2-((4-(4-Aminopiperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (20)
Se disolvió (1-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-4-il)carbamato de terc-butilo (179) (138 mg, 0,231 mmol) en diclorometano seco (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (1,0 ml, 13 mmol) a la solución y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (50 ml) y NaHCO3 ac. sat. (50 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (50 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se secaron (MgSO4) y se concentraron al vacío para dar un sólido de color amarillo que se recogió en acetona (~ 2 ml) y precipitó con benzina de petróleo a 40-60 °C para producir el compuesto del título (20) (47 mg, 41 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, dg-DMSO) 5 9,96 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,44 (s, 1H) 7,32 - 7,10 (m, 4H), 7,03 - 6,84 (m, 3H), 3,70 - 3,53 (m, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,18 - 2,91 (m, 4H), 2,85 - 2,60 (m, J = 34,4, 8,4 Hz, 3H), 1,84 - 1,70 (m, 2H), 1,69 - 1,54 (m, J = 15,3, 6,6 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,64 min; m/z 499 [M+H]+.
Ejemplo 21: 2-(2-(2-(2-((1,2,3,4-Tetrahidroisoquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetamida (21)
imagen78
(a) 6-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroisoquinolina-2(1H)-carboxilato de terc-butilo (180)
Se cargaron 6-amino-3,4-dihidroisoquinolina-2(1H)-carboxilato de terc-butilo (0,500 g, 2,01 mmol), 2-(2-(2-(2- (metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (166) (0,675 g, 1,68 mmol), trifluoroetanol (3 ml), y TFA (0,3 ml) en un tubo para microondas, se sometieron a sonicación durante dos minutos, después se calentaron por irradiación de microondas a 100 °C durante 20 minutos. La mezcla enfriada se concentró, se co-evaporó con tolueno (3x 20 ml) y se cargó sobre un cartucho de 10 g SCX en metanol. El cartucho se eluyó con metanol (200 ml), y después con metilamina metanólica al 1 % (200 ml). El eluyente de metilamina metanólica se concentró para dar un aceite de color pardo (0,850 g). El aceite se disolvió en DCM (5 ml), y se añadió anhídrido Boc (549 mg, 2,52 mmol). La mezcla resultante se agitó en un burbujeador de aceite durante 18 horas, después se diluyó con
DCM (50 ml) y se lavó con agua (50 ml). La capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 50 ml), y las fases de DCM
combinadas se secaron (filtro de separación de fases) y se evaporaron. El análisis por cromatografía (Isolera, cartucho de sílice de 40 g, acetato de etilo al 0-50 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) dio el compuesto del título (180) (520 mg, 54 %) en forma de un jarabe amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,54 (s, 1H), 7,45 (s, 2H), 7,38 (s, 1H),
7,28 - 7,18 (m, se superpone con CDCla), 7,10 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,56 (s, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,70 - 3,62 (m, 5H),
3,17 - 3,03 (m, 4H), 2,85 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 1,50 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,93 min; m/z 571,1 [M+H]+, m/z
515,0 [M+tBu+2H]+.
(b) 2-(2-(2-(2-((2-(terc-butoxicarbonil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4- il)etil)fenil)acetato de litio (181)
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Se disolvió 6-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroisoquinolina-2(1H)- carboxilato de terc-butilo (I80) (520 mg, 0,91 mmol) en THF (20 ml) y se añadió una solución de hidróxido de litio hidrato (76 mg. 1,8 mmol) en agua (5 ml). Después de 18 horas, el tHf se eliminó a presión reducida, la mezcla se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (I81) (414 mg, rendimiento del 81 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, Ó6-DMSO) 5 10,36 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,59 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,20-7,02 (m, 5H), 4,45 (s, 2H), 3,54 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,17 (s, 2H), 3,14-2,98 (m, 4H), 2,76 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 1,43 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,51 min; m/z 557,1 [M-Li+2H]+,
501,1 [M-tBu-Li+3H]+, 457,1 [M-Li-Boc+3H]+; m/z 555,1 [M-Li]-.
(c) 6-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroisoquinolina-2( 1 H)-carboxilato de terc-butilo (I82)
Se disolvió 2-(2-(2-(2-((2-(terc-butoxicarbonil)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4- il)etil)fenil)acetato de litio (I81) (205 mg, 0,37 mmol) en DMF (3 ml) y se añadió HATU (154 mg, 0,41 mmol). Después de agitar durante 3 minutos, se añadieron carbonato de amonio (212 mg, 2,20 mmol) y DIPEA (0,26 ml, 1,5 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla resultante se añadió a agua (50 ml) y bicarbonato sódico saturado (10 ml) y después se extrajo con acetato de etilo (3x 50 ml). Los extractos orgánicos se lavaron con salmuera (2 x 50 ml), se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron a sequedad. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de 12 g de sílice, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) y el producto se trituró con éter dietílico para dar el compuesto del título (I82) (138 mg, 67 %) en forma de una espuma de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,53 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,43 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,29 - 7,26 (m, se superpone con CHCI3), 7,10 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,36 (d, J = 14,4 Hz, 2H), 4,55 (s, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,65 (s, 2H), 3,15 - 3,04 (m, 4H), 2,85 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 1,50 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,36 min; m/z 556,1 [M+H]+, 500,0 [M-tBu+2H]+, 456,1 [M-Boc+2H]+; m/z 554,2 [M-H]-.
(d) 2-(2-(2-(2-((1,2,3,4-Tetrahidroisoquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (21)
Se agitaron 6-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)-3,4-dihidroisoquinolina-2(1H)- carboxilato de terc-butilo (I82) (136 mg, 0,245 mmol), DCM (10 ml) y TFA (1 ml) juntos a temperatura ambiente. Después de tres horas, la solución se concentró y el residuo se trató con hidróxido sódico 1 M (25 ml). La suspensión resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron y se evaporaron para dar el compuesto del título (21) (81,6 mg, rendimiento del 74 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,06 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,48 (dd, J = 8,3, 2,1 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,26-7,21 (m, 1H), 7,19 - 7,13 (m, 3H), 6,96 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 3,81 (s, 2H), 3,49 (s, 2H), 3,17 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 3,14 - 3,06 (m, 2H), 3,05 - 2,97 (m, 2H), 2,94 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,67 (t, J = 5,6 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr: 4,76 min; m/z 456,1 [M+H]+; m/z 454,1 [M-H]-.
Ejemplo 22: 2-(2-(2-(2-((4-(Morfolin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (22)
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(a) 2-(4-Nitrofenil)oxirano (I83)
Se agitó 2-bromo-1-(4-nitrofenil)etanona (1,9 g, 7,9 mmol) en metanol (30 ml) y la suspensión se enfrió en un baño de hielo. Se añadió en una porción borohidruro sódico (0,33 g, 8,7 mmol) y después de cinco minutos, el baño de hielo se retiró y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Después de tres horas, se añadió carbonato potásico (1,1 g, 7,9 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante a 16 horas más. El metanol se evaporó, se añadió agua (50 ml), y la mezcla se extrajo con DCM (3 x 100 ml). Las fases combinadas de DCM se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (I83) (1,296 g, rendimiento del 99 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CdCI3) 5 8,25 - 8,18 (m, 2H), 7,50-7,41 (m, 2H), 3,96 (dd, J = 4,1, 2,5 Hz, 1H), 3,23 (dd, J = 5,5, 4,1 Hz, 1H), 2,78 (dd, J = 5,5, 2,5 Hz, 1H). Métodos de LCMS C: tr 5,42 min.
(b) N-(2-Hidroxi-2-(4-nitrofenil)etil)-4-metilbencenosulfonamida (I84)
Se suspendieron tosilamida (0,69 g, 4,0 mmol), 2-(4-nitrofenil)oxirano (I83) (0,33 g, 2,0 mmol), cloruro de benciltrietilamonio (46 mg, 0,20 mmol) y carbonato potásico (28 mg, 0,20 mmol) en dioxano (1,0 ml) y la mezcla resultante se agitó a 90 °C. Después de cuatro horas, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en DCM (15 ml). La mezcla resultante se filtró y se evaporó. El residuo se sometió a cromatografía (Isolera, cartucho de 40 g de sílice, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I84) en forma de un sólido de color naranja (363 mg, rendimiento del 38 %); 1H rMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 8,19 - 8,13 (m, 2H), 7,64 - 7,59 (m, 2H), 7,57 - 7,52 (m, 2H), 7,34 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,27 (s, 1H), 5,82 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,71 (dd, J = 10,7, 6,0 Hz, 1H), 2,92 (td, J = 6,2, 1,7 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,55 min, m/z 335,0 [M-H]-.
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(c) 2-(4-Nitrofenil)-4-tosilmorfolina (I85)
Se sometió N-(2-Hidroxi-2-(4-nitrofenil)etil)-4-metilbencenosulfonamida (I84) (0,610 g, 1,34 mmol) a sonicación en DCM (20 ml) durante cinco minutos y se enfrió a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió una dispersión al 60 % de NaH (0,220 g, 5,44 mmol) y la mezcla se agitó durante cinco minutos antes de añadir trifluorometanosulfonato de (2-bromoetil)difenilsulfonio (1,21 g, 2,72 mmol). La mezcla se agitó durante 17 horas, permitiendo que el baño de refrigeración llegara a temperatura ambiente durante este tiempo. Se añadieron acetato de etilo (200 ml), cloruro de amonio saturado (80 ml) y agua (20 ml) y las capas se separaron. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 ml) y las fases combinadas de acetato de etilo con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (Isolera, cartucho de sílice de 40 g, acetato de etilo al 0-40 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I85) (433 mg, 88 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCls) 5 8,22 - 8,18 (m, 2H), 7,63 - 7,59 (m, 2H), 7,52 - 7,48 (m, 2H), 7,33 (dd, J = 8,5, 0,6 Hz, 2H), 4,71 (dd, J = 10,2, 2,6 Hz, 1H), 4,10 (ddd, J = 11,6, 3,4, 1,4 Hz, 1H), 3,87 (td, J = 11,6, 2,7 Hz, 1H), 3,82 -3,77 (m, 1H), 3,65 (ddt, J = 11,6, 2,8, 1,6 Hz, 1H), 2,51 (td, J = 11,6, 3,4 Hz, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,18 (dd, J = 11,5, 10,3 Hz, 1H). Métodos de LCMS C: tr 6,20 min; m/z 363,0 [M+H]+.
(d) 2-(4-Nitrofenil)morfolina (I86)
Una mezcla de 2-(4-Nitrofenil)-4-tosilmorfolina (I85) (430 mg, 1,19 mmol), fenol (670 mg, 7,12 mmol) y HBr al 33 %/AcOH (2,2 ml) se calentó en un tubo cerrado herméticamente (tubo para microondas, calentamiento convencional) a 75 °C durante veinte horas. La mezcla enfriada se concentró y el residuo se cargó sobre un cartucho de 10 g SCX en metanol. El cartucho se lavó con metanol (200 ml), y después se diluyó con metilamina metanólica al 1 % (100 ml). El eluyente de metilamina se evaporó para dar el compuesto del título (I86) (204 mg, 83 %) en forma de un aceite de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,27 - 8,18 (m, 2H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 4,63 (dd, J = 10,3,
2,5 Hz, 1H), 4,13 - 4,04 (m, 1H), 3,82 (td, J = 11,3, 3,1 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 12,3, 2,5 Hz, 1H), 3,06-2,92 (m, 2H), 2,74 (dd, J = 12,3, 10,3 Hz, 1H). Métodos de LCMS C: tr 1,49, 1,58 min; m/z 209,1 [M+H]+.
(e) 2-(4-nitrofenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (I87)
Se disolvió 2-(4-nitrofenil)morfolina (I86) (200 mg, 0,961 mmol) en DCM (5 ml) y después se añadieron DMAP (12 mg, 10 % en moles) y anhídrido Boc (0,265 ml, 1,15 mmol). Después de una hora, la mezcla se diluyó con DCM (20 ml), y se lavó con agua (20 ml). La fase acuosa se extrajo con DCM (2 x 20 ml), y los extractos combinados de DCM se secaron (frita hidrófoba) y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de 12 g de sílice, acetato de etilo al 0-40 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I87) (0,230 g, 78 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,26 - 8,19 (m, 2H), 7,60 - 7,53 (m, 2H), 4,53 (dd, J = 10,5, 2,6 Hz, 1H), 4,17 (s a, 1H), 4,05 (dd, J = 11,5, 2,4 Hz, 1H), 3,97 (s a, 1H), 3,70 (td, J = 11,7, 2,8 Hz, 1H), 3,06 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 2,84-2,67 (m, 1H), 1,49 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,23 min; m/z 209,1 [M-Boc+2H]+.
(f) 2-(4-aminofenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (I88)
Se calentaron 2-(4-nitrofenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (I87) (100 mg, 0,324 mmol), carbón activo (20 mg), cloruro de hierro (lll) hexahidrato (9 mg, 10 % en moles), metanol (1 ml) e hidrazina hidrato (162 mg, 1,62 mmol al 50 %) a reflujo juntos durante cinco horas. La mezcla se filtró a través de algodón, y el alcohol se lavó con DCM (5 ml). El filtrado se evaporó, y se disolvió de nuevo en etanol al 95 % (3 ml) y acetato de etilo (2 ml). Se añadió una solución de cloruro de amonio (173 mg. 3,24 mmol) en agua (1 ml), seguido de polvo de indio (153 mg, 1,30 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante cuatro horas y después se filtró. Los sólidos recogidos se lavaron con DCM (20 ml) y los filtrados combinados después se diluyeron con agua (10 ml) y bicarbonato sódico saturado (10 ml). La fase acuosa se lavó con DCM (2 x 25 ml), los extractos combinados de DCM se secaron (filtro de separación de fases) y se evaporaron. El residuo se disolvió en etanol al 95 % (3 ml), y se trató a reflujo con más cantidad de polvo de indio (153 mg, 1,30 mmol) y cloruro de amonio (173 mg. 3,24 mmol) en agua (1 ml). Después de tres horas, la mezcla se diluyó con agua (10 ml) y se filtró. Los sólidos recogidos se lavaron secuencialmente con acetato de etilo (25 ml) y bicarbonato sódico saturado (10 ml). La fase acuosa del filtrado se separó, y se lavó con acetato de etilo (2 x 25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 4060 °C) para dar el compuesto del título (I88) (51,4 mg, rendimiento del 57 %) en forma de un aceite de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 7,19-7,12 (m, 2H), 6,71 -6,63 (m, 2H), 4,33-4,25 (m, 1H), 4,03-3,85 (m, 3H), 3,73 - 3,60 (m, 3H), 3,02 (s, 1H), 2,84 (s, 1H). Métodos de LCMS C: tr: 4,72 min; m/z 179,1 [M-Boc+2H]+.
(g) 2-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)morfolina-4-carboxilato de terc- butilo (I89)
Se calentaron 2-(4-aminofenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (I88) (50 mg, 0,18 mmol) y 2-(2-(2-(2- (metilsulfonil)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de metilo (I67) (72 mg, 0,18 mmol) en trifluoroetanol (1,2 ml) y TFA (0,12 ml) por irradiación de microondas (100 °C/20 minutos). La mezcla se concentró, se evaporó en tolueno y se cargó sobre un cartucho de 5 g SCX en metanol (1 ml). El cartucho se lavó con metanol (50 ml), y después se eluyó con metilamina al 1 %/metanol (50 ml). El eluyente básico se concentró, y se recogió en
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diclorometano (5 ml). se añadió anhídrido Boc (0,062 ml, 0,27 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se evaporó sobre gel de sílice, y se sometió a cromatografía (cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 0-60 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I89) (46 mg, rendimiento del 42 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,55 (s, 1H), 7,64 (d, J =
8.6 Hz, 2H), 7,47 (s, 1H), 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,29-7,18 (m, se solapa con CHCI3), 4,41 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,08 (m, 3H), 3,76 (s, 2H), 3,73 - 3,64 (m, 4H), 3,16 - 2,98 (m, 5H), 2,85 (s, 1H), 1,51 - 1,47 (m, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,88 min; m/z 601,1 [M+H]+, 545,1 [M-tBu+2H]+.
(h) Ácido 2-(2-(2-(2-((4-(4-(terc-Butoxicarbonil)morfolin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acético
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Se disolvió 2-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (I89) (46 mg, 0,077 mmol) en THF (2 ml), y se añadió hidróxido de litio hidrato (6,0 mg, 0,15 mmol) en agua (0,5 ml). Después de 18 horas, la mezcla se concentró, se diluyó con agua (5 ml) y el pH se ajustó a 3 con HCI 6 M. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml), y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron para dar el compuesto del título (I90) (39 mg, rendimiento del 85 %) en forma de un jarabe de color amarillo pálido; 1H RMN (400 mHz, CDQ3) 5 8,52 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,35 - 7,27 (m, 4H), 4,38 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,07 - 3,80 (m, 5H), 3,67 (td, J = 11,7, 2,7 Hz, 1H),
3.06 (s, 4H), 2,84 (s, 2H), 1,47 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,49 min; m/z 587,1 [M+H]+, 531,0 [M-tBu+2H]+,
487,1 [M-Boc+2H]+; m/z 585,2 [M-H]-.
