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ES2664753T3 - Composiciones de inducción de respuestas inmunes - Google Patents

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ES2664753T3
ES2664753T3 ES16164271.5T ES16164271T ES2664753T3 ES 2664753 T3 ES2664753 T3 ES 2664753T3 ES 16164271 T ES16164271 T ES 16164271T ES 2664753 T3 ES2664753 T3 ES 2664753T3
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ES
Spain
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antigen
microparticles
immunogenic composition
polypeptide
microparticle
Prior art date
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Active
Application number
ES16164271.5T
Other languages
English (en)
Inventor
Padma Malyala
Derek T. O'hagan
Manmohan Singh
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GlaxoSmithKline Biologicals SA
Original Assignee
GlaxoSmithKline Biologicals SA
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Publication date
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Abstract

Una composición inmunogénica que comprende (a) un primer antígeno que contiene un polipéptido, (b) al menos un primer y segundo adyuvantes, en la que el primer adyuvante comprende una micropartícula que comprende poli (D, L-láctido-co-glicólido) y en la que el segundo adyuvante comprende un compuesto de imidazoquinolina que está atrapado, encapsulado, disuelto o disperso dentro de dicha micropartícula introduciendo el compuesto de imidazoquinolina durante el procedimiento de fabricación de micropartículas, y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que dicha composición provoca una respuesta inmune cuando se administra a un sujeto vertebrado.

Description

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DESCRIPCION
Composiciones de inducción de respuestas inmunes Campo de la invención
La presente invención se refiere en general a composiciones inmunogénicas y a agentes que potencian la respuesta inmune de uno o más antígenos seleccionados.
Antecedentes de la invención
La aparición de vacunas de subunidades creadas por tecnología de ADN recombinante ha intensificado la necesidad de composiciones que contengan adyuvantes seguras y eficaces. Las vacunas de subunidades, aunque ofrecen ventajas significativas sobre las vacunas tradicionales vivas y muertas en términos de seguridad y costo de producción, generalmente presentan polipéptidos aislados o mezclas de polipéptidos aislados para el sistema inmune, que tienen inmunogenicidad limitada en comparación con, por ejemplo, virus completos, bacterias y otros microorganismos. Como resultado, estas vacunas generalmente se benefician de adyuvantes con capacidades inmunoestimuladoras, que los ayudan a alcanzar su máximo potencial en el tratamiento de la enfermedad.
Las vacunas vivas tradicionales, por otro lado, comúnmente no requieren adyuvantes. Además, las vacunas muertas son generalmente más inmunogénicas que las vacunas de subunidades y comúnmente no requieren adyuvantes. No obstante, estas vacunas, como las vacunas de subunidades, también se pueden beneficiar de adyuvantes con capacidades inmunoestimulantes
La técnica anterior incluye el documento WO2007/05205, que describe vacunas contra la gripe. Se preparó una vacuna basada en glicoproteínas de superficie trivalente y, entre otras cosas, se combinó con micropartículas formadas a partir de un copolímero de poli(lactido co-glicolido) y el inmunopotenciador R-848 (una imidazoquinolina).
Sumario de la invención
La invención a la que pertenece la presente especificación se establece en las reivindicaciones adjuntas a esta divulgación.
La presente divulgación proporciona composiciones inmunogénicas que comprenden (a) un primer antígeno, (b) al menos un primer y segundo adyuvantes, en las que el primer adyuvante comprende micropartículas y en las que el segundo adyuvante comprende un compuesto de imidazoquinolina, y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable, cuyas composiciones provocan una respuesta inmune cuando se administran a un sujeto vertebrado.
En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden composiciones inmunogénicas de la presente invención.
En aspectos, la presente divulgación proporciona composiciones de vacunas inyectables que comprenden composiciones inmunogénicas de acuerdo con la presente divulgación.
En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona kits para preparar una composición inmunogénica que comprende un primer recipiente que comprende un antígeno, un segundo recipiente que comprende un compuesto de imidazoquinolina, y un tercer recipiente que comprende micropartículas, o un primer recipiente que comprende un antígeno y un segundo recipiente que comprende un compuesto de imidazoquinolina y micropartículas.
En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona procedimientos para provocar respuestas inmunes en un sujeto vertebrado que comprende administrar al sujeto vertebrado una cantidad eficaz de una composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención.
En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona procedimientos para provocar una respuesta de linfocitos T citotóxicos (CTL) en un sujeto vertebrado que comprende administrar al sujeto vertebrado una cantidad eficaz de una composición inmunogénica de la presente invención.
En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona procedimientos para provocar una respuesta inmune mediada por anticuerpos en un sujeto de vertebrado individual que comprende administrar una cantidad eficaz de una composición inmunogénica de la presente invención al sujeto vertebrado.
En algunos aspectos, la presente divulgación proporciona procedimientos de preparación de composiciones inmunogénicas tales como las descritas en este documento.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 muestra la liberación de imidazoquinolina 090 en función del tiempo a partir de cuatro formulaciones diferentes.
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Descripción detallada de la invención
La práctica de la presente invención empleará, a menos que se indique lo contrario, procedimientos convencionales de virología, química, bioquímica, tecnología recombinante, inmunología y farmacología, dentro de los conocimientos de la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la literatura. Véase, por ejemplo, Virology, 3rd Edition, vol. I & II (B. N. Fields and D. M. Knipe, eds., 1996); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1990); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986, Blackwell Scientific Publications); Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); y DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I & II (D. Glover, ed.).
A. Definiciones
Como se usa en este documento, las formas singulares "un", "una" y "el" incluyen referencias en plural a menos que el contenido indique claramente lo contrario.
Como se usa en este documento, el término "aproximadamente" se refiere a +/-10 % de un valor.
Como se usa en este documento, la frase "composición inyectable" o variantes de la misma se refiere a composiciones farmacéuticamente aceptables apropiadas para inyección en un sujeto vertebrado, composiciones que por lo general son estériles, libres de pirógenos, y poseen valores de pH e isotonicidad específicos apropiados para inyección.
Por "farmacéuticamente aceptable" o "farmacológicamente aceptable" se entiende un material que no es biológicamente o de otra manera indeseable, por ejemplo, el material se puede administrar a un individuo sin causar efectos biológicos indeseables o interactuar de manera perjudicial con cualquiera de los componentes de la composición en la que está contenido.
Por "sujeto vertebrado" se entiende cualquier miembro del subphylum chordata, que incluye, sin limitación, seres humanos y otros primates, que incluyen primates no humanos tales como chimpancés y otros simios y especies de monos; animales de granja tales como ganado, ovejas, cerdos, cabras y caballos; mamíferos domésticos como perros y gatos; animales de laboratorio incluyendo roedores tales como ratones, ratas y cobayas; aves, incluyendo aves domésticas, silvestres y de caza tales como pollos, pavos y otras aves gallináceas, patos, gansos y similares. El término no indica una edad en particular. De este modo, tanto adultos como recién nacidos están destinados a ser cubiertos.
Por "pH fisiológico" o "pH en el intervalo fisiológico" se entiende un pH en el intervalo de aproximadamente 7,2 a 8,0 inclusive, más por lo general en el intervalo de aproximadamente 7,2 a 7,6 inclusive.
Como se usa en este documento, "tratamiento" se refiere a cualquiera de (i) la prevención de una afección (por ejemplo, una enfermedad o trastorno) en cuestión (por ejemplo, cáncer o una infección patógena, como en una vacuna tradicional), (ii) la reducción o eliminación de los síntomas asociados con la condición en cuestión, y (iii) la eliminación sustancial o completa de la afección en cuestión. El tratamiento se puede realizar de forma profiláctica (antes de la llegada de la afección en cuestión) o terapéuticamente (después de la llegada de la misma).
Los términos "cantidad eficaz" o "cantidad farmacéuticamente eficaz" de una composición inmunogénica de la presente invención se refieren en este documento a una cantidad suficiente de la composición inmunogénica para el tratamiento o diagnóstico de una afección de interés. La cantidad exacta requerida variará de un sujeto a otro, dependiendo, por ejemplo, de la especie, la edad y el estado general del sujeto; la severidad de la afección que se trata; el antígeno particular de interés; en el caso de una respuesta inmunológica, la capacidad del sistema inmune del sujeto para sintetizar anticuerpos, por ejemplo, y el grado de protección deseado; y el modo de administración, entre otros factores. Una cantidad "eficaz" apropiada en cualquier caso individual se puede determinar por un experto en la materia. De este modo, una "cantidad terapéuticamente eficaz" por lo general caerá en un intervalo relativamente amplio que se puede determinar a través de ensayos de rutina.
Como se usa en este documento, el término "micropartícula" se refiere a una partícula de aproximadamente 10 nm o menos a aproximadamente 150 |im de diámetro, por ejemplo, que varía desde 10 nm a 25 nm a 50 nm a 100 nm a 250 nm a 500 nm a 1 |im a 2,5 |im a 5 |im a 10 |im a 25 |im a 50 |im a 100 |im a 150 |im. En algunas realizaciones, las micropartículas descritas en este documento pueden ser generalmente esféricas. En algunas realizaciones, las micropartículas descritas en este documento pueden ser de geometría irregular.
Como se usa en este documento, el término "partícula de proteína" se refiere a una partícula que comprende al menos 50 % en peso de proteína, una "partícula de polisacárido" se refiere a una partícula que comprende al menos 50 % en peso de polisacárido, y así sucesivamente.
Las micropartículas se pueden agregar en masas más grandes en algunas circunstancias. Como un ejemplo específico, las micropartículas que tienen ADN adsorbido pueden ser, por ejemplo, una pre-liofilización de aproximadamente 0,5-2 |im de diámetro, mientras que las mismas partículas pueden ser, por ejemplo, en agregados
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que tienen un diámetro de aproximadamente 5-15 |im después de la liofilización. La micropartícula generalmente tendrá un diámetro que permita la administración parenteral o mucosal sin obstruir las agujas y los capilares. El tamaño de micropartículas se determina fácilmente por técnicas bien conocidas en la técnica, tales como espectroscopía de correlación de fotones, difractometría láser y/o microscopía electrónica de barrido. El término "partícula" también se puede usar para indicar una micropartícula como se define en este documento.
El término "polipéptido" se refiere a un polímero de residuos de aminoácidos y no está limitado a una longitud mínima del producto. De este modo, proteínas de longitud completa, péptidos, oligopéptidos, dímeros, multímeros, y similares, están incluidos dentro de la definición.
Una "especie que contiene polipéptidos" es una molécula, al menos una parte de la cual es un polipéptido. Los ejemplos incluyen polipéptidos, proteínas que incluyen glicoproteínas, metaloproteínas y lipoproteínas, antígenos de polisacáridos conjugados con proteínas transportadoras, y así sucesivamente. Las proteínas para su uso en este documento incluyen proteínas de longitud completa y fragmentos de las mismas. En ciertas realizaciones, se emplean modificaciones en la secuencia nativa, tales como deleciones, adiciones y sustituciones (generalmente de naturaleza conservadora).
El término "fragmento" como se usa en este documento se refiere a una parte físicamente contigua de la estructura primaria de una biomolécula. En el caso de las proteínas, un fragmento se puede definir por una parte contigua de la secuencia de aminoácidos de esa proteína y puede tener al menos 3-5 aminoácidos, al menos 6-10 aminoácidos, al menos 11-15 aminoácidos, al menos 16-24 aminoácidos, al menos 25-30 aminoácidos y al menos 30-45 aminoácidos. En el caso del polinucleótido, un fragmento se define por una parte contigua de la secuencia de ácido nucleico de ese polinucleótido y puede tener al menos 9-15 nucleótidos, al menos 15-30 nucleótidos, al menos 31-45 nucleótidos, al menos 46- 74 nucleótidos, al menos 75-90 nucleótidos y al menos 90-130 nucleótidos. En algunas realizaciones, los fragmentos de biomoléculas son fragmentos inmunogénicos.
En algunas realizaciones, el antígeno es una partícula de proteína. Las partículas de proteína pueden tener las siguientes características físicas. Las partículas de proteína son generalmente de forma esférica y generalmente poseen un diámetro de aproximadamente 150 nm aproximadamente 200 nm a aproximadamente 500 nm a aproximadamente 1 |im a aproximadamente 2 |im a aproximadamente 5 |im a aproximadamente 10 |im de diámetro. Las partículas de proteína se pueden formar como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 6,534,064 de O'Hagan et al. o Pub. No. US 2005/0107322 para O'Hagan et al.
Un "polinucleótido" es un polímero de ácido nucleico. Un polinucleótido puede incluir tan solo 5, 6, 7 u 8 nucleótidos. Además, un "polinucleótido" puede incluir secuencias bi y monocatenarias y se refiere, pero no se limita a, ADNc de ARNm viral, procariótico o eucariótico, ARN genómico y secuencias de ADN de organismos virus (por ejemplo, virus de ARN y aDn y retrovirus), procariotas o eucariotas y secuencias de ADN sintéticas. El término también captura secuencias que incluyen cualquiera de los análogos de base conocidos de ADN y ARN. El término incluye además modificaciones, tales como deleciones, adiciones y sustituciones (generalmente de naturaleza conservadora), a una secuencia nativa, por ejemplo, donde la molécula de ácido nucleico codifica una proteína antigénica. Estas modificaciones pueden ser deliberadas, como a través de mutagénesis dirigida al sitio, o pueden ser accidentales, tales como a través de mutaciones de huéspedes que producen antígenos.
Una "especie que contiene polinucleótidos" es una molécula, al menos una parte de la cual es un polinucleótido. Los ejemplos incluyen construcciones de vectores de ARN, construcciones de vectores de ADN y así sucesivamente.
Como se usa en este documento, el término "sacárido" abarca monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Una "especie que contiene sacáridos" es una molécula, al menos una parte de la cual es un sacárido. Los ejemplos incluyen antígenos sacáridos, antígenos que comprenden sacáridos conjugados con péptidos transportadores, y así sucesivamente.
Como se usa en este documento, el término "aislado" se refiere a una especie química tal como un polinucleótido, un polipéptido y un anticuerpo, etc. que se encuentra en un entorno diferente del que presenta la especie química de manera natural. Una especie química que se aísla generalmente está sustancialmente purificada. Los procedimientos para aislar células también son bien conocidos para los expertos en la materia.
Una proteína "purificada" es una proteína que se produce (por ejemplo, de forma recombinante o sintética) o se aísla de su huésped natural, de manera que la cantidad de proteína presente en una composición es sustancialmente mayor que la presente en una preparación en bruto. En general, una proteína purificada será al menos aproximadamente 50 % homogénea, más preferiblemente al menos aproximadamente 80 %, aproximadamente 85 %, aproximadamente 90 %, aproximadamente 95 %, aproximadamente 97 %, aproximadamente 98 %, aproximadamente 99 %, o más, homogéneo.
Como se usa en este documento, una "respuesta inmunológica" a un antígeno o composición es el desarrollo en un sujeto de una respuesta inmune humoral y/o celular al antígeno o composición. Para los fines de la presente invención, una "respuesta inmune humoral" se refiere a una respuesta inmune mediada por moléculas de anticuerpo, mientras que una "respuesta inmune celular" es una mediada por linfocitos T y/u otros glóbulos blancos. Un aspecto importante de la inmunidad celular implica una respuesta específica de antígeno por las células T citolíticas ("CTL").
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Las CTL tienen especificidad por antígenos peptídicos que se presentan en asociación con proteínas codificadas por el MHC y expresadas en las superficies de las células. Las CTL ayudan a inducir y promover la destrucción intracelular de microbios intracelulares, o la lisis de células infectadas con tales microbios. Otro aspecto de la inmunidad celular implica una respuesta específica de antígeno por células T auxiliares que actúan para ayudar a estimular la función y enfocan la actividad de células efectoras inespecíficas contra células que presentan antígenos peptídicos en asociación con moléculas de MHC en su superficie. Una "respuesta inmune celular" también se refiere a la producción de citoquinas, quimioquinas y otras moléculas similares producidas por células T activadas y/u otros glóbulos blancos, incluidos los derivados de las células T CD4+ y CD8+.
