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ES2585407T3 - Un método para inducir tolerancia a un alérgeno - Google Patents

Un método para inducir tolerancia a un alérgeno Download PDF

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ES2585407T3
ES2585407T3 ES09706855.5T ES09706855T ES2585407T3 ES 2585407 T3 ES2585407 T3 ES 2585407T3 ES 09706855 T ES09706855 T ES 09706855T ES 2585407 T3 ES2585407 T3 ES 2585407T3
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Spain
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lactobacillus
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food allergen
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Abstract

Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso en: (a) tratar intolerancia a dicho alérgeno en un sujeto en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto; (b) tratar una alergia inducida por el alérgeno en un sujeto al inducir tolerancia a dicho alérgeno, en donde dicho probiótico se va a utilizar en combinación con dicho alérgeno de alimento; o (c) inducir tolerancia a dicho alérgeno en un sujeto en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto; en donde el probiótico en (a), (b) y (c) se selecciona de la lista que consiste de una especie de Lactobacillus, Bifidobacterium, Escherichia, Saccharomyces, Streptococcus y Bacillus.

Description

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Los agentes probióticos particularmente útiles son del género Lactobacillus tales como Lactobacillus acidophilus NCFM, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus casei immunitass, Lactobacillus johnsonii, Lactococcus lactis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus
5 helvetirus.
Aquí se considera que el Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) es un agente probiótico particularmente útil.
Los microorganismos pueden ser de origen natural, atenuado o modificado genéticamente para introducir nuevos rasgos
10 o alterar rasgos existentes. En una realización, el probiótico se ha modificado genéticamente para introducir un gen de alérgeno o una parte o fragmento o porción del mismo que se expresa para producir microorganismos recombinantes que liberan o exponen el sistema inmunitario del sujeto al alergeno o un fragmento antigénico del mismo. Por lo tanto, el probiótico y alérgeno se puede administrar al sujeto como una sola entidad. Como se indicó anteriormente, un probiótico y un prebiótico también se puede administrar, junto con el alergeno o el alergeno puede ser producido por el probiótico.
15 La presente solicitud divulga un método para inducir tolerancia en un sujeto a un alérgeno, el método comprende administrar al sujeto una cantidad de alérgeno o fragmento antigénico, componente o análogo del mismo y un agente biótico efectivo para inducir tolerancia en el sujeto al alérgeno.
20 En particular, la presente invención proporciona un probiótico y un alérgeno de alimento para uso en inducir tolerancia en un sujeto a dicho alérgeno, en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto, en donde el probiótico se selecciona de la lista que consiste de una especie de Lactobacillus, Bifidobacterium, Escherichia, Saccharomyces, Streptococcus y Bacillus.
25 En una realización particular, el alérgeno de alimento es una leguminosa tal como un maní.
Se puede administrar uno o más alérgenos en general en una cantidad que no provoca ansiedad al sujeto, tal como en forma de anafilaxia. Como se indicó anteriormente, el alérgeno de leguminosa se puede producir también mediante una forma probiótica del biótico.
30 En una realización particular, el probiótico es una especie de Lactobacillus, preferiblemente L. rhamnosus.
Por lo tanto otro aspecto de la presente invención, es un probiótico y un alérgeno de alimento para uso en inducir tolerancia en un sujeto a un alérgeno de leguminosas, en donde dicho probiótico y alérgeno de leguminosas se van a
35 administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto. El agente probiótico se selecciona de la lista que consiste de
L. acidophilus NCFM, L. casei, L. casei Shirota, L. casei immunitass, L. johnsonii, L. lactis, L. plantarum, L. reuteri, L. rhamnosus, L. salivarius y L. helvetirus.
La presente solicitud divulga adicionalmente, un método para inducir tolerancia en un sujeto a un alérgeno de
40 leguminosas, el método comprende administrar al sujeto una cantidad del alérgeno de leguminosas o un fragmento antigénico, componente o análogo del mismo y un agente biótico es un agente prebiótico seleccionado de la lista que consiste de un oligosacárido y una fibra efectiva para inducir tolerancia en el sujeto al alérgeno.
El prebiótico puede ser un oligosacárido o una fibra soluble o insoluble.
45 La presente invención contempla adicionalmente, un probiótico y un alérgeno de alimento para uso en inducir tolerancia en un sujeto a un alérgeno de maní en donde dicho probiótico y alérgeno de maní se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto en donde el agente probiótico se selecciona de la lista que consiste de L. acidophilus NCFM, L. casei, L. casei Shirota, L. casei immunitass, L. johnsonii, L. lactis, L. plantarum, L. reuteri, L. rhamnosus, L.
50 salivarius y L. helvetirus.
La presente solicitud también divulga un método para inducir tolerancia en un sujeto a un alérgeno de maní, el método comprende administrar al sujeto una cantidad del alérgeno de maní o un fragmento antigénico, componente o análogo del mismo y un agente prebiótico seleccionado de la lista que consiste de un oligosacárido y una fibra efectiva para
55 inducir tolerancia en el sujeto al alérgeno.
Como se indicó anteriormente, la fibra puede ser soluble o insoluble.