(i) 2-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo
(191)
Se disolvió ácido 2-(2-(2-(2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)morfolin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)fenil)acético (I90) (39 mg, 0,066 mmol) en DMF (3 ml) y se añadieron carbonato de amonio (38 mg, 0,40 mmol), HATU (28 mg, 0,073 mmol) y DIPEA (0,046 ml, 0,27 mmol). La mezcla de color amarillo se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas y después se añadió a agua (30 ml) y salmuera (10 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 ml), y las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de 4 g de sílice desactivada*, 0-100 % de isopropilamina al 1 % en acetato de etilo/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I91) (23,3 mg, rendimiento del 60 %) en forma de un vidrio incoloro; 1H RMN (400 MHz, CDQ3) 5 8,53 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,61 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,31 - 7,19 (m, 5H, se solapa con CHCI3), 5,58 (s, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,40 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,08 - 3,84 (m, 3H), 3,74 - 3,63 (m, 3H), 3,16 - 3,00 (m, 5H), 2,85 (s, 1H), 1,48 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,29 min; m/z 586,1 [M+H]+, 530,1 [M-tBu+2H]+, 608,1 [M+Na]+; m/z 584,1 [M-H]-.
* cartucho desactivado por tratamiento con 3 volúmenes de isopropilamina al 1 % en acetato de etilo seguido de aclarando con un gradiente de 3 volúmenes del 100-0 % de isopropilamina al 1 % en acetato de etilo/benzina de petróleo a 40-60 °C.
(j) 2-(2-(2-(2-((4-(morfolin-2-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (22)
Se agitó 2-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)morfolina-4-carboxilato de terc-butilo (I91) (23 mg, 0,039 mmol) con DCM (3 ml) y TFA (0,3 ml). Después de 18 horas, la mezcla se concentró y el residuo se suspendió en NaOH acuoso al 10 % (1 ml) y salmuera (1 ml). La mezcla se extrajo con acetato de etilo (5 x 3 ml), y las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron para dar el compuesto del título (22) (17 mg, 89 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,19 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,74 - 7,67 (m, 2H), 7,42 (s, 1H), 7,27 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,25 -7,21 (m, 1H), 7,19-7,14 (m, 3H), 6,91 (s, 1H), 4,32 (dd, J = 10,1, 2,1 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 3,58 (dt, J = 11,2, 7,2 Hz, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,15-2,98 (m, 4H), 2,89 (dd, J = 12,3, 2,2 Hz, 1H), 2,72 (d, J = 5,2 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,75 min; m/z 486,1 [M+H]+, 508,0 [M+Na]+; m/z 484,1 [M-H]-.
Ejemplo 23: 2-(2-(2-(2-((4-(1-Acetilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida
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Se añadieron trietilamina (34,6 jl, 0,248 mmol) y anhídrido acético (23,4 |jl, 0,248 mmol) a una solución de la 2-(2- (2-(2-((4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (I1) (30 mg, 0,062 mmol) en DMF (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (20 ml) y NaHCÜ3 ac. sat. (20 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (20 ml) y salmuera (20 ml) y se secaron sobre Na2SÜ4. La solución se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido de color blanco que se suspendió en DCM (aprox. 2 ml) y ciclohexano (aprox. 10 ml). La suspensión se filtró para dar el compuesto del título (23) (24 mg, 72 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,14 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,71 - 7,63 (m, 2H), 7,42 (s, 1H), 7,27 - 7,12 (m, 6H), 6,91 (s, 1H), 4,57 - 4,48 (m, 1H), 3,93 - 3,90 (m, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,16 - 3,06 (m, 3H), 3,06 - 2,97 (m, 2H), 2,77 - 2,65 (m, 1H), 2,62 - 2,51 (m, pico oscurecido por disolvente), 2,03 (s, 3H), 1,81 - 1,74 (m, 2H), 1,57 (cd, J= 12,6, 4,2 Hz, 1H), 1,49 - 1,35 (m, 1H); Métodos de LCMS C: tr 5,89 min; m/z 526 [M+H]+.
Ejemplo 24: 2-(2-(2-(2-((4-(4-(Dimetilamino)piperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetamida (24)
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A una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(4-aminopiperidin-1-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4- il)etil)fenil)acetamida (20) (30m g, 0,060 mmol) en metanol anhidro (2 ml) se le añadió una solución ac. sal 37 % de formaldehído (7 jl, 0,06 mmol) y triacetoxiborohidruro sódico (0,038 g, 0,18 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre EtOAc (50 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se separó, se secó (MgSÜ4) y el disolvente se eliminó al vacío para producir un aceite de color amarillo en bruto. El aceite en bruto se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (Biotage Isolera: MeOH al 0-100 % en EtOAc) para producir el compuesto del título (24) (11 mg, 35 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz,drMeOD) 5 8,51 (s, 1H), 7,57-7,51 (m, 2H), 7,31 - 7,18 (m, 4H), 7,04-6,99 (m, 2H), 3,76 - 3,67 (m, 4H), 3,20 - 3,13 (m, 2H), 3,09 - 3,03 (m, J = 9,9, 5,5 Hz, 2H), 2,762,64 (m, 2H), 2,34 (s, 7H), 2,01 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,66 (cd, J = 12,4, 3,9 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,77 min; m/z = 527 [M+1]+.
Ejemplo 25: 2-(2-(2-(2-((4-(Piperazin-1-ilmetil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (25)
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(a) 4-(4-nitrobencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I92)
Se añadió 1-(bromometil)-4-nitrobenceno (1,08 g, 5,00 mmol) a una mezcla agitada vigorosamente de piperazin-1- carboxilato de terc-butilo (1,02 g, 5,50 mmol) y carbonato sódico (0,583 g, 5,50 mmol) en DMF (5 ml) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó durante dos horas. Se añadió agua (25 ml), y la suspensión resultante se dejó en reposo durante cinco minutos y después se filtró. El sólido recogido se lavó con agua (25 ml) y se secó al aire para dar el compuesto del título (92) (1,523 g, rendimiento del 95 %); 1H RMN (400 MHz, CDQ3) 5 8,32 - 8,10 (m, 2H), 7,51 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 3,59 (s, 2H), 3,52 - 3,39 (m, 4H), 2,43 - 2,34 (m, 4H), 1,45 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 4,58 min, m/z 266,1 [M-tBu+2H]+, 222,1 [M-Boc+2H]+.
(b) 4-(4-aminobencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I93)
Se agitaron 4-(4-nitrobencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I92) (0,500 g, 1,56 mmol), acetato de etilo (100 ml) y Pd al 10 %/C (150 mg) en una atmósfera de hidrógeno a 50 psi (244,74 kPa). Después de dos horas, la mezcla se filtró a través de celite y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 0-60 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I93) (327 mg, rendimiento del 72 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 7,11 - 7,05 (m, 2H), 6,67 - 6,61 (m, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,43 - 3,37 (m, 6H), 2,40 - 2,30 (m, 4H), 1,45 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 1,80 min; m/z 292,1 [M+H]+.
(c) 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I94)
Se enfrió 2,4-dicloro-5-(trifluorometil)pirimidina (0,546 g, 2,52 mmol) en 1:1 de dicloroetano: terc-butanol a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió una solución 1,0 M de cloruro de cinc (ll) en éter dietílico (3,43 ml, 3,34 mmol), y la mezcla se agitó durante una hora a 0 °C. Se añadió gota a gota 4-(4-aminobencil)piperazin-1- carboxilato de terc-butilo (I93) (0,667 g, 2,29 mmol) en 1:1 de dicloroetano:terc-butanol (20 ml) durante treinta minutos, seguido de trietilamina (0,351 ml, 2,52 mmol) en 1:1 de dicloroetano; terc-butanol (10 ml). La mezcla se
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agitó durante una noche, permitiendo que el baño de hielo llegara a temperatura ambiente durante este tiempo. La mezcla se concentró sobre gel de sílice y se sometió a cromatografía (cartucho de 40 g de sílice, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar un residuo que se trituró con benzina de petróleo a 40-60 °C para dar el compuesto del título (I94) (0,976 g, 90 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d4- MeOD) 5 8,68 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,30 (s, 2H), 3,27 - 3,00 (a, se solapa con el disolvente), 1,47 (s, 9H). Métodos de LCMS C: 5,08 min; m/z 472,1 [M+H]+; m/z 470,1 [M-H]-.
(d) 4-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de tero-butilo (I95)
Se disolvieron 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de tero-butilo (I94) (0,500 g, 1,06 mmol) y 2-(2-etinilfenil)acetato de metilo (I4) (0,203 g, 1,17 mmol) en DMF (10 ml) y se añadió bis(trifenilfosfina)cloruro de paladio (II) (37 mg, 5 % en moles). La mezcla se desgasificó con nitrógeno durante diez minutos, después se añadieron yoduro de cobre (l) (10 mg, 5 % en moles) y trietilamina (0,738 ml, 5,30 mmol). La mezcla se calentó por irradiación de microondas (100 °C/20 minutos) y después se concentró. La cromatografía del residuo (cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) dio el compuesto del título (I95) (192 mg, rendimiento del 30 %) en forma de un aceite de color pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,63 (s, 1H), 7,68 (dd, J = 7,6, 1,0 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,50 (s, 1H), 7,42 (dd, J = 7,5, 1,4 Hz, 1H), 7,38-7,29 (m, 4H), 3,95 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,45 - 3,40 (m, 4H), 2,43 - 2,35 (m, 4H), 1,45 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,30 min; m/z 610,1 [M+H]+, m/z 608,2 [M-H]-.
(e) 4-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de tero- butilo (I96)
Se agitó vigorosamente 4-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pi rimidin-2-
il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I95) (190 mg, 0,312 mmol) con Pd al 10 %/C (100 mg) en DMF (10 ml) en una atmósfera de hidrógeno. Después de dos, la reacción se transfirió a un tubo Parr con la ayuda de acetato de etilo (10 ml) y la mezcla se hidrogenó a 45 psi (310,26 kPa). Después de 18 horas, se añadieron un catalizador de Pearlman (100 mg) y trietilamina (0,2 ml), y la mezcla se agitó en una atmósfera de hidrógeno a 40 psi (275,79 kPa). Después de tres horas, la mezcla se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se filtró a través de celite, con lavado del celite con acetato de etilo (2 x 25 ml). El filtrado se diluyó con acetato de etilo (100 ml) y se lavó con una solución al 5 % de cloruro de litio (3 x 100 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato sódico y se evaporó para dar el compuesto del título (I96) (127 mg, rendimiento del 66 %) en forma de un jarabe amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,54 (s, 1H), 7,63 - 7,56 (m, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,26 - 7,17 (m, 4H), 3,75 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,46 - 3,40 (m, 4H), 3,17-3,05 (m, 4H), 2,45 - 2,34 (m, 4H), 1,45 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,63 min; m/z 614,2 [M+H]+; m/z 612,1 [M-H]-.
(f) 2-(2-(2-(2-((4-((4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)metil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio (I97)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I96) (120 mg, 0,196 mmol) en THF (4 ml), y se añadió una solución de hidróxido de litio hidrato (25 mg, 0,59 mmol) en agua (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, después se concentró y el residuo se evaporó dos veces en tolueno para dar el compuesto del título (I97) en forma de un sólido de color castaño que se usó sin purificación. Métodos de LCMS C: tr 5,17 min; m/z 600,2 [M-Li+2H]+; 544,1 [M-tBu- Li+3H]+; m/z 598,2 [M-Li]-.
(g) 4-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc- butilo (I98)
Se disolvió el 2-(2-(2-(2-((4-((4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)metil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetato de litio en bruto (I97) en DMF (2 ml) y se añadieron cloruro de amonio (210 mg, 3,92 mmol), HATU (149 mg, 0,392 mmol) y DIPEA (68,0 pl, 0,392 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, después se concentró. El residuo se repartió entre bicarbonato sódico saturado (50 ml) y acetato de etilo (50 ml); la fase acuosa se extrajo con más cantidad de acetato de etilo (2 x 50 ml) y las fases combinadas de acetato de etilo se lavan con salmuera (3 x 50 ml), se secaron sobre sulfato sódico y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de 4 g de sílice, gradiente al 20-100 % de isopropilamina al 1 % en acetato de etilo/benzina de petróleo a 40-60 °C, después gradiente al 0-5 % de metanol/isopropilamina al 1 % en acetato de etilo) para dar un residuo que se sometió a cromatografía (cartucho de sílice de 12 g, gradiente al 80-100 % de isopropilamina al 1 % en acetato de etilo/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I98) (34 mg, rendimiento del 29 % en dos etapas de éster) en forma de una espuma de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,54 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,29 - 7,20 (m, 8H), 5,38 (s, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,49 (s, 2H), 3,46 - 3,39 (m, 4H), 3,16 - 3,04 (m, 4H), 2,44 - 2,34 (m, 4H), 1,45 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,08 min; m/z
599,1 [M+H]+, 499,1 [M-Boc+2H]+; m/z 597,2 [M-H]-.
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(h) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperazin-1-ilmetil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (25)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I98) (34 mg, 0,057 mmol) en DCM (4 ml) y se añadió TFA (0,4 ml). La mezcla resultante se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente y después se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en NaOH acuoso al 10 % (2 ml) y salmuera (3 ml) y después se extrajo con acetato de etilo (4 x 5 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron a sequedad. El residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto del título (25) (27,5 mg, 98 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,17 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,72 - 7,66 (m, 2H), 7,26 - 7,20 (m, 3H), 7,20 - 7,13 (m, 3H), 6,90 (s, 1H), 3,49 (s, 2H), 3,37 (s, 2H), 3,14 - 2,98 (m, 4H), 2,67 (t, J = 4,7 Hz, 4H), 2,26 (s, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,52 min; m/z 499,1 [M+H]+; m/z 497,1 [M-H]-.
Ejemplo 26: 2-(3-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)pirazin-2-il)acetamida (26)
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A una solución 1,0 M de LiHMDS en tolueno (14,8 ml, 14,8 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a 0 °C se le añadieron 2,3-dicloropirazina (0,699 ml, 6,71 mmol) y acetato de etilo (0,725 ml, 7,38 mmol). La mezcla se agitó durante una noche durante 18 horas, permitiendo que el baño de hielo se calentara a temperatura ambiente. La mezcla se vertió en cloruro de amonio saturado (100 ml), y se extrajo con éter dietílico (3 x 100 ml). Los extractos de éter combinados se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de 40 g de sílice, acetato de etilo al 0-25 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I99) (0,414 g, rendimiento del 31 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN
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(400 MHz, CDCI3) 5 8,46 (d, J - 2,5 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,22 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 4,03 (s, 2H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,16 min.
(b) 2-(3-((trimetilsilil)etinil)pirazin-2-il)acetato de etilo (I100)
Una mezcla del 2-(3-cloropirazin-2-il)acetato de etilo (I99) (0,410 g, 2,04 mmol), DMF (6 ml), trietilamina (2 ml), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (ll) (72 mg, 5 % en moles) y yoduro de cobre (l) (19 mg, 5 % en moles) en un tubo de Schlenk se desgasificó con tres ciclos de vacío/nitrógeno, y después se añadió trimetilsililacetileno (0,866 ml, 6,13 mmol) en una atmósfera de nitrógeno. El tubo se lavó abundantemente con nitrógeno, se selló y se calentó a 90 °C. Después de 18 horas, la mezcla se enfrió y se vertió en agua (50 ml). Se añadió cloruro de amonio saturado (50 ml), y la mezcla se extrajo con éter dietílico (3 x 100 ml). Las fases de éter combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de 40 g de sílice, acetato de etilo al 0-30 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I100) (0,386 g, rendimiento del 72 %) en forma de un aceite de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,47 - 8,41 (m, 2H), 4,20 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 4,05 (s, 2H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz), 0,28 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,20 min; m/z 263,1 [M+H]+.
(c) 2-(3-etinilpirazin-2-il)acetato de etilo (I101)
Se enfrió 2-(3-((trimetilsilil)etinil)pirazin-2-il)acetato de etilo (I100) (0,386 g, 1,47 mmol) en THF (15 ml) a 0 °C y se añadió una solución 1,0 M de TBAF en THF (1,84 ml, 1,84 mmol). La mezcla se agitó durante dos minutos y después se vertió en agua (150 ml). La mezcla resultante se extrajo con éter dietílico (2 x 150 ml) y las fases combinadas de éter se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (I101) (0,209 g, rendimiento del 75 %) en forma de un aceite de color amarillo-pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCb) 5 8,50 - 8,47 (m, 2H), 4,21 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 4,08 (s, 2H), 3,49 (s, 1H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,88 min; m/z 191,1 [M+H]+.
(d) 4-(4-((4-((3-(2-etoxi-2-oxoetil)pirazin-2-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I102)
Se cargaron 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I43) (140 mg, 0,306 mmol), 2-(3-eti nil pi razi n-2-il)acetato de etilo (I101) (64 mg, 0,34 mmol), cloruro de
bis(trifenilfosfina)paladio (ll) (11 mg, 5 % en moles) y DMF (2 ml) en un tubo para microondas y se desgasificó con nitrógeno durante diez minutos. Se añadieron yoduro de cobre (l) (3 mg, 5 % en moles) y trietilamina (0,192 ml, 1,38 mmol) en una atmósfera de nitrógeno y la mezcla resultante calentó por irradiación de microondas (120 °C/15 minutos). La mezcla enfriada se concentró, y el residuo se evaporó sobre gel de sílice. El análisis por cromatografía (cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) dio el compuesto del título (I102) (95,5 mg, rendimiento del 52 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 mHz, d6-DMSO) 5 10,47 (s, 1H), 8,87 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 8,76 - 8,71 (m, 2H), 7,63 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,15 - 3,99 (m, 6H), 2,80 (s, 2H), 2,70 - 2,63 (m, 1H), 1,80 - 1,70 (m, 2H), 1,55 - 1,44 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,14 (t, J =
7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,73 min; m/z 633,1 [M+Na]+, 555,0 [M-tBu+2H]+, 511,1 [M-Boc+2H]+; m/z 609,1 [M-H]-.