Un "antígeno" se refiere a una molécula que contiene uno o más epítopos (lineales, conformacionales o ambos) que provocan una respuesta inmunológica. El término se puede usar indistintamente con el término "inmunógeno". Un "epítopo" es la parte de especie dada (por ejemplo, una molécula antigénica o complejo antigénico) que determina su especificidad inmunológica. Un epítopo está dentro del ámbito de la presente definición de antígeno. Comúnmente, un epítopo es un polipéptido o polisacárido en un antígeno de origen natural. En antígenos artificiales, puede ser una sustancia de bajo peso molecular tal como un derivado de ácido arsanílico. Normalmente, un epítopo de célula B incluirá al menos aproximadamente 5 aminoácidos pero puede ser tan pequeño como 3-4 aminoácidos. Un epítopo de célula T, tal como un epítopo de CTL, incluirá por lo general al menos aproximadamente 7-9 aminoácidos, y un epítopo de célula T auxiliar por lo general incluirá al menos aproximadamente 12-20 aminoácidos. El término "antígeno" indica tanto antígenos de subunidades, esto es, antígenos que están separados y discretos de un organismo o célula completa con la que se asocia el antígeno en la naturaleza, así como bacterias, virus, hongos, parásitos u otras bacterias inactivadas, atenuadas o aniquiladas u otros microbios o células tumorales Los anticuerpos tales como anticuerpos anti-idiotipo, o fragmentos de los mismos, y mimotopos peptídicos sintéticos, que pueden imitar un antígeno o determinante antigénico, también se capturan bajo la definición de antígeno como se usa en este documento. De forma similar, un oligonucleótido o polinucleótido que expresa un antígeno o determinante antigénico in vivo, tal como en terapia génica y aplicaciones de inmunización de ADN, también se incluye en la definición de antígeno en este documento.
De este modo, para los fines de la presente invención, los antígenos se pueden derivar de cualquiera de los diversos virus, bacterias, parásitos, hongos y otros microbios, así como de cualquiera de los diversos antígenos tumorales. Los antígenos también incluyen ácidos nucleicos que expresan un antígeno o determinante antigénico in vivo. Como algunos ejemplos específicos, los antígenos pueden ser proteínas de o derivadas de la familia del virus del herpes, incluyendo proteínas derivadas del virus del herpes simple (HSV) tipos 1 y 2, tales como glicoproteínas gB, gD y gH HSV-1 y hSV-2; proteínas derivadas de citomegalovirus (CMV) que incluyen gB y gH de CMV; proteínas derivadas de la familia de virus de la hepatitis, incluyendo virus de la hepatitis A (HAV), virus de la hepatitis B (HBV), virus de la hepatitis C (HCV), el virus de la hepatitis delta (HDV), virus de la hepatitis E (HEV) y virus de la hepatitis G (HGV); proteínas, incluidas proteínas de la envoltura gp120, gp160, gp41, p24gag y p55gag, derivadas del HIV, que incluyen miembros de los diversos subtipos genéticos de aislados del HIV HlVmb, HIVsf2, HIVlav, HIVlai, HIVmn, HIV- 1 CM235, HIV-1 us4, HIV-2 ; proteínas derivadas del virus de la inmunodeficiencia simia (SIV); y proteínas derivadas de Neisseria meningitidis (A, B, C, Y), Hemophilus influenza tipo B (HIB), Helicobacter pylori; albúmina de suero humano y ovoalbúmina, entre muchos otros.
Una composición o vacuna inmunogénica que provoca una respuesta inmune celular puede servir para sensibilizar a un sujeto vertebrado mediante la presentación de antígeno en asociación con moléculas de MHC en la superficie celular. La respuesta inmune mediada por células se dirige a, o acerca a, las células que presentan antígeno en su superficie. Además, se pueden generar linfocitos T específicos de antígeno para permitir la futura protección de un huésped inmunizado. La capacidad de un antígeno particular para estimular una respuesta inmunológica mediada por células se puede determinar mediante una serie de ensayos, tales como por ensayos de linfoproliferación (activación de linfocitos), ensayos de células citotóxicas CTL, o mediante el análisis de linfocitos T específicos para el antígeno en un sujeto sensibilizado. Tales ensayos son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Erickson et al., J. Immunol. (1993) 151:4189-4199; Doe et al., Eur. J. Immunol. (1994) 24:2369-2376. De este modo, una respuesta inmunológica como se usa en este documento puede ser una que estimule la producción de CTL, y/o la producción o activación de células T auxiliares. El antígeno de interés también puede provocar una respuesta inmune mediada por anticuerpos. Por consiguiente, una respuesta inmunológica puede incluir uno o más de los siguientes efectos: la producción de anticuerpos por, por ejemplo, pero no se limitan a, células B; y/o la activación de células T supresoras y/o células T yA dirigidas específicamente a un antígeno o antígenos presentes en la composición o vacuna de interés. Estas respuestas pueden servir para neutralizar la infectividad, y/o mediar el complemento de anticuerpo o la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) para proporcionar protección a un huésped inmunizado. Tales respuestas se pueden determinar usando inmunoensayos estándar y ensayos de neutralización, bien conocidos en la técnica.
Una composición inmunogénica que contiene un antígeno de acuerdo con la presente invención muestra "inmunogenicidad potenciada" cuando posee una capacidad mayor para provocar una respuesta inmune que la respuesta inmune provocada por una cantidad equivalente del antígeno administrado usando un sistema de administración diferente, por ejemplo, en la que el antígeno se administra como una proteína soluble. De este modo, una composición inmunogénica o de vacuna puede mostrar "inmunogenicidad potenciada" porque el antígeno es más fuertemente inmunogénico o porque se necesita una dosis más baja o menos dosis de antígeno para lograr una respuesta inmune en el sujeto al que se administra el antígeno. Tal inmunogenicidad potenciada se puede determinar administrando la composición de antígeno y los controles de antígeno a animales y comparando títulos
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de anticuerpos y/o inmunidad mediada por células contra los dos usando ensayos convencionales descritos en este documento.
El término "adyuvante" se refiere a cualquier sustancia que ayude o modifique la acción de un antígeno en el sistema inmune. Los adyuvantes pueden potenciar la inmunidad humoral y/o celular.
El término "excipiente" se refiere a cualquier sustancia esencialmente accesoria que puede estar presente en la forma de dosificación terminada. Por ejemplo, el término "excipiente" incluye vehículos, aglutinantes, disgregantes, cargas (diluyentes), agentes de suspensión/dispersión, y así sucesivamente.
Como se usa en este documento, la frase "construcción de vector" generalmente se refiere a cualquier ensamblaje que sea capaz de dirigir la expresión de una(s) secuencia(s) de ácido nucleico o gen(es) de interés. Una "construcción de vector de ADN" se refiere a una molécula de ADN que es capaz de dirigir la expresión de una (s) secuencia (s) de ácido nucleico o gen (es) de interés. Un tipo específico de construcción de vector de ADN es un plásmido, que es una molécula circular de ADN episomal capaz de replicación autónoma dentro de una célula huésped. Por lo general, un plásmido es un bucle circular de ADN bicatenario en el que se pueden unir segmentos de ADN adicionales. pCMV es un plásmido específico que es bien conocido en la técnica. Se conocen otras construcciones de vectores de ADN, que se basan en virus de ARN. Estas construcciones de vector de ADN comprenden por lo general un promotor que funciona en una célula eucariótica, 5' de una secuencia de ADNc para la cual el producto de transcripción es una construcción de vector de ARN (por ejemplo, un replicón de vector ARN de alfavirus) y una región de terminación 3'. Otros ejemplos de construcciones de vector incluyen construcciones de vector de ARN (por ejemplo, construcciones de vector de alfavirus) y similares. Como se usa en este documento, "construcción de vector de ARN", "replicón de vector de ARN" y "replicón" se refieren a una molécula de ARN que es capaz de dirigir su propia amplificación o autorreplicación in vivo, por lo general dentro de una célula diana. La construcción del vector de ARN se usa directamente, sin la necesidad de introducir ADN en una célula y transportarlo al núcleo donde se produciría la transcripción. Mediante el uso del vector de ARN para la administración directa al citoplasma de la célula huésped, la replicación autónoma y la traducción de la secuencia de ácido nucleico heteróloga se produce de manera eficiente.
B. General
La invención a la que pertenece la presente especificación se establece en las reivindicaciones adjuntas a esta descripción.
La presente divulgación proporciona composiciones inmunogénicas que comprenden (a) un primer antígeno, (b) al menos un primer y segundo adyuvantes, en las que el primer adyuvante comprende una micropartícula y en las que el segundo adyuvante comprende una imidazoquinolina, y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que dicha composición provoca una respuesta inmune cuando se administra a un sujeto vertebrado.
En algunos aspectos, el primer antígeno es un organismo patógeno muerto o vivo (por ejemplo, atenuado o inactivado). En algunos aspectos, el primer antígeno es un antígeno que contiene polipéptidos (por ejemplo, proteínas de longitud completa, fragmentos de proteínas, etc.). En algunas realizaciones, el primer antígeno es un antígeno que contiene polisacáridos (por ejemplo, un polisacárido capsular, un conjugado de proteína de polisacárido-proteína, etc.). En algunos aspectos, el primer antígeno es un antígeno que contiene un polinucleótido (por ejemplo, un polinucleótido que está unido a una secuencia reguladora que controla la expresión del polinucleótido, etc.). En algunos aspectos, el primer antígeno es una forma de una micropartícula estabilizada que se forma a partir de un antígeno tal como uno de los anteriores, cuya micropartícula se puede producir, por ejemplo, como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 6,534,064 o Pub. No. US 2005/0107322 para O'Hagan et al. o por otros medios conocidos para los expertos en la materia. Aunque tales micropartículas estabilizadas no son partículas similares a virus, en algunas realizaciones, el primer antígeno es una partícula similar a virus. Tales micropartículas estabilizadas son por lo general partículas libres y no están atrapadas dentro de un portador.
Las composiciones inmunogénicas de acuerdo con la invención también se pueden usar en procedimientos para provocar una respuesta inmune, por ejemplo, una respuesta de linfocitos T citotóxicos (CTL), una respuesta inmune mediada por anticuerpos, o ambas, en un sujeto vertebrado, que comprenden administrar al sujeto vertebrado la composición inmunogénica.
En algunas realizaciones, las composiciones inmunogénicas de la invención se usan en una vacuna inyectable para tratar, por ejemplo, un patógeno o tumor.
Las composiciones inmunogénicas de acuerdo con la invención también se pueden preparar como composiciones farmacéuticas.
La presente divulgación proporciona kits para preparar composiciones inmunogénicas. Los kits pueden comprender, por ejemplo, un primer recipiente que comprende un antígeno y un segundo recipiente que comprende micropartículas y una imidazoquinolina. Los kits también pueden comprender, por ejemplo, un primer recipiente que comprende un antígeno, un segundo recipiente que comprende micropartículas, y un tercer recipiente que comprende una imidazoquinolina.
Las composiciones inmunogénicas pueden comprender además al menos un tercer adyuvante, y en algunos casos pueden comprender 3, 4, 5 o más adyuvantes.
En algunos aspectos, las composiciones comprenden además un segundo antígeno. El segundo antígeno puede ser, por ejemplo, un organismo patógeno muerto o vivo, un antígeno que contiene un polipéptido, un antígeno que 5 contiene polisacáridos, un antígeno que contiene polinucleótidos, una micropartícula estabilizada, y así sucesivamente. En algunos aspectos, las composiciones inmunogénicas de la invención pueden comprender adicionalmente 2, 3, 4 o más antígenos.
C. Imidazoquinolinas
Las imidazoquinolinas preferidas son las de la fórmula,
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en la que R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo de uno a diez átomos de carbono, hidroxialquilo de uno a diez átomos de carbono, alcoxialquilo de uno a diez átomos de carbono, aciloxialquilo en las que la unidad estructural aciloxi es alcanoiloxi de uno a cinco átomos de carbono o benzoiloxi y en las que la unidad estructural alquilo contiene de uno a seis átomos de carbono,
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en la que R3 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo de uno a diez átomos de carbono, bencilo, (fenil)etilo y fenilo, donde el sustituyente bencilo, (fenil)etilo o fenilo están opcionalmente sustituidos en el anillo de benceno por una o dos unidades estructurales seleccionadas independientemente del grupo que consiste en alquilo de uno a cuatro átomos de carbono, alcoxi de uno a cuatro 20 átomos de carbono y halógeno. Los grupos alquilo precedentes pueden ser lineales, ramificados y/o cíclicos. Las imidazoquinolinas particularmente preferidas para la práctica de la presente invención incluyen imiquimod, resiquimod y
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el último de los cuales también se denomina en este documento "imidazoquinolina 090". Véase, por ejemplo, 25 Publicaciones Internacionales Nos. WO 2006/031878 de Valiante et al. y WO 2007/109810 de Sutton et al.
Las proporciones de peso/peso típicas de antígeno a imidazoquinolina en las composiciones de la presente invención varían de 1:1 a 2:1 a 5:1 a 10:1, entre otras posibilidades.
D. Micropartículas
Como se indicó anteriormente, además de uno o más antígenos y una o más imidazoquinolinas, las composiciones 30 descritas comprenden uno o más tipos de micropartículas. Los ejemplos de micropartículas incluyen (a) micropartículas inorgánicas (por ejemplo, micropartículas que comprenden fosfato de calcio, micropartículas que comprenden sales de aluminio [alumbre], tales como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, sulfato de aluminio, etc.) y (b) micropartículas orgánicas tales como las basadas en aminoácidos de baja solubilidad (por ejemplo,
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micropartículas de L-tirosina, etc.), polímeros biodegradables (por ejemplo, PLG, etc.), aceites metabolizables (por ejemplo, MF59, etc.), y así sucesivamente.
Cuando las micropartículas son micropartículas sólidas, el (los) antígeno (s), imidazoquinolina (s) y diversos componentes suplementarios opcionales pueden ser independientemente, por ejemplo: (a) establecidos dentro de las micropartículas, (b) unidos a las micropartículas, por ejemplo, adsorbido o conjugado con la superficie de las micropartículas, y/o (c) asociado de otra forma con las micropartículas en diversos grados, por ejemplo, mezclado con las micropartículas en una dispersión líquida, mezclado con las micropartículas en una composición sólida (por ejemplo, coliofilizado con las micropartículas), y así sucesivamente. El(los) antígeno(s), imidazoquinolina(s) y diversos componentes suplementarios opcionales se pueden adsorber, conjugar o establecer en poblaciones separadas de micropartículas.
Cuando las micropartículas son micropartículas líquidas (por ejemplo, gotitas de aceite en una emulsión de aceite en agua, etc.), el(los) antígeno(s), imidazoquinolina(s) y diversos componentes suplementarios pueden ser independientemente, por ejemplo: disueltos o disperso dentro de la(s) fase(s) oleosa(s) de la emulsión (incluyendo poblaciones separadas de gotitas de aceite), disuelto o disperso dentro de la fase acuosa de la emulsión y/o dispuesto en las interfaces entre las fases acuosa y oleosa de la emulsión.
El(los) antígeno(s), imidazoquinolina(s) o diversos componentes suplementarios se pueden establecer dentro de las micropartículas (por ejemplo, atrapados, encapsulados, disueltos o dispersos en las micropartículas), por ejemplo, introduciendo estas especies durante el procedimiento de fabricación de micropartículas. El(los) antígeno(s), imidazoquinolina(s) o diversos componentes suplementarios se pueden unir a las micropartículas, adsorberse a las micropartículas, o asociarse de otro modo con las micropartículas, por ejemplo, introduciendo estas especies en micropartículas previamente formadas.
