ES2645993T3

ES2645993T3 - Película hidrosoluble que posee actividad curativa

Info

Publication number: ES2645993T3
Application number: ES13770508.3T
Authority: ES
Inventors: Alessandro DEL BONO; Cristina DEL BONO; Gianni Ferrari
Original assignee: Mediolanum Farmaceutici SpA
Current assignee: Mediolanum Farmaceutici SpA
Priority date: 2012-07-18
Filing date: 2013-07-15
Publication date: 2017-12-11
Anticipated expiration: 2033-07-15
Also published as: EP2874614B1; HK1206263A1; WO2014013413A1; SI2874614T1; ITMI20121248A1; HUE035005T2; EP2874614A1; PT2874614T; PL2874614T3; DK2874614T3

Abstract

Película hidrosoluble que contiene: a) entre 25 y 60% en peso sobre el peso total de la película de alginato sódico como sustancia filmógena principal; b) entre 0,1 y 20% en peso de celulosa microcristalina sobre el peso total de la película; c) entre 0,1 y 25% en peso de proteínas vegetales; d) al menos un glicosaminoglicano sulfato y/o galactosaminoglicano sulfato, como ingrediente activo con actividad curativa.

Description

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DESCRIPCION

Pelfcula hidrosoluble que posee actividad curativa Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a una pelfcula hidrosoluble y el dispositivo para uso medico que contiene dicha pelfcula hidrosoluble con actividad curativa, en particular adecuada como adyuvante en la terapia farmacologica sitemica de llagas o heridas.

Estado de la tecnica

Los proteoglicanos y glicosaminoglicanos son componentes de la matriz extracelular y de la superficie celular.

En particular, los proteoglicanos consisten en una nucleoprotefna y una o mas cadenas de glicosaminoglicanos. Los glicosaminoglicanos (GAGs) son polisacaridos lineales con dos unidades de disacarido repetitivas que consisten respectivamente, en dos familias de aminoazucares: sulfato de glucosamina (GlcNS, GlcNS,6S, GlcN,6S) acetato de glucosamina (GlcNAc, GlcNAc,6S) y acetato de galactosamina (GalNAc, GalNAc,4S; GalNAc,6S; GalNAc,4S,6S) y de un acido uronico seleccionado de acido glucuronico (GlcA) y acido iduronico (IdoA,IdoA2S).

Practicamente todas las celulas de mamfferos producen proteoglicanos y/o los excretan en la matriz extracelular, los insertan en la membrana plasmatica o los almacenan en los granulos secretores.

Despues de una herida o lesion de la piel, se activan muchos mecanismos de estimulacion (induccion) de proteoglicanos de acuerdo con un comportamiento celular especffico. Por ejemplo, el sindecan (proteoglicano de dermatan sulfato) aumenta varias veces la concentracion del mismo tanto en las celulas endoteliales como en los queratinocitos hiperproliferantes (Elnius K. et al., J. Cell. Biol. 1991; 114: 585-595. Gallo et al. J. Invest. Dermatol. 1996; 107: 676-683.

El analisis de proteoglicanos solubles, extrafdos del exudado de heridas y/o lesiones, muestra que el sulfato de galactosaminoglicano que esta presente en mayores cantidades es dermatan sulfato (DS). El dermatan sulfato es un fuerte promotor de factores de crecimiento de fibroblastos (FGF-2) (Penc et al., J. Biol. chem. 1998; 273(43): 2811628121). Las celulas endoteliales humanas en cultivo, expuestas a soluciones de dermatan sulfato, respondieron con la produccion de NF-KB y aumentaron la adhesion celular de tipo 1 (ICAM-1) de lecuocitos endoteliales, mientras esta protefna contribuyo a la accion reparadora de las lesiones (Penc SF et al., J. Clin. Invest. 1999; 103(9): 13291335).

Los DSPGs, es decir, proteogicanos de dermatan sulfato, como decorina y biglicano, son fuertes promotores de factores de crecimiento FGF2 y se han asociado con la organizacion y el crecimiento de la cicatrizacion de heridas (Garg et al. “Chemistry of Scarring” en “Scarless Wound Repair” Marcel Dekker New York 2000, paginas 1-2.).

Las heridas y llagas cronicas contienen una alta concentracion de proteasas y menores concentraciones de factores de crecimiento, alta presencia de celulas secretoras con baja actividad mitogenica y altas concentraciones de citoquinas inflamatorias. Las proteasas originan la degradacion de los factores de crecimiento endogenos, de la fibronectina y laminina, que previnen o ralentizan la regresion espontanea de las lesiones (Traversa B. et al. Primary Intention 2001 9(4): 161-167).

El siguiente estudio fue el de comprobar si los glicosaminoglicanos exogenos, ya no asf en forma de proteoglicanos, podrfan realizar un papel decisivo en el tratamiento de este tipo de llagas y heridas cronicas.

Se demostro, como resultado de experimentos llevados a cabo in vitro en matrices de colageno disenadas para estimular ingenierfa tisular, que los fibroblastos y queratinocitos mostraron una mayor capacidad de proliferacion sobre matrices de heparina/colageno o de dermatan sulfato/colageno en comparacion con la matriz de colageno sola. Este efecto fue cada vez mas marcado cuanto mayor era el peso molecular de los GAGs. La presencia de dermatan sulfato en las membranas de colageno promovio la atraccion, el crecimiento y la proliferacion de fibroblastos y queratinocitos, mientras la presencia de heparina no fraccionada promovio principalmente la proliferacion de fibroblastos (Ruozi B. et al., Int J. Pharmaceutics 2009; 738(1-2): 108-115). Sin embargo, para todos los dispositivos de uso topico descritos en el estado de la tecnica parece esencial asociar los GAGs antes mencionados con el colageno, para obtener resultados apreciables.

La US 4837024 de describe polvos de colageno y al menos un glicosaminoglicano a aplicar sobre las heridas.

Este documento de la tecnica anterior describe la capacidad de diversos GAGs para atraer fibroblastos y promover la neovascularizacion. De hecho, ambas actividades son parametros importantes para evaluar la capacidad de los GAGs de promover la curacion de heridas. La capacidad de los GAGs en ambas actividades no puede funcionar sin la presencia de colageno.

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Tambien para la US 5.929.050 que describe una composicion para tratar heridas que consiste en solucion acuosa que contiene condoritm sulfato y un vendaje esteril, parece importante la presencia de colageno para acelerar la curacion ya que este ultimo proporciona todas las sustancias nutritivas para el crecimiento celular.

Kirker et al en “Glycosamin hydrogel films as biointeractive dressings for wound healmg”-Biomaterials Elsevier Science Publisher BV Barking GB, Vol. 23 N° 17 1 de Septiembre 2002 paginas 3661-3671 describen una pelmula en la que un glicosaminoglicano como acido hialuronico o condroitm sulfato son una parte integral de la estructura de la pelmula ya que forman enlaces qmmicos covalentes con el polietilenglicol por medio de los grupos carboxilo del glicosaminoglicano que primero se hacen reaccionar con dihidrazida de acido adfpico antes de reaccionar con polietilenglicol.

Esta pelmula no tiene suficientes propiedades de endurecimiento y fuerza ya que se aplica en un vendaje para proteger la herida de infecciones bacterianas. Arosio et al (EUROPEAN JOURNAL OF VASCULAR AND ENDOVASCULAR SURGERY: THE OFFICIAL JOURNAL OF THE EUROPEAN SOCIETY FOR VASCULAR SURGERY OCT 2001, vol. 22, n° 4, Octubre 2001 (2001-10), paginas 365-372, XP002693997, ISSN: 1078-5884) describe el Mesoglican en el tratamiento de ulceras venosas cronicas.