(e) 4-(4-((4-(2-(3-(2-etoxi-2-oxoetil)pirazin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I103)
Se disolvió 4-(4-((4-((3-(2-etoxi-2-oxoetil)pirazin-2-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1- carboxilato de terc-butilo (I102) (187 mg, 0,306 mmol) en dMf (20 ml), trietilamina (0,1 ml) y se añadió una suspensión de Pd al 10 %/C (0,100 g) en DMF (2 ml). La mezcla se purgó con 3 ciclos de vacío/hidrógeno, y después se agitó vigorosamente en una atmósfera de hidrógeno. Después de 17 horas, la mezcla se filtró a través de celite, y el celite se lavó con acetato de etilo (200 ml). Los filtrados combinados se lavaron con 1:1 de agua: salmuera saturada (4 x 100 ml), se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (I103) (142 mg, 76 %) en forma de un aceite de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d4-MeOD) 5 8,51 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 8,42 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,20-7,13 (m, 2H), 4,21 (dd, J = 11,4, 1,8 Hz, 2H), 4,15 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,97 (s, 2H), 3,37 (s, 4H), 2,87 (s a), 2,70 (tt, J = 11,9, 3,3 Hz, 1H), 1,83 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 1,59 (ddd, J = 25,6, 12,9, 4,4 Hz, 2H), 1,48 (s, 9H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,76 min; m/z 615,1 [M+H]+, 559,1 [M-tBu+2H]+, 515,1 [M-Boc+2H]+.
(f) 4-(4-((4-(2-(3-(2-amino-2-oxoetil)pirazin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I104)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(3-(2-etoxi-2-oxoetil)pi razi n-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidi n-2-il)amino)fenil)piperidin-1 - carboxilato de terc-butilo (I103) (142 mg, 0,231 mmol) en THF (10 ml) y metanol (5 ml) y después se añadió una solución de hidróxido de litio monohidrato (48,0 mg, 1,16 mmol) en agua (2,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas, y después se concentró. El residuo se evaporó dos veces en tolueno y después se disolvió en DMF (20 ml) y se añadieron cloruro de amonio (62 mg, 1,2 mmol), HOBt (47 mg, 0,35 mmol), PyBOP
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(181 mg, 0,347 mmol) y DIPEA (0,161 ml, 0 924 mmol). Después de dos horas, la mezcla se inactivo con agua (1 ml), se concentró y el residuo se repartió entre 1:3 de salmuera saturada:agua (30 ml) y acetato de etilo (20 ml). La fase acuosa se lavó con acetato de etilo (3 x 20 ml), después las fases de acetato de etilo combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 20-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C y después acetato de etilo al 100 % durante 10 volúmenes de columna) para dar el compuesto del título (I104) (66,2 mg, rendimiento del 49 %) en forma de un jarabe incoloro; 1H RMN (400 MHz, c4-MeOD) 5 8,40 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,24 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,09 - 7,01 (m, 2H), 4,10 (d, J = 13,3 Hz, 2H), 3,81 - 3,75 (m, 2H), 3,34 - 3,23 (m, 4H), 2,76 (s a), 2,58 (tt, J = 12,0, 3,4 Hz, 1H), 1,71 (d, J = 12,2 Hz, 2H), 1,47 (ddd, J = 25,5, 12,8, 4,3 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H). Métodos de LCMS C: 6,17 min; m/z 586,1 [M+H]+, 530,1 [M-tBu+2H]+, 486,1 [M-Boc+2H]+; m/z 584,2 [M-H]-.
(g) 2-(3-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)pirazin-2-il)acetamida (26)
Se agitaron 4-(4-((4-(2-(3-(2-amino-2-oxoetil)pirazin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pi rimidin-2-il)amino)fenil)pi peridin-1-
carboxilato de terc-butilo (I104) (66 mg, 0,11 mmol), DCM (20 ml) y TFA (2 ml) a temperatura ambiente durante 17 horas, después se concentraron. El residuo se suspendió en NaOH al 10 % (10 ml) y salmuera (10 ml), y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (4 x 20 ml). Las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (26) (47 mg, rendimiento del 85 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,05 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,42 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,39 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,54 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,08 (s, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,07 - 2,97 (m, 2H), 2,63 - 2,53 (m, se solapa con el disolvente), 1,67(d, J = 12,1 Hz, 2H), 1,55-1,43 (m, 2H), 1,23 (s, 1H). Métodos de LCMS C: tr 4,36 min; m/z 486,1 [M+H]+; m/z 484,1 [M-H]-.
Ejemplo 27: 2-(3-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)pirazin-2-
il)acetamida (27)
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Se disolvió 2-(3-(2-(2-((4-(Pi peridi n-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pi rimidin-4-il)etil)pi razin-2-il)acetamida (26)
(42 mg, 0,087 mmol) en metanol (4 ml) y se añadió formaldehído al 37 % (26 pl, 0,35 mmol). Después de cinco minutos, se añadió tri(acetoxi)borohidruro sódico (92 mg, 0,44 mmol) y la mezcla se agitó durante tres horas. La solución se concentró, y el residuo se suspendió en hidróxido sódico al 10 % (1 ml). Después de cinco minutos, se añadió salmuera (2 ml), y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (5 x 3 ml). Las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (27) (34 mg, rendimiento del 77 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RmN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,07 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,42 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,55 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,08 (s, 1H), 4,09 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 3,77 (s, 2H), 3,17 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 3,05 - 2,92 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 2,20 (s, 2H), 1,82-1,61 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,53 min; m/z 500,1 [M+H]+; m/z 498,2 [M-H]-.
Ejemplo 28: 2-f2-f2-f2-ff2-Mef/'M,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-6-il)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)fenil)acetamida (28)
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(21) (25 mg, 0,055 mmol) en metanol (2 ml) y se añadió formaldehído acuoso al 37 % (0,016 ml, 0,22 mmol). La mezcla se agitó durante cinco minutos y después se añadió tri(acetoxi)borohidruro sódico (58 mg, 0,27 mmol). Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se trató con NaOH acuoso al 10 % (1 ml) durante cinco minutos. Se añadió salmuera (2 ml), y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (5 x 5 ml). Los extractos de acetato de etilo combinados se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato sódico) y se evaporaron para dar el compuesto del título (28) (22,8 mg, rendimiento del 88 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d4-MeOD) 5 8,54 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 8,3,
2,2 Hz, 1H), 7,28-7,16 (m, 4H), 7,04 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,66 (s, 2H), 3,60 (s, 2H), 3,21-3,11 (m, 2H), 3,11 -3,02 (m, 2H), 2,96 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,76 (t, J = 6,1 Hz, 2H), 2,46 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,78 min, m/z 470,1 [M+H]+; m/z 468,1 [M-H]-.
Ejemplo 29: 2-(4-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)pirimidin-5-
il)acetamida (29)
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(a) 2-Formilsuccinato de dietilo (I105)
Se añadieron gota a gota una mezcla de succinato de dietilo (26,1 g, 25,0 ml, 0,150 mol) y formiato de etilo (11,1 g, 12,1 ml, 0,150 mol) durante 1,5 horas a una suspensión agitada de sodio (3,40 g, 0,150 mol) en éter dietílico (120 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. Tras la finalización de la adición, la agitación continuó a temperatura ambiente durante 17 horas. Se añadió cuidadosamente agua (120 ml) a la suspensión resultante y la agitación se continuó hasta que todos los sólidos se disolvieron. Las capas se separaron y la capa acuosa se lavó con éter dietílico (100 ml). Después, la capa acuosa se acidificó a pH 5 usando HCI 11 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 100 ml), los extractos etéreos de la capa acidificada se combinaron, se secaron (Na2SO4) y después se evaporaron a sequedad a presión reducida para dar el compuesto del título (I105) (16,5 g) en forma de un líquido móvil de color amarillo. El producto en bruto no se purificó más y se usó directamente en la siguiente etapa.
(b) 2-(4-oxo-2-tioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-5-il)acetato de etilo (I106)
Se añadió etóxido sódico (6,105 g, 89,71 mmol) a etanol absoluto (150 ml) en una atmósfera de nitrógeno seguido de 2-formilsuccinato de dietilo (I105) (en bruto, 16,5 g) en etanol absoluto (30 ml) y tiourea (6,829 g, 89,71 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1 hora y después se enfrió a temperatura ambiente a la que la agitación se continuó durante 16 horas. Los volátiles se evaporaron a presión reducida para dar un sólido oleoso de color pardo. Se añadió una solución acuosa fría de ácido acético (15 %; 120 ml) y la mezcla resultante se sometió a sonicación y después se agitó a 0 °C hasta que todo el residuo estuvo en suspensión. El precipitado resultante se recogió por filtración. La torta de filtro se lavó con agua (100 ml) y se secó para dar el compuesto del título (I106) (6,31 g, rendimiento del 19 % en 2 etapas) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6- DMSO) 5 7,44 (s, 1H), 4,05 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,28 (s, 2H), 1,17 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 2,92 min; m/z 213,0 [M-H]-.
(c) 2-(6-oxo-1,6-dihidropirimidin-5-il)acetato de etilo (I107)
Una suspensión de níquel Raney en agua (Aldrich; 25 ml) se añadió a una suspensión agitada de 2-(4-oxo-2-tioxo- 1,2,3,4-tetrahidropirimidin-5-il)acetato de etilo (I106) (3,0 g, 14 mmol) en agua (200 ml) a temperatura ambiente. La suspensión resultante se calentó a reflujo durante 20 horas y después se agitó a temperatura ambiente durante 70 horas más. La mezcla se filtró a través de un lecho fino de celite, la torta de filtro se lavó con agua caliente (200 ml) y los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para dar un sólido de color azul pálido (~1,8 g). Se añadió diclorometano (250 ml) y la suspensión resultante se sometió a sonicación en un baño de ultrasonidos hasta que se obtuvo un sólido suspendido fino. La suspensión fina se calentó a reflujo con agitación vigorosa durante 1 hora y después se filtró caliente a través de una capa de celite, lavando la torta de filtro con diclorometano caliente (200 ml). Los filtrados se combinaron y se evaporaron a sequedad a presión reducida para dar el compuesto del título (I107) (1,01 g, rendimiento del 40 %) en forma de un sólido esponjoso de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,12 (s, 1H), 8,00-7,97 (m, 1H), 4,19 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,49 (s, 2H), 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 2,05 min; m/z 183,1 [M+H]+.
(d) 2-(4-cloropirimidin-5-il)acetato de etilo (I108)
A 2-(6-oxo-1,6-dihidropirimidin-5-il)acetato de etilo (I107) (0,868 g, 4,77 mmol) se le añadió POCI3 (6 ml) en una atmósfera de nitrógeno y la mezcla resultante se calentó a reflujo durante 5 minutos y después se enfrió a temperatura ambiente. La reacción se añadió lentamente a agua (300 ml), la solución acuosa se extrajo con DCM (3 x 100 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el compuesto del título (I108) (0,885 g, rendimiento del 93 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,93 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 4,21 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,76 (s, 2H), 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,09 min; m/z 201,1, 203,1 [M+H]+.
(e) 2-(4-((trietilsilil)etinil)pirimidin-5-il)acetato de etilo (I109)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 2-(4-cloropirimidin-5-il)acetato de etilo (I108) (0,823 g, 4,10 mmol) en DMF seca (15 ml) se le añadieron trietilamina (1,715 ml, 12,31 mmol) seguido de trifenilfosfina (0,124 g, 0,473 mmol), trans-diclorobis(trifenil-fosfina)paladio (ll) (0,144 g, 0,205 mmol), Cu(l)l (0,078 g, 0,410 mmol) y finalmente (trietilsilil)acetileno (1,470 ml, 8,204 mmol). Después, la mezcla de reacción se calentó por irradiación de microondas a 120 °C durante 25 minutos, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Isolera Biotage, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-30 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I109) (1,176 g, rendimiento del 94 %) en forma de un aceite de color amarillo-naranja; 1H RMN (400 MHz, CDCb) 5 9,08 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 4,18 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,80 (s, 2H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,10-1,01 (m, 9H), 0,77 - 0,67 (m, 6H) Método de LCMS C: tr 6,64 min; m/z 305,1 [M+H]+.
(f) 2-(4-etinilpirimidin-5-il)acetato de etilo (I110)
A una solución de 2-(4-((trietilsilil)etinil)pirimidin-5-il)acetato de etilo (I109) (1,174 g, 3,856 mmol) en THF seco (40 ml) en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota ácido acético (0,243 ml, 4,24 mmol) seguido de TBAF
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(1,0 M en THF, 4,049 ml, 4,049 mmol) a 0 °C. La reacción se agitó a esta temperatura durante 5 minutos y después se vertió en NaHCO3 ac. sat. (100 ml) y DCM (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un aceite de color pardo. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Isolera Biotage, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-60 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I110) (0,397 g, rendimiento del 54 %) en forma de un aceite de color pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 9,11 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 4,20 (c, J = 7,1 Hz, 2H), 3,81 (s, 2H), 3,56 (s, 1H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,78 min; m/z 191,1 [M+H]+.
(g) 4-(4-((4-((5-(2-etoxi-2-oxoetil)pirimidin-4-il) etinil)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I111)
A una solución desgasificada de nitrógeno de 2-(4-etinilpirimidin-5-il)acetato de etilo (I110) (0,146 g, 0,766 mmol) y
4- (4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino) fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I45) (0,250 g,
0,547 mmol) en DMF seca (15 ml) se le añadieron trietilamina (0,305 ml, 2,19 mmol), tetrafluoroborato de tri-terc- butilfosfonio (0,016 g, 0,055 mmol), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,019 g, 0,027 mmol) y Cu(l)l (0,010 g, 0,055 mmol). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos y después se concentró al vacío para dar una goma de color pardo. El material en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Isolera Biotage, cartucho de 40 g de Si, EtOAc al 0-70 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I111) (0,093 g, rendimiento del 27 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,50 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 7,63 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,14 - 4,04 (m, 4H), 3,96 (s, 2H), 2,81 (s a, 2H), 2,70 - 2,61 (m, 1H), 1,75 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 1,53 - 1,37 (m, 11H), 1,14 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,64 min; m/z 609,2 [M-H]-.
(h) 4-(4-((4-(2-(5-(2-etoxi-2-oxoetil)pirimidin-4-il)etil)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I112)
Se disolvió 4-(4-((4-((5-(2-etoxi-2-oxoetil)pirimidin-4-il) etinil)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1- carboxilato de terc-butilo (I111) (0,108 g, 0,177 mmol) en DMF seca (10 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió Pd/C (10 % en peso; 0,040 g) en EtOAc (2 ml) a la solución y la atmósfera se cambió a gas hidrógeno (globo). La reacción se cerró herméticamente con un globo y se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas. El catalizador se retiró por filtración a través de Celite, que se lavó con EtOAc (5 x 20 ml). El disolvente se eliminó al vacío para dar un semi-sólido de color grisáceo que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Isolera Biotage, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-70 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I112) (0,096 g, rendimiento del 88 %) en forma de una espuma de color amarillo pálida; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,06 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,11 - 4,04 (m, 4H), 3,83 (s, 2H), 3,28 - 3,21 (m, 4H), 2,79 (s a, 2H), 2,68-2,58 (m, 1H), 1,74 (d, J = 13,1 Hz, 2H), 1,52-1,38 (m, 11H), 1,14 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,65 min; m/z 615,1 [M+H]+.
(i) 2-(4-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)pirimidin-5- il)acetato de litio (I113)
Se añadió LiOH.H2O (0,020 g, 0,468 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(5-(2-etoxi-2-oxoetil)pirimidin-4-il)etil)-5- (trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)fenil) piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I112) (0,096 g, 0,156 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y metanol (1 ml) y la mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 18 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (70 ml) y NaOH acuoso 2 M (80 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 70 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (70 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I113) (0,096 g, cuantitativo) en forma de un sólido de color amarillo pálido. Métodos de LCMS C: tr 6,19 min; m/z 587,1 [M+H]+
(j) 4-(4-((4-(2-(5-(2-amino-2-oxoetil)pirimidin-4-il)etil)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I114)
Se disolvió 2-(4-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluoro-metil)pirimidin-4-il)etil)pirimidin-
5- il)acetato de litio (I113) (0,092 g, 0,16 mmol) en THF seco (7 ml) y DMF seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. A la solución se le añadieron 1-hidroxibenzotriazol (0,023 g, 0,17 mmol) y EdCi (0,033 g, 0,17 mmol) y N,N- diisopropiletilamina (0,109 ml, 0,624 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadió en una porción carbonato de amonio (0,075 g, 0,78 mmol), y la reacción se agitó temperatura ambiente durante 24 horas. Se añadieron más reactivos, 1-hidroxibenzotriazol (0,011 g) y EDCI (0,016 g) y N,N- diisopropiletilamina (0,055 ml) y carbonato de amonio (0,035 g) y la reacción se agitó durante 20 horas más a 35 °C. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (70 ml) y NaHCO3 ac. sat. (70 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 70 ml), las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua (100 ml) y salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido oleoso. El producto en bruto se purificó por cromatografía sobre gel de sílice (Isolera Biotage, cartucho de 12 g de Si, EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C, después metanol al 0-10 % en EtOAc) para dar el
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compuesto del título (I114) (0,076 g, rendimiento del 83 %) en forma de una espuma de color amarillo pálida; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,03 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,64 (s a, 1H), 7,55 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,16 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,11 (s a, 1H), 4,12-4,04 (m, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,30 - 3,21 (m, 4H), 2,77 (s a, 2H), 2,68 - 2,58 (m, 1H), 1,74 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,53 - 1,37 (m, 11H). Métodos de LCMS C: tr 6,12 min; m/z 586,1 [M+H]+.