Las proporciones p/p típicas de antígeno a micropartículas varían desde 100:1 a 200:1 a 500:1 a 1000:1, entre otras posibilidades.
En algunos aspectos, las micropartículas comprenden una o más especies inorgánicas (por ejemplo, micropartículas que comprenden fosfato de calcio, micropartículas que comprenden sales de aluminio [alumbre], tales como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, sulfato de aluminio, etc.). Por ejemplo, el hidróxido de aluminio y el fosfato de calcio se pueden obtener de Brenntag Biosector, Denmark, entre otras fuentes.
En algunos aspectos, las micropartículas comprenden uno o más aminoácidos de baja solubilidad (por ejemplo, micropartículas de L-tirosina, etc.). Las suspensiones de micropartículas de L-tirosina se describen, por ejemplo, en M. Singh et al., Vaccine 24 (2006) 1680-1686 y las referencias citadas en este documento.
En algunas realizaciones, las micropartículas comprenden uno o más aceites metabolizables. El aceite metabolizable es comúnmente uno que tiene de aproximadamente 6 a aproximadamente 30 átomos de carbono incluyendo, pero no se limitan a, alcanos, alquenos, alquinos, y sus ácidos y alcoholes correspondientes, los éteres y ésteres de los mismos, y mezclas de los mismos. El aceite puede tener una estructura de cadena lineal o ramificada. Puede estar completamente saturado o tener uno o más enlaces dobles o triples. Cuando se emplean aceites basados en mono o poliéster o éter, la limitación de aproximadamente 6 a aproximadamente 30 carbonos se aplica a las unidades estructurales de ácido graso o alcohol graso individuales, no al recuento total de carbono. El aceite puede ser esencialmente cualquier aceite vegetal, aceite de pescado, aceite animal o aceite sintéticamente preparado que pueda ser metabolizado por el cuerpo del animal huésped. Por ejemplo, el componente oleoso de esta invención puede ser cualquier alcano, alqueno o alquino de cadena larga, o un derivado de ácido o alcohol del mismo, por ejemplo, como el ácido libre, su sal o un éster del mismo, tal como un mono-, o di- o tri-ésteres, por ejemplo, triglicéridos, ésteres de 1,2-propanodiol o alcoholes polihidroxilados similares. Los alcoholes se pueden acilar empleando ácido amino o polifuncional, por ejemplo, ácido acético, ácido propanoico, ácido cítrico o similares. También se pueden usar los éteres derivados de alcoholes de cadena larga que son aceites y cumplen los criterios establecidos en este documento.
Como un ejemplo específico, muchos peces contienen aceites metabolizables que pueden recuperarse fácilmente. Por ejemplo, el aceite de hígado de bacalao, los aceites de hígado de tiburón y el aceite de ballena, tales como el esperma de ballena, ejemplifican varios de los aceites de pescado, que se pueden usar en este documento. Un número de aceites de cadena ramificada se pueden sintetizar bioquímicamente en unidades de isopreno de 5 carbonos y generalmente se denominan terpenoides. El aceite de hígado de tiburón contiene un terpenoide ramificado insaturado conocido como escualeno, 2,6,10,15,19,23-hexametil-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaeno. Los aceites de pescado, incluyendo escualeno y escualano, el análogo saturado al escualeno, están disponibles fácilmente a partir de fuentes comerciales o se pueden obtener por procedimientos conocidos en la técnica. El aceite metabolizable se puede estabilizar en forma de una emulsión usando uno o más tensioactivos apropiados. Las composiciones de emulsiones inmunogénicas comprenden por lo general (1) aproximadamente 0,5 a 1 a 2 a 6 a 10 a 20 % en volumen de aceite, más por lo general 1 a 10 % en volumen de aceite, e incluso más por lo general 2 a 6 % en volumen de aceite, (2) aproximadamente 80 a 90 a 95 a 98 a 99 a 99.5 % en volumen de agua, más por lo general 90 a 99 % en volumen de agua; y (3) una cantidad de uno o más tensioactivos suficientes para estabilizar las gotitas de aceite (micropartículas).
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Preferiblemente, sustancialmente todas las gotitas de aceite son menores de 1 miera de diámetro, más por lo general menores de 250 nm. Por "sustancialmente todo" se entiende al menos aproximadamente 80 % (en número), por lo general al menos aproximadamente 90 %, más por lo general al menos aproximadamente 95 % o incluso al menos 98 %. Para producir tales emulsiones, se pueden usar un número de técnicas. Por ejemplo, se pueden usar emulsionantes comerciales, que operan según el principio de las fuerzas de alto cizallamiento desarrolladas al forzar los fluidos a través de pequeñas aberturas a alta presión. Los ejemplos de emulsionantes comerciales incluyen, sin limitación, el microfluidizador Modelo 110Y (Microfluidics, Newton, Mass.), Modelo 30CD de Gaulin (Gaulin, Inc., Everett, Mass.), y el Tipo 830H de Rainnie Minilab (Miro Atomizer Food and Dairy, Inc., Hudson, Wis.). La presión apropiada para usar con una emulsión individual se determina fácilmente por un experto en la materia. El tamaño de las gotas de aceite se puede variar, por ejemplo, cambiando la proporción de tensioactivo a aceite (aumentando la proporción por lo general disminuye el tamaño de gota), presión de operación (aumentando la presión de operación por lo general disminuye el tamaño de gota) y temperatura de operación (por lo general un aumento de temperatura disminuye el tamaño de gota). El tamaño de gota también variará con el tensioactivo particular y el aceite usados, así como con otros componentes presentes, si los hay, en el momento de la emulsión (por ejemplo, imidazoquinolina, antígeno, y/o cualquier compuesto complementario opcional descrito a continuación).
Hay una serie de tensioactivos específicamente diseñados para y utilizados comúnmente en situaciones biológicas. Por ejemplo, una serie de tensioactivos biológicos se enumeran como tales por Sigma Chemical Company en las páginas 310-316 de Catalog of Biochemical and Organic Compounds. Los tensioactivos se pueden dividir en cuatro tipos básicos: aniónico, catiónico, zwitteriónico y no iónico. Los ejemplos de tensioactivos aniónicos incluyen ácido algínico, ácido caprílico, ácido cólico, ácido 1-decanosulfónico, ácido desoxicólico, ácido 1-dodecanosulfónico, dodecilsulfato de sodio (SDS), lauril sulfato de sodio (SLS), dioctil sulfosuccinato de sodio (DSS), N- lauroilsarcosina y ácido taurocólico, entre otros. Los ejemplos de tensioactivos catiónicos incluyen bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de cetiltrimetilamonio o "CTAB" (por ejemplo, cetrimida), bromuro de dimetil dioctodecil amonio (DDA), cloruro de dioleoil-3-trimetilamonio-propano (DOTAP) benzalconio, cloruro de bencildimetilhexadecil amonio, cloruro de cetilpiridinio, cloruro de metilbencetonio y dodecil sulfato de 4-picolina, entre otros. Los ejemplos de tensioactivos zwitteriónicos incluyen 3-[(3-colamidopropil)-dimetilamonio]-1-propanosulfonato (comúnmente abreviado CHAPS), 3- [(colamidopropil)dimetilamonio]-2-hidroxi-1-propanosulfonato (comúnmente abreviado CHAPSO), N-dodecil-N,N- dimetil-3-amonio-1-propanosulfonato, y liso-alfafosfatidilcolina, entre otros. Ejemplos de tensioactivos no iónicos incluyen alcohol polivinílico (PVA), povidona (también conocida como polivinilpirrolidona o PVP), polisorbatos, alquilfenoles polioxietilados, poloxámeros, decanoil-N-metilglucamida, éter monopentil del dietilenglicol, n-dodecil- beta-D-glucopiranósido, condensados de óxido etileno de alcoholes grasos (por ejemplo, los vendidos con el nombre comercial Lubrol), monoéteres de glicol polioxietilados, éteres de polioxietileno de ácidos grasos (particularmente ácidos grasos C12-C20), y ésteres de sorbitán incluyendo ésteres de ácidos grasos de polioxietilensorbitán (por ejemplo, vendidos bajo nombre comercial Tween®) y ésteres de ácido graso de sorbitán (por ejemplo, vendidos bajo el nombre comercial Span®), entre otros.
En ciertos aspectos, las micropartículas de aceite se pueden estabilizar usando uno o más derivados de sorbitán, por ejemplo, monoésteres de ácido graso de sorbitán seleccionados, sesquiesteres de ácido graso de sorbitán, triésteres de ácido graso de sorbitán, monoésteres de ácido graso de polioxietileno sorbitán y triésteres de ácido graso de polioxietileno sorbitán. Por ejemplo, las micropartículas de aceite se pueden estabilizar usando un éster de sorbitán (por ejemplo, trioleato de sorbitán) y un éster de polioxietilensorbitán (por ejemplo, monooleato de polioxietilensorbitán).
Un ejemplo específico de una composición de micropartículas estabilizadas con tensioactivo es MF59, que es una dispersión acuosa de micropartículas de aceite que contiene 4-5 % p/v de micropartículas de escualeno, estabilizadas con 0,25-0,5 % p/v de polisorbato 80 (Tween 80), trioleato de sorbitán al 0,5 % p/v (Span 85) y opcionalmente diversas cantidades de MTP-PE (por ejemplo, 0-100 pg/dosis). Otro ejemplo específico de una composición de micropartículas estabilizada con tensioactivo es SAF, que contiene escualano al 10 %, Tween 80 al 0,4 %, polímero bloqueado plurónico L121 al 5 %, y thr-MDP (véase a continuación). Todavía otro ejemplo específico de una composición de micropartículas estabilizadas con tensioactivos es el sistema adyuvante Ribi (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT) que contiene 2 % de escualeno, 0,2 % de Tween 80 y uno o más componentes de la pared celular bacteriana del grupo que consiste en monofosforil lípido A (MPL), dimicolato de trehalosa (TDM) y esqueleto de la pared celular (CwS), preferiblemente MPL + CWS (Detox).
Para una descripción adicional de micropartículas apropiadas para su uso en este documento y procedimientos de formación de estas, véanse las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,086,901, 6,299,884 and 6,451,325 y la Publicación Internacional No. WO 00/50006.
En algunos aspectos, las micropartículas comprenden uno o más polímeros biodegradables. Los ejemplos de polímeros biodegradables incluyen poliésteres biodegradables, por ejemplo, poli(a-hidroxi ácidos), ácido polihidroxivalérico y policaprolactona, polidioxanonas, poliortoésteres, polianhídridos y policianoacrilatos (por ejemplo, polialquilcianoacrilato o "PACA"). Más por lo general, las micropartículas para su uso con la presente invención son micropartículas poliméricas derivadas de poli (a-hidroxiácidos), por ejemplo, de un poli(lactido) ("PLA") o un copolímero de lactido y glicolido, tal como un poli(L-lactido-co-glicolido) o poli(D, L-lactido-co-glicolido) ("PLG"). Las micropartículas de polímero se pueden derivar de cualquiera de diversos materiales de partida poliméricos que tienen una variedad de pesos moleculares y, en el caso de los copolímeros tales como PLG, una variedad de proporciones de monómeros (por ejemplo, láctido: glicólido), cuya selección será en gran medida una cuestión de
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elección, dependiendo en parte de las especies coadministradas y la tasa de degradación deseada. La proporción molar lactido/glicólido puede variar, por ejemplo, desde 10:90 o menos a 15:85 a 25:75 a 40:60 a 45:55 a 50:50 a 55:45 a 60:40 a 75:25 a 85:15 a 90:10 o más, mientras que los pesos moleculares de polímeros biodegradables pueden variar, por ejemplo, desde 5.000 o menos a 10.000 a 20.000 a 40.000 a 50.000 a 70.000 a 100.000 a 200.000 Dalton, o más. Por ejemplo, un polímero PLG 50:50, que contiene un 50 % de D,L-láctido y 50 % de glicólido, proporcionará un copolímero de resorción rápida, mientras que el PLG 75:25 se degrada más lentamente, y 85:15 y 90:10, incluso más lentamente, debido al aumento en el componente lactido. Las mezclas de micropartículas con proporciones de lactido: glicólido variables también se pueden usar en este documento para alcanzar la cinética de liberación deseada. La tasa de degradación de las micropartículas de la presente invención también se puede controlar mediante factores tales como el peso molecular del polímero y la cristalinidad del polímero.
Los copolímeros de PLG con proporciones de lactido: glicólido variables y pesos moleculares están disponibles comercialmente de una serie de fuentes, incluidas de Boehringer Ingelheim, Germany and Birmingham Polymers, Inc., Birmingham, AL, USA. Algunos copolímeros de PLG de ejemplo incluyen: (a) rG 502, un PLG que tiene una proporción molar lactido/glicólido de 50:50 y un peso molecular de aprox. 12.000 Da; (b) RG 503, un PLG que tiene una proporción molar lactido/glicólido 50:50 y un peso molecular de aprox. 34.000 Da; (c) RG 504, un PLG que tiene una proporción molar lactido/glicólido 50:50 y un peso molecular de aprox. 48.000 Da, (d) RG 752, un PLG que tiene una proporción molar de lactido/glicólido 75:25 y un peso molecular de aprox. 22.000 Da; (e) RG 755, un PLG que tiene una proporción molar 75:25 láctido/glicólido y un peso molecular de aprox. 68.000 Da; y (f) RG 502 H, un PLG que tiene una proporción de copolímero láctido/glicólido de 50/50, que tiene un grupo carboxilo terminal libre, y que tiene un peso molecular de aprox. 7800 Da. Los polímeros de PLG también se pueden sintetizar mediante policondensación simple del componente de ácido láctico usando técnicas bien conocidas en la técnica, tal como se describe en Tabata et al., J. Biomed. Mater. Res. (1988) 22:837-858.
Las micropartículas de polímero se preparan usando cualquiera de varios procedimientos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, en algunos aspectos, técnicas de doble emulsión/evaporación de solvente, tales como las descritas en la Patente de los Estados Unidos No. 3,523,907 y Ogawa et al., Chem. Pharm. Bull. (1988) 36:1095- 1103, se pueden usar en este documento para preparar las micropartículas. Estas técnicas implican la formación de una emulsión primaria que consiste en gotitas de solución de polímero, que posteriormente se mezcla con una fase acuosa continua que contiene un estabilizador/tensioactivo de partículas. En otros aspectos, también se pueden formar micropartículas usando secado por pulverización y coacervación como se describe en, por ejemplo, Thomasin et al., J. Controlled Release (1996) 41:131; la Patente de los Estados Unidos No. 2,800,457; Masters, K. (1976) Spray Drying 2nd Ed. Wiley, New York; técnicas de revestimiento por suspensión en aire, tales como recubrimiento en cubeta y revestimiento Wurster, como se describe por Hall et al., (1980) The Wurster Process in Controlled Release Technologies: Methods, Theory, and Applications (A.F. Kydonieus, ed.), Vol. 2, pp. 133-154 CRC Press, Boca Raton, Florida and Deasy, P.B., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. (1988) S(2):99-139; y gelificación iónica como se describe por, por ejemplo, Lim et al., Science (1980) 210:908-910. Las nanopartículas poliméricas también se pueden formar usando el procedimiento de desplazamiento del solvente como se describe en el documento PCT/US06/46212 presentada el 1 de diciembre de 2006.