Por ultimo, citamos WO03034993 que describe algunas composiciones para promover el crecimiento celular para proteger los tejidos y promover la curacion de heridas sobre la base de:

a) colageno hidrolizado, como componente principal,

b) un polisulfato de GAG,

c) una sal de acido hialuronico

d) una sal de glucosamina

Estas composiciones tambien pueden estar en forma de pelmula, en este caso el colageno tiene la funcion de la sustancia principal que genera pelmula.

Como es sabido, el colageno disponible en el mercado es esencialmente de origen bovino y equino; en algunos individuos puede inducir una respuesta antigenica, una respuesta que se puede reducir substancialmente si en los procesos de extraccion y purificacion de colageno se usan enzimas proteolfticas adecuadas que son adecuadas para destruir su telopeptido C-terminal.

Ademas, el colageno es una sustancia muy cara y por lo tanto no recomendada debido al precio resultante, si se usa en grandes cantidades como por ejemplo las necesarias para la preparacion de pelmulas adecuadas para cubrir heridas de grandes dimensiones. Como una demostracion del mismo, la antes mencionada WO03034993 abarca el uso de tales tipos de pelmula solamente para heridas de menor tamano como las dentales.

Por lo tanto se sentfa la necesidad de tener un dispositivo para la formacion de cicatriz incluso de lesiones de gran tamano como por ejemplo ulceras de vasculopatfas y pie diabetico que al mismo tiempo proteja la herida y libere continua y uniformemente los GAGs in situ en la lesion sin el inconveniente del estado de la tecnica.

US2010/002790 describe pelmulas hidrosolubles que contienen

a) entre 25 y 60% en peso de alginato sodico

b) entre 0,1 y 20% en peso de celulosa microcristalina sobre el peso total de la pelmula,

c) entre 0,1 y 25% en peso de protemas vegetales.

Cuando se usa para uso topico sobre la piel, estas pelmulas se pueden usar para tratar pequenas heridas de la piel y no contienen ingredientes activos que tienen actividad de curacion.

Compendio de la invencion

El Solicitante ha encontrado ahora inesperadamente que es posible superar los inconvenientes de dispositivos para uso topico que contienen GAGs con el dispositivo de la presente invencion que comprende una pelmula hidrosoluble o gel solido que tiene actividad de curacion segun la presente invencion.

Por lo tanto, la presente invencion se refiere a una pelmula hidrosoluble que comprende:

a) entre 25 y 60% en peso de alginato sodico, como principal sustancia filmogena,

c) entre 0,1 y 25% en peso de protemas vegetales,

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d)

al menos un glicosaminoglicano sulfato de tipo natural, como ingrediente activo con actividad de curacion.

La presente invencion se refiere ademas a un dispositivo para uso medico que contiene la pelfcula hidrosoluble segun la presente invencion.

Este dispositivo es adecuado en particular para cubrir llagas y heridas, incluso las mas grandes, protegiendolas del ambiente exterior, proporcionando continuamente el glicosaminoglicano sulfato del tipo natural en la zona de la piel danada, ya que realiza una accion de liberacion lenta del ingrediente activo en el area requerida y al mismo tiempo protege el sitio de la lesion de agentes bacterianos, contaminantes, cuerpos extranos.

Descripcion de las figuras

La Figura 1 describe la accion amortiguadora de la biopelfcula, despues de la adicion de HCl o NaOH como se muestra en el experimento descrito en el ejemplo 2 en comparacion con agua pura y soluciones acuosas que contienen 30 mg de Mesoglican.

La Figura 2 muestra la progresion del pH de la pelfcula de la presente invencion preparada como se describe en el ejemplo 5, colocada en soluciones convertidas en acidas con HCl 0,01 M o basicas con NaOH 0,01M, y la comparacion de los valores de pH en agua pura y en soluciones acuosas que contienen 30 mg de Mesoglican, despues de las adiciones de los correspondientes volumenes de NaOH y HCl.

Descripcion detallada de la invencion

Para los fines de la presente invencion mediante la definicion general de “glicosaminoglicano sulfatos y/o galactosaminoglicano sulfatos (GAGs)" nos referimos a ambos glicosaminoglicano sulfatos y/o galactosaminoglicano sulfatos que se encuentran en la naturaleza, por ejemplo, en tejidos animales y particularmente en la matriz extracelular como componentes de los denominados proteoglicanos como por ejemplo condroitfn sulfato, dermatan sulfato, heparan sulfato, heparina de bajo, relativamente bajo y/o alto peso molecular, queratan sulfato y mezclas relativas de al menos dos de los componentes antes mencionados.

Para los fines de la presente invencion por heparina de bajo peso molecular nos referimos a heparina con un peso molecular (Mw) promedio comprendido entre: 4.000 y 6.500 y con un 60% de las moleculas con un peso molecular promedio de menos de 8.000 Da.

Por heparina de relativamente bajo peso molecular nos referimos: a heparina con un peso molecular (Mw) promedio comprendido entre: 6.500 y 10.500 y con un 60% de las moleculas que se caracterizan por un peso molecular promedio de menos de 12.000 Da.

Por heparina de alto peso molecular nos referimos a heparina no fraccionada convencional (UFH) que tiene un peso molecular promedio comprendido entre: 12.000 y 18.000 e incluso valores que alcanzan hasta 40.000 Da.

Para los fines de la presente invencion mediante la definicion de “condroitm sulfato", donde no se especifica expresamente nos referimos al menos a uno de los siguientes isomeros:

condroitfn-4-sulfato (Ch-S-A), condroitfn-6-sulfato (Ch-S-C), condroitfn-2,6-di-sulfato (Ch-S-D), condroitfn-4,6- disulfato (Ch-S-E)

Segun una realizacion preferida, los dispositivos medicos segun la presente invencion contienen una mezcla de al menos 2 de los galactosaminoglicano sulfatos antes mencionados de tipo natural.

Segun una realizacion preferida de la invencion estos dispositivos medicos contienen las siguientes mezclas:

La mezcla (A), que comprende principalmente:

a) heparina de relativamente bajo peso molecular, con posibles trazas de heparina que contiene glucosamina N- desulfato, (GlcN, GlcN,6S)

P) dermatan sulfato

y) condroitfn sulfato;

La mezcla (B), que comprende:

a') heparina de relativamente bajo peso molecular,

P') dermatan sulfato,

La mecla (C) que comprende los siguientes glicosaminoglicanos de bajo peso molecular: a'') heparan sulfato,

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P”) condroitm sulfato y'') dermatan sulfato

La mezcla (D) comprende los siguientes componentes:

a'”) dermatan sulfato con trazas de heparina de relativamente bajo peso molecular y P''') condroitfn sulfato,

La familia de la mezcla (A) incluye, en particular, el producto disponible en el mercado con el nombre comercial Mesoglican®. Preferiblemente, la mezcla de Mesoglican consiste en:

• 55-60% de una mezcla de heparina de relativamente bajo peso molecular de cuyo 2-8% es heparina de alto peso molecular (heparina de movimiento lento) y 47-58% de heparina (heparina denominada de movimiento rapido).