(k) 2-(4-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)pirimidin-5-il)acetamida (29)
Se disolvió 4-(4-((4-(2-(5-(2-amino-2-oxoetil)pirimidin-4-il)etil)-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1- carboxilato de terc-butilo (I114) (0,076 g, 0,13 mmol) en dCm (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió ácido trifluoroacético (0,298 ml, 3,89 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío, se añadieron EtOAc (70 ml) y NaOH ac. 2 M (70 ml) al residuo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 70 ml), los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (2 x 50 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar una goma de color amarillo pálido. Se añadieron metanol (~5 ml) y ciclohexano (~ 15 ml) al producto, algunos de los volátiles se eliminaron al vacío (~ 50 %), lo que dio un aceite de color amarillo que se separó de la solución de disolvente y se transfirió cuidadosamente a un nuevo matraz con una pipeta. La solución eliminada se concentró al vacío y después se secó adicionalmente a alto vacío para dar una goma de color amarillo pálido. Se añadieron éter dietílico (5 ml) y metanol (1 ml) y la solución se concentró al vacío. El proceso se repitió dos veces con éter dietílico para dar el compuesto del título (29) (35 mg, rendimiento del 56 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 mHz, d4-MeOD) 5 8,91 (s, 1H), 8,53 - 8,50 (m, 2H), 7,52 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,21 - 7,16 (m, 2H), 3,70 (s, 2H), 3,42 - 3,34 (m, 4H), 3,27 - 3,20 (m, 2H), 2,84 (td, J = 12,5, 2,6 Hz, 2H), 2,70 (tt, J = 12,2, 3,9 Hz, 1H), 1,89 (d, J = 13,7 Hz, 2H), 1,72 (ddd, J = 16,4, 12,9, 4,0 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,46 min; m/z 486,1 [M+H]+.
Ejemplo 30: 2-(4-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)pirimidin-5- il)acetamida (30)
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A una suspensión de 2-(4-(2-(2-((4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil) pirimidin-4-il)etil)pirimidin-5- il)acetamida (29) (0,029 g, 0,060 mmol) en metanol anhidro (2 ml) se le añadió una solución ac. al 37 % de formaldehído (0,018 ml, 0,24 mmol) en una atmósfera de nitrógeno, seguido de triacetoxiborohidruro sódico (0,063 g, 0,30 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml) y NaHCO3 ac. sat. (30 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (40 ml) y salmuera (40 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío para dar un sólido que se recogió en DCM (~10 ml) y metanol (~1 ml) y se concentró al vacío. El proceso se repitió solamente con DCM dos veces. El sólido de color blanquecino resultante se suspendió en DCM (5 ml) y se añadió ciclohexano (~10 ml). La suspensión se sometió a sonicación y el producto se recogió por filtración. El sólido se lavó con benzina de petróleo a 40-60 °C (5 x 10 ml), se secó al aire y posteriormente se secó a alto vacío para dar el compuesto del título (30) (0,017 g, rendimiento del 57 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,01 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,11 (s, 1H), 3,57 (s, 2H), 3,28 - 3,22 (m, 4H), 2,87 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 2,46 - 2,36 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 1,98 (t, J = 10,6 Hz, 2H), 1,76-1,58 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,52 min; m/z 500,1 [M+H]+.
Ejemplo 31: 2-(2-(2-(2-((4-(1-Etilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (31)
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Se añadió acetaldehído (84,5 pl, 1,51 mmol) a una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (I1) (91,0 mg, 0,188 mmol) en metanol anhidro (10 ml) en una 5 atmósfera de nitrógeno. Después, se añadió en una porción triacetoxiborohidruro sódico (0,638 g, 3,01 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (35 ml) y NaHCO3 ac. sat. (40 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 35 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (30 ml) y salmuera (30 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se disolvió en DCM (5 ml) y MeOH (2 ml). Se añadió 10 ciclohexano (20 ml), y el disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un sólido de color castaño que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C; después MeOH al 0-75 % en EtOAc) para producir un sólido de color blanco. El sólido se suspendió en DCM (5 ml) y ciclohexano (20 ml) y se filtró para proporcionar el compuesto del título (31) (40,7 mg, 42 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,13 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 7,66 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,43 (s, 15 1H), 7,26 - 7,12 (m, 6H), 6,92 (s, 1H), 3,50 (s, 2H), 3,14 - 3,06 (m, 2H), 3,05 - 2,92 (m, 4H), 2,43 (tt, J = 11,7, 3,7 Hz,
1H), 2,33 (c, J = 7,2 Hz, 2H), 1,93 (td, J = 11,5, 2,1 Hz, 2H), 1,73 (dd, J = 11,8, 2,0 Hz, 2H), 1,62 (ddd, J = 24,8, 12,4, 3,6 Hz, 2H), 1,01 (t, J = 7,2 Hz, 3H); Métodos de LCMS C: tr 4,90 min; m/z 512 [M+H]+.
Ejemplo 32: 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida 20 (32)
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(a) (1-Oxipiridin-3-il)acetonitrilo (I115)
5 Se añadió peróxido de hidrógeno al 30 % (12 ml) a una solución de 3-piridilacetonitrilo (7,50 g, 63,5 mmol) en ácido acético (40 ml) y la mezcla se calentó a 95 °C durante 20 horas. Después, la mezcla de reacción se enfrió y se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. Después, se añadió agua (35 ml) y la solución se concentró a presión reducida. Se añadió agua (2 x 100 ml) al residuo y la solución se concentró a presión reducida. El agua residual se eliminó por destilación azeotrópica usando tolueno (2 x 100 ml) para producir el compuesto del título (I115) (8,3 g, 97 10 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido que se usó sin purificación adicional.
(b) (2-Cloropiridin-3-il)acetonitrilo (I16)
Se añadió lentamente (1-oxipiridin-3-il)acetonitrilo (I115) (4,00 g, 29,8 mmol) a una solución agitada de POCb (50 15 ml). La mezcla se calentó a 80 °C en aumentos de 5 - 7 °C cada 10-15 minutos. Después, la reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. El exceso de POCI3 se eliminó por destilación, y el residuo de color pardo se vertió cuidadosamente en agua fría (200 ml). Después, se añadió cuidadosamente una solución saturada de NaHCO3 (300 ml). Se añadió en porciones NaHCO3 sólido a la mezcla acuosa, hasta que se detuvo el desprendimiento de gas. La capa acuosa se separó en dos porciones (250 ml cada vez) y cada porción se extrajo con EtOAc (3 x 100 ml). Las 20 capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (200 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó, y el residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice en columna (EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo) para proporcionar una mezcla de dos compuestos isoméricos. La mezcla se purificó de nuevo por cromatografía en columna sobre gel de sílice (éter dietílico al 0-40 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el
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compuesto del título (I116) (0,932 g, 20 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 8,41 (dd, J = 4,8, 1,8 Hz, 1H), 7,90 (ddt, J = 7,6, 1,7, 0,7 Hz, 1H), 7,34 (dd, J = 7,6, 4,8 Hz, 1H), 3,87 (s, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,50 min; m/z 153 [M+H]+.
(c) Ácido (2-cloropiridin-3-il)acético (I117)
Se añadió una solución del 15 % p/p NaOH (15 ml) a (2-cloropiridin-3-il)acetonitrilo (I116) (0,932 g, 6,11 mmol). La mezcla se calentó a reflujo durante 35 minutos y después se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla se enfrió adicionalmente a 0 °C y después se acidificó con HCl conc. (aprox. 5 ml) a pH 1. La suspensión se dejó en reposo durante 1 hora en un baño de hielo. El precipitado se filtró y se lavó con propan-2-ol frío (3 x 15 ml) para producir el compuesto del título (I117) (1,05 g, 100 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d6- DMSO) 5 12,63 (s, 1H), 8,32 (dd, J = 4,8, 1,9 Hz, 1H), 7,86 (dd, J = 7,5, 1,9 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 7,5, 4,8 Hz, 1H), 3,75 (s, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,06 min; m/z 172 [M+H]+.
(d) 2-(2-cloropiridin-3-il)acetato de metilo (I118)
Se añadió cloruro de acetilo (0,651 ml, 9,16 mmol) a una suspensión de ácido (2-cloropiridin-3-il)acético (I117) (1,048 g, 6,108 mmol) en MeOH (30 ml). La mezcla se calentó a reflujo durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre DCM (100 ml) y NaHCO3 sat. (100 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (2 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (Na2SO4) y el disolvente se eliminó a presión reducida para producir un aceite que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-40 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I118) (0,863 g, 76 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 8,34 (dd, J = 4,8, 1,9 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 7,5, 1,9 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 7,5, 4,8 Hz, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,65 (s, 3H). Métodos de LCMS C: tr 5,04 min; m/z 186 [M+H]+.
(e) 2-(2-((trietilsilil)etinil)piridin-3-il)acetato de metilo (I119)
Se añadieron una solución de trietilsilil acetileno (0,579 ml, 3,23 mmol) en DMF desgasificada (3 ml) y trietilamina (0,901 ml, 6,47 mmol) a una mezcla de 2-(2-cloropiridin-3-il)acetato de metilo (I118) (0,200 g, 1,08 mmol), Pd(PPha)2Cl2 (75,6 mg, 0,108 mmol), Cu(l)l (30,8 mg, 0,162 mmol) y trifenilfosfina (42,4 mg, 0,162 mmol) en DMF desgasificada (4 ml) y la mezcla resultante se calentó a 90 °C durante 20 horas. La mezcla enfriada se diluyó con EtOAc y se pasó a través de un lecho de celite, lavando con acetato de etilo (100 ml). Se añadió agua (75 ml) al filtrado y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 75 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un residuo de color pardo oscuro. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en ciclohexano) para producir el compuesto del título (I119) (0,353 g) en forma de un aceite de color pardo que se usó sin purificación adicional; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,50 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1H), 7,62 (dd, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 7,8, 4,8 Hz, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 1,05 (t, J = 7,9 Hz, 9H), 0,75 - 0,67 (m, 6H). Métodos de LCMS C: tr 6,55 min; m/z 290 [M+H]+.
(f) 2-(2-etinilpiridin-3-il)acetato de metilo (I120)
Se añadió una solución de TBAF (solución 1 M en THF; 0,207 ml, 0,207 mmol) a una solución de 2-(2- ((trietilsilil)etinil)piridin-3-il)acetato de metilo (I119) (50,0 mg, 0,173 mmol) en THF (2 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 2 minutos a 0 °C y después se diluyó con NaHCO3 saturado (20 ml). Después, se añadió EtOAc (20 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml) después las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua 20 ml) y salmuera (20 ml) y se secaron sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó al vacío para producir un residuo oleoso de color pardo. El aceite se purificó usando cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-55 % en ciclohexano) para proporcionar el compuesto del título (I120) (25,9 mg, 86 %) en forma de un aceite de color naranja; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,52 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1H), 7,65 (dd, J = 7,9, 1,6 Hz, 1H), 7,29-7,24 (m, pico oculto por disolvente), 3,87 (s, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,35 (s, 1H). Métodos de LCMS C: tr 4,74 min; m/z 176 [M+H]+.
(g) 4-(4-((4-((3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I121)
Una solución de 2-(2-etinilpiridin-3-il)acetato de metilo (I120) (43,6 mg, 0,249 mmol) en dimetilformamida (2 ml) y trietilamina (107 pl, 0,765 mmol) se añadieron a una mezcla de 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino) fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I45) (87,4 mg, 0,191 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (13 mg, 0,019 mmol), Cu(l)l (5,5 mg, 0,029 mmol) y trifenilfosfina (7,5 mg, 0,017 mmol) en dimetilformamida (2 ml). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 10 minutos. La mezcla enfriada se diluyó con EtOAc y se pasó a través de un lecho de celite, lavando con acetato de etilo (100 ml). El disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se repartió entre EtOAc (70 ml) y agua (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (70 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un residuo de color pardo
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oscuro. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-40 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir el compuesto del título (I121) (81,5 mg, 72 %) en forma de un aceite de color pardo viscoso que se usó sin purificación adicional.
(h) 4-(4-((4-(2-(3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I122)
Se añadió una solución de 4-(4-((4-((3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etinil)-5-(trifluorometil)pi rimidin-2- il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I121) (81,5 mg, 0,137 mmol) en DMF (10 ml) a una solución de Pd al 10 %/C (170 mg) en DMF (7 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una capa de celite, lavando con EtOAc (100 ml). El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un aceite que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-40 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir el compuesto del título (I122) (61,4 mg, 75 %) en forma de un aceite viscoso; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,51 (s, 1H), 8,46 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,56-7,50 (m, 3H),
7.49 (s, 1H), 7,19 - 7,14 (m, 2H), 7,12 (dd, J = 7,7, 4,8 Hz, 1H), 4,23 (s a, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,40 - 3,33 (m, 2H), 3,32 - 3,23 (m, 2H), 2,80 (t, J = 12,1 Hz, 2H), 2,62 (tt, J = 12,1, 3,5 Hz, 1H), 1,81 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 1,651,55 (m, 2H), 1,48 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,01 min; m/z 622 [M+Na]+, 600 [M+H]+, 544 [M-tButil+2H]+.
(i) 2-(2-(2-(2-((4-( 1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetato de litio (I123)
Se añadió UOH.H2O (19,1 mg, 0,455 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I122) (90,9 mg, 0,152 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y metanol (1 ml). La mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 20 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml) y NaHCO3 ac. sat. (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml), las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título (I123) (81,3 mg, 91 %) en forma de un aceite viscoso amarillo pálido.
(j) 4-(4-((4-(2-(3-(2-amino-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I124)
Se añadieron 1-hidroxibenzotriazol (20,4 mg, 0,151 mmol), EDCI (29,0 mg, 0,151 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (0,192 ml, 1,10 mmol) a una solución de 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetato de litio (I123) (81,3 mg, 0,137 mmol) en THF seco (6 ml) y DMF seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió en una porción carbonato de amonio (106 mg, 1,10 mmol) a la mezcla agitada de reacción después de 10 minutos. La reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 18 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml) y se lavó con NaHCO3 saturado (50 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un aceite de color amarillo pálido. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-100 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para proporcionar el compuesto del título (I124) (66,3 mg, 83 %) en forma de un semi-sólido de color blanco; 1H RMN (400 Mhz, CDCh) 5 8,50 (d, J = 0,4 Hz, 1H),
8.49 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,54 (dd, J = 7,7, 1,7 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,19 - 7,13 (m, 3H), 5,40-5,35 (m, 2H), 4,23 (s, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,41 - 3,35 (m, 2H), 3,32 - 3,24 (m, 2H), 2,80 (t, J = 12,6 Hz, 2H), 2,63 (tt, J = 12,0, 3,4 Hz, 1H), 1,81 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 1,65 - 1,57 (m, picos ocultos por disolvente), 1,48 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,25 min; m/z 607 [M+Na]+, 585 [M+H]+, 529 [M-tButil+2H]+.
(k) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida (32)
Se añadió ácido trifluoroacético (0,337 ml, 4,40 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(3-(2-amino-2-oxoetil)piridin-2- il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I124) (64,3 mg, 0,110 mmol) en DCM seco (15 ml) en una atmósfera de nitrógeno y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre EtOAc (40 ml) y NaOH 2 M (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (40 ml) y salmuera (40 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida para dar un sólido de color amarillo que se suspendió en DCM (5 ml) y ciclohexano (15 ml). El precipitado se filtró para proporcionar el compuesto del título (32) (35,5 mg, 53 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,05 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,36 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,62 - 7,55 (m, 3H), 7,53 (s, 1H), 7,18 (dd, J = 7,6, 4,8 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,00 (s, 1H), 3,53 (s, 2H), 3,24 (s, 4H), 3,02 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 2,61 - 2,52 (m, picos ocultos por disolvente), 1,67 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 1,49 (cd, J = 12,2, 3,8 Hz, 2H). Métodos de LCMS C: tr 1,50, 1,59 min; m/z 485 [M+H]+.
Ejemplo 33: 2-(2-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-
il)acetamida (33)
imagen90
5
Se añadió formaldehído (37 % en peso en H2O; 16,5 pl, 0,222 mmol) a una suspensión de 2-(2-(2-(2-((4-(piperidin-4- il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida (32) (22 mg, 0,044 mmol) en metanol anhidro (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Después, se añadió en una porción triacetoxiborohidruro sódico (94,0 mg, 0,444 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el 10 residuo se diluyó con EtOAc (25 ml) y NaHCO3 ac. sat. (25 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo
con EtOAc (2 x 25 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (25 ml) y salmuera (25 ml) y se
secaron sobre Na2SO4. El disolvente se eliminó a presión reducida para producir un sólido de color blanco. El sólido se suspendió en DCM (5 ml) y ciclohexano (20 ml) y se filtró para proporcionar el compuesto del título (33) (16 mg, 72 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, cfe-DMSO) 5 10,06 (s, 1H), 8,64 (s, iH), 8,36
15 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,59 (dd, J = 7,7, 1,2 Hz, 3H), 7,53 (s, 1H), 7,20 - 7,13 (m, 3H), 7,00 (s, 1H), 3,53 (s, 2H),
3,24 (s, 4H), 2,91 (d, 10,6 Hz, 2H), 2,47-2,39 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,12-1,99 (m, 2H), 1,78-1,59 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr 1,51, 1,579 min; m/z 499 [M+H]+.