En ciertas realizaciones, se puede usar un sistema de evaporación de solvente de agua en aceite en agua (w/o/w) para formar las micropartículas, a lo largo de las líneas descritas por O'Hagan et al., Vaccine (1993) 11:965-969, PCT/US99/17308 (WO 00/06123) de O'Hagan et al. and Jeffery et al., Pharm. Res. (1993) 10:362. En general, un polímero de interés tal como PLG se disuelve en un solvente orgánico, tal como acetato de etilo, cloruro de dimetilo (también llamado cloruro de metileno y diclorometano), acetonitrilo, acetona, cloroformo y similares. El polímero por lo general se proporcionará en aproximadamente un 1-30 %, más por lo general aproximadamente un 2-15 %, incluso más por lo general aproximadamente un 3-10 % y más por lo general, aproximadamente una solución al 4-8 %, en solvente orgánico. La solución de polímero se combina a continuación con un primer volumen de solución acuosa y se emulsiona para formar una emulsión de o/w. La solución acuosa puede ser, por ejemplo, agua desionizada, solución salina normal, una solución regulada, por ejemplo, solución salina regulada con fosfato (PBS) o una solución reguladora de citrato de sodio/ácido etilendiaminotetraacético (citrato de sodio/ETDA). Las últimas soluciones pueden (a) proporcionar una tonicidad, esto es, osmolalidad, que es esencialmente la misma que los fluidos fisiológicos normales y (b) mantener un pH compatible con las condiciones fisiológicas normales. Alternativamente, las características de tonicidad y/o pH de las composiciones de la presente invención se pueden ajustar después de la formación de micropartículas y antes de la administración. Preferiblemente, la proporción en volumen de solución de polímero a solución acuosa varía desde aproximadamente 5: 1 a aproximadamente 20: 1, más preferiblemente aproximadamente 10: 1. La emulsificación se realiza usando cualquier equipo apropiado para esta tarea, y es por lo general un dispositivo de alto cizallamiento tal como, por ejemplo, un homogeneizador.
En algunos aspectos, se establecen uno o más componentes adicionales dentro de las micropartículas. Por ejemplo, el (los) antígeno (s), imidazoquinolina (s) y/o los componentes complementarios opcionales descritos a continuación se pueden introducir añadiendo el(los) mismo(s) (a) a la solución de polímero, si están en forma soluble en aceite o dispersable en aceite o (b) a la solución acuosa, si está en forma soluble en agua o dispersable en agua.
Se combina luego un volumen de la emulsión o/w con un segundo volumen más grande de una solución acuosa, que por lo general contiene un tensioactivo. La proporción de volumen de la solución acuosa a la emulsión o/w por lo general varía desde aproximadamente 2:1 a 10:1, más por lo general aproximadamente 4:1. Los ejemplos de
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tensioactivos apropiados para la práctica de la invención se enumeran anteriormente. Los expertos en la materia se pueden seleccionar fácilmente tensioactivos apropiados para el tipo de especie que se va a adsorber. Por ejemplo, las micropartículas fabricadas en presencia de tensioactivos cargados, tales como tensioactivos aniónicos o catiónicos, pueden producir micropartículas con una superficie que tiene una carga neta negativa o una carga positiva neta, que puede adsorber una amplia variedad de moléculas. Por ejemplo, micropartículas fabricadas con tensioactivos aniónicos, tales como dodecilsulfato de sodio (SDS), por ejemplo, micropartículas de SDS-PLG, adsorben fácilmente especies cargadas positivamente, por ejemplo, especies que contienen polipéptidos tales como proteínas. De manera similar, las micropartículas fabricadas con tensioactivos catiónicos, tales como CTAB, por ejemplo, micropartículas de CTAB-PLG, adsorben fácilmente especies cargadas negativamente, por ejemplo, especies que contienen polinucleótidos tales como ADN. Ciertas especies se pueden adsorber más fácilmente a micropartículas que tienen una combinación de tensioactivos. Además, en algunos casos, puede ser deseable añadir un tensioactivo a la solución orgánica anterior.
Esta mezcla se homogeneiza a continuación para producir una emulsión doble w/o/w estable. Cada una de las etapas de homogeneización anteriores se realiza por lo general a una temperatura ambiente (esto es, 25 °C) o menos, más por lo general menos, por ejemplo, mientras se enfría dentro de un baño de hielo.
El(los) solvente(s) orgánico(s) se evapora(n). Después de la preparación, las micropartículas se pueden usar tal cual o liofilizadas para uso futuro.
Los parámetros de formulación se pueden manipular para permitir la preparación de micropartículas pequeñas del orden de 0,05 |im (50 nm) a micropartículas más grandes de 50 |im o incluso mayores. Véase, por ejemplo, Jeffery et al., Pharm. Res. (1993) 10:362-368; McGee et al., J. Microencap. (1996). Por ejemplo, la agitación reducida por lo general da como resultado micropartículas más grandes, como lo hace un aumento en el volumen de la fase interna y un aumento en la concentración del polímero. Las partículas pequeñas se producen por lo general mediante agitación aumentada, así como volúmenes de fase acuosa baja, altas concentraciones de estabilizadores de emulsión y una disminución en la concentración de polímero.
E. Antígenos
Los antígenos útiles en la presente invención incluyen, por ejemplo y sin limitación, antígenos derivados de la familia del herpesvirus, incluidos antígenos derivados del virus del herpes simple (HSV) tipos 1 y 2, tales como las glicoproteínas HSV-1 y HSV-2 gB, gD y gH; antígenos derivados del virus de la varicela zoster (VZV), virus de Epstein-Barr (EBV) y citomegalovirus (CMV) que incluyen gB y gH de CMV; y antígenos derivados de otros virus del herpes humano tales como HHV6 y HHV7. (Véase, por ejemplo, Chee et al., Cytomegaloviruses (J. K. McDougall, ed., Springer-Verlag 1990) pp. 125-169, para una revisión del contenido de codificación de proteína de citomegalovirus; McGeoch et al., J. Gen. Virol. (1988) 69:1531-1574, para una discusión de las diversas proteínas codificadas por HSV-1, la Patente de los Estados Unidos No. 5,171,568 para una discusión de las proteínas gB y gD de HSV-1 y HSV-2 y los genes que codifican para las mismas; Baer et al., Nature (1984) 310:207-211, para la identificación de secuencias codificantes de proteínas en un genoma de EBV, y Davison and Scott, J. Gen. Virol. (1986) 67:1759-1816, para una revisión de VZV).
Antígenos de la familia de virus de la hepatitis, incluyendo el virus de la hepatitis A (HAV), el virus de la hepatitis B (HBV), el virus de la hepatitis C (HCV), el virus de la hepatitis delta (HDV), el virus de la hepatitis E (HEV) y el virus de la hepatitis G (HGV), también se puede usar convenientemente en las técnicas descritas en este documento. A modo de ejemplo, se conoce la secuencia genómica viral de HCV, como lo son los procedimientos para obtener la secuencia. Véase, por ejemplo, Publicaciones Internacionales Nos. WO 89/04669; Wo 90/11089; y WO 90/14436, incorporado en este documento por referencia en su totalidad. El genoma del HCV codifica varias proteínas virales, que se analizarán más adelante. Estas proteínas, así como sus fragmentos antigénicos de los mismos, encontrarán uso en la presente invención. De manera similar, se conoce la secuencia del antígeno delta de HDV (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos No. 5,378,814) y esta secuencia también se puede usar de forma conveniente en la presente invención. Además, los antígenos derivados del HBV, tal como el antígeno central, el antígeno de superficie, sAg, así como las secuencias anteriores a la superficie, pre-Sl y pre-S2 (anteriormente llamadas pre-S), así como combinaciones de los anteriores, tales como como sAg/pre-S1, sAg/pre-S2, sAg/pre- Sl/pre-S2, y pre-S1/pre-S2, encontrará uso en este documento. Véase, por ejemplo, "HBV Vaccines--from the laboratory to license: a case study" in Mackett, M. and Williamson, J. D., Human Vaccines and Vaccination, pp. 159176, para una discusión sobre la estructura del HBV; y la Patente de los Estados Unidos Nos. 4,722,840, 5,098,704, 5,324,513; Beames et al., J. Virol. (1995) 69:6833-6838, Birnbaum et al., J. Virol. (1990) 64:3319-3330; y Zhou et al., J. Virol. (1991) 65:5457-5464.
Los antígenos derivados de otros virus también encontrarán uso en la invención, tales como, sin limitación, antígenos derivados de miembros de las familias Picornaviridae (por ejemplo, poliovirus, etc.); Caliciviridae; Togaviridae (por ejemplo, virus de la rubéola, virus del dengue, etc.); Flaviviridae; Coronaviridae; Reoviridae; Birnaviridae; Rhabodoviridae (por ejemplo, virus de la rabia, etc.); Filoviridae; Paramyxoviridae (por ejemplo, virus de la parotiditis, virus del sarampión, virus sincicial respiratorio, etc.); Orthomyxoviridae (por ejemplo, tipos de virus de influenza A, B y C, etc.); Bunyaviridae; Arenaviridae; Retroviradae (por ejemplo, HTLV-I; HTLV-II; HIV-1 (también conocido como HTLV-III, LAV, ARV, hTLR, etc.)), incluyendo pero sin limitar a, antígenos de los aislados HIVmb, HIVsv2, HIVlav, HIVlai, HIVmn); HIV-1 CM235, HIV-1 us4; HIV-2; virus de la inmunodeficiencia simia (VIS), entre otros.
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Además, los antígenos también se pueden derivar del virus del papiloma humano (HPV) y los virus de la encefalitis transmitida por garrapatas. Véase, por ejemplo, Virology, 3a Edition (W. K. Joklik ed. 1988); Fundamental Virology, 2nd Edition (B. N. Fields and D. M. Knipe, eds. 1991), para una descripción de estos y otros virus.
Más particularmente, la proteína de envoltura gp120 de cualquiera de los aislados de HIV anteriores, que incluyen miembros de los diversos subtipos genéticos de HIV, es conocida e informada (véase, por ejemplo, Myers et al., Los Alamos Database, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, N. Mex. (1992); Myers et al., Human Retroviruses and Aids, 1990, Los Alamos, N. Mex.: Los Alamos National Laboratory; and Modrow et al., J. Virol. (1987) 61:570- 578, para una comparación de las secuencias del gen de la envoltura de una variedad de aislados de HIV) y las secuencias derivadas de cualquiera de estos aislados encontrarán uso en los presentes procedimientos. Además, la invención es igualmente aplicable a otras proteínas inmunogénicas derivadas de cualquiera de los diversos aislados de HIV, incluyendo cualquiera de las diversas proteínas de envoltura tales como gp160, gpl40 y gp41, antígenos gag tales como p24gag y p55gag, así como proteínas derivadas de la región pol.
El virus de la gripe es otro ejemplo de un virus para el cual la presente invención es útil. Específicamente, los antígenos derivados del virus de la gripe incluyen las glicoproteínas de la envoltura HA y NA de la gripe A, que son de particular interés para generar una respuesta inmune. Se han identificado numerosos subtipos HA de influenza A (Kawaoka et al., Virology (1990) 179:759-767; Webster et al., "Antigenic variation among type A influenza viruses," p. 127-168. In: P. Palese and D. W. Kingsbury (ed.), Genetics of influenza viruses. Springer-Verlag, New York). De este modo, las proteínas derivadas de cualquiera de estos aislados también se pueden usar en la invención descrita en este documento.
Los antígenos para uso en las composiciones y procedimientos descritos en este documento también se pueden derivar de numerosos antígenos bacterianos, tales como los de organismos que causan difteria, cólera, tuberculosis, tétanos, tos ferina, meningitis y otros estados patógenos, que incluyen, sin limitación, Meningococcus A, B y C, Hemophilus influenza tipo B (HIB) y Helicobacter pylori (por ejemplo, Cag, Vac, Nap, HopX, HopY, ureasa, etc.). Los ejemplos de antígenos parásitos incluyen los derivados de organismos que causan la malaria y la enfermedad de Lyme.
Adicionalmente, las composiciones y procedimientos descritos en este documento proporcionan un medio para tratar una variedad de cánceres malignos. Por ejemplo, la presente invención se puede usar para montar respuestas inmunitarias tanto humorales como celulares a proteínas particulares específicas del cáncer en cuestión, tales como un oncogén activado, un antígeno fetal o un marcador de activación. Tales antígenos tumorales incluyen cualquiera de los diversos MAGE (antígeno E asociado a melanoma), que incluyen MAGE 1, 2, 3, 4, etc. (Boon, T. Scientific American (March 1993):82-89); cualquiera de las diversas tirosinasas; MART 1 (antígeno de melanoma reconocido por las células T), ras mutante; p53 mutante; antígeno de melanoma p97; CEA (antígeno carcinoembrionario), entre otros.
Es fácilmente evidente que la presente invención se puede usar para generar anticuerpos contra un gran número de antígenos con fines de diagnóstico e inmunopurificación, así como para prevenir o tratar una amplia variedad de enfermedades.
Como se explicó anteriormente, las composiciones y procedimientos de la presente invención pueden emplear antígenos de HCV. El genoma del virus de la hepatitis C por lo general contiene un solo marco de lectura abierto de aproximadamente 9.600 nucleótidos, que se transcribe en una poliproteína. La secuencia de longitud completa de la poliproteína se describe en la Publicación Europea No 388,232 y en la Patente de los Estados Unidos No. 6,150,087, incorporada en este documento como referencia en su totalidad. Como se muestra en la tabla 1, una poliproteína del HCV, tras la escisión, produce al menos diez productos distintos, en el orden de NH2-Core-E1-E2- p7-NS2-NS3-NS4a-NS4b-NS5a-NS5b-CoOH. El polipéptido núcleo se produce en las posiciones 1-191, numeradas con respecto a HCV-1 (véase, Choo et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2451-2455, para el genoma de HCV- 1). Este polipéptido se procesa adicionalmente para producir un polipéptido de HCV con aproximadamente aminoácidos 1-173. Los polipéptidos de envoltura, E1 y E2, se producen en aproximadamente las posiciones 192383 y 384-746, respectivamente. El dominio P7 se encuentra aproximadamente en las posiciones 747-809. NS2 es una proteína de membrana integral con actividad proteolítica y se encuentra aproximadamente en las posiciones 810-1026 de la poliproteína. NS2, ya sea solo o en combinación con NS3 (encontrado aproximadamente en las posiciones 1027-1657), escinde el enlace de NS2-NS3 que a su vez genera el extremo N de NS3 y libera una poliproteína grande que incluye actividades tanto de serina proteasa como ARN helicasa. La proteasa NS3, que se encuentra aproximadamente en las posiciones 1027-1207, sirve para procesar la poliproteína restante. La actividad helicasa se encuentra aproximadamente en las posiciones 1193-1657. La finalización de la maduración de la poliproteína se inicia por escisión autocatalítica en la unión NS3-NS4a, catalizada por la serina proteasa NS3. Las posteriores divisiones mediadas por NS3 de la poliproteína de HCV parecen implicar el reconocimiento de las uniones de escisión de poliproteína por una molécula NS3 de otro polipéptido. En estas reacciones, NS3 libera un cofactor NS3 (NS4a, encontrado a aproximadamente en las posiciones 1658-1711), dos proteínas (NS4b encontrado a aproximadamente en las posiciones 1712-1972, y NS5a en aproximadamente las posiciones 1973-2420), y una ARN polimerasa dependiente de ARN (NS5b encontrado aproximadamente en las posiciones 2421-3011).
Se conocen secuencias para productos de poliproteína de HCV y polipéptidos inmunogénicos derivados de ellas (véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 5350671). Por ejemplo, se han descrito una serie de
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polipéptidos inmunogénicos generales y específicos, derivados de la poliproteína del HCV. Véase, por ejemplo, Houghton et al., Publicaciones Europea. Nos. 318, 216 y 388, 232; Choo et al. Science (1989) 244:359-362; Kuo et al. Science (1989) 244:362-364; Houghton et al. Hepatology (1991) 14:381-388; Chien et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89:10011-10015; Chien et al. J. Gastroent. Hepatol. (1993) 8:S33-39; Chien et al., Publicación Internacional No. WO 93/00365; Chien, D. Y., Publicación Internacional No. WO 94/01778. Estas publicaciones proporcionan antecedentes extensos sobre el HCV en general, así como sobre la fabricación y los usos de los reactivos inmunológicos del polipéptido del HCV. Por razones de brevedad, por lo tanto, la divulgación de estas publicaciones se incorpora en este documento como referencia.