• 25-35% de dermatan sulfato,

• 4-8% de condroitfn sulfato (principalmente Ch-S-A y cantidades mas pequenas de Ch-S-C.)

La familia de mezclas (B) incluye, en particular, el producto conocido como Sulodexide que contiene 80% de heparina de relativamente bajo peso molecular y 20% de dermatan sulfato.

La familia (C) incluye, en particular, el producto mas conocido como Danaparoid que consiste en 75-85% de heparan sulfato, no mas de 8,5% en peso de condroitfn sulfatos (Ch-S-A) y (Ch-S-C), y 8 a 16% de dermatan sulfato.

La familia (C) tambien incluye el producto conocido como Mistral.

La pelfcula hidrosoluble segun la presente invencion se prepara preferiblemente como se describe en US2010/002790.

Para los fines de la presente invencion por peso seco de pelfcula hidrosoluble nos referimos al peso de los otros componentes en la pelfcula final que no sea agua.

Para los fines de la presente invencion, consideramos como sustancia filmogena principal la sustancia que representa entre el 90 y 100% en peso de sustancia filmogena sobre el peso total de las sustancias filmogenas, preferiblemente entre el 95 y 99,9% en peso sobre el peso total. Preferiblemente, el dispositivo segun la presente invencion contiene Mesoglican sodico, a concentraciones comprendidas entre 0,1 y 10% en peso, mas preferiblemente entre 1 y 7% en peso e incluso mas preferiblemente entre 3 y 6% en peso sobre el peso seco de la pelfcula hidrosoluble. Segun una solucion particularmente preferida esta contenido en una cantidad de 4,5 y 4,8% en peso calculada sobre el peso seco de la pelfcula hidrosoluble.

El dispositivo segun la presente invencion puede tambien contener dermatan sulfato con trazas de heparina de relativamente bajo peso molecular y condroitfn sulfatos, a concentraciones comprendidas entre 0,1 y 10% en peso, mas preferiblemente entre 1 y 7% en peso e incluso mas preferiblemente entre 3 y 6% en peso sobre el peso seco de la pelfcula hidrosoluble. Segun una solucion particularmente preferida esta contenido en una cantidad de 4,5 y 4,8% en peso calculado sobre el peso seco de la pelfcula hidrosoluble.

Preferiblemente, el alginato sodico o componente (a) de la pelfcula hidrosoluble, con propiedades formadoras de pelfcula segun la presente invencion esta contenido en cantidades comprendidas entre 28 y 40% en peso, mas preferiblemente entre 30 y 38% en peso e incluso mas preferiblemente entre 35 y 37% y segun con una solucion particularmente preferida entre 36,1 y 36,9% en peso calculado sobre el peso seco total de la pelfcula hidrosoluble.

La celulosa microcristalina o componente (b) usada como espesante en la pelfcula hidrosoluble de la invencion esta contenida en cantidades preferiblemente comprendidas entre 2,5 y 11% en peso y mas preferiblemente comprendidas entre 5 y 8% en peso calculado sobre el peso seco total de la pelfcula.

Las protefnas vegetales o componente (c) de la pelfcula hidrosoluble de la presente invencion que estan contenidas en la pelfcula hidrosoluble por sus propiedades emulsionantes y capacidad de aumentar la consistencia de la misma estan presentes en cantidades comprendidas entre 5 y 15%, incluso mas preferiblemente entre 10 y 14% en peso sobre el peso seco total de la pelfcula.

La pelfcula tambien puede contener opcionalmente otros aditivos como derivados de polioxietileno y en particular polisorbato 80, preferiblemente en concentraciones comprendidas entre 5 y 12%, plastificantes y humectantes como polioles y en particular glicerina preferiblemente en concentraciones comprendidas entre 15 y 30%, ademas agentes espesantes como polivinilpirrolidona a concentraciones preferiblemente comprendidas entre 1 y 5% en peso sobre el peso seco total de la pelfcula.

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Como filmogeno opcional o sustancia formadora de pelfcula es posible usar acido hialuronico en cualquier caso en cantidades no superiores a 0,2% en peso sobre el peso seco total del polfmero.

La pelfcula contiene humedad residual, que en cualquier caso no excede del 15% en peso sobre el peso total de la pelfcula hidrosoluble y de tal manera que la actividad del agua Aw tomada como la relacion entre la tension de vapor en la pelfcula y la tension de vapor en el agua pura, a la misma temperatura, esta comprendida entre 0,1 y 0,6.

El Solicitante ha encontrado en particular que la pelfcula hidrosoluble segun la presente invencion tiene una tasa cicatrizante de heridas superior al control ya despues de 2 y 4 horas despues de la administracion.

Ademas, el Solicitante ha encontrado inesperadamente que el dispositivo biomedico sometido a esterilizacion por medio de rayos gamma es estable, no cambia y tambien tien una accion amortiguadora, como se demuestra por los experimento in vitro dados en los ejemplos 2 y 5. De hecho, la matriz de la pelfcula hidrosoluble se puede preparar a fin de garantizar un pH final, es decir, cuando la pelfcula esta en presencia de solucion acuosa, comprendido en los intervalos de 6,0 + 0,4 hasta pH de 7,0 + 0,5, se mantiene en este intervalo por adicion de ambos, acido clorhfdrico e hidroxido sodico a concentraciones de 0,01 N y con volumenes comprendidos entre 20 pl y 1.000 pl, al sistema que consiste en una membrana entera suspendida en 20 ml de agua destilada.

De la tecnica anterior se puede obtener la siguiente informacion.

El pH de la piel intacta es aproximadamente de 5,5; el pH de la mayorfa de las celulas esta comprendido entre 6,5 y 8,5; las heridas y lesiones tambien tienen este intervalo de pH, con la tendencia a alcanzar el valor de 9,0. El pH de la sangre venosa es de 7,35.

En presencia de lesiones cronicas el pH del lecho de la herida es de vital importancia para los fines del proceso de curacion; de hecho se ha observado que una “acidificacion” del lecho de la lesion conduce a un aumento de la tasa de curacion en pacientes que padecen ulceras venosas de las extremidades inferiores.

Una de las razones es la mayor disponibilidad de oxfgeno para los tejidos. La otra se deriva de los altos niveles de proteasas asociados con pHs alcalinos del lecho de la lesion. La expresion excesiva de proteasas es un factor que contribuye a la ralentizacion del proceso de curacion, en algunos casos bloqueando la lesion en un cfrculo cronico. Por otro lado la reduccion del pH o el mantenimiento de los fluidos de la lesion en una zona tendencialmente “acida”, es un metodo para controlar la actividad de las proteasas, sin causar, ademas, una desactivacion irreversible de las mismas, que determinarfa tambien la desnaturalizacion de protefnas utiles en los fluidos de la herida, como factores de crecimiento.

Existe evidencia de que valores tendencialmente acidos del exudado de la lesion pueden promover la curacion. De hecho, en ambientes tendencialmente alcalinos con pH comprendido entre 7,0 y 9,0, las proteasas muestran el pico maximo de actividad. Catepsina G, elastasa, plasmina, metal-proteinasas de la matriz (MMP-1) pueden degradar el tejido de la matriz extracelular que acababa de ser construido (laminina, fibronectina, colageno, etc.) y por lo tanto ralentizando la curacion. (Greener B et al. J of Wound Care 2005; 14(2): 59-61. Vease tambien: Rushton I. Role of proteases and of pH in wound healing. Nurs Stand 2007; 21(32): 68, 70, 72. PubMed).