Ejemplo 34: 2-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)isonicotinamida 20 (34)
imagen91
(a) 2-((trimetilsilil)etinil)isonicotinato de metilo (I125)
5 Se pusieron 2-bromonicotinato de metilo (1,00 g, 4,63 mmol), PdCÍ2(PPh3)2 (162 mg, 0,231 mmol) trifenil fosfina (60,7 mg, 0,231 mmol) y Cu(l)l (44,1 mg, 0,231 mmol) en un matraz de reacción secado al horno en una atmósfera de nitrógeno y después se añadieron TMS-acetileno (785 pl, 5,55 mmol), THF desgasificado y seco (5 ml) y trietilamina (5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y después se evaporó a presión reducida para dar un residuo de color negro que se adsorbió sobre gel de sílice. El análisis por cromatografía 10 (SiO2, acetato de etilo al 0-20 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) dio el compuesto del título (I125) (708,6 mg, rendimiento del 66 %) en forma de un líquido de color oscuro; 1H rMn (400 MHz, CDCh) 5 8,75 - 8,61 (m, 1H), 7,98 (dd, J = 1,0, 0,4 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 5,1, 1,6 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 0,26 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,38 min; m/z 234,1 [M+1]+.
15 (b) 2-etinilisonicotinato de metilo (I126)
A una solución de 2-((trimetilsilil)etinil)isonicotinato de metilo (1125) (8,00 g, 34,2 mmol) en THF (150 ml) se le añadió TBAF (1,0 M en THF) (51,4 ml, 51,4 mmol) a 0 °C. La solución resultante se dejó calentar a temperatura ambiente a
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
la que la agitación se continuó durante 1 hora. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y se lavó con NaHCÜ3 al 10 % (50 ml). La capa orgánica se secó (MgSÜ4) y se evaporó a presión reducida para dar un residuo de color pardo oscuro/negro. El residuo se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía (SiÜ2, acetato de etilo al 0-20 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I126) (4,5 g, 81 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CüCl3) 5 8,73 (dd, J = 5,1, 0,9 Hz, 1H), 8,01 (dd, J= 1,5, 0,9 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 5,1, 1,6 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,22 (s, 1H).
(c) 2-(2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)vinil)isonicotinato de (E)-metilo (I127)
Una solución de 2-etinilisonicotinato de (E)-metilo (I126) (100 mg, 0,621 mmol), Cu(l)CI (1,84 mg, 0,0186 mmol), NaOtBu (3,6 mg, 0,037 mmol), bispinacolatodiboro (189 mg, 3,74 mmol), Xantphos (10,7 mg, 0,0937 mmol) y metanol (40 mg, 1,2 mmol) en THF (5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción en bruto se adsorbió sobre gel de sílice y los disolventes se eliminaron por evaporación a presión reducida. La purificación por cromatografía (SiÜ2, acetato de etilo al 0-20 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) dio el compuesto del título (I127) (141,3 mg, 79 %) en forma de un líquido amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,70 (dd, 5,0, 0,6 Hz, 1H), 7,93-7,90 (m, 1H), 7,67 (dt, J = 4,4, 2,2 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 1,27 (s, 12H).
(d) 2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)vinil)isonicotinato de (E)- metilo (I128)
Se añadió una solución acuosa 2,0 M de Na2CÜ3 (0,3 ml) a una solución de 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pi rimidin- 2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I45) (100 mg, 0,103 mmol), 2-(2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)vinil)isonicotinato de (E)-metilo (I127) (76 mg, 0,26 mmol), Pd(PPh3)4 (75 mg, 0,66 mmol), LiCI (28 mg, 0,66 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla resultante se agitó en atmósfera de nitrógeno a 90 °C durante 16 horas. La mezcla en bruto se evaporó a presión reducida y se adsorbió sobre gel de sílice. El análisis por cromatografía (SiÜ2, acetato de etilo al 0-50 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) dio el compuesto del título (I128) (110 mg, 86 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,84 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,14 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,88 (dd, J = 15,1, 1,6 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 4,9, 1,5 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,25 (m, 1H), 4,33-4,19 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 2,82 (m, 2H), 2,67 (m, 1H), 1,85 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,64 (dd, J = 12,5, 4,0 Hz, 2H), 1,59 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,93 min; m/z 584,21 [M+1]+,
582,1 [M-1]-, 528,1 [M-tBu+2]+.
(e) 2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)isonicotinato de metilo (I129)
Una suspensión de 2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)vinil)isonicotinato de (E)-metilo (I128) (110 mg, 0,188 mmol) y Pd al 10 %/C (20 mg) en MeÜH (10 ml) se agitó en una atmósfera de hidrógeno a presión atmosférica durante 16 horas. La mezcla resultante se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida para dar el compuesto del título (I129) (70 mg, 63 %) en forma de un líquido amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCh) 5 8,68 (dd, J = 5,1,0,7 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,66 (dd, J= 5,1, 1,5 Hz, 1H), 7,547,47 (m, 3H), 7,18 (t, J= 5,5 Hz, 2H), 4,22 (s, 2H), 3,93 (d, J = 3,9 Hz, 3H), 3,43 - 3,35 (m, 2H), 3,34 - 3,26 (m, 2H),
2.80 (t, J = 12,1 Hz, 2H), 2,63 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 1,82 (d, J = 12,3 Hz, 2H), 1,67-1,54 (m, 2H), 1,48 (d, J = 7,1 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 6,75 min; m/z 586,1 [M+1]+, 584,2 [M-1]-.
(f) 4-(4-((4-(2-(4-carbamoilpiridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc- butilo (I130)
Una solución de 2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)fenil)amino)- 5-(trifluorometil)pirimidin-4-
il)etil)isonicotinato de metilo (I129) (70,0 mg, 0,120 mmol), y LiÜH.H2Ü (15 mg, 0,36 mmol) en THF (5 ml), agua (1 ml) y MeÜH (0,5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Los volátiles se evaporaron a presión reducida para dar un sólido de color amarillo que se disolvió en DMF seca (4 ml). Se añadieron HATU (133 mg, 0,350 mmol), DIPEA (60 pl, 0,034 mmol) y cloruro de amonio (187 mg, 3,50 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se diluyó con acetato de etilo. La solución resultante se lavó con NaHCÜ3 acuoso al 10 %, después la capa orgánica se secó (MgSÜ4) y los volátiles se eliminaron por evaporación a presión reducida. El residuo se adsorbió sobre gel de sílice y se purificó por cromatografía (SiÜ2 acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I130) (50 mg, 50 %) en forma de un sólido incoloro; 1H RmN (400 MHz, CDCh) 5 8,67 (dd, J= 5,1, 0,7 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,44 (dd, J = 5,1, 1,6 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,37-6,20 (m, 1H), 6,18-5,96 (m, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,34 (tt, J = 10,4, 5,0 Hz, 4H), 2,63 (s, 1H),
1.81 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,73 (s, 2H), 1,60 (dd, J = 12,7, 4,1 Hz, 2H), 1,48 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,04 min; m/z 571,2 [M+1C, 569,2 [M-1]', 515,2 [M-t-Bu+2]+.
(g) 2-(2-(2-((4-(Piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)isonicotinamida (I131)
Se añadió ácido trifluoroacético (100 pl, 0,131 mmol) a una solución de 4-(4-((4-(2-(4-carbamoilpiridin-2-il)etil)-5-
5
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20
25
(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (I130) (50 mg, 88 pmol) en DCM (4 ml) y la mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía (SiO2, MeOH al 0-50 %/DCM) para dar el compuesto del título (I131) (28 mg, 68 %) en forma de un sólido incoloro, 1H RMN (400 MHz, d^MeOD) ó 8,55 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,61 (dd, J= 5,2, 1,3 Hz, 1 H), 7,53 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 3,46 (d, J = 12,7 Hz, 2H),
3,37 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,27 (dt, J = 3,2, 1,6 Hz, 5H), 3,18 - 3,04 (m, 2H), 2,83 (ddd, J = 12,1, 8,7, 3,6 Hz, 1H), 2,03 (d, J = 13,8 Hz, 2H), 1,88 (ddd, J= 16,7, 13,6, 3,8 Hz, 2H). Método LCMS C; tr 4,44 min; m/z 471,1 [M+1]+, 469,1 [M- 1]-.
(h) 2-(2-(2-((4-(1-Metilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)isonicotinamida (34)
Se añadió una solución de formaldehído (ac. al 37 %; 24 pl, 0,30 mmol) a una solución de 2-(2-(2-((4-(Piperidin-4- il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)isonicotinamida (I131) (28 mg, 60 pmol) en MeOH seco (2 ml). Se añadió triacetoxiborohidruro sódico (63 mg, 0,30 mmol) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió acetato de etilo y la solución resultante se adsorbió sobre gel de sílice. El análisis por cromatografía (SiO2, MeOH al 0-50 %/DCM) dio el compuesto del título (34) (14 mg, 49 %) en forma de un sólido incoloro; rH RMN (400 MHz, d^-MeOD) ó 8,58 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,61 (dd, J = 5,2, 1,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 3,51 - 3,31 (m, 4H), 2,99 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 2,56-2,44 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,15 (d, J = 2,8 Hz, 2H), 1,87 - 1,70 (m, 4H). Métodos de LCMS C: tr
4,50 min; m/z 485,1 [M+1]+, 483,1 [M-1]-.
Ejemplo 35: 2-(2-(2-(2-((4-(pirrolidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (35)
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(a) 4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (I132 e I133)
A una solución agitada de bis(trimetilsilil) amida sódica (1,01 g, 5,50 mmol) en THF (20 ml) se le añadió gota a gota una solución de 3-oxopirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (0,925 g, 5,00 mmol) en THF (7 ml) a -78 °C. Después de agitarse durante 15 minutos, se añadió N-fenil-bis(trifluorometanosulfonimida) (1,79 g, 5,00 mmol) en THF (12 ml) y la mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 3 horas más, y después a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactivó con NaHCO3 acuoso al 10 % y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano al 20-80 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar una mezcla de los compuestos del título (I132 e I133) (1,44 g, 90 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCtj) 5 8,65 (s, 1H), 5,66 (d, J = 17,5 Hz, 2H), 4,21 - 4,09 (m, 8H), 1,41 (s, 18H).
(b) 4-(4-nitrofenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (I134 e I135)
Se añadió una solución acuosa 2 M de Na2CO3 (5,70 ml, 9,09 mmol) a una mezcla desgasificada de ácido 4- nitrofenilborónico (0,909 g, 1,52 mmol, 1,2 equiv.), 4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)-2,3-dihidro-1 H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (I34 e I35) (1,44 g, 4,54 mmol), LiCI (0,385 g, 9,08 mmol) y Pd(PPh3)4 (1,57 g, 1,36 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se agitó a 80-90 °C durante 4 horas. La mezcla resultante se disolvió en EtOAc (70 ml) y la capa orgánica se lavó con H2O (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secó sobre Na2SO4 para producir un aceite de color rojo oscuro. El aceite se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar una mezcla de los compuestos del título (I134 e I135) (0,442 g, 34 %) en forma de un sólido de color amarillo claro; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,41 - 8,32 (m, 2H), 8,24 -8,19 (m, 2H),
7,81 - 7,73 (m, 2H), 7,52 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz), 6,43 - 6,33 (m, 1H), 4,58 - 4,48 (m, 4H), 4,42 - 4,31 (m, 4H), 1,52 (s, 9H), 1,51 (s, 9H).
(c) 3-(4-aminofenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (I136)
Una solución de 4-(4-nitrofenil)-2,3-dihidro-1 H-pirrol-1 -carboxilato de terc-butilo (I134 e I135) (0,442 g, 1,52 mmol) en EtOH (10 ml) y DMF (10 ml) se añadió a una solución de Pd al 10 %/C (255 mg) en DmF (10 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una capa de celite y se lavó a través de con EtOAc (130 ml). El disolvente se eliminó al vacío para producir un aceite de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I136) (0,307 g, 77 %) en forma de un aceite de color pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 7,02 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,64 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,85 - 3,49 (m, 4H), 3,43 - 3,29 (m, 1H), 3,29-3,15 (m, 2H), 2,18 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 1,97-1,85 (m, 1H), 1,47 (d, J = 4,7 Hz, 9H). Métodos de LCMS C: tr 4,88 min; m/z 163,2 [M-Boc +H]+.
(d) 3-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (I137)
Se añadió cloruro de cinc (1,0 M en Et2O) (1,40 ml, 1,40 mmol) a una solución de 2,4-dicloro-5- (trifluorometil)pirimidina (180 pl, 1,29 mmol) en 1:1 de DCE/t-BuOH (10 ml) a 0 °C en una corriente de gas nitrógeno. La mezcla se agitó durante 1 hora a 0 °C y después se añadió 3-(4-aminofenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (I136) (0,307 g, 1,17 mmol) en 1:1 de DCE/tBuOH (10 ml). A continuación, se añadió gota a gota una solución de NEt3 (0,180 ml, 1,29 mmol, 1,1 equiv.) en 1:1 de DCE/t-BuOH (5 ml) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó vigorosamente durante 30 minutos más a 0 °C después de la adición final y después a temperatura ambiente durante 16 horas. El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un residuo oleoso de color pardo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir un sólido de color amarillo pálido. El sólido se suspendió en MeOH (15 ml) y agua (15 ml). El precipitado se filtró para proporcionar el compuesto del título (I137) (0,449 g, 87 %) en forma de un sólido de color amarillo pálido; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5 8,56 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,26 (s, 2H), 3,92 - 3,73 (m, 1H), 3,69 - 3,51 (m, 1H), 3,48-3,22 (m, 3H), 2,26 (s, 1H), 2,03 - 1,90 (m, 1H), 1,48 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,68 min; m/z 443,0 [M+H]+, 441,1 [M-H]-.
(e) 3-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (I138)
Una solución de 2-etinilbenzoato de metilo (I4) (0,21 g, 1,2 mmol) en dimetilformamida (3 ml) y trietilamina (0,57 ml,
4,1 mmol) se añadieron a una mezcla de 3-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pirrolidina-1- carboxilato de terc-butilo (I137) (0,45 g, 1,0 mmol, 1 equiv.), Pd(PPh3)2Cl2 (71 mg, 0,10 mmol), Cu(l)l (30 mg, 0,15 mmol) y trifenilfosfina (40 mg, 0,15 mmol, 0,15) en dimetilformamida (4 ml). La mezcla de reacción se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 15 minutos. La reacción se enfrió y la mezcla se diluyó con EtOAc, se pasó a través de un lecho de celite y se lavó a través de con EtOAc (60 ml). Se añadió agua (50 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secaron sobre Na2SO4. Después de la filtración, el disolvente se eliminó al vacío para dar un residuo de color pardo oscuro. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-20 y después al 20-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título
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(I138) (0,53 g, 90 %) en forma de un aceite de color naranja; 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 8,62 (s, 1H), 7,68 (dd, J = 7,7, 1,0 Hz. 1H), 7,58 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,47-7,41 (m, 2H), 7,39 - 7,30 (m, 4H), 7,24 (s, 1H), 3,96 (s, 2H), 3,87 - 3,75 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,68 - 3,52 (m, 1H), 3,48 - 3,22 (m, 3H), 2,30-2,21 (m, 1H), 2,02 - 1,94 (m, 1H), 1,49 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,82 min; m/z 581,1 [M+H]+.
(f) 3-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc- butilo (I139)
Se añadió una solución de 3-(4-((4-((2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenil)eti nil)-5-(trifluorometil)pi rimidin-2- il)amino)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (I138) (0,527 g, 0,906 mmol) en EtOH (10 ml) a una solución de Pd al 10 %/C (0,500 g) en DMF (6 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas en una atmósfera de hidrógeno. La reacción se filtró a través de una capa de celite y se lavó a través de con EtOAc (80 ml). El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un aceite de color amarillo. Éste se recogió en DMF/EtOH (1:1, 10 ml) y se añadió una suspensión de Pd al 10 %/C (0,500 g, 1 equiv.) en DMF. La reacción se agitó en una atmósfera de H2 a temperatura ambiente durante 24 horas más. La reacción se filtró a través de una capa de celite y se lavó a través de con EtOAc (80 ml). El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un aceite de color amarillo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-45 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para producir el compuesto del título (I139) (0,126 g, 24 %) en forma de un aceite de color pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,54 (s, 1H), 7,58 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,30 - 7,17 (m, 6H), 3,91 - 3,72 (m, 2H), 3,75 (s, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,66 - 3,52 (m, 1H), 3,47 - 3,21 (m, 3H), 3,17 - 3,04 (m, 4H), 2,23 (d, J = 20,4 Hz, 1H), 1,97 (dd, J = 21,1, 10,2 Hz, 1H), 1,48 (d, J = 3-1 Hz, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,91 min; m/z 585 [M+H]+, 607 [M+Na]+.
(g) 2-(2-(2-(2-((4-( 1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio (I140)
Se añadió LiOH.H2O (0,015 g, 0,65 mmol, 3 equiv.) a una solución de 3-(4-((4-(2-(2-metoxi-2-oxoetil)fenetil)-5- (trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (I139) (0,13 g, 0,22 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y metanol (1 ml) y la mezcla resultante se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 70 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se diluyó con EtOAc (50 ml) y NaHCO3 acuoso saturado (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml), se secaron sobre MgSO4 y el disolvente se eliminó al vacío para dar el compuesto del título (I140) (0,12 g, 99 %) en forma de un aceite de color amarillo pálido; Métodos de LCMS C: tr 6,56 min; m/z
571,1 [M-Li+2H]+, 515,1 [M-Li-tButil+2H]+, 471,1 [M-Li-Boc+2H]+, 569,2 [M-Li-H]'.