Cualquier polipéptido de HCV antigénico deseado se puede utilizar con la presente invención, incluyendo, por ejemplo, las glicoproteínas de la envoltura E1 y/o E2 de HCV, así como los complejos E1E2, asociados ya sea a través de interacciones covalentes o no covalentes. Tales complejos pueden estar compuestos por fragmentos inmunogénicos de E1 y E2 que comprenden epítopos. Por ejemplo, fragmentos de polipéptidos E1 pueden comprender desde aproximadamente 5 hasta casi la longitud completa de la molécula, tal como 6, 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 185 o más aminoácidos de un polipéptido e1, o cualquier número entero entre los números establecidos. De manera similar, los fragmentos de polipéptidos E2 pueden comprender 6, 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300 o 350 aminoácidos de un polipéptido E2, o cualquier número entero entre los números indicados. Los polipéptidos E1 y E2 pueden ser de las mismas o diferentes cepas de HCV. Por ejemplo, los epítopos derivados de, por ejemplo, la región hipervariable de E2, tal como una región que abarca los aminoácidos 384-410 o 390-410, se pueden incluir en el polipéptido E2. Un epítopo E2 particularmente eficaz para incorporar en la secuencia E2 o complejos E1E2 es uno que incluye una secuencia consenso derivada de esta región, tal como la secuencia consenso para los aminoácidos 390-410 del genoma del HCV tipo 1. Los epítopos adicionales de E1 y E2 son conocidos y se describen en, por ejemplo, Chien et al., Publicación internacional No. WO 93/003 65.
Además, los polipéptidos E1 y E2 pueden carecer de todo o una parte del dominio que abarca la membrana. La secuencia de anclaje a la membrana funciona para asociar el polipéptido al retículo endoplásmico. Normalmente, tales polipéptidos son capaces de secretarse en un medio de crecimiento en el que se cultiva un organismo que expresa la proteína. Sin embargo, como se describe en la Publicación Internacional No. WO 98/50556, tales polipéptidos también pueden recuperarse intracelularmente. La secreción en el medio de crecimiento se determina fácilmente usando una serie de técnicas de detección, que incluyen, por ejemplo, electroforesis en gel de poliacrilamida y similares, y técnicas inmunológicas tales como ensayos de inmunoprecipitación como se describe, por ejemplo, en la Publicación Internacional No. WO 96/04301, publicada el 15 de febrero de, 1996. Con E1, generalmente los polipéptidos que terminan con aproximadamente la posición de aminoácido 370 y superior (en base a la numeración de E1 de HCV1) serán retenidos por el ER y por consiguiente no se secretan en los medios de crecimiento. Con E2, los polipéptidos que terminan con aproximadamente la posición de aminoácido 731 y superior (también se basan en la numeración de la secuencia de E2 de HCV1) serán retenidos por el ER y no secretados. (Véase, por ejemploPublicación Internacional No. WO 96/04301, publicada el 15 de febrero de 1996). Cabe señalar que estas posiciones de aminoácidos no son absolutas y pueden variar hasta cierto punto. De este modo, la presente invención contempla el uso de polipéptidos E1 y E2 que retienen el dominio de unión transmembrana, así como polipéptidos que carecen de todo o una parte del dominio de unión transmembrana, incluyendo polipéptidos E1 que terminan en aproximadamente los aminoácidos 369 y menores, y los polipéptidos E2, que terminan en aproximadamente los aminoácidos 730 y menores, están destinados a ser capturados por la presente invención. Adicionalmente, el truncamiento C-terminal se puede extender más allá del dominio de expansión transmembrana hacia el extremo N-terminal. De este modo, por ejemplo, los truncamientos E1 que ocurren en posiciones menores a, por ejemplo, los truncamientos 360 y E2 que ocurren en posiciones menores a, por ejemplo, 715, también están abarcados por la presente invención. Todo lo que es necesario es que los polipéptidos E1 y E2 truncados sigan siendo funcionales para su propósito previsto. Sin embargo, las construcciones de E1 truncadas particularmente preferidas son aquellas que no se extienden más allá del aminoácido 300. Las más preferidas son las que terminan en la posición 360. Las construcciones de E2 truncadas preferidas son aquellas con truncamientos C-terminales que no se extienden más allá de aproximadamente la posición de aminoácido 715. Los truncamientos E2 particularmente preferidos son aquellas moléculas truncadas después de cualquiera de los aminoácidos 715-730, tales como 725. Si se usan moléculas truncadas, es preferible usar moléculas E1 y E2 que están ambas truncadas.
E2 existe como especies múltiples (Spaete et al., Virol. (1992) 188:819-830; Selby et al., J. Virol. (1996) 70:5177- 5182; Grakoui et al., J. Virol. (1993) 67:1385-1395; Tomei et al., J. Virol. (1993) 67:4017-4026) y se pueden producir la escisión y proteólisis en los extremos N y C de los polipéptidos E1 y E2. De este modo, un polipéptido E2 para uso en este documento puede comprender al menos los aminoácidos 405-661, por ejemplo, 400, 401, 402... a 661, tales como 384-661, 384-715, 384-746, 384-749 o 384-809, o 384 a cualquier término C entre 661-809, de una poliproteína de HCV, numerada en relación con la poliproteína de HCV-1 de longitud completa. De manera similar, los polipéptidos E1 preferibles para su uso en la presente invención pueden comprender los aminoácidos 92-326, 192-330, 192-333, 192-360, 192-363, 192-383, o 192 a cualquier extremo C-terminal entre 326-383, de una poliproteína del HCV
Los polipéptidos E1 y E2 y complejos de los mismos también pueden estar presentes como asialoglicoproteínas. Tales asialoglicoproteínas se producen por procedimientos conocidos en la técnica, tales como mediante el uso de células en las que la glicosilación terminal está bloqueada. Cuando estas proteínas se expresan en tales células y se aíslan mediante cromatografía de afinidad de lectina GNA, las proteínas E1 y E2 se agregan espontáneamente. Los procedimientos detallados para producir estos agregados de E1E2 se describen en, por ejemplo, la Patente de los
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Estados Unidos No. 6074852. Por ejemplo, los complejos E1E2 se producen fácilmente de forma recombinante, como proteínas de fusión o, por ejemplo, cotransfectando células huésped con construcciones que codifican los polipéptidos E1 y E2 de interés. La cotransfección se puede llevar a cabo ya sea en trans o cis, esto es, usando vectores separados o usando un único vector que porta ambos de los genes E1 y E2. Si se hace usando un único vector, ambos genes pueden ser dirigidos por un único conjunto de elementos de control o, alternativamente, los genes pueden estar presentes en el vector en casetes de expresión individuales, dirigidos por elementos de control individuales. Después de la expresión, las proteínas E1 y E2 se asociarán espontáneamente. Alternativamente, los complejos se pueden formar mezclando las proteínas individuales juntas que se han producido por separado, ya sea en forma purificada o semipurificada, o incluso mezclando los medios de cultivo en los que se han cultivado las células huésped que expresan las proteínas, si las proteínas se secretan. Finalmente, los complejos E1E2 de la presente invención se pueden expresar como una proteína de fusión en la que la parte deseada de E1 se fusiona con la parte deseada de E2.
Además, los complejos E1E2 pueden estar presentes como una mezcla heterogénea de moléculas, debido a la escisión y la escisión proteolítica, como se describió anteriormente. De este modo, una composición que incluye complejos E1E2 puede incluir múltiples especies de E1E2, tales como E1E2 que termina en el aminoácido 746 (E1E2746), E1E2 que termina en el aminoácido 809 (E1E2809), o cualquiera de las otras diversas moléculas E1 y E2 descritas anteriormente, tales como moléculas E2 con truncamientos N-terminales desde 1-20 aminoácidos, tales como especies E2 que comienzan en el aminoácido 387, aminoácido 402, aminoácido 403, etc.
Los complejos E1E2 se producen fácilmente de forma recombinante, ya sea como proteínas de fusión o, por ejemplo, cotransfectando células huésped con construcciones que codifican los polipéptidos E1 y E2 de interés. La cotransfección se puede llevar a cabo ya sea en trans o cis, esto es, usando vectores separados o usando un único vector que porta ambos de los genes E1 y E2. Si se hace usando un único vector, ambos genes pueden ser dirigidos por un único conjunto de elementos de control o, alternativamente, los genes pueden estar presentes en el vector en casetes de expresión individuales, dirigidos por elementos de control individuales. Después de la expresión, las proteínas E1 y E2 se asociarán espontáneamente. Alternativamente, los complejos se pueden formar mezclando las proteínas individuales juntas que se han producido por separado, ya sea en forma purificada o semipurificada, o incluso mezclando los medios de cultivo en los que se han cultivado las células huésped que expresan las proteínas, si las proteínas son secretadas. Finalmente, los complejos E1E2 de la presente invención se pueden expresar como una proteína de fusión en la que la parte deseada de E1 se fusiona con la parte deseada de E2.
Se conocen en la técnica procedimientos para producir complejos E1E2 a partir de proteínas E1 y E2 truncadas de longitud completa que se secretan en medios, así como proteínas truncadas producidas intracelularmente. Por ejemplo, tales complejos se pueden producir de forma recombinante, como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 6,121,020; Ralston et al., J. Virol. (1993) 67:6753-6761, Grakoui et al., J. Virol. (1993) 67:1385-1395; y Lanford et al., Virology (1993) 197:225-235.
Otros polipéptidos de HCV también se pueden usar en la invención. Por ejemplo, polipéptidos de HCV derivados de la región Core, tales como polipéptidos derivados de la región encontrada entre los aminoácidos 1-191; aminoácidos 10-53; aminoácidos 10-45; aminoácidos 67-88; aminoácidos 86-100; 81-130; aminoácidos 121-135; aminoácidos 120-130; aminoácidos 121-170; y cualquiera de los epítopos de núcleo identificados en, por ejemplo, Houghton et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,350,671; Chien et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89:10011-10015; Chien et al. J. Gastroent. Hepatol. (1993) 8:S33-39; Chien et al., Publicación Internacional No. WO 93/00365; Chien, D. Y., Publicación Internacional No. WO 94/01778; y Patente de los Estados Unidos No. 6,150,087, encontrará uso con las composiciones y procedimientos objeto.
Además, los polipéptidos derivados de las regiones no estructurales del virus también encontrarán uso en este documento. La región NS3/4a de la poliproteína del HCV se ha descrito y la secuencia de aminoácidos y la estructura general de la proteína se describen en Yao et al. Structure (November 1999) 7:1353-1363. Véase, también, Dasmahapatra et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,843,752, incorporada en este documento como referencia en su totalidad. Como se indicó anteriormente, ya sea la secuencia nativa o análogos inmunogénicos se pueden usar en las formulaciones del sujeto. Dasmahapatra et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,843,752 y Zhang et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,990,276, ambos describen análogos de NS3/4a y procedimientos de preparación de los mismos.
Además, los polipéptidos para uso en las composiciones y procedimientos objeto se pueden derivar de la región NS3 de la poliproteína del HCV. Se conocen un número de tales polipéptidos, que incluyen, pero no se limitan a, polipéptidos derivados de las regiones c33c y c100, así como proteínas de fusión que comprenden un epítopo NS3, tal como c25. Estos y otros polipéptidos NS3 son útiles en las presentes composiciones y son conocidos en la técnica y se describen en, por ejemplo, Houghton et al, Patente de los Estados Unidos No. 5,350,671; Chien et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1992) 89:10011-10015; Chien et al. J. Gastroent. Hepatol. (1993) 8:S33-39; Chien et al., Publicación Internacional No. wO 93/00365; Chien, D. Y., Publicación Internacional No. WO 94/01778; y la Patente de los Estados Unidos No. 6,1 50087.
Además, múltiples antígenos de fusión de epítopos (denominados "MEFA"), como se describe en Publicación Internacional No. WO 97/44469, se puede usar en este documento. Tales MEFA incluyen múltiples epítopos derivados de dos o más de las diversas regiones virales. Los epítopos son preferiblemente de más de una cepa de
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HCV, proporcionando de este modo la capacidad añadida de proteger contra cepas múltiples de HCV en una única vacuna.
Se debe observar que, por conveniencia, las diversas regiones de HCV generalmente se definen con respecto al número de aminoácidos en relación con la poliproteína codificada por el genoma de HCV-la, como se describe en Choo et al. (1991) Proc Natl Acad Sci USA 88:2451, con la metionina iniciadora siendo designada posición 1. Sin embargo, los antígenos para uso con la presente invención no se limitan a los derivados de la secuencia de HCV-la. Cualquier cepa o aislado de HCV puede servir como base para proporcionar secuencias antigénicas para uso con la invención. A este respecto, las regiones correspondientes en otro aislado de HCV se pueden determinar fácilmente alineando las secuencias de los dos aislados de una manera que lleva las secuencias a una alineación máxima.
Se conocen en la técnica diversas cepas y aislados de HCV, que se diferencian entre sí por cambios en la secuencia de nucleótidos y aminoácidos. Por ejemplo, aislar HCV J1.1 se describe en Kubo et al (1989) Japan. Nucl. Acids Res. 17:10367-10372; Takeuchi et al. (1990) Gene 91:287-291; Takeuchi et al. (1990) J. Gen. Virol. 71:3027-3033; y Takeuchi et al. (1990) Nucl. Acids Res. 18:4626. Las secuencias de codificación completas de dos aislados independientes, HcV-J y BK, están descritas por Kato et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:9524-9528 y Takamizawa et al., (1991) J. Virol. 65:1105-1113, respectivamente. Los aislados de HCV-1 están descritos por Choo et al. (1990) Brit. Med. Bull. 46:423-441; Choo et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:2451-2455 y Han et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1711-1715. Los aislados de HCV HC-J1 y HC-J4 se describen en Okamoto et al. (1991) Japan J. Exp. Med. 60:167-177. Los aislados de HCV HCT 18. Respecto, HCT 23, Th, HCT 27, EC1 y EC10 están descritos en Weiner et al. (1991) Virol. 180:842 848. Los aislados de HCV Pt-1, HCV-K1 y HCV-K2 se describen en Enomoto et al. (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun. 170:1021-1025. Los aislados de HCV A, C, D y E se describen en Tsukiyama-Kohara et al. (1991) Virus Genes 5:243-254. Los polipéptidos de HCV para uso en las composiciones y procedimientos de la invención se pueden obtener a partir de cualquiera de las cepas de HCV citadas anteriormente o de aislados recién descubiertos aislados de tejidos o fluidos de pacientes infectados.
Otros antígenos útiles en la presente invención son los derivados del HIV. El genoma del HIV incluye las regiones conocidas como Gag (p55gag), Pol, Vif, Vpr, Tat, Rev, Vpu, Env y/o Nef. Los antígenos de HIV de cualquiera de estas regiones, de cualquiera de los diversos subtipos, tales como el subtipo B de HIV y el subtipo C de HIV, así como cualquiera de los diversos aislados encontrarán uso con la presente invención. Será fácilmente evidente para un experto en la materia a la vista de las enseñanzas de la presente divulgación cómo determinar las regiones correspondientes en otras cepas o variantes de HIV (por ejemplo, aislados HIVmb, HIVsf2, HIV-1sf162, HIV-1sf170, HIVlav, HIVlai, HIVmn, HIV-1 CM235, HIV-1 us4, otras cepas de HIV-1 de diversos subtipos (por ejemplo, subtipos, A G y O), cepas de HIV-2 y diversos subtipos y virus de la inmunodeficiencia simia (SIV). (Véase, por ejemplo, Virology, 3rd Edition (W. K. Joklik ed. 1988); Fundamental Virology, 2nd Edition (B. N. Fields and D. M. Knipe, eds. 1991); Virology, 3rd Edition (Fields, B N, D M Knipe, P M Howley, Editors, 1996, Lippincott-Raven, Philadelphia, Pa.; para una descripción de estos y otros virus relacionados), usando, por ejemplo, programas de comparación de secuencias (por ejemplo, BLAST y otros descritos en este documento) o identificación y alineación de características estructurales (por ejemplo, programa tal como el programa "ALB" descrito en este documento que puede identificar las diversas regiones).