Las ulceras y las lesiones cronicas se caracterizan por valores de pH incluso superiores a 9.

Existe por tanto una necesidad de tener un dispsitivo medico capaz de inhibir la alcalinidad de la lesion y mantener su pH alrededor de valores de 6,7 - 6,9.

Se examino un estudio de 50 pacientes portadores de lesiones agudas y cronicas en un hospital universitario (Varanasi-India). Se controlaron los valores de pH, se detectaron en el exudado de la herida: al principio mas del 50% de los casos tenfan un pH superior a 9,0 y ningun caso tiene un pH de menos de 7,5. Durante la evolucion hacia la curacion los valores de pH cayeron por debajo de 7,5 (14% de los casos) y otros se mantuvieron entre 7,5 - 8,0 (34% de los casos). La evolucion del pH hacia valores proximos a neutro era una indicacion de curacion, y ademas exudados con valores de pH superiores a 8,0 representaban un buen medio de cultivo para Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus (V.K. Shukla et al. J of Wound Care 2007; 16(7): 291294. PubMed).

lan A.I. Wilson et al. (en VASA 1979; 8(4): 339-342 a traves de:
www.scirus.com) en el informe titulado “Relazione fra il pH della superficie delle ulcere varicose and guarigione" muestra los resultados de un experimento de 29 pacientes que padecfan ulceras varicosas. El pH promedio de los exudados de las ulceras era aproximadamente 7,7 + 0,3. Se llevo a cabo un tratamiento terapeutico con unguento tamponado a pH 6,0 frente a un control que consistfa en el mismo unguento a pH 7,3. El tratamiento con unguento tamponado a pH 6,0 mantuvo la “acidez” de las ulceras venosas por un periodo superior con una ventaja significativa en la tasa de curacion medida a traves de un “cociente de curacion” representado por el area de la parte cubierta por el epitelio, en mm2/dfa. Los valores informados fueron 22,6 mm2/dfa para aquellos tratados y 3,3 mm2/dfa para los controles.

Alexander L et al. (en el monografico informado en Arch Dermatol Res 2007; 298: 413-420. PubMed) hipotetiza las condiciones que influyen el pH en la curacion de lesiones como una nueva perspectiva de terapia.

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Se obtienen incluso mejores resultados en terminos de actividad amortiguadora de la pelfcula hidrosoluble objeto de la presente invencion si se anade un hidroxiacido organico como componente de la mezcla de preparacion de la pelfcula. Segun una realizacion preferida, se usa un hidroxiacido organico de 3 a 6 atomos de carbono y que contiene de 1 a 2 grupos hidroxilo, como por ejemplo: acido cftrico, acido tartarico, acido tartronico, acido hidroxibutfrico, etc.

Preferiblemente se usa acido cftrico.

Se obtuvo esta caracterfstica amortiguadora de la pelfcula a traves de la adicion de una cantidad conocida (preferiblemente comprendida entre 1 y 2% sobre el peso total de la pelfcula seca) de hidroxiacido a la mezcla de preparacion hasta que se alcance un pH comprendido entre 5,4 y 5,6.

En la practica, cambiando esta adicion, es posible dar a la matriz de la biopelfcula la capacidad de mantener las lesiones y llagas “tamponadas” en los ambientes de pH adecuados para acelerar sus curacion.

Una propiedad adicional mostrada por las pelfculas hidrosolubles de la invencion es la alta estabilidad en el almacenamiento.

El dispositivo para uso medico que consiste en la pelfcula segun la presente invencion es en particular adecuado para el tratamiento de lesiones secundarias a eventos patologicos, como por ejemplo ulceras de las extremidades inferiores en sujetos con insuficiencia venosa cronica, ulcera de pie diabetico, ulceras arteriales, lesiones secundarias a eventos traumaticos como por ejemplo ulceras de decubito, abrasiones, lesiones seundarias a eventos ambientales como por ejemplo lesiones por escaldaduras, quemaduras, siendo todas estas lesiones tambien grandes.

Con fines ilustrativos pero no limitantes damos algunos ejemplos de composicion del dispositivo para uso medico que consiste en la pelfcula hidrosoluble segun la presente invencion.

Ejemplo 1

Preparacion de la biopelfcula de Mesoglican

En un mezclador que contiene agua destilada necesaria para formar 100 partes, precalentada entre 50°C y 70°C, se dispersan los siguientes: 2,5 partes de sorbitol, 5 partes de glicerina, 2 partes de polisorbato 80 hasta completa solubilizacion. Se anaden los siguientes por aspersion: 8,7 partes de alginato sodico, 1,7 partes de celulosa microcristalina, 3 partes de protefna vegetal, 0,5 partes de polivinilpirrolidona, 1,1 partes de Mesoglican sodico, 0,025 partes de hialuronato sodico. La mezcla se agita lentamente durante 30 minutos hasta dispersion y homogeinizacion completa del gel. Comienza un enfriamiento lento a 25°C bajo agitacion lenta. Se comprueba el pH de la masa gelatinosa, que debe ser 7,0 + 0,5; en este caso era pH 7,0.

La masa se deja reposar durante una noche para la desaireacion, a continuacion se transfiere, bajo agitacion y a traves de una bomba peristaltica a un recipiente adecuado de la maquina de distribucion y despues se deposita en pelfcula sobre un soporte de banda de siliconato de polietileno. La banda se hace pasar a un horno tunel ventilado equipado con cuatro estaciones de calentamiento sucesivas con temperaturas en aumento hasta 120°C. A la salida del tunel se obtiene un rollo que consiste en soporte de siliconato de tereftalato de polioxietileno (PET) y una pelfcula solida de gel. El producto se seca durante al menos 24 horas. El rollo se corta en rollos mas pequenos de bandas en relacion con el tamano de la pieza deseada.

Se obtiene asf una pelfcula hidrosoluble de 8 x 12 cm que pesa en promedio 650 mg y que tiene la composicion expresada sobre la sustancia seca como se informa en la siguiente tabla.

Nombre comercial de los ingredientes: Nombre qufmico de los ingredientes mg de composicion /pelfcula

Protanal GP 2650: Alginato sodico 237,86

Avicel PH 105: Celulosa microcristalina 46,48

Pisane M9: Protefna vegetal (guisantes) 82,01

Sorbitolo 70%: Sorbitol 47,84

Pricerina 9095: Glicerina 99,95% 136,70

Tween 80: Polisorbato 80 54,68

Kollidon 90 F: Polivinilpirrolidona 13,67

Mesoglycan sodico: Mesoglican sodico 30,10

Crystal Hyal: Hialuronato sodico 0,68

La pelfcula tiene un contenido de agua, medido con la tecnica de Karl Fischer de 12% - 15%.

Ejemplo 2

Analisis del efecto amortiguador de la pelfcula hidrosoluble de la invencion

5 La pelfcula hidrosoluble preparada como se describe en el ejemplo 1 se trituro en pequenos trozos y se suspendio en 20 ml de agua destilada, bajo agitacion. Despues de 5-10 minutes, se formo una “solucion” con una modesta cantidad de material en suspension. El pH de dicho sistema fue en promedio de 6,75. Al mismo tiempo se prepararon dos vasos de precipitado que contenfan 20 ml de agua destilada, en cada uno de los cuales se midio el valor de pH y a los cuales se anadieron progresivamente y por separado 0,1, 0,2, 0,4, 1,0 ml de hidroxido sodico o 10 acido clorhfdrico 0,01 M, respectivamente. En paralelo a esta prueba se hicieron las mismas adiciones sobre agua destilada, por separado, en dos suspensiones del mismo numero de membranas de pelfcula en 20 ml de agua destilada. Se midieron los valores de pH para cada adicion.