(h) 3-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc- butilo (I141)
Se añadieron 1-hidroxibenzotriazol (38,0 mg, 0,28 mmol), EDCI (50,0 mg, 0,32 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (187 ul, 1,08 mmol) a una solución de 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)fenil)amino)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetato de litio (I140) (124 mg, 0,215 mmol) en THF seco (6 ml) y DMF seca (1 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió en una porción carbonato de amonio (101 mg, 1,08 mmol) a la mezcla de reacción agitada después de 10 minutos y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 23 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y la solución residual se diluyó con EtOAc (65 ml) y se lavó con NaHCO3 saturado (65 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 ml) y se secaron sobre MgSO4. El disolvente se eliminó al vacío para proporcionar un aceite de color amarillo pálido. El material en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (EtOAc al 0-80 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I141) (76 mg, 62 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCla) 5 8,54 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,56 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,29 - 7,20 (m, 4H, oculto por disolvente), 5,36 (d, J = 21,2 Hz, 2H), 3,89-3,76 (m, 1H), 3,66 - 3,51 (m, 2H), 3,45-3,27 (m, 4H), 3,15 - 3,04 (m, 4H), 2,29-2,25 (m, 1H), 2,01-1,94 (m, 1H), 1,49 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 6,37 min; m/z 570,1 [M+H]+, 568,2 [M-H]-.
(i) 2-(2-(2-(2-((4-(Pirrolidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (35)
A una solución de 3-(4-((4-(2-(2-amino-2-oxoetil)fenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)pi rrolidina-1- carboxilato de terc-butilo (I141) en DCM (20 ml) se le añadió TFA (4,0 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El disolvente se eliminó al vacío y el residuo se recogió en EtOAc (10 ml) y NaOH 2 M (10 ml). La capa orgánica se extrajo con EtOAc (2 x 10 ml), y las capas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml) y se secaron sobre MgSO4, El disolvente se eliminó al vacío para dar un sólido de color amarillo. El sólido se suspendió en ciclohexano y se filtró para dar un sólido de color pardo (42 mg). El producto se purificó adicionalmente por RP-HPLC (Waters, C^CN al 0-80 % en H2O durante 20 minutos a un caudal de 10 ml/min). Las fracciones que contenían producto se basificaron (pH 10) con NaOH 2 M y se extrajeron con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4) y el disolvente se eliminó al vacío para dar el compuesto del título (35) (17 mg, 27 %) en forma de un aceite de color pardo; 1H RMN (400 MHz, d4-MeOD) 5 8,56 (d, J = 0,6 Hz, 1H), 7,73 - 7,68 (m, 2H), 7,33 - 7,16 (m, 6H), 3,67 (s, 2H), 3,60 - 3,46 (m, 2H), 3,42 - 3,33 (m, 2H), 3,14 (m, 5H), 2,45 (dtd, J = 10,1, 7,1, 3,4 Hz, 1H), 2,18-2,05 (m, 1H); Métodos de LCMS C: tr 4,84 min; m/z 470,1 [M+H]+.
Ejemplo 36:
il)etil)fenil)acetamida (36)
2-(2-(2-(2-((4-((4-Metilpiperazin-1-il)metil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-
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Se disolvió 2-(2-(2-(2-((4-(piperazin-1-ilmetil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)fenil)acetamida (25) (11 mg, 0,022 mmol) en metanol (1 ml). Se añadió una solución al 37 % de formaldehído (7 pl) seguido de triacetoxiborohidruro sódico (24 mg, 0,11 mmol). La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante dos horas y después se concentró. El residuo se suspendió en hidróxido sódico al 10 % (1 ml) y salmuera (2 ml) y 10 después se extrajo con acetato de etilo (5 x 2 ml). Las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico, se evaporaron y el residuo se evaporó en DCM para dar el compuesto del título (36) (10,3 mg, rendimiento del 94 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, d4- MeOD) 5 8,46 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 7,60 - 7,54 (m, 2H), 7,20 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,18 - 7,13 (m, 1H), 7,13 - 7,07 (m, 3H), 3,57 (s, 2H), 3,46 (s, 2H), 3,06 (cd, J = 6,8, 3,1 Hz, 2H), 3,01 - 2,94 (m, 2H), 2,54 (s, 8H), 2,29 (s, 3H). Métodos 15 de LCMS C: 4,70 min; m/z 513,2 [M+H+]; m/z 511,0 [M-H]-.
Ejemplo 37: 3-(2-(2-((4-(Piperazin-1-ilmetil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzamida (37)
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Se disolvió ácido 3-yodobenzoico (2,00 g, 8,06 mmol) en THF (20 ml) y después se añadieron cloruro de oxalilo (1,4 ml, 16 mmol) y DMF (0,05 ml), y la mezcla resultante se agitó durante 2 horas. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se disolvió en THF (20 ml) y amoniaco acuoso concentrado (10 ml). Después de 60 minutos, se añadió agua (200 ml) y después de 30 minutos más, el precipitado resultante se recogió por filtración y se secó al aire para dar el compuesto del título (I142) (1,97 g, rendimiento del 99 %) en forma de un polvo de color blanco; 1H RMN (400 MHz, c4-MeOH) 5 8,23 (t, J = 1,8 Hz, 1H), 7,90 (ddd, J = 7,9, 1,7, 1,0 Hz, 1H), 7,86 (ddd, J = 7,8, 1,7, 1,0 Hz, 1H), 7,24 (t, J = 7,8 Hz, 1H). Métodos de LCMS C: tr 5,29 min, m/z 248,1 [M+H]+.
(b) 3-((Trimetilsilil)etinil)benzamida (I143)
Se cargaron 3-yodobenzamida (I142) (1,00 g, 4,05 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (ll) (0,142 g, 5 % en moles), yoduro de cobre (l) (0,077 g, 10 % en moles), DMF (4 ml) y diisopropilamina (12 ml) en un tubo para microondas. La mezcla se desgasificó durante diez minutos con nitrógeno, después se añadió trimetilsililacetileno (0,69 ml, 4,9 mmol) y la mezcla resultante se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 15 minutos. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se cromatografió (Biotage Isolera, cartucho de sílice de 40 g, acetato de etilo al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I143) (0,569 g, rendimiento del 65 %) en forma de un sólido de color pardo; 1H RMN (400 MHz, CDCy 5 7,88 (td, J = 1,8, 0,5 Hz, 1H), 7,78 (ddd, J = 7,8, 1,8, 1,2 Hz, 1H), 7,63-7,59 (m, 1H), 7,40 (td, J = 7,8, 0,5 Hz, 1H), 6,05 (s a, 1H), 5,67 (s a, 1H), 0,26 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,94 min, m/z 218,2 [M+H]+.
(c) 3-Etinilbenzamida (I144)
Se disolvió 3-((trimetilsilil)etinil)benzamida (I143) (0,565 g, 2,60 mmol) en THF (33 ml), y se añadió TBAF 1 M en THF (3,25 ml, 3,25 mmol). Después de dos horas, la reacción se vertió en agua (200 ml) y la solución resultante se extrajo con éter dietílico (3 x 200 ml). Las fases de éter combinadas se lavaron con salmuera (200 ml), se secaron sobre sulfato sódico y después se evaporaron para dar el compuesto del título (I144) (0,357 g, rendimiento del 95 %) en forma de un sólido de color castaño; 1H RMN (400 MHz, cDcI3) 5 7,92 (t, J = 1,5 Hz, 1H), 7,83-7,79 (m, 1H), 7,64 (dt, J = 7,7, 1,4 Hz, 1H), 7,42 (td, J = 7,8, 0,5 Hz, 1H), 6,07 (s a, 1H), 5,77 (s a, 1H), 3,13 (s, 1H). Métodos de LCMS C: tr 4,74 min, m/z 146,2 [M+H]+.
(d) 4-(4-((4-((3-carbamoilfenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I145)
Se cargaron 4-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I94) (0,30 g, 0,64 mmol), 3-etinilbenzamida (I144) (102 mg, 0,70 mmol), yoduro de cobre (l) (12 mg, 10 % en moles), trifenilfosfina (17 mg, 10 % en moles), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (ll) (22 mg, 5 % en moles), DMF (3 ml) y trietilamina (0,443 ml, 3,18 mmol) en un tubo para microondas y se desgasificaron con nitrógeno durante cinco minutos. La mezcla resultante se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 15 minutos y después se enfrió a temperatura ambiente. La mezcla enfriada se añadió carbonato potásico acuoso la 5 % (150 ml) y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 150 ml). Las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con agua (200 ml) y salmuera (200 ml), se secaron y después se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía (Biotage Isolera: cartucho de sílice de 12 g, acetato de etilo al 20-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C y después metanol al 0-10 %/acetato de etilo) para dar el compuesto del título (I145) (107 mg, rendimiento del 29 %) en forma de un sólido de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, de-DMSO) 5 10,46 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,09 (t, J = 1,7 Hz, 1H), 8,04 (dt, J = 7,9, 1,4 Hz, 1H), 7,77 (dt, J = 7,8, 1,3 Hz, 1H), 7,71 - 7,66 (m, 2H), 7,66 - 7,52 (m), 7,27 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 3,44 (s, 2H), 2,33 - 2,26 (m, 4H), 1,38 (s, 9H), Métodos de LCMS C: tr 5,06 min; m/z 581,1 [M+H]+, 525,1 [M- tBu+2H]+; m/z 579,2 [M-H]-.
(e) 4-(4-((4-(3-carbamoilfenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (I146)
Una suspensión de 4-(4-((4-((3-carbamoilfenil)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1- carboxilato de terc-butilo (I145) (105 mg, 0,18 mmol) y Pd/C (75 mg) se agitó en DMF (5 ml) y trietilamina (0,15 ml) a 30 °C en una atmósfera de hidrógeno durante 18 horas. Después de la filtración, los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se sometió a cromatografía (Biotage Isolera: cartucho de sílice de 4 g, metanol al 0-2 %/ acetato de etilo) para dar el compuesto del título (I146) (66,6 mg, rendimiento del 63 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) 5 10,20 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,74 - 7,50 (m, 8H), 7,40 - 7,35 (m, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,24 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 3,43 (s, 2H), 3,17-3,04 (m, 4H), 2,36-2,23 (m, 4H),
1,38 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr 5,05 min; m/z 585,2 [M+H]+; m/z 583,2 [M-H]-.
(f) 3-(2-(2-((4-(Piperazin-1-ilmetil)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)benzamida (37)
Se disolvió 4-(4-((4-(3-carbamoilfenetil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)bencil)piperazin-1-carboxilato de terc- butilo (I146) (65 mg, 0,11 mmol) en DCM (10 ml), después se añadió TFA (1 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se repartió entre hidróxido sódico al 10 % (25 ml) y acetato de etilo (25 ml). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 ml), después las fases combinadas de acetato de etilo se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato sódico y se
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evaporaron. El residuo se lavó con tolueno (2 x 2 ml) y DCM (2 x 0,5 ml) para dar el compuesto del título (37) (22 mg, rendimiento del 40 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, Ó6-dMsO) 5 10,19 (s, 1h), 8,66 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,74 - 7,64 (m, 3H), 7,40 - 7,35 (m, 2H), 7,35 - 7,29 (m, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,38 (s, 2H), 3,17 - 3,02 (m, 4H), 2,75 - 2,61 (m, 4H), 2,29 (s, 4H). Métodos de LCMS C: tr 4,52 min; m/z
485,1 [M+H]+; m/z 483,1 [M-H]-.
Ejemplo 38: 2-(2-(2-(2-((4-(1-Etilpiperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-
il)acetamida (38)
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Una mezcla de 2-(2-(2-(2-((4-(piperidin-4-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida (32) (74 mg, 0,15 mmol), bromoetano (12 pl, 0,16 mmol) y carbonato potásico (63 mg, 0,46 mmol) en DMF (5 ml) se agitó durante 48 h a temperatura ambiente en una atmósfera inerte. Los volátiles se eliminaron a presión reducida y el residuo se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y una solución saturada de hidrogenocarbonato sódico (20 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 30 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera y después se secaron (MgSO4). El disolvente se retiró a presión reducida y el sólido resultante se sometió a cromatografía (Biotage Isolera: columna C-18 de fase inversa, MeCN al 0-100 % en H2O) para dar el compuesto del título (38) (22 mg, 28 %) en forma de un sólido de color blanquecino; 1H RMN (400 MHz, Ó6-DMSO) 5 10,07 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,37 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,65-7,57 (m, 3H), 7,55 (s, 1H), 7,26-7,13 (m, 3H), 7,02 (s, 1H), 3,54 (s, 2H), 3,25 (s, 4H), 2,98 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,48 - 2 30 (m, 3H), 1,95 (c, J = 11,7, 11,3 Hz, 2H), 1,73 (d, J = 10,5 Hz, 2H), 1,63 (cd, J = 12,4, 3,6 Hz, 2H), 1,03 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr 4,16 min; m/z 513 [M+H]+.
Ejemplo 39: 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida (39)
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(a) 3-(4-((4-((3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I147)
Se añadió una solución de 2-(2-etinilpiridin-3-il)acetato de metilo (I120) (0,100 g, 0,571 mmol) en THF (1 ml) y trietilamina (0,199 ml, 1,43 mmol) a una mezcla de 3-(4-((4-cloro-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1- carboxilato de terc-butilo (I24) (0,217 g, 0,476 mmol), Pd(PPhs)2CI2 (0,033 g, 0,048 mmol), Cu(l)l (0,014 g, 0,071 mmol) y trifenilfosfina (0,019 g, 0,071 mmol) en dimetilformamida (3 ml). La mezcla resultante se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos, después se enfrió, se desgasificó durante 10 minutos y se calentó en irradiación de microondas a 120 °C durante 20 minutos más. La mezcla enfriada se diluyó con acetato de etilo y la solución resultante se pasó a través de un lecho de Celite, lavando con acetato de etilo (250 ml). Los volátiles se eliminaron para dar un sólido de color pardo que se sometió a cromatografía (Biotage Isolera: cartucho de sílice de 25 g, EtOAc al 0-40 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I147) (0,061 g, 22 %); 1H RMN (400 MHz, CDCls) ó 8,63 (s, 1H), 8,62 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 7,9, 1,3 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,54 (s, 1H), 7,35 (dd, J = 7,9, 4,7 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,30-4,06 (m) 3,95 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,84 - 2,58 (m, 3H), 2,06-1,98 (m), 1,70-1,66 (m, 2H), 1,69-1,51 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
(b) 3-(4-((4-(2-(3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I148)
A una solución de 3-(4-((4-((3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etinil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin- 1-carboxilato de terc-butilo (I147) (0,061 g, 0,10 mmol) en DMF (9 ml) y trietilamina (1 ml) se le añadió una suspensión de Pd/C (0,070 g) en DMF (3 ml). La mezcla resultante se agitó en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con acetato de etilo y después se filtró a través de una capa de Celite. El Celite se lavó con acetato de etilo y los filtrados se combinaron. El disolvente se eliminó al vacío para dar un aceite de color pardo que se recogió en DMF (9 ml) y trietilamina (1 ml). Se añadió una suspensión de Pd/C (0,070 g) en DMF (3 ml) y la mezcla resultante se agitó en una atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 19 horas más. La mezcla de reacción en bruto se diluyó con acetato de etilo y después se filtró a través de una capa de Celite. El Celite se lavó con acetato de etilo y los filtrados se combinaron.
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El disolvente se eliminó al vacío para dar un aceite de color pardo que se sometió a cromatografía (Biotage Isolera: cartucho de sílice de 25 g, EtOAc al 0-50 % en benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I148) (0,030 g, 49 %) en forma de un aceite de color amarillo; 1H RMN (400 MHz, CDCls) ó 8,50 (s, 1H), 8,46 (dd, J = 4,8, 1,7 Hz, 1H), 7,61 - 7,46 (m, 4H, NH), 7,19 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,12 (dd, J = 7,7, 4,8 Hz, 1H), 4,35 - 3,99 (m), 3,72 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,37 ( J = 7,4 Hz, 2H), 3,28 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,80 - 2,57 (m, 3H), 2,07 - 1,95 (m), 1,911,69 (m, 2H), 1,69 - 1,50 (m, 3H), 1,46 (s, 9H). Métodos de LCMS C: tr = 6,00 min, m/z 600,2 [M+H]+.
(c) Ácido 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-Butoxicarbonil)piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3- il)acético (I149)
A una solución de 3-(4-((4-(2-(3-(2-metoxi-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin- 1-carboxilato de terc-butilo (I148) (0,030 g, 0,050 mmol) en THF (7 ml), agua (1,5 ml) y MeOH (1 ml) se le añadió hidróxido de litio monohidrato (0,020 g, 0,48 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas y los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo (10 ml) y hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4) el disolvente se eliminó al vacío para dar el compuesto del título (I149) (0,029 g, 99 %) en forma de un sólido de color blanco. Métodos de LCMS C: tr 5,50 min, m/z = 586,1 [M+H]+, 584,2 [M-H]-.