La proteína de envoltura de HIV es una glicoproteína de aproximadamente 160 kd (gp160). Durante la infección del virus de la célula huésped, gp160 se escinde mediante proteasas de la célula huésped para formar gp120 y la proteína de membrana integral, gp41. La parte de gp41 está anclada en la membrana bicapa de virión, mientras que el segmento de gp120 sobresale en el entorno circundante. gp120 y gp41 están más covalentemente asociados y se puede liberar gp120 libre de la superficie de viriones y células infectadas. El polipéptido gp120 es fundamental para mediar en la entrada a la célula huésped. Estudios recientes han indicado que la unión de CD4 a gp120 induce un cambio conformacional en Env que permite la unión a un correceptor (por ejemplo, un receptor de quimioquinas) y la posterior entrada del virus en la célula. (Wyatt, R., et al. (1998) Nature 393:705-711; Kwong, P., et al.(1998) Nature 393:648-659). CD4 está unido a una depresión formada en la interfaz del dominio externo, el dominio interno y la hoja de puente de gp120.
Los procedimientos recombinantes para obtener los diversos antígenos de HIV una vez que se identifica la región deseada son bien conocidos en la técnica. Véase, también, la Patente de los Estados Unidos No. 5,614,612.
Además, las secuencias modificadas de cualquiera de estas regiones de HIV, tales como gp120 y p55gag modificados, se pueden usar en la presente invención. Las secuencias pueden modificarse para un uso óptimo de codones para simular codones humanos y reducir la toxicidad. Tales secuencias modificadas son conocidas en la técnica y las secuencias y procedimientos de producción de las mismas se describen en detalle en las Publicaciones Internacionales de propiedad común Nos. WO 00/39304 y WO 00/39302, así como en la Publicación Internacional No. WO98/34640.
La presente invención también es útil para antígenos derivados de Neisseria spp., tal como N. meningitidis, el agente causante de la meningitis bacteriana y la sepsis. Los meningococos se dividen en grupos serológicos basados en las características inmunológicas de los antígenos capsulares y de la pared celular. Los serogrupos actualmente reconocidos incluyen A, B, C, W-135, X, Y, Z y 29E. Para los fines de la presente invención, un antígeno meningocócico se puede derivar de cualquiera de los diversos serogrupos conocidos. Los polisacáridos responsables de la especificidad del serogrupo se han purificado a partir de varios de estos grupos, incluidos A, B,
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C, W-135 e Y. Se han desarrollado vacunas efectivas basadas en polisacáridos capsulares contra la enfermedad meningocócica causada por los serogrupos A, C, Y y W135 y cualquiera de estos antígenos de vacuna encontrarán uso en las presentes composiciones y procedimientos. Véanse, por ejemplo, las Publicaciones Internacionales Nos. WO 96/29412, WO 96/14086, WO 99/57280, WO 00/22430, WO 99/24578, WO 99/36544, así como Tettelin et al. (2000) Science 287:1809-1815 y Pizza et al. (2000) Science 287:1816-1820, para una descripción de diversos antígenos proteicos meningocócicos que se encontrarán en este documento. Adicionalmente, los antígenos sacáridos, tales como los del serogrupo A de N. meningitidis, C W135 y/o Y, tal como se describe en Costantino et al. (1992) Vaccine 10:691-698 y Costantino et al. (1999) Vaccine 17:1251-1263 encontrará uso en este documento. Otros antígenos de Neisseria útiles incluyen los derivados de N. gonorrhorea, por ejemplo, los descritos en las Publicaciones Internacionales Nos. WO 99/57280, WO 99/24578 y WO 99/36544.
Por ejemplo, el serogrupo B de N. meningitidis (denominado en este documento "MenB") representa un gran porcentaje de meningitis bacteriana en bebés y niños que residen en los EE. UU. y Europa. De acuerdo con lo anterior, los antígenos derivados de MenB son particularmente útiles con las presentes composiciones y procedimientos, tales como cualquiera de los antígenos expresados por los diversos marcos de lectura abiertos (ORF) del genoma MenB. Véase, por ejemplo, Publicación Internacional No. WO 99/57280. Los ejemplos de dichos antígenos incluyen las proteínas MenB 961 y 287. Otros antígenos meningocócicos para su uso en este documento incluyen derivados del polisacárido MenB capsular (denominados en este documento “derivados de PS de MenB”). Los ejemplos de derivados de PS de MenB se describen en la Publicación EP No. 504,202 B y la Patente de los Estados Unidos No. 4,727,136. También son útiles los miméticos moleculares de epítopos únicos de PS MenB como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 6,030,619. Además, las preparaciones de vesículas de membrana externa de MenB, tales como las descritas en la Solicitud de Patente Internacional PCT/IB01/00166, Bjune et al. (1991) Lancet 338:1093-1096, Fukasawa et al. (1999) Vaccine 17:2951-2958 y Rosenquist et al. (1998) Dev. Biol. Stand. 92:323-333.
Se ha descrito la secuencia genómica completa de MenB, cepa MC58. Tettelin et al., Science (2000) 287:1809. Varias proteínas que provocaron respuestas de anticuerpos bactericidas en suero se han identificado por secuenciación del genoma completo. Muchas de estas proteínas tienen secuencias que están altamente conservadas entre Neisseria meningitidis. Pizza et al., Science (2000) 287:1816. De acuerdo con lo anterior, tales antígenos encontrarán uso en la presente invención.
El antígeno se puede proporcionar en forma de partículas de proteína como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 6,534,064 de O'Hagan et al. y Pub. No. US 2005/0107322 de O'Hagan et al. Tales partículas se pueden formar a partir de antígenos apropiados seleccionados entre los anteriores, entre otros.
En algunos aspectos, el antígeno es una micropartícula producida por un procedimiento que comprende las etapas de: (a) formar una partícula a partir de una solución acuosa; (b) estabilizar la partícula de antígeno mediante un tratamiento de estabilización; y (c) recuperar la partícula de antígeno de la solución acuosa.
En algunos aspectos, el procedimiento de producción de una micropartícula de antígeno incluye una técnica de evaporación de solvente. Las técnicas de evaporación del solvente son conocidas para los expertos en la materia y se describen en este documento.
En algunos aspectos, el procedimiento de producción de una micropartícula de antígeno se basa en el uso de agentes de precipitación, por ejemplo, añadiendo un agente de precipitación a una solución acuosa de un antígeno y agitando la mezcla resultante para formar la partícula. Los ejemplos de agentes de precipitación incluyen, pero no se limitan a, uno o más de aceites, hidrocarburos o agentes de coacervación. En algunos aspectos, este procedimiento puede incluir además un ácido. Los ejemplos de ácidos incluyen, pero no se limitan a, ácido acético, ácido glicólico, ácido hidroxibutírico, ácido clorhídrico o ácido láctico.
Se puede llevar a cabo un tratamiento de estabilización que puede comprender, por ejemplo, uno o más de tratamiento térmico o tratamiento con un agente de reticulación químico. Se conocen procesos de tratamiento térmico o enlace químico cruzado. Véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 6,534,064 de O'Hagan et al. o Pub. No. US 2005/0107322 de O'Hagan et al.
Las combinaciones de antígenos derivados de uno o más organismos se pueden usar convenientemente para provocar la inmunidad frente a múltiples patógenos en una única vacuna. Un ejemplo de antígenos en una vacuna de múltiples patógenos es una combinación de oligosacáridos de superficie bacterianos derivados de MenC y Hib, conjugados con un portador mutante no tóxico derivado de una toxina bacteriana, tal como un mutante no tóxico de toxina diftérica conocido como CRM197. Este conjugado es útil para prevenir la meningitis bacteriana y se describe en la Publicación Internacional No. WO 96/14086, publicada el 17 de mayo de 1996.
F. Componentes suplementarios
Las composiciones descritas en este documento opcionalmente incluyen una variedad de componentes suplementarios. Tales componentes suplementarios opcionales incluyen excipientes farmacéuticamente aceptables y adyuvantes inmunológicos suplementarios, tales como los que se describen a continuación, entre otros.
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Como se indicó anteriormente, cuando las micropartículas son micropartículas sólidas, los componentes suplementarios opcionales pueden ser, por ejemplo: (a) establecidos dentro de las micropartículas, por ejemplo, atrapados, encapsulados, disueltos o dispersos en las micropartículas, incluyendo poblaciones separadas de micropartículas., (b) unidos a las micropartículas, por ejemplo, adsorbidos o conjugados a la superficie de las micropartículas, que incluyen poblaciones separadas de micropartículas, o (c) asociadas de otra forma con las micropartículas en diversos grados, por ejemplo, mezcladas con las micropartículas en una dispersión líquida, mezclada con las micropartículas en una composición sólida (por ejemplo, coliofilizado con las micropartículas), y así sucesivamente.
Cuando las micropartículas son micropartículas líquidas (por ejemplo, gotitas de aceite en una emulsión de aceite en agua, etc.), los componentes complementarios opcionales pueden ser independientemente, por ejemplo: disueltos o dispersos dentro de la (s) fase (s) oleosa (s) de la emulsión (incluyendo poblaciones separadas de gotitas de aceite), disuelto o disperso dentro de la fase acuosa de la emulsión y/o dispuesto en las interfaces entre las fases acuosa y oleosa de la emulsión.
Los componentes suplementarios opcionales incluyen adyuvantes inmunológicos suplementarios, que se pueden usar para mejorar adicionalmente la eficacia de las composiciones inmunogénicas. Por ejemplo, tales adyuvantes inmunológicos se pueden administrar al mismo tiempo que las composiciones inmunogénicas de la presente invención, por ejemplo, en la misma composición (por ejemplo, como se describe en los párrafos anteriores) o en composiciones separadas. Tales adyuvantes se pueden administrar antes o después de las composiciones inmunogénicas de la presente invención.
Los adyuvantes inmunológicos suplementarios incluyen, pero no se limitan a: (1) adyuvantes de saponina, tales como Quil A, o QS21 (por ejemplo, Stimulon (Cambridge Bioscience, Worcester, MA) se pueden usar o ISCOM (complejos inmunoestimulantes) generados de estos, los ICOMS que pueden estar desprovistos de detergente adicional, por ejemplo, WO00/07621; (2) adyuvante completo de Freunds (CFA) y adyuvante incompleto de Freunds (IFA); (3) citoquinas, tales como interleucinas (por ejemplo, IL-1, IL-2, iL-4, IL-5, iL-6, IL-7, IL-12 (WO99/44636), etc.), interferones (por ejemplo, interferón gamma), factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF), factor de necrosis tumoral (TNF), etc.; (4) adyuvantes de fosfolípidos, que incluyen adyuvantes de lipopolisacárido y fosfato de liposacárido, por ejemplo, monofosforil lípido A (MPL), MpL 3-O-desacilado (3dMPL), por ejemplo, GB-2220221, EPA-0689454, opcionalmente en ausencia sustancial de alumbre cuando se usa con sacáridos neumocócicos, por ejemplo, WO00/56358; así como compuestos de aminoalquil glucosamina fosfato tales como los descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 6,355,257 y fosfolípidos con grupos alcano lineales tales como los descritos en Pub. No. US 2004/0202669; (5) oligonucleótidos inmunoestimuladores que incluyen oligonucleótidos que comprenden motivos CpG (Roman et al., Nat. Med., 1997, 3, 849-854; Weiner et al., PNAS USA, 1997, 94, 1083310837; Davis et al., J. Immunol. 1988, 160, 870-876; Chu et al., J. Exp. Med., 1997, 186, 1623-1631; Lipford et al., Eur. J. Immunol. 1997, 27, 2340-2344; Moldoveanu et al., Vaccine, 1988, 16, 1216-1224, Krieg et al., Nature, 1995, 374, 546-549; Klinman et al., PNAS USA, 1996, 93, 2879-2883: Ballas et al., J. Immunol., 1996, 157, 1840-1845; Cowdery et al., J. Immunol., 1996, 156, 4570-4575; Halpern et al., Cell. Immunol., 1996, 167, 72-78; Yamamoto et al., Jpn. J. Cancer Res., 1988, 79, 866-873; Stacey et al., J. Immunol, 1996, 157, 2116-2122; Messina et al., J. Immunol., 1991, 147, 1759-1764; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 4918-4925; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 5394-5402; Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 4755-4761; y Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 5898-5906; Solicitudes de Patente Internacional WO96/02555, WO98/16247, WO98/18810, WO98/40100, WO98/55495, WO98/37919 y WO98/52581) esto es, que contiene al menos un dinucleótido CG (un nucleótido de citosina seguido por un nucleótido de guanosina), siendo la 5 metilcitosina opcionalmente usada en lugar de citosina; (6) un éter de polioxietileno o un éster de polioxietileno, por ejemplo, WO99/52549; (7) un tensioactivo de éster de polioxietileno sorbitán en combinación con un octoxinol (WO01/21207) o un tensioactivo de polioxietileno alquil éter o éster en combinación con al menos un tensioactivo no iónico adicional tal como un octoxinol (WO01/21152); (8) una saponina y un oligonucleótido inmunoestimulador (por ejemplo, un oligonucleótido CpG) (WO00/62800); (9) una saponina y una emulsión de aceite en agua, por ejemplo, WO99/11241; (10) una saponina (por ejemplo, QS21) + 3dMPL + IL- 12 (opcionalmente + un esterol) por ejemplo, WO98/57659; (11) mutantes desintoxicados de una toxina ADP- ribosilante bacteriana tal como una toxina del cólera (CT), una toxina pertussis (PT) o una toxina termolábil (LT) de E. coli, particularmente LT-K63 (donde la lisina es sustituida para el aminoácido de tipo salvaje en la posición 63) LT- R72 (donde la arginina sustituye al aminoácido de tipo salvaje en la posición 72), CT-S109 (donde la serina se sustituye por el aminoácido de tipo salvaje en la posición 109), y PT-K9/G129 (donde la lisina es sustituida por el aminoácido de tipo salvaje en la posición 9 y la glicina sustituida en la posición 129) (véanse, por ejemplo, las Publicaciones Internacionales Nos. WO93/13202 y WO92/19265); (12) aminoalquil glucosaminida 4 fosfatos (AGP), véase, por ejemplo, Johnson, D.A. et al.; Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999 Aug 2; 9(15):2273-8; (13) miméticos de lipopolisacáridos (que incluyen miméticos de monofosforil lípido A), tales como fosfolípidos no sacáridos (por ejemplo, análogos del lípido A simplificados que carecen de un disacárido) descritos en Hawkins, L.D. et al; J. Pharmacol. Exp. Ther., 2002 Feb.; 300(2):655-61 y la Patente de los Estados Unidos No. 6,290,973; (14) adyuvantes que comprenden ARN bicatenario natural o sintético ("ARNds"), que generalmente está compuesto de pares de bases intermitentes de ácido riboguanílico-ácido ribocitidílico ([rG-rC]) y ácido riboadenílico-ácido polirribouridílico ([rA-rU]); para información adicional, véanse, por ejemplo, el documento PCT/US02/30423 de propiedad común; (15) péptidos de muramilo tales como N-acetil-muramil-L-treonil-D-isoglutamina (thr-MDP), N-acetil-normuramil-L-alanil- D-isoglutamato (nor-MDP), N-acetilmuramil-L alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-(1'-2'-dipalmitoil-sn-glicero-3- hidroxifosforiloxi)-etilamina (MTP-PE), etc.; (16) compuestos de tiosemicarbazona tales como los descritos en el documento WO 04/60308; (17) compuestos de triptantrina tales como los descritos en el documento WO 04/64759;
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(18) formulaciones de polifosfaceno (PCPP) tales como las descritas, por ejemplo, en Andrianov et al. (1998) Biomaterials 19(1-3):109-115 y Payne et al. (1998) Adv. Drug Del. Rev. 31(3):185-196; (19) Derivados de lípido A que incluyen derivados de lípido A de Escherichia coli tales como OM-174, descritos por ejemplo en Meraldi et al. (2003) Vaccine 21:2485-2491 y Pajak et al. (2003) Vaccine 21:836-842; y (20) otras sustancias que actúan como agentes inmunoestimulantes para mejorar la eficacia de la composición.