Los resultados se dan en las siguientes tablas 1a y 1b:

Tabla 1a

: pH de la biopelfcula (*)

NaOH 0,01 N anadido (pl): Lot. P1251A0 Lot. P1270C0 Lot. P1271C0 pH H2O (**) (20 ml)

-: 6,7 6,7 6,7 N.D.

20: 6,8 6,7 6,8 6,6

100: 6,8 6,8 6,8 8,6

200: 6,9 6,8 6,9 9,1

400: 7,0 7,0 7,1 9,5

1000: 7,5 7,4 7,7 10,0

15

Tabla 1b

: pH de la biopelfcula (*)

HCl 0,01 N anadido (pl): Lot. P1251A0 Lot. P1270C0 Lot. P1271C0 pH H2O (**) (20 ml)

-: 6,9 6,8 6,8 N.D.

20: 6,8 6,8 6,8 6,2

100: 6,8 6,7 6,7 4,6

200: 6,7 6,6 6,6 4,2

400: 6,6 6,5 6,5 3,8

1000: 6,3 6,2 6,2 3,4

(*) biopelfcula disuelta en 20 ml de H2O

5

10

15

20

25

30

(**) promedio de tres mediciones

N.D. = incapaz de determinarse (despues de 30 minutos la lectura no era todavfa estable)

A partir de este modelo experimental se encontro que la pelfcula disuelta/suspendida en agua tiene un pH de aproximadamente 6,75. Su efecto tamponador permitina que el pH del “sistema de lesion” se mantuviera alrededor de este valor o como maximo comprendido entre 6,1 y 7,5; como se ha demostrado a partir de estos sistemas, los sistemas acuosos no tamponados previamente alcanzarfan pH 3,4 y 10,0 respectivamente.

Analisis comparativo llevado a cabo con Mesoglican en agua.

Se disolvio una cantidad de Mesoglican correspondiente a la cantidad contenida en una membrana, 30 mg, en 20 ml de agua destilada. Se midio el pH. Se anadio dicha solucion a 20, 100, 200, 400, 1000 pl de NaOH 0,01 M y se midio el pH de las respectivas soluciones. Se anadio una solucion de Mesoglican similar en 20 ml de agua a los volumenes correspondientes de HCl 0,01 M y se detectaron los pHs respectivos. Los valores obtenidos se dan en la Tabla 1c.

: pH de 30 mg de Mesoglican en 20 ml de soluciones alcalinizadas (con NaOH 0,01 M) y acidificadas (con HCl 0,01 M) a traves de la adicion de las cantidades indicadas al lado

NaOH 0,01 M anadido (pl): Mesoglican En 20 ml de agua + NaOH 0,01 M Mesoglican en 20 ml de agua + HCl 0,01 M HCl 0,01 M anadido (pl)

-: 7,5 7,6
-

20: 7,6 7,3
20

100: 9,0 6,8
100

200: 9,6 6,4
200

400: 10,2 5,9
400

1000: 10,6 5,3
1000

Los valores de la Tabla 1c demuestran que la solucion sola de Mesoglican no es capaz de tamponar la zona de la lesion.

La Figura 1 resume los resultados obtenidos con el experimento del ejemplo 2, del que se puede ver claramente tambien graficamente que la accion amortiguadora solo se obtiene con las pelfculas hidrosolubles segun la presente invencion.

La Fig. 1 muestra los valores de pH tomados por las tres muestras P1251A0 ♦, P1270C0 ■, P1271C0 ▲ en comparacion con soluciones acuosas ■, y soluciones de 30 mg de Mesoglican en 20 ml de agua •, despues de cada adicion de las cantidades respectivas de NaOH y HCl 0,01M.

Ejemplo 3

Estudio de estabilidad

El proposito de este experimento fue evaluar el contenido de Mesoglican a lo largo del tiempo por medio de su actividad anti-factor Xa activado.

3.1. Materiales

Se sometieron los siguientes lotes experimentales de dispositivo al estudio de estabilidad:

Lote de pelfcula P1251A0 producida con lote de Mesoglican 08-0-041 Lote de pelfcula P1270C0 producida con lote de Mesoglican 08-0-023 Lote de pelfcula P1271C0 producida con lote de Mesoglican 09-0-051 Contenido teorico 30,10 mg de Mesoglican.

5

10

15

20

25

30

35

40

3.2. Programa de estabilidad

Las condiciones de almacenamiento y los tiempos en los que se llevaron a cabo los analisis son los siguientes:

25°C - 60% hr

0 meses, 1 mes, 3 meses, 6 meses y 12 meses 30°C - 65% hr

1 mes, 3 meses, 6 meses, 9 meses y 12 meses 40°C - 75% hr

1 mes, 3 meses y 6 meses

3.3. Metodo para determinar el contenido de Mesoglican en la biopelfcula evaluado a traves de su actividad antifactor Xa activado

Como es conocido, la heparina es capaz de inhibir el factor Xa (FXa) activado, a traves de la interaccion con la serin proteasa Antitrombina III (ATIII).

El metodo para determinar la actividad anti-factor Xa, desarrollado para determinar la actividad de la heparina, si se aplica a Mesoglican es capaz de indicar la actividad del producto ya que uno de sus componentes es heparina.

El ensayo se lleva a cabo en sistemas purificados.

En el sistema in vitro, se anade una muestra que contiene cantidades conocidas de Mesoglican y ATIII con un exceso de FXa. El FXa residual se mide gracias a su actividad amidolftica sobre el sustrato cromogenico. Las cantidades de FXa residual es inversamente proporcional a la cantidad de Mesoglican presente en la muestra.

3.3.1. Reactivos.

- Kit Stachrom Heparin DIAGNOSTICA STAGO cod. 00906 que consiste en:

• Tampon Tris EDTA pH 8,4 concentrado (normalmente diluir 10 ml a 100 ml con agua desionizada)

• Sustrato cromogenico CBS 31.39 (que se prepara con 4 ml de agua desionizada)

• ATIII bovina (que se prepara con 2 ml de tampon diluido)

• FXa bovino (que se prepara con 4 ml de agua desionizada) para preparar al menos 30 minutos antes de su uso.

- Lote de Heparina de Trabajo Estandar 2247 que se le atribuyo la cantidad de 196 Unidades Internacionales de actividad anti-Xa (UIanti-Xa/mg) frente al Estandar de Referencia Internacional 3.1 en cantidad de 1010 Unidades Internacionales de actividad anti-coagulante (UI/ml), segun el metodo del documento EP, parrafo 2.7.5.

- Biopelfcula de dimensiones 8x12 cm, peso teorico de 650 mg y contenido teorico de 30,10 mg de Mesoglican

- Lote de Mesoglican sodico usado para la preparacion de la biopelfcula

- Emulsion codigo de referencia 9756904 de Instrumentation Laboratory

3.3.2. Aparatos

Analizador de coagulacion Instrumentation Laboratory mod. ACL 300R o equivalente

Rotores Instrumentation Laboratory codigo 68000

Copas de muestra Instrumentation Laboratory codigo 67992

Escala AX 105DR fijada en 4 cifras decimales

Cristalerfa e instrumentos de laboratorio convencionales

3.4. Preparacion de las soluciones para la construccion de la Heparina estandar de trabajo

Preparar una solucion de heparina Estandar de Trabajo, a la concentracion de 10 mg/ml igual a 1960 UI/ml) en agua destilada. Preparar a partir de esta solucion, mediante dilucion con tampon Tris-EDTA a pH 8,4, otras soluciones a concentraciones de:

5

10

15

20

25

30

35

0,15 Ul/ml,

0,125 Ul/ml,

0,1 Ul/ml,

0,075 Ul/ml, 0,05 Ul/ml.