(d) 3-(4-((4-(2-(3-(2-amino-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (I150)
Se añadieron 1-hidroxibenzotriazol (20 mg, 0,15 mmol), EDCI.HCI (32 mg, 0,17 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (45 pl, 0,26 mmol) a una solución de ácido 2-(2-(2-(2-((4-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il)fenil)amino)-5- (trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acético (I149) (29 mg, 0,051 mmol) en DMF seca (5 ml) en una atmósfera de nitrógeno. Se añadió en una porción carbonato de amonio (50 mg, 0,52 mmol) después de 10 minutos, después la agitación continuó a temperatura ambiente durante 17 horas. Se añadieron porciones adicionales de 1- hidroxibenzotriazol (20,0 mg, 0,15 mmol), EDCI.HCI (32 mg, 0,17 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (45 pl, 0,26 mmol), después se añadió en una porción carbonato de amonio (50 mg, 0,52 mmol) después de 10 min. La solución resultante se agitó a 25 °C durante 24 horas. Los volátiles se eliminaron al vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo (10 ml) e hidrogenocarbonato sódico saturado (10 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml) después las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (10 ml), se secaron (MgSO4) y se evaporaron a sequedad. El residuo se sometió a cromatografía (Biotage Isolera: cartucho de sílice de 10 g, EtOAc al 0-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C y después un cartucho de sílice 10 g, EtOAc al 50-100 %/benzina de petróleo a 40-60 °C) para dar el compuesto del título (I150) (0,023 g, 77 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, CDCls) ó 8,49 (s, 1H), 8,46 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1H), 7,77 (s a, 1H), 7,57 - 7,44 (m, 3H), 7,19 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,14 (dd, J = 7,6, 4,8 Hz, 1H), 5,63 (d, J = 22,0 Hz, 2H), 4,35 - 3,96 (m), 3,67 (s, 2H), 3,41 - 3,33 (m, 2H), 3,27 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 2,83-2,58 (m, 3H), 2,01-1,99 (m, 1H), 1,80-1,71 (m, 1H), 1,68 (s, 3H), 1,65-1,52 (m, 2H), 1,46 (s, 9H).
(e) 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida (39)
A una solución de 3-(4-((4-(2-(3-(2-amino-2-oxoetil)piridin-2-il)etil)-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il)amino)fenil)piperidin- 1-carboxilato de terc-butilo (I150) (23 mg, 0,039 mmol) en DCM (7 ml) se le añadió TFA (1 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas y después los volátiles se eliminaron al vacío. El residuo se repartió entre acetato de etilo (50 ml) y una solución 2,0 M de NaOH (50 ml), después la capa orgánica se lavó con agua (50 ml) y salmuera (50 ml) y se secó sobre MgSO4 antes de evaporarse al vacío para dar el compuesto del título (39) (18 mg, 94 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RmN (400 MHz, d4-MeOH) ó 8,52 (s, 1 H), 8,37 (dd, J = 4,9, 1,6 Hz, 1H), 7,67 (dd, 0 = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,27 - 7,17 (m, 3H), 3,68 (s, 2H),
3,39 - 3,32 (m, 2H), 3,27 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 3,21-3,14 (m, 2H), 2,82-2,70 (m, 3H), 2,07-1,94 (m, 1H), 1,94-1,83 (m, 1H), 1,80-1,64 (m, 2H). Métodos de LCMS C: tr 4,12 min, m/z = 485,1 [M+H]+, 483,1 [M-H]-.
Ejemplo 40: 2-(2-(2-(2-((4-(1-Etilpiperidin-3-il)fenil)amino)-5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-
il)acetamida (40)
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Se añadió W,W-diisopropiletilamina (18,0 pl, 0,103 mmol) a una solución de 2-(2-(2-(2-((4-(Piperidin-3-il)fenil)amino)- 5-(trifluorometil)pirimidin-4-il)etil)piridin-3-il)acetamida (39) (17 mg, 0,034 mmol) en DMF (5 ml). La mezcla se agitó durante 5 min después se añadió bromoetano (4,0 pl, 0,051 mmol) y la agitación continuó durante 24 ha temperatura ambiente. Se añadió una porción adicional de bromoetano (4,0 pl, 0,051 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas más a temperatura ambiente. Los volátiles se evaporaron al vacío y el residuo se repartió entre acetato de etilo (10 ml) y hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (10 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (10 ml) y salmuera (10 ml) y se secaron sobre Na2SÜ4. La filtración y después la eliminación del disolvente a presión reducida proporcionó un sólido de color beige que se purificó por HPLC preparativa dirigida a masas para proporcionar el compuesto del título (40) (6,2 mg, 36 %) en forma de un sólido de color blanco; 1H RMN (400 MHz, 04-MeÜH) 5 8,54 (s, 1H), 8,38 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 1H), 7,69-7,66 (m, 3H), 7,28 - 7,19 (m, 3H), 3,68 (s, 2H), 3,59 - 3,46 (m, 2H), 3,38 - 3,22 (m, parcialmente oculto por Ó4-MeÜH), 3,19 - 3,08 (m, 2H), 3,04 - 2,80 (m, 3H), 2,12 - 1,99 (m, 2H), 1,99 - 1,70 (m, 2H), 1,34 (t, J = 7,3 Hz, 3H). Métodos de LCMS C: tr = 4,20 min, m/z = 513,2 [M+H]+, 511,2 [M-H]-.
Ensayos biológicos
La actividad de los compuestos de la invención se puede perfilar usando ensayos bioquímicos y celulares.
La potencia primaria en FAK puede evaluarse utilizando un ensayo bioquímico con tecnología Alpha Screen™.
La cinética de esta unión puede estudiarse más a fondo utilizando un ensayo de tecnología de resonancia de plasmón superficial (SPR) utilizando un sensor Biacore™ S51 para establecer Ka, kd y en consecuencia Kd. Cuando las tasas de desviación de la proteína exceden en gran medida las tasas, como puede ocurrir con compuestos altamente potentes, Kd proporciona una medida precisa de la afinidad de unión proteína-ligando.
La capacidad de los compuestos de la invención para inhibir FAK dentro de las células se puede evaluar con un ensayo de tipo ELISA realizado usando un instrumento Meso Scale Discovery SECTOR Imager 6000. En este ensayo, se determina la capacidad de los compuestos de la invención para inhibir la fosforilación de Y397-FAK.
El efecto de los compuestos de la invención sobre la inhibición de la proliferación celular resultante de la actividad no FAK puede evaluarse usando un ensayo de proliferación bidimensional usando una línea celular adecuada. Esto da una indicación de las actividades inespecíficas y la toxicidad potencial derivada de ellas. Por lo tanto, la comparación de la inhibición de la fosforilación de Y397-FAK y la proliferación bidimensional da una medida de los efectos mediados por FAK específicos y también de la toxicidad potencial resultante de la actividad inespecífica.
La potencia primaria en VEGFR3 puede evaluarse utilizando un ensayo bioquímico con tecnología Alpha Screen™.
La capacidad de los compuestos de la invención para inhibir VEGFR3 dentro de las células se puede evaluar con un ensayo de tipo ELISA.
Ensayo FAK bioquímico Alpha Screen™
Se usa un péptido marcado con biotina como sustrato (secuencia de aminoácidos: Biotina-Glu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu- Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2). La enzima FAK se expresó en células de insecto como dominio catalítico (aminoácidos 411-686) marcado N-terminalmente con seis aminoácidos de histidina y una secuencia de escisión del virus del grabado del tabaco (TeV). Después de lisar las células por sonicación, la cinasa se purificó por cromatografía de afinidad con metales inmovilizados con Ni, escisión de TeV dejando una glicina N-terminal, y filtración en gel. Las reacciones de ensayo de 15 pl se realizan en placas blancas de bajo volumen de 384 pocillos de la marca Greiner. Todas las reacciones contenían HEPES 10 mM, pH 7,4, NaCl 25 mM, MgCl2 10 mM, Tween-20 al 0,01 % (v/v), Na3VÜ4 50 pM, albúmina al 0,01 % (p/v) de la clara de huevo de gallina, sustrato peptídico 111 nM, ATP 80 pM, y enzima FAK de 4 ng/reacción, omitiéndose la enzima de las reacciones de control negativo. Los compuestos se añadieron en un volumen de 100 nl de series de dilución compuestas en DMSÜ, reacciones de control positivo y negativo que recibieron el mismo volumen de DMSÜ sin compuestos. Las placas se sellaron con sellos adhesivos y se incubaron durante 90 minutos a 30 °C. Las reacciones se detuvieron con los reactivos de detección añadidos al mismo tiempo. La formación del producto se cuantificó como luminiscencia amplificada entre perlas PerkinElmer AlphaScreen™, usando perlas de donante recubiertas con estreptavidina y aceptor de antifosfotirosina (P-Tyr-100). A cada reacción se le añadieron 5 pl que contenían HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 25 mM, EDTA 100 mM, Tween-20 al 0,01 % (v/v) y 6,25 pg/ml de cada tipo de perla. Las placas se incubaron durante 6 horas antes de leerlas en un lector de placas PerkinElmer EnVision™ en modo HTS Alphascreen™. Los valores de CI50 se obtuvieron calculando el porcentaje de inhibición (% de I) para cada reacción en relación con los controles en la misma placa (% de I = (I-CN)/(CP-CN), donde CN/CP son los promedios de las reacciones negativas/positivas, respectivamente), luego ajustando los datos del % de I frente a la concentración de compuesto [I] al % de I = (A+((BA)/(1+((C/[I])AD)))) donde A es la asíntota inferior, B es la asíntota superior, C es el valor de CI50, y D es el factor de pendiente.
Resultados
Compuesto
CI50 (nM)
1
2,1
2
2,5
3
1,9
4
1,5
5
2,4
6
4,2
7
9,6
8
6,1
9
7,0
10
2,9
11
3,0
12
6,3
13
0,60
14
21
15
18
16
2,0
17
3,4
18
13
19
7,7
20
0,81
21
2,4
22
2,8
23
0,39
24
0,77
25
3,0
26
20
27
7,2
28
0,30
29
11
30
11
31
3,6
32
3,5
33
6,2
34
5,7
35
7,7
36
2,3
37
15
38
23
39
14
40
51
Ensayo FAK Biacore™ SPR
Los parámetros de unión de los compuestos se determinaron usando un sensor Biacore™ S51. Se inmovilizó un 5 anticuerpo anti-GST en un chip CM5 mediante acoplamiento de amina primaria de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
En el tampón de ejecución (HEPES 0,01 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, tensioactivo P20 al 0,005 %, MgCl2 10 mM, y DMSO al 1 %), la enzima FAK purificada fusionada con GST en el extremo N se capturó en tanto punto 1 como 2. El 10 punto 1 se bloqueó posteriormente con carga con PF-562.271 30 nM al comienzo de cada ciclo. Las series de
concentración de los compuestos de ensayo se inyectaron sobre los puntos a 25 °C. La unión específica se calculó como la diferencia entre las señales de punto 2 y 1 seguida de la corrección del disolvente. El ajuste a un modelo de unión de un sitio produjo las constantes de velocidad cinética kd y ka y la constante de unión de equilibrio Kd = kd/ka.
15 Para los compuestos con una Kd < 5 nM esperada, la enzima FAK purificada fusionada con GST N-terminal se
capturó en el punto 2 del chip recubierto con anticuerpo anti-GST solamente. Después del ciclo de inyección de un
compuesto, la superficie del chip se regeneró con glicina-HCl 10 mM, pH 2,2 antes de capturar la enzima de nuevo. Los sensogramas de unión se analizaron como se ha descrito anteriormente.
20 Resultados
Compuesto
Kd (nM)
1
0,49
2
1,5
3
0,91
4
0,73
5
0,57
6
6,3
7
2,3
8
1,0
9
7,0
10
0,96
11
0,61
12
0,92
13
0,47
14
6,1
15
5,0
16
1,3
17
3,5
5
10
15
20
25
30
18
13
19
7,8
20
0,63
21
0,44
22
0,99
23
1,3
24
0,77
25
1,1
26
14
27
16,6
28
0,94
29
12,1
30
5,7
31
1,0
32
2,5
33
5,6
34
5,0
35
1,6
36
0,48
Ensayo de biomarcador celular de plataforma MSD de inhibición de P397Y-FAK
Los compuestos de la invención pueden ensayarse para determinar la actividad in vitro en el siguiente ensayo:
Las placas de 96 pocillos (cat. n.° MA6000, Meso Scale Discovery) se recubren con 30 pl/pocillo de anticuerpo FAK monoclonal de ratón [63D5] (cat. n.° ab72140, Abcam) prediluido en PBS a una concentración de 1 mg/ml. Las placas se sellan con una película adhesiva y se incuban durante 16 horas a 4 ° C. Después, el anticuerpo se expulsa de las placas y se añaden 150 pl de Bloqueador A al 3 % [p/v] (cat. n.° R93AA-1, Meso Scale Discovery). Las placas se vuelven a sellar con una película adhesiva y se incuban a temperatura ambiente en un agitador ajustado a velocidad media durante 2 horas. Luego, las placas se lavan tres veces con una solución que contiene Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, NaCl 0,15 M y Tween-20 al 0,02 %, antes de la adición del lisado celular que se describe a continuación.
Las células se dividen 1:2 en matraces de cultivo de células T150 2 días antes del tratamiento del compuesto. El día anterior al tratamiento con compuesto, se siembran 200 pl de medio que contiene 20.000 células en todos los pocillos de las placas de microtitulación de 96 pocillos blancas, de fondo transparente, tratadas con TC y pClear (cat. n.° 655098, Greiner Bio-One), y las placas se incuban a 37 °C y CO2 al 5 % durante 36 horas. Luego se añade 1 pl/pocillo de compuesto de la serie de dilución preparada en DMSO. Los pocillos de control negativo reciben el mismo volumen de DMSO sin compuestos, y los pocillos de control positivo reciben 2 pM de un compuesto de control en el mismo volumen de DMSO. Las células se tratan durante 1 hora a 37 °C y CO2 al 5 %. Los medios/compuestos se retiran luego y se añaden 55 pl/pocillo de tampón de lisis completo enfriado con hielo. El tampón de lisis completo se prepara añadiendo 1 comprimido de inhibidor completo de fosfatasa PhosSTOP (cat. n.° 04906837001, Roche) y 1 comprimido de inhibidor de proteasa completo, Mini, sin EDTA (cat. n.° 04693159001, Roche) por 10 ml de tampón de lisis incompleto (150 ml de NaCl, Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, Triton-X 100 al 1 %). Las placas se incuban en hielo durante 30 minutos, con 30 segundos de agitación a alta velocidad cada 5 minutos. Se transfirieron 40 pl/pocillo de lisado celular a las placas de microtitulación de 96 pocillos recubiertas, bloqueadas y lavadas descritas anteriormente. Las placas de 96 pocillos se sellan con una película adhesiva y se incuban durante 16 horas a 4 ° C. Luego, las placas se lavan tres veces con una solución que contiene Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, NaCl 0,15 M y Tween-20 al 0,02 % y se aprovechan secas. Se añaden 25 pl/pocillo de solución de detección (Bloqueador A al 1 % [p/v] (cat. n.° R93AA-1, Meso Scale Discovery) en Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, NaCl 0,15 M y Tween-20 al 0,02 %, con 1:600 de anticuerpo de conejo FAK fosfo Y397 policlonal
(cat. n.° ab39967, Abcam), 1:1000 de anticuerpo anti-conejo de etiqueta sulfo (cat. n.° R32AB-1 Meso Scale Discovery) y el Bloqueador D-M reconstituido 1:40 (cat. n.° D609-0100, Rockland Immunochemicals for Researc)), y las placas se vuelven a sellar con película adhesiva y se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente en un agitador de placas ajustado a velocidad media. Luego, las placas se lavan tres veces con una solución que contiene 5 Tris-HCl 50 mM, pH 7,5, NaCl 0,15 M y Tween-20 al 0,02 % y se aprovechan secas. Luego se añaden 150 pl/pocillo
de tampón de lectura T + Tensioactivo (cat. n.° R92TC-1, Meso Scale Discovery), y los niveles de pFAK-397 se
cuantifican utilizando un instrumento Meso Scale Discovery SECTOR Imager 6000.
Los valores de CI50 se determinan calculando primero el porcentaje de inhibición (% de I) para cada lisado en
10 relación con los controles en la misma placa (% de I = (S-CP)/(CN-CP)) donde S es el resultado de la muestra, CN
es el resultado promedio de los controles negativos tratados con DMSO solamente, y CP es el resultado promedio
de los controles positivos tratados con 2 pM, % de I se representa gráficamente frente a la concentración del compuesto [I] y los datos se ajustan usando la siguiente ecuación, % de I = (A+((B-A)/(1+((C/[I])”D)))), donde A es la asíntota inferior, B es la asíntota superior, C es el valor de CI50, y D es el factor de pendiente.
15
Resultados para las células MDA-231-LNA
Compuesto
CI50 (nM) % de respuesta de control a 2 pM
1
59 114
2
58 96
3
27 99
4
140 105
5
70 109
6
440 108
7
260 114
8
124 105
9
214 105
10
37 109
11
116 112
12
522 106
13
26 111
14
572 71
16
36 111
17
60 89
18
880 98
20
13 111
21
1 87
22
23 91
23
8 120
24
12 107
25
25
85
27
341 107
28
7 86
30
281 119
5
10
15
20
25
30
35
31
39 139
33
24 84
Ensayo de proliferación celular bidimensional
Las células se dividen 1:4 en matraces de cultivo de células T75 dos días antes de la siembra de células. Se puede usa diversidad de líneas celulares de cáncer en este ensayo.