También se describe un método para reducir una sensibilidad del sujeto a una alergia, el método comprende administrar 60 al sujeto un agente biótico en conjunto con un alérgeno asociado con la alergia o un fragmento antigénico o componente
o análogo del alérgeno durante un tiempo y bajo condiciones suficientes para un nivel de tolerancia que se va a inducir en el sujeto.
La “administración” incluye administración secuencial y simultánea de un probiótico y/o prebiótico y alérgeno. 65
7
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El ARN se extrajo utilizando el kit RNAeasy Mini (Qiagen, Hilden, Alemania) y se hace transcripción inversa en ADNc utilizando cebadores de Sistema de Síntesis de Primera Hebra Superscript y oligo (dT) (Invitrogen). Todas las reacciones incluyeron un control 'RT menos' sin transcriptasa inversa para controlar la posibilidad de contaminación de ADN. Se cuantifican FoxP3 e IL-4 mARN por PCR en tiempo real utilizando Ensayos de Expresión de Gen TaqMan marcados con FAM en un sistema ABI Prism 7300HT (Applied Biosystems, Foster City, CA). El factor alfa 1 de alargamiento de la traducción eucariótica (EEF1A1) que se expresa de forma estable en cultivos de células mononucleares humanas se utilizó como gen de referencia (Hamalaninen et al, Anal Biochem 299: 63-70, 2001). El nivel medio de expresión de genes en muestras de cADN se expresó como una relación en el sentido de expresión EEF1A1.
Estadística
Se diseñó el ensayo clínico con un tamaño de muestra de 250 con el fin de tener una potencia del 90% para detectar una diferencia del 40% en el riesgo de eccema entre los grupos de probióticos y placebo. Los resultados secundarios incluyeron resultados inmunológicos reportados aquí. Se evaluaron todas las muestras de CBMC disponibles y análisis primarios por intención fueron para tratar. Los datos se evaluaron utilizando histogramas y se transformaron datos asimétricos en logotipo. Los datos emparejados paramétricos se analizaron mediante la prueba t emparejado, y datos paramétricos no emparejados utilizando la prueba de rangos con signos Wilcoxon y prueba Sign. Los datos no emparejados paramétricos se analizaron mediante la prueba t independiente, y los datos no emparejados no paramétricos utilizando la prueba U de Mann Whitney. Los datos continuos se presentan como medias aritméticas ± 1 EEM o medianas con rangos intercuartiles. Los datos categóricos se analizaron utilizando la prueba de X2 o la prueba exacta de Fisher. El valor P <0.05 se consideró estadísticamente significativo, con la debida precaución en la interpretación de los resultados de comparaciones múltiples. Cuando el significado de los hallazgos no estaba claro se llevó a cabo un análisis de sensibilidad mediante al excluir los participantes en los que: (1) los datos de cumplimiento del tratamiento (conteos de cápsulas regresados) no estaban disponibles (n = 9); (ii) los conteos de cápsula sugirieron los niveles de cumplimiento <50% (n = 2); o (iii) no se tomaron cápsulas de tratamiento debido a un parto prematuro entre la aleatorización y 36 semanas de gestación (n = 1). Los análisis se realizaron utilizando SPSS v 16.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL).
Efectos del tratamiento de LGG sobre proliferación BPMC
Los efectos de LGG administrado por vía oral se evaluaron en adultos sanos. Se cosecharon PBMC de 11 adultos antes de y sobre la terminación de 7 días de tratamiento de LGG. El tratamiento se asoció con una reducción del 30% (CI 95% 11 a 50%; P = 0.03) en respuesta proliferativa de células T CD4+ promedio a LGG muerto por calor (HKL) en comparación con respuestas proliferativas de los mismos sujetos antes del tratamiento de LGG. En contraste, no ha cambiado en la proliferación de células T CD4+ a OVA (P = 0.2) o medio solo (P = 0.06) después del tratamiento LGG.
Efectos del tratamiento de LGG sobre fenotipo DC
Se investigó el fenotipo DC en PB-MC cultivado recolectado de los adultos antes y después del tratamiento de LGG. El plasmocitoide DC (pDC) aumenta desde 3.20% hasta 5.29% de DDC total (P = 0.02) después del tratamiento LGG, en PBMC cultivado durante 48 h con HKL. Una tendencia hacia un aumento de la proporción de PDC a mieloide (mDC) también se observó después del tratamiento de LGG en PBMC cultivado con HKL (relación de medio 0.36 de pretratamiento, 0.58 de postratamiento; P = 0.07). El tratamiento de LGG no se asoció con cualquier cambio significativo en el fenotipo DC en PBMC cultivado con OVA o solo medio.
Los datos muestran que la administración oral de LGG para adultos sanos conduce a cambios sistémicamente detectables en las respuestas proliferativas de células T y fenotipo DC. Tanto la disminución de la proliferación de células T CD4+ y el aumento en el número de pDC en PBMC cultivado con HKL son coherentes con la inducción de tolerancia específica a antígeno (Colonna et al, Nat Immunol 5: 1219-1226, 2004).
Aquellos expertos en la técnica apreciarán que la invención descrita aquí es susceptible de variaciones y modificaciones distintas de aquellas descritas específicamente. Se debe entender que la invención incluye todas estas variaciones y modificaciones en la medida que caen dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. La invención también incluye todas las etapas, características, composiciones y compuestos mencionados o indicados en esta especificación, individual o colectivamente, y cualquier y todas las combinaciones de cualesquiera dos o más de dichas etapas o características en la medida en que entran dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
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12