Para ejemplos adicionales de adyuvantes, véase Vaccine Design, The Subunit and the Adjuvant Approach, Powell, M.F. y Newman, M.J, eds., Plenum Press, 1995).
G. Formulación y administración
Como se indicó anteriormente, el (los) antígeno (s), imidazoquinolina (s) o diversos componentes suplementarios de las composiciones de la divulgación se pueden establecer dentro (por ejemplo, atrapados, encapsulados, disueltos o dispersos) de micropartículas sólidas o líquidas, por ejemplo, al introducir estas especies durante el procedimiento de fabricación de micropartículas. El (los) antígeno (s), imidazoquinolina (s) o diversos componentes suplementarios también se pueden unir a las micropartículas (por ejemplo, conjugados o adsorbidos) o asociados de otra manera con las micropartículas, por ejemplo, introduciendo estas especies en la formación de micropartículas previamente. La adsorción y otras asociaciones se pueden establecer simplemente mezclando estas especies y las micropartículas. La conjugación de tales especies a micropartículas se puede basar en diversas químicas de enlace conocidas en la técnica que incluyen acoplamiento de carbodiimida y perfiles de solubilidad. En algunas realizaciones, el (los) antígeno (s), imidazoquinolina (s) o diversos componentes suplementarios se asocian de otra forma con las micropartículas en diversos grados, por ejemplo, mezclándolos con las micropartículas en una dispersión líquida, mezclándolas con las micropartículas en una composición sólida (por ejemplo, coliofilizado con las micropartículas), y así sucesivamente.
Las composiciones de la presente invención incluirán comúnmente uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, se pueden usar vehículos farmacéuticamente aceptables tales como agua, solución salina, glicerol, etanol, etc. Pueden estar presentes otros excipientes, tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes osmóticos, sustancias reguladoras biológicas y similares. Una solución reguladora biológica puede ser virtualmente cualquier solución que sea farmacológicamente aceptable y que proporcione a la formulación el pH deseado, esto es, un pH en el intervalo fisiológico. Los ejemplos incluyen soluciones reguladoras de fosfato, soluciones reguladoras de citrato, soluciones reguladoras de borato, soluciones reguladoras de succinato y soluciones reguladoras de histidina, así como combinaciones de solución reguladora salina, que incluyen solución salina regulada con fosfato, solución salina regulada con tris, solución salina regulada de Hank y similares. Los ejemplos de agentes osmóticos incluyen sales, azúcares, etc.
Dependiendo de la forma de dosificación final, también se pueden introducir otros excipientes conocidos en la técnica, que incluyen aglutinantes, disgregantes, cargas (diluyentes), lubricantes, deslizantes (potenciadores del flujo), adyuvantes de compresión, conservantes, agentes de suspensión/dispersión, formadores de película/recubrimientos, y así sucesivamente.
Una vez formuladas, las composiciones de la invención se pueden administrar por vía parenteral, por ejemplo, mediante inyección. Las composiciones se pueden inyectar por vía subcutánea, intraperitoneal, intravenosa o intramuscular. Otros modos de administración incluyen administración oral y pulmonar, supositorios, aplicaciones mucosales y transdérmicas. El tratamiento de dosificación puede ser un programa de dosis única o un programa de dosis múltiple. Un programa de dosis múltiples es aquel en el que un ciclo primario de vacunación puede ser de 1 a 10 dosis separadas, seguido de otras dosis administradas a intervalos de tiempo posteriores, elegidas para mantener y/o reforzar la respuesta inmune, por ejemplo, entre 1 y 4 meses, para una segunda dosis, y si es necesario, una(s) dosis posterior(es) después de varios meses. El régimen de dosificación también estará determinado, al menos en parte, por la necesidad del sujeto y dependerá del juicio del médico. Adicionalmente, si se desea la prevención de la enfermedad, las vacunas se administran generalmente antes de la infección primaria con el patógeno de interés o antes de la llegada de las células tumorales. Si se desea un tratamiento terapéutico, las vacunas se administran generalmente después de la infección primaria o la aparición de células tumorales.
En algunas realizaciones, las composiciones de la presente invención se pueden usar para la administración dirigida específica del sitio. Por ejemplo, la administración intravenosa de las composiciones se puede usar para dirigirse al pulmón, hígado, bazo, circulación sanguínea o médula ósea.
EJEMPLOS
A continuación, se encuentran ejemplos de realizaciones específicas para llevar a cabo la presente invención. Los ejemplos se ofrecen solo con fines ilustrativos, y no pretenden limitar el ámbito de la presente invención de ninguna manera.
Se han realizado esfuerzos para asegurar la precisión con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperaturas, etc.), pero, por supuesto, se deben permitir algunos errores y desviaciones experimentales.
Ejemplo 1. Preparación de formulación.
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Los materiales para este ejemplo son los siguientes: (1) RG503 PLG, que tiene una proporción de copolímero láctido/glicólido de 50/50, obtenida de Boehringer Ingelheim, USA, (2) RG 502 H PLG, que tiene una proporción de copolímero láctido/glicólido de 50/50 y que tiene un grupo carboxilo terminal libre, obtenido de Boehringer Ingelheim, uSa, (3) dioctil sulfosuccinato (DSS) obtenido de Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA, (4) imidazoquinolina 090 (síntesis descrita en Publicaciones Internacionales Nos. WO 2006/031878 de Valiante et al. y WO 2007/109810 de Sutton et al.).
Se prepararon micropartículas PLG aniónicas con imidazoquinolina encapsulada 090 usando una técnica de evaporación del solvente. En resumen, las micropartículas se prepararon emulsionando 4 mL de una solución de polímero al 15 % p/v (RG503 o RG502H) en cloruro de metileno con 1,0 mL de PBS 1x a alta velocidad usando un homogeneizador IKA. La imidazoquinolina 090 se dispersó en la fase oleosa antes de la emulsificación y se usó en la formulación de micropartículas en una cantidad igual a 1 % p/p en relación con PLG. La emulsión primaria se
añadió luego a 32 mL de agua destilada que contenía DSS (0,5 % p/p) y se homogeneizó usando un
homogeneizador Omni. Esto dio como resultado la formación de una emulsión w/o/w, que se agitó durante 12 h a temperatura ambiente, permitiendo que el cloruro de metileno se evaporara.
Se formaron formulaciones adsorbiendo antígeno a las micropartículas de PLG anteriores con imidazoquinolina 090 encapsulada. El antígeno, proteína Men B 287, se adsorbió a las partículas en una cantidad de PLG al 1 % p/p en un balancín de laboratorio durante la noche a 4 °C. Se añadieron azúcares (manitol al 4,5 % y sacarosa al 1,5 % del volumen de reconstitución) y se colocaron luego alícuotas de la formulación en pequeños viales de vidrio y se liofilizaron.
Se formaron micropartículas de PLG adsorbidas por antígeno liofilizado mediante el siguiente procedimiento: Se prepararon micropartículas de PLG aniónicas usando una técnica de evaporación de solvente. En resumen, las
micropartículas se prepararon emulsionando 4 mL de una solución de polímero al 6 % p/v (RG503) en cloruro de
metileno con 1,0 mL de PBS 1x a alta velocidad usando un homogeneizador IKA. La emulsión primaria se añadió luego a 32 mL de agua destilada que contenía DSS (0,05 % p/p) y se homogeneizó usando un homogeneizador Omni. Esto dio como resultado la formación de una emulsión w/o/w, que se agitó durante 12 h a temperatura ambiente, permitiendo que el cloruro de metileno se evaporara. Las formulaciones se formaron adsorbiendo el antígeno, Men B 287, a las micropartículas PLG aniónicas anteriores en una cantidad de 1 % p/p de PLG en un balancín de laboratorio durante la noche a 4 °C. Se añadieron azúcares (manitol al 4,5 % y sacarosa al 1,5 % del volumen de reconstitución) y se colocaron partes alícuotas de la formulación en pequeños viales de vidrio y se liofilizaron.
Se formó una formulación de imidazoquinolina 090 soluble mediante la adición de una solución de imidazoquinolina 090 (100 |ig/ml) a micropartículas de PLG adsorbidas con antígeno liofilizado reconstituido de acuerdo con el párrafo anterior. La imidazoquinolina 090 soluble se añadió en una cantidad de 10 % p/p de PLG. La dosis de antígeno fue de 1 |ig.
Se formó una formulación de imidazoquinolina 090 coliofilizada adsorbiendo antígeno de proteína Men B 287 en una cantidad de PLG al 1 % p/p sobre micropartículas de PLG adsorbidas con imidazoquinolina 090 en un balancín de laboratorio durante la noche a 4 °C. Se formaron micropartículas PLG adsorbidas de imidazoquinolina 090 adsorbiendo imidazoquinolina 090 sobre micropartículas de PLG aniónicas, formadas como anteriormente, añadiendo una solución de imidazoquinolina 090 (100 ug/ml) a micropartículas de PLG (10 % p/p de PLG para grupos que contienen 1 |ig de antígeno) y la adsorción se llevó a cabo durante la noche un balancín de laboratorio a 4 °C. Se añadieron azúcares (manitol al 4,5 % y sacarosa al 1,5 % del volumen de reconstitución) y se colocaron alícuotas de la formulación en pequeños viales de vidrio y se liofilizaron.
Ejemplo 2. Perfil de liberación in vitro.
La liberación in vitro se midió mediante el siguiente procedimiento: los viales de cada una de las formulaciones anteriores que contienen imidazoquinolina-090 se mantuvieron en un balancín a temperatura ambiente (después de reconstituir las formulaciones liofilizadas en agua). Las muestras se recogieron en el tiempo 0, 7 días, 14 días, 28 días y 42 días y se centrifugaron. La imidazoquinolina 090 se midió en el sobrenadante mediante RP-HPLC.
Los resultados se muestran en la figura 1. Como puede verse a partir de la figura 1, la formulación soluble tenía una liberación inmediata de imidazoquinolina 090, la liberación de la formulación de imidazoquinolina 090 coliofilizada era esencialmente inmediata, la imidazoquinolina 090 encapsulada (usando RG502H) se liberó esencialmente en 28 días, y una cantidad sustancial de la imidazoquinolina 090 encapsulada (usando RG503) permaneció retenida, incluso después de 42 días.
Ejemplo 3. Estudio in vivo.
Para el grupo 1 "PLG/287" en la tabla 1 a continuación, los viales PLG/287 que contienen 0,1 mg de PLG y 1 |ig de antígeno 287 adsorbido por animal preparado como en el ejemplo 1 se reconstituyeron con agua para inyección en el momento de la inmunización.
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Para el grupo 2 "PLG/287 + 090 soluble" en la tabla 1 a continuación, los viales que contienen Men B 287 (1 |ig de 287 adsorbido en 0,1 mg de PLG por animal preparado como en el ejemplo 1) se reconstituyeron con agua para inyección y se añadió imidazoquinolina 090 soluble (10 |ig por animal) en el momento de la inmunización.
Para el grupo 3 "PLG/090 coliofilizada/287" en la tabla 1 a continuación, viales que contienen PLG (0,1 mg por animal) con imidazoquinolina 090 adsorbida coliofilizada (10 |ig por animal) y Men B 287 adsorbido (1 |ig por animal) preparado como en el ejemplo 1 se reconstituyeron con agua para inyección en el momento de la inmunización.
Para el grupo 4 "RG503 PLG/090 encapsulada/287" en la tabla 1 a continuación, viales que contienen PLG RG 503 (0,1 mg por animal), imidazoquinolina 090 encapsulada (10 |ig por animal) y Men B 287 adsorbido (1 |ig por animal) preparado como en el ejemplo 1 se reconstituyeron con agua para inyección en el momento de la inmunización.
Para el grupo 4 "RG502H/090 encapsulada/287" en la tabla 1 a continuación, viales que contienen PLG RG 502H (0,1 mg por animal), imidazoquinolina 090 encapsulada (10 |ig por animal) y Men B 287 adsorbido (1 |ig por animal) preparado como en el ejemplo 1 se reconstituyeron con agua para inyección en el momento de la inmunización.
Para todos los grupos, se inyectaron IM muestras en grupos de 10 ratones CD-1 hembras el(los) día(s) 0, 21 y 35. En el día 39 y día 56, se analizaron los títulos de ELISA en suero como se describe en Singh, M. et al. (2004) J. Pharm. Sci. 93(2):273-282, y en el día 56 se analizó la actividad bactericida en suero (SBA) como se describe en Pizza, M. et al. (2000) Science 287(5459): 1816-1820. 2996 es la cepa de MenB utilizada para el análisis de SBA.
Los resultados se presentan en la tabla 1 a continuación. Como se ve en la tabla, el atrapamiento de imidazoquinolina 090 en RG 503 PLG (Grupo 4), títulos (IgG) de anticuerpos potenciados, en aproximadamente el doble y títulos séricos bactericidas (SBA) en cuatro veces en comparación con Hombres B 287 solo adsorbido (Grupo 1) y Hombres B 287 adsorbidos con imidazoquinolina 090 soluble (Grupo 2). El atrapamiento de imidazoquinolina 090 en RG 502H PLG (Grupo 5) fue más comparable con Men B 287 adsorbido solo (Grupo 1) y Men B 287 adsorbido con imidazoquinolina 090 soluble (Grupo 2). La formulación coliofilizada (Grupo 3) fue comparable a Men B 287 adsorbido solo (Grupo 1) y Men B 287 adsorbido con imidazoquinolina 090 soluble (Grupo 2), aunque los títulos de SBA se redujeron.
Tabla 1. Títulos de IgG y SBA.
2wp3 2wp3
Grupo
Formulación IgG GMT SBA 2996
1
PLG/287 9.341 256
2
PLG/287 + 090 soluble 6.323 256
3
PLG/ 090 coliofilizada/287 6.729 128
4
RG503 PLG/090 encapsulada/287 15.724 1024
5
RG502H/090 encapsulada/287 11.390 256
De este modo, nuevas composiciones y procedimientos para su uso y de esta forma se dan a conocer. Aunque la presente invención se ha descrito con referencia a las realizaciones específicas de la misma, los expertos en la materia deben entender que pueden realizarse diversos cambios y pueden sustituirse equivalentes sin apartarse del ámbito de la invención.

Claims (13)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    REIVINDICACIONES
    1. Una composición inmunogénica que comprende (a) un primer antígeno que contiene un polipéptido, (b) al menos un primer y segundo adyuvantes, en la que el primer adyuvante comprende una micropartícula que comprende poli (D, L-láctido-co-glicólido) y en la que el segundo adyuvante comprende un compuesto de imidazoquinolina que está atrapado, encapsulado, disuelto o disperso dentro de dicha micropartícula introduciendo el compuesto de imidazoquinolina durante el procedimiento de fabricación de micropartículas, y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que dicha composición provoca una respuesta inmune cuando se administra a un sujeto vertebrado.