3.5. Peparacion de las soluciones para calcular la actividad de Mesoglican

Preparar una solucion de Mesoglican sodico, lote usado para la preparacion de la biopelfcula, a la concentracion de 10 mg/ml.

Diluir con tampon Tris-EDTA a pH 8,4, dicha solucion a las concentraciones de 4 pg/ml,

3 pg/ml, 2,5 pg/ml,

2 pg/ml,

1,25 pg/ml,

3.5.1. Disolucion de la pelfcula y preparacion de la muestra

La pelfcula se separa del soporte plastificado, se pesa, se corta en trozos pequenos precipitados de 600 ml. Se anaden 300 ml de agua desionizada y se dejan bajo aproximadamente 5 minutos hasta que este completamente disuelto. La solucion particularmente densa (concentracion teorica de Mesoglican: 30,10 mg/300 ml, es decir, 100,33 pg/ml).

Preparar una solucion con una concentracion final de 3,01 pg/ml.

3.5.2. Proceso de uso del analizador de coagulacion

En los rotores del analizador de coagulacion, segun las instrucciones descritas por los procedimientos, se colocan las copas de muestra que contienen los reactivos para cada una de las 5 concentraciones de heparina estandar de trabajo, de las 5 concentraciones de Mesoglican usadas como materia prima para ese lote correspondiente de dispositivo y de las 5 muestras a la misma concentracion teorica de 3,01 pg/ml de biopelfcula.

En la reaccion la heparina modifica alostericamente la antitrombina lll que inhibira al factor Xa. La reaccion se controla a partir de la absorbancia detectada a 405 nm.

3.6. Calculos para obtener el contenido de Mesoglican

Se construye el estandar de calibracion de trabajo, en base a la actividad de la Heparina usada (Ul/ml) y en la absorbancia correspondiente obtenida. A partir de este estandar, conociendo la absorbancia de las soluciones de Mesoglican se puede extrapolar la actividad en Unidades lnternacionales anti-Xa (UaXa/ml).

Con el fin de calcular la actividad anti-Xa expresada en UaXa/mg, se uso la siguiente formula:

y se transfiere a un vaso de agitacion sostenida durante obtenida es turbia pero no

: a

Actividad (UaXa/mg)=: X 1000

c

en donde:

a= actividad Mesoglican extrapolada a partir de la curva expresada en UaXa/ml c= concentracion del Mesoglican expresada en pg/ml

Los valores calculados para las concentraciones correspondientes de Mesoglican ensayadas se promedian para obtener el contenido (T) expresado en UaXa/mg.

Calculos para obtener el contenido de Mesoglican en la biopelfcula

Se construye la calibracion estandar de trabajo en base a la actividad de la Heparin usada (Ul/ml) y a la absorbancia correspondiente obtenida. Para este estandar, sabiendo la absorbancia de las soluciones de la pelfcula, se extrapola

la acrividad en UaXa/ml. Con el fin de calcular la concentracion de Mesoglican presente en la solucion de biopelfcula expresada en pg/ml se uso la siguiente formula:

Concentracion de Mesoglican (pg/ml) =

a

T

X 1000

en donde:

5 a= actividad de biopelfcula extrapolada a partir de la curva expresada en UaXa/ml T= contenido de Mesoglican expresado en UaXa/mg

Los cinco valores calculados, obtenidos en las 5 replicas de la dilucion de la biopelfcula a prueba, se promedian para obtener la concentracion (C) de Mesoglican en la solucion de biopelfcula expresada en pg/ml.

Con el fin de obtener el contenido de Mesoglican en la biopelfcula, expresado en porcentaje sobre el valor teorico de 10 30,10 mg, se uso la siguiente formula:

: C

Mesoglican % =: X 100

3,01

en donde:

C = concentracion (C) de Mesoglican encontrada en la pelfcula expresada en pg/ml 3,01 concentracion teorica de Mesoglican expresada en pg/ml

Hacer la media de los valores obtenidos de las diferentes pelfculas (al menos 3) para obtener el contenido de 15 Mesoglican en la pelfcula.

Se usaron 3 pelfculas hidrosolubles diferentes, preparadas como se describe en el ejemplo 1 para cada vez; se usaron 5 de ellas para los lotes P1270C0 y P1271C0 a T0 y para el lote P1251A0 a T1 mes.

3.6.1. Resultados

La Tabla 3 muestra los resultados relativos a la pelfcula P1251A0 colocada en estabilidad a 25°C y 60% de 20 humedad relativa (h.r.), a 30°C y 65% de h.r., durante 12 meses y a 40°C y 75% de h.r. durante 6 meses.

Tabla 3. Lote de biopelfcula pf P1251A0

Condiciones: Meses Porcentaje de recuperacion de actividad anti- Xa en relacion con el peso teorico de la membrana Promedio ± (t . CV%)/(g.l.)1'2 OOO Contenido de Mesoglican Lote 08-0-041 UI-anti-Xa/mg

: 0 86,37 ± 2,87 % 39

25°C: 1 85,47 ± 4,06 % 41

60% h.r.: 3 86,45 ± 5,20 % 45

: 6 86,45 ± 4,52 % 46

: 12 82,69 ± 4,28 % 47

30°C: 1 81,12 ± 5,39 % 41

65% h.r.: 3 90,35 ± 3,89 % 45

: 6 84,32 ± 2,33 % 45

Condiciones: Meses Porcentaje de recuperacion de actividad anti- Xa en relacion con el peso teorico de la membrana Promedio ± (t . CV0/0)/(g.l.)1/2 OOO Contenido de Mesoglican Lote 08-0-041 Ul-anti-Xa/mg

: 9 88,09 ± 5,73 % 41

: 12 81,20 ± 2,29 % 47

40°C: 1 82,29 ± 4,17 % 41

75% h.r.: 3 87,39 ± 2,78 % 45

: 6 77,29 ± 1,86 % 44

: 6 w 88,88 ± 3,60 %

Nota para la Tabla 3: la t de Students para la probabilidad de 95% y para n-1 (15-1) grados de libertad es 2,15;

000 para metodos complejos el error del metodo se puede representar por X% ± t.CV%/(n-1)1,2. En donde (n-1)1/2 para 15 mediciones = 3,74.

** Replicacion del analisis llevado a cabo en otras 3 membranas mantenido mientras tanto a 20°C.

5 En el periodo de analisis a 1 mes el Mesoglican 08-0-041 dio 41 Ul/mg con CV% 3,52. En el periodo analftico de 12 meses dio 47 Ul/mg con CV% = 6,25.