Claims (12)

  1. imagen1
    Reivindicaciones
    1. Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso en:
    5 (a) tratar intolerancia a dicho alérgeno en un sujeto en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto;
    (b)
    tratar una alergia inducida por el alérgeno en un sujeto al inducir tolerancia a dicho alérgeno, en donde dicho probiótico se va a utilizar en combinación con dicho alérgeno de alimento; o
    (c)
    inducir tolerancia a dicho alérgeno en un sujeto en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto;
    en donde el probiótico en (a), (b) y (c) se selecciona de la lista que consiste de una especie de Lactobacillus, 15 Bifidobacterium, Escherichia, Saccharomyces, Streptococcus y Bacillus.
  2. 2.
    Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en la reivindicación 1 en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar en dos diferentes formulaciones.
  3. 3.
    Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en la reivindicación 1 o 2 en donde el probiótico es una especie de Lactobacillus.
  4. 4.
    Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en la reivindicación 3 en donde la especie de Lactobacillus se selecciona de la lista que consiste de Lactobacillus acidophilus NCFM, Lactobacillus casei,
    25 Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus casei immunitass, Lactobacillus johnsonii, Lactococcus lactis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus helvetirus.
  5. 5.
    Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en la reivindicación 4 en donde el probiótico es Lactobacillus rhamnosus.
  6. 6.
    Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en donde el alérgeno de alimento es un alérgeno de leguminosas.
  7. 7. Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en la reivindicación 6 en donde el alérgeno de 35 leguminosas es un alérgeno de maní.
  8. 8.
    Un probiótico y un alérgeno de alimento para uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en donde el sujeto es un humano.
  9. 9.
    Uso de un probiótico y un alérgeno de alimento en la fabricación de un medicamento para:
    a) tratar intolerancia a dicho alérgeno en un sujeto en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto;
    45 (b) tratar una alergia inducida por el alérgeno en un sujeto al inducir tolerancia a dicho alérgeno, en donde dicho probiótico se va a utilizar en combinación con dicho alérgeno de alimento; o
    (c) inducir tolerancia a dicho alérgeno en un sujeto en donde dicho probiótico y alérgeno de alimento se van a administrar secuencial o simultáneamente a dicho sujeto;
    en donde el probiótico en (a), (b) y (c) se selecciona de la lista que consiste de una especie de Lactobacillus, Bifidobacterium, Escherichia, Saccharomyces, Streptococcus y Bacillus.
  10. 10. Uso de un probiótico y un alérgeno de alimento como se reivindica en la reivindicación 9 en donde el probiótico es 55 una especie de Lactobacillus.
  11. 11.
    Uso de un probiótico y un alérgeno de alimento como se reivindica en la reivindicación 10 en donde la especie de Lactobacillus se selecciona de la lista que consiste de Lactobacillus acidophilus NCFM, Lactobacillus casei, Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus casei immunitass, Lactobacillus johnsonii, Lactococcus lactis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius y Lactobacillus helvetirus.
  12. 12.
    Uso de un probiótico y un alérgeno de alimento como se reivindica en la reivindicación 11 en donde el probiótico es Lactobacillus rhamnosus.
    65 13. Uso de un probiótico y un alérgeno de alimento como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12 en donde el alérgeno de alimento es un alérgeno de leguminosas.
    13
    imagen2
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