  2. 2. La composición inmunogénica de la reivindicación 1, en la que dicha micropartícula comprende L-tirosina.
  3. 3. La composición inmunogénica de la reivindicación 1 o 2, en la que la composición inmunogénica es una composición inyectable.
  4. 4. La composición inmunógena de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en la que la micropartícula comprende un tensioactivo seleccionado de un tensioactivo aniónico, un tensioactivo catiónico, un tensioactivo zwitteriónico y un tensioactivo no iónico.
  5. 5. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la micropartícula se forma (i) mediante un procedimiento de precipitación, o (ii) mediante un procedimiento de evaporación del solvente.
  6. 6. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que dicha micropartícula comprende un aceite metabolizable, opcionalmente en la que:
    (a) dicho aceite metabolizable es un terpenoide, o
    (b) dicho aceite metabolizable es escualeno, por ejemplo, cuando la composición inmunogénica comprende MF59.
  7. 7. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que:
    (a) dicho primer antígeno que contiene un polipéptido se establece dentro de dichas micropartículas,
    (b) dicho primer antígeno que contiene un polipéptido se adsorbe en dichas micropartículas,
    (c) el primer antígeno que contiene polipéptidos se mezcla con dichas micropartículas,
    (d) el primer antígeno que contiene polipéptidos comprende un antígeno conjugado,
    (e) el primer antígeno que contiene polipéptidos es un antígeno derivado de células tumorales, o
    (f) el primer antígeno es un antígeno derivado de un organismo patógeno, opcionalmente en la que el organismo patógeno se selecciona de un virus, una bacteria, un hongo y un parásito.
  8. 8. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende, además:
    (a) un tercer adyuvante distinto del primer y segundo adyuvantes, o
    (b) un segundo antígeno que contiene un polipéptido distinto del primer antígeno que contiene un polipéptido.
  9. 9. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la composición provoca una respuesta inmune celular en un sujeto vertebrado y en la que el primer antígeno que contiene polipéptido se deriva de una entidad seleccionada del grupo que consiste en un tumor, un virus, una bacteria, un hongo y un parásito, y opcionalmente en la que:
    (a) el sujeto vertebrado es un ser humano, o
    (b) la respuesta inmune celular es una respuesta de linfocitos T citotóxicos (CTL).
  10. 10. Un procedimiento de producción de una composición inmunogénica según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 que comprende: (a) proporcionar una emulsión que comprende agua, solvente orgánico, dicho polímero biodegradable y dicho segundo adyuvante y (b) eliminar el solvente orgánico de la emulsión para formar micropartículas, en el que el primer antígeno que contiene el polipéptido se adsorbe, se establece dentro o se mezcla con dichas micropartículas, opcionalmente en el que:
    (i) dicha primera fase acuosa comprende además el primer antígeno, o
    (ii) el primer antígeno se adsorbe en dichas micropartículas.
  11. 11. Un procedimiento para formar una composición inmunogénica según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 que comprende: (a) emulsionar una fase orgánica que comprende el polímero biodegradable, el compuesto de imidazoquinolina y un solvente orgánico con una primera fase acuosa que comprende agua, formando así una emulsión de agua en aceite; (b) emulsionar una segunda fase acuosa que comprende agua con la emulsión formada
    5 en la etapa (a) para formar una emulsión de agua en aceite en agua; y (c) eliminar el solvente orgánico de la emulsión de agua en aceite en agua para formar micropartículas, en el que el primer antígeno que contiene el polipéptido se adsorbe, se establece dentro o se mezcla con las micropartículas.
  12. 12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que:
    (a) dicha primera fase acuosa comprende además el primer antígeno que contiene polipéptido,
    10 (b) el primer antígeno que contiene polipéptido se adsorbe en dichas micropartículas, o
    (c) la segunda fase acuosa comprende además un tensioactivo, opcionalmente en la que el tensioactivo es un tensioactivo aniónico.
  13. 13. La composición inmunogénica según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9 para uso en un procedimiento para provocar una respuesta inmune en un sujeto vertebrado.
    15
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102481375B (zh) 2009-05-27 2017-06-06 西莱克塔生物科技公司 具有不同释放速率的纳米载体加工组分
JP5988435B2 (ja) * 2010-01-24 2016-09-07 ノバルティス アーゲー 放射線照射された生分解性微粒子
JP6324067B2 (ja) * 2010-05-26 2018-05-16 セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッドＳｅｌｅｃｔａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ． 多価合成ナノキャリアワクチン
EA201390660A1 (ru) 2010-11-05 2013-11-29 Селекта Байосайенсиз, Инк. Модифицированные никотиновые соединения и связанные способы
KR20140022025A (ko) * 2011-03-25 2014-02-21 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 삼투적 매개 방출 합성 나노담체
KR20140050698A (ko) 2011-07-29 2014-04-29 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 체액성 및 세포독성 t 림프구(ctl) 면역 반응을 발생시키는 합성 나노운반체
US9358461B2 (en) * 2012-12-26 2016-06-07 Sony Interactive Entertainment America Llc Systems and methods for ranking of cloud executed mini-games based on tag content and social network content
JP6146676B2 (ja) * 2013-10-09 2017-06-14 東レ株式会社 免疫賦活化剤
US9815886B2 (en) 2014-10-28 2017-11-14 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2800457A (en) 1953-06-30 1957-07-23 Ncr Co Oil-containing microscopic capsules and method of making them
NL134977C (es) 1962-07-11
EP0142193A1 (en) 1983-10-22 1985-05-22 Akzo N.V. Preparation of immunogens consisting of antigens and/or antigenic determinants bound to glycoside-containing carriers
US5324513A (en) 1984-03-07 1994-06-28 Institut Pasteur Composition useful for the fabrication of vaccines
US5171568A (en) 1984-04-06 1992-12-15 Chiron Corporation Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine
US5098704A (en) 1984-06-18 1992-03-24 Chiron Corporation Hepatitis surface antigen particle vaccine
US4722840A (en) 1984-09-12 1988-02-02 Chiron Corporation Hybrid particle immunogens
US4727136A (en) 1985-10-01 1988-02-23 Canadian Patents And Development Ltd. Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine
CA1338800C (en) 1986-06-17 1996-12-17 Michael Houghton Hepatitis delta and diagnostics and vaccines
US5350671A (en) 1987-11-18 1994-09-27 Chiron Corporation HCV immunoassays employing C domain antigens
HU216017B (hu) 1987-11-18 1999-04-28 Chiron Corp. Eljárás HCV-1 polipeptidek, HCV-1 polinukleotidok, rekombináns vektorok és gazdasejtek, valamint immunesszé kit, hepatitis C vírusfertőzés elleni vakcinák, a fertőzés kimutatására szolgáló diagnosztikumok előállítására, és immunvizsgálati és vírustenyészt
GB8815795D0 (en) 1988-07-02 1988-08-10 Bkl Extrusions Ltd Glazing bead
KR0185373B1 (ko) 1989-03-17 1999-05-01 로버트 피. 블랙버언 Hcv 폴리단백질에서 유래되는 hcv 아미노산 서열 부분을 포함하는 폴리펩티드 및 그 사용
DE69033891T2 (de) 1989-05-18 2002-08-29 Chiron Corp. (N.D.Ges.D. Staates Delaware), Emeryville NANBV-Diagnostika: Polynukleotide, geeignet für Reihenuntersuchungen auf Hepatitis C-Virus
WO1990014837A1 (en) 1989-05-25 1990-12-13 Chiron Corporation Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
DE69019164T2 (de) 1989-12-14 1995-09-07 National Research Council Of Canada, Ottawa, Ontario Verbessertes meningokokkale polysaccharidkonjugatvakzin.
US5614612A (en) 1990-03-09 1997-03-25 Haigwood; Nancy L. Purified gp120 compositions retaining natural conformation
US6274148B1 (en) 1990-11-08 2001-08-14 Chiron Corporation Hepatitis C virus asialoglycoproteins
US5389640A (en) 1991-03-01 1995-02-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
IL101715A (en) 1991-05-02 2005-06-19 Amgen Inc Recombinant dna-derived cholera toxin subunit analogs
DE69232871T2 (de) 1991-06-24 2003-05-08 Chiron Corp. (N.D.Ges.D. Staates Delaware), Emeryville Polypeptide des hepatitis c-virus (hiv)
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
UA39944C2 (uk) 1992-07-07 2001-07-16 Чірон Корпорейшн Спосіб визначення ранньої сероконверсії у ссавця-хазяїна до вірусу гепатиту с і набір для використання в способі
ATE204762T1 (de) 1993-03-23 2001-09-15 Smithkline Beecham Biolog 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
ATE223702T1 (de) 1993-10-22 2002-09-15 Genentech Inc Verfahren und zusammensetzungen zur mikrokapselung von adjuvantien
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
ES2366201T3 (es) 1994-07-15 2011-10-18 University Of Iowa Research Foundation Oligonucleótidos inmunmoduladores.
PT773957E (pt) 1994-07-29 2005-11-30 Chiron Corp Polipeptidos truncados e1 e e2 de hepatite c inovadores, e metodos de obtencao dos mesmos
GB9422096D0 (en) 1994-11-02 1994-12-21 Biocine Spa Combined meningitis vaccine
IL117483A (en) 1995-03-17 2008-03-20 Bernard Brodeur MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K.
US5843752A (en) 1995-05-12 1998-12-01 Schering Corporation Soluble active hepatitis C virus protease
US5990276A (en) 1996-05-10 1999-11-23 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
EP0935662B1 (en) 1996-05-24 2005-11-30 Chiron Corporation Multiple epitope fusion protein
EP0930893B1 (en) 1996-10-11 2005-04-13 The Regents of The University of California Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates
PT991403E (pt) 1997-01-30 2003-08-29 Chiron Corp Uso de microparticulas com antigenio adsorvido para estimular respostas imunes
PL335050A1 (en) 1997-02-07 2000-03-27 Merck & Co Inc Synthetic genes gag hiv
JP2001513776A (ja) 1997-02-28 2001-09-04 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション ＬＰＳ関連障害の処置における非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む核酸の使用
EP1005368B1 (en) 1997-03-10 2009-09-02 Ottawa Hospital Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide in combination with alum as adjuvants
CA2288129A1 (en) 1997-05-01 1998-11-12 Chiron Corporation Use of virus-like particles as adjuvants
ATE437951T1 (de) 1997-05-06 2009-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Intrazelluläre herstellung von verkürztem hepatitis c-polypeptid e2
US6355257B1 (en) 1997-05-08 2002-03-12 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
WO1998052581A1 (en) 1997-05-20 1998-11-26 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
DK1003850T3 (da) 1997-06-06 2009-09-07 Univ California Inhibitorer af DNA-immunstimulatorisk sekvensaktivitet
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
PT1007546E (pt) 1997-08-27 2009-04-24 Childrens Hosp & Res Ct Oak Compostos miméticos moleculares de epítopos de meningococos do serogrupo b
DE69815692T2 (de) 1997-09-05 2004-04-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Öl in wasser emulsionen mit saponinen
WO1999022763A2 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Cistron Biotechnology, Inc. Encapsulated immunomodulators useful as vaccine adjuvants
DE69841807D1 (de) 1997-11-06 2010-09-16 Novartis Vaccines & Diagnostic Neisseriale antigene
PT1042001E (pt) 1997-12-16 2002-09-30 Chiron Corp Uso de microparticulas combinadas com emulsoes submicronicas oleo-em-agua
ES2333071T5 (es) 1998-01-14 2015-08-17 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Antígenos de Neisseria meningitidis
US6303114B1 (en) 1998-03-05 2001-10-16 The Medical College Of Ohio IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens
JP2002511423A (ja) 1998-04-09 2002-04-16 スミスクライン ビーチャム バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン
MX343744B (es) 1998-05-01 2016-11-22 J Craig Venter Inst Inc Antigenos de neisseria meningitidis y composiciones que los contienen.
DK1100468T3 (da) 1998-07-29 2006-07-31 Chiron Corp Mikropartikler med adsorbent-overflader, fremgangsmåder til fremstilling af disse samt anvendelser deraf
EP1559795A3 (en) 1998-10-09 2005-11-09 Chiron Corporation Neisseria genomic sequences and methods of their use
EP1141314A2 (en) 1998-12-31 2001-10-10 Chiron Corporation Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof
EP2206785A1 (en) 1998-12-31 2010-07-14 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Improved expression of HIV polypeptides and production of virus-like particles
MXPA01007760A (es) 1999-02-01 2003-06-24 Eisai Co Ltd Compuesto adyuvante inmunologico.
DE60020677T2 (de) 1999-02-26 2006-05-04 Chiron Corp., Emeryville Mikroemulsionen mit adsorbierten makromolekülen und mikropartikeln
MXPA01009452A (es) 1999-03-19 2002-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vacuna.
AU764969B2 (en) 1999-04-19 2003-09-04 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Vaccines
AU765824B2 (en) 1999-09-24 2003-10-02 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Vaccines
JP2003509452A (ja) 1999-09-24 2003-03-11 スミスクライン ビーチャム バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ポリオキシエチレンアルキルエーテル又はエステル及び少なくとも一つのノニオン界面活性剤を含有するアジュバント
WO2001026681A2 (en) 1999-10-13 2001-04-19 Chiron Corporation Method of obtaining cellular immune responses from proteins
GB0023008D0 (en) 2000-09-20 2000-11-01 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
CA2452382A1 (en) * 2001-07-10 2003-01-23 Corixa Corporation Compositions and methods for delivery of proteins and adjuvants encapsulated in microspheres
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
JP4522699B2 (ja) 2001-10-03 2010-08-11 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド アジュバント化されたＭｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ組成物
CA2462203A1 (en) 2001-10-12 2003-11-20 University Of Iowa Research Foundation Methods and products for enhancing immune responses using imidazoquinoline compounds
AU2002360628A1 (en) 2001-12-21 2003-07-30 Children's Hospital & Regional Medical Center Use of a novel cell surface protease from Group B Streptococcus
EP2572707A3 (en) 2002-02-20 2013-11-06 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
EP1487485B1 (en) 2002-03-19 2010-12-15 PowderJect Research Limited Imidazoquinoline adjuvants for dna vaccines
GB0206461D0 (en) 2002-03-19 2002-05-01 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
US7521062B2 (en) 2002-12-27 2009-04-21 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. Thiosemicarbazones as anti-virals and immunopotentiators
WO2004060396A2 (en) 2002-12-27 2004-07-22 Chiron Corporation Immunogenic compositions containing phospholpid
EP1594524B1 (en) 2003-01-21 2012-08-15 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of tryptanthrin compounds for immune potentiation
US7731967B2 (en) 2003-04-30 2010-06-08 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Compositions for inducing immune responses
ES2328697T5 (es) 2003-06-02 2017-07-25 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Composiciones inmunogénicas basadas en micropartículas que comprenden toxoide adsorbido y un antígeno que contiene un polisacárido
DE102004032952A1 (de) * 2004-07-07 2006-01-26 Leica Microsystems Cms Gmbh Rastermikroskop und Verfahren zur Untersuchung von biologischen Proben mit einem Rastermikroskop
BRPI0515316A (pt) * 2004-09-14 2008-07-15 Chiron Corp compostos de imidazoquinolina
US9107813B2 (en) 2004-11-15 2015-08-18 Derek T. O'Hagan Immunogenic compositions containing anthrax antigen, biodegradable polymer microparticles, and polynucleotide-containing immunological adjuvant
EP2368573A3 (en) * 2005-11-04 2013-05-01 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
AU2007221154A1 (en) * 2006-02-24 2007-09-07 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
WO2007109810A2 (en) 2006-03-23 2007-09-27 Novartis Ag Methods for the preparation of imidazole-containing compounds

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