La Tabla 4 muestra los resultados relativos a la pelfcula P1270C0 colocada en estabilidad en las condiciones indicadas anteriormente

Tabla 4. Lote de biopelfcula P1270C0

Condiciones: Meses Porcentaje de recuperacion de actividad anti- Xa en relacion con el peso teorico de la membrana Promedio ± (t. CV%)/(g.l.)1'2 °°° Contenido de Mesoglican Lote 08-0-023 Ul anti-Xa

: 0 82,19 ± 3,57 % A 41

25°C: 1 85,68 ± 4,02 % 42

60% h.r.: 3 76,99 ± 4,51 % 44

: 6 89,53 ± 2,36 % ** 42

: 12 74,64 ± 3,42 % 45

30°C: 1 71,66 ± 4,17 % 42

65% h.r.: 3 73,31 ± 5,85 % 44

: 6 81,06 ± 3,58 % ** 42

: 9 84,97 ± 3,46 % 41

: 12 83,83 ± 3,30 % 45

40°C: 1 79,80 ± 2,92 % 42

75% h.r.: 3 78,01 ± 2,36 % 44

: 6 84,12 ± 2,07 % 42

10 Nota para la Tabla 4:

5

10

15

20

25

^ 25 mediciones se llevaron a cabo. Para 25 mediciones (n-1)1/2 = 4,90 y la tstudent = 2,06.

(**) solamente 14 valores. Para 14 valores la tstudent = 2,16. Para 14 valores (n-1)1/2 = 3,60.

El lote de Mesoglican 08-0-023 en el periodo de analisis de 9 meses dio el valor de 41 Ul/mg, (anti-Xa) con CV% de 6,16. En el periodo analftico de 12 meses dio 45 Ul/mg con CV% de 6,83.

La Tabla 5 muestra los resultados relativos a la pelfcula P1271C0 colocada en estabilidad a 25°C y 60% de h.r., a 30°C y 40% de h.r. durante 12 meses y durante 6 meses a 40°C y 75% de h.r.

Tabla 5. Lote de biopelfcula P1271C0

Condiciones: Meses Porcentaje de recuperacion de actividad anti- Xa en relacion con el peso teorico de la membrana Promedio ± (t. CV%)/(g.l.)1'2 °°° Contenido de Mesoglican Lote 09-0-051 Ul anti-Xa/mg

: 0 75,21 ±2,85% i 39

25°C: 1 78,87 ± 3,31 % 44

60% h.r.: 3 73,05 ± 8,61 % 45

: 6 82,80 ± 5,01 % 44

: 12 76,04 ± 3,40 % 46

30°C: 1 76,52 ± 3,33 % 44

65% h.r.: 3 77,38 ± 5,75 % 45

: 6 75,55 ± 3,0 % 44

: 9 77,70 ± 2,82 % 45

: 12 76,28 ± 2,01 % 46

40°C: 1 73,99 ± 2,06 % 44

75% h.r.: 3 73,76 ± 2,99 % 45

: 6 80,92 ± 2,17 % 45

Nota para la Tabla 5:

a 25 mediciones se llevaron a cabo. Para 25 mediciones (n-1)1/2 = 4,90 y la tstudent = 2,06.

El lote de Mesoglican 09-0-051 en el periodo de analisis de 9 meses dio 45 Ul/mg con CV% de 7,39 y en el periodo de 12 meses, 46 Ul/mg con CV% = 5,91.

La tercera columna de cada tabla indica el contenido de Mesoglican en cada pelfcula ensayada (promedio de 5 replicas llevadas a cabo en 3 o en 5 membranas diferentes).

Puesto que el peso experimental de los tres lotes de pelfcula era 550 mg ± 15 mg, igual a aproximadamente 85% del teorico; se considero esta diferencia en el calculo del porcentaje de recuperacion de la actividad por la biopelfcula.

Los lfmites de confianza de un metodo complejo se pueden cuantificar a traves de la siguiente formula: ± (t . CV%)/(n-1)1/2 en la que n es el numero de replicas llevadas a cabo y la t de Student se calcula a 95% de probabilidad para n-1 grados de libertad.

Ya que es un metodo biologico bastante complejo y por lo tanto sujeto a errores, se decidio, para cada sesion de trabajo, probar el tambien ingrediente activo usado para la preparacion de cada lote de pelfcula hidrosoluble; con la intencion de verificar la fiabilidad de los resultados obtenidos en cada sesion. La cuarta columna de cada tabla muestra los contenidos del lote de Mesoglican usado para ese lote de pelfcula. Generalmente, todas las 3 pelfculas se evaluaron en una unica sesion y por lo tanto el contenido de Mesoglican es solo uno, donde se hace necesario llevar a cabo el analisis en muchas sesiones, se da el contenido de Mesoglican para cada sesion.

3.6.2. Discusion

5

10

15

20

25

30

35

Todas las biopelfculas ensayadas en el estudio de estabilidad tenfan un contenido de agua de alrededor de 14% - 16%. Por lo tanto la recuperacion de Mesoglican de la matriz se puede aproximar al 90%, como en el caso del lote P1271C0 o al 100% del contenido teorico, como en el caso del lote P1251C0. Esta evidencia experimental confirma la estabilidad del Mesoglican en la matriz, pero en particular demuestra la tendencia de la pelfcula de liberar el ingrediente activo en el area de la lesion donde se necesita.

El metodo ha mostrado una cierta imprecision que deriva de la complejidad del analisis y de la falta de paralelismo entre los estandares de trabajo de Heparina y los de Mesoglican. Habiendo comprobado asf la razon de los amplios lfmites de confianza, se puede considerar el dispositivo medico estable en el tiempo en todas las condiciones ensayadas.

Ejemplo 4

Evaluacion de la curacion de la herida de la pelfcula hidrosoluble

El experimento consistio en la evaluacion de la curacion de la herida de la biopelfcula en la reduccion/cerrado de la herida inducida artificialmente. El experimento se llevo a cabo en una monocapa de celulas de queratinocitos humanos (hacat); en la que se creo un rasguno pasando una cuchilla a lo largo de la monocapa entera. La eficiencia de curacion y de regeneracion del dispositivo a las concentraciones de 5 mg/ml, 2,5 mg/ml y 1,25 mg/ml de pelfcula hidrosoluble se determino tomando fotograffas de los medios celulares a los tiempos T0, T2h, T4h, Teh y T24h en comparacion con el mismo medio celular no tratado. Se obtuvo evidencia experimental de que los bordes de la herida comenzaron espontaneamente a curarse en el control, pero a las concentraciones de 5 mg/ml, 2,5 mg/ml y 1,25 mg/ml de pelfcula, la tasa de curacion era mayor ya despues de 2 horas, 4 horas y 8 horas con respecto a la tasa de curacion espontanea detectada en los controles. Las variaciones en el tamano de la herida, entendida como la mayor tasa de curacion, en los medios tratados con respecto al medio control son significativas a tiempos T2h y T4h. La pelfcula hidrosoluble aumenta sus propiedades de regeneracion celular, estimulando su proliferacion y migracion haciendo asf su capacidad de curacion mas rapida y mas eficaz.

Ejemplo 5

Modulacion del efecto tamponador de la pelfcula.

Ejemplo 5. Modulacion del efecto tamponador de la pelfcula.

Se preparo una muestra de pelfcula hidrosoluble segun la receta del ejemplo 1, con la diferencia de que en la mezcla de preparacion en el momento del control del pH se anadio una cantidad adecuada de hidroxiacido organico acido cftrico, hasta que se obtuvo un pH del sistema igual a pH 5,6 (se anadieron 0,25 g de acido cftrico a 100 g de matriz de biopelfcula que contiene 76% de agua. Por lo tanto, el acido cftrico anadido representaba 1,04% en peso sobre el peso seco total de los componentes).

En la preparacion descrita en el ejemplo 1, el pH fue en este punto de 7,0. La pelfcula hidrosoluble obtenida, sometida al modelo de evaluacion como se describe en el ejemplo 2, demostro que logro mantener los valores de pH variables solamente en el intervbalo de pH 6,0 ± 0,4, aunque con las adiciones de acido clorhfdrico o hidroxido sodico 0,01 M, en las soluciones respectivas y a las cantidades descritas en el experimento del ejemplo 2.

La Tabla 6a muestra los valores de pH de cada una de las soluciones acuosas preparadas mediante solubilizacion en 20 ml de agua, de una membrana de biopelfcula, que contiene una cantidad conocida de un hidroxiacido organico (acido cftrico) ademas de la mezcla dada en el ejemplo 1 e inspirado en US2010/0029790.

Tabla 6a

: valores de pH de membranas preparadas segun el ejemplo 5, solubilizadas en 20 ml de agua y alcalinizadas (NaOH 0,01 M) y acidificadas (HCl 0,01 M) con la adicion de las cantidades indicadas al lado

NaOH 0,01 M anadido (pl): Membrana en 20 ml de agua + NaOH 0,01 M Membrana en 20 ml de agua + HCl 0,01 M HCl 0,01 M anadido (pl)

-: 5,9 5,9
-

20: 5,9 5,9
20

100: 5,95 5,9
100

200: 6,0 5,8
200

400: 6,1 5,8
400

1000: 6,35 5,6
1000

El grado de variabilidad del pH de una preparacion tal se incluye en el intervalo 5,9 ± 0,5. Por lo tanto, tambien incluye pH 6,0, el resultado optimo para una ventaja significativa en la velocidad de curacion de ulceras varicosas, como se muestra en VASA 1979; 8(4): 339-349, en la pagina 14 de la presente solicitud, de la lfnea 24 en adelante.

5 La Figura 2 da los resultados del efecto tamponador de la biopelfcula preparada como se describe en el ejemplo 5.

La Figura 2 muestra la progresion de los pHs de dicha matriz colocada en soluciones acidificadas con HCl y alcalinizadas con NaOH 0,01M ♦, y la comparacion de los valores de pH en soluciones acuosas ■, y en soluciones acuosas que contienen 30 mg de Mesoglican •, despues de la adicion de los volumenes correspondientes de NaOH y HCl.

10 Esta caracterfstica amortiguadora de la pelfcula se obtuvo a traves de la adicion de una cantidad conocida de hidroxiacido organico a la mezcla de preparacion. En la practica, cambiando la calidad y cantidad de esta adicion, es posible dar a la matriz de la biopelfcula la capacidad de mantener las lesiones y llagas “tamponadas” en los entornos de pH adecuados para acelerar su curacion.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

1. Pelfcula hidrosoluble que contiene:

a) entre 25 y 60% en peso sobre el peso total de la pelfcula de alginato sodico como sustancia filmogena principal;

b) entre 0,1 y 20% en peso de celulosa microcristalina sobre el peso total de la pelfcula;

c) entre 0,1 y 25% en peso de protefnas vegetales;

d) al menos un glicosaminoglicano sulfato y/o galactosaminoglicano sulfato, como ingrediente activo con actividad curativa.
2. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 1, caracterizada porque dicho glicosaminoglicano sulfato y/o galactosaminoglicano sulfato se selecciona de la clase que consiste en: condroitfn sulfato, dermatan sulfato, heparan sulfato, heparina, queratan sulfato y mezclas relativas de al menos dos de los componentes antes mencionados.
3. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 2, caracterizada porque dicha heparina tiene un peso molecular promedio comprendido entre 4.000 y 6.500 y con 60% de moleculas que tienen pesos de menos de 8.000 Da.
4. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizada porque la heparina tiene un peso molecular promedio comprendido entre: 6.500 y 10.500 y con al menos 60% de las moleculas caracterizadas por un peso molecular promedio de menos de 12.000 Da.
5. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-2, caracterizada porque la heparina tiene un peso molecular promedio comprendido entre 12.000 y 18.000 Da.
6. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4, caracterizada porque el glicosaminoglicano sulfato y/o galactosaminoglicano sulfato consiste en una mezcla (A) que comprende:

a) heparina con peso molecular de 6.500 y 12.000 y con al menos 60% de las moleculas caracterizadas por un peso molecular promedio de menos de 12.000 Da.

P) dermatan sulfato

y) condroitfn sulfato
7. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 6, caracterizada porque la mezcla (A) consiste en:

• 55-60% de una mezcla de heparina con peso molecular promedio comprendido entre 6.500 y 10.500 Da

• 25-35% de dermatan sulfato,

• 4-8% de condroitfn sulfato (mayoritariamente Ch-S-A)
8. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde el glicosaminoglicano sulfato y/o el galactosaminoglicano sulfato consiste en la mezcla (B) que consiste en:

a') heparina con relativamente bajo peso molecular,

P') condroitfn sulfato
9. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 8, caracterizada porque la mezcla (B) consiste en 80% de heparina con relativamente bajo peso molecular y 20% de dermatan sulfato.
10. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde el glicosaminoglicano sulfato y/o el galactosaminoglicano sulfato es una mezcla (C) que consiste en:

a'') heparan sulfato,

P'') condroitm sulfato

y'') dermatan sulfato.
11. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde el glicosaminoglicano y/o galactosaminoglicano sulfato es una mezcla (D) que consiste en:

5

10

15

20

25

a'”) dermatan sulfato,

P'”) condroitm sulfato
12. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 10, en donde dicha mezcla (C) consiste en 75-85% de heparan sulfato, no mas de 8,5% en peso de condroitm sulfatos (Ch-S-A) y (Ch-S-C), y entre 8 y 16% de dermatan sulfato.
13. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 6, en donde la mezcla (A) esta contenida en la pelfcula hidrosoluble en concentraciones comprendidas entre 0,1 y 10% en peso calculado sobre el peso seco de dicha pelfcula.
14. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-13 que comprende un hidroxiacido organico.
15. Pelfcula hidrosoluble segun la reivindicacion 14 en donde dicho hidroxiacido tiene entre 3 y 6 atomos de carbono y entre 1 y 2 grupos hidroxilo.
16. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 14 y 15, caracterizada porque este hidroxiacido organico se selecciona de: acido cftrico, acido tartarico, acido tartronico, acido hidroxibutfrico, etc.
17. Pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 14-16, en donde dicho hidroxiacido organico se anade a la mezcla en cantidades tales que la mezcla alcanza un pH comprendido entre 5,4 y 5,6.
18. Dispositivo para uso medico que comprende la pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 117.
19. Dispositivo para uso medico segun la reivindicacion 18, caracterizada porque consiste en la pelfcula hidrosoluble segun cualquiera de las reivindicaciones 1-17.
20. Dispositivo para uso medico segun cualquiera de las reivindicaciones 18 o 19, para el tratamiento de:

• lesiones secundarias despues de eventos patologicos, seleccionados de ulceras de las extremidades inferiores en sujetos con insuficiencia venosa cronica, ulcera de pie diabetico, ulceras arteriales,

• lesiones secundarias despues de eventos traumaticos seleccionados de ulceras de decubito, abrasiones,

• lesiones secundarias despues de eventos ambientales seleccionados de lesiones por escaldaduras, quemaduras.