El día de la siembra celular, se añadieron 100 pl/pocillo de medio que contenía 1000-5000 células a placas de microtitulación de 96 pocillos (cat. n.° 655 180, greiner bio-ona), excepto los pocillos G12 y H12 a los que se añadieron 100 pl de medio. En una segunda placa, una sola fila de células se siembra a la misma concentración. Esta segunda placa se conoce como la placa t = 0 y se utiliza para calcular el número de células relativo antes de la adición del agente de ensayo. Las placas que contienen células se incuban durante 24 horas a 37 °C/CO2 al 5 %. Luego se añaden 0,5 pl/pocillo de compuesto de la serie de dilución preparada en DMSO. Se incluye un compuesto con potencia conocida para cada conjunto de placas para evaluar el rendimiento del ensayo. Los pocillos de control negativo reciben el mismo volumen de DMSO sin compuestos. La señal de fondo se determina a partir de pocillos que contienen solo medio. La placa t = 0 se lee mediante la adición de un reactivo a base de resazurina (véase a continuación) el día en que otras placas tienen compuesto añadido. Las placas que contienen células a las que se ha añadido el compuesto se incuban entonces durante 3 días a 37 °C y CO2 al 5 %.
Después de 3 días de incubación, la proliferación celular se cuantifica mediante la adición de 20 pl/pocillo de un reactivo a base de resazurina con una composición típica de la siguiente manera: Resazurina, Sigma# R7017-1G, 0,015 % p/v; azul de metileno, Sigma# MB-1(25 g), 0,0025 % p/v; hexacianoferrato de potasio (III), Sigma# P8131- 100G, 0,033 p/v; hexacianoferrato de potasio (II) trihidrato, Sigma# P9387-100G, 0,042 % p/v; en tampón PBS. Las placas se incuban con reactivo a base de resazurina durante 1-4 horas (37 °C, CO2 al 5 %) antes de la determinación de fluorescencia en, o cerca de (579Ex/584Em).
El porcentaje de inhibición de la proliferación (% de I) para cada pocillo tratado en relación con los controles en la misma placa se calcula usando la ecuación % de I = (S-B)-(T0-B)/(CN-B)-(T0-B) donde S es el resultado de la muestra, B es la fluorescencia de fondo, T0 es el valor t = 0 y CN es el resultado promedio de los controles negativos tratados con DMSO solamente. Para la determinación de CI50, % de I se representa gráficamente frente a la concentración del compuesto [I] y los datos se ajustan usando la siguiente ecuación, % de I = (A+((B- A)/(1+((C/[I])AD)))), donde A es la asíntota inferior, B es la asíntota superior, C es el valor de CI50, y D es el factor de pendiente.
Resultados para las células MDA-231-LNA
Compuesto
CI50 (pM)
1
1,15
2
3,21
3
1,63
4
1,73
5
1,54
6
3,91
7
1,73
8
1,16
9
3,58
10
1,43
11
2,25
12
1,70
13
>1,0
14
4,49
15
2,37
16
2,00
17
3,51
18
>5
19
1,49
20
1,46
21
0,80
22
1,07
23
4,82
24
1,70
25
2,89
26
>5,5
27
2,81
28
1,35
29
>5
30
>5
31
4,10
32
>5
33
1,52
34
7,85
35
>10
36
5,62
37
2,79
38
>10
Ensayo bioquímico de VEGFR3
Los compuestos de la invención pueden ensayarse para determinar la actividad in vitro en el siguiente ensayo: Se 5 usa un péptido marcado con biotina como sustrato (secuencia de aminoácidos: Biotina-Glu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu- Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2). El dominio citoplásmico VEGFR3 (aminoácidos 798-1298) se adquirió como proteína de fusión GST N-terminal ("la enzima"). Las reacciones de ensayo de 15 pl se realizan en placas blancas de bajo volumen de 384 pocillos de la marca Greiner. Todas las reacciones contenían HEPES 10 mM pH 7,4, MgCl2 10 mM, Tween-20 al 0,01 % (v/v), Na3VÜ4 50 pM, albúmina al 0,01 % (p/v) de la clara de huevo de 10 gallina, Ditiotreitol 1 mM, sustrato peptídico 111 nM, ATP 500 pM, y 3,8 ng/enzima de reacción, omitiéndose la
enzima de las reacciones de control negativo. Los compuestos se añadieron en un volumen de 100 nl de la serie de dilución preparada en DMSÜ, reacciones de control positivo y negativo que recibieron el mismo volumen de DMSÜ sin compuesto. Las placas se sellaron con sellos adhesivos y se incubaron durante 90 minutos a 30 grados centígrados. Las reacciones se detuvieron con los reactivos de detección añadidos al mismo tiempo como se indica 15 a continuación: La formación del producto se cuantificó como luminiscencia amplificada entre perlas PerkinElmer AlphaScreen™, usando perlas de donante recubiertas con estreptavidina y aceptor de antifosfotirosina (P-Tyr-100). A cada reacción se le añadieron 5 pl que contenían HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 25 mM, EDTA 100 mM, Tween-20 al 0,01 % (v/v) y 6,25 pg/ml de cada tipo de perla. Las placas se incubaron durante 6 horas antes de leerlas en un lector de placas PerkinElmer Envision™ en modo HTS Alphascreen™. Los valores de CI50 se obtuvieron calculando 20 el porcentaje de inhibición (% de I) para cada reacción en relación con los controles en la misma placa (% de I = (I-
CN)/(CP-CN), donde CN/CP son los promedios de las reacciones negativas/positivas, respectivamente), luego ajustando los datos del % de I frente a la concentración de compuesto [I] al % de I = (A+((BA)/(1+((C/[I])AD)))) donde
A es la asíntota inferior, B es la asíntota superior, C es el valor de CI50, y D es el factor de pendiente.
El ensayo anterior también se ejecutó en una forma ligeramente modificada en algunos casos (indicada a continuación con *). En estos casos, el dominio citoplásmico de VEGFR3 (aminoácidos 818-1177, que carece de 5 949-1002 del número de acceso P35916 de UniProt) se expresó y se purificó como proteína de fusión Hexa-His N-
terminal ("la enzima"), en lugar de usar la proteína de fusión GST N-terminal.
Resultados
Compuesto
CI50 (nM)
1
10
2
120*
3
1,1
4
4,0
5
12
6
52
7
48
8
4,8
9
2,5
10
4,0
11
2,5
12
12
13
70
14
101
15
37
16
11
17
31
18
664
19
37
20
5,0"
21
25
22
15
23
12
24
3,9
25
14
26
51
27
30
28
10
29
68
30
7
5
10
15
20
25
30
35
40
45
31
12
32
5,1*
33
16*
34
184*
35
53*
36
16
37
254
38
23*
39
23*
40
46*
Ensayo ELISA Flt4 Fosfo
Los compuestos de la invención pueden ensayarse para determinar la actividad in vitro en el siguiente ensayo:
Se sembraron células endoteliales microvasculares linfáticas dérmicas adultas humanas (HMVEC-dLyAD) (Cat. n.° CC-2810, Lonza) en placas de 12 pocillos tratadas con TC de fondo transparente (Cat- n.° 665180, Greiner Bio-One) en Endogro MV completo (Cat. n.° SCME004, Millipore) a 200.000 células/pocillo (volumen 1 ml), y las placas se incubaron a 37 °C y Co2 al 5 % durante 6 horas. Los medios se reemplazaron con Endogro Basal (Cat. n.° SCME- BM, Millipore) + BSA al 0,1 % (Cat. n.° A8412, Sigma) y las células se incubaron durante un periodo adicional (durante la noche a 37 °C y CO2 al 5 %).
Se recubrieron inmuno placas de 96 pocillos Maxisorp (cat. n.° 439454, Nunc) con 100 pl de anticuerpo total de captura de VEGFR2 (Parte n.° 841888, kit ELISA de VEGFR3/Flt4 humano total, Cat. n.° DYC3491, R&D Systems), anticuerpo de captura Fosfo VEGF R3 (Parte n.° 841885, kit ELISA de Fosfo VEGF R3/Flt4 humano, Cat. n.° DYC2724, R&D Systems). Las placas se cubrieron y se incubaron a temperatura ambiente durante la noche.
El anticuerpo de recubrimiento se retiró rápidamente y las placas se lavaron tres veces con tampón de lavado (solución salina tamponada con fosfato (NaCl 137 mM, KCl 2,7 nM, Na2HPO4 8,1 nM, KH2PO4 1,5 ml, pH 7,2-7,4), Tween 20 al 0,05 %). Luego se añadieron 300 pl de tampón de bloqueo (Tween 20 al 5 % v/v, sacarosa al 5 % p/v en PBS) a los pocillos y la placa se incubó durante 2 horas a temperatura ambiente. La solución de bloqueo se retira y las placas se lavan tres veces y se aprovechan secas.
Las series de dilución de compuesto se prepararon en Endogro basal (Cat. n.° SCME-BM, Millipore) + BSA al 0,1 % (Cat. n.° A8412, Sigma) con concentración de DMSO al 0,1 % constante. Se añadieron 439 pl de muestra o control de vehículo a las monocapas de células. Las células se tratan durante 1 hora a 37 °C y CO2 al 5 %. Se añaden 250 ng/ml de VEGF-C humano recombinante (Cat. n.° 2179-VC, R&D Systems) a los pocillos y las placas se incuban durante 10 minutos adicionales a 37 °C y CO2 al 5 %.
Los medios y los compuestos se eliminaron y la monocapa celular se lavó una vez en solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (Cat. n.° 21600-044, Invitrogen). Se añadieron 130 pl de tampón de lisis a los pocillos y el lisado celular se cultivó y se transfirió a los tubos y se almacenó en hielo. Se preparó el tampón de lisis completo añadiendo 10 pl de cóctel inhibidor de proteasa (Cat. n.° P8340, Sigma-Aldrich), 10 pl de PMSF (fluoruro de fenilmetanosulfonilo, Cat. n.° P7626, Sigma-Aldrich, preparado como solución madre de DMSO 500 mM) por 1 ml de reactivo de extracción de PhosphosafeTM (Cat. n.° 71296, Merck).
Las muestras recolectadas se diluyeron 1:2 en el Diluyente IC n.° 18 (Tween 20/PBS al 5 %) y se transfirieron 100 pl a las placas de 96 pocillos recubiertas, bloqueadas y lavadas con VEGFR3 Total y Fosfo y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente. Las placas se lavaron entonces tres veces en tampón de lavado como se ha descrito anteriormente y se aprovecharon secas.
Para la detección de VEGFR3 total, se añadieron 100 pl de anticuerpo de detección (Anticuerpo de detección VEGFR3 Total Parte N.° 841888 en el kit VEGFR3 Total) diluido en el diluyente IC n.° 1 (BSA al 1 % p/v (Cat. n.° A7906, Sigma-Aldrich)/PBS) a los pocillos y la placa se incubó durante 2 horas a temperatura ambiente. La placa se lavó tres veces en tampón de lavado y se aprovechó seca. Se añadieron 100 pl de estreptavidina-HPR diluida en el diluyente IC n.° 1 Estreptavidina-HRP, Parte n.° 890803 en el kit VEGFR3 Total) a los pocillos y se incubaron a temperatura ambiente durante 20 minutos, seguido de un lavado como se ha descrito anteriormente. Se añadieron 100 pl de solución de sustrato (sistema de sustrato líquido de 3,3',5,5'-tetrometilbencidina (TMB) para ELISA, Cat. n.° T0440, Sigma-Aldrich) y la placa se incubó durante 20 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente, seguido de adición de 50 pl de solución de parada (H2SO4 2 N).
5
10
15
20
25
30
35
Para la detección de Fosfo VEGFR3, se diluyeron 100 pl de anticuerpo de detección (Anticuerpo de detección anti- fosfoestirosina-HRP, Parte n.° 841403 en el kit Fosfo VEGFR3) en el Diluyente IC N.° 1 (BsA/PBS al 1 % p/v), se añadió a los pocillos, y la placa se incubó durante 2 horas a temperatura ambiente. Después, la placa se lavó entonces tres veces en tampón de lavado como se ha descrito anteriormente y se aprovechó seca. Se añadieron 100 pl de solución de sustrato (sistema de sustrato líquido de 3,3',5,5'-tetrometilbencidina (TMB) para ELISA, Cat. n.° T0440, Sigma-Aldrich) y la placa se incubó durante 20 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente, seguido de adición de 50 pl de solución de parada (H2SO4 2 N).
Los niveles totales de Fosfo VEGFR3 se cuantificaron utilizando un lector de placas Multiskan Ascent y el software Ascent equipado con un filtro de 450 nm.
Los valores de CI50 se determinan calculando en primer lugar el nivel de fosfo VEGFR3 con respecto a total VEGFR3 de acuerdo con la siguiente fórmula.
donde SRP es el nivel de Fosfo relativo de la muestra, SP es la lectura de Fosfo VEGFR3, y ST es la lectura de total VEGFR3.
El porcentaje de inhibición (% de I) para cada lisado en relación con el vehículo de control (estimulado con VEGF-C) se calcula entonces de acuerdo con la siguiente fórmula:
, . VE-hicú] d SRP-Pru Éb i SRP*
% de I =-----------;---------------
Vthi mil d SRP
100
donde SRP es el nivel de Fosfo relativo de la muestra como se ha calculado anteriormente.
El % de I se representa gráficamente frente a la concentración del compuesto y los datos se ajustan usando una curva de respuesta de dosis sigmoidal (GraphPad Prism 4 para Windows) con la siguiente ecuación (Y = Inferior + (Superior-Inferior)/(1 + 10A(LogEC50-X))), donde X es el logaritmo de la concentración, Y es la respuesta. Y comienza en la parte Inferior y va hasta la parte Superior con una forma sigmoidea.
Resultados
Compuesto
CI50 (nM)
3
80
5
240
8
127
11
67
12
81
16
36
17
44
20
30
21
113
22
30
24
71
25
66
30
658
31
67
33
81

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    1. Un compuesto de la fórmula (I):
    imagen1
    o una forma iónica, salina o de solvato del mismo, en la que: R1 se selecciona de: H y
    imagen2
    en las que:
    R se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    RN2 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    RN3 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    RN4 se selecciona de H y CH3;
    rN7 y rN8 se seleccionan independientemente de H y CH3; RN9 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    RN10 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    RN11 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    R2 se selecciona de H y
    imagen3
    en las que:
    RN5 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    RN6 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me; y en donde solamente uno de R1 y R2 es H;
    o R1 y R2 juntos forman el grupo -CH2-N(RN12)-C2H4-, donde RN12 se selecciona de H, alquilo C1-3 y C(=O)Me;
    R4 se selecciona de CF3, halo, CF2H y CN; y
    R5 se selecciona de grupos de las siguientes fórmulas:
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    imagen4
    en las que:
    R6 se selecciona de H, (CHRC1)niC(O)N(RN13)Z1 y (CH2)n2C(O)OZ2; en donde:
    ni es 1;
    RC1 es H o Me;
    RN13 es H o CH3;
    Z1 es H, CH3 u OCH3; n2 es 1; y Z2 es CH3;
    y donde solamente uno de RN13 y Z1 puede ser CH3,
    R7, si está presente, se selecciona de H, y (CH2)m1C(O)N(RM1)Y1, en donde: m1 es 0 o 1;
    RM1 es H; y
    Y1 es H, Me u OCH3; y uno de R6 y R7 no es H; y
    R8, si está presente, es H o, cuando R7 es C(=O)NH2, R8 se selecciona de H y alquilo C1-2.
  2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R2 es H y R1 es:
    (a)
    imagen5
    en la que RN1 es C(=O)Me; o
    (b)
    imagen6
    en la que RN1 es H, metilo o etilo; o
    (c)
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    imagen7
    en la que RN2 se selecciona de H, metilo y etilo; o
    (d)
    imagen8
    en la que RN3 se selecciona de H y metilo; o
    (e)
    imagen9
    en la que RN4 se selecciona de H y metilo; o
    (f)
    imagen10
    en la que RN7 y RN8 son ambos H o ambos metilo; o
    (g)
    imagen11
    en la que RN9 es H; o
    (h)
    imagen12
    en la que RN10 se selecciona de H y metilo; o
    (i)
    imagen13
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    en la que RN11 es H.
  3. 3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 es H y R2 es: (a)
    imagen14
    , donde R se selecciona de H y metilo; o (b)
    imagen15
    donde R se selecciona de H y metilo.
  4. 4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R4 se selecciona de CF3, CI y CF2H, preferiblemente CF3.
  5. 5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R5 es un grupo de la siguiente fórmula:
    imagen16
  6. 6. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R es un grupo
    seleccionado de:
    imagen17
  7. 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en el que R7 es H y R6 se selecciona de CH2C(O)NH2, CH2C(O)NHCH3, CHCH3C(O)NH2 y CHCH3C(O)NHCH3.
  8. 8. Un compuesto de acuerdo con CHCH3C(O)NH2 y CH2C(O)NHCH3.
  9. 9. Un compuesto de acuerdo con lr C(O)NH2, C(O)NHCH3, CH2C(O)NH2 y CH2C(O)NHCH3.
  10. 8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en el que R7 es H y R6 se selecciona de CH2C(O)NH2,
  11. 9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en el que R6 es H y R7 se selecciona de
  12. 10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, en el que R6 es H y R7 es C(O)NH2.
  13. 11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, en el que R8 es metilo.
    5 12. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R5 es un grupo de la
    siguiente fórmula:
    imagen18
    10 13. Una composición que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, y
    un vehículo o un diluyente farmacéuticamente aceptables.
  14. 14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en un método de terapia.
    15
  15. 15. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para su uso en el método de tratamiento del cáncer